Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
III
BIOSENZORI
Biosenzorii reprezint sisteme biologico - electronice selective integrate ,
formate dintr-un receptor biologic activ, un traductor i un sistem electronic de
amplificare, prelucrare i afiare date. Receptorul biologic activ furnizeaz informaii
analitice specifice ce permit recunoaterea unei anumite specii biologice sau chimice
dintr-un amestec complex ce compune materia analizat, urmat de determinarea
cantitativ sau semicantitativ a acesteia. Receptorul biologic activ al biosenzorului
poate fi format din enzime, anticorpi , microorganisme, lektine, aptameri ,DNA i
tesuturi umane sau animale imobilizat pe un suport.
81
Fig.III.2. Schema conversiei concentraiei , masei sau grosimii de strat a unei specii chimice sau
biologice ntr-o mrime electric proporional prin intermediul unei structuri biologic
active i a unui traductor adecvat
Sistemele de tip biosenzorii snt realizri relativ recente, cu tendin de cretere rapid,
ce permit determinri analitice cantitative rapide, ieftine i in situ, suficient de precise,
a cror selectivitate sensibilitate i limit de detecie depind de receptorul biologic
folosit ultimelele caracteristici avnd valori deosebit de ridicate . Biosenzorii nu folosesc
la determinri reactivi liberi, genereaz cantiti infime de deeuri chimico- biologice
care snt uor colectate i distruse. Un biosenzor este reutilizabil i ca atare poate fi
folosit pentru un numr mare de analiize. De regul recetorii biologici activi snt de
unic utilizare dar exist i situaii n care din motive de cost snt pstrate suporturile
i regenerate componentele active. Aplicaiile de baz pentru biosenzori snt n domeniul
medicinei, a problematicii de mediu, a industriei farmaceutice, a industriei alimentare
i a biotehnologiei.
Determinrile experimentale cu biosenzori snt simple i nu
necesit cunostiine de specialitate avansate ci numai parcurgerea a mai multor etape ,
dup cum urmeaz :
1 - pornirea aparatului
2 - ataarea receptorului biologic la sistemul electronic, urmat de recunoaterea
automat a acestuia de ctre sistemul electronic precum i de validarea (invalidarea)
acestuia
3 - dozarea unui anumit volum sau cantiti din analit pe sistemul biologic activ
4 - transformri chimico- biologice ntre materia analizat i sistemul biologic activ cu
generarea de produi de reacie specifici .
5 - transformarea, pe baza unor dependene fizico chimice specifice a
cantitii
produselor de reacie rezultate pe receptorul biologic activ , ntr- un semnal electric
proporional cu concentraia specieiei urmrite .
6 - procesarea datelor i afiarea electronic a rezultatului msurtorii
82
Specia
chimic
biologic
sau
Senzorul folosit
Glucoz
biosenor amperometric
Uree
biosenor poteniometric
Lactoza
biosenor amperometric
Sodiu
Potasiu
Calciu
Oxigen
pH
Penicilin
biosenor poteniometric
10
Colesterol
biosenor amperometric
11
Hepatita B
chemoluminiscen - immunoassay
83
12
Candida Albicans
piezobalant - immunoassay
(III.1)
Una din aplicaiile cele mai cunoscute ale deteciei amperometrice la biosenzori o
reprezint biosenzorul de glucoz,
fiind folosit la ora actual n medicin pentru
determinarea in situ a glucozei din snge la diabetici i la sportivi . Senzorul de glucoz
are ca material biologic activ enzima oxidoreductaz folosit pentru biocataliza
reaciei de oxidare a glucozei cu oxigenul din aer cu obinerea de gluconolacton i
de peroxid de hidrogen (H2O2) . Receptorul biologic activ pentru analiza rapid a
sngelui se prezint sub forma unor fii de plastic de unic utilizare ce dispun la un
capt de doi electrozi lamelari miniaturali ntre care se gsete depus oxidoreductaz
sub form de gel uscat iar la cellalt capt fia dispune de pini electrici de conexiune
cu sistemul electronic. La depunerea unei picturi de snge pe zona acoperit de
oxidoreductaz are loc reacia :
(III.2)
Peroxidul de hidrogen este deosebit de reactiv i se descompune electrozii celulei
electrochimice n compunerea creia mai intr i o surs de tensiune constant asigurat
de partea electronic i un circuit de amplificare i msurare a intensitii curetului
electric ce curge prin celula de electroliz, intensitate proporional cu cantitatea de
peroxid de hidrogen descompus i implicit cu cantitatea de glucoz din sngele
analizat. Conversia valorii intensitii curentului electric din celul cu valorile de
concentraie de glucoz din snge, precum i afiarea automat a rezultatelor este
realizat de partea electronic a aparatului. Determinarea este semicantitativ i
acoper un domeniu de la 20500 mg/dl, se consider c la concentraii <60 mg/dl
indicaia este marcat de erori destul de ridicate, motiv pentru care nu este indicat
determinarea glucozei prin aceast metod n domeniul acestor concentraii. La om se
84
Glucozoxidaza
2.
