Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
-apa: reprezintă peste 75-85% din greutatea umedă a bacteriei. Există apă liberă (mediu de dispersie)
şi apă legată fizico-chimic cu diferite structuri. Sporii au puţină apă, în special apă legată. Bacteriile
sunt fiinţe „acvatice” prin excelenţă.
-Substanţele minerale: reprezintă 2-30% din greutatea uscată a bacteriei şi variază în funcţie de
specie, vârsta culturii, compoziţia chimică a mediului.
-glucidele
În structura bacteriană se pot găsi glucide simple cu rol în metabolismul intermediar glucidic, precum
şi glucide complexe, de exemplu poliozide. Acestea din urmă au o serie de roluri, spre ex. participă la
realizarea structurii peretelui celular, fac parte din capsula unor bacterii etc.
Există teste biochimice în care se urmăreşte utilizarea sau imposibilitatea utilizării unui anumit zahar
de către o bacterie. Aceste teste sunt utile pentru identificarea bacteriei respective (în special în cazul
enterobacteriilor folosind mediile TSI, MIU, sistemele API etc). Testările biochimice sunt de mare
utilitate şi în studiul fungilor (auxanogramă, zimogramă).
-proteine
-glucide
- Lipidele: Reprezintă mai puţin de 10% din greutatea uscată a bacteriilor şi variază cantitativ în
funcţie de specie, vârsta culturii (cresc în celulele „îmbătrânite”, reprezentând probabil un semn de
degenerescenţă) şi compoziţia mediului. La mycobacterii, sunt în cantitate mai mare (circa 20-40%).
Lipidele se pot găsi libere în vacuole, combinate sau făcând parte din diferite structuri ale celulei
bacteriene (perete, membrană, mezozomi).
-pigmentii:
Pigmentogeneza este caracteristică bacteriilor cromogene şi este dependentă de condiţiile de
cultivare.
Producerea de pigmenţi poate reprezenta un criteriu de identificare (ex. în cazul tulpinilor de
Pseudomonas aeruginosa sau în cazul unor specii din genul Staphylococcus). Trebuie să reţinem încă
de la început faptul că în cazul stafilococilor, pigmentogeneza este doar un caracter orientativ şi nu
vom clasifica drept „patogenă” o tulpină de stafilococ în funcţie de „culoarea” coloniei. Stafilococii
sunt condiţionat patogeni. Testul orientativ privind patogenitatea este testul coagulazei care ar
trebui efectuat în mod obligatoriu pentru toate tulpinile izolate de la pacienţi.
Putem aminti și faptul că pigmenţii pot avea o serie de roluri, de ex.: rol de protecţie faţă de radiaţiile
UV (pigmenţi carotenoizi), rol antibiotic (exemplu piocianina elaborată de P. aeruginosa faţă de B.
anthracis) şi rol enzimatic.
-enzimele:
În cazul bacteriilor se poate aprecia că metabolismul este foarte intens. Capacitatea de a elabora
anumite enzime este determinată genetic (există peste 2000 de determinanţi genetici diferiţi),
precum şi prin mecanisme de control care pot modifica bagajul enzimatic în funcţie de necesităţi.
După locul de acţiune, enzimele bacteriene se pot împărţi în:
· enzime extracelulare (exoenzime), de exemplu hidrolazele;
· enzime ectocelulare (în membrana citoplasmatică, reglând permeabilitatea selectivă), de exemplu
permeazele;
· enzime intracelulare.
- Vitaminele bacteriene
- Factorii de creştere
Factorii de creştere sunt metaboliţii esenţiali pe care bacteria nu-i poate sintetiza pe baza
substanţelor care se găsesc în mediul extern. Factorii de creştere trebuie neapărat incluşi în mediul
de cultură în cazul în care dorim să izolăm microorganismul respectiv, numit „microorganism
pretenţios” (ex. factorii X şi V trebuie incluşi în mediul de izolare pentru Haemophilus influenzae).
