4.

SISTEMUL CELULAR DE MEMBRANE

Studiul membranelor celulare a devenit o parte important a biologiei celulare odat cu introdurecerea metodelor biochimice i histologice, cnd s-au precizat funciile specifice diferitelor membranelor. Sistemul celular de membrane celular prezint o seam de caractestici comune: - toate au acelai tip structural, biochimic, biofizic, morfologic i funcional; - toate au permebilitate selectiv, dinamic, ciclic; - toate au polarizare electric ce se poate modifica n strns legtur cu variaiile permeabilitii; - toate au sisteme enzimatice proprii, care le confer funciuni metabolice proprii; Tabel 4. Membrane Periplasmatic Reticul endoplasmic - membrane , cu granule - membrane , netede Microviloziti Mitocondriale Funcii metabolice Glicoliza Sinteza de proteine Sinteza de acizi grai, fosfolipide Hidrolize terminale: proteine, polizaharide Ciclul Krebs Oxidarea acizilor grai Sinteza de acizi grai Fosforilare oxidativ Condensare de substane sintetizate n alte sisteme de membrane Sinteza de mucopolizaharide

Sistemele Golgi

Tabel 4. Membranele celulare i funciile lor 1. Membrana citoplasmatic (plasmalema, membrana periplasmatic) de cca 60-100 grosime, separ coninutul celulei de mediul nconjurtor.. Membrana plasmatic este o parte a sistemului structural celular n unitatea creia se integreaz nu numai din punct de vedere morfologic ci i funcional. Ea este aceea parte a sistemului de membrane celulare care limiteaz i regleaz schimburile cu mediul exterior, extracelular, asigurnd astfel o compoziie a mediului intraceluler i un gradient electrochimic caracteristic, tot aa cum membrana nuclear asigur i limiteaz schimburile citplasmei fundamentale cu

sucul nuclear sau cum membrabna mitocondrial asigur i limiteaz schimburile intramitrocondriale cu citoplasma fundamenta Permite trecerea selectiv a metaboliilor de la exterior la interior, precum i invers, din celul spre exterior.La plante i la unele baterii plasmalema este dublat de o a doua berier, peretele celular 2. Membranele organitelor celulare, sunt subiri, de cca 60 , includ: a) membrana dubl a mitocondriilor i se compune din reticul neted i rugos; b) membrana lizozomilor a crei integritate asigur meninerea enzimelor lizozomale n stare inactiv,.latent; c) reticul endoplasmatic, reprezentnd o reea de canale ce traverseaz ntreaga celul ca un aparat circulator intracelular ; d) aparatul Golgi, compus din vezicule i cisterne ce se afl n relaie de continuitate cu reticulul endoplasmatic; e) membrana nucleului dubl i prevzut cu pori. f) membrana peroxizomilor Prin fragmentarea celulei n cursul omogenizrii i al centrifugrii difereniate membranele reticulului endoplasmatic formeaz vezicule de microzomi; 3.Membrane speciale a) teaca de mielin, care nconjoar axonii neuronilor, produs de celule Schwann; b) discurile segmentului extern al ceulelor cu bastonae din retin. Funciile membranelor celulare, foarte variate, sunt indispendabile pentru via. Membranele citoplasmatice, sunt bariere cu permeabilitate foarte selectiv, prin care se fac schimburile ntre celule i mediul nconjurtor. Asigur comunicarea ntre celule i fixarea celulelor n esuturi. Compartimentarea materiei vii, realizat de membranele subcelulare, asigur formarea de spaii n care se desfoar anumite reacii chimice n condiii optime. Pe lng compartimentarea substanei vii, membranele intervin efectiv n desfurarea proceselor metabolice. Interaciunile lipide-proteine n membrane sunt eseniale pentru funcia enzimelor de membran. Dou din trei procesele majore de conversiune a energiei n natur se petrec n membrane: fotosinteza, ce are loc in membrana tilacoizilor din cloroplaste, convertete energia solar n energie chimic potenial, iar fosforilarea oxidativ, proces prin care energia chimic potenial este eliberat i convertit n ATP, are loc n membrana intern a mitocondriilor. Membranele controleaz fluxul de informaii ntre celule i mediul nconjurtor. Membranele conin receptori specifici pentru stimulii externi: receptorii sunt glicoproteine ( grupri glucidice grefate pe proteinele specifice ale membranelor celulare). Micarea bacteriilor pentru hran, rspunsul celulelor la acinea hormonilor asupra membranelor celulelor int, percepia luminii sunt

cteva procese datorate detectrii unui semnal de ctre receptori. Membranele au capacitatea i de a genera semnale chimice sau electrice cu rol n comunicarea biologic. . Membranele au proprietatea de a suferi modificri funcional adaptative. Ca exemplu se pot cita inducia enzimelor din reticulul endoplasmatic sub aciunea medicamentelor. Membranele au rol n procesele imunitare, n reaciile de aprare ale celulelor i ale organismului. 4.1. Compoziia chimic a membranelor biologice. Membranele biologice sunt compuse din proteinre, lipide, ioni i ap n proporii variabile. Deoarece resturile glucidice sunt ntotdeauna ataate proteinelor sau lipidelor n membrane putem considera , membranele ca fiind alctuite din proteine ( glicoproteine) i din lipide (glicolipide). Se pot considera trei tipuri de membrane dup compoziia lor: Cea mai simpl membrana este mielina, al crei component major este alctuit de lipide i care conine foarte puine proteine. Aceast compoziie chimic se potriveste perfect cu funcia mileilnei de izolator, de barier a permeabiliii. A doua categorie de membrane, membranele citoplasmatice ale celulelor animale, conin cca 50 % proteine, implicate n funciile enzimatice i de transport ale acestor membrane, cu funcie i n permebilitate selectiv. Al treilea grup de membrane include membranele citoplasmatice ale bacteriilor i de membrana intern a mitocondriilor, care au funcii complexe, cum este fosforilarea oxidativ. Ele conin o mare cantitate de proteine (75% din masa membranei). Lipidele. Lipidele din membranele celulare constau din fosfolipide (fosfogliceride i sfingolipide), glicolipide i colesterol. Fosfogliceridele au la baz molecula de glicerol, n care dou grupri sunt esterificate cu acizi grai. A treia poziie este ocupat de un grup polar (fosfat). Glicerol O Lanurile ---------R1 C - O - CH2 Grupare polar (fosfat) de acizi grai ------R2 - C O - CH OH C2 -. O - P - O
O-

Acid fosfatidic (diacilglicerol-3 fosfat) cu sarcin permanent negativ 2

Fosfogliceridele pot conine o mare varietate de acizi grai. De obicei ele conin un acid gras saturat i unul nesaturat, acesta fiind situat n poziia mijlocie a lanului de glicerol, ntre acidul gras saturat i grupul polar la cellalt capt.O excepie o constituie dipalmitoil lecitina din membrana alveolar pulmonar, probabil datorat faptului c acizii grai saturai sunt mai greu oxidai dect acizii grai nesaturai. Gruprile polare ale fosfoglicerifelor sunt i ele foarte variate, toate conin o grupare fosfat, dar i alte grupri destul de complexe. A doua clas major de lipide de membrane o constituie sfingolipidele. Acestea au la baz molecula unui aminoalcool cu lan lung de atomi de carbon.

H H H H2 C- (CH2 )n - C - C- C - C- CH2OH H OH NH3 Sfingozin

H H H O CH3 + H2 C- (CH2 )n - C - C- C - C- CH2O - P O CH - CH2-N - CH3 H OH NH3 O CH3 ----------------OC Fosforilcolin Acid gras R1 Sfingomielin Glicolipidele (lipide ce conin glucide ataate) difer de sfiomngomielin prin natura unitii legate de gruparea hidroxil primar scheletului sfigozinei. Cea mai simpl glcolipid este cerebrozida, n care se gsete doar o unitate glucidic, glucoza sau galactoz. Glicolipide mai complexe, cum sunt gangliozidele, conin un lan ramificat de pn la 7 uniti glucidice.

H H H H2 C- (CH2 )n - C - C- C - C- CH2 O - glucoza H OH NH3 sau NH galactoza O- C R1 Cerebrozid (glicolipid) O alt lipid important este colesterolul, un steroid prezent numai la eucariote nu i la procariote.

