Sunteți pe pagina 1din 85

1

C CA AP PI IT TO OL LU UL L 1 1
T TE EH HN NI IC CI I D DE E S ST TU UD DI IU U N N B BI IO OL LO OG GI IA A C CE EL LU UL LA AR R

I. INTRODUCERE
Familiarizarea cu metodele i instrumentele oricrei tiine este esenial pentru o bun
nelegere a aplicaiilor. Vor fi prezentate n continuare cele mai uzuale metode folosite
pentru studiul celulelor i principiile ce le implic aceste metode: uniti de msur,
pregtirea preparatelor pentru examinare, microscopia optic, microscopia n contrast de
faz, microscopia n lumin polarizat, microscopia electronic, criofracturarea,
radioautografia, examinarea celulelor vii, izolarea i studiul in vitro a liniilor celulare pure.
Cele mai importante uniti de msur folosite n biologia celular sunt micrometrul i
nanometrul. Angstrom-ul (; 10
-10
m) nu mai este recunoscut n sistemul internaional de
uniti i n schimb se folosete nanometrul (nm; 10
-9
m) ce reprezint echivalentul a 10.
Micrometrul (m) a nlocuit termenul de micron dar are aceeai valoare de 10
-6
m.

II. PREGTIREA ESUTURILOR PENTRU EXAMINAREA MICROSCOPIC
Cel mai obinuit procedeu folosit pentru studiul celulelor este prepararea de seciuni
tisulare ce pot fi studiate cu ajutorul microscopului optic. Prin microscopie optic, celulele
sunt examinate prin transiluminare. Deoarece esuturile i organele sunt prea grosiere
pentru a permite transiluminarea lor, s-au dezvoltat o serie de tehnici pentru obinerea de
seciuni fine, translucente. n unele cazuri straturi foarte fine de esut sau membrane
transparente a unor animale vii pot fi observate la microscop fr secionare prealabil a
esutului. n aceste cazuri este posibil studiul acestor structuri pentru perioade ndelungate
i n diverse condiii fiziologice i experimentale. Dac se dorete realizarea unui preparat
permanent, fragmente mici din diverse structuri pot fi fixate, ntinse pe lame de sticl,
colorate i montate cu rezin, apoi examinate la microscop. n majoritatea cazurilor,
esuturile necesit o secionare foarte fin nainte de a fi examinate. Aceste seciuni sunt
realizate cu precizie de instrumente denumite microtoame, iar organul sau esutul trebuie
pstrat i pregtit pentru secionare.
A. Fixarea
1. Pentru a evita digestia celulelor de ctre enzime (autoliza) sau bacterii i pentru a
pstra structura, piese din organul examinat necesit un tratament prompt i adecvat
nainte sau imediat dup ndeprtarea din corp.
2
a. Acest tratament fixare const, de obicei, n scufundarea esuturilor n ageni
stabilizatori sau prin perfuzarea organelor cu aceste substane pentru a menine pe
ct posibil caracteristicile morfologice i moleculare ale esuturilor respective.
b. Substanele chimice folosite pentru pstrarea esuturilor sunt denumii fixatori.
(1) Unii fixatori (ex. clorura de mercur, acidul picric) realizeaz precipitarea i
coagularea proteinelor.
(2) Alii (ex. formalina, glutaraldehida) nu determin coagularea proteic.
(3) Toi fixatorii au att efecte favorabile dar i nefavorabile. Scopul este de a
obine amestecuri fixatoare ce combin efectele dorite i minimalizeaz efectele
nedorite.
(a) Cel mai utilizat amestecuri sunt amestecul Bouin, compus din acid picric,
formalina (o soluie saturat, 37% formaldehid n ap), acid acetic i ap; i
formalina Zenker (amestecul Hely) ce conine formalin, dicromat de potasiu,
clorur de mercur i ap.
(b) Cei mai simpli fixatori folosii sunt soluia salin de formalin 10% i soluia
de glutaral-aldehid tamponat 2-6%.

Tabel 1-1. Etapele de preparare tisular pentru examinare n microscopia optic
Etapa Scop Durata
Fixarea in fixatori simpli sau
compui (amestec Bouin)
Pentru a pstra morfologia
tisular i compoziia molecular
Aproximativ 12 h, n funcie de
fixator i mrimea piesei
Deshidratarea n concentraii
graduale de etanol (70%-100%)
Pentru a nlocui apa celular cu
solveni organici
6-24 h
Clarificare n benzen, xilen sau
toluen
Pentru a impregna esuturile cu
un solvent de parafin
1-6 h
Includere n parafin topit (58-
60C)
Parafina ptrunde n toate spaiile
intercelulare i chiar n celule
realiznd o rigiditate a esuturilor
pentru secionare
-6 h
2. Procesul de fixare este complex i nu este pe deplin cunoscut. ns se cunoate
faptul c formaldehida i glutaraldehida reacioneaz cu gruprile aminice (NH
2
) ale
proteinelor tisulare. Datorit rezoluiei nalte oferite de microscopul electronic, este
necesar n acest caz, o fixare mai bun pentru a pstra cu finee detaliile
ultrastructurale. Pentru acest lucru, o procedur de dubl fixare a devenit procedura
standard pentru studiile structurale de finee: prin folosirea unei soluii de
glutaraldehid, urmat de cea de a doua fixare cu tetraoxid de osmiu. n timp ce
3
glutaraldehida realizeaz cross-link-ul proteinelor, scopul tetraoxidului de osmiu este
de a fixa i colora lipidele i proteinele.
B. Includerea
1. Pentru a obine seciuni folosind microtomul, esuturile trebuie infiltrate, dup fixare,
cu substane de includere ce induc esutului respectiv o consisten rigid.
a. Aceste substane sunt gelatina, celoidina, parafina, i cele mai recente, rezinele
plastice.
b. Parafina este folosit de rutin pentru microscopia optic; rezinele de tip epoxy
(Epon sau Araldite) sunt folosite pentru microscopia electronic.
2. Procesul de includere sau de impregnare tisular este de obicei precedat de 2
etape: dehidratare i splare.
a. n prealabil, apa existent n fragmente este extras prin tratri succesive n
amestecuri de concentraii diferite de etanol i ap (de obicei de la etanol 70% la
etanol 100%).
b. Etanolul este apoi nlocuit de un solvent dizolvabil n mediul de includere. n cazul
includerii cu parafin, solventul este xilena.
(1) n timp ce esuturile sunt infiltrate cu solvent, de obicei acestea devin
transparente. Odat impregnat cu solvent, esutul este plasat n parafin topit de
obicei la 58-60C. Cldura determin evaporarea solventului, i spaiile sunt
umplute de parafin.
(2) esuturile incluse pentru microscopia electronic sunt de asemenea
deshidratate in soluii de etanol i ulterior infiltrate cu solveni plastici cum este
oxidul de propilen. Aceti solveni sunt miscibili cu i apoi nlocuii de soluii
plastice (Epon, Araldite).
3. Blocurile de parafin ce conin esuturile sunt secionate de lama de oel a
microtomului la grosimea de 1-20 m. Seciunile sunt apoi plasate pe lame de sticl.
a. Pentru microscopia electronic, sunt necesare seciuni mult mai fine (0,02-0,1 m)
i includerea se realizeaz printr-un plastic dur de tip epoxy. Blocurile obinute sunt
att de dure, nct pentru secionarea lor sunt necesare lame de sticl sau diamant.
b. Deoarece fasciculul de electroni nu poate penetra sticla, seciunile extrem de fine
sunt plasate pe un cadru de metal (de obicei de cupru). Acele poriuni ale seciunii ce
se evideniaz printre ochiurile cadrului pot fi examinate la microscopul electronic.
4. Imersia esuturilor n solveni, cum este xilena, dizolv lipidele celulare, ceea ce este
un efect nedorit, atunci cnd dorim studierea acestor componente.
4
a. Pentru a preveni pierderea de lipide, se folosete criomicrotomul cu ajutorul
cruia, esuturile devin consistente la temperaturi sczute pentru a determina
rigiditatea necesar secionrii.
b. Criomicrotomul i succesorul su, mai eficient, criostatul permit ca seciunile
s fie obinute rapid fr a necesita procedura de includere descris anterior.
c. Acestea sunt adesea utilizate n clinic, deoarece permit studiul rapid a
specimenelor patologice n timpul procedurilor chirurgicale. Sunt de asemenea
eficiente n studiile de histochimie a unor enzime foarte sensibile sau a unor molecule
mici, deoarece nghearea nu inactiveaz enzimele i previne difuziunea
micromoleculelor.
B. Colorarea
1. Cu cteva excepii, majoritatea esuturilor sunt incolore, astfel c observarea lor la
microscopul optic este dificil. Astfel au fost elaborate diverse metode de colorare ce
nu doar realizeaz evidenierea diverselor componente tisulare, dar permit i
diferenieri ntre diversele esuturi.
a. Colorarea se realizeaz prin folosirea de amestecuri ce coloreaz selectiv
componentele tisulare.
b. Majoritatea coloranilor se comport ca i compui acizi sau bazici i au tendina
de a forma legturi electrostatice cu radicalii ionizabili ai esuturilor.
c. Componentele tisulare ce se coloreaz cu colorani bazici sunt denumite bazofile,
iar cele cu afinitate fa de coloranii acizi sunt denumite acidofile.
(1) Exemple de colorani bazici sunt albastru de toluidin i albastru de metilen.
Hematoxilina se comport ca i un colorant bazic, adic coloreaz componentele
celulare bazofile. Principalele compomente celulare realizeaz legturi ionice i
reacioneaz cu coloranii bazici datorit compoziiei n acizi a acestora
(nucleoproteine i glicozaminoglicani).
(2) Coloranii acizi (ex. orange G, eozina, fucsina) coloreaz componentele bazice
prezente n proteinele citoplasmatice.
(3) Dintre toi colorani, combinaia hematoxilinei cu eozina (HE) este cea mai
utilizat.

Tabel 1-2. Exemple de tehnici de colorare
Tehnica Componente Nucelu Citoplasma Colagen Fibre
elastice
Fibre
reticulare
Hematoxilin- Hematoxilin i Albastru Roz Roz Variabil
5
eozin eozin
Colorare
elastic Weigert
Rezorcin i
fucsin, HCl,
hematoxilin,
acid picric, acid
acetic glacial
Gri Galben Rou Negru
Impregnare
argentic
Soluie salin de
argint
Maro
nchis
Negru

2. O multitudine de ali colorani sunt utilizai n diverse procedee citologice. Cu toate
c sunt folositoare pentru vizualizarea diverselor componente celulare, de obicei nu
realizeaz o analiz a compoziiei chimice a celulelor studiate. Pe lng colorare,
impregnarea cu metale, de tipul argintului sau aurului este o tehnic mult mai utilizat,
n special n studii ale sistemului nervos.
3. n microscopia electronic, imaginea format se datoreaz capacitii celulelor sau
colorantului de a absorbi sau a mprtia electronii. Sruri de metale grele cum ar fi
citratul de plumb i acetatul de uraniu, determin o absorbie ridicat a electronilor sau
o capacitate de refracie i sunt coloranii de baz folosii n microscopia electronic.

III. MICROSCOPIA OPTIC
Investigaiile citologice se bazeaz pe preparatele microscopice numite extemporanee
sau nepermanente i cele permanente, care se examineaz fie la microscopul optic sau
fotonic, fie la alte tipuri de microscoape, cum sunt: microscoape cu fluorescen,
microscoape cu lumin ultraviolet (UV), microscoape cu cmp ntunecat, microscoape de
for atomic i microscoape electronice prin transmisie (TEM) sau prin baleiaj (SEM).
A. Microscopul optic uzual
1. Printre primele instrumente folosite pentru studiul celulelor a fost microscopul optic
(Fig. I-1), oferind posibilitatea studierii detaliilor ce nu pot fi observate cu ochiul liber.
Aceste detalii pot fi observate pe baza proprietilor luminii (natura ei ondulatorie), a
proprietilor optice ale materiei (dimensiuni, indici de refracie, coeficieni de absorie)
i a proprietilor fiziologice ale ochiului.
a. Formarea imaginii este supus legilor opticii. Microscoapele optice sau fotonice
utilizeaz pentru obinerea unei imagini mrite a preparatelor, efectele optice ale
lentilelor asupra radiaiilor fotonice ale spectrului luminos.
6
b. Pe retin se formeaz imaginea redus i rsturnat a tuturor obiectelor spre care
ne ndreptm privirea. Capacitatea ochiului de a distinge detaliile obiectelor vizibile
se numete acuitate vizual.
(1) Acuitatea vizual este condiionat de structura retinei i de distana care
separ detaliile unele de altele. Detaliile unui obiect pot fi vzute distinct numai
cnd imaginea lor se formeaz pe o regiune a retinei numit pata galben.
(a) Pentru ca dou puncte, A i B, ale unui obiect s fie percepute distinct este
necesar ca imaginile lor pe retin, a i b, s se formeze la o distan de 4 m;
dac distana respectiv este sub 4 m vom avea impresia existenei unui
singur punct.
(b) Explicaia const n aceea c cele dou imagini a i b, trebuie s se formeze
pe dou celule cu conuri din retin separate printr-o alt celul neimpresionat,
diametrul unui con fiind de 4 m.
(2) La aceast distan de 4 m a proieciei pe retin corespunde o distan AB de
0,1 mm (100 m) dac obiectul se afl la distana vederii distincte a ochiului
normal (20-25 cm). Distana minim la care dou puncte se pot observa distinct se
numete distan separatoare minim sau putere de rezoluie (rezoluie) (Fig I-
2). Rezoluia ochiului uman este prin urmare de 100 m.
c. Microscopia se bazeaz pe proprietatea lentilelor convergente de a da imaginea
unui obiect luminos aezat naintea lor, la o anumit distan (Fig. I-3).
(1) Dac obiectul AB se afl n faa unei lentile convergente, la o distan mai
mare dect distana focal (f), de cealalt parte a lentilei se va forma imaginea
real, mrit i rsturnat, ab, la ntlnirea razelor refractate cu axele
secundare.
(2) Dac obiectul este ntre lentil i focar, imaginea obiectului se va forma
naintea lentilei (i napoia obiectului), imaginea fiind mrit, dreapt i virtual.
Se numete virtual fiindc nu poate fi proiectat pe un ecran sau pe o plac
fotografic, spre deosebire de cea real.
2. Microscopul este compus din dou sisteme de lentile: un sistem numit obiectiv, n
faa cruia se aeaz obiectul i un sistem numit ocular, prin care privim imaginea
proiectat de obiectiv, la fel cum am privi cu o lup un obiect (Fig. I-4, Fig. I-5).
a. Sistemele de lentile au o construcie special pentru a elimina aberaiile lentilelor.
b. n mod simplificat putem considera obiectivul i ocularul echivalente fiecare unei
lentile convergente.
7
0
0,6
sin
d
n

(1) Imaginea format de obiectiv, real, mrit si rsturnat, se formeaz ntre


focarul F i lentila ocularului. Prin urmare imaginea final obinut Ia microscop
este mrit, virtual i rsturnat fa de obiect.
(2) Dac dorim s proiectm imaginea pe un ecran sau s o fotografiem este
necesar s utilizm un sistem optic special care s dea o imagine final real.
c. Mrirea produs de microscop este produsul mririi date de obiectiv i a mririi
date de ocular. n practic, mrirea maxim produs la microscopul optic este de
1500x corespunznd unui obiectiv ce mrete de 100x i unui ocular ce mrete de
15x.
3. Rezoluia microscopului (ca i a oricrui instrument optic sau a ochiului uman)
este dat de formula lui Abbe:


d
0
distana separatoare minim,
lungimea de und a radiaiei folosite pentru formarea imaginii,
n indicele de refracie al mediului dintre obiect i prima lentil a obiectivului (lentila
frontal),
unghiul de deschidere (apertur) al lentilei frontale a obiectivului, adic unghiul
format de razele divergente extreme, care, plecnd din central obiectului ptrund n
obiectiv.
a. Mrimea sin n este numit i apertur numeric. Analiznd formula reies
posibilitile pe care le avem spre a obine o rezoluie ct mai bun (d ct mai mic).
b. Utilizarea unor radiaii cu lungime de und mai mic (raze ultraviolete n cazul
microscopului de UV sau electroni n cazul microscopului electronic), n mai mare
(n=1 n aer, n=1,33 n ap i n=1,51 n ulei de cedru, folosit ca mediu optic ntre
obiect i obiectivul de imersie).
c. Rezoluia microscoapelor optice este de 0,3 m fr imersie, 0,2 m cu imersie,
0,1 m n cazul fotografierii cu raze ultraviolete.
4. Descrierea microscopului optic. Microscopul optic este constituit din: partea
mecanic, sursa de lumin i aparatul de transmis lumina, partea optic (obiectiv i
ocular).
a. Partea mecanic (stativul) (Fig. I-4) se compune din talpa sau piciorul
microscopului, coloan (n continuarea piciorului), platina sau msua microscopului
(pe care se aeaz lama), tubul (ce are la extremitile sale obiectivul i ocularul),
dispozitivul de punere la punct (viza macrometric, pentru deplasri mari ale tubului
8
i viz micrometric, pentru deplasri fine), revolverul (dispozitivul pe care se
adapteaz obiectivele).
b. Sursa de lumin este de obicei o lamp cu filament alimentat de la reea printr-
un transformator. Lumina este concentrat pe obiectivul examinat printr-un sistem de
lentile numit condensor, prevzut cu o diafragm.
c. Partea optic este reprezentat de obiectiv i ocular (Fig. I-5).
(1) Obiectivele pot fi uscate (care mresc imaginea de 6x, 10x, 20x i 40x) i cu
imersie (mrire 90x). Ocularele mresc de 5x, 7x i 10x. Prin urmare la
microscopul pentru care s-au dat cifrele de mai sus mrirea maxim este de 90 x
10 = 900.
(2) Ocularele se monteaz ntr-o lup binocular. Pentru fotografierea imaginii
vzute la microscop se demonteaz lupa binocular i n locul ei se instaleaz o
lentil de proiecie i un aparat de fotografiat.
5. Tehnica punerii la punct a imaginii la microscop
a. La extremitatea superioar a tubului se afl un ocular de mrire mic sau mijlocie.
Prin rotirea revolverului se aduce n axa microscopului un obiectiv slab (10x).
b. Se coboar condensorul pentru a obine o iluminare uniform de o intensitate
potrivit.
c. Se aeaz pe platin lama cu preparatul de studiat cu lamela n sus i se fixeaz
lama cu ajutorul valeilor.
d. Se aduce n axa optic obiectul cu ajutorul uruburilor ce deplaseaz platina.
(1) Privind din lateral se ridic platina, cu ajutorul vizei macrometrice pn la o
distan mai mic dect distana focal a obiectivului (nscris pe obiectiv: 16 mm
la obiectivul 10x, 8 mm la obiectivul 20x i 4 mm la obiectivul 40x).
(2) Privind apoi prin ocular se coboar ncet platina prin manevrarea urubului
macrometric, pn cnd apare imaginea n cmpul microscopului. Dac nu se
vede nimic, se datoreaz fie faptului c obiectul nu se afl n axa optic, fie am
cobort prea repede platina i deci operaia se reia de la nceput.
e. Nu se va cuta niciodat imaginea prin ridicarea platinei fiindc exist riscul de a
deteriora lama i obiectivul, mai ales cnd ntrebuinm obiective puternice.
Completarea punerii la punct se face cu viza micrometric.
(1) n timpul observrii, viza micrometric va fi manevrat continuu n ambele
sensuri, pentru a parcurge toate planurile preparatului i a crua acomodarea
ochiului observatorului.
9
(2) Un bun observator ine n pemanen o mn pe viza micrometric, iar cu
mna cealalt deseneaz imaginea.
f. Dup ce s-a pus la punct imaginea cu obiectivul 10x, pentru examinarea cu
obiectivul 20x (sau 40x) se rotete revolverul aducnd n axa optic acest obiectiv
fr a mica viza macrometric. Completarea punerii la punct se face numai cu viza
micrometric.
B. Examinarea n imersie
1. Partea cea mai important a unui microscop este obiectivul, fiindc de calitile lui
depind calitile imaginii.
a. Obiectivul este format din mai multe lentile montate ntr-un tub metalic.
(1) Lentila inferioar este plan convex, cu faa plan spre obiect i se numete
lentil frontal.
(2) Puterea de mrire a ei este n raport direct cu mrimea unghiului de
deschidere, adic cu unghiul format de razele de lumin divergente extreme, care
plecnd din punctul O, aflat pe obiect, ptrund n lentil.
(3) Puterea de mrire a unui obiectiv este cu att mai mare cu ct diametrul lentilei
sale frontale este mai mic.
b. ntre obiect i lentila frontal trebuie s rmn ntotdeauna un spaiu de cel puin
1,5 mm, numit distan frontal.
(1) Acest spaiu poate fi liber (aer) n cazul obiectivelor uscate sau, n cazul
obiectivelor cu imersie, poate fi ocupat de un lichid cu indice de refracie (n)
apropiat cu al sticlei, cum este apa (n=1,33) sau egal cu al sticlei, n cazul uleiului
de cedru (n=1,51).
(2) La obiectivele uscate o mare parte din razele care pleac dintr-un punct O al
obiectului, a cror oblicitate fa de axa optic a sistemului depete un anumit
unghi, vor suferi o reflexie total cnd ajung la faa superioar a lamelei (ce
acoper obiectul aezat pe lam). Deci numai o parte a conului luminos ptrunde
n obiectiv, restul fiind pierdut.
(3) n cazul obiectivelor cu imersie, dac se introduce ntre lentila frontal i lamel
ulei de cedru, cu indicele de refracie 1,51, egal cu al sticlei, sunt eliminate
fenomenele de reflexie a luminii, precum i fenomenele de refracie.
(a) Toate razele de lumin care pleac din punctul O i ajung pe lentila frontal,
indiferent de oblicitate, ptrund microscop i contribuie la formarea imaginii.
10
(b) Deci obiectivele cu imersie dau o imagine mult mai luminoas dect cele
uscate fiindc primesc toate razele conului de lumin corespunztor unghiului
de deschidere.
(c) n plus puterea de mrire a obiectivelor cu imersie este superioar celei a
obiectivelor uscate, de asemenea se pot observa mai bine detaliile de structur
ale obiectelor fiindc i rezoluia obiectivelor cu imersie este mai bun.
2. Sistemul cu imersie. n urma refraciei i reflexiei datorit trecerii din sticl n aer, o
parte din razele de lumin provenite de la obiectul microscopic (preparat) se pierd, nu
ptrund n obiectiv (razele de tip 1 din Fig. I-6).
a. Punnd pe lamela de sticl un fluid cu indice de refracie apropiat de cel al sticlei,
de exemplu ulei de cedru (n=1,51) i cobornd sistemul microscopului pn cnd
lentila frontal a obiectivului se cufund n ulei, aceste raze trec aproape nedeviate,
intrnd n obiectiv (vezi raza 2, Fig. I-6), contribuind astfel la mbuntirea calitii
imaginii.
b. Obiectivele cu imersie sunt obiective speciale, unele cu sistem telescopic pentru a
realiza mai uor apropierea de preparat fr a distruge lamela de sticl. Puterea de
mrire a acestor obiective poate fi de 60x, 90x, 100x sau 110x.
c. Microscoapele moderne pot avea oculare ce mresc pn la 20-25x, obiective cu
imersie ce mresc pn la 100-110x, precum i sisteme intermediare de mrire (ntre
obiectiv i ocular).
(1) Astfel mrirea final n microscop poate ajunge la 2000-3000x, iar prin
fotografierea imaginii i mrirea acesteia se poate ajunge la mriri mai mari.
(2) n plus folosind ca surs de lumin o lamp cu lumin UV se pot obine
rezoluii de pn la 0,1 mm, la mriri finale (dup fotografierea i mrirea imaginii)
de 6000-7000x.
d. Examinarea n imersie are aplicaii medicale importante, printre care: studiul
bacteriilor, examinri hematologice, examinri de citogenetic.
C. Tehnica examinrii n imersie
1. n continuare vom prezenta paii care trebuie urmai pentru examinarea n imersie.
a. Se plaseaz preparatul la microscop. Utiliznd obiectivul de 10x se focalizeaz
microscopul pe cmpul cel mai potrivit care conine preparatul de examinat. Se
centreaz preparatul n cmpul de examinare, manipulnd uruburile laterale ale
microscopului.
b. Se schimb obiectivul la 40x i se refocalizeaz cu mai mult finee. Din nou se
centreaz cmpul de examinare.
11
c. Se rotete obiectivul la jumtatea distanei ntre 40x i 100x.
d. Se pune o pictur de ulei de imersie pe lam, n centrul cmpului de examinare.
e. Se continu rotirea revolverului pn cnd cel de 100x ajunge n pictura de ulei.
Sub nici o form nu trebuie ca obiectivul de 40x sa ajung n ulei.
f. Folosind focalizarea de finee se refocalizeaz imaginea care ne intereseaz.
g. Imediat dup ce s-a terminat vizualizarea, se terge uleiul de pe lam i de pe
obiectivul de 100x, cu o crp nmuiat n xylol, toluen sau un substituent de xylol
special pentru acest scop.
2. Aproape toi solvenii organici, n special xylolul i toluenul sunt potenial periculoi,
sunt inflamabili i pot ptrunde in organism prin absorbie direct la nivelul pielii sau
plmnilor. Expunerea constant la aceti solveni a fost pus n legtur cu afeciuni
hepatice i chiar se consider a fi implicate n carcinogenez. Astfel este recomandat
utilizarea tuturor solvenilor cu precauie i n spaii bine ventilate.
3. Odat ce uleiul de cedru este pus pe lam, obiectivele de 10x i de 40x nu vor mai fi
folosite pn dup ndeprtarea uleiului.
a. Uleiul distorsioneaz orice imagine vizualizat la magnificaii mai mici. Astfel uleiul
se folosete doar cnd este necesar i atunci cnd nu se mai lucreaz cu magnificaii
mici.
b. Pentru utilizarea din nou a obiectivelor mici, uleiul se cur de pe lam i aceasta
este lsat la uscat.
c. Deci microscopia cu imersie este utilizat doar cnd este neaparat nevoie i
numai dup ce preparatul a fost atent examinat la magnificaii mari, uscate (40x).
D. Preparat de examinat cu imersie. Cromatina sexual (corpusculul Barr) n nucleii
celulelor din mucoasa bucal (Fig. I-7).
1. Se degreseaz cu alcool sanitar 3 lame de sticl curate.
a. Dup igienizarea cavitii bucale prin cltire de cteva ori cu ap, subiectul
deschide gura i se racleaz cu o lam mucoasa de pe faa lateral a vestibulului
bucal, ndeprtnd astfel celulele moarte, detritusurile celulare i saliva.
b. Se repet operaia cu o alt lam, recoltnd celulele din epiteliul mucoasei bucale.
c. Lama care conine celulele recoltate se aduce n contact cu o lam curat i printr-
o micare de glisare de-a lungul lamei curate se etaleaz celulele, obinndu-se
astfel frotiul. Se las lama la uscat cteva minute.
2. Se coloreaz frotiul cu fuxin bazic, prin imersarea lamei, pe rnd, n pahare
Berzelius cu: 1) metanol absolut, 15-30 minute; 2) metanol 70%, 5 minute; 3) ap
distilat, 10 minute; 4) fuxin bazic, 15-30 minute.
12
3. Se cltete lama cu ap la robinet pentru ndeprtarea excesului de colorant, apoi
se introduce n: 5) metanol, 1 minut; 6) metanol absolut 1 minut.
4. n primele dou soluii are loc fixarea, n a treia rehidratarea, n a patra colorarea
integral a nucleilor, iar n ultimele dou decolorarea nucleilor, cu excepia
corpusculului Barr, care are o afinitate mare pentru colorant, astfel nct rmne
colorat.
5. Se examineaz lama la microscop cu obiectivul cu imersie.
6. De studiat: corpusculul Barr are aspectul unui mic triunghi colorat n violet nchis cu
baza la periferia nucleului sau poate avea form semilunar sau de cupol cu
suprafaa convex spre interiorul nucleului, dar totdeauna tangent la periferia nucleului.
Restul nucleului este colorat palid n roz-violet i prezint granule de cromatin.
Corpusculii Barr nu se vd n toi nucleii datorit poziiei diferite n care pot fi situai.