Bacteriile patogene sunt heterotrofe. Adaptându-se la viaţa parazitară, devin dependente de o serie
de astfel de factori de creştere (unele sunt atât de dependente încât nu pot fi cultivate „in vitro”, de
exemplu bacilul leprei - Mycobacterium leprae).
Metabolismul microbian
Nutriţia microorganismelor
Pentru studiul dinamicii unei populatii bacteriene intr-o cultura discontinua asincrona se
analizeaza curba de crestere a bacteriilor = evolutia unei populatii bacteriene care se
multiplica prin diviziune simpla in functie de timp.
Curba de crestere bacteriana prezinta 4 faze esentiale: faza de lag, faza de crestere
logaritmica, faza stationara si faza de declin si moarte celulara.
a) Faza de lag (de crestere zero)-incepe din momentul
introducerii inoculului in mediu de cultura. Numarul celulelor bacteriene ramane neschimbat
sau se modifica foarte putin. In aceasta faza celulele nu sunt latente, ci au un metabolism activ
(sinteza de enzime inductibile), celulele pregatindu-se de multiplicare. La sfarsitul fazei
celulele bacteriene cresc in dimensiuni si are loc faza de initiere a cresterii.
b) Faza de log (de crestere logaritmica) – caracterizata printr-un ritm exponential de
crestere.La fiecare diviziune populatia bacteriana se dubleaza. Celulele au cea mai intensa
activitate metabolica si sunt sensibile la conditiile nefavorabile (radiatii, substante
antimicrobiene). Capacitatea de crestere exponentiala dureaza o perioada redusa de
timp,datorita factorilor de mediu limitanti. Exemplu de factori limitanti: lipsa nutrientilor,
relatii antagoniste. La sfarsitul fazei apare o faza de incetinire a cresterii, apoi cultura intra in
faza a III-a.
c) Faza stationara de crestere (“de platou”) – o perioada de echilibru in care numarul de
celule bacteriene ramane constant, ca numarul de celule care mor fiind compensat de numarul
celor ce se divid. Celulele sunt mature, dimensiuni si morfologie normale, apar primele
incluzii si primii spori (la speciile sporogene) si au o activitate metabolica redusa. La sfarsitul
fazei numarul celulelor incepe sa scada progresiv; daca in aceasta faza se adauga mediu de
cultura proaspat, cultura intra din nou in faza de crestere exponentiala.
d) Faza de declin si moarte celulara – are loc o regresie exponentiala care continua pana
ramane o fractiune mica de celule rezistente/dormante sau pana moare toata populatia
celulara. Durata fazei depinde de durata de viata a speciei. Celulele prezinta alterari
morfologice, se coloreaza anormal, au substante de rezerva, devin acidofile. La speciile
sporulate sunt prezenti numerosi spori maturi sau sporuleaza toata cultura.
Metabolitii primari sunt substante produse de bacterii pe parcusul cailor metabolice
majore si care sunt esentiale pentru viata celulelor (enzime, aminoacizi, acizi organici). Sunt
sintetizati in faza de crestere exponentiala.
Metabolitii secundari sunt substante biochimice neesentiale pentru viata celulelor
bacteriene (vitamine, antibiotice, alcooli) si care sunt sintetizate in faza stationara de crestere.
Oxigenul este un alt constituent universal al celulelor vii, furnizat in primul rand de nutrienţi
şi de apa din mediul natural/de cultură. Din cauza solubilităţii sale reduse, oxigenul molecular
aflat in soluţie este utilizat repede de bacteriile aerobe.
Pentru necesităţi de ordin practic, pe baza efectului pe
care O2 il exercită asupra metabolismului şi creşterii MO-lor, acestea se diferenţiază in 4
tipuri:
1. MO strict sau obligat aerobe – care au nevoie absolută de O2 atmosferic şi sunt incapabile
să trăiască in anaerobioză. Respiratia celulara = respiratia aeroba; ex.: Bacillus sp.,
Mycobacterium sp., Pseudomonas aeruginosa, mucegaiuri.
