MEMBRANE BIOLOGICE Organizarea materiei vii

Elementele constitutive ale materiei vii sunt aceleai cu cele care alctuiesc materia nevie. In sistemele materiale, diferitele specii de atomi formeaz compui chimici anorganici sau organici, mai mici sau mai mari, fr a avea ns neaprat proprieti caracteristice viului. Gradul de structurare (ordine) a materiei este caracteristica esenial care deosebete sistemele materiale vii de cele nevii. Elementele primelor trei perioade din sistemul periodic, cu atomi mici, reprezint aproximativ 98% din materia vie, dintre care H, C, O, N reprezint 96%; acestea se clasific n metale (Ca, K, Na, Mg etc) i metaloizi (C, Cl, S etc). Unele elemente au rol plastic, intrnd n compoziia anumitor structuri (H, C, N, O, P, Ca etc). Altele au rol catalitic, dinamic, contribuind la desfurarea n bune condiii a unor procese: conducerea excitaiei neuromusculare, diferite procese enzimatice, procesele de la nivelul membranelor biologice. Dintre acestea fac parte Ca, K, Na, Mg etc. Pe lng elementele aflate n proporie mai mare, n sistemele biologice se gsesc i elemente aflate n cantiti mai mici i al cror rol nu este pe deplin elucidat: Cu, Cd, Cr, As, Se, Pd, Mo, numite oligoelemente. Biofizica molecular are ca obiect de studiu caracterizarea componenilor moleculari ai materiei vii, n ncercarea de a demonstra rolul biologic sau mecanismul acestora de interaciune n cadrul proceselor celulare. Pentru aceasta, este necesar izolarea componenilor moleculari i macromoleculari folosind o serie de tehnici preparative precum ultracentrifugarea, centrifugarea n gradient de concentraie, cromatografia sau electroforeza. Prin separare se pot obine populatii omogene de celule, organite celulare sau chiar componente macromoleculare distincte, care urmeaz a fi studiate separat. Prin izolare ns, se pierd aspectele funcionale legate de coexistena n mediul biologic, cu toate consecinele ce decurg de aici. Astfel, de un deosebit interes n ultimul timp se bucur tehnicile biofizice de studiu in vivo. In legtur cu componenii moleculari ai materiei vii, trebuie s remarcm faptul c exist o diversitate foarte mare de biomolecule (se estimeaz, de exemplu, c sunt 1012 tipuri de molecule proteice i 1010 tipuri de acizi nucleici) ce rezult ns din asamblarea unui numr surprinztor de mic de uniti monomerice: 20 de aminoacizi (unitile monomerice ale proteinelor) i 8 nucleotide (unitile monomerice ale acizilor nucleici). Dup natura moleculelor din care sunt compuse celulele oricrui organism, se deosebete o mare proporie de micromolecule anorganice (ap i ioni anorganici) precum i componenii organici, specifici materiei vii ce se prezint preponderent ca molecule uriae (macromolecule). Organismul uman cuprinde 70% ap i 30% componeni de alt natur. Apa total este repartizat ntr-un sistem compartimental format din: 5% n plasm; 15% n lichidul interstiial sau extracelular; 5% ap legat (apa constituit din molecule orientate, ataate macromoleculelor sau ionilor); 45% n lichidul intracelular. Cunoaterea volumului acestor compartimente i a compoziiei lor este primordial din punct de vedere fiziologic, patologic i terapeutic.

Apa total a organismului se rennoiete la fiecare 16 zile. Organismul prelucreaz zilnic aproximativ 2,5 l de ap. Aportul zilnic de ap are la baz apa ingerat ca atare i apa preluat prin intermediul alimentelor, iar eliminarea se realizeaz prin urin, plmni, piele. Datorit proprietilor sale fizice, discutate anterior, apa joac un rol biologic important n fenomenele de transport (circulaie sanguin, secreie glandular, difuzie, osmoz, filtrare) i n stabilitatea structural a membranelor celulare.

