TEHNICI DE MICROSCOPIE

MICROSCOPIA OPTICA
LP 1
Biologie Celulara si Moleculara
 TEHNICI DE MICROSCOPIE
Microscopie optica
• Microscopie optica de transmisie
• Microscopie de baleiaj utilizand lasere
Microscopie confocala
Microscopie in camp apropiat
Microscopie electronica
• Microscopie electronica de transmisie
• Microscopie electronica de baleiaj
Microscopie de forta atomica
Microscopie optica de transmisie
• Lumina traverseaza proba microscopica;
• Lumina este absorbita diferentiat de diferite componente ale
probei
• Este nevoie frecvent de colorarea artificiala a probei pentru a
vizualiza mai bine anumite componente celulare etc.
• Imaginea este virtuala, marita si rasturnata
• Principiul care sta la baza constructiei oricarui microscop il
constituie proprietatea lentilelor optice de a produce
refractia razelor luminoase care le traverseaza, formand astfel
o imagine reala sau virtuala.
• La MO, obiectivul formeaza o imagine marita, reala si
inversata specimenului. Ocularul preia aceasta imagine si o
transforma intr-o imagine marita, virtuala si dreapta in raport
cu prima.
• Microscopul optic (MO) este utilizat atat in domeniul
cercetarilor medicale cat si in analize uzuale de laborator.
• Cu ajutorul MO se pot face analize ale lichidului
cefalorahidian (LCR), a urinii, a sangelui etc.
• Acest instrument optic poate da imagini clare ale unor
formatiuni celulare cu dimensiuni pana la aproximativ 0,15
μm.
• Microscopul optic are trei parti principale: mecanica, optica
si dispozitiv de iluminare.
Constructia Microscopului
A. Suportul microscopului
B. Bratul microscopului
C. Prisma
D. Filtru
E. Ocular
F. Dispozitiv “revolver”
G. Obiective
K. Platina
I. Viza micrometrica
J. Viza pentru control condensator
H. Viza macrometrica
L. Condensor
M. Diafragma iris
N. Sursa de lumina
O. Adaptor camera
P. Controlul iluminarii
 COMPONENTELE MECANICE ALE MO

• A – Suportul microscopului -
componenta care confera stabilitate
aparatului. La microscoapele
moderne in suportul microscopului
se afla incorporata in sursa de
lumina.

• B - Bratul microscopului se
articuleaza fix sau mobil cu suportul.
 Componentele Mecanice ale MO

C - Prisma microscopului are la partea

superioara ocularele (E), iar la partea
inferioara, revolverul (F) cu obiectivele
(G). La microscoapele moderne, in
prisma optica se afla interpusa lupa
binocular, care contine un sistem de
prisme pentru distribuirea imaginii la
cele doua oculare.

F - Revolverul - format din doua

discuri metalice suprapuse, cel inferior
mobil, aduce prin rotire obiectivul
dorit in axul optic.

.
 Componentele Mecanice ale MO

Dispozitivul de punere la punct a

imaginii este alcatuit din viza
macrometrica (I) - foloseste
pentru prinderea grosiera a
imaginii, si viza micrometrica (H)
– prin miscari fine, permite
clasificarea imaginii.
 COMPONENTELE MECANICE ALE MO

• K - Platina, perpendiculara pe
brat, serveste ca suport pentru
preparat. Bratul se imobilizeaza
pe platina prin doua lame
metalice numite valeti sau
cavaleri. Platina este prevazuta
cu un dispozitiv special numit car
mobil care, actionat de doua
suruburi coaxiale, permite
deplasarea fina a preparatului.
 Componentele Optice ale MO
Cuprind piese de calitatea carora depind performantele ce pot fi
obtinute in examinarea unui preparat.
Aceasta componenta este alcatuita din oculare (E), obiective (G)
si sistemul de iluminare (N).
 Componentele Optice ale MO