IV. MICROSCOPIA ELECTRONIC
A. Generaliti (Fig. I-8)
1. Forarea barierelor invizibilului cu consecine aproape de nebnuit pentru tiinele
biologice, s-a realizat dup 1933, odat cu apariia microscoapelor electronice.
Microscopul electronic constituie un exemplu de felul cum au fost aplicate n practic
unele din marile descoperiri fcute n fizic la sfritul secolului trecut: descoperirea
razelor X, demonstrarea existenei electronului, stabilirea caracterului ondulatoriu al
electronilor i asemnarea acestora cu fotonii, stabilirea rolului de funcionare ca lentil
a cmpurilor electromagnetice cu simetrie axial asupra electronilor. Toate aceste
descoperiri au dus la fundamentarea opticii electronice ce st la baza construirii
microscoapelor electronice a acceleratoarelor de particule, a tuburilor cinescopice.
2. Fizicianul francez Louis de Broglie a emis, n 1924, ipoteza c electronii au
proprieti ondulatorii, adic le este asociat o und, din acest punct de vedere
asemnndu-se cu fotonii. Aceast lungime de und a electronului se numete
lungime de und Broglie. Prin aceasta de Broglie a demonstrat asemnarea dintre
radiaiile electronice i cele luminoase.
3. n toate tipurile de microscoape electronice, electronii generai de un tun electronic i
supui unor tensiuni de accelerare, sunt focalizai i dispersai pentru a forma o
imagine prin trecerea lor prin cmpuri electrostatice sau electromagnetice n funcie de
tipul constructiv de microscop. Lungimea de und a fasciculului de electroni este
aleas n funcie de tensiunea de accelerare, de la 0,0859 la 20 kV, la 0,0028 la
400kV, permind explorri n microcosmosul celular pn la nivel molecular. Cele mai
13
perfecionate microscoape electronice aflate n exploatare n diferite laboratoare au
rezoluii garantate de 2-3 (n condiii speciale 1,2 i putere maxim de mrire pe
placa fotografic de 800 mii ori).
4. Microscoapele electronice existente se mpart dup tipul de construcie i destinaia
lor n:
a. Microscoape electronice de transmisie (TEM Transmission Electron
Microscope), utilizate pentru cercetri ultrastructurale.
b. Microscoape electronice de baleiaj (SEM Scanning Electron Microscope),
folosite la studiul ultramorfologiei suprafeelor cu ajutorul electronilor secundari sau
reflectai.
c. Microscoape electronice de transmisie i baleiaj (STEM Scanning Transmission
Electron Microscope), ce permit studiul ultrastructural prin transmisie de electroni i
al suprafeelor prin electroni secundari sau reflectai pe principiul SEM.
d. Microscoape electronice analitice de transmisie (TEAM) folosite pentru cercetri
simultane ultrastructurale i analitice.
e. Microscoape electronice sistemice, aparate cu funcionalitate de sistem ce permit
cercetri multiple simultan pe acelai preparat.
f. Microscoape electronice cu fotoemisie (PEM Photoelectron Emission
Microscope) cu aceleai aplicaii ca i cele de tip SEM.
g. Microsonde electronice (EPI - Electron Probe Instrument) utilizate n analize
elementare i n studiul suprafeelor.
h. Microscoape ionice cu emisie de cmp (FIM - Field Ion Microscope) cu ajutorul
crora se poate vizualiza direct orientarea atomilor ntr-un material.
B. Microscopia electronic de transmisie (TEM)
1. Microscopia electronic prin transmisie este determinat, pe de o parte de
interaciunea cmpurilor electromagnetice produse de lentile cu electronii, influennd
parametrii electronooptici i, pe de alt parte de interaciunea electronilor cu proba.
Pentru ca electronii s poat tranversa proba este necesar o grosime suficient de
mic a ei i totodat energii de accelerare suficient de mari ale electronilor.
2. Astfel, deosebim microscoape electronice de transmisie convenionale CTEM, a
cror tensiuni de accelerarea electronilor sunt cuprinse ntre 20-125 kV (pentru probe
biologice se folosesc n mod curent tensiuni de 80 kV) i microscoape de voltaj nalt
(HVEM), ale cror tensiuni ajung la 3 MV (3000 kV) i chiar mai mult.
3. O seciune transversal printr-un microscop electronic relev o serie de elemente
constructive ca: sistemul de vidare, tunul electronic, camera probei, ecranul
14
fluorescent, dispozitivul de fotografiere i blocurile speciale pentru alimentarea
electric.
4. Datorit complexitii sale tehnologice de a meniune un fascicul de electroni cu un
diametru de 1-2 m n condiiile de paraxialitate impuse de legile opticii pe o lungime
de cel puin un metru, putem distinge n cadrul microscopului electronic mai multe
etaje, la fel de importante n funcionarea lui. Astfel, evideniem:
a. sistemul electronooptic;
b. sistemul electronic i consola de comad;
c. sistemul de vid.

a. Sistemul electronooptic
(1) Sistemul electronooptic sau sistemul responsabil de realizarea imaginii,
localizat n coloana microscopului, este alctuit din: sistemul de iluminare, camera
pentru preparat, sistemul de formare a imaginii, camera de observaie i camera
fotografic.
(2) Principial, realizarea imaginii la microscopul electronic nu difer de
microscoapele obinuite, fotonice.
(3) Astfel, ca i la microscopul fotonic, este necesar o surs de radiaii tot de
natur electromagnetic, aa numita radiaie X a crei lungime de und este ns
de 10
5
-10
6
mai mic dect a radiaiei verzi, aflat la jumtatea spectrului vizibil,
deci sub 0,1 ceea ce va permite detalieri morfostructurale de ordinul
angstromului. Reamintim c scara de 1 este scara atomic.
b. Sistemul electronic i consola de comand
(1) Sistemul electronic, deosebit de important, este alctuit n principal la
microscoapele moderne din dou blocuri: unul responsabil de realizarea unei
tensiuni nalte, bine stabilizate, care s permit obinerea rezoluiei propuse, sub
10 , al doilea fiind responsabil de realizarea unui curent bine stabilizat pentru
alimentarea lentilelor, micornd pe ct posibil aberaiile lor.
(2) Evident c accesarea luminii, rezoluiei i claritii imaginii se realizeaz
electronic prin consola de comand situat pe un panou frontal.
c. Sistemul de vid
(1) Pentru a mpiedica interaciunile dintre radiaiile X i moleculele de aer, deci
obinerea unui fascicul coerent cu o deplasare perfect rectilinie pn la ecranul
fluorescent, este necesar realizarea n coloana microscopului a unui vid nalt de
aproximativ 10
-4
-10
-6
torr i chiar mai mult.
15
(2) Sistemul de vidare conine una sau dou pompe rotative care asigur un vid
preliminar i una de difuzie care ridic vidul la cotele cerute de rezoluia
microscopului. Totodat, sistemul conine o serie de supape manuale i automate
cu rol de protecie n timpul utilizrii instrumentului.
C. Microscopul electronic cu voltaj nalt (HVEM)
1. Microscop de transmisie ce folosete o tensiune mai mare de 300.000 V, ajungnd,
la unele tipuri, pn la 3-5 MeV.
2. Primul microscop electronic cu o tensiune de accelerare de 1 milion de voli (1 MV) a
fost construit n 1960 de ctre Dupony i Perrier n laboratorul de optic electronic din
Toulouse, aceast realizare constituind punctul de plecare pentru o nou generaie de
microscoape electronice.
3. n ciuda complexitii lor i a costului ridicat ele s-au dovedit extrem de utile,
deoarece ntr-un astfel de microscop electronii pot trece prin preparate care au grosimi
de 14 m, fiind posibil ca seciuni de grosimea celor realizate de un microtom obinuit
s fie uor examinate, uneori fr a mai fi colorate. De asemenea se pot cerceta celule
ntregi fr a fi incluzionate, iar Porter i Fotino (1974) au demonstrat c n aceste
condiii se poate realiza mai uor reconstituirea tridimensional a structurilor i
evidenierea enzimelor.
4. Folosindu-se microscopul electronic Toulouse 3000 cu o tensiune de accelerare de
1 MV s-au obinut fotografii ale unor bacterii, ale moleculelor de acizi nucleici. De
asemenea, utilizndu-se un alt tip de microscop electronic cu voltaj nalt JEM 1000 D,
s-a reuit urmrirea evoluiei cromozomilor n meioz. Rezultatele obinute pn n
prezent n cercetarea biologic arat c microscopia de voltaj nalt va avea mari
perspective n viitor.
5. Acest tip de microscop se bazeaz pe acelai principiu constructiv ca i la
microscoapele convenionale de 100 kV. nalta tensiune utilizat presupune ns
realizarea unei coloane cu mult mai nalt, iar nlturarea vibraiilor din coloan
necesit i realizarea unei fundaii cu mult mai stabil dect n mod obinuit.
6. Astfel, ntreg ansamblul poate atinge nlimea unei cldiri pe trei nivele. La fel,
lentilele sunt mai puternice iar curentul absorbit de ele i de sistemul de accelerare a
fluxului conduc la utilizarea unor blocuri de alimentare electric mai perfecionate i mai
costisitoare. Sunt necesare de asemenea, msuri de securitate sporite pentru evitarea
iradierii personalului.
D. Microscopul electronic analitic de transmisie (TEAM)
16
1. TEAM este format dintr-un microscop electronic de transmisie de nalt rezoluie, la
care se ataeaz un microanalizor de raze X din clasa spectrometrelor.
2. Noutatea adus de TEAM const n posibilitatea de a culege i informaii cu privire
la elementele chimice cuprinse n preparat, pe lng cele de ordin morfo-structural,
prin difracie de electroni coninute de CTEM.
3. Funcioneaz pe baza analizei lungimii de und dispersate, sau mai nou pe baza
analizei energiei dispersate. Astfel, bombardarea printr-un fascicul de electroni a unor
preparate determin emisia de radiaii X a cror lungime de und este caracteristic
atomilor bombardai; spectrometrul msoar aceste lungimi de und, permind
determinarea compoziiei chimice elementare a unor volume extrem de mici de
materie.
4. Pn n prezent s-au conturat cteva direcii de cercetare, prin utilizarea TEAM, cum
ar fi:
a. localizarea elementelor chimice existente n condiii normale n esuturi, n special
a ionilor de Na+ i Ka+;
b. detectarea unor elemente n anumite stri patologice cum ar fi de exemplu:
intoxicaiile sau carenele fiziologice;
c. aprecierea distribuiei unor elemente poluante n diferite verigi ale lanului biologic;
d. identificarea unor reacii chimice ntre diferite elemente pe baza analizrii unor
precipitate ce se formeaz n esuturi.
E. Microscopul electronic electronic de baleiaj (SEM) (Fig. I-9)
1. SEM spre deosebire de TEM furnizeaz imagini tridimensionale ale suprafeelor
probelor cercetate, ale cror dimensiuni sunt de ordinul centimetrilor, dar nu pot furniza
informaiile morfo-structurale ce se regsesc n grosimea materialului.
2. Formarea imaginii se bazeaz pe principiul emisiei electronilor secundari, reflectai
n urma bombardrii probei de ctre fasciculul primar de radiaii X.
3. Fasciculul de electroni cade sub un anumit unghi pe prob producnd reflexii sub
unghiuri diferite n funcie de incidena particulei cu zona de impact. Spotul de radiaii
baleiaz n timp ntreaga suprafa a probei, astfel nct pe ecran apare imaginea, la
scar dorit, a zonei scanate.
4. Constructiv, SEM are n plus un detector al electronilor secundari emii n urma
interaciunii cu suprafaa probei. Curentul produs de acesta este modulat i trimis n
final spre blocul de baleiere al unui tub cinescopic dintr-un monitor.
17
5. Pregtirea probei pentru analiza cu un astfel de microscop este mai uoar, nefiind
necesare realizarea de seciuni ultrafine. Pe de alt parte, rezoluia este mai mic cam
de 10 ori fa de TEM.
6. Condiia principal impus probelor examinate printr-o astfel de metod este ca
suprafaa acestora s fie conductoare pentru evitarea acumulrii de sarcini electrice pe
suprafa. n cazul unei analize calitative, probele sunt tiate i polizate mecanic sau
chimic. n cazul unei probe la care se impune studiul morfostructural de suprafa sau
al compoziiei, suprafaa probei trebuie pregtit n prealabil. Totodat, probele
neconductoare se acoper cu un strat fin de ordinul grosime, depus prin evaporare
n vid, stratul realiznd astfel neutralitatea electric a suprafeei impus de condiiile
specifice de lucru n microscopia de baleiaj.
7. Pentru obinerea unei depuneri uniforme a stratului n cazul probelor a cror
suprafa este rugoas, acestea sunt supuse rotirii sub anumite unghiuri n tot timpul
depunerii. Stratul depus este o vopsea pe baz de argint coloidal, observarea fiind
ameliorat prin depunerea de straturi succesive de Au i Pd, grosimea total
nedepind 1000 de .
8. n cazul probelor biologice care conin ap i lichide volatile i care sunt supuse
evaporrii n timpul baleierii datorit vidului existent n coloan, este necesar, n
prealabil, ca i n microscopia de transmisie, deshidratarea i eventual nghearea lor,
nlturnd, astfel, efectele nedorite.