Fore interatomice i intermoleculare

Pentru nelegerea formrii structurilor biologice din componenii lor moleculari sau atomici este necesar cunoaterea diferitelor tipuri de interaciuni elementare ce se manifest ntre acestea. Rezultatul acestor interaciuni este, fie formarea unor legturi chimice, deci a unor noi componeni moleculari, fie dispunerea spaial a acestora n conformitate cu rezultanta forelor intermoleculare care se manifest ntre ei. Legturile ionice sunt legturi electrostatice foarte puternice. Fora de interacie dintre doi ioni avnd sarcinile electrice q1 i q2, aflate la distana r ntr-un mediu cu constant dielectric , este dat de legea lui Coulomb: 1 q1 q 2 F= 4 r 2 Forele de respingere (dintre sarcinile de acelai semn) sunt pozitive, iar cele de atracie (dintre sarcinile de semn contrar) sunt negative. Legtura (interaciunea) 1. Covalent Exemplu legturi care determin structura primar, legturi bisulfidrice: -SS-COOCa2+ + -COO Na Cl Na+(H2O)n Interaciuni ale dipolilor permaneni sau indui C=O----H-NO-H----N O-H----O= N-H----N N-H----O2 Formeaz bistratul lipidic i gruprile nepolare ale proteinelor Energia interaciunii (kJ/mol) 146 - 680 40 - 400 4 - 40 4 - 40 8 25 25 25 15 10 4 - 8,5

2. Ionic 3. Ion dipol 4. Dipol-dipol 5. De hidrogen

6. Hidrofobe

Moleculele formate din mai muli atomi legai covalent se vor angaja n interacii cu moleculele vecine n funcie de distribuia sarcinilor electrice n cadrul moleculei. Distribuia asimetric a sarcinilor pozitive i negative genereaz un dipol electric molecular. ntre astfel de molecule cu caracter de dipol se dezvolt legturi de tip Van der Waals, care sunt mai slabe dect legturile ionice, scznd mult mai repede cu distana: F ~ 1/r6. Exist molecule cu caracter de dipol permanent la care

sarcinile pozitive sunt concentrate spaial diferit fa de cele negative, indiferent de influenele exterioare. Unele molecule au caracter neutru dar, n prezena unor molecule polare, acestea i redistribuie sarcinile electrice devenind dipoli indui, ce pot s se angajeze astfel n interacii dipol-dipol. La alte molecule cu caracter neutru, micarea electronilor este cauza unei polarizri pe perioade foarte scurte de timp. Aceste molecule cu caracter de dipol instantaneu vor induce i moleculelor vecine dipoli instantanei cu care vor putea astfel interaciona, dipolul indus i cel inductor comportndu-se ca o pereche de oscilatori cuplai. Exist dou tipuri de legturi care au un rol determinant n realizarea structurii spaiale a biopolimerilor i n agregarea supramolecular, care conduce la formarea organitelor i a celulelor n general: 1. legtura de Hidrogen: ntr-o legtur covalent cu caracter polar pronunat, nucleul de hidrogen (protonul) este numai parial ecranat de electroni i prezint un surplus de sarcin pozitiv, care-l face s interacioneze cu o pereche de electroni neparticipani la legtura chimic a unui atom suficient de electronegativ dintr-o alt molecul. O molecul se comport ca donoare de protoni (D-H), iar cealalt ca donoare de electroni (:A), respectiv ca acceptoare de protoni, ntre ele stabilindu-se o legtur de hidrogen prin transferul parial al protonului: D-H ----- :A. + Cei mai frecveni donori de protoni sunt gruprile -OH, =NH, NH , iar acceptori sunt n special atomii de oxigen i de azot, cnd au surplus de sarcin negativ (electroni neparticipani). Acest gen de interacie electrostatic ntre molecule este, din punct de vedere energetic, la limita dintre forele Van der Waals i legturile chimice covalente. Energia degajat la formarea unei legturi de hidrogen este de 4 - 7 Kcal/mol, iar prin stabilirea legturii ntre gruparea (D-H) i gruparea (:A) se reduce libertatea de micare a moleculelor, sistemul devenind mai structurat. Agregrile dintre moleculele de ap, ce i determin proprietile fizice deosebite, se realizeaz tot prin legturi de H. Aceste legturi joac rolul major n stabilitatea structurii spaiale a biopolimerilor (macromoleculelor) i n realizarea interaciunilor specifice ntre macromolecule sau ntre o macromolecul i un anumit loc reactiv situat pe o macromolecul. 2. legtura hidrofob: dizolvarea n ap a oricrei molecule face ca moleculele de ap aflate n contact cu ea s nu mai poat stabili acelai numr de puni de H cu alte molecule de ap, dar se pot eventual forma astfel de puni ntre ap i molecula respectiv. Dac aceast molecul are ns o poriune hidrofob pe care nu se pot stabili legturi de H, aa cum sunt catenele hidrocarbonate din acizii grai, toate moleculele de ap aflate n contact cu aceast poriune vor avea un numr redus de legturi de H, deci, energia potenial a sistemului va fi mare. Deoarece orice sistem tinde s ating starea cu energie potenial mai mic, gruprile hidrofobe evit ntr-o ct mai mare msur contactul cu apa, asociindu-se ntre ele. Aceast interacie este legtura hidrofob, care face ca moleculele (sau gruprile) hidrofobe dizolvate n ap s se alture ntre ele numai pe baza respingerii mutuale cu solventul. Efectul hidrofob contribuie i el la realizarea structurilor spaiale ale biopolimerilor, dar rolul su predominant este formarea membranelor biologice ca bistraturi lipidice.

