Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Desi exista o mare gama de lipide – in membrana celulara nu se gasec toate tipurile ci doar 3
categorii importante:
(1) Fosfolipide – 70-75%
Clasificarea fosfolipidelor in functie de poliol
a) Fosfogliceride – pornesc de la glicerina
b) Fosfosfingozide – pornesc de la sfingozina (amino-alcool nesaturat cu doi carboni asimetrici)
[Glicerol aminat la C2, cu lant lung mononesaturat la C1]
PC + PM + GLICOLIPIDE – EXTERIOR
PE + PI + PS – INTERIOR
Acizii grasi :
solubilitate in apa ++<-C12-C24 → hidrofobicitate ++
ingroasare bistrat
Sunt saturati sau nesaturati cu catena hidrocarbonata neramificata.
Clasificare in functie de acidul gras esterificat la pozitia 1 sau 2 a glicerinei:
1 + acid gras saturat: - miristic C14, palmitic C16, stearic C18
2 + acid gras nesaturat : oleic 1, linoleic 2, linolenic 3 – C18
- Glicolipdele (contin sfingozina si colina dar nu au fosfor – in membrana externa) Colesterolul este
distribuit in proportie egala.
N.B. Aparitia PS in membrana externa este semn ca celula intra intr-un proces apoptotic.
Spatiul ocupat de lipide poate fi asemanat cu un cilindru al carui baza are 60A cu inaltimea de 30A.
Prin mobiliatea lipidelor membranare, trebuie sa luam in considerare dinamica componentelor
organice – ele nu sunt statice – sunt intr-o continua agitatie. Astfel miscarile sunt:
Intramoleculare – de rotatie(intregul corp) – in jurul legaturii C-C 10^9 rotatii/s
- flexie(a cozii) 10^8 flexii/s – stergator de parbriz
Intermoleculare – difuzie laterala (in planul unei foite lipidice) – 10^7 schimbari de directie/s
flip-flop (trecerea dintr-o foita a bistratului in alta - foarte rara, aproape nula) 1/luna,
mai frecventa in endomembranele RE
Manifestarea bidimensionala a fluiditatii bistratului lipidic da membranei celulalre caracterul de
structura cu proprietati mezomorfe specifice cristalelor lichide datorat capacitatii lipidelor de a
structura microdomenii bogate in sfingolipide, colesterol, proteine membranare ce poarta numele de
lipid rafts. Astfel se organizeaza structuri specializate ale membranei cum ar fi caveolele. Lipid rafts
sunt structuri planare sau invaginate, ca exemplu pentru cele din urma sunt caveolele = vezicule
plasmalemale in celula endoteliala.
Desi exista o mare gama de lipide – in membrana celulara nu se gasec toate tipurile ci doar 3
categorii importante:
(2) Fosfolipide – 70-75%
Clasificarea fosfolipidelor in functie de poliol
a) Fosfogliceride – pornesc de la glicerina
b) Fosfosfingozide – pornesc de la sfingozina (amino-alcool nesaturat cu doi carboni asimetrici)
[Glicerol aminat la C2, cu lant lung mononesaturat la C1]
Acizii grasi :
solubilitate in apa ++<-C12-C24 → hidrofobicitate ++
ingroasare bistrat
Sunt saturati sau nesaturati cu catena hidrocarbonata neramificata.
Clasificare in functie de acidul gras esterificat la pozitia 1 sau 2 a glicerinei:
1 + acid gras saturat: - miristic C14, palmitic C16, stearic C18
2 + acid gras nesaturat : oleic 1, linoleic 2, linolenic 3 – C18
Ectoproteinele se pot lega de un rest etanolaminic aparinand unei proteine din membrana externa –
proces care se numeste glipiere – carboxilul din structura proteica se asociaza gruparii amino din
stuctura etanolaminei din capatul liber al glicofosfatidilinozitolului. Partea lipidica ramane pe foita
externa a bistratului si poarta numere de ancora glicofosfatidilinozitolica.
Endoproteinele se pot atasa membranei interne – tranzitoriu si reversibil – prin reactii de acilare (se
leaga la diversi acizi grasi). Si in acest caz, ancora este cufundata in bistrat. Aceasta ancorare poate
fi necesara in exprimarea functiilor unor proteine – abia dupa legare adoptand conformatia necesara
activitatii ei.
Exemplu – proteinele G mici trebuie se se lege – se face tranzitia functionala dintre proteina
citosolica si membranara.
[Uneori o ancora nu este de ajuns, fiind necesare mai multe. Legarea proteinelor de domeniile
extra- sau intracelulare se face cu ajutorul enzimelor specifice. Inhibitorii ai acestorenzime pot
astfel juca roluri in dezvoltarea tumorilor – daca proteinele cu rol in crestere nu se mai pot atasa
membranei atunci procesul proliferarii este stopat.]
Atat proteinele membranare acilate, cat si cele glipiate au tendinta de a se cumula in caveole sau
plute lipidice.
Proteinele periferice dupa extragere se desprind de lipide, cele integrale raman asocite, astfel fiind
insolubile in apa (dializarea detergentilor duce la precipitarea prin floculare si au caracter amfifil).
Majoritatea proteinelor integrale, strabat sun transmembranare, isi expun partile hidrofobe in
interiorul bistratului lipidic, pe cand partile hidrofile se afla la extremitati.
Proteinele integrale care se afla numai partial in membrane au fost considerate multa vreme
inexistente, astazi recunoscandu-se doua dintre ele:
(1) Citocromul B5
(2) Caveolina
Anion Exchanger 3 – AE1 – banda 3 – care este canal anionic de schimb pentru HCO3- si Cl- are
endodomeniu mare si ectodomeniu mic.Spectrina – este o endoproteina importanta ce joaca un
rolfundamental in structurarea citoscheletului atasat membranei. Este un heterodimer cu o
subunitate alfa si una beta, care se rasucesc usor una in jurul alteia, rezultand o structura elicoidala,
astfel se structureaza niste bastonase flexibile. Bastonasele au capacitatea de a interactiona 2 cate 2,
formand tetrameri. Capetele tetramerilor, adica cozile bastonaselor se asociaza cate 5-6 si
interactioneaza cu filamente scurte de actina, rezultand astfel nodurile retelei.Actina – este si ea o
endoproteine ce joaca rol in formarea citoscheletului.
Banda 4.1 – Este o proteine globulara de legatura intre citoschelet format din actina si spectrina pe
de-o parte si endodomeniu prin legarea la glicoforina C
Ankirina – o alta endoproteina globulara ce contribuie asemeni benzii 4.1 la ancorare – se leaga la
subunitatea beta a spectrinei si la banda 3, care este o proteina transmembranara.
Viteaza de rotatie si difuzie laterala depind de interactiunile proteinelor intre ele – putand sa se
incetineasca sau sa se accelereze. Miscarile proteinelor au rol functional – astfel ele pot migra in
membrana spre locuri unde sunt utile – asta implica si distributie heterogena – spre exemplu in
celulele polare – distributia proteica este diferita la polul apical fata de cel later-bazal, din
considerente functionale.
Determinarea miscarilor s-a facut coletaral altor cercetari:
La heterocarioni, proteine marcate imunofluorescent au fost observate miscandu-se
Limfocitele marcate cu proteine fluorescente – acestea s-au redistributi sub forma de pete –
fenomen numit patching/capping
Experimente facute pentru determinarea migrarii moleculelor de rodopsina din celulele cu
bastonase din retina – aceste experimente au permis determinarea vitezi si capacitatilor de difuzie.
Proteinele membranare, cum este cazul receptorilor si integrinelor – au rol in preluarea semnalelor
din mediul extracelular – prelucrarea acestuia si angajarea mai departe a altor componente in
contiunarea semnalizarii catre alti centrii – proces care se amplifica, avand ca rezultat o schimbare –
fie ea enzimatica sau la nivelul sintezei proteice.
Pentru a intelege mai bine rolurile este necesar sa exemplificam:
Integrinele – sunt heterodimeri alcatuiti din subunitatile alfa si beta reprezentate de proteine
unipas de tip I, cu rol in aderenta celulelor la matricea extracelulara si in trasnmiterea de
informatii legate de caracteristici fizico-chimice ale unor structuri macromoleculare din mediul
extracelular.
Asadar, au rol structural si metabolic(apoptoza, diferentiere si motilitate), cel din urma nu este pe
deplin cunoscut, sestieinsa ca integrinele apar in procese ca diferentierea si moartea celulara.