Colesterol O2
Colesterol oxidaza
3.
Glutamate O2
D Glutamatoxidaza
Gluconolactona H 2 O2
Colestenona H 2 O2
Oxiglutarat NH 3 H 2 O2
aza
Piruvat H 2 O2
4. Lactate O2 Lactatoxid
daza
Acetilfosfat CO2 H 2 O2
5. Piruvat HPO4 Piruvatoxi
(III.3)
(III.4)
(III.5)
(III.6)
(III.7)
85
86
se elimin chiturile de unic utilizare i prin aceasta scade mult preul de cost
al analizelor
- prin folosirea att a metodei amperometrice ct i a celei conductometrice , n
cadrul aceleiai determinri, crete precizia msurtorilor
Se prezint n continuare un exemplu de realizare a biosenzorului n legtur cu figura
III.3. care reprezint o vedere n seciune a biosenzorului, figura III.4. care reprezint o
vedere din fa i lateral a biosenzorului i figura III.5. care reprezint schema de
principiu a msurrii amprometrice i conductometrice cu biozenzorul enzimatic.
87
Biosenzorul enzimatic conform figurii III.3., figurii III.4. i figurii III.5. este
format dintr-un corp 1 n care se gsete o unitate 2 electronic de achizitie ,
prelucrare i afiare date, o unitate 3 electronic amperometric pentru msurarea
curentului de electroliz, o unitate 4 electronic conductometric pentru msurarea
conductivitii electrolitului, o tastatur 5 pentru programarea diferitelor aplicaii cu
enzime diferite, un sistem de dozare peristaltic pentru soluia ce conine o enzim de
tip oxidaz compus la rndul lui dintr-o capsul 6 din plastic ce conine o soluie o de
oxidaz, un urub 7 , radalinat la partea superioar i cav la partea inferioar, un reper 8
prevzut la partea superioar cu un perforator p pentru tierea foliei f termosudate de
nchidere a capsulei 6 din plastic iar la partea inferioar cu un con c i o piulit 9 pentru
strngerea i etanarea unui furtun 10 siliconic subire prin care curge oxidaza, un
cilindru 11 spijinit excentric i cu rotaie excentric, acionat manual, prevzut cu un
locas l conic pentru plasarea cilindrului 11 spijinit excentric pe poziia obturat a
furtunului 10 , un clichet 12 cu un arc de compresie i o bil n corpul 1 se mai gsete
cuplat prin apsare o tij 13 prevzut la partea inferioar cu doi electrozi 14,15
semicirculari din platin pentru msurare amperometric i conductometric , un con 16
perforat pentru fixarea i strngerea furtunului 10, o cup 17 detaabil prin desfiletare
ce constituie camera de reacie i la
88
\
Fig.III.4. vedere din fa i lateral a biosenzorului enzimatic 1-corp, 2-unitate
electronic de achizitie , prelucrare i afiare date, 3-unitate electronic amperometric, 4-unitate
electronic conductometric, 5-tastatur , 6-capsul din plastic, o-soluie de oxidaz, 7-urub, 8reper, p-perforator, f-foliei termosudat, c-con, 9 - piulit, 10-furtun siliconic, 11- cilindru
spijinit excentric, l -locas conic, , 13- tij, 14,15-electrozi din platin, 16-con, 17-cup, 21pipet sau dozator electronic manual.
