BIOSENZORI

Lungu Iulia Ioana, anul III, Ingineri Medicala

Universitatea Politehnica din Bucuresti

CUPRINS
Introducere.pag 3
Biosenzor - definiii, clasificri...pag 5
Structura i funciile traductorilor......pag 7
Materiale i metode pentru realizarea biosenzorilor....pag 10
1. Materiale..pag 10
2. Metode de fabricare a biosenzorului...pag 12
3. Metode de caracterizare a biosenzorilor..pag 14

Principiul senzorial n lumea vie

2

Ligant
Biosenzorii
au fost realizai dup o atent observaie a receptrii substanelor n
lumea vie. La scar microscopic, vorbim despre recepionarea substanelor la nivel
celular. Cuplarea unor substane de celule provoac schimburi de sarcini ionice, eliberare
de substane semnalizatoare etc. Aceste "impresii" sunt transmise mai departe pe cale
Mediu extern celular
biochimic. S vedem n continuare cum capteaz o celul vie doar o anumit substan
din mediul nconjurtor.

Celulele vii au posibilitatea s se adapteze la Biolichid

modificrile mediului exterior cu
ajutorul receptorilor. Receptorul const dintr-o protein
ce de
esteligani)
legat la membrana
(purttor
celulei. El posed o nalt afinitate de a se cupla doar cu anumite substane ce pot fi:
hormoni, enzime, anticorpi, produi de metabolism, ioni - denumite ligani. Un receptor
este specializat strict pe o substan. Spre exemplu, n sistemul nervos uman s-au
evideniat dou tipuri de receptori pentru neurohormonul acetilcolin: nicotinici Protein
- Receptor
constau n proteine cu proprieti
ionofore
i muscarinici - receptori cuplai de proteina G
i bazai pe sistemul mesagerilor secundari,

Mediu intern celular

Membran celular

Na+

K+

Fig.1. Captarea unui ligant n receptorul celulei.

Legarea ligantului de proteina receptor cauzeaz schimbri structurale ale
receptorului. Aceste modificri permit deschiderea temporar a unui canal prin membrana
celulei, pentru ionii cu mobilitate mare: Na +, K+ (vezi fig.10.1). Influxul de ioni pozitivi
3

Na+, K+, modific puternic potenialul membranei (chiar o singur legtur produce o
cretere detectabil de potenial). Se obine astfel amplificarea substanial a semnalului
incident. Dup transmiterea semnalului, cel mai adesea, complexul receptor-ligant se
degradeaz n interiorul celulei. De aceea, regenerarea unui nou receptor n membran
necesit ceva timp. Cele mai simple proteine receptor utilizate n domeniul biosenzorilor,
au fost enzimele.

De la celula vie la biodispozitiv

De multe ori tehnica" a mprumutat principii de funcionare din principii similare
biologice. Exist dispozitive electronice ce pot fi considerate dualele unor simuri:
fototranzistorul "simte" semnalul luminos i-l transmite amplificat, iar dispozitivele
acustice cu cristal piezoelectric echivaleaz cu celulele receptoare de sunet, etc.
Biosenzorii sunt biodispozitive sau pri ale acestora, care recepioneaz substane.
Deci clasa biodispozitivelor este o clas mai larg, care o include pe cea a biosenzorilor.
DEFINITIE: Vom nelege prin biodispozitiv un ansamblu de pri electrice, biologice,
mecanice, optice ca elemente active (traductoare, amplificatoare, de caracterizare, etc)
i a unor elemente de interconectare, capsule, terminale, microcanale de alimentare cu
biolichid ca elemente de conectare cu mediul extern.
Biodispozitivul poate avea funcii complexe. Atunci cnd el este construit doar
pentru a detecta o anumit substan, poart numele de biosenzor. Dar exist
biodispozitive create i n alte scopuri: caracterizarea unor materiale biologice, furnizarea
unui medicament, sau detectarea multor substane (biodispozitiv de tip multisenzor)
combinat cu furnizarea de substane, vehicularea i manipularea de substane, esuturi,
etc.
Un exemplu de biodispozitiv este cel utilizat pentru furnizarea insulinei la
diabetici. Acest dispozitiv conine ca elemente active: structuri traductoare care
detecteaz nivelul glicemiei i o micropomp pentru insulin, [68]. n continuare ne vom
focaliza atenia mai mult asupra biodispozitivelor ce au ca unic funcie recepionarea de
substane biosenzorii.

