Metabolismul Metabolismul reprezint totalitatea transformrilor de 1. substan 2. energie 3.

informaie ce au loc n organismul viu Ansamblul proceselor chimice i fizico chimice prin care materia vie realizeaz continua rennoire n vederea organizrii i desfurrii activitii specifice Organismele animale sunt sisteme informaionale deschise iau substane nutritive din mediul exterior, pe care le transforma sintetizeaza componenii structurali i funcionali proprii sub actiunea: enzimelor si a controlului unor produsi metabolici hormoni sistemului nervos Reactiile enzimatice- dereglari Secvente liniare sau cicluri metabolice Enzime cheie - hotaratoare (activatori, inhibitori- dereglari ale proc. metabolice) Inhibitori : 1. carenta in coenzima 2. insuficienta cant. de substrat 3. insuficienta sintezei enzimei, etc. CONSECINTA: dereglarea mecanismului dinamic al celulei (metaboliti suplimentari sau in minus) boli de metabolism Cauze genetice sau negenetice Metabolismul intermediar cuprinde totalitatea reaciilor biochimice ce se petrec ntr-un anumit tip de celul Trsturile eseniale ale sistemelor biologice sunt: autoreglarea autoreproducerea autoevoluia Fiecare parte component a organismului are o funcie specific Componentele celulare i grupele de compui chimici din celul (protide, lipide, acizi nucleici) au funcii specifice Caracteristicile proceselor metabolice 1. au loc n condiii blnde, fr variaii mari de temperatur, presiune sau pH. 2. sunt reacii enzimatice 3. se desfoar cu randamente mari, depind randamentul mainilor create de om 4. sunt reglate biocibernetic 5. se desfoar n trepte, ceea ce permite eliberarea energiei n trepte

6. au un pronunat caracter de universalitate Studiul metabolismului cuprinde: digestia, absorbia, transportul Funciile specifice ale metabolismul intermediar obinerea energiei chimice din substanele nutritive; conversia substanelor exogene i endogene n uniti structurale de baz sau precursori ai macromoleculelor; asamblarea acestor uniti structurale n macromolecule (proteine, acizi nucleici, poliglucide) degradarea biomoleculelor necesare diferitelor funcii celulare specializate Procese catabolice i Procese anabolice Procesele catabolice :totalitatea reaciilor de degradare din organism. predominant reacii de oxidare prin care substanele cu structur complex se transform n substane cu structur mai simpl cu eliberare de energie(exergonice i entropice) G<0. Procesele anabolice :totalitatea proceselor de biosintez din organismele vii. se asambleaz molecule mari din constitueni simpli. sunt reacii endergonice deci antientropice, G >0. Sursa de energie pentru desfurarea reaciilor anabolice o reprezint procesele catabolice, respectiv energia nmagazinat n compui macroergici. Catabolismul i anabolismul constituie dou procese contrarii. LOCUL DE DESFASURARE al reactiilor metabolice Reaciile catabolice i anabolice sunt separate spaial, adic au loc n compartimente subcelulare distincte: nucleu, mitocondrii, lizozomi, reticul endoplasmatic, membran, citosol ntr-un organism clinic sntos, cele dou procese se gsesc ntotdeauna n echilibru dinamic intensitatea r. difer de la esut la esut, sau de la organ la organ Organele i esuturile cu intensitate metabolic ridicat sunt: ficatul, esutul adipos esutul osos esutul muscular glanda mamar n lactatie Procese amfibolice transformri ale constituenilor care pot avea simultan att caracter catabolic ct i anabolic rezult intermediari cu rol de plac turnat metabolic ca de ex. : acetil-coenzima A, acidul piruvic acidul oxalil-acetic Pot fi: catabolizai trecnd n produi de eliminare, 2

sau utilizai n biosinteze Metode de investigare a metabolismului Studiul metabolismului poate fi fcut la diferite nivele de organizare prin metode variate. a.) Metode practicate pe organismul ntreg (sntos sau bolnav ) dozarea produilor de excreie i efectuarea unor studii de bilan, dozarea metaboliilor n snge b.) Metode analitice dezintegratoare pe organe izolate i perfuzate, pe felii de organe, pe culturi de esuturi, pe organite celulare i pe extracte solubile de enzime Cile de reglare ale metabolismului Reglarea celular se realizeaz cu ajutorul enzimelor. majoritar reglarea celular se realizeaz de ctre enzimele reglatoare care sunt de obicei enzime allosterice; produsul final este frecvent un inhibitor allosteric (se afl n punctele de ramificare ale cilor metabolice) Sinteza enzimelor induse se afl sub control genetic. Enzimele induse sunt enzimele care sunt sintetizate numai ca rspuns la prezena anumitor substrate. (v. biosinteza proteinelor) 2. Reglarea neuro-hormonal se realizeaz cu ajutorul hormonilor. sunt mesageri chimici care ajung pe cale sanguin la esuturi "int" unde a) stimuleaz sau inhib anumite secvene din cile metabolice sau b) act. prin activarea sau inhibarea unor enzime sau complexe enzimatice METABOLISMUL ENERGETIC Studiaz aspectele energetice ale r. metabolice Problemele metabolismul energetic: 1. furnizarea de energie celulei; identificarea proceselor 2. stocarea energiei - sintez a compuilor macroergici; 3. transferul energiei din compuii macroergici (ATP) la procesele endergonice 1. Oxidarea biologic Oxidare biologic- sursa majora n furnizarea energiei n organism substanele organice se transform n CO2, H2O si Q: scindri hidrolitice sub aciunea hidrolazelor specifice a principalele substane nutritive luate prin hran poliglucide, lipide, proteine Locul reactiilor - n tractul digestiv Rezult biomolecule mici care apoi sunt catabolizate si transformate in alti comp. si elibereaza energie Biomoleculele mici sunt activate i parial catabolizate n citoplasm la intermediari, n parte comuni (acid piruvic, cetoacizi). acetia sunt catabolizai n continuare cu formarea unui intermediar comun acetil CoA - metabolit comun- sub aciunea unor enzime specifice.

