Curs13

Ce este un biosenzor?
Dispozitiv analitic care foloseste o reactie biologica
sau o molecula biochimica pentru detectarea
analitului si converteste un raspuns biologic intr-un
semnal procesabil si cuantificabil

Test de sarcina

Dispozitiv de monitorizare a glucozei (pentru

pacienii cu diabet zaharat)

Un senzor care integreaza un element biologic cu un

traductor fizico-chimice pentru a produce un semnal
electronic proportional pentru un singur analit care este
apoi transportat la un detector .

Dispozitiv detectie analit care combina un component

biologic cu un detector fizicochimic.
Componenta: - alcatuit din 3 parti
1. un element biologic sensibil material biologic
ex: tesuturi
microorganisme
cellule receptoare
enzime
acizi nucleici
anticorpi
acizi nucleici
material care imita un produs viu

 2.

traductor
3. detector- functioneaza intr-un mod

fizicochimic
optic,
piezoelectric
electrochimic,
termometric,
sau magnetic.

Tatal biosenzorului

Profesor Leland C Clark Jnr

19182005

Istoria Biosenzorilor

1916

Primul raport privind imobilizarea de proteine:

sdsorbtia de invertaza pe carbune activat.

1922

Primul electrod de pH din sticla

1956

1962

Prima descriere a unui biosenzor: un electrod

amperometric pentru glucoza bazat pe enzime (Clark)

1969

Guilbault and Montalvo Primul biosenzor potentiometric:

ureaza imobilizata pe amoniac pentru a detecta ureea

1970

Bergveld tranzistor ion selectiv cu efect de camp (ISFET)

1975

Clark publica lucrarea sa finala despre electrodul de

oxigen.

Lubbers and Opitz au descris un senzor de fibra optica

pentru a masura dioxidul de carbon.

History of Biosensors

1987

Biosenzor pentru determinarea glicemiei lansat de

MediSens ExacTech

1990

biosenzor de la BIACore

1992

1996

Lansare glucocard

1998

Biosenzor pentru glucoza de la LifeScan FastTake

1998

Curent Puncte Quantom , nanoparticlue, nanofire, nanotuburi ;

Biosenzor pentru sange portabil de la -STAT

Roche Diagnostics prin fuziobarea lui Roche si

Boehringer

Detector

Analit

Raspuns
TARGET ANALYTE

Analiza

Detectie

Semnal

Manipulare
proba/
preparare

Ce vrei sa detecteze?
Molecule Proteine, ADN Glucoza, Vitamine Zahar, ioni metalici

Bacterii
Glucoza

Proteine
ADN

Cum recunosc in mod specific analitul?

ADN
complementar
Antigen

Altele:
enzime/substrat
APN/ADN sau
APN/ARN

Anticorp

ADN

Monitorizarea concentratiei de glucoza la

pacientii cu diabet
alte scopuri medicale
aplicatii legate de mediu- ex. determinarea
pesticidelor din apele contaminate ale raurilor
senzori sensibili la concentratia de bacterii din
aer sau alimente pentru a impiedica activitatile
de bioterorism
Detectia de agenti patogeni
Determinarea nivelului de substante toxice dupa
bioremediere
Detectia si determinarea de organofosfati

Test de sarcina
Detecteaza proteinei hCG in urina.

Dispozitiv de monitorizare glicemiei (pacientii diabetici)

Monitorizeaza nivelul glucozei din sange.

Boli infectioase
biosenzor pt. RBS

Biosenzor de tp vechi pentru CO2

din mine

Platforma Biosenzor
Biacore

 trebuie

s converteasc n mrimi electrice

parametri generali ca:
entalpia de reacie (termistorul),
modificri ale masei depuse (cristal
piezoelectric),
grosimi ale unor straturi transparente
(dispozitive optoelectronice),
concentraii de substane sau ioni
(traductoare ISE).

