UNIVERSITATEA DE ȘTIINȚE

AGRONOMICE ȘI MEDICINĂ VETERINARĂ

FACULTAREA DE BIOTEHNOLOGII

 
 
 
 

 
 SUPEROXID DISMUTAZA
 
- Referat -

 
 
Coordonator științific Studenta
Șef lucrare doctor Grupa: 6202
 
 

  BUCUREȘTI
-2019-
 CUPRINS

•INTRODUCERE .................................................................................. 3
•Cap.I Caracteristici generale ............................................................. 4
1.1. Surse de izolare ................................................................... 5
1.2. Codul enzimei ...................................................................... 6
1.3. Reacții catalizate ................................................................... 7
1.4. Paramentrii ce caracterizează enzima …………………….............. 8
•Cap. II Metode de determinare a activitatii enzimatice………………..…..9
2.1. Principiul metodei………………….....................……..………………..10
2.2. Reactivi……………………………...............................................……. 11
2.3. Mod de lucru………………….....................…………………………..…… 12
2.4. Mod de calcul…………………………………………....................……….. 13
 
•Cap. III Utilizari/Importanta determinarii activitatii
enzimatice………..14
3.1.Industria medicala………......……….....................................….….. 15
•CONCLUZII ............................................................................... ............... 16
 
•REFERINȚE BIBLIOGRAFICE .....................................................……………..17
 
 Noțiuni introductive
Enzimele sunt compuși de natură proteică ce catalizează
reacțiile de biosinteză și degradarea din celulele vii.
Acestea pot fi întâlnite în microorganisme, și în toate organele vegetale și animale .
În vederea studierii metabolismului vegetal este necesară cunoașterea celor
6 clase de enzime, atât din punct de vedere structural, cât și din punct de
vedere al rolului biochimic și al modului de acțiune.
Raportat la tipul de reacție pe care îl catalizează, enzimele se împart în șase mari
clase²:
- oxidoreductaze (oxidare sau reducere a unor molecule)
- transferaze (transfer al unor grupări funcționale între două molecule)
- hidrolaze (hidroliza)
- liaze (scindarea/eliminarea nehidrolitică cu formarea unor duble legături)
- izomeraze (conversia unui izomer în celălalt)
- ligaze sau sintetaze (legarea a două molecule, cuplată cu hidroliza ATP).
Cap.I Caracteristici generale
 1.1. Natura sursei de izolare
 
Superoxid dismutaza se formează cu :
Cu/Zn , fiind un lichid apos care iși exercită calitățile de antioxidant în citoplasma
celulelor, înconjurând toate celelate componente celulare ;
Mn, fiind activ în mitocondrii, structuri din celule în care se produce energie, energie
care poate duce la crearea radicalilor liberi .
Activitatea sa fiziologică optimă are loc la un pH - 7,8 .
SOD ajută la asimilarea Zn, Cu, Mn la nivel celular .
 Codul enzimei
Superoxid dismutaza (SOD) are codul E.C. 1.15.1.1., fiind o enzimă care catalizează
alternativ dismutare (compartimentarea) a superoxidului (O₂ˉ) radical în oricare
moleculă obișnuită de oxigen (O₂) sau peroxid de hidrogen (H₂O₂). Superoxidul este
un produs secundar al metabolismului oxigenului și, dacă nu este reglementat,
cauzează multe tipuri de leziuni ale celulelor .
Oxidazele sunt oxidoreductaze care catalizeaza reactiile anumitor substraturi ca
oxigenul molecular sau ale peroxizilor, fiind caracterizate prin transfer de hidrogen sau
de electroni de pe un donor pe un acceptor, care este oxigenul molecular; ca produs de
reactie se formeaza apa.
 Reacții catalizate
 
