Tehnici moderne de purificare si concentrare a cumpusilor biologic activi

NATURA, CLASIFICAREA SI PERFORMANTELE MEMBRANELOR

Referat STUDENT : TURESCU IONUT 01.07.2010

Aspecte generale
Lipidele reprezinta 40-50% din materialul organic al membranelor. Sub aspect molecular, ele reprezinta componenta structurala de baza a mebranelor celulare (raportul molecular lipide/proteine fiind de apx 50/1). Asa cum stipuleaza modelul in mozaic fluid al organizarii membranelor, lipidele sunt structurate sub forma de bistrat, cu capetele hidrofile la exterior si cozile hidrofobe la interior, bistrat care prezinta proprietati fluide, manifestate bidimensional. In bistrat lipidele au o distributie (dispunere) asimetrica si de o mare eterogenitate. Asadar, membranele celulare sunt structurate pe un bistrat lipidic bidimensional, asimetric si eterogen. Definitia lipidelor membranare Lipidele membranare reprezinta o categorie larga de substante organice relativ insolubile in apa, solubile in cei mai multi solventi organici, cu caracter amfifil, multe dintre ele fiind esteri ai unor alcooli polihidroxilici cu acizi grasi(acizi carboxilici cu loant alifatic liniar, adica o catena liniara continand mai multi atomi de carbon). Descrierea lipidelor membranare si caracterizarea bistratului lipidic Caracterele fizico-chimice ale lipidelor se definesc drept molecule ideale pentru structurarea de membrane, a caror principala menire este aceea de a separa doua compartimente apoase (interiorul celulelor de mediul inconjurator). Se definesc drept molecule ideale pentu ca structura si caracterul lor amfipat induce proprietati amfifile arhitecturii pe care o organizeaza, partea hidrofoba putand crea o bariera, iar partea hidrofila conferind capacitatea de a acomoda mediile apoase aflate de o parte si de cealalta, adica interiorul, respectiv exteriorul celulei. Lipidelesunt molecule mici cu posibilitati mari de mobilitate, astfel incat structurile pe care le pot asambla nu sunt rigide. Sunt molecule relative insolubile in medii apoase, prezentand tendinta de asociere spontana, ceea ce confera structurilor pe care le formeaza, tenacitatea de a-si pastra integritatea, sau de a se reface rapid, atunci cand sunt agresate mecanic. Tendinta spontana de asociere implica un consum energetic minim, ceea ce reprezinta un avantaj in economia celulara. Desi sunt molecule mici, structura lor este deosebit de complexa, aceasta complexitate chimica fiind exploatata fericit de celula. Printre avantajele ce rezulta in privinta structurarii membranelor, se poate enumera modelarea care se face printr-un bagaj enzimatic adecvat, consistent si bine elaborat, care foloseste integrarii celulei in contextul biologic in care se afla si functioneaza. Clasificarea lipidelor mebranare

Biochimia descrie o mare diversitate de clase de lipide, insa in membranele celulare se intalnesc numai 3 tipuri de lipide care se pot clasifica, in functie de structura lor chimica globala (enumerarea fiind in functie de abundenta in care apar) in: --fosfolipide --colesterol --glicolipide. Fosfolipidele reprezinta 70-75% dintre lipidele membranare, colesterolul 20-25%, iar glicolipidele 1-10%. O mentiune de facut in legatura cu glicolipidele din membranele celulelor animale, este aceea ca ele sunt din clasa sfingolipidelor. Ideea de eterogenitate a lipidelor membranare sporeste insa, daca se doreste abordarea chiar si numai a complexitatii tipurilor de celule din clasa fosfolipidelor, cele mai bine reprezentate lipide din membranele celulare, sub aspectul abundentei. Acestea se pot clasifica, in functie de poliolul din structura in: ++fosfogliceride (glicerofosfatide)- daca poliolul este glicerina; ++fosfosfingozide (sfingofosfatide)- daca poliolul este sfingozina (de fapt un aminodiol cu un lant alifatic), care inlocuieste unul dintre acizii grasi din coada hidrofoba a fosfolipidelor rezultate, cel de al doilea fiind inserat printr-o legatura amidica la gruparea amino a sfingozidei. Dar aceasta eterogenitate a fosfolipidelor membranare nu se termina aici, ea se nuanteaza prin analiza detaliilor referitoare la structura lor chimica. Structura de principiu a unui fosfoglicerid este reprezentata grafic, in mod intuitiv, in fig .1. Se observa ca pe scheletul polialcoolului se afla grefate pe de o parte doua lanturi alifatice (acestea formand coada hidrofoba a lipidului membranar), iar pe de alta parte o molecula (notat cu X) prin intermediul unei grupari fosfat (formand impreuna partea esentiala a capului hidrofil).

Fig.1 . Structura schematica, de principiu a unui fosfoglicerid. In verde este reprezentat miezul glicerolului; in galben sunt reprezentate lanturile alifatice ale acizilor grasi; cu un X, in albastru, este reprezentata partea variabila din capul hidrofil. In functie de restul X din capul hidrofil, fosfogliceridele se impart in: Fosfatidilcoline (prescurtare PC), cand X este o colina; Fosfatidietanolamine (PE), X fiind etanolamina; Fosfatidilserine (PS), la care X este serina; Fosfatidilinozitoli (PI), in care X este inozitol; Acid fosfatidic (PA), cu X-ul fiind, simplu, un atom de hidrogen.

Echivalentul fosfatidilcolinelor pentru sfingofosfolipidele membranare sunt sfingomielinel (SM). De amintit aici si un fosfolipid in care doua molecule de glicerina, structurand cardiolipine, fosfolipide specifice membranei mitocondriale interne. Cat priveste abundenta sub care tipurile de fosfolipide apar in structura bistratului, PC, SM, PE si PS sunt majoritare, reprezentand fiecare intre 20 si 25%. PI si PA reprezinta pana la 1% fiecare; in ciuda acestui fapt (sau poate tocmai de aceea) aceste doua fosfolipide sunt implicate in procese celulare deosebit de importante. In ceea ce priveste aspectele legate de dispunerea asimetrica a fosfolipidelor in membrane, experimental s-a dovedit ca PC si SM sunt preponderent distribuite in foita externa a bistratului, in timp ce PE, PS si PI sunt, dupa datele existente pana in prezent, exclusiv in foita interna. Mai mult, aparitia PS in foita externa a bistratului reprezinta o dovada a intrarii celulei intrun proces apoptotic. Colesterolul este in general egal distribuit intre ambele foite ale bistratului. Glicolipidele se afla numai in foita externa a bistratului lipidic.