Caderinele – deasemenea proteiene cu rol structural si metabolic, sunt esentiale in stabilirea
jonctiunilor.
Grosimea glicocalixului variaza intre 20-50nm, poate ajunge pana la 200 – 2000 nm, variind de la
tesut la tesut (spre exemplu, in stomac, din cauza aciditatii stratul este mai gros si exista si
glicoproteine specifice – mucine), de la celula la celula si chiar la o singura celula – diferita la polul
apical fata de cel bazo-lateral.
Se pote formula o regula – grosimea glicocalixului este cu atat mai mare cu cat proteinele sunt mai
putin implicate in interactiunea cu alte celule. Cea mai mare grosime a glicocalixului este intalnita
la celulele sangvine.
Componentele
Nu toate monozaharidele existente intra in constitutia membranelor, intra doar cateva, care sunt:
glucoza, galactoza, manoza, fucoza, N-acetil-glucozamina, N-acetil-galactozamina, acizi sialici (o
familie care deriva de la acidul neuraminic, adica acidul N-acetil-neuraminic sau N-glicolil-
neuraminic), xiloza (prin care partea glucidica se leaga de o proteine) si acizi uronici(glucuronic sau
iduronic), ultimii nefiind monozaharide.
Asamblarea componentelor nu este intamplatoare, se face prin control enzimatic, iar asta exclude
anumite posibilitati de asamblare, deoarece celula nu prezinta anumite enzime. Glicoziltransferazele
au o stereospecificitate crescuta si sunt abundente la nivelul aparatului Golgi si RE, unde se
sintetizeaza glicoconjugatele.
La locurile de legare se ramifica astfel incat, ramurile vor bi- sau triantenare.
Aceste structuri contin mai multe monozaharide decat glicolipidele.
(3) Proteoglicani – descoperiti tarziu, compozitie speciala – 90% glucide, 10% proteine, lanturile
lor glucidice sunt cele mai lungi si poarta denumirea de GAG (glicozaminoglicani). Aceste lanturi
au si ele o structura speciala – sunt formate dintr-o structura dizahardica repetitiva – un zahar sau
aminozahar si un acid uronic (cu exceptia keratan-sulfatilor care contin un zahar si un aminozahar,
nu au acid uronic)
(3) Procese de recunoastere celulara – comunicarea celulelor intre ele. Fenomene fiziologice care se
bazeaza pe unele modificari glucidice la suprafatacelulelor, exemple fiind
a. Eritrocitele, dupa desializare sunt eliminate din organism. (ficat si splina)
b.Extravazarea leucocitelor – diapedeza – reprezinta trecerea unor celule sangvine din sange in
tesuturi – se declanseaza printr-o cascada complexa la un stimul inflamator.
c. Fertilizarea – capacitatia – modificari enzimatice – glicoproteice si lipidice ce cresc metabolisul
si motilitatea spermatozoidului – cat sireactia acrozomiala etc.
d. Grupul sangvin AB0 – se bazeaza tot pe recunostere de tip glucidic
e. Receptori celulari – majoritate glicoproteine
f. Acizii sialici au rol indiferentiere si moarte celulara
13. Conceptul de microdomenii de membrana Pentru a
defini conceptul micrdomenii, trebuie luata in considerare distributia asimetrica lipidelor in
membrana – distributie realizata cu mare consum energetic prin procesul de biogeneza. Datorita
distributiei asimetrice si a dinamicii lipidelor – despre care am spus mai devreme ca se comporta ca
un fluid (modelul mozaic fluid) se poate spune ca prezinta propietati mezomorfe, ca ale cristalelor
lichide:
„...certain organic materials do not show a single transition from solid to liquid, but rather a
cascade of transitions involving new phases. The mechanical properties and the symmetry
properties of these phases are intermediate between those of a liquid and those of a crystal. For
this reason they have often been called liquid crystals. A more proper name is ‘mesomorphic
phases” Mai mult decat atat, fosfolipedele, colesterolul, glicolipidele si
anumite proteine din membrana prezinta capactitatea de a se uni, agrega(desi nu foarte stabil)
spontan laolalta, dupa considerente biochimice in microdomenii de membrana, adica,
conglomerate de mai multe tipuri de lipide si proteine ce se afla la un moment dat unite.
In cadurul membranelor se respecta modelul de plute lipidice – lipid rafts si reprezinta
conglomerate ce au un scop structural (ex: caveolina) sau metabolic – tin anumite structuri legate
pentru a forma complexe de actiune supramoleculare.
Cum spuneam, plutele lipidice se agrega pe considerente fizico-chimice si construiesc complexe –
fie ele plane sau invaginari(caveole), ce ce este de asteptat, ele prezinta o fluiditate mai scazuta,
lucru explicat prin variatia unor componente:
(1) Colesterol de 3-5 ori mai abundent
(2) Sfingolipidele (SM si glicolipdele) sunt cu 30-35% mai abundente
(3) Glicerofosfolipdele mai slab reprezentate
(4) Lipidele foitei interne (PS, PI) sunt mai slab reprezentate
(5) Lipidele prezinta acizi grasi saturati – mai rigizi!
(6)
Mecanism :
legarea ligand + activarea R
interactiunea R cu proteinele G si activarea acestora prin eliberarea de GDP, legarea GTP si
disocierea trimerului in subunitatea alfa si heterodimerului beta si alfa
transmiterea semnalului la efectorul din aval
Proteinele G:
Gs – activeaza adenilatciclaza si canalele de Ca
Gi – inhiba adenilatciclaza si activeaza canalele de K
Gq – activeaza fosfolipaza C
G olfactorii – activeaza adenilatciclaza in neuronii olfactorii
Go – inhiba canalele de Ca, activeaza canalele de K si activeaza fosfolipaza C
Gt- transducina – activeaza GMPc fosfodiesteraza in celulele fotosesnsibile cu bastonase
Mai au rol si in modularea glicolizei din mm striati si metabolizarea glicogenului (inhiba formarea
acestiua prin proteinkinaza A – activata de AMPc)
Mesagerii secunzi sunt compusi care poarta informatia transmisa de primul mesager avand
capacitatea de a modifica activitatea unor proteine intracelulare care pot avea rol enzimatic, intervin
in contractie sau in asigurarea permeabilitatii membranare.
Exemple: AMPc, GMPc, IP3, DAG,Ca2+
AMPc este un nucleotid ciclic cu rol de mesager secund reglat de fosfodiesteraza si adenilatciclaza.
GMPc este mediatorul semnalelor luminoase cuplat cu Gt. IP3 determina deschiderea canelelor
ionice ptr Ca2+ din reticulul endoplasmic in citosol. DAG ramane ancorat de membrana lipidica si
activeaza pkC. Ca2+ functioneaza ca mesager secund impreuna cu previousii* sau independent sau
cu legandu-se de calmodulina-> calmodulina+4Ca.
Efectorii intracelulari sunt activati de mesagerii secunzi ca raspuns la mesajul primit de la
hormoni/neurotransmitatori. Exemple: pkA (adenilat ciclaza), pkC(fosfolipaza C)
Sistemul efector de mesageri secunzi adenilat ciclaza:
ATP->AMPc
activat de glucagon, PTH, ACTH, adrenalina prin R beta adrenergici
inhibat de receptorii alfa adrenergici si somatostatina
In ceea ce priveste canalele ionice, celula poate controla starea lor (deschise/ inchise).
1. Canale ionice controlate electric (prin voltaj) – modificarea potentialului de membrana.
Potentialul cu valoare normala 50mV-70mV mentine canalele inchise.
2. Canale ionice controlate chimic, prin liganzi. Se deschid atunchi cand leaga un compus
chimic. Ligandul se poate lega in ectodomeniu – ligand extracelular sau in endodomeniu –
ligand citoslic
3. Canale ionice controlate mecanic – se deschid sau se inchid o data cu exercitarea unei
tensiuni mecanice la nivelul membranei.
Activitatea canalelor ionice are un caracter ciclic, de aceea mentionam ca starea de repaus
presupune absenta stimulului, strea deschisa – trecerea ionilor dupa aparitia stimulului, iar starea
inactiva – este ocupat de ligand dar se mentine inchis. Are ca rezultat mentinere homeostaziei.
Proteinele STAT sunt localizate in citosol si sunte denumite proteine latente – deoarece migreaza in
nucleu si isi exercita functia – reglarea transcriptiei genice – numai dupa ce au fost activate.
