MIJLOACE TEHNICE DE STUDIU N BIOLOGIA

CELULAR
Celula unitatea morfologica si functionala a materiei vii este o structura de
dimensiuni mici, care poate fi studiata doar cu ajutorul aparatelor de marit si a unor
tehnici de evidentiere specifica a structurilor.
In functie de dimensiunea celulei, anumite proprietati sau activitati specifice,
sunt folosite diverse mijloace tehnice.
Pentru un studiu general al structurilor celulare, cele cu dimensiuni de ordinul
micro-metrilor (m), este utilizat microscopul fotonic.
Pentru studiul structurilor moleculare cu dimensiuni de ordinul nanio-metrilor
(nm) este aplicat microscopia electronic, microscopia laser-confocala sau
microscopia de forta atomica
Pentru studiul structurilor celulare la nivel atomic (0, 000 000 1 mm = 1
Angstrom) sunt aplicate metode tehnice de tipul difraciei n raze X (metod care n
anul 1953 a permis stabilirea organizrii moleculare a AND-ului) si rezonana n
cmp magnetic, sau RMN, car permite elucidarea interaciunilor moleculare i a
proceselor metabolice la nivelul celulelor vii.
O reprezentare schematica a dimensiunilor celulare si mijloacelor tehnice
uttilizate pentru studiul acestora este data in figura 1.

Figura 1. Imagini ale unei structuri la scara marita din 10 in 10, la nivel macroscopic
la cel celular si apoi la cel atomic (Bruce Albert, 2010)

In figura 2 sunt date cateva exemple de structuri celulare cu ordinul lor de marime si
metodele cu ajutorul carora pot fi studiate.

Figura 2 ordinul de marime a unor sttructuri celulare

MICROSCOPIA OPTICA (FOTONIC)

Microscopul fotonic este un aparat de mrit, care mareste imaginea cu ajutorul
lentilelor de sticla (principiul optic) si foloseste ca surs de radiaie a probei de
examinat fotonul, element din spectrul undelor electromagnetice.
Puterea de rezoluie a microscopului fotonic este de 0,2 m i reprezint cea
mai mic distan la care dou puncte pot fi vzute distinct. Puterea de rezoluia a
microscopului fotonic nu poate fi depit din cauza lungimii de und mari a
fotonului.
Prile componente ale microscopului fotonic sunt:
1-Partea mecanic
2-Partea optic
3-Sursa de lumin i dispozitivul de transmisie.
Partea mecanic este reprezentat de:
Talpa microscopului n care este montat sursa de lumin;
Coloana microscopului pe care sunt montate platina (masa microscopului),
tubul obiectiv ocular i dispozitivele de punere la punct a imaginii.
Platina are o form rotund sau ptrat, iar n centru are o deschidere care
permite iluminarea preparatului de examinat. Pe platin se afl un sistem de prindere a
portobiectului , alctuit din dou brae (valei), unul mobil i unul fix. Pe colul din
dreapta sus a mesei se afl o rigl, care ajut la reperarea unor teritorii de pe
suprafaa preparatului.
Tubul are montat la extremitatea superioar sistemul optic ocular, iar la
extremitatea inferioar un revolver alctuit din dou discuri, unul fix, montat n partea
inferioar a tubului i unul mobil, pe care sunt montate obiectivele i care prin micri
circulare de rotaie, aduce n axul optic al microscopului, pe rnd, cte un obiectiv cu
putere de mrire diferit (microscoapele Olympus au 4 obiective cu putere de mrire
4x, 10x, 40x, 100x).
Sistemul de punere la punct a imaginii este alctuit din dou uruburi, numite
vize (unul macrometric - macroviza, pentru micri grosiere i unul micrometric microviza, pentru micri fine), care deplaseaz masa microscopului n plan vertical.

Pentru deplasarea mesei n plan orizontal exist dou uruburi amplasate sub masa
microscopului, n colul din dreapta sus.
Partea optic
Partea optic est reprezentat de sistemul ocular i sistemul obiectiv, ambele
fiind alctuite din elemente tubulare, metalice n care sunt amplasate un numr variat
de lentile de sticl.
Ocularele, ca i obiectivele pot avea puteri de mrire diferite: 5x, 7x, 10x i
15x. Acestea pot fi schimbate, prin scoaterea lor i nlocuirea n suportul ocular din
extremitatea superioar a microscopului.
Obiectivele de 4x, 10x, i 40x sunt obiective uscate, iar cel de 100x este
obiectiv cu imersie, pentru care se folosete ulei de cedru sau alte tipuri de lichide cu
indicele de refracie apropiat d cel al sticlei.
Sursa de lumin i dispozitivul de transmisie este reprezentat de:
Bec de 6v, alimentat de un transformator.
Oglind plan, montat n talpa microscopului, care reflect razele luminoase,
dirijndu-le n axul optic al microscopului.
Condensorul de lumin este aflat sub platin i este alctuit dintr-un sistem de
lentile cu rol de focalizare a luminii pe preparatul microscopic. Pentru iluminarea
eficient a preparatului este necesar corectarea aperturii numerice a condensorului cu
cea a obiectivului aflat n lucru. Schimbarea aperturii se realizeaz cu ajutorul unui
diafragm manipulat cu o prghie.