Structura membranelor biologice

Membranele biologice sunt compuse din proteine, lipide, glucide, ioni, ap, n proporii variabile. Nu exist date analitice asupra coninutului n ioni i ap.
3

Deoarece resturile glucidice sunt ntotdeauna ataate proteinelor sau lipidelor din membrane, putem considera membranele ca fiind alctuite din proteine i lipide.

Lipidele
Dei structurile lipidelor din membrane sunt aa diferite, ele au o proprietate comun: sunt molecule amfifile. Aceasta nseamn c ele au o parte hidrofil i o parte hidrofob. Partea hidrofil este gruparea polar. Partea hidrofob const din lanurile de acizi grai. O consein a structurii amfifile este aranjamentul fosfolipidelor i glicolipidelor n mediul apos. Gruprile polare au afinitate pentru ap, n timp ce lanurile de hidrocarburi caut s nu vin n contact cu apa. Aceasta se poate realiza prin formarea de micele, n care gruprile polare sunt la suprafa i lanurile de hidrocarburi spre interior. Un alt aranjament posibil, de fapt cel mai favorizat n mediul apos este dublul strat lipidic (figura). Formarea stratului dublu lipidic este un proces rapid i spontan n ap, un proces de autoasamblare. Fora major care determin formarea straturilor duble lipidice o constituie interaciunea hidrofob. Ali factori care stabilizeaz structurile duble lipidice sunt: forele de atracie Van der Waals dintre lanurile de acizi grai i interaciunile electrostatice i prin puni de H dintre gruprile polare ale fosfolipidelor i moleculele de ap.

Fosfolipidele prezint proprieti de mezomorfism, adic la nclzire nu trec direct din starea cristalin n starea lichid, ci prezint stri intermediare, numite stri mezomorfe. Aceste stri sau faze prezint proprieti intermediare ntre lichide i solide. Substanele care prezint un astfel de comportament se numesc cristale lichide. Procesul care are loc este o topire a lanurilor de acizi grai din molecula fosfolipidelor, care capt conformaii i mobiliti similare cu cele din hidrocarburile lichide. In acelai timp, grupele polare ale moleculei menin grupate moleculele fosfolipidelor ntr-o singur structur. Lipidele sufer o tranziie endoterm de la starea de cristal la cea de cristal lichid, iar temperatura la care se produce tranziia se numete temperatur de tranziie. Lipidele au constituit mult vreme principala component a membranelor analizate 2 6 biochimic, deoarece tehnicile lor de analiz erau bine stabilite. Pe 1 m exist 510 molecule lipidice, ceea ce nseamn pentru ntreaga membran a unei celule animale aproximativ 109 molecule lipidice.