partea superioar cu dou contacte 18, 19 i un loca e de fixare elastic a tijei 13 prin
intermediul unui clichet 20 cu bil i arc de compresie , reperul 21 este extern
biosenzorului , poate fi o pipeta sau un dozator electronic manual, i folosete pentru
dozarea precis a unui anumit volum prescris din soluia de analizat n cupa 17 ce
constituie camera de reacie a biosenzorului.
Modul de lucru cu biosenzorul este urmtorul : se desfileteaz la maxim urubul
7 randalinat i cav dup care se ntoarce aparatul cu 1800 fa de poziia normal de
lucru, se aeaz capsula cu oxidaza n cavitatea urubului 7 dup care acesta se strnge cu
mna pn cnd este opus o rezisten mecanic sensibil ceea ce nseamn c folia
termosudat a capsulei 6 a fost perforat de cuitul p al reperului 8 iar gtul capsulei 6
89
a realizat etanarea cu reperul 8 dup care se ntoarce din nou biosenzorul n poziia de
lucru i se desfileteaz cupa 17 detaabil de pe tija 13, se execut cteva rotaii
complete spre dreapta a cilindrului 11 spijinit excentric pn cnd pe conul 16 perforat
apare o pictur de oxidaz. Dup aceste operaii se nfileteaz la loc cupa 17 se mai
execut o rotaie complet a cilindrului excentric n vederea dozrii , prin sistemul
peristaltic, a volumului necesar de oxidaz n cupa 17 cu
90
emisie a unei specii excitate ce ia natere n timpul unei reacii chimice. Avantajele
determinrii concentraiei speciilor pe baza msurii fotoluminiscenei sau a
chemoluminiscenei permite determinarea multor specii anorganice i organice cu
sensibiliti cu pn la trei ordine de mrimi mai ridicate ca cele obinute n cadrul
spectrometriei de absorbie , limitele de detecie situndu-se n domeniul ppb (10-9). Un
alt avantaj al metodelor i procedeelor bazate pe fotoluminiscen o prezint domeniul
liniar mai mare dect domeniul liniar al metodeor bazate pe spectrometrie de absorbie.
Dezavantajul principal al folosirii metodelor fotoluminiscente
l reprezint numrul
relativ redus de substane ce prezint aceste proprieti optice dependente de
concentraie . Att
fenomenul de fluorescen de
fosforescen ct i de
chemoluminiscen stau labaza a numeroase tipuri de biosenzori.
k
a
F*
(III.8)
(III.9)
(III.10)
(III.11)
La situaia (a) substana fluorescent revine la starea fundamental prin emisia unui
foton , n situaia (b) substana fluorescent revine la starea fundamental prin stingerea
fluorescenei prin preluarea fotonului de o alt substan denumit Quencher fr s
apar emisie de energie radiant, n situaia (c) substana fluorescent revine la starea
fundamental prin preluarea energiei strii excitate prin alte procese dect cele de la
punctul (a) i punctul (b).
92
If=K*.(P0- P) = K*.[F*]
(III.12)
93
(III.14)
.
