Sinteze Biochimie II.

5
5. Metabolismul Nucleotidelor
• 1. Patologia metabolismului nucleotidelor pirimidinice. (pag 169). Cea mai cunoscuta afecțiune legata de metabolismul
nucleotidelor pirimidinice este aciduria orotică. Boala este dată de defecte congenitale ale enzimelor orotat fosforiboziltransferaza
sau orotidilat decarboxilaza, fapt ce blochează sinteza de nucleotide pirimidinice la nivelul acidului orotic, care se acumulează în
sange și se elimina urinar. Boala este periculoasa prin deficitul de nucleotide pirimidinice creat. Pacienții depind de aportul extern
și sunt tratați cu doze mari de uridină, administrata pe cale orala.
• 2. Radicalii liberi. Definitie, proprietati. Pg 178. Radicalii liberi sunt specii chimice (molecule, atomi, ioni) capabile sa existe in mod
independent si care contin cel putin un electron neimperecheat pe un orbital exterior. Sunt chimic instabili, reactionand usor cu
alte molecule. Sunt implicati in reactii autocatalitice deoarece moleculele care reactioneaza cu ei devin, la randul lor, radicali liberi,
generand noi reactii ce vor forma radicali liberi.
• 3. Etapele neutralizarii si eliminarii xenobioticelor. Faza III. Procesul prin care se realizează neutralizarea şi eliminarea
xenobioticelor cuprinde 3 faze: faza 1 de oxidare, faza 2 de conjugare si faza 3 de eliminare. Faza 3 de eliminare consta in
eliminarea xenobioticelor din organism. Exista doua mecanisme, unul majoritar prin care produsii de conjugare din faza 2, cu
solubilitate crescuta, sunt eliminati pe cale urinara sau biliara, si un mecanism de transport in afara celulei a xenobioticelor
nemodificate, ce au patruns in celula datorita hidrofobicitatii. In membrana enterocitelor exista o glicoproteina specifica P care
transporta xenobiotice lipofile intrate in enterocit prin difuzie libera afara in lumenul intestinal. La nivelul glandelor suprarenale
exista un altfel de transportor de substante lipofile din celule in afara celulelor, numit transportor de rezistenta multipla la
medicamente, deoarece elimina din celule mai multe tipuri de medicamente. Un xenobiotic intalnit foarte frecvent este
benzopirenul. Benzopirenul este un poluant comun, rezultat din arderea tutunului, a carbunelui sau a hranei pregatite pe gratar.
Xenobioticul traverseaza liber membrana celulara datorita caracterului puternic lipofil. In interiorul celulei devine substratul
citocromilor P450 rezultand un epoxid care hidrolizeaza cu formare de diol in prezenta epoxid hidratazei.
• 4. Radicalii liberi ai oxigenului si membranele celulare (incomplet). Utilizarea
oxigenului ca reactant în cursul metabolizării xenobioticelor, implică automat
generarea de radicali liberi, care pot genera leziuni celulare şi tisulare. Ca şi în cazul
radicalilor liberi generaţi de alte surse, există mecanisme de neutralizare eficiente.
Radicalii liberi sunt: oxigenul triplet (atmosferic), oxigenul singlet, oxigenul
superoxid, oxigenul perhidroxil, apa oxigenata, radical hidroxil, ionul hidroxil, apa.
• 5. Care sunt componentele nucleotidelor din constituția ADN. Baze azotate
purinice(Adenina si Guanina) sau pirimidinice (Citozina si timina)+pentoze in cazul
nostru dezoxiriboza ->condensat cu 3 grupari fosfat.
• 6. Guta. Este principala actiune in care este implicate hyperuricemia. Ea reprezinta
de fapt un grup de boli metabolice in cadrul carora simptomele si semnele de boala
sunt rezultatul depunerii tisulare a unor depozite formate din cristale de urat de Na
monohidra. Guta se caracterizeaza prin atacuri recurente de artrita monoarticulara,
fiind intalnita mai frecvent la barbati. Simptomele acute sunt datorate
microtraumatismelor sau modificarilor metabolice locale determinate de
acumularea acestor cristale. Majoritatea pacientilor prezinta o deteriorare a
excretiei renale si o eliminare deficitara a uratului. Ei dezvolta adesea caliculi renali,
formati din acid uric si urati, dar formarea acestora este favorizata de deshidratare
si scadearea Ph-ului urinar. Diagnosticul de laborator al gutei se realizeaza prin
cresterea concentratiei plasmatice a acidului uric si examenul lichidului sinovial.