Ideea eterogenitatii fosfolipidelor membranare este substantiata si de diversitatea tipuirilor de acizi grasi care intra in structura lor. Acestia au un numar par de atomi de carbon cuprins intre 12 si 24 ( C12-C24). La cei cu mai putin de 12 atomi de carbon, solubilitatea in apa a lipidelor pe care le formeaza creste prea mult, ceea ce le poate afecta integritatea bistratului si rolul de bariera al acestuia. Acizii grasi cu mai mult de 24 de atomi de carbon in molecula, sporesc prea mult hidrofobicitatea lipidelor, ingroasa bistratul, reducand eficienta sub aspectul proprietatilor de permeabilitate selectiva si ii reduce fluiditatea prin cresterea interactiunilor la nivelul cozilor hidrofobe. Asadar, din motive de eficienta in functionare, acizii grasi evidentiati a structura lipidele membranare, contin intre 12 si 24 de atomi de carbon. Ei pot fi acizi grasi saturati sau nesaturati. In ceea ce priveste pozitionarea lor in structura glicerofosfatidelor se pot face urmatoarele afirmatii: 1. In pozitia 1 a glicerinei, de regula, se afla estrificat un acid gras saturat. Cei mai des intalniti sunt C14, acidul miristic, C10, acidul palmitic si C18, acidul stearic. O ordine a frecventei sub care apar ar fi C 10 > C18 > C14.

2. In pozitia 2 a glicerinei, de regula, este esterificat un acid gras nesaturat. Cei mai des intalniti sunt C18:1, acidul oleic, C18:2, acidul linoleic si C18:3, acidul linolenic. Trebuie amintit faptul ca, pentru rolul sau deosebit de important, acidul arahidonic, sau acidul eicosatetraenoic (C 20:4) si ca acizii grasi din sfigolipide sunt, de regula saturati. Structura de bistrat rezolva dezideratul esential al organizarii membranei Bistratul este cea mai simpla structurare a lipidelor care poate inchide un volum mare de mediu hidrofil, spre a-l separa de un altul tot hidrofil (capetele hidrofile la exterior, putand acomoda structura celor doua medii hidrofile; cozile hidrofobe in interior, in adancimea structurii, conferind rolul de bariera). Asadar este o structura care poate corespunde dezideratelor celulelor de a fi separate de mediul inconjurator si de a-si mentine intr-o maniera eficienta homeostazia interna. Asamblarea in bistrat, se poate face spontan, fiind deci favorizata energetic, iar bistratul nu poate prezenta, din considerente termodinamice, capete libere. Acest lucru confera membranelor tenacitate in pastrarea integritatii structurale si refacerea rapida a acesteia, chiar in cazul unor distrugeri datorate agresiunilor mecanice. Structurarea sub forma de bistrat si dispunerea asimetrica a componentelor acestuia, confera proprietati fizico-chimice diferite celor doua fete ale membranei. Mai mult, asigura comportament independent celor doua fete ale membranei, dar si solidar, atunci cand nevoile celulei o cer, aceasta avand caile de a controla comportamentul (independent, sau solidar) al componentelor membranare.

Starea fizica a bistratului lipidic Bistratul lipidic este fluid, intr-o continua dinamica, cu efect asupra interrelatiilor dintre moleculele care il compun, inter-relatii care sunt intr-o permanenta modificare. Fluiditatea bistratului lipidic este o rezultanta a

diverselor posibilitati de miscare a lipidelor ce il alcatuiesc. Lipidele membranare pot executa urmatoarele tipuri de miscari: 1. Miscari intramoleculare, pe care lipidele le executa in raport cu propria lor structura (in raport cu propria lor axa), volumul ocupat de ele putand fi aproximat cu un cilindru al carei baze are o suprafata de ~60 (raza de ~4.4 ) si cu inaltimea de ~30 . Aceste miscari pot fi: De rotatie, cu o frecventa de 109 rotatii/s; aceste miscari izvorasc din capacitatea lanturilor acizilor grasi de a se roti in jurul legaturilor C-C, capacitate care se rasfrange asupra comportamentului intregii molecule prin cuplurile de forte pe care le induc; rezultanta acestui zbucium intern molecular este miscarea de rotatie a moleculei lipidice in ansamblu. De flexie a cozilor hidrofobe, cu o frecventa de 108 flexii/s; aceste miscari trebuie intelese tot ca rezultat al miscarilor din interiorul moleculelor de lipid, la nivelul 5 cozilor hidrofobe ale acizilor grasi nesaturati, care, datorita impiedicarilor datorate prezentei celuilalt acid gras din structura, nu pot executa decat miscari asemanatoare stergatorului de parbriz; efectul la nivelul intregii molecule este acela al miscarii de flexie a cozii. 2. Miscari intermoleculare, care implica schimbarea pozitiei moleculelor de lipide unele in raport cu altele. Acestea pot fi: Miscari de translatie, miscari ale lipidelor in planul membranei, in aceiasi foita a bistratului, unele printre altele; frecventa acestei miscari este de 107 schimbari de directie/s; Miscari flip-flop, adica miscari de trecere a lipidelor dintr-o foita a bistratului in cealalta; aceste miscari presupun o rasturnare a moleculei in planul membranei, pentru a-si pastra capul hidrofil la exteriorul structurii, adica trecerea capului hidrofil prin portiunea hidrofoba a membranei; frecventa acestor miscari este foarte mica, practic nula, ceea ce pare logic; exista totusi o endomembrana la nivelul careia miscarea de flip-flop are loc frecvent si anume membrana reticulului endoplasmic. Absenta practic a miscarilor flip-flop explica bidimensionalitatea starii fluide a bistratului lipidic, structura de baza a membranelor celulare. Miscarile lipidelor se manifesta, practic numai in cadrul aceluiasi strat al bistratului. De asemenea, frecventa extrem de redusa a miscarilor flip-flop are ca efect mentinerea distributiei asimetrice a moleculelor de lipide in cele doua straturi, distributie construita de celula cu mare consum energetic odata cu biosinteza de novo a membranelor. Manifestarea bidimensionala a fluiditatii bistratului lipidic da membranei celulare caracterul de structura cu proprietati mezomorfe, proprietati specifice cristalelor lichide. Acest comportament mezomorf este accentuat de capacitatea lipidelor de a structura microdomenii bogate in sfingolipide, parte dintre ele glicolipide, colesterol si anumite proteine membranare. Aceste microdomenii sunt denumite plute lipidice (lipid rafts) si au o deosebita importanta atat structurala (organizeaza structuri specializate ale membranei, cum ar fi caveolele), cat si metabolica tinand laolalta molecule si macromolecule destinate a functiona impreuna in complexe supramoleculare. Pentru a intelege mai bine structurarea microdomeniilor de membrana, sa mentionam ca lipidele nu sunt omogen amestecate nici in cadrul fiecarei foite a bistratului, ci se asociaza pe baza unor considerente fizice. Plutele lipidice fie planare, fie invaginate sub forma caveolelor (numite vezicule plasmalemale in celula endoteliala), se caracterizeaza printr-o fluiditate mai mica in comparatie cu restul bistratului. Prezenta plutelor lipidice si eterogenitatea lor sustin si nuanteaza ideea de

