ALTE SISTEME TRANSPORTOARE DE

HIDROGEN I ELECTRONI.
OXIDOREDUCERILE MICROZOMALE

OXIDOREDUCERILE MICROZOMALE
Localizate n reticulul endoplasmatic neted (fraciunea microzomal)
Sistem transportor de electroni care nu este fosforilant (nu este
productor de ATP)
Implicat n procesele de hidroxilare i de dehidrogenare
Sistemul cuprinde:
donorul de echivaleni reductori - NADPH2
flavoprotein
fier-sulf-protein

citocrom microzomal specific, denumit citocromul P450, care are rol de

oxidaz mixt, cataliznd concomitent procese de hidroxilare i de
formare a apei.
Hidroxilazele utilizeaz NADPH, n calitate de cosubstrat i oxigenul
molecular, cataliznd urmtoarea reacie general:
R-H + NADPH + H+ + O2

R-OH + NADP+ + H2O

2

Mecanismul secvenial al oxidoreducerilor microzomale

Produs (R-OH)
hidroxilat

Citocrom P450
reductaza
NADPH+H+

2Fe2+-Sulf
proteine

FAD

2eNADP+

citP450-Fe3+

primul
electron
1e-

R-OH
citP450-Fe3+

citP450-Fe3+
(Oxidat)

2Fe3+-Sulf
proteine

FADH2

Citocromul
P450

2H+

citP450-Fe2+

Substrat (R-H)

Substrat (R-H)
Compus aromatic
Compus steroidic
Acizi biliari
Metabolit toxic endogen
Medicament

R-H O

citP450-Fe2+

1e-

R-H

R-H

al doilea
electron

O2

O2

H2O
R-H + NADPH + H+ + O2

R-OH + NADP+ + H2O

2-

Mecanismul secvenial al oxidoreducerilor microzomale

Schema ilustreaz legarea substratului (R-H) de citocromul P450, transferul individual,
secvenial, al celor doi electroni de la NADPH-citocrom P450 reductaz, i legarea de
oxigenul activat, cu formarea substratului hidroxilat (R-OH) i a apei (H2O)
n prima etap, substratul R-H se combin cu forma oxidat (Fe3+) a P450 care este apoi
redus cu un electron (ce provine de la NADPH) la forma Fe2+. Acest transfer al primului
electron se face prin intermediul flavoproteinei (NADPH citocrom P450 reductaza).
Fier-Sulf proteinele, au rolul de a separa cei doi electroni provenii de de la NADPH.
Complexul format din citocromul P450 (Fe2+) i substrat (R-H) reacioneaz cu oxigenul
molecular (O2) ntr-un asemenea mod nct unul din atomii de oxigen este redus la ap,
iar cellalt este introdus n substratul organic, rezultnd substratul hidroxilat (R-OH).
Ca mecanism, complexul este oxigenat i primete un al doilea electron de la
NADPH, rezultnd oxigen activat sub form de anion O2-. Urmeaz o oxidoreducere
intern cu formarea substratului hidroxilat i a apei (H2O), ambii produi de reacie
coninnd atomii de oxigen din molecula de O2. Citocromul P450 liber este regenerat
sub form de Fe3+. Transferul de echivaleni reductori de la NADPH se face n dou
trepte, datorit aciunii Fe-S proteinelor.

R-H + NADPH + H+ + O2

R-OH + NADP+ + H2O

R-H - substratul care urmeaz a fi hidroxilat: compui aromatici,

compui steroidici, acizi biliari, medicamente, metabolii toxici
endogeni;
Un atom din molecula de O2 este ncorporat n substratul R-H iar
cellalt este redus cu formarea apei.
Flavoproteina microzomal i citocromul P450 prezint fenomenul de
inducie enzimatic: biosinteza i deci concentraia lor n ficat crete
semnificativ sub aciunea barbituricelor i a altor medicamente.
Aceti ageni stimuleaz proliferarea reticulului endoplasmatic din
celulele hepatice = > adaptare cu rol protector a celulei.
5

Citocromul P450 (CYP, EC: 1.14.14.1)

componenta de baz a sistemului oxidazic cu funcii multiple (SOFM)
familie multigenic de hemoproteine caracterizate prin proprieti diferite
de cataliz, de specificitate pentru substrat, i de sensibilitate la tratamentul
cu diferii inductori.
denumirea de citocrom P450 este dat de complexul citocromului cu
monoxidul de carbon care este un pigment (P) cu un maxim de absorbie
la 450 nm
clasa proteinelor cu hem, centrul activ este alctuit dintr-un complex
chelat fier-protoporfirina IX. Apoproteina are o mas molecular cuprins
ntre 45.000 i 50.000 daltoni
Modelul spaial al citocromului P450
descifrat prin cristalografie de raze X.
Este redat structura secundar a
componentei proteice i componentei
prostetice de tip heminic. Captul Nterminal este ilustrat cu albastru, iar
cel C-terminal cu rou.
(dup Hamdane, 2008)
6

Citocromul P450 (II)