V. ALTE TIPURI DE MICROSCOPII
A. Microscopia pe fond ntunecat i ultramicroscopia
1. Se bazeaz pe fenomenul Tyndall, care const n dispersia (mprtierea) luminii
de ctre particule foarte mici aflate n suspensie i care astfel devin vizibile, analog
particulelor de praf aflate ntr-o raz de lumin puternic.
2. n acest caz se folosete o metod de iluminare n care fascicolul care servete la
iluminarea obiectului nu ptrunde direct n microscop.
a. Proba este iluminat cu raze oblice printr-un condensor special (cardioid sau
paraboloid), iar n obiectiv nu ptrund dect razele dispersate de particule aflate n
suspensie.
b. Fascicolul incident este n fiecare caz limitat de o diafragm (D) cu deschideri
convenabil alese. Astfel apar nite puncte strlucitoare pe fond negru, ce corespund
particulelor pn la 0,003 mm, deci de aproape 1000 ori mai mici dect limita de
18
rezoluie a microscopului optic. Se pot astfel observa particule n citoplasm celulelor
vii, care nu pot fi vzute n microscopia obinuit.
3. Microscopia pe fond ntunecat se folosete i pentru examenul celulelor vii (microbi,
protozoare) care pot fi vzute i la microscopul obinuit, dar ale cror particulariti
apar cu mult mai clar pe fond ntunecat. De exemplu studiul spirochetelor permite
diagnosticul unor boli printre care i sifilisul.
a. Pe de alt parte se practic i pentru preparate cu contrast slab. Imaginea
preparatului apare luminoas pe fond ntunecat. Acest procedeu are la baz efectul
produs de condensor, datorat fenomenului de difracie a luminii (n preparat) realizat
printr-o iluminare lateral.
b. Examinarea pe fond ntunecat se poate face i la un microscop obinuit, la care
preparatul cu particule n suspensie se plaseaz ntr-o cuv de sticl iluminat
lateral. Acest procedeu se numete ultramicroscopie.
(1) Dup prezena cercului se va putea constata prezena particulei i micarea ei.
(2) Particulele se vd ca nite stelue sclipitoare pe fond ntunecat.
(3) Ultramicroscopia permite observarea unor particule cu dimensiuni de pn la
0,003 m (30 ).
c. De remarcat c pe msur ce ne apropiem de limita de rezoluie a microscopului
dispare asemnarea dintre obiect i imagine din punct de vedere geometric. Aceasta
se aplic i la microscopia pe fond ntunecat i la ultramicroscopie.
4. Preparat de examinat pe fond ntunecat
a. Celule cultivate de Spirulina platensis (alg verde-albastr).
b. De studiat: celule unite ntre ele ntr-o structur de form spiral, strlucitoare pe
fond negru, care se rotete ncet n jurul axei sale.
B. Microscopia de fluorescen (Cap. 6, tabel 6-1)
1. Prin absorbia energiei luminoase moleculele trec din starea fundamental n starea
excitat. Revenirea moleculei la starea fundamental se produce prin pierderea
energiei. n cazul fluorescenei, revenirea la starea fundamental se nsoete de
emisie de radiaie luminoas ce are o energie inferioar radiaiei absorbite, adic
lumina emis are lungimea de und mai mare.
a. Substanele ce prezint fluorescen puternic se numesc fluorocromi.
(1) n microscopia de fluorescen preparatele examinate conin fluorocromi.
(2) Prin iradierea cu lumin ultraviolet se produce excitarea fluorocromilor i
rezult fluorescena zonelor ce conin fluorocromii.
19
b. Microscopul de fluorescen are ca surs de lumin o lamp cu vapori de mercur
ce emite radiaii ultraviolete.
(1) n calea razelor ultraviolete se aeaz filtre de excitaie (colorate n albastru
pn la violet) ce opresc o parte din radiaiile sursei lsnd s treac numai pe
cele cu lungimea de und care s excite fluorocromul.
(2) Radiaia trece apoi prin condensor, obiectiv, lama cu preparatul microscopic,
toate din sticl de cuar fiindc sticla obinuit absoarbe razele ultraviolete.
(3) Dup trecerea prin obiectiv lumina este filtrat prin filtre de baraj care opresc
lumina ce vine de la surs i permit numai trecerea luminii emise de fluorocrom.
Imaginea este observat dup ce lumina fluorescent trece prin ocular.
(4) Zonele fluorescente apar luminate pe fond ntunecat.
c. Microscopia de fluorescen se folosete pentru observarea unor preparate
colorate vital, pentru observarea lizozomilor ce au acumulat colorani fluoresceni
(cum este acridin oranjul), n studiul cromozomilor (benzi fluorescente sau detectarea
cromozomului Y), n studii de imunologie (imunofluorescen), de histochimie i
citochimie.
d. Microscopia de fluorescen a fost folosit n biologia celular n studiul mobilitii
proteinelor de membran dup fuziunea celulelor umane i de oarece, experien
ce dovedete fluiditatea membranei.
e. Precizri: Nu se va privi niciodat la microscopul cu fluorescen pn nu ne-am
convins c filtrele de baraj se afl la locul lor, deoarece razele ultraviolete produc
instantaneu leziuni retiniene severe. La pornirea lmpii microscopului cu fluorescen
se ateapt cel puin 15 minute, iar dup oprirea lmpii este necesar o rcire de
circa 2 ore nainte de a o aprinde.
2. Tehnica examinrii n fluorescen. Examinarea preparatelor fluorescente se
poate efectua prin transmisie sau prin reflexie (iluminarea de sus prin obiectiv).
a. Procedeul pentru examinarea prin transmisie (transparen) presupune
preparate care sunt transparente sau seciuni din preparate pe care lumina le poate
strbate.
(1) Fluorescena este indus n toat masa preparatului; ceea ce face posibil
examinarea preparatului, adic observarea zonelor fluorescente fa de cele
nefluorescente.
(2) Procedeul se poate combina cu observarea structurii (imaginii) prin absorbie
(transparen) n lumin policrom din spectrul vizibil pentru a identifica structura
i zonele de interes.
20
b. Examinarea prin reflexie (iluminarea de sus prin obiectiv) presupune inducia
fluorescenei n primul rnd pe suprafaa preparatului.
(1) Tehnica este combinat cu examinarea preparatului n lumin policrom din
spectrul vizibil prin procedeul de transmisie pentru a putea identifica i examina
structura.
(2) Este posibil i examinarea combinat la aceste tipuri speciale de
microscoape.
c. n microscopia de fluorescen preparatele sunt impregnate cu fluorocromi. Prin
aceasta unele zone sau detalii de interes din preparat devin fluorescente atunci cnd
sunt iradiate cu lumin ultraviolet n cadrul spectrului de absorie. Pentru acest
procedeu microscoapele de cercetare sunt echipate cu condensori speciali pentru
lumin ultraviolet, obiective speciale.
d. Exist microscoape speciale pentru studii de fluorescen realizate pentru a
examina preparatele utiliznd iluminarea prin obiectiv (procedeul prin reflexie).
(1) Sursa de lumin pentru producerea fluorescenei este n general o lamp cu
vapori de mercur (Hg) sau o lamp cu Xenon cu puterea de 200-1000 W.
(2) Preparatele se depun pe lame de sticl nefluorescente. Dac se utilizeaz
procedeul cu imersie atunci uleiul trebuie s fie nefluorescent.
e. Procedeul. Radiaiile ultraviolete emise de surs (S) sunt filtrate de filtrul de
excitaie (FE) pentru a selecta lungimea de und care s produc prin excitaie
fluorescena preparatului.
(1) Lumina de excitaie cu lungimea de und
1
cade pe prisma (Pr) cu reflexie
total i care se afl inclus n obiectiv. Acest obiectiv special focalizeaz lumina
de excitaie (
1
) pe suprafaa preparatului producnd fluorescena.
(2) Lumina fluorescent emis de preparat (
2
) ajunge la obiectivul (Ob) i de aici
la ocularul (Oc). Pentru ca lumina de excitaie (
1
) eventual reflectat de preparat
s nu ajung pe retina ochiului ea este barat cu filtrul de baraj (FB) care se aplic
sub ocular. Astfel observatorul vede numai lumina fluorescent.
(3) Zonele fluorescente apar luminoase pe fond ntunecat aa cum am mai artat
metoda se poate combina cu obsevarea prin transmisie a preparatului pentru a
identifica structura. Pentru aceasta aparatul este dotat cu o surs policrom n
spectrul vizibil (S
1
) care este completat cu elementele sistemului prin
transparen.
21
f. Procedul este asemntor cu microscopia n lumin reflectat prin care se
examineaz preparatele la suprafa prin reflexia diferenial a luminii datorat formei
suprafeelor.
g. Aceast tehnic se poate utiliza pentru preparate netransparente ct i pentru
preparate transparente n combinaie cu observarea structurii prin transparen.
3. Aplicaii practice.
a. Cu ajutorul fluorescenei primare pot fi identificai:
(1) pigmenii: porfirinele (fluorescena roie), lipocromii sau pigmenii carotenoizi
(fluoresecena verde), cromolipidele (fluorescen galben-verde), lipofuscina
(fluorescen rou-brun);
(2) acizii aminai: fenilalanina, tirozina, triptofanul (fluorescena albastr);
(3) unele virusuri i bacilul Koch emit o fluorescen verde strlucitor;
(4) dintele natural este autofluorescent, proprietate prin care se deosebete de cel
artificial;
(5) aminele biogene: adrenalina, noradrenalina, serotonina (fluorescen verde).
b. Cu ajutorul fluorocromrii cu acridin orange se pot identifica:
(1) acizii nucleici: ARN-ul fluorescena roie, ADN-ul - fluorescen verde-
galben;
(2) fibrele de colagen, elastice i de reticulin - fluorescena verde;
(3) nucleii leucocitelor au o florescen verde iar citoplasma lor i eritrocitele
rmn opace;
(4) mucinele - fluorescen verde.
4. Preparate de examinat n microscopia de fluorescen.
a. Acizii nucleici n celulele hepatice (colorare cu acridin-oranj)
(1) Acridin-oranjul coloreaz ADN-ul n verde iar ARN-ul n rou. Astfel, nucleul,
care conine ADN, se va colora n verde, iar citoplasma i nucleolii care conin
ARN, se vor colora n rou.
(2) Tehnica: Ficatul de obolan, proaspt recoltat se taie n buci mici de circa 1
cm
3
, care se preseaz, n mai multe locuri, pe o lam curat i degresat. Lama
se usuc la aer, dup care se introduce n soluie fixatoare de alcool metilic: acid
acetic glacial (3:1), timp de 10-15 minute. Se coloreaz preparatul cu acridin-oranj
prin introducerea lamei succesiv, n pahare Berzelius care au urmtorul coninut:
(a) ap distilat, 2 min;
(b) acid ascorbic 0,1 M, 20 min. (are rolul de a prelungi fluorescena n timpul
examinrii);
22
(c) acridin-oranj 0,01% n ap, 5 min.;
(d) ap distilat, 2 min.
(3) La urm se aplic o pictur de ap cu pH 4,5, se acoper cu o lamel, dup
care lama este gata de examinare.
(4) De studiat: celulele hepatice izolate sau n grupuri mici, care prezint un
contur neregulat (cu franjuri), de culoare roie intens, unul sau doi nuclei de
culoare verde cu nucleoli roii. ntre celulele hepatice se mai pot observa celule
albe sanguine care prezint nucleul de form neregulat i culoare verde i cu
citoplasm uor roie.
b. Cromozomul Y (corpusculul F) n nucleii celulelor din mucoasa bucal
colorat cu clorhidrat de chinacrin.
(1) Tehnica: se prepar un frotiu de celule din mucoasa bucal dup cum s-a
descris la determinarea cromatinei sexuale. Frotiul se coloreaz cu soluie de
chinacrin prin introducerea lamei n pahare Berzelius care conin urmtoarele
soluii:
(a) alcool metilic i acid acetic (3:1), 10-15 min.;
(b) ap distilat, 2 min.;
(c) acid ascorbic 0,1 M, 20 min.;
(d) chinacrin 0,5%, pH 4,5 15 min.;
(e) 3 bi de ap distilat, 10 minute n total
(f) se usuc la aer.
(2) Se monteaz lama cu ap avnd pH 4,5 i se acoper cu o lamel, dup care
se examineaz la microscop.
c. Autofluorescena clorofilei n cloroplastele de Hydrilla sp.
(1) Autofluorescena este proprietatea unor substane naturale de a emite radiaii
n spectrul vizibil atunci cnd sunt iluminate cu radiaii ultraviolete.
(2) Tehnica: Se pune o frunz de Hydrilla sp. pe o lam ntr-o pictur de ap i
se acoper cu o lamel. n lumina alb cloroplastele din celulele frunzei au o
culoare verde, pe cnd n lumin ultraviolet cloroplastele emit o fluorescen
roie.
C. Microscopia n contrast de faz (Cap. 6, tabel 6-1)
1. Majoritatea obiectelor biologice observate la microscop sunt transparente i de
aceea pentru observarea lor ele trebuie n prealabil colorate (contrastate), astfel nct
diferitele elemente structurale s se coloreze (contrasteze) diferit. A alege o astfel de
colorare este de obicei dificil. Dar i esuturile (structurile) necolorate sunt optic
23
neomogene, deoarece au un indice de refracie a luminii diferit. De aceea ntre razele
care traverseaz partea structurii cercetate cu indicele de refracie n
1
i zona cu indice
de refracie n
2
va aprea o anumit diferen de faz. Aceast diferen de faz nu se
manifest direct, deoarece diferenele de drum optic sau modificrile n faza undelor de
lumin produse de ctre aceste obiecte sunt prea mici ca s fie detectate de ochi sau
pe fotografie.
a. n microscopia n contrast de faz diferenele de drum optic sunt amplificate,
deoarece razele refractate sunt defazate la trecerea printr-un dispozitiv special numit
plac de faz.
b. Dup cum se observ n figura I-10, razele de lumin ajung la preparat, de aici la
obiectiv i apoi la placa de faz care este prevzut cu un an inelar. Raza
nerefractat trece prin inelul plcii de faz, care o defazeaz cu
1
/
4
fa de raza
refractat ce nu trece prin acest inel. La formarea imaginii se produce interferena
celor dou raze.
c. Interferena dintre razele normale i cele defazate duce la o mrire a contrastului
la limita dintre dou zone cu indici de refracie foarte puin diferii. Rezultatul este
apariia unui halou ce crete contrastul i permite observarea unor detalii invizibile la
microscopul optic simplu. Pentru fiecare obiectiv exist o plac de faz, ce se aduce
n axa optic prin rotirea tamburului pe care se afl montate plcile de faz.
d. Microscoapele folosite n aceast tehnic au n componena lor o trus special
care conine elementele necesare pentru examinarea n contrast de faz: condensori
pentru contrast de faz (care conin i placa de faz), obiective pentru contrast de
faz, microscop ocular pentru centrarea condensorilor fa de obiective i chei
speciale pentru reglarea (centrarea) condensorilor.
e. Microscopia n contrast de faz este folosit pentru studiul celulei vii, permind
observarea structurii nucleului, distribuia organitelor n citoplasm, modificrile din
diviziunea celulei, micrile celulare. Adesea se procedeaz la filmare prin cuplare la
microscop a unui aparat destinat acestui scop.
f. Aceast metod special utilizat la microscoapele moderne, este adecvat pentru
observarea obiectelor (preparatelor) transparente care nu absorb lumina, ci doar
introduc n razele de lumin diferene de drum optic.
2. Aplicaii practice
a. studiul celulelor n stare vie (celule nefixate i necolorate);
b. scoate n eviden unele detalii de structur care nu se pot observa la microscopul
fotonic obinuit ca endocitoza, micarea cililor i flagelilor, diviziunea celular, etc.;
24
c. studiaz reaciile celulare la diferii ageni fizici sau chimici;
d. studiaz benzile cromosomilor.
3. Preparat de examinat n contrast de faz
a. Materiale: microscop n contrast de faz; frotiu de mucoas bucal, cultur de
celule n monostrat sau o suspensie de protozoare pe o plac petri.
b. De studiat: folosind figura ca i ghid, familiarizai-v cu componentele
microscopului cu contrast de faz. Observai componentele asemntoare cu ale
microscopului optic uzual, cu diferena c acestea sunt inversate.
c. Plasai fie frotiu de mucoas bucal, fie o cultur de celule n monostrat sau chiar
o plac petri ce conine o suspensie de protozoare pe platina microscopului.
d. Observai celulele la microscopia uzual i n contrast de faz. Notai posibilele
micri sau unele schimbri ale celulelor, dup o perioad de timp, inclusiv unele
schimbri la nivelul materialului nuclear al celulelor cultivate.
e. n cazul frotiului de mucoas bucal se observ celule izolate sau n grupuri de
cte 2-4, care prezint nucleul dispus central de forma rotund sau uor alungit n
care se observ heterocromatina mai nchis la culoare situat mai ales la periferie.
n citoplasm se observ granule de diferite forme i mrimi dispuse n jurul
nucleului, iar sub plasmalem un inel mai clar din care lipsesc granulele.
D. Microscopia n lumin polarizat
1. Tehnic prin care se obin imagini ale unor constituieni n care structurile examinate
sunt anizotrope, acestea fcnd ca viteza de propagare a luminii polarizate s varieze
cu direcia de propagare; mediile respective se numesc birefringente.
a. Clasificri ale birefringenei:
(1) n structurile fibrilare (colagen, mielin, fibrele musculare striate, etc.) poate
exista o birefringen pozitiv cnd indicele de refracie este mai ridicat n lungime
dect n plan perpendicular i birefringen negativ, n caz contrar (fibrele
nucleoproteice).
(2) birefringena cristalin sau intrinsec observat n sistemele sau moleculele n
care ionii prezint un aranjament asimetric regulat i este independent de indicile
de refracie a mediului de montare; se observ n structuri constituite din proteine
sau lipide;
(3) birefringena de form sau structur apare atunci cnd particulele
submicroscopice sunt orientate regulat ntr-un mediu cu indice de refracie diferit;
25
(4) birefringena de tensiune se observ la structurile izotrope care sunt supuse
unei constrngeri mecanice i se ntlnete la nivelul muchilor i n esuturile
embrionare;
(5) dicroismul apare n momentul n care absorbia unei lungimi de und dat de
lumina polarizat variaz n funcie de orientarea obiectului examinat.
b. Aceste variaii apar datorit diferenelor de intensitate (amplitudinea luminii
transmise de obiect). Unii colorani organici ca roul de Congo sau thionina, pot
induce dicroismul n unele structuri biologice datorit unei orientri prefereniale a
moleculelor.
2. Microscopul cu lumin polarizat (Fig. I-11)
a. Prezint dou dispozitive speciale numite: polarizor i analizor; ele sunt constituite
dintr-o pelicul de film polaroid sau dintr-o prism Nicol.
b. Polarizorul se gsete sub condensator iar analizorul se afla deasupra obiectivului.
c. Dac planul de polarizare al analizorului este perpendicular pe cel al polarizorului,
lumina nu va fi transmis. Punnd pe platina microscopului un preparat birefringent,
planul de polarizare va devia datorit ntrzierii provocate de ntreruperea probei de
examinat. nvrtim preparatul pn cnd n cmpul microscopului apar puncte cu
luminozitate maxim i minim.
d. Tehnica: se coboar tubul microscopului apropiind obiectivul de condensor pn
la obinerea unei iluminri maxime i uniforme a cmpului microscopic; se rotesc cei
doi nicoli analizorul i polarizorul pn cnd se obine ntunecarea maxim n
cmpul ocularului; pe platina microscopului se aeaz o lam port obiect pe care
sunt seciuni din rinichi, intestin sau ficat, colorate dup metoda topo-optic
Romanyi (materialul se fixeaz n formol, se secioneaz la microtomul de congelare
iar seciunile se coloreaz cu o soluie de albastru de toluidin la pH 4,5 urmnd o
post fixare cu fericianid de potasiu care are capacitatea de a se lega de lipidele i
glicoproteinele din structura biomembranelor);
3. Aplicaii practice
a. se pot studia structurile a cror compoziie chimic macromolecular au un aspect
liniar, ca de exemplu fibrele de colagen, mielina, fibrele musculare striate;
b. se utilizeaz pentru studiul structurilor: membrane biologice;
c. se evideniaz structurile cu simetrie radial: granule proteice, lipide, colesterol.



26
C CA AP PI IT TO OL LU UL L 2 2
S ST TR RU UC CT TU UR RA A M ME EM MB BR RA AN NE EI I I I S SU UP PR RA AF FA A A A C CE EL LU UL LA AR R

I. INTRODUCERE
Celula este unitatea de baz morfo-funcional a tuturor esuturilor i organelor. Este un
mic compartiment apos, delimitat de membran ce conine moleculele, macromoleculele i
incluziunile ce permit celulei s-i ndeplineasc funciile.
A. Clasificarea celulelor. Celulele pot fi mprite n dou categorii: celule procariote
(bacterii) i celule eucariote (fungi, plante i animale). Celulele eucariote, prin definiie,
conin un nucleu (karyon = nucleu); procariotele nu au nucleu. n acest capitol ne-am
concetrat n principal asupra celulelor eucariote, n special celulele mamiferelor.
B. Compartimentele membranare ale celulelor eucariote.
1. Cnd examinm un preparat de esut sau organ n microscopie optic, se observ
c distribuirea colorantului se realizeaz ntr-un model regulat. Colorantul apare limitat
de o barier, permind celulelor s se individualizeze.
a. Membrana plasmatic, ce nconjoar celula este indicat de bariera ce limiteaz
colorantul.
b. Pe suprafaa delimitat de membrana plasmatic, distribuirea diferenial a
colorantului reflect compartimentarea citoplasmei n mai multe organite subcelulare
(nucleu, reticul endoplasmic, aparat Golgi, mitocondrie, lizozomi, endozomi,
peroxizomi - vezi urmtorul capitol).
2. Membrana plasmatic i membranele organitelor au o structur de baz similar i o
compoziie asemntoare. Diferenele specifice n compoziie reflect funciile
diferitelor membrane.

II. ORGANIZAREA MEMBRANELOR BIOLOGICE
A. Generaliti
1. Membranele biologice sunt compuse din lipide i proteine, unite ntre ele prin legturi
necovalente. O cantitate mic de carbohidrai este legat covalent de proteine i lipide
(Fig. II-1).
2. Lipidele membranare formeaz baza structural a unei membrane, n timp ce
proteinele sunt responsabile de funciile active ale membranelor.
3. Interpretarea curent a modului prin care o membran biologic este organizat la
nivel molecular este cunoscut sub numele de modelul de mozaic fluid modificat
(Figura II-2).
27
B. Bistratul lipidic. Structura de baz a unei membrane biologice este bistratul lipidic.
1. Lipidele unei membrane biologice sunt amfipatice: au un cap hidrofil (iubete
apa) sau polar i o coad hidrofob (urte apa) sau non-polar.
a. Grupele polare hidrofile sunt orientate nspre exteriorul bistratului i
interacioneaz cu mediul apos.
b. Cozile hidrofobe interacioneaz ntre ele pentru a forma miezul bistratului lipidic.
2. Aceast orientare este constant n toate straturile lipidice ale membranelor ce
delimiteaz compartimente: membrana plasmatic i membranele organitelor.
3. Stratul dinspre exterior este denumit foia extern, iar cel dinspre interior, foia
intern.
a. Foia extern a membranei plasmatice este orientat spre mediul extracelular iar
foiele externe ale organitelor sunt orientate spre citoplasm.
b. Foia intern a membranei plasmatice este orientat spre citoplasm, iar foiele
interne ale ornganitelor sunt orientate spre compartimentul intern al organitelor.
C. Lipidele membranare. Exist 3 clase principale de lipide n structura membranelor
biologice: fosfolipide, colesterol i glicolipide.
1. Fosfolipide. Cel mai abundent component al membranelor biologice (Fig. II-3).
a. La o concentraie adecvat, fosfolipidele vor forma, spontan, un bistrat lipidic, n
momentul plasrii lor ntr-un mediu apos.
b. Fosfolipidele sunt digliceride construite pe un schelet de glicerol.
(1) Poriunea hidrofil. Grupurile polare, fie colina, serina, etanolamina sau
inozitol, sunt legate de carbonul 3 al glicerolului pentru a forma cele 4 fosfolipide:
fosfatidilcolina, fosfatidilserina, fosfatidiletanolamina i fosfatidilinozitol (Fig.
II-4).
(2) Poriunea hidrofob. Dou lanuri de acizi grai sunt legate de carbonul 1 i 2
al glicerolului; cozile de acizi grai interacioneaz ntre ele prin legturi slabe van
der Waals.
2. Colesterol. La fel ca i fosfolipidele, colesterolul este amfipatic. Colesterolul conine
un grup polar hidroxil, un inel steroid hidrofob i un lan hidrocarbonat (Fig. II-5).
a. Colesterolul se inser ntre fosfolipide, cu grupul hidroxil lng grupul polar a
fosfolipidului i inelul steroid paralel la lanurile acil n interiorul hidrofobic al bistratului
(Fig. II-6).
b. Colesterolul joac un rol important n modularea structurii i fluiditii membranelor
biologice.
3. Glicolipide. Glicolipidele sunt lipide cu resturi de zaharuri ataate.
28
a. Glicolipidele sunt totdeauna prezente pe foia extern a membranei plasmatice, cu
grupurile zaharidice nspre exteriorul celulei. Asimetria distribuiei i orientrii
acestora se realizeaz din modul n care zaharidele sunt adugate n timpul
biosintezei (vezi Capitolul 3 II A 2 b; III B 2).
b. Glicolipidele umane i animale sunt constituite din ceramid i sunt denumite
glicosfingolipide. Glicosfingolipidele sunt importante n interaciunile celul-celul i
celul-matrice i contribuie la ncrctura negativ a suprafeei celulare.
D. Proteinele membranare
1. Proteinele membranare sunt de dou tipuri: integrale i periferice (Fig. II-7).
a. Proteinele membranare integrale sunt ncorporate n bistratul fosfolipidic i nu
pot fi izolate fr distrugerea membranei (prin extracie cu solveni organici sau cu
detergeni).
(1) Unele proteine integrale traverseaz membrana o singur dat (unipasaj) sau
de mai multe ori (multipasaj). Altele, sunt parial ncorporate n membran, pe o
fa sau alta a membranei. Proteinele membranare integrale pot fi de asemenea
ataate la bistratul fosfolpidic prin legturi covalente cu lanurile de acizi grai ce le
ancoreaz la membran.
(2) Proteinele membranare integrale sunt amfipatice; poriuni din proteine
interacioneaz direct cu interiorul hidrofobic al bistratului, iar regiunile hidrofilice
vin n contact cu mediul apos, pe una sau pe ambele fee ale membranei.
b. Proteinele membranare periferice sunt acele proteine ce pot fi izolate fr
distrugerea membranei (prin tratarea membranei cu soluii ionice sau prin
modificarea pH-ului soluiei).
(1) Aceste proteine sunt distribuite asimetric n membran; se pot gsi fie pe o
parte fie pe cealalt parte a bistratului lipidic.
(2) Proteinele membranare periferice formeaz asocieri prin legturi ionice cu
proteinele membranare integrale, cu alte proteine membranare periferice, sau cu
grupurile polare ale fosfolipidelor.
2. Glicoproteinele membranare. Majoritatea proteinelor membranei plasmatice sunt
glicoproteine. Gruprile lor zaharoase se gsesc la exteriorul celulei, la fel ca i n
cazul gruprilor zaharoase ale glicolipidelor.
E. Mobilitatea componentelor membranare (Fig. II-8). Membranele sunt structuri fluide,
dinamice. Proteinele membranare i fosfolipidele pot difuza relativ liber n planul
membranei. Totui, micrile lor sunt restricionate.
29
1. Micarea proteinelor membranare, att integrale ct i periferice, poate fi
restricionat prin ataarea la alte proteine membranare sau la componentele
citoscheletului.
2. Micarea fosfolipidelor n bistrat poate fi de asemenea restricionat prin asocierea
cu proteinele membranare imobilizate.
3. O concentraie crescut de colesterol (membrana plasmatic a eucariotelor)
determin o rigiditate a membranei, prin reducerea fluiditii membranare i
restricionarea difuziei proteinelor i fosfolipidelor.
4. Proteinele membranare i fosfolipidele nu realizeaz micri spontane de flip-flop
de pe o foi pe alta a membranei. Ele rmn de obicei n stratul n care au fost stocate
n timpul biosintezei lor i al asamblrii membranei.
F. Microscopia membranelor celulare
1. O membran biologic nu poate fi observat n microscopia optic. Totui, aceasta
poate fi detectat, i prezena sa observat indirect prin distribuia colorantului pe o
seciune histologic. O membran biologic poate fi observat n microscopia
electronic.
2. n microscopia electronic de transmisie, folosind seciuni fine de material
histologic (fixat cu tetraoxid de osmiu OsO
4
), relev membrana biologic, pe
seciune, ca fiind o structur trilaminar: dou straturi electrodense cu un strat
electro-lucent ntre ele (Fig. II-1A).
a. Aceast structur trilaminar a fost denumit unitatea membranar.
b. Grosimea unei membrane biologice este de aproximativ 8-10 nm.
3. Microscopia electronic prin criofracturare permite examinarea membranelor
biologice n planul membranei. Aceast procedur, practic mparte, sau cliveaz,
membrana de-a lungul planului hidrofobic ntre cele dou straturi lipidice ale sale
(Figura II-9).
a. Planul de clivaj expune interiorul membranei, evideniind cele dou fee ale
membranei, faa E (orientat spre spaiul extracelular) i faa P (orientat spre
protoplasm, sau citoplasm).
b. Numeroase particule intramembranare observate pe cele dou fee sunt
considerate a fi proteine membranare integrale. Modelul acestor particule poate
oferi indicii asupra distribuiei proteinelor membranare n bistrat i poate fi legat de
funciile membranei examinate.