 La

senzorii de metabolism - reacii chimice

ntre analii i anumii receptori enzimatici cu
degajare / absorbie de cldur.
Nu se msoar cantitatea analitului, ci variaia
de temperatur, T.
Entalpiile molare reacii catalizate de enzime

Enzima-receptor se imobilizeaz pe sticl poroas

pe suprafaa unui termistor.
Se imerseaz totul n soluia de msurat.
Termistorul joac rolul traductorului i furnizeaz
T.
De aici rezult numrul de moli de analit, conform
relaiei:

unde este numrul de moli de analit,

C este cldura molar a dispozitivului
Dezavantajul principal este schimbul de cldur ce
apare ntre diversele componente ale
experimentului,
ceea ce va induce erori mari n evaluarea lui T.
Optimizrile vizeaz izolarea calorimetric a
biosenzorului ntr-un reactor.

 Cu

ajutorul traductorilor optici - indica variaia

unor parametri precum:
coeficient de absorbie a luminii,
lungime de und,
indice de refracie,
grosimi ale unor
straturi transparente.

Principiul de detectare
a albuminei serice
cu un senzor
optoelectronic.

 Receptorul

a fost imobilizat pe o membran

de bromocresol transparent.
Curgerea biolichidului purttor de albumin a
determinat captarea ei pe receptori.
Creterea grosimii stratului de analit se face
ntre

o surs de lumin (led)

i un detector de lumin (fotodiod).

Curentul

prin fotodiod scade pe msur ce

crete grosimea stratului de albumin depus
pe receptor.

 Principiul

de lucru:

urmrete scderea frecvenei de rezonan a unui

cristal piezoelectric
cnd se absoarbe un material strin la suprafaa sa
i-l comprim.
Cristalul este acoperit cu un material receptor.
Efectele zgomotului electric au putut fi nlturate
prin utilizarea de cristale pereche.
Aceti traductori au fost utilizai pentru detectarea:
NOx, COx, H+, microorganisme.

Reaciile electrochimice se produc la interfaa

electrod soluie,
iar reaciile biologice cu transfer de electroni se
produc la interfaa enzim soluie.
Se utilizeaz poteniometria, determin variaia
potenialului electric al unui electrod receptor n
funcie de concentraia ionilor de analit dintr-o
soluie.
Metoda tradiional de detecie a unor ioni ntr-o
substan purttoare folosete ISE (Electrozi ioni
selectivi).
Din punct de vedere electronic ISE poate fi privit
ca o surs de tensiune electromotoare (de sute de
milivoli pentru biosenzori) i cu o impedan de
ieire mare (pn la sute de M),

 Masa

electric este soluia,

iar ieirea sursei este electrodul de referin.
Dac concentraia ionilor de analit din soluie
se modific,
atunci potenialul electrodului sensibil la
aceti ioni (receptorul) se modific dup
relaia lui Nerst.
Ex. n cazul pH-ului o scdere a acestuia cu o
unitate, determin creterea tensiunii
furnizate cu circa 55mV.

biosenzorii electrochimici folosesc

amperometria.
au loc reacii chimice de oxido-reducere cu
transfer de electroni n medii electrolitice.
n domeniul biosenzorilor- a nsemnat detectarea
unui analit prin msurarea concentraiei unui
produs de metabolism, mult mai uor de
determinat.
Pentru aceasta se folosesc electrozi cu enzime
receptor aezate n unul sau mai multe straturi.
Pentru msurarea concentraiei de glucoz se
folosete enzima GOD care accelereaz foarte
mult procesul de oxidare al glucozei, n urma
cruia rezult i H2O2.

 Este

mult mai uor s se msoar

concentraia de H2O2,
dup care se calculeaz din reacie
concentraia de glucoz.
Curenii care se stabilesc n aceste straturi
sunt de natura unor cureni de difuzie.
Curentul, Ilim este proporional cu
concentraia substanei care se determin
mai uor, ci, (i=H2O2)
n exemplul anterior cu glucoza

 Pentru

determinarea unui analit,

traductoare folosesc chemoreceptori direct
din lumea vie.
De ex, s-a realizat un receptor de
acetilcolin, utiliznd organul electric al
petelui Torpedo i un senzor capacitiv.
Cnd biolichidul purttor coninea acetilcolin
n concentraie mrit,
cretea tensiunea electric furnizat de
traductorul organic al petelui,
ceea ce ncrca senzorul capacitiv.