Multiplicitatea i eterogenitatea citocromilor P450 a necesitat elaborarea unei

nomenclaturi bazat pe procentul de omologie al secvenelor proteice, aceast
nomenclatur fiind adus la zi o dat la doi ani.
Tehnicile de biologie molecular recent descoperite au permis izolarea mai multor
ADNc ale citocromilor P450. Aceste secvene au fost exprimate n numeroase celule
eucariote sau procariote, iar celulele recombinante au permis studierea specificitii de
substrat a acestor izoforme precum i caracteristicile lor fizico-chimice.
Anul 2014 a marcat a 60-a aniversare a descoperirii citocromilor P450, fiind
identificate la om un numr de 57 gene care codific pentru diferite izoenzime ce
prezint un interes farmacologic i toxicologic.
Monooxigenazele
citocrom P450 sunt
desemnate cu
prescurtarea CYP urmat
de o cifr arab care
indic familia genic din
care face parte. Urmeaz
apoi o liter pentru
subfamilie i o cifr arab
ca numr de identificare
a genei.

Familie
CYP 1

Sub-familie

Enzima

A
B.

1
2
3.

Omologie > 40%

Omologie > 60%

A
B.

3 ..
7

Citocromul P450 (III)

O izoform nu este specific unui singur substrat, un CYP poate metaboliza
mai multe substrate i un substrat poate fi metabolizat de mai multe
izoforme CYP.
Familia CYP metabolizeaz mii de compui endogeni i exogeni i sunt

prezente n aproape toate esuturile.

Sunt implicate n biosinteza colesterolului, a acizilor biliari, hormonilor
steroizi, i n metabolismul vitaminei D.

La om, cele mai implicate enzime n metabolismul medicamentelor sunt

izoformele: CYP3A4, CYP2D6, CYP2C9, CYP1A2, CYP2C19.
Dei membrana reticulului endoplasmic constituie principala localizare
subcelular a citocromului P450 n ficat, el este de asemenea situat n
membrana intern mitocondrial a celulelor din glandele suprarenale, din
testicule, placent i creier.

Clasificarea CYP 450 n funcie de substrat

Izoforma
Substrate
CYP

Inhibitori

Inductori

Principalele clase de CYP implicate n metabolismul

medicamentelor. Activarea i inhibiia cu impact asupra
eficacitii-toxicitii acestora

B. P. Sweeney and J. Bromilow,

Anaesthesia, 2006, 61, pages 159177

10

Izoforma
CYP

Substrate

Inhibitori

Inductori

Principalele clase de CYP implicate n metabolismul

medicamentelor. Activarea i inhibiia cu impact asupra
eficacitii-toxicitii acestora

B. P. Sweeney and J. Bromilow,

Anaesthesia, 2006, 61, pages 159177

11

Glucide
Lipide
Proteine

Vitamine
Minerale
H2O

Componente dietare
XENOBIOTICE
MEDICAMENTE

digestie
absorbtie
transport

Compusi intracelulari SIMPLI

Ci de biosintez

Ci de stocare

ANABOLISM
Compusi de
REZERV

Biomolecule COMPLEXE
cu rol structural si functional
O2
Detoxifiere si
Eliminare

Transformari oxidative CATABOLISM

Energie

Produsi de degradare
Produsi toxici

CO2
H2O

MECANISME GENERALE DE TRANSFORMARE A CONSTITUENILOR

ORGANICI FUNDAMENTALI AI ORGANISMELOR VII
Proteine

Polizaharide

Lipide

Aminoacizi

Hexoze
Pentoze

Acizi grasi
Glicerol

Stadiul I

Stadiul II
Acetil~SCoA

Ciclul
citratului

Stadiul III

2H
Stadiul IV

O2

2H

2H

2H

Oxidarea biologic

H 2O

ATP

CO2

13

Glucide
Metabolism glucidic

14

GLUCIDE Definiie i caracteristici structurale

GLUCIDE sau CARBOHIDRAI = compui naturali, alctuii din carbon,
hidrogen i oxigen, care au, n general, gust dulce i caracter reductor,
sau care prin hidroliz pot forma compui cu aceaste proprieti.
Biomolecule cu structuri de tip polihidroxicarbonilic (polihidroxialdehide
sau polihidroxicetone).

Clasificare (I)
Monozaharide (nu hidrolizeaz)
Clasificarea glucidelor
n functie de comportarea
la hidroliz

Oligozaharide (hidrolizeaz n
2-10 resturi monozaharidice)
Homoglicani
Polizaharide (glicani, glucani) compusi cu un numr mare de
monozaharide n structur

Heteroglicani
15

Clasificarea monozaharidelor (II)

Monozaharide
propriu-zise

n functie de numrul
de atomi de carbon din
structur

-trioze
-tetroze
-pentoze
-hexoze, etc

Monozaharidele
n functie de tipul gruprii
carbonil din structur
Monozaharide
derivate

-aldoze
-cetoze

Cu grupri amino care substituie

gruprile hidroxil (aminozaharuri)
-glucozamina
-galactozamina
-manozamina
-Cu N n structur si/sau
-Cu S n structur
(structuri N acetilate, N sulfatate,
O sulfatate)
Acizi uronici: acidul glucuronic,
acidul galacturonic, etc)
16

Structurile liniare ale unor compui polihidroxialdehidici (aldoze)

i polihidroxicetonici (cetoze)

Monozaharide
reprezentative

17

D-Glucoza i cei doi epimeri.