Receptorii citokinici sunt deobice dimeri sau trimeri, asociati functional cu proteinele JAK (1,2,3
Tyk2).
Legarea moleculei semnal declanseaza o tranzatie conformationala care apropie proteinele JAK una
de alta astfel incate aceastea sa se „transfosforileze” astfel activandu-se, crescandu-le activitatea
domenilor tirozin kinazice.
Aceste domenii tirozinkinazice fosforileaza resturi tirozinice din structura receptorilor intracelulari,
activand aceste resturi tirozinice. Aceste resturi activate pot deveni punti pentru legarea proteinlor
STAT. Deasemenea se pot lega proteine adaptoare – Ras-MAP-kinaze.
O proteina STAT prezinta un domeniu SH2 care indeplineste doua functii. In primul rand, se leaga
de puntea de tirozina amintita mai devreme. Dupa legare, proteina STAT este fosforilata fiind
practic activata. Dupa aceasta fosforilare ea disociaza legandu-se de alta proteine STAT activata.
Dimerul STAT, activat, intra in nucleu unde, impreuna cu alte proteine reglatoare se leaga la un
ADN responsive element stimuland transcriptia genica.
Inactivarea acestui sistem se face prin bucla de feedback negativ realizabila la mai multe etaje, care
urmareste in principiu desfosforilarea componentelor.
Astfel, lipsa AQP in anumite tesuturi poate declansa patologia – lipsa lor la nivel renal poate cauza
o absorbtie ineficienta de apa. Patologia poate aparea si la nivelul glandelor salivare sau arborelui
traheobronisc unde pot aparea deficiente secretorii.
2. La nivel cerebral – localizarea AQP apare la jonciunile hematoneuronale. Implicate in acest caz
sunt in special astrocitele. Se pot declansa astfel edeme cerebrale.
3. In migrarea celulara – AQP intervin in angiogeneza – explicabil si la nivel tumoral.S-a observat o
inaintare mai inceata a tumorilor la soareci care nu prezentau AQP.
4. La nivelul pielii – aquagliceroporinele regleaza nivelul hidratarii prin transportul moleculelor de
glicerol.
5. Metabolismul lipidic – AQP exista in membrana adipocitelor influentand traficul
transmembranar – contribuind astfel la hipertrofia acestora.
22.Proteinele G heterotrimice.
Proteinele G sunt o familie de proteine cu rol in transmiterea semnalelor, determinand schimbari
metabolice in interiorul celulei.
Proteinele G heterotrimerice sunt alcatuite din 3 subunitati α, β si γ. Subunitatea α este cea care ii
confera rolul. Sunt evidentiate mai multe tipuri de proteine G: Gs,Gi,Gq,Gt. Au activitate GTP-
azica.
Sunt proteine “switch”. Inactive sunt legate de GDP si devin active cand sunt legate de GTP. Odata
activata, subunitatea α se detaseaza de celelalte unitati si activeaza o enzima (mesageri secunzi) sau
un canal ionic. Cateva exemple unde sunt intalnite proteinele G: cascada adenilat ciclazei, cascada
fosfolipazei C.
Inactivarea se face prin activitatea hidrolazica intrinseca a subunitatii alfa, reasociandu-se cu
subunitatile beta si gamma.
Proteinele G:
Gs – activeaza adenilatciclaza si canalele de Ca
Gi – inhiba adenilatciclaza si activeaza canalele de K
Gq – activeaza fosfolipaza C
G olfactorii – activeaza adenilatciclaza in neuronii olfactorii
Go – inhiba canalele de Ca, activeaza canalele de K si activeaza fosfolipaza C
Gt- transducina – activeaza GMPc fosfodiesteraza in celulele fotosesnsibile cu bastonase
Mai au rol si in modularea glicolizei din mm striati si metabolizarea glicogenului (inhiba formarea
acestiua prin proteinkinaza A – activata de AMPc)
Canalele ionice sunt complexe proteice care permit intrarea/iesirea diferitilor ioni prin membrana
celulara, fara ele fiind imposibil acest lucru.
Exemple de canale ionice:
-Na/K ATPaza: pastreaza un gradient electrochimic constant, mentinand celula polarizata
-H/K ATPaza: scoate H in afara celulei (intalnita mai des la celulele din stomac)
-Ca ATPaza: cu rol in contractia musculara.
Reglarea poate fi facuta prin mai multe moduri:
1. Canalele ionice urmează calea proteinelor de export, fiind sintetizate de ribozomii ataşaţi
reticulului endoplasmic rugos (RER). Ulterior suferă o serie de prelucrări în drumul spre cisternele
aparatului Golgi, de unde sunt secretate în vezicule de exocitoză.
2. calea mesagerilor secunzi: reglarea canalelor prin fosfo/defosfo
3. isi modifica conformatia cand ligandul s-a atasat de el
4. exista unele canale voltaj-dependente care se deschid numai cand diferenta de potential specifica
tipului de celula e atinsa
5. deschiderea data de modificarile mecanice induse de citoschelet
Transportul activ mai porta numele de transport anti-entropic datorita sensului opus gradientului de
concentratie in care are loc deplasarea, ca urmare, un astfel de fenomen necesita consum de energie.
Pompa de Na/K este o structura complexa, formata dintr-un tetramer cu 2 subunitati mari alfa –
unitate catalitica si transportoare , si 2 subunitati mici beta – unitate reglatoare, necesara pt
impachetarea primei subunitati la nivelul RE, in biosinteza.
Mecanismul de pompare presupune 7 etape ce au ca rezultat expulzarea a 3 ioni de Na si
introducerea a 2 ioni de K.
1. Legarea a 3 ioni de Na pe versantul citosolic al subunitatii alfa a pompei
2. Legarea ATP pe endodomeniu subunitatii alfa
3. Fosforilarea unui radical aspartat prin scindarea ATP la ADP si schimbarea
conformatiei proteinei care duce la expunerea celor 3 ioni de Na pe ectodomeniu ectodomeniul
subunitatii alfa
4. Discocierea si expulzarea in exterior la ionilor de Na si legarea la ectodomeniul
subunitatii altfa a 2 ioni K
5. Hidrolizarea aspartilfosfatului si schimbarea conformatiei subunitatii alfa
6. Internalizarea si expunerea ionilor K pe endodomeniul subunitatii alfa
7. Disocierea ionilor K si eliberarea i citosol cu inchiderea unui ciclu de pompare.
Pompa Na/K este electrogena, 3-2 , mentine potentialul de membrana. Consuma jumatate din
cantitatea celulata de ATP. Inhibarea actiunii prin ouabaina duce la incapacitatea celulara de a
mentine homeostazia.
Categorii de pompe
Tipul P de ATPaze:
-Na/k, H/K, Ca ATPaza, pompa protonica H-ATPaza
Tipul V de ATPaze:
de tip vacuolar, pompeaza protoni in endosomi sau lizosomi
Tipul F ATPaze:
sintetizeaza ATP din energia rezultata prin disiparea unui gradient protonic existent
Tipul E ATPaze:
sunt enzime ale suprafetei celulate cu rol in hidroliza diversilor nucleozidtrifosfatilor
(inclusiv ATP) cu rol in semnalizare
Transportorii ABC sunt prezenti atat la eucariote cat si la procariote, sunt de o mare
duiversitate si au capacitatea de a transporta de la ioni, glucide, aa, vitamine, lipide antibiotice,
medicamente pana la oligozaharide, oligopeptide, proteine mici. Sunt formati din domenii
transmembranare – prin care trece substanta transportata, domenii de legare a nucleotidelor – pe
fata citosilica a membranei si au rolul de a lega si hidroliza ATP, domenii de legare a solutiilor – pe
fata externa, cu rol in preluarea si transferarea substantei transportate.
Mecanismul transportorilor:
1. Asociera substantei de transportat la domeniul de legare al acesteia (SBD)
2. Legarea ATP la NBD – nucleotid binding domain
Pompa Na/K este electrogena, 3-2 , mentine potentialul de membrana. Consuma jumatate din
cantitatea celulata de ATP. Inhibarea actiunii prin ouabaina duce la incapacitatea celulara de a
mentine homeostazia.
