API 10 S - cod 10100

Sistem de identificare pentru Enterobacteriaceae si alti bacili Gram negativi

API 10 S este un sistem standardizat pentru identificarea Enterobacteriaceae-lor si a
altor bacili Gram negativi nepretentiosi, care utilizeaza 11 teste biochimice miniaturizate
si o baza de date. Lista completa a organismelor care pot fi identificate cu ajutorul trusei
API 1 ! este furnizata la sfarsitul acestui insert tehnic, in tabelul de identificare.
PRINCIPIU
Galeria API 10 S este constituita din 1 microtuburi care contin diverse substrate sub
forma deshidratata. "estele se inoculeaza cu o suspensie bacteriana, realizata din
colonia studiata, pentru reconstituirea mediului. #eactiile metabolice produse in timpul
perioadei de incubare se traduc prin viraje de culoare spontane sau obtinute prin
adaugarea de reactivi suplimentari.
$upa %& ore de incubare la '(-')
o
*,

se realizeaza citirea acestor reactii vizual, cu
ajutorul "abelului de citire, iar identificarea este obtinuta consultand lista cu profiluri
numerice din acest insert tehnic sau cu programul soft dedicat identificarii cu truse API
+APILA, PL-!..
RAC!I"I
*ompozitia /itului +pentru #0 identificari.0
( galerii API 1 !
( cutii de incubare
( fise pentru rezultate
1 bareta pentru inchiderea pungii cu galerii
1 notita tehnica
Produse aditionale neincluse in $it
mediu de suspensie ( ml +cod %1(. sau mediu NaCl 0%&#' ( ml +cod %%'.
reactivii individuali "$A +cod )&., 1A23! +cod )(&., 4I"1 +cod )&&., 4I"%
+cod )&(., 56 +cod )&7.
ulei de parafina - +cod )1.
pipete Pasteur sau PSIpete +cod )%(.
soft de identificare APILA, PL-!
stativ pentru fiole +cod )%.
c(ipament de laborator necesar
- incubator +'( 8 ')9 *.
- frigider
- bec ,unsen
- creioane mar/er
PAS!RAR GA)RII SI RAC!I"I
Galeriile API 10 S sunt ambalate intr-un saculet de alumuniu cu plicuri deshidratante.
$upa deschiderea acestuia, galeriile ramase se inchid in saculet impreuna cu
deshidratantul cu ajutorul baretei pentru inchidere: se plaseaza e;tremitatea saculetului
intre cele doua piese ale baretei si se preseaza cu grija, pe toata lungimea. Galeriile pot
fi astfel pastrate cel mult 10 luni de la desc(iderea saculetului, la %-<=* +sau pana la
data limita de valabilitate indicata pe ambalaj..
#eactivii se pastreaza la intuneric la %-<=* +cu e;ceptia "$A si 4I"1 care pot fi pastrati
la %-'=*. pana la data limita de valabilitate indicata pe ambalaj.
$upa deschiderea fiolelor +si transferul reactivilor in flacoanele picuratoare. reactivii pot
fi pastrati o luna +sau pana la data limita de utilizare, daca aceasta este anterioara.0 se
noteaza data deschiderii pe eticheta flacoanelor sau fiolelor.
#eactivii 56 si 1A23! sunt foarte sensibili la lumina: din acest motiv se inveleste
flaconul cu o folie de aluminiu si nu se tine in afara frigiderului decat atunci cand se
utilizeaza. 4u se lasa timp indelungat pe masa de lucru>
C*+P*,I!I +-II SI RAC!I"I
+ediu NaCl 0%&#'
( ml
sau
+ediu de suspensie
( ml
*lorura de sodiu <.( g
Apa demineralizata 1 ml
Apa demineralizata
Reactiv !-A
( ml
*lorura ferica '.& g
?
%
5 @sp 1 ml
Reactiv .A+S
( ml
*omponent 1 %1<' +confidential. .( g
?*l 14 @sp 1 ml
!%&A%(0 evitati contactul cu ochii si pielea.
In caz de contact cu ochii clatiti imediat locul afectat cu multa apa timp
de 1 minute.
In caz de contact cu pielea spalati cu sapun si multa apa.
Reactiv NI!1
( ml
Acid sulfanilic .& g
Acid acetic ' g
?
%
5 ) ml
C*R*,I"
#'&0 provoaca arsuri.
!%0 nu lasati la indemana copiilor.
!%'0 nu inspirati vaporii.
