Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Facultatea de Inginerie
Sectia: Inginerie Chimica
- 2008 -
Cuprins
1. Enzimele …………………………………………………..3
2. Preparate enzimatice…………………………………......6
4. Bibliografie…………………………………………………14
2
1. Enzimele
3
specificitate de actiune; asigura coordonarea, reglarea si controlul proceselor biochimice
la care participa.
4. Liaze - catalizează scindarea legăturilor din molecule pe alte căi decât în prezenţa apei.
4
trebuie să fie suficient de puternice pentru a asigura menţinerea moleculei în poziţie
potrivită, un timp suficient de îndelungat pentru producerea reacţiei.
Viteza reacţiilor catalizate cu enzime depăşesc cu 8 până la 11 ordine de mărime
viteza celor necatalizate. Activitatea enzimelor depinde de temperatură, de pH, precum şi
de alte proprietăţi ale mediului pe care celula le reglează în vederea controlării procesului
metabolic.
Din cele prezentate rezultă că descifrarea mecanismului biocatalizei este esenţial
pentru înţelegerea proceselor metabolice şi al chimismului vieţii în general.
5
dreaptă este punctul de saturaţie. Prezenţa impurităţilor în preparatul brut de pepsină (b)
modifică forma curbei de solubilitate dând indicaţii asupra eterogenităţii unui preparat
enzimatic. În cazul în care în soluţie există două proteine cu solubilităţi diferite, soluţia se va
satura în ele la momente diferite şi curba de solubilitate a preparatului impur va avea mai multe
puncte de intersecţie. Pentru acurateţea rezultatelor şi mai ales pentru siguranţa interpretării se
recomandă ca aceste puncte de solubilitate să fie realizate în diferiţi solvenţi. Sunt extrem de
rare cazurile în care două proteine au aceiaşi solubilitate într-un solvent oarecare şi este mai
puţin probabil ca doua proteine să aibă solubilităţi egale în diferiţi componenţi.
Testele imunologice sunt deosebit de specifice şi sensibile. Astfel dacă în sângele
animalelor imunizate cu proteina de cercetat apare un singur tip de anticorp, proteina este
unitară.
Dacă se compară rezultatele experimentale obţinute prin diferite metode ( compoziţia în
aminoacizi, măsurarea presiunii osmotice, microscopie electronică, analiză de sedimentare
viteză-difuziune, echilibru de sedimentare, gel cromatografie) pentru determinarea masei
moleculare a preparatului enzimatic purificat se obţin valori mult deosebite este un indiciu
asupra heterogenităţii acestuia.
Evidenţierea unor impurităţi prin teste funcţionale este un procedeu de punere în
evidenţă a unor cantităţi mici de substanţe contaminante în cazul în care acestea au proprietăţi
biologice specifice (enzime, hormoni). În situaţii rare în care o dingură proteină are două sau
mai multe activităţi biologice, raportul lor trebuie să rămână constant pe tot parcursul
procedeului de purificare.
2. Preparate enzimatice
6
ridicată (produse lactate acide, vin, bere, oţet, alcool etilic, brânzeturi, preparate din
carne, produse farmaceutice, etc).
Altă categorie de microorganisme pot determina alterarea materiilor prime sau a
produselor alimentare. Acest motiv stă la baza impunerii unor norme de igienă foarte
riguroase.
În ultima perioadă, rolul biotehnologiilor a fost foarte bine conturat de tendinţe
moderne aplicate sub formă de preparate enzimatice mixte ca adaosuri exogene în
industria brânzeturilor, preparatelor din carne, etc. În egală măsură, şi nu mai puţin
importante, în conturarea tendinţelor moderne sunt mocroorganismele. Ele se folosesc
sub formă de culturi starter, singulare sau mixte, în industria laptelui, cărnii, etc.
Enzimele se mai numesc şi biocatalizatori de natură proteică, solubili, coloidali,
sensibili la acţiunea căldurii şi puternic dependenţi de condiţiile de mediu. Enzimele sunt
sintetizate de celule vii.
Într-un metabolism desfăşurarea secvenţială a fiecărei etape este posibilă numai
sub acţiunea biocatalizatorilor. Enzimele pot fi de natură vegetală, animală sau
microbiană (fungică sau bacteriană).
Activitatea catalitica a enzimelor, extrem de importanta din punct de vedere
fiziologic, prezinta si o deosebita importanta practica. O serie de industrii care
prelucreaza materii prime de origine vegetala sau animala, au de-a face in procesele lor
tehnologice cu reactii catalizate de enzime, care sunt proprii acestor materii prime sau
sunt elaborate de microorganismele ce se dezvolta in/pe ele.
Reactiile enzimatice similare pot avea loc insa si cu enzime izolate sau cu sisteme
extrase din diferite surse bogate in enzime si introduse apoi in procesele tehnologice in
scopul realizarii unor transformari dorite. Aceste enzime sau sisteme enzimatice izolate
din speciile in care au fost elaborate se numesc preparate enzimatice. Ele se
caracterizeaza printr-o puritate mai mica sau mai mare enzimatica, in functie de calitatea
si tipul compusilor ce le insotesc, proveniti din aceeasi sursa enzimatica. Cu alte cuvinte,
preparatele pot fi mai mult sau mai putin pure (purificate).
