1

1.METABOLISM- NOIUNI INTRODUCTIVE

1.1.Introducere n studiul metabolismului intermediar
Organismele vii i asigur structura complex- care presupune meninerea unor
echilibre biochimice i funcionale - printr-un aport continuu de energie din exterior.
Aceast energie este preluat o dat cu alimentele din mediul nconjurtor iar
organismele vii au posibilitatea ca prin procese colective s elibereze i s stocheze
aceast energie chimic i s sintetizeze biomolecule complexe pornind de la cele
simple.
Totalitatea transformrilor compuilor chimici i a energiei din organismul viu
poart denumirea de metabolism iar prin metabolism intermediar se nelege ansamblul
proceselor biochimice care au loc dup absorbia intestinal a substanelor nutritive
provenite din alimente. Aceste procese biochimice presupun conversia materiei i
energiei prin secvene de reacii catalizate de enzime n care produsul unei reacii
enzimatice devine substrat pentru reacia urmtoare. Produii care rezult n aceste
reacii succesive pot fi metabolizai sau devin intermediari metabolici.
Cele dou direcii principale ale metabolismului intermediar sunt:
1.Catabolismul care cuprinde procesele prin care molecule complexe-glucide, lipide,
proteine- de natur endogen sau exogen sunt scindate treptat la molecule simple :
monoglucide, glicerol, acizi grai, aminoacizi. Acestea la rndul lor sunt degradate
oxidativ pn la bioxid de carbon i ap. n aceast etap energia liber care rezult este
captat sub form de adenozintrifosfat ( ATP) sau ali compui macroergici. Energia
chimic care se formeaz n procesele catabolice mai poate fi folosit n susinerea unor
procese fiziologice sau fizico- chimice cum ar fi contracia muscular, transportul activ
prin membrane, excitaia nervoas sau pentru unele procese anaerobe iar o mic parte
din energie este convertit n cldur. Etapele finale ale cii metabolice sunt
reprezentate de a. ciclul acizilor tricarboxilici b. catena de respiraie c.fosforilarea
oxidativ. n aceste etape acetilcoenzima A este degradat oxidativ la dioxid de carbon
i ap iar energia este stocat sub form de ATP.
2.Anabolismul cuprinde procesele de biosintez ale complexelor macromoleculare
(glucide, lipide, proteine, acizi nucleici etc) , pornind de la componeni mai simpli care
provin n primul rnd din alimente. Energia necesar proceselor anabolice este furnizat
de compui macroergici cum ar fi ATP sau indirect prin hidrogenul cu energie ridicat
din nicotinamid - adenindinucleotid fosfat (NADPH).
ntre procesele catabolice i cele anabolice exist un echilibru dinamic la nivel celular,
compoziia chimic a celulelor fiind meninut pe toat durata de via a acestora ntre
anumite limite ceea ce nseamn c viteza de sintez a biomoleculelor este egal cu
viteza de degradare a lor. Economisirea de metabolii i de energie reprezint condiii de
desfurare a proceselor biochimice componente ale metabolismului intermediar.
Unele ci anabolice i catabolice cuprind etape comune formate din reacii reversibile
care sunt catabolizate de enzime comune i la care particip metabolii comuni aa cum
este cazul gluconeogenezei i glicolizei din metabolismul glucidic.Aceste ci cuprind i
etape distincte formate din reacii ireversibile i care sunt catalizate de enzime
reglatoare.
2
Echipamentul enzimatic care catalizeaz o anumit cale metabolic- anabolic sau
catabolic - are o localizare intracelular distinct. Astfel ,citosolul conine enzime
specifice urmtoarelor seturi de reacii: glicoliza, calea pentozofosfailor, biosinteza
acizilor grai. Echipamentul enzimatic care catalizeaz setul de reacii din ciclul acizilor
tricarboxilici ( ATC), fosforilarea oxidativ, |-oxidarea acizilor grai ,formarea corpilor
cetonici este localizat n matricea mitocondrial.
Metabolismul se clasific n funcie de natura biomoleculei sau compusului
metabolizat:
a. metabolismul glucidic;
b. metabolismul lipidelor;
c. metabolismul proteinelor (incluznd aici i metabolismul nucleotidelor i acizilor
nucleici) ;
d.metabolismul hidromineral.
Reglarea metabolismului se realizeaz la mai multe nivele i cuprinde anumite
sisteme de reglare ,unele prin mecanisme specifice iar altele prin mecanisme
nespecifice.n molecula enzimei care controleaz o anumit reacie biochimic exist n
afara centrului activ al moleculei i centri alosterici unde se pot lega specii moleculare
care nu prezint analogie structural cu substratul ( numii efectori alosterici). Legarea
acestor efectori determin modificri conformaionale n macromolecula de enzim care
se transmit la distan , la centrul activ al enzimei i acioneaz n sensul activrii sau
inhibrii formrii complexului enzim-substrat. Aceti efectori alosterici joac un rol
important n reglarea i controlul proceselor biochimice.
Astfel ntr-un proces biochimic care decurge n mai multe etape (proces multi-
secvenial) , unul dintre produii finali poate aciona ca inhibitor alosteric pentru una
dintre enzime ( n schema de mai jos: S= substrat, P=produs de reacie, E=enzima ):


Reglarea proceselor metabolice se poate face i prin controlul genetic al vitezei
de biosintez al enzimei care catalizeaz o reacie biochimic sau prin controlul
vitezelor de intrare a biomoleculelor n celul datorit permeabilitii selective a
membranelor celulare pentru acetia.
Procesele metabolice n organismele animale sunt reglate prin intermediul
hormonilor. Astfel ,hormonii hipotalamici pot stimula sau inhiba secreia tropinelor
hipofizare. Eliberarea hormonilor hipotalamici i a tropinelor hipofizare este reglat prin
mecanism feed back de ctre concentraia plasmatic a hormonilor periferici Activitatea
unor glande endocrine cum este paratiroida sau pancreasul endocrin este reglat de
parametrul biologic pe care-l controleaz. Astfel ,eliberarea de insulin cu aciune
hipoglicemiant este declanat de creterea glicemiei.
Hormonii sunt activatori ai biosintezei la nivel celular, ndeplinind funcia de
efectori ai biosintezei enzimelor. n metabolismul lipidic , unii hormoni cum ar fi
(-)
S
P
1
P
2
....
P
n
E
1
E
2
E
3 E
n
3
catecolaminele stimuleaz lipoliza (mesagerul secundar este n acest caz AMP ciclic) n
timp ce alii (cum ar fi insulina) stimuleaz lipogeneza. n metabolismul glucidic
hormonii glucocorticosterozi faciliteaz conversia aminoacizilor n glucoz iar insulina
induce conversia glucozei n glicogen.

1.2.Oxidarea biologic a glucidelor, lipidelor i proteinelor


Biomoleculele cu structur complex de natur exogen cum ar fi poliglucidele,
proteinele sau lipidele nu pot fi utilizate de ctre organism dect dup o prealabil
conversie a lor n aparatul digestiv.Scindarea hidrolitic a acestor biomolecule este
realizat cu ajutorul echipamentului enzimatic prezent n sucul gastric, sucul duodenal,
intestinul subire i flora bacterian. n urma acestor transformri metabolice se obin
unitile componente ale acestor biomolecule complexe:monoglucide, glicerol,acizi
grai, aminoacizi. Aceste uniti componente sunt catabolizate la nivel celular prin
desfacerea treptat a legturilor C-C din fiecare compus cu formarea n final a unui
metabolit comun, acetilcoenzima A, care reprezint punctul de legtur catabolic i
anabolic din organism. Pornind de la acetilcoenzima A se pot sintetiza mai multe clase
de biomolecule. Degradarea aminoacizilor presupune obligatoriu i o etap de
ndeprtare a gruprii amino realizat prin transaminare sau deaminare
oxidativ.Catabolizarea unitilor structurale ( monoglucide, aminoacizi etc.) rezultate
prin hidroliz se face pe cale oxidativ , cu consum de oxigen iar acest proces este
denumit impropriu oxidare biologic.Din oxidarea acizilor grai rezult cele mai
importante cantiti de energie dar oxidarea glucidelor decurge mai rapid, fiind utilizat
deseori de ctre organismul animal pentru nevoile imediate de energie. Dioxidul de
carbon i apa reprezint produii finali ai oxidrii acetilcoenzimei A n ciclul ATC
cuplat cu catena de respiraie i fosforilare oxidativ. Dioxidul de carbon rezult prin
decarboxilarea unor acizi ( de exemplu acidul o-cetoglutaric) n ciclul ATC. Apa rezult
n catena de respiraie pornind de la hidrogenul preluat de pe diferite substrate sub
form de coenzime n stare redus ( NADH , FADH
2
) i oxigenul molecular. Prin
cuplarea catenei de respiraie cu fosforilarea oxidativ, energia care rezult n procesul
de formare al apei este nmagazinat n legturile macroergice ale ATP.
n schema de mai jos se red principalele etape n degradarea oxidativ a glucidelor,
lipidelor i proteinelor:


4
Ciclul ATC
Acetil-CoA
Piruvat
Glucoza
Poliglucide Lipide
Acizi grasi
Proteine
Aminoacizi
2 CO
2
O
2
H
2
O
NAD
+
NADH+H
+
ADP+P
i
ATP

Degradarea oxidativ a glucidelor, lipidelor i proteinelor

1.3. Biomolecule macroergice
n organismele animale exist un grup de biomolecule specializate denumite compui
macroergici care sunt implicai n schimbul de energie, bilanul energetic n orice tip de
celule vii. Compuii macroergici i ndeplinesc aceast funcie prin susceptibilitatea lor
la hidroliz cnd se elibereaz o cantitate mare de energie (egal sau mai mare de 7
kcal/mol).
Un rol important ca furnizor de energie pentru multe procese biochimice i revine
sistemului adenilat ce cuprinde adenozintrifosfatul-ATP, adenozindifosfatul-ADP i
adenozinmonofosfatul-AMP i care funcioneaz n prezena ionilor de magneziu
(Mg
2+
) i fosfatului anorganic P
i
(a se vedea i schema de mai jos):
N
N
N
N
NH
2
AMP
ADP
O
CH
2
O OH
O P P ~ O
O
-
O
O
-
P ~ O
O
O
O
-
O
H
_

Schema 1.3.1. Structura funcional a sistemului adenilat, ATP/ADP/AMP
5
Fosforilarea la nivelul substratului i fosforilarea oxidativ reprezint cele mai
importante ci de sintez a ATP-ului.
Fosforilarea la nivelul substratului implic utilizarea imediat n scopul sintezei de ATP
a energiei eliberate n cursul unei reacii exergonice care face parte dintr-o secven
catabolic. Fosforilarea la nivelul substratului implic preluarea de P
i
i asigur 10-12%
din necesarul de ATP al organismului animal.
Se cunosc trei reacii de fosforilare la nivelul substratului care opereaz n organismul
animal i anume:
a. n glicoliz, aldehida 3-fosfogliceric este convertit la acid 1,3-difosfogliceric
sub aciunea gliceraldehid-fosfat-dehidrogenazei (cu preluare de P
i
). ntr-o etap
ulterioar, acidul 1,3-difosfogliceric este transformat sub aciunea
fosfogliceratkinazei n acid 3-fosfogliceric cu sinteza concomitent de ATP:
H
2
C O
C
COOH
OH H
P H
2
C O
C
C
OH
H
O
H
P H
2
C O
C
C ~ O
OH
O
H
P
NAD
+
NADH+H
+
P
i
P
ADP
ATP
Aldehid-3-
fosfo-gliceric
Acid 1,3-difosfo-
gliceric
Acid 3-fosfo-
gliceric


b. Tot n glicoliz, 2-fosfoenolpiruvatul este convertit la piruvat cu formarea unei
molecule de ATP. Aceast etap este precedat de obinerea 2-fosfoenolpiruvatului din
2-fosfoglicerat:

Acid 2-fosfo-
gliceric
H
2
O
H
2
C OH
C O
COOH
H P
CH
2
C O ~
COOH
P
ADP
ATP
COOH
C
CH
3
O
Fosfoenol-
piruvat
Piruvat

c.n ciclul ATC, prin decarboxilarea oxidativ a o-cetoglutaratului la succinat se
sintetizeaz ATP. Aceast conversie se realizeaz prin dou reacii catalizate de o-
cetoglutarat dehidrogenaza i respectiv succinil~CoA sintetaza:
COO
-
C O
CH
2
CH
2
COOH
C ~ SCoA
CH
2
O
CH
2
COOH
NAD
+
NADH+H
+ CO
2
CoA-SH
GDP
GTP
CoA-SH
P
i
COOH
CH
2
CH
2
COOH
Acid o-ceto- Succinil ~ CoA Acid
glutaric succinic

Aceast fosforilare la nivel de substrat duce la sinteza de GTP pornind de la GDP i P
i
.
Sistemul GDP/GTP este n corelaie cu sistemul ADP/ATP aa cum rezult i din
reacia de transfosforilare prezentat mai jos:
6
GTP + ADP GDP + ATP

Fosforilarea oxidativ asigur aproximativ 80-90% din necesarul de ATP al
organismului animal. Oxidarea coenzimelor reduse (NADH, FADH
2
) n catena de
respiraie este cuplat cu fixarea direct de fosfat anorganic (P
i
) la ADP, acest
mecanism de cuplare fiind prezentat mai departe.
n cursul diverselor procese biochimice, ATP-ul este scindat la ADP+ P
i
sau la AMP i
acid pirofosforic care este hidrolizat mai departe la acid fosforic ,aa cum se exemplific
n reaciile de mai jos:


a.
O
OH
OH
OH
CH
2
O
HO
H
O
OH
OH
OH
CH
2
O
O
H
+ ATP
P
+ ADP
Glucoza Glucozo-6-fosfat


Deoarece fosforilarea glucozei necesit mai puin de 7,3 kcal/mol, este suficient
scindarea hidrolitic a ATP-ului la ADP+ P
I
.
b. R-COOH + ATP + COA-SH R-CO~SCOA + AMP + PP
i

Acid gras Acil~CoA
Sinteza acetil~CoA (forma activat a acizilor grai) necesit mai mult de 7,3 kcal/mol,
iar n acest caz scindarea hidrolitic a ATP-ului se face la AMP+PP
i
, acesta din urm
fiind hidrolizat rapid la dou resturi de fosfat anorganic (P
i
) sub aciunea unor
pirofosfataze specifice existente n toate tipurile de celule:
PP
i
+ H
2
O 2 P
i

Adenilatkinaza este o enzim activ, prezent n toate celulele, care catalizeaz
conversia AMP la ADP printr-o reacie de transfosforilare:
AMP + ATP 2 ADP

Dac ATP-ul poate fi sintetizat din ADP i P
i
, nu acelai lucru se poate spune despre
sinteza din AMP i PP
i
pentru care nu exist o enzim care s catalizeze aceast reacie.
Ali compui macroergici sunt cei din clasa guanidinfosfailor i anume creatinfosfatul
i argininfosfatul:
HN PO
3
H
2
C
N
NH
CH
2
CH
3
COOH
HN PO
3
H
2
C
NH
NH
CH
2
CH
2
C
COOH
NH
2
H
Creatinfosfat Argininfosfat

