Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
II
CUPMNS
Cap.I Hemoglobina. Derivafii
hemoglobinei.........,....
............ 9
Dozarea hemoglobinei ca cianmethemoglobind prin metoda Drabkin.......... 9
tr.l Determinareabilirubineitotalecudicloraniline...........
II.2 Determinarea bilirubinei prin metoda Van den Bergh
direct[ sau rapid[
Cap.Itr
Itr.l
Vitamine
.......14
.......... 16
...............23
........24
............,.
Dozarea vitaminei C
m.1.1 Reaclia de identificare a vitaminei C cu azotat de argint........25
m.l.2Dozareavitaminei C prin metoda iodometric6........................26
........28
W.2Dozneavitaminei PP
Dozarcavitaminei PP prin metoda volumetrice................................. 30
................... 33
Itr.3 Identificarea vitaminei Be
Reacfia de identificare a vitaminei Be cu reactivul
(83).....
.............
Folin - Ciocilteu.,.
................... 35
Itr.4 Identificarea vitaminei A
Reacfia de identificare avitarrinei A cu acid tricloracetic................. 38
..............
Enzime....
................................. 39
..........40
....................42
IV.2 Influen{a pH-lui asupra actiyitifii
................44
IV.3 Determinxeaactivith[ii transaminazelor
IV.3.1 Determinarea activitilii transaminazelor serice ALAT gi
ASAT prin metoda spectrofotometrici........ ........45
IV.3.2 Determinarea activitiilii ALAT (TGP) prin metoda.
.......49
IV.3.3 Determinarea activitalii ASAT (TGO) prin metoda
.......51
fV.4 Determinareaastlitilliiy glutamiltransferazei (GGT)........................ 53
Determinarea activit5{ii y glutamiltrans fer,azei (GGT) prin
......54
metoda
Cap.IV
IV.l InfluenfatemperaturiiazupraactivitSliienzimatice
enzimatice
serice
enzimatic6
enzimaticl"
enzinaticd
..........;.;i....
spectrofotometric[
............ 56
...........57
.................92
.....92
.................. 94
............94
VI.2.2 Misurltori organoleptice: culoare, miros, aspect........ ............97
VI.3 Examenul microscopic al urinei (sedimentul
........99
VI.4 Examenul fizicochimic al
............ 105
VI.4.1
.......... 105
W.4.2 M6surarea
........ 106
VI.4.3 Misurarea
......107
YI.4.4 Determinarea compozitiei
... 108
VI.4.5 Cercetarea elementelor anormale din
...... l l I
VI.4.5.1 Identificarea proteinelor
.....
I. Determin[ri
...ll2
I.a Proba cu acid acetic la cal.....----..............lt2
Recoltareaurinei.....
VI.2 Examenul macroscopic al urinei....
W.2.tMdsurarea diurezei
VI.l
urinar)
urinei........
MdsurareapH-ului
densitdlii
osmo1arit6tii...............
chimice.
urind...
urinare....
calitative..............-
ll2
q
i
tr
II
Heller.......
(fleller)
calitative
I.aReacliaBenedict
Fehling.....
Reac{iaNylander
cantitative
Imbert....
Erlich
Bilirubina-MetodaLugol
......
nitrifi)
urinare......
VII.I
calitative...
Pandy.......
Nonne-Appe1t..............
145
.............. 145
................ 145
..............147
He11er........
............... 148
tr. Determindri cantitative ..................... t' ..... r... ................ 49
................. 149
II.a Metoda diluliilor (Heller).....
1
WI.5.2
VII.5.3
VII.5.4
YII.5"5
acetonei....
lanitra{i
ReactiaFehling.....
cantitative
\III.5.6
MetodaMohr........
BlbHografie
..... 163
-,
Biochinie -Lucrdripracticemedicind,vol.
il
CAPITOLUL
IIEMOGLOBINA
DERTVATII IIEMOGLOBINEI
Hernoglobina este o heteroproteini (cromoprotein6) alcbtuitil dintr-o
globina $i o grupare prostetic5" colorate
grupare proteicd incolord
(metaloporfrrin[) hem. Globinele sunt proteine din clasa histonelor, au
caracter bazic, fiind bogate in lizinn gi histidind.
Din greutatea molecular[ a hemoglobinei de 64.450 daltoni globina
rqrezinticca.g6 7o, hemul cca.4 % gi fierulcca. 0,33 -0,34yo.
in organism hemoglobina indepline$e func1ii importante preollm:
fixarea reversibiltr a oxigenului molecular la nivelul plimdnilor,
formdnd oxihemoglobina (HbO2), forma de transport a oxigenului la lesuturi
gi a unei parli din dioxidul de carbon (l2o/o) formflnd carbhemoglobina
(HbCO2), forma de transport a dioxidului de carbon de la nivelul lesuturilor
la p16m5ni;
F participarea la structura unor sisteme tampon, contibuind astfel la
reglarea echilibrului acidobazic.
Determinarea valorilor hernoglobinei constifuie un test uzual in
diagnosticul unei anemii sau policitemii.
Determinarea hemoglobinei in s6nge poate fi efectuat[ indirect pe
baz.a capacitiitii de fixare a oxigenului sau a continutului de fier. Practic se
luti1uz.eazd metode fotometrice care m6soard pigmentul sub formfl de
oxihemoglobind sau sub fonnd de cianmethemoglobinE.
v9!4
Principiul metodei
Materiale necesare
eprubete de hemolizl
stativ eprubete
micropipete de hernoglobini
hdrtie de frltru
spectrofotometru
cuve de 1 cm
vase cu soMe dezinfectanti
distilatii
tifon
reactivi
apd
Reactivi
Reactiv Drabkin:
0,14 g fosfat monoPotasic
0,2 g cianurd de Potasiu
apd distilatI ad.1000 (PH:6'4)
Se filtreaz[ prin hdrtia de filtru, apoi solulia se plsfteazdla frigider
in flacoane de sticlLde culoare brun[, bine inchise, aproximativ 2 luni.
7,3 7,5
Parametrii obligatorii ai soluliei Drabkin sunt pH-ul
(deoarece la pH acid precipitii proteinele, iar 1a pH alcalin precipitd
lipidele), claritatea gi stabilitatea.
Standard de cianmethernoglobinl
Proba
Sdnge capilar sau venos recoltat pe anticoagulant
(EDTA)
Tehnica de lucru
Se pregltesc dou6 eprubete de hemoliz[ in care se pipeteaz[ c6te 5
ml de reactiv Drabkin.