30
II. FUNCIILE MEMBRANEI PLASMATICE
Membrana plasmatic este interfaa dintre o celul i mediul su extern. Membrana
plasmatic nvelete celula, regleaz pasajul moleculelor n i dinspre celul, i rspunde
la semnale primite din mediul extern.
A. Clasele de proteine plasmatice. Proteinele membranei plasmatice au fost mprite n
mai multe categorii bazat pe funcia acestora: proteine carrier i pompe, canale, receptori,
enzime, proteine structurale. Unele proteine pot avea una sau mai multe din aceste funcii
(Fig. II-10).
1. Pompele transport activ molecule prin membrana plasmatic. De exemplu Na
+
/K
+
-
ATP-aza, pompa de sodiu, transport ionii de sodiu i potasiu prin membrana
plasmatic. Proteinele carrier (crui) transport de asemenea ioni i metabolii,
cum ar fi aminoacizii i zaharidele, cuplndu-i de obicei activitatea cu cea a pompei
de sodiu.
2. Canalele permit pasajul ionilor i moleculelor mici prin membrana plasmatic n
ambele direcii. Jonciunile Gap sunt jociuni intercelulare ce conin astfel de canale
[vezi Capitolul 4 V C 2 b (2) (b)].
3. Proteinele receptor se leag de molecule extracelulare specifice (liganzi) ce iniiaz
un rspuns celular. Un receptor este de obicei o protein transmembranar cu locul de
legare a ligandului expus spre mediul extern. Domeniile intracelulare ale proteinelor
receptor sunt de obicei asociate cu alte molecule sau complexe ce produc un semnal.
Aceti receptori transfer informaia i nu ioni sau molecule prin membran.
a. Un receptor pentru ligand este asociat cu un canal apos selectiv ionic. Legarea
ligandului la receptor induce o modificare conformaional a n componentele
proteice ale canalului. Canalul se deschide, permind ionilor specifici s-l traverseze
i deci s traverseze membrana.
b. Receptorii enzimatici sau catalitici conin un domeniu tirozin-kinazic pe
suprafaa citoplasmatic a membranei. Acest tip de receptor activeaz celula prin
fosforilarea resturilor tirozinice pe proteinele intracelulare, ca urmare a legrii
ligandului.
c. Receptorii legai de proteina G sunt asociai cu o protein de legare a guanozin
trifosfatului (GTP), sau protein G, pe suprafaa citoplasmatic a membranei
plasmatice. Legarea ligandului la acest tip de receptor activeaz proteina G.
(1) Receptorul legat de proteine G declaneaz o modificare n concentraia
citoplasmatic a uneia sau mai multor micromolecule de semnal intracelulare,
denumite mesageri secundari (Ca
2+
, AMP ciclic).
31
(2) Unii receptori legai de proteina G activeaz calea de semnalizare a inozitol
trifosfatului (IP
3
). IP
3
, un mesager secund, induce eliberarea calciului, un alt
mesager secundar, din reticulul sarcoplasmatic, unde acesta este stocat.
B. Distribuia topografic a proteinelor membranare. Locurile specifice ale proteinelor
ntr-o membran pot determina funcia ntregii membrane plasmatice sau ale unor regiuni
ale membranei. De exemplu:
1. Na
+
/K
+
-ATP-aza este prezent pe suprafaa tuturor celulelor i n distribuia sa joac
un rol n reglarea volumului intracelular.
2. ntre celulele epiteliale, jociunile ocluzive (tight junctions) blocheaz Na
+
/K
+
-ATP-
aza pe suprafaa bazolateral. Aici funcioneaz n transportul ionilor de Na
+
i K
+
de-a
lungul membranei bazolaterale i n transportul srurilor i apei de-a lungul celulelor
epiteliale.

IV. ENDOCITOZA: TRANSPORTUL MACROMOLECULELOR I AL PARTICULELOR
A. Generaliti
1. Proteinele, macromoleculele, i particulele mari nu pot traversa membrana
plasmatic prin proteinele ce mediaz pasajul micromoleculelor i a ionilor. n schimb,
celula utilizeaz un proces denumit endocitoz, prin care o poriune a membranei se
asociaz cu materialul ce va fi nglobat, se invagineaz, producnd o vezicul
intracelular ce conine materialul ingerat.
2. Exist dou tipuri de endocitoz: pinocitoza i fagocitoza. Pinocitoza este o
proprietate a tuturor celulelor. Fagocitoza este realizat doar de unele tipuri celulare,
principale fiind macrofagele i neutrofilele.
B. Pinocitoza. Acest proces implic ingestia de fluid i paricule solubilizate prin
intermediul unor microvezicule (< 200 nm n diametru).
1. Exist dou tipuri de pinocitoz: pinocitoza fazei fluide i endocitoza mediat de
receptor.
a. Pinocitoza fazei fluide (Figura II-11). n acest tip, volume mici de fluid extracelular
i particulele suspendate n fluid sunt integrate n celul non-specific n vezicule
pinocitozice necptuite. Mecanismele implicate n formarea acestor vezicule nu
sunt pe deplin cunoscute.
(1) Concentraia particulelor solubilizate ncorporate n vezicul este direct
proporional cu concentraia din fluidul extracelular.
(2) Dei n acest proces nu sunt implicai receptori, n unele situaii, particulele
suspendate pot interaciona cu ncrctura electric a membranei plasmatice prin
32
interaciuni electrostatice (de exemplu, molecule bazice ncrcate pozitiv sunt
endocitate mai rapid dect moleculele acide ncrcate negativ) realiznd o
endocitoz mai selectiv.
b. Endocitoza mediat de receptor (Figura II-11). n acest tip de pinocitoz,
receptorii membranari, sunt ncorporai n vezicule cptuite. Procesul implic
aglomerarea receptorilor n anumite regiuni ale membranei ce sunt cptuite n
interior cu o protein denumit clatrin (Fig. II-12).
(1) Formarea veziculelor. Materialul (ligand) ce va fi endocitat se leag de un
receptor. Receptorul poate fi localizat fie n regiunea membranar cptuit cu
clatrin sau se deplaseaz spre o astfel de regiune prin difuziune lateral dup
legarea ligandului. O depresiune nvelit de clatrin se formeaz prin
invaginarea a regiunii cptuite i mai apoi depresiune devine o vezicul nvelit
de clatrin pe msur ce este ncorporat n citoplasm.
(a) Moleculele de clatrin (Fig. II-12) sunt asamblate spontan ntr-o structur
tridimesional; aceasta nchide membrana din interior i determin formarea
veziculei.
(b) Vezicula i pierde nveliul de clatrin aproape imediat dup formarea sa.
Clatrina este reciclat la nivelul membranei plasmatice.
(2) Interaciunile receptor-ligand. Endocitoza mediat de receptor exprim
trsturi caracteristice interaciunilor receptor-ligand.
(a) Numrul de receptori pentru un ligand specific n membrana plasmatic este
limitat (~10
5
per celul) Astfel, ncorporarea ligandului este saturabil la
concentraii mici extracelulare.
(b) Afinitatea mare a ligandului pentru receptor determin ca ligandul s fie n
mod eficient sustras din mediul extracelular i concentrat n celul.
(c) De asemenea, numrul de molecule ligand ncorporat pe unitatea de timp
poate depi cu mult numrul de receptori, pentru c receptorii sunt reciclai
prin exocitoz i reutilizai.
2. Veziculele endocitate
a. Unele vezicule pinocitozice i poart coninutul de pe o suprafa pe alta i
elibereaz coninutul pe acea suprafa (veziculele pinocitozice ale endoteliul
vascular). Altele, n schimb sechestreaz ionii preluai din mediul extracelular
(vezicule pinocitozice n celulele musculare netede). Unele pot fuziona cu lizozomii.
b. n endocitoza mediat de receptor, veziculele sunt aproape ntotdeauna ndreptate
spre lizozomi, unde coninutul lor este degradat.
33
(1) n unele situaii, prin endocitoza mediate de receptor, receptorii sunt iniial
disociai de ligandul lor ntr-un compartiment pre-lizozomal cunoscut sub numele
de CURL [compartiment de disociere a receptorului de ligand; [vezi Capitolul 3 III
B 3 b (2)].
(a) Din CURL, receptorul este reciclat spre membrana plasmatic. Ligandul
este eliberat lizozomilor i degradat.
(b) Produsele rezultate n urma digestiei ligandului pot servi n procesele
metabolice. De exemplu, dup preluarea i digestia lipoproteinei de densitate
mic (LDL), colesterolul eliberat din aceasta este folosit de celul pentru sinteza
membranei.
(2) n alte situaii, complexul receptor-ligand este livrat intact lizozomilor i apoi
degradat. Acesta este un mecanism de reglare negativ a receptorilor folosit n
unele procese de semnalizare (factorul de cretere epidermal i receptorii si).
c. Unele vezicule de endocitoz nu sunt livrate lizozomilor ci, n schimb sunt
transferate pe un alt domeniu (o alt fa) al membranei plasmatice, fuzioneaz cu
acesta i i elibereaz coninutul. Acest proces, denumit transcitoz, este implicat
n mecanismul secreiei imunoglobulinelor A i M.
C. Fagocitoza (Figura II-11). n fagocitoz, regiuni largi ale membranei plasmatice se
extind, nglobnd particule mari, cum sunt microorganismele sau resturile celulare. Se
formeaz astfel vacuole (>1m n diametru) denumite fagozomi.
1. Formarea fagozomilor. Interpretarea curent a formrii fagozomilor este cunoscut
sub denumirea de ipoteza fermoarului.
a. Fagocitoza este un proces mediat de receptor: fagocitul trebuie s aib receptori
pe membrana sa plasmatic ce pot recunoate molecule int i se pot lega de
acestea. n plus, o particul sau o celul, pentru a fi ingerat, trebuie s aib locusuri
de legare distribuite pe ntreaga sa suprafa celular.
b. Odat ce fagocitul se ataeaz de celula int, membrana plasmatic a fagocitului
nconjoar gradual particula int, fiecare receptor interacionnd succesiv cu un
locus de legare, la fel cu dinii unui fermoar.
c. Citoscheletul cortical de actin n fagocit este reorganizat, facilitnd extensia
membranei n jurul particulei int.
d. Cnd particula int este integral ingerat, poriunile opuse ale membranei
fuzioneaz pentru a forma vacuola (fagozom).
2. Fagozomii fuzioneaz n continuare cu lizozomii, iar coninutul lor este de obicei
degradat datorit enzimelor lizozomale.
34
3. Opsonizarea. Cnd sistemul imun determin un rspuns umoral mpotriva unui
agent patogen, moleculele IgG formate acioneaz ca opsonine, ce nvelesc
microorganismul pentru a amplifica fagocitoza sa de ctre macrofage.
a. Moleculele IgG nvelesc agentul patogen prin interaciunea locusurilor de legare a
antigenului cu suprafaa microorganismului; cozile moleculelor IgG se extind n afara
suprafeei lor.
b. Fagocitele conin receptori pentru cozile IgG la nivelul membranei plasmatice.
Acetia sunt denumii receptori Fc i legarea acestor receptori cu cozile IgG
faciliteaz ingerarea agentului patogen.

V. STRUCTURILE SUPRAFEEI CELULARE
A. Glicocalix. Acest nveli al membranei plasmatice se afl pe suprafaa extern a
celulei (Figura II-13).
1. Compoziie. Glicocalixul const din:
a. Oligozaharide legate covalent de glicoproteinele i glicolipidele membranei
plasmatice
b. Lanuri lungi polizaharidice ale proteoglicanilor membranari
c. Glicoproteine i proteoglicani ce au fost secretate i resorbite la suprafaa celulei
2. Funcii. Glicocalixul are rolul de a proteja suprafaa celulei de factorii mecanici.
Oligozaharidele mediaz recunoaterea specific inter-celular i reaciile de adeziune
(ex. neutrofile ce se leag de celule endoteliale n reaciile inflamatorii; interaciunile
dintre spermatozoizi i ovul; agregarea trombocitelor).
B. Specializrile membranei plasmatice. Anumite celule, cum ar fi celulele epiteliale,
dezvolt modificri ale suprafeei celulare pentru a le facilita funciile. Aceste modificri pot
lua forma unor extensii stabile (microvili, stereocili, cili i flageli), plieri i interdigitaii, ct i
jonciuni intercelulare specializate.
1. Microvilii (Figura II-13). Acetia sunt extensii n deget de mnu la
suprafaa celulelor epiteliale ceea ce le crete suprafaa de absorbie.
a. Morfologia n microscopia optic. Un singur microvil nu este vizibil n
microscopia optic, dar o aglomerare de microvili poate fi observat la suprafaa
celulei ca nite striaii fine paralele cu axul lung al celulei. Striaiile au fost denumite
platou striat.
b. Morfologia n microscopia electronic. Microvili individuali sunt identificai ca
fiind extensii tubulare ale membranei plasmatice la polul apical al celulelor epiteliale.
35
(1) Microvilii au un diametru relativ constant de aproximativ 0,1 m. Lungimea lor
poate varia (1-3 m) dar este aproape constant pentru un anumit tip celular.
(2) Microvilii au un centru de filamente de actin cu rol de suport i redau
rigiditatea microvililor, n meninerea aranjamentului lor paralel.
(a) Miezul de actin este ancorat la membrana plasmatic la polul apical i
lateral al microvililor. Miezul se extinde n citoplasma apical, unde
interacioneaz cu o reea terminal, orizontal de actin.
(b) Contraciile reelei terminale se consider a determina creterea spaiului
dintre microvili prin deprtarea vrfurilor acestora.
c. Enzimele microvilare. Numeroase enzime digestive sunt inserate n membrana
plasmatic a microvililor i au roluri specifice n digestie i absorbie.
2. Stereocilii. Stereocilii sunt microvili elongai. Acetia nu prezint motilitate i nu au
asemnri cu cilii, n ciuda numelui. La fel ca i microvilii, acetia conin filamente de
actin n centru.
a. n sistemul reproductor masculin, stereocilii pot fi observai pe seciuni
histologice, proiectndu-se n lumenul epididimului i a vaselor deferente, sub form
de piramide. Funcia lor este de absorbia substanelor din lumen.
b. n urechea intern, stereocilii pot fi observai la nivelul celulelor proase ale
organului Corti i canalelor semicirculare. Aici, stereocilii acioneaz ca i
transductori, genernd poteniale electrice datorit forelor mecanice ce acioneaz
asupra acestora prin percepia sunetului sau micarea corpului.
3. Cilii i flagelii. Cilii i flagelii sunt structuri mobile ce sunt proiectate de pe suprafaa
unei celule. Ei i au originea n corpii bazali (vezi Capitolul 4 III E). Cilii i flagelii au
elemente structurale similare, mecanisme de motilitate i origini similare. Cilii i flagelii
pot mica fluide i particule de-a lungul suprafeei celulare sau pot contribui la
micarea celular.
a. Morfologia n microscopia optic
(1) Cu microscopul optic, cilii apar ca i multiple structuri scurte asemntoare
firului de pr ce se proiecteaz de la suprafaa unei celule. Flagelii sunt mai lungi
dect cilii i de obicei celulele au doar un singur flagel.
(2) Cnd cilii sunt prezeni n numr mare (ex. epiteliul traheal), corpii lor bazali
sunt vizibili ca i o band de culoare nchis, n citoplasm, imediat sub cili.
b. Morfologia n microscopia electronic. Cilii i flagelii sunt compui dintr-un
buchet de microtubuli (Figura II-14, II-15)
36
(1) Axonema, sau miezul unui cil sau flagel este constituit din 9 dublete
concentrice de microtubuli n jurul unei singure perechi de microtubuli (Figura 15).
(2) Din fiecare dublet se extind n inelul extern braele dineinei ce confer cililor i
flagelilor motilitatea acestora.
c. Motilitatea cililor i flagelilor
(1) Prin hidroliza ATP se produce o for de micare a braelor dineinei, ceea ce
permite alunecarea dubletelor adiacente de microtubuli. Aceast alunecare st la
baza motilitii cililor i flagelilor.
(2) Cilii realizeaz o micare de biciuire, n timp ce flagelii realizeaz o micare
de unduire.
(3) Multitudinea de cili de pe suprafaa epitelial realizeaz o btaie rapid (pn
la 15 bti pe secund) n mod sincronizat. O btaie ciliar prezint o micare
iniial puternic, rapid i o micare de revenire lent.
(a) n micarea iniial, toi cilii dintr-o anumit regiune a epiteliului se mic
ntr-o singur direcie, complet extini, mturnd fluidele i suspensiile.
(b) Micarea de revenire determin revenirea cililor n poziia iniial cu o
micare de circular, reducnd astfel coeficientul de vscozitate.
(4) Spre deosebire de cili, flagelii se mic printr-o serie de undulaii ce se
propag de la baz pn la vrful flagelului.
3. Pliuri i interdigitaii. Suprafeele laterale i bazale ale unor celule epiteliale
prezint amplificaii extinse ale membranei plasmatice (Figura II-16). Aceste pliuri cresc
suprafaa celular i creaz un spaiu intercelular complex. Pe lateral, amplificaiile
sunt intersectate sau prezint interdigitaii cu proieciile laterale corespondente ale
celulelor adiacente.
a. Pliuri interne bazale i striaiile. n unele celule, procesele bazale conin
mitocondrii ale cror ax lung este paralel cu axul lung al celulei. Aceast orientare
produce striaiile bazale ce pot fi observate n seciunile tubulilor renali i ale ductelor
unor glande salivare.
b. Transportul fluidic transepitelial. n epiteliul absorbant, suprafeele membranare
laterale sunt bogate n Na
+
, K
+
-ATPaz.
(1) Na
+
este pompat din citoplasm de-a lungul membranei laterale astfel c
spaiul dintre interdigitaiile laterale devine hipertonic. Apa ce nsoete Na
+
-ul
destinde spaiul potenial dnd natere spaiului intercelular datorit unei presiuni
hidrostatice crescute. Aceast presiune conduce fluidul din acest spaiu n esutul
conjunctiv adiacent.
37
(2) Mitocondriile asociate cu membrana plasmatic lateral asigur sursa
energetic necesar acestui proces.

































38
C CA AP PI IT TO OL LU UL L 3 3
O OR RG GA AN NI IT TE EL LE E I I I IN NC CL LU UZ ZI IU UN NI IL LE E C CI IT TO OP PL LA AS SM MA AT TI IC CE E

I. INTRODUCERE
Compartimentul citoplasmatic a unei celule eucariote este spaiul intercelular situat ntre
membrana plasmatic i nucleu.
A. Componentele citoplasmatice. Citoplasma conine o varitate de organite
membranare, structuri filamentare, particule i incluziuni. Aceste structuri sunt
nconjurate de citosol, ce este compus din ap, ioni, diveri metabolii, inclusiv aminoacizi
i nucleotide, numeroase proteine i molecule precum glucoza iadenozin-trifosfat (ATP).
B. Principalele ci ale biosintezei. Citoplasma celulelor eucariote este subdivizat ntr-o
serie de organite membranare distincte. Anumite funcii specifice existente n celule sunt
repartizate organitelor celulare. Organitele aparinnd unei ci biosintetice sunt
interconectate prin transportul vezicular.
1. Transportul vezicular. Un mecanism general al transportului vezicular explic
micarea proteinelor i a fosfolipidelor ntre i prin organitele membranare ale unei ci
de biosintez.
a. Veziculele se formeaz i se desprind dintr-un compartiment membranar ajung la
urmtorul compartiment membranar al cii (ex. compartimentul int), fuzioneaz cu
acesta i i elibereaz coninutul.
b. Veziculele apoi se desprind din membrana int i se rentorc fuzionnd cu
membrana de origine pentru a prelua un alt transport. n acest mod, organitele
membranare rein identitatea lor unic n timp ce produsele de biosintez trec prin
acestea.
2. Calea de biosintez proteic. Calea intracelular pentru sinteza i secreia proteic
leag reticulul endoplasmic rugos (RER), aparatul Golgi i reeaua golgi trans
(RGT). Anumite proteine i ncep sinteza n RER, sunt apoi transportate la aparatul
Golgi, unde sunt prelucrate i sortate n reeaua trans, spre destinaiile finale.
3. Calea biosintezei fosfolipidelor membranare. Calea intracelular pentru sinteza i
distribuia fosfolipidelor membranare leag reticulul endoplasmic neted (REN) de
RER, de unde fosfolipidele sunt distribuite altor organite n calea biosintezei proteice
prin intermediul veziculelor. Proteinele de schimb a fosfolipidelor transport
fosfolipide de la REN la alte organite care nu sunt n calea biosintezei proteice.

II. RETICULUL ENDOPLASMATIC
39
Reticulul endoplasmatic prezint un rol major n procesele de biosintez celular. Este un
organit nvelit de o singur membran ce formeaz o vast reea interconectat de
compartimente denumite cisternele RE. Membrana RE reprezint mai mult de 50% din
totalul membranelor celulare. REN i RER reunesc dou regiuni distincte ale RE. Dei
membranele ale acestor dou regiuni sunt continui, aceste sunt distincte din punct de
vedere morfologic, funcional i n ceea ce privete compoziia acestora.
A. Reticulul endoplasmic neted.
1. Morfologie. REN este constituit dintr-o serie de tubuli anastomozai ce prezint o
suprafa neted (Figura II-17).
2. Funcie. REN este responsabil de biosinteza lipidelor membranare. Acestea includ
att fosfolipide membranare, ct i colesterol i ceramid. Ceramida poate prezenta
ataat un lan simplu sau complex de carbohidrai formnd astfel un glicolipid.
a. Localizarea biosintezei. Enzimele implicate n biosinteza lipidelor membranare
sunt localizate n compartimentul citoplasmatic al membranei, n apropierea sursei de
substrat.
b. Translocarea fosfolipidelor. Dei fosfolipidele membranare sunt sintetizate pe
faa citoplasmatic a membranei, unele sunt ntoarse spre coninutul cisternei.
Aceasta explic asimetria fosfolipidelor observat n compartimentele membranare.
(1) Flipazele sunt enzime prezente n membrana REN i sunt responsabile pentru
translocarea fosfolipidelor.
(2) O anumita flipaz este responsabil pentru translocarea fosfolipidelor ce
conin colin, dar nu i pentru fosfolipidele ce conin serin sau etanolamin.
Astfel, asimetria lipidelor membranare din membranelor biologice este stabilit
n REN.
c. Transferul fosfolipidelor sintetizate de REN la alte organite membranare
(1) Transferul ctre aparatul Golgi, lizozomi i membrana plasmatic este realizat
prin intermediul veziculelor ce pleac de la REN i ajung la organitele int.
(2) Transferul ctre mitocondrii i peroxizomi este realizat prin proteine
citoplasmatice transportoare de fosfolipide.
3. Distribuia. Deoarece rolul su n biosinteza fosfolipidelor este esenial pentru
ntreinerea membranei celulare, toate celulele conin REN. Cu toate acestea, este n
mod particular predominant n anumite tipuri celulare.
a. Hepatocite. REN joac un rol important n metabolismul glicogenului. n plus, REN
hepatocitelor este locul detoxificrii medicamentelor lipid-solubile, a reziduurilor
metabolice i a toxinelor ingerate.
40
b. Celule musculare striate. REN depoziteaz Ca
2+
citoplasmatic n majoritatea
celulelor, iar aceast funcie este mai dezvoltat n celulele musculare striate. n
aceste celule, REN i corespunde reticulul sarcoplasmatic, un organit ce joac un rol
major n meninerea concentraiei sczute a calciului n sarcoplasm i astfel
regleaz contracia muscular.
c. Celule ce produc hormoni steroizi. REN este bine dezvoltat n aceste celule ce
sintetizeaz i secret steroizi, cum sunt celulele adrenocorticalei, celulele
interstiiale ale testiculelor i celulele granuloase ale ovarului.
B. Reticulul endoplasmic rugos.
1. Morfologie. Faa citoplasmatic a RER este presrat cu ribozomi i poliribozomi
dndu-i aspectul rugos. Se extinde de-a lungul citoplasmei ca o serie de cisterne
membranare turtite (Figura II-17).
a. Membrana RER continu membrana nveliului nuclear.
b. RER poate fi observat prin microscopia optic prin colorare cu colorani bazici i
cu ajutorul coloranilor metacromatici. Aceasta se datoreaz reelei de anioni ale
gruprilor fosfat aparinnd acizilor ribonucleici (din ribozomi).
2. Distribuia. RER este prezent n toate celulele dar este abundent n celulele
specializate pentru secreia proteic. Este predominant n citoplasma bazal a unor
celule secretorii polarizate (ex. pancreas exocrin) i n pericarionul neuronilor mari,
unde este denumit substana Nissl (Fig. II-18, II-19).
3. Funcie. RER este responsabil pentru biosinteza proteic, incluznd proteine
secretorii, hidrolazele acide, proteine membranare ale RE, ale aparatului Golgi i a
lizozomilor, ct i proteine ale membranei plasmatice.
a. Localizarea sintezei proteice. Sinteza tuturor proteinelor ncepe la nivelul
poliribozomilor liberi n citoplasm (vezi VII A). Polizomii ce sintetizeaz proteine la
nivelul RER sunt conduse spre acest organit deoarece proteina nascent conine o
secven semnal n apropierea captului amino.
(1) Pe msur ce proteina nascent iese din ribozom, secvena semnal este
recunoscut de o particul de recunoatere a semnalului (SRP) din citoplasm
(Fig. II-20). SRP se leag de secvena semnal formnd un complex constituit din
proteina nascent, ribozom i din ARNm ce este translatat. Sinteza proteic este
temporar suspendat.
(2) Complexul SRP se leag de un receptor SRP, o proteina membranar din
RER. Ulterior, ribozomul se leag de proteina de legare a ribozomului din
41
membrana RER, iar SRP se disociaz i este reciclat n citoplasm i sinteza
proteic rencepe.
b. Translocarea proteinelor. Pe msur ce translaia ARNm se continu pe
polizomii legai de membrana RER, proteinele nou sintetizate sunt transferate prin
membrana RER n cisternele RER.
(1) Proteinele secretorii. Urmnd clivajului secvenei semnal prin peptidaza
semnal, o protein rezident RER, proteinele secretorii sunt eliberate n interiorul
cisternelor. Acestea sunt transportate prin vezicule de la RER la aparatul Golgi.
(2) Proteinele membranare. Proteinele membranare sunt de asemenea inserate
n membranele RER n timpul sintezei. Proteinele membranare, ns rmn
asociate cu membrana veziculelor n timp ce acestea sunt transportate de la RER
la aparatul Golgi.
c. Modificrile proteinelor. Proteinele sintetizate pe RER sufer o varietate de
modificri. Acestea pot avea loc fie n timpul translocaie prin membrane sau dup ce
proteina a fost eliberat n cisterne.
(1) Modificri cotranslaionale implic modificri ale sau adiia de aminoacizi
specifici la secvena primar a proteinei nascente.
(a) Glicozilarea N-linkat
(i) Adiia de zaharuri la reziduurile de asparagin (Asn) este cea mai
obinuit modificare.
(ii) Cele mai multe proteine membranare i secretorii sunt glicoproteine.
Glicozilarea acestor glicoproteine ncepe n RER. Urmtoarele etape n
procesarea oligozaharidelor N-linkate ale glicoproteinelor are loc n aparatul
Golgi (vezi III B 1).
(b) Hidroxilarea reziduurilor de prolin i lizin n lanurile pro- ale colagenului
are loc n timp ce peptidul nascent este n tranzit de-a lungul membranei RER.
(c) Clivarea secvenei semnal este n sine o modificare cotranslaional a
proteinelor secretorii.
(2) Modificrile post-translaionale ale RER implic o pliere adecvat a
proteinelor i asocierea subunitilor proteice pentru a forma largi complexe
moleculare.
(a) Proteinele nou-sintetizate sunt reinute n RER pn cnd acestea fie vor
prezenta o conformaie adecvat sau acestea se asociaz cu perechea unui
complex oligomeric.
42
(b) Cteva proteine rezidente RER servesc pentru controlul calitii proteinelor
(ex. proteina de legare (BiP), calnexina).
4. Transportul vezicular de la RER la aparatul Golgi.
a. Veziculele de transport ce conin proteine nou-sintetizate se desprind de pe
regiunile netede ale RER. Aceste regiuni sunt denumite elemente tranziionale ale
RER.
b. Veziculele se mic i fuzioneaz cu membranele cis Golgi.
5. Transportul vezicular la alte organite membranare. Proteinele ce i ncep
sinteza n RER sunt transportate de la RER la aparatul Golgi, printre i de-a lungul
sacilor golgieni, i de la reeaua trans la destinaia lor final prin intermediul veziculelor.
Veziculele se desprind de pe o membran, sunt transportate la urmtorul compartiment
membranar (inta), fuzioneaz cu acesta i i elibereaz coninutul. Apoi veziculele se
desprind de pe membrana int i se rentorc i fuzioneaz cu membrana originar
pentru a prelua un alt transport.