Unde: F0 - Intensitatea de fluorescen a substanei fluorescente n absena specieie ce
provoac stingerea fluorescenei
F - Intensitatea de fluorescen a substanei fluorescente n prezena
specieie ce provoac stingerea fluorescenei
[Q] - concentraia speciei (Quencher) ce provoac stingerea fluorescenei
Kd - constanta dinamic Stern - Volmer
0 - timpul de via a strii excitate a fluoroforului n absena Quencher-ului
- timpul de via a strii excitate a fluoroforului n prezena Quencher-ului
La aceeai concentraie a Quencher-ului la stingerea dinamic de fluorescen valoarea
constantei dinamice Stern Volmer KdSV crete odat cu creterea temperaturii. O
aplicaie de baz pentru msurarea concentraiei pe baza stingerii de fluorescen o
reprezint determinarea oxigenului liber din lichide n special din ap. La aceast
aplicaie reprezentat simbolic n figura substana de fluorescen este depus pe un
ansablu de dou fibre optice sub forma unui gel sau polimer aderent insolubil . Prin una
din cele dou fibre se realizeaz excitarea iar prin cealalt se msoar timpul de
stingere al fluorescenei, timp care este n legtur cu
a)
b)
Fig. III.6. reprezentarea simbolic a unui senzor pentru determinarea concentraiei unei
substane de analizat absorbante de fotoni (Quencher) pe baza fenomenului de stingere a
fluorescenei . a- radiaia de fluorescen inaintea prezenei substanei de analizat , b- radiaia
de fluorescen dup prezena substanei de analizat.
94
concentraia oxigenului liber (Quencher) prin relaia Stern - Volmer (III.15.) . n acest
scop se folosete ca surs de excitaie o diod laser pulsatorie cu lungimea de und a
radiaiei cuprins de obicei n domeniul luminii albastre , fluorescena avnd loc la valori
ale lungimi de und mai mari, respectiv n domeniul luminii
roii unde poate fi msurat uor cu fotodiode sau detectoare de tip Diode- Array,
determinndu-se fie timpul de stingere fie modificarea de faz dintre radiaia de excitare
i radiaia de fluorescen ( din modificarea de faz se poate determina cu precizie timpul
de stingere. In figura III.7. este prezentat evoluia concentraiei unei substane
(Quencher) n funcie de evoluia intensitii fluorescenei ( stingerea fluorescenei cu
creterea concentraiei Quencher-ului) Din
evoluia fluorescenei sub form de
hiperbol se oserv din figur c sensibiltatea acestui procedeu este mult mai bun n
domeniul concentraiilor mici ( la variaii mici de concentraii corespund variaii mari,
precis msurabile, de intensitate a fluorescenei) fiind folosit printre altele la
determinarea oxigenului liber din lichide , n special la ap unde aceste concentraii se
plaseaz la valori mici .
III.1.2.1.1.1.2. Stingerea static de fluorescen
La stingerea static de fluorescen fluoroforul i Quencherul formeaz un
complex care prezint o fluorescen mai redus sau chiar de valoare zero fa de
fluoroforul iniial. Prin formare de complexe se reduce concentraia iniial a
fluoroforului. La stingerea static de fluorescen dependena intensitii fluorescenei
unui material colorat fluorescent de concentraia unor specii (Quencher) ce prezint
95
(III.15)
unde :KsSV reprezint constanta static Stern - Volmer
Adesea este preferat urmtorul mod de scriere pentru ecuaia Stern - Volmer
(III.14)
Prin reprezentarea termenului (F0 / F) 1 funcie de concentraia rezult o dependen
liniar de de tipul celei din figura III.8. unde panta de cretere este tocmai constanta
static Stern - Volmer KsSV
96
(15)
Microperox idaz
Aminoftalat N 2 3H 2 O h
criminalistic
(III.16)
(III.17)
Aceasta reacie st la baza a numeroase chituri comerciale de luciferinluciferaz folosite in cercetarea biologic, medical i farmacologic
- bioluminiscena bacterial folosit pentru determinarea NAD (P)H cu
flavinmononucleotid (FMN)
97
NAD(P)H FMN
FMN reductaza
NAD(P) FMNH 2
(III.18)
Reaciile sint doar exemple reprezentative, la ora actual exist o adevrat competiie
privind dezvoltarea de noi aplicaii pentru bioluminiscen, iar n aceast competiie
dezvoltarea de noi senzori competitivi este de importan capital. Tot n acest context se
nscriu i cercetri astronomice privind identificarea bioluminiscenei de pe alte planete
ca o expresie a existenei vietii pe aceste corpuri cereti. In acest sens snt folosii senzori
de nalt performan ce au limite de detecie a speciei luminiscente la nivelul de 10-17.