 se catabolizeaz n mitocondrie printr-o cale comun de catabolizare - ciclul acizilor tricarboxilici (ATC) n urma creia rezult CO2 i coenzime reduse (NADH + H+ i FADH2). Coenzimele reduse NADH + H+ i FADH2 2. Cuplarea energetic a proc. endergonice cu cele exergonice se desfoar n paralel, n aceeai celul, ultimele fiind condiionate energetic de primele- transfer de energie eficient ntre cele dou tipuri de procese La organismele superioare, datorit temp. constante a organismului, transferul se poate realiza doar pe calea cuplajului. Dou reacii sunt cuplate dac energia liber a uneia (r. exergonica G< 0) asigur desfurarea celeilalte ( G> 0) Modaliti de cuplaj energetic prin participarea unui intermediar comun ( I ) la cele dou tipuri de reacii (nu este specific celulei vii) G-1-P in F-6-P prin intermediarul energetic comun- transportor de energie de la reacia exergonic la reacia endergonic Cuplarea r. endergonice cu r. exergonice prin intermed comun

A I

G <0

B I*

G > 0

Arderea biologic (oxidare) i arderea chimic n lumea vie rolul de intermediar comun ntre reaciile exergonice i cele endergonice l are sistemul alctuit din ATP (forma energizat) i ADP+P forma neenergizat, mai srac n energie Lavoisier- ntre arderea biologic (oxidare) i ardere chimic exist diferene eseniale chiar dac produii finali sunt aproape aceiai Compuii organici n organism sunt dehidrogenai treptat, hidrogenul este singurul element ce intr direct n reacie cu oxigenul (oxidare celulara). reaciile se petrec n trepte, energia degajat este eliberat n trepte, ceea ce permite ca o mare parte din energia de oxidare s fie transformat n energie chimic (ATP). 3.Compui macroergici Compuii macroergici sunt compui bogai n energie. Prin hidroliz enzimatica, legtura covalent elibereaz o cantitate apreciabil de energie (7-8 kcal/mol); aceast legtur a fost denumit legtur macroergic i se noteaz cu " ~ " n locul liniuei de valen. Un compus care conine una sau mai multe legturi macroergice se numete compus macroergic. legtur de tip anhidrid, de tip ester enolic sau de tip tioester 1.Nucleozido fosfai leg. tip anhidrida

NH 2 N N N N O CH 2 O O
+ .. P O ..

rezonanta de opozitie O
+ .. P O .. O + P O

O-

O-

O-

OH OH

respingere electrostatica

Nucleozido fosfai Legturile macroergice din ATP ct i din alte nucleotide (GDP, GTP, UDP, UTP, CDP,CTP, TDP, TTP) - legturi de tip anhidrid sau legturi pirofosforice deoarece se formeaz prin eliminarea unei molecule de ap ntre 2 molecule de acid ortofosforic. Molecula de ATP se caracterizeaz printr-o mare instabilitate termodinamic, determinat de particularitile structurale

 cele 4 gr OH din molecula ATP-ului, sunt ionizate la pH=7 (pH fiziologic) astfel nct molecula apare ca un tetra-anion, unde are loc o localizare spaial a sarcinilor negative - se resping Respingerea electrostatic se manifest mai ales la nivelul legturilor -P-O-P- afecteaz molecula n ansamblul ei ATP- G= - 7.30 kcal/mol Aciunea forelor (respingerea electrostatic ct i rezonana de opoziie) face ca molecula de ATP s fie supus unui "stres" fizico-chimic. La hidroliz, stres-ul fizico-chimic este diminuat, astfel nct produii de hidroliz (ADP, AMP) au o stabilitate mult mai mare dect molecula de ATP, hidroliza ducnd la eliberare de energie la procesele energetice particip ATP, GTP, CTP i TTP

ATP + H 2O ATP + H 2O P-P

ADP + Pa AMP + P-P 2P

2. Acilfosfai (G= -11,8 kcal/mol) legtur macroergic- tip anhidrida

O C H C O PO 3H2 OH PO 3H2
H2O H3PO4

G o' = -7.30kcal G o' = -7.30kcal G o' = -7.30kcal

O C H C OH OH PO 3H2

CH2 O

CH2 O

acid 1,3 difosfogliceric

acid fosfogliceric

3. Enoilfosfai (G = -14,8 kcal/mol) leg. tip esteric Leg. macroergic este enolfosforic (glicoliza ) cea mai mare energie - tip esteric

COOH C O PO 3H2 CH2

H2O

H3PO4

COOH C OH CH2

acid fosfoenolpiruvic acid enolpiruvic 4. Guanidin fosfai G = -10,3 kcal/mol restul fosforic este legat la un atom de azot (creatinfosfatul (CP) i argininfosfatul)
HN C N PO 3H2 NH CH3 HN C NH (CH2)3 CH NH2 COOH argininfosfat PO 3H2 NH

CH2 COOH creatinfosfat

5.Tioesteri (G= -7.5kcal/mol). n r. metabolice cu participarea R-COOH i a coenzimei A (HSCoA). Sunt catalizate de tiokinaze i sunt r. ATP- dependente AMP + P- P ATP O CH3 COOH + HSCoA CH3 C SCoA tiokinaza Transferul gruprii fosfat Scala termodinamic arat tendina gruprii fosfat de a fi transferata dintr-un anumit compus pe un acceptor ATP-ul servete ca intermediar comun n reaciile de transfer a gruprii fosfat la nivelul celulei i deci de transfer de energie chimic Intermediarul este sistemul ATP-ADP Aproape n toate reaciile de transfer de fosfat ntre metabolii ADP servete ca acceptor intermediar de fosfat ATP servete ca donor intermediar de fosfat Sinteza ATP-ului. (Fosforilarea) Reacie de fosforilare a ADP