Pentru obtinerea unor preparate enzimatice, trebuie ales un material biologic
bogat in enzime, cu o puternica activitate catalitica si care sa se prelucreze usor. Materiile
prime folosite la obtinerea preparatelor enzimatice, pot fi de natura vegetala, animala sau
microbiana. La plante, concentratii mari de enzime se intalnesc in seminte, in boabele de
cereale germinate si negerminate, in fructe, in radacini, in seva si in frunze. La animale,
enzimele se gasesc in toate celulele, insa concentratii mari de anumite enzime se gasesc
localizate in anumite organe si tesuturi, specializate in producerea de enzime, asa cum
sunt glandele salivare, mucoasa stomacului, pancreasul, mucoasa intestinala.
Avantajele prelucrării surselor de enzime de origine animală şi vegetală: sunt
sigure din punct de vedere a inoculităţii şi permit obţinerea certă a enzimelor singulare (a
unui singur tip de enzimă).
Dezavantaje:
- vegetalele şi animalele prezintă un ciclu de viaţă lung, prin urmare obţinerea enzimelor
este limitată din punct de vedere cantitativ;
- preparatele enzimatice obţinute din aceste surse sunt mai termosensibile.
7
Microorganismele reprezină cea mai bună sursă de preparate enzimatice deoarece:
-ciclul de dezvoltare (viaţă) este mult mai scurt decât în cazul plantelor sau a
animalelor;
-se pot obţine în cantităţi mari denumite şi biomase prin cultivare în instalaţii cu
un principiu constructiv simplu şi folosind medii de cultură relativ ieftine cum ar fi:
tărâţe, zer, extracte de porumb, melasă;
- producţia de enzime generată de microorganisme poate fi optimatizată cu
folosirea unor tulpini mutante, înalt performante, obţinute în urma dorinţei de a
eficientiza parametrii procesului fermantativ;
- preparate enzimatice obţinute, în unele cazuri, prezintă stabilităţi mai bune la
temperaturi ridicate, acest avantaj vizează transferuri enzimatice care se impun ca
desfăşurare la temperaturi situate la 75-900C (industria spirtului);
În cazul adoptării ca sursă a microorganismelor se impun câteva condiţii:
preparatele enzimatice de origine microbiană trebuie să fie libere de toxine sau de
substanţe cu efect antibiotic, prin urmare trebuie să fie produse de microorganisme
nepatogene fără potenţial alergent, toxicogen, antibiotic.
Procesul de extractie al materiilor prime enzimatice este precedat, cu
exceptia enzimelor extracelulare elaborate de microorganisme, intotdeauna de operatia de
dezintegrare a celulelor, cu aparate speciale, pentru eliberarea enzimelor. Dupa operatia
de dezintegrare celulelor, urmeaza operatia de extractie a lor, care consta in amestecarea
materialului cu solventi care dizolva enzimele, urmata de separarea solutiei de enzime, de
toate particulele in suspensie. Solubilizarea se realizeaza prin tratarea cu apa sau solutii
de saruri, asa cum enzima sau grupul de enzime intereseaza, este solubil in apa sau in
diferite solutii. Molaritatea solutiilor si pH-ul mediului de extractie, precum si timpul
necesar unei extractii optime se stabilesc experimental.
Amestecul de material si solvent este centrifugat, iar supernatantul reprezinta
extractul enzimatic brut care poate fi utilizat ca atare, dupa concentrare, sau dupa uscare,
sau este supus operatiei de purificare.
In extracte, enzimele se gasesc alaturi de o multime de substante care au fost
extrase in acelasi timp, deoarece au fost solubile si ele, in solventii de extractie folositi.
De obicei,metodele de purificare se refera fie la indepartarea impuritatilor din extract,
fie la indepartarea enzimei din extract prin precipitare, adsorbtie sau extractie.
Dupa aceasta operatie se obtin preparate enzimatice partial purificate. Cand
preparatul enzimatic a fost adus intr-o stare avansata de puritate este posibila cristalizarea
lui. Pentru aprecierea puritatii preparatelor enzimatice se utilizeaza curbele de
solubilitate, care stabilesc variatia cantitatii de enzima solubilizata in functie de cantitatea
de enzima introdusa.
In scopul utilizarii repetate a unei enzime si pentru desfasurarea in instalatii
continue sau semicontinue a reactiilor enzimatice, in practica industriala, au inceput sa se
utilizeze in ultimul timp, preparatele enzimatice imobilizate. Aceste preparate prezinta o
serie de avantaje, putandu-se prelucra o cantitate mai mare de substrat cu aceeasi enzima,
8
enzima care nu ramane in produs, existand posibilitatea opririi reactiei la momentul dorit,
printr-o simpla operatie mecanica.
Ţesuturi vegetale
Liza pereţilor celulari
Ţesuturi animale
(omogenizare)
Microorganisme
(+enzime extracelulare)
Preparat brut
Standardizare
Condiţionare
Preparat enzimatic
de uz industrial
9
Activitatea enzimatică poate fi caracterizată prin două noţiuni:
- activitatea enzimatică specifică- reprezintă numărul de unităţi enzimatice
conţinute într-un proteină.