CH3

H C - CH2 - CH2 - CH2 C - CH3 CH3 CH3 CH3

Colesterolul . Dei structurile lipidelor din membrane sunt att de diferite, ele au o proprietate comun: lipidele de membran sunt molecule amfifile sau amfipatice. Partea hidrofil este gruparea polar n fosfolipide, resturile glucidice n glicolipide i gruparea hidroxil la C3 n colesterol. Partea hidrofob este prezentat de lanurile de acizi grai n fosfolipide, lanul de acid gras i lanul de hidrocarbur al sfingozinei n sfingomielin i glicolipide i ntreaga molecul cu excepia gruprii OH n colesterol. O consecin a structurii amfipatice este aranjamentul fosolipidelor i glicolipidelor n mediu apos sub form de micele. Aranjamentul favorit pentru majorittea fosfolipidelor i glicolipidelor n mediu apos, este o foi compus dintr-un strat dublu lipidic, care st la baza sructurii membranelor biologice. La nclzirea fosfolipidelor la o temperatura mult sub punctul de topire, lipidele sufer deci o tranziie de faz, de la starea cristalin la starea de cristal lichid.

Lipidele membranelor tuturor celulelor se afl la temperaturile fiziologice n starea de cristal lichid, deci n stare fluid. Fluiditatea este esenial n fiziologia membranelor. Proteinele n timp ce lipidele asigur n primul rnd funcia de barier a membranelor, proteinele confer funcionalitatea membranei: intervin n transportul activ, ndeplinesc funcii enzimatice sau de receptori. Antigenele de grup sanguin sunt glicoproteine cu lanuri glucidice caracteristice. Proteinele membranare sunt insolubile n ap, prin urmare izolarea lor i determinarea proprietilor se poate face prin tratament cu detergeni. Dup solubilizarea lor proteinele se separ prin electroforez, n funcie de masa lor molecular..Cu ct funciile membranelor sunt mai complexe cu att apar mai multe polipeptide la fracionarea membranei.. Proteinele pot fi numai ataate membranei sau poate face parte din membrane.. 4.2. Modele de organizare molecular a membranelor. Membrana este un loc de trecere a fluxului molecular dar i o barier ce se opune scurgerii lui. Lipidele i proteinele acestei bariere se unesc prin legturi necovalente i sunt astfel aranjate ca zonele hidrofobe sunt orientate spre interior, iar cele hidrofile spre exterior. Multitudinea cercetrilor asupra membranelor vii constituie obiectul de studiu al Membranologiei. Modelele de structur a membranelor vom trata urmtoarele : - modelul lamelar - modelul micelar - modelul n mozaic lipido-proteic 4.2.1. Modelul lamelar de structur . Membrana vie este constituit dintr-un strat lipidic bimolecular cu proteine.

Fig. 2. Schema modelului lamelar de structur a membranelor celulare (Danielli-Davson) J. Danielli i R. Davson (1936) au propus cunoscuta ipotez a membranelor lipoproteice, dup care membranele celulare sunt formate din dou filme suprapuse de molecule lungi fosfolipidice aezate paralel unele cu altele; pe feele lor libere se afl proteine fibrilare; fiecare molecul fosfolipidic are grupri hidrofobe (apolare). Gruprile apolare ale unui strat se leag cu gruprile celuilalt prin legturi van der Waals, care se stabilesc ntre resturile metilate ale lanurilor lungi, dezordonate ale acizilor grai. Capetele hidrofile (polare) ale fosfolipidelor ncrcate pozitiv sau negativ sunt neutralizate de funciile secundare ionizate negative sau pozitive ale resturilor de aminoacizi din proteinele fibrilare. n felul acesta se explic permebilitatea selectiv a membranei pentru substanele liposolubile. Pentru a explica difuziunea rapid a apei i a glucidelor prin astfel de model Danielli admite existena porilor. Deci, tipul lamelar este alctuit din trei foie: una central cu dou filme fosfolipidice acoperite pe ambele fee de ctre o foi cu proteine fibrilare. Membrana este asimetric, deoarece faa extern este acoperit de macromolecule de polizaharide, iar cea intern de proteine globulare. Boois, Bunjenberg i Jong cred c legtura dintre proteine i capetele polare ale lipidelor se realizeaz prin puni complexante. Astfel, sterolii dintre fosfolipide, sunt legai de proteinele fibrilare prin intermediul Mg+ . Membrana secionat perpendicular apare trilaminar: o band clar la mijloc de 40 A. avnd de o parte i alta cte un strat opac electronilor, gros de 20-30 A. n 1960 modelul lui Danielli-Davson este completat de Robertson care susine c acesta este modelul unitarde structur a oricrei membrane biologice. Dup Robertson datele de microscopie electronic ar confirma ipoteza: zonele ntunecate ar corespunde la 2 straturi proteice, iar zona clar dintre acestea stratului dublu lipidic. n modelul Danielli -Davson interaciunile dintre proteine i lipide sunt de natur electrostatic, gruprile polare ale acestora neutralizndu-se reciproc, fiind ascunse contactului cu apa. Benson emite alt ipotez: proteinele din membrane sunt n mare parte globulare i ncorporate n interiorul membranei. Moleculele lipidice nu formeaz un strat dublu, ci lanurile de acizi grai sunt intercalate ntre pliurile ( buclele) lanului polipeptidic, n aa fel nct capetele polare ale lipidelor s rmn la exterior, expuse contactului cu apa. Intercalarea lanurilor de acizi grai n lanurile polipeptidice mpiedic formarea legturilor de hidrogen ntre

peptide, ceea ce nu este favorabil din punct de vedere termodinamic. Se tie c n structura proteinelor stabilitatea lanului este dat de legturile de hidrogen. 4.2.2. Modelul micelar Acest model a fost propus ncepnd din 1952, n urma studiilor lui A.Pappart i R. Ballentine care au gsit c membranele eritrocitelor conin trei feluri de lipide: - a) lipide uor legate de proteine - b) lipide slab legate de proteine - c) lipide puternic legate de proteine; O prim concluzie care se desprinde este aceea c: - 42 % din lipide se leag puternic electrostatic de proteine; - 44% sunt legate slab de capetele hidrofobe ale altor substraturi. O a doua concluzie se bazeaz pe organizarea micelar a fosfolipidelor n care este dispersat o mas de proteine globulare. Unele fosfolipide ca lecitina i 50% din cefaline se leag electrostatic de proteine, altele printre care i colesterolul sunt legate numai de lipide i se organizeaz n dispersie stabil n apa de mbibiie, credu-se pori apoi , n timp ce barajul difuziei este reprezentat prin polii apolari ai lipidelor.

A.n seciune cu suprafaa B. n seciune perpendicular pe grosimea suprafeei Fig. 5. Schema modelului micelar al membranelor celulare

4 . 2. 3. Modelul n mozaic lipido-proteic Dup acest model, proteinele membranei sunt ncorporate n stratul dublu lipidic la fel ca nite iceberguri ce plutesc pe mare. Aceat mare lipidic este fluid, deci cu lipide n stare de cristal lichid, n care se pot mica n voie

proteinele. Proteinele se pot deplasa,deci lateral ( difuziune) sau se pot roti n jurul unei axe perpendiculare pe planul membranei. Singer mparte proteinele membranei n integrale (propriu-zise) i periferice sau ataate. Proteinele integrale ptrund adnc n stratul lipidic, putnd chiar s strbat membrana deintr-o parte n cealalt. Pentru a fi posibil aceast penetrare a proteinelor integrale n lipide se sugereaz c i ele sunt amfipatice, ca fosfolipidele: partea hidrofil ar proemina n exterior, fiind n contact cu mediul apos i cu gruprile fosfolipidice; partea hidrofob ar fi in interior membranei i ar interaciona cu lanurile de acizi grai din molecula fosfolipidelor. n partea hidrofob a proteinelor, majoritatea aminoacizilor ar fi cu resturile hidrofobe la exterior spre a putea interaciona cu acizii grai din fosfplipide. Prile din moleculele proteinelor de membran ce strbat stratul dublu lipidic sunt compuse exclusiv din aminoacizi hidrofobi. Acest model ndeplinete condiiile de stabilitate a structurii din punct de vedere termodinamic.n plus exist date experimentale ce susin structura globular a proteinelor de membran i penetrarea lor n stratul dublu lipidic (criofracturarea). La examenul microscopic se observ dup fracturarea prin nghe proeminene pe un fond neted.Proeminenele ar fi proteinele sau complexele proteice din membrane, poriunea neted fiind stratul dublul lipidic. Suprafa Faa intern membran

Fig. 3 Fracionarea membranelor prin nghe (freeze-fracturing.) Datele privitoare la membranele biologice menin stratul dublu lipidic ca element de baz[. Structura n mozaic fluid lipido-proteic red doar imagina unui anumit moment, deoarece componentele membranei sunt ntr-o continu micare . Baza fluiditii stratului dublu lipidic o constituie mobilitatea lipidelor. Se pot distinde dou feluri de micri: a) stratul dublu lipidic este caracterizat printr-un interior fluid i o cretere progresiv a rigiditii pe msur ce ne apropiem de la centrul membranei spre periferie, adic spre restul de glicerol din molecul. c) o alt categorie de micri n molecula fosfolipidelor este micarea grupelor polare ale fosfolipidelor. Astfel, de exemplu n lecitin micarea atomilor din celin este din ce n ce mai acentuat pe msur ce ne ndeprtm de restul de glicerol.