Biosenzor - definiii, clasificri

4

DEFINITIE: Biosenzorul const n cuplarea spaial ntre un substrat biologic activ

(receptorul) imobilizat pe un traductor de semnal (dispozitiv electronic) i un circuit
electronic de amplificare. Toate aceste elemente integrate ntr-o singur capsul poart
numele de biocip. n figura 2 este prezentat schematic structura bloc a unui biosenzor.
O problem specific a biosenzorilor este imobilizarea receptorilor pe suprafeele
dispozitivelor electronice. Doar cu titlu informativ, dm ca exemple cteva metode: a)
adsorbia biomoleculelor pe suprafee (ce utilizeaz forele de adeziune, iar alteori forele
de atracie electrostatic); b) captarea biomoleculelor n geluri din polimeri (fixarea
moleculelor este mai sigur); c) crearea unor reacii chimice prin care biomoleculele se
leag covalent de elementele traductorului.
O alt problem specific este refacerea substratului biologic (dup consumarea
complexului receptor-ligant) pentru o nou msurtoare. Timpul de regenerare al
receptorului este un parametru important n alegerea unui biosenzor de ctre un utilizator.

R
E
C TRADUCTO
E
P
T (DISPOZIT
O ELECTRON
R

Fig. 2.
Prezentarea
schematic
a unui
biosenzor.

Substane purttoare de diveri ligani

Substana purttoare a diverilor ligani, poate fi: ser, limf, snge; generic o vom
denumi biolichid. Spre exemplu n snge exist o multitudine de ligani. Receptorii au
rolul de a extrage din acel amestec o singur substan, pentru care au afinitate. Aceast
substan, pentru analiza creia a fost conceput biosenzorul, o vom numi analit. Spre
exemplu dac se dorete msurarea concentraiei de glucoz din snge, se folosete ca
receptor enzima GOD (glucozoxidaz), iar analitul este glucoza.
Modificrile ce au loc n biosenzor la reinerea analitului, pot fi: modificarea
grosimii unui strat, schimbarea indicelui de refracie, a temperaturii, modificri n
5

absorbia luminii, creterea sarcinii electrice, modificri de potenial electric sau de

curent electric.

Clasificarea biosenzorilor.
1 Biosenzori de afinitate. Analitul nu se modific chimic n timpul msurtorii. El doar se
leag de receptor. La sfrit el poate fi ndeprtat chimic sau prin splare.
2 Biosenzori de metabolism. Aici substratul biologic se consum printr-o reacie chimic
cu analitul. Se formeaz un nou produs. Starea iniial se poate reface dup completa
consumare a analitului. Exemplu: se dorete detectarea microorganismului Helycobacter
Pylor n substana purttoare - suc gastric. n metabolismul su, acest microb produce
NH3 (amoniac). Aadar, senzorul nu va detecta microbul n sine, ci concentraia de
amoniac.
3 Imunosenzori. Detectarea substanelor de tip antigen (Ag) se face cu ajutorul anticorpilor
(Ac), pe principiul "lact-cheie". Anticorpii sunt proteine cu molecule n form de Y
(numite imunoglobuline). n vrfurile Y-ului sunt doar dou locuri, unde se poate leaga
un singur tip de antigen. Aceti anticorpi sunt produi de organism ca rspuns la o
anumit substan strin (antigen), pe care nu o poate elimina prin fagocitoz i creia,
n ultim instan, i "ncurc planurile", legndu-se de ea: Ac+Ag AcAg.
Exemplu: n referina [2] se descrie un biosenzor cu material piezoelectric acoperit cu
anticorpi pentru Candida Albicans (microorganism din familia fungilor). n timp de
aproximativ o or celulele receptoare au captat ntre 10 6 i 108 celule de Candida A.,
avnd ca rezultat scderea frecvenei de rezonan a cristalului piezoelectric cu
0,5...1,4kHz.
4 Senzori biomimetici. Cu ajutorul acestor senzori se detecteaz semnale fizice (sunet, stres
mecanic, lumin) pe baza interaciunii lor cu substratul biologic activ (receptorul).