mozaic fluid a organizarii membranelor. Plutele lipidice pot fi asemuite unor sloiuri de forme, dimensiuni si organizari variate ce plutesc in oceanul lipidic mai putin specific organizat. Caveolele reprezinta o forma de plute lipidice, ce se dispun individual, sau in ciorchini la nivelul membranei. Eterogenitatea plutelor lipidice a fost evidentiata prin interpretarea rezultatelor diferitelor metode de obtinere: diferiti detergenti neionici; sonicarea preparatelor de membrane si analizarea fractiunii usoare; analize imunocitochimice. Desi rezultatele experimentale sunt, in anumite limite, variate, sugerand diversitatea compozitionala a plutelor lipidice, se pot totusi extrage cateva caracteristici generale: colesterolul este de 3-5 ori mai abundent decat in restul membranei si reprezinta 33-50% din totalul lipidelor la acest nivel; sfingolipidele (SM si glicolipidele) sunt imbogatite si reprezinta 30-35% intre lipidele din plute; glicerofosfolipidele sunt sarac reprezentate (in comparatie cu restul membranei); 30% pentru PC + PE, fata de ~50% in restul membranei; lipidele specifice foitei interne a bistratului (PS, PI) sunt slab reprezentate la nivelul plutelor; in foita interna de la nivelul plutelor, lipidele contin preferential acizi grasi saturati (asta ar putea realiza necesarul de rigiditate corespunzator celei a foitei externe, unde sfingolipidele sunt bogat reprezentate). Colesterolul Raportul molecular colesterol:fosfolipide n membranele celulare este de 1:1. Molecula de colesterol se insereaz ntre fosfolipidele membranare, orientndu-se cu gruparea hidroxil n vecintatea capului polar al fosfolipidelor. Inelul steroidic este o structur rigid, plan, care interacioneaz cu lanul hidrocarbonat adiacent capului polar, lsnd restul cozilor hidrofobe ale acizilor grai libere, flexibile. Colesterolul moduleaz proprietile bistratului lipidic, intensificnd proprietatea de barier impermeabil fa de moleculele mici solubile n ap, influeneaz fluiditatea membranei, previne interaciunea lanurilor hidrocarbonate ale acizilor grai din structura lipidelor membranare. Glicolipidele membranare Glicolipidele membranelor celulare sunt specifice pentru specie, sunt de asemenea tisular-specifice i reprezint 5% din moleculele lipidice ale monostratului extern. Conin un cap polar format din unul sau mai multe resturi glucidice, ataate la o structur ceramidic. De exemplu, n structura galactocerebrozidelor, sfingozina mpreun cu acizii grai formeaz o structur ceramidic de care sunt ataate resturi de galactoz, iar gangliozidele conin unul sau mai multe resturi de acid sialic (acid N-acetilneuraminic) care imprim acestor molecule ncrctur negativ. n consecin, gangliozidele particip la construcia molecular a canalelor ionofore i la mecanismul de transmitere a informaiei de la suprafaa celulei (semnalizarea celular).Clasele de lipide

membranare, datorit structurii i proprietilor lor imprim membranelor anumite caracteristici: 1. Fosfolipidele formeaz spontan bistratul, deoarece au o regiune hidrofil sau polar care este capabil de interaciuni electrostatice sau prin legturi de hidrogen cu moleculele de ap. Regiunile hidrofobe sunt insolubile n ap deoarece nu pot forma interaciuni energetic favorabile cu moleculele de ap. Ca urmare, moleculele de ap nconjoar moleculelehidrofobe formnd structuri asemntoare unor ,,cuti", n care moleculele de ap se prezint ntr-un aranjament mult mai ordonat dect n apa care constituie mediul nconjurtor. Costul energetic este minimalizat dac moleculele hidrofobe se acumuleaz ct mai strns, astfel nct un numr ct mai mic de molecule de ap s fie implicate n nconjurarea lor.Introduse n mediu apos, moleculele cu caracter amfipatic ale lipidelor membranare agreg spontan n aa mod nct adpostesc regiunile (cozile) hidrofobe n interiorul structurilor sferice denumite micelii sau plane denumite bistrat lipidic, fiind expuse apei regiunile cap hidrofile. 2. Fosfolipidele se rearanjeaz spontan, refac bistratul atunci cnd apar bree n acesta. 3. O alt proprietate este fluiditatea care st la baza caracterului dinamic al membranelor celulare. La o anumit valoare de temperatur denumit temperatur critic, are loc tranziia de faz, adic trecerea bistratului din stare fluid n stare de gel, datorit scderii mobilitii legturilor C-C din lanuri hidrocarbonat ale acizilor grai din structura fosfolipidelor. Are loc trecerea de la o conformaie randomic la o conformaie cu grad superior de ordonare. Valoarea de temperatur la care are loc tranziia de faz depinde de lungimea i caracterul nesaturat al lanurilor hidrocarbonate ale fosfolipidelor. Lanurile hidrocarbonate mai scurte i prezena legturilor duble favorizeaz organizarea randomic datorit scderii numrului de legturi van der Waals dintre regiunile hidrofobe. Fluiditatea depinde i de coninutul de colesterol al membranelor, concentraiile mari de colesterol scad fluiditatea bistratului. Aceast scdere a fluiditii are efecte aupra funciilor membranei celuare, prin scderea permeabilitii pentru ap i molecule hidrofile i creterea rezistenei mecanice a acestora. Prezena glicolipidelor influeneaz fluiditatea: gangliozidele se caracterizeaz prin capacitatea de a participa la formarea legturilor de hidrogen care determin creterea gradului de ordonare molecular i scderea fluiditii. 4. Bistratul lipidic este format din domenii cu compoziie diferit: forele van der Waals (fore de atracie ntre lanurile hidrocarbonate ale lipidelor membranare adiacente) nu sunt suficient de selective pentru a ine mpreun grupurile de molecule fosfolipidice, n consecin apar domenii specializate denumite ,,bacuri de lipide". Un exemplu de astfel de domenii sunt caveolele implicate n endocitoz, bogate n colesterol i sfingolipide, mpreun cu proteine specifice cu rol stabilizator al acestor domenii. Un alt exemplu este cel al unor domenii care conin o proporie ridicat de sfingolipide care, avnd lanuri hidrocarbonate mai lungi, determin la acest nivel o grosime crescut a bistratului, intervenind n organizarea moleculelor proteice pentru a-i ndeplini funciile: de transport, de semnalizare celular. 5. Organizarea sub form de monostrat a lipidelor (n loc de bistrat) este caracteristic picturilor lipidice cu rol n depozitarea trigliceridelor i colesterolului esterificat, fiind surs de precursori lipidici pentru sinteza membranelor sau surs de substrate pentru metabolismul energetic. Monostratul

