Stresul oxidativ

n timp, concentraia de oxigen atmosferic a crescut prin procesele de fotosintez i, ca atare, diferite tipuri de aprare antioxidante au fost induse n celulele anaerobe. Celulele anaerobe sunt facultativ anaerobe i pot exista n absena sau prezena oxigenului. Viaa aerobic a evoluat pe msur ce sisteme de aprare antioxidante suplimentare au fost dezvoltate pentru a combate concentraia crescut de oxigen atmosferic. Pentru acele organisme care pot utiliza oxigen, exist avantaje speciale energia obinut este mai mare i viteza de obinere este mai mare. Toate organismele multicelulare au nevoie de oxigen. Dar oxigenul este un agent de oxidare lent.

Alte specii ale oxigenului, dar i ale azotului sunt ageni de oxidare mai puternici.

Stresul oxidativ
Stres oxidativ dezechilibru intre producia de specii reactive ale oxigenului i azotului i capacitatea antioxidant a organismului. Dei micile fluctuaii n concentraia acestor oxidani la starea de echilibru pot juca de fapt, un rol n semnalizarea intracelular, aprarea contra intruilor, creteri necontrolate a concentraiilor acestor oxidani n starea de echilibru pot s conduc la reacii n lan mediate de radicalii liberi care atac, fr discernmnt, proteine, lipide, polizaharide i ADN

Specii reactive ale oxigenului (ROS)

- radicalul superoxid - radicalul hidroperoxil - radicalul peroxil - radicalul alcoxil - radicalul hidroxil - peroxidul de hidrogen - hipocloritul - acidul hipocloros - ozonul - oxigenul singlet O2 HO2 RO2 RO OH H2O2 HOCl HOCl O3 1O 2

Radicalul superoxid (O2)

In vivo, O2 este produs att enzimatic ct i nonenzimatic.

Sursele enzimatice includ:

oxidaze NADPH situate pe membrana celulelor polimorfonucleare, macrofagelor i celulelor endoteliale: NADPH + 2O2
NAD(P)H oxidaza

2 O2 + NADP+ + H+

oxigenaze citocrom P450-dependente xantin oxidaza: conversia hipoxantin xantin acid uric

Xantin oxidaza

H2O + O2

+ 2H+ + 2 O2

Surse neenzimatice:
sunt atunci cnd un singur electron este transferat direct la oxigen de ctre coenzime sau grupri prostetice reduse (de exemplu flavine sau proteine fier-sulf), sau de diverse xenobiotice reduse n prealabil de diverse enzime (ex. adriamicin - medicament anticancer sau paraquat ierbicid). Lanul respirator mitocondrial: Aproximativ 1-2% din totalul de O2 consumat este convertit la O2 n acest fel.

Ionul superoxid poate accepta electroni, jucnd rol de agent oxidant, sau poate ceda electroni rol reductor. Poate reaciona cu el nsui genernd ap oxigenat i oxigen triplet, reacie care poart numele de dismutare - spontan sau sub aciunea enzimei superoxid dismutaza (SOD): 2 O2 + 2H+ H2O2 + O2

La interacia cu ioni ai metalelor tranziionale n stare oxidat (Fe3+, Cu2+) produce radicalul hidroxil, cel mai reactiv dintre ROS (reacia Fenton): O2 + Fe3+ 3O2 + Fe2+ Fe2+ + H2O2 Fe3+ + OH + HO

Reacia cu radicalul hidroxil cu formarea oxigenului singlet: O2 + OH 1O2 + HO

n organism, rolul radicalului superoxid i a moleculelor derivate din el este n primul rnd de protecie mpotriva microorganismelor.

Peroxidul de hidrogen (apa oxigenat - H2O2)

este produs n special din radicalul superoxid prin reducere monovalent. 2 O2 + 2H+ H2O2 + 3O2 Macrofagele i neutrofilele produc H2O2 Apa oxigenat poate trece rapid prin membranele celulare. Este descompus de catalaz: 2 H2O2 H2O + O2 Ca i radicalul superoxid, ea nu este o substan foarte reactiv dar efectul su nociv se manifest prin generarea radicalului hidroxil (reacia Fenton) Fe2+ + H2O2 Fe3+ + OH + HO Aceast reacie poate fi catalizat la nivel celular de ctre fier, cupru sau alte metale prezente aici. n cazul anemiei feriprive, administrarea de preparate cu fier poate duce la creterea stresului oxidativ, de aceea este recomandat administrarea concomitent de compui antioxidani (vitamina C, E, extracte naturale cu polifenoli, etc).