Structura i funciile traductorilor

6

Traductorii trebuie s converteasc n mrimi electrice parametri generali ca:

entalpia de reacie (termistorul), modificri ale masei depuse (cristal piezoelectric),
grosimi ale unor straturi transparente (dispozitive optoelectronice), concentraii de
substane sau ioni (traductoare ISE).

Traductori termici
La senzorii de metabolism exist reacii chimice ntre analii i anumii receptori
enzimatici cu degajare / absorbie de cldur. n acest caz nu se msoar cantitatea
analitului, ci variaia de temperatur, T.
Enzima-receptor se imobilizeaz pe sticl poroas pe suprafaa unui termistor. Se
imerseaz totul n soluia de msurat. Termistorul joac rolul traductorului i furnizeaz
T. De aici rezult numrul de moli de analit, conform relaiei:

H C T

(1)

unde este numrul de moli de analit, C este cldura molar a dispozitivului (ce se
determin anterior prin msurtori calorimetrice). Dezavantajul principal este schimbul
de cldur ce apare ntre diversele componente ale experimentului, ceea ce va induce
erori mari n evaluarea lui T. Optimizrile vizeaz izolarea calorimetric a biosenzorului
ntr-un reactor.

Traductori optoelectronic
Cu ajutorul traductorilor optici se poate indica variaia unor parametri precum:
coeficient de absorbie a luminii, lungime de und, indice de refracie, grosimi ale unor
straturi transparente. Ca exemplu, n figura 3, este prezentat principiul de detectare a
albuminei serice cu un senzor optoelectronic.

Fig. 3. Principiul de detectare a albuminei serice cu un senzor optoelectronic.

Receptorul a fost imobilizat pe o membran de bromocresol transparent. Curgerea
biolichidului purttor de albumin a determinat captarea ei pe receptori. Creterea
grosimii stratului de analit se face ntre o surs de lumin (led) i un detector de lumin
(fotodiod). Curentul prin fotodiod scade pe msur ce crete grosimea stratului de
albumin depus pe receptor.

Traductori piezoelectrici
Principiul pe care se lucreaz aici urmrete scderea frecvenei de rezonan a
unui cristal piezoelectric cnd se absoarbe un material strin la suprafaa sa i-l
comprim. Cristalul este acoperit cu un material receptor. Efectele zgomotului electric au
putut fi nlturate prin utilizarea de cristale pereche. Aceti traductori au fost utilizai
pentru detectarea: NOx, COx, H+, microorganisme.

Traductori electrochimici
Reaciile electrochimice se produc la interfaa electrod soluie, iar reaciile
biologice cu transfer de electroni se produc la interfaa enzim soluie. Se utilizeaz
poteniometria, cnd se determin variaia potenialului electric al unui electrod receptor
n funcie de concentraia ionilor de analit dintr-o soluie. Metoda tradiional de detecie
a unor ioni ntr-o substan purttoare folosete ISE (Ion Selective Electrodes). Din punct
de vedere electronic ISE poate fi privit ca o surs de tensiune electromotoare (de sute de
milivoli pentru biosenzori) i cu o impedan de ieire mare (pn la sute de M).

Masa electric este soluia, iar ieirea sursei este electrodul de referin. Dac
concentraia ionilor de analit din soluie se modific, atunci potenialul electrodului
sensibil la aceti ioni (receptorul) se modific dup relaia lui Nerst. Spre exemplu, n
cazul pH-ului (concentraia ionilor de H +), o scdere a acestuia cu o unitate, determin
creterea tensiunii furnizate cu circa 55mV.
Muli biosenzori electrochimici folosesc amperometria. n acest caz au loc reacii
chimice de oxido-reducere cu transfer de electroni n medii electrolitice. n domeniul
biosenzorilor, aceast tehnic a nsemnat detectarea unui analit prin msurarea
concentraiei unui produs de metabolism, mult mai uor de determinat. Pentru aceasta se
folosesc electrozi cu enzime receptor aezate n unul sau mai multe straturi. Pentru
msurarea concentraiei de glucoz se folosete enzima GOD care accelereaz foarte mult
procesul de oxidare al glucozei, n urma cruia rezult i H 2O2. Este mult mai uor s se
msoar concentraia de H2O2, dup care se calculeaz din reacie concentraia de
glucoz. Curenii care se stabilesc n aceste straturi sunt de natura unor cureni de difuzie.