lipidic conine mari cantiti de proteine, unele cu funcie n metabolismul lipidelor, altele cu funcie necunoscut. Lipidele neutre din aceste picturi lipidice sunt molecule hidrofobe care n mediul apos intracelular agreg n picturi tridimensionale nconjurate de monostratul lipidic, cu cozile hidrofobe orientate spre coninutul n lipide neutre, iar cu capetele hidrofile spre mediul apos intracelular. Aceast organizare este ntlnit n special n adipocite. Proteinele membranelor celulare Proteinele membranare sunt moleculele implicate n funciile majore ale membranelor celulare. Reprezint 50% din greutatea membranelor celulare i 75% din greutatea membranelor mitocondriale, cu o intens activitate metabolic. Clasificarea acestor proteine s-a fcut dup criteriul topografic, dar i dup aspectul interaciunilor cu moleculele lipidice ale bistratului n dou clase: proteine integrale ale membranelor i proteine periferice (de suprafa). Proteinele integrale Pot penetra membrana n ntregime datorit caracterului lor amfipatic: regiunea central localizat n interiorul membranei are caracter hidrofob i interacioneaz cu lanurile hidrocarbonate ale fosfolipidelor, fiind alctuit din aminoacizi cu caracter nepolar. Legturile dintre aminoacizi sunt legturi peptidice care sunt legturi polare i pentru c apa este absent n compartimentul hidrofob al membranelor, aceste legturi peptidice vor forma puni de hidrogen ntre ele. Domeniile hidrofile ale moleculelor proteice vor fi expuse pe faa extracelular i citosolic a membranelor, n contact cu gruprile polare ale moleculelor lipidice. Lanurile polipeptidice ale acestor proteine transmembranare pot realiza unul sau mai multe pasaje prin bistratul lipidic, prezentnd conformaie de -helix: un pasaj prin bistrat- un -helix ( ,,singlepass"), mai multe pasaje prin bistrat- mai multe -helixuri (,,multipass"). Conformaia de -helix nu este unica conformaie a proteinelor transmembranare. Aceste proteine pot prezenta conformaie a lanului polipeptidic de -foaie pliat, care poate fi mpachetat sau rulat n continuare n conformaie de ,,-barrel", multiplele segmente transmembranare putnd satisface n acest caz necesitatea de legturi de hidrogen. -helixurile proteinelor transmembranare au funcie de ancorare n bistratul lipidic prin compoziia n aminoacizi hidrofobi. Multe proteine transmembranare care realizeaz un singur pasaj prin bistrat formeaz homodimeri datorit interaciunilor dintre domeniile -helix adiacente, cruciale pentru structura i funcia proteinelor-canal i proteinelor transportor. Proteinele transmembranare care realizeaz mai multe pasaje sunt formate din mai multe -helixuri, toate constituite din aminoacizi hidrofobi, deoarece dup sinteza lor n citosol, acestea sunt iniial integrate n bistratul lipidic de o protein-translocaz, fiind nconjurate de molecule lipidice. mpachetarea moleculei proteice apare ulterior i apr o parte din -helixuri de contactul cu lipidele membranare, unele interaciuni proteine-lipide fiind nlocuite cu interaciuni proteine-proteine i -helix--helix, facilitnd astfel apariia unor structuri canal pentru transportul moleculelor hidrofile mici prin membrana hidrofob . Unele proteine integrale strbat parial membrana i sunt integrate n bistrat n trei moduri diferite:

1. Proteinele prezente pe faa citoplasmatic, cum este familia de proteine Src kinaze care convertesc semnale extracelulare n semnale intracelulare, conin acid miristic adugat la gruparea aminoterminal a proteinei n timpul sintezei n ribozomi- se stabilete o legtur amidic. Acidul miristic reprezint o prim ancor, care se inser n monostratul citoplasmic al bistratului, ns este o ancor slab. Apariia unei molecule-semnal din mediul extracelular determin adugarea acidului palmitic la un rest de cistein al lanului polipeptidic pentru a ancora mai ferm proteinele Src. Oprirea semnalelor extracelulare conduce la desprinderea acidului palmitic i desprinderea kinazelor din membrana celular, urmat de eliberarea lor n citosol i, firete, de inactivarea cii de semnalizare celular. Inserarea unor proteine cum sunt proteinele p 21ras se poate realiza prin legarea unui rest farnezil la un rest de cistein prin legtur tioesteric , la captul C-terminal al proteinei. 2. Proteinele situate pe faa exoplasmic a membranelor celulare se ancoreaz de monostratul lipidic prin intermediul unui fosfolipid glicozilat care conine resturi glucidice inozitol i N-acetilglucozamina.

Carbohidraii membranelor celulare Reprezint 2-10% din greutatea componentelor membranare. Oligo- i polizaharidele se leag covalent de proteinele sau lipidele membranare formnd glicoproteine i respectiv, glicolipide: majoritatea proteinelor de suprafa ale membranelor sunt glicoproteine i una din zece molecule lipidice membranare sunt glicozilate. Proteoglicanii sunt constituii dintr-o component proteic n bistratul lipidic i o component polizaharidic. Lanul polizaharidic rmne n exteriorul celulei, fiind o component a matricei extracelulare. Mobilitatea proteinelor i lipidelor n membrana celular Mobilitatea proteinelor i lipidelor n monostratul lipidic se realizeaz prin difuzie lateral. Un alt mecanism este difuzia rotaional, care semnific micarea de rotaie a unei biomolecule n jurul unei axe perpendiculare pe planul membranei. Att difuzia lateral ct i cea rotaional sunt favorizate energetic, deoarece regiunile nepolare ale moleculelor proteice i lipidice nu prsesc interiorul hidrofob. Difuzia transversal denumit i inversiune sau ,,flip-flop" se realizeaz prin deplasarea moleculelor ntre cele dou monostraturi ale bistratului lipidic. Mobilitatea lipidelor i proteinelor membranare mpreun cu fluiditatea bistratului determin caracterul dinamic al membranelor celulare.

Asimetria distribuiei componentelor membranare Este o caracteristic cu rol esenial n realizarea funciilor celulare. Distribuia asimetric a moleculelor lipidice pe cele dou fee ale bistratului poate fi exemplificat prin structura membranei hematiilor care conine n monostratul lipidic extern predominant fosfatidilcolin i sfingomielin, iar n monostratul intern fosfatidiletanolamin i fosfatidilserin. Consecinele sunt multiple: diferenele gradului de nesaturare ale lanurilor hidrocarbonate ale lipidelor i natura diferit a gruprilor polare determin diferene n fluiditatea celor dou monostraturi, apare de asemenea i o distribuie diferit a sarcinilor