Pe lng micrile din cadrul moleculei exist i micri ale ntregii molecule n stratul dublu lipidic. Se pot distinge: a) difuziunea lateral n planul membranei astfel nct molecula rmne n acelai strat monilipidic, deci n aceeai jumtatea a membranei. Aceast miscare este foarte rapid. b) difuziunea transversal sau micarea , flip-flop, adic trecerea unei molecule dintr-un monostrat lipidic n cellalt .Micarea este lent, dureaz ore sau zile, puin probabil. Exist i micri de rotaie a proteinelor n membrane.n principiu sunt dou feluri de micri: njurul unei axe perpendiculare sau n jurul unei axe paralele cu planul membranei. Al doilea tip de rotaie nu a fost evideniat experimental.

Fig. 4. Modelul n mozaic fluid lipido-proteic ( Singer1971, dup Dornell i al.1991.) 4. 3. Componentele suprafeei celulare H. Bennett (1962) distinge dou componente ale suprafaei celualre: a) una intern - plasmalema lipoproteic b) alta extern - glicocalixul polizaharid n multe cazuri apar structuri secundare cum sunt pereii celulari din celuloz, hemiceluloze, substane pectice, etc. Plasmalema rezist la trecerea apei, ionilor, moleculelor hidrofile, difuzia O2, N2 i CO2 Avnd constant dielectric mare nseamn c rezist la curentul electric direct. Fiind flexibil, uor deformabil, prezint micri, se separ, se

recombin instantaneu refcndu-se brusc. n schimb glicocalixul este uor strbtut de ap, ioni i molecule mici, avnd o rezisten electric mic.

Fig. 6. Structura membranei celulare dup Lambert (dup, Ionescu-Varo,1981 .) 4. 3. 1. Glicocalixul Glicocalixul este de natur glucidic, se caracterizeaz prin structura sa variabil: de la mrimea, tria i rezistena pereilor celulari ai vegetalelor i pn la un strat detectabil numai chimic de pe suprafaa eritrocitelor exist toate gamele de mrimi. La celulele vegetale glicocalixul conine pe lng polizaharide (celuloz, manani, xilani, galactani, arabani, fucoidin i heteropolizaharide, poliuronide ( substane pectice, acid alginic i diferite mucilagii, gume ce conin acid uronic, chitin, chitozan, lignin, ceruri, suberin, cutin, sporolenin, proteine,o serie de oxizi i carbonai minerali. Asemenea substane complexe sunt organizate n microfibrile (de celuloz, xilani, manani, glucani, chitina). Glicocalixul, n ansamblu, apare ca polimeri anionici care corijeaz proprietile electrice ale membranei vii. Asociaia strns ntre glicocalix i plasmalem determin noi proprieti suprafeei celulare, n sensul proteciei, reglrii schimburilor i activitii ei. Glicocalixul poate fi ataat sau neataat. Glicocalixul ataat ntlnit la globuile roii de vertebrat, la amibe, microviluii celulelor vezicii biliare, fagocite etc, ntr-un cuvnt celule unde configuraia

suprafeei lor se schimb antrennd glicocalixul. Amiba are un glicocalix lung, antenular cu funcia de captare de proteine, particule n cursul fagocitrii i pe care le transport n caveole. Glicocalix neataat constituie nveliul bacteriilor, al fungiilor, al celulelor plantelor, al fibrelor musculare, al epiteliilor animale cu membran bazal.Cum se poate vedea o prim funcie a acestei formaiuni este pur mecanic.n concepia actual pereii celulelor vegetale sunt considerai ca fiind un glicocalix care d rigiditatea necesar esuturilor. La animale, substana matrical a mezogleei celenteratelor, cartilageina i oseina esutului osos trebuie considerate de asemenea glicocalixuri Rolurile glicocalixului: a) mecanic, de solidalizare a celulelor.n adeziunea intercelular b) de ungere a suprafeelor celulare c) de legare chimic complementar a proteinelor i ionilor n cazul enterocitelor d) sub form de membran bazal are rol de filtru: el determin mrimea particulelor ce urmeaz s treac prin interstiiile podocitelor din glomerulul lui Malpighi. Deci reine particulele mari s ajung la membrana vie i mpiedic enzimele s difuzeze rapid prin membrana vie n afar. e) asigur identitatea, individualitatea celulei, deorece glicoproteinele sunt specifice nu numai speciei ci i tipului de celul de ex. grupele sangvine umane A,B,O sunt determinate de gruprile glucidice terminale aflate pe glicoproteine i glicolipide aflate pe membrana eritrocitelor. f) conine gruprile glucidice ale receptorilor aflai n plasmalem care interacioneaz cu hormonii sau cu toxinele bacteriene: de ex.receptorii pentru insulin,toxina holeric sunt glicoproteine a cror grupare glucidic este esenial n recunoatere i interaciune. 4. 4. Solidarizarea celulelor. Membrana celular realizeaz pe feele laterale, adiacente dintre celule o serie de cute, ndoituri, falduri care solidarizeaz celulele. Astfel nefrocitele segmnentului proximal al tubului nefrotic prezint falduri care se mbuc cu cele ale celulelor nvecinate crescnd suprafaa i meninndu-le strns unite. n alte cazuri membrana celular a fibrei musculare striate prezint o serie de ndoituri n dreptul plcii motorii, constituind aparatul juxtaneuronal bogat n acetilconesteraz. Jonciunile intercelulare sunt de trei feluri: 4. 4. 1. Desmozomii sunt o alt nfiare pe care o iau anumite poriuni mici ale membranei celulare ce realizeaz contacte strnse cu celulele adiacente sau cu substraturile extracelulare. ntre celule nu se stabilete niciodat un contact strns ntre plasmaleme, existnd un spaiu de cca 8-10 nm. Acest spaiu

se realizeaz prin interaciunea forelor electrostatice care resping membranele cu aceeai sarcin cu a forelor de atracie London van der Waals. n cazul desmozomilor, n spaiul intercelular se gsete un material diferit prin aspectul su electronoptic de al subsdtanei intercelulare. Foia extern a plasmalemei nu se modiic ca i spaiu, n schimb foia intern dinspre citoplasm se ngroa foarte mult i de la ea pornesc microfibrile sau , tonofilamente n citoplasm. Asigur adeziunea celulelor n epitelii, furniznd rezisten mecanic Clasificarea desmozomilor: e. maculari, mici, din loc n loc f. zonulari, mari n jurul celulei, care pot fi: - autodesmozomi, ntre supreafeele aceleiai celule - ideodesmozomi, ntre celule de acelai tip; - allodesmozomi, ntre celule de tip diferit; - heterodesmozomi, ntre plasmalem i o structur molecular; g. ntregi : simetrici i asimetrici h. dismembraniali -rmne spaiu i sinmembraniali, se contopesc ; . 4. 4. 2 . Jonciuni strnse ( tight junctions) se realizaz prin sudarea a dou membrane vecine. Acestea nconjoar complet celula, toate celulele intrun strat apar sudate mpreun fr spaii intercelulare. Aceste jonciuni apar n poriunile apicale ale celulelor ce delimiteaz lumenul unor caviti (intestin, vezica biliar, corpul ciliar al ochiului etc.). Rolul lor este de a mpiedica scurgerea lichidelor printre celule, scurgerea se face numai prin celule.