ADP + H3PO4

ATP + H2O

Go' = +7.30kcal

Reacia este puternic endergonic i nu poate avea loc dect dac este cuplat cu o reacie exergonic. Exista trei tipuri de fosforilri: fotofosforilarea (plantele verzi), fosforilarea de substrat fosforilarea oxidativ (cuplat cu oxidarea celular). 1.Sinteza de ATP cuplat cu oxidri de substrat S ox + CoH 2 + X SH 2 + C o ox + X X + Pa X + Pa

Pa + ADP ATP Energia eliberat de SH2 este preluat de un intermediar(~X), care o transfer unui rest de acid fosforic(Pa). 1.1. Sinteza de ATP cuplat cu oxidarea aldehidei 3-fosfoglicerice Aldehida 3-fosfogliceric este un intermediar in degradarea anaerob a glucozei. Oxidarea gr. aldehidice la gr. carboxil este o reacie puternic exergonic, fiind cuplat cu sinteza de ATP. Procesul este catalizat de 2 enzime: gliceraldehid -3 fosfatdehidrogenaza i 1, 3 difosfoglicerat kinaza

 5 etape Gliceraldehid-3 fosfatdehidrogenaza prima enzima din procesul de oxidare prezint n structura centrului catalitic: gr. SH i coenzima NAD+.
NAD E SH
+

Oxidarea aldehidei 3-fosfoglicerice- etapa1 1. legarea substratului la centrul catalitic al E prin intermediul gruprii SH i se formeaz un tiosemiacetal
NAD E SH
+

O C H C H OH PO 3H2 E

NAD

CH2 O

S H

C C

OH H OH PO3H2

CH2 O

Oxidarea aldehidei 3-fosfoglicerice- etapa 2 2. R. de dehidrogenare care constituie etapa cheie a procesului, n care gr. carbonil se oxideaz la gr. carboxil Se elibereaz o cantitate mare de energie care este conservat parial n leg. macroergic tioesteric
NAD+ E S H OH C H C OH PO 3H2 CH2 O E S H C C OH PO 3H2 CH2 O NADH +H O

Oxidarea aldehidei 3-fosfoglicerice- etapa 3 . n etapa a treia, are loc transferul hidrogenilor de pe coenzima redus, din centrul catalitic, la coenzima oxidat din soluie.
NADH +H E E S H C C OH O PO 3H2 CH2 O
+

NADH+ H+ NAD+

+ NAD O S H C C OH O PO 3H2 CH2

Oxidarea aldehidei 3-fosfoglicerice- etapa 4 4. n etapa a patra are loc legarea restului fosforil din acidul fosforic pe substrat i eliberarea enzimei. Leg. macroergic se conserv n leg. de tip anhidrid din acidul 1, 3 difosfogliceric

+ NAD E S H C C OH CH2 O O

H3PO4

O C H C O PO 3H2 OH PO 3H2 + E

NAD+

CH2 O PO 3H2

SH

Oxidarea aldehidei 3-fosfoglicerice- etapa 5 5. Etapa a cincea este catalizat de cea de-a doua enzim, 1,3 difosfoglicerat kinaza - transferul fosfatului activat pe molecula de ADP rezultnd ATP i acid 3-fosfogliceric Coenzima redus (NADH + H+) (din 3) intr n oxidarea celular.
O C H C O PO 3H2 OH O
ADP

O
ATP

C H C

OH OH O PO 3H2

CH2

PO 3H2

CH2

1.2. Sinteza de ATP cuplat cu transformarea ac. 2-fosfogliceric n ac. piruvic Acidul 2-fosfogliceric se sintetizeaz tot n procesul de degradare anaerob a glucozei. dou enzime distincte: o enolaz i o fosfotransferaz. ETAPA 1 Prima etap este o reacie de deshidratare intramolecular a ac. 2 fosfoglicericac. 2 fosfoenol piruvic R. exergonic Este etapa cheie a procesului
O C H C OH O P O3H2 H2O OH C C O OH O P O3H2

CH2

CH2

ETAPA 2
COOH C O PO 3H 2 CH 2 acid fosfoenolpiruvic
ADP ATP

COOH C OH CH 2 acid enolpiruvic

restul fosforil activat este transferat pe ADP n prezena fosfoenol piruvat kinazei. Rezult acidul enol piruvic i ATP. 1.3. Sinteza de ATP cuplat cu decarboxilarea oxidativ a acidului cetoglutaric Acidul cetoglutaric este un intermediar care se formeaz n ciclul acizilor tricarboxilici (ATC)-Krebs

 La r. particip complexul enzimatic "- cetoglutarat decarboxilaza". Complexul - 3 enzime i 4 coenzime: TPP, ac. lipoic, HSCoA i NAD+, rezulta Tiaminsuccinatsemialdehida (TSA)
COOH C O CH2 CH2 COOH CO 2 TPP TPP CHO CH2 CH2 COOH

ETAPA 2 n etapa a doua, TSA reacioneaz cu acidul lipoic i formeaz S-succinil dihidrolipoatul. Etapa este exergonic, energia eliberat se nmagazineaz n legtura macroergic de tip tioester
TPP CHO CH2 CH2 COOH TPP S O S L C S L CH2 HS CH2 COOH

ETAPA 3 n etapa a treia restul succinil este transferat pe HSCoA, cea de-a treia coenzim a complexului enzimatic, rezultnd succinil-SCoA un alt compus macroergic de tip tioester
O C CH2 CH2 COOH S L HS HS HS L HSCoA C O SCoA CH2 CH2 COOH

O C SCoA GDP+ Pa CH2 CH2 COOH

GTP

O C SCoA CH2 CH2 COOH

Energia coninut n tioester sub aciunea tiokinazei i n prezena GDP i a P este utilizat pentru sinteza de GTP. Coenzima redus (acidul lipoic) transfer hidrogenii pe NAD+ form oxidat care trece n form redus (NADH+H+) i aceasta intr n oxidarea celular 2. Sinteza ATP cuplat cu OXIDAREA CELULARA Reaciile din organism cu importan major pentru eliberarea de energie sunt reaciile de oxidare a diferitelor substrate n aceste oxidri hidrogenul este preluat de la substrate, este activat, (prin intermediul unui lan de reacii la care particip diferite sisteme redox) astfel c n final se va combina cu oxigenul pentru a forma apa.