2. MO strict sau obligat anaerobe – in acest grup sunt incluse o serie de specii bacteriene
care nu se pot dezvolta in prezenta O2 şi care pot fi cultivate doar in medii sărăcite in O2,
deoarece chiar la presiuni reduse O2 poate avea efect inhibitor, toxic. Respiraţia celulară -
respiraţie anaerobă; ex.- exclusiv bacterii - Clostridium (C. botulinum, C tetani, C.
perfringens, C. difficile),Bifidobacterium sp., Bacteroides sp., Peptococcus,
Peptostreptococcus etc.
3. MO aerobe, facultativ anaerobe – care işi pot orienta metabolismul in funcţie de
disponibilitatea O2 in mediu, spre respiraţie sau fermentaţie. Unele (bacteriile lactice)
desfăşoară un metabolism de tip fermentativ chiar in prezenta O2 , altele işi orientează
metabolismul spre respiraţie sau fermentaţie, in funcţie de condiţiile de mediu; ex., E.coli (ca
şi toate speciile incluse in Fam. Enterobacteriaceae), Staphylcoccus sp., Streptococcus sp.,
levurile (Saccharomyces sp., Candida sp. etc.);
4. MO microaerofile – au nevoie de cantităţi extrem de mici de O2. Acestă particularitate
reflectă prezenţa unor enzime ce sunt inactivate in condiţii de oxidare puternică şi care pot fi
menţinute in stare funcţională numai la presiuni relative ale O2 reduse (~0,2 atm). Respiratie
aerobă, cu tendinţă spre respiraţie anaerobă/ fermentaţie;ex.: Spirochaetales, Thiobacteriales,
Campylobacter jejuni, Helicobacter pylori.
Nevoia de O2 reflectă mecanismul molecular prin care microorganismele işi satisfac nevoile
energetice, reflectă deci tipul de metabolism energetic.
Sistemele biologice sunt dependente de obţinerea energiei prin cuplare chimică cu reacţiile
oxidative. Reacţiile metabolice, ca toate recţiile chimice, se impart in cele 2 mari categorii:
- reacţii exergonice;
- reacţii endergonice .
Reacţiile exergonice, producătoare de E, sunt reacţii potenţial spontane şi corespund tranziţiei
de la o stare mai instabilă, cu un conţinut mai mare de energie chimică, la o stare mai stabilă,
cu un conţinut de E mai mic.
Reacţiile endergonice, consumatoare de E, au loc numai cu un aport de E şi nu sunt spontane;
in celule, reacţiile endergonice au loc datorită cuplării lor cu reacţii exergonice care
conferă sistemului, in ansamblu, un caracter exergonic.
De multe ori insă, cuplarea se realizează prin sinteza in reacţiile exergonice a unui compus
cu potenţial macroergic şi utilizarea sa in cele endergonice. Acest intermediar, reprezentat de
regulă de ATP, poate servi ca transductor de E, practic pentru cele mai multe reacţii,
endergonice şi exergonice.
In cursul metabolismului lor, microorganismele realizează o serie de transformări de energie,
care condiţionează activităţile lor biologice esenţiale, ca de ex.: conversia E luminoase in E
chimică;
- ,, E chimice in E chemoosmotică (a unui gradient de H+)= protonmotrice;
- ,, E chimice (ATP) in alte forme de E: calorică, mecanică, electrică.
Tipurile de metabolism energetic
Importanţa generală a metabolismului energetic in viaţa microorganismelor, a surselor de E, a
donorilor de H şi e-, a acceptorului final de e-, in procesele producătoare de E, a determinat
utilizarea acestora drept criterii de clasificare şi nomenclatură a principalelor tipuri de
metabolism energetic.
I. Clasificarea microorganismelor dupa natura sursei de E folosite:
1. microorganisme fototrofe sau fotosintetizante;
2. microorganisme chemotrofe sau chemosintetizante.
Fototrofia - energia folosită in reacţiile de biosinteză este energia fotonică, datorită
capacităţii microorganismelor de a o converti in E chimică, sub forma legăturilor macroergice
din ATP.
