Ministerul Sănătății, Muncii și Protecției Sociale al Republicii Moldova

Universitatea de Stat de Medicină și Farmacie „Nicolae Testemițanu”

FACULTATEA MEDICINĂ GENERALĂ

REFERAT

Oxidarea microzomială. Rolul citocromului P450.

Moisei Tatiana,
Anul I, grupa M2125
Profesor metodist: Martîn Cristina

Chișinău 2021
 Cuprins

Scopul lucrării. Materiale și metode

........................................................................3

Capitolul 1. Oxidare microzomiala.Citocrom P450.Generalitati...................4

1.1 Definiția .............................................................................................4

1.2 Structura Citocromului P450.............................................................4
1.3 Clasificarea enzimelor ........................................................................................4
Capitolul 2. Rolul enzimelor , tipuri și funcții ........................5

2.1 Tipurile de citocrom P450 la om .............................................5

2.2 Funcțiile citocromului P450 ...............................................................6

2.3 Rolul citocromului P450................................................

Capitolul 3.Citocromul P450 – rectiile,dualitate si metabolizm.......................7

3.1 Oxigenazele. Citocromul P450 şi reacţiile de oxido-reducere..........................7

3.2 Transferul de electroni de la citocromul P450

3.4Activitatea catalitică a citocromului P450

Recomandări și concluzii
.........................................................................................9

Bibliografie .............................................................................................................1
0
Scopul lucrării :

Studierea clasificării, funcțiilor si rolurilor citocromului P450. Identificarea

componentelor localizării enzimelor markeri, determinarea activității enzimelor în
diagnosticul diferitor afecțiuni. Prevenirea carenței de enzime, respectarea
recomandarilor pentru o viațăsănătoasă.

Materiale și metode :

A fost realizată o lucrare decriprivă, în baza consultării literaturii de specialitate,

surselor on-line, bibliotecii. Selectarea informației utile, interesante și captivante,
consultând surse respective, în urma utilizării termenilor cheie “enzime”,
“citocrom”, “rol”, “funcție” au fost propuse enunțuri descriptive, care au format un
discurs demn.
 Introducere

Sistemul de oxidază cu funcție mixtă a citocromului P450 joacă un rol major în

metabolismul unor substraturi endogene importante, cum ar fi biosinteza
colesterolului și conversia colesterolului în acizi biliari, formarea hormonilor
steroizi, androgeni și estrogeni, metabolismul vitaminei D3 la substanța activă
1,25- dihidroxivitamina D3, hidroxilarea omega a acizilor grași, precum și
biotransformarea xenobioticelor exogene. Eficacitatea biologică și toxicitatea
potențială a multor medicamente sunt puternic influențate de metabolismul lor, o
mare parte din care este realizată de sistemele de monooxigenază dependente de
P450. Gama largă de reacții chimice efectuate de P450 face ca această enzimă să
fie unul dintre cei mai versatili catalizatori cunoscuți. Ficatul, plămânul și pielea
microzomală P450 în special sunt importante în transformarea xenobioticelor
lipofile, inclusiv medicamentele, insecticidele, agenții cancerigeni, aditivii
alimentari și poluanții de mediu în compuși mai polari care sunt mai ușor de
excretat. CYP-urile intestinale, în special CYP3A4, pot fi foarte importante în
promovarea metabolismului de prim pasaj al multor medicamente. Deoarece mulți
dintre acești compuși își pierd activitatea sau potența după ce au fost metabolizați
în metaboliți polari și excretabili, P450 a fost considerat a fi important ca sistem de
detoxifiere celulară. Cu toate acestea, cu anumiți compuși, deși xenobioticul
părinte nu este toxic, metabolismul prin sistemul P450 poate genera intermediari
reactivi care sunt foarte toxici, de ex. CCL4, nitrozamine și acetaminofen.