• 7. Implicarea cit.P450 in metabolismul medicamentelor. Efecte generale. Cit.P450
se gaseste in cea mai mare concentratiei in ficat , localizati in microzomi, reprezintă
pana la 20% din totalul proteinelor hepatice. În organismul uman îndeplinește mai
multe roluri: -Biosinteza hormonilor steroizi - neutralizarea si eliminarea
xenobioticelor - eliminarea produsilor de catabolism endogen.
• 8. Superoxid dismutaza si catalaza. Superoxid dismutaza asigura eliminarea anionului superoxid, prima
specie toxica ce se formeaza din oxigen, reprezentand astfel prima linie de aparare impotriva stresului
oxidativ. Pentru a functiona corect, este necesara prezenta oligoelementelor: cupru si zinc(pentru SOD
din citosol) si mangan( pentru SOD din mitocondrii). Scaderea concentratiei de SOD se poate datora
deficitului de oligoelemente. Absenta acestei enzime este insuportabila cu viata. De asemenea,
concentratiile prea mari de SOD determina leziuni tisulare datorita productiei unei cantitati mari de apa
oxigenata. Catalaza-Este o hemoproteina ce catalizeaza reactia de desfacere a apei oxigenate in oxigen si
apa. Este prezenta in toate celulele, in peroxizomi cu exceptia eritrocitelor care nu contin aceste
organite, caz in carw ea este o enzima citoplasmatica. Caralaza are un rol protector asemanator glutation
peroxidazei.
• 9. Lipoproteinlipaza. Functie. Mecanism de actiune.KM. Enzima lipoproteinlipază (LPL) acţionează în
ţesutul adipos, muşchi scheletici, miocard, plămâni, rinichi, aortă, dar nu în ficat şi creier. Sub acţiunea
LPL sunt hidrolizate 90% din trigliceridele din chilomicroni. KM al LPL din ţesutul adipos este de 10 ori
mai mare decât în miocard. Astfel, după prânz, la un titru ridicat de trigliceride în sânge, acestea sunt
utilizate de ţesutul adipos. În perioada de foame trigliceridele aflate la o concentraţie plasmatică mult
mai mică vor putea fi utilizate numai de miocard şi muşchii scheletici.
• 10. Precursorii și etapele principale ale biosintezei nucleotidelor purinice. Biosinteza nucleotidelor
purinice cuprinde 3 etape:
• 1. Transformarea α-D-ribozo-5-fosfat în inozinmonofosfat (IMP).
• 2. Transformarea IMP în nucleozide purinice monofosfat AMP și GMP.
• 3. Fosforilarea nucleozidelor purinice monofosfat cu obținerea de nucleozide purinice di- și respectiv
trifosfat (ADP, ATP respectiv GDP, GTP).
• Moleculele precursor în procesul de sinteză contribuie fiecare cu o grupare de atomi la formarea
heterociclului purinic. Sinteza nucleotidelor purinice necesită aminoacizi (Gli, ASP) ca donori de C și N,
CO2 ca sursă de carbon și unități monocarbon transferate prin intermediul FolH4.
• 11. Catabolismul nucleotidelor purinice. Etape. Acizii nucleici sunt hidrolizaţi de nucleaze la nucleotide, acestea sunt hidrolizate de
nucleotidaze la nucleozide, iar nucleozidele sub acţiunea fosforilazelor se transformă în bazele azotate corespunzătoare şi riboză-1-fosfat.
Bazele azotate purinice sunt catabolizate la acid uric, produs greu solubil cu puternic potential antioxidant, iar bazele azotate pirimidinice
la produsi usor solubili: CO2, NH3 şi β aminoacizi (β-alanina şi acid β-aminoizobutiric).
• 12. Activatori ai cit P450. Xenobioticele sunt compuși străini corpului(medicamente, pesticide),astfel compușii cu masă moleculară mică
sunt neutralizati și eliminați prin acțiunea concentrată a mai multor sisteme enzimatice , în care inițierea e realizată de complexul
citocrom P450.