Proteinele
Studiul proteinelor din membran implic: - obinerea proteinelor prin solubilizarea (dezagregarea) membranei; - izolarea proteinelor purificate; - caracterizarea structurii acestor proteine.
4

Proteinele sunt mult mai puin cunoscute dect lipidele membranare, aceasta att din cauza unor obstacole metodologice, ct i datorit complexitii structurale i funcionale a fiecrei proteine. Proteinele membranare au un rol funcional preponderent i, ntr-o mai mic msur, un rol structural pur. Se deosebesc dou clase de proteine membranare: Proteine extrinseci, proteine care pot fi deplasate din membrane prin metode blnde cu solveni hipotoni, soluii saline concentrate sau cationi bivaleni. Exist dou tipuri de proteine extrinseci: unele sunt prezente la nivelul suprafeei externe a membranei (receptorii de la nivelul plasmalemei i hormonii), altele localizate la nivelul feei citoplasmatice (la nivelul membranei eritrocitare). In cazul acestor proteine se ntlnesc interaciuni lipide-proteine de tipul legturilor Van der Waals i puni de H. Proteine intrinseci, proteine care nu pot fi extrase din membran dect cu ajutorul detergenilor, care dezasambleaz complet membrana celular. Cea mai productiv tehnic este electroforeza n gel de poliacrilamid, n prezena detergentului dodecilsulfat de sodiu (SDS). Detergentul fiind puternic rupe toate interaciunile noncovalente dintre proteine sau dintre proteine i lipide. Rolul SDS anionic const n neutralizarea sarcinilor negative ale proteinelor. Ca urmare, proteinele vor migra n cmp electric exclusiv funcie de masa lor proprie. Proteine pot interaciona cu fosfolipidele membranare prin legturi hidrofobe sau tip dipol-dipol. Majoritatea proteinelor care traverseaz membrana prezint gruparea NH2 terminal la exterior, iar COOH terminal este situat n citoplasm. Proteinele sunt componentele active ale membranei, avnd rol de receptori, transportori, canale sau enzime. Ele asigur funcia de mediator al schimburilor de substan, energie i informaie dintre exterior i mediul intracelular.

Organizarea membranelor biologice

O serie de modelele teoretice s-au elaborat pentru definirea structurii membranelor, pe baza datelor furnizate de diferitele tehnici fizico-chimice precum microscopia electronic, difracia cu raze X, RES, RMN etc. Modelul mozaicului lipoproteic a fost elaborat ncepnd din 1966, iar cea mai cunoscut i acceptat variant este cea dat de Singer i Nicolson (1972). Dup acetia, proteinele membranei ar fi implantate ntr-un strat dublu fosfolipidic la fel ca nite iceberguri ce plutesc pe mare. Aceast mare lipidic este fluid, deci cu lipidele n stare de cristal lichid, n care se pot mica n voie proteinele. Astfel, n stratul dublu lipidic proteinele se pot deplasa fie lateral (difuziune lateral) fie se pot roti n jurul unei axe perpendiculare pe planul membranei (difuzie rotaional). Singer (1971) mparte proteinele membranei n integrale (proteine de membran propriu-zise) i periferice (proteine ataate membranei). El consider c proteinele integrale sunt cele care ptrund adnc n stratul dublu lipidic, putnd chiar s strbat membrana dintr-o parte n alta. Pentru a fi posibil aceast penetrare a proteinelor integrale n lipide, se sugereaz c i proteinele membranei sunt amfipatice (ca i fosfolipidele), adic au o poriune hidrofil i o poriune hidrofob n molecul. Partea hidrofil ar proemina n afara membranei, fiind n contact cu mediul apos i cu gruprile polare ale fosfolipidelor. Partea hidrofob ar fi n interiorul membranei i ar interaciona cu lanurile de acizi grai din molecula fosfolipidelor (figura).
5

Modelul mozaicului lipoproteic ndeplinete condiiile de stabilitate a structurii din punct de vedere termodinamic. Modelul este susinut de numeroase date experimentale ce confirm structura globular a proteinelor membranare (dicroism circular) precum i plasamentul transmembranar al proteinelor (criofracturare). Exist, de asemenea, dovezi experimentale n sprijinul mobilitii proteinelor i a fluiditii lipidelor n membran.

