Microscopia de transmisie și

reflexie
Realizat de : Apostol Roxana Daniela
Tehnica Dentara I 2021-2022
Ce este microscopul? Din ce este alcătuit ?
Microscopul reprezintă un instrument optic alcătuit dintr -un ansamblu de dioptrii ( sferici
) și centrați ce are rolul de a formă imagini mult mărite ale unor obiecte de dimensiuni
mici.
Microscopul este alcătuit din :
- sistemul mecanic
- sistemul electric
- sistemul optic
Schema microscopului de transmisie și de reflexie ( sistemul optic)
Utilitatea microscopiei de transmisie si reflexie
Microscopia de transmisie: se folosește pentru preparate ce nu au grosimi mai mari de un
micron și prezintă un contrast bun.

Microscopia de reflexie: se folosește pentru preparate ce nu permit o transmisie eficientă a

luminii. Obiectivul poate juca rol de condensor sau poate există un condensor special
dispus coaxial cu obiectivul.
Principalele elemente componente ale sistemelor
Sistemul mecanic :
- măsuța microscopului prevăzută cu doi cavaleri ( sau călăreți ) ce asigura fixarea
preparatului pe măsuță .
- șuruburi de punere la punct a imaginii (macroviza pentru acordul brut și microviza
pentru acordul fin ).
- șuruburi de centrare a componentelor optice pe același ax.
-revolverul cu obiective și diafragmele (fante circulare cu diametrul variabil ce au rolul de
a modifica fluxul de lumina pe preparat).
Principalele elemente componente ale sistemelor
Sistemul optic : -condensorul
– focalizează razele de lumina ce vin de la sursă , pe preparat.
-obiectivul – format dintr -un ansamblu de lentile convergente ce formează o imagine
reală , mărită și răsturnată .
-ocularul – format dintr -un ansamblu de lentile convergente ce formează o imagine
virtuală , mărită și dreapta .
Sistemul electric : - sursă de tensiune. -
aparate de măsură .
Mărimi caracteristice microscopului
• mărirea transversală:
unde: y2 = dimensiunea imaginii (perpendiculară pe axa optică)
y1 = dimensiunea obiectului (perpendicular pe axul optic)

•grosismentul:
unde: α2 = unghiul sub care se vede obiectul privit prin microscop,
α1 = unghiul sub care se vede obiectul atunci când este privit cu ochiul liber şi situat
la distanţa optimă de citire (0.25m pentru un ochi normal),
Gob = grosismentul obiectivului, Goc = grosismentul ocularul
Mărimi caracteristice microscopului
•puterea separatore
unde: ε = distanţa dintre două puncte ale obiectului care pot fi separate,
n = indicele de refracţie dintre preparat şi obiectiv,
λ = lungimea de undă a radiaţiei utilizate,
α = unghiul dintre axa optică şi razele cele mai depărtate de axă care mai pătrund în
obiectiv
Reprezentare schematica a elementelor prezentate anterior
Parte experimentală
A.Determinarea diametrului celulelor (hematiilor) - metoda clasică
Materiale necesare: preparat, microscop, micrometru ocular
Mod de lucru: se aşează preparatul pe măsuţa microscopului şi se pune la punct
imaginea.Se înlocuieşte ocularul cu micrometul ocular.Se localizează apoi o celulă şi se
determină diametrul în diviziuni
Parte experimentală
Diametrul în microni se calculează cu ajutorul formulei:

, unde
Determinarea diametrului hematiilor utilizând programul de achizitie și de
prelucrare
aProgramul
imaginilor Optica
permite Visionproceduri
următoarele Pro v2.7de măsurare: numărarea obiectelor,determinarea
unghiurilor, determinarea lungimii segmentelor, determinarea razei obiectelor presupuse circulare,
determinarea ariei și perimetrului obiectelor, determinarea distanței dintre două puncte

● Calibrarea imaginii
Se asează micrometrul obiectiv pe masuța microscopului și se captează imaginea scalei

acestuia utilizând un obiectiv cu gob de 40. Distanța dintre două diviziuni din scală este de

0,01mm. În imaginea ce urmeaza a fi studiată, obținută cu același obiectiv cu gob de 40, se copiază

o porțiune din scala micrometrului obiectiv

Determinarea diametrului hematiilor utilizând programul de achizitie și de
prelucrare
a imaginilor
Se Optica
lansează comanda Vision
Micrometer Procompletând
- Calibrate v2.7 în caseta de dialog următoarele câmpuri: Length -
lungimea cunoscută a segmentului marcat (L), corespunzatoare unității de măsură introduse la campul Liniar unit,
conversia lungimii respective în μm la campul = micron(s),mărirea utilizată la câmpul Magnification și unitatea de
măsură a ariei la câmpul Square unit.

● Proceduri de măsurare

a) Numărarea obiectelor (Counting)

Operațiunea de numărare se face manual dând clic pe fiecare obiect în parte. Acestea vor

fi marcate individual cu câte un numar de la 1 la n. Pentru a încheia procedura se dă dublu clic pe

butonul dreapta al mouse-lui. Imaginea finală este formată din suprapunerea a două straturi:

unul care conține imaginea propriu-zisă și altul, ce conține imaginea cu numerele marcate.
Determinarea diametrului hematiilor utilizând programul de achizitie și de
prelucrare
ab)imaginilor
DeterminareaOptica Vision
unghiurilor Pro v2.7
(Angle)

Măsurarea unui unghi presupune a specifica trei puncte de control pe imagine. Unghiul măsurat va
fi cel cuprins între dreapta ce trece prin punctele 1 si 2, respectiv dreapta ce trece prin punctele 2 si
3. Elementele de identificare ale unghiului vor fi afisate într-un strat suprapus peste imaginea finală.

c) Determinarea lungimii segmentelor (Polyline)

Pentru a măsura lungimea segmentelor trebuiesc specificate succesiv capetele acestora.

Încheierea selecției se face cu dublu clic pe butonul dreapta al mouse-lui. În imagine vor fi afișate

lungimea totală a poligonului, precum și lungimea medie a segmentelor.

Determinarea diametrului hematiilor utilizând programul de achizitie și de
prelucrare
ad)imaginilor Optica
Determinarea razei Vision Pro v2.7
(Circle from 3 Points)

Cunoscând că trei puncte necoliniare determină în mod unic un cerc, se punctează la

nivelul obiectului investigat, cele trei puncte cât se poate de precis pe circumferintă.
Cercul astfel aproximat, va fi afișat într-un strat suprapus împreună cu raza calculată.
Determinarea grosismentului obiectivului
Materiale necesare: microscop, micrometru obiectiv, micrometru ocular

Mod de lucru:se aşează micrometrul obiectiv pe măsuţa microscopului şi se pune la punct

imaginea. Se înlocuieşte ocularul cu micrometul ocular. Se aliniază cele două scale la stânga
şi se caută diviziuni ce coincid atât pe scala micrometrului obiectiv cât şi pe cea a ocularului
Determinarea grosismentului obiectivului (n = numarul de

diviziuni pe micrometrul ocular,

m = numarul de diviziuni pe micrometrul obiectiv).

Grosismentului obiectivului se calculeaza cu ajutorul formulei:

Bibliografie

1) https://www.qdidactic.com/sanatate-sport/medicina/microscopia-de-transmisie-micro
scopia-de-reflexie159.php
2) https://www.scribd.com/document/412813522/Microscopia-de-transmisie-pdf
3) Lucrari practice Biofizica