TIPURI DE MICROSCOPIE FOTONIC

Prin montarea unor dispozitive speciale la

microscopul fotonic obinuit, se poate realiza:
- microscopia n contrast de faz,
- microscopia de fluorescent,
- microscopia n cmp ntunecat,
- microscopia n lumin polarizata.
Aceste tipuri de microscopii sunt aplicate
preferenial, n funcie de tipul preparatului
microscopic i a proprietilor structurilor celulare
examinate.

Figura 3. Principiul de formare a imaginii in

microscopia optica.

Figura 4. Componentele microscopului optic

Tabel. 1 Particularitile structurale si functionale eseniale ale unor tipuri de microscoape optice.
TIP MICROSCOP
OBINUIT
PRIN FLUORESCEN
PRINCIPIU SPECIFIC DE Sursa de radiaie Sursa de radiaie unde
FUNCIONARE
fotonul cu lungime de electromagnetice scurte i frecven
und mare.
nalt (UV).

PARTICULARITI
TEHNICE ALE

Bec de 6V

1-Lamp cu vapori de mercur.

2-Filtre: de excitaie i de protecie
3-Condensorul poate fi unul din
cele trei:
+cu apertur numeric de 1,2,
+pentru cmp ntunecat
+cu oglind

APLICAII

Studiu general al
celulei i a organitelor
celulare n stare fixat
i colorat.

Evidenierea structurilor
fluorescente, cu fluorescen
primar (natural unii aminoacizi,
pigmeni, bacterii, dintele natural
etc.) i secundar (indus cu ageni
chimici de tipul acridin orange sau
altele). Prin fluorscen secundar
se pot evidenia AND, proteinele
fibrilare de tipul colagenului,
elastinei sau reticulinei, mucinele,
etc.

N CONTRAST DE FAZ
Defazarea undei transmise de
la sursa de radiaie obiuit i
a
undei
difractate de
preparatul microscopic, ceea
ce
mrete
contrastul
elementelor preparatului
1-Obiectiv cu inel de faz.
2-Condensor inelar pe disc
opac

Se studiaz celulele vii i

necolorate, micrile cililor i
a flagelilor, procesele de
endocitoz
i
diviziune
celular, precum i alte
activiti
celulare
n
desfurare.

N LUMIN POLARIZAT
Variaia vitezei de propagare
a luminii polarizate de pe
preparat, n funcie de
direcia de propagare.
1-Polarizor, care se afl sub
condensor.
2-Analizor, care se afl
deasupra obiectivului
Cnd axa de polarizare a
polarizorului
este
perpendicular
pe
axa
analizorului se obine un
cmp ntunecat.
Se evideniaz structurile
fibrilare
sau
liniare
(miofibrilele,
mielina,
colagenul),
structurile
membranare i structurile cu
simetrie radiar (granule
proteice,
lipidice
sau
glucidice).

Imagini de microscopie optica:

Camp luminos

Contrast de faza

Camp intunecat

Lumina polarizata

Figura 5. Exemple de imagini obtinute cu diferite tipuri de microscoape optice si

principiul de formare a imaginii.
TEHNICA DE LUCRU cu microscopul optic obisnuit
Tehnica de lucru cu microscopul obinuit este urmtoarea:
1-Se conecteaz microscopul la reeaua de 220V i se apas butonul de aprindere a becului;
2-Se rotete revolverul cu obiectivele, pn cnd se aduce n axul optic al microscopului
obiectivul de 10x;
3-Privind n oculare se coboar masa microscopului pn cnd se obine o lumin uniform i
de intensitate mare;
4-Se aeaz lama portobiect cu lamela n sus pe partea superioar a platinei, fixnd-o cu
ajutorul valeilor;
5-Privind lateral, se aduce n cmpul luminos preparatul de pe lama microscopic;
6-Privind n oculare, se ridic treptat masa microscopului cu ajutorul vizei macrometrice, pn
cnd apare o imagine n cmpul examinat;
7-Se rotete viza macrometric pn la obinerea unei imagini clare;
8-Privind lateral, se schimb obiectivul de 10x cu un obiectiv mai mare.
n timpul examinrii se recomand s se in mna n permanen pe viza micrometric, pentru
a menine imaginea clar n timpul deplasrii cmpului, deoarece preparatul nu are o grosime
uniform.

ATENIE!
1. Nu se va folosi viza macrometric la obiective mai mari de 10x, existnd pericolul
de spargere a lamei portobiect;
2. Examinarea unui preparat microscopic incepe cu obiectivul 10x sau mai mic
3. La terminarea examinarii preparatului microscopic, mai intai se fixeaza in axul
optic al microscopului obiectivul 10x si apoi se coboara masa microscopului
4. Nu se va folosi obiectivul de 100x fr ulei de imersie.