Centru chiralic (cu rou)

18

Structuri
piranozice
i
furanozice

Anomerii
i

19

Formarea structurilor ciclice i

glucopiranozice

atom de
carbon
semiacetalic

Conformaia scaun
a glucopiranozei

20

Derivai de hexoze cu rol biologic

21

Dizaharide formarea legturii glicozidice

atomul de carbon anomeric

Formarea
maltozei

Legtura glicozidic
protejeaz atomul de
carbon anomeric de oxidare

Glu(a14)Glu
22

Structurile unor dizaharide

Glc(a12b)Fru
Configuraia
atomului de
carbon
anomeric

Atomi de carbon
legai prin legtur
glicozidic

23

Unitile repetitive ale unor glicozaminoglicani ai matrixului extracelular

Polimeri liniari compui ai unitilor repetitive dizaharidice

Acid glucuronic

N-Acetilglucozamina

Structurile unor dizaharide care conin

monozaharide derivate (N i O-sulfatate)

Heteroglicani (I)

25

Heteroglicani (II)

26

Oligozaharidele
2-10 monozaharide, unite ntre ele prin legturi glicozidice
oligozaharidele cu mai mult de trei uniti nu exist n form
liber ci intr n structura unor biomolecule complexe n care sunt
asociate cu lipide sau proteine
Polizaharidele, denumite glicani sau glucani
biomolecule constituite din cteva zeci pn la sute sau mii de
subuniti monozaharidice;
unele au structuri liniare (celuloza, acidul hialuronic, heparina)
altele sunt ramificate (glicogenul, amidonul)

O categorie aparte o constituie glucidele conjugate glicoproteinele

i glicolipidele.
Cele mai rspndite macromolecule din aceast clas sunt
mucopolizaharidele, componente ale proteoglicanilor (constituite
din acid hexuronic i hexozamine) i poliozidele bacteriene
27

Homopolizaharide cu rol de glucide de rezerv

Granule de amidon (plante)

Granule de glicogen (muchi, ficat)

Other homopolysaccharides (e.g. cellulose and chitin) serve as structural

elements in plant cell walls and animal exoskeletons.

Structura amidonului

Structura spaial a amilozei

din molecula de amidon

29

 Suspensia de amiloz n ap adopt o

conformaie helical.
Iodul molecular (I2) se poate insera n
mijlocul helixului => culoarea albastr
caracteristic

30

Structura spaial a glicogenului

31

Celuloza i chitina homopolizaharide cu rol structural

Fragment de chitin
(homopolizaharid liniar compus din resturi de N-acetilglucozamin legate b)

Exoschelet de chitin

Peretele celular la bacterii i alge conine heteropolizaharide cu rol structural

Peptidoglican
(unitile de GlcNac-Mur2Ac legate b1 4 - sunt crosslinkate de peptide mici)

Lizozimul distruge bacteriile prin hidroliza legturii b1 4

Structura agarozei (alge)

exact structure depends

on the bacterial species

Agreganii= agregate de proteoglicani

Agreganii
interacioneaz puternic
cu colagenul din
matrixul extracelular
contribuind la structura
rigid a esutului
conjunctiv

(Tamiflu)

Numerose virusuri se fixeax pe suprafaa

celulelor gazd prin intermediul lectinelor virale
(proteine care leag glucide) i a oligozaharidelor
de pe suprafaa celulelor gazd.
Medicamente antivirale analogi structurali ai
acidului N-acetilneuraminic, inhib sialidaza
viral i limiteaz eliberarea virusurilor din celula
(Relenza)
infectat

Celulele de Helicobacter pylori ader la suprafaa mucoasei gastrice cu

ajutorul unor interacii dintre lectinele bacteriene i oligozaharide
specifice ale celulelor gastrice.

Rolul biologic al glucidelor

surse directe de energie
substane de rezerv ex: la animale glucoza se depoziteaz sub

forma glicogenului muscular i hepatic, iar la plante sub form

de amidon
substane cu rol structural i de susinere ex: celuloza, chitina,

mucopolizahridele din esuturile cartilaginoase.

funcii specifice glicoproteinele intr n structura proteinelor
de grup sangvin, particip la procesele imunitare, intr n
structura heparinei cu rol anticoagulant, etc.