10

 procesul se numete i respiraie celular sau lan respirator pentru c ultimul acceptor al hidrogenului este oxigenul Formarea moleculei de ap (oxidarea celulara) Formarea moleculei de ap este localizat n membrana intern a mitocondriei, unde sunt localizate i alte procese metabolice (ciclul acizilor tricarboxilici- ATC, oxidarea AG, degradarea aerob a glucozei) ntre substrat i oxigen se interpun sistemele oxidoreductoare care vor intra n reacie n funcie de potenialul lor redox, electronii curg n sensul pozitivrii potenialelor redox (+0,81 2.1. Componentele lanului respirator Lanul respirator i fosforilarea oxidativ se desfoar n membrana intern a mitocondriei aici se gsesc enzimele care catalizeaz cele 2 procese, fiind integrate n structura membranei 5 tipuri de fragmente numite complexe I-V, care conin n form nealterat sistemul transportor de echivaleni reductori Reaciile lanului respirator sunt puternic exergonice. (G= - 52.6 kcal/mol Complexele enzimatice I-V Complexele I-V sunt dispuse secvenial n membrana intern a mitocondriei, n ordinea descreterii potenialului redox negativ (excepie CoQ i cit C), fiecare complex cataliznd o anumit reacie de oxido-reducere. Complexul V este responsabil de fosforilarea oxidativ fiind numit ATP -sintetaza sau F0F1- ATP-az. Complexul enzimatic I Complexul I- numit NADH-CoQ oxidoreductaza catalizeaz transportul de echivaleni reductori de pe NADH+ H+ din matrice pe coenzima Q i are n structur flavoproteine i fier neporfirinic Hidrogenul este disproporionat la preluarea sa de ctre complexul I, electronii fiind transferai prin intermediul ionilor de fier i sulf din cele 4 proteine fiersulf Complexul I este inhibat de barbiturice, pesticide i antibiotice Complexul enzimatic II Complexul II, numit succinat CoQ oxidoreductaza, catalizeaz transferul hidrogenului de pe succinat pe aceeai coenzim Q. Subunitatea principal a complexului II o reprezint succinat dehidrogenaza care are drept coenzim FAD. Succinat dehidrogenaza acioneaz n ciclul ATC i introduce hidrogenii n lanul respirator n complexul II, alturi de succinat dehidrogenaza se afl 3 proteine cu fier i sulf. n acest complex II se afl flavoproteine specializate pentru a prelua hidrogenul i de pe alte substrate (acil-CoA, glicerol-3-fosfat, colin, sarcozin) Complexul enzimatic III Complexul III, numit CoQ-citrocom c reductaza, catalizeaz transferul echivalenilor reductori de la CoQ la citocromul c i eliberarea de H+

11

 n acest complex intr citocromii: b, c1, c i a precum i 1 protein cu fier i sulf Complexul enzimatic IV Complexul IV, numit citocromoxidaza a-a3 catalizeaz transferul electronilor hidrogenului pe oxigenul molecular cu formare de oxigen activat -O2-Citocromoxidaza este o hemoprotein, conine ioni de Fe i Cu Citocromul a este strns legat de citocromul a3. Afinitatea citocromului a3 pentru oxigen este mai mare dect a Hb i mioglobinei Oxigenul activat se combin instantaneu cu H+ din mediu; rezult H2O. Citocromoxidaza este inhibat de ionul de CN, de CO i de azide Mecanismul lanului respirator Etapele oxidrii celulare

1. SH2 + NAD+ 2. NADH+H+ + FMN

Sox + NADH +H+

NADHdehidrogenaza

NAD+ + FMNH2

3. FMNH2 + CoQ FMN + CoQH2 4. CoQH2 + 2citbFe3+ CoQ + 2 citb Fe2+ + 2H+ 5. 2citbFe2+ + 2 citc1 Fe3+ 2citb Fe3+ + 2citc1 Fe2+ 6. 2citc1Fe2+ + 2 citc Fe3+ 2citc1 Fe3+ + 2citc Fe2+ 7. 2citcFe2+ + 2 cita Fe3+ 2citc Fe3+ + 2cita Fe2+ 8. 2citaFe2+ + 2 cita3 Fe3+ 2cita Fe3+ + 2cita3 Fe2+ 9. 2 cita3 Fe3+ + 1/2 O2 2cita3 Fe2+ +O210. 2H+ +O2H 2O
Oxidarea celular Sistemul are un rol catabolic deoarece se consum hidrogenii din substrate i oxigenul din respiraie (adus de Hb); restul compuilor se regenereaz. Lanul respirator utilizeaz de regul hidrogen de la NADH + H+ (prin hidrogenarea substratelor) i nu utilizeaz coenzime de tip NADPH + H+ (se folosesc n reaciile de biosintez) R. lanului respirator sunt puternic exergonice. Reacia global se poate scrie (G= - 52.6 kcal/mol):