• 13. Roluri ale cit P450 in organism. Farmacogenetica citocromilor P450. Roluri:
→Biosinteza hormonilor steroizi, proces localizat la nivelul glandei suprarenale și a glandelor sexuale
→Neutralizarea și eliminarea xenobioticelor(exotoxine)
→Eliminarea produsilor de catabolism endogeni(endotoxine)
Administrarea xenobioticelor pot dezvolta reactii diferite, in functie de metabolizarea lor. Aceasta diferenta de metabolizare se explica prin
polimorfismul genelor ce codifica enzimele CYP. Astfel poate exista un:
-metabolism ultrarapid(cand exista mai multe copii ale genei CYP)
-metabolism rapid(gena normala)
-metabolism lent( gena este partial sau total inactiva)
Exista peste 300 de variante CYP. Pacientii cu metabolism lent risca o exagerare a efectelor farmacodinamice ale medicamentului si necesita
reducerea dozei de medicament. Pacientii cu metabolism rapid necesita doze crescute de medicament.
• 14. Catabolismul nucleotidelor pirimidinice. Bazele azotate primidinice sunt catabolizate la produsi solubili: CO2, NH3, si beta aminoacizi
* beta-alanina si acid beta aminoizobutiric.*
• 15. Factori ce cresc nivelul stresului oxidativ. Pg 183.
• Factori interni: activarea leucocitelor, oxidarea hemoglobinei, acrivarea xantin oxidazei, eliberarea de fier liber,activarea metabolismuui
prostaglandinelor si activarea celulelor endoteliale.
• Factori de mediu: expunerea prelungita la soare, expunerea la radiatii, contactul cu agenti carcinogeni, fumatul, medicatia contraceptiva,
exercitiile fizice excesive sau incorect executate, consumul excesiv de alcool, stresul intelectual, poluarea, agentii infectiosi, dieta
dezechilibrata
• 16. Care sunt radicalii liberi ai oxigenului.(pag 178-179). Radicalii liberi reprezinta orice specie chimica ,atom,ion, molecula capabila sa existe in
mod independent si care contin cel putin un electron neimperecheat pe un orbital exterior. Acestia sunt: *vezi la 4*.
• 17. Enzime implicate in protectia antioxidanta.
▪ Superoxid dismutaza, (=SOD) enzima antioxidanta, asigura eliminarea anionului superoxid, prima specie toxica ce se formeaza din oxigen.
▪ Catalaza este o hemoprotein ace catalizeaza reactia de desfacere a apei oxygenate in O2 si H2O. Prezenta in toate celulele cu exceptia
eritrocitelor, are rol protector asemanator glutation peroxidazei.
▪ Glutation peroxidaza localizata in citoplasma, in mitocondrie are rolul de a neutraliza apa oxigenata din celule prin transformarea ei in apa.
▪ Tioredoxinele si tioredoxin reductaza contribuie la reglarea sistemului imun.
▪ Hemooxigenaza (HO) catalizeazaconversia hemului la monoxid de carbon, biliverdina si fier.
• 18. Biosinteza nucleotidelor. Reactii de salvare. Sinteza unei nucleotide este un proces costisitor din punct de vedere energetic, fiind necesară
energia a 10 molecule ATP pentru sinteza unei molecule de AMP. Din acest motiv, într-un mod analog cu metabolismul proteic ce reutilizează
aminoacizii, în metabolismul acizilor nucleici, sunt reutilizate elementele de bază ale nucleotidelor: baze azotate şi nucleozide. În cazul
metabolismului purinelor, bazele purinice libere sunt reutilizate printr-o reacţie de fosforibozilare, prin care sunt transformate în nucleozide
monofosfat. Enzima hipoxantin-guanin fosforibozil transferază este reglată prin feed-back de concentraţiile AMP şi GMP. În cazul nucleotidelor
pirimidinice, reacţiile de salvare utilizează doar nucleozide (uridina, citidina, timidina şi d-citidina), pe care le convertesc prin fosforilare
(fosforiltransferaza ATP dependentă) în nucleotide monofosfat. În plus, enzima orotat fosforibozil transferază transformă acidul orotic liber în
orotidin monofosfat (OMP).