Se recclteazl 0,02 ml de s6nge cu ajutorul unei micropipete de
hemoglobin[, se gterge exteriorul pipetei cu o hf,rtie de filtru pentru
10
II
Calcul
Cp:Ep/Erxg,
g hemoglobinn /100 ml
ser:
Ep
/ E, x C,
unde:
Cn concentralia probei
Eo extincfia probei
:
:
E, : extinc{ia standardului
Cr:
Obeervafii
Pentru oblinerea unor rezultate corecte se vor respecta urmdtoarele
precau,tii cu privire la:
a. Fotometru:
o etalonare corecti cu respectarea pozi{iei gtecherului ln momentul
determin5rii;
o folosirea de cuve cu grosime de 1 cm
o citire la lungimea de undd de 540 nm fa15 de apl distilatii.
b. Standard:
o se pf,streazd,la rece gi se folosegte o singuri dat[;
r inaintea utilizirii, fiola cu standard se menfine timp de 30 de
minute la temperatura laboratorului;
r fiola cu standard are valabilitate dup[ tiliere de maxim o ord.
c. Preparare reactiv:
r cianura de potasiu este o substarr{i alb[, uscat5 (dac6 este umedE se
fine timp de24 - 48 de ore la exicator);
o cdntirire exactii a substanfelor la balanfa analitici;
o pH reactiv :'7 ,3 - 7 ,5;
r pH ap6 distilatii :6 - 6,5;
o plstrare reactiv la frigider, in flacon brun cu {op de plastic sau de
(nu
sticl[
de cauciuc);
11
.
.
rcrmlree, rryid-
Tiry de rea4ie:
o tnebtrie si fie de 30 de minute; dac6 se deprqegte timpul, reaclia
devine ireversibilE, total[.
g-
Valori normale
nou-ndscut:
copii 0-lan:
copii 1-15ani:
17
-20 9/100 ml
- 19 9/100 ml
ll,2- 13,4 gll00 ml
12
birba{i:
14
* l8 9/100 ml
femei:
12
- 16 9/100 ml
Variatii patologice
Valori
'
anemii;
hemoragii.
t2
I
3.
B@*it!*-Lvgrffiplaqttre'w'dici&.vet
Vahri
&
poliglobulii;
dsceidGaese;
insuficienl5puhtei&4a;
insuficim$ cardiaci;
r,.f,|ffi$i:{ ti";,
.irir
'... i ;:
"-r;
lr;
:i
!S-'',1."::
I !r'1
;i:,i
&3:
:l
7
I
CAPITOLUL
il
reactivi
t4
tr
II
Reactivi
Reactiv l:
Dicloranilina l,7mmolA
HCl
80 mmoVl
Reactiv 2:
AzotLtde sodiu 95 mmoVl
Se amestecn 50 ml de reactiv I cu I ml de rcactiv 2.
Amestecul de reactivi are stabiiitate timp de 5 zile la 20
de3 s[pt6m6nila2-8oC.
25oC qi
Proba
Ser
Tehnica de lucru
Se pregiitesc doud eprubete: martor, prob4.
Se
Reactivi
Martor
100
Ser
ul
Proba
100
ul
lml
Reactiv I
Amestec R1 + R2
lml
20
Calcul
concentafia probei
Eo: extinc{iaprobei
E*
F:
extinc{ia martorului
factor :253lrmolll (la8 mgA)
l5
i
g
Bilirubina se afl6
in
totali.
Materiale necesare
eprubete
tifon
reactivi
16
II
Reactivi
Solutie de acid sulfanilic. 1,25 g acid sulfanilic, 3,5 ml HCI
concentrat (d: 1,19) se aduc Ia250 ml cu api distilatS.
Solufie de azotit de sodiu: 0,175 g NaNOz in 100 ml api distilatE.
Accelerator (solu{ie cofeind-benzoat). 13,75 g cofein6, 18,75 g
benzoat de sodiu se aduc ta250 ml cu apl distilatE.
Solufie de tarhat alcalin. 65 gtaftat dublu de sodiu gi potasiu, 19 g
NaOH se aduc 1a250 ml cu ap6 distilatS.
Ser fiziologic (NaCl solulie 0,9Vo)
Proba
Ser nehemolizat
Tehnica de lucru
Dozarea bilirubinei totale (BT)
Se pregdtesc dou6 eprubete: martor, prob6.
Se pipeteazE in eprubete conform tabelului urmdtor:
Tebelul
II
Reactivi
Ser
sulfanilic
So1. azotit de sodiu
So1. acid
Martor
0.25 ml
Proba
0.25 ml
0,25 ml
0,25
ml
0,1 ml
lml
lml
Accelerator
Se agitii gi se menfin timp de 20 de minute la
temperafura camerei dupd care se adaug6:
lml
1ml
Tartrat alcalin
Se agit6 conlinutul eprubetelor gi dup[ 5 minute se citegte extinclia
probei (Ep) fat6 de martog la lungimea de undd de 600 nm, in cuve de I cm.
Calcul
mg BT/ 100 ml ser = En xYt la x Vi
mg BT/ 100 mI ser: En x 2,6 I 1,150 x 0,25
mg BT/ 100 ml ser: En x 9,04 -
t7
$il
unde:
a:
pentru
l.:
1,150
600 nm
0,25
Itr
Martor
Proba
Ser
Ser fiziologic
0.5 ml
0.5 ml
2nn
2llnl
0,3 ml
0,3 ml
Reactivi
0,1 ml
Calcul
mg BD/ 100 ml ser: En x Vr / a x Vi
mg BD/ 100 ml ser: En x 2,9 I 0,943 x 0,5
mg BD/ 100 ml ser = Ep x 6,1
unde:
r:
0,943
pentru l. = 530 nm
18
-,
II
#l
Reactiv diazobenzensulfonic :
25 ml solufie acid sulfanilic O,lVo:
I g acid sutfanilic
15 ml HCl concentrat
ap6 distilatii ad. 1.000 ml
0,75 ml solufie azotit de sodiu 0,5 {/o.
Tehnica de lucru
Se pregltesc dou[ eprubete: martor, probi.
Se pipeteazi in eprubete conform tabelului urmltor:
Tabelul
IV
Martor
Reactivi
0.5 ml
1,75 tnt
Ser
Ser
fiziologic
Proba
BT
0.5 ml
ml
0.25 ml
Accelerator
BD
0.5 ml
I,75 ml
1,75
Reactiv diazobenzensulfonic
Ap[ distilatE
0.25
0.25 ml
ml
Calcul
Se taseazl curba de calibrare folosindu-se o solulie de bilirubind
pur[ standard de concentrafie 20 mg/l00 ml.
Se calculeazi factorul de pant5, care in cazul de fat[ este Fp:7.
Concentrafiile bilirubinei totale (BT) pi bilirubinei directe (BD) se
calcuLeazd folosind relaf iile
mg BT/100 ml ser: Ep x Fp
mg BD/100 ml ser = Ep * Fp
Observafii
Probele de analizattrebuie ferite de lumind puternicd.
Este de preferat ca probele s[ fie prelucrate imediat de la recoltare, in
caz contar ele por fi pdstrate in frigider maxim 20 ore.
t9
Valori normale
normal bilirubina seric[ este reprezentatil in principal de
bilirubina neconjugati (indirectd), insolubilfl in aPd, vehiculatii de
serumalbuminE. Datoriti dimensiunilor mari, acest complex nu se frltreazd
prin capilarele glomerulare, deci bilirubina este absentE in urina normal6.