Dinamica componentelor membranelor biologice

Baza fluiditii stratului dublu lipidic o constituie mobilitatea lipidelor. Se pot distinge mai multe categorii de micri: - micri de flexie ale moleculelor fosfolipidice; stratul dublu lipidic este caracterizat printr-un interior fluid i o cretere progresiv a rigiditii pe msur ce ne deplasm de la centru membranei spre periferie. Aceast cretere progresiv a fluiditii spre interiorul membranei a fost evideniat prin msurtori de RES i RMN. Deci, gruprile metilenice (-CH2-) din lanurile acizilor grai sunt din ce n ce mai mobile spre interiorul membranei. O alt categorie de micri n molecula fosfolipidelor este micarea grupelor polare ale fosfolipidelor. Aceast micare este din ce n ce mai accentuat pe msur ce ne ndeprtm de periferie. Deci, n stratul dublu lipidic avem doi gradieni diferii de flexibilitate, unul spre interiorul membranei i cellalt spre exterior. - micarea de translaie a moleculelor de fosfolipide; reprezint micarea ntregii molecule de fosfolipid n stratul dublu lipidic. Se pot distinge dou categorii de astfel de micri: difuzia lateral a moleculei n planul membranei, care se face n aa fel nct molecula rmne n acelai monostrat lipidic, deci, n aceeai jumtate a membranei. Aceast micare este foarte rapid. S-a calculat prin RES c o molecul de fosfolipid difuzeaz ntr-o secund pe o distan medie de 2 m. Aceasta este o mobilitate foarte mare, dat fiind dimensiunea obinuit a unei molecule fosfolipidice (de ordinul nanometrilor). Valoarea coeficientului de difuziune lateral corespunde unei vscoziti de circa 100 ori mai mare ca a apei (110-3 N.s/m2, la 6 C) comparabil cu a uleiului de msline.

flexie flip-flop (rar)

difuzie lateral (frecvent)

rotaie

difuziunea transversal sau micarea de flip-flop, adic trecerea moleculei dintr-un monostrat lipidic n cellalt (sau din jumtatea intern n cea extern a membranei). Asemenea micri sunt mult mai puin probabile dect difuziunea lateral. Timpul n care se petrece acest proces este mult mai lung dect cel n care se produce difuziunea lateral a fosfolipidelor n membran. translaia i rotaia proteinelor n membrane; miscrile translaie i rotaie sunt mai reduse ca intensitate comparativ cu fosfolipidele. Aceaste micri s-au putut evidenia prin msurtori de fluorescen.

Funciile membranelor biologice

Principalele funcii ale membranelor biologice sunt urmtoarele: compartimenteaz materia vie (bariere selective); intervin n desfurarea proceselor metabolice (interaciunile lipoproteice sunt eseniale pentru funcia enzimelor din membran), dou din procesele majore de conversie a energiei n natur se petrec n membran: fotosinteza i fosforilarea oxidativ; controleaz fluxul de informaie dintre celule i mediul nconjurtor, conin receptori specifici pentru stimuli exteriori i legarea hormonilor de membran. Genereaz semnale chimice i electrice; sufer modificri funcionale adaptative (inducia enzimelor din reticulul endoplasmic sub aciunea medicamentelor); au rol n procesele imunitare, n reaciile de aprare ale celulelor i organismului.

Fenomene de transport membranar

Prezentarea global a proceselor de transport se poate face urmrind trei criterii principale: mecanismele biofizice generale ale diferitelor tipuri de transport categoriile de substane (molecule, ioni) transportate limitarea analizei transportului la nivelul membranei plasmatice a unor tipuri de celule, esuturi sau bariere fiziologice (cazuri particulare). Corespunztor cerinelor de a delimita structurile vii cu grad mare de ordine, de mediu exterior (grad de ordine minim), sistemele biologice superioare (organismele pluricelulare) au dezvoltat mai multe nivele de separare existnd trei clase mari de membrane biologice: membrane bazale epiteliale asigur prima bariera dintre mediul extern i mediul intern (interstiial) al organismului,

 membrane plasmatice bariera de ordin II, separ spaiul interstiial de cel intracelular, membrane intracitoplasmatice (endomembranele) i ale organitelor celulare bariera de ordinul III, asigur segregarea funcional metabolic n cadrul celulei. Membrana nuclear este ultima barier care izoleaz materialul genetic (cel mai nalt grad de structurare) de mediul extern. Meninerea gradienilor termodinamici ntre diferitele compartimente, de-o parte i de alta a barierelor membranare se face cu consum energetic din partea sistemului biologic. Consumul de energie se face att direct, la nivelul barierei pentru a menine gradientele, ct i indirect prin procesele de sintez/renoire a componentelor care alctuiesc barierele.

