Universitatea de Medicin i Farmacie "Carol Davila" Bucureti

Departamentul 2 preclinic - tiinte morfologice

Disciplina de medicin celular i molecular

Tehnici de microscopie.
Echipamentele

Dr. Iurie Roatei

 Microscopie = tehnic de examinare a obiectelor
mici, cu instrumente care s depeasc, prin
sensibilitate, posibilitile ochiului.
 Principiile constructive
Microscopul optic Microscopul electronic
Tunul electronic -sursa
electronilor de inalta
energie
Anod

lentile Camera in care se

electromagnetice introdce preparatul

Lentila proiector

Ecranul
fluorescent pe
care se formeaza
imaginea
 Principiile constructive
Microscopul optic Microscopul electronic

Formula lui Abb: Formula lui De Broglie:

d = / n sin = h/m.v

= 0,55 (constanta) h = constanta lui Planck

n = 1 (aer) v = viteza particulei
sin =1 (=90) m = masa particulei

Rezoluia maxim Rezoluia maxim

= 0,2 m = 0,2 nm
 Principiile constructive
Microscopul optic
Preparatul colorat este
strbatut de lumin alb
lsand sa treac doar o
anumit lungime de und:
o n funcie de legarea
colorantului pe diferite
structuri sau organite
celulare se obine o
imagine policromatic
o Imaginea final este
colorat
Microscopul electronic
Electronii care strbat
preparatul sunt deviai n
funcie de densitatea de
nuclei grei din
ultrastructurile din
preparat:
o Elementele ce leag
mai muli nuclei grei
vor produce un grad
mai mare de disper-
sie a e- zone
electronodense, mai
ntunecate
o Elementele care nu
leag nuclei grei vor
permite trecerea e-
zone electronoclare
 Comparaie MO versus ME
Caracteristic Microscopul optic Microscopul electronic

Spectrul vizibil
Spectrul electromagnetic Electroni
760nm 390nm
folosit Imagini alb-negru
Imagini colorate

Puterea de rezoluie 0.2 m 0.2 nm

Puterea de mrire X 1500 X 1.000.000

Lamp de tungsten de
Surs de radiaii Bec cu incandescen
nalt tensiune (50KV)
Lentile Sticl Electromagnetice

Mediul de examinare Aer Vacuum

Ochiul uman - retina Ecran fluorescent
Proiecia imaginii
film fotografic film fotografic
 Comparaie MO versus ME

Caracteristic Microscopul optic Microscopul electronic

Preparatul examinat Celule fixate sau vii Doar celule fixate

Diversitate de substane
Fixarea
(uzual alcooli, formaldehid)
Glutaraldehid/formaldehid
Postfixare: tetraoxid de osmiu
(OsO4)

Includere Parafin Rin

Secionare Seciuni de ~ 5 m Seciuni de ~ 50 nm

Agent de
Colorani solubili n ap Metale grele
difereniere
Suport Lama de sticl Gril de cupru
 Exemple de imagini

Microscopul optic Microscopul electronic

 Exemple de imagini

Microscopul optic Microscopul electronic

 Exemple de imagini

Microscopul optic Microscopul electronic

Microscopul optic
Ocular
Revolver
Obiectiv
Dispozitiv de deplasare a lamei
Masa microscopului
Condensor
Macroviza i microviza
Sursa de lumin
Obiectivul - imagine mrit, real i
rsturnat a obiectului
Ocularul - imagine final mult mrit,
rsturnat i virtual, la infinit (nu
necesit efort de acomodare)
 Microscopul optic
Puterea de mrire
Puterea de mrire - produsul dintre puterea de
mrire a obiectivului i cea a ocularului

Puterea de mrire maxim 1500x

Puteri de mrire i denumirile obiectivelor

4 lup
10 obiectiv de orientare

20, 40 obiectiv de diagnostic histologic

60, 100 obiectiv de diagnostic citologic
Microscopul optic (cu cmp luminos)
 Studiul celulelor vii, necolorate
Tipuri de microscoape optice
1. M. cu cmp ntunecat
2. M. cu contrast de faz
3. M. cu interferen
4. M. tip Nomarski
5. Microscopul inversat
 Studiul celulelor vii, necolorate
1. MICROSCOP CU CMP NTUNECAT

PRINCIPIU
exist un diafragm n
condensor care selecteaz
doar lumina lateral, imaginea
final fiind format de razele
reflectate de componentele din
preparat
 Studiul celulelor vii, necolorate
2. M. CU CONTRAST DE FAZ
PRINCIPIU
lumina care trece prin medii
cu indici de refracie diferii i
modific direcia i viteza
micoscopul transform
aceste diferene n diferene
de intensitate luminoas
3. M. CU INTERFEREN
PRINCIPIU
mai folosete nc o raz de
lumin care nu traverseaz
esutul analizat, dar interfer
cu raza provenit de la sursa
de lumin
ofer informaii despre
densitatea obiectului analizei
 Studiul celulelor vii, necolorate
4. M. TIP NOMARSKI 5. MICROSCOPUL INVERSAT

Un tip modificat al Utilizat pentru examinarea celulelor

microscopului cu contrast din flacoane sau plci Petri
de faz, oferind imagini
aparent tridimensionale obiective sub masa microscopului
sursa de lumin deasupra preparatului
 Microscopul electronic de baleiaj
Ofer imagini tridimensionale ale suprafeelor celulelor,
esuturilor sau chiar a organelor
Acelai principiu al interaciunii cu un fascicul de electroni
Importani pentru obinerea imaginii sunt electronii reflectai
pe suprafaa preparatului

18
 Tehnica de ngheare - fracturare
Permite vizualizarea suprafeelor rezultate prin clivajul anumitor
structuri (ex: clivajul membranei celulare)
se realizeaz un mulaj metalic sau de carbon

Se examineaza la M.E.T.

19