MICROSCOPIA ELECTRONICA

De Bălan Florentina
MICROSCOPUL ELECTRONIC
 Un microscop electronic este un tip de microscop care
folosește electroni pentru a ilumina specimenul și a
transmite o imagine mărită a acestuia.
 Studiul celulelor cu ajutorul microscopului electronic a
permis, în anii 1950-1970, identificarea organizării
celulelor și a organitelor celulare.
 Poate fi caracterizat folosindu-se aceiași parametri ca și
pentru microscopul optic:
 Puterea de mărire  aproximativ 1.000.000 x ;
 Rezoluție 0,002 nm (variabilă dependentă de tensiunea de
accelerare a electronilor, de viteza acestora);
 Ochiul uman detectează lungimi de undă între~ 400-
800 nm.

o Microscopul optic
poate detecta o
lungime de unda de
200 nm.

o Microscopul
electronic poate
ajunge la o
rezolutie de 2pm.
PRINCIPIUL DE FUNCTIONARE AL
MICROSCOPULUI ELECTRONIC

 Microscopul electronic constă dintr-un cilindru vidat în

care sunt accelerați electronii extrași dintr-un filament
(de regulă de tungsten) prin aplicarea unei tensiuni de
accelerare de ordinul sutelor de mii de volți.
 O serie de lentile opto-electronice focalizează fasciculul
de electroni care trece prin probă și este vizualizat pe
un ecran fluorescent sau este captat de un detector
electronic.
 Formarea imaginii în ME depinde de interacțiunea
electronilor din flux cu nucleele și electronii atomilor
din preparat (probă).
 Celulele și țesuturile nu au contrast, motiv pentru care
se folosesc pentru pregătirea probei săruri de metale
grele, care se leagă selectiv de diverse molecule
(fosfolipide, proteine, etc) pentru a crește contrastul în
preparat.
 Cu ajutorul microscopului electronic putem examina
structuri celulare de mici dimensiuni, denumite
ultrastructuri (complexe macromoleculare și organite).
TIPURI DE MICROSCOAPE ELECTRONICE


Microscop electronic de transmisie
detectează electronii transmiși prin probă
-Furnizează detalii de rezoluție înaltă (∼ 0,2 nm)


Microscop electronic de baleiaj
detectează electroni reflectați de probă
-Furnizează detalii ale suprafeței probei analizate ( ∼ 50 nm)
MICROSCOPUL ELECTRONIC DE
TRANSMISIE
o Folosește un fascicul de
electroni în locul unui fascicul
de lumină .
o Pentru focalizarea
electronilor într-un fascicul
coerent se folosesc lentile
electromagnetice amplasate
într-o incintă vidată.
o Puterea de mărire și rezoluția
sunt dependente de viteza de
accelerare a electronilor în
incinta vidată a ME.
 Forma originală a microscopiei electronice,
microscopia electronică cu transmisie, implica o rază
de electroni la tensiune înaltă emisă de un catod, de
regulă filament de wolfram, și focalizată de lentile
electrostatice și electromagnetice.
 Rezoluția unui microscop electronic cu transmisie este
limitată în principal de aberația de sfericitate, dar o
nouă generație de sisteme de corecție a aberațiilor a
avut ca efect depășirea parțială a aberațiilor sferice și
creșterea rezoluțiilor.
  Capacitatea de a determina pozițiile atomilor în
cadrul materialelor a făcut din acest tip de microscop o
unealtă importantă pentru cercetarea și dezvoltarea
din domeniul nanotehnologiilor.
ETAPELE OBTINERII PREPARATULUI PENTRU
MICROSCOPIA ELECTRONICA DE TRANSMISIE
CLASICA
 Recoltare
 Fixare

 Includere

 Sectionare si Montare

 Contrastare
RECOLTAREA

 Se face prin biopsie si culturi celulare.

 Biopsia este un test medical frecvent efectuat de către
un chirurg sau de un radiolog care
implică eșantionare de celule sau țesut pentru
examinare.
 Biopsia este prelevare medicală de țesut de la un
subiect viu pentru a determina prezența sau gradul
unei boli.
FIXAREA
 Este obligatorie pentru ME deoarece nu se pot examina
celule vii.
 Trebuie făcută înainte sau imediat după recoltarea
țesutului prin biopsie.
 Trebuie făcută foarte rapid după recoltare - orice
degradare la nivel molecular/celular va fi redată de
microscop.
Fixarea este fizica sau chimica:
o Fizica :
 prin înghețare rapidă - vitrificare (azot lichid, la -
190°C)
o Chimica:

 Glutaraldehidă (timp de fixare rapid – 5 secunde,

putere de penetrare scăzută în țesut – 0,5mm)
Tetraoxid de osmiu (OsO4) – numită postfixare,
permite conservarea fosfolipidelor (vizualizarea
membranelor)
Aldehidele și agenții oxidanți (OsO4) acționează prin
formarea de legături covalente cu grupările funcționale
ale macromoleculor din celule/țesuturi
INCLUDEREA
 Includerea încorporează piesa de țesut într-o materie
solidă, potrivită pentru a obține secțiuni cât mai subțiri
(50-100 nm), care pot fi examinate la microscop
(electronii o pot străbate).
 Este precedată de deshidratare pentru a înlocui apa și
a permite materialului de includere, o rășină hidrofobă
epoxidică, să pătrundă în probă.
 SECTIONAREA SI MONTAREA
 Secționarea se realizează cu un aparat special
(ultramicrotom) pentru a obține secțiuni subțiri de 0,04 – 0,1
µm.
Piesele se recoltează pe apa și apoi se
Piesa de țesut este inclusă în epon montează pe o grilă

Secționarea se face la
ultramicrotom
CONTRASTAREA
 Este echivalentă colorării pentru microscopul optic;
este necesară pentru a putea discrimina diferite
componente ale preparatului.
 Se face cu săruri de metale grele (citrat de plumb,
acetat de uranil, etc), ale căror nuclee se leagă de
anumite componente din preparat, blocând trecerea
electronilor.
 Depunerea metalelor grele nu este specifică dar este
reproductibilă astfel încât creșterea contrastului se
realizează consecvent pe anumite structuri.
 SECTIUNE
NECONTRASTATA

 SECTIUNE
CONTRASTATA
MICROSCOPUL ELECTRONIC DE BALEIAJ
 Oferă imagini tridimensionale
ale suprafețelor celulelor,
țesuturilor, organisme.
 Același principiu al
interacțiunii unui fascicul de
electroni cu o probă care
trebuie acoperită cu un strat
subțire metalic (pentru
stabilitate și contrast).
 Imaginea este formată de
electronii reflectați de pe
suprafața preparatului și
colectați de un detector.
 Cilii si microvilii  Firele de par

 Celule nervoase
crescute in cultura
 Organism microscopic
din ape termale

 Acarian colorat
digital
BIBLIOGRAFIE
 https://www.wikipedia.org/
 https://www.histology.ro/

 https://microscopy.stanford.edu/

 https://www.fei.com/image-gallery/#gsc.tab=0

 http://www2.optics.rochester.edu/

 https://
delphipages.live/ro/stiinta/fizica/transmission-electro
n-microscope
SFARSIT!