Traductori biologic intaci

Pentru determinarea unui analit, aceste traductoare folosesc chemoreceptori direct
din lumea vie. Spre exemplu, s-a realizat un receptor de acetilcolin, utiliznd organul
electric al petelui Torpedo i un senzor capacitiv. Cnd biolichidul purttor coninea
acetilcolin n concentraie mrit, cretea tensiunea electric furnizat de traductorul
organic al petelui, ceea ce ncrca senzorul capacitiv. S-au putut face msurtori n
domeniul 1....100mol/l concentraie de acetilcolin n biolichidul purttor prin tehnici de
C-V-metrie.
Alt direcie de lucru este cuplarea unor celule receptoare vii cu una sau mai multe
fibre nervoase. Stimularea unor celule olfactive sau gustative cu un anumit analit conduce
la generarea unui impuls nervos detectabil ctre neuronii din fibr.
Ca exemplu, s-a realizat un senzor pentru determinarea concentraiei de
aminoacizi, utiliznd drept traductor organul olfactiv din antenulele crabului Calinectes
Sadipus. Antenulele, legate de o unic fibr nervoas, au fost conectate cu o sond de
platin. Stimularea receptorilor olfactivi cu aminoacidul L-glutamat, n concentraia
0,01...1mmol/l, a creat impulsuri nervoase msurabile, cu valori cuprinse ntre 101000V. n plus, s-a obinut o linearitate bun n aceast gam de msur.

Materiale i metode pentru realizarea biosenzorilor

1.Materiale
1.1.

Nanotuburi de carbon

Nanotuburile de carbon conin sute de milioane de atomi de carbon, totul n

funcie de lungimea lor. Nanotuburile de carbon sunt n principiu cilindri lungi infinii,
dar un nanotub perfect este nchis la ambele capete de ctre semi-fulerene, nelsnd
legturi izolate. Un nanotub de carbon cu un singur perete (SWNT) este asemenea unui
cilindru, n timp ce nanotuburile de carbon cu pereti multipli (MWNT) sunt alctuite din
mai muli cilindri unul ntr-altul ale caror raze difer prin spaiul interstrat de grafit.
Diametrul minim al unui SWNT este limitat la ~ 0,4 nm. Un MWNT poate avea straturile
exterioare n diametru mai mari de 30 nm.
Nanotuburile de carbon pot avea proprieti metalice comparabile sau mai bune
dect ale cuprului, sau pot fi semiconductori, ca siliciul n tranzistori, totul depinznd de
structura lor. Pot conduce de asemenea caldura aa cum o conduce diamantul, i din
moment ce este carbon, chimiti pot crea legturi ntre atomii de carbon ai fulerenelor i
ali atomi sau molecule. Aceast abilitate de a lega/ataa alte molecule sau atomi de
nanotuburi sau/i buckyballs le fac s fie un nou nanomaterial ce se poate folosi n
sistemele biologice sau s fie legate n materialele compozite.
Teoreticienii au calculat c din nanotuburile de carbon se vor face cele mai
puternice fibre fcute vreodat (aproximativ de 100 de ori mai puternice ca oelul), cu
doar 1/6 din greutatea lor. Nanotuburile de carbon i buckyball-urile sunt cele mai bune
materiale descoperite n ultima decad.
1.2.

Porfirine

Metaloporfirinele, mpreun cu proteinele globulare, ndeplinesc o serie de funcii

biochimice foarte importante, din natur. Hemoglobina, mioglobina, clorofila, citocromii,
catalazele i peroxidazele sunt exemple binecunoscute, a cror chimie se bazeaz pe
descrierea proprietilor redox ale metaloporfirinelor corespunztoare i pe abilitatea de a
transporta, stoca i activa oxigenul molecular. n prezent, s-a reuit coordinarea
majoritii metalelor i a ctorva semimetale, n interiorul cavitii porfirinice
.
1.3.