Problema tehnic pe care o rezolv biosenzorul const n realizarea unui senzor
de bioluminiscen miniatural compact
i autonom destinat identificrii
i
determinrii concentraiei unor specii biologice care pot da reacii luminiscente.
Materia analizat poate s se prezinte sub form solid, lichid, pulverulent sau sub
form lichid mbibat n suporturi lamelare poroase. In acest scop msurarea radiaiei
difuze de luminiscen se realizeaz folosindu-se un pachet opto-electronic format
dintr-o lentil colectoare, un filtru de interferen i un detector de mare sensibilitate de
tip CCD, ntreaga structur fiind montat intr-un tub metalic cilindric de mici
dimensiuni ce are n partea superioar electronica de interfaare de tip USB .
Avantajele obinute prin folosirea biosenzorului snt urmtoarele :
- se obine un senzor de bioluminiscen miniatural compact destinat identificrii
i msurrii concentraiei diferitelor specii biologice conectndu-se direct la un
laptop
- senzorul are o construcie simpl i un pre redus
- senzorul de bioluminiscent reprezint un mijloc util n criminalistic pentru
identificarea i cuantificarea urmelor de snge invizibile cu ochiul liber
folosindu-se reacia de bioluminiscen a sngelui cu luminol.
- senzorul de bioluminiscent permite construirea de chit-uri ieftine specializate
pe o anumit specie biologic cum ar fi de exemplu celule canceroase din
plasma sanguin pentru identificare i dozare fiind necesar o singur pictur
de snge cu care se imbib o lamel poroas. In aceast execuie senzorul are
microprocesor propriu cu soft inscripionat i sistem de afiare digital
al
rezultatelor.
Se d n continuare un exemplu de realizare a inveniei n legtur cu figura
III.9. care reprezint o seciune prin senzorul de bioluminiscen. Biosenzorul are o
structur compact format dintr-un corp cilindric cav 1 ce conine o lentil colectoare
2, un filtru de interferen 3, i un detector CCD de mare sensibilitate 4, n partea
superioar a structurii se gsete un capac 5 ce conine electronica de interfaare
whirless 6 cu un laptop, iar la partea inferioar un capac 9
98
Fig.III.9. seciune prin senzorul de bioluminiscen. 1-corp cilindric cav, 2-lentil colectoare,
3-filtru de interferen, 4-detector CCD, 5-capac , 6-electronic de interfaare, 7, 8,9-capace
interschimbabile, 10-folie poroas , 11-prob de analizat
interschimbabil cu alte dou capace 7,8 folosite la rndul lor pentru adaptarea la
condiiile optime de msurare n funcie de starea de agregare a probei. Reperul 10
reprezint o folie poroas mbibat cu proba de analizat 11 i cu specia chimic ce
provoac luminiscen, ea este folosit n cazul identificrii cantitii unui anumit
component bioluminiscent din plasma sanguin. Modul de lucru este simplu: se pornete
laptopul, se verific prezena transmisiei whirless
i se provoac reacia de
chemoluminiscen prin amestecarea speciei biologice analizate cu specia chimic ce
d emisie luminiscent cu acea specie biologic dup care se aduce ct mai repede
posibil proba analizat n dreptul senzorului i se execut msurtoarea. In funcie de
starea de agregare a probei pentru determinri se folosete unul din cele trei capace
speciale 6,7 sau 8, astfel :
- pentru probe lichide sau pulverulente se folosete capacul cav 6, reacia de
bioluminiscen provocndu-se direct n cavitatea acestuia dup care senzorul se
nurubeaz cu grij n capac i se efectueaz msurarea
- pentru probe solide se nurubeaz capacul 7 pe senzor, se provoac reacia de
biloluminiscen pe proba solid prin adaugarea speciei chimice corespunztoare
i se aeaz senzorul pe prob n aa fel nct fereastra capacului 7 s fie in
dreptul zonei de reacie dup care se efectueaz masurarea
- pentru determinri din probe sanguine se nurubeaz capacul 8 pe senzor,
se provoac reacia de bioluminiscen prin picurarea unei picturi de snge
proaspt pe banda siliconic poroas 10, de tip chit, pe care se gsete
impregnat specia chimic de luminiscen, dup care se introduce banda prin
99
(III.19)
100
fluorescen situat tot n domeniul vizibil dar la o lungime de und superioar celei a
radiaiei incidente. Determinarea concentraiei (c) a unei specii chimice sau biologice se
face prin extrapolarea valorii fluorescenei (F) msurate
pe o curb de etalonare
realizat n coordonate: fluorescen (F) - concentraie (c), curb realizat cu ajutorul
unor concentraii cunoscute pentru acea specie.