Bilirubina conjugatii (directd) este hidrosolubili qi are valori misi
in mod
Nisculi la termen
(BT me/100 ml ser)
Prematuri
(BT ms/100 ml ser)
-24 ore
24-48 ore
t2
3,5 zile
dupi I luni
12
24
1.5
1.5
Nou-niscu{i
nimita suoerioari)
0
Varia{ii patologice
in
in
cazurile
2A
II
cu
insuficienta
defecte enzimatice
cu
hepatite;
ciroze:
2l
J-'
I
"Fiwtrffiiat+ffiipqqgFcedsdfr&id-ff
';'.';i ',:!l!':':l' t''.. 1;:-"'{ir:1 '::i''i*::it';''1i'1"':
,
:..,i: irr,-1prc&d agr6i ql*,d@qglfuitiaterk 1@9#,-de-#0relis al
W&gSAS&r;,
::.:
i:
:;; :li;'j'ii'i.,i,:.:r
22,,
-t,.1.i.;,1,
.:'.a;fr'i
l,:.i','.i..{i
CAPITOLUL
II
ilI
VITAMII\E
Vitaminele sunt definite ca substanfe organice esenfiale pentru
men{inerea vielii gi reproducerii, care nu pot fi sintetizate tn organism gi din
acest motiv trebuie aduse din exterior prin intermediul alimentelor.
Vitaminele nu reprezintE materiale sffucturale gi nu au valoare energetici.
Ele sunt active in cantit6fi foarte mici gi sunt coenzime, cu rol indispensabil
in procesele anabolice qi catabolice (rol biostimulant).
Clasificarea vitaminelor nupoate fi fdcut6 pebaza structurii chimice,
din cauza diversitElii qi complexit5fii acesteia, ea diferind de la o vitaminl la
alta.
Criteriul principal de clasificare aL vitaminelor este caracterul
solubilitEfii lor, astfel vitaminele se clasifici in dou6 grupe: Iiposolubile Si
hidrosolubile.
Vitaminele liposolubile sunt vitaminele A, D, E, F, K. Ele se gisesc
in alimentele grase gi participl numai in procesele anabolice. Aceste
vitamine sunt insolubile in ap6 (se pierd cantitili foarte mici in cazul sp6l6rii
sau men{inerii tn apd) gi sunt vehiculate prin singe de cltre lipoproteine.
Administrate in cmtitii{i mari produc hipervitaminozhcumanifestiiri toxice.
Yilaminele hidrosolubile sunt vitaminele Br, Bz, Bo, Brz,C, PP, acidul
folic, acidul pantotenic. Au molecule polare solubile tn ap6, de aceea se
pierd ugor la sp6lare, menlinere sau fierbere in api. Majoritea lor au rol tn
procesele catabolice. Administrate in cantitiiti mari nu se acumuleazd (nu
apar hipervitaminoze).
Lipsa vitaminelor din organism, deficitul sau concentratia lor
qrescutil determin[ tulbur6ri metabolice mai mult sau mai pufin grave.
Astfel apare necesitatea determinErii cantitative gi calitative in lichidele
biologice fie pentru precizareadiagnosticului, fi.e pentru cercetare.
23
ct
ilI.l
Doznrea vitaminei C
Vitamina C
R
I
II
t
.
catecolaminelor.
Cregte apdrarea organismului la infec{ii microbiene qi virale, precum
gi fa{6 de noxe: Pb, Hg, benzen.
Necesarul zilnic
Necesarul zilnic de vitamin[ C este de 60 - 80 mg.
Necesarul cregte la persoane care depun efort fizic intens sau igi
desftgoari activitatea in frig.
Sursele de vitamin[ C sunt legumele gi fructele proaspete.
De re{inut este faptul ci vitamina C este solubili gi ugor oxidabild; ea
se pierde (inactiveazd) in timpul prepardrii alimentelor.
i
)
I
I
I
:
i
I
Carenfa in vitnmina C
Carenla de vitamin[ C conduce la dezvoltarea unei maladii specifice
denumitii scorbut.
Afecliunea se caracterizeazd prin perturbarea sintezei de colagen qi
ruperea pere{ilor capilarelor, modificdri ale tesutului conjunctiv gi ale
structurii fibrelor de colagen, alterEri in procesul de formare a oaselor gi
dinflor, fr6narea cregterii, sclderea rezistenfei la infecfii.
Prineipiul metodei
Vitarnina C, datorit5 proprietifii de a se oxida uqor, reduce
de argint la Ag metalic care se depune, formdnd oglindade argrnt.
25
sirurile
Etl
Materiale necesare
eprubete
reactivi
Reactivi
Solulie apoasd de vitamina C
Solufie de AgNOr 5g%
Solufie de amoniac 20o/o
Tehnica de lucru
intr-o eprubetilmare se pipeteazh;
1 ml AgNOg 5%
0,5 ml solu{ie NH3
2 ml soMe vitamina C
Confinutul eprubetei se amestecb qi se fierbe timp de 5 - l0 minute.
se observa cum se depune argintul pe perefii eprubetei, formand
oglinda de argint.
26
Biochimie-Lucrdripracticemedicind,vol.ll
. _
Materiale necesare
flacoane Erlenmeyer 50 ml
pipete de sticli
biuretii
vase cu solu{ie dezinfectanti
api distilatii
tifon
reactivi
Reactivi
Solulie HCL2g%
Solu{ie KIlg%
Solufie KIO3 0,004 N
Solufie amidon l%
Tehnica de lucru
se
pipeteazl:
2mlH:Cl2g%
3 mlap[distilati
0,5 ml solulie iodurd de potasiu
2 ml solu{ie amidon 1%
l%
il
h
lr
te
,a
I mlHCI2g%
3 ml apidistilati
0,5 ml solulie ioduri de potasiu 1%
2 ml solutie amidon
1%
27
.:
qe
Calcul
Concentra{ia vitaminei C se exprimd in
Se cunosc:
Vp
de analizat
v- :
m{/o.
martor
Se calculeazd:
- V. :
N in raport cu
1000
satr
factor de prevenire a
pelagrei.
Apar$ine complexului vitaminic B 9i provine din piridind'
.\
II
Nicotinamida
)l
)l
re
triptofan
mg vitaminb PP
NAD* (NADP
2Il
il
r5
o alcooldehidrogenaze;
29
ts
aldehiddehidrogenaze;
glutamatdehidrogenaze;
fosfogliceroaldehiddehidrogenaze;
lactatdehidrogenazi;
malatdehidrogenaz[.
Necesarul zilnic
Necesarul zilnic de vitamin[ PP este de 50 mg.
Sursele de vitamin[ PP sunt reprezentate de carne qi preparate din
carne, lapte, brfutz\ ou[, cantitate mai micl in legume, fructe, legume
uscate gi cereale.