Radicalul hidroxil (OH)

este cea mai reactiv specie. reacioneaz rapid cu cele mai multe dintre substanele organice aflate n sistemele biologice. Poate fi generat din reacia peroxidului de hidrogen cu un ion metalic redus (Fe, Cu) vezi reacia de mai sus. radicalul hidroxil trece prin membranele celulare. n prezena unui substrat organic (acizilor grai) formeaz un compui care sunt radicali reacie n lan:

OH + R HOR
HO + RH R + H2O R + 3O2 ROO ROO + RH ROOH + R Acest tip de reacie n lan este caracteristic alterrii oxidative a acizilor grai i a altor lipide, n cazul proteinelor i a acizilor nucleici (n special a ADN-ului).

Radicalii peroxil organici (ROO)

sunt foarte importani n sistemele biologice, fiind produi fie din componenii naturali fie din contaminani externi. implicare n efectele radiaiilor ionizante, n procesele de mbtrnire, n ischemie, etc. Reacii: R + O2 ROO ROO + RH ROOH + R ROO + RSH ROOH + RS ROO + CC ROO-CH2-C< ROO + PhO ROO + PhO

Specii reactive ale azotului (RNS)

- monoxidul de azot

- dioxidul de azot - peroxinitratul - acidul peroxinitros - trioxidul de azot - clorura de nitrozil - ion nitroniu - alchilperoxinitratul - nitrozotiolii

NO NO2 ONOO ONOOH N2O3 NO2Cl NO2+ ROONO RSNO

Monoxidul de azot (NO)

este generat din arginin n cataliza NO-sintazei: L arginin + NADPH,H+ L citrulin + NO + NADP+

NO reacioneaz rapid cu O2 i formeaz ONOO (peroxinitrat) rezult n medii cu potenial oxidant foarte mare Poate strbate distane considerabile i trece uor prin membranele celulare, astfel nct este considerat declanatorul principal al ruperii lanurilor de ADN.

Mieloperoxidaza - MPO

Stresul oxidativ i poluani ai aerului

Stresului oxidativ mediat de poluani poate rezulta din:
generarea direct de specii reactive ale oxigenului (ROS); funcia alterat a mitocondriilor sau aciunea NADPH oxidazei; activarea celulelor inflamatorii capabile s genereze ROS i RNS; deteriorarea ADN-ului n procese oxidative.

SISTEME ANTIOXIDANTE
Aprarea antioxidant a organismului implic: mecanisme enzimatice mecanisme neenzimatice, care la rndul lor pot fi:
de provenien intern (proteine, molecule mici) de provenien extern, din alimentaie vitamine, polifenoli, antociani, etc)

Aceste mecanisme lucreaz n sinergie mpotriva diverilor radicali liberi sau alte tipuri de oxidani.

Sisteme antioxidante enzimatice

Superoxid dismutaza (SOD) - metaloenzim, coninnd cupru i zinc (pentru SOD din citosol) i mangan (pentru SOD din mitocondrii): 2 O2- + 2 H+ O2 + H2O2 Catalaza snge, mduva osoas, rinichi, ficat, membranele mucoaselor, peroxizomi: 2 H 2 O2 O2 + H 2 O Glutation peroxidaza + glutation reductaza H2O2 + 2 GSH GSSG + H2O GSSG + NADPH + H+ 2 GSH + NADP+

Sistemul enzimatic de aprare mpotriva speciilor reactive ale oxigenului

O2

Superoxid dismutaza

O2-

Catalaza H2O2

OH Glutatation peroxidaza Glutation reductaza NADPH+H+

H 2O

2 G-SH

GSSG

NADP+

Tioredoxinele i tioredoxin reductaza -sunt enzime cu o activitate antioxidant intrinsec datorit resturilor de cistein din molecul, care prin gruparea reductoare tioloc pot anihila diveri oxidani. Hemoxigenaza (HO) - catalizeaz reacia de oxidare a hemului la monoxid de carbon, biliverdin i fier.