37

Digestia i absorbia glucidelor

38

DIGESTIA I ABSORBIA GLUCIDELOR ALIMENTARE

Digestia = transformrile mecanice,
fizice i chimice pe care le sufer
alimentele n tubul digestiv, pentru

DIGESTIE =
ansamblul cailor
metabolice ce
permit
transformarea
alimentelor in
nutrimente

a le face capabile s strbat

mucoasa acestuia i s ajung n
limf i snge
Absorbia = procesul de trecere a
substanelor

din

intestin

prin

peretele intestinal n capilarele din

snge, i apoi n vena port
39

DIGESTIA GLUCIDELOR
Polizaharide : amidonul, glicogenul,
Dizaharide : zaharoza, maltoza, lactoza
Monozaharide: glucoza, fructoza, riboza, etc

1. Cavitatea bucal: -amilaza

salivar (-1,4-glucan-4glucanhidrolaza, EC:3.2.1.1)
secretat glandele salivare,
hidrolizeaz amidonul => dextrine
i eventual maltoz, transformare

limitat de timpul scurt pe care

alimentele l petrec n cavitatea
bucal => bolul alimentar.
40

2. Stomac: n sucul gastric nu exist

enzime

amilolitice, iar amilaza

salivar ce a acionat pn la acest

nivel

este

inhibat

de

acidul

clorhidric secretat n stomac =>

chimul gastric.

41

3. Intestin: hidroliz sub aciunea

enzimelor pancreatice i intestinale.
-Amilaza
amidonul

pancreatic
i

glicogenul

hidrolizeaz
alimentar

netransformate => dextrine i maltoz.

Alfa-glicozidazele hidrolizeaz maltoza i

alte dizaharide => dou molecule de
glucoz

-fructozidaza (zaharaza sau sucraza)

hidrolizeaz

zaharoza

=>

glucoz

fructoz
-galactozidaza (lactaza) hidrolizeaz
lactoza =>glucoz i galactoz

n urma digestiei glucidelor, n

intestinul subire rezult o serie de
monozaharide, dintre care predomin
glucoza, galactoza, fructoza, manoza,
precum i unele pentoze.
42

Alfa-glicozidazele - int terapeutic

Alfa-glicozidazele de la nivelul peretelui intestinal hidrolizeaz
oligozaharidele la glucoz i alte monozaharide.
Inhibiia acestor enzime reduce rata de digestie a carbohidrailor i
reduce astfel cantitatea de glucoz disponibil pentru absorbie
Acarboza, miglitolul inhibitori competitivi ai alfa-glicozidazelor
utilizai pentru tratarea diabetului zaharat de tip II
Efecte secundare datorit inhibiiei alfa-glicozidazelor,
oligozaharidele nedigerate ajung la nivelul colonului unde sunt
transformate de bacteriile saprofite, determinnd apariia de
tulburri locale (flatulen, diaree)

43

CH2-OH a - amilaz CH2-OH

OH

O
1

OH

6CH -OH
2
1

OH

OH

O
1
2

OH

O
OH

Enzima R
CH2-OH
OH

CH2-OH

CH2-OH

OH

OH

OH

O
4
1

OH

OH

CH2-OH

6 CH2

b - amilaz

OH

OH

1
2

OH
OH
capt
reductor

OH

Aciunea amilazelor asupra moleculei de amidon

6CH2-OH
5
4

Maltaz (EC: 3.2.1.20)

CH2-OH

6 CH2-OH
5
4

OH

O
1
2

OH 3
OH

OH

O
OH
OH

OH

O
1

a - D glucoz

b - galactozidaza (EC: 3.2.1.23) 6CH2-OH

OH

OH
O
HO-H2C 6

Zaharaz
(EC: 3.2.1.26)

O
OH

5
4

b -D fructoz

3 1CH2-OH

OH

Maltoz (glucoz -a - 1,4-glucoz)

Sucroz (glucoz- a - 1,2-fructoz)

6CH2-OH

O
2

OH 5
O
OH
4

OH

OH
OH

OH
Lactoz (galactoz - b - 1,4-glucoz)

44

45

FICAT I PANCREAS DE IEPURE (disecie)

46

Unele

polizaharide

(celuloza,

pentozanele) NU sunt transformate n

tubul digestiv al omului (nu conine
enzimele necesare).
Ele trec, ca atare, n intestinul gros,
unde sunt degradate n mic msur
sub aciunea florei intestinale i sunt

eliminate prin fecale.

Aceste polizaharide NU AU ROL IN
NUTRITIE, fiind utile pentru digestie,
deoarece

contribuie

la

reglarea

peristaltismului intestinal.
47

ABSORBIA GLUCIDELOR are loc

la nivelul peretelui intestinal sub form
de monozaharide. Viteza de absorbie

depinde de:
-

natura compusului glucidic

unii

factori

regiunea

anatomo-fiziologici:

intestinal,

starea

de

funcionare a intestinului, prezena unor

vitamine (tiamina, piridoxina, acidul

pantotenic),

unor

hormoni

(tiroxina).