• 19. Etapele neutralizarii si eliminarii xenobioticelor. Faza I. Procesul prin care se realizează neutralizarea şi eliminarea xenobioticelor
cuprinde 3 faze: faza 1 de oxidare, faza 2 de conjugare si faza 3 de eliminare. Faza 1 este realizată de CYP, care acţionând ca o
monooxigenază, introduce un atom de oxigen în structura compusului xenobiotic, rezultând un derivat hidroxilat sau un epoxid. În cazul
producerii de epoxid, aceşti intermediari sunt foarte toxici, cu potenţial carcinogen şi din acest motiv, intervine imediat enzima epoxid hidratază
care rupe şi reduce ciclul epoxi cu obţinerea unui derivat hidroxilat. Pe lângă acest proces majoritar de hidroxilare, în această etapă mai pot
funcţiona şi reacţii de deaminare, dehalogenare, desulfurare sau peroxidare .
• 20. Agenti antivirali. Sunt analogi structurali ai purinelor sau pirimidinelor, in care fie sunt substituiti atomi de carbon cu halogeni(iodoxuridina,
trifluoruridina), fie componenta glucidica este modificata (vidarabina este o adeninarabinoza, aciclovirul este aciclovirguanozina, azidotimidina
este 3` azido-3`-deoxitimidina). Aciclovirul este un agent antiviral pentru herpesvirus (HSV), iar azidotimidina-AZT pentru virusul
imunodeficientei umane (HIV). Ambele substante inhiba competitive kinaze virale, transformandu-se in nucleotide aberante, blocand
activitatea AND polimerazelor virale.
• 21. In ce varianta putem elimina total radicalii liberi ai oxigenului?. ???
• 22. Enzimele implicate in reducerea nivelului de radicali liberi ai oxigenului.
▪ 1. Superoxid dismutaza (SOD) Superoxid dismutaza asigură eliminarea anionului superoxid, prima specie toxică ce se formează din oxigen,
reprezentând astfel prima linie de apărare împotriva stresului oxidativ. Pentru a funcţiona corect, este necesară prezenţa unor oligoelemente:
cupru şi zinc (pentru SOD din citosol) şi mangan (pentru SOD din mitocondrii).
▪ 2. Catalaza Catalaza este o hemoproteină ce catalizează reacţia de desfacere a apei oxigenate în oxigen şi apă. Este prezentă în toate celulele, în
peroxizomi, cu excepţia eritrocitelor care nu conţin aceste organite, caz în care ea este o enzimă citoplasmatică. Catalaza are un rol protector
asemănător glutation peroxidazei.
▪ 3. Glutation peroxidaza Este o enzimă cu localizare citoplasmatică şi mitocondrială cu rol de neutralizare a apei oxigenate din celule prin
transformarea ei în apă.
• 4. Alte enzime: Tioredoxinele şi tioredoxin reductaza, Hemoxigenaza (HO).
• 23. Metale in protectia antioxidanta.
▪ Seleniul - Acest oligoelement nu este el insusi antioxidant, dar participa la apararea organismului impotriva ROS ca si cofactor al enzimei
glutation peroxidaza
▪ Cuprul - Este unul din cofactorii enzimei superoxide dismutaza. Concentratiile crescute ale cuprului pot indica o crestere a stresului oxidative.
▪ Zincul La fel ca si cuprul, este unul din cofactorii enzimei superoxid dismutaza. De asemenea, zincul are efecti protector aupra gruparii tiol din
structura proteinelor si poate inhiba partial reactiile de producere a ROS.
• 24. Sindromul Lesch-Nyhan(pag. 168).
▪ boala congenitală gravă generată de deficitul genetic al hipoxantin-guanin-fosforibozil-transferazei ce reduce parțial sau total activitatea
enzimei=> blocarea totala a reacțiilor de salvare a nucleotidelor => amplificarea sintezei de novo a nucleotidelor(vor fi catabolizate la acid uric)
▪ asociata cu creșterea producției de purine, hiperuricemie, litiaza cu acid uric, guta => pacienții prezintă retardare mentală severa cu tulburări
de comportament caracterizate prin automutilare
▪ prognosticul pe termen lung => nefavorabil(se poate administra allopurinol pt prevenirea gutei și a calculilor urinari)
• 25. Care sunt componentele nucleotidelor din structura ARN?. Adenina, Guanina, Uracil si Citozina.