Sisteme antioxidante neenzimatice

Endocompui cu aciune antioxidant: Proteinele ce conin grupri tiol (-SH) metalotioneine Proteinele de oc termic Glutationul este un tripeptid format din acid glutamic, cistein i glicocol

Acidul uric (catab. purine) Coenzima Q10 (lan respirator)

Melatonina - hormon, derivat din serotonin, respectiv triptofan

Acidul lipoic (dehidrogenaze de cetoacizi)

S S CH CH2 (C H 2 )4 C OOH SH SH H 2C CH CH2 (C H 2 )4 C OO H

H 2C

Bilirubina - produsul de catabolizare al hemului

Exocompui cu aciune antioxidant

Vitamina C
protejeaz proteine, acizi grai, ADN mpotriva oxidrii. este efectiv mpotriva radicalului superoxid, peroxinitritului, apei oxigenate, acidului hipocloros, oxigenului singlet, oxidani i poluani din aer, a oxidanilor scpai din neurofilele i macrofagele activate.

Vitaminele E
Este inserat printre lipoproteinele i acizii grai din structura membranei celulare i lipoproteinelor plasmatice are un rol protector mpotriva peroxidrii lipidelor determinat de stresul oxidativ Lucreaz cuplat cu vitamina C i SOD, catalaza, GSH-peroxidaza

Carotenoizii
sunt precursori ai vitaminei A. Se acumuleaz n membranele celulare. interacioneaz cu oxigenul singlet, radicalul superoxid i astfel, previn oxidarea unor substraturi biologice, n special a acizilor grai polinesaturai.
H3C CH3 6 5 CH3 CH3 CH3 CH3 C H 3C 3 15 15' H3C CH3

- caroten

CH

CH3

H3C 15 15' 5' H3C

H3C

CH3

4'

- caroten
CH3

CH3

CH3

CH3

Ciclu a - iononic
CH3 CH3 H3C 15 15' H3C CH3

H3C

CH3

- caroten
CH3

CH3

CH3

ciclu

b - iononic

Structur pseudo

( g ) ionon

Seleniul

nu este el nsui antioxidant, dar particip la aprarea organismului mpotriva ROS ca i cofactor al enzimei glutation peroxidaza Cofactor al enzimei superoxid dismutaza (SOD). Concentraiile crescute ale cuprului pot indica o cretere a stresului oxidativ. S-a evideniat o cretere a cuprului seric n cursul procesului de mbtrnire Dup fier, zincul este cel mai abundent ion metalic ce se gsete la om. A fost gsit n componena mai mult de 1200 enzime (ex. SOD). are efect protector asupra gruprii tiol din structura proteinelor i poate inhiba parial reaciile de producere a ROS. Deficitul de zinc crete sensibilitatea la leziuni produse de stresul oxidativ . Studii efectuate pe persoanele vrstnice cu boli degenerative au pus n eviden un raport Cu/Zn crescut

Cuprul

Zincul

Manganul
cofactor pentru multe clase de enzime, incluznd oxidoreductaze, transferaze, hidrolaze, multe implicate n homeostazia redox (ex. SOD-2 i arginaza)

Flavonoide, isoflavonoide, antociani din produsele vegetale

EFECTE ALE STRESULUI OXIDATIV Modificri oxidative ale lipidelor

acizii grai nesaturai din membranele celulare reacii n lan Consecine - reducerea fluiditii i modificarea permeabilitii membranei celulare iar, n final, dezorganizarea membranei celulare. factor important n etiopatogenia unor afeciuni cardiovasculare ca: ateroscleroza, hipertensiunea arterial, neoxigenarea post-ischemic. Marker important LDL oxidat Vitaminele E i C au n special rol protector:
Vit E-OH + Lipid ox VitE-O + Lipid red Vit E-ox + VitCred VitE-OH + VitCox 2 VitCox VitCred + VitCox.

Peroxidarea lipidelor

Produi de oxidare ai lipidelor

Oxidarea acidului linoleic

Oxidarea acidului arahidonic izoprostani

Produi de autooxidare a colesterolului

I: 7a-hidroxicolesterol; II: 7-cetocolesterol; III: 7-b-hidroxicolesterol; IV: colesterol5a,6a-epoxid; V: colestan-3,5a,6b-triol; VI: colesterol-5b,6b-epoxid; VII: 5,6secosterol

Transformrile enzimatice ale colesterolului n oxisteroli

CYP7A1: colesterol-7a-hiddroxilaza; CYP3A4: colesterol-4b-hidroxilaza; CYP46: colesterol -24-hidroxilaza; CYP27A1: sterol 27-hidroxilaza; Ch - 25 - OHlase: colesterol-25-hidroxilaza.

Modificri oxidative ale proteinelor

Se modific preferenial catenele laterale ale resturilor urmtorilor aminoacizi: lizina, valina, cisteina, tirozina, fenilalanina, arginina, metionina, histidina.