Termenul P450 desemnează o familie largă de proteine care conțin hem găsite în
bacterii, drojdii, plante, nevertebrate și vertebrate. Aproximativ 150 de forme de
P450 au fost identificate și o nomenclatură bazată pe omologia structurală, în mare
parte dedusă din ADNc-urile corespunzătoare este utilizată pentru a clasifica aceste
forme multiple de P450 [1]. Nomenclatura se bazează pe relațiile evolutive dintre
enzimele CYP450 și nu pe similaritatea profilurilor de substrat din cauza
profilurilor de substrat suprapuse ale multor enzime CYP și a capacității mai
multor CYP de a modifica un singur substrat la același sau chiar la diferite locuri
[2]. Multe studii in vitro care utilizează fracții microzomale izolate sau hepatocite
sau linii celulare intacte au furnizat informații critice și de bază despre
metabolismul medicamentelor de către CYP, în ciuda limitărilor relativ scurte ale
unor astfel de sisteme, inclusiv lipsa conjugării și a altor enzime citosolice,
pierderea CYP-urilor în cultură, limitată. numărul de funcții hepatice exprimat,
niveluri mai scăzute de CYP în comparație cu in vivo. Studiile de îmbunătățire a
unor astfel de sisteme in vitro pentru a reflecta mai bine starea in vivo reprezintă
un front de cercetare important.
 Capitolul 1. Enzime generalități

1.1 Definiția citocrom P450

Oxidarea microzomală este o cascadă de reacții care intră în prima fază a

transformării xenobiotice. Esența procesului este hidroxilarea substanțelor care
utilizează atomi de oxigen și formarea apei. Aceasta schimbă structura
substanței originale, iar proprietățile sale pot fi suprimate și întărite. Oxidarea
microzomală ne permite să procedăm la reacția de conjugare. Aceasta este a
doua fază a transformării xenobioticelor, la sfârșitul căreia moleculele produse
în interiorul organismului se vor alătura grupului funcțional deja existent.
Uneori se formează substanțe intermediare care cauzează deteriorarea celulelor
hepatice, necroza și degenerarea țesutului canceros.

Citocrom P450- o enzimă oxidarea microsomală, o proteină care conține

heme. Legați oxigenul și substratul (de obicei, un xenobiotic). Numele său este
asociat cu absorbția luminii cu lungimea de undă de 450 nm. Biologii l-au găsit
în toate organismele vii. În prezent, mai mult de unsprezece mii de proteine
sunt incluse în sistemul citocromului P450. În bacterii, această substanță este
dizolvată în citoplasmă și se crede că această formă este cea mai evolutivă
antică decât la om.

Enzimele din acest grup sunt implicate în schimbul de steroizi, acizii biliari și
acizi grași, fenolii, neutralizarea medicamentelor, otrăvurile sau drogurile.

1.2 Structura citocromului P450

Greutatea moleculară a diferitelor cit. P450 variază de la 44 la 60 kDa.

Monomerii hemoproteici constau dintr-un singur lanț polipeptidic care conține 45

până la 55% resturi de aminoacizi nepolari.

Secvența completă de aminoacizi a fost stabilită pentru peste 150 cit. P450.

Structura tridimensională a cit.A fost studiată în detaliu cu ajutorul cristalografiei

cu raze X. P450 din P. putida. Proteina conține 414 reziduuri de aminoacizi, M.m.
- 47 kDa, este o prismă asimetrică cu baza de 3,0 nm și laturi de 5,5 și 6,0 nm.

Cit. P450 din P. putida contine

4 regiuni elicoidale antiparalele, un amestec de elice și structuri dezordonate

intercalate cu structuri beta paralele.

Hem este situat între două spirale paralele.

Reziduurile Arg-112, Arg-229 și His-335 interacționează cu grupările propionice

ale hemului. Alți aminoacizi din jurul hemului sunt nepolari. Hema nu iese la
suprafața moleculei. Cea mai mică distanță de la suprafață la hem este de
aproximativ 0,8 nm.