Fig. 7. Semidesmozom

Fig. 8. Semiautodesmozom

Un exemplu concludent despre rolul acestor jonciuni l constituie bariera hematoencefalic concretizat de jonciunile dintre celulele endoteliale ale vaselor de snge ce irig encefalul. Aceasta are rolul de a proteja encefalul de substane toxice, este permeabil pentru glucoz spre interior i CO2 spre exterior. Bariera este funcional pentr proteine dar nu este funcional pentru alcool i morfin. 4. 4. 3. Jonciuni permeabile ( gap junctions) servesc la stabilirea comunicrii ntre celule. Ele au o structur special. Membranele celulelor ntre care se afl asemenea jonciuni sunt situate la o distan de 20-40 , deci cu mult mai mic dect n spaiul intercelular obinuit.Cele dou membrane sunt unite prin canale cilindrice, prin care interiorul celor dou celule comulnic. Canalele care sunt complet izolate de spaiul extracelular sunt realizate prin aranjarea regulat a unor proteine de membran. Jonciunile permeabile reprezint vestigiile unui sistem primitiv de comunicare ntre celule, prezent nc la Spongieri. Prin acestea pot s treac ioni anorganici i molecule cu GM sub 1000 (glucide, aminoacizi, nucleotide, hormoni, vitamine); nu pot s treac proteinele i acizii nucleici.Astfel de jonciuni se afl ntre celulele musculare netede din intestin, ntre ceile musculare miocardice, n esuturi epiteliale, glande salivare, ficat, rinichi, tiroid etc. Jonciunile permeabile au caracter dinamic. Creterea concentraiei de Ca2+ n citoplasma unei celule determin nchiderea comunicrii ntre celule. Astfel, n cazul unor leziuni mecanice a unor esuturi (piele, ficat) n celulele lezate ptrund ionii de calciu din spaiul extracelular.nchiderea imediat a comunicrii prin jonciuni permeabile mpiedic scurgerea materialului din celulele vecine n cele distruse, deci previne extinderea leziunilor. Ulterior, n procesul de vindecare a rnilor se restabilesc jonciunile permebile ntre celule. Lowenstein consider c aceste jonciuni permeabile cauzeaz mbolnvirea ntregului organ i nu poriuni ale acestuia. In concluzie, jonciunile permebile, dei reprezint un sistem primitiv de comunicare ntre celule, i pstreaz importana i la organismele superioare .La acestea se adaug, ns i alte sisteme de reglare i integrare a funciilor diferitelor esuturi. 4. 5. Microvilii n unele cazuri, specializarea suprafeei plasmalemei a mers att de departe nct s-au difereniat structuri noi cum sunt microvilii i cilii. Microvilii sunt digitaii de 1-2 , care se ntlnesc la polul apical al enteriocitelor, nefrocitelor, plexurilor coroidiene, celulelor foliculare. Ei au un ax fibrilar mai dens, iar suprafaa lor este acoperit cu aa numitul glicocalixul antenaro perie molecular de polizaharide filiforme lung de pn la 1000 .O celul intestinal are 3000 microvili; 1 mm2 de suprafa intern a intestinului are 200.000.000 microvili care mresc enorm suprafaa intestinului subire.

La baza microvililor se gsesc vezivcule pinocitare prin care se nglobeaz lichide cu substane dizolvate n mediu. G. Palade (1953) a descris n endoteliul capilarelor de la vertebrate nite invaginaii ale suprafeei celulare denumite de E. Jamade- caveole care au fost vzute i pe sinapsele nervilor; formarea veziculelor pinocitare i fagocitoza trebuie socotite ca ncepnd tot cu invaginaii caveolare. Vezicule exocitare rmase dup ce s-a eliminat produsul de secreie sunt tot caveole.n asemenea cazuri suprafeele celulare se mresc de cca 10 ori. Dar cel mai interesant exemplu de specializare strict a unei pri de membran l constituie invaginrile sarcotubulare ale fibrei musculare striate care nconjoar miofibrilele prin care este condus impulsul nervoexcitant la miofibrile i prin care se elibereaz Ca++ din reticulul enndoplasmic, determinnd contracia.

Fig. 9. Antenule

Fig. 10. Microvili

Fig. 11. Caveole

4. 6. Rolurile i activitile fiziologice ale membranei plasmatice Micarea i recombinarea suprafeelor celulare: eccitoza, encitoza (pinocitoza, fagocitoza); Schimburile de substane cu mediul nconjurtor i toate particularitile celulare ale permebilitii. Suport al antigenelor de suprafa: Izolator electric n cazul tecii de mielin a celulelor Schwann: Conversia energiei luminoase n impuls electric n cazul membranelor celulelor cu bastinae din retin. 4. 6. 1. Micri celulare avnd baz sistemul microtubulilor de dinein Dac microfilamente intr n structura microvililor, n schimb expansiunile permanente mai mari de la suprafaa celule cum sunt cilii i flagelii, au la baza structurii lor micrtotubuli. Cilii i flagelii sunt variante ale aceleiai organele. Cilii apar n numr mare pe suprafaa celulei, au micri coordonate ca un lan de gru suflat de vnt, prin care se realizeaz mpingerea unor materiale din mediul extern dintro direcie bine determinat, de exemplu eliminarea materialelor strine cilor respiratorii. Aceasta se realizeaz prin btaia coordonat a cililor dup care urmeaz o micare de revenire i apoi btaia urmtoare. Ciclul se repet de 4060 ori pe secund.

Fig. 12. Micarea ciliat Cilul este format din trei pri: poriunea liber sau cilul propriu-zis, corpul bazal i rdcinile. Ultimele dou poriuni se afl n citoplasm.Corpul bazal are o structur identic cu a centriolului i este coordonator al micrilor cilului. Rdcinile au o structur variat ce realizeaz ancorarea cilului de celul. Partea liber a cilului este format dintr-un complex de structuri microtubulare numit axonem mbrcat n hialoplasm i membran celular. Axonema n toate celulele are un plan de organizare asemntor. Exist 9 dublete de microtubuli aezate n jurul a doi microtubuli individuali (aa numita structur

9+2). Fiecare dublet este format dintr-un microtubul complet (numit i subfibra A, avnd 13 protofilamente), de care este ataat pe o parte un microtubul incomplet, n forma literei C (numit subfibra B, avnd 10-11 protofilamente). Tubulinele alfa i beta ce formeaz subfibra A sunt diferite de tubulinele omoloage din subfibra B. De partea opus subfibrei B se leag de subfibra A dou brae n form de clete, compuse dintr-o protein numit dinein. Flagelul este la eucariote o structur asemntoare cilulului, dar unic i mai mare. Prin micarea ondulatorie a flagelului se realizeaz locomoia celulei. La om exist o singurt celul - spermaztozoidul- care se deplaseaz prin flagel. Structura flagelului este asemntoare cu a cilului, dar este mai complex. Axonema este tot de tipul 9 + 2. Mecanismul molecular al micrii cililor i flagelilor este aceeai. Dineina joac un rol esenial, avnd proprietate ATP-azic. Scindarea ATP furnizeaz energia necesar micrii, funcia dineinei este similar cu a miozinei. ATP provine din glicoliz sau mitocondrii i difuzeaz prin citoplasm n axonema cililor, pe cnd la flageli exist mitocondrii ce nconjoar axonema nsi. n timpul micrii cililor i flagelilor se produce alunecarea dubletelor unul n raport cu cellalt i n consecin incovoierea axonemei. Aceast alunecare a dubletelor se face prin deplasarea punilor de laterale ce se stabilesc ntre dinein i dubletul adiacent. La fel cum actina este deplasat prin desfacerea punii de legtur cu miozina, tot aa n acest sistem se desfac i se refac legturile dineinei cu dubletul adiacent; se realizeaz, n consecin, glisarea dubletelor unul fa de cellalt i ncovoierea cilului sau a flagelului. Dineina joac un rol decisiv. Absena ei la unii bolnavi ( genetic) duce la infecii respiratorii ( incapacitatea cilor respiratorii de a se cura) sau sterilitate ( din cauza imobilitii spermatozoizilor). Deci dineina lipsete n acesta caz n toate sistemele cu cili i flageli. Flagelii la procariote (bactertii) sunt complet diferii ca structur de cei de la eucariote. Apar unul sau mai muli pe o celul i sunt formai de filamente de flagelin. 4. 6. 2. Recombinarea suprafeelor celulare Celula este capabil s se mite, s se contopeasc cu alte poriuni de membran, s se recombine i chiar s se schimbe cu o alt suprafa celular. Astfel n eccitoz, ntlnim o destindere a membranelor, o contopire i o recombinare care, prin eliminarea coninutului veziculei din celul, creaz o mrire de suprafa. n cazul secreiei granulelor de zimogen al pancreasului exocrin s-a vzut cum plasmalema se contopete cu membrana vezicului de secreie. Aceast contopire se realizeaz prin influena pancreoziminei dup ctva timp, mai multe granule de zimogen i contopesc pereii, eliberndu-se astfel, tripsinogenul, chimotripsinogenul, amilaza, lipaza, nucleaza, esterazele acumulate n ele. n cazul proteinelor (caseina) ele se gsesc nconjurate de o membran