Categorii de pompe:
Tipul P de ATPaze:
-Na/k, H/K, Ca ATPaza, pompa protonica H-ATPaza
Tipul V de ATPaze:
-de tip vacuolar, pompeaza protoni in endosomi sau lizosomi
Tipul F ATPaze:
-sintetizeaza ATP din energia rezultata prin disiparea unui gradient protonic existent
Tipul E ATPaze:
-sunt enzime ale suprafetei celulate cu rol in hidroliza diversilor nucleozidtrifosfatilor (inclusiv
ATP) cu rol in semnalizare
Transportorii ABC sunt prezenti atat la eucariote cat si la procariote, sunt de o mare duiversitate si
au capacitatea de a transporta de la ioni, glucide, aa, vitamine, lipide antibiotice, medicamente pana
la oligozaharide, oligopeptide, proteine mici. Sunt formati din domenii transmembranare – prin care
trece substanta transportata, domenii de legare a nucleotidelor – pe fata citosilica a membranei si au
rolul de a lega si hidroliza ATP, domenii de legare a solutiilor – pe fata externa, cu rol in preluarea
si transferarea substantei transportate.
Sunt sisteme de ancorare intre celule, sau intre acestea si matricea extracelulara care au
menirea de a stabiliza structura tisulara. Sunt structir de ordinul nm, motiv pentru care examinarea
se face la ME.
Observate la ME, joctiunile pot avea forma de disc, spot – macule, sau de banda – zonule.
Rolurile jonctiunilor:
stabilizarea mecanica a tesuturilor
controleaza transportul markerilor in spatiul extracelular
controleaza comunicarea intercelulara
compartimenteaza suprafata celulara in domenii celulare: domeniul apicat si domeniul
latero-bazal
Clasificare:
A. Jonctiunile simple- spatiile intercelulare:
- Jonctiuni simple digitiforme
- Jonctiuni simple denticulate
B. Jonctiuni speciale:
- Jonctiuni stranse:
- pentalaminata, heptalaminata – ZONULA OCCLUDENS
- Jonctiuni de atasare:
1. pe microfilamente de actina:
- celula – celula – ZONULA ADHERENS
- celula – matrice – JONCTIUNEA FOCALA
2. pe filamente intermediare:
- celula – celula – MACULA ADHERENS
(DESMOZOMUL IN SPOT)
- celula – matrice – HEMIDESMOZOMUL
- Jonctiuni de comunicatie – GAP (NEXUS)
- Complexule jonctionale
Jonctiunea focala:
celula conjuctiva -matrice extracelulara conjunctiva
componenta matricei extracelulare este reprezentata de fibronectina
distanta dintre componente 15 – 20 nm
linker : integrina, are subiunitatile alfa si beta
complexul proteic de atasare la citoschelet este format din talina si vinculina
elementul de citoschelet este o bandeleta contractila de microfilamente de actina
Jonctiunile focale servesc drept loc de atasare a bandeletelor de actina numite fibre de stress.
Acestea reprezinta bandelete de actina crosslinkate de ALFA-ACTININA ce ancoreaza celula
si exercuta tensiune asupra substratului. Sunt asezate la jonctiunile focale ale membranei prin
interactiunea cu integrina. Este mediata de talina, vinculina, tensina.
Talina se leaga deasemenea de vinculina ce la randul ei se poate lega de alfa actinina si
tensina.
35. Jonctiunea de atasare pe filamente intermediare – clasificare, descriere
Sunt celula-celula sau celula-matrice. Distanta dintre membrane este de 15-30 nm, distanta mare ce
nu afecteaza transportul markerilor. Contin o proteina linker transmembranara care va stabili
legaturi de tip homofilic/heterofilic. Acestea pot fi selectine, integrine, imunoglobuline – toate 3
stabilesc leg de tip heterofilic - sau cadherine – tip homofilic.
Jonctiunile pot fi definitive sau tranzitori. De tip tranzitoriu sunt jonctiunile dintre leucocite si
endoteliu vascular in miscarea de diapedeza.
Jonctiunile de ancorare pe filamentele intermediare sunt Macula Adherens si hemidesmozomul.
Macula Adherens:
celula-celula- la distanta de 30 nm
Glicoproteina linker = cadherina Ca dependenta ce realizeaza leg de tip homofilic
complexul proteic de atasare la citoschelet care formeaza placa desmozomala cu aspect de
semidisc este alcatuit de desmoplachina, plakoglobina, desmocalmina, desmoyokina,
antigenul penfigusului bulos. Din cele 2 semidiscuri de pe cele 2 fronturi citoplasmatice
rezulta aspectul de macula al jonctiunii
elementul de citoschelet este reprezentat de filamentele intermediare. In celulele epiteliate
acestea sunt tonofilamente alcatuite din citokeratine.
Desmozomul este localizat intre celulele epiteliale, sub zonula adherens. Se mai localizeaza si in
portiunile orizontale ale discurilor intercalare alaturi de zonula adherens si de filamentele
intermediare de desmina.
Hemidesmozomul
celula-matrice; leaga polul bazal al celulei epiteliale de membrana bazala.
Membrana celulara epiteliala este la 15-20 nm de membrana bazala
linker: integrina
complexul proteic de atasare ce formeaza placa desmozomala – un semidisc pe frontul
citoplasmatic al jonctiunii
elementul de citoschelet reprezentat de tonofilamente
36.Microfilamentele de actina
Reprezinta 20% din proteinele structurale ale celulelor musculare si 5% in celulele nemusculare.
Este de 6 tipuri: 4 alfa pt celulele musculare, 1 beta si 1 gamma pt celulele nemusculare.
Structura actinei a fost descrisa de Kenneth Holmes si Wolfgang Kabs in 1990. Exista 2 forme:
globulara si filamentoasa.
Actina globulara are 375 aa si 43 000 KDa. Prezinta situsuri de legare ce mediaza interactiunea cap-
coada cu alti 2 monomeri. Fiecare monomer este rotat 166 de grade in interiorul filamentului
rezultand forma filamentoasa cu dublu helix. Monomerii au aceeasi orientare justificand polaritatea
moleculei: un cap + si unul -. Intr-o solutie cu nivel ionic scazut actina filamentoasa devina
globulara si la nivel ionic crescut se intampla invers. Prima treapta a polimerizarii este nucleatia
(formarea unor agregate mici din cate 3 monomeri de actina G) si a doua este aditia reversibila de
monomeri la capetele + si -. Monomerii de actina leaga si ATP, care e hidrolizat si regleaza
asamblarea si comportamentul dinamic al actinei. Monomerii care leaga ATP polimerizeaza mult
mai repede decat cei ce leaga ADP. Concentratia critica de monomeri de actina reprezinta rata de
polimerizare in filamente, si este egala cu rata de disociere. Rata de disociere e mai mare la capatul
– decat la +, invers se intampla cu rata de polimerizare. Pentru ca actina leaga mai lent monomeri
prin hidroliza ADP decat ATP, se naste fenomenul de Treadmilling si ilustreaza dinamica
filamentelor de actina.
Disocierea este favorizata de:
1. citocalizina - se leaga la capatul + si blocheaza elongarea
2. timiozina – separa monomeri de actina
3. gelsolina - se leaga de fosfatidilinozitol, este activata de Ca
4. profilina – se leaga de PI, transforma ADP in ATP
Polimerizarea este ajutata de faloidina, substanta folosita si in microscopia cu fluorescenta.
Microfilamentele de actina se pot organiza individual in :
bandelete : pachete de filamente paralele cu proteine cross-linker mici si rigide
retea: structuri 3D cu proprietatea de gel semisolid cu proteine de origanizare mari si
flexibile
Aceste proteine cross-linker modeleaza citoscheletul.
Reteaua de actina este generata si mentinuta de FILAMINA ABP- actina binding protein,
gasita sub forma de dimeri, fiecare cu 2 subunuitati. Are structura literei V si legand la fiecare capat
actina, rezulta o retea 3D ce se numeste CORTEX CELULAR.
Reprezinta 20% din proteinele structurale ale celulelor musculare si 5% in celulele nemusculare.
Este de 6 tipuri: 4 alfa pt celulele musculare, 1 beta si 1 gamma pt celulele nemusculare.
Structura actinei a fost descrisa de Kenneth Holmes si Wolfgang Kabs in 1990. Exista 2 forme:
globulara si filamentoasa.