• 26. Inhibitori ai cit. P450 Inhibitia activitatii. C4P poate fi realizata de compusi diversi : inhibitori ai sintezei de C4P,
inhibitori ai sintezei hemului, CO2, medicamente, sucul de grapefruit.
• 27. Xenobiotic. Definitie. Tipuri. Surse. Xenobiotic= strain corpului , substanta neimplicata in procesele de nutritive si
sustinere al proceselor fiziologice. Pot fi: medicamente, pesticide, compusi rezultati in urma proceselor de ardere,
deseuri industrial, polimeri, coloranti din haine, chimicale din alimente.
• 28. Vitamine in protectia antioxidanta.
• Vitamina C are rolul de a proteja substraturile biologice (proteine, acizi grasi, ADN) impotriva oxidarii. La concentratii
fiziologice, vitamina C previne oxidarea fractiunii LDL-colesterolului cauzata de ROS (neutrofile activate, celule
endoteliale activate).
▪ Caracterul hidrofob al vitaminei E determina inserarea acesteia printre lipoproteinele si acizii grasi din structura
membranei celulare, unde joaca rol protector impotriva peroxidarii lipidelor determinata de stresul oxidativ. Toti
tocoferolii, in special tocoferolii α si γ au proprietati antioxidante.
• 29. Etapele neutralizarii si eliminarii xenobioticelor. Mecanism general. Procesul are 3 faze:
▪ -faza I de oxidare-realizata de CYP->are loc un proces majoritar de hidroxilare. –mai apar reactii de dezaminare,
desulfurare, dehalogenare.
▪ -faza II de conjugare- realizata de enzime( transferaze)- atasare diverse grupari chimice cu solubilitate ridicata-> creste
posibilitatea de eliminare a acestora
▪ -faza III de eliminare- 2 mecanisme-> unul pe cale urinara sau biliara( pentru produsii de conjugare din faza II cu
solubilitate crescuta) ->un mecanism ce transporta inafara celulelor xenobioticele nemodificate, intrate datorita
hidrofobicitatii.
• 30. Transformarea ribonucleozideor in dezoxiribonucleozide. Dezoxiribonucleozidele se obtin prin reactia de reducere
a gruparii hidroxil din pozitia 2 a ribozei ribonucleozidelor difosfat. Pentru aceasta, ribonucleozidele monofosfat sunt
fosforilate la forma difosfat apoi sunt transformate prin actiunea catalititca a unui complex enzimatic numit
ribonucleotic reductaza.
• 31. Surse endogene de radicali liberi ai oxigenului.
• 1.Lanțul respirator este responsabil de conversia oxigenului în două molecule de apă, în cazul procesului, 0,4-4% din oxigen evolueaza spre
ROS.
• 2.Enzimele ce contribuie la producerea de O2( xantin oxidaza)
• 3.La nivelul neutrofilelor, în procesul fagocitozei, sursa majoră de O2 este un complex enzimatic NAD(P)H oxiază.Pe lângă acest proces și
anticorpii pot genera ROS, atunci când se leagă de antigen.
• 4.Unele enzime metabolic active gnereaza ion superactiv O2 ca parte a funcției lor normale (ex. enzimele citocromului P450).
• 5.Ciclooxigenaza poate genera O2ca parte a metabolismului acidului arahidonic.
• 6.Prin autooxidarea unor molecule cum ar fi gliceraldehida, FMNH2, FADH2, adrenalina, dopamina, sau a moleculelor care conțin tiol
(cisteina).
• 32. Acidul uric. Acidul uric este produsul final al catabolismului bazelor purinice, atât a celor endogene, cât și din cele alimentare.Zilnic se
constituie o rezerva de 1 g.75% este excretat prin urină,iar restul este secretat la nivelul tractului gastro-intestinal unde este degradat pâna la
alantoină. Acidul uric este un compus puțin solubil, solubilitatea crescând la trecerea sub formă de urat.Depunerile de urat se previn prin
alcalinizarea urinii. Concentrația acidului uric plasmatic este mai mare la persoanele care au o dietă bogată în proteine,acizi nucleici, precum și
la consumatorii de alcool.