Toți citocromii de membrană P450 de pe fragmentul N-terminal al lanțului

peptidic au o regiune hidrofobă scurtă care conține de la 12 la 21 de resturi de
aminoacizi. Acționează ca o peptidă ancoră și conține o secvență semnal
responsabilă de inserarea unei proteine în membrană. Este urmată de o secvență de
semnal stop care oprește încorporarea peptidei în stratul dublu fosfolipidic.

1.3 Clasificarea enzimelor

Toți citocromii și genele care codifică sinteza lor sunt denumite conform
următoarelor linii directoare:

numele citocromului trebuie să indice rădăcina CYP;

numele genei care codifică sinteza citocromului corespunzător conține și CYP, dar
este scris cu caractere cursive;
citocromii sunt împărțiți în familii (desemnate prin numere), subfamilii (desemnate
prin litere) și izoforme (desemnate prin numere care reflectă numărul genei
codificatoare).

De exemplu, CYP 2 D 6 aparține celei de-a doua familii, subfamiliei D, codificată

de gena 6. Numele genei în sine arată ca CYP 2 D 6.

Capitolul 2. Rolul enzimelor , tipuri și funcții

2.2 Funcțiile citocromului P450

Un citocromului P450 monooxygenase implicate în metabolismul acizilor grasi,

steroizi și retinoizi
Mecanic, utilizeaza oxigen molecular introduce un atom de oxigen în substrat, și
reducerea cea de-a doua într-o moleculă de apă, cu doi electroni furnizate de
NADPH prin intermediul citocromului P450 reductaza (NADPH--hemoproteină
reductaza)
Catalizează epoxidation de legături duble de acizi grași polinesaturați (PUFA) (

Metabolizeaza endocannabinoid arachidonoylethanolamide (anandamida) la 20-

hydroxyeicosatetraenoic acid ethanolamide (20-HETE-EA) și 8,9-, 11,12-și 14,15-
epoxyeicosatrienoic acid ethanolamides (EpETrE-EAs), potențial modularea
endocannabinoid sistem de semnalizare
Catalizează hidroxilarea de carbon-hidrogen. Metabolizeaza colesterol spre 25-
hydroxycholesterol, fiziologic regulator de celular de colesterol homeostaziei
Catalizează oxidativ transformări de toate-trans-retinol a all-trans retinal, un
precursor pentru forma activă all-trans-retinoic acid
De asemenea implicat in metabolismul oxidativ de medicamente, cum ar fi
antiaritmice, antagoniști adrenergici, și antidepresive triciclice.

2.3 Rolul citocromului P450

Rolul: plastic şi dezintoxicare. 

În ficat – hidroxilarea medicamentelor, neutralizarea toxinelor, hormonilor (sunt
eliminaţi). 

În medulosuprarenale – sinteza noradrenalinei şi adrenalinei. 

În corticosuprarenale – sinteza colesterolului, hormonilor gluco- şi

mineralocorticoizi.

Capitolul 3.