Chemotrofia – energia folosita in biosinteza este cea eliberata din reactii biochimice de
oxidoreducere. Microorganismele sunt numite chemosintetizante = chemotrofe. Bacteriile
chemotrofe aparţin grupului Scotobacteria (gr. scotos = intuneric), fiind bacteriile care nu
depind de energia luminoasă
1. Respiraţia aerobă
Este un tip de respiraţie celulară in care acceptorul final de e- este O2.
Este un proces metabolic exergonic, de oxidare completă a substratului cu ajutorul O2, din
care se eliberează o cantitate mare de energie. Substratul donor de e- şi H+ poate fi reprezentat
de substanţe anorganice (in cazul litotrofelor) sau organice (in cazul organotrofelor), acestea
din urmă fiind oxidate complet la CO2 +H2O. Prin respiraţie se realizează degradarea
oxidativă a compuşilor cu un potenţial eneergetic ridicat, de ex. glucoza. Electronii şi H+
rezultaţi din degradarea substratului sunt transportaţi la O2 prin intermediul unui sistem de
enzime localizate la nivelul membranei (la PK) sau mitocondiilor (la EK), cu rol de
transportori ce alcătuiesc sistemul transportor de e- = catena de respiraţie celulară (mai multe
oxido-reduceri succesive in urma cărora se eliberează E şi se stochează ATP). Modul de
formare a ATP prin cuplarea cu reacţii redox = fosforilare oxidativă.
Sistemul transportor de e- este alcătuit dintr-o serie de enzime: dehidrogenaze, quinone,
citocromi.
Calea biochimică de degradare in respiraţia aerobă este ciclul Krebs = ciclul acizilor
tricarboxilici, care continuă glicoliza sau căile sale alternative şi asigură oxidarea terminală a
substraturilor şi degradarea piruvatului la CO2 şi H2O.
La majoritatea MO-lor, aerobe in special, metabolismul energetic este un proces catabolic
linear, cu eficienţă termodinamică invariabilă şi un caştig constant de ATP.
MEDIILE DE CULTURA
După consistenţă:
• medii lichide;
• medii solide;
• medii semisolide (ex. mediu OMS, mediu cu gelatina);
• medii deshidratate.
După provenienţă:
• medii naturale (lichide: must de malţ, lapte;
solidificate: cartof glicerinat);
• medii artificiale sunt medii cu compoziţie chimică semidefinită, care conţin o bază
naturală (lichide: bulion, apă peptonată; solidificate: geloză, gelatină).
După complexitate şi scopul utilizării:
• Medii uzuale simple (ex. bulion simplu, agar nutritiv);
• Medii speciale (sunt medii cu grade diferite de complexitate care permit creşterea
preferenţială a anumitor specii dintr-un amestec heterogen de microorganisme dintr-o
probă sau evidenţierea anumitor caractere particulare de metabolism ale
microorganismului cultivat):
• medii selective conţin unul sau mai mulţi agenţi inhibitori reprezentaţi de
coloranţi, antibiotice, săruri biliare care pot limita sau inhiba multiplicarea
anumitor specii de microorganisme dintr-o probă cu încărcătură microbiană
mixtă (mediu BSA, mediu MacConkey);
• medii de îmbogăţire -oferă condiţii preferenţiale de creştere pentru anumite
specii bacteriene, care se vor multiplica mai rapid decât microorganismele
asociate (ex. geloză-sânge, geloză chocolat);
• medii diferenţiale - evidenţiază anumite particularitaţi metabolice, utile în
identificarea unei anumite specii de microorganisme: sistemele multitest;
• medii de transport care asigură supravieţuirea tulpinilor microbiene în proba
recoltată până în momentul însămânţării (ex. mediu Cary-Blair);
• medii de conservare sau de întreţinere care asigură supravieţuirea
microorganismelor în laborator pe o anumită perioada de timp (ex. mediu
OMS, mediu YPG).