7
Pentru mamifere, creatinfosfatul are un rol important ca rezervor de grupri fosfat
macroergic la nivelul muchilor ,pentru a putea fi utilizat n timpul contraciei prin
intermediul ATP. Creatinfosfokinaza (CPK) este o enzim care catalizeaz sinteza
ATP-ului pornind de la creatinfosfat i ADP ntr-o reacie reversibil:

C HN
NH ~
N CH
2
CH
3
COOH
P
+ ADP HN C
NH
2
N CH
2
CH
3
COOH
+ ATP
Creatinfosfat Creatin


n repaus, reacia merge de la dreapta la stnga i reprezint modalitatea de sintez a
creatinfosfatului. n muchii nevertebratelor, rolul de fosfagen al creatinfosfatului este
preluat de argininfosfat.Astfel de compui macroergici reprezint un rspuns la
asigurarea de durat a rezervei de energie n celule cu un consum foarte ridicat de ATP,
cum este cazul muchilor n contracie.
Sinteza de ATP este n funcie de necesitile energetice la nivel celular iar
controlul acestui proces se face cu ajutorul unor enzime alosterice a cror activitate este
dependent de concentraiile unor efectori ca AMP, ADP i ATP.
Mononucleotidele trifosforilate, altele dect ATP, au un rol important ndeosebi
n procese de biosintez. Astfel, guanozintrifosfatul (GTP) este implicat n biosinteza
proteinelor, citozintrifosfatul (CTP) n biosinteza fosfolipidelor, uridintrifosfatul (UTP)
n biosinteza glicogenului, glicosfingolipidelor etc.
Unele mecanisme de transmitere a informaiilor chimice, ndeosebi provenind de
la hormoni, presupun existena la nivelul membranelor plasmatice a unor proteine G
care au ca i componente GDP i GTP.
n tabelul de mai jos se d coninutul n energie liber (kcal/mol) corespunztoare
hidrolizei unor compui macroergici sau ale unor biomolecule fosforilate care nu sunt
macroergice.
Tabelul 1.3.1. Coninutul n energie liber (kcal/mol) corespunztoare
hidrolizei unor compui macroergici sau ale unor biomolecule fosforilate care nu
sunt macroergice
Biomolecule Tipul de legtur Energie
Acid fosfoenolpiruvic
Creatinfosfat
Acetil~CoA
ATP ( ADP + P
i
)
Glucozo-1-fosfat
Glucozo-6-fosfat
Glicerol-3-fosfat
enol-fosfoesteric
fosfoamidic
tioesteric
anhidridic
esteric
esteric
esteric
14,8
10,3
7,5
7,3
5,0
3,3
2,2

8
Orice biomolecul macroergic fosforilat avnd o energie liber corespunztoare
hidrolizei sale mai mare de 7,3 kcal/mol este capabil ca printr-o reacie de
transfosforilare s converteasc ADP la ATP.
1.4.Ciclul acizilor tricarboxilici
1.4.1. Etapele ciclului ATC
Ciclul acizilor tricarboxilici sau ciclul lui Krebs este o cale amfibolic (se
implic att n procesele catabolice ct i n cele anabolice):
a. acetatul activat care rezult ca metabolit al diferitelor ci de utilizare a substanelor
nutritive (glucide, acizi grai i aminoacizi) este degradat printr-un ciclu de reacii n
scop energetic.
b. ciclul acizilor tricarboxilici furnizeaz intermediarii si pentru biosinteza multor
compui.
1. Introducerea acetatului sub form de acetilcoenzim A n ciclul Krebs se face prin
reacia de condensare cu acidul oxalilacetic n urma creia rezult acidul citric:
H
3
C CO ~ SCoA
Acetil ~ CoA
+
HOOC C CH
2
O
COOH
Acid oxalilacetic
H
2
O
CoA-SH
H
2
C COOH
C
C
COOH HO
COOH H
2
Acid citric

Reacia de mai sus este catalizat de citratsintetaz i este o condensare aldolic
ntre o component carbonilic (oxalilacetat) i una metilenic (acetil~CoA).
Labilizarea hidrogenului din poziia o a acetil~CoA se datoreaz lipsei fenomenului de
mezomerie n tioesteri care conduce la efectul atrgtor de electroni al grupei CO-.
Succinil~CoA, un intermediar al ciclului Krebs i ATP-ul sunt inhibitori alosterici ai
citratsintetazei. n acest fel, o stare energetic ridicat n esuturi ,semnalat de
concentraii mari de ATP, duce la ncetinirea ritmului reaciilor incluse n ciclul ATC
prin inhibarea citratsintetazei.
2. Citratul este izomerizat n continuare la izocitrat sub aciunea cis-aconitazei i avnd
ca intermediar cis-aconitatul:
H
2
C COOH
C
C
COOH HO
COOH H
2
C COOH
C
C
COOH
COOH
H
H
2
- H
2
O
+ H
2
O
- H
2
O
+ H
2
O
HO CH COOH
C
C
COOH
COOH
H
H
2
acidul citric acidul acidul
cis-aconitic izocitric

Izomerizarea acidului citric se realizeaz printr-o deshidratare urmat de o etap de
hidratare.
3.Acidul izocitric este decarboxilat oxidativ cu formarea acidului o-cetoglutaric i CO
2

sub aciunea izocitratdehidrogenazei, enzim reglatoare alosteric:
9
HO CH COOH
C
C
COOH
COOH
H
H
2
NAD
+
NADH+H
+
CO
2
COOH
C O
CH
2
CH
2
COOH
Acidul izocitric Acidul o-cetoglutaric

4. Acidul o-cetoglutaric este decarboxilat oxidativ la succinil~coenzima A:

Decarboxilarea oxidativ a acidului o-cetoglutaric este catalizat de complexul o-
cetoglutarat dehidrogenaza care depinde de tiaminpirofosfat (TPP), acid lipoic,FAD i
NAD
+
. Produsul de reacie, succinil~CoA, este un compus macroergic, iar scindarea
legturii tioesterice este cuplat cu fosforilarea guanozin-difosfatului (GDP) care trece
n GTP (reacie de fosforilare a substratului):

Conversia GTP la ATP se face sub aciunea enzimei nucleozid difosfatkinaza:
GTP + ADP GDP + ATP
o-Cetoglutaratdehidrogenaza este inhibat de ATP, NADH i succinil~CoA.
5. Acidul succinic obinut n reacia precedent este convertit la acidul fumaric sub
aciunea succinatdehidrogenazei, o flavin-dehidrogenaz:


COOH
CH
2
CH
2
COOH
FAD
FADH
2
HC COOH
CH HOOC
Acid succinic Acid fumaric

COOH
C O
CH
2
CH
2
COOH
NAD
+
NADH+H
+
CO
2
CoASH
Acid Succinil ~ CoA
o-cetoglutaric
COOH
CH
2
CH
2
CO SCoA
COOH
CH
2
CH
2
COOH
+ CoASH
GDP
GTP
P
i
COOH
CH
2
CH
2
CO SCoA
Acid succinic
Succinil-CoA
10
Aceast reacie este inhibat competitiv de concentraii mari de acid oxalilacetic, dar i
de acid malonic, un fals substrat.
6. Sub aciunea fumarazei, o enzim stereospecific, acidul fumaric este hidratat la acid
L-malic:
COOH
C
CH
2
COOH
OH
HC COOH
CH HOOC
H
2
O
H
2
O
H
Acid fumaric Acid L-malic

7. Ciclul catabolizrii unei molecule de acetil~CoA se ncheie prin reacia de oxidare a
acidului L-malic la acid oxalilacetic:
NAD
+
NADH+H
+
COOH
C
CH
2
COOH
OH H
COOH
C
CH
2
COOH
O
Acid L-malic Acid oxalilacetic

Reacia este catalizat de L-malatdehidrogenaza.
Ecuaia global a ciclului ATC este:
CH
3
CO~SCoA + 3 NAD
+
+ FAD + GDP + 2H
2
O + Pi 2 CO
2
+ FADH
2
+ 3 NADH
+ GTP + CoASH + 2 H+
Deci prin oxidarea acetil~CoA rezult 2 molecule de bioxid de carbon i patru
perechi de echivaleni reductori (3 NADH + 3 H
+
+ FADH
2
) care sunt oxidai n lanul
respirator i care permite reluarea ciclului ATC. Condiia obligatorie n acest caz este
desfurarea acestui proces n condiii de aerobioz. Ciclul Krebs reprezint o cale
major de degradare a glucidelor, lipidelor i proteinelor cu scopul generrii de ATP,
dar poate furniza intermediari pentru diferite ci metabolice.
Intrarea n ciclul Krebs a aa-numiilor aminoacizi cetoformatori (fenilalanin,
leucin) se face prin acetil~CoA, la fel ca i pentru acizii grai care sunt degradai prin
|-oxidare. Glucidele dar i unii aminoacizi furnizeaz i componenta oxalilacetat care
permite reluarea ciclului ATC. Disponibilitatea oxalilacetatului permite utilizarea
lipidelor n ciclul ATC.
Calea major de sintez a oxalilacetatului o reprezint carboxilarea piruvatului sub
aciunea piruvatcarboxiligazei:
CH
3
COCOOH + CO
2
+ ATP HOOCCH
2
COCOOH + ADP + Pi
Reacia se desfoar n mitocondrii, iar biotina este gruparea prostetic a
piruvatcarboxiligazei.
Aminoacizii glucoformatori se degradeaz pe ci proprii cu formarea unor
intermediari ai ciclului ATC.
La pH-ul celular, toi acizii formai n stare liber n ciclul ATC (citric, cis-aconitic,
izocitric, o-cetoglutaric, etc.) se gsesc sub form de anioni.
Cele dou decarboxilri oxidative din ciclul Krebs catalizate de izocitratdehidrogenaz
respectiv o-cetoglutaratdehidrogenaza sunt responsabile pentru cea mai mare parte din
11
bioxidul de carbon expirat de animale (volumul de CO
2
n litri/zi este de 30003500 n
cazul vacilor n perioada de lactaie i demonstreaz intensitatea acestei ci metabolice).
1.4.2.Bilanul energetic al ciclului Krebs. Cuplarea ciclului Krebs cu lanul respirator
i fosforilarea oxidativ permite oxidarea coenzimelor reduse (NADH, FADH
2
) prin
care se genereaz ATP i este facilitat de localizarea intramitocondrial a
echipamentelor enzimatice specifice acestor procese.
Prin conversia izocitratului la o-cetoglutarat sub aciunea NAD
+

izocitratdehidrogenazei rezult un mol de NADH care duce n final la formarea a 3 moli

de ATP.
Prin decarboxilarea oxidativ a o-cetoglutaratului la succinil~CoA sub aciunea o-
cetoglutaratdehidrogenazei se formeaz un mol de NADH (=3 moli de ATP).
Dehidrogenarea malatului la oxalilacetat sub aciunea malatdehidrogenazei
genereaz un nou mol de NADH (= 3 moli de ATP).
Conversia succinatului la fumarat sub aciunea succinatdehidrogenazei genereaz
un mol de FADH
2
(= 2 moli de ATP).
n conversia succinil~CoA la succinat se formeaz o legtur fosfat macroergic prin
fosforilare la nivelul substratului. Prin transfosforilare, molecula de GTP astfel format
este convertit la ATP.
Deci nsumnd numrul de moli de ATP formai prin catabolizarea unui mol de
acetil~CoA prin ciclul ATC continuat cu catena de respiraie cuplat cu fosforilarea
oxidativ se obine un total de 12 moli ATP.
1.4.3.Caracterul amfibolic al ciclului ATC.
Numeroase biomolecule i sintetizeaz scheletul hidrocarbonat pe seama unor
intermediari ai ciclului Krebs, ceea ce consacr acest ciclu ca pe o cale amfibolic
(catabolic i anabolic).Succinatul, intermediar al ciclului ATC, este antrenat n
biosinteza hemului, mioglobinei, citocromilor prin ciclul succinat-glicocol. Succinatul
este intermediar i n gluconeogeneza la rumegtoare.
Oxalilacetatul i o-cetoglutaratul, cetoacizii formai n ciclul ATC, pot forma prin
transaminare sau aminare reductiv aminoacizii corespunztori, aspartatul i glutamatul.
Aspartatul este de asemenea un precursor n biosinteza pirimidinelor.
Prin reacii anaplerotice se neleg reaciile care permit furnizarea de intermediari
metabolici ai ciclului Krebs. Carboxilarea piruvatului este un exemplu de reacie
anaplerotic prin care se furnizeaz ciclului Krebs oxalilacetat n condiiile n care
mamiferelor le lipsete echipamentul enzimatic de conversie direct a acetil~CoA n
oxalilacetat. Reacii anaplerotice sunt considerate i transaminrile aspartatului i
glutamatului la oxalilacetat i respectiv o-cetoglutarat:

Aspartat + piruvat oxalilacetat + alanin

Glutamat + piruvat o-cetoglutarat + alanin

Glutamatdehidrogenaza catalizeaz urmtoarea reacie anaplerotic care furnizeaz o-
cetoglutarat:

12
Glutamat + NAD
+
+ H
2
O o-cetoglutarat + NADH + H
2
O + NH
3
Reglarea ciclului ATC. Oxidarea acetatului activat n acest ciclu, dar i ritmul
oxidrilor n ciclul ATC sunt sensibile la ncrcarea energetic a celulei, la concentraia
de ATP. Sunt importante i semnalele FAD i NAD
+
atunci cnd schimbul energetic
este mic. Controlul ciclului ATC este realizat prin mai multe mecanisme ce acioneaz
n cteva puncte de control care includ citratsintetaza, izocitratdehidrogenaza i o-
cetoglutaratdehidrogenaza i au fost menionate la trecerea n revist a reaciilor acestui
ciclu.
1.4.4.Dereglri ale ciclului ATC. Unele otrvuri de membrane cum ar fi CCl
4
pot s
afecteze randamentul de sintez al coenzimelor reduse (NADH, FADH
2
) cu consecine
imediate n sinteza de ATP (prin cuplarea cu lanul respirator i fosforilarea oxidativ)
i implicit instalarea unor tulburri funcionale inclusiv modificri structurale
degenerative.
n cetoza rumegtoarelor, insuficiena oxalilacetatului face ca s nu se mai
asigure raportul echimolar necesar reaciei cu acetil~CoA ,instalndu-se astfel o
disfuncie a mitocondriilor.
O privire de ansamblu asupra ciclului ATC este redat n schema 1.4.1.
Oxalil acetat
Citrat
Cis-aconitat
Izocitrat
o-Cetoglutarat
Succinil ~ CoA
Succinat
Fumarat
Malat
Acetil-CoA
NAD
+
NADH+H
+
CO
2
NAD
+
NADH+H
+
CO
2
GTP GDP
FADH
2
FAD
NAD
+
NADH+H
+
2a
2b
1
3
4
5
6
7
8

Schema 1.4.1.Principalele etape ale ciclului ATC (1-citratsintetaza, 2-aconitaza, 3-
izocitratdehidrogenaza, 4-o-cetoglutaratdehidrogenaza, 5-succinil-CoA tiokinaza,
6-succinatdehidrogenaza, 7-fumaraza, 8-malatdehidrogenaza).