SOD catalizează disproporționarea superoxidului :
2 HO₂ → O₂ + H₂ O₂
Astfel, O₂ˉ este transformat în două specii mai puțin dăunătoare .
Calea prin care se poate scrie dismutarea catalizatorului SOD a superoxidului , pentru Cu,
Zn SOD, cu urmatoarele reacții:
Cu 2+ -SOD + O 2 - → Cu + -SOD + O 2 (reducerea cuprului; oxidarea dismutază)
Cu + -SOD + O₂+ 2H + → Cu 2+ -SOD + H 2 O 2 (oxidarea cuprului; reducerea superoxid)
Forma generală, aplicabilă tuturor formelor diferite de metal, coordonate de SOD, poate fi
scrisă după cum urmează:
M (n + 1) + -SOD + 02 - → Mn + -SOD + 02
M n + -SOD + O 2 - + 2H + → M (n + 1) + -SOD + H 2 O 2 .
unde M = Cu (n = 1); Mn (n = 2); Fe (n = 2); Ni (n = 2).
Într-o serie de astfel de reacții, starea de oxidare și încărcarea  cationului  metalic  oscilează
între n și n + 1: +1 și +2 pentru Cu sau +2 și +3 pentru celelalte metale.
1.4. Parametrii ce caracterizează enzima

Temperatura influiențează viteza reacției enzimatice modificând stabilitatea enzimei,

afinitatea enzimei pentru substrat, viteza de scindare a [ES], precum și, afinitatea E
pentru diferiți efectori (activitori și inhibitori).
Temperatura influiențează viteza de reacție prin următorii factori :
creșterea vitezei de reacție enzimatică odată cu creșterea temperaturii ;
faptul că enzimele sunt de natură proteică respectă proprietățile proteinelor, deci la
temperaturi ridicate de peste 50 °C se denaturează .
În enzimologie, temperaturile ridicate provoacă fenomenul de inactivare, iar
temperaturile scăzute provoacă fenomenul de inhibare.
Enzimele care acționează la temperaturi mici (sub 0°C) se numesc
psihrofile (ex: lipazele), iar cele acționează la temperaturi
foarte ridicate se numesc termofile (ex: peroxidaza).
Cap.II Metode de determinare a superoxidului dismutaza
Enzimele sunt proteine sau proteide fără de care celule vii nu pot înfăptui reacţii
complexe într-un timp scurt, la temperatura mediului înconjurător. Ele sunt substanţe
care catalizează reacţiile biochimice din organism, avînd un rol esenţial în biosinteza şi
degradarea substanţelor din materia vie, întîlnindu-se în toate organismele animale,
vegetale şi în microorganisme, mai fiind denumite din această cauză biocatalizatori.
Fără enzime , procesele biochimice s-ar desfăşura cu viteze foarte mici. Rolul in
organism: descompunerea moleculelor mari, accelerează procesele metabolice,
coordonează unele etape ale ciclului metabolic.
2.1.Principiul metodei
 
Metoda descrisă de Winterbourn și colaboratori se bazează pe capacitatea superoxid
dismutazei de a inhiba reducerea sării de tetrazoliu - Nitro Blue Tetrazoliu (Nitro BT)
cu radicali superoxid .

O unitate enzimatică reprezintă cantitatea de enzimă care produce 50% inhibiție în

condiții standard . Radicalii superoxid sunt generați în mediul de reacție prin
fotoreducerea riboflavinei .
 2.2.Reactivi și soluții
1. Soluție de Nitro BT (clorură de 2,2’ - di (p - nitrofenil) -5,5’-difenil-3,3’-
(3,3’- dimetoxi - 4,4’- difenil
ditetrazoliu) 1,5 mm ;
2. Soluție EDTA Na₂ 0,1 M adusă la pH 7,8 cu NaOH 1 N ;
3. Soluție riboflavină 0,12 mM ;
4. Soluție tampon fosfat de potasiu 36 mM pH 7,8 ;
5. Extract proteic realizat din ficat sau din E. coli .
2.3.Mod de lucru
a. 2,55 ml soluție tampon ;
b. 0,20 ml soluție EDTA Na₂ ;
c. 0,10 ml soluție enzimă ;
d. 0,10 ml soluție Nitro BT ;
e. 0,05 ml soluție riboflavină .
Paralel, se realizează și un martor cu aceeași compoziție, cu excepția soluției
enzimatice. Martorul și proba sunt supuși iluminării timp de 5 minute, la un bec de
neon, după care se citește extracția la 560 nm .
2.4.Mod de calcul
 