Fosforilarea oxidativ cuplat cu catena respiratorie - 1

12

 Sinteza moleculei de ATP, din ADP i P, pe seama energiei eliberat n lanul respirator se numete fosforilare oxidativ cuplat cu lanul respirator Energia liber ce se degaj la transportul unei perechi de electroni prin lanul respirator este de -52,6 kcal (mai mic dect legarea direct a oxigenului cu hidrogenul (G= -57 kcal. Aceast cantitate de energie este inegal repartizat pe diferitele cupluri redox (etape). Etapele n care E degajat este > de 8 kcal, sunt etape de cuplare (E e folosit pentru sinteza de ATP. Aceste etape sunt: transferul ionilor de hidrogen i a electronilor de pe NADH+H+ pe coenzima Q (complexul I); transferul electronilor de pe CoQ la citocromul c ; transferul electronilor de pe citocromul a3 pe O2. Fosforilarea oxidativ cuplat cu catena respiratorie-2 Dac hidrogenul este introdus n lanul respirator prin intermediul coenzimei reduse de tip NADH+H+ atunci cei doi atomi de hidrogen vor parcurge toate cele trei puncte de cuplare i deci o coenzim redus NADH+H+ este echivalent cu 3 molecule de ATP Dac hidrogenul este introdus n lanul respirator de o coenzim de tip FADH2 (complexul II) atunci se realizeaz numai dou puncte de cuplare i deci o coenzim de tip FADH2 este echivalent cu 2 moli de ATP Fosforilarea oxidativ cuplat cu catena respiratorie-3 Energia eliberat n lanul respirator este de 52,6 kcal iar energia utilizat n procesul endergonic este de 3 x 7,3 kcal = 21,9 kcal (valoarea energetic a celor 3 legturi macroergice sintetizate). randamentul de utilizare a energiei degajate n lanul respirator - 41%, o valoare mare n comparaie cu randamentul mainilor Reglarea fosforilrii oxidative Controlul respirator Reaciile oxidative din organismele vii duc la realizarea energiei chimice (ATP) necesar pentru diferitele travalii. Intensitatea cu care se desfoar reaciile de oxidare este reglat de nevoile energetice ale celulei. Factorul reglator cel mai economic pentru activitatea oxidativ a celulei este aceea care limiteaz debitul de electroni prin lanul respirator i consumul de oxigen. Controlul respirator-1 Concentraia fiecruia din reactani (H2, O2, ADP, P) poate limita debitul echivalenilor reductori prin lanul respirator, deci intensitatea respiraiei tisulare. Substratele nu constituie factorul limitativ pentru lanul respirator. Oxigenul este prezent n celule n cantitate suficient, deci conc. oxigenului nu este factor limitativ. Fosforul anorganic este i el suficient n celul.

13

 ADP-ul este compusul a crui concentraie controleaz viteza de curgere a electronilor prin lanul respirator Controlul respirator-2 Celulele cu activitate intens consum ATP-ul ntr-un ritm rapid; lucru ce duce la generarea de ADP care stimuleaz fluxul de electroni prin lanul respirator. In celulele cu activitate redus, ATP-ul este consumat n cantitate mic i deci i nivelul ADP va fi cobort. Prin urmare ATP-ul nu joac rolul unui depozit sau acumulator de energie ci mai degrab al unui transportor de energie de la procesele exergonice la procesele endergonice. Procesul oxidrii celulare i al fosforilrii oxidative este controlat de ctre hormonii tiroidieni iodurai (tiroxina). Intensificarea respiraiei terminale de ctre tiroxin se explic prin activarea enzimelor succinat-dehidrogenaza i citocromoxidaza. Decuplarea i inhibiia fosforilrii oxidative- inhibitori Inhibitorii fosforilrii oxidative sunt de trei tipuri: Inhibitori ai transferului de hidrogen sau de electroni Decuplanii fosforilrii oxidative Inhibitorii globali ai fosforilrii oxidative Din prima categorie fac parte o serie de compui organici sau anorganici ca: amitalul (medicament din clasa barbituricelor) care blocheaz transferul hidrogenului de la NADH+H+ la FAD+. Antimicina inhib transferul de electroni de la citocromul b la citocromul c. Substanele anorganice ca: CN , CO, H2S inhib citocromoxidaza. Decuplarea i inhibiia fosforilrii oxidative- decuplanti Decuplanii, opresc sinteza de ATP; respiraia fiind decuplat. Energia eliberat n oxidarea celular se risipete n mediul nconjurtor sub form de cldur. Prin decuplare, ADP nu mai joac rol n controlul respiraiei. Compuii chimici cu rol de decuplani pot fi 2,4 dinitrofenolul, dicumarolul, valinomicina, arseniatul etc. Inhibitorii globali inhib concomitent i respiraia i fosforilarea (oligomicinaantibiotic) Alte catene de oxidare celular 1. Catena microzomial Enzime: NADPH + H+ - dehidrogenaze, flavinenzime, citocrom P450 i citocromul b5 are un rol mai puin activ ( NADP se afl n celul n form redus NADPH + H+), spre deosebire de NAD+ care se afl sub form oxidat. NADPH + H+ rezult: n urma degradrii glucozei pe calea pentozo-fosfailor prin decarboxilarea oxidativ a ac. izocitric (ATC) prin decarboxilarea oxidativ a ac. malic la ac. piruvic NADPH + H+ particip la o serie de reacii de biosinteza hidrogenare ( AG, baze pirimidinice etc.) (generator de hidrogen) hidroxilare (colesterol). (generator de electroni) electronii ajung la citocromul P450 ( oxidaza terminal a cat.microzomiale) 14

Cit P450= cit in stare redusa + CO - abs. la = 450 nm Mecanismul oxidrii microzomiale

Locul de desfasurare al catenei microzomiale Catena se desfoar cu precdere n: reticulul endoplasmatic al celulelor hepatice reticulul corticosuprarenalelor glandele genitale R. de transport al e- de la NADPH+H+ la cit. P450 elibereaz Q (G = - 40 kcal) dar este utilizat pentru reacia de hidroxilare (G= + 40 kcal) catena microzomial nu genereaza ATP Reaciile de hidroxilare dependente de citocromul P450 degradarea colesterolului la acizi biliari degradarea hemului la bilirubin degradarea hormonilor steroidici Activitatea cat. microzomiale - sczut - este stimulat considerabil dup adm. unor substane strine (medicamente) - intensifica sinteza de citP450- catab. subst. straine Rolul biologic al hidroxilazelor este acela de a debarasa organismul de cantiti anormal de ridicate ale unor substane active (hormoni, medicamente Speciile reactive ale oxigenului (SRO) implicate n stresul oxidativ Stresul oxidativ (SO) reprezint totalitatea deteriorrilor oxidative produse de SRO (specii reactive ale oxigenului) la nivelul celulei sau la nivelul ntregului organism. SO este asociat cu perturbarea balanei prooxidante/antioxidante, n favoarea primei componente producerea excesiv de SRO sau RL (radicali liberi) este implicat n patogeneza multor afeciuni Starile patologice au la baz 2 mecanisme prin care se produc SRO: celulele inflamatorii activate leziunile provocate de ischemie, hipoxie, reperfuzie i reoxigenare EFECTELE RADICALILOR LIBERI (RL) ASUPRA ORGANISMULUI 2 categorii de efecte n organism: Efecte benefice: bactericid n cursul fagocitozei stimularea activitii limfocitelor controlul tonusului vascular normal Efecte nocive: distrucia/deteriorarea structurilor celulare: transformarea malign celular:

15

 mbtrnirea celular. Sursele principale de R.L. Endogene: lanurile transport de electroni din mitocondrii, microsomi, cloroplaste; enzimele oxidative; celulele fagocitare; reaciile de autooxidare (Fe 2+, adrenalina). Exogene: substanele oxidoreducatoare; medicamente antioxidante; fumul de igar; radiaiile ionizate; ocul termic BIOCONSTITUENTI AFECTATI DE RL LIPIDE- cele mai sensibile la aciunea RLO. Membranele celulare prezint n constituia lor acizi grai nesaturai care sunt inta atacurilor radicalilor liberi. Distrucia oxidativ a acizilor grai nesaturai (cunoscut i sub denumirea de peroxidare lipidic) este nociv mai ales datorit faptului c duce iniierea unor lanuri de reacii autopropagate- RADICALI LIPOPEROXIDICI -implicate n procesul aterogenetic PROTEINE- mai puin susceptibile, numai asupra unor zone specifice din structura proteinelor de exemplu dac proteina leag un metal de tranziie ntr-o anumit zon ACIZI NUCLEICI- sunt atacai de radicalii liberi dac acetia se formeaz n imediata lor vecintate GLUCIDE- EX. ACTIUNEA ASUPRA AC. HIALURONIC- alterarea membranelor celulare i modificarea vscozitii lichidului sinovial CLASIFICAREA SRO Specii radicalice: Anorganice: - superoxidul ; - hidroxilul (oxidrilul) O. Organice: alcoxil R (peroxil). Specii neradicalice: peroxidul (perhidrolul sau apa oxigenat) - H2O2; acidul hipocloros - HOCl; oxigenul singlet sau oxigenul molecular n stare activat 1O2; ozonul O3; dioxigenul O2 Producia de SRO este un fenomen constant n organismele vii. La obolan s-a estimat c n celul se formeaz circa 2 x 1010 anioni superoxid i molecule de ap oxigenat n 24 de ore. SRO determin modificri reversibile i moderate n organismele vii, datorit generrii lor n cantiti reduse.

16

 Reactivitatea chimic a SRO este dependent de concentraie i de temperatur Speciile reactive ale oxigenului (SRO- ROS) oxigenul singlet (1O2 ) radicalul superoxid (O2 ) radicalul hidroxil (OH ) radicalul hidroperoxid (HO2) peroxidul de hidrogen (H2O2) Acestea se formeaz n cursul unor procese metabolice normale i patologice ce implic aciunea oxidazelor i a sistemelor transportoare de electroni. Dac concentraia acestor specii reactive este crescut se instaleaz stresul oxidativ(SO). Implicat n: procesul inflamator, cancerogenez, boala de iradiere i fenomenul de mbtrnire Speciile reactive ale oxigenului- 2

. O2 + H HO 2 . . HO 2 + HO 2 H2O 2 + O 2 . . O 2 + H2O 2 HO + HO -+ O 2
+

.-

Speciile reactive ale oxigenului- 3 Radicalul OH- este considerat a fi compusul responsabil pentru iniierea distrugerii oxidative a biomoleculelor, fiind cel mai reactiv oxidant care acioneaz la conc. f. mici; cel mai reactiv i cel mai nociv. Radicalul peroxil sau peroxid sau peroxianionul (RO2) - reprezint finalul activrii O2. atac mai nti sistemele prooxidante, naturale, pentru care au mare afinitate Peroxidul de hidrogen (H2O2) - se formeaz n cantiti mari n mitocondrii (din ficat i creier, din inim), n peroxizomi (din ficat, rinichi, intestin, inim), n microzomi i n cloroplaste i alge. Efectele poteniale ale H2O2 n leziunile celulare sunt: peroxidarea lipidelor membranare; alterri ale ADN i mutagenez; oxidarea enzimelor celulare ANTIOXIDANTI ENZIMATICI Conc. ionului superoxid (O2 ) este meninut relativ constant, datorit unor E ca: SOD (superoxid dismutaza) i citocrom c oxidaza SOD este o metaloprotein ce conine Cu 2+, Zn 2+, Mn 2+, prezent n citoplasm, mitocondrii i microorganisme.
+ ..O 2 + O 2 +2 H .O + citc Fe3+ 2

H2O 2 + O 2 O 2 + citc Fe2+

ALTE ENZIME IMPLICATE IN diminuarea STRESULUI OXIDATIV CAT, G- peroxidaza (G-Px), G-reductaza (GR) descompun H2O2 17

 CAT - detoxifiere, descompunere a H2O2 produs de SOD; acioneaz ca un protector al SOD prin inactivarea H2O2 G-Px- n eritrocite - n cantiti mari ; rol major n meninerea integritii membranelor eritrocitare la stres oxidativ. GSH-px acioneaz la concentraii mici de H2O2
H2O 2 + H2O 2 H2O 2 + 2 G-SH
catalaz

2 H2O +1/2 O 2
glutation reductaz

glutation peroxidaz

2 H2O + G-S-S-G 2 G-SH + NADP+

G-S-S-G + NADPH + H+

Antioxidanii neenzimatici n amestec cu substane cu efecte sinergice, inhib att iniierea ct i propagarea procesului de autooxidare unele extracte naturale conin att antioxidani care pot manifesta proprieti deosebite Vitamine (vitamina C, vitamina E, vitamina A, carotenul) precum i o serie de ali compui cum ar fi: glutationul, flavonoizi, antociani, taninuri, transferina, ceruloplasmina, arginina, melatonina, etc. Flavonoizii (polifenoli simpli sau conjugai) se gsesc n produsele alimentare ca: ptrunjel, morcovi, citrice, brocoli, varz, castravete, dovleac, roii, vinete, soia, mure, afine, cpuni, coacze, n condimente ca: rosmarin, salvie, piper, ceap, usturoi. efect antioxidant prin epurarea direct a radicalilor liberi, prin inhibarea formrii oxigenului singlet i inactivarea metalelor prooxidative Ciclul acizilor tricarboxilici (ATC)-KREBS alturi de oxidarea celular principala cale generatoare de energie, Din ciclu rezult coenzime reduse de tipul: NADH+H+, FADH2, FMNH2 foarte muli acizi mono, di i tricarboxilici -pot fi oxidai de esuturile animale la CO2 +H2O (4 acizi: citric, succinic, fumaric i malic) Krebs (1937) a elaborat teoria ciclului citratului sau ciclul acizilor tricarboxilici (ATC) demonstrand c ac. citric se poate forma din ac. piruvic i ac. oxalil acetic, de fapt participa acetil ~ SCoA ce se formeaz prin decarboxil. ac. piruvic Acetil ~SCoA poate rezulta n celul n urma degradrii Aa, a AG superiori i din acidul piruvic provenit din degradarea glucidelor Acetil ~SCoA se descompune la CO2 i H2O Degradarea - oxidarea major (cantitativ) n celula vie Enzimele implicate n ciclu se gsesc n mitocondrie Caracteristica principal a ATC Compusul care intr n ciclu si care se reface este acidul oxalil acetic, iar cel care se degradeaz este de fapt acetil ~SCoA. La reacia de oxidare nu particip O2 ci H2O care este dehidrogenat n diferite etape Hidrogenul este preluat de coenzime i transportat la catena respiratorie

18

Caracteristicile ATC 1. oxidarea radicalilor acetil indiferent de originea lor 2. - reaciile sunt aerobe, fiind conectate la respiraia tisular i indirect la fosforilare 3. - necesit un compus iniial care intr n ciclu i care se regsete la sfritul ciclului- acidul oxalilacetic 4. - este localizat n membrana intern a mitocondriilor 5. - ciclul Krebs are un caracter universal, se ntlnete n toate esuturile animalelor superioare, n foarte multe microorganisme i n esuturile vegetale Etapele ciclului ATC- 7 etape 1. Formarea acidului citric. condensarea acetil ~SCoA cu acidul oxalil acetic cu formarea ac. citric Reacia este catalizat de citrat sintetaza. Echilibrul reaciei este mult deplasat spre dreapta deoarece hidroliza legturii tiol-esterice macroergice elibereaz energie (G = -7,7 kcal). Citrat sintetaza este o enzim reglatoare. Este activat de ioni de Mg2+ i inhibat de ATP i de NADH+H+
CH3 O + C SCoA acetil SCoA COOH C O HO CH2 COOH acid oxalilacetic O C C SCoA
H2O HSCoA

CH2 COOH CH2

CH2 HO C CH2

COOH COOH

COOH

COOH

citril~SCoA

acid citric

Izomerizarea acidului citric la acid izocitric- 2 Enzima: aconitaza deshidratare i rehidratare succesiv intermediar acidul cis aconitic Acidul izocitric rezult din reacie doar n proporie de 8 % se consum n urmtoarele etape ale ciclului, echilibrul se deplaseaz n sensul formrii de noi cantiti de acid izocitric Aconitaza este activat de ionii de Fe2+ i de cistein i inhibat de acidul monoflor acetic

Oxidarea acidului izocitric-3

19

Etapa cheie

Oxidarea acidului izocitric-3.1 Acidul izocitric se transf. n acid cetoglutaric n prezena izocitrat dehidrogenazei (enzim allosteric) in 2 etape: 1. pana la ac.oxalil succinic 2. decarboxilare pana la ac. cetoglutaric Izocitrat dehidrogenaza se gsete n 2 forme: una care are drept coenzim NAD+, iar cealalt NADP+. 1. izocitrat dehidrogenaza NAD+ -dep.- n mitocondrii 2.izocitrat dehidrogenaza NADP+ dep.- n mitocondrii; n citoplasm Este activat de ionii de Mg2+ sau de Mn2+ i ADP. Dehidrogenarea ac. izocitric - acidul oxalil succinic - nu este eliberat din complexul ES dect dup decarboxilare, rezultnd acid cetoglutaric. Etapa oxidrii i decarboxilrii izocitratului este o etap cheie a ciclului Krebs.