1.5.Catena de respiraie i fosforilare oxidativ
Ciclul acizilor tricarboxilici i lanul respirator cuplat cu fosforilarea oxidativ
reprezint ci comune de degradare a glucidelor, lipidelor i proteinelor. Coenzimele
reduse NADH i FADH
2
formate n glicoliz, oxidarea acizilor grai i ciclul ATC sunt
13
molecule bogate n energie iar hidrogenul pe care-l conin se gsete la un potenial
ridicat cuantificabil prin potenialul redox standard.
Prin transferul hidrogenului pe oxigen cu formarea apei se elibereaz o cantitate
mare de energie care poate fi utilizat la generarea de ATP. Reoxidarea coenzimelor
asigur continuitatea reaciilor din ciclul ATC dar i din alte ci metabolice care implic
dehidrogenri specifice.
Lanul respirator este etapa ultim a degradrii aerobe la organismele eucariote
prin care atomii de hidrogen i electronii (aa numiii echivaleni reductori) de la
coenzimele reduse sunt transferai la oxigen prin intermediul unor sisteme redox i a
unui echipament enzimatic specific:
NADH + H
+
+ 1/2 O
2
NAD
+
+ H
2
O
FADH
2
+ 1/2 O
2
FAD + H
2
O
Fiecare sistem redox implicat n lanul respirator este caracterizat printr-o anumit
cdere de potenial.
Fosforilarea oxidativ este procesul prin care se genereaz ATP din transferul
echivalenilor reductori de la NADH sau FADH
2
la oxigen i reprezint sursa major
de ATP n organismele aerobe.
Localizarea lanului respirator i fosforilrii oxidative. Ansamblul componentelor
lanului respirator i fosforilrii oxidative este localizat n membrana intern a
mitocondriei. Transferul de electroni de la coenzimele reduse (NADH, FADH
2
) la
oxigenul molecular are loc prin intermediul componentelor lanului respirator (cum ar fi
citocromii)
1.5.1.Organizarea catenei de respiraie
Catena de respiraie este format din 4 complexe enzimatice legate prin doi
transportori de electroni mobili: coenzima Q i citocromul C.
Complexul I mai este denumit i complexul NADH-coenzima Q reductaza
cunoscut i sub numele de NADH-dehidrogenaza, Subunitile complexului I conin i
cteva heteroproteine cu fier neheminic i sulf notate cu FeS
1
, FeS
2
etc, aceast ordine
corespunznd descreterii lui E
0
. Flavoproteina FP
N
,avnd ca i coenzim
flavinmononucleotidul (FMN), este de asemenea o component a complexului I, fiind
implicat n preluarea hidrogenului de la coenzimele NADH.
Acceptorul de electroni pentru complexul I este coenzima Q numit i ubichinon
i notat Q.
Coenzima Q face legtura cu complexul III (complexul citocrom C reductaz). Tot
coenzima Q este implicat n transferul de electroni de la complexul II la complexul
III.
Complexul II mai este denumit i succinat-coenzima Q-reductaza i reprezint
punctul de intrare n catena de respiraie a hidrogenului de la succinat. Complexul II
include flavoproteina succinatdehidrogenaza (fiind aceeai enzim care particip i n
ciclul Krebs) cu coenzim de tip FAD. Tot n complexul II se mai gsesc cel puin trei
proteine cu fier i sulf.
Funcionarea catenei de respiraie se poate face prin ramura lung, adic atunci cnd
echivalenii de reducere intr n lanul respirator prin complexul I sau prin ramura
scurt, cnd intrarea echivalenilor se poate face prin complexul II.
14
Complexul III este denumit i coenzima Q-citocrom c-reductaz. Electronii
primii de la complexele I i II sunt cedai complexului III prin intermediul coenzimei
Q. Ca grupri prostetice ale complexului III menionm citocromii de tip b i c precum
i o protein cu Fe i S.
Citocromii sunt heteroproteide avnd ca grupare prostetic Fe-porfirina IX, asemntor
hemului din mioglobin i hemoglobin. Citocromul C, de exemplu, este o
heteroproteid solubil, legat de membran pentru a ndeplini rolul de transportor de
electroni.



N
N
N
Fe
2+
H
3
C CH
CH
3
C
H
2
C
H
3
C
S
CH
3
CH
2
C
C
CH
3
N
CH
3
CH
CH
3
S
H
2
H
2
H
3
P
R
O
T
E
I
N


Schema 1.5.1. Structura citocromului C

n esen, rolul citocromilor n catena de respiraie este de acceptor al electronilor de la
partenerul aflat n amonte i cedarea acestora partenerului din dreapta:

Cit (Fe
3+
)
Cit (Fe
2+
)
e
-
e
-


Complexul IV numit i citocromoxidaz este acceptorul de electroni de la
citocromul C n stare redus pe care-i transfer la oxigenul molecular ca acceptor final.
15
Gruprile prostetice ale acestui complex sunt cuprul (Cu
2+
) i citocromii a i a
3
. O
imagine de ansamblu a lanului respirator este redat n schema 1.5.2:

cit a
cit a
3

ATP
CN
-
, azide,
CO, H
2
S
1/2 O
2

H
2
O (+0,32 V)
Complex I
FP
N
(FMN)
Fe S
Complex II
FP
S
(FAD)
Fe S
cit b 560
NADH+H
+
NAD
+
(-0,32 V)
Succinat
Fumarat
Rotenon, amital,
pericidin
Coenzima Q (+0,04 V)
Complex III
cit b 562
cit b 566
Fe - S
cit C
1
citocrom C (+0,25 V)
Complex IV
Cu
2+
F
A
C
T
O
R

D
E

C
U
P
L
A
R
E

1

(F
1
)
ATP
ATP
Antimicin

Schema 1.5.2. Complexele lanului respirator i fosforilrii oxidative


1.5.2.Calea transferului de electroni
Complexul I NADH-CoQ-reductaza (prin cuplare cu fosforilarea oxidativ)
catalizeaz urmtoarea reacie:
16
NADH+H
+
+ CoQ NAD
+
+ CoQH
2
ADP+P
i
ATP

Cuplarea lanului respirator cu fosforilarea oxidativ necesit eliberarea protonilor n
primele etape.
Inhibitorii transferului de electroni din complexul I sunt unele insecticide (rotenona),
antibiotice (antimicina A) sau barbiturice (amitalul).
Complexul II reprezint punctul de intrare n lanul respirator pentru electronii de la
succinat care sunt transferai la coenzima Q:
FP
S
(FAD)
FP
S
(FADH
2
)
Succinat
Fumarat
CoQH
2
CoQ

Complexul III este acceptorul de electroni de la CoQ pe care-i transfer citocromului
C:
CoQH
2
+ 2 cit C (Fe
3+
) CoQ + 2 cit C (Fe
2+
) + 2 H
+
ADP+P
i
ATP

Complexul IV (citocromoxidaza) este acceptorul de electroni de la citocromul c
i catalizeaz transferul acestora la oxigenul molecular pentru a forma n final ap:
O
2
+ 4 cit C(+2) + 4 H
+
ADP+P
i
ATP
4 cit C(+3) + 2 H
2
O

Sinteza de ATP este realizat de o protein cu structur complex format din 12-
13 subuniti i denumit factor de cuplare F1 care este localizat n membrana intern
mitocondrial. Principala component a complexului ATP-sintetaza este format din
cinci subuniti. Celelalte componente ale factorului de cuplare F1 au roluri n fixarea
de membrana mitocondrial sau de reglare ale unor procese.
Citocrom-oxidaza este inhibat de azide, oxidul de carbon i ionii CN
-
.
Ecuaia global a lanului respirator cuplat cu fosforilarea oxidativ este:
NADH + H
+
+ 1/2 O
2
+ 3 ADP + 3 P
i
NAD
+
+ 3 ATP + 4 H
2
O
Dac ns introducerea echivalenilor de reducere n catena de respiraie se face
prin ramura scurt atunci ecuaia global a celor dou procese este:
FADH
2
+ 1/2 O
2
+ 2 ADP + 2 P
i
FAD + 2 ATP + 3 H
2
O
Din oxidarea n lanul respirator cuplat cu fosforilarea oxidativ rezult
echivalena n ATP pentru formele reduse ale dehidrogenazelor:
1 mol NADH + H
+
= 3 moli ATP
1 mol FADH
2
= 2 moli ATP
17
Oxidarea dehidrogenazelor depinde de concentraia substratelor, a ADP-ului i P
i

dar i de integritatea membranei mitocondriale i de aportul de oxigen.
|-Oxidarea acizilor grai i ciclul Krebs reprezint surse importante de coenzime
reduse (NADH+H
+
, FADH
2
, FMNH
2
), dar numeroase alte substrate pot fi
dehidrogenate sub aciunea unor dehidrogenaze specifice.
Prin ct de fosforilare notat cu P/O se nelege raportul ntre numrul de moli
de ATP sintetizai i oxigenul consumat n lanul respirator i el este de 3/1 pentru
ramura lung i de 2/1 pentru ramura scurt.

1.5.3.Decuplani ai fosforilrii oxidative de catena de respiraie

Agenii capabili s stopeze utilizarea energiei eliberate n catena de respiraie
pentru fosforilarea ADP se numesc decuplani. Ca decuplani naturali amintim tiroxina
n concentraii peste limitele normale, care face ca energia n catena de respiraie s fie
disipat sub form de cldur. Animalele care hiberneaz au esuturi brune n care
catena de respiraie este decuplat de fosforilarea oxidativ (astfel de esuturi se gsesc
i la animalele nou nscute sau la ft). Un alt decuplant este 2,4-dinitrofenolul care,
fiind un transportor de protoni prin membran, duce la anularea gradientului de pH
implicat n cuplarea catenei de respiraie cu fosforilarea oxidativ.

1.5.4.Specii reactive de oxigen

n catena de oxidaie cuplat cu fosforilarea oxidativ apar alturi de oxigenul redus la
O
2-
i forme intermediare de oxigen activat datorit unor reduceri incomplete, aa
numitele specii reactive de oxigen (SRO). n peroxizomi i citosol exist de asemenea
sisteme care genereaz specii reactive de oxigen. Un exemplu de generare de anion
radical superoxid (O
2
- .
) este oxidarea xantinei sub aciunea xantinoxidazei la acid uric:
Xantin +2 O
2
+ H
2
O Acid uric + 2 O
2
-.
+ 2 H
+

Speciile reactive de oxigen (SRO) au o citotoxicitate deosebit ,interacionnd cu
acizii nucleici, lipide membranare, proteine etc. Aceast interaciune se concretizeaz
prin promovarea formrii de peroxizi ai bazelor nucleice sau acizilor grai constitueni
ai lipidelor din membranele celulare, cu efecte asupra permeabilitii membranelor,
activitii unor enzime etc.
Radicalul superoxid este transformat sub aciunea unei enzime denumit
superoxiddismutaz (SOD) n ap oxigenat, H
2
O
2
. (reacia a, vezi mai jos). Anionul
superoxid genereaz i un radical liber cu toxicitate mare, radicalul hidroxil (-OH,
reacia b):
(a) O
2
- .
+ O
2
- .
+2 H
+
H
2
O
2
+ O
2

(b) O
2
- .
+ H
2
O 1/2 O
2
+ OH
-
+ OH
.

Catalaza i peroxidazele (inclusiv glutation-peroxidaza) sunt enzime prezente n
peroxizomi capabile s ndeprteze rapid H
2
O
2
din celule:
18
H
2
O
2
H
2
O + 1/2 O
2
Catalaza
Glutation peroxidaza
GSH G S S G
Glutation reductaza


Sistemul de aprare celular utilizeaz i sisteme antioxidante neenzimatice care
cuprind vitamine (A, E, C), provitamine (|-carotin), peptide cum ar fi glutationul sau
metabolii ca acidul uric.
O serie de stri patologice cum ar fi tendina la hemoliz datorit deteriorrii
membranelor eritrocitelor, ischemia, malignizarea, afeciuni legate de vrsta naintat
etc se interpreteaz n prezent i prin aciunea speciilor reactive de oxigen care produc
efecte de autooxidare sau peroxidare.




























19
2.METABOLISMUL GLUCIDELOR


2.1. Digestia i absorbia glucidelor

Poliglucidele (amidon, celuloz, glicogen, pentozani) i diglucidele (zaharoz,
maltoz, lactoz) care provin din alimentaie sunt scindate hidrolitic sub aciunea unui
echipament enzimatic specific la monoglucidele componente, singurele forme
absorbabile.
Digestia amidonului i glicogenului ncepe prin aciunea amilazei salivare pn la forme
intermediare limit i maltoz. oAmilaza salivar atac exclusiv legturile 1,4-
glicozidice. Legturile o 1,6glicozidice caracteristice punctelor de ramificaie nu pot fi
desfcute de o-amilaz. PH-ul acid al stomacului inhib aciunea o-amilazei salivare
ns n intestinul subire sucul pancreatic (alcalin) determin o cretere a pH-ului ,
favoriznd digestia amidonului i glicogenului. Dextrinele limit sunt scindate hidrolitic
sub aciunea amilo-1,6-glucozidazei pn la maltoz.
n tractul digestiv al omului, celuloza nu poate fi scindat hidrolitic n lipsa unui
echipament enzimatic corespunztor, fiind lipsit astfel de orice valoare nutritiv.
Rumegtoarele dispun ns de o |-glicozidaz denumit celulaz care este furnizat de
flora bacterian din prestomace, valorificnd astfel celuloza ca surs de glucoz.
Dizaharidazele acioneaz specific la nivelul intestinului subire n funcie de
natura diglucidei i a legturii glicozidice. Astfel maltaza (o o-glucozidaz) catalizeaz
scindarea hidrolitic a maltozei, lactoza (o |-galactozidaz) pe aceea a lactozei,
zaharaza (o o-glucozidaz sau |-fructozidaz) pe aceea a zaharozei. Aceste enzime sunt
sintetizate de ctre enterocite i acioneaz la nivelul marginii n perie a enterocitului, n
imediata apropiere a sistemului de transport al monoglucidelor rezultate.
Monoglucidele n stare liber care rezult n urma scindrii hidrolitice a
glucidelor sunt transportate prin celulele epiteliate ale intestinului printr-un proces de
difuzie (galactoza i glucoza fiind absorbite cu o vitez mai mare dect fructoza sau
manoza). Exist de asemenea sisteme de transport activ a monoglucidelor, fapt care
rezult din viteza de absorbie de cteva ori mai mare a glucozei i galactozei dect
pentru xiloz, care este absorbit prin difuzie pasiv.
Un prim sistem de transport activ care este specific pentru glucoz i galactoz
este cel dependent de Na
+
. n acest caz legarea Na
+
la transportor (carrier) mrete
afinitatea acestuia pentru monoglucid.
Digestia i absorbia unor glucide este prezentat n schema 2.1
20
CIRCULAIE
FICAT
Metabolismul
unor monoglucide
(fructoz, galactoz)
CAVITATEA
BUCAL
-amilaza salivar
Amidon
Diglucide
(lactoz, zaharoz, fructoz)
VEN PORT
Transport
LUMEN INTESTINAL EPITELIU INTESTINAL/CAPILARE
Maltoz
Amidon Glucoz Transport activ
Dextrine
Galactoz
Lactoz Transport activ
Glucoz
Glucoz Transport activ
Zaharoz
Fructoz Difuzie facilitat
1
2
3
4
5
STOMAC
(HCl distruge
-amilaza)

