Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
METABOLISMUL MICROBIAN.
CULTIVAREA BACTERIILOR.
EXAMENUL BACTERIOLOGIC.
Fiziologia bacterian studiaz viaa i
activitile bacteriilor nutriia,
metabolismul, creterea i multiplicarea,
condiiile de cultivare a bacteriilor.
Metabolismul bacterian reprezint
ansamblul de reacii biochimice care au loc
n celula vie.
- Catabolism reacii chimice de
descompunere a substanelor complexe n
elemente simple, nsoit de degajarea
energiei (metabolism energetic)
- Anabolism reacii chimice de sintez a
substanelor complexe din elemente simple,
necesit energie (metabolism constructiv, de
sintez)
Particularitile metabolismului bacterian:
1. Este un metabolism necompartimentat , toate
procesele metabolice se desfoar intr-o singur
celul
2. Este foarte flexibil, realizndu-se prin diverse ci
metabolice (bacteriile se adapteaz rapid la
condiiile mediului)
3. Este foarte intens (viteza reaciilor este mare)
4. Produsele intermediare din procesele catabolice
pot fi utilizate direct n calitate de precursori
pentru reaciile anabolice (amfibolism)
n toate reaciile metabolice intervin catalizatori
proteici specifici - enzimele
Enzimele bacteriene. Caractere generale:
- Substane proteice
- Active n limite largi de temperaturi (0-65C)
i de pH (2-9)
- Specificitate de substrat i de aciune
(reacioneaz cu un substrat cataliznd un
tip de reacie)
- Specificitatea este determinat de centrul
activ al enzimei, complementar cu
receptorul de pe substrat
- Nu se modific n cursul reaciei
Clasificarea enzimelor bacteriene
I. Constitutive (permanente)
II. Inductive (adaptive), se sintetizeaz n prezena
substratului (ex.: lactaza)
III. Represive, sinteza lor este inhibat de
acumularea n exces a produsului reaciei
catalizate
Dup locul de aciune (exoenzime, endoenzime)
Dup tipul reaciei catalizate (oxido-reductaze,
hidrolaze, transferaze, liaze, izomeraze, ligaze)
Dup impactul asupra ma/o
- Enzime metabolice
- Enzime de patogenitate, responsabile de
modificri patologice ale esuturilor, celulelor
ma/o : hialuronidaza, colagenaza,
plasmocoagulaza, hemolizina, fibrinolizina,
lecitinaza, proteaze, etc.
Importana practic a studierii enzimelor
1. Rol n identificarea i clasificarea
bacteriilor (enzimele determin activitatea
biochimic specific a bacteriilor)
2. Unele substane chimice, antibiotice
interfereaz cu activitatea unor enzime,
inhibnd creterea bacteriilor (tratament)
3. Determinarea mecanismelor patogenezei
infeciilor (unele enzime sunt responsabile
de producerea leziunilor n esutul gazdei)
4. Aplicarea industrial a enzimelor
NUTRIIA BACTERIAN
TG in vitro
Bacteria TG in vivo (ore)
(min)
Mycobacterium
tuberculosis
120-240 24-48
CULTIVAREA BACTERIILOR
Creterea bacteriilor n laborator cultivare.
Se cultiv bacteriile pentru izolarea lor din
medii naturale (prelevate patologice,
alimente, ap, etc).
Izolarea bacteriilor se realizeaz pentru:
1. Identificarea mi/o (scop de diagnostic)
2. Testarea sensibilitii lor fa de antibiotice
3. Obinerea unor produi de biosintez
(antibiotice, AA), bioconversie (hormoni
steroizi), fermentare (alcooli, acizi organici,
etc), producerea vaccinurilor, eubioticelor...
Pentru cretere bacteriile au nevoie de
nutrieni i condiii fizico-chimice adecvate.
Condiiile (principiile) de cultivare
- Surs nutritiv adecvat
- Surs de energie
- Ap
- Temperatura potrivit
- pH adecvat
- Soluie tampon-fosfat
- Soluie NaCl 3%
- Mediul Cary-Blair
- Turbiditate uniform
- Formarea unei pelicule la suprafaa
mediului (vibrioni, yersinia)
- Formarea unui sediment
- Culturi continue
- Culturi sincrone
- Sput
- Puroi
- Exsudate, transsudate
- Snge
- LCR
- Bioptate, punctate
- Alimente
- Sol
- Aer
- Lavaje
- Vectori, etc
- Modul de prelevare (recoltare)
- n recipiente sterile
- Respectnd regulile de autoprotecie
- La debutul bolii
- Pn la administrarea antibioticelor
- Cantitate suficient
Transportarea
- Imediat sau utiliznd medii de transport, cu
respectarea condiiilor speciale dup necesitate
- n ambalaj special (cutii metalice, pungi din plastic...)
- n fia de nsoire s fie indicat identitatea
pacientului, vrsta, sexul, natura prelevatului, data,
ora prelevrii, scopul investigaiei, .a.
EXAMENUL BACTERIOLOGIC PENTRU
CULTURILE AEROBE
- Prelevatul este supus examenului
macroscopic (modificarea aspectului, a
mirosului, etc) - orientare n diagnostic
- Dup necesitate, probele sunt supuse
pregtirii pentru investigaie (diluare,
omogenizare, centrifugare, etc)
- Examinarea microscopic (preparate
native, Gram, Ziehl-Neelsen, Loeffler...)
prezena mi/o, forma, cantitatea, G+/-.
I etap IZOLAREA CULTURILOR PURE
Scopul izolrii - de a obine o cultur pur dintr-
un melanj de celule bacteriene sau dintr-un
produs patologic. O colonie separat
constituie o cultur pur.
Tehnici utilizate:
1. Prin epuizarea inoculului pe suprafaa gelozei
din cutia Petri (nsmnare n striuri paralele,
nsmnare n cadrane, etalarea consecutiv
pe trei cutii).
2. Metoda diluiilor logaritmice a inoculului n
geloz topit i rcit la 50 C (10-1, 10-2,...),
apoi turnate n cutii Petri sau eprubete.
Incubare n termostat la 37 C, 18-24 h (n funcie
de TG).
Metode speciale de izolare n culturi pure:
- A bacteriilor sporulate: nclzirea prealabil a
prelevatului 80 C 20 min
- A bacteriilor acido-rezistente: tratarea prealabil
cu acid a prelevatului i neutralizarea ulterioar
cu o baz
- A mi/o patogene din prelevate plurimicrobiene:
mbogirea prealabil a florei patogene utiliznd
medii de mbogire
- A bacteriilor cu virulen nalt i pretenioase la
cultivare: inocularea la animalele de laborator
sensibile
II etap ACUMULAREA CULTURII PURE
- Examinarea macroscopic a coloniilor crescute
(form, culoare, dimensiuni, etc)
- Examinarea microscopic (frotiu Gram) a
coloniilor suspecte, confirmarea puritii culturii
- Repicarea coloniilor suspecte pe geloz n
pant (nclinat) pentru acumularea culturii
pure
- Termostat, 37 C, 18-24 ore
III etap IDENTIFICAREA CULTURII PURE