III. APARATUL GOLGI
A. Morfologie. Aparatul Golgi este un organit ce apare ca o structur format din 6-8
compartimente membranare aplatizate i vezicule asociate i vacuole, adesea localizate
lng centrozom (Figura II-21, II-22, II-23).
1. Vezicule (de transport). Un numr mare de vezicule mici sunt asociate cu sacii
golgieni. Acestea sunt adunate pe faa cis a aparatului Golgi, faa cea mai apropiat
de RER. Veziculele sunt responsabile de transportul direcionat al moleculelor de la
RER la aparatul Golgi (Fig. II-24, II-25).
a. Veziculele de asemenea sunt aranjate de-a lungul poriunii laterale ale cisternelor
golgiene.
b. Aceste vezicule sunt responsabile de transportul direct a moleculelor ntre
subcompartimentele aparatului Golgi.
2. Vacuole (vezicule de secreie). Vacuolele sunt localizate pe faa trans a aparatului
Golgi ce reprezint faa cea mai ndeprtat de RER. Vacuolele sunt responsabile de
concentrarea i transportul produilor finali de la Golgi la destinaiile lor finale.
3. Compartimentele funcionale ale aparatului Golgi. Aparatul Golgi poate fi separat
n patru compartimente funcional distincte: sacii cis, sacii mediali, sacii trans i
reeaua trans (TGN) (Fig. II-27). Primii trei sunt implicai n modificri post-
translaionale ale moleculelor ce tranziteaz sacii. Reeaua TGN este implicat n
43
sortarea moleculelor spre destinaiile finale (lizozomi, vezicule secretorii, sau
membrana plasmatic).
B. Funcii. Principalele funcii ale aparatului Golgi sunt de a prelucra proteinele i lipidele
sintetizate de RE.
1. Prelucrarea lanurilor oligozaharidice N-linkate. Oligozaharidele N-linkate
sintetizate n RER sunt prelucrate mai departe n aparatul Golgi n sacii golgieni cis i
mediali.
2. Sinteza glicoproteinelor O-linkate. Adiia de zaharuri la proteine la nivelul serinei
(glicoproteine O-linkate) este realizat la nivelul sacilor golgieni mediali i trans prin
proteine membranare integrale denumite glicozil-transferaze. Aceste enzime adaug
de asemenea i zaharuri la reziduurile de serin ale glicolipidelor din sacii golgieni.
3. Procesarea hidrolazelor acide. Hidrolazele acide destinate lizozomilor sunt
sintetizate de polizomii RER. Prelucrarea ulterioar n sacii cis golgiene le
direcioneaz ctre lizozomi (Fig. II-26).
a. Direcionarea este realizat prin reziduuri de manoz fosforilate rezultnd
manoza-6-fosfat (M6P).
b. Hidrolazele cu M6P sunt transportate prin sacii golgieni la TGN, unde se leag de
un receptor M6P, o protein transmembranar a TGN. Acest receptor ajut la
sortarea enzimelor pentru lizozomi.
(1) Receptorii i hidrolazele sunt localizate n regiuni specifice ale TGN ce sunt
nvelite de o protein citoplasmatic, clatrina (vezi Capitolul 2 IV B 1 b).
(2) Vezicule nvelite de clatrin, ce conin hidrolazele legate de receptor se
desprind de TGN i sunt transportate la un alt compartiment membranar denumit
endozomul matur [vezi Capitolul 2 IV B 2 b (1)].
(a) Hidrolazele pot rmne n endozomul matur sau pot fi mpachetate n
lizozomi.
(b) Receptorul M6P este reciclat la TGN pentru a fi reutilizat.
4. Sulfatarea proteinelor are loc n sacii trans. Proteinele din miezul proteoglicanilor ale
matricei extracelulare sunt glicozilate extensiv iar aceste zaharuri sunt puternic
sulfatate. Unele reziduuri de tirozin sunt de asemenea sulfatate.
C. Rolul aparatului Golgi n secreie. Proteinele i lipidele ce vor deveni constitueni ale
membranei plasmatice, ct i proteinele ce vor fi secretate de celul, sunt transportate de
la aparatul Golgi la suprafaa celulei i eliberate ntr-un proces denumit secreie
constitutiv. Alte molecule sunt depozitate n granule secretorii i eliberate mai trziu, n
44
urma unui stimul. Acest proces este denumit secreie reglat. Sortarea acestor
molecule are loc n TGN.
1. Secreia constitutiv este o funcie a tuturor celulelor. Continuu, veziculele se
mic de la TGN pentru a fuziona cu membrana plasmatic unde i elibereaz
coninutul prin exocitoz. Membrana veziculelor este apoi preluat prin endocitoz i
reciclat la aparatul Golgi. Exemple ale secreiei constitutive includ secreia de proteine
plasmatice de ctre hepatocite, secreia de imunoglobuline de ctre celule plasmatice
i eliberarea de proteine i lipide ale membranei plasmatice.
2. Secreia reglat. Proteinele secretate ce urmeaz aceast cale sunt sortate activ n
granule de depozit n TGN, printr-un proces denumit agregare selectiv. O secven
semnal pentru sortare nu a fost identificat pentru aceste proteine.
a. Agregarea selectiv. Aceste proteine secretorii par s fie agregate n prezena
unor concentraii mari de Ca
2+
i ntr-un mediu uor acid. Ambele condiii sunt
ntlnite n regiuni ale TGN.
b. Sortarea activ. Proteinele agregate devin localizate n regiuni ale membranelor
TGN ce sunt nvelite de clatrin, ceea ce contribuie la formarea de vezicule cu
nveli.
c. Modificri post-translaionale ale proteinelor n granule de secreie. Granulele
de secreie nu sunt doar vezicule de depozitare; n acestea avnd loc o procesare i
maturare activ. Vacuole nou formate ce se desprinde de pe TGN sunt mari i au un
coninut diluat. Asemenea vacuole sunt denumite vacuole de condensare.
Modificri ulterioare includ condensarea (concentrare) secreiei i modificri
enzimatice (clivaj) ale proteinelor de secreie.
d. Stimularea secreiei. Concentraia crescut a Ca
2+
citoplasmatic este necesar
pentru a semnaliza granulele de secreie, deplasarea lor spre membrana plasmatic
i eliberarea coninutului prin exocitoz.

IV. MITOCONDRIILE
Mitocondriile sunt organite dublu-membranare prezente n toate celulele (Fig. II-29).
Acestea sunt responsabile de producerea de ATP i se gsesc de obicei n numr de
1000 per celul. Mitocondriile tind s se acumuleze n regiunile celulei unde activitatea
metabolic este crescut i cantiti mari de ATP sunt necesare (membrana apical a
celulelor ciliate; membranele bazolaterale implicate n transportul ionilor i a apei).
45
A. Morfologia. Mitocondriile sunt formate din dou membrane ce delimiteaz dou
compartimente distincte. Acestea prezint o varietate de forme, de sfer, de bastona sau
de structuri lungi filamentare.
1. Membrana extern. Membrana extern este neted i conine un numr de enzime
metabolice. Membrana extern conine de asemenea o mulime de proteine de
transport denumite porine. Porina este responsabil pentru transportul prin membrana
extern fiind permeabil neselectiv pentru particule mai mici de 5 kD.
2. Membrana intern. Membrana intern mitocondrial formeaz o varietate de pliuri
ale membranei denumite criste. Numeroasele pliuri ale membranei interne i mresc
suprafaa, crescnd astfel capacitatea sa de a genera ATP. Membrana intern este
impermeabil pentru ioni. Astfel, este necesar o form de transport activ pentru a
transporta moleculele prin membran.
3. Compartimentele mitocondriale. Dou compartimente sunt create de cele dou
membrane.
a. Spaiul intermembranar este localizat ntre membrana intern i membrana
extern.
b. Matricea este localizat n spaiul creat de membrana intern. Matricea conine
granule matriciale electrodense ce conin Ca2+ acumulat, fosfat i ali ioni bivaleni.
Mitocondriile sunt capabile s acumuleze aceti ioni mpotriva gradientului de
concentrare.
B. Funcii. Mitocondria este organitul responsabil de producerea ATP-ului. O varietate de
ci de metabolism au loc n mitocondrie, incluznd -oxidarea acizilor grai, fosforilarea
oxidativ i ciclul Krebs. Att prin ciclul Krebs ct i prin oxidarea acizilor grai se produc
substraturi pentru sinteza ATP pentru a forma ATP.
1. Enzimele mitocondriale
a. Enzime membranare. Cristele conin ATP-sintetaz i enzime pentru fosforilarea
oxidativ i lanul transportor de electroni. ATP-sintetaza este prezent sub forma
unor particule elementare, cu dou subuniti, F0 i F1.
b. Enzime matriciale. Matricea conine enzimele ciclului Krebs i enzimele implicate
n oxidarea acizilor grai.
2. Gradientul electrochimic. Activitatea enzimelor din lanul transportor de electorni
localizat n membrana intern realizeaz un gradient electrochimic de-a lungul
membranei interne. Aceasta creaz o important for proton motrice (PMF) ce
realizeaz micarea H
+
sub gradientul electrochimic prin ATP-sintetaz. Aceast
micare a protonilor denumit cuplare chemiosmotic determin sinteza ATP.
46
a. ATP-ul produs este transportat n afara matricei printr-un sistem antiport ADP-ATP
n membrana intern.
b. ATP-ul nou sintetizat difuzeaz apoi n citoplasm prin porii membranei externe.
C. Genomul mitocondrial. Mitocondriile conin ADN propriu i structuri de sintez
proteic. Genomul este de mici dimensiuni, comparativ cu genomul nuclear (vezi cap. 4 II
A).
1. ADN-ul mitocondrial este o molecul circular care codific 13 polipeptide, 2 ARNr i
22 ARNt. Toate polipeptidele codificate de ADN-ul mitocondrial sunt subuniti ale cii
de fosforilare oxidativ. ARNt i ARNr sunt folosii n translaia ARNm mitocondrial.
2. Celelalte proteine mitocondriale sunt codificate de ctre genomul nuclear i sunt
sintetizate de ctre polizomii liberi n citoplasm. Post-translaional aceste proteine
sunt translocate de-a lungul membranelor mitocondriale.
D. Creterea i diviziunea mitocondrial. Mitocondriile nu sunt sintetizate de novo ci
apar prin creterea i diviziunea altor mitocondrii.
1. Mitocondriile se divid, crescnd n numr n timpul interfazei. Diviziunea
mitocondriilor nu se realizeaz sincronizat cu ciclul celular. Replicarea ADN
mitocondrial nu este restricionat de faza S ci se continu n timpul ciclului celular.
2. Numrul de mitocondrii se pare c este reglat n funcie de necesiti. De exemplu,
cnd o fibr muscular n repaus a fost stimulat n mod repetat pentru o lung
perioad de timp s-a observat o cretere de 5-10 ori a numrului de mitocondrii.
E. Originea mitocondriilor. Se consider c mitocondriile ar proveni din procariote care
au supravieuit n simbioz cu eucariotele primitive. Urmtoarele argumente susin aceast
teorie:
1. Mitocondriile se divid i conin genom propriu. Ele sintetizeaz ARNr, ARNt i ARNm
i realizeaz translaia propriilor ARN n proteinele mitocondriale.
2. Subunitile ribozomale mitocondriale sunt asemntoare cu cei ai bacteriilor dect
cu ribozomii eucariotelor.
3. Sinteza proteinelor mitocondriale este sensibil la inhibitorii sintezei proteice
bacteriene i nu este sensibil la inhibitorii sintezei proteice de la eucariote.

V. PEROXIZOMII
Peroxizomii sunt prezeni n aproape toate celulele eucariote ca i vezicule nconjurate de
o singur membran (fig. 2-1).
A. Morfologia. Peroxizomii sunt structuri sferice sau uor ovoide cu dimensiuni ntre 0,3-
1,0 m n diametru. Microscopia electronic relev o matrice electrodens amorf. La
47
unele specii (excepie face specia uman) conin o incluziune cristaliod n care se afl
urat-oxidaz.
B. Funcii.
1. -oxidarea acizilor grai. Principala funcie a peroxizomilor este descompunerea
acizilor grai cu lan lung prin -oxidare. Peroxizomii conin o varietate de enzime
oxidative i pot fi responsabili de 50% din oxidarea acizilor grai, restul fiind oxidai n
mitocondrii.
2. Degradarea peroxidului de hidrogen. -oxidarea produce peroxid de hidrogen
(H
2
O
2
), o substan potenial toxic pentru celule, ce trebuie eliminat.
a. Peroxizomii conin enzima catalaz ce distruge H
2
O
2
produs.
b. H
2
O
2
n exces ce se acumuleaz ntr-o celul din alte surse poate fi, de
asemenea, eliminat de ctre peroxizomi.
C. Biogeneza. Ca i mitocondria, peroxizomul nu se alf n calea sintezei proteice ce
implic RER i aparatul Golgi. Astfel, toate proteinele i lipidele peroxizomului trebuie
importate.
1. Proteinele (att enzime ct i proteine membranare) sunt sintetizate de polizomii
liberi n citoplasm i importate post-translaional n peroxizom.
2. Fosfolipidele sunt produse n REN i transferate membranei peroxizomale prin
proteine de schimb fosfolipidic.
3. Noii peroxizomi provin din peroxizomii preexisteni prin cretere i fisiune.

VI. LIZOZOMII
Lizozomii sunt organite membranare prezente in toate celulele. Ei conin un numr mare
de hidrolaze acide folosite n degradarea intracelular a macromoleculelor.
A. Morfologia. Lizozomii sunt heterogeni din punct de vedere morfologic. La aceast
concluzie s-a ajuns printr-un sistem de clasificare bazat pe caracteristicile ultrastructurale
n combinaie cu histochimia enzimatica. Lizozomii sunt clasificai ca i primari, secundari
i teriari (figura 2-5).
1. Lizozomii primari sunt organite produse de novo ce nu au participat nc la un
proces de digestie. Aceste vezicule mici, ce msoar ntre 0,1 i 0,3 m n diametru, se
coloreaz omogen. Acetia pot fi identificai prin colorarea enzimelor folosind reacii
histochimice adecvate (ex. pentru fosfataza acid).
2. Lizozomii secundari sunt de obicei mai mari dect lizozomii primari i au un
coninut heterogen indicnd procesele de degradare ce au loc n lizozomi.
48
a. Materialele ce urmeaz s fie digerate de hidrolazele lizozomale pot ajunge n
compartimentele lizozomale pe mai multe ci.
(1) Endocitoza i fagocitoza aduc materiale din exterior n celul prin vezicule
(endozomi sau fagozomi) ce fuzioneaz cu lizozomii (vezi cap. 1 IV).
(2) Autofagocitoza este un proces prin care celula formeaz o vacuol
membranoas (autofagozom) n jurul componentelor citoplasmatice. n continuare
vacuola fuzioneaz cu lizozomi pentru a expune coninutul lor ctre hirolazele
acide.
b. Lizozomii secundari conin uneori material digerat parial. De exemplu, un
autofagozom poate conine fragmente de mitocondrie sau RER ce pot fi recunoscute;
un fagozom poate conine o bacterie parial digerat.
3. Lizozomi teriari. Morfologic, lizozomii teriari se aseamn cu lizozomii secundari.
Lizozomilor teriari, ns, le lipsesc hidrolazele acide active.
a. Lizozomii teriari se acumuleaz n citoplasm odat cu naintarea n vrst.
Acetia se mai numesc i corpi reziduali.
b. n celulele care triesc mai mult timp, cum sunt neuronii, corpii reziduali sunt
cunoscui i ca lipofuscin (pigmentul mbtrnirii).
B. Funcia. Mai mult de 40 enzime hidrolitice au fost identificate n lizozomi. Acestea
includ proteaze, lipaze, nucleaze, glicozidaze, fosfataze, fosfolipaze i sulfataze. Astfel,
aproape orice substan biologic ar putea fi degradat de lizozomi. Totui, nici un lizozom
individual nu conine toate hidrolazele identificate.
1. Natura acid a lizozomilor. Toate enzimele lizozomale funcioneaz la un pH acid
(n jur de 5,0). O pomp de protoni (o H
+
-ATP-az) prezent n membrana lizozomal
scade pH pompnd activ H
+
n interiorul lizozomilor.
2. Locaii ale activitii lizozomale. Funcia lizozomal se desfoar adesea
intracelular. Totui, unele celule elibereaz enzime lizozomale ce i ndeplinesc funcia
n matrice extracelular.
a. Osteoclastele secret activ enzime lizozomale n mediul extracelular n timpul
rezorbiei osoase. Aceste enzime desfac hidroxiapatita i elibereaz n snge Ca
2+
i
fosfat.
b. La locul infeciei i inflamaiei, neutrofilele adesea i elibereaz lizozomii n
matricea extracelular.
3. Maladiile lizozomale. Cteva boli ereditare au fost identificate ca rezultnd din
absena uneia sau a mai multor hidrolaze acide specifice. Deficiena enzimatic
determin acumularea intracelular a substratelor normale ale enzimelor lips. De
49
exemplu, n bolile Tay Sachs, Fabray i boala Gaucher, glicolipidele se acumuleaz n
lizozomi, n final umplu citoplasma i determin o dezechilibrare a funciilor celulare.

VII. PARTICULE I INCLUZIUNI
A. Ribozomi i polizomi. Toate sintezele proteice ncep pe ribozomii liberi din
citoplasm. ARN mesager, ARN de transport i subunitile ribozomale ce au fost
transportate n afara nucleului, n citoplasm, se asambleaz n complexe funcionale de
sintez proteic.
1. Morfologia i distribuia. Ribozomii apar ca i particule cu diametre ntre 15 nm i
25 nm. Se pot prezenta singulari (monoribozomi) sau ca polizomi, n clustere, spirale,
rozete sau elice. Acetia ar putea exista liberi n citoplasm sau ataai de membranele
RER. Celulele metabolic active prezint att polizomi liberi i ataai.
a. Celulele specializate n secreia proteic au o proporie mai mare de polizomi
ataai (ex. fibroblastele).
b. Celulele nedifereniate i celulele ce sintetizeaz cantiti mari de proteine
citoplasmatice au de obicei mai muli poliribozomi liberi (ex. celulele musculare
netede).
2. Sinteza proteic
a. Ribozomi ataai. Dac o secven semnal este codificat n ARNm, acest
complex va fi legat de o particul de recunoatere a semnalului i dirijat ctre RER
pentru continuarea translaiei.
b. Ribozomii liberi. n absena secvenei semnal, translaia continu n
citoplasm.
B. Glicogen i lipide. Celulele depoziteaz carbohidrai i lipide sub forme ce sunt
disponibile ca i intermediare n procesul sintetic sau ca i substrate metabolice.
1. Glicogenul este un polimer mare ramificat de glucoz prezent n citoplasm ca i
particule care nu sunt ncapsulate de membrane. Particulele msoar n jur de 30 nm
n diametru i ar putea fi prezente singure sau n clustere (figura 2-1).
a. Glicogenul este abundent n hepatocite i celulele musculare striate dar se
regsete n cantiti mai mici n aproape toate tipurile celulare. Este adesea asociat
cu REN.
b. Sinteza i catabolizarea glicogenului sunt intens reglate. Cnd celulele desfac
glicogenul, glucozo-1-fosfatul este eliberat i folosit pe mai multe ci metabolice.
50
2. Picturile lipidice sunt compuse din trigliceride ce s-au unit n picturi
citoplasmatice. Trigliceridele asigur sursa de acizi grai ce va fi folosit ca i surs de
energie n celule.
a. n timpul deshidratrii esuturilor pentru prepararea histologic, picturile lipidice
sunt extrase, producnd guri pe seciunile histologice (figura 9-1). Fixarea cu
tetraoxid de osmiu, sau prepararea seciunilor ngheate colorate cu colorani
liposolubili vor evidenia picturile (figura 9-2).
b. Celule ce produc hormoni steroizi conin un numr mare de picturi lipidice,
coninutul crora servesc ca i intemediari n sinteza de hormoni steroizi.
c. Acumularea de picturi lipidice este semn a unui proces patologic n unele celule
(ex. degenerarea lipidic a ficatului).
