Fluxuri pasive i active prin biomembrane

n procesele izoterm-izobare din sistemele biologice izolate membranar, existena unui gradient de potenial electrochimic al unei anumite substane, genereaz un flux de substan sau un transport dup o anumit direcie (influx sau eflux). Fluxul moleculelor ncrcate electric este determinat att de gradientul de concentraie ct i de cmpul electric (gradientul de potenial electric). In cazul unei difuzii pure, fr influena cmpului electric, difuzia se face conform cu legea lui Fick, definit anterior. Fluxurile pasive se deosebesc de cele active prin mecanismul biofizic de funcionare al structurilor membranare ce intermediaz transportul. Astfel putem diferenia: 1. disipatorii de energie liber electrochimic, reprezentai de canalele ionice i transportori. Acetia utilizeaz secundar energie, aceasta fiind nmagazinat n gradienii electrochimici transmembranari, i 2. generatori de gradient electrochimic, reprezentai de pompele ionice, ce utilizeaz direct energia obinut prin hidroliza legturilor macroergice din ATP. Distincia dintre cele dou modaliti de transport este numai n funcie de modul n care se face cuplajul cu reaciile chimice generatoare de energie: cuplaj direct n cazul transportului activ i cuplaj indirect, prin intermediul gradienilor electrochimici n cazul transportul pasiv.

Fenomenologic, transportul micromoleculelor poate fi de tip uniport, atunci cnd are loc trecerea prin membran a unei singure specii moleculare i multiport, atunci cnd dou sau mai multe fluxuri diferite sunt cuplate, avnd loc prin aceai structur specializat a membranei. Dac cuplajul se face n acelai sens se numete simport (cotransport), iar dac se face n sensuri opuse se numete antiport (contratransport).

CLASIFICARE Fenomene de microtransfer (molecul cu molecul): I. Transport pasiv conform gradientului de concentraie Difuziune simpl Difuziune facilitat - prin transportori - prin proteine-canal II. Transport activ cu consum energetic Transport activ primar prin pompe ionice Transport activ secundar: - cotransport (simport) - contratransport (antiport) Fenomene de macrotransfer (numr mare de molecule simultan): I. Fagocitoz transport de material solid II. Pinocitoz transport de material lichid Endocitoz Exocitoz Transcitoza

Transportul pasiv
Transportul pasiv micromoleculelor prin membrane se face n sensul gradientului de concentraie sau de potenial electrochimic. Pentru unele substane fluxul crete aproximativ proporional cu gradientul, conform legii lui Fick, saturaia cii de transport fcndu-se numai la valori foarte mari ale acestuia (difuzie simpl), n timp ce pentru altele, fluxul ajunge mult mai repede la o valoare maxim, ce nu poate fi depit orict ar crete gradientul (difuzia mediat). Difuzia simpl n acest caz, difuzia se face direct, n sensul gradientului electrochimic dintre compartimentele separate de membran, conform legii lui Fick. Transportul are loc prin dizolvarea n stratul lipidic funcie de coeficientul de permeabilitate (sau coeficientul de partiie), astfel trecnd moleculele hidrofobe i cele amfifile (hormonii steroizi, alcoolii i acizii grai). La trecerea micromoleculelor polare sau ioni anorganici, bistratul lipidic reprezint o barier energetic considerabil, difuzia simpl a acestora fiind limitat. Difuzia prin canale Canalele ionice sunt proteine integrale care traverseaz bistratul lipidic i au n centrul lor un canal trecere de diametru de ordinul angstromilor. Din punct de vedere termodinamic, canalele ionice sunt disipatori de energie liber, pe care metabolismul celular o stocheaz sub form de gradient de concentraie i de potenial electric. Canalele ionice sunt de obicei bidirecionale i se caracerizeaz prin conductana ionic i permeabilitatea specific pentru fiecare tip de ioni (ele se gsesc n membranele majoritii celulelor, contribuind la apariia potenialului de repaus celular). Funcie de aceste caracteristici canalele ionice pot fi: 1. neselective cu conductan fix au permeabilitate diferit funcie de diametrul particulei