citoplasmatic, formnd mici vezicule care, cu timpul se apropie de polul apical al celulei. Prin contopirea plasmalemei cu membrana veziculelor se formeaz caveole, iar proteinele ies din celul. n cazul lipidelor veziculele sunt mult mai mari i de asemenea nglobate ntr-o membran. Ajungnd la suprafaa celulei ele sunt nchise ntr-un scurt pseudopod, care cu timpul, se stranguleaz la baz, astfel c n lumenul glandei cad picturi de lipide nvelite ntr-o dubl membran i anume plasmalema la exterior i membrana proprie n interior. Endocitoza este un mecanism fiziologic tradus morfologic prin deplasarea membranei celulare spre interior. Se formeaz astfel, vacuole cu perei ce provin din plasmalem i n care sunt ncorporate particule din afar. Aceste vezicule sau endozomi permit trecerea particulelor i a ionilor care nu pot strbate plasmalema, includ n celul substane care au reacionat specific cu membrana i pe care aceasta le absoarbe selectiv, dar i protejeaz celula de ptrunderea unor cantiti mari de substane.

Fig. 13. Forme de eccitoz Foarte bine se poate observa la amoebe care includ particule colorate, dar de colorani vitali. Prima etap a endocitozei este adsorbia ionilor, particulelor, moleculelor de stratul mucoid al glicocalixului. Ceea ce este important este concentrarea selectiv a materialului n cursul ingestiei i deteriorarea stratului mucuoid. Deci, accentul cade nu pe adsorbia materialului, ci pe cantitatea sa prins de glicocalix. A doua faz a endocitozei este formarea endozomilor din

plasmalem i transformarea lor n lizozomi prin aportul celular de hidrolaze acide. n concluzie transportul prin vezicule celulare membranare const n trei procese: endocitoza, prin care se introduc n celul substane i partzicule de diferite mrimi cu ajutorul invaginaiilor plasmalemei intracitozsau pinocitoza, adic desprinderea de vezicule tranportatoare din dictiozomi fragmentari de endozomi primari, asamblri de endozomi primari n formaiuni secundare lizozomale. exocitoza, adic eliminarea prin recombinri i contopiri ale membranei a unor produse celulare 4. 6. 3. Schimburile prin membran Celulele iau din mediu tot felul de substane indispensabile meninerii activitii lor fiziologice i elimin propduse elaborate i de excreie. Astfel are loc un schimb permanent ntre celule i mediul lor extern datorit faptului c memnrana este permeabil, fiind traversat de multe substane dizolvate. Dar, permebilitatea este selectiv, n sensul c nu toate tipurile de substane pot strbate bariera membranei celulare. Aceast selectivitate este n funcie i de ali parametrii ca : tipul de celul, pH-ul, rH-ul mediului, timpul, concentraia substanei dizolvate etc. Pe o parte i de alta a membranei periplasmatice exist aa cum s-a artat diferene foarte marcante de concentraii ionice i de potenial electric. Membrana intervine n meninerea acestor diferene. Membrana trebuie s funcioneze astfel ca substanele nutritive s intre n celul, produii de catabolism s ias cu mult uurin, n timp ce substanele idiogene cu adevrat necesare metabolismului celular s nu ias din celul, s nu o traverseze dect forte greu, ntr-un sens sau altul. Cercetrile realizate cu ajutorul izotopilor marcai sau cu substane toxice au artat c permebilitatea membranei periplasmetice, ca i a endomebranelor, este strns legat de activitatea metabolic a ntregii celule; c permebilitatea este selectiv, adic este diferit pentru diversele substane; c este dinamic, adic variaz de la un moment sau altul, pentru aceeai substan, n funcie de schimbrile care survin n mediul extracelular sau n metabolismul celular. Permebilitatea se exprim n uurina cu care unele substane strbat zona periplasmatic superficial i sistemul de endomembrane. Permeabilitatea celulelor este o nsuire fundamental a acestora, determinat de compoziia i structura materiei vii, de specificul reaciilor biochimice care se petrec n interiorul ei i de compoziia i concentraia mediului extraceluilar. Permeabilitatea este determinant pentru felul i intensitatea reaciilor metabolice i pentru compoziia mediului. Dinamica fiziologic a permebilitii este extrem de complicat.

Majoritatea concepiilor curente asupra problemelor permebilitii se bazeaz pe acceptarea teoriei de membran care presupune c principala rezisten la ptrunderea n celul a substanelor din mediul extracelular sau la ieirea din mediul intracelular este localizat la suprafaa membranei periplasmatice, de condensaie lipoproteic. Descoperirea sistemelor de membrane intracitoplasmatice a reticul endoplasmatic, continuitatea de la suprafaa celular i pn la nivelul nucleului a acestui sistem de membrane face ca problemele permebilitii s se complice. Cunoaterea fenomenului de permeabilitate celular ne permite nu numai nelegerea just a morfologiei i fiziologiei celulelor, ci i nelegerea unor probleme de baz ale biologiei cum ar fi: influena modificatoare a mediului exterior asupra animalelor; adaptarea organismelor acvatice la mediul lor de via; explicarea unor fenomene funcionale ( bioelectrice, excitaia, conductibilitatea, mecanismul celular al proceselor de secreie i excreie etc.) 4. 6. 3. 1. Mecanismele permebilitii celulare Forele care asigurt trecerea substanelor prin membrana periplasmatic se pot grupa n dou categorii: a) fore pasive, care nu necesit cheltuial energetic celular; b) fore active, consumatoare de energie celular. Forele pasive: - diferenele de concentraie de o parte i de alta a membranei periplasmetice sau gradientul de concentraie (gradientul osmotic sau potenialul chimic); - diferenele de potenial electric de o parte i de alta a membranei periplasmatice sau gradientul de voltaj (potenial electric, potenial constant transmembranar, potenial de membran) - structura membranei periplasmatice care frneaz micare a substanelor. Forele active: - difuziunea facilitat - transportul activ.

Forele pasive
1. Difuziunea n soluii moleculele sunt ntr-o continu micare care este proporional cu temperatura absolut (T). Felul n care se face aceat micare i viteza sunt n funcie de concentraia moli/ l sau mM/cm3. Procesul de ntreptrundere a moleculelor sau micelelor solvatului cu solventulului a fost denumit difuziune. Aceast noiune este legat de gradient i flux ( M ) .Din cauza diferenelor de

concentraie, va lua natere un flux a particulelor de la concentraia mare spre concentraia mic. Viteza fluxului va fi proporional cu panta curbei diferenei de concentraie dintre cele dou regiuni, care constituie un vector i gradient de concentraie sau grad ( S ),ca re indic concentraia substanei S, exprimat n majoritatea cazurilor n M/ cm 3. Uurina cu care se realizeaz aceast micare exprimat cantitativ = constanta de difuziune ( D ) Ms = - Ds. x gradient ( S) Fluxul net al unei substane S (M/cm2/s) este dat de produsul dintre constana de difuziune Ds (cm2/s ) a substanei i gradientul de concentraie al substanei S (M/cm3 x cm sau M/cm4). Aceasta a fost situaia ntr-un sistem n care difuziunea moleculelor nu a fost limitat de nici o discontinuitate de faz. ntr-un sistem, ns n care intervine o membran, cum este cazil sistemului intracelular separat de cel extracelular de ctre membrana periplasmatic, procesul de difuziune este diferit. La nivelul membranei, difuziunea este mult ncetinit comparativ cu apa i, de obicei, poate fi neglijat. n aceste condiii, n mediul intracelular sau n mediul extracelular nu mai exist diferene n ceea ce privete concentraia unei substane, cu toate c prin sistem poate exista un flux net de substan. Mai precis exprimat, viteza de difuziune a unei substane, la nivelul membranei dintr-o parte n alta este aa de mic, nct apariia unui gradient de concentraie, orict de nensemnat, n cele dou medii este suficient s asigure difuziunea substanei pn la suprafaa membranei cu viteza egal cu aceea cu care substana respectiv difuzeaz prin membrana nsi. Deci, viteza de trecere a unei substane va depinde n primul rnd de proprietile structurale i funcionale ale membranei i de gradientul de concentraie a substanei respective prin membran. Micarea unei substane este rezultatul echilibrrii celor doi factori care intervin: gradientul de concentraie i rezistena la frecare. Prezena membranei celulare, cu permebilitate specific, la limita de separaie a celor dou medii apoase are o importan uria, pentru c ea limiteaz fluxul ionilor i mpiedic astfel o nivelare ionic a celor dou medii. 2. Gradientul osmotic n conformitate cu al doilea principiu al termodinamicii, dac exist o diferen de potenial chimic ntre dou faze 1 i 2 separate de o membran (cum este cazul celulelor vii) substana va difuza spontan din regiunea cu potenial chimic ridicat ctre cea cu potenial chimic sczut. Travaliul necesar pentru a face s treac un mol, dintr-o substan considerat dintr-o parte n alta a membranei, dac concentraia intern i extern nu variaz, este proporuional cu diferena ntre logaritmii naturali ai concentraiei interne i externe, multiplicat cu T (temperatura absolut) i R (constana universal a gazelor). C int W 0 = RT ( ln Cint ln C ext) sau Wn = RT ln -----