Oxidarea ac. cetoglutaric la acidul succinic- 4

O C COOH CH2
TPP,acid lipoic, HSCoA, NAD+

O C SCoA CH2 CH2 COOH succinil~SCoA

CH2 COOH acid cetoglutaric

O C SCoA CH2 CH2 COOH succinil~SCoA
GTP + ADP GDP +ATP

GDP - Pa

GTP

OH

CH2 CH2 COOH acid succinic

Oxidarea ac. cetoglutaric la acidul succinic- 4.1 Reacia este catalizat de complexul enzimatic cetoglutarat dehidrogenaza care conlucreaz cu coenzimele: TPP, acidul lipoic, HSCoA i NAD+. Reacia se petrece n mai multe subetape n prima subetap are loc decarboxilarea oxidativ a acidului cetoglutaric i formarea de succinil ~SCoA. Succinil ~SCoA este transformat n acid succinic iar energia legturii tioesterice este nmagazinat ntr-o legtur macroergic n GTP. Reacia este catalizat de succinil ~SCoA tiokinaza (vezi fosforilarea de substrat) Oxidarea acidului succinic la acid fumaric- 5

20

OH

CH2

FAD

FADH2

HOOC

CH2 COOH acid succinic

C COOH H acid fumaric

Oxidarea acidului succinic la acid fumaric- 5.1 Enzima: succinat dehidrogenaza care are drept coenzim FAD enzim allosteric ce conine fier neheminic activat de acidul succinic i fumaric (iz. trans) inhibat de acidul malic (iz. cis) i inhibat competitiv de acidul oxalic, oxalilacetic i pirofosfat. La concentraii mari de acid malic n celul, ciclul ATC se oprete la aceast etap, ceea ce duce la acumularea de acid succinic. acidul oxalil acetic (compusul care se reface la sfritul ciclului) poate inhiba propria sa sintez din acid succinic Faptul c toate aceste substrate au n structur dou grupri anionice (COO-) se consider c situsul catalitic al SDH trebuie s conin dou grupri cationice. Hidratarea acidului fumaric-6 Enzima: fumaraza Adiia apei la dubla legtura C=C din acidul fumaric -rezulta acid L malic.
HOOC C H
H2O

HO
H2O

CH CH2

COOH COOH

C COOH H acid fumaric

acid L malic

Oxidarea acidului malic- 7 malat dehidrogenaza

HO CH CH2 COOH COOH
NAD
+ NADH + H

COOH

acid L malic
O C COOH O C

CH2 COOH acid oxalilacetic

oxalacetat decarboxilaza
COOH CH3 acid piruvic

CH2 COOH acid oxalilacetic

piruvat carboxilaza

O C COOH CH3 acid piruvic

CO2

ADP ATP

O C COOH CH2 COOH acid oxalilacetic

Oxidarea acidului malic- 7.1 Enzima: malat dehidrogenaza care are drept coenzim NAD+ ultima etap - oxidarea acidului L malic la acid oxalil acetic la animalele superioare - att n mitocondrii ct i n citoplasm Ac. oxalilacetic poate reintra n ciclu printr-o nou condensare cu acetil ~SCoA.

21

 Funcionarea ciclului ATC este condiionat de disponibilitatea celulei n acid oxalilacetic 1. Dac necesarul de acid oxalilacetic este sczut, atunci excesul de acid oxalilacetic este transformat n acid piruvic prin decarboxilare. 2. Dac necesarul de acid oxalilacetic este mare, atunci are loc sinteza acidului oxalilacetic din acid piruvic sub aciunea enzimei piruvat carboxilaza. Reacia este ireversibil un activator al piruvat carboxilazei este Acetil ~SCoA (se afl n mitocondrii). Piruvat carboxilaza este alctuit din mai multe catene peptidice; conine patru molecule de biotin drept coenzim. acetil ~SCoA i regleaz propria sa degradare Bilanul energetic al ciclului Krebs-1 Reacia global a degradrii acetil ~SCoA n ciclul Krebs este urmtoarea: Bilanul energetic al ciclului Krebs 2. Prin dou reacii de decarboxilare sunt eliminai cei doi atomi de carbon din acetil ~SCoA sub form de CO2 iar atomii de hidrogen sunt fixai pe coenzime. Coenzimele reduse (NADH+H+ i FADH2) introduc hidrogenul n lanul respirator Din fosforilarea cuplat cu lanul respirator s-a vzut c un mol de NADH+H+ este echivalent cu 3 moli de ATP, iar un mol de FADH2 este echivalent cu 2 moli de ATP. Arderea complet a acidului acetic n bomba calorimetric elibereaz 209 kcal. Prin degradarea biologic a acidului n ciclul Krebs se elibereaz 12 moli ATP, ceea ce corespunde la 96 kcal. Deci =42% Reglarea ciclului Krebs ntr-o "tur" a ciclului intr 1 acetil ~SCoA i se elimin 2 CO2 Atomii C ai acidului acetic nu sunt transformai n CO2 concomitent ci numai dup 2 "ture" ale ciclului. 1. C din gruparea COOH este eliminat dup a doua "tur" a ciclului iar 2. C din radicalul CH3 dup cea de a treia "tur" a ciclului. Reglarea i controlul ciclului Krebs se realizeaz cu ajutorul enzimelor. etapa 1- o prim reglare se realizeaz la nivelul reaciei de condensare ntre acetil ~SCoA i acidul oxalilacetic, sub aciunea citrat sintetazei etapa 2 reglatoare este dehidrogenarea acidului succinic la acid fumaric sub aciunea succinat dehidrogenazei (SDH) Reacia limitativ a ciclului este oxidarea i decarboxilarea acidului izocitric sub aciunea izocitrat dehidrogenazei Rolul amfibolic al ciclului Krebs i cuplarea lui cu alte procese Reactanii ciclului Krebs pot participa la o serie de reacii de biosintez acetil ~SCoA este precursorul biosintezei AG, a colesterolului, a hormonilor cu structur steranic acidul cetoglutaric poate servi la biosinteza acidului glutamic i a glutaminei acidul succinic este precursor pentru biosinteza hemului i a acidului aspartic.

22

Reaciile de biosintez care au la baz precursori din reaciile ciclului Krebs au loc n afara mitocondriilor.

23