Actina globulara are 375 aa si 43 000 KDa. Prezinta situsuri de legare ce mediaza interactiunea cap-
coada cu alti 2 monomeri. Fiecare monomer este rotat 166 de grade in interiorul filamentului
rezultand forma filamentoasa cu dublu helix. Monomerii au aceeasi orientare justificand polaritatea
moleculei: un cap + si unul -. Intr-o solutie cu nivel ionic scazut actina filamentoasa devina
globulara si la nivel ionic crescut se intampla invers. Prima treapta a polimerizarii este nucleatia
(formarea unor agregate mici din cate 3 monomeri de actina G) si a doua este aditia reversibila de
monomeri la capetele + si -. Monomerii de actina leaga si ATP, care e hidrolizat si regleaza
asamblarea si comportamentul dinamic al actinei. Monomerii care leaga ATP polimerizeaza mult
mai repede decat cei ce leaga ADP. Concentratia critica de monomeri de actina reprezinta rata de
polimerizare in filamente, si este egala cu rata de disociere. Rata de disociere e mai mare la capatul
– decat la +, invers se intampla cu rata de polimerizare. Pentru ca actina leaga mai lent monomeri
prin hidroliza ADP decat ATP, se naste fenomenul de Treadmilling si ilustreaza dinamica
filamentelor de actina.
Disocierea este favorizata de:
1. citocalizina - se leaga la capatul + si blocheaza elongarea
2. timiozina – separa monomeri de actina
3. gelsolina - se leaga de fosfatidilinozitol, este activata de Ca
4. profilina – se leaga de PI, transforma ADP in ATP
Polimerizarea este ajutata de faloidina, substanta folosita si in microscopia cu fluorescenta.
Deasemenea, actioneaza asuprea gelsolinei, care este in stransa legatura cu actina din matrix si ca
urmare, schimba forma celulei.
Caspazele activate interactioneaza cu factorul inhibitor al caspazelor (ICAD) si il inhiba, potentand
astfel cascada.
2. Calea mitocondriala – activata prin factori exogeni – specii reactive ale oxigenului, cresteri ale
[Ca2+] intramitosolic si caspaze.
Rezultatul activarii este deschiderea unui por larg in membrana mitocondriala interna – MPTP –
Mitochondrial Permeability Transition Pore, urmata de umflarea celulara, ruperea membranei
externe mitocondriale si eliberarea citocromului C in citosol.
Citocromul C eliberat in citosol, se leaga de APAF – Apoptotic protease activating factor 1 si ATP si
formeaza o strucutura, 7 dintre aceste structuri legate intre ele, formeaza un oligomer sub forma de
roata cu spite numit apoptosom. Aceasta structura leaga 7 molecule de procaspaza 9 si formeaza
caspaza 9 – forma activa, ce induce apoptoza.
3. Calea nucleara – se bazeaza pe existenta unei proteine nucleare – tumor suppressor p53 – ce
detecteaza nepotriviri intre bazele azotate la nivelul ADN-ului.
In cazul unei nepotriviri usoare seactiveaza transcrierea p21 ce opreste ciclul celular (probabil
pentru corectare).
In cazul unei erori severe la nivelul ADN-ului p53 isi autostimuleaza propria trasncriere si
actioneaza consecutiva la activarea factorilor proapoptotici – BAX si inactiveaza factorii
antiapoptotici – BCL2.
Modificarea cantitativa BAX:BCL2 – activeaza MPTP – declansand apoptoza pe cale mitocondriala
(2). Deasemenea, activeaza factorii Fas – ce activeaza calea descrisa la punctul (1).
Dereglari ale mecanismului apopotozei provoaca imbatranirea, incapacitatea organismului de a
scapa de celulele afectate crescand riscul de cancer.
Structura fundamentala de baza a cililor si flagelilor este AXONEMA, alcatuita din microtubuylii si
proteinele lor asociate.Microtubulii au un aranjament caratcteristic 9+2(un dublet inconjurat de 9
dublete periferice) in cadrul dubletelor periferice exista un microtubul format din 13
protofilamente.Acesti microtubuli periferici sunt legati de perechea centrala prin legaturii radiare
alcatuite din nexina.In aditie exista 2 brate de dineina care sunt atasate la fiecare microtubul A, iar
activitatea de motor a dineinei determina batalia cililor si flagelior.Capatul- al microtubulilor din
cili sdau flageli este ancorat in corpusculul bazal,ce este similar cu structura centriolului avand
triplete de microtubuli.Corpusculii bazali oricum joaca un rol clar in organizarea axonemei, el
inainteaza formarea si cresterea microtubulilor prezentii in axonema si ancorarea lor la suprafata
celulara.
Miscarea cililor si a flagelilor repr alunecarea relaticva a dubletelor de microtubulii unele fata de
altele sub actiunea dineinei.Baza moleculei de dineina se leaga ca subfibra A a dubletului, in timp
ce capetele globulare se leaga de subfibra B din dubletul adiacent.
45. Microtubulii
Microtubulii sunt alcatuitii doar din TUBULINA care este un dimer alc. din 2 subunitatii:-alfa
tubulina si -beta tubulina de 55kD fiecare, ca si actina este codificata de o fam. mica de gene.Se
cunoaste si gama tubulina localizata in special in centrozom unde joaca un rol imp. in initierea
asamblarii microtubulilor.Dimerii de tubulina vor polimeriza forrmand microtubulii care in general
sun alcatuitii din 13 protofilamente asamblate in jurul unui spatiu central.Protofilamentele ce sunt
alc. dintr un aranjament cap coada al dimerilor de tubulina sunt dispuse paralel la niv
microtubulilor.La fel ca filamentele de actina sunt str. polare cu 2 capete distincte:capatul+ cu o
crestere rapida si capayul- cu o crestere lenta.Polaritatea este imp. in det. directiei de miscare de-
alungul microtubulului,exact cum polaritatea filamentului de actina det. directia de miscare a
miozinei.Dimerii de tubulina se pot depolimeriza,iar microtubulii pot avea cicluri rapide de
asamblare si dezasamblare.
Atat alfa cat si beta tubulina leaga GTP care fct analog ATP-ului legat de actina regland
polimerizarea.In particular GTP legat de beta tubulina este hidrolizat la GDP urmaind
polimerizarea.Aceasta hidroliza a GTP stabileste afinitatea de legare a tubulinei fata de alte
molecule de aceea favorizeaza depolimerizarea si duce la comportamente dinamice.Se poate vorbi
de acelasi comportament de treadmilling de asamblare si dezasamblare in care moleculele legate de
GTP sunt permanent pierdute de la capetele - si sunt inlocuite prin aditie de molecule de tubulina
legate de GTP la capatul+, in acelasi microtubul.Turnoverul de reinoire este rapid de cateva minute
si este foarte imp. pt. remodelarea citoscheletului in timpul mitozei.Din cauza rolului principal al
microtubulilor in miztoza,drogurile ce afecteaza asamblarea microtubulilor sunt utilizate in
tratamentul cancerului-Colchicina,calcemidul se leaga de tubulina si inhiba polimerizarea ei,deci
blocheaza mitoza.Taxolul stabilizeaza microtubulii,blocand diviziunea.
Centriolii sunt str cilindrice alc. din 9 triplete de microtubulii,similar corpusculului bazal al cilului
si flagelului, centriolii sunt precursorii corpusculului bazal.
-DINEINELE
Dineina are molecula foarte grea 2000Kd, are 2-3 lanturi grele(500Kd)complexate cu un nr variabil
de polipeptide usoare si medii(14-120Kd),lanturile grele form domenii globulare ce leaga ATP-ul si
sunt responsabile de deplasarea de a lungul microtubulilor.Portiunea bazala este form din lanturile
medii si usoare si se leaga de organitele celulare.
3. Elongarea
Incepe cand ARNt -dipeptidil este transferat in situsul A in situsul P, proces care va continua pe
toata lungimea ARNm.
Intotdeauna in situsul A se va alinia un alt codon care va fi recunoscut de anticodonul
corespunzator din ARNt si care va lega un nou aminoacid la catena polipeptidica.
Adipocitele albe au forma rotunjita cand sunt izolate sau poligonala cand sunt grupate. Incluziunea
lipidica din cadrul unei celule este uniloculara, ocupa intreaga citplasma – pe care o impinge catre
periferie. Celula capata aspectul de inel cu pecete.
Adipocitele brune(la nou nascu+copilarie)involueaza la adult gasindu-se doar in loja interscapulara
si inghinala.Au forma rotunjita cu nucleu sferic eucromatic. Citoplasma are aspect vacuolar.
In patologie se pot obsera numeroase incluziuni lipidice in hepatocitele alcoolicilor.