Obiectivele (G) - constituite dintr-un

sistem de lentile care sunt destinate
sa functioneze in imediata vecinatate
a preparatului. Singura lentila care
formeaza imaginea se afla la partea
inferioara a obiectivului si se
numeste lentila frontala. Distanta
dintre ea si suprafata preparatului
reprezinta distanta frontala si este cu
atat mai mica cu cat obiectivul folosit
are o putere mai mare de marire.
Celelalte lentile din obiectiv au rolul
de a corecta aberatiile optice
produse de lentila frontala.
 Componentele optice ale MO
Obiectivele - cel mai frecvent au puterea de marire de: 6x, 10x,
20x, 40x, 60x, 90x, 100x, aceasta fiind gravata pe suprafata
cilindrului.
Obiectivele cu o putere de marire mai mica (pana la 40x) se
numesc obiective “uscate” pentru ca mediul interpus intre
lentila frontala si preparat este aerul.
Obiectivele cu putere mare de marire (60x, 90x, 100x), cu care
se lucreaza foarte aproape de preparat, se numesc obiective cu
“imersie” deoarece spatiul dintre lentila frontala si preparat este
ocupat de un lichid (ulei de cedru, glicerina, uleiul de parafina) in
care este imersat varful apropiat cu al sticlei port preparat - prin
folosirea lor, se elimina in mare masura refractia in afara
suprafetei lentilei frontale a razelor de lumina care ilumineaza
preparatul. Ca urmare imaginea observata va castiga in
luminozitate si claritate.
 Informatiile privind obiectivul
Producator Filet de montaj in
Mod de corectie disp. Revolver
de camp plan Corectia aberatiilor
Putere de marire optice
Apertura numerica
Proprietati optice
Distanta de lucru
speciale
Cod culoare de
Lungimea tubului
imersie
Inel de ajustare
Grosimea lamelei
Ansamblul lentilelor
Inel de ajustare
a grosimii frontale
lamelei
 Componentele optice ale MO

Ocularele (E) - se afla dispuse la

partea superioara a lupei
binocular, fiind formate fiecare,
din doua lentile plan convexe ce
formeaza o imagine marita,
dreapta si virtuala.
- Pentru observare se folosesc
de obicei oculare cu putere
mica de marire (5x, 10x),
deoarece rolul lor este de a
distinge detaliile fine date de
obiectiv si mai putin de a mari
aceasta imagine.
 Componentele optice ale MO

Gradul de marire a imaginii finale date de microscop poate

fi modificat prin schimbarea obiectivelor si ocularelor si se
calculeaza facand produsul dintre puterea de marire a
ocularului si a obiectivului.

   Formula pentru grosisment si putere de separare

  Exemplu:  ocular 10x; obiectiv 20x; marire: 20 X 10=200.
Aceasta valoare da puterea de marire totala sau
grosismentul microscopului.
 Componentele optice ale MO

Sistemul de iluminare, la
microscoapele moderne, se afla
incorporat in suport (A) si este
reprezentat de un bec de 6V sau 12V.
Lumina este orientata in axul optic al
microscopului de catre o oglinda
plana dispusa oblic in dreptul unui
orificiu care se afla sub platina.
Inclinatia oglinzii poate fi reglata cu
doua suruburi.
 Componentele optice ale MO

Sub platina (K), prins de coloana

microscopului se afla condensorul (L),
care are rolul de a concentra razele de
lumina intr-un focar ce coincide cu
planul preparatului. Unghiul luminii
care intra in condensor se regleaza cu
ajutorul diafragmei iris (M), dispusa in
montura condensorului, sub lentile.
Condensorul poate fi ridicat sau
coborat, cu ajutorul unei vize (J)
dispusa sub platina.
Ocularul (1) – contine lentilele
ocular; valori tipice ale maririi: 5x,
10x si 20x
Obiectivul (2); valori tipice ale
maririi: 4x, 5x, 10x, 20x, 40x, 50x
si 100x; interschimbabile
Platina (3) – sustine proba de
examinat
Sursa de lumina (4) – situata
sub masa
Condensorul (5) – sistem de
lentile si diafragme care
controleaza cantitatea de lumina
prin proba si focalizarea luminii
Macroviza si microviza (6)
Microscopul lui van Leewenhoek
Microscopul lui van Hooke
 Moduri de Examinare
in Microscopia Optica
Microscopia in camp luminos (clasica)
Microscopia de contrast de faza
Microscopia in camp intunecat
Microscopia in fluorescenta
Microscopia in lumina polarizata
Microscopia cu iluminare oblica
Microscopia in lumina reflectata
Microscopul inversat
Mcroscopia confocala Laser
Drumul Optic in Microscopul clasic (Drept)
Microscopul inversat
DRUMUL OPTIC IN MICROSCOPUL INVERSAT
Celule vegetale - frunza Ficat de sobolan

Frotiu de sange Frotiu de sange – malaria (P. vivax )