Carenfa in vitamina PP
Ansamblul stdrilor patologice determinate
de deficitul de
enterocolitd cu diaree.
30
L
l'
g_
Biochimie -Lucrdripracticemedicind,vol.
2CuSOq +
12
2Kl
-*
+ 2Na2SO3
II
Iz + KzSO+ + Cu2SO4
-+
Na2S2O6+ 2NaI
Materiale necesare
ml
.n
re
flacoane iodometrice
pipete de sticlE
hdrtie de filtru
biuret5
vase cu solufie dezinfectantl
distilati
tifon
apd
le
reactivi
)r
ia
h
):
n
le
:e
1i,"
tE
Reactivi
Solu{ie vitamind PP
Solufie fenolftaleind" l% in etanol
Solufie NaOH 0,1 N
Solu{ie CUSO+ l%
Solufie HCI 10%
KI cristalizati pa
Solufie de tiosulfat de sodiu ( NazSzO:) 0,1 N
Solufie arnidon 1%
Tehnica de lucru
:e
Proba de analizat
:e
.d
indicator:
3r
i
Biochimie - Lucrdri practice medicind, vol.Il
ET
Calcul
Se cunosc:
Vn:
de malizat
V-
martor
Se calculeazL:
V- -
Vp
numirul de mililitri de
NazSzO3
dozarcavitaminei PP.
NazSzOg 0,1N.
32
't
JI
II
fi
1a
B6
zat
qa
LtA
re
de
4,5dihidroximetil pirind.
Pe lAng6 piridoxin[, mai posedi activitate vitaminic6 inc[ doi
deriva{i ai 3-hidroxipirinei caxe au in pozilia 4 a inelului piridinic o grupare
aldehidicfl sau aminic[ gi care se numescpiridoxal, respectivpiridoxamind.
Tofi aceqti trei compugi poarti denumirea comun[ de vitamina 86.
)el
)el
nr
Cf,o
Piridoxina
Vitamina 86
iro rol in
t
t
in metabolismul lipidelor
Necesarul zilnic
Necesarul zilnic de vitamin[ 86 este de 1,5 -2m9
Sursele de vitamini. Be sunt reprezentate de alimente de origine
animala (ficat, rinichi), drojdia de bere, idltite, germeni gr6u, soia" alune,
nuci, pepene galben.
Carenfa de vitaminl Bc
Dezvoltarea hipovitaminozei Bo este legatii atdt de aportul sdu
insuficient in hranl, rat gi d" o dereglare a biosintezei piridoxalfosfatului tn
organism.
Principiul metodei
Din cei fiei compuqi care au in comun aucleul piridinic (piridoxalul,
piridoxina, piridoxamina), doar piridoxina in prezenla carbonatului de sodiu
ii
reactivului Folin
- Ciocilteu
Materiale necesare
eprubete
II
6,7
ap[ distilatE
tifon
reactivi
ne
['
lu
in
Reactivi
Solufie vitamina Be
Reactiv fenolic Folin - Cioctlteu (tungstat qi molibdat de sodiu)
Solufie NazCOr 20g%
Tehnica de lucru
intr-o eprubetlmare se mlsoar6:
1 ml soMe vitaminl Bo
I ml reactiv fenolic Folin - Ciocdlteu
2 ml solu{ieNuCOt20Yo
Dup6 agitare apare imediat o coloralie albastrfl.
Interpretarea rezultatului
0,08 mg substan{[ pur6 vitamin6 Bo.
dozarea vitaminei Bo se rcalizeazd plirn metode
ln
hborator,
enzimatice qi cromatografice.
liu
Vitamina A
35
6
Sinteza vitaminelor
are loc
in intestin
se
Necesarul zilnic
Necesarul zilnic de vitamin6 A:
adult: 4 - 5000UI
coPii: 2500 - 4500 UI
peqte
rA
,il
rei
se
ic,
:le
nd
r-
II
obstrucfie biliar6.
Lipsa sau insuficienfa vitaminelor A in alimenta{ie conduce la:
tulburdri oculare:
dereglflri ale adaptlrii la intuneric:
hemeralopie (orbire noctumi,,orbul g6inilor");
deregl[ri degenerative ale ochiului;
xeroftalmie;
keratomalacie;
hiperkeratoz[ cu tegumente gi mucoase ffiPft, ingroqate
(keratinizate), care prezint6 cruste gi fiswi:
tegumente
cu
aspect
de ,piele de gdint',
,,broasc6
rdioasd";
mucoase afectate: bucal6, gingivald, conjunctivalL, aparat
respirator, cdi urogenitale;
ea
infectii;
malformatii fetale la gravide.
de
re
in
se
Hipervitaminoza A
Hipervitaminoza A (hipercarotenemia) apare in:
regimul bogat tn caroten;
hiperlipemie provocati de:
hipotiroidie;
diabet;
atercmatsz.d.
ite
re
cefalee;
somnolenfS.
in intoxicalia
37
g
*
Principiul metodei
Vitaminele A dau cu acidul tricloracetic
portocalie cue vireaz[ in albastru.
colorafie galben-
Materiale necesare
eprubete
tifon
reactivi
Reactivi
Solufie uleioasd de vitamin6 A0,l mgYo
Solufie cloroformic[ cu acid tricloracetic 30Yo
Tehnica de lucru
intr-o eprubetii se m6soard 0,5 ml solulie uleioasd de vitamini A qi I
ml so$e acid tricloracetic 30yo care se prelige pe perelii eprubetei. Apare o
colora{ie galben la limita de separare a celor dou[ lichide care vheazd in
albastru.
300 prgl100
ml ser.
pgl100 ml ser.
Hipocarotenemii se inregistreazi c6nd conceirtrafia
este mai micl de 35 pgl100m1plasmd (60 UD.
38
in vitamind A
Lil
CAPITOLUL
9n-
il
eo
in
00
00
II
&l
ENZIME
Enzimele sunt biocatalizatoi sau fermenfi de natur[ organicd
sintetizate de microorganisme gi organisme vegetale sau animale.
Prin nafura lor chimici sunt proteine, prezente ln toate celulele
fesuturilor gi organelor.
Enzimele condilioneazd desfd.gurarea, coordonarea gi autoreglarea
rea{iilor specifice materiei vii, prin caxe se rcalizeaz,ilprocesele metabolice
ale creqterii, reproducerii qi ale tuturor activitiifilor celulare.
Caracterele generale ale enzimelor sunt urm[toarele:
o aclioneazd in cantitiili exfrem de mici, ceea ce atestii faptul ci au
activitate catalitici mare (nansformi cantitilfi foarte mari de substrat);
o nu se consuml;
o nu modific[ echilibrul de reaclie ci doar viteza de reac{ie;
r au actiune reversibill;
r au specificitate de reaclie gi de substrat.