În martor (lipsește enizima) radicalii superoxid formați prin fotoreducerea riboflavinei,
reduc sarea de tertazoliu la un formazan, intensitatea culorii albastre fiind maximă
(100% inhibiție).
În probă, superoxid dismutaza descompune o parte din radicalii superoxid, iar
cantitatea de formazan formată este mai mică .
Procentul de inhibiție realizat de enzimă din probă se calculează utilizănd relația :
100 - X 100 = a % inhibiție .
Pentru exprimarea rezultatelor experimentale în unități enzimatice a x inhibiție se
raportează la 50 și la mg/ml proteină în probă :
U/mg = .
CAP. III Utilizari/Importanta determinarii activitatii
enzimatice
Studiul activitatii catalitice a enzimelor,a mecanismului de actiune,cineticii
reactiilor enzimatice etc. prezinta o importanta teoretica de necontestat pentru studiul
metabolismului substantelor si energiei in organismele vii,reglarea si controlul
acestora,intelegerea anomaliilor metabolice etc. Pe de alta parte,importanta studierii
acestor catalizatori sub toate aspectele nu se limiteaza doar la domeniul strict
fundamental.
3.1.Industria medicala
SOD (Superoxid dismutaza) este utilizat pentru a trata artrita, probleme de prostata,
ulcere, arsuri, boli inflamatorii, dar si intoxicatii de la expunerea la fum si radiatii, si
pentru a preveni efectele secundare ale medicamentelor impotriva cancerului. Mai
poate ajuta si la reducerea ridurilor faciale, la cicatrizarea si  vindecarea ranilor si
arsurilor.
Concluzii
 
Superoxid dismutaza se incadreaza in clasa oxidoreductazelor, fiind o oxidaza.
Oxidazele sunt oxidoreductaze care catalizeaza reactiile anumitor substraturi ca
oxigenul molecular sau ale peroxizilor, fiind caracterizate prin transfer de hidrogen sau
de electroni de pe un donor pe un acceptor, care este oxigenul molecular; ca produs de
reactie se formeaza apa. Oxidazele pot fi clasificate in functie de mecanismul de
actiune, in: oxigenaze, hidroxilaze si oxidaze transportoare de electroni. Superoxid-
dismutaza este o oxidaza transportoare de electroni, mai exact o metaloenzima.
Superoxid-dismutaza (superoxid : superoxid-oxidoreductaza) este o enzima intalnita in
toate organismele aerobe sau aerotolerante, care se incadreaza in grupa
metaloenzimelor, molecula sa putand contine, in functie de sursa biologica, fier, cupru,
magneziu sau zinc.
Enzima catalizeaza reactia de dismutare a ionilor de superoxid, toxici pentru celula vie.
Oxigenul molecular are o reactivitate scazuta (stare de triplet). Oxigenul poate exista
insa si intr-o forma reactiva (singlet) cand momentele de spin sunt de sens contrar,
forma ce apare doar in cazuri particulare.
REFERINTE BIBLIOGRAFICE
 
Lector dr. Dana Iordachescu,Prof. dr. doc. St. I.F. Dumitru -“Biochimie practica” editia
a2-a revazuta si completata,Bucuresti,1998.

Dr.Chim.Traian Galben,Dr.Aurelia Enache- Curs de chimie generala si biochimie

vegetala .partea II ,Biochimie vegetala,Reeditare,1986,Institutul Agronomic
“N.Balcescu”-Bucuresti,Facultatea de Agricultura

D.C.Cojocaru,Zenovia Olteanu,Elena Ciornea,Lacramioara Oprica,Sabina-Ioana

Cojocaru-Enzimologie generala,ed.Tehnopress,Iasi,2007.

Suport de laborator, Lucrarea practică nr.1, Enzimologie

https://en.m.wikipedia.org/wiki/Superoxide_dismutase.ro
 
https://scritub.ro

http://www.ghidnutritie.ro/articol/substante_utile/sod-superoxid-dismutaza