Curs 13

Tehnici si metode folosite in medicina -SENZORI I BIOSENZORI-

Concentraii nepotrivite ale carbohidrailor din buturi (vin) pot schimba complet
procesul de producere a acestora.

O alternativ simpl i ieftin de detecie a glucozei o reprezint biosenzorii

Senzori i biosenzori
Metodele curente care au fost folosite pentru detectia si analiza diferitelor substante cum ar fi : medicamentele, substantele biologic active, sau diferite substante toxice ce contamineaza aerul, apa sau solul, sunt in general scumpe, necesita pre-tratamente si preconcentrari si nu pot fi utilizate decat in laboratoare. Ca o consecinta au aparut tehnici si instrumente noi pentru monitorzarea calitatii mediului cat si a sanatatii populatiei. Acestea folosesc sisteme senzoriale care detecteaza si cuantifica in acelasi timp diferite substante in probe care se pot afla sub diferite forme. Scopul urmarit este de a dezvolta noi dispozitive analtice care sa fie rapide, portabile, foarte selective si sa aiba o sensibilitate ridicata fata de substanta care trebuie dozata (analit.). Se urmareste in acelasi timp miniaturizarea si fabricarea unor senzori versatili, care sa permita interschimbarea elementelor de recunoastere la un pret scazut, si totodata ca acestia sa fe usor de folosit.

Senzori
Un senzor este definit ca fiind un dispozitiv de msur care genereaz un semnal electric msurat sub diferite forme (sarcin electric, tensiune electric sau intensitatea unui curent electric), atunci cnd este supus unui fenomen ne-electric. Un senzor poate fi privit ca un traductor, deoarece el este un sistem care transform o mrime fizic n alta, dar aceast asemnare este restrictiv deoarece un senzor este mult mai complex. Senzorul recunoate un fenomen ntr-un mod specific pe care l traduce ntr-o proprietate cuantificabil, care este la rndul ei transformat ntr-un semnal electric de un traductor. n acest fel fenomenele sunt reprezentate sub forma unor semnale electrice pentru a cror interpretare pot fi folosite tehnici moderne de control, achiziie i prelucrare a datelor

Senzori i biosenzori

Senzori i biosenzori
Organismele vii se dezvolt i evolueaz datorit interaciunii cu mediul nconjurtor, interaciune concretizat sub forma schimburilor de substan i energie dintre senzorii biologici ai organismelor i mediu. Majoritatea acestor senzori sunt celulele specializate care sunt sensibile la:
Variaia unor parametrii fizici ai mediului nconjurtor, Variaia unor parametrii fizici ai mediului intern al organismului, Molecule din exteriorul organismului, cum sunt toxine, nutrieni sau feromoni, Molecule care influeneaz metabolismul intern al organismului (glucoza, oxigenul, hormoni, etc.), Diferena dintre propriile molecule i cele ale mediului nconjurtor sau ale altor organisme

Senzori i biosenzori
Prin utilizarea unor componente biologice (esuturi, celule, proteine sau ADN) n combinaie cu diferii traductori au fost create dispozitive noi cu ajutorul crora anumite evenimente biochimice sunt convertite n cantiti msurabile, dispozitive numite biosenzori. Un biosenzor este un dispozitiv analitic care conine material biologic cu funcie de recunoatere (bioreceptor) aflat n contact direct cu un traductor de semnal care transform informaia fizic/chimic rezultat ntr-un semnal msurabil proporional cu concentraia probei analizate.

Biosenzori
Bioreceptorul (proteine sau ADN, celule, esuturi,) este ales astfel nct s
interacioneze n mod specific i selectiv cu proba analizat, funcionarea biosenzorilor bazndu-se pe modificrile conformaionale care au loc la nivel de biomolecul. . Este mbinat selectivitatea i specificitatea elementelor biologice cu sensibilitatea traductorului, mbinare concretizat n detecia calitativ i cantitativ a interaciunii dintre biomolecul i prob analizat.

Recunoatere specific

Aplicaii ale senzorilor i biosenzorilor

monitorizarea clinic a unor substane de interes biologic (monitorizarea glucozei i lactozei, ureei, colesterolului, a diverselor medicamente, n imunologie, etc.) n industria alimentar (dozarea carbohidraiilor n buturi i alimente, detectarea Salmonelei n alimente, controlul calitii produselor lactate, al prospeimii produselor din carne i pete, etc) monitorizarea calitii mediului (detecia i dozarea gazelor toxice, a fenolilor, pesticidelor, ionilor metalelor grele, etc.) sau studiul interaciunilor dintre diverse biomolecule (recunoaterea molecular dintre diferite proteine).

Clasificarea senzorilor i biosenzorilor

O clasificare general a senzorilor i mparte pe acetia n dou grupuri mari: senzori fizici i senzori chimici. Senzorii fizici sunt aceia care sunt sensibili la variaia unor parametrii fizici dintr-un sistem cum sunt temperatura, presiunea, anumite fore sau cmpuri i care nu au interfaa chimic. Senzorii chimici sunt utilizai pentru determinri calitative i cantitative ale unei anumite substane. Rspunsul lor se bazeaz n particular pe reaciile chimice care apar ntr-un sistem n care este implicat n mod selectiv substana analizat.
Biosenzorii pot fi clasificai dup mai multe criterii: dup natura traductoarelor, dup tipul bioreceptorului folosit sau dup tehnicile de imobilizare ale bioreceptorului folosite.