Polimeri conductori

Polimerii activ electrochimic se pot clasifica n diferite categorii care se bazeaz

pe modul de propagare a sarcinii care este strict legat de structura lor chimic. Cele dou
categorii principale sunt: polimerii conductori de electroni i polimerii conductori de
protoni (ioni).
10

Polimerii conductori de electroni se impart n dou clase n funcie de modul de

transport al electronilor i anume: polimeri redox i polimeri conductori electronici.
Polimerii redox conin centri redox localizai electrostatic i spaial ce pot fi
oxidai sau redui, electronii putnd fi transportai printr-o reacie de schimb de electroni
(salt electronic) ntre centrii redox nvecinai numai n cazul n care micarea parial le
permite.
n cazul polimerilor conductori electronici (polimeri conductori intrinseci ICP),
micarea electronilor delocalizai are loc n sisteme conjugate; totui, mecanismul saltului
electronic cel mai probabil lucreaz ntre lanuri i defecte. Transformrile electrochimice
duc n principiu la reorganizarea legturilor polimerilor obinui prin polimerizarea
oxidativ sau mai rar reductoare a compuilor heterociclici i benzoidici sau
nonbenzoidici (amine). ). Cteva exemple de polimeri conductori electronici: polianilina
(PANi) i derivaii si, polidifenilamina, poli-o-fenilendiamina, poli-2aminodifenilamina, polipirolul (PPy) i derivaii si, politiofena (PTh) i derivaii si,
poli-3,4-etilendioxitiofena (PEDOT) i derivaii si, polifenazina i poli-1hidroxifenazina, poliacridina; policarbazoli; politiazine; poli-o-aminofenol; polifluorene,
poliluminol, polirodamine, poliflavine, poli-p-fenilene i poli-fenilene-vinilene,
politrifenilamine.
1.4.

Grafene

Andr Geim i Konstantin Novoselov au ctigat premiul Nobel pentru Fizic n

2010, n urma experimentelor efectuate pe grafene, experiente care au evideniat
proprietile extraordinare, avndu-i originea n fizica cuantic. Aceti cercettori sunt
primii care au izolat straturile de grafen cel mai subire i mai dur material de pe
Pmnt i au reuit s o izoleze cu band adeziv! Experimentele lui Geim au artat c
electronii din grafene au un comportament special, ei micndu-se ntr-o manier
relativist, chiar dac viteza lor este mai mic dect viteza luminii n vid. Caracteristica
benzilor de energie le plaseaz ntre metal i semiconductor. ncepnd cu noiembrie 2010,
articolele publicate se bazeaz tot mai mult pe introducerea de heteroatomi n matricea
grafenic, pentru a controla spectrul de energie i, implicit, caracteristicile electronice.
n urma cercetrilor ulterioare asupra proprietilor acestui material, Geim,
Novoselov i ali cercettori au descoperit cteva lucruri interesante, ca duritatea
extraordinar i capacitatea elastic, conductivitatea electric i termic foarte bun,
impermeabilitatea i transparena. Exist numeroase aplicaii ale acestui material, oamenii
de tiin aducnd mereu noi i noi inovaii.
Grafenele sunt deja folosite pentru a nlocui capacitorii n stocarea energiei. Noile
textile pe baz de grafene sunt elastice i pot fi splate fr a perturba proprietile
electronice ale materialului. n viitorul apropiat putem ncrca telefonul cu ajutorul
hainelor.

2. Metode de fabricare a biosenzorilor

11

2.1.

Metoda serigrafic

Tehnologia de serigrafiere este folosit intens n industria electronic, ct i n cea

de printare publicitar. Aceast tehnologie este destul de avantajoas pentru producie
datorit flexibilitii designului, procesului de automatizare, o bun reproductibilitate, o
gam larg de materiale i costuri de producie foarte mici. Aceast metod este vzut ca
o alternativ la producerea de biosenzori pe scal larg la preuri foarte sczute. Prima
apariie a unui senzor fabricat prin aceast tehnologie a fost relatat ntr-un patent din
1981 al lui Baumbach.
Matricea suport este materialul pe a crui suprafa se imprim parile funcionale
i constructive ale senzorului.
Cernelurile sau pastele sunt depuse secvenial prin mti sau abloane pe matricea
suport pentru formarea parilor structurale i funcionale ale senzorului.
2.2.