electrice, fosfatidilserina fiind singurul fosfolipid cu sarcin negativ. Importana funcional a asimetriei de distribuie a componentelor membranare poate fi exemplificat astfel: Activitatea enzimatic a proteinelor asociate membranei este dependent de sarcina electric a fosfolipidelor, proteinkinazele necesitnd prezena fosfatidilserinei cu sarcin electric negativ. n timpul apoptozei, fosfatidilserina este translocat n monostratul exoplasmic al bistratului lipidic i expus astfel pe suprafaa celular, semnalizeaz macrofagelor prezena unei celule moarte, acesta fiind semnalul pentru fagocitare. Translocarea fosfatidilserinei n monostratul extern se produce prin inactivarea translocazei care realizeaz translocri din monostratul extern n cel intern i activarea scramblazei care transfer fosfolipide nespecific ntre monostraturile lipidice. Localizarea glicolipidelor n monostratul extern este implicat funcional n mecanisme de semnalizare celular, ele funcionnd ca receptori. De exemplu, toxina holeric se leag doar de celule care prezint gangliozide GM1 pe suprafaa celular (celulele epiteliului intestinal). Se remarc localizarea proteinelor membranare, mai precis orientarea strict, specific pe faa exoplasmic sau citosolic a unor domenii ale moleculelor proteice. De exemplu, glicoproteinele au lanurile oligozaharidice orientate pe faa extern a membranelor celulare i pe faa citosolic a membranelor reticului endoplasmic i aparatului Golgi. Localizarea asimetric a lipidelor i proteinelor determin delimitarea specific a unor domenii structural-funcionale ale membranelor celulare: un exemplu ilustrativ este domeniul apical, respectiv laterobazal al membranei celulelor epiteliului intestinal. Funcia de transport a membranelor celulare Existena celulelor depinde de o permanent comunicare cu mediul nconjurtor, iar un rol fundamental n aceast comunicare o are proprietatea de permeabilitate selectiv a membranelor celulare. Consecina este meninerea homeostaziei celulare, adic asigurarea concentraiilor intracelulare relativ constante ale substanelor organice, ionilor, metaboliilor, meninerea unei activiti metabolice stabile i reglarea volumului celular. Permeabilitatea selectiv este influenat de metabolismul celular, condiiile din mediul extracelular i tipul de esut. Transportul diferitelor substane prin membran depinde de caracteristicile substanei transportate (greutatea molecular, forma, dimensiuni, gradul de ionizare, gradul de hidratare) i de compoziia chimic a membranelor, clasificndu-se n: Transport de ioni i molecule mici prin mecanisme de difuzie sau mecanisme n care sunt implicate proteine membranare. Transport de macromolecule i particule prin vezicule delimitate de membrane. Dup consumul de energie metabolic nmagazinat n ATP, transportul prin membranele celulare se clasific n: transport pasiv i transport activ.

Transportul pasiv
Transportul moleculelor i ionilor prin membrana celular n sensul gradientului de concentraie sau electrochimic se numete transport pasiv. Decurge fr consum de energie inmagazinat n ATP, cteodat chiar cu pierdere de energie liber. Difuzia simpl Caracterizeaz moleculele mici cu caracter hidrofob i gazele: CO2, O2. Este cel mai simplu tip de transport pasiv, difuzia simpl fiind determinat de gradientul de concentraie i/sau electric al particulelor transportate, de o parte i de alta a membranei. Moleculele nu sunt modificate chimic sau asociate altor molecule n cursul trecerii prin membran. Difuzia simpl se desfoar n urmtoarele etape: Trecerea moleculelor din mediul extracelular sau intracelular apos n interiorul hidrofob al membranei Traversarea bistratului lipidic Deplasarea moleculelor din membran n mediul apos intracelular sau extracelular Viteza cu care se desfoar etapa 1 depinde de coeficientul de partiie (K) al moleculei, care msoar afinitatea relativ a moleculei pentru mediul lipidic n raport cu apa, altfel spus, ilustreaz gradul de hidrofobicitate al moleculei. Cu ct valoarea acestui coeficient este mai mare, molecula este mai hidrofob (liposolubil) i ptrunde mai repede n celul.Coeficientul de partiie este direct proporional cu constanta de permeabilitate a membranelor celulare (P). Viteza de difuzie a moleculelor prin membran este mult mai mic n mediu apos, deci etapa 2 limiteaz viteza transportului. Difuzia simpl se desfoar conform legii lui Fick dac avem gradient de concentraie pe cele dou fee ale membranei: (dn/dt) = P x S (C1aq C2aq) adic, viteza de difuzie este direct proporional cu diferena de concentraie, suprafaa i coeficientul de permeabilitate al membranelor. Difuzia facilitat a moleculelor i ionilor A. n difuzia facilitat transportul pasiv este mediat de proteine membranare denumite permeaze care au specificitate fa de molecula transportat, proces cu cinetic de tip enzimatic. Permeaza leag reversibil la un situs activ pe o fa a membranei o singur specie molecular sau molecule ce aparin unei singure familii: se formeaz complexul permeaz-molecul care traverseaz bistratul, disociindu-se pe cealalt fa a membranei, cu eliberarea moleculei transportate. Viteza cu care are loc difuzia facilitat n funcie de concentraia moleculei transportate a evideniat existena unei relaii de tip Michaelis-Menten pentru reacii enzimatice cu un singur substrat. Viteza atinge o valoare maxim atunci cnd devine independent de concentraia substratului: la vitez maxim apare fenomenul de saturare, toate permeazele fiind ,,ocupate", implicate n complexe de tip permeaz-molecul de transportat. O alt caracteristic comun ntre difuzia facilitat i reaciile enzimatice este inhibiia specific competitiv prin molecule similare sau necompetitiv, de

exemplu prin ioni ai metalelor grele sau 2,4 dinitrofluorobenzen. Modelul propus: modelul transportorilor crui care execut o micare de rotaie n bistratul lipidic care are drept rezultat trecerea moleculelor de pe o fa pe alta a membranelor celulare. Un exemplu este transportul unor ioni de polipeptide antibiotic ( valinomicina transport n acest mod ionul de potasiu). Un alt model este cel n care permeaza sufer o modificare conformaional n urma legrii moleculei de transportat, consecina fiind o modificare conformaional, formarea unui ,,canal" prin care moleculele pot traversa membrana. Modificarea conformaional ar determina de fapt orientarea aminoacizilor hidrofili ai permeazei spre interiorul moleculei, care ar delimita ,,canalul" prin care pot trece moleculele hidrofile. B. Difuzia mediat de proteinele canal, proteine transmembranare strbtute de un canal delimitat de aminoacizi hidrofili care formeaz pori membranari: 1. proteinele canal ionice prin care ionii difuzeaz cu diferite viteze n sensul gradientului de concentraie. Sunt de mai multe tipuri n funcie de modul cum are loc deschiderea lor care este un rspuns celular la stimuli mecanici, sau pot fi canale dependente de voltaj ( potenialul de membran) sau de liganzi. Ligandul poate fi un mediator extracelular (neurotransmitor) sau intracelular (ion, nucleotid, protein de legare a GTP). Canalele cu poart comandat de voltaj Celulele excitabile (neuronul i celulele musculare) sufer modificri controlate ale valorilor potenialului de membran, asigurndu-se conducerea impulsului electric de-a lungul membranei plasmatice. Celulele aflate n stare de repaus se caracterizeaz prin potenial de membran denumit potenial de repaus. n prezena unui stimul, se produce o excitaie electric rapid, autopropagabil, cu caracter tranzitoriu denumit potenial de aciune care genereaz un ciclu de depolarizare a membranei, hiperpolarizare, revenire la starea de repaus, asociate creterii tranzitorii a permeabilitii membranei celulare pentru ionii de Na i K, datorit conformaiilor moleculare alternative ale proteinelor canal n funcie de diferena de potenial. Depolarizarea este determinat de creterea permeabilitii pentru Na+, n consecin ionii de Na ptrund n celule datorit gradientului de concentraie ionic i potenialului de repaus. Se deschid i proteinele canal pentru K+, se produce efluxul ionilor de potasiu. Exist dou opiuni n acest moment: anularea generrii potenialului de aciune sau dezvoltarea potenialului de aciune, n funcie de permeabilitatea pentru Na/K. Dac permeabilitatea pentru ionii de sodiu este mai mare dect permeabilitatea pentru ionii de potasiu, influxul de Na este mai mare dect efluxul de K: se produce accentuarea depolarizrii locale a membranei i apare potenialul de aciune. La un prag de +35 mV canalele de Na+ sunt nchiseinactive i membrana fiind refractar la noi stimuli, este posibil restabilirea potenialului de repaus. Proteinele canal pentru Na+ sunt formate din patru domenii transmembranare, fiecare alctuit din cte ase -helixuri. Al 4-lea helix din fiecare domeniu este alctuit din aminoacizi ncrcai pozitiv ( arginin, lizin), cu rol de senzor voltaic .