51
C CA AP PI IT TO OL LU UL L 4 4
C CI IT TO OS SC CH HE EL LE ET TU UL L

I. INTRODUCERE
Citoscheletul, n analogie cu scheletul osos al organismului, realizeaz un cadru suport
pentru celul, permindu-i s adopte o varietate de forme. De asemenea joac un rol n
organizarea coninutului celular prin meninerea distribuiei spaiale a organitelor care e
caracteristic anumitor tipuri celulare. n plus, citoscheletul ofer motorul pentru miarea
celular i a organitelor celulare.
A. Elemente filamentare. Citoscheletul cuprinde 3 tipuri principale de filamente proteice:
actina, microtubulii i filamentele intermediare, plus o varietate de proteine asociate.
Fiecare tip de filament este compus din diferite subuniti proteice.
1. Conservarea structurii. Actina i subunitile proteice ale microtubulilor sunt
constante. Filamentele intermediare, pe de alt parte, au diverse mrimi i greuti
moleculare.
2. Coexistena intracelular. Toate cele trei tipuri de filamente citoscheletice se
regsesc n majoritatea celulelor, uneori independent unele de altele, dar adesea
asociate prin proteine accesorii.
3. Citoscheletul nu este o super-structur rigid. In celule nemusculare, elementele
citoscheletului sunt ntr-un status de echilibru dinamic ntre o acumulare de subuniti
libere i filamente polimerizate. n celulele musculare, elementele filamentoase se
gsesc n principal ntr-o form asamblat.
B. Organizarea citoplasmei. n timp ce organitele membranare (reticulul endoplasmic,
complexul Golgi, mitocondria, nucleul) realizeaz o diviziune a funciei pentru multe
procese metabolice, citoscheletul realizeaz o mai mare organizare prin meninerea
locaiei acestor organite n citoplasm. n continuare v prezentm cteva exemple.
1. Reeaua cortical actinic. O reea filamentar de atin i proteinele de legare a
actinei se gsesc imediat sub membrana plasmatic, formnd un complex denumit
cortexul celular. Acesta controleaz forma celular i micarea suprafeei celulare (vezi
II C 1).
2. Scheletul citoplasmatic. Reticulul endoplasmatic i membranele Golgi sunt
poziionate de-a lungul unor microtubuli ce eman din centrozom.
a. Sacii golgieni sunt de obicei localizai mai aproape de centrozom dect reticulul
endoplasmatic. Reticulul endoplasmatic, ce formeaz o reea membranar extins n
toat citoplasma, este ntins printr-un schelet de microtubuli.
52
b. Proteinele motorii, care au locusuri de ataare pentru organitele celulare i
pentru microtubuli, sunt responsabile pentru micarea organitelor n anumite poziii
din celul.
3. Integratori ai spaiului citoplasmatic. n majoritatea celulelor animale o reea
extins de filamente intermediare nconjoar nucleul, se extind pn la periferia celulei
i intr n contact cu membrana plasmatic. n celulele epiteliale aceste filamente
intermediare se ataeaz de plcile desmozomale pentru a rigidiza contactul
intercelular (vezi Capitolul 5).

II. ACTINA
Actina este proteina cea mai abundent n majoritatea celulelor eucariote, msurnd pn
la 5% sau mai mult din proteinele totale ale celulelor nemusculare i pn la 20% din
greutatea celulelor musculare.
A. Tipuri de actin.
1. Actina filamentoas (actina-F) este un helix liniar format din subuniti globulare
polimerizate (monomeri) numite actina-G.
2. Actina monomeric (actina-G), cu greutatea molecular de 42 kD, prezint
locusuri de legare pentru adenozin-trifosfat (ATP) sau adenozin-difosfat (ADP) i att
pentru cationii monovaleni (K
+
) ct i bivaleni (Mg
2+
).
B. Polimerizarea actinei. Cnd monomerii de actin-G sunt amestecai in vitro cu K
+
,
Mg
2+
i ATP, acetia polimerizeaz n filamente lungi de actin-F.
1. Polimerizarea ncepe cu o faz latent (perioada de nucleaie) dup care actina-F se
formeaz rapid (faza de elongaie) pn cnd se atinge un nivel de platou al
polimerizrii (faza de echilibru).
a. Perioada de nucleaie. Faza de laten reprezint o barier cinetic, n care
monomerii se asociaz pentru a forma dimeri i apoi trimeri. Trimerul este structura
de nucleaie pentru adiia spontan a monomerilor n viitoarele filamentele.
b. Elongaia. Monomerii sunt adugai la fiecare capt al trimerului, producnd un
filament elongat de 7-9 nm n diametru i cu o lungime intermediar.
c. Faza de echilibru. n faza de echilibru, rata de adiie a monomerilor este egal cu
rata la care monomerii prsesc filamentul.
2. Hidroliza ATP. Imediat dup adiia monomerilor la filamentul de actin, fosfatul
terminal al ATP care este legat de moleculele de actin, este hidrolizat.
a. Hidroliza ATP determin o schimbare a conformaiei fiecrei subuniti actinice din
filament.
53
b. n timp ce hidroliza ATP nu este necesar pentru polimerizare, schimbarea de
conformaie modific rata de adiie a actinei-G la cele dou capete ale filamentului.
3. Rata de polimerizare. Diferena ratei de polimerizare la cele dou capete ale
filamentelor n formare confer o polaritate a filamentului.
a. Captul de adiie rapid este captul plus. Rata de adiie la acest capt este de
10 ori mai mare dect la captul de adiie lent (captul minus).
b. La fiecare capt este o concentraie critic (Cc) a monomerilor de actin la care
rata de asociere este egal cu rata de disociere.
(1) La captul plus, Cc este de aproximativ 1 mol/l, n timp ce la captul minus
este de aproximativ 8 mol/l.
(2) La concentraiile actinei-G ntre aceste valori, la captul plus vor fi adugai
monomeri i disociai la captul minus ntr-un ritm egal, rezultnd ntr-un aspect de
covor rulant. Acesta este statusul de echilibru.
(a) La concentraii sub 1 mol/l, depolimerizarea este favorizat la ambele
capete ale filamentului. Dezasamblarea va continua pn cnd concentraia de
monomeri liberi atinge Cc, cnd condiiile statusului de echilibru vor fi restabilite.
(b) La concentraii de peste 8 mol/l, polimerizarea va fi favorizat la ambele
capete ale filamentului. Creterea va continua pn cnd concentraia de
monomeri liberi scade pn la Cc, cnd condiiile statusului de echilibru vor fi
restabilite.
(c) n timpul strii de echilibru, filamentul va atinge o lungime constant chiar
dac exist prin filament un flux net de subuniti.
4. Reglarea polimerizrii. n celule nemusculare, concentraia de actin-G n
citoplasm se gsete ntre 50 i 200 mol/l. La o astfel de concentraie, ne-am
atepta ca toat actina-G s se regseasc sub form de filamente, innd cont de Cc
sczut al actinei. Totui, aceasta nu se ntmpl pentru c majoritatea monomerilor de
actin sunt sechestrai de un mic grup de proteine de legare a actinei (vezi II C),
exemple fiind profilina i timozina 4.
a. Interaciunea profilinei i participarea blocurilor de actin-G la etapa de nucleaie
ce iniiaz polimerizarea.
b. Aceast interaciune este un proces reglat, astfel c monomerii pot fi disponibili. n
activarea plachetar, de exemplu, aceasta rezult ntr-o modificare a formei esenial
pentru formarea trombusului (vezi Capitolul 12 VIII C 1).
C. Proteinele de legare a actinei. Actina se afl ntr-o varietate de structuri intracelulare,
de la protruzii rigide ale suprafeei celulare, cum sunt microvilii, la matricea de actin
54
tridimensional, dinamic din cortexul celular. Dei, structura filamentelor de actin este
constant, organizare i funcia motil asociat cu acestea rezult dintr-o larg varietate
de proteine de legare a actinei, ce se leag de actina-F, ajutnd la organizarea i
modularea funciei acesteia. Alte proteine de legare a actinei se leag de actina-G,
reglnd polimerizarea. Tabelul 4-1 prezint un sumar ale claselor principale de proteine de
legare a actinei. Exemple de interaciuni ntre actin i proteine de legare a actine include
urmtoarele:
1. Cortexul celular. Imediat sub membrana plasmatic n citoplasma cortical exist o
reea tridimensional de filamente de actin ce exclude organitele.
a. Filamentele lungi de actin sunt interconectate n reea prin dou proteine
filamentare de legare a actinei, fimbrina i spectrina II, formnd un gel vscos.
b. Acest gel poate deveni mai lichid. Gelsolina, o alt protein de legare a actinei
prezent n aceast reea devine o protein de separare cnd Ca
2+
citoplasmatic
depete 10
-6
mol.
(1) Cnd u macrofag vine n contact cu o particul pe care o va ngloba, nivelurile
Ca
2+
intracelular cresc i gelsolina separ filamentele de actin n fragmente
scurte. Gelsolina rmne strns legat de captul plus nou creat, blocnd
creterea monomerilor. Dezasamblarea rezultat a reelei de actin permite
suprafeei celulare s se restructureze astfel nct s permit nglobarea particulei.
(2) n timpul secreiei reglate, actinei cortical i scade vscozitatea datorit
gelsolinei, ca urmare a unui stimul ce produce o cretere tranzitorie a Ca
2+

citoplasmatic. Granulele de secreie depozitate n citoplasm sunt capabile s se
deplaseze spre membrana plasmatic, s fuzioneze cu aceastai s-i elibereze
coninutul prin exocitoz.

Tabelul 4-1. Funciile principalelor proteine de legare a actinei.
Funciile Proteinelor de legare a actinei (ABP) Exemple de ABP
Leag filamente de actin: lateral sau terminal Fimbrina, vilina,
-actinina
ntrete filamentele de actin Tropomiozina
Leag filamentele de actin legate n reea Filamina
Fragmenteaz filamentele de actin Gelsolina
Ataeaz capetele filamentelor de actin la membrana plasmatic Spectrina, ankirina
Permit alunecarea filamentelor de actin n celulele musculare Miozina II
Transport vezicule pe filamente de actin Miozina I
Leag i sechestreaz monomerii de actin Profilina, timozina 4

55
c. n celulele mobile, actina cortical poate fi reorganizat pentru a permite extensia
de lamelipode. Un lamelipod este o extensie foarte subire ale limitei celulare ce
intr n contact cu substratul i determin micarea celulei.
2. Microvilii. Membrana celular a unor celule epiteliale prezint proiecii n deget de
mnu, denumite microvili, ceea ce crete suprafaa celular pentru absorbie.
a. Fiecare microvil prezint un miez central format din 20-30 filamente de actin
legate paralel cu axul lung i ce sunt legate de membrana celular (vezi Figurile 1-3,
5-4).
b. Filamentele sunt interconectate prin dou proteine de legare a actinei, fimbrina i
vilina. Filamentele sunt ataate de membrana plasmatic prin miozina I i
calmodulin i sunt ataate de vrful lor printr-o protein de ataare a crei
compoziie rmne necunoscut.
D. Toxine de desfacere a actinei. Dou toxine, citocalazina i faloidina au fost folosite
pentru a studia echilibrul monomer-polimer.
1. Citocalazina. Citocalazina alcaliod A i B, i un derivat mai puternic, citocalazina
D, se leag de captul plus a filamentelor de actin determinnd depolimerizarea lor.
(a) Citocalazina blocheaz adiia de subuniti la captul plus, ca urmare Cc pentru
monomerii de actin trece la captul minus, astfel determinnd disocierea
subunitilor din filament.
(b) Cnd citocalazina intr n celulele vii citoscheletul de actin dispare. Locomoia
celular i citokineza sunt astfel inhibate i celula i schimb forma.
2. Faloidina. Faloidinele provenit din ciupercile Amanita au un efect opus;
stabilizeaz filamentele de actin.
(a) Faloidina se leag la interfaa dintre subunitile actinei-F, legndu-le mpreun.
(b) Deoarece faloidina se leag doar de actina-F, faloidina colorat fluorescent este
folosit ca i colorant specific actinei-F n microscopia optic.

III. MICROTUBULII
Microtubulii sunt de form cilindric, goi pe interior, cu un diametru de 25 nm. Pentru c se
extind prin citoplasm, acetia determin localizarea organitelor membranare i sunt
implicai ntr-o serie de funcii motilitate celular, inclusiv micarea cililor i flagelilor,
transportul vezicular intracelular i micarea cromozomilor n timpul meiozei i mitozei
(Figura 3-1).
A. Compoziia microtubulilor. Microtubulii sunt filamente polimerice, lungi, formate din
subuniti de tubulin.
56
1. Subunitatea tubulinic este un heterodimer de dou proteine monomerice globulare
non-identice: -tubulina la capul subunitii i -tubulina la coada acesteia. Fiecare
monomer are o greutate molecular de aproximativ 50 kD.
2. Fiecare heterodimer are dou locusuri de legare a nucleotidelor, una pentru fiecare
monomer. Locul de legare pe -tubulina se leag ireversibil de guanozin trifosfat (GTP)
dar nu l hidrolizeaz. n contrast, locul de legare de pe -tubulina leag reversibil GTP
i l poate hidroliza la guanozin difosfat (GDP).
B. Polimerizarea tubulinei. Heterodimerii de tubulin se leag unul de altul cap la coad
ntr-o coloan liniar pentru a forma protofilamente. Treisprezece protofilamente, prin
interaciuni laterale se asociaz pentru a forma microtubulii.
1. Asamblarea microtubulilor urmeaz un curs similar cu polimerizarea actinei-G pentru
a forma filamente de actin: nucleaia, elongaia i faza de echilibru.
2. Deoarece subunitile de tubulin sunt polarizate, protofilamentele i microtubulii ce
se formeaz din acestea, sunt de asemenea structuri polarizate. Captul plus crete
mai repede dect captul minus.
a. La fel ca i la actina-F, i n cazul subunitilor de tubulin exist un Cc diferit
pentru fiecare capt al microtubulului.
b. Captul minus al unui microtubul este de obicei acoperit. Acesta este asociat cu
centrozomul (vezi III E 1). Astfel, numai captul plus este disponibil pentru adiia
dimerilor de tubulin, determinnd astfel orientarea polar a microtubulilor ntr-o
celul.
C. Instabilitatea dinamic a microtubulilor. Microtubulii trec printr-o rapid asamblare i
dezasamblare. Monitorizat cu tehnici morfologice de cultur ceular, microtubuli individuali
pot fi observai crescnd la o rat constant i apoi, dintr-o dat, se micoreaz rapid
napoi spre centromer. Acest comportament a microtubulilor a fost denumit instabilitate
dinamic. Modelul curent de explicare a acestui fenomen implic o relaie ntre adiia de
dimeri de GTP-tubulin i hidroliza consecutiv a GTP la GDP.
1. Dimerii de GTP-tubulin sunt adugai la captul plus a unui microtubul mai rapid
dect rata de hidroliz a GTP.
2. Aceasta rezult printr-o formare a unui capt GTP. Deoarece dimerii de tubulin
legai de GTP se leag unul de cellalt mai eficient dect de dimerii GDP, microtubulii
continu s creasc.
3. Dac rata de polimerizare scade, permind ca hidroliza GTP s ajung din urm,
captul GTP este pierdut i microtubulul, coninnd acum doar dimeri GDP-tubulin, se
micoreaz rapid.
57
4. Aceast micorare are loc deoarece microtubulii acoperii cu capt GDP sunt foarte
instabili i adiia de GTP-tubulin la GDP-tubulin este foarte ineficient.
D. Proteine asociate microtubulilor (MAP). Dac procesul de instabilitate dinamic ar fi
singurul determinant al polimerizrii microtubulilor ntr-o celul, oricnd civa microtubuli
ar putea crete rapid n timp ce alii ar colapsa. Pentru a asigura un oarecare echilibru n
microtubul, MAP stabilizeaz microtubulii i promoveaz interaciunea lor cu alte
componente celulare.
1. Clasificarea MAP. MAP sunt clasificate n dou grupuri majore: HMW-MAP
(proteine cu greutate molecular mare, > 200 kD) i LMW-MAP (proteine cu greutate
molecular mic, 55-62 kD). LMW-MAP sunt denumite i proteine tau.
2. Funciile MAP
a. Structura celular. Unele MAP acioneaz ca i componente structurale realiznd
conexiunea cu alte componente celulare. MAP leag microtubulii de componente
celulare i inhib depolimerizarea microtubulilor. MAP se leag de asemenea de
ntreaga lungime a microtubulilor citoplasmatici, astfel stabilizndu-i.
b. Motori moleculari. Alte MAP mic structuri membranare de-a lungul
microtubulilor.
(1) Motorii moleculari kinezina i dineina citoplasmatic sunt un grup divers de
proteine motorii dependente de microtubuli ce sunt implicate n transportul
organitelor i n transportul vezicular prin axoni. Dineina citoplasmatic a fost
denumit astfel datorit aspectului asemntor cu dineina ciliar (vezi III F 2).
(2) Ambii motori moleculari sunt compui din dou lanuri grele i cteva lanuri
uoare.
(a) Lanurile grele sunt similare miozinei prin aceea c au un domeniu n alfa-
helix i un cap globular de care se leag ATP.
(b) Dou cozi interacioneaz pentru a forma o coad, cu care lanurile uoare
se asociaz.
(3) Capetele globulare se leag de microtubul i transform hidroliza ATP n
micarea motorului molecular de-a lungul microtubulului. Componentele veziculare
a citoplasmei interacioneaz cu cozile i sunt astfel transportate.
(4) n general, dineina citoplasmatic se deplaseaz spre captul minus al
microtubulului, n timp ce kinezina se deplaseaz spre captul plus.
E. Centrul de organizare a microtubulilor (MTOC). Acestea sunt regiuni n citoplasm
ce reprezint zone de nucleaie pentru asamblarea microtubulilor. MTOC protejeaz
58
captul minus al microtubulilor i determin creterea n lungime prin adiia dimerilor de
tubulin la captul minus.
1. Centrozomul. Este locul principal al nucleaiei microtubulilor. Dac microtubulii sunt
colorai cnd celula se afl n interfaz, acetia pot fi observai radiind n afara
centrozomului, o regiune localizat n apropierea nucleului.
a. n centrul centrozomului sunt dou structuri cilindrice denumite centrioli. Acetia
sunt orientai perpendicular unul pe cellalt i sunt nconjurate de un material amorf,
nchis la culoare (Figura 3-1).
b. Peretele fiecrui centriol este compus din 9 triplete de microtubuli. Fiecare triplet
este format prin fuziunea lateral a 3 microtubuli adiaceni.
(1) Capetele microtubulilor citoplasmatici nu interacioneaz direct cu microtubulii
centriolilor, ci cu materialul amorf asociat.
(2) O component a acestui material, -tubulina, interacioneaz cu i -
tubulina pentru a permite nucleaia microtubulilor.
c. Centriolii se dubleaz n timpul interfazei, rezultnd dou perechi de centrioli care
migreaz la prile opuse ale nucleului la nceputul mitozei. Acetia formeaz cei doi
poli ai fusului mitotic (vezi Capitolul 5 VII B 1 a).
2. Corpii bazali. Microtubulii din cili i flageli se asambleaz din corpii bazali, structur
asemntoare centriolilor (vezi III F 3).
F. Cilii i flagelii. Cilii i flagelii celulelor eucariote sunt structuri specializate, compuse
dintr-un buchet de microtubuli-dublete. Acetia ofer motilitate celulelor (ex.
spermatozoizi, celulele epiteliale din tractul respirator).
1. Ultrastructur. Ultrastructura cililor i flagelilor este similar (vezi Capitolul 2 V B 3
c).
2. Mobilitatea cililor i flagelilor. Braele laterale ale dineinei hidrolizeaz ATP pentru
a produce energia necesar forei de alunecare dintre dublete.
3. Cilii i flagelii cresc din corpii bazali. Corpii bazali sunt structuri cilindrice din
citoplasm n apropierea membranei plasmatice. Acetia sunt compui din nou
triplete de microtubuli. Tripletele adiacente sunt unite prin proteine de legtur de-a
lungimii acestora.
a. n timpul dezvoltrii cililor i flagelilor, fiecare dublet al axonemei crete din doi
dintre microtubuli, nspre triplet, meninnd simetria de 9 a corpului bazal. Nu se
cunoate modul n care cresc cei doi microtubuli centrali ai axonemei.
b. ntr-o celul, cilii au de obicei aceeai lungime, dar mecanismul de stabilire a unei
lungimi standard nu se cunoate.
59
G. Toxinele de desfacere a microtubulilor. Medicamentele colchicina i taxol sunt
folosite ca i ageni anti-mitotici. Acestea se leag de tubulin sau microtubuli, interfernd
cu schimbul de subuniti de tubulin dintre microtubuli i rezerva citoplasmatic de dimeri
liberi de tubulin.
1. Colchicina inhib asamblarea microtubulilor i promoveaz dezasamblarea
microtubulilor existeni. Se leag direct cu dimeri de tubulin nepolimerizai prevenind
asamblarea acestora.
2. Taxol are un efect opus. Stabilizeaz microtubulii legndu-se de acetia. De
asemenea, promoveaz polimerizarea astfel scznd rezerva de dimeri liberi de
tubulin.
3. n medicin, colchicina i taxolul sunt folosite la reducerea creterii tumorilor benigne
i maligne. Interfernd cu fusul mitotic, acestea ncetinesc sau stopeaz diviziunea
celular necontrolat.

IV. FILAMENTELE INTERMEDIARE
Filamentele intermediare sunt cel de-al treilea tip de filamente ale citoscheletului. Sunt
denumite astfel deoarece pe micrografiile electronice diametrul lor aparent (10 nm) se afl
ntre diametrul actinei (7 nm) i cel al microtubulilor (25 nm). n majoritatea celulelor,
filamentele intermediare formeaz o reea ce nconjoar nucleul i se extinde la periferia
celulei, formnd o reea de filamente n citoplasm.
A. Tipuri de filamente intermediare. n celulele vertebratelor, filamentele intermediare
sunt compuse dintr-un grup heterogen de proteine a cror greutate molecular variaz.
Sunt clasificate n 5 tipuri principale (Tabelul 4-2). Fiecare tip este caracteristic unor
anumite esuturi i celule.
1. Filamentele intermediare tipul I i tipul II: filamente de keratin. Filamentele
intermediare de keratin (denumite i citokeratine) se gsesc n celulele epiteliale
(Figura 3-2).
a. Acestea sunt heterodimeri formai dintr-o mixtur de 1:1 din citokeratine tip I
(acid) i citokeratine tip II (neutru/bazic). Nici o subunitate singur nu poate forma
un filament.
b. n epiteliul uman exist mai mult de 20 keratine diferite a cror greutate molecular
variaz ntre 40-70 kD.
c. O singur celul epitelial poate crea o varietate de keratine.
(1) Cel mai simplu epiteliu conine numai dou tipuri de keratin: un tip I i un tip II
(ex. ectodermul embrionic i hepatocitele adulte).
60
(2) Alte epitelii conin ase sau mai mutle tipuri diferite de keratin (ex. epiteliu
lingual, vezica urinar, glande sudoripare).
(3) Epidermul este cel mai heterogen, unde seturi distincte de keratine sunt
coninute de celule n diferite straturi a epiteliului scuamos stratificat.