-activitatea enzimatică molară- reprezintă numărul de molecule de substrat transformate
de către o moleculă de enzimă în unitatea de timp
10
toate contin endo-1,4-β-glucanaza, enzima identificata prin capacitatea de hidroliza
rapida a substratului solubil carboximetilceluloza. Astfel, Clostridium stercorarium
sintetizeaza o endo-1,4-glucanaza termostabila si o exo-β-glucanaza. Tulpina are si
propprietati fermentative, in conditii anaerobe producand acid acetic, acid lactic si etanol.
Sistemul enzimatic celulozolitic al tulpinii Cellulomonas fimii ATCC 484 este compus
din 3-4 enzime: doua endoglucanaze si cel putin o exoglucanaza.
Substratul natural al celulazelor este celuloza. Preparatele enzimatice comerciale
de tipul celulaze sunt preparate in care predomina endo β-1,4 celulazele cu proprietatea
de a produce hidroliza legaturilor 1,4 β glucozidice din interiorul macromoleculei de
celuloza.
In prezent cercetarile privind biosinteza complexului enzimatic celulozolitic sunt
orientate in directia valorificarii pe cale biotehnologica a deseurilor celulozice din
agricultura, zootehnie, industrie.
Microorganismele au capacitatea de a produce hemicelulaze cu rol in hidroliza
substraturile hemicelulozice. Microorganismele agenti producatori de hemicelulaze sunt:
- bacterii: genurile Streptomyces, Bacillus, Cytophaga, Acchromobacter,
Pseudomonas;
- mucegaiuri: genurile TRIchoderma, Thrichotecium, Chaetomium,
Aspergillius.
Hemicelulazele microbiene sunt de doua tipuri, in functie de modul lor de actiune
si anume:
- endohemicelulaze – scindeaza legaturile β 1,4 din interiorul catenei
poliglucidice;
- exohemicelulazice – elibereaza monomeri sau dimeri de la extremitatile
polimerului.
In general, microorganismele produc complexe enzimatice in care xilanazele sunt
asociate cu celulaze, β-glucozidaze etc.
Enzimele hemicelulozice prezinta importanta in procesele biotehnologice de
valorificare a deseurilor vegetale pentru obtinerea de produse cu valoare economica
deosebita: alcool carburant SCP (Single Cell Protein), solventi (acetona, butanol,
propanol).
Utilizarea α-amilazelor si proteazelor in panificatie a fost stabilita cu 10-20 ani
ianinte, dar potentialul hemicelulazelor a fost previzionat la inceputul acestui deceniu.
Enzimele xilanolitice, denumite, adeseori, pentozanaze, reprezinta un grup de
hemicelulaze, care hidrolizeaza legaturile variate din arabinoxilani. Cunoasterea modului
loor de actiune a crescut cu cativa ani in urma, ceea ce a condus la utilizarea lor in
practica.
Folosirea pentozanazelor este importanta in fabricare painii integrale si a painii
imbogatite in fibre, corectand capacitatea de legare a apei. Impreuna cu celulazele
rezolva problemele de calitate la painea cu continut ridicat de fibre. Mai tarziu, celulazele
si pentozanazele au fost folosite la faina de secara care are pentozani greu hidratabili in
cantitate mare.
Doze mici de xilanaza purificata, adaugata in faina de grau dau o crestere a
volumului painii de pana la 10%, dar aluatul a fost slab, lipicios; doze mai amri au produs
aluaturi foarte slabe (moi), o structura grosiera si o scaderii a volumului painii.
11
In aluaturi care contin multe fibre, adaugarea pentozanazei este ceruta pentru a
ameliora culoarea cojii, structura si volumul: chiar daca absorbtia apei este scazuta,
umiditatea painii coapte este neschimbata.
In cateva studii asupra gelului obtinut din faina, celulaza a fost una din enzimele
studiate,
Kulp (1968) a folosit trei preparate de celulaza si a aratat ca efectele pe care le-a
observat au fost date si de interferenta pentozanazelor.
Utilizarea pentozanazelor se face in functie de tipul si calitatea fainii utilizate si
de compozitia aluatului. Acestea sunt utilizate in panificatia moderna ca adaosuri
amelioratoare, sub forma de preparate obtinute din speciile Aspergillius.
12
Activitatea maxima de zaharificare a hartiei de filtru in prezenta inductorului (coji
de floarea-soarelui) a fost stabilita pentru P. astreanus in 6 zile si in 11 zile de cultivare.
Unele tulpini ale speciei de P. ostreatus manifesta o inalta activitate celulazica si
pe substratul ce nu contine coji de floarea soarelui in calitate de inductor, ceea ce denota
prezenta caracterului constitutiv de sinteza a hidrolazelor. Manifestarea ambelor
caractere: inductiv si constitutiv- sunt specifice tulpinilor P. ostreatus .
13
Bibliografie
www.regielive.ro
www.facultate.regielive.ro
www.onlinebioterra.evonet.ro
14