Lipidele apar la microscopul fotonic(optic) sub forma unor picaturi sferice evidentiate cu coloranti
specifici de tipul Sudanului sau OsO4(tetraoxid de osmiu) in hepatocite, celulele
corticosuprarenalei si corpului galben din ovar. La microscopul electronic, acumularile de grasimi
au forme ovalare sau sferice, de diferite marimi.
55. Incluziuni pigmentare – aspect MO, ME
Incluziunile lipidice sunt de mai multe feluri, pot aparea in conditii fiziologice si patologice. Din
categoria celor patologice sunt pigmentii biliari – bilirubina in celulele Kupfer sau hepatocite. Cele
fiziologice:
(1) Melanina – pigment negru evident in epidermul pielii, in SNC – substanta neagra.
Lizozomii (Christian deDuve) sunt organite celulare cu rol digestiv celular, prezente in toate
celulele, mai putin in hematia adulta, gasindu-se in cantitate mare in hepatocite si macrofage.
Ei contin enzime hidrolitice, proteaze, lipaze, glicozidaze, nucleaze, dar si alte tipuri de enzime,
fosfataze, sulfataze, glicozilare – ce le asigura functia digestiva, toate componentele de origine endo
sau exogena, care sunt superfluu sunt digerate lizozomal.
Ei contin un lumen acid, cu doua unitati mai jos decat pH-ul citosolic, acesta asigura un ph de
actiune. Citoplasma – 7,2 ; lumen lizozomal - 5
Exista doua tipuri de lizozomi:
(1) Lizozomi secretori
– o combinatie intre lizozomi conventionali si granule secretorii, se diferntiaza prin faptul ca includ
enzime hidrolitice specifice celulelor in care se afla.
Un exemplu bun sunt celulele de e linia imuna – limfocitele T care contin in lumenul lor lizozomi
cu enzime hidrolitice specifice mentinute inactive datorita pH-ului. Contin PERFORINA.
Limfocitele se apropie de celula tinta si isi secreta enzimele care sunt instant activate de conditiie de
mediu.
(2) Lizozomi conventionali
– nu au functia secretorie, o prezinta doar pe cea „digestiva”. Cand celula se divide, fiecare celula
fiica este prevazuta cu un numar de lizozomi.
Lizozomii interactioneaza cu molecule provenite din spatiul extra- si intracelular care mai intai sunt
prelucrate – „dezasamblare si reciclare”.
Moleculele din spatiul extracelular, lichide sau particule mici sunt introduse in celula prin endo- sau
pinocitoza si sunt acoperite de un strat de proteine (clatrina, coatomer, ceveolina) formand un
endozom – acestia fiind la randulor de maimulte feluri – primar si secundar. Particulele mari cum ar
fi bacteriile sau detritusuri celulare sunt digerate prin procesul de facocitoza, ce are ca rezultat
eliberarea unui fagozom.
Moleculele din spatiul intracelular sunt digerate sub forma de autofagozomi – vezicule
responsabile de distrugerea unor structuri sau organite inutile in structura celulara(organite
degradate in mitocondri sau ribozomi)
Lizozomii interactioneaza cu endozomii secundari si produc endofagozomul, locul unde se produce
digestia.
Tipurile de interactiune dintre lizozomi si endofagozomii secundari pot fi sistemtizati astfel:
(1) Kiss and Run – lizozomul interactioneaza scurt cu endozomul secundar, se produce un schimb
chimic, in endozom se poate produce digestia, iar lizozomul poate pleca mai departe sa
interactioneze cu alti endozomi secundari.
(2) Fusion – lizozomul si endozomul fuzioneaza producand un organism hibrid in care are loc
digestia – aminoacizii si alti metaboliti rezultati sunt trasnportati incitosol pentru a fi reutilizati. In
unele cazuri ramane un mic reziduu pigmentar care este exocitat si ramane in celula pentru tot restul
vietii organismului.
N.B – Modelul maturarii – presupunea interactiunea consecutiva a unor endozomi primari cu alte
vezicule intre care au loc schimburi, pana cand endozomul se „matureaza” si devine lizozom.
N.B.2 – Lizozomii tertiari – sunt lizozomi ajunsi intr-un stadiu de epuizare enzimatica, maeterialul
continut nu poate fi degradat in continuare. Se mai numesc corpi reziduali.
Actiunea lizozomilor se poate sistematiza:
(1) Autofagie – digestia componentelor, poate fi de doua feluri:
i. Macro – componentele ce trebuie fagocitate sunt acoperite de un strat de REN
ii. Micro – fagocitoza unei singure proteine
(2) Autoliza – intervine in apoptoza
(3) Heterofagie – pentru materiale celulare
(4) Crinofagie – digestia produsilor de secretie in celulele secretorii in vederea reglarii calitatii si
cantitatii
Functii
Functia peroxizomilor este data de enzimele pe care le contin, ce faciliteaza utilizarea oxigenului ca
substrat reducator – ei oxideaza alte subtraturi – le preiau atomii de hidrogen, conform reactiei:
RH2 + O2 -> R + H2O2
Catalaza, enzima peroxizomala, utilizeaza H2O2-ul generat de alte enzime ca substrat reducator,
oxidand alte substraturi, jucand un rol in detoxifiere.
H2O2 + RH2 -> R + 2H2O
Se poate realiza o clasificare a functiilor:
(1) Reactii de oxidare a altor substraturi - detoxifiere
(2) Oxidarea excesului de acizi grasi cu lant lung de at de C, rezultand fragmente de cate 2 at de
C, care sunt fie convertite in acetilCoA, fie sunt exportate din peroxizomi si folosite la noi sinteze
de compusi celulari.
(3) Descompunerea purinelor AMP, GMP cu formare de aa si acid uric
(4) Produc si exporta in citoplasma colesterol
(5) Sinteza plasmalogeni – contin primele 2 enzime necesare. Plasmalogenii sunt fosfolipide
concentrate la nivelul cordului si encefalului.
La plante exista glioxizomi, peroxizomi specializate ce au capacitatea de a produce glucide din
lipide si acizi grasi.
La insecte – licurici, intervin in atragerea partenerului prin enzima – luciferaza.
Peroxizomii sunt organite care se adapteaza repede mediului in care se afla, asta explica
heterogenitatea structurala a peroxizomilor din cadrul aceluiasi organism.
Biogeneza
O functie a peroxizomului – ce il incadreaza la categoria organisme autonom este capacitatea
acestuia de a se divide, desi nu posed material genetic. Deasemenea poseda capacitatea de a
prolifera, proliferare indusa in doua faze:
(1) Prolifereaza din muguri preexistenti
(2) Crestere prin import de proteine
REN:
metabolizarea lipidelor: biosinteaza, degradarea si modularea compozitiei lipidelor –
producere colesterol din acetilCoA, producere ceramide;
detoxifiere celulara
depozit dinamic de Ca
62. Mecanismul prin care lanţul polipeptidic este transferat din citosol în reticulul
endoplasmic
Peptidul semanl se afla la capatul N-terminal. Prezenta acestuia desi este necesara, nu este si
suficienta. Acest peptid nu are receptor la nivelul membranar RE. Din aceasta cauza intervine
particula de recunoastere a semnalului – SRP. Aceasta are la un capat un sit pt interactiunea cu
peptidul semnal din lantul polipeptidic si la celalalt capat unul pt situsul a ribozomal. Acest
complex operational (lant polipeptidic in sinteza + particula de recunoastere a peptidului semnal)
transfera masinaria unui complex proteic transmembranar din membrana RE – translocon. Acest
complex are in structura sa un canal hidrofil (por hidrofil) cu rolul de a transloca polipeptidul in
lumenul RE, pe masura alungirii sale. O data cu preluarea actiunii de catre translocon SRP este
eliberat in citosol, iar sinteza poate astfel continua; acum situsul A este liber pt a prelua ARNt
corespunzator codonului care urmeaza.
In concluzie etapele sunt:
1. initierea sintezei proteice in citosol
2. aparitia peptidului semnal
3. recunoasterea peptidului semnal de catre SRP, interactiunea dintre ele , blocarea sintezei
prin ocuparea situsului A
4. legarea complexului macromolecular astfel format la SRPR – receptorul particulei de
recunoastere a peptidului semnal- la membrana RE
5. interactiunea dintre SRPR si translocon cu transferul complexului, legarea ribozomului si
deblocarea sintezei proteice prin eliberarea SRP in citosol
6. translocarea lantului polipeptidic, pe masura ce se alungeste, prin membrana RE
Biosinteza tuturor proteinelor incepe in citosol (exceptie cele codificate de ADN-ul mitocondrial).