Metoda MAPLE

Caracteristic procesului MAPLE este utilizarea unei inte compozite criogenice de

porfirine sau de nanotuburi de carbon funcionalizate cu porfirine, dizolvat intr-o
matrice de solvent cu o presiune de vapori relativ ridicat.
n tehnica MAPLE, la interaciunea radiaiei laser cu materialul se iniiaz dou
procese fototermice i anume: evaporarea intei compozite ngheate i ejectarea de
porfirine sau de nanotuburi de carbon funcionalizate cu porfirine, dup caz, n camer.
Datorit concentraiei sczute de porfirine sau de nanotuburi de carbon funcionalizate cu
porfirine n inta compozit de concentraie (1 - 5) %, aciunea simultan de evaporare
desoarbe uor porfirinele sau nanotuburile de carbon funcionalizate cu porfirine.
Energia fotonilor absorbit de solvent este convertit n energie termic ce induce
nclzirea porfirinelor sau a nanotuburilor de carbon funcionalizate cu porfirine i
evaporarea solventului. Moleculele de porfirin sau de nanotuburi de carbon
funcionalizate cu porfirine ating o energie cinetic suficient de mare care s le permit
transformarea n faz de gaz prin ciocniri colective cu moleculele solventului ce se
evapor. Prin optimizarea atent a condiiilor de depunere MAPLE (lungime de und,
rat de repetiie, tipul solventului, concentraie, gaz reactiv i presiunea gazului), acest
proces poate decurge fr nici o descompunere semnificativ a porfirinelor sau a
nanotuburilor de carbon funcionalizate cu porfirine.

2.3.
12

Metoda electropolimerizrilor

Polimerizarea electrochimic a acestor polimeri este de fapt un proces foarte

simplu este suficient aplicarea unui potenial pozitiv (Epolimer) n regim
poteniostatic, sau aplicarea mai multor cicluri avnd o limit anodic suficient de mare
(de obicei potenialul trebuie s depeasc Epolimer cu 100 200 mV), sau aplicarea
unui curent anodic ntr-o soluie de monomer, proces care determin creterea progresiv
a unui film polimeric corespunztor pe suprafaa electrodului. Pentru majoritatea
monomerilor reprezentai ca molecule conjugate electrooxidarea duce la formarea unor
lanuri polimerice liniare, formarea legturilor chimice ntre unitile monomerice
alturate realizndu-se prin meninerea structurii conjugate (de exemplu la pirol i tiofen
polimerizarea se realizeaz n poziiile 2 i 5, iar pentru benzen i anilin n poziia para).
Pentru fiecare monomer Epolimer i viteza de depunere depind de concentraia
monomerului: cu ct concentraia este mai mare cu att filmul polimeric crete mai
repede (pentru o valoare fix a Epolimer) sau Epolimer scade mai mult pentru aceaiai
vitez de cretere. Procesul este influenat mai ales de solventul ales, de exemplu
oxidarea pirolului n soluii apoase de acetonitril are ca rezultat filme polimerice de
polipirol cu proprieti diferite. Procesul mai este dependent i de tipul de electrolit de
fond (electrolit fr transformri redox), deoarece componenii electrolitului sunt
ncapsulai n filmul polimeric i afecteaz proprietile acestuia. Viteza de polimerizare
i proprietile filmului depind de temperatur, pH, agitarea soluiei i ali factori.
2.4.

Metoda polimerizrilor n plasm

Un polimer obtinut prin polimerizare n plasm se refer la un material care este

creat ca rezultat al trecerii unui gaz sau vapor organic printr-o descrcare incandescent
mai precis printr-o descrcare electric ntr-un gaz organic. Este obinut, de cele mai
multe ori un film subire. Materialele obinute prin polimerizarea n plasm sunt o nou
clas de materiale deoarece acest tip de polimerizare creeaz lanuri scurte cu catene
alturate ramificate care nglobeaz muli radicali liberi; aceti radicali liberi leag
oxigenul i vaporii de ap din atmosfer n urma expunerii la aer, acest fenomen putnd fi
observat mai ales n cazul polimerilor mbtrnii. Aceste materiale polimerice au o
structur dezordonat dependent de intensitatea i energia speciilor care bombardeaz
filmul polimeric n cretere.
Procesul de polimerizare n plasm este realizat la presiune i temperatur joas.
Exist trei clase de sisteme folosite n polimerizarea n plasm, i anume: reactoare cu
electrozi interni, reactoare cu electrozi externi i reactoare cu microunde sau frecvene
nalte (nu se folosesc electrozi).

3.Metode de caratcterizare a biosenzorilor

13

3.1.