Canalele cu poart comandat de liganzi. Structurile joncionale specializate n transmiterea semnalelor de la neuroni la celule-int: neuroni, celule musculare, poart denumirea de sinapse, care pot fi electrice sau chimice. Sinapsele chimice implic eliberarea de ctre neuroni a neurotransmitorilor care acioneaz asupra celulelor-int, mpachetai sub form de vezicule sinaptice n terminaia axonal a neuronului presinaptic. Eliberarea neurotransmitorului n placa sinaptic determin creterea concentraiei de Ca++ n celula presinaptic, ca urmare a deschiderii canalelor pentru Ca++ cu poart comandat de voltaj, n momentul apariiei potenialului de aciune. Legarea neurotransmitorilor de receptorii membranari ai celulei postsinaptice determin modificarea conformaiei acelui receptor, deschiderea canalului ionic, adic modificarea permeabilitii locale a membranelor urmat de depolarizare i propagarea potenialului de aciune. De exemplu, legarea acetilcolinei la receptorul nicotinic crete local permeabilitatea membranei postsinaptice pentru Na+ i K+ , apare depolarizarea membranei i

este generat potenialul de aciune. La rndul su, propagarea potenialului de aciune determin deschiderea proteinelor canal pentru Na +(comandate de voltaj) din sarcolem, depolarizarea membranei reticulului sarcoplasmic i eliberarea Ca++ n citosol. Creterea concentraiei intracelulare a calciului determin contracia muscular.

2. proteinele canal ionice de repaus, dintre care cel mai reprezentativ este canalul de K+ a crui existen explic permeabilitatea mare a membranelor celulare pentru ionii de potasiu i rolul major al K+ n meninerea potenialului de membran. Exist peste 100 de tipuri de canale pentru ioni. Canalul de K+ este un tetramer dotat cu aminoacizi ncrcai electronegativ care atrag cationii i cu un filtru ion-selectiv care se deschide spre mediul apos extracelular, expunnd cei 4 atomi de oxigen carbonil dintr-un rest de glicin (Gly79 KcsA). Urmtorul rest al prii extracelulare a filtrului este asparagina un aminoacid ncrcat negativ (Asp80 KcsA). Oxigenii carbonil sunt puternic electronegativi i atrag cationi, filtrul ion-selectiv poate astfel lega ioni de K la nivelul a 4 situsuri notate S1S4 ncepnd din partea extracelular a canalului ionic. Transportul ionilor de sodiu prin aceste proteine-canal este energetic nefavorabil, interaciunile puternice dintre filtru i buclele porului nu pot permite interaciunu cu cationi de dimensiuni mai mici, cum este cationul de Na.Datorit transportului selectiv al ionilor prin membrana plasmatic i a diferenelor de compoziie ionic dintre citosol i mediul extracelular, cele dou fee ale membranei sunt diferite din punctul de vedere al ncrcturii electrice: faa citoplasmic este ncrcat negativ n raport cu faa exoplasmic, deci exist o diferen de potenial electric denumit potenial de membran. Transportul unei specii ionice prin aceste proteine canal depinde de gradientul de concentraie ionic i valoarea potenialului de membran, care mpreun formeaz gradientul electrochimic. Meninerea stabilitii potenialului de membran se realizeaz prin mecanisme n care proteinele canal pentru K+ au un rol central. Pomparea ionilor de Na n spaiul extracelular prin activitatea Na+/K+ ATPazei conduce la creterea numrului sarcinilor electrice pozitive pe faa exoplasmic a membranelor i la apariia unui exces de sarcini electrice negative pe faa citoplasmatic datorit anionlor organici intracelulari. Restabilirea echilibrului se produce datorit influxului de K+ prin funcionarea Na+/K+ ATPazei, dar i prin difuzia lor liber prin canalele de K+. Influxul de potasiu are loc mpotriva

gradientului de concentraie, sub aciunea forelor de atracie electrostatic determinate de sarcinile electrice negative din celul. 3. canalele de transport pentru ap (aquaporinele) Au fost identificate 13 tipuri de aquaporine n membranele celulelor umane, membri ai unei familii de proteine majore intrinseci de membran, care transport apa n i din celul, prevenind trecerea ionilor i altor substane. Prima aquaporin descoperit a fost AQP1 din membrana eritrocitului, a crei existen a fost raportat de profesor dr. Gheorghe Benga de la Universitatea de Medicin i Farmacie ,,Iuliu Haieganu din Cluj-Napoca, n 1986. ncercrile de izolare ale antigenului Rh, evideniau constant o protein asociat de 28 kDa, necunoscut, cu funcie nedeterminat, dar cu prezen constant n membrana hematiilor i n membranele celulelor tubilor renali. Peter Agre este cel care izoleaz i caracterizeaz aceast protein cu funcie de transport al apei, dup ce mult timp a fost suspectat un mecanism adiional de transport al apei care ar explica permeabilitatea mare pentru ap a membranelor unor tipuri de celule, permeabilitate care nu poate fi explicat prin simpla osmoz. Pentru activitatea sa de caracterizare i demonstarare a existenei aquaporinelor, Peter Agre primete premiul Nobel n 2003. Aquaporinele sunt formate din 6 domenii -helix transmembranare care determin 5 bucle interhelicale (A-E) care formeaz domeniile extracelulare i citosolice ale proteinei. Buclele B i E sunt bucle hidrofobe care conin un motiv nalt conservat Asn-Pro-Ala (NPA) care prin suprapunere n poriunea central hidrofob a bistratului lipidic, formeaz una din cele dou constricii ale aquaporinei n form de clepsidr. Cealalt constricie, mai ngust, este filtrul selectiv ar/R (aromatic/Arg), care slbete legturile de H dintre moleculele de ap, permind acestora s traverseze porul ngust al aquaporinelor i s interacioneze cu resturile de arginin ncrcate pozitiv, care n acelai timp opresc trecerea protonilor prin aceast protein-canal. AQP1 se gsete n membrana bazolateral i apical a celulelor epiteliale din tubii contori proximali, ansa lui Henle i vasa recta, n membranele hematiilor, endoteliilor vasculare i tractului gastrointestinal. AQP2 se gsete n ductul colector principal al rinichilor i este controlat de vasopresin, mutaii n gena AQP2 determin diabetul insipid. AQP2 apare n membrane intracelulare. Tipurile 3 i 4 sunt rspunztoare de reabsorbia apei la nivelul ductelor colectoare medulare din rinichi. Tipurile 3, 7, 9 i 10 sunt aquagliceroporine, canale care transport glicerol i ap. Dac aquaporinele au un rol crucial n meninerea homeostaziei apei, rolul lor fiziologic i patologic ca transportori ai glicerolului nu este elucidat deplin. Adipocitele sunt sursa major de glicerol, substrat pentru gluconeogeneza hepatic. Aquaporinele 7 i 9 (AQP7, AQP9) sunt canale pentru glicerol n adipocite i hepatocite, care menin balana optim ntre eliberarea glicerolului din adipocite i preluarea acestuia n hepatocite.