!%70 in caz de contact cu ochii spalati imediat din abundenta cu apa si
consultati un medic.
Reactiv NI!/
( ml
4,4-dimetil-1-naftilamina .7 g
Acid acetic ' g
?
%
5 ) ml
C*R*,I"
#'&0 provoaca arsuri.
!%0 nu lasati la indemana copiilor.
!%'0 nu inspirati vaporii.
!%70 in caz de contact cu ochii spalati imediat din abundenta cu apa si
consultati un medic.
Reactiv *0
( ml
"etrametil-p-fenilendiamina 1 g
Alcool izoamilic 1 ml
N*CI"
#10 inflamabil.
#%0 nociv prin inhalare.
!%&A%(0 evitati contactul cu pielea si ochii.
U!I)I,AR RAC!I"I
Lasati reactivii sa atinga temperatura camerei +%-'
o
*. inainte de utilizare.
1% Reactivii !-A1 NI!11 NI!/1 *02
$eschideti fiolele de reactivi in modul indicat in paragraful BPrecautiiC +fiole cu
capac picurator..
3liberati o picatura de reactiv.
#einchideti bine fiola si pastrati-o in modul indicat in paragraful BPastrarea
reactivilorC.
/% Reactivul .A+S2
$eschideti fiola cu solvent asociata cu reactivul 1A23! in modul indicat in
paragraful BPrecautiiC +fiole fara capac picurator..
Aspirati continutul fiolei de solvent cu o pipeta foarte uscata si transferati
solventul in flaconul picurator +care contine principiul activ deshidratat..
Di;ati capacul picurator al flaconului.
Inchideti bine flaconul.
Agitati.
Asteptati (-1 minute pentru dizolvarea completa a principiului activ.
-tilizati reactivul astfel reconstituit, inchideti bine flaconul dupa folosire si
pastrati-l in modul indicat in paragraful B Pastrarea reactivilorC.
PRCAU!II
$estinat numai diagnosticului in vitro.
Personalul de laborator calificat trebuie sa utilizeze metode aseptice si precautiile
obisnuite contra agentilor infectiosi.
4u pipetati cu gura prelevatele si reactivii.
4u folositi reactivii dupa data e;pirarii.
$upa scoaterea din frigider, lasati reactivii sa revina la temperatura ambianta
+%-'
o
*. inainte de utilizarea lor.
$eschideti fiolele usor, in modul indicat in continuare0
- "ineti fiola vertical, intr-o mana +capacul alb in partea superioara..
- Apasati cu putere capacul.
- Acoperiti partea inclinata a capacului cu varful degetului mare.
- Apasati cu degetul partea inclinata a capacului cu o miscare spre e;terior
spargand e;tremitatea fiolei in interiorul capacului.
Fiole fara capac picurator:
- Indepartati usor capacul.
Fiole cu capac picurator:
- #asturnati fiola si mentineti-o in pozitie verticala.
- Aplicati o presiune laterala asupra capacului pentru transferarea in totalitate a
reactivului in flaconul picurator.
"oate produsele inoculate trebuie sa fie considerate ca potential infectioase si
manipulate ca atare.
"oate prelevatele si culturile bacteriene trebuie sa fie considerate ca potential
infectioase si se va lucra cu ele respectand normele privind protectia in laborator.
La sfarsitul testului, dupa citire si interpretare, toate prelevatele, lichidele varsate
si produsele inoculate trebuie sa fie autoclavate, incinerate sau trecute intr-un
dezinfectant germicid inainte de a fi aruncate.
Interpretarea rezultatelor testului trebuie sa fie facuta de un microbiolog
competent care sa ia in considerare conte;tul clinic, originea prelevatului,
aspectele macro si microscopice si eventual rezultatele altor teste, in particular
antibiograma.
+*- - )UCRU
Prelevatele si culturile bacteriene trebuie sa fie considerate ca potential infectioase si
din acest motiv vor fi manipulate numai de catre personalul de specialitate respectand
normele de protectie specifice laboratorului, precautiile obisnuite pentru grupele
bacteriene studiate si folosind metode aseptice pe toata durata utilizarii acestor
prelevate si culturi.
Pregatirea galeriei
Pregatiti o cutie de incubare +reuniti tavita si capacul. si repartizati apro;. ' ml
apa distilata sau demineralizata in godeurile tavitei pentru crearea unei
atmosfere umede +se poate folosi orice fel de apa fara aditivi chimici care pot
duce la elibererea de gaze, cum ar fi *l
%
, *5
%
, etc...