2. selective cu conductan variabil aceste canale prezint dou conformaii posibile caracterizate prin dou stri diferite de conductan: conformaia de repaus (nchis), sau ntr-o conformaie de activitate (deschis). Ele sunt prezente mai ales n celulele excitabile, deschiderea lor fiind comandat de variaii ale potenialului electric transmembranar sau de legarea unor molecule cu rol de mesageri chimici. Canalele ionice comandate electric sunt implicate n propagarea potenialului de aciune n celulele excitabile (axoni, fibre musculare), iar canalele comandate chimic sunt implicate n transmiterea intercelular a excitaiei precum i n funcionarea unor celule receptoare specializate. Eficacitatea transportului prin canale ionice este foarte mare, printr-un singur canal 6 8 putnd trece 10 -10 ioni pe secund. Difuzia mediat (facilitat) Acest tip de difuzie se realizeaz prin legarea reversibil de un component al membranei (transportor) care, prin modificare de conformaie tip flip-flop permite trecerea particulei prin stratul hidrofob. Si n acest caz, fora care determin transportul este tot gradientul de concentraie, fr s fie necesar un aport direct de energie metabolic dar, saturarea mai rapid a transportorilor fa de aceea a canalelor, face ca cinetica transportului mediat s difere de aceea a difuziei simple sau prin canale. Difuzia facilitat se desfoar cu viteze mult mai mici comparativ cu difuzia prin canale ionice, de ex. transportorul de glucoz din membrana eritrocitar permite trecerea a circa 300 molecule pe secund. Esenial n funcionarea transportorilor este ns specificitatea lor foarte mare, asigurat de structura site-ului de legare a substratului transportat la nivelul feei membranare a transportorului. Specificitatea este att de mare nct se pot deosebi izomerii dextrogiri de cei levogiri. Unele substane chimice se pot incorpora n structura membranei permind astfel trecerea ionilor prin membran. Aceste substane sunt numite ionofori. De exemplu, + valincomicina permite un transport uniport electrogenetic de K , nigericina un + transport antiport electroneutru (transportul n sensuri contrare al K i H+) n timp ce gramicidina A poate forma canale prin care pot trece ntr-o anumit ordine de + + + selectivitate diferii ioni (H , Na , K ).

Transportul activ
Fluxurile de ioni n sens contrar gradienilor de concentraie sunt foarte evidente mai ales la celulele acelor organe implicate n secreia de fluide cu compoziie ionic (osmolaritate) diferit de cea a plasmei sanguine (rinichii, celulele productoare de acid clorhidric din mucoasa gastric, din epiteliul urechii interne care secret endolimfa etc). Transportul activ de ioni este prezent ns n membranele oricrei celule vii, exemplul cel mai general fiind scoaterea Na+ i reintroducerea K+ n citoplasm de ctre pompa membranar de sodiu i potasiu, mecanism care asigur meninerea gradientului electrochimic dintre exterior i interior, generator de potenial membranar de repaus, necesar pentru derularea celorlaltor procese de schimb. Acesta reprezint un mecanism de transport activ primar, deoarece, producerea de energie necesar transportului mpotriva gradientului se face chiar la locul transportului, pompa ionic fiind o enzim ATP-azic. Se admite c pe faa extern a membranei, un compus X se transform n alt + compus Y pierznd cu aceast ocazie afinitatea fa de Na , dar cptnd afinitate
10

pentru K . Dar, compusul Y nu exist n acest moment pe faa intern a membranei, astfel nct apare un gradient de concentraie al compusului Y de-a lungul grosimii + membranei, ceea ce face ca Y mpreun cu eventualii ioni de K preluai din mediul extracelular s se dplaseze ctre faa intern a membranei. Aici ns, are loc o reacie invers de transformare a compusului Y n X. Se pierde astfel afinitatea + pentru K i acesta este eliberat n interiorul celulei. Produsul su de transformare, + X, i va relua drumul ctre exterior transportnd Na . Transformarea Y n X se face ca o reacie endergonic, prin alimentarea cu energie metabolic stocat n compui macroergici de tipul ATP-ului. Stoechiometria pompei de sodiu-potasiu poate fi exprimat prin relaia: + + 3Na i+ + 2K e + ATPi 3Na e + 2K i+ + ADPi + Pi La nivelul molecular, pompa de sodiu-potasiu este un ansamblu de macromolecule proteice capabil s hidrolizeze ATP-ul i s utilizeze energia eliberat pentru transportul antientropic al ionilor, este o ATP-az de transport, (Na-K)-ATP-aza. Activitatea acestei enzime este blocat de ouabain i digital (ele interfereaz n + legarea K la exterior).
EX