Dac pentru glucoz viteza de absorbie se noteaz arbitrar cu 100, pentru

alte monozaharide se obin urmtoarele valori: - galactoza 110

fructoza 43
manoza 19
xiloza 15
arabinoza 9

48

Structura mucoasei intestinului subire

Mucoasa intestinala formeaza

cute transversale - valvule
conivente.
Pe valvule se gasesc vilozitatile
intestinale (4 milioane).
Vilozitatile intestinale
reprezinta unitatea
morfofunctionala a aparatului
de absorbtie intestinala.
Printre vilozitati se deschid
glandele intestinale. 49

Structura mucoasei intestinului subire

50

ABSORBIA MONOZAHARIDELOR
- Mecanisme fizice sau biochimice
- Pentozele i unele hexoze : difuzie simpl, fr consum energetic

- Absorbia majoritii hexozelor se desfoar, prin difuzie facilitat sau printr-un

proces activ, cu ajutorul unor transportori. Reacia are loc n prezena hexokinazei i
este stimulat de hormonii corticosuprarenali. Hexozele se absorb sub form de
esteri fosforici, care sunt apoi hidrolizai n prezena fosfatazelor corespunztoare

- Dup absorbie, monozaharidele ajung pe calea venei porte la ficat, unde pot fi
depozitate temporar sub form de glicogen, sau trec n circulaia general, ajungnd

pe cale sangvin n toate celulele diferitelor organe i esuturi unde sunt necesare
pentru desfurarea proceselor metabolice
51

Digestia i absorbia glucidelor n intestinul subire

52

Catabolismul glucidic

53

Repere cronologice n elucidarea catabolismului glucidic

Louis Pasteur
1822 - 1895

Eduard Buchner
1860 - 1916

1860 L. Pasteur a descoperit c microorganismele erau responsabile de procesele de

fermentaie
1897 E. Buchner a descoperit c un extract de Saccharomyces poate fermenta zahrul
1918 G. Embden tumorile maligne prezint o intensificare a procesului de glicoliz
(utilitate n diagnosticul cu PET)
1930 O. Warburg & H. Von Euler-Chelpin au elucidat procesul de degradare a glucozei la
Saccharomyces
G. Embden & O. Meyerhof au elucidat reaciile glicolizei n muchi
54

CATABOLISMUL GLUCIDIC
GLICOLIZA
FERMENTAIILE

DEGRADAREA AEROB

DEGRADAREA PE CALEA PENTOZO-FOSFAT

DEGRADAREA PE CALEA ACIZILOR URONICI
ALTE CI DE DEGRADARE

55

Schema general a
catabolismului glucozei n
condiii anaerobe i aerobe

GLICOLIZA (GLUCOLIZA)
DEGRADAREA ANAEROB
CALEA EMBDEN - MEYERHOFF - PARNAS (1930)
Procesul prin care o molecul de glucoz se transform anaerob n 2
molecule de acid lactic
11 etape, catalizate de enzime specifice (localizate n faza solubil a
citoplasmei)
2 stadii:
STADIUL I cu consum de ATP
STADIUL II proces cuplat cu formare de ATP

STADIUL I Reaciile cu consum de ATP

1. Fosforilarea (activarea) glucozei
CH
2

O
CH2

OH
O
+
OH

HO

+ ADP

OH

ATP
Mg2+

OH
glucoza

OH

O OH

hexokinaza

OH

HO

OH
OH

(glucokinaza) FICAT

glucozo-6-fosfat

57

2. Izomerizarea - conversia glucozo 6-fosfat n fructozo 6-fosfat

6

CH2

CH2

OH
OH

EC: 5.3.1.9
Mg2+
Mn2+

OH
glucozo-6-fosfat

HO

HO

OH

glucozo-6-fosfat
izomeraza

CH2 OH

OH

b - fructozo-6-fosfat

3. Fosforilarea fructozo 6-fosfat

6

CH2

HO
4
3

OH

CH2

OH

O
5

P
+ ATP

CH2

OH

fosfofructokinaza

+ ADP

HO

OH

CH2

b - fructozo-6-fosfat

OH

fructozo-1,6-bisfosfat

58

3. Scindarea fructozo 1,6-bis-fosfat

1 CH2

2C

HO

P
O

O
CH2

CH

4 HC

OH

5 HC

OH

6 CH2

fructozo 1,6- bis fosfat

aldolaza

C
CH2

fructozo-1,6-bisfosfat

+
OH

OH

HC
CH2

dihidroxiaceton
fosfat

gliceraldehid
3 - fosfat

0,5%

10,5%

89%

echilibrul reaciei este deplasat

spre dreapta

CH2 O
C

CH2 OH
dihidroxiaceton
3- fosfat

triozo
izomeraza

CH2 O
HC

OH

HC

gliceraldehid
3- fosfat

59

STADIUL II Oxidarea gliceraldehid 3-fosfat acid lactic,

cu formare de ATP
5. Oxidarea fosforilant a gliceraldehid 3-fosfat
Gliceraldehid 3-fosfat dehidrogenaza
O
C

HC

ENZ - SH

HC
CH2

OH

NAD+

HC
O

NADH +

S - ENZ

NAD+

CH2

gliceraldehid
3 - fosfat

CH2

Complex activat ES
Gliceraldehid 3-fosfat-DH

aldehida

HS - ENZ

O
+ NAD+ +

Pi

~O

OH

OH

OH

HO

tioester
"macroergic"

Reacia global este:

R

~ S - ENZ

HC

OH

H+

+ NADH + H+

ester fosforic
macroergic

Funcia aldehidic este oxidat la funcia acid corespunzatoare

Energia eliberat n procesul de oxidare este conservat sub forma leg. fosfat
macroergic din ac 1,3-bisfosfogliceric

~O

HC
CH2

OH
O

acid 1,3-bisfosfo
gliceric 60
Compus fosforilat macroergic !