Inscrieti referinta tulpinii de studiat pe marginea laterala a cutiei +nu notati pe
capac deoarece in timpul manipularii acesta poate fi schimbat..
$esfaceti ambalajul galeriei.
Puneti galeria in tavita.
In paralel realizati testul o;idazei pe o colonie identica cu cea studiata, astfel0
- puneti o bucatica de hartie de filtru pe o lama de sticla
- umeziti cu o picatura de apa
- etalati colonia aleasa cu un aplicator de sticla sau de lemn
- adaugati o picatura de reactiv 56
- culoarea violet ce apare in 1-% minute indica o reactie po3itiva%
Aceasta reactie trebuie sa fie notata pe fisa pentru rezultate deoarece reprezinta al 11-
lea test de identificare.
N*!A2 API 10 S trebuie utilizata pentru bacili Gram negativi nepretentiosi. Germenii
pretentiosi, necesitand precautii de manipulare deosebite +,rucella, Drancisella. nu fac
parte din baza de date API 10 S. 3ste bine sa se utilizeze alte teste pentru e;cluderea
sau confirmarea prezentei lor.
Prepararea inoculului
$eschideti o fiola de mediu 4a*l .<(E +( ml. sau o fiola de mediu de suspensie
+( ml. in modul indicat in paragraful B PrecautiiC +fiola fara capac picurator., sau
utilizati un tub continand ( ml apa fiziologica sterila sau apa distilata sterila fara
aditiv.
Prelevati cu o pipeta o singura colonie bine individualizata izolata pe mediul
gelozat.
#ealizati o suspensie bacteriana omogenizand bine bacteriile in mediu.
N*!A2 majoritatea speciilor Vibrio sunt halofile. $aca se suspecteaza prezenta lor,
realizati suspensia bacteriana in mediu 4a*l .<(E.
Inocularea galeriei
Dolosind aceeasi pipeta umpleti tubul si cupula testului I*I"I cu suspensia
bacteriana.
-mpleti doar tuburile +nu si cupulele. celorlalte teste.
*reati anaerobioza in testele L$*, 5$*, ?
%
! si -#3, umpland cupulele
respective cu ulei de parafina.
Inchideti cutia de incubare.
Incubati la '(-')=* timp de 1<-%& ore.
Citirea galeriei
$upa 1<-%& ore de incubare la '(-')=*, realizati citirea galeriei cu ajutorul
"abelului de citire din acest insert tehnic.
4otati pe fisa pentru rezultate toate reactiile spontane.
#evelati testele care necesita adaugarea de reactivi0
- "est "$A 0 Adaugati o picatura de reactiv "$A. *uloarea maro inc(is indica o
reactie po3itiva care va fi notata pe fisa pentru rezultate.
- "est I4$ 0 - Adaugati o picatura de reactiv 1A23!. *uloarea ro3 difu3ata in
tot godeul indica o reactie po3itiva%
- "est 45% 0 Adaugati o picatura de reactiv 4I" 1 si 4I" % in tubul GL-.
Asteptati /-4 minute. *oloratia rosie indica o reactie po3itiva.
N*!A0 "estele de reducere a nitratilor si de producere de indol trebuie sa fie
realizate ultimele deoarece aceste reactii elibereaza gaz care risca sa altereze
interpretarea celorlalte teste din galerie. 4u acoperiti cutia de incubare dupa
adaugarea acestor reactivi
Identificarea
*odificati rezultatele obtinute intr-un profil numeric0 pe fisa de rezultate testele sunt
separate in grupe de trei si o valoare 1, % sau & este indicata pentru fiecare test.
Galeria API 1 ! contine 1 teste si adunand in interiorul fiecarei grupe de cate '
teste numerele corespunzatoare reactiilor pozitive, se obtine un profil numeric
alcatuit din & cifre +reactia o;idazei constituie al 11-lea test iar reducerea nitratilor al
1%-lea..
Identificarea se obtine fie cautand profilul numeric obtinut in lista codurilor din acest
insert tehnic, fie cu ajutorul softului de identificare APILA, Plus, prin introducerea
manuala a codului numeric +alcatuit din & cifre..
3;emplu0
)I+INARA +A!RIA)U)UI 5*)*SI!
$upa folosire, fiolele, cutiile, pipetele si galeriile trebuie incinerate sau decontaminate
prin autoclavare sau imersie in dezinfectant, inainte de a fi aruncate.