Enzimele ac[toneazd, atdt in interiorul organismului, cdt gi in exhase,
in afara organismului, ceea ce permite dorarea lor in laborator. Acfiunea
enzimelor asupra tuturor activitifilor celulare face posibil ca o reactieo
incompatibiH din punct de vedere termic cu viafa (necesiti temperaturi
foarte inalte), s[ aibtr totugi loc, la o temperaturb mult mai mic[.
h funcfie de reacfia c,atalitic6 a enzimei gi de substratul asupra c[ruia
acfioneazL, enzimele se clasifici
$ase grupuri: oxidoreductaze,
transferaze, hidrolaze, izomeraze, liaze S i ligaze.
Activitatea enzimatici este influenlath de mai mulli factori, printre
qlre:
in
.
r
temperatufa;
pH_ul;
electrolitii;
o concentrafia substratului;
r concentatia enzimei;
o substantele activatoare sau inhibitoare din mediu.
39
F--I
Eil
respectiV
apoettzima care este de natur6 proteici. Temperatura optimd este de +37"C,
deoarece la aceast[, temperaturi distrugerea enzimei este practic nul6, iar
viteza reacfiei este suficient de mare. Mdrind temperatura peste aceastii
,n
)I.II
licI
II
anumitd
uri:
nea
Principiul metodei
Amilaza salivar6 este activtr la +37"C, dax prin fierbere
rnactiveaz.6, gi nu mai are acliune hidrolitic[ asupra amidonului.
lal
mi
Materiale necesare
lite
eprubete
:tor
de
ice
r$i
se
tifon
/$i
reactivi
flor
lo
C9,
ind
pre
Reactivi
Solulie amidon lYo inNaCl 0,3%
Reactiv Fehling I:
CUSO+
HzSO+
api
uin
distilatii
35 g
5
1000
ml
ml
30%
ap[ distilati ad
in momentul utiliz5rii
Fehling tr.
potasiu
se amestec6
p[r!i
300
ml
150 g
1000 ml
egale de reactiv Fehling
qi
116:
Proba
tiv
iar
Tehnica de lucru
ln aoua epnrbete se pipeteazS
,C,
stii
Ia
se
lt
cdte 4
NaCl0,3%,
intr-o eprubetii se adaug6 I ml de saliv[ proaspdtiio nefiartEo iar in
doua eprubetl I ml de salivd diluati fiarth.
41
wl.II
Interpretarea rezultatelor
In eprubeta cu salivl nefiarti, enzima activd descompune amidonul
la rnaltoz5,, caf,e reduce reactivul Fehling la oxid cupros de culome rogu
ctrrilmiziu.
eprubeta cu
enzimelor.
Principiul metodei
Amilaza salivar[ are activitate maxim6 la un pH specific, care se
poate prlre in evidenfi prin hidroliza amidonului intr-o gan6' de pH-uri
reahzate de sisteme tampon.
42
UI
15
II
tr
Materiale necesare
eprubete
erb
nul
)$u
distilatii
tifon
ap6
usi
reactivi
Ice
Reactivi
Solufii tanrpon fosfat cu pH-uri: 5,8;6,2; 6,6;7,0;7,7;8,0
Solutie amidon l% ?nNaCl 0,3%
Solu,tie Lugol (iod in iodur6 de potasiu)
Proba
rH-
ila
rlui
lor,
cu
cu
rlui
ere
tea
trut
Tehnica de lucru
37'C in termostat.
Dup[ rlcire se adaug[ tn fiecare eprubeti cdte o piclturi de solu{ie
Lugol.
Se agitn qi se unnlregte colorafia ap[rutd in fiecare eprubet5.
Interpretarea rezultatelor
pH-ul optim al activitilii asrilazei salivare se gdsegte in eprubeta
coloratil in galben rogcat, deoarece in aceasta hidroliza amidonului a avut
loc pdn6 la maLtozd gi maltodextrine.
se
.uri
tampon cu pH-uri
fieclrei eprubete.
Se adaug[ in fiecare eprubetii cite I ml solu{ie de amidon 1% gi cdte
ml de salivi diluaili gi se mentin timp de 30 de minute la temperatura de
43
i
E{
Y Alaninaminotransferaza (ALAD sau transaminaza glutamicpiruvicd. (rcn se gdsegte localizatd predominant in frcat, 90% in
citoplasma, 10% in mitocondrii; in cantitifi mici 9i in muqchii scheletici,
miocard, rinichi qi pancreas.
ALAT are rol in diagnosticul hepatitelor.
TGP catalizeazdreaclia de transfer a grup[rii amino de la L-alaninl
la acidul o-cetoglutaric, rezultdnd acid L-glutamic qi acid piruvic.
CH.-CH-COOH +
I
HOOC
-CHz-CHz-C-COOH
ll
o
NH2
L-alanind
+-r
e>
ac. a-cetoglutaric
NHz
ac. L-glutamic
ac.piruvic
Y Aspartataminotransferaza (ASAT) sau transaminaza glutamicoxalaceticd (fcq are o largd rispdndire in organism, fiind prezentl in
concentrafii mari in miocard, ficat qi in coo."ntra{ii mai reduse in muqchiul
scheletic, rinichi, creier, pancreas.
ASAT are doufl izoenzvne, una cationicl (80% intramitocondrial) gi
una anionic[ (citosol), qi migreazl electroforetic cu hei componen{i: A, B 9i
C.
TGO catalizeazdreactia de transfer a grupIrii amino de la acidul Laspartic la acidul cr-cetoglutaric, rezultind acid L-glutamic ai acid
oxalacetic.
44
IJI
II
NH2
are
ino
ac. a-cetoglutaric
ac- L-aspartic
e+HOOC-CHr-C-COOH +
alt
HOOC
il
m
ici,
u1a
in
riul
)$i
Iqi
Lcid
CHz- CHr-
CH
COOH +
NH,
ac. glutamic
Principiul metodei
in reaclia catalizathde ASAT
tT*
nc-
o
ac. oxalacetic
nc-
++
il
no'L
000r{
t\- H0^
.o'n.e-Hn{Q}no ,ffii.*-r'rx@Ho.
f
Gi{-
l'{
. ?,1 dinitrolenil.hidrrzona
^t
btrr
acidului pirwic
dinitrsfeqilihidrarino
45
Materiale necesare
eprubete
tifon
reactivi
Reactivi
Substrat ALAT. 1,5 g &FIPO+, 0,2A g KH2POa, 0,039 g acetoglutarat Na (sau 0,030 g acid a-cetoglutaric), 1,78 g alanin6 se dizolvl
in circa 80 ml de ap6. Se ajusteazd pH-ul solufiei la 7 ,4 cu NaOH 0,4 N apoi
se completeazd volumul la 100 ml cu ap6 bidistilat[.