Tabelul 4-2. Principalele tipuri de proteine ale filamentelor intermediare (FI)
Proteina FI Tipul
de FI
Greutatea
molecular medie
(x 10
3
)
Numrul de
polipeptide
Distribuia tisular
Keratin I 40-56,5 20 Epiteliu
Keratin II 53-70 20 Epiteliu
Vimentin III 57 1 Celule mezenchimale
Desmin III 53-54 1 Celule musculare
Proteina fibrilar
glial (GFAP)
III 57 1 Astrocite din SNC; unele celule
Schwann din SNP
Proteinele neurofilamentelor
NF-L IV 60 1 Axoni, dendrite i corpi bazali ai
tuturor neuronilor din SNC i
SNP
NF-M IV 140 1
NF-H IV 210 1
Laminele nucleare
Lamina A i C V 60-70 1 Nucleul tuturor celulelor
nucleate Lamina B V 67 1

2. Filamentele intermediare de tip III. Proteinele vimentina, desmina i proteina
acid fibrilar glial (GFAP) constituie tipul III de filamente intermediare. Aceste
proteine care variaz n greutate molecular de la 50 la 57 kD, sunt omopolimere
(formate din polimerizarea unui singur tip de proteine filamentare intermediare).
a. Filamentele intermediare de vimentin sunt cele mai ntins distribuite. Se gsesc
n majoritatea celulelor mezodermale (ex. fibroblaste, celule endoteliale, leucocite) i
sunt tranzitoriu exprimate n toate celulele n timpul dezvoltrii embrionare.
b. Filamentele intermediare de desmin se afl n celulele musculare. Se gsesc n
toat citoplasma celulelor musculare netede. n celulele musculare striate leag
miofibrilele unele de altele la nivelul discurilor Z.
c. GFAP formeaz filamente gliale n astrocitele din sistemul nervos central i n
unele celule Schwann din sistemul nervos periferic.
3. Filamentele intermediare de tip IV: neurofilamente. Filamentele intermediare de
tip IV se gsesc n axoni, dendrite i pericarionii neuronilor (Figura 3-3).
61
a. Neurofilamentele sunt heteropolimeri compui din 3 subuniti: NF-L, NF-M i NF-
H. Sunt denumite astfel pentru dimensiunile lor moleculare slabe, medii i grele: 60,
140 i respectiv 210 kD.
b. Toate cele trei subuniti se afl de obicei ntr-un singur neurofilament.
c. Subunitile NF-M i NF-H se gsesc n poriunea exterioar a neurofilamentului,
unde cozile lor lungi carboxi-terminale se extind spre exterior din filamentul central.
4. Filamentele intermediare de tip V: laminele nucleare. Filamentele intermediare
tip V se gsesc n toate celulele nucleate.
a. Laminele sunt compuse din trei polipeptide: laminele A i C, ce sunt produse
exprimate din aceeai gen i lamina B.
b. Laminele din lamina nuclear, o reea de proteine fibroase ce se aliniaz pe
suprafaa intern a nveliului nuclear.
(1) Reeaua realizeaz un cadru pentru organizarea structurii nveliului nuclear i
un situs pentru ataarea cromatinei n timpul interfazei.
(2) Lamina nuclear este ataat la nveliul nuclear prin lamina B.
B. Ultrastructura filamentelor intermediare. In contrast cu subunitile de actin i
tubulin, care sunt proteine globulare, subunitile filamentelor intermediare sunt proteine
fibroase.
1. Toate subunitile filamentelor intermediare sunt proteine fibroase alungite cu un
domeniu central -elicoidal i domenii globulare non-elicoidale la captul amino-
terminal i la coada carboxi-terminal.
2. Domeniul central -elicoidal, care este conservat la majoritatea filamentelor
intermediare, joac un rol major n asamblarea acestora.
3. Captul non-elicoidal i domeniile cozii variaz n lungime i n secvena de
aminoacizi. Aceste domenii, pentru c sunt evideniate de-a lungul suprafeelor
filamentare, ar putea participa n interaciunile dintre filamentele intermediare i alte
componente celulare. Domeniile capului i al cozii sunt de asemenea situri pentru
modificrile post-translaionale, cum ar fi fosforilarea.
C. Asamblarea filamentelor intermediare.
1. Formarea dimerilor. Primul pas n asamblarea filamentelor intermediare implic
asocierea cap-la-cap a proteinelor filamentelor intermediare la nivelul domeniilor -
elicoidale, formnd un dimer coiled-coil.
2. Formarea tetramerilor. Doi dimeri se asociaz ntr-un mod antiparalel formnd un
tetramer. Dimerii sunt
62
a. Tetramerii se gsesc n cantiti mici, solubili n citoplasm, sugernd c este
structura de baz stabil din care sunt asamblate filamentele intermediare.
b. Structura tetrameric este o structur nepolar are aceeai polaritate la ambele
capete, un rezultat al aranjamentului antiparalel i simetria axial a dimerilor. Acesta
este n contrast cu filamentele de actin i microtubuli, care sunt molecule polarizate.
3. Formarea protofilamentelor i asamblarea final. Tetramerii agreg cap-la-cap,
formnd un protofilament. Protofilamentele se asociaz lateral pentru a forma un
cilindru tip frnghie compus din 8 tetrameri. Acest proces care implic mai multe
etape nu este pe deplin cunoscut.
4. Bazinul intracelular al proteinelor filamentelor intermediare este redus. n
majoritatea celulelor, proteinele filamentelor intermediare se gsesc aproape n
ntregime ntr-un status polimerizat. Aceasta este de asemenea n contrast cu actina i
microtubulii, la care elementele constitutive se afl ntr-un status de echilibru dinamic
ntre un bazin de subuniti neasamblate i unul format de filamentele polimerizate.
D. Funciile filamentelor intermediare. Filamentele intermediare realizeaz o structur
nalt organizat i particip ntr-o varietate de interaciuni celulare. Se consider c
funciile cele mai importante ale filamentelor intermediare sunt organizarea i integrarea
spaiului citoplasmatic i de a furniza stabilitatea mecanic pentru celule i componentele
acestora. n cele ce urmeaz sunt exemple ale funcionalitii filamentelor intermediare.
1. Integrarea spaiului citoplasmatic. Poate c cel mai bun exemplu al acestei funcii
este cel al neurofilamentelor, n care braele lungi ale NF-M i NF-H menin spaiul
regulat al neurofilamentelor din axon, contribuind la stabilitatea structural a axonului i
la reglarea calibrului axonal.
2. Stabilitatea mecanic. Filamentele intermediare de keratin sunt asociate cu
desmozomi i hemidesmozomi, unde acetia formeaz un cadru intracelular flexibil i
resilient avnd funcie de suport pentru epiteliu.
3. Funcia dinamic a laminelor nucleare. n nucleul interfazic, laminele determin
integritatea nveliului nuclear determinnd structura i stabilitatea. n timpul mitozei,
laminele nucleare joac un rol important n dezasamblarea i reasamblarea nveliului
nuclear (vezi Capitolul 6 VI B).
a. n timpul mitozei, nveliul nuclear este dezasamblat, permind cromozomilor
duplicai s fie separai n celulele fiice. Hiperfosforilarea laminelor nucleare conduce
la dezintegrarea nveliului nuclear.
(1) Laminele A i C sunt dispersate n citoplasm.
(2) Lamina B rmne asociat cu fragmentele veziculare ale nveliului nuclear.
63
b. La sfritul mitozei, reasamblarea nveliului nuclear este urmat de defosforilarea
laminelor. Interaciuni specifice ntre lamine i cromozomi sunt urmate de
polimerizarea laminelor i restaurarea integritii nucleare.

V. JONCIUNILE INTERCELULARE
Majoritatea jonciunilor intercelulare (Tabel 4-3) se regsesc n esutul epitelial. Acestea
servesc pentru o serie de funciuni ce includ adeziunea celular; comunicarea celul-
celul i n stabilirea compartimentelor intraepiteliale.
A. Desmozomii. Celulele sunt ataate fizic prin desmozomi mici arii, localizate, de
contact dintre celule (Figura 4-3). Desmozomii mai sunt denumii i macule aderente, un
termen ce subliniaz forma punctat a acestora i caracteristicile adezive.
1. Localizare i distribuie. Desmozomii se gsesc pe toate suprafeele celulelor
epiteliale cu excepia acelor suprafee orientate spre un spaiu sau spre substratul de
esut conjunctiv.
a. Sute de desmozomi se pot gsi pe suprafaa unei celule epiteliale dintr-un epiteliu
stratificat.
b. Totui, unele regiuni a suprafeei unei celule epiteliale dintr-un epiteliu stratificat ar
putea apare lipsit de desmozomi.

Tabelul 4-3. Jonciunile intercelulare
Tip Forma Adeziunea
extracelular
Adeziunea
intracelular
Funcii
Jonciuni de aderen
Desmozomii Punctat (macular) Caderine Filamente de
keratin
Adeziunea
intercelular
Hemidesmozomii Punctat (macular) Integrine Filamente de
keratin
Adeziunea celul
membrana
bazal
Centur de aderen
(zonula adherens)
Circumferenial Caderine Microfilamente de
actin
Adeziunea
intercelular
Jonciuni ocluzive
Jonciuni strnse
(zonula occludens)
Circumferenial Contacte focale
ale proteinelor
membranare
Restricia
difuziunii
paracelulare
Jonciuni de comunicare
Jonciuni Gap (nexus) Punctat (macular,
extrem de variabil n
mrime)
Conexoni Comunicarea
metabolic i
electric a
64
celulelor


2. Desmozomii n microscopia optic
a. Desmozomii apar ca puncte mici de contact ntre celulele adiacente. Mrimea unei
plci desmozomale mari este aproape de limita de rezoluie a microscopului optic.
b. Acetia sunt mai evideni cnd celulele sunt uor contractate n timpul fixrii sau
cnd spaiul intercelular este uor mrit.
3. Componentele desmozomilor
a. Plcile de adeziune. Plcile de adeziune sunt componente intracelulare ale
desmozomilor.
(1) Plcile de adeziune definesc suprafaa desmozomului. Un desmozom are
dou plci de adeziune, una n fiecare celul.
(2) Fiecare plac filamentoas este format parial de domeniile citoplasmatice
ale moleculelor de caderin (vezi V A 3 c). Proteinele citoplasmatice,
desmoplakinele i plakoglobina formeaz cea mai mare poriune a plcii de
adeziune.
b. Filamentele intermediare.
(1) Filamentele intermediare de keratin a citoscheletului se ataeaz de plac.
(2) Filamentele de keratin par s formeze bucle n interiorul i exteriorul plcii de
adeziune. Astfel, placa de adeziune servete i ca suport al citoscheletului.
c. Proteine transmembranare de legtur. Glicoproteinele, desmogleina i
desmocolina sunt componentele de adeziune ale desmozomilor.
(1) Desmogleinele i desmocolinele sunt membre ale familiei caderinelor calciu-
dependente, molecule de adeziune celul-celul.
(2) Proteinele transmembranare de legtur au att domenii intracelulare ct i
extracelulare.
(a) Domeniul intracelular a glicoproteinei se extinde n placa de adeziune i
contribuie la structura plcii.
(b) Domeniul extracelular al moleculei se extinde n spaiul intercelular i se
leag de molecule similare ale celulei vecine, conectate.
d. Stratul dens central. Probe ale interaciunii proteinelor transmembranare de
legtur pot fi vizibile ca i un strat dens central n spaiul intercelular, dintre celule
opuse.
65
(1) Acesta este locul reaciei de adeziune ce formeaz baza mecanismului de
legare a celulelor de ctre desmozomi.
(2) Proteinele transmembranare de legtur se leag de calciu, acest ion fiind
necesar pentru funcionarea desmozomilor la locul de adeziune celul-celul.
(3) Stratul dens central nu este la fel de regulat observabil n microscopia
electronic de rutin, n comparaie cu plcile de adeziune i filamentele
intermediare asociate.
B. Hemidesmozomii. Jonciunile desmozomale se localizeaz la interfaa dintre epiteliu i
esutul conjunctiv pe membrana plasmatic bazal a celulelor epiteliale, adiacent laminei
bazale.
1. Componentele hemidesmozomilor.
a. Hemidesmozomii sunt formai din plcile de adeziune, filamentele intermediare
ale citoscheletului i proteinele transmembranare de legtur.
b. Proteinele transmembranare de legtur ale hemidesmozomilor fac parte din
familia integrinelor ale moleculelor de adeziune, dar au un rol similar cu caderinele
desmozomilor.
2. Hemidesmozomii i lamina bazal. Hemidesmozomii servesc ca i puncte de
ataare ale celulelor epiteliale de lamina bazal i implicit de matricea extracelular.
a. Lamina membranei bazale se concentreaz n ariile de legtur ale
hemidesmozomilor.
b. Moleculele de lamin interacioneaz cu moleculele de integrin pentru a
conecta lamina bazal la membrana plasmatic.
3. Hemidesmozomii i desmozomii. Aceste jonciuni asociate cu filamente
intermediare au unele similariti structurale i funcionale dar prezint i unele
diferenieri chimice.
C. Jonciunile Gap. Celulele sunt cuplate electric i chimic prin jonciunile gap.
1. Structura jonciunilor gap. Jonciunile gap nu sunt vizibile n microscopia optic.
a. Acest tip de jonciuni intercelulare apare n microscopia electronic ca i o apoziie
a membranei plasmatice a celulelor adiacente. Gap-ul unei jonciuni gap se refer
la un spaiu intercelular uniform de 2-3 nm din regiunea joncional.
b. Tehnicile de preparare a probelor ce faciliteaz observarea jonciunilor gap includ
colorarea cu lanthaniu i criofracturarea.
(1) Colorarea cu lanthaniu. Spaiul intercelular a unui epiteliu poate fi demarcat
prin expunerea esutului intact la suspensiile coloidale a srurilor de lanthaniu n
timpul fixrii electrono-microscopice.
66
(a) Dup umplerea regiunii intercelulare a jonciunii gap cu lanthaniu, gap-ul
ngust este mai bine definit i se observ a fi ntrerupt de subuniti ce par a
uni cele dou celule.
(b) Subunitile jonciunilor gap sunt vizibile datorit efectului de colorare
negativ a lanthaniului.
(2) Criofracturarea. Tehnica criofracturrii expune structura subunitar a
jonciunilor gap (Figura 4-2).
(a) Cnd membrana plasmatic a unei celule ce este cunoscut a avea
jonciuni gap este clivat prin criofracturare, se observ o acumulare
caracteristic a proteinelor intramembranare. Aceste acumulri sunt
evidenieri ale jonciunilor gap.
(b) Tehnicile de criofracturare relev faptul c jonciunile gap variaz foarte
mult n dimensiuni, de la cteva particule pn la mii de particule per o
singur jonciune.
2. Componentele jonciunilor gap.
a. Conexonii. Subunitile observabile prin tehnica colorrii cu lanthaniu i
particulele observate prin criofracturare sunt observaii din puncte de vedere diferite
ale unui conexon.
(1) Conexonul este un complex proteic inclus n membrana plasmatic a unei
celule. Acesta este proiectat afar din membran n spaiul extracelular.
(2) Conexonul fuzioneaz cap la cap cu un conexon al celulei adiacente,
producnd o pereche de conexoni. Perechea de conexoni este unitatea
structural i funcional a jonciunii gap.
(3) O jonciune gap poate fi format numai din cteva perechi de conexoni sau
prin mii de perechi de conexoni.
b. Moleculele de conexin. Conexonii sunt formai de molecule de conexin
transmembranare.
(1) Microscopia electronic de rezoluie nalt a artat faptul c conexonul este un
hexamer al moleculelor de conexin. Fiecare molecul de conexin are patru
segmente transmembranare.
(2) Cele ase molecule de conexin includ un canal apos ngust, de aproximativ 2
nm n diametru.
(a) Acest canal se afl n contact exact cu un canal similar aparinnd celuilalt
conexon din perechea de conexoni.
67
(b) Astfel, un canal format din 12 molecule de conexin exist n fiecare
pereche de conexoni, realiznd un legtur apoas dintre citoplasma unei
celule cu citoplasma celulei adiacente.
3. Funciile jonciunilor gap. Jonciunile gap sunt locuri ale cuplrii metabolice i
electrice dintre celule.
a. Bazele funcionrii. Canalele apoase a perechilor de conexoni realizeaz o
continuitate a citoplasmei unei celule cu citoplasma celulei adiacente.
(1) Un numr mare de astfel de canale pot exista ntr-o jonciune gap, i o celul
poate avea mai multe jonciuni gap pe suprafaa sa.
(2) Astfel, exist o cuplare extins citoplasm-citoplasm i membran-membran
ntr-un grup de celule legate prin jonciuni gap.
b. Cuplarea metabolic. Jonciunile realizeaz bulevarde de difuziune pentru ioni
i molecule relativ mici de la o celul la alta prin canalele din fiecare pereche de
conexoni.
(1) Difuziunea poate fi demonstrat la nivelul microscopiei optice prin
microinjectarea de molecule fluorescente de diferite greuti moleculare ntr-o
celul i observarea difuziunii probei sau a lipsei difuziunii n celulele
adiacente. Astfel de investigaii au artat faptul c greutatea molecular maxim a
unei particule capabile de difuziune de la o celul la alta este de aproximativ 1200
daltoni (1,2 kD).
(2) Mesagerii intracelulari cum ar fi AMP ciclic difuzeaz de la o celul la alta prin
jonciunile gap i astfel propag diveri stimuli de-a lungul esutului.
c. Cuplarea electric.
(1) Jonciunile gap sunt implicate de asemenea n cuplarea electric a celulelor
epiteliale deoarece ionii se mic liber prin canalul apos a unei jonciuni.
(2) Potenialele sunt capabile de difuziune i prin alte esuturi, cum ar fi muchiul
neted i miocard i aceast cuplare electric se coreleaz strns cu prezena sau
absena jonciunilor gap din respectivul esut.
4. Reglarea jonciunilor gap. Concentraia de calciu intracelular i pH-ul citosolic
controleaz funcionarea jonciunilor gap. Celulele epiteliale ce sunt cuplate prin
jonciuni gap devin decuplate dac concentraia intracelular de calciu este crescut
sau dac pH-ul este sczut. Aceasta este semnificativ n rspunsul esutului la o
anumit injurie.
68
a. Injuria celular i pierderea de substane solubile. Ruperea membranei
celulare ce este parte a unui complex celular cuplat poate rezulta n pierderea unor
substane solubile cu greutate molecular mic din celulele neafectate, dar cuplate.
b. Decuplarea celulelor reduce pierderea de substane solubile. Influxul de calciu
extracelular n celula afectat cauzeaz nchiderea canalelor apoase ale perechilor
sale de conexoni. Aceasta previne pierderea excesiv de componente citosolice cu
greutate molecular mic din celulele adiacente, cuplate, neafectate.
D. Jonciunile strnse. Jonciunea strns (ocluziv) nconjoar celula, conectnd-o cu
toate celulele vecine. Jonciunea strns mai este denumit i zonula occludens datorit
formei sale asemntoare unei centuri i datorit ocluziei spaiului extracelular.
1. Localizarea i distribuia jonciunilor strnse. Prezena jonciunilor strnse poate
fi observat n microscopia optic.
a. Jonciunile strnse sunt prezente n epiteliul absorbant i secretor.
b. Aceste jonciuni se gsesc n epiteliul simplu cubic sau simplu cilindric pe
suprafaa lateral a celulelor, n apropierea polului apical.
c. n general, doar o singur jonciune strns este prezent ntr-o celul epitelial,
n opoziie cu numeroii desmozomi i jonciuni gap ce ar putea fi prezente n
aceeai celul.
2. Structura jonciunilor strnse
a. Microscopia electronica de transmisie caracterizeaz jonciunile strnse ca fiind
regiuni ale membranei de contact sub forma conexiunilor focale.
(1) Conexiunile focale. Jonciunile strnse sunt vizibile ca o serie de conexiuni
focale ale unitilor membranare din celulele adiacente.
(2) Profunzimea jonciunilor este variabil. Pot fi doar cteva sau pot fi mai
multe conexiuni focale care s formeze jonciunile strnse.
b. Criofracturarea caracterizeaz jonciunile strnse ca fiind reele din filamente de
particule intramembranare.
(1) Reele de filamente i anuri. Jonciunile apar ca i reele continui de rnduri
de particule ce formeaz filamente intramembranare i anuri (amprente)
complementare.
(2) Variaia structural. Reelele joncionale vizibile prin criofracturare variaz de
la aranjamente nguste i relativ simple de cteva filamente i anuri pn la
configuraii complexe, largi constnd din mai multe filamente i anuri.
69
c. Proteinele jonciunilor strnse. Unele proteine ale jonciunilor strnse au fost
deja caracterizate. Totui, niciuna din aceste proteine nu corespunde filamentelor
intramembranoase, fapt demonstrat prin microscopia electronic, dup criofracturare.
3. Funciile jonciunilor strnse
a. Ocluzia spaiului intercelular. Jonciunile strnse funcioneaz ca legturi
intraepiteliale prin blocarea spaiului intercelular al unui epiteliu.
(1) Previne sau reduce fluxul de substane de pe o parte pe alta a epiteliului via
calea paracelular.
(2) Eficacitatea jonciunii strnse ca i barier fa de difuzia de-a lungul epiteliului
este o funciune a profunzimii i complexitii joncionale.
(a) Jonciunile nguste cele care conin puine filamente anastomozate sunt
clasificate ca fiind jonciuni slabe.
(b) Jonciunile largi cele cu mai multe filamente sunt bariere mai eficiente.
b. Transport. Transportul direcionat a apei i substanelor solubile de-a lungul
epiteliului depinde de ocluzia captului apical ale spaiului intercelular prin jonciunile
strnse.
(1) Jonciunile strnse sunt componente eseniale ale mecanismului responsabil
de fluxul apei i al substanelor solubile de-a lungul epiteliului.
(2) n absena jonciunilor strnse, difuziunea simpl ar avea loc prin calea
paracelular (adic prin spaiul intercelular), i nu ar exista nici un flux net ale apei
sau al substanelor solubile de-a lungul epiteliului.
c. Polaritatea celular. Jonciunea strns are un rol important n echilibrul
domeniilor chimice apicale i bazolaterale ale membranei celulare epiteliale.
(1) Fosfolipidele i proteinele prezente n cele dou domenii membranare sunt
diferite. Segregarea acestor componente este esenial pentru funcionarea
celulelor i esuturilor.
(2) O jonciuni strns funcioneaz ca i o barier molecular, prevenind
amestecarea celor dou domenii membranare.
E. Centurile de adeziune. Acest tip de jonciune se afl n complexul joncional profund n
jonciunea strns. Centura de adeziunea mai este denumit i zonula aderens pentru c
este o jonciune de aderen circumferenial (Fig. 4-2).
1. Proteine de legtur transmembranare (caderine) sunt componente ale centurii
de adeziune i funcioneaz n ataarea intercelular.
2. Centura de adeziune este asociat cu filamentele de actin.
70
a. Centura de adeziune este ataat de o band citoplasmatic de filamente de
actin ce urmresc de asemenea o cale circumferenial pe faa citoplasmatic a
complexului joncional.
b. Centura de adeziune funcioneaz de asemenea i ca un sit de ataare a
filamentelor de actin.
F. Complexul joncional. Un complex joncional este un grup format din anumite jonciuni
intercelulare. Complexele joncionale sunt prezente in diverse epitelii.
1. Localizarea i distribuia complexelor joncionale.
a. Complexul este localizat pe suprafaa lateral a celulelor epiteliale n apropierea
suprafeei apicale.
b. Complexele joncionale sunt de obicei prezente n epiteliile simple i sunt cel mai
evidente n epiteliul simplu cubic i epiteliul simplu cilindric. Complexul este cel mai
adesea observat n:
(1) Epitelii de absorbie (epiteliul simplu cilindric din intestinul subire)
(2) Epitelii de secreie (celule acinare a pancreasului exocrin)
2. Componente ale complexului joncional. Complexul este de obicei format printr-o
jonciune strns, o centur de adeziune i un desmozom. Unii cercettori includ n
complexul joncional i o jonciune gap.
3. Linia terminal. Cele dou zone joncionale a unui complex joncional (jonciunea
strns i centura de adeziune) nconjoar celula sub forma unei centuri. La rezoluia
microscopului optic, aceste zone joncionale sunt detectate ca i o singur structur,
denumit linie terminal.
a. Pe seciune transversal, linia terminal apare ca i un punct pe suprafaa lateral
a celulei epiteliale, n apropierea suprafeei libere.
b. Pe seciune paralel cu linia terminal, linia terminal apare ca i o structur
poligonal, evideniind foarte bine celula.
4. Reeaua terminal. Reeaua terminal este ancorat la centura de adeziune a
complexului joncional.
a. Reeaua terminal este covor de filamente n citoplasma apical a celulei
epiteliale. Este format de actin i spectrin i st pe un strat de filamente
intermediare (Fig. 4-4).
b. Reeaua terminal funcioneaz ca i un punct de ataare pentru buchetele de
filamente de actin ce susin microvilii. Filamentele de actin se extind n afara
microvililor n citoplasma apical pentru a se insera n reeaua terminal.
71
c. Reeaua terminal, mpreun cu banda circumferenial asociat format din
filamente de actin, ar putea fi o structur contractil.
(1) Funcioneaz n timpul dezvoltrii embrionice, n micrile morfogenetice ale
straturilor epiteliale.
(2) Ar putea de asemenea funciona i n epiteliul adult pentru a nchide suprafaa
epitelial dup dispariia celulelor senescente.