Spectroscopie FT-IR

Spectroscopia n infrarou este o tehnic de investigare des folosit n studierea att

a materialelor organice, ct i a celor anorganice. n principiu, se bazeaz pe msurarea
absorbiei undelor electromagnetice IR ntr-un anumit interval de frecvene. Undele
electromagnetice folosite n spectroscopia IR au frecvene cuprinse n intervalul 1.9
1013 - 1.2 1014 Hz, corespunznd unor energii a fotonilor situate n intervalul 0.078 0.5 eV, conform relaiei Plank: unde h este constanta lui Planck, iar frecvena.
Acest nivel de energie nu poate excita electronii, dar poate induce excitarea
vibraional a legturilor covalente dintre atomi sau grupri funcionale. Frecvenele
pentru care are loc absorbia sunt n direct legtur cu structura moleculelor sau a
speciilor de atomi, cu tipul legturii i cu modurile posibile de vibraie (stretchingntinderi, scissoring- forfecri, rocking- legnri i twisting- rsuciri). Pentru
obinerea unui spectru IR tipic, proba de studiat este expus la un fascicul de lumin n
infrarou, iar fasciculul transmis este colectat i analizat. Folosind frecvenele de
absorbie caracteristice, diferite grupri funcionale pot fi identificate rapid.
3.2.

Spectroscopie Raman

Efectul Raman este un efect de mpratiere neelastic a radiaiei electro-magnetice

la interaciunea acesteia cu substana, cnd pot avea loc urmtoarele fenomene:
Emisie de radiaie datorit oscilaiilor electronilor, cauzate de unda electro-magnetic;
Molecula devine polarizat la frecvena radiaiei incidente;
Au loc trei tipuri de mprtiere: Tyndall (interacia luminii, preponderent cu
particulele coloidale, dect cu moleculele mici), Rayleigh (mprtierea elastic a luminii,
fr modificarea lungimii de und, este proporional cu inversul puterii a patra a
lungimii de und), Raman (mprtiere inelastic, cu modificarea frecvenei, este mult
mai slab, n ceea ce privete intensitatea, dect mprtiere de tip Rayleigh i, este una
dintre principalele metode de analiz chimic nedistructiv).
Din spectrele Raman ale moleculelor se pot obine urmtoarele informaii:
- Ofer informaii despre gruprile nepolare;
- Tehnica Raman este complementar tehnicii IR;
- O molecul centrosimetric nu are benzi comune IR i Raman;
- Determinarea structurii moleculare;
- Studiul sistemelor amorfe i cristaline;
- Caracterizarea materialelor.
3.3. Spectrofotometrie UV-VIS
14

Spectrofotometria este o ramura a spectroscopiei moleculare ce se ocupa cu

analiza calitativa si cantitativa a spectrelor de absorbtie a radiaiilor electromagnetice in
domeniul de lungimi de und 200 - 1100 nm de ctre speciile absorbante aflate de obicei
in soluii. Din cauza faptului ca in domeniul UV-VIS nu toate substantele si elementele
chimice au spectre de absorbtie cu maxime clare, analiza calitativa nu este atat de
reprezentativa ca cea cantitativa. Legea de baz folosit n analizele sau determinrile
spectrofotometrice, care descrie fenomenul de absorbie, a fost gsit experimental i
fundamentat teoretic de ctre Bouguer (1729), constituind o legtur ntre cantitatea de
lumin absorbit i proprietiile soluiei pe care o strbate.
3.4.

Microscopie de forte atomice

Primul STM a fost inventat n 1981, iar mai tarziu n 1986, aceiai inventatorii,
Gert Binning i Heinrich Rohrer de la Laboratorul de Cercetare IBM Zrich, obin
premiul Nobel n Fizic. STM folosete un vrf conductor ascuit, ntre el i suprafaa
probei studiate fiind aplicat o tensiune de polarizare.
Mai trziu, a aparut microscopul de fore atomice (AFM), microscop care a avut ca
punct de plecare schema de funcionare a STM. Daca n cazul STM-ului, era msurat
curentul de tunelare, AFM-ul folosete fora exercitat ntre vrf i suprafaa probei.
AFM-ul poate fi folosit att n mod static (mod contact), ct i dinamic (tapping i noncontact). Ca i STM-ul, AFM-ul se bazeaz pe o tehnic de baleiere pentru a produce
imagini 3D ale suprafeei probei la rezoluii mari. Se msoar fore foarte mici (mai puin
de 1 nN) ntre suprafaa vrfului i suprafaa probei prin detectarea micrii cantileverului
flexibil, urmrindu-se astfel profilul probei. n timp ce n cazul STM, trebuie ca probele
investigate s fie conductoare, AFM-ul poate fi folosit i pentru orice tip de suprafaconductor sau izolator.
Vrful AFM este foarte ascuit, are de regul mai puin de 50 nm n diametru, iar
suprafeele investigate sunt de dimensiuni de sub 100 m. Timpul de scanare poate varia
de la cteva secunde la zeci de minute n funcie de dimensiunea de scanare i de
nalimea denivelrilor de pe suprafaa probei. Mrirea obinut este ntre 100 X i
100.000.000 X pe axa orizontal (x-y) i pe vertical.
3.5.