Substrat ASAT. 1,5 g K2HPOa,0,20 g KH2POa, 0,039 g a-cetoglurat
Na (sau 0,030 g acid a-cetoglutaric),1,57 g aspartat de Na (sau 1,32 g acid
aspartic) se dizolv[ in aproximativ 80 ml de ap6. Se ajusteazd pH-ul solufiei
la 7,4 cu NaOH 0,4 N, apoi se completeazd volumul la 100 ml cu apl
bidistilat6.
Solufie 2,4-dinitrofenilhidrazin6 I mM. Se dizolvi 19,8 mg
dinitrofenilhidrazndin l0 ml de HCI (d: 1,19) 9i se completeazilla 100 ml
cu apd bidistilatd.
Solu{ie standard de piruvat de Na 2 mM. Se dizolvd 22 mg piruvat
de Na in 100 ml de ap6 (1 ml solufie conline 2 moli piruvat). Se adaugi 0,3
ml de cloroform pentru conservare.
Solu{ie NaOH 0,4 N
Proba
Ser nehemolizat (hematiile confin
transaminaze decdt serul sanguin).
de lA
20 ori mai
multe
Tehnica de lucru
At6t pentru determinarea ALAT, cdt gi pentru deterrninarea ASAT se
pregdtesc cdte trei eprubete: o prob[ de analizat (P), o prob[ standard (S) li
o probd martor (M).
Se pipeteazd in eprubete reactMi conform tabelului VI:
46
Itr
)I.II
II
Tabelul VI
ALAT
Enzime
Probe
Solu{ie substrat
ASAT
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
ALAT (ml)
Solu,tie substrat
ASAT (ml)
Se
Ser (ml)
SoMe
0,1
0,1
0,1
Se incubeazi 30
de minute La37oC
incubeaz[ 60
de minute la37"C
standard
de oiruvat (ml)
ia-
olvI
apoi
Solu{ie 2,4-
0,5
0,5
0,5
Se
0,5
0,5
0,5
dinitro.urat
acid
u{iei
fenilhidrazinE
(ml)
Repaus 20 de minute la temperatura
camerei
apdt
mg
)ml
oYa]
0,3
r
SolulieNaOH
N
0.4
cm.
Calcul
Se calculeaz[ concentralia piruvatului rezultat6 din reacfie pentru
fiecare enzimdin pmoli/minut/1, care se noteazd cu x.
rulte
Pentru
Tse
l)
gi
ALAT:
x
:En/E.x
x 66,7
Pentm ASAT:
3313
Bfo"l'f*i"
A
intema,tionale
fuud'iP'*ti""*"di 't
se determind 9i ?n unit6{i
(UI)'
pentru transformarea
tabelele de coreclie se gasesc formulele
in IJI'
concenfraliei din pmoliiminut/l, la 25oC
in
Tabelul
r]I
UI
9.5
4
6
2.5
10
13
4
4,5
14
26
28
30
32
34
36
38
16
l6
l8
40
42
20
22
23
24
7,5
18
46
48
50
19
VII
8,5
9
10
11
t2
r9
t4
l5
t7
20
2l
AMT
x t]I x
52
54
56
58
60
62
64
66
68
70
72
74
76
22
23
24
25
26
27
29
30
3l
33
34
35
36
UI
37
78
38
80
39
82
40
84
42
86
88
46
90
48
92
50
94
52
96
54
98
56
100
toz 60
x t]I x
UI
l1
l3
24
26
28
30
32
34
4
6
t4
t6
18
15
10
t7
t9
t2
20
22
23
20
UI
2l
23
25
27
29
31
UI
36
38
40
42
44
46
33
35
37
48
50
74
52
54
55
39
5l
60
4l
44
uL so va repeti
Dac[ activitatea et.o,imaticd depdqegte_ ^60.
,^rurt[, 10 minute pentru ALAT q
determinarea cu o poi*oa de incubas.
se inmu$esc cu 3.
20 deminute p."* eSni. Rezuttatetb oblinute
48
'ol.II
II
dt{i
IV.3.2 I)eterminarea activitnfii ALAT (TGP)
prin metoda enzimatictr
tarea
Principiul metodei
Substraturile participante in reaclia catalizatd de ALAT (TGP) sunt:
Lalanina gi a-cetoglutaratul (a-oxoglutaratul).
Piruvatul rezultat din reacfie, in prezentp lactat dehidrogenazei
fl-DfD, va reac{iona cu NADH+Ff ducind la formarea NAD* gi L-lactat.
Variafia absorban{ei mdsuratii la lungimea de undi de 340 nm este
direct proporfionalE eu activitatea ALAT (TGP).
L-alanina
TGP
alfa-cetoglutarat
++ piruvat+ L-glutamat
AIAT
LDH
piruvat +
NADH+It'
L-Iastat
Materiale necesare
eprubete
reactivi
Reactivi
speta
\T
qi
Reactiv Rl:
Tampon TRIS
Reactiv R2:
NADH+H0,2 mmol/l
LDH
12AOUN
alfa-cetoglutarat 16 mmol/l
49
NAD+
s
Proba
Ser nehemolizat
Plasm[oblinutSdins6ngerecoltatpeEDTA/heparinl
Tehnica de lucru
*;A;b""
se pipeteazr 1
ml de
amestec de reactivi
Rl qi R2
Seagit6conlinutuleprubeteigiseincubeazAtimpdelminutla
370C.
- 365
de 340 nm (334
Se mdsoard varialia absorbanfei la lungimea deundS
nm) fa{[ de ap[ diitihti, in cuve de 1 cm, timp de tei minute'
Se calculeazd variatia absorbanlei pe minut
(AAlmin)'
Calcul
CpUA: (AA/min) x
1750 1':340 nm
CeUA: (AA/min) x
1780 )':
334 nm
CpU/I = (AA/min)
l2l0 l':
365 nm
"
unde:
concentralia Probei
AA/min : variatia absorban{ei pe minut
Cn
Observa{ii
de 340 nm
Dac6 variafia absorbanlei pe minut la lungimea de und6
(33anm)depdgegte0,17saula-lungimeadeundSde365nmdepaqegte
fiziologicl de Nacl
0,095, se va repeta determinarea cu ser diluat cu soMe
10'
in ptopo+e de t : t O iar rezultatul obfinut se va inmufi cu
Valori normale
adul1i:2:16,54
copii Pf,nA ta 5 ani: 0,2
13
UI
Vari4ii Pntologice
Cregteri importante ale ALAT aparin:
hePatita vira16 acut[;
,ol.II
--
II
a,
hepatite cronice;
ctroze;
icter mecanic;
iR2
ficatde stazlacnti,;
mononucleoza infec{ioasd.
ut la
(334
nm
se$e
t{aCl
)
L-aspartat* a-cetoglutarat
oxalacetat
L-glutamat
ASAT
MDH
oxalacetat
+ NADH+If
Materiale necesare
eprubete
->
L-malat + NAD*
*dfuffi'*M
:::
cuve I cm
vase cu solutie dezinfectantb
api distilatE
tifon
reactivi
Reactivi
Reactiv Rl:
TamPon TRIS
(PH=7,8)
L-asPartat
88 mmoVl
260 mmoVl
Reactiv R2:
0,2 mmolA
NADH+If
600 U/T
MDH
9OO U/I
LDH
alfa-cetoglutarat 12 mmoVl
Proba
Ser nehemolizat
Plasmaobfinutiidins6ngerecoltatpeEDTAlheparina
Tehnica de lucru
i-tr-" .p*U.tA
se pipeteazd 1
ml de amestec de reactivi Rl qi R2
nm (334
se m6soar6 varialia absorbanlei la lungimea de und6 de 340
_365 nm) fa!6 de ap[ distihta, tn cuve de 1 cm, timp de trei minute.