C ext 3. Gradientul electric Dac este vorba de o particul ncrcat electric, trebuie s inem seama de ncrctura ionului i eventual de diferena de potenial electric(potenial constant transmebranal), care exist n membrana ce separ dou medii. Aa cum am artat se tie c , dac ionul este ncprcat pozitiv, el va fi atras ctre faa membranei ncrcat negativ. Fora ce deplaseaz ionul va fi prorional cu gradientul de potenial. 4. Micarea net de ap Dac graie unei diferene de presiune osmotic sau hidrostatic exist o micare net de ap prin membran, este evident c particulele n soluie se vor deplasa o dat cu solventul. Este important de reinut acest al treilea mecanism, deoarece, dac graie interveniei unui anumit mecanism se acumuleaz un ion ntr-una din faze, se va stabili o micare a solventului n direcia micrii ionului, ducnd astfel la restabilirea echilibrului osmotic; exist de altfel numeroase argumente de ordin experimental n favoarea acestui mecanismm, care explic micarea apei prin membrane, n general i reabsorbia apei la nivelul rinichiului, n special. 5. Difuziunea (reacia ) de schimb Se spune c reacia de schimb este reacia n care o molecul schimb un atom (sau o molecul) contra unui atom (sau o molecul) identic al unei alte faze. Dac ntr-una din faze se utilizeaz izotopul unuia dintre atomi,se va putea pune n eviden reacia de schimb, ceea ce poate exprima formula: A0 C + AB = A0 B + AC n biologie, un astfel de mecanism a fost folosit pentru a explica valorile ridicate ale fluxului de Na+, observate la nivelul fibrei musculare.Se poate imagina deci existena,n membrana fibrei musclare a unei substane ce foirmewaz un complex cu Na . Agitaia termic ar putea aduce aceast substan n contact cnd cu mediul extracelular, cnd cu cel intracelular. La contactul cu aceste medii, substana ar putea s schimbe Na+ pe care l transport, cu un alt ion din mediu. n totalitate nu exist modificri ale concentraiei ionilor de Na, fiind fiecare ion de Na este schimbat contra unui alt ion de Na; totui o micare a ionilor de Na se observ.

Fig. 14. Schema mecanismului difuziunii de schimb 7. Difuziunea n ir Hodgkin i Keynes arat c membrana are pori, n interiorul crora sunt aliniate dou sau trei grupe de ioni, fiind ocupate totdeauna de un ion de K+. Se presupune c ionii nu se depesc n interiorul porului. n consecin, un ion de K nu poate prsi un grup la o extremitate a porului dect dac un alt ion de K a fost ncrcat la cealalt extremitate a porului. Deplasarea n interiorul membranei se face ntotdeauna prin grupe de n ioni de K. Aceast posibilitate a fost verificat cu ajutorul unui model mecanic. Forele active 1. Difuziunea facilitat n concepia lui Danielli (1943), acest fenomen explic trecerea unei substane cu o vitez mult mai mare dect poate prevedea (pe baza teoriei membranei lipoproteice) pentru o alt substan de aceeai dimensiune, form i coeficient de partaj. Un exemplu plastic n acest sens este ptrunderea glucozei n eritrocitele umane.Wilbrandt i colab.(1956) studiind cinetica fenomenului au ajuns la concluzia c trebuie s fie vorba de legtura glucozei cu un purttor (transportor) de membran, care acioneaz ca un feriboat pentru glucoz n interiorul fazei mebranoase: ar lua glucoza de la suprafaa membranei celulare, ar trece-o prin membran, ar elibera-o i apoi s-ar ntoarce nencrcat spre suprafaa membranei pentru a se ncrca din nou. Studii mai recente (Crone,1961) au adus dovezi de necontestat c transportul glucozei prin membrana dintre snge i encefal este un mecanism de acelai tip ca mai sus. Fenomenul difuzrii facilitate se apropie n multe privine de transferul activ, care se refer mai ales la un grup de fenomene de transfer ce nu pot fi explicate prin noiunea de solubilitate sau penetraie prin pori. Din punct de vedere cinetic, fenomenul de transfer activ poate fi mai bine explicat ca un rezultat al legturii dintre molecula transporat cu un transportor de membran, dar, spre deosebire de difuziunea facilitat, transferul activ necesit energie

metabolic. Transferul activ nseamn ntotdeauna un travaliu n cursul creia o substan este transportat mpotriva unui potenial electrochimic. 2. Transferul activ nc din 1895, Overton ntrevede necesitatea existenei unui mecanism care s restabileasc i s asigure meninerea gradienilor de concentraii ionice ntre mediile intra- i extracelulare; el arat c miocardul omului face cam 2,4 x 10 9 contracii n 70 de ani i totui conine n interiorul fibrelor musculare o cantitate de K + tot att de mare i o cantitate de Na + tot att de mic i n tineree i la btrnee Mecanismul transportului activ, a crui existen este confirmat astzi de nenumrate date experimentale, permit nelegerea unor fenomene care nu pot fi explicate numai prin interaciunea forelor pasive. n aceast categorie intr, de exemplu micarea unei substane n sensul gradientului electrochimic, dar cu o vitez mult mai mare dect cea prevzut de legea a doua a termodinamicii. n ambele cazuri, variaia energiei libere este pozitiv i pentru a se putea efectua acest travaliu este necesar s fie pus n joc o cantiutate de energie rezultat din procesele metabolice celulare. Transportul activ de cationi. Cationii monovaleni Na + i K+. Folosindu-se ionii radioactivi 24 Na i 42 K s-a putut stabili cu mult precizie fluxul de intrare ( influxul) i fluxul de ieire (efluxul) celor doi ioni, precum i viteza trecerii acestora prin membrane. S-a constatat astfel c exist un permanent schimb de Na+ i de K+ n ambele sensuri, fluxul net artnd ceea ce a pierdut sau a ctigat celula. Dei gradienii electrochimici mping ionii de Na+ ctre interiorul celulei i ionii de K+ ctre exteriorul celulei, totui concentraia intern de K+ i de Na+ rmne constant. nseamn c exist un mecanism activ vcare scoate din celule ionii de Na+ n exces i recupereaz ionii de K+ care prsesc celula, adic un eflux activ de Na+ i un influx activ de K+ . Efluxul de Na+ s-a dovedit prin urmtoarea experien. Iniial s-a ncrcat un axon uria de caracati cu 24Na, folosind una din cele dou modaliti obinuite : fie se injecta ionul radioactiv direct n axoplasm, fie se punea acest ion n soluia fiziologic ce sclda axonul i se excita de repetate ori; n cursul excitrii ionii de Na+ ptrund n cantitate mare n axon, iar cei de K+ ies din axon. S-au constatat urmtoarele: eliminarea de 24 Na+ este forte rapid la nceput i apoi scade treptat din intensitate, de unde concluzia c ea este proporional cu concentraia interioar. cnd temperatura mediului este modificat de la 18 0 la 5 0 C efluxul de 24 Na+ este rapid ncetinit;revenirea la temperatura iniial intensific din nou fenomenul: dac se intoxic preparatul cu cianur se observ o ncetinire progresiv a efluxului de 24 Na+; dac se blocheaz sinteza de ATP cu ajutorul 2,4