• 33. Masuri de protectie antioxidanta luate de organismele ce utilizeaza oxigen. Aceste masuri de protectie sunt formate din: enzime
(catalaze, glutation peroxidaze), proteine transportoare de Cu si Fe (feritina, transferina, ceruloplasmina), molecule mici antioxidante (
glutation, bilirubina, glucoza, vit E) si oligoelemente ( Cu, Zn) indispensabile activitatii enzimelor antioxidante.
• 34. Etapele neutralizării și eliminării xenobotanicelor.Faza II. Faza II de conjugare realizează de mai multe tipuri de enzime de tip transferaze
care atașează de compusul activat în faza I diverse grupări chimice cu solubilitate ridicată, fapt ce crește polaritatea compusului și astfel
posibilitatea de eliminare a acestuia.Aceste enzime sunt: -glucuronil-transferazelece atașează un rest de acid glucuronic de la donorul UDPacid
glucuronic -sulfokinazele atașează un rest sulfat de la donorul PAPS (3-fosfoadenozin-5- fosfosulfat.
• 35. Citostatice. Citostaticele sunt substante cu rol de inhibitori ai enzimelor importante implicate in metabolismul nucleotidelor. Se impart in:
Antimetaboliti, Antifolati, Antagonistii glutaminei, Agenti antivirali.
• 36. Glutationul. Este un tripeptid format din acid glutamic, cisteina si glicocol. Glutationul redus (GSH)
serveste ca substrat glutation peroxidazei si influenteaza expresia genelor ce codeaza unele proteine pro-
si antiinflamatorii. Prin scaderea concentratiei GSH scade si capacitatea de aparare a organismului. GSH
este oxidat la GSSG (glutation oxidat) in cursul stresului oxidativ.
• 37. De ce apariția oxigenului în atmosferă poate fi considerat evenimentul hotărâtor al evoluției vieții pe
Pământ?. Utilizarea oxigenului ca agent oxidant a realizat oxidarea completă a substratelor organice, cu
eliberarea unor mari cantități de energie, ce au putut constitui suportul energetic a unor procese
fiziologice din ce în ce mai complexe.O ilustrare a saltului energetic o constituie oxidarea glucozei: În
condiție aerobă: Glucoză+6O2+36ADP+36Pi+→6 CO2+6 H2O+36 ATP Glucoza este oxidată complet la CO2
și H2O, eliberâdu-se astfel 100% din energia conținută. Pentru a obține acest surplus energetic,
organismele au trebuit sa facă față agresivității acestui agent oxidant.În acest sens au dezvoltat structuri
specializate ca hemoglobina, mioglobina, citocromii pentru transportul și utilizarea oxigenului.S-a realizat o
compartimentare a utilizării oxigenului în organite speciale:mitocondrie, lizozomi, peroxizomi.
• 38. Emunerați biotransformările din organism în care este implicat P450.
• 1.Hidroxilare alifatică
• 2.Hidroxilare aromatică
• 3.Epoxidare
• 4.Reacții de dealchilare (O-dealchilare, N-dealchilare)
• 5.Deaminare
• 6.Reacții de N-oxidare (amine primare, secundare, terțiare)
• 7.Sulfoxidare
• 8.Desulfurare
• 9.Declorinare.
• 39. Precursorii și etapele principale ale biosintezei nucleotidelor
pirimidinice. Carbamil-fosfat + acid aspartic→acid carbamil aspartic→acid
dihidroxiorotic→acid orotic→orotidin-monofosfat (OMP)→uridin-monofosfat (UMP).
• 40. Explicatia flexibilitatii si eficacitatii sistemului Cit P450. Flexibilitatea si
eficacitatea sistemului Cit P450 este o adaptare evolutiva a omului. Exista o lupta
continua pentru supravietuire intre regnul animal si cel vegetal. Astfel plantele s-au
adaptat de-a lungul evolutiei prin producerea de metode de aparare cum sunt
substantele toxice pentru a descuraja posibilii consumatori. Astfel animalul cu cel
mai adaptabil metabolism va castiga aceasta lupta, avand acces la mai multe surse
de hrana! Aceasta adaptabilitate este data de Cit P450.