3.1 Oxigenazele. Citocromul P450 şi reacţiile de oxido-reducere

Aproape 90% din O, este redus de complexul citocromoxidazic aar Unele ţesuturi
conţin enzime ce catalizează reacţii de oxido-reducere în care atomii de oxigen se
includ nemijlocit în molecule şi fonnează grupa OH sau carboxilică - COOH.
Enzimele ce catalizează tipul dat de reacţii se numesc oxigenaze. Dioxigenazele
sunt enzime ce catalizează reacţii care includ în molecula substratului organic
ambii atomi de 0 2, exp: pirocatehaza. Monooxigenazele reprezintă enzime ce
catalizează reacţii de includere a unui atom de 0 2, celălalt fiind redus la H ,0.
Acestc enzime necesită două substraturi-unul adiţionează un atom, iar al doilea-
cosubstratul este donator de H pentru reducerea atomului de O, la H,0: AH + BH2
+ 0 2 —^ AOH + В + H20 ‘ Primul substrat se hidroxilează, de aceea enzimele
sunt denumite şi hidroxilaze; monooxigenazele se divizează în subclase în
dependenţă de natura cosubstratului (FMN, FAD, NAD, NADP, a-cetoglutarat).
Numeroase şi complexe sunt reacţiile de oxido-reducere, cu participarea
citocromului P450 (prezent în reticulul endoplasmatic). Acest citocrom poate
interacţiona cu 0 2 şi cu СО, formînd cu ultimul un complex ce absoarbe lumina la
450 nm.
Citocromul P450 catalizează reacţiile de hidroxilare a substratului (RH —»- ROH),
iar celălalt se reduce la H20 , adiţionînd echivalenţi reduşi ai NADH, NADPH sau
proteine fiero-sulf

3.2 Transferul de electroni de la citocromul P450

Reducerea echivalenților fie din NADH, fie din NADPH sunt necesare pentru ca
P450 să activeze oxigenul molecular pentru oxidarea ulterioară cu funcții mixte.
Primul sistem P450 care a fost purificat și reconstituit din componentele sale
moleculare a fost sistemul 11 β-hidroxilază al mitocondriilor cortexului suprarenal
[16]. Acest sistem a fost separat într-o fracțiune de membrană care conține P450 și
o activitate solubilă a reductazei NADPH-P450; acesta din urmă s-a rezolvat în
continuare într-o proteină fier-sulf și o flavoprotein reductază și secvența

NADPH → flavoproteină → proteină sulf de fier → P450

a fost stabilit [16]. O cale similară de transfer de electroni care a folosit NADH în
locul NADPH a fost găsită pentru sistemul de hidroxilază camfor al bacteriei
Pseudomonas putida [17]. Proteinele cu sulf de fier, deși sunt necesare pentru
reducerea electronilor P450 mitocondriale, nu sunt implicate în reducerea
microzomală a electronilor P450. Sistemul de metabolism microzomal al
medicamentelor conține două componente majore, P450 și reductorul acestuia,
NADPH citocrom P450 reductază [18] (Fig. 4). Citocromul P450 reductază
microzomal de mamifer conține 2 moli de flavină, un FAD și un FMN, per mol de
enzimă reductază. Activitatea NADPH-citocromului P450 reductazei poate fi
testată prin capacitatea sa de a reduce alți acceptori, de obicei citocromul feric c, ca
urmare a creșterii absorbanței la o lungime de undă de 550 nm, așa cum este
descris în [7]. Reductaza este, de asemenea, activă în furnizarea de echivalenți
reducători pentru activitatea hemo-oxigenazei microzomale. O revizuire recentă a
rolurilor reductazei în fiziologie, farmacologie și toxicologie poate fi găsită în [19].

Fig. 5. Spectrul de absorbție al citocromului b5 microzomal. Linia continuă este

spectrul pentru citocromul b5 oxidat cu un vârf la 412 nm. Linia întreruptă este
spectrul de absorbție după reducerea cu ditionit, cu un vârf la 423 nm. Citocromul
b5 redus nu leagă CO.
Fig. 4. Transferul de electroni în citocromul P450. NADPH este reductorul preferat
pentru citocromul microzomal P450. Electronii sunt trecuți de la NADPH la
cofactorul FAD al reductazei, care trece electroni la cofactorul FMN, care apoi
reduce hemul P450. NADH este mai puțin eficient decât NADPH în reacția cu
reductaza P450 și reducerea P450. NADH reduce eficient componenta FAD a
NADH-citocromului b5 reductazei care apoi reduce a doua enzimă hem majoră din
microzomi, citocromul b5. Sistemul este important în desaturarea acizilor grași. Cu
toate acestea, nu este foarte eficient, în comparație cu reductaza NADPH
citocromului P450 în reducerea hemului citocromului P450. Pentru reducerea
citocromului mitocondrial P450, sunt necesare proteine cu sulf de fier. Schema
descrie rolurile adrenodoxinei reductazei FAD în reducerea proteinei adrenodoxină
fier-sulf și, ulterior, a citocromului mitocondrial P450.