Exista proteine destinate exportului si cele care trebuie sa functioneze ca proteine solubile in
lumenul RE, lizozomilor sau al cisternelor golgiene.
Cele din urma au atasat peptidului semnal – la capatul C-terminal- o secventa consens
recunoscuta de o hidrolaza – semnal -peptidaza- care elimina peptida semnal hidrofoba (care altfel
ar tine proteina inserata in bistratul lipidic, ca proteina transmembrana unipas de tip II), astfel are
loc eliberarea proteinei in lumenul RE.
In ceea ce priveste proteinele transmembranare, translocarea are un mecanism diferit.
Intotdeauna, inserarea in translocon se face cu partile pozitive din lantul polipeptidic catre versantul
citoplasmatic al membranei RE. Atunci cand aa cu sarcini pozitive – Lys,Arg- se afla intre peptida
semnal si capatul N-terminal, inserarea se face direct, astfel capatul N ramanand in citosol si
proteina rezultata este unipas,
tip II. Cand aa pozitivi se afla intre peptida semnal si capatul C terminal, translocarea se face in
sens invers, cu capatul N terminal deja format in lumenul RE, si capatul C terminal in citosol.
Proteinele transmembranare sunt proteine care contin mai multi aa hidrofobi ce raman prinsi in
bistratul lipidic, strabatandu-l.
Un rol important il au secventele START/ STOP TRANSFER. Start transfer este o secventa
hidrofoba cu numar fara sot in ordinea aparitiei in cursul sintezei si initiaza procesul de translocare.
Stop transfer sunt secvente hidrofobe cu sot oprind translocarea. Secventele stop inchid porul
hidrofil si intrerup comunicarea dintre ribozom si translocon, in tip ce secventele start deschid
porul.
RE nu are rol doar in biosinteaza lantului polipeptidic si eliberarea sa in lumen, sau inserarea in
membrana, este esential si in modificarea chimica a unor resturi de aa si asistarea impachetarii
corecte.
- Modificarile co-traducere
o Au loc la nivelul transloconului
o Initierea glicozilarii proteinelor
In RE este initiata formarea structurilor N-glicozidice, prin grefarea de resturi oligozaharide
pe asparagina aflata in secventa consens ..-Asn-X-Ser(Thr).. X- orice aa uzual cu exceptia prolinei.
Oligozaharid transferaza grefeaza la azotul amidic n oligozaharid cu structura globala –
(GlcNAc)2Man9Glc3 si cu o geometrie triantenara – 2 antene se termina cu Man, cea de a 3a cu 3
glucoze legate una de alta. Enzima transfera acest oligozaharid de pe DOLICIL-DIFOSFO-
OLIGOZAHARID (se gaseste in bistratul lipidic). Enzima oligozaharid-transferaza este indiferenta
la asp care nu se afla in aceasta secventa.
o Hidroxilari la nivelul lantului polipeptidic
Hidroxilarile prolinei in pozitia 4 si lizinei in pozitia 5 se petrec in proteine ale matricei
extracelulare ; exemple: Colagen , elastina
o Carboxilarea acidului glutamica in pozitia gama
Se realizeaza de catre carboxilaza (proteina transmembranara)
exemple: proteinele coagularii si la unele proteine ale matricei osoase
- Modificari post-traducere
o Glipiarea = ancorarea unor ectoproteine la bistratul lipidic printr-o ancora
glicofosfatidilinozitolica.
Se intalneste la nivelul proteinelor a caror inserare in translocon se face in sens invers. Ancorarea se
face printr-o legatura amidica. Disribuirea acestor proteine se face preferential la nivelul plutelor
lipidice. Nu se cunoaste valoarea functionala a acestui proces.
o Asistearea proteinelor pt impachetarea corecta
Asistata de proteine numite s(h)aperone (chaperone) – mecanismul nu este complet elucidat.
Calnexina- proteina saperon cu activitate lectinica. Leaga structurile N-glicozidice care au
ramas cu o singura glucoza dupa tundere si mentine precursorul de glicoproteina legat.
Desprinderea de calnexina se face prin actiunea glicozidazei din lumenul RE, doar dupa realizaraea
plierii corecte. Exista la acest nivel o glucozil-transferaza care isi exercita activitatea in cazul in
care glucoza a fost desprinsa timpuriu , enzima realizand in aceste conditii, reglucozilarea. Glucoza
necesara este furnizata de catre
ARIDIL-DIFOSFO-GLUCOZA si asigura reatasarea calnexinei.
In lumenul RE avem un mediu asemanator cu cei citoplasmatic ce mentine conditii
oxidative favorabile puntilor disulfurice. Enzima implicata se numeste protein disulfura izomeraza.
Aceasta realizeaza punti in structura priteinei nascande sau desface puntile gresit structurate si le
reformeaza.
S(h)aperona cu cel mai larg spectru de actiunie se numeste BiP (binding protein). Aceasta
detine controlul inchiderii si deschiderii transloconului, complexeaza proteinele translocate si le
elibereaza doar dupa impachetarea corecta. In caz contrat, proteina impachetata necorespunzator
este condusa de BiP la translocon, care la randul rau elibereaza lantul polipeptidic in citosul,
urmand ca aceasta sa fie etichetata cu Ubi pentru a fi degradata de proteazomi.
Desi mecanismele nu sunt complet elucidate, se cunoaste ca necesaul de shaperone este
furnizat datorita semnalizarii din lumenul RE. Semnalul parcurce ectodomeniul, fosforileaza
endodomeniul si activeaza un sit enzimatic endonucleazic de la ultimul nivel. Are loc prelucrarea
unui pre-ARNm existent in citoplasma, care dupa eliminarea intronului devine ARNm
functional.Acesta este folosit pt furnizarea proteinelor shaperon prin mecanismul cunoscut –
biosinteza proteinelor.
Transportul RE -Golgi
Microtubulii ce trec pe langa cisternele golgi sunt orientate cu capul (-) catre membrane apicala
strabatand partial tesatura de filamente de actina.
Veziculele folosesc initial proteine motoare din familia dyneinelor pt a se deplasa catre capul (-) al
microtubulilor apoi cand ajung la filamentele de actina folosesc proteine motor ,miozina I cu
ajutorul careia se deplaseaza de-a lungul acestor filamente. Ajungand la nivelul membrane apicale
membrane veziculelor fuzioneaza cu membrane celulara marindu-I suprafata.
2.Trafic trans-Ap Golgi – Membrana bazo-laterala
Sortare: prin motive de aminoacizi
Transport: tot pe calea microtubulilor insa catre capul (+) prin folosirea kinezinelor (proteinele
motor)
Reglarea mecanismelor de selectie,sortare si veziculare se face prin proteinele G monomerice.
68. Ciclul secretor.
Pentru domnul Leabu ar mai fi de precizat faptul ca termenul de ciclu secretor nu este cel optim de
folosit aici, ci ca, mai corect ar fi termenul de cale secretorie, deoarece termenul de ”ciclu” implica
reciclari ale unor componente, fenomen despre care nu avem dovezi suficiente pentru a-l sustine.
Ulterior, tot la nivel golgian, structura se aglomereaza intr-o singura vezicula ce poarta un invelis de
clatrina. Odata ce vezicula este „matura” – acesta este exocitata din aparatul Golgi in citosol, proces
in urma caruia isi pierde invelisul de clatrina.
Vezicula exocitata – fara invelis de clatrina se va numi lizozom primar.
Lizozomii primari fuzioneaza acum cu endozomii tarzii – producand lizozomi secundari sau,
fuzioneaza cu lizozomi secundari deja exsitenti.
La nivelul retelei trans-Golgi se gaseste o enzima lizozomala – fosfataza acida – fapt ce dovedeste
biosinteza enzime in forma activa, insa acesta nu functioneaza biochimic decat la un pH mai scazut
– precum este in lizozom.
Exocitoza reprezinta procesul de eliminare a unor produsi de secretie in spatiul extracelular prin
intermediul fuzionarii veziculelor ce contin materialul de interes cu membrana celulara.