dinitrofenolului se observ diminuarea treptat a efluxului de 24 Na+ ( pe msura consumrii ATP-ului existent); dac acum se injecteaz ATP n axon, se observ o reluare a efluxului. Deci, travaliul acestei pompe care asigur scoaterea sodiului din celul se efectueaz pe seama energiei elinberate de ATP. se mai observ c, n urma ndeprtrii K+ din soluia fiziologic exterioar, efluxul de 24 Na este ncetinit, fr ns a fi complet oprit; adugarea de K+ n baie este suficient ca fenomenul s se reia la valoarea normal. Transportul activ de Na+ exist i a fost studiat i n alte celule: n fibrele nervoase gigante ale miriapodelor, n eritrocitele umane, n pielea de broasc (din exterior spre interior), n peretele vezicii urinare de broasc, etc; acest mecanism intervine n formarea salivei i a altor sucuri digestive, n reabsorbia tubular a Na+, n muchii scheletici, netezi, cardiaci etc. Influxul activ de K+ s-a pus n eviden prin experiene analoage. Mediul extracelular a unui axon perfuzat s-a ncrcat cu 42K+ i s-a putut observa o absorbie activ a axonului cu acest element: din timp n timp, axonul scos din mediul extracelular radioactiv i splat cu grij, a fost pus n contor Geiger i sa msurat radioactivitate, deci ncrcarea cu 42K+ .S-a constatat c exist o saturare progresiv n 42K+ ce provine din mediul extracelular, unde concentraia de potasiu este mult mai cobort dect n mediul inrtracelular. De asemenea, inhibitorii metabolismului i temperaturile joase ncetinesc absorbia ionului aa cum s-a ntmplat i cu efluxul de sodiului radioactiv. Influxul de K+ i efluxul de Na+ sunt activiti care se realizeaz numai pe baza energiei libere celulare. Ar exista, deci, pe lng o pomp de Na+ i o pomp de K+ care asigur meninerea unei concentraii intracelulare mai ridicat dect n mediul extracelular. Cuplarea efluxului de Na+ cu influxul de K+ (pompa de sodiu-potasiu). Se pare c expulzarea activ de Na+ de ctre pompa de sodiu este cuplat cu introducerea activ de potasiu n mediul intracelular. Ar fi un schimb forat de Na+ pentru K+, realizat de acelai mecanism energetic. La nivelul tubului urinifer ar fi un schimb forat de Na+ pentru H+. Eccles a rezumat ntr-o schem schimburile de sodiu i potasiu ntre mediul intracelular i mediul extracelular, aa cum se produc n fibra axonic n repaus (i aceasta este valabil chiar i pentru celule mai puin excitabile). Schimburile prin difuziune (pasiv) cuprind un flux important de K+ ce iese (un eflux pasiv de K+) i un flux mai redus de potasiu ce intr n celul (un influx pasiv de K+). Schimburile cuprind de asemenea un influx pasiv de Na+. Din cauza diferenei foarte mari de permeabilitate a membranei pentru cei doi ioni, influxul de Na+ i efluxul de K+ sunt de aceeai ordine de mrime, cu toate c gradienii electrochimici sunt foarte diferii. Dei forele electrice i chimice care mping ionii de Na+ s intre n celul sunt mult mai mari dect uorul

dezechilibru dintre forele electrice i chimice care mping ionii de K+ s ias, totui prin permeabilitatea ei, membrana frneaz mai mult trecerea ionilor de Na+. Pompa ionic sodiu - potasiu, ntreinut de ctre reaciile metabolice, completeaz schimburile care se fac prin difuziune pasiv cu mecanismul transferului activ: eflux activ de Na+ cuplat cu influx activ de K+. Se realizeaz, astfel pentru fiecare ion un echilibru dinamic : influxul total de Na+ este egal cu efluxul total de Na+; la fel i pentru ionul de potasiu: influxul total de K+ este egal cu efluxul totatl de K+. Astfel este asigurat constana concentraiilor intracelulare a celor doi ioni.

Fig. 15. Pompa de sodiu - potasiu Transportul activ de anioni. Dintre anioni, Cl - este transportat activ la nivelul mucasei gastrice, a pielii de broasc, al branhiilor de anguil i al ileonului de obolan. Iodul este acumulat la nivelul tiroidei. Transportul anionilor pare s fie mai puin specific dect transportul cationilor.Astfel, mucoasa gastric poate substitui clorul, iodul sau bromul. Clorul i bromul pot s nlocuiasc iodul la nivelul tiroidei. Fosfatul, ca i ali anioni, poate suferi procesul transferului activ.

Transferul unor substane organice. Printre substanele organice, anumii aminoacizi i unele zaharuri sunt supuse transferului activ. Astfel, s-a studiat transportul acidului gama-aminobutiric n celulele nervoase ale cortexului cerebral de cobai, mpotriva gradientului de concentraie; transport activ al glicinei marcate cu 14C la nivelul intestinului subire i al colonului la broasc estoas (Testudo hermanni). Un studiu mai complex asupra tranportului activ de aminoacizi s-a fcut la obolanul anesteziat, urmrindu-se absorbia a 15 aminoacizi la nivelul jejunului in vivo, i reflectarea ntregului proces de transfer n activitatea bioelectric a esutului. n general absorbia aminoacizilor modific activitatea electric de baz a intestinului, nlocuidu-se undele lente (beta) prin secvene scurte (alfa).Urmtorii aminoacizi: glicocol, cistin, arginin, prolin, valin, leucin, treonin, lizin, acid aspartic i acid glutamic, sunt cei mai activi, determin unde alfa frecvente, uniform repartizate uniform repartizate timp de 15 minute; histidina, triptofanul i acidul alfa-aminobutiric prezint o activitate mai slab; fenilalanina, tirosina, acidul gama-aminobutiric sunt foarte puini activi. Inegala activitate bioelectric a aminoacizilor poate fi legat de transferul activ diferit pentru fiecare grup de aminoacizi. 4. 6. 3. 2. Factorii care influeneaz permebilitatea celular 1. Coeficientul de partaj. Dac o substan se afl n prezena a doi solveni nemiscibili n care ea este solubil, se stabilete un echilibru de repartiie care, pentru o temperatur dat , depinde de solubilitatea respectiv a substanei n fiecare din cei doi solveni. Dac soluiile sunt suficient de diluate i dac corpul dizolvat este acelai n cei doi solveni, raportul concentrailor C1 i C2 este considerat o constant la o temperatur dat: C1 ---C2 = K

n care K = coeficientul de partaj. Experienele arat c ptrunderea a numeroase substane n celul depinde nu de volumul moleculei lor, ci de coeficientul lor de partaj. Acest studiu a fost valabil pentru numeroase substane anestestezice, foarte solubile n grsimi i care, cu toat dimensiunea mare a moleculei lor, intr foarte uor n celul ca urmare miscibilitii n lipidele membranare i n ap. Astfel, solubilitatea n grsimi a unei molecule este adesea mai important pentru a uura ptrunderea sa n celul, dect mrimea moleculei sale. Dac judecm viteza de ptrundere a alcoolilor dup aciunea lor narcotic (dup concentraia lor necesar s provoace fenomenul de narcoz), atunci alcoolii cu cea mai mare solubilitate n grsimi ptrund mai uor n celule dect alcooli