6. Transferul radicalului fosforil pe ADP

O
C

~O

HC

OH

CH2

fosfoglicerat
kinaza

P
ADP

COOH
HC
CH2

acid 1,3-bisfosfo
gliceric

OH
O

ATP

acid 3-fosfogliceric

FOSFORILARE
DE SUBSTRAT

7. Izomerizarea - conversia acidului 3-fosfogliceric n acid 2-fosfogliceric

fosfoglicerat
mutaza

COOH
HC

OH

COOH
HC

(izomeraza)
CH2

acid 3-fosfogliceric

Mg2+

CH2

OH

acid 2-fosfogliceric
61

8. Deshidratarea intramolecular i oxidoreducerea acidului 2-fosfogliceric

COOH

COOH

enolaza
HC

CH2

Mg2+

OH

~O

acid fosfoenol piruvic = compus

macroergic, care prin hidroliz
elibereaz 14,8 kcal/mol

CH2

H2O

acid fosfoenol
piruvic

acid 2-fosfogliceric

9. Transferul gruprii fosforil la ADP

COOH
C

~O

ADP

piruvat
kinaza
Mg2+

CH2
acid fosfoenol
piruvic

FOSFORILARE
DE SUBSTRAT

COOH
C

OH

ATP

CH2
acid enol
piruvic

62

10. Izomerizarea acidului enol piruvic la acid piruvic

COOH

COOH

OH

C
CH2

tautomerie ceto-enolic

C
CH3

acid enol
piruvic

acid piruvic

11. Reducerea acidului piruvic la acid lactic

NAD+
COOH
C

CH3
acid piruvic

NADH + H+
lactat
dehidrogenaza

COOH
HC

OH

CH3

Produsul final
al degradrii
anaerobe a
glucozei

acid lactic
63

IZOENZIMELE LACTAT-DEHIDROGENAZEI (LDH)

Izoenzimele = forme enzimatice diferite ale aceleiai enzime (izoforme).
- Acioneaz asupra aceluiai substrat
- Structur primar diferit,
- Proprieti fizico-chimice diferite:
gradul de afinitate pentru variate substrate;
sensibilitatea la activatori i la inhibitori;
mobilitatea n cmpul electroforetic;
stabilitatea la cldur;
sunt elaborate de organe diferite;
permit o modulare a activitii lor n esuturi diferit i intevin astfel n
reglarea activitii tisulare.

Exist 5 izoenzime LDH ce pot fi evideniate n serul uman prin electroforez

Enzima activ LDH - tetramer
- dou tipuri de protomeri (2 lanuri): tipul H (de la heart- inim)
tipul M (de la muscle- muchi).
-Subunitile M i H sunt codificate de gene diferite: LDH-A (cromozomul 11 ) i
LDH-B (cromozomul 21)
Asocierea celor dou tipuri de protomeri n structura tetramer a condus la
formarea a 5 izoenzime:
- dou omogene: H4 i M4
- 3 hibrizi: M1H3, M2H2, M3H1.
64

Structura tridimensional a LDH

CH3
C

COOH

muchi scheletic
NAD+
+
NADH +H
LDH5

CH3
HO

LDH1

+
Acid piruvic NADH +H

CH
COOH

NAD+

Acid L-lactic

muchi cardiac

LDH1 (H4)

Muchi cardiac i Eritrocite

LDH2 (M1H3)

Leucocite

LDH3 (M2H2)

Plmni

LDH4 (M3H1)

Rinichi

LDH5 (M4)

Muchi scheletic i Ficat

Izoenzimele LDH pot fi separate prin electroforez, obinndu-se zimograme

Markeri de lezare tisular: semnificaie clinic diferit!
Ex: LDH1 i LDH2 infarct miocardic acut
LDH2 i LDH5 hepatit acut

65

BILANUL CHIMIC I ENERGETIC AL GLICOLIZEI

Stadiul - I
Glucoz

(2 triozo-3-P)

2 Gliceraldehid -3-P + 2 ADP

2 ATP

Stadiul - II
2 Gliceraldehid -3-P + 2 Pi + 2 NAD+
2 Acid 1,3-bis fosfo-gliceric +
2 Acid piruvic

Glucoz + 2 Pi

2 NADH2

+ 2 ADP

4 ADP
LDH

2 Acid 1,3-bis fosfo-gliceric + 2 NADH2

2 Acid piruvic + 4 ATP + 2 H2O
2 Acid lactic

2 NAD+

2 Acid lactic + 2 ATP + 2 H2O

Glicoliza e formatoare
de ATP prin fosforilare
de substrat

66

BILANUL CHIMIC I ENERGETIC AL GLICOLIZEI

COOH

C6H12O6

2 HC

Go = - 47 kcal/mol

OH

47 .......................100
14 ........................x = ~30%
(2ATP)