VI. MECANISMUL CONTRACIEI MUSCULARE
Cnd musculatura se contract, fiecare sarcomer se scurteaz i devine mai gros, dar
miofilamentele rmn la aceleai dimensiuni (Figura 7-4).
1. Suprapunerea miofilamentelor. Pentru a realiza scurtarea, trebuie s existe o
accentuare a suprapunerii miofilamentelor; filamentele subiri i filamentele groase
trebuie s gliseze una peste cealalt. Examinarea ultrastructural a sarcomerului n
diverse stadii de contracie a oferit dovezi pentru acest mecanism. Cnd muchiul
contractat este comparat cu muchiul relaxat, s-a observat urmtoarele:
a. Banda I se scurteaz n lungime n timp ce banda A rmne la lungimea iniial.
b. Zona H devine mai ngust cu filamentele subiri ce penetreaz zona H.
c. Aceste observaii sugereaz c filamentele subiri gliseaz pe filamentele
groase n timpul contraciei.
2. Interaciunea dintre filamentele de miozin i actin n timpul contraciei. Un
cap de miozin se leag de filamentul de actin adiacent i o schimbare
conformaional a capului miozinic mic miozina de-a lungul filamentului de actin. O
interaciune ciclic ATP-dependent dintre capetele de miozin i filamentele de actin
adiacente genereaz o for ce determin filamentele s gliseze una peste alta (Figura
7-5).
a. Etapele contraciei. Interaciunea ciclic poate fi divizat n etape secveniale.
(1) Etapa 1: miozina disociaz de actin
(a) La nceputul unui ciclu capul filamentului de miozin este strns ataat de
un filament adiacent de actin.
(b) Cnd ATP se leag de capul miozinei, afinitatea miozinei fa de actin se
reduce i capul se detaeaz.
(i) Legarea ATP este esenial pentru eliberarea miozinei de filamentul de
actin.
72
(ii) n absena ATP, interaciunea actin-miozin nu se va opri i astfel
muchiul nu se va relaxa. Aceasta este baza explicrii rigor mortis,
rigiditatea muscular ce apare n urma decesului.
(2) Etapa 2: modificarea conformaional a miozinei
(a) n urma eliberrii capului miozinei de pe actin, ATP-ul legat este hidrolizat
de ctre miozin ATP-az, inducnd o modificare conformaional a miozinei ce
determin capul miozinei s fie dizlocat de-a lungul filamentului de actin la o
distan de 5 nm.
(b) Produii rezultai din hidroliza ATP, ADP i fosfat anorganic (Pi), rmn
ataai de capul miozinei.
(3) Etapa 3: miozina se leag de actin
(a) Capul miozinei mpreun cu ADP i Pi se leag de un nou sit al
filamentului de actin.
(b) Contactul iniial a capului miozinei cauzeaz eliberarea moleculei de Pi i
conduce la o legare strns a capului de actin.
(4) Etapa 4: a doua modificare conformaional a miozinei
(a) Legarea strns induce o nou modificare conformaional a capului
miozinei, astfel nct mpinge filamentul de actin spre mijlocul sarcomerului.
(b) Aceast modificare a capului miozinei este acompaniat de eliberarea
moleculei de ADP, elibernd locul pentru o alt molecul de ATP. Legarea unei
alte molecule de ATP de capul miozinei induce eliberarea acestuia de filamentul
de actin, determinnd reluarea ciclului.
b. Simetria contraciei.
(1) Filamentele groase de miozin sunt bipolare; astfel aceeai interaciune ciclic
a capetelor miozinei i filamentelor de actin are loc la fiecare capt al
filamentului.
(2) Discurile Z dintr-un sarcomer sunt astfel trase una spre cealalt rezultnd n
scurtarea sarcomerului.
c. Dilema contraciei. Dei modelul filamentului glisant poate explica contracia ntr-
un singur sarcomer, nu poate explica ntr-un mod adecvat scurtarea ntregii
miofibrile.
(1) Dac ciclul explicat anterior ar avea loc simultan n sarcomere adiacente, nu ar
avea loc nicio contracie, deoarece fore egale i opuse ar aciona pe ambele fee
ale discului Z. Contracia oricrui sarcomer ar bloca contracia sarcomerele
adiacente.
73
(2) Totui, fotografia ultra-rapid a demonstrat c exist o pauz temporal
extrem de mic n contracia sarcomerelor adiacente. Aceasta creaz o contracie
n val n fiecare miofibril i ulterior n fiecare fibr muscular.
3. Reglarea contraciei. Reglarea contraciei n muchiul striat este o funcie a reglrii
interaciunii dintre miozin i actin. Aceast interaciune depinde de prezena
proteinelor reglatoare, tropomiozina i troponina, ce sunt asociate cu actina-F, i
depinde de asmenea de ionii de calciu din sarcoplasm.
a. Tropomiozina. Tropomiozina este o protein filamentar ce se afl n anul alfa
helix din actina-F.
(1) Este constituit dintr-un dublu helix din dou polipeptide.
(2) n muchiul relaxat, blocheaz locul de legare a miozinei de pe molecula de
actin.
b. Troponina. Troponina este un complex de trei proteine globulare (troponina T, C
i I). Troponina este prezent ntr-o stoichiometrie 1:1 cu tropomiozina.
(1) Troponina T, denumit astfel pentru activitatea de legare cu tropomiozina,
este considerat a fi responsabil pentru poziionarea complexului de filamentul
de actin.
(2) Troponina C leag ionii de calciu, un pas esenial n inierea contraciei.
Troponina C se leag de patru molecule de Ca
2+
.
(3) Troponina I inhib legarea miozinei de actin.
c. Rolul ionilor de calciu. Cnd toate cele trei subuniti ale troponinei sunt
prezente ca i un complex, funcia lor combinat devine sensibil fa de Ca
2+
. Cnd
Ca
2+
se leag de troponina C, conformaia complexului troponinic se schimb,
permind moleculelor tropomiozinei s i modifice uor poziia astfel nct capetele
miozinei se pot lega de filamentele de actin.
d. Reglarea nivelelor de calciu. Nivelele de calciu din sarcoplasm sunt reglate de
reticulul sarcoplasmatic (RS).
(1) Calciul este sechestrat n cisternele terminale ale RS.
(a) Membrana RS conine Ca
2+
/ATP-az, o protein membranar integral ce
pompeaz activ Ca
2+
din sarcoplasm n RS, meninnd concentraia
sarcoplasmatic a Ca
2+
la nivele uzuale de 10
-7
mol/l. La acest nivel sczut,
interaciunea actin-miozin este blocat de ctre proteine reglatoare.
(b) Ionii de Ca2+ din RS sunt legate de proteine membranare prezente pe faa
intern a cisternelor terminale.
(2) Calciul este eliberat din cisternele RS.
74
(a) Ulterior stimulrii fibrei musculare de ctre neuronul motor ce o inerveaz,
Ca
2+
depozitat inund sarcoplasma, crescnd concentraia citoplasmatic la un
nivel de 10
-5
mol/l.
(b) La aceste nivele crescute, Ca
2+
se leag de troponina C, elibernd inhibiia
interaciunii actinei cu miozina i iniiind contracia.
(3) Calciul este resechestrat n cisternele RS.
(a) Cnd stimularea nervoas nceteaz, Ca
2+
este pompat napoi n RS,
scznd astfel concentraia citoplasmatic la un nivel normal de 10
-7
mol/l.
(b) n urma scderii nivelului sarcoplasmatic a Ca
2+
interaciunea actinei cu
miozina este din nou inhibat de troponina I i blocat de tropomiozin i astfel
fibra muscular se relaxeaz.
























75
C CA AP PI IT TO OL LU UL L 5 5
N NU UC CL LE EU UL L

I. INTRODUCERE
Nucleul este structura cea mai proeminent pe un preparat microscopic a oricrei celule
aflate n interfaz. Este centrul activitii celulare, depozitul acidului dezoxiribonucleic
cromozomial (ADN), i locul sintezei i procesrii acidului ribonucleic (ARN).

II. CROMOZOMII
ADN-ul dublu catenar al nucleului celulelor eucariote este mpachetat n uniti aranjate
liniar denumite cromozomi. Cantitatea total de informaie genetic dintr-un organism este
denumit genom. n celulele umane, volumul mare de informaie genetic este coninut n
nucleu; cu toate acestea exist un al doilea genom, mai simplu i mai restrns, genomul
mitocondrial (vezi Capitolul 3 IV C).
A. Structura general
1. Celule mitotice. Cromozomii sunt mai evideni n celulele aflate n diviziune n care
ADN este condensat n structuri morfologice discrete.
2. Celule interfazice. n timpul interfazei ADN-ului cromosomal este amorf i structura
sa variaz n funcie de gradul de condensare (vezi II C 4).
a. Celulele interfazice aparinnd sexului feminin conin corpusculii Barr, un
cromozom X condensat permanent ce este vizibil de obicei n apropierea nveliului
nuclear.
b. Nici un alt cromozom nu poate fi recunoscut ca i structuri discrete n nucleul
interfazic.
B. Numrul de cromozomi
1. Celule haploide. Ovulul i spermatozoidul normal conin o singur copie a
genomului (n). Aceste celule sunt considerate celule haploide. Genomul unei celule
haploide conine aproximativ 3 x 10
9
perechi de baze, mpachetat n 23 cromozomi:
22 autozomi i un singur cromozom sexual, X sau Y.
2. Celule diploide. Celulele somatice conin numrul diploid de cromozomi (2n)
mpachetat n 46 cromozomi: 22 perechi de autozomi i doi cromozomi sexuali (2
cromozomi X la sexul feminin, iar la sexul masculin, un cromozom X i un cromozom
Y).
C. Cromatina. Cromozomii sunt formai din cromatin, care este un complex de ADN,
histone i proteine non-histonice ce se afl n celulele eucariote.
76
1. Histonele. Histonele sunt cele mai abundente proteine asociate ADN nuclear.
a. Histonele sunt o familie de proteine primare cuprinse n 5 tipuri majore: H1, H2A,
H2B, H3 i H4. Ultimele 4 histone sunt denumite i histone nucleosomale.
b. Histonele sunt bogate n lizin i arginin i deci sunt ncrcate pozitiv. Aceasta le
permite s se lege strns la grupurile fosfat ncrcat negativ aparinnd ADN-ului.
2. Proteine non-histonice. Proteinele non-histonice sunt un grup heterogen de
proteine ce includ proteine structurale (ex. implicate n condensarea cromozomilor
mitocondriali), proteine reglatoare implicate n reglarea genic (ex. reglarea
oncogenelor cum ar fi Fos i Myc) i enzime implicate n funciile nucleului (ex. ADN
polimeraze i ARN polimeraze).
3. Organizarea cromatinei. Dac ADN-ul nuclear ar fi complet ntins ar avea o
lungime de 1,5 metri. mpachetarea eficient trebuie de aceea s cuprind tot acest
material ntr-un volum mic al nucleului. Histonele joac un rol major n mpachetarea
ADN (Figura 5-1).
a. Nucleozomii. ADN-ul extins, n microscopia electronic, apare ca nite mrgele
pe un irag. Mrgelele sunt nucleozomii, iar iragul este ADN-ul linker.
(1) Structura nucleozomului. Fiecare nucleozom are dou copii a fiecreia dintre
histonele nucleozomale. ADN-ul dublu catenar este rotit de 1,75 ori n jurul acestui
miez de 8 proteine histonice.
(2) ADN linker. Nucleozomii sunt legai unul de cellalt de un scurt fragment de
ADN denumit ADN linker (de legtur).
(3) Unitatea fibrilar de cromatin. Complexul format din nucleozom i ADN
linker formeaz o fibril de aproximativ 10 nm n diametru.
b. Fibra de cromatin. O unitate fibrilar de cromatin se rotete ntr-o fibr
elicoidal, solenoidal cu un diametru de aproximativ 30 nm.
(1) Helixul solenoid are 6 nucleozomi per o rotaie.
(2) Histona non-nucleozomal H1 este legat de ADN pe interiorul solenoidului,
stabiliznd fibra.
c. Structura cromozomului condensat. Mecanismele mpachetrii ordonate ce
sunt necesare pentru a produce statusul condensat a cromozomului mitotic nu sunt
bine nelese. Se presupune c acestea implic mai multe nivele de formare a
buclelor fibrei de 30 nm.
(1) Buclele lungi ale fibrei de 30 nm sunt ancorate la un nveli de proteine non-
histonice.
77
(2) Aceste structuri mpachetate sunt aranjate ntr-o spiral ce are ca rezultat
caracteristica mpachetare strns a cromozomilor mitotici.
4. Tipuri de cromatine. Cromatina nucleului interfazic este clasificat n
heterocromatin i eucromatin bazat pe gradul de condensare (Figura 5-2).
a. Heterocromatina. Heterocromatina este nalt condensat i este inactiv
transcripional. ntr-o celul tipic, 90% din cromatin se poate afla sub aceast
form.
(1) Heterocromatina se coloreaz intens cu colorani bazici i cu hematoxilin.
(2) Heterocromatina poate fi evideniat folosind iodura de propidiu, un colorant
fluorescent, sau prin reacia Feulgen, o colorare histochimic specific pentru
deoxiriboz i ADN.
b. Eucromatina. Eucromatina este mult mai extins i dispersat dect
heterocromatina i este activ transcripional. Eucromatina este matria pentru
moleculele de ARN mesager (ARNm) ce codific proteinele celulare.
(1) Eucromatina este extensiv n celulele active metabolic n sintez proteic
(ex. neuronii).
(2) Eucromatina este vizibil n nucleii colorai cu hematoxilin-eozin (HE) sub
forma regiunilor clare interptrunse de heterocromatina intens colorat.

III. NUCLEOLUL
Nucleolul (fig. 5-2) este locul transcripiei ARN ribozomal (ARNr) i al asamblrii
subunitilor ribozomale.
A. Morfologie. Nucleolul este o structur intranuclear nemembranar ce se coloreaz
intens cu heatoxilin i colorani bazici.
1. Nucleolul este prezent doar n nucleul interfazic.
a. n mod obinuit, fiecare celul are doar unul sau doi nucleoli. Deoarece genele ce
codific ARNr sunt localizate pe 5 cromozomi diferii, exist posibilitatea existenei a
mai muli nucleoli. De obicei, ns, acetia fuzioneaz.
2. Prin microscopie electronic nucleolul apare ca o structur heterogen cu regiuni
fibrilare, granulare i palid colorate.
B. Regiunile funcionale. Sinteza de ARNr i asamblarea subunitilor ribozomale are loc
n regiuni distincte ale nucleolului. Ulterior asamblrii, subunitile ribozomale mari i mici
imature sufer maturarea n timpul transferrii lor n afara nucleului n citoplasm prin
complexele porului nuclear.
78
1. Regiunile fibrilare sunt situri ale transcripiei active ale ARNr din genele ARNr
(ARN ribozomal).
2. Regiunile granulare sunt situri de asamblare a ARNr, ARN 5S i proteine
ribozomale n subunitile ribozomale.
a. ARN 5S este transcris pe ADN n afara nucleolului.
b. Proteinele ribozomale sunt sintetizate n citoplasm pe polizomi liberi (vezi
Capitolul 3 VIII A) i translocate n nucleu prin complexul porului nuclear.
3. Regiunile pal-colorate conin ADN ce nu este transcris n mod activ.

IV. NVELIUL NUCLEAR
nveliul nuclear este format din dou uniti membranare ce servesc ca i limit fizic
ntre citoplasm i nucleu (Figura 5-3).
A. Membrana nuclear extern se afl n contact cu citoplasma, este continu cu
reticulul endoplasmic rugos, i este mpodobit cu ribozomi i poliribozomi.
B. Membrana nuclear intern se afl n contact cu nucleoplasma i este acoperit cu
reeaua laminei nucleare.
C. Spaiul perinuclear este compartimentul dintre membranele nucleare interne i
externe. Este continuu cu spaiul cisternelor rediculului endoplasmatic.
1. Proteinele sintetizate de polizomi legai de membrana nuclear extern sunt inserai
n membran sau sunt translocate de-a lungul membranei n spaiul perinuclear.
2. Acele proteine ce nu rmn asociate cu nveliul nuclear urmeaz aceeai cale ca i
proteinele sintetizate pe reticulul endoplasmatic rugos (vezi Capitolul 3 I B 2).

V. PORII NUCLEARI
Porii realizeaz canale pentru comunicarea direct ntre nucleoplasm i citoplasm.
Membranele interne i externe sunt continui n jurul inelului porului nuclear.
A. Structura. Un por nuclear este cilindric n exterior, cu un diametru exterior de 120-140
nm i un canal intern cu un diametru de 9 nm. Porul cilindric ntinde distana dintre
membranele nucleare interne i externe.
1. Complexul porului nuclear este un ansamblu macromolecular cu o simetri
octogonal. Fiecare por este compus din mai mult de 100 proteine globulare cu o mas
molecular total estimat de 125 MD.
2. nveliul nuclear a unei celule tipice de mamifer conine ntre 3000 i 4000 de pori
nucleari. Acest numr este mai mare n celulele mai active transcripional.
79
B. Funcia. Una din cele mai importante funcii ale complexului porului nuclear este aceea
de transport selectiv al substanelor prin nveliul nuclear. Transportul prin por este
bidirecional. Moleculele exportate din nucleu spre citoplasm includ ARN de transfer
(ARNt), subunitile ribozomale i ARNm. Moleculele importate din citoplasm n
nucleoplasm includ ADN- i ARN-polimeraze, proteine reglatoare, proteine ribozomale i
histone.
1. Difuziunea pasiv. Porii nucleari sunt permeabili pentru ioni i molecule mici cu
raza moleculara n jur de 4,5 nm (echivalentul a aproximativ 60 kD). Proteinele mai
mari de 9 nm n diametru nu trec liber prin porul nuclear.
2. Transportul activ. Transportul moleculelor mari (> 9 nm n diametru) i a
complexelor macromoleculare prin complexul porului nuclear este un proces mediat
de receptor ce necesit ATP. Pentru a tranzita complexul porului nuclear, proteinele
trebuie s posede una sau mai multe secvene de localizare nuclear (NLS) n
secvena lor primar de aminoacizi.
a. NLS este o secven peptidic scurt de 4-8 aminoacizi de baz, ncrcai pozitiv
(ex. lizina, arginina, prolina). NLS poate fi localizat oriunde n protein i o protein
poate conine una sau mai multe NLS.
b. Mecanismul de transport
(1) Din citoplasm n nucleu. Transportul proteinelor prin complexul porului
nuclear este un proces n dou etape.
(a) Ataarea. Proteinele ce posed o NLS se leag de proteine citosolice
specifice pentru a forma un complex. Apoi complexul se ataeaz de un
receptor de la periferia complexului porului nuclear.
(b) Translocarea
(i) Proteina ce conine NLS este transportat prin porul nuclear i proteinele
citosolice sunt eliberate napoi n citoplasm.
(ii) Translocarea este un proces dependent de ATP. O parte a energiei
obinut prin hidroliza ATP este folosit n dilatarea tranzitorie a porului
nuclear pentru a permite intrarea proteinelor transportate.
(2) Din nucleu spre citoplasm. Transportul ARN i a subunitilor ribozomale n
afara nucleului spre citoplasm este de asemenea un proces selectiv. De
asemenea transportul n aceast direcie pare s necesite un receptor. Detaliile
mecanismului nu sunt pe deplin cunoscute.

VI. LAMINA NUCLEAR
80
Lamina nuclear este o reea fibroas ce aliniaz suprafaa intern a nveliului nuclear.
Lamina, cu o grosime de 10-20 nm, determin structura i stabilitatea nucleului interfazic
i mediaz legarea cromatinei de nveliul nuclear. Este ntrerupt de porii nucleari.
A. Compoziie. Matricea nuclear este compus din filamentele intermediare de tip IV
denumite laminele nucleare A, B i C (vezi Capitolul 4 IV A 3).
B. Rolul n mitoz. Lamina joac un rol major n fragmentarea rapid a nveliului nuclear
la nceputul mitozei i n reasamblare la sfritul mitozei (vezi Capitolul 4 IV D 3).

VII. MATRICEA NUCLEAR
Aspectul organizat al nucleului este rezultatul existenei unei substructuri denumite matrice
nuclear. Aceasta este o reea fibroas ce conine aproximativ 10% din totalul proteinelor
nucleare, 30% din ARN-ul nuclear, 1-3% din ADN-ul total i 3% din fosfolipidele nucleare.
A. Morfologia. Preparatele de matrice nuclear sunt obinute prin dizolvarea nveliului
nuclear, extrgnd ARN i proteinele asociate i prin digestia ADN-ului.
1. Vizualizate la microscopul electronic, astfel de preparate relev o reea fibroas cu o
form similar cu nucleul.
2. n interiorul reelei exist elemente reziduale ale nucleolului, fibrile asociate cu
complexe de pori nucleari i fibrile asociate cu lamina nuclear.
B. Funcia. Matricea nuclear se consider a determina structura i organizarea
compartimentului nuclear intern. Aceasta servete ca i o faz solid la care sunt ataate
complexele enzimatice responsabile pentru transcripia ARN i replicarea ADN.

VIII. CICLUL CELULAR
Ciclul celular este o secven ordonat de eveniment n care celula crete, i dubleaz
cromozomii i se divide n dou celule. Ciclul celular somatic normal poate fi mprit n:
interfaz i mitoz.
A. Interfaza. O celul aflat n interfaz continu s creasc, timp n care i dubleaz
mrimea i i replic ADN-ul. Interfaza a fost mprit n trei faze: faza G
1
, faza S i faza
G
2
(Figura 5-4).
1. Faza G
1
. Imediat dup mitoz, celula intr n faza G
1
. Aceasta este perioada de
cretere celular.
a. Activitate. n timpul G
1
, celula sintetizeaz i acumuleaz ARN pentru sinteza
proteic i proteine reglatoare, enzime pentru sinteza ADN.
b. Durat. G
1
este faza cea mai variabil a ciclului celular.
81
(1) n unele celule ce cresc rapid (celule embrionice), G
1
este att de scurt nct
se poate considera ca fiind inexistent.
(2) n alte celule (fibroblaste latente, spermatogoniile prepubertal) G
1
este foarte
lung i celulele par a fi ncetat ciclul celular. Celulele ntr-o astfel de faz G
1
lung
se consider de fapt a fi n faza G
0
, n care celulele nu cresc i nici nu se divid. G
0

poate dura zile ntregi, sptmni sau ani nainte ca celulele s re-prolifereze
(reintrarea n ciclul celular).
2. Faza S. Sinteza de ADN are loc n faza S, ce dureaz n mod normal 6-12 ore. n
acest interval, genomul este replicat i continu de asemenea sinteza proteic i
sinteza ARN.
a. Dublarea coninutului de ADN (2N la 4N) nu este vizibil pe seciunile histologice,
dar poat fi uor detectat prin microspectrofotometria preparatelor colorate Feulgen,
sau prin utilizarea unor colorani fluoresceni ADN-specifici.
b. Dup replicarea cromozomilor din faza S, acetia rmn ataai unul de cellalt i
sunt denumii cromatide surori.
3. Faza G
2
. n aceast faz, aflat ntre sinteza ADN i mitoz, celula continu s
sintetizeze ARN i proteine n pregtirea sa pentru diviziunea celular.
a. n faza G
2
, coninutul de ADN este exact dublu celui din faza G
1
. Celulele din faza
S au o cantitate intermediar de ADN n timpul replicrii.
b. Faza G
2
dureaz ntre 2 i 4 ore n majoritatea celulelor umane.
B. Mitoza. n mitoz, coninutul nuclear i cel citoplasmatic sunt divizate egal ntre cele
dou celule fiice. Mitoza se mparte n 6 etape: profaza, prometafaza, metafaza, anafaza,
telofaza i citokineza (Figura 5-5). n medie, mitoza dureaz 1 or.
1. Profaza. n timpul profazei, cromatina ce era dispersat n interfaz condenseaz
ncet n cromozomi. n acelai timp, citoscheletul se rearanjeaz: microtubulii
citoplasmatici ncep s se dezasambleze i fusul mitotic se formeaz.
a. Fusul mitotic este o structur bipolar compus din centrioli, microtubuli i
proteine asociate.
b. n fiecare cromatid este coninut o secven de ADN denumit centromer i
asociat cu aceasta exist o structur denumit kinetocor.
(1) Kinetocorul este locul de ataare a microtubulilor de fusul mitotic.
(2) Centromerul este constricia primar a cromozomului la nivelul creia sunt
unite cromatidele surori.
2. Prometafaza. Prometafaza ncepe cu dezasamblarea nveliului nuclear.
82
a. Unii microtubuli se ataeaz de kinetocori i sunt denumii microtubuli
kinetocorici. Microtubulii din fusul mitotic ce formeaz interdigitaii se numesc
microtubuli polari. Microtubulii din afara fusului mitotic se numesc microtubuli
astrali.
b. Microtubulii kinetocorici exercit o presiune pe cromozomii respectivi i ncep
aranjarea cromozomilor.
3. Metafaza. n metafaz, cromozomii sunt aliniai ntr-un singur plan, planul ecuatorial,
ntre polii fusului ntr-o structur denumit placa metafazic i sunt meninui n
aceast poziie de microtubulii kinetocorici.
4. Anafaza. Anafaza ncepe cnd cromozomii pereche sunt desprii, permind
fiecrei cromatide (considerat acum un cromozom) s fie tras spre polii fusului.
a. Cromatidele sunt ncet trase spre polii fusului prin scurtarea microtubulilor
kinetocorici i prin elongarea microtubulilor polari.
b. Anafaza este o faz scurