OXIDAREA MICROZOMIALĂ.

ROLUL CITOCROMULUI P450.

A ELABORAT: MOISEI TATIANA, GR.M2125

PROFESOR: MARTÎN CRISTINA
 CUPRINS:
• Scopul lucrării. Materiale și metode
• Capitolul 1. Oxidare microzomiala.Citocrom P450.Generalitati
• Definiția
• Structura Citocromului P450
• Clasificarea enzimelor
• Capitolul 2. Rolul enzimelor , tipuri și funcții
• 2.1 Funcțiile citocromului P450
• 2.3 Rolul citocromului P450
• Capitolul 3. Citocromul P450 – reactiile,transfer si activitatea catalitica
• 3.1 Mecanism de reactie 3.2 Oxigenazele. Citocromul P450 şi reacţiile de oxido-reducere
• 3.3 Transferul de electroni de la citocromul P450
• 3.4 Activitatea catalitică a citocromului P450
• Recomandări și concluzii .
• Bibliografie
• Scopul lucrării :
• Studierea clasificării, funcțiilor si rolurilor citocromului P450.
Identificarea componentelor localizării enzimelor markeri, determinarea
activității enzimelor în diagnosticul diferitor afecțiuni. Prevenirea
carenței de enzime, respectarea recomandarilor pentru o viațăsănătoasă.

• Materiale și metode :
• A fost realizată o lucrare decriprivă, în baza consultării literaturii de
specialitate, surselor on-line, bibliotecii. Selectarea informației utile,
interesante și captivante, consultând surse respective, în urma utilizării
termenilor cheie “enzime”, “citocrom”, “rol”, “funcție” au fost propuse
enunțuri descriptive, care au format un discurs demn.
 DEFINIȚIE:
Oxidarea microzomială este o cascadă de reacții care intră în prima fază a transformării
xenobiotice. Esența procesului este hidroxilarea substanțelor care utilizează atomi de oxigen și
formarea apei. Aceasta schimbă structura substanței originale, iar proprietățile sale pot fi
suprimate și întărite. Oxidarea microzomală ne permite să procedăm la reacția de conjugare.
Aceasta este a doua fază a transformării xenobioticelor, la sfârșitul căreia moleculele produse
în interiorul organismului se vor alătura grupului funcțional deja existent.

Citocrom P450- Familia citocromului P450 (prescurtată ca CYP ,

P450 și, foarte frecvent, CYP450 ) este o superfamilie enzimatică de
hemoproteine prezente în toate domeniile aparținând subclasei
enzimatice a oxidază cu funcție mixtă (sau monooxigenază).
Citocromii P450 sunt principalii actori implicați în detoxifierea
organismului, putând acționa asupra unui număr mare de substraturi
diferite, atât exogene (medicamente și toxine de origine externă), cât și
endogene (deșeuri ale organismului).
 Structura citocromului P450

și conține o secvență semnal responsabilă

constau dintr-un singur lanț de inserarea unei proteine ​în membrană
polipeptidic

Proteina conține 414 reziduuri

regiune hidrofobă scurtă care de aminoacizi
conține de la 12 la 21 de resturi Citocrom
de aminoacizi P450
Este urmată de o secvență de semnal
stop care oprește încorporarea peptidei
Greutatea moleculară a în stratul dublu fosfolipidic
diferitelor cit. P450 variază de
la 44 la 60 kDa.

4 regiuni elicoidale antiparalele, un amestec de elice și structuri

dezordonate intercalate cu structuri beta paralele.
 CLASIFICAREA ENZIMLOR

izoforme
(desemnate prin subfamilii
familii (desemnate
numere care reflectă (desemnate prin
prin numere),
numărul genei litere)
codificatoare).
De exemplu, CYP 2 D 6 aparține celei de-a
doua familii, subfamiliei D, codificată de
gena 6. Numele genei în sine arată ca e
CYP 2 D 6.
 FUNCȚIILE CITOCROMULUI P450
• Сitocromul P450 este ‘implicat în metabolismul acizilor grasi, steroizi și retinoizi
• Mecanic, utilizeaza oxigen molecular introduce un atom de oxigen în substrat, și reduce cea
de-a doua într-o moleculă de apă, cu doi electroni furnizati de NADPH prin intermediul
citocromului P450 reductaza (NADPH--hemoproteină reductaza)
• Catalizează epoxidarea de legături duble de acizi grași polinesaturați (PUFA)
• Catalizează hidroxilarea de carbon-hidrogen. Metabolizeaza colesterol spre 25-
hydroxycolesterol, fiziologic regulator celular de colesterol in homeostaza
• Catalizează oxidativ transformări de toate-trans-retinol a all-trans retinal, un precursor pentru
forma activă all-trans-retinoic acid
• De asemenea implicat in metabolismul oxidativ de medicamente, cum ar fi antiaritmice,
antagoniști adrenergici, și antidepresive triciclice.
 ROLUL CITOCROMULUI P450
• În corticosuprarenale – sinteza colesterolului, hormonilor gluco- şi
În corticosuprarenale mineralocorticoizi.