Microscopie electronica de baleiaj

Un microscop electronic este un tip de microscop care utilizeaza un fascicul de

electroni pentru a ilumina specimenul si produce o imagine marita. Microscoapele
electronice au o putere mai mare decat un microscop optic, deoarece electronii au o
lungime de unda in jur de 100.000 de ori mai mica decat lumina vizibila (fotoni) si pot
realiza mai mult de 50 pm rezolutie si o marire de pana la aproximativ 10.000.000 de ori,
pe cand un microscop optic este limitat la o rezolutie de aproximativ 200 nm si o putere
de marire de 2000 de ori.
Microscopul electronic foloseste lentile electrostatice si electromagnetice pentru a
controla fasciculul de electroni pe care il concentreaza pentru a forma o imagine. Aceste
15

lentile sunt analoage, dar diferite de lentilele de sticla a unui microscop optic care
formeaza o imagine marita, concentrandu-se pe lumina sau prin specimen. Microscoapele
electronice sunt folosite pentru a observa o gama larga de probe biologice si anorganice,
inclusiv microorganisme, celule, molecule mari, probe de biopsie, metale si cristale.
Industrial, microscopul electronic este adesea folosit pentru controlul calitatii si
analizarea defectelor de fabricatie de marimi foarte mici/microscopice.
3.6.

Calorimetrie diferentiala de baleiaj

Calorimetria diferenial de baleiaj (DSC) este o tehnic prin care se msoar

energia necesar pentru a stabili o diferen aproape zero ntre o substan i un material
inert ce sunt supuse unor regimuri de temperatur identice ntr-un mediu nclzit sau rcit
cu o rat controlat. Temperatura este msurat n mod continuu i este folosit o tehnic
diferenial pentru controlarea fluxului de cldur ctre prob i pentru a echilibra
diferenele de cldur dintre prob i referin.
3.7.

Analiza termogravimetrica

Analiza termogravimetric (TGA) este o metod analitic folosit pentru studierea

stabilitii termice a materialelor i pentru determinarea fraciei de componente volatile
prin monitorizarea modificrii masei la ncalzire. Msurtorile pot fi efectuate n aer sau
n atmosfer controlat de gaz inert, iar masa este nregistrat n funcie de temperatur.
Aceast metod se bazeaz pe analiza dependenei pierderii de mas de
temperatura unei probe de material cnd acesta este nclzit cu o vitez dat, constant,
pn la finalizarea procesului de degradare (masa rmas rmne constant cu creterea
temperaturii) - aprox. 900 C. Este o metod larg utilizat n studiul materialelor
polimerice, deoarece ofer informaii asupra creterii stabilitii termooxidative a
materialului, deci o mbuntire a performanelor sale. Aparatul care permite
determinarea continu a masei unei probe n timpul programului de temperatur se
numete termobalan.
3.8.

Voltametrie

n voltametrie se msoar curentul rezultat ntr-o celul de electroliz n urma

aplicrii, unei diferene controlate de potenial ntre un electrod indicator uor polarizabil,
numit electrod de lucru, i un electrod cu potenial constant numit electrod de referin.
Voltametria cuprinde un grup de metode electroanalitice n care informaia despre
analit se obine din analiza curbei intensitate - potenial (voltamograma) nregistrat
pentru un sistem electrochimic.
Aceast tehnic furnizeaz att informaii calitative ct i cantitative despre
sistemul care este studiat. Prin voltametrie se pot obine informaii privind mecanismul de
desfurare a unei reacii chimice. De asemnea se pot obine informaii i despre cinetica
16

procesului; permite deasemenea calculul mrimilor ce intervin n proces (ca exemplu,

coeficienii de difuzie ai speciilor electroactive din sistem).

17