Problema tehnic pe care o rezolv sonda descris const n realizarea unui senzor
de fluorescen miniatural compact
i autonom destinat msurrii concentraiei
speciilor chimice sau biologice fluorescente de natur solid, pulverulent sau lichid
(ultimele numai dac snt absorbite pe materiale solide sau poroase de tip folie poroas).
In acest scop msurarea radiaiei de fluorescent se realizeaz la 90 0 fa de direcia
radiaiei incidente folosindu-se o surs de radiaie monocromatic de tip LED sau
diod laser cu emisie n albastru i pentru recepie un detector de tip CCD n faa
cruia se gsete un filtru de interferent, iar n faa filtrului o lentil colectoare,
ntreaga structur fiind montat intr-un tub metalic cilindric de mici dimensiuni, att
alimentarea LED-ului ct i preluarea datelor se realizeaz printr-o interfaa de tip USB
plasat n partea superioar a senzorului.
Folosirea sondei duce la obinerea urmtoarelor avantaje:
- se obine un senzor de fluorescen miniatural compact i cu pre redus destinat
msurrii concentraiei speciilor chimice sau moleculare fluorescente
- senzorul de fluorescen nu necesit surs electric de alimentare, LED-ul emitor de
consum extrem de mic fiind alimentat prin interfaa USB a unui calculator sau
laptop, aceeai interfa prin care se preiau i datele de la senzor n vederea procesrii
acestora
- senzorul de fluorescen permite impreun cu o unitate de calcul extern i un soft
specializat determinarea concentraiei speciilor chimice sau moleculare fluorescente
de natur solid pulverulent i lichid pe teren fr a fi necesar o pregtire
complex a probelor.
- printr-un suport prins cu dou uruburi senzorul permite analiza de fluorescen a unor
specii chimice picurate pe benzi de hirtie sau pe folii siliconice poroase
- folosindu-se avantajele
enumerate mai sus, senzorul de fluorescen permite
construirea de chit -uri miniaturale, ieftine i specializate pe anumite specii chimice,
inclusiv pe analiza plasmei sanguine folosind n acest scop o singur pictur de snge.
Este evident c, n aceast situaie senzorul devine o unitate autonom de analiz i
trebuie echipat cu microprocesor cu display electronic i cu soft inscripionat precum
i cu surs electric de alimentare proprie.