• sinteza noradrenalinei şi adrenalinei. 

În medulosuprarenale
• hidroxilarea medicamentelor, neutralizarea toxinelor, hormonilor
În ficat (sunt eliminaţi

plastic şi • detoxifierea organismului, putând acționa asupra unui număr mare

de substraturi diferite, atât exogene (medicamente și toxine de
dezintoxicare origine externă), cât și endogene (deșeuri ale organismului).
 MECANISM DE REACTIE A
CITOCROMULUI P450
Centrul de reacție catalitică al citocromului P450 este centrul hemo-tiolatului , foarte
conservat în toate izoformele cunoscute, conținând o grupă hem în care un atom de fier
este legat necovalent de sulful unui reziduu de cisteină
Mecanismul de acțiune al citocromului diferă în funcție de
tipul reacției catalizate, dar poate fi rezumat schematic în
șase etape:

•[
legarea substratului la citocromul P450;
-reducerea atomului de fier al grupului hem
cu electroni furnizați de NADH sau NADP
(H);
-legarea oxigenului molecular de citocrom;
-transferul unui al doilea electron;
-formarea unei molecule de apă;
-cataliza reacției specifice.
•

Substratul se leagă de locul activ al enzimei, în vecinătatea grupului

hem, pe partea opusă a lanțului peptidic. Substratul legat induce o
schimbare a conformației sitului activ, îndepărtând adesea o moleculă de
apă din poziția de coordonare axială distală a fierului [6] și schimbând
uneori starea fierului hemului de la fundamental la excitat . [7]
 TRANSFERUL DE ELECTRONI DE LA CITOCROMUL
P450

• Reducerea echivalenților fie din NADH, fie din NADPH sunt necesare pentru ca P450 să
activeze oxigenul molecular pentru oxidarea ulterioară cu funcții mixte. Primul sistem P450
care a fost purificat și reconstituit din componentele sale moleculare,Acest sistem a fost
separat într-o fracțiune de membrană care conține P450 și o activitate solubilă a reductazei
NADPH-P450; acesta din urmă s-a rezolvat în continuare într-o proteină fier-sulf și o
flavoprotein reductază și secvența. Sistemul de metabolism microzomal al medicamentelor
conține două componente majore, P450 și reductorul acestuia, NADPH citocrom P450
reductază [18] (Fig. 4
 Fig. 5. Spectrul de absorbție al citocromului b5
microzomal. Linia continuă este spectrul pentru citocromul
b5 oxidat cu un vârf la 412 nm. Linia întreruptă este
spectrul de absorbție după reducerea cu ditionit, cu un vârf
la 423 nm. Citocromul b5 redus nu leagă CO.
Fig. 4. Transferul de electroni în citocromul P450.
NADPH este reductorul preferat pentru citocromul
microzomal P450. Electronii sunt trecuți de la NADPH la
cofactorul FAD al reductazei, care trece electroni la
cofactorul FMN, care apoi reduce hemul P450.
ACTIVITATEA CATALITICA A CITOCROMULUI P450

• Reacțiile oxidative care sunt catalizate de enzimele P450 au

fost caracterizate și discutate de Guengerich și colegii [34],
[37], [38] iar cele reprezentative sunt prezentate în Fig. 8 –
hidroxilări alifatice, hidroxilare aromatică, epoxidare, N-
dealchilare, O-dealchilare, S-dealchilare, N-hidroxilare,
dezaminare oxidativă, denitrozare oxidativă, dehalogenare
oxidativă, desulfurare oxidativă, sulfoxidare.
 •
Fig. Fig. 8.general de reacții catalizate de enzimele citocromului P450. Alte reacții, care nu sunt
8. Tipul
prezentate, includ migrarea arii, contracția inelului, formarea inelului, cuplarea inelului, formarea
dimerului, migrarea grupului (prezentată în Ref. [33]).
 Concluzii

• Pe parcursul realizării acestei lucrări am studiat clasificarea, funcțiile și

rolul citocromului P450 in țesuturi și organe. Am identificat componentele
localizării CYP, am determinat activitatea citocromului .
• Din cauza multor dintre factorii descriși mai sus care modulează
nivelurile de CYP, precum și polimorfismele multor CYP, există o mare
variabilitate a conținutului de CYP care metabolizează xenobioticul în
familiile 1, 2 și 3 din ficatul uman, ceea ce reprezintă probabil
variabilitatea mare în oxidarea medicamentelor de către oameni