Se calcuteazb vaiatiaabsorbanfei pe minut (AA/min)'
Calcul
l':
CnU/l = (AA/min) x 1790 l':
CpUA
(AA/min) x
1750
334 nm
3Zl0 I = 365 nm
unde:
Cn
340 nm
concentrafia Probei
1tr
,UI
II
Observafii
und[ de 340 nm
(334 nm) deplgeqte 0,17 sau la lungimea de undE de 365 nm depbqegte
0,095, se va repeta determinarea cu sef diluat cu solulie fiziologici de NaCl
in proporlie de 1:10, iar rezultatul ob,tinut se va itrmulli cu 10.
DacE variafia absorbanfei pe minut la lungimea de
Valori normale
adu{i:2-20UI
copii 3 luni
- 1 an: pfn6la 28 UI
Variafii patologice
R2
tla
334
y-glutamil-peptid A + peptid B
---+
53
peptid A + y-glutamil-peptid B
wf4
de
Principiul metodei
in *edi, alcalin, y glutamiltransferaza catalizeazd scindarea L-1glutamit-p-nitoanilidei gi transferul grupdrii L-1-glutamil pe glicilglicini
p,rott in libertate a nitroanilidei de culoare galben5. Cregterea valorii
":o
" mdsrnat[ la lungimea de undd de 405 nm este direct
absorbanlei
proporfional[ cu activitatea GGT.
Materiale necesare
eprubete
tifon
reactM
Reactivi
Reactiv Rl
TamPon TRIS,
PH:8,1
54
100 mmoVl
OI.II
'de
II
Reactiv R2
Glicilglicind
100
L-y-glutamil-p-nitroanilid6
mmol/t
4 mmoUl
ansa
in
cantitatea
Rl.
corespunzdtoare de reactiv
Proba
Ser nehemolizat
line,
Tehnica de lucru
intr-o eprubeti se pipeteazS 1 ml de amestec de reactivi Rl gi R2 $
100 pl de probl de analizat.
Se agitii conlinutul eprubetei gi se incubeaz[ timp de I minut la
37"C.
L1:in[,
lorii
410
Calcul
irect
(AA/min)
nm
nm
unde:
Cn concentra{ia probei
AA/min = varia,tia absorban{ei pe minut
Observafii
Daci variafia absortan{ei pe minut depiqegte 232 UlL, proba se va
dilua cu solulie de NaCl in proporfie de l:10, se va repeta determinarea gi
ruzultatul se va ?nmulli cu 10.
Valori normale
femei:
7 -32Un
bdrbafi: ll - 50 Un
))
Variafii patologice
Valori crescute ale GGT apar tn:
hepatopatia drog indusd (inclusiv etanolicd ?n care apar
cregterile cele mai importante);
ciroza biliard primitivi (cregteri semnificative);
sindroame obstructive (cregte de 10 - 30 de ori fa{a de normal);
hepatite cronice;
neoplasm hepatic;
steatozd hepaticd;
stazd hepaticd in insuficien{a cardiacd congestivE;
afecfiuni pancreatice;
hipertrigliceridemie (creqteri u$oare de 1,5 -2 oi care sugereazi
o stimulare a proteosintezei hepatice).
Determinarea GGT este un test screening al consumului de alcool.
GGT este primul parametru care cregte qi ultimul care scade ln cazul
consumului de alcool (chiar dacd transaminazele sau alte teste hepatice sunt
normale)
56
-'
)ol.II
II
tr
al);
Principiul metodei
Enzima in mediu baz,lc wtalueazd hidroliza monofosfafilor. In urma
reacfiei renfltil p-nifiofenol gi fosfat anorganic. Ionii de Mg* cresc
rctivitatea enzimei.
Activitatea enzimaticl este direct proporlionali cu cantitatea de pnitrofenol eliberat6, respectiv cu intensitatea coloraliei obfinute.
:eazd
cool.
:azttl.
sunt
fupe
in $
ryti),
nald"
'area
igure
fosfataza alcalind
p - nitrofenol + fosfat
-r--:t;;-----+
Mg--
Materiale necesare
eprubete
reactivi
Reactivi
Reactiv Rl:
1 moUl
Tampon dietilamin6, pH 0,6 mmoVl
Clorur6 de
Reactiv R2:
Fosfat de p-nitrofenil (solu{ie) 10 mmoVl
9,8
magneziu
Proba
Ser nehemolizat
Plasm5
hepainizatf
Tehnica de lucru
Se amesteci reactivul R2
R I (substrat tamponat).
in
57
(25,30'C).
Se mlsoard vana[ia absorbanlei la lungimea de undi de 405
nm fatl de api distilati, tn cuve de 1 cm, timp de trei minute.
Se calculeazb varialia absorban{ei pe minut (AA/min).
- 410
Calcul
Cp Un
: (AA/min) x 3000
1,: 405 nm
unde:
concentralia probei
AA/min vana[ia absorbanf ei pe minut
Co
Observafii
DacI varia{ia absorbanlei pe minut depaqegte 0,25, proba se va dilua
cu solutie de NaCl in proporfie de 1:10, se va repeta determinarea qi
rezultatul se va inmulli cu 10.
Valori normale
femei
blrbafi
copii in perioada
55
70
crepterii
- 170 I'IVI
- l75UVl
Variafii fiziologice
Mirirea nivelului seric al
loc in
Variafii patotogice
FAL este unica enzimil care se determin[ uzual pentru diagnosticul
afecfiunilor osoase.
Valori crescute:
rahitism:
:x
voJ.II
R2
gi
37"C
-
410
II
ff
hiperparatiroidism;
boala Paget;
tumori osteogene insofite de reacfie osteoblasticd;
metastaze osoase;
osteoporoza (modific6ri nesemnificative);
dilua
gi
ea
Valori scizute:
hipofosfatazie congenital6 (rahitismul rezistent la tratamentul
cu vitamina D);
hipotiroidie;
intoxicafii cu plumb;
deficit sever de vitamina C.
rc in
:en{ii
rii gi
ri tn
sticul
Principiul metodei
Materiale necesare
eprubete
distilatil
tifon
reactivi
apd
Reactivi
SolufieNaCl 0,9%
Solufie iod 0,1 N
Solu{ie amidon 0,1olo
Proba
Ser (win5, salivi)
Tehnica de lucru
Se pregdtesc 10 eprubete curate qi se pipeteazdin prima eprube
ml de ser, iar in urmdtoarele 9 eprubete cdte I ml de solufie NaCl.