Transportul activ
Pentru a menine constant concentraia ionic a mediului intracelular, celula i-a creat mecanisme de transport activ, capabile s deplaseze moleculele i ionii n sens invers gradientelor de concentraie i electrochimice, datorit consumului de energie metabolic. Transportul activ propriu-zis

n acest tip de transport, proteina-transportor are i funcie ATPazic i utilizeaz energia eliberat prin hidroliza ATP n procesul de transport. Aceste proteine transportoare sunt clasificate n: Clasa ATPazelor de tip P care au ca reprezentant major Na+-K+ ATPaza rspunztoare de eliminarea activ din celul a ionilor de sodiu concomitent cu acumularea intracelular a ionilor de potasiu. Meninerea constant a concentraiei intracelulare de K+ prin funcia acestei pompe asigur condiii pentru desfurarea biosintezei proteinelor, activitii unor enzime i meninerii potenialului de membran. Un alt reprezentant este Ca2+ATPaza care este situat la nivelul membranei celulare i are rolul de a scoate ionii de calciu din celule, pentru meninerea unei concentraii intracelulare potrivite desfurrii proceselor de semnalizare celular. Pe de alt parte, Ca2+ ATPaza localizat n membrana reticulului sarcoplasmic din celulele musculare, scade conentraia intracelular de Ca2+ prin transportul activ al acestor ioni n lumenul reticulului n timpul relaxrii musculare. Clasa ATPazelor de tip V cuprind pompele de protoni (H+ATPazele) care au funcia de a pompa protoni prin membrana celular a unor tipuri de celule ( renale, osteocaste, macrofage, neutrofile, spermatozoizi, celule tumorale, fiind implicate n procese ca homeostazia, resorbia osoas, transportul cuplat prin membran, fecundarea ovulului de spermatozoid, metastazarea tumoral. H+ATPazele localizate la nivelul membranelor endosomale i lizosomale cu rol n scderea pH-ului din interiorul acestor organite. Clasa ATPazelor de tip F din membrana mitocondriilor utilizeaz gradientul protonic pentru a sintetiza ATP (cupleaz sinteza ATP cu transportul H+ de la concentraii ridicate la concentraii sczute). Clasa ATPazelor de tip ABC se remarc printr-un numr mare de molecule ce aparin acestei clase, implicate n mecanisme cu semnificaie n domeniul clinic. Dac ABC ATPazele bacteriene realizeaz importul de ioni, aminoacizi, peptide, proteine, mono- i polizaharide necesare acestor celule, ATPazele ABC ale eucariotelor sunt specializate pentru export. O astfel de ATPaz este proteina de multirezisten la medicamente (,,multidrug resistance protein" MDR ) care este supraexprimat n celulele tumorale umane, determinnd rezisten simultan la o varietate de medicamente citotoxice larg utilizate n chemoterapie, 40% din cancerele umane avnd rezisten multimedicamentoas. ABC ATPazele din membrana reticulului endoplasmic transport n lumen peptide provenite din degradarea citosolic a proteinelor virale sau microbiene. Aceste peptide ajung din lumenul RE pe suprafaa celular fiind recunoscute de limfocitele T citotoxice, care n acest mod suprim celulele infectate. Un alt reprezentant al acestei clase este proteina CTFR (,,cystic fibrosis transmembrane conductance regulator"), care este un transportor al ionilor de clor prin membranele celulelor productoare de mucus, saliv, transpiraie, lacrimi sau enzime digestive.Transportul clorului prin membranele celulare are rol n reglarea transportului de ap pentru meninerea fluiditii secreiilor i mucusului, dar i n reglarea transportului membranar de sodiu. Deleia unui aminoacid din poziia 508 a proteinei CTFR determin un blocaj al transportului de ap i sare (NaCl) prin membrane, cu producerea de ctre celulele care cptuesc cile respiratorii sau canalele secretorii ale pancreasului a unui mucus vscos ce obstrueaz aceste ci. Mucusul cu aceste caracteristici defavorizeaz funcia ciliar i favorizeaz infecii bacteriene cronice.

Sistemele de cotransport Proteinele transportor de tip ATPazic nu sunt singurele rspunztoare de transportul activ prin membranele celulare. Celulele au o clas secundar de proteine care import sau export ioni i molecule mici cum sunt glucoza sau aminoacizii mpotriva gradientului lor de concentraie, fr consum de energie provenit din hidroliz de ATP. Proteinele care realizeaz cotransport utilizeaz energia gradientului electrochimic al Na+ sau H+ pentru a transporta simultan o alt substan, proces denumit cotransport. Cnd molecula/ionul transportat i ionul cotransportat trec prin membran n aceeai direcie, procesul se numete cotransport, iar cnd trec n direcii opuse, procesul este antiport. Un exemplu de cotransport este importul glucozei sau aminoacizilor n celulele epiteliului intestinal sau al tubilor renali mpotriva gradientului lor de concentraie prin cuplarea cu transportul n celul al ionilor de Na. Micarea Na+ din mediul extracelular n celule este determinat de dou fore: gradientul de concentraie ( concentraia Na+ este sczut n mediul intracelular fa de cel extracelular) i de potenialul de membran (faa citoplasmic a membranelor celulare fiind ncrcat negativ n raport cu faa exoplasmic). Pentru fiecare doi ioni de sodiu transportai n celul se produce cotransportul unei molecule de glucoz. n aceelai timp, activitatea Na+-K+ATPazei asigur meninerea gradientului de concentraie al Na+ i simportul continuu al Na+ - glucozei/AA n celulele epiteliale. Transportul transcelular al glucozei i aminoacizilor din lumenul intestinal sau tubii renali n snge este condiionat de polaritatea celulelor epiteliale: membrana apical conine proteina simport Na+glucoz/aminoacizi, iar membrana latero-bazal deine pompe de tip Na+K+ATPaz i proteine (permeaze) care mediaz difuzia facilitat a glucozei i aminoacizilor n circulaie. Celulele miocardice au o protein membranar denumit sistem antiport Na+-Ca2+ care are un rol mai important n meninerea unei concentraii intracelulare sczute de Ca2+ n aceste celule, importul a trei ioni de sodiu fiind nsoit de exportul unui ion de calciu mpotriva gardientului su de concentraie (concentraia extracelular de Ca2+ este de 10000 de ori mai mare dect cea intracelular). Creterea concentraiei intracelulare de calciu determin contracia, iar activitatea antiportului Na+-K+ care scade concentraia intracelular de calciu reduce fora contraciilor inimii. Gradientul de Na+ necesar funcionrii acestui antiport este furnizat prin activitatea Na+K+ATPazei. Ouabaina i digoxina cresc contraciile musculaturii cardiace n insuficien cardiac congestiv, prin inhibarea Na+-K+ATPazei ceea ce determin creterea concentraiei intracelulare de Na i reducerea activitii sistemului antiport Na+-Ca2+, cu creterea concentraiei intracelulare de ioni de calciu, consecina fiind creterea forei de contracie a miocardului. Proteina antiport Cl/HCO3 denumit proteina AE1 este proteina integral de membran predominant n eritrocitele mamiferelor. Schimbul unui anion de clor contra unui anion bicarbonat nu implic modificri ale ncrcturii electrice a membranei, antiportul fiind dependent doar de gradienii de concentraie ai celor doi anioni pe cele dou fee ale membranei. CO2 eliberat din celule ajunge n sngele capilar, difuzeaz prin membrana eritrocitului i este transformat n bicarbonat solubil n ap (anionul HCO3-), reacie catalizat de anhidraza carbonic: Eliberarea O2 din oxihemoglobin induce o schimbare conformaional n polipeptidul globin, care permite unei histidine s lege protonul produs n