CH3
acid lactic

n esutul muscular glicoliza ncepe de la glucozo-1 fosfat, deci nu se

consum dect o molecul de ATP n Stadiul I:
fosforilaz
Glicogen

Glucozo -1-fosfat
Pi

izomerizare
Glucozo -6-fosfat

Fructozo -6-fosfat
izomerizare

+ ATP

Fructozo -1,6-bisfosfat
67

GLICOLIZA
COMENTARII - CONCLUZII
1.) Este procesul prin care o molecul de glucoz se transform anaerob
(n condiii de hipoxie celular) n dou molecule de acid lactic.
2.) Deci procesul de desfoar fr participarea oxigenului.
NADH + H+ nu trece n lanul respirator ci particip la reducerea acidului piruvic.
3.) Din punct de vedere energetic concomitent cu degradarea glucozei din
punct de vedere chimic are loc eliberare de energie Go = - 47 kcal/mol
(cldura de formare a acidului lactic)
4.) Pe baza energiei eliberate de formeaz:
-2 molecule de ATP cnd reaciile ncep de la glucoz
- 3 molecule de ATP cnd reaciile ncep de la glicogen (n esutul muscular)
5.) Procesul decurge n dou stadii:
-Primul stadiu consumator de energie (ATP)
-Al doilea stadiu este interesant din punct de vedere energetic deoarece
se genereaz ATP prin fosforilare de substrat (adic prin oxidarea direct a
unui substrat aa cum este gliceraldehid 3-fosfatul, cu participarea enzimei
gliceraldehid 3-fosfat dehidrogenaza).

68

GLICOLIZA
COMENTARII - CONCLUZII
6.) Randamentul energetic este ~ 30%.
7.) Complexul de enzime care sunt implicate n glicoliz sunt localizate n
citoplasm.

8.) Reglarea glicolizei:

Procesul de glicoliz depinde de urmtorii parametri:
a) concentraia de fosfat anorganic (Pi) din sistemul de reacie
b) concentraia n esteri hexozo- i triozofosfai
c) Raportul dintre ATP i ADP
9.) Aceti parametri, printr-un mecanism de feed-back pot stimula sau
inhiba lanul de reacii din glicoliz.

De exemplu: cnd are loc o solicitare de ATP, n condiiile unui consum

energetic, se elibereaz ADP i Pi.
Aceasta duce la mrirea vitezei reaciilor are loc stimularea procesului
glicolitic.
69

GLICOLIZA
COMENTARII - CONCLUZII
Pe de alt parte, n lips de ADP i Pi - deci n condiii aerobe cnd
este intensificat fosforilarea oxidativ i se formeaz ATP - glicoliza
este inhibat.
10.) Exist particulariti privind eficiena procesului n funcie de esuturi.
Astfel, glicoliza predomin n eritrocit dar i n muchiul cardiac i creier
(deci n esuturi extrahepatice).

11.) Glicoliza reprezint mijlocul prin care organismul ateapt

revenirea unor condiii de oxigenare adecvat.
Mecanismul este denumit datorie de oxigen.
DECI:
- Meninerea unor anumite concentraii de oxigen i de dioxid de
carbon n celule este esenial pentru funcia normal a celulelor.

70

CT scan
PET scan
18F-2-fluoro-2-

deoxyglucose

Medicine: High Rate of Glycolysis in Tumors Suggests

Targets for Chemotherapy and Facilitates Diagnosis

Detection of cancerous tissue by positron emission tomography (PET).

Cancerous Tissue Has Deranged Glucose Catabolism (Lehninger Biochemistry, 5e, 2013)

72

Detection of cancerous tissue by positron emission tomography (PET).

Cancerous Tissue Has Deranged Glucose Catabolism
Glucose uptake and glycolysis proceed about ten times faster in most solid tumors
than in noncancerous tissues. Tumor cells commonly experience hypoxia (limited
oxygen supply), because they initially lack an extensive capillary network to supply
the tumor with oxygen. As a result, cancer cells depend on anaerobic glycolysis for
much of their ATP production. They take up more glucose than normal cells,
converting it to pyruvate and then to lactate as they recycle NADH. The high
glycolytic rate may also result in part from smaller numbers of mitochondria in
tumor cells; less ATP made by respiration-linked phosphorylation in mitochondria
means more ATP is needed from glycolysis.
In addition, some tumor cells overproduce several glycolytic enzymes, including an
isozyme of hexokinase that associates with the cytosolic face of the mitochondrial
inner membrane and is insensitive to feedback inhibition by glucose 6-phosphate.
This enzyme may monopolize the ATP produced in mitochondria, using it to convert
glucose to glucose 6-phosphate and committing the cell to continued glycolysis. The
hypoxia-inducible transcription factor (HIF-1) is a protein that acts at the level of
mRNA synthesis to stimulate the synthesis of at least eight of the glycolytic
enzymes. This gives the tumor cell the capacity to survive anaerobic conditions until
the supply of blood vessels has caught up with tumor growth.
73