Prin extracie i purificare s-a putut descrie structura (Na-K)-ATP-azei: ansamblu tetrameric constnd din cte dou subuniti mai mari, tip (cu masa molecular de 112.000 D) i dou subuniti mai mici, tip (cu masa molecular de 35.000 D), care sunt glicoproteine. Pe una din subunitile se gsete locul catalitic pentru hidroliza ATP-ului, iar ntre cele dou subuniti mari este zona hidrofil prin care sunt transportai ionii. Rolul deosebit al pompei de sodiu i potasiu din membrana plasmatic a tuturor celulelor const i n faptul c peste o treime din toat cantitatea de ATP sintetizat ntr-un organism animal n repaus este hidrolizat de (Na+,K+)ATP-az. Aceasta nseamn c peste o treime din intensitatea metabolismului bazal servete nemijlocit la asigurarea gradientului electrochimic dintre spaiul intra i extra celular. In afara transportului activ primar (prin pompe) se cunoate i un mecanism de transport activ secundar (cuplat). Astfel, transportul aminoacizilor n celule este cuplat cu efluxul activ de Na+ (Na+ este transportat activ n timp ce ptrunderea aminoacizilor n celul este un proces de difuzie facilitat). Analog, se produce transportul glucozei la nivelul celulelor intestinale. Un alt exemplu este transportul cuplat al apei cu Na+ n esuturile epiteliale (i.e. nefron, vezica biliar, intestin), Transportul Na+ n exterior este activ, iar apa intr in celul cuplat cu Na+ care difuzeaz pasiv spre interior. Acest mecanism are rolul de a menine izotonia mediului. Un exemplu de transport activ secundar este antiportul de Ca2+ la nivelul sarcolemei fibrei musculare. Ca2+ este scos din celul prin cuplaj cu intrarea pasiv a Na+ prin transportori specifici.

11

Fenomene de macrotransport
Mecanismele care permit celulelor s absoarb sau s elimine macromolecule sau particule de dimensiuni mari la nivelul membranei plasmatice sunt complet diferite de cele ale transportului ionilor sau moleculelor mici. Transportul prin vezicule se face prin: endocitoz, cnd transportul are loc spre interiorul celulei, exocitoz, din citoplasm spre exterior, transcitoz, atunci cnd veziculele strbat integral celula dintr-o parte n cealalt. Endocitoza se mparte n dou tipuri, funcie de natura substanelor ca ptrund n celul: pinocitoza i fagocitoza. Pinocitoza poate fi independent de receptori sau mediat de receptori. Pinocitoza independent de receptori este numit i endocitoz n faz lichid sau constitutiv. Pinocitoza dependent de receptori, denumit i clatrinic, se produce prin intermediul receptorilor de la nivelul membranei plasmatice, care recunosc macromoleculele din lichidul extracelular. Exemple de pinocitoz clatrinic sunt transportul insulinei i colesterolului n celule. Fagocitoza joac la om i mamifere un rol important n procesele de aprare antimicrobian a organismului. Celula specializat, macrofagul, emite prelungiri citoplasmatice numite pseudopode care nconjoar particulele de substan solid. Prelungirile fuzioneaz iar materialul inglobat este transformat n vezicul de digestie, lizozom, unde, sub influena enzimelor hidrolitice materialul fagocitat este distrus. Exocitoza reprezint un proces prezent la toate celulele eucariote. In afara transferului la exterior a produilor secretai de celul, fenomene de exocitoz se produc i la nivelul sinapselor neuronale. Veziculele intracitoplasmatice fuzioneaz cu membrana plasmatic i, sub influena forelor de tensiune superficial, membrana veziculei conflueaz cu cea plasmatic, iar coninutul este eliberat n afara celulei. Transcitoza este o form particular a transportului prin vezicule ce realizeaz transportul macromoleculelor prin celulele endoteliului capilar, ce faciliteaz transportul proteinelor plasmatice ctre spaiul interstiial. Transportul prin transcitoz se poate produce n dou moduri: prin vezicule independente ce se deplaseaz dinspre faa luminal a celulei endoteliale, prin citoplasma acesteia, spre faa antiluminal sau interstiial; veziculele pot forma un canal membranar transcitoplasmatic ntre polul luminal i cel bazal. In acest mod viteza transportului crete considerabil.

12