In figura III.10. este prezentat o seciune prin sonda fluorometric. Detectorul
de fluorescen se compune dintr-o specie chimic sau biologic fluorescent 1
existent n substane solide, pulverulente sau n lichide mbibate n materiale poroase
sau pulberi, un corp 2 n care se gsete canalul de excitare compus dintr-un un LED 3,
cu emisie n albastru i un canal de msurare a fluorescenei aezat la un unghi de 90 0
fa de canalul de excitare, format la rndul lui dintr-o lentil optic colectoare 4, un
filtru de interferen 5, un senzor CCD 6 de mare sensibilitate i o unitate
de
interfaare 7 de tip USB. Pentru msurri pe solide i pulberi pe corpul detectorului se
prinde cu dou uruburi un corp de adaptare 8, iar pentru msurri la lichide imbibate
pe benzi de hrtie sau pe benzi poroase siliconice este folosit un corp special de
adaptare 9, fixat cu aceleai dou suruburi ca i corpul de adaptare 8
101
Fig. III.10. seciune prin sonda fluorometric. 1-specie chimic sau biologic fluorescent, 2corp , 3-LED, 4-lentil optic colectoare, 5-filtru de interferen, 6-senzor CCD 7-unitate de
interfaare, 8-corp de adaptare, 9-corp de adaptare
Fig. III.11. Schema de principiu a msurrii variaiilor mici de mas sau de grosime de strat prin
fenomenul de plasmonrezonan
103
Fig. III.12. Suprafaa aurit a prismei pe care s-au fixat diferite tipuri de receptori: a- receptor, banticorp pentru proteina, c- anticorp pentru structur celular, d-hidrat de carbon ce leag lectine,
e - receptor ce interacioneaz intit cu structuri proteinergene
104
montajului devenit clasic cu folosirea unei prismei aurite pe o fa . Una din tendinele
actuale n biosenzoric este obinerea de sisteme de msurare miniaturale care pe ct
posibil s poat determina minimalinvaziv diversi parametrii direct n organismul viu .
Aceast tendin are anse reale n cadrul SPR. In acest sens la tehnica SPR este
avantajos faptul c fenomenul SPR apare i atunci cnd pe o fibr optic prin care
trece lumin este depus pe o poriune lateral un strat subire de aur pe care este depus
un strat subire din substana biologic activ. O asemenea sond , figura .13.b, poate fi
scufundat direct ntr-un recipient de lichid n vederea efectuarii de msurtori dar poate
fi introdus i ntr-un esut viu datorit diametrului fibrei optice a crui valoare se
situeaz
n domeniul m. are i un Dezavantajul aceastei tehnici const n
imposibilitatea realizrii termostatrii ceea ce duce la anumite probleme la interpretarea
rezultatelor , efectul rezonanei lasmonice de suprafa fiind puternic deendent de
temperatur.
Pasul urmtor n miniaturizare l constituie nano SPR unde aurul nu este
imbilizat pe o suprafaa de sticl ci introdus sub form de nanoparticule n soluia de
cercetat , figura III.13.c, suprafaa acestor nanoparticule este acoperit ca n cazul clasic
cu structura de legare. Dac pe suprafaa acestor nanoparticule se ajunge la reacii apar
efecte ale fenomenului SPR msurabile prin tehnic microscopic sau prin tehnica
fibrelor optice care deschid noi posibiliti de investigare cum ar fi de exemplu n
depistarea i investigarea tumorilor. Este posibil injectarea de asemenea nanoparticule
n tumoare urmat de investigarea efectului SPR prin fibr optic introdus n esut.
Dup rezultatul analizei , rezultat care este instantaneu, prin aceai fibr optic poate fi
introdus energie laser n esut n vederea distrugerii acestuia rezultnd concepte de
terapie noi i deosebit de performante.
105
106
107
Echipamentul pentru determinarea variaiei grosimii de strat conform figurii III.15 este
format dintr-o prism 1 optic din sticl, o lamela 2 optic avnd o depunere 3 de aur
pur subire pe una din fee , un strat 4 biologic activ depus pe stratul de aur, un strat 5
subire de ulei special cu indice de refracie ridicat, un sistem 6 i 7 de stringere cu
colier , un corp 8, o surs 9 de radiaie monocromatic de tip diod laser sau LED, un
detector 10 optoelectronic de tip diode- array pentru msurarea unghiului de refracie ,
o unitate 11 electronic central, o unitate 12 de calcul , o celul 13 de curgere , un
recipient sau reactor 14 cu speciile biologice urmrite, o pomp 15 peristaltic
acionat cu un motor 16 electric.