msurtori n domeniul 1....100mol/l

concentraie de acetilcolin n biolichidul
purttor prin tehnici de C-V-metrie.
Alt direcie de lucru este cuplarea unor celule
receptoare vii cu una sau mai multe fibre
nervoase.
Stimularea unor celule olfactive sau gustative cu
un anumit analit conduce la generarea unui
impuls nervos detectabil ctre neuronii din fibr.
EX: s-a realizat un senzor pentru determinarea
concentraiei de aminoacizi,
utiliznd drept traductor organul olfactiv din
antenulele crabului Calinectes Sadipus.
Antenulele, legate de o unic fibr nervoas, au
fost conectate cu o sond de platin.

Stimularea receptorilor olfactivi cu aminoacidul

L-glutamat, n concentraia 0,01...1mmol/l, a
creat impulsuri nervoase msurabile,
cu valori cuprinse ntre 10-1000V.
s-a obinut o linearitate bun
Ex: o serie de substane ca: acetilcolina,
dopamina, ioni de Na+, Ca+, K+.
Ele particip ca neurotransmitori la
propagarea impulsului nervos.
transmiterea unui impuls nervos se face pur
electric: prin deplasare de sarcin electric.
Datorit acestei comportri "electronice" a
sistemului nervos uman, s-a dezvoltat o ramur
nou n tiinele biologice:
neuroelectrofiziologia.

 Prin

Bio-FET - totalitatea dispozitivelor

biologice ce conin ca element traductor
activ un tranzistor cu efect de cmp.
Ele pot fi biosenzori (tranzistoarele ISFET,
ENFET)
sau dispozitive de testare i investigare a
materialelor biologice,
sau dispozitive create n alte scopuri.

Tranzistoarele ISFET (Tranzistoare sensibile la

efectul de Ion Sensitive Field Effect Transistor)
au derivat direct din ISE (electrozii sensibili la
ioni).
constructiv, dispozitivul ISFET este un MOSFET,
pentru care receptorul - un electrod ce sezizeaz
doar anumii ioni (de exemplu de Ca+, K+)
este un metal special (Pt, Pd, Ir).
Regiunea porii este imersat ntr-o soluie
biologic cu analit.
O categorie aparte o reprezint tranzistoarele
MEM-FET (MEMbrane-FET),
electrodul receptor este o membran organic
depus n dreptul porii tranzistorului, i care
capteaz selectiv sarcina ionic.

structura i simbolul ales pentru tranzistorul

ISFET.

 Tensiunile

aplicate: VS=VSB=0, VG>0 i VD>0 se

menin constante.
Cnd concentraia ionilor de analit crete,
se modific diferena de potenial metalsemiconductor.
Deci variaz VFB i n consecin potenialul
porii.
Rezult o mbogire a canalului n
electroni, iar n final o cretere a curentului
de dren.
Fluctuaiile concentraiei de ioni de analit se
traduc prin fluctuaii ale curentului ID.

sensibilitate curent-concentraie de analit ct

mai mare.
este mai favorabil un regim de lucru la tensiuni
VGt mici,
astfel nct s se poat neglija efectul atenurii
mobilitii sub influena cmpului electric
transversal.
Rezult astfel, o dependen logaritmic curentconcentraie.
dac s-ar lucra sub prag, unde ID depinde
exponenial de VG , prin compunere cu relaia lui
Nerst ar rezulta o dependen polinomial
curent-concentraie, net superioar funciei
logaritmice.

 ISFET-urile

care determin concentraia

ionilor de H+ se mai noteaz prin pH-FET-uri,
innd cont c pH=-lg [cH+].
O soluie apoas este neutr cnd pH=7,
Soluia apoas este acid pentru pH<7 i
bazic pentru pH>7.
Pentru electrolitul complex al organismului
uman neutralitatea are loc de asemenea cnd
cH+=cOH-, dar aceasta se ntmpl la
temperatura de 370C pentru un pH=6,75.
Sngele are pH=7,36, deci se comport slab
bazic.