Schema 2.1. Digestia i absorbia unor glucide
(1 - -amilaz, 2 maltaz, 3 dextrinaz, 4 lactaz, 5 - zaharaz)

2.2Ci de metabolizare a glucozei n organismele animale

Principalele ci de catabolizare a glucozei sunt urmtoarele:
a. catabolizarea anaerob sau glicoliza cu formare de acid lactic i avnd ca
intermediar acidul piruvic care este redus sub aciunea unei lactat NAD
+
-
oxidoreductaze.
b. catabolizarea aerob, oxidativ care decurge tot prin intermediul piruvatului i care
duce la formarea acetil~CoA ce poate fi preluat n ciclul Krebs i catena de respiraie n
cuplare cu fosforilarea oxidativ.
c. calea pentozo/hexozo-fosfailor care decurge prin intermediul esterilor fosforici ai
acidului gluconic i ai unor pentoze. Prin aceast cale este furnizat NADPH necesar
unor biosinteze reductive dar i pentozele necesare biosintezei nucleotidelor i acizilor
nucleici.
d. calea acidului glucuronic care implic activarea glucozo-1-fosfatului sub form de
UDP-glucoz i convertirea acestuia din urm prin intermediul UDP-glucuronatului n
21
pentoze i acid ascorbic la majoritatea speciilor (cu excepia omului, primatelor i
cobailor).
2.2.1. Glicoliza (calea Embden-Meyerhof-Parnas)
2.2.1.1.Etapele glicolizei
Degradarea glucozei pn la piruvat se realizeaz n toate tipurile de celule (n citosol)
n scop energetic, aceast cale metabolic fiind elucidat de ctre Embden, Meyerhof i
Parnas. Piruvatul rezultat n glicoliz este convertit la acetil~CoA i preluat apoi n
ciclul ATC n condiiile n care esuturile dispun de oxigen sau este redus la acidul lactic
n condiiile unui deficit de oxigen.
1. Prima etap este reprezentat de conversia glucozei n fructozo-1,6-difosfat i care
implic o fosforilare, o izomerizare i o a doua etap de fosforilare. O etap
obligatorie n metabolizarea glucozei este fosforilarea ei care permite captarea ei
n celule:


O
CH
2
O
OH
OH
OH
HO
H
O
CH
2
O
OH
OH
OH
O P
H
Mg
2+
ATP
ADP
Glucoz Glucozo 6 - P


La pH-ul fiziologic, gruparea fosfat confer moleculei de glucozo-6-fosfat o
sarcin net negativ care mpiedic practic prsirea celulei. Hexokinazele sunt
enzimele implicate n catalizarea transferului grupei fosforil de la ATP la gruparea
hidroxil de la C6 al glucozei sau alt hexoz.
Glucozo-6-fosfat este izomerizat la fructozo-6-fosfat sub aciunea glucozo-6-fosfat-
izomerazei (o aldo/cetoizomeraz specific). Este o reacie reversibil, controlat prin
nivelul substratului, care necesit prezena ionilor de Mg
2+
sau Mn
2+
:

O
CH
2
O
OH
OH
OH
O P
H
O
C OH
CH
2
O
OH
OH
H
H
2
O P
Glucozo - 6 - fosfat Fructozo - 6 - fosfat


Fructozo-6-fosfatul este fosforilat la fructozo-1,6-difosfat sub aciunea enzimei
fosfofructokinazei (PFK) ntr-o reacie ireversibil. PFK are o activitate mai redus,
fiind enzima reglatoare major a glicolizei.
PFK este o enzim alosteric care are ca i activatori:
22
a. adenozinmonofosfatul (AMP) dar i ADP activeaz PFK i semnaleaz o scdere
energetic a celulei ducnd n final la creterea fluxului metabolic prin glicoliz i
sinteza de ATP n mitocondrie.
b. fructozo-2,6-difosfatul,
c. fructozo-1,6-difosfatul, produsul aciunii sale, activeaz prin feed-back
stimulare PFK fiind totodat un inhibitor al fructozo-1,6-difosfatazei (enzima care
catalizeaz reacia invers, de formare a fructozo-6-fosfatului din fructozo-1,6-difosfat).
Ca inhibitori ai PFK menionm:
a. citratul - intermediar al ciclului ATC inhib PFK b. ATP-ul este de asemenea un
inhibitor al PFK i semnaleaz (la concentraii mari) o stare energetic ridicat a celulei.
Reacia de fosforilare a fructozei-6-fosfatului:


ATP
ADP
O
C OH
CH
2
O
OH
O P
H
H
2
O P O
C OH
CH
2
O
OH
OH
H
H
2
O P
Fructozo - 6 - fosfat Fructozo - 1,6 - difosfat


2. Scindarea fructozo-1,6-difosfatului
Fructozo-1,6-difosfatul este scindat aldolic la dou trioze, gliceraldehid-3-fosfatul i
dihidroxiaceton-fosfatul sub aciunea unei liaze, fructozo-1,6-difosfatliaza sau aldolaza:

O
C OH
CH
2
O
OH
O P
H
H
2
O P
H
2
C O
C
P
O
C OH H
2
+ HC
C
C
OH
O
O
H
P H
2
Dihidroxiaceton- Gliceralde-
fosfat hid - 3 - P


Reacia este reversibil iar ntre triozo-fosfaii obinui se stabilete un echilibru
sub aciunea unei triozo-fosfat izomeraze:
H
2
C O
C
P
O
CH
2
OH
H
2
C O
C
P
OH
C
O
H
H
Dihidroxiaceton-
fosfat
Aldehida
3-fosfogliceric


Aldehida 3-fosfogliceric este mai reactiv, sistemul enzimatic i conversiile ulterioare
avnd specificitate pentru acest substrat, de aceea echilibrul de mai sus este deplasat n
sensul formrii acestuia.
23
3. Oxidarea fosforilant a gliceraldehidei-3-fosfatului
Conversia gliceraldehidei-3-fosfatului la acid 1,3-difosfogliceric (o reacie de
fosforilare a substratului) are loc sub aciunea gliceraldehid-3-fosfat-dehidrogenazei:

NAD
+
NADH + H
+
P
i
Gliceraldehid- Acid 1,3-difosfo-
3 - fosfat gliceric
HC
C
C
OH
O
O
H
P H
2
~ P
HC
C
C
OH
O
O
O
P H
2


Aceast reacie reversibil necesit nicotinamidadenin-dinucleotidul (NAD
+
) ca
acceptor de electroni iar produsul reaciei, acidul 1,3-difosfogliceric, este un compus
macroergic.
Legtura macroergic de la C
1
din acidul 1,3-difosfogliceric este transferat pe ADP sub
aciunea 1,3-difosfoglicerat kinazei (fosforilare la nivelul substratului):

ADP
ATP
Acid 1,3-difosfo- Acid 3-fosfo-
gliceric gliceric
HC
C
C
OH
O
O
OH
P H
2
~ P
HC
C
C
OH
O
O
O
P H
2


NADH rezultat n urma oxidrii fosforilante a gliceraldehidei-3-fosfatului
necesit reoxidarea sa permanent n cursul glicolizei desfurate n citosol.
4. Conversia acidului 3-fosfogliceric la acid 2-fosfogliceric
Aceast conversie este o rearanjare n care gruparea fosforil se schimb de la acid 3-
fosfogliceric la acid 2-fosfogliceric sub aciunea unei fosfogliceromutaze ntr-o reacie
reversibil:
H
2
C O
C
P
COOH
OH H
H
2
C OH
C O
COOH
P H
Acid 3-fosfo- Acid 2-fosfo-
gliceric gliceric


5. Conversia acidului 2-fosfogliceric la acid piruvic
Prin eliminarea intramolecular a unei molecule de ap din acidul 2-fosfogliceric sub
aciunea unei enolaze se formeaz acidul 2-fosfoenolpiruvic:

24
H
2
C OH
C O
COOH
P H
H
2
O
CH
2
C
COOH
O ~ P
Acid 2- fosfo- Acid 2-fosfoenol-
gliceric piruvic

Enolaza este o enzim care necesit prezena Mg
2+
, Acidul 2-fosfoenolpiruvic este
convertit la acidul piruvic ntr-o reacie ireversibil n condiiile celulare i sub aciunea
unei piruvatkinaze:
CH
2
C
COOH
O ~ P
ADP
ATP
CH
3
C
COOH
O
Acid 2-fosfo- Acid
enolpiruvic piruvic


Radicalul fosforil din acidul 2-fosfoenolpiruvic este transferat pe ADP cu
formare de ATP prin fosforilare la nivelul substratului.
n continuare, acidul piruvic rezultat prin parcurgerea ciclului ATC poate avea
mai multe destinaii:

a.Acidul piruvic este redus la acidul lactic sub aciunea lactatdehidrogenazei n condiii
anaerobe (cum ar fi muchiul n contracie) sau pentru acele esuturi care nu au
echipamentul enzimatic necesar metabolizrii aerobe a piruvatului (hematiile, retina,
esuturile embrionare sau neoplazice):

CH
3
C
COOH
O
NADH + H
+
NAD
+
HC
CH
3
OH
COOH
Acid piruvic Acid lactic


Aceast reacie permite reoxidarea NADH rezultat n etapa de oxidare a gliceraldehid-3-
fosfatului, asigurndu-se astfel continuarea glicolizei prin NAD
+
.
Acidul lactic rezultat n condiii anaerobe n esutul muscular este transportat pe
cale sanguin la ficat i rinichi care-l reoxideaz n prezena lactatdehidrogenazei la
acidul piruvic,un substrat al gluconeogenezei. Glucoza format din convertirea acidului
lactic muscular este furnizat din nou muchiului care l transform n acid lactic (ciclul
Cori).
b.n condiii aerobe, acidul piruvic este convertit la acetil~CoA ntr-o reacie ireversibil
sub aciunea unui sistem enzimatic complex denumit piruvat dehidrogenaz n
prezen de acid lipoic i coenzima A:

25
CH
3
C
COOH
O
NADH + H
+
NAD
+
CO
2
CoA~ SH
CH
3
CO ~ SCoA
Acid piruvic Acetil ~ CoA

Reacia se produce n mitocondrii iar acetil~CoA care rezult intr n ciclul ATC
unde este degradat la bioxid de carbon i hidrogen fixat ca forme reduse ale
dehidrogenazelor implicate (NADH+H
+
, FADH
2
). Acetil~CoA poate fi utilizat ca
substrat pentru biosinteza acizilor grai.
c.Acidul piruvic este carboxilat la acidul oxalilacetic n organismul rumegtoarelor sub
aciunea unei carboxilaze specifice:
CH
3
C
COOH
O
CO
2
COOH
C O
CH
2
COOH
Acid Acid
piruvic oxalilacetic

Acidul oxalilacetic este i el un substrat al ciclului ATC.
n schema 2.2 este redat schema acestui proces complex de catabolizare a glucozei.
Bilanul energetic al glucozei
1. Bilanul glicolizei anaerobe:
- 2 moli de ATP pe molecula de glucoz sunt produi prin conversia 1,3-
difosfogliceratului la 3-fosfoglicerat.
- ali 2 moli de ATP pe molecula de glucoz sunt produi prin conversia
fosfoenolpiruvatului la piruvat.
- 2 moli de ATP sunt consumai pe molecula de glucoz la sinteza fructozo-1,6-
difosfatului.
Deci ctigul net n glicoliza anaerob este de 2 moli ATP pe molecul de glucoz.
Dac glicoliza pornete de la glicogen atunci ctigul net este de 3 moli ATP pe
molecul de glucoz ntruct sinteza glucozo-6-fosfatului se face prin fosforoliza
glicogenului care nu consum ATP. Dei cantitatea de ATP eliberat este relativ mic,
glicoliza asigur aportul energetic necesar esuturilor n lipsa oxigenului pentru perioade
relativ scurte.
2. Bilanul glicolizei aerobe:

ATP produs: 2 moli de ATP pe molecula de glucoz sunt produi prin conversia 1,3-
difosfogliceratului la 3-fosfoglicerat; 2 moli de ATP pe molecula de glucoz sunt
produi prin conversia fosfoenolpiruvatului la piruvat; echivalenii a 12 moli de
ATP(3x4 NADH+H
+
); din catabolizarea unui mol de acetil~CoA se formeaz 12 moli
de ATP n ciclul Krebs, deci n total 2X12=24 moli de ATP.

26

2 NAD
+
2 x PIRUVAT
2 x ACETIL ~ CoA CITOPLASMA
Citrat Citrat Acetil-CoA
Oxalilacetat
Izocitrat
Succinat
Malat
Acizi grasi
GLICOGEN GLUCOZO-1- P GLUCOZO-6- P GLUCOZA
GALACTOZO-1- P
ATP
ADP
GALACTOZA
ATP
ADP
ATP
ADP
2(NAD
+
+ P
i
)
2(NADH + H
+
)
2 x 1,3-DIFOSFOGLICERAT
2 ADP
2 ATP
2 x 3-FOSFOGLICERAT
2 x 2-FOSFOGLICERAT
2 x 2-FOSFOENOLPIRUVAT
H
2
O
2 ADP
2 ATP
2 x PIRUVAT
2(NADH + H
+
)
2 x LACTAT
MITOCONDRIE
FRUCTOZO-6- P FRUCTOZA
ATP
ADP
FRUCTOZO 1,6-Di- P
(2 x G
3
P)
GLICERALDEHIDA-3- P DIHIDROXIACETON- P


Schema 2.2. Glicoliza

ATP consumat: 2 moli de ATP pe molecula de glucoz pentru sinteza fructozo-1,6-
difosfatului.
Deci bilanul glicolizei aerobe este de 38 moli de ATP pentru un mol de glucoz.
Dac glicoliza pornete de la glicogen atunci ctigul net este de 39 moli de ATP pe
molecula de glucoz.

2.2.1.2.Decarboxilarea oxidativ a piruvatului

Decarboxilarea oxidativ a piruvatului este o reacie ce face legtura ntre
glicoliza aerob i ciclul acizilor tricarboxilici:
27
CH
3
C
COOH
O
CH
3
CO ~ SCoA
Acid piruvic Acetil ~ CoA
NADH + H
+
NAD
+
CO
2
CoA~ SH


Acetil~CoA obinut n urma decarboxilrii piruvatului este un substrat al
ciclului ATC.
Piruvatdehidrogenaza- PDH- este un complex enzimatic localizat n matricea
mitocondrial care catalizeaz decarboxilarea oxidativ a acidului piruvic.
Orice defect genetic localizat n subunitile proteice ale PDH poate afecta activitatea
PDH, unele simptome fiind: acidoza lactic i deteriorarea neurologic.
n boala Beri-Beri concentraiile piruvatului i o-cetoglutaratului n snge sunt
mai mari dect normal iar activitatea piruvat i o-cetoglutarat dehidrogenazei este
diminuat
2.2.1.4.Intrarea galactozei n glicoliz
Lactoza este scindat hidrolitic sub aciunea lactazei la galactoz i glucoz.
Galactoza este convertit apoi n mai multe etape n timpul metabolizrii la glucozo-6-
fosfat.
Prima etap este reprezentat de fosforilarea galactozei la galactozo-1-fosfat:
ATP
ADP
O
CH
2
HO
OH
OH
OH
HO
O
CH
2
HO
OH
OH
O
HO
P
Galactoz Galactozo-1- P

n etapa a doua galactozo-1-fosfat primete gruparea uridil de la uridin difosfat-
glucoz (UDP-glucoz) sub aciunea UDP-glucozo-galactozo-1-fosfat-uridil
transferazei:
+
H
+
O
CH
2
OH
OH
O
HO
UDP
O H
Glucozo-1-
UDP-Glucoz
UDP-Galactoz
O
CH
2
HO
OH
OH
O
HO
O
CH
2
OH
OH
O
HO
O
O
CH
2
OH
OH
O
HO
O UDP H
Galactozo-1-
P
P
P
P

UDP-Galactoza se biosintetizeaz parial i prin reacia:
28
Galactozo-1-fosfat
UTP
PP
i
O
CH
2
HO
OH
OH
O
HO
O
CH
2
OH
OH
O
HO
UDP
O H
UDP-Galactoz
P


n etapa urmtoare, galactoza este epimerizat la glucoz la nivelul nucleozid-
difosfailor sub aciunea unei epimeraze specifice:
UDP-Glucoz
H
UDP-Galactoz
O
CH
2
HO
OH
OH
HO
O P O ~ P
O
-
O
O
O
-
O
CH
2
O
O OH
HN
N
O
O
H
O
CH
2
OH
OH
HO
O P O ~ P
O
-
O
O
O
-
O
CH
2
HO
O
O OH
HN
N
O
O

Echilibrul de mai sus este deplasat spre galactoz atunci cnd nevoile organismului
animal o impun (sinteza structurilor glicolipidice, glanda mamar n perioadele de
lactaie cnd se sintetizeaz lactoza etc.)
La concentraii mai mari, galactoza devine toxic pentru organism. Galactozemia
este o boal care se datoreaz lipsei enzimei galactozo-1-fosfat uridil transferaza,
metabolismul galactozei fiind blocat la galactozo-1-fosfat. Concentraia galactozei n
snge este crescut, fiind prezent totodat i n urin. Diagnosticarea n cazul
galactozemiei se face pe baza absenei din hematii a galactozo-1-fosfat uridil
transferazei iar tratamentul cuprinde obligatoriu eliminarea din diet a galactozei.
Stigmatele clinice ale bolii se datoreaz nu att absenei unor compui eseniali ct
acumulrii unor compui toxici cum ar fi galactitolul, ca urmare a reducerii
galactozei(schema 2.3.).
Acumularea galactitolului n cristalin sub aciunea unei reductaze este
semnificativ n cazul galactozemiei, ducnd la formarea cataractei.

29
Galactoz
O
CH
2
HO
OH
OH
OH
HO
H
2
C OH
C OH
CH HO
CH HO
C
CH
2
OH
OH H
H
Galactitol

Schema 2.3. Reducerea galactozei la galactitol
2.2.1.6. Reglarea glicemiei
Fosfofructokinaza (PFK)reprezint un element important de control al glicolizei,
fiind inhibat de citrat i de o concentraie mare de ATP i stimulat de AMP (care
semnaleaz o scdere energetic) i de fructozo-2,6-difosfat. Piruvat kinaza este activat
alosteric de fructozo 1,6-difosfat i inhibat de ATP i alanin. Controlul activitii
piruvatkinazei se face prin fosforilare reversibil, o glicemie sczut avnd ca efect
fosforilarea piruvatkinazei la nivelul ficatului cu consecine asupra scderii activitii
acestei enzime. Acumularea de glucozo-6-fosfat are loc atunci cnd fosfofructokinaza
este inactiv, o concentraie mrit de glucozo-6-fosfat inhibnd hexokinaza.
n condiii de nfometare, organismul mobilizeaz rezerva de glicogen din ficat
pentru a menine constant concentraia glucozei din snge. Glucozo-6-fosfataza este o
enzim prezent n ficat i rinichi, fiind implicat n conversia glucozo-6-fosfatului la
glucoz. De menionat c rezerva de glicogen din muchii scheletici nu contribuie la
meninerea constant a glicemiei deoarece lipsete glucozo-6-fosfataza din muchi.
n continuare sunt menionai civa hormoni care sunt implicai n reglarea
glicemiei.
Insulina stimuleaz glicogeneza i lipogeneza cu consecine asupra scderii
glicemiei. Insulina este implicat i n creterea permeabilitii celulelor pentru glucoz.
n diabet, deficiena n insulin are ca rezultat o hiperglicemie, esuturile avnd o
capacitate mai mic de metabolizare a glucozei. La polul opus se situeaz sinteza n
exces a insulinei de ctre insulele de celule tumorale care are ca i consecin instalarea
unei hipoglicemii.
Glucagonul stimuleaz glicogenoliza hepatic care duce n final la creterea
concentraiei glucozei n snge. La administrarea glucagonului nu s-au observat
modificri ale metabolismului glicogenului n muchi (de exemplu modificri ale
nivelului lactatului i piruvatului din snge).
Tiroxina stimuleaz i ea glicogenoliza hepatic stimulnd totodat absorbia
glucozei din intestin.
n condiii de stress are loc o cretere a concentraiei de adrenalin care
stimuleaz glicogenoliza hepatic mrind astfel concentraia glucozei din snge.
Hidrocortizonul (dar i ali 11-oxisteroizi secretai de corticosuprarenal)
stimuleaz gluconeogeneza cu consecine asupra creterii nivelului glucozei sanguine.
Din acest motiv hidrocortizonul este considerat ca un hormon diabetogen, fiind un
antagonist al insulinei.
n sindromul Cushing se constat o sintez mrit de steroizi care are la origine
tumoarea sau hiperplazia corticosuprarenalei ducnd la instalarea unei hiperglicemii.
30
n boala Addison, insuficiena corticosuprarenalei are ca i consecin o
hipoglicemie moderat.
Hormonul adrenocorticotrop (ACTH) i hormonul de cretere au ca efect
creterea concentraiei glucozei sanguine, fiind antagoniti ai insulinei.
2.3. Cile alternative de degradare a glucozei.Ciclul pentozo/hexozo-fosfailor
Calea pentozo/hexozo-fosfailor furnizeaz o surs de NADPH necesar unor
biosinteze reductive localizate n citoplasm cum ar fi biosinteza acizilor grai, a
colesterolului, hormonilor steroizi precum i hidroxilarea unor compui strini
organismului. NADPH-ul, cofactor al glutation-reductazei este implicat n reducerea
glutationului oxidat la glutation redus (tripeptid implicat n prevenirea peroxidrii
lipidice precum i a meninerii integritii enzimelor tiolice):
GSSG + NADPH + H
+
2GSH + NADP
+

ntr-o serie de esuturi cum ar fi ficatul, glanda mamar n lactaie,
corticosuprarenala, esutul adipos n care lipogeneza sau sinteza de hormoni steroizi
sunt intense se observ i o maximalizare a fluxului cii pentozo/hexozo-fosfailor.
Aceast cale de degradare a glucozei furnizeaz o surs de ribozo-5-fosfat pentru
biosinteza acizilor nucleici precum i o cale de utilizare a pentozelor inclusiv prin
convertirea lor la gliceraldehid-3-fosfat i fructozo-6-fosfat. Calea pentozo/hexozo-
fosfailor permite i interconversia glucidelor cu 3, 4, 5, 6 i 7 atomi de C prin reacii
neoxidative.
Desfurarea acestei ci de degradare a glucozei implic dou faze: a. una oxidativ n
care glucozo-6-fosfatul este convertit la pentozo-fosfai i b. pentozo-fosfaii
regenereaz glucozo-6-fosfatul n urma unor reacii de condensri i scindri aldolice.

a. Etapa oxidativ ncepe cu dehidrogenarea glucozo-6-fosfatului la acid 6-
fosfogluconic sub aciunea glucozo-6-fosfat dehidrogenazei. Intermediar se
formeaz 6-fosfogluconolactona, un ester intramolecular ntre gruparea carboxil
C
1
i grupul hidroxil C
5
, care este convertit la acidul corespunztor sub aciunea o-
lactonazei:

NADP
+
NADPH + H
+
O
CH
2
OH
OH
OH
O
O H
P
O
CH
2
OH
OH
O
O
O
H
P
H
2
C O
C OH
C OH
CH HO
C OH
COOH
P
H
H
H
H
2
O
Glucozo-6-fosfat 6-Fosfo-glucono-o-lactona Acid 6-fosfogluconic


Acidul 6-fosfogluconic este oxidat n continuare la acidul 3-ceto-6-fosfogluconic
sub aciunea 6-fosfogluconatdehidrogenazei NADP dependent. Acidul 3-ceto-6-
fosfogluconic este decarboxilat simultan la ribulozo-5-fosfat:


31
NADP
+
NADPH + H
+
H
2
C O
C OH
C OH
CH HO
C OH
COOH
H
H
H
P H
2
C O
C OH
C OH
C
C OH
COOH
H
H
H
O
P
CO
2
H
2
C O
C OH
C OH
C
C OH
O
P
H
H
H
2
Acid 6-fosfo-gluconic Acid 3-ceto-6-fosfogluconic Ribulozo-5-fosfat


Aa cum se observ i din reaciile de mai sus, conversia glucozo-6-fosfatului la
ribulozo-5-fosfat genereaz 2 molecule de NADPH.
Ribulozo-5-fosfat este izomerizat n ultima etap a fazei oxidative la ribozo-5-fosfat i
xilulozo-5-fosfat. Fosfopentozo-izomeraza este enzima care catalizeaz conversia la
ribozo-5-fosfat iar fosfopentozo-epimeraza pentru conversia la xilulozo-5-fosfat:
H
2
C O
C OH
C OH
C
C OH
O
P
H
H
H
2
Ribozo-5-fosfat
H
2
C O
C OH
CH
C
CH
2
OH
O
HO
P
H
Xilulozo-5-fosfat
H
H
2
C O
C OH
C OH
C
CHO
OH
P
H
H
Ribulozo-5-fosfat

Multe esuturi necesit NADPH pentru desfurarea biosintezelor reductive mai
mult dect utilizarea ribozo-5-fosfatului pentru ncorporarea n acizi nucleici i
nucleotide (cum ar fi n celulele cu lipogenez intens). n acest caz pentozele obinute
n exces sunt reconvertite la hexoze, de exemplu ribozo-5-fosfatul este convertit la
fructozo-6-fosfat (i gliceraldehid-3-fosfat) sub aciunea unor transcetolaze i
transaldolaze.
b. Conversia pentozelor la hexoze
Fragmentul glicoaldehidic din xilulozo-5-fosfat este transferat n prezena unei
transcetolaze pe ribozo-5-fosfat cu formarea sedoheptulozo-7-fosfatului i
gliceraldehid-3-fosfatului:
+ +
Sedoheptulozo-7-fosfat Gliceraldehid-3-fosfat
H
2
C O
C OH)
3
CH HO
C
C
O
OH
(H
H
2
H
Xilulozo-5-fosfat Ribozo-5-fosfat
P H
2
C O
C OH
CH
C
CH
2
OH
O
HO
H
H
H
P
H
2
C O
C OH
C OH
C
CHO
OH
P
H
2
C O
C OH
CHO
H
P

32
Gliceraldehid-3-fosfatul este un intermediar comun n calea pentozo-fosfailor i
glicoliz.
Fragmentul dihidroxiacetonic din sedoheptulozo-7-fosfat este transferat printr-o
reacie de transaldolizare pe gliceraldehid-3-fosfat cu formarea fructozo-6-fosfatului
(intermediar comun al glicolizei i cii pentozo-fosfailor) i eritrozo-4-fosfat:
+
+
Sedoheptulozo-7-fosfat Gliceraldehid-3-fosfat Fructozo-6-fosfat Eritrozo-4-fosfat
H
2
C O
C OH
C OH
CH HO
C O
C OH
H
H
2
H
H
2
C O
C OH)
3
CH HO
C
C
O
OH
(H
H
2
P P
H
2
C O
C OH
CHO
H
P
H
2
C O
C OH
C OH
CHO
H
H
P

O nou molecul de xilulozo-5-fosfat cedeaz un rest glicolaldehidic unei
molecule de eritrozo-4-fosfat cnd rezult fructozo-6-fosfat i gliceraldehid-3-fosfat
(intermediari ai glicolizei):
+
+
H
2
C O
C OH
C OH
CH HO
C O
C OH
H
H
2
H
H
Xilulozo-5-fosfat Eritrozo-4-fosfat Fructozo-6-fosfat Gliceraldehid-3-fosfat
P H
2
C O
C OH
CH
C
CH
2
OH
O
HO
P
H
2
C O
C OH
CHO
H
P
H
2
C O
C OH
C OH
CHO
H
H
P

Suma acestor reacii este:

Deci rezultatul net al reaciilor incluse n conversia pentozelor la hexoze este
sinteza a dou hexoze i a unei trioze pornind de la 3 pentoze. Aceste reacii sunt
catalizate de transcetolaze implicate n transferul unei uniti de 2 atomi de carbon i
respectiv transaldolaze implicate n transferul unei uniti de 3 atomi de carbon.
n continuare fructozo-6-fosfatul este izomerizat la glucozo-6-fosfat care devine
substrat pentru faza oxidativ a cii pentozo-fosfailor. Gliceraldehida-3-fosfat se poate
izomeriza la dihidroxiaceton-fosfat iar mpreun formeaz fructozo-1,6-difosfatul.
Acesta reprezint un substrat al fructozo-1,6-difosfatazei astfel nct n final din 6
molecule de glucozo-6-fosfat care intr n calea pentozo-fosfailor (ntr-un bilan care
cuprinde reaciile oxidative i neoxidative) se sintetizeaz 5 molecule de fructozo-6-
fosfat. Acestea reprezint la rndul lor un substrat pentru gluconeogenez i se formeaz
5 molecule de glucozo-6-fosfat.
Bilanul net al cii pentozo-fosfailor este:
Glucozo-6-fosfat + 12 NADP
+
+ 6 H
2
O 6 CO
2
+ 12 NADPH + H
+
+ P
i

Pornind de la un mol de glucozo-6-fosfat se obin prin ciclul pentozo/hexozo-
fosfailor 36 moli de ATP dar rolul important al acestei ci rezid n furnizarea NADPH
+ H
+
biosintezelor reductive de tipul celor menionate mai sus.
Ribozo-5-fosfat+2 xilulozo-5-fosfat
2fructozo-6-fosfat+gliceraldhid-3-fosfat
33
O privire de ansamblu asupra cii pentozo/hexozo-fosfailor este redat n
schema 2.4.
Calea pentozo/hexozo-fosfailor depinde de nevoile de ribozo-5-fosfat, ATP i
NADPH .
Fructozo-6- P
Xilulozo-5- P
Gliceraldehida-3- P
Glucozo-6-
P
NADP
+
NADPH + H
+
6-Fosfo-
gluconolactona
6-Fosfo-
gluconat
H
2
O
Faza oxidativa
Ribulozo-5- P
Conversia
pentozelor la
hexoze
Ribozo-5- P
Eritrozo-4- P
Sedoheptulozo-7- P
Xilulozo-5- P
Gliceraldehida-3- P
Fructozo-6- P

Schema 2.4. Calea pentozo-hexozofosfailor (faza oxidativ i conversia pentozelor
la hexoze)
2.4. Catabolizarea glucozei pe calea glucuronatului
Calea acidului uronic furnizeaz glucuronat activ sub aciunea unui echipament enzimatic localizat n hepatocite. Prima etap este reprezentat de
convertirea glucozo-1-fosfatului la uridin-difosfatglucoz (UDP-glucoz) sub aciunea UDP-glucozo-pirofosforilazei:

UDP-Glucoz
UTP +
H
+ PP
i
Glucozo-1-fosfat
H
O
CH
2
OH
OH
O
HO
O
O
CH
2
OH
OH
HO
O P O ~ P
O
-
O
O
O
-
O
CH
2
O
O
O OH
N
NH
O
O
P
H


Calea acidului uronic este o surs de UDP-glucoz pentru sinteza di- i poliglucidelor incluznd aici i glicogenul. n prezena unei dehidrogenaze
NAD-dependente, UDP-glucoza este oxidat la UDP-glucuronat:

34
UDP Glucoza + 2 NAD
+
+ H
2
O
-
OO
+ 2 NADH + 2 H
+
UDP- Glucuronat
H
O
C
OH
OH
O P O ~ P
O
-
O
O
O
-
O
CH
2
HO
O
O OH
N
NH
O
O


UDP-Glucuronatul este o surs de glucuronat activ pentru sinteza glucuronidelor
obinute prin conjugarea (printr-o legtur glicozidic) cu ali compui de natur exo-
sau endogen din clasa acizilor carboxilici, fenolilor etc., reacii catalizate de glucuronil
transferaze cu formarea de glucuronide:

+ RCOOH
UDP
O
COO
-
OH
OH
O UDP O H
O
COO
-
OH
OH
O
O C R
O
H
UDP-Glucuronat Glucuronid



Sinteza glucuronidelor reprezint o form de detoxifiere a organismului, multe
medicamente de exemplu fiind eliminate din organism sub aceast form. Hormonii
steroizi sau bilirubina pot fi convertii la compui solubili prin conjugarea cu UDP-
glucuronat i eliminai prin bil sau urin.UDP-glucuronatul particip la biosinteza
heparinei i a condroitinsulfatului.
Cnd necesitile organismului animal sunt satisfcute n UDP-glucuronat, acesta
este convertit n mai multe etape la xiluloz care poate intra n calea pentozo/hexozo-
fosfailor. Aceast cale de metabolizare ncepe cu hidroliza UDP-glucuronatului la
acidul D-glucuronic care este redus sub aciunea unei hidrogenaze NADPH dependente
la acid gulonic.n continuare acidul L-gulonic este oxidat sub aciunea L-gulonat-
dehidrogenazei NAD
+
dependente la acid 3 ceto-gulonic care prin decarboxilare
formeaz L-xiluloz (a se vedea schema 2.5.).

35
H
2
O UDP
Acid D-glucuronic
NADPH + H
+
NADP
+
sau
H
2
C OH
CH HO
C OH
CH HO
CH HO
COOH
H
Acid L-gulonic
HC OH
C
COOH
OH
CH HO
C OH
CHO
H
H
HC OH
C
COOH
OH
CH HO
C OH
CH
2
OH
H
H
UDP
_
glucuronat

H
2
C OH
CH HO
C OH
CH HO
CH HO
COOH
H
NAD
+
NADH + H
+
H
2
C OH
CH HO
C OH
C
CH HO
COOH
O
H
CO
2
H
2
C OH
CH
C OH
C
C
HO
O
OH
H
H
2
Acid L-gulonic Acid 3-ceto-L-gulonic L-xiluloz

Schema 2.5. Conversia UDP-glucuronatului la acid L-gulonic, respectiv L-xiluloz.
L-xiluloza nu este un substrat pentru calea pentozo/hexozo-fosfailor, de aceea el
este convertit la izomerul su natural, D-xiluloza, avnd ca intermediar xilitolul:
H
2
C OH
CH
C OH
C
C
HO
O
OH
H
H
2
L-xiluloz
H
2
C OH
CH
C OH
CH
C
HO
OH
HO
H
H
2
Xilitol
NADP
+
NADPH + H
+
NAD
+
NADH + H
+
H
H
2
C OH
C
CH
C
C
O
OH
OH
HO
H
2
D-xiluloz


La toate mamiferele cu excepia omului, maimuelor antropoide i cobaiului,
acidul L-gulonic poate fi convertit la acid ascorbic. Prima etap n aceast conversie
este formarea gulonolactonei care este oxidat ntr-o etap ulterioar la 2-ceto-L-
gulonolacton sub aciunea gulonolacton-oxidazei:
36

H
2
C OH
CH HO
C OH
CH HO
CH HO
COOH
H
Acid L-gulonic
H
2
O
NAD
+
NADH + H
+
H
2
C OH
CH HO
C
CH
CH HO
C
HO
O
O
H
L-Gulonolacton
H
2
C OH
CH HO
C
CH
C
C
HO
O
O
O
H
2-Ceto-
L-Gulonolacton

2-Ceto-L-gulonolacton este izomerizat la acidul ascorbic. Lipsa genetic a
gulonolacton-oxidazei face ca unele mamifere s fie incapabile s sintetizeze acid
ascorbic i le fac dependente de aportul exogen n aceast vitamin:
H
2
C OH
CH HO
C
CH
C
C
HO
O
O
O
H
2-Ceto-
L-Gulonolacton
H
2
C OH
CH HO
C
C
C HO
C
HO
O
O
H
Acid L-ascorbic


O privire de ansamblu asupra catabolizrii glucozei pe calea acidului glucuronic
este redat n schema 2.6-mai jos !

2.5. Gluconeogeneza

Biosinteza glucozei din compui neglucidici (acidul lactic, glicerol, aminoacizi)
se numete gluconeogenez. Sistemul nervos central, muchiul alb n contracie,
hematiile solicit permanent glucoz (esuturi glucodependente) iar n condiii de
inaniie sau regim alimentar bogat n lipide i proteine, glucoza este sintetizat prin
gluconeogenez.
Gluconeogeneza utilizeaz ca substrate acidul lactic obinut n urma glicolizei i
respectiv glicerolul obinut din metabolismul lipidic n timpul unui exerciiu fizic
ndelungat n care catecolaminele sunt implicate n mobilizarea glicogenului din ficat i
a lipidelor din esutul adipos. Gluconeogeneza din rinichi permite excreia unui numr
crescut de protoni n condiiile unei acidoze metabolice.

37
UDP-Glucoz
UDP-Glucuronat UDP-Glucoz
Glucozo-1- P
Glucozo-1- P
Glucozo-6- P
Xilulozo-5- P
D-xiluloz
glicoproteine
glucuronide
D-Glucuronat
L-Gulonat
L-Gulonolacton L-xiluloz
Xilitol
untul
pentozofosfailor
2-Ceto-L-gulonolacton
Vitamina C

Schema 2.6. Calea acidului glucuronic

catecolaminele sunt implicate n mobilizarea glicogenului din ficat i a lipidelor din
esutul adipos. Gluconeogeneza din rinichi permite excreia unui numr crescut de
protoni n condiiile unei acidoze metabolice.
Sediul gluconeogenezei este ficatul (responsabil de 85-90% din glucoza sintetizat) i cortexul renal dar creierul i muchiul sunt i ele capabile de
gluconeogenez ns exclusiv pentru nevoile proprii ntruct le lipsete glucozo-6-fosfataza. Gluconeogeneza din ficat i rinichi este implicat n
meninerea n limite fiziologice a glicemiei.
Gluconeogeneza decurge n general prin parcurgerea n sens invers a etapelor
glicolizei cu excepia ctorva reacii catalizate de enzime unidirecionale care sunt
specifice gluconeogenezei i anume: fructozo-1,6-difosfataza, fosfoenolpiruvat
carboxikinaza, piruvat carboxiligaza i glucozo-6-fosfataza.
Parcurgerea n sens invers a glicolizei este dezavantajoas din punct de vedere
energetic ndeosebi pentru reaciile catalizate de urmtoarele kinaze: piruvat
kinaza,fosfofructo-1-kinaza, hexokinaza.:



Gluconeogeneza prezint reacii specifice prin care se evit dezavantajele din
punct de vedere energetic (reacii cu AG
0
foarte pozitiv) asociate cu parcurgerea n sens
invers a glicolizei i anume:
Glucoza+ATP Glucozo-6-fosfat
Fructozo-6-fosfat+ATP
hexokinaza
fructozo-1,6-difosfat+ATP
fosfofructo-
kinaza
Fosfoenolpiruvat+ADP piruvat+ATP
piruvat-
kinaza
+ADP
38
a. carboxilarea piruvatului la oxalilacetat sub aciunea piruvat carboxiligazei cnd se
consum o molecul de ATP:
CH
3
-CO-COOH + CO
2
+ ATP + H
2
O HOOC-CH
2
-CO-COOH + ADP + P
i
+ 2H
+

Acid piruvic Acid oxalilacetic
b. decarboxilarea oxalilacetatului urmat de fosforilare prin care se obine
fosfoenolpiruvatul sub aciunea fosfoenolpiruvatcarboxikinazei i cu cheltuiala
unei molecule de GTP:
HOOC CH
2
CO COOH + GTP C
CH
2
COH
O ~ P
+ GDP + CO
2
Acid oxalilacetic Fosfoenolpiruvat


Piruvatcarboxiligaza are ca grupare prostetic biotina de care este ataat printr-un
lan flexibil, asemntor cu cel din complexul piruvatdehidrogenaza.
Piruvatcarboxiligaza necesit ioni de Mg
2+
i Mn
2+
iar reacia de carboxilare decurge n
dou etape:
Biotin-enzima + ATP +
-
3
HCO CO
2
~ biotin-enzima + ADP + P
i

CO
2
~ biotin-enzima + CH
3
CO COOH biotin-enzima + HOOC CH
2
CO COOH
Acid piruvic Acid oxalilacetic

Procesul descris mai sus decurge intramitocondrial iar piruvatcarboxiligaza
accept ca efector alosteric pozitiv acetil~CoA. n citoplasm are loc conversia
oxalilacetatului la fosfoenopiruvat sub aciunea fosfoenolpiruvatcarboxikinazei.
Trecerea membranei mitocondriale (impermeabil pentru oxalilacetat) se face sub form
de malat. Reducerea oxalilacetatului la malat se realizeaz n mitocondrie sub aciunea
malatdehidrogenazei dependente de NADH (provenit din catabolizarea acizilor grai).
Odat ajuns n citoplasm, malatul este convertit din nou la oxalilacetat sub aciunea
unei izoenzime a malatdehidrogenazei dependente de NAD
+
. n citoplasm are loc
totodat i conversia oxalilacetatului la fosfoenolpiruvat (reacie care implic simultan o
decarboxilare i fosforilare). O privire de ansamblu asupra formrii oxalilacetatului n
mitocondrie este redat n schema 2.7. :

39
CH
3
CO COOH
CH
3
CO COOH
HOOC CH
2
CO COOH
HOOC CH
2
CH COOH
OH
HOOC CH
2
CH COOH
OH
HOOC CH
2
C COOH
O
MITOCONDRIE
Piruvat
Piruvat
Oxalilacetat
Oxalilacetat
Malat
Malat
CITOPLASM

Schema 2.7.Formarea oxalilacetatului n mitocondrie
Tot n citoplasm are loc convertirea fosfoenolpiruvatului la fructozo-1,6-difosfat
pe parcursul mai multor etape sub aciunea unor enzime bidirecionale (comune
glicolizei i glicogeneogenezei):
CH
2
C O ~
COOH
HC
C
O
COOH
OH H
2
HC OH
C
COOH
O H
2
HC OH
C
C
O
O O
H
2
Fosfoenolpiruvat 2-Fosfoglicerat 3-Fosfoglicerat 1,3-Difosfoglicerat
H
2
C O
C O
C OH H
2
Aldehida 3-
fosfoglicerica
Dihidroxiaceton
fosfat
+
Fructozo-1,6-difosfat
P P
P P
P
H
2
C O
C OH
CHO
H
P
O
OH
CH
2
O
OH
CH
2
O
O
H
P
P
P
-

c. Convertirea fructozo-1,6-difosfatului la fructozo-6-fosfat se face sub aciunea unei
enzime specifice, fructozo-1,6-difosfataza, ntr-o reacie ireversibil, exergonic:
40
H
2
O
P
i
O
OH
CH
2
O
OH
CH
2
O
O
H
P
P
Fructozo-1,6-difosfat
O
OH
CH
2
O
OH
CH
2
OH
O
H
P
Fructozo-6-fosfat

Fructozo-1,6-difosfatul i fructozo-2,6-difosfatul sunt inhibitori ai fructozo-1,6-
difosfatazei, enzim alosteric, n timp ce ATP-ul o stimuleaz.
d. Glucozo-6-fosfataza este o alt enzim unidirecional care catalizeaz hidroliza
glucozo-6-fosfatului la glucoz. Aceast enzim este localizat n ficat ceea ce
permite furnizarea glucozei esuturilor extrahepatice pentru necesiti energetice
sau de sintez:

Glucozo-6-fosfat Glucoz
H
2
O
P
i
O
CH
2
O
OH
OH
OH
O
H
P
O
CH
2
O
OH
OH
OH
HO
H

Sediul acestei reacii este lumenul reticulului endoplasmatic dup care glucoza i
fosfatul anorganic sunt transportate napoi n citosol.
Biosinteza glucozei nu este posibil n muchi i creier care nu posed glucozo-6-
fosfataz.
Calculul stoechiometric al gluconeogenezei este:
2CH
3
-CO-COOH + 4ATP + 2GTP + 2NADH + 6H
2
O Glucoza + 4ADP + 2GDP +
2NAD
+
+ 6P
i
+ 2H
+

AG
0
=-9Kcal/mol
Aminoacizii glucoformatori (toi, cu excepia leucinei) sunt catabolizai la
substrate ale ciclului ATC care pot fi convertii la oxalilacetat sau piruvat, substrate ale
gluconeogenezei. Astfel, izoleucina i metionina sunt catabolizate la propionil~CoA,
convertit mai departe la succinil~CoA i apoi oxalilacetat:
CH
3
CH
2
CO ~ SCoA
ATP
AMP + PP
i
CO
2
HC
COOH
CO ~ SCoA
CH
3
HOOC CH
2
CH
2
CO ~ SCoA
izomeraz
Propionil~CoA Metilmalonil~CoA
Succinil~CoA

Izomeraza care catalizeaz conversia metilmalonil~CoA la succinil~CoA are ca
i coenzim vitamina B
12
. Succinil~CoA ajunge pe calea ciclului ATC la oxalilacetat.
41
Acidul propionic este un produs de catabolizare rumenal a glucozei la rumegtoare
care poate fi convertit la oxalilacetat urmnd calea prezentat mai sus.
Ali aminoacizi cum ar fi histidina, arginina, prolina, glutamina, glutamatul pot fi
catabolizai de o-cetoglutarat care este convertit la oxalilacetat prin parcurgerea ciclului
ATC.
Fumaratul, produsul de catabolizare a fenilalaninei i tirozinei, este convertit la
oxalilacetat tot prin parcurgerea ciclului ATC.
Aspartatul este convertit direct la oxalilacetat prin transaminare. Alanina,
glicina i serina sunt convertii la piruvat prin transaminare.
n schema 2.8. se red legtura dintre aminoacizi i ciclul Krebs.
Un loc aparte i revine o-alaninei care are cea mai mare vitez de convertire la
glucoz dintre toi aminoacizii. o-Alanina din muchi provine din transaminarea
piruvatului obinut din glicoliz (pornind de la glucoza circulant sau glicogen mus-
Oxalilacetat
Citrat
o-Cetoglutarat
Succinil-CoA
Fumarat
Fen
Tir
Piruvat
Acetil~CoA
Cis
Ala
Ser
Gli
Leu
Ile
Trp
Glu
Arg
Pro
His
Propionil~CoA
Val
Ile Met Tre
Fen
Tir
Asp
Asn

Schema 2.8. Intrarea aminoacizilor n ciclul Krebs
cular) sau din degradarea unor aminoacizi. Transaminarea piruvatului n muchi se
realizeaz n primul rnd pe seama unor aminoacizi cu caten ramificat iar o-alanina
este apoi transportat prin sistemul sanguin la ficat unde este convertit din nou prin
transaminare la piruvat, substrat al gluconeogenezei. O privire de ansamblu asupra
ciclului alanin-glucoz (ciclul Felig-Malette) este redat n schema 2.9. :
42
Ficat
Glucoz
Piruvat
Alanin
Glucoz Glucoz
Piruvat
Alanin Alanin
Snge
Creier
Muchi
Proteine
Proteoliz

Schema 2.9.Ciclul alanin-glucoz (Felig- Malette)
o-Alanina este un inhibitor al piruvatkinazei i stimuleaz astfel accesul unor
substrate (precursori ai glucozei) la gluconeogenez prin blocarea reaciei
fosfoenolpiruvat piruvat.
Lactatul este de asemenea un substrat al gluconeogenezei hepatice, sursa
major fiind glicoliza anaerob din muchi dar i din eritrocite care, n lipsa
mitocondriilor, sunt dependente energetic de glicoliz. n ficat lactatul este convertit
la piruvat sub aciunea lactat-dehidrogenazei. Piruvatul este convertit prin
gluconeogenez la glucoz care poate fi trimis muchiului n contracie. Secvena de
reacii descris mai sus este considerat drept ciclul lactat-glucoz (ciclul Cori)
reprezentat n schema 2.10.:
Snge
Glucoz
Piruvat
Lactat
Muchi
Glucoz
Lactat
Ficat
Glucoz
Piruvat
Lactat


Schema 2.10. Ciclul lactat-glucoz (ciclul Cori)
n urma scindrii hidrolitice a lipidelor la nivelul esutului adipos, hepatic i
muscular rezult glicerolul care este un substrat al gluconeogenezei n ficat:
H
2
C OH
C OH
C OH
H
H
2
NAD
+
NADH + H
+
H
2
C OH
C O
C O H
2
Glicerol Glicerol-3-fosfat Dihidroxiaceton-fosfat
ATP
ADP
H
2
C OH
C OH
C O
H
H
2
P
P

Glicerolul este activat n prealabil la glicerol-3-fosfat care este convertit la dihidroxiacetonfosfat sub aciunea unei dehidrogenaze specifice.
Dihidroxiacetonfosfatul se poate izomeriza la aldehida 3-fosfogliceric i mpreun formeaz fructozo-1,6-difosfatul.
n schema 2.11. se red calea gluconeogenezei.

43
Glucozo-6-
P
Glucoza
Glucozo-1- P
Alanina Piruvat Oxalilacetat
CO
2
GTP
Fosfoenolpiruvat
2-Fosfoglicerat
3-Fosfoglicerat
1,3-Difosfoglicerat
ATP
Gliceraldehid-3- P
NADH
Dihidroxi-
acetonfosfat
Glicerol-3- P
Glicerol
Lactat
Fructoza
Fructozo-1,6-di- P
Fructozo-6-
P Galactoza

Schema 2.11. Calea gluconeogenezei


2.6.Metabolismul glicogenului
2.6.1.Catabolismul glicogenului (glicogenoliza)
Degradarea glicogenului-glucan cu structur ramificat care reprezint forma
de depozitare a excesului de glucide n organisme animale are loc n ficat i muchi
sub aciunea unui echipament enzimatic specializat i presupune desfacerea
legturilor 1,4- i 1,6-glicozidice. Clivarea ncepe de la captul nereductor al
lanului poliglucidic, cu formarea glucozo-1-fosfatului. Calea de degradare a
glicogenului a fost elucidat de studiile lui Carl i Gerty Cori. Cei doi cercettori au
izolat enzima care catalizeaz aceast reacie, glicogen-fosforilaza, care este o 1,4o-
44
glucan-fosfat-glucoziltransferaz, un dimer care are drept grupare prostetic
piridoxalfosfatul.
Glicogenfosforilaza are o aciune limitat asupra glicogenului, deoarece nu este
capabil s catalizeze scindarea fosforolitic a legturilor 1,6-glicozidice. Aciunea
glicogenfosforilazei nceteaz cnd ntlnete un reziduu la o distan de patru resturi
glucozil fa de o ramificaie 1,6.
Clivarea fosforolitic a glicogenului prezint avantaje fa de clivarea
hidrolitic deoarece rezult o glucid fosforilat care intr fr cheltuial de ATP n
fluxul glicolitic. n plus, clivarea fosforolitic a glicogenului n esutul muscular nu
permite prsirea celulei de ctre glucozo-1-fosfat (n form ionizat) , spre deosebire
de clivarea hidrolitic n care glucoza liber poate difuza n afara celulei.
O transferaz (amilo-1,4-1,6-glucantransferaza) este implicat n transferul
unui bloc de 3 resturi glucozil de pe un lan pe altul n aa fel nct n regiunea de
ramificaie poate aciona aceeai enzim (enzima de debranare cu activitate
bifuncional) care scindeaz hidrolitic legtura o1,6-glicozidic i rezult glucoz
liber. Deci transferaza i 1,6-glucozidaza (enzima de debranare) convertesc
structura ramificat a glicogenului ntr-o structur liniar care este scindat
fosforolitic mai departe de glicogen fosforilaz pn la ntlnirea unui nou punct de
ramificaie. Un singur lan polipeptidic de 160kd conine dou centre active
responsabile pentru activitatea transferazic i respectiv 1,6-glucozidazic. n
continuare glucozo-1-fosfatul este convertit sub aciunea fosfoglucomutazei la
glucozo-6-fosfat. Centrul catalitic al enzimei are un rest de serin fosforilat iar
glucozo 1,6-difosfatul este un intermediar al acestei convertiri.
Glucozo-6-fosfataza (localizat n membrana reticului endoplasmatic) este o
enzim hidrolitic ce permite ficatului s elibereze glucoz n snge contribuind astfel
la meninerea relativ constant a glicemiei. Glucozo-6-fosfataza mai este prezent n
intestin i rinichi. Lipsa acestei enzime n muchi i creier face ca glucozo-6-fosfatul
s fie reinut i utilizat exclusiv pentru generarea de energie sub form de ATP numai
pentru aceste organe.
Glicogen fosforilaza este enzima cheie n glicogenoliz fiind supus unui
control metabolic complex care include reglarea covalent i alosteric. Ca inhibitori
alosterici ai glicogen fosforilazei se comport ATP-ul (n concentraii mari) i
glucozo-6-fosfatul n timp ce AMP-ul este un activator al acestei enzime.
Glicogen fosforilaza se gsete n esuturi n dou forme: 1. forma activ este
forma fosforilat a enzimei denumit fosforilaza a i 2. fosforilaza b este forma
inactiv, defosforilat a enzimei . Fosforilazele a i b sunt interconvertibile prin
aciunea a dou enzime: glicogen fosforilazkinaza i glicogen fosforilaz-fosfataza:


Glicogen +P
i Glucozo-1-fosfat +Glicogen
n reziduuri
(n-1reziduuri)
(
)
45
glicogen fosforilaz kinaza
glicogen fosforilaz fosfataza
Fosforilaza b
(inactiv)
Fosforilaza a
(activ)



Adrenalina i glucagonul controleaz alturi de insulin glicogenoliza.
Adrenalina eliberat din medulara suprarenal sub aciunea activitii musculare,
stimuleaz glicogenoliza din esutul muscular i mai puin pe cea din ficat, care
rspunde mai bine la aciunea glucagonului, hormon cu structur polipeptidic
secretat de celulele o ale pancreasului. Aciunea glucagonului i adrenalinei este
mediat de AMP
C
, mesager secundar care joac un rol cheie n controlul proceselor
biologice. Adenilat ciclaza catalizeaz sinteza AMP ciclic, care se formeaz ca
rspuns la aciunea adrenalinei i glucagonului iar prin reaciile n cascad AMP
C
este
legat de enzimele cheie ale glicogenolizei. Creterea concentraiei intracelulare de
AMP ciclic n esutul muscular de exemplu stimuleaz activitatea unei proteinkinaze
AMP
C
dependente care va efectua fosforilarea glicogen fosforilazei. Concentraii de
ordinul 10
-9
M de glucagon sau adrenalin determin o amplificare a glicogenolizei
(prin reacii n cascad) de 15 ordine de mrime. Reglarea activitii glicogen
fosforilazei n muchi este redat n schema 2.12.:

P
i
+
Adenilat
ciclaza
(inactiv)
Adenilat
ciclaza
(activ)
Adrenalin
Glucagon
ATP
AMP
c
Proteinkinaza
(inactiv)
Proteinkinaza
(activ)
5-AMP
Fosfodiesteraza
Glicogen
fosforilaza b
(inactiv)
Glicogen
fosforilaza a
(activ)
Glicogen
n Glicogen
n-1
Glucozo-1- P


Schema 2.12. Reglarea activitii glicogenfosforilazei n muchi
46

Adrenalina interacioneaz la nivelul celulelor hepatice att cu |-receptori
membranari ct i cu receptori adrenergici de tip o
1
. Interaciunea cu acetia din urm
este responsabil de formarea a doi mesageri secundari: diacilglicerolul (DAG) i
inozitoltrifosfatul (IP
3
). Una din subunitile componente () ale glicogen
fosforilazkinazei prezint o afinitate mare pentru calciu pe care-l leag, ceea ce are ca
rezultat activarea excepional a fosforilazkinazei cu efecte de maximalizare a
glicogenolizei hepatice. Calciul din reticulul endoplasmatic este scos sub aciunea IP
3

ducnd la creterea concentraiei lui n citosol.
Glicogenoliza muscular este i ea dependent de creterea concentraiei
calciului citosolic dar n acest caz acetilcolina este responsabil de acest efect.
Acetilcolina determin mobilizarea calciului din reticulul endoplasmatic printr-
un mecanism similar cu cel al adrenalinei n esutul hepatic (interaciune cu receptori
de tip o
1
i formare de IP
3
) i deci stimularea glicogenolizei. n acest fel se asigur o
sincronizare a contraciei musculare i a glicogenolizei prin intermediul aceluiai
stimul (Ca
2+
). Exacerbarea glicogenolizei duce la cantiti apreciabile de glucozo-6-
fosfat care vor genera ATP prin parcurgerea etapelor glicolizei. Creterea
concentraiei fructozo-2,6-difosfatului datorit adrenalinei este responsabil de
intrarea glucozo-6-fosfatului n glicoliz prin activarea unei enzime cheie din aceast
cale metabolic, fosfofructo-1-kinaza.
2.6.2. Biosinteza glicogenului (glicogenogeneza)
n biosinteza glicogenului donorul de glucoz este UDP-glucoza care este o
form activat a glucozei:
Glucozo-1-fosfat + UTP UDP-glucoz + PP
i

Reacia este catalizat de UDP-glucozo-pirofosforilaza iar glucozo-1-fosfatul
provine din glucozo-6-fosfat sub aciunea fosfoglucomutazei. Conversia glucozo-1-
fosfatului la UDP-glucoz este reversibil dar hidroliza pirofosfatului anorganic (PP
i
)
sub aciunea pirofosfatazelor celulare o face practic ireversibil.
Uridin difosfat glucoza transfer un rest glucozil pe un lan de glicogen
existent care servete ca iniiator al procesului (primer glicogenic), ncepnd de la
captul nereductor al oligoglucidului sub aciunea glicogen sintetazei.
Glicogen sintetaza catalizeaz reacia de sintez prin care dou uniti sunt
unite printr-o legtur o 1,4 glicozidic fr aport energetic direct sub form de ATP
sau alt nucleozid-trifosfat. Ramificarea glicogenului presupune implicarea unei alte
enzime amilo-1,4-1,6-transglicozidaza (enzima de ramificare sau de branare) prin
care glicogenul liniar este convertit la un polimer ramificat. Pentru formarea
acestor ramificaii, un numr de 7 resturi glucozil ale lanurilor terminale sunt
transferate la hidroxilul C
6
al unui rest de glucoz din aceeai sau dintr-o alt
ramificaie. Ramificarea glicogenului este important deoarece


47
+
UDP-Glucoz Primer glicogenic
Glicogen liniar
O
CH
2
O
OH
OH
O
HO
UDP
H
UDP
O
CH
2
OH
OH
HO
O
CH
2
O
OH
OH
HO
O
O
H
O
CH
2
OH
OH
HO
O
CH
2
O
OH
OH
HO
O
O
H
O
CH
2
OH
OH
HO
O


permite accesul enzimelor glicogen fosforilaza i glicogen sintetaza la un mare numr
de resturi glucozil terminale. n plus, aceast ramificare mrete gradul de solubilitate al
glicogenului. O privire de ansamblu asupra glicogenezei i glicogenolizei este redat n
schema 2.13.
Glicogen
"ramificat"
UDPG
Glicogen
"liniar"
P
i
UTP
PP
i
G-6- P
G-1-
P
Glc
1
2
3
4 5
6
7
8

Schema 2.13. Glicogeneza i glicogenoliza(1. Glicogenfosforilaza 2. Enzima
de deramificare 3. Fosfoglucomutaza 4. Glucokinaz sau hexokinaz 5. Glucozo-
6-fosfataza 6. UDPG pirofosforilaza 7. Glicogen-sintetaza 8. Enzima de
ramificare)

48
Reglarea glicogenogenezei.Glicogen-sintetaza se prezint sub dou forme
interconvertibile i reprezint enzima limitant de vitez a glicogenogenezei:

glicogen sintetaz kinaza
glicogen sintetaz fosfataza
Glicogen sintetaza
(forma fosfo inactiv)
Glicogen sintetaza
(forma defosfo activ)


Glicogensintetaz kinaza este asemntoare cu proteinkinaza AMP
C
dependent
menionat la reglarea glicogenolizei iar glicogensintetaz-fosforilaza care este
responsabil de activarea glicogen sintetazei este identic cu glicogen fosforilaz
fosfataza.
Glucagonul reduce glicogenogeneza prin activarea adenilatciclazei care
produce o cretere a concentraiei AMP ciclic (mesager secundar). Acesta la rndul
lui activeaz protein kinaza AMP
C
dependent. Reglarea activitii glicogen sintetazei
n ficat este prezentat n schema 2.14.
Adenilat
ciclaza
(inactiv)
Adenilat
ciclaza
(activ)
Adrenalina
Glucagon
ATP
AMP
c
Proteinkinaza
(inactiv)
Proteinkinaza
(activ)
5-AMP
Fosfodiesteraza
Glicogen
sintetaza
(inactiv)
Glicogen
sintetaza
(activ)
UDP-Glucoz

Glicogen



Schema 2.14. Reglarea activitii glicogensintetazei n ficat

49
O concentraie sczut de AMP ciclic duce la stimularea glicogenogenezei i la
diminuarea glicogenolizei.
Dar glicogen-sintetaza este receptiv nu numai la aciunea proteinkinazei A
(AMP
C
dependent) dar i a altor kinaze cum ar fi proteinkinaza C activat sinergic
de DAG i Ca
2+
. n condiiile unei glicogenolize active, inhibarea glicogenogenezei
este realizat prin fosforilarea glicogen sintetazei de ctre glicogen fosforilaz kinaza
superactiv, cu afinitate mare pentru Ca
2+
.
Activarea glicogenolizei care coincide cu inactivarea glicogenogenezei este
redat n schema 2.15. :
Fosforilazkinaza b Fosforilazkinaza a
Proteinkinaza A
Glicogensintetaza a Glicogensintetaza b
(inactiv)
Fosforilaza b
Fosforilaza a
(activ)
Rezultat: glicogenul este degradat.
Cazul A este posibil la un nivel ridicat al glucagonului
i/sau adrenalinei, respectiv un nivel sczut al insulinei.
A
B
Fosforilazkinaza a
Fosforilazkinaza b
(inactiv)
Fosfoproteinfosfataza 1 (PP1G)
Glicogensintetaza b

Glicogensintetaza a
(activ)
Rezultat: sinteza glicogenului.
Cazul B este posibil la un nivel ridicat al insulinei,
respectiv un nivel sczut al glucagonului.

Schema 2.15. Activarea glicogenolizei coincide cu inactivarea glicogenogenezei
2.7.Biosinteza lactozei
Lactoza este biosintetizat n glanda mamar, fiind principala glucid din lapte
iar coninutul su procentual mediu este cuprins ntre 3,9-6,4% n laptele unor specii
de animale domestice.
Prima etap este reprezentat de biosinteza |-UDP-galactozei pornind de la |-
UDP-glucoz.Conversia |-UDP-glucozei la |-UDP-galactoz are loc sub aciunea
unei epimeraze dependente de NAD
+
. UDP-glucoza este biosintetizat pornind de la
glucozo-1-fosfat n prezena UDP-glucozo-pirofosforilazei i a unui mol de UTP.

50
O
CH
2
O
OH
OH
HO
O
UDP
H
-UDP-Glucoz
4-Ceto-UDP-Glucoz
-UDP-Galactoz
NAD
+
NADH + H
-
O
CH
2
OH
OH
HO
O
UDP
O
NAD
+
NADH + H
-
O
CH
2
OH
OH
HO
O
UDP
O H


n continuare |-UDP-galactoza reacioneaz cu o-D-glucoza sub aciunea unui
complex enzimatic numit lactozsintetaz:
-Glucoz
Lactoza
-UDP-Galactoz
O
CH
2
OH
OH
HO
O
UDP
O H
+
O
CH
2
OH
OH
HO
OH O H
UDP
H
O
O
OH
OH
OH
CH
2
HO
O
CH
2
OH
OH
HO
O

O component a lactozsintetazei denumit proteina A este prezent n ficat i
intestin i catalizeaz condensarea |-UDP-galactozei cu o-N-acetil-glucozamin cu
formarea N-acetil-lactozaminei( a se vedea schema 2.16. ).
Proteina B, cealalt component a lactozsintetazei, nu are activitate catalitic
proprie i este sintetizat n celulele specializate ale glandei mamare. Rolul proteinei
B este de a induce modificri n structura proteinei A creia i schimb specificitatea
n sensul folosirii ca substrat a glucozei.
2.8.Conversia glucozei n fructoz i alte oze
Fructoza este utilizat n organismele animale ca precursor biosintetic al unor
aminoglucide. Atunci cnd fructoza nu este asigurat prin aport alimentar sub form
51
-N-acetil-glucozamin
N-acetil-lactozamin
-UDP-Galactoz
O
CH
2
OH
OH
HO
O
UDP
O H
+
H
H
O
O
OH
N
OH
C
O
CH
2
OH
OH
HO
O
OH
CO
CH
3
H
2
H
O
CH
2
OH
N
HO
OH O
C CH
3
O
H
UDP

Schema 2.16. Biosinteza N-acetil-lactozaminei
de zaharoz, fructani etc, glucozo-6-fosfatul poate fi convertit la nivelul hepatocitelor n
fructozo-6-fosfat sub aciunea unei izomeraze specifice.
UDP-N-acetil-glucozamina reprezint o form activ care este utilizat mpreun
cu UDP-glucuronat i celelalte componente la biosinteza mucopoliglucidelor.
Biosinteza UDP-N-acetil-glucozaminei pornete de la fructozo-6-fosfat care este
convertit ntr-o prim etap la glucozamin-6-fosfat (prin condensare cu glutamin ca
donor de grup amino). Glucozamin-6-fosfatul este acetilat la N-acetil-glucozamin-6-
fosfat care trece n N-acetil-glucozamin-1-fosafat sub aciunea unei fosfomutaze
specifice.
N-acetil-glucozamin-6-fosfatul este convertit la UDP-N-acetil-glucozamin n
prezena UTP aa cum se prezint i n schema 2.17.
n mod asemntor, UDP-N-acetil-manozamina este biosintetizat pornind de la
fructozo-6-fosfat.
52
N-acetil-glucozamin-6-fosfat N-acetil-glucozamin-1-fosfat
UDP-N-acetilglucozamina
H
P
Fructozo-6-fosfat Glucozamin-6-fosfat
P
H
O
CH
2
OH
N
O
OH O
C CH
3
O
P
UTP
PP
i
H
H
Mucopoliglucide
O
CH
2
OH
NH
2
O
OH O H
H
O
CH
2
OH
N
O
O O
C CH
3
O
H
O
CH
2
OH
N
HO
O O
CO CH
3
UDP
O
CH
2
OH
O
OH
CH
2
O
OH
H
P
Gln
Glu
P


Schema 2.17. Sinteza UDP-N-acetilglucozaminei


2.9.Dereglri ale metabolismului glucidelor
Diabetul zaharat este o consecin a unei deficiene n secreia de insulin i se
manifest prin hiperglicemie i glucozurie. ndeosebi animalele btrne (porci,
ierbivore, pisici, cini) prezint diabet zaharat. Conversia glucozei libere la glucozo-
6-fosfat sub aciunea glucozo-fosfokinazei este afectat de insuficiena de insulin iar
rezultatul acestei inhibri l reprezint instalarea hiperglicemiei i diminuarea
glicogenogenezei. Energia necesar organismului animal este procurat ndeosebi
prin mobilizarea lipidelor din esutul adipos i intensificarea catabolismului acestora.
Aceast mobilizare a lipidelor este nsoit i de creterea concentraiei
lipoproteinelor plasmei sanguine cu un coninut ridicat de colesterol liber dar i a
concentraiei acizilor grai liberi n condiiile inhibrii biosintezei lipidelor.Cetozele
la rumegtoare se caracterizeaz prin hipoglicemie i niveluri ridicate de corpi
cetonici n lapte i urin. n condiiile unui consum ridicat de glucoz, cum ar fi de
exemplu n gestaie i lactaie i a unui aport insuficient de substane nutritive, la
rumegtoare se observ o intensificare a degradrii acizilor grai din lipidele proprii
dar i a aminoacizilor din proteine cu scopul obinerii de substrate pentru
gluconeogenez dar i de energie. Combaterea cetozelor se face prin administrare de
corticosteroizi, substane glucogenice (propionat, propilenglicol) sau de sruri de
cobalt (promotori ai utilizrii acidului propionic).
53
Hipoglicemia neonatal se manifest la purcei i se datoreaz rezervei limitate de
glicogen i a intensificrii metabolismului glucidic n scop energetic n timpul naterii.
n aceste condiii, glicemia poate lua valori critice datorit unui aport insuficient de
substrate pentru gluconeogenez dar i activitii sczute a echipamentului enzimatic
implicat n acest proces.
Hiperglicemia i glucozuria alimentar pot apare la animale n condiiile unui
aport excesiv de amidon i diglucide care afecteaz capacitatea de reabsorbie a glucozei
la nivelul tubulilor renali. Acidoza lactic se manifest la rumegtoare ca urmare a unei
concentraii mrite de acid lactic (datorit fermentaiei rumenale) n condiiile de
nutriie amintite mai sus.
Eritrocitele mature sunt dependente de glicoliz pentru obinerea de ATP necesar
pentru activitatea ATP-azei implicat n stimularea sistemului de transport de ioni de
sodiu i potasiu.
Cteva dereglri ale glicolizei n hematii sunt descrise mai jos:
a. Deficitul de hexokinaz se datoreaz unui defect enzimatic n izoenzimele
hexokinazei localizate n hematii. Bolnavii cu deficit de hexokinaz au un nivel sczut
de 2,3-difosfoglicerat (2,3-DFG), un intermediar care nsoete glicoliza n hematii i
care n mod normal are rolul de a scdea afinitatea hemoglobinei pentru oxigen. n
consecin, hemoglobina bolnavilor cu o astfel de dereglare enzimatic are o afinitate
deosebit pentru oxigen care n acest fel este mai puin disponibil pentru esuturi.
Deficitul de hexokinaz are ca efect instalarea anemiei hemolitice.
b. Deficitul de piruvatkinaz se datoreaz unor defecte genetice n subunitile din
izoenzima piruvatkinazei localizat n hematii. Consecina acestei dereglri este o
sintez inadecvat de ATP cu urmri asupra ATP-azei necesare pompei de ioni.
Reducerea activitii ATP-azei duce la descreterea stabilitii hematiilor i liza
acestora. Deficiena piruvat kinazei are ca efect instalarea anemiei hemolitice
(distrugerea excesiv i prematur a hematiilor).
c. Acidoza lactic. O concentraie mare de acid lactic n snge este rezultatul unei
biosinteze mrite sau scderii utilizrii lactatului. Scderea pH-ului sanguin i a
bicarbonailor poate fi o consecin a unei concentraii mrite de acid lactic. Lipsa
oxigenului sau anoxia are ca efect o sintez inadecvat a ATP-ului n mitocondrii i o
activare a fosfofructokinazei (PFK), enzima reglatoare major a glicolizei care duce la
creterea fluxului metabolic prin glicoliz i deci implicit la o sintez mrit de lactat.
Lipsa oxigenului nu permite o utilizare adecvat a lactatului la nivelul esuturilor (este
mpiedicat oxidarea mitocondrial a acetil~CoA). Anoxia tisular are ca rezultat
instalarea unei anemii severe i o slbire a fluxului sanguin.
Deficienele ereditare ale echipamentului enzimatic implicat n metabolismul
glicogenului conduc la depuneri excesive de glicogen i/sau imposibilitatea de a folosi
acest glicogen n circuitul metabolic.
n boala von Gierke s-a observat o activitate redus sau absena glucozo-6-
fosfatazei n ficat, intestin i rinichi ceea ce are ca urmare imobilizarea glucozei,
inclusiv un depozit mrit de glicogen n ficat. Hipoglicemia care nsoete boala von
Gierke conduce la mobilizarea lipidelor i proteinelor din esuturile extrahepatice cu
scopul furnizrii de substrate pentru gluconeogenez. Din acest motiv n boala von
54
Gierke se observ de asemenea o lactacidemie i cetogenez excesive. Manifestrile
clinice ale bolii cuprind hepatomegalie, convulsii, tulburri digestive, neurologice etc.
n boala Pompe s-a observat o deficien a 1,4-1,6 glucozidazei, enzim
lizozomal implicat n glicogenoliz. Se constat o depunere exagerat a glicogenului,
n special n lizozomii din muchiul scheletic i cardiac i instalarea hipoglicemiei.
Boala Cori se caracterizeaz prin depuneri masive de glicogen hepatic i
muscular care are ns o structur anormal. Astfel, ramurile externe ale glicogenului
sunt foarte scurte n condiiile absenei enzimei de debranare (o 1,6 glucozidaz).
Glicogenoza McArdle se datoreaz absenei fosforilazei musculare care duce
la depuneri exagerate de glicogen normal. Bolnavii prezint crampe musculare
datorit incapacitii esutului muscular de a utiliza glicogenul propriu ca surs de
combustibil n efortul fizic. PH-ul celulelor musculare ale bolnavilor cu maladia
McArdle este mai alcalin n condiii de efort fizic datorit scindrii fosfocreatinei i a
lipsei acumulrii intermediarilor din fluxul glicolitic.
Alte deficiene enzimatice au fost localizate n cazul fosfofructokinazei (boala
Tarui i glicogenoza de tip VIII) i a enzimei de branare normal (boala Andersen).
Defectele genetice ale enzimelor implicate n metabolismul galactozei
(galactokinaza, UDP-glucozo-galactozo-1-fosfat uridil transferaza) duc la instalarea
galactozemiei i galactozuriei sau a unor alterri hepatice, tulburri neuropsihice,
cataract etc.
Au fost semnalate mai multe dereglri metabolice asociate cii pentozo/hexozo-
fosfailor:
a. anemia hemolitic datorit unei deficiene n glucozo-6-fosfat dehidrogenaza din
globulele roii. Singura surs de NADPH pentru globulele roii (lipsite de mitocondrii)
este untul pentozo-fosfat. NADPH-ul, cofactor al glutation-reductazei, este implicat n
meninerea integritii enzimelor tiolice, inclusiv a glutationului care are un rol
detoxifiant, reacionnd cu peroxizii. Deficiena n glucozo-6-fosfat dehidrogenaza face
ca sinteza de NADPH prin untul pentozo-fosfat s fie insuficient. n aceast situaie
nu se mai asigur protecia necesar glutationului redus, globulele roii fiind mai
susceptibile la liz.
Unele medicamente cum ar fi aspirina, sulfamidele, medicamentele antimalarice pot
oxida glutationul redus producnd anemia hemolitic.
b. sindromul Wernicke-Korsakoff este cauzat de o deficien cronic de tiamin.
Transcetolazele ciclului pentozo/hexozo-fosfailor sunt TPP-enzime dependente de
Mg
2+
. Activitatea transcetolazelor este sczut n condiiile unei deficiene de tiamin
iar simptomele clinice ale sindromului cuprind paralizie, deteriorarea funciei mentale
etc.
n pentozuria esenial (n calea acidului uronic ), o deficien de L-xilitol-
dehidrogenaz (NADP dependent) duce la imposibilitatea transformrii L-xilulozei la
D-xiluloz iar L-xiluloza este eliminat prin urin.





55