reacia catalizat de anhidraza carbonic cu formare de hemoglobinat acid. HCO3 format este transportat din eritrocit prin acivitatea antiportului Cl/HCO3, la schimb cu Cl, care ptrunde n eritrocit. La nivelul capilarelor pulmonare, procesul este invers. CO2 difuzeaz din eritrocite, scderea concentraiei citosolice a CO2 determin activarea anhidrazei carbonice care catalizeaz reacia de la dreapta la stnga, n sensul formrii CO2 i OH. Prin legarea oxigenului la hemoglobin, este eliberat protonul, care formeaz cu OH molecula de ap. Scderea concentraiei intracelulare a HCO3 datorit activitii anhidrazei carbonice determin ptrunderea HCO3 n celul, la schimb cu Cl. Dac schimbul anionic prin proteina AE1 nu ar avea loc, HCO3 s-ar acumula n eritrocite i ar genera mult CO2, modificnd pH-ul citosolic eritrocitar, care devine alcalin. Aproximativ 80% din CO2 din snge este transportat prin mecanismul de generare al bicarbonatului n eritrocite. Sistemul antiport Cl/HCO3 permite transportul unor mari volume de CO2 de la esuturi spre plmni, schimbul HCO3 cu Cl menine pH-ul citosolic neutru.

Transportul CO2 de la esuturi la plmni mediat de antiportul Cl/HCO3 (sursa: Lodish ,,Mollecular Cell Biology")

n reglarea pH-ului celular , un rol esenial au proteinele cotransportor Na+HCO3/Cl i antiportul Na+/H+. Metabolismul anaerob al glucozei produce acid lactic, iar metabolismul anaerob aerob produce mari cantiti de CO2, care este hidratat de anhidraza carbonic la acid carbonic. Acest acid slab disociaz, crescnd concentraia intracelular de protoni, pH-ul celular devine acid, afectnd metabolismul celulelor. Proteina antiport Na+HCO3/Cl import un ion de sodiu n sensul gradientului su de concentraie, mpreun cu ionul bicarbonat i export la schimb un ion de clor mpotriva gradientului de concentraie. HCO3 importat se combin cu protonii, genernd CO2, care difuzeaz din celule. Antiportul Na+/H+ import un ion de sodiu n sensul gradientului de concentraie i export la schimb un proton. Aceste sisteme de export de protoni sunt activate de scderea pH-ului intracelular. Creterea pH-ului celular stimuleaz antiportul Cl/HCO3, care determin intensificarea exportului de HCO3 i normalizarea pH-ului citosolic la valori de 7,4. Meninerea pH-ului fiziologic creeaz condiiile desfurrii normale a proceselor de sintez a ADN, a ARN, de biosintez a proteinelor (creterea i diviziunea celular) i o activitatea enzimelor implicate n desfurarea altor ci metabolice celulare.

CONSIDERATII FINALE ASUPRA ORGANIZARII MOLECULARE A MEMBRANELOR CELULARE Organizarea membranelor celulare, cat si a endomembranelor, are la baza un bistrat lipidic eterogen, asimetric si cu proprietati fluide manifestate bidimensional. Acestuia i se adauga proteine care ii confera caracterul unui mozaic (proteine plutind pe, sau cufundate intr-o mare lipidica). Modelul mozaicului fluid pentru organizarea biomembranelor a fost completat prin evidentierea si descrierea unor structuri adiacente: citoscheletul asociat membranei (structura aflata pe versantul intern al membranelor) si glicocalixul (structura expusa pe versantul extern al membranelor, alcatuita din lanturi oligo-(poli-)zaharidice din compozitia glicolipidelor, glicoproteinelor si proteoglicanilor din membrana). Atat proteinele cat si componenta glucidica a membranelor nu diminueaza ci accentueaza si nuanteaza caracterul eterogen, asimetric si de fluid bidimensional al structurarii membranelor celulare. Tot in completarea modelului mozaic fluid sub aspect structural, dar si functional au fost definite notiunile de domenii si/sau microdomenii de membrana. Acestea sunt regiuni mai extinse (domeniile), sau mai reduse (microdomeniile) din suprafata membranelor a caror compozitie este diferita de a altor zone. Compozitiile diferite ale domeniilor de membrana (apical versus laterobazal) sunt riguros controlate si pastrate de celula. Compozitia si existenta microdomeniilor (caveole, plute lipidice, structuri cu invelis de clatrina) au o dinamica mai accentuata, raspunzand nevoilor in continua schimbare ale celulelor, nevoi impuse de considerente interne ale celulei, sau de stimuli externi la care celulele trebuie sa raspunda. Componentele membranelor fie ele lipide, proteine, structuri glucidice au atat roluri structurale cat si metabolice. Aceasta dualitate a rolurilor este valabila atat pentru clasele de componente biochimice ale membranelor, cat si pentru

entitati moleculare (aceiasi molecula poate indeplini atat functii structurale cat si metabolice).

BIBLIOGRAFIE
1. MOLECULAR BIOLOGY OF THE CELL, autori: B. Alberts, D. Bray, J. Lewis, M. Raff, K. Roberts, J.D. Watson, Garland Publishing Inc., New York & London, 1989 (editia a II-a), 1994 (editia a III-a), 2002 (editia a IV-a); 2. MOLECULAR CELL BIOLOGY, autori: H. Lodish, A. Berk, S.L. Zipursky, P. Matsudaira, D. Baltimore, J. Darnell, W.H. Freeman and Company, New York, 2000 (editia a IV-a). 3. www. Scritube.com