3.3 Activitatea catalitica a citocromului P450

aici există o diversitate extraordinară în reacțiile catalizate de citocromul P450,
care poate fi unul dintre cei mai versatili catalizatori cunoscuți [30], [31], [32],
[33]. Reacțiile catalizate de P450 pot fi clasificate în linii mari ca: metabolismul
constituenților endogeni incluzând steroizi, colesterol, acizi biliari, vitamine, acizi
grași și eicosanoizi; conversia xenobioticelor exogene lipofile în produse mai
polare care pot fi conjugate cu produse mai solubile pentru detoxifiere și
îndepărtare din organism și metabolismul anumitor xenobiotice precum CCL4,
acetaminofen, benzen, halotan și nitrozamine în produse mai reactive care sunt
toxice sau cancerigene. Conversia medicamentelor în produse toxice ca o
consecință a metabolismului de către sistemul de oxidază microzomală cu funcții
mixte este un motiv major pentru eșecul multor medicamente în studiile pre și post
clinice [34], [35], [36].

Reacțiile oxidative care sunt catalizate de enzimele P450 au fost caracterizate și

discutate de Guengerich și colegii [34], [37], [38] iar cele reprezentative sunt
prezentate în Fig. 8 – hidroxilări alifatice, hidroxilare aromatică, epoxidare, N-
dealchilare, O-dealchilare, S-dealchilare, N-hidroxilare, dezaminare oxidativă,
denitrozare oxidativă, dehalogenare oxidativă, desulfurare oxidativă, sulfoxidare.
P450 poate cataliza, de asemenea, reacții reductive în condiții anaerobe sau
hipoxice, de ex. nitroreducerea nitropirenelor, reducerea azo (aminoazobenzen),
dehalogenarea reductivă a CCL4 la radicalul triclorometil. Acesta din urmă joacă
un rol critic în utilizarea CCL4 în reacțiile toxicologice pentru a provoca
peroxidarea lipidelor urmată de afectarea ficatului, fibroză și ciroză. În general,
unele dintre aceste reacții pot fi efectuate printr-o formă de P450, în timp ce altele
pot fi efectuate prin mai multe forme. Unele substraturi pot fi oxidate de o formă
de P450 la o concentrație scăzută, dar o altă formă la o concentrație mare, de ex.
nivelurile scăzute de N,N-nitrozodimetilamină care induce cancer sunt demetilate
de CYP2E1 (demetilază cu Km scăzut), în timp ce concentrațiile mai mari sunt
demetilate de mai multe P450, inclusiv CYP 2B1 și 2B2 [39]. Caracteristicile
structurale necesare pentru ca un substrat să fie oxidat de un anumit P450 nu sunt
încă clare, în ciuda multor investigații.

Fig. 8. Tipul general de reacții catalizate de enzimele citocromului P450. Alte

reacții, care nu sunt prezentate, includ migrarea arii, contracția inelului, formarea
inelului, cuplarea inelului, formarea dimerului, migrarea grupului (prezentată în
Ref. [33]).

Recomandări și concluzii

De-reținut!
A fi sanatos sau a fi bolnav nu reprezinta stari care se obtin instantaneu, ci sunt
rezultatul stilului nostru de viata. Viata agitata mancarea de fast-food, abuzul
de mancare gatita, bogata in grasimi saturate, odihna si hidratarea
necorespunzatoare. Din fericire, lucrurile sunt reversibille si pot fi indreptate.
Primul pas, farfuria noastra, desigur cu vointa si cu perseverenta, cu cat mai
timpuriu, cu atat mai bine.
Concluzii

Pe parcursul realizării acestei lucrări am studiat clasificarea, funcțiile și rolurilor

enzimelor markeri în țesuturi și organe. Am identificat componentele localizării
enzimelor markeri, am determinat activitatea enzimelor în diagnosticul diferitor
afecțiuni. Am determinat metodele de prevenire a carenței de enzime.