 S-tiolarea i S-glutationilarea proteinelor

 Nitrarea, halogenarea i oxidarea tirozinei ditirozina

 Modificarea proteinelor cu lipide peroxidate (la lizina in special)

 Glicarea proteinelor - Reacia Maillard

Modificri oxidative ale acizilor nucleici

Aciunea asupra deoxiribozei
P P P O CH2 O

baz
O CH2 O

baz
O CH2 O

baz

baz

+ MA

O2
H O O O
P

+
O
O CH2 OH

OH

Aciunea asupra catenelor polinucleotidice ale acizilor nucleici

Ruperea monocatenar

8-oxo-guanina
Legtur ADN-protein

Fapi-guanin

Modificarea bazei

8-oxo-adenina
Aduct cu derivat de lipide oxidate 5-OH-metiluracil Excizia bazei Rupere dublucatenar

Acid oxaluric

dG-malonaldehid

Glicol-timin

d-guanozin-lizin

Formarea 8-hidroxideoxiguaninei i 2,6-diamino-4- hidroxi-5formamidopiridinei din guanin

Impactul NO i ROS asupra cilor intrinsece i extrinsece care regleaz apoptoza (moartea celular)

Boli umane care au fost asociate cu stresul oxidativ crescut, pe baza unor biomarkeri ai afectrii oxidative
Biomarker
Malondialdehida

Boal asociat
Boala Alzheimer

Biomarker
Scderea concentraiei de GSH sau a raportului GSH/GSSG

Boal asociat
Sindrom distres respiratorie acut (adult)

Scleroz amiotrofic lateral

Astm Ateroscleroz

Boli hepatice alcoolice

Boala Alzheimer Scleroz amiotrofic lateral

Leshmania cutanat
Diabet preeclampsie HNE hidroxinonanenen Boala Alzheimer Ateroscleroz Boli cardiovasculare Boal pulmonar obstructiv cronic Mild cognitive imairment Boala Parkinson

azbestoz
Astm Ataxia telangietacsia Cancer Boli cardiovasculare Cataract Diabet tip I i II Pacieni HIV pozitivi Fibroz idiopatic pulmonar

Biomarker
F2-isoprostan

Boal asociat
Sindrom detres respiratorie acut (adult) Boli cronice i acute de ficat datorate alcoolului Sindrom acut al anemiei falciforme Boala Alzheimer Astm ateroscleroz By-pass cardiopulmonar Boli cardiovasculare Boli renale cronice Boal pulmonar obstructiv cronic

Biomarker
Scderea concentraiei de GSH sau a raportului GSH/GSSG

Boal asociat
Sindrom de detres respirator Retinopatia la prematuri Artrit reumatoid Sindrom Werner

Biomarker F2-isoprostan

Boal asociat Boli ale arterelor coronare

Boala CreutzfeldtJakob Boala Crohn Fibroza chistic Diabet tip I i II

Biomarker Proteine S-glutationilate

Boal asociat Cataract

Diabet tip I i II Ataxia Friedreich Infecii cu HIV Hiperlipidemie

Boala Down Insufucien cardiac Ciroz hepatic

Carcinom renal Sferocitoz Uremie asociat cu hemodializ sau dializ peritoneal

Biomarker Proteine carbonilate

Boal asociat Aceruloplasminemie

Biomarker Cl-Tir

Boal asociat Sindrom distres respiratorie acut (adult) Astm Ateroscleroz Boli cardiovasculare

Miocardit acut autoimun Pancreatit scut Boala Alzheimer

Scleroz amiotrofic lateral

Astm Displazie bronhopulmonar Cataractogenez Sindrom de oboseal cronic Hepatit C cronic Boli renale cronice
Boal pulmonar

Insuficien renal cronic

Boal coronarian Fibroz chistic Artrit reumatoid Di-Tir Sindrom distres respiratorie acut (adult) Ateroscleroz Fibroz chistic Boli renale stadiu final

Biomarker
Proteine carbonilate

Boal asociat
Insuficien renal cronic Fibroz chistic Diabet tip I i II Infecie cu Heliobacter pylori i inflamaie Fibroz idiopatic pulmonar Artrit cronic juvenil Cancer pulmonar Meningit Boala Parkinson

Biomarker
Proteine carbonilate

Boal asociat
Boal Crohn Progeria Psoriazis Artrit reumatoid Sarcoidoz Sepsis Amiloidoz sistemic Uremie Sindrom Werner

Preeclampsie