Din prima eprubetd se ia I ml, se trece in a doua eprubet6 gi se ag
Se procedeazd astfeL pind la ultima eprubet[, din care se ia ml gi
aruncd, realizdndu-se astfel o serie de dilulii succsive (l/2, l/4,
r/16....11srz).
Se adaugi in toate eprubetele cdte2 ml de solulie de amidon, se a
gi se introduc la tennostat la37"C timp de 30 de minute. Apoi, in eprube
60
"e
vol.Il
II
ricite sub jet de ap6, se adaugl in fiecare cdte 3 picbturi de solufie de iod
0,1N.
' Eprubetele
iul de
c mai
l/10)
ute la
erului
difiile
Tebelul IX
Nr.
eorubeti
Ditutia
serului
Activitatea
amilazicli
(uW)
UI
t/2
r/4
t/8
16
l0
t/16
1t32
U@
Ur28
t/252
I/512
32
64
t28
256
512
t024
in
unitdli
trohlgemuth UW).
I UW reprezintil cantitatea minim[ de enziml capabild sd degradeze
n mg de amidon ?n timp de 30 minute la37"C.
I UD (unitate diastazicd) reprezintii cantitatea de enzim6 capabil[ s[
hidrolizeze 0,2 nl amidon lyao in condiliile descrise.
sethz
uw:2oUD
unde:
'?o
til:
agrti
rctele
6l
I
I
q
Calcul
Se calcule azd carfirtatea de amidon (mg) hidrolizath de amilaza
ril/ohlgemuth
conlinutd intr-un ml de ser. Rezultatul exprimat in unitiifi
(UW) se ob,tine inmulsnd gradul diluliei ultimei eprubete in care nu apare
culoarea albastr[ cu 2.
IJW:Voxc/100xdx103
unde:
V6 = volumul de solu{ie de amidon;
concentrafia soluliei de amidon;
d diua ultimei eprubete in care nu apare culoarea albastra.
E'x. Presupunand c6 in'eprubeta a cincea apare culoarea albastrd,
c:
:
(l
x 2) : 1116:2
xl6 :
32
UW
Observafii
Aceasti metodi este semicantitativL, orientativd.
Reaclii fals pozitive dau codeina, morfrua, indometacinul.
Valori normale
ser:
16
32
UW
urind:8-64UW
Varia{ii patologice
Valori crescute ale amilazei in ser:
F creqteri marcante (de 5 - 10 ori fa{5 de normal):
pancreatite acute (prin leziuni ale acinilor pancreatici);
insuficienli renalfl (anilaza are eliminare renal6);
creqteri moderate:
ts
,ol.II
lLaza
muth
lpare
)
II
obstruc{ii intestinale;
contuzii abdominale cu lezarea pancreasului;
ulcer perforat;
colici biliare;
afecliuni ale glandelor salivare:
parotiditd;
calcul salivar;
hipertiroidism;
cregteri pasagere:
administrare morfinE;
intoxicafii acute cu alcool.
rstrd"
:ia
ii
),l\o
te de
ulcer Perforat;
colici biliare.
Valo{
HzOz+HzOz
2H2O + Oz
se
63
g
numlrului de eritrocite. Din acest motiv se efectueazL gi numirarea
eritrocitelor o data cu recoltarea sangelui pentru detenninareacatalazei-
Principiul metodei
Determinarea activitalii catalazei se face printr-o metodi indirecti:
unei
cataLaza dintr-un microlitru de sdnge e pus6 s[ acfioneze asupra
(in exces) de ap6 oxigenata la temperatura camerei, un anumit timp'
cantitali-Excesul
de api oxigenatE rdmas6 nefiansformat6 se titreazd tn mediu
acid cu permanganat de Potasiu.
Activitatea enzimei se determina prin cantitatea de ap4 oxigenat[
descompusdde catalaz6in 30 de minute lal7"C'
tifon
reactivi
Reactivi
Alcool amilic
Proba
Sdnge
diluat 1/1000
64
13
/OI.II
:ecti:
unei
;imp.
rediu
onatd
F]
rt
II
Tehnica de lucru
Se recolteazd din pulpa degetului cu ajutorul unei micropipete
,i-l ml sdnge care se introduc int-un balon cotat de 100 ml care con{ine l0
:nl de ap[ distilatd.
Se amestecd pentru a produce hemoliza 9i se completeazd apoi cu
rya distilati p&r[ la sernn, ob{indnd astfel o dilulie a sdngelui de 111000.
in doue flacoane Erlenmeyer, martor qi probl se pipeteazl reactivii:
.;te 10 ml de ap[ distilati gi cdte 1 ml de ser diluat l/1000.
Martorul se fierbe timp de 3 - 5 minute pentru a distruge activitatea
-rels2si, apoi se r[cegte in jet de apI rece.
Se pipeteaz6 tn ambele flacoane cite 2 ml de ap[ oxigenat5, se agit6
p se introduc la termostat timp de 30 de minute la 17"C.
Se adauga apoi in cele dou6 flacoane cdte 5 ml de acid sulfuric 20Yo
p cdte 2 - 3 picIturi de alcool amilic.
Se titreazi cele doud flacoane, martor qi prob6, cu pefinanganat de
pousiu N/10 p6n[ la culoare rczpal stabil[.
Calcul
Se calculeazd titrul permanganatului de potasiu
in raport cu
apa
oxigenati:
xnaoo+r
gzoz:0,1 x
unde:
V-
ap5)
a
unde:
a:
s=1
g#inr&fGei
:,
r:
.,il
ir', i,3gfl!'outPriqrndb :. ,,
.aiCr;.]i : :b i*l::"1-i'' ,
I
:i
I
fr
t{
rKt
itr
m
m
:: , :
,.'",
'':'..'
Il
I.:r-*,': l:,r,*c!i.r}
'
,,.
---i:
- lsrlsS
il-::'.,p1;1.
i .
.i,
;!
il
{i =
liil
:,r:;rt.ii,:J, -
i:;i!,
t',i
:3t!S*
ii.,tIri: ,i
sl :l;,i,ir,j
;irr
:i
; i;'
ra
ii..' : ;iit
,
jrj,:iiiJ r,-,f 1;fi
r.
I!,
-t-iil3
tl',r\ :;.1r):t
Il
I.
I
IL.
iri"r; ::i:
:is,l+l
iil[litils:
t?
:?irnu
.-::
gtr,r'.:r::
r:i{$
,..t.j.:itiX;
:,...i1)
:-,it;i;-i.t!;:l;
f{:i.;
:":iit -.: l;
nl
'f
:.t;,'rii ,:..r,.,i..
s.
ld.irrl.J.:r
!.
':'J'!r
irl.t,
ffi