CATABOLISMUL GLUCIDIC
GLICOLIZA
FERMENTAIILE
DEGRADAREA AEROB
DEGRADAREA PE CALEA PENTOZO-FOSFAT

DEGRADAREA PE CALEA ACIZILOR URONICI

ALTE CI DE DEGRADARE

74

DEGRADAREA AEROB
Implic mai multe stadii:
I. TRANSFORMAREA GLUCOZEI N ACID PIRUVIC

COOH

II. FAZA INTERMEDIAR

Acid oxalilacetic

CH2
COOH

Acid piruvic
O

COOH

Acetil-CoA
C

CH3

~SCoA

CH3

III. FAZA AEROB PROPRIU-ZIS

a) Acetil~ScoA + Acid oxalilacetic

b) Cuplare cu lanul respirator

Ciclu Krebs
H2O + Energie

CO2
76

COOH

COOH
H2N

CH

HC

acid
- cetoglutaric

CH3
PLP

acid lactic

4
transaminare

reducere

LDH

2
COOH
C

CH2

carboxilare
ligaz
BIOTINA
+ ATP
+ "CO2"

decarboxilare
oxidativ

TPP
Acid lipoic
HSCoA
FAD
NAD+

CH3
acid piruvic

COOH

CO2

Ciclul Krebs

CO2
NADH2
FADH2

NAD+
NADH2

CO2

CH3

alcool-DH

n metabolismul intermediar

CH3

C
H

acetaldehida

~ SCoA

acetil-CoA

decarboxilare
simpl

acid oxalilacetic

CH3

TPP

TRANSFORMRILE ACIDULUI
PIRUVIC

Glicogen

NAD+

NADH2

+ acid
glutamic

COOH

Glucoz

CH3

ALT

L-alanin

OH

CH2

OH

alcool etilic

+ H2O
aldehid-DH

NAD+
NADH2

CH3

COOH
acid acetic

FERMENTATIILE (microorganisme)

77

DECARBOXILAREA OXIDATIV A ACIDULUI PIRUVIC

COMPLEX
5
coenzime

TPP
acid lipoic
HSCoA
FAD
NAD

MULTIENZIMATIC
3
enzime

piruvat dehidrogenaza
dihidrolipoil transacetilaza
dihidrolipoil dehidrogenaza

Mecanismul reaciei:
H2
C
N
H3C

+
N

CH3
CH2

NH2

CH2 O

PP

E1

TPP
(tiamin pirofosfat)

CH3

COOH
acid piruvic
78

H3C
HO

CH3

CO2

+
H3C

CH2-CH2-PP

E1

HO

COOH

CH3

E1

CH2-CH2-PP

C
H

"hidroxietil derivat"

"lactil derivat"

E1

TPP

(CH2)4

+
S

CO-Lys

E2

S
acid lipoic
(forma ox.)

(CH2)4 CO - Lys
SH
O

S
C

E2
(CH2)4

+ HSCoA
HS

CH3
O
SCoA
CH3 C
acetil-CoA

E2
acid lipoic
(forma ox.)
se reface

SH

CO-Lys

E2

acid lipoic
(forma red.)

FAD

FADH2

E3

NADH2
NAD+

79

DEGRADAREA AEROB A GLUCOZEI

C6H12O6

+ 6 O2

6 CO2

6 H2O

Go = - 688 kcal/mol

+ 38 ATP

Bilan chimic i energetic global

80

STADIUL I
Glucoza

Glucoza + 2 ATP

- 2 ATP

2 Triozo 3-fosfati

2 Triozo 3-fosfati + 4 ADP + 4 P i + 2 NAD+

+ 6 ATP

2 Acid piruvic + 2 NADH 2

+ 2 H2 O + 4 ATP

2 Acid piruvic

+ 4 ATP
(fosforilare de substrat)
Total I

Decarboxilarea oxidativa a acidului piruvic

STADIUL II
2 Acid piruvic

CH3
2

O
2 CH3

COOH

~ SCoA

TPP
acid lipoic
HSCoA
FAD; NAD+

+ 8 ATP

2 CO2

2 CO2 + 2 NADH2 ...................... + 6 ATP

+ 2 Acetil-CoA
Total II

+ 6 ATP

acetil-CoA
4 H2 O

STADIUL III

O
a) Ciclul Krebs

2 CH3

~ SCoA

acetil-CoA

b) Lantul respirator
+ O2

4 CO2
6 NADH2 ............6 NADH 2 ................18 ATP
2 FADH2 ............2 FADH2 ................ 4 ATP
2 GTP ..............................................+ 2 ATP
(fosforilare de substrat)

H2 .....................1/2 O2 .....................1 H 2 O
12 H2 ....................6 O 2 .....................12 H 2 O

Total III
TOTAL GENERAL

24 ATP
38 ATP

Go = - 688 kcal/mol
688 ..................................100
266 (38 x 7) ........................x = 39%

81

DEGRADAREA AEROB A GLUCOZEI

82

DEGRADAREA AEROB A GLUCOZEI

83