C*N!R*)U) CA)I!A!II
2ediile, galeriile si reactivii fac obiectul controalelor de calitate sistematice in diferite
etape de fabricare. !e poate face un control bacteriologic in laborator cu urmatoarele
tulpini0
1. Escherichia coli A"** %(F%%
%. Enterobacter cloacae A"** 1'&)
'. Proteus mirabilis A"** '(7(F
&. Stenotrophomonas maltophilia A"** (1''1
*bs2 Profilul a fost obtinut dupa 1<-%& ore de incubare, pornind de la culturi pe mediu
agar "rGpcase !oja sange de oaie.
)I+I!
!istemul API 10 S este destinat numai identificarii bacililor Gram negativi
nepretentiosi cel mai des intalniti in prelevatele clinice +vezi tabelul de
identificare.. 4u poate fi utilizat pentru identificarea altor germeni sau pentru
e;cluderea prezentei lor.
"estele suplimentare sunt uneori necesare pentru diferentierea intre doua specii
In acest caz microbiologul va lua in considerare conte;tul clinic, originea
prelevatului studiat, aspectele macro si microscopice si eventual rezultatul altor
teste cum ar fi procentul de identificare +EI$. si indicele de tipicitate +".. +$e
e;emplu pentru un prelevat clinic, o slaba diferentiere intre 3. coli si !erratia
odorifera va orienta microbiologul catre 3. coli, in special daca EI$ si indicele "
sunt mari si in favoarea acestei specii, 3. coli fiind frecvent si !erratia odorifera
foarte rar intalnit in prelevatele clinice..
Galeria API % 3 care contine 1 teste suplimentare poate fi folosita pentru
identificari aprofundate. In acest caz microorganismele pot fi identificate cu
ajutorul *atalogului de interpretare API % 3.
PR5*R+AN!
!istemul API 1 ! a fost comparat cu alte metode obtinandu-se urmatoarele rezultate0
In raport cu metodele conventionale, o concordanta de F'.&E +studiu pe %F% tulpini.
+G. !tane/ et al., 1F<..
In raport cu API % 3,
- identificare corecta0 F7.FE la nivel de gen si F(.FE la nivel de specie +studiu pe
')&)7 tulpini. +3. A. #obertson et al., 1F)(..
- identificare corecta0 F'.(E la nivel de gen si <(.7E la nivel de specie +studiu pe %1
tulpini. +!. ,. Phillips et al., 1F))..
- identificare corecta0 1E la nivel de specie +cu sau fara teste suplimentare. +studiu
pe ) tulpini. +studiu realizat in 1FFF intr-un spital francez..
!A6) - CI!IR
!S! SU6S!RA! RAC!II7N,I+ R,U)!A!
NGA!I" P*,I!I"
54PG orto-nitro-fenil--
$-galactopiranozid
beta-galactozidaza incolor galben +1.
GL- glucoza fermentatie A o;idare +&. albastru A
albastru
verde
galben A
galben gri
A#A arabinoza fermentatie A o;idare +&. albastru A
albastru
verde
galben
L$* lizina lizin decarbo;ilaza galben portocaliu
5$* ornitina ornitin decarbo;ilaza galben rosu A
portocaliu +%.
*I" citrat de sodiu utilizarea citratului verde pal A
galben
albastru-verde A
albastru +'.
?
%
! tiosulfat de sodiu producerea de ?
%
! incolor A
gri
depozit negru A
filamente fine
-#3 uree ureaza galben rosu A
portocaliu
"$A triptofan triptofan dezaminaza
"$A A imediat
galben maro inchis
I4$ triptofan producerea de indol
1A23! A imediat
1A23! 1A23!
incolor roz
verde pal A
galben
56 pe hartie de filtru citocrom o;idaza
56 A 1-% min
incolor violet
45
%
+tub GL-. producere de 45
%
4I"1 H 4I"% A %-' min
galben rosu
+1. 5 culoare galben foarte slaba reprezinta tot rezultat pozitiv.
+%. 5 culoare portocaliu aparuta dupa 1<-%& ore de incubare trebuie considerata ca
rezultat negativ.
+'. *itire in godeu +zona aeroba..
+&. Dermentatia incepe in partea inferioara a tubului, o;idarea incepe in godeu.
!A6)U) - I-N!I5ICAR prezinta procentul de reactii pozitive dupa 1<-%& ore de
incubare la '(-')
o
*.