Clasificarea senzorilor chimici i a biosenzorilor

Dup tipul traductoarelor: Electrochimici:
Amperometrici: Poteniometrici: Conductometrici.

Optici. Gravimetrici
Piezoelectrici (dispozitive cu cristale piezoelectrice-QCM). Acustici (dispozitive cu unde acustice de suprafata-SAWs).

Termici.

Clasificarea senzorilor chimici i a biosenzorilor

Dup tipul bioreceptorilor: Enzimatici. Imunosenzori (anticorpi monoclonali). Celulari:
Microorganisme esuturi

Cu acizi nucleici (ADN).

Biosenzori
Recunoasterea biologica dintre analit si receptor se poate analiza prin trei mecanisme de baza care includ:
sisteme biocatalitice, sisteme de bioafinitate sau sisteme microbiale

Biosenzori
Biosenzori bazati pe bio-cataliza (recunoastere chimica) Acesti biosenzori folosesc enzime si functioneaza pe baza a doua mecanisme:
Primul mecanism implica transformarea catalitica a analitului de la o forma nedetectabila la una detectabila. Limitarile acesti tip de senzor sunt in primul rand acelea impuse de natura enzimei ce cuprind un numar limitat de analiti care sa constituie substrat pentru o anumita enzima. Al doilea mecanism implica detectia analitului care inhiba sau mediaza activitatea enzimatica. Acest mecanism este avantajos a fi folosit in detectiei poluantilor din mediul inconjurator, care afecteaza activitatea enzimelor in concentratii mici.

Biosenzori
Biosenzorii bazati pe bio-afinitate. ( imunosenzori) Acestia depind de utilizarea anticorpilor (Ac). Exista si se pot obtine Ac monoclonali si policlonali pentru o gama mare de substante. Functionarea lor se bazeaza pe interactiunea specifica dintre Ac si antigen (Ag), obtinandu-se in final concentratia Ag. In functie de mecanismele care au loc se deosebesc mai multe tipuri de imunosenzori.
imunosenzori de competitie, a caror functionare se bazeaza pe utlizarea a doi Ag. Unul este nemarcat si reprezinta analitul, al doilea este marcat si impreuna cu cel marcat se afla in competitie pentru un numar limitat de locuri de legare a Ac. imunosenzori de inlocuire, in care analitul = Ag, inlocuieste Ag marcat care a fost prins anterior de catre Ac. imunosenzori de tip sandwich, care se utilizeaza in cazul Ag bivalenti. Ca urmare se vor produce doua tipuri de interactiuni :
una cu Ac imobilizat una cu un Ac marcat

Biosenzori
Markeri Markerii pot fi diferite particule, metale, coloranti, radionuclizi, enzime, compusi electrochimici. Detectorii folositi pentru traducerea interactiunii specifice Ag-Ac pot fi:
sisteme acustice (cristale piezelectrice) sau sisteme optice (care masoara modificarea indicelui de refractie).

Markerii sunt din ce in ce mai mult folositi datorita specificitatii lor ridicate si datorita faptului ca pot fi regenerati si schimbati (schimbarea Ac imobilizat pe detector). Pot de asemenea fi folositi in masuratorile din sistemele de analiza in flux continuu. De asemenea prezinta avantajul ca se pot doza molecule de interes medical, toxine sau microorganisme (salmonella). Se pot confectiona si biosenzori cu ADN care detecteaza modificarile chimice induse in ADN.

Biosenzori
Biosenzori cu microorganisme. Acesti biosezori folosesc mecanisme primare. Materialul biologic este format din celule sau bacterii vii.
Un prim mecanism consta in folosirea analitului (compus organic) drept substrat respirator. Un alt mecanism implica inhibarea respiratiei celulei de analit. Aceasta respiratie si inhibta ei pot fi masurate folosind detectori optici sau detectori electrochimici.

Avantajul utilizari acestor tehnici se datoreaza in primul rand folosiri microorganismelor comparativ cu enzimele izolate. Acesti biosenzori sunt mai ieftini si pot opera intr-un interval larg de de pH si de temperatura. Specificitatea mare a acestor biosenzori, pentru determinarea toxinelor, poate fi atat un avantaj cat si un dezavantaj in functie de aplicatia dorita. Astfel de dispozitve pot fi utilzate cu precadere pentru monitorizarea toxicitatii generale sau in situatii in care compusii toxici sunt bine definiti. Un avantaj al acestui tip de biosenzor il reprezinta faptul ca se pot folosi si microorganisme modificate genetic. Acestea sunt produse special, folosind tehnicile ingineriei genetice, pentru a recunoaste un anumit analit.

Tipuri de senzori
electrozii de sticl de pH folosii pentru msurarea concentraiei ionilor de hidrogen sau electrozi de diferite forme i materiale

benzi de hrtie impregnate cu reactivi n stare solid

optod - sub forma unor sonde ce pot fi folosite n diverse medii nasul electronic, limba electronic

lab on chip

Criterii de performan ale senzorilor

Selectivitatea Curba de calibrare [rspuns = f(c)]: Sensibilitatea (panta curbei de calibrare) Domeniul liniar de concentraii Limita de detecie Reproductilitatea (dat de deviaia standard) Timpul de rspuns Durata de via (Stabilitatea)