A fost realizată o lucrare decriprivă, în baza consultării literaturii de specialitate,

surselor on-line, bibliotecii. Selectarea informației utile, interesante și captivante,
consultând surse respective, în urma utilizării termenilor cheie “enzime”,
“marker”, “rol”, “funcție” au fost propuse enunțuri descriptive, care au format un
discurs demn.

oncluzii

Din cauza multor dintre factorii descriși mai sus care modulează nivelurile de
CYP, precum și polimorfismele multor CYP, există o mare variabilitate a
conținutului de CYP care metabolizează xenobioticul în familiile 1, 2 și 3 din
ficatul uman, ceea ce reprezintă probabil variabilitatea mare în oxidarea
medicamentelor de către oameni. Guengerich a evaluat nivelurile de CYP 1A2,
2E1 și 3A4 în 18 probe de ficat uman [37]. Au existat diferențe de 5-10 ori în
nivelurile fiecăruia dintre cele 3 CYP între cele 18 eșantioane [37]. Din cauza
acestei variații a nivelurilor unui anumit P450, a prezenței mai multor CYP cu
specificitate de substrat suprapusă și a capacității unui CYP de a metaboliza multe
substraturi distincte structural, există specificități extinse de substrat care se
suprapun, care probabil contribuie la interacțiunile medicament-medicament și la
medicamente adverse. reacții [97]. Încercările de a minimiza astfel de efecte
adverse vor necesita studii suplimentare privind relațiile structură-funcție ale
enzimelor CYP, informații suplimentare despre legăturile dintre polimorfismele
CYP și boală/toxicitate, identificarea care sunt substraturile pentru CYP-urile
orfane [98] și dezvoltarea modelelor bioinformatice pentru a prezice. dacă anumite
medicamente și substanțe chimice pot fi toxice sau cancerigene sau acționează
pentru a induce un CYP. Dezvoltarea CYP-urilor de proiectare care pot fi utile în
îndepărtarea toxinelor, poluanților, petrolului etc. și a CYP-urilor de inginerie
pentru a-și extinde capacitățile catalitice, așa cum se discută în Ref. [[99], [100] ar
putea extinde și mai mult activitățile acestuia

Bibliografie

 https://www.invitro.md/pagins/analis-page/204
 https://www.reginamaria.ro/utile/dictionar-de-analize/fosfataza-acida-totala
 https://ro.warbletoncouncil.org/succinato-deshidrogenasa-5274
 https://ro.wikipedia.org/wiki/Enzim%C4%83#Rol_
%C3%AEn_cadrul_organismelor
 file:///D:/Tabelul%201.%20Enzime%20utilizate%20%C3%AEn%20calitate
%20de%20markeri%20%C3%AEn%20timpul%20frac%C8%9Bion
%C4%83rii%20%C8%9Besuturilor_celulelor%20Componenta%20Marker
%20Componenta%20Marker%20Nucleu.pdf
 https://www.helpnet.ro/enzimele-esentiale-pentru-sanatate
 „Biochimie pentru Asistenti Medicali, Blaneofiziokinetoterapie si
Recuperare Medicala, Radiologie si Imagistica Medicala” – Lucia Maria
Procopciuc 2016
 „Curier medical” – Revista societatilor medicale din Republica Moldova /
Publicatie stiintifico-practica, fondata in 1958.
 „Actualitati in hepatologie” – Dr. Coriolan Brad
 „Biochimie clinica / Implicatii practice”, Editia a II-a – Miodora Dobreanu.

10