Se cunosc doua astfel de cai:
a) Calea de secretie constitutiva
a. Opereaza in toate tipurile de celule
b. Are loc concomitent cu traficul noilor suprafete de membrana necesare pt a inlocui componente
nefunctionale sau pt a satisface nevoile de crestere. Acest lucru necesita si dezvoltarea matricei
extracelulare, fapt pt care se secreta si componente ale acesteia
b) Calea de secretie semnalizata
a. Este,de regula, specifica celulelor specializate in secretie.
b. Produsii de secretie sunt stocati in vezicule aflate langa membrana celulara, ce asteapta a fi
exocitate dupa primirea unui semnal.
c. De multe ori acest semnal este reprezentat de cresterea concentratiei citosolice de Ca, ca urmare a
legarii unui mesager primar la un recepor specific din membrana celulei respective.
De mentionat ar mai fi faptul ca, in unele situatii, maturarea moleculelor secretate are loc exact in
momentul exocitarii. Exemplu : colagenul tip I (daca s-ar matura in interiorul celulei s-ar integra in
structurile ei intracelulare, determinand situatii patologice.
Deasemenea, actioneaza asuprea gelsolinei, care este in stransa legatura cu actina din matrix si ca
urmare, schimba forma celulei.
Caspazele activate interactioneaza cu factorul inhibitor al caspazelor (ICAD) si il inhiba, potentand
astfel cascada.
2. Calea mitocondriala – activata prin factori exogeni – specii reactive ale oxigenului, cresteri ale
[Ca2+] intramitosolic si caspaze.
Rezultatul activarii este deschiderea unui por larg in membrana mitocondriala interna – MPTP –
Mitochondrial Permeability Transition Pore, urmata de umflarea celulara, ruperea membranei
externe mitocondriale si eliberarea citocromului C in citosol.
Citocromul C eliberat in citosol, se leaga de APAF – Apoptotic protease activating factor 1 si ATP si
formeaza o strucutura, 7 dintre aceste structuri legate intre ele, formeaza un oligomer sub forma de
roata cu spite numit apoptosom. Aceasta structura leaga 7 molecule de procaspaza 9 si formeaza
caspaza 9 – forma activa, ce induce apoptoza.
3. Calea nucleara – se bazeaza pe existenta unei proteine nucleare – tumor suppressor p53 – ce
detecteaza nepotriviri intre bazele azotate la nivelul ADN-ului.
In cazul unei nepotriviri usoare seactiveaza transcrierea p21 ce opreste ciclul celular (probabil
pentru corectare).
In cazul unei erori severe la nivelul ADN-ului p53 isi autostimuleaza propria trasncriere si
actioneaza consecutiva la activarea factorilor proapoptotici – BAX si inactiveaza factorii
antiapoptotici – BCL2.
Modificarea cantitativa BAX:BCL2 – activeaza MPTP – declansand apoptoza pe cale mitocondriala
(2). Deasemenea, activeaza factorii Fas – ce activeaza calea descrisa la punctul (1).
Dereglari ale mecanismului apopotozei provoaca imbatranirea, incapacitatea organismului de a
scapa de celulele afectate crescand riscul de cancer.
C.Porii
Def:Discontinuitati in spatiul perinuclear dat de fuzionarea celor 2 membrane.
Importanta:rolul lor este essential in realizarea schimburilor dintre nucleu si citoplasma, in primul
rand permitand trecerea ARNm din nucleu in citoplasma
Dimensiuni: diametrul cuprins intre:300-1000A, in fct de tipul cellular si organism
Forma: dupa ultimele cercetari se considera ca forma porilor ar varia intre circular si polygonal.
Numarul:proportional cu activitatea celulei: cu cat sinteza de arn este mai mare cu atat celula
respectiva va avea mai multi pori.In medie porii ocupa cca 10-20% din invelisul nuclear.
D.Materialul anular(anulii)
Termenul de “material anular” tine sa inlocuiasca termenul de annulus folosit in anii 60’.
Def:formatiuni ultrastructurale atasate circumferintei sau perimetrului porilor. Acesta formeaza
impreuna cu porul ”complexul por”.
Componente:
Matricea anulara:(anulul propriu-zis) este un inel de material dens la fluxul de elctroni ,care se
proecteaza atat pe versantul citoplasmatic cat si pe cele nucleoplasmice. Dpdv biochimic este alc
din proteine deoarece dispare dupa digestia cu tripsina.
Masele anulare(subanulii): sunt in numar de 8 substructuri aproximativ sferice dispuse in matricea
anulara . Fiecare are un diam de ~200A si o dispozitie simatrica radial.
Diafragmul: -uneori oblitereaza orificiul anular
-format dintr-un mat mai dens decat matricea citoplasmatica sau decat carioplasma
-nu este o membrana dpdv ultrastructural si prin urmare UN ARE VALOARE FUNCTIONALA
Granula centrala: ocupa uneori centrul porului,cu diametru de 100-150A
80.Porul nuclear, transport (generalitati)-am tartat acest subiect mai sus la 70.(in continuare
voi scrie din curs)
Porul nuclear -este zona de intrerupere a invelisului nuclear
-la nivelul sau se gaseste complexul por
-rol-regleaza schimburile dintre nucleu si citoplasama
-functioneaza ca o bariera selectiva in ambele sensuri
-sunt structuri dinamice care par si dispar in sunctie de activitatea celulei
-in nr de ~3000-4000 pe un nucleu
-dimensiuni:10nm in repaus
25 nm in stare activa(are loc transport)
Complexul Por
-structura ordonata cu aspect octagonal vazut de sus
-format din urmatoarele structuri:
*anul sau mase anulare-subunitati proteice a 20nm in nr de 8(sunt 8 citoplasmatice –se insera pe
citoplasma si 8 nuceloplasmice ce se insere pe fibrilele nucleoplasmice si pe inelul nucleoplasmic
formand COSULETUL FIBROS AL PORULUI
TRANSPORTUL PRIN POR
-se face in ambele sesuri si este de 2 tipuri-ACTIV SI PASIV
*T PASIV-trec elem cu diametre foarte mici:ioni ce Na+ siK+, molecule cu greutate molecular mai
mica de 60 de KDa:aa nucleotide oligozaharide
-se face in fct de gradientul de concentratie
-se face prin canale periferice
*T ACTIV-prin partea centrala a porului
-molec mai mari de 60 de kDa
-necesita enzyme ptr transport:6ATP-aze
-viteza de transport este invers proportional cu dimensiunile molec de transportat(cu cat molecula e
mai mare cu ata transportul decurge mai incet)
-exista un import si un export in ambele sensuri:
#TRANSP ACTIV PTR IMPORT
-proteine nucleare-cu afinitate pt nucleu
-enzime necesare ptr replicarea adn
-complexe ribonucleoproteice
-complexe ligand-receptor-hormon
-factori ptr transcriptie
PROTEINELE TREBUIE SA AIBA IN STRUCTURA LOR SECVENTE SEMNAL DE
ADRESARE NUCLEARA (+LIZINA SI ARGININA).Proteinele putand fi libere la suptafata sau
mascate.secventa semnal recunoscuta in citoplasma de receptori care se apaseaza la proteina
formand un complex din fibrele citoplasmatice=> POR
Complexul se va desface si receptorul se recicleaza.
Ptr export procesele sunt similar:ARNt-ARNm-ribozomi
-se discuta daca reprezinta in mod real o component a nucleolului sau este cariolimfa care umple
spatiul dintre cecelalte component nucleolare
Toate cele 4 componente nucleolare pot fi distinse in acelais nucleol clar numai in CAZURI RARE.
Raporturile cantitative si topografice dintre aceste componente variaza in raport cu tipul celualar si
in mod special cu momentul functional.
85.Eucromatina
Eucromatina reprezintă materialul normal, izopicnotic, deţinătorul informaţiei genetice,
cucomportament tipic în cazul diviziunii celulare (se spiralizează, se condensează, se
decondensează şi se colorează). La rândul ei, eucromatina este de două tipuri: eucromatina activă
şi eucromatina permisivă.
Eucromatina activă conţine genele ce vor fi transcrise în ARNm.
Eucromatina permisivă este reprezentată de acea porţiune din eucromatină care devineactivă doar
după ce acceptă (permite) semnale declanşatoare (din categoria hormonilor,enzimelor etc.).
Procesul autoreplicării semiconservative a ADN-ului, în faza S din ciclul diviziunii celulare, începe
la nivelul eucromatinei. În consecinţă, replicarea eucromatinei este mult mai timpurie, încomparaţie
cu cea a heterocromatinei..
Constitutivă şi facultativă