108
109
110
Biosenzorul interferometric se prezint sub forma unei structuri modulare format dintro sursa 1 de radiaie de tip diod laser, o fibr 2 optic ce este scindat prin intermediul
unui divizor 3 optic ntr-o fibr 4 optic pentru transmiterea unui fascicul luminos de
referin i o fibr 5 optic pentru transmiterea unui fascicul luminos de lucru, o prism
6 optic cu o depunere 7 subire de aur sau de argint peste care este depus un strat 8
112
114
rezonanei plasmonice a valorii raportului celor dou valori ale defazri radiaiei
reflectate fa cele dou valori ale lungimilor de und ale radiaiei iniiale. Valorile
defazrilor acestor dou lungimi de und, provocate de aceeai modificare masic, snt
diferite deoarece cele dou radiaii au frecvene (energii) diferite, n schimb efectul
influenei temperaturii asupra valorii msurate este acelai n cazul ambelor frecvene i
ca urmare prin efectuarea raportului matematic aceast influen se simplific dnd
valoarea unu care prin inmulire cu valoarea msurtorii nu afecteaz rezultatul acesteia.
Prin folosirea biosenzorului portabil mimniatural se obin urmtoarele avantaje:
- se aduce un sistem de msurare pe baz de rezonan plasmonic la dimensiuni
miniaturale care permite msurri in situ n locuri greu accesibile inclusiv n
esuturi vii
- scade preul de cost prin nlocuirea unei prisme optice cu o fibr optic
- crete precizia de msurare prin inlocuirea msurrii unghiului de refracie, ca
expresie a modificrii masice a speciei urmrite , cu msurarea defazrii ntre
lungimea de und a radiaie incidente fa de lungimea de und a radiaiei
reflectate
- exprimnd valoarea mrimii msurate prin raportul celor dou valori ale defazri
radiaiei reflectate fa cele dou valori ale lungimilor de und ale radiaiei
iniiale este eliminat eroarea de msurare cauzat de influena temperaturii. .
Se prezint n continuare un exemplu de realizare a biosenzorului n legtura cu
figura III.18. care reprezint schema de principiu a biosenzorului. Biosenzorul este
format dintr-o surs de radiaie S ce conine dou diode 1 i 2 laser, un chopper 3
optic care comut alternativ cele dou fascicule f1 i f2 de radiaie monocromatic, de
radiaie monocromatic, de fecvene diferite spre un optocuplor 4 la care este
conectat o fibr 5 optic cu scindare, prevzut la un capt cu o depunere 6 subire
din aur pe o lungimea de cca 10 mm i avnd grosimea de cca 30- 50 nm, peste
care este realizat o depunere 7 subire biologic activ ce leag specific specia
urmrit, iar la cellalt capt cu o parte 8 electronic ce msoar defazajul ntre
valorile lungimilor de und ale radiaiei incidente i valorile lungimilor de und ale
radiaiei reflectate i efectueaza ulterior raportul celor dou valori ale defazajului n
vederea eliminrii erorii de msurare cauzat de influena temperaturii .
115
pe efectul de
rezonan plasmonic de suprafa. S-surs de radiaie, 1,2-diode laser, 3-chopper
optic, f1,f2-fascicule de radiaie monocromatic, 4-optocuplor, 5-fibr optic 6depunere subire din aur, 7-depunere subire biologic activ, 8-parte electronic
m
2A
(III.20)
Fig. III.19. Schema de principiu a unei piezobalane . 1-piezocuar, 2-matial biologic activ, 3,4
conductori electrici, 5- parte electronic
116
a)
b)
Fig. III.20. Apectul celor dou fee ale oscilatorului piezoelectric, a- faa activ pe care se
depunde materialul ce fixeaz specia biologic urmrit, b- faa opus feei active.
117