inferiori, mai puini solubili n grsimi, dei dimensiunea moleculeleor alcoolilor superiori este mult mai mare . 2. Dimensiunea moleculelor. Cu ct o molecul este mai voluminoas, cu att ea are ansa mai mic de a ptrunde n celul. Moleculele mari de hidrocarbonate sau proteine ptrund rar n celule prin mecanismele obinuite ale permeabilitii.Sodiul ptrunde mai greu dect potasiu deoarece n stare hidratat sodiul are un volum mai mare. Acest fapt este explicat prin teoria prezenei porilor n membranele periplasmatic, care au diametru de 3,2 ; diametrul moleculei de sodiu este de de 3,6 i al potasiului 2,2 . Dar se pare c talia are o importan mai mic dect coeficientul de partaj n permeabilitatea celular. 3.Gradul de ionizare. Fcnd s varieze pH-ul se poate preciza efectul sarcinii electrice a unui electrolit asupra posibilitilor sale de penetraie celular. Pentru CO2, cnd pH-ul se mrete, disociaia crete iar ptrunderea lui scade; cnd pH-ul scade fenomenul este invers. Pentru bazele slabe, cum sunt aminele sau alcaloizii,cnd pH-ul crete, disociaia diminueaz, dar ptrunderea crete. Acest fenomen are importan mare n farmacologie, deoarece trecerea substanelor farmacologice poate fi reglat prin modificarea pH-ului din soluia care acioneaz asupra celulelor. n ansamblu, cu toat creterea taliei moleculei, intrarea acizilor este, n general, cu att mai rapid cu ct gradul lor de disociaie este mai mic. Cu ct sarcina electric a unui ion este mai mic foarte mic - el are ans mai mare de a ptrunde n celul.Cationii monovaleni,cum sunt Na+, K+ vor intra mai uor dect bivalenii cum sunt Mg2+ i Ca2+., iar acetia mai uor ca cei trivaleni cum este Fe 3+. .La fel anionii monovaleni I-, Cl- intr mai uor dect anionii bivaleni SO42-. Pe de alt parte ionii cu aceai valen nu intr toi cu aceai uurin. Ionul de NH4 intr mai uor dect potasiu i acesta mai uor dect litiu. Aceasta depinde de hidratarea lor. Relaia care exist ntre sarcina electric a ionilor i viteza de ptrundere a lor n celule face s se presupun c trecerea ionilor prin membran este frnat sau facilitat ntr-o msur de sarcina ionului. Anionii vor fi atrai de poriunile ncrcate pozitiv +, iar cationii de poriunile ncrcate negativ -, ca i cum membrana ar fi ncrcat n mozaic.Dar, sarcina general a membranei este + la exterior, ceea ce face ca anionii s treac mai uor dect cationii. Ptrunderea ionilor din mediul extracelular n celul se pare c se face pe baza unui schimb cu ionii din mediul intracelular. Ionii de hidrogen ce apar n activitatea metabolic celular i cei de bicarbonat fac de obicei obiectul unui schimb: primii pentru cationi, ultimii pentru anioni. Schimbul de ion fiind egal ion pentr ion- diferena de potenial a membranei-potenialul constant transmembranar este meninut.

4. Prezena ionilor nedifuzabili. Proteinele citoplasmatice disociate nu pot difuza prin membrana celular, constituind ioni nedifuzabili, care determin o repartiie inegal a ionilor difuzabili de o parte i de alta a membranei, fenomen ce caracterizeaz echilibrul Donnan.

Fig. 16. Echilibru Donnan Dac se pune o soluie de proteinat de K (PK), la un pH potrivit ntr-un sac de colodiu, care la rndul su se pune ntr-o soluie de KCl distribuia iniial este A. La interior concentraia iniial K+ este (C1), concentraia de Cl- = 0, iar concentraia proteinatului este C1. La exterior concentraia ionilor de K + este de C2 i concentraia de Cleste C2. Dar clorul trece prin membran n sacul de colodiu, n virtutea gradientului de concentraie. Ei vor fi urmai obligatoriu de K+ care menin neutralizarea elecric (B). Cnd echilibrul este atins un anumit numr x de K+ i de Cl- au intrat n sac i deci: - n interior conc K+ = ( C1 + x), n timp ce a Cl- va fi x; - la exterior conc K+ =(C2 x) , ca i a Cl- = (C2 x); Donnan a artat c la echilibru produsul concenrtraiilor ionilor difuzabili la interiorul sculeului este egal cu produsul concentraiilor acelorai ioni la exterior: [ K + ]i x [ Cl ] i = [ K + ] ext x [ Cl-] ext relaia 1, folosind simbolurile ( C1+ x) x = (C2 - x ) (C2 x), de unde,

C22 x2 + C1x = C22 - 2C2x + x2 ; C1 + 2 C2

x = --------- ;

Dac ne sunt cunoscute concentraiile iniiale ale ionilor din interior i concentraiile ionilor din exterior, atunci aceast ecuaie poate da valoarea lui x, deci concentraia de echilibru a ionilor difuzabili care trec prin membran. Starea n care se ndeplinesc condiiile acestea (relaia 1) poart numele de echilibru lui Donnan. Pentru un amestec de electrolii difuzabili monovaleni (NaCl, HNO3 , Li, Br, HJ) Pentru cationi : [Na+i] [K+i] [ Li+i] [ H+i] [Na+ex] [K+ex] [Li+ ex] [H+ ex] Pentru anioni : [Cl i] [ NO3- i] [ Br i ] [I- i] [Cl ex] [ NO3-ex] [Br-ex ] [I- ex] Aceast relaie nu este valabil pentru membranele celulare vii dect n cazuri foarte rare, mai ales n ce privete sodiul i potasiul a cror ptrundere se supune altor mecanisme. 5.Metabolismul celular. Celule mbtrnite de leucocite i mresc volumul datorit ptrunderii apei din mediul exterior cu toate c presiunea osmotic a mediului era presiunea osmotic fiziologic n care celulele triesc i n care i pstreaz un grad de hidratare normal.

4.7. n t r e b r i
1. Membrana celular are structur trilaminar : a. dup teoria lui Danielli i Davson b .deorece are un strat de proteine i dou straturi fosfolipidice c. un strat proteic i dou straturi glicolipidice d. dou straturi proteice i un strat de fosfolipidic e. dou straturi fosfolipidice i un strat glicolipidic 2. Care din urmtoarele componente celulare au membran dubl: a. reticulul endolasmatic b. nucleul c. aparatul Golgoi d. lizozomul e. nucleolul 3. Localizarea microvililor: a la polul luminal al celulelor intestinale

b. la polul bazal al celulelor intestinale c. la suprafaa celulelor traheii d. la suprafaa epiteliilor celulelor din bronhii e. la polul apical al celulelor fotoreceptoare 4. Teaca de mielin are rol: a. de nutriie b. de protecie c. recepie d. fagocitoz e. de a forma neurilema. 5. Dup teoria lui Singer membranele celulare sunt formate din: a.dup modelul n mozaic de lipo-proteic b. lipidele sunt aezate ntr-un strat c. lipidele sunt reprezentate de fosfolipide d. dou straturi de fosfolipidele e. proteinele sunt inclavate mai mult sau mai puin n fosfolipide 6. Proprietile membranelor sunt: a. permeabilitate total b. permeabilitate selectiv c. polarizare electric d. insolubile n mediul apos e. insolubile n solveni organici 7. Solidarizarea celulelor se realizeaz prin: a.plasmodesme b.desmozomi c.jonciuni strnse d.gap jonctions e.perete celular la celula vegetal 8. Recombinri ale membranei plasmatice sunt reprezentate de: a. pinocitoz b. eccitoz c. excitoz d. pseudopode e. fagocitoz 9. Care dintre urmtoarele afirmaii este sunt adevrate. a. permeabilitatea membranelor are la baz gradientul osmotic b. trecerea apei prin plasmalen se evideniaz prin plasmoliz c. trecerea substanelor prin membrane se realizeaz contra gradientului de concentraie datorit mecanisme pasive d.trecerea substanelor prin membrane se realizeaz contra gradientului de concentraie datorit mecanismelor active. e. transportul activ se face cu cheltuial energetic

b.

10. Care din enunurile de mai los corespund caracteristicilor membranelor celulare: a. majoritatea membranelor prezint sisteme enzimatice b. membranele celulare prezint un glicocalix de natur proteic c. glicocalizul este gros i impermeabil pentru ap d. glicocalixul este alctuit din oligozagaride legate de fosfolipide e. glicocalixul este alctuit din oligozagaride legate de proteine 11. Factorii care influeneaz permebilitatea membranelor sunt: a. gradul de ionizare b. prezena ionilor nedifuzabili c. gradientul de concentraie d. metablismul celulei e. starea de repaus sau de excitabilitate 12. Celula n repaus prezint: a. membran plasmatic polarizat b. ncrctur pozitiv n interior c. ncrctur negativ la exterior d. repartiie inegal a ionilor de Na+ i K+ de o parte i de alta a membranei celulare e. la exterior sunt mai muli ioni de sodiu, iar la innterior sunt mai muli ioni de potasiu 13. Care din urmtoarele afirmaii este corect: a. efluxul ionilor de sodiu este pasiv b. influxul ionilor de potasiu este pasiv c. pompa de sodiu-potasiu este un mecanism energofag d. pompa de sodiu-potasiu determin in influx activ de potasiu e. pompa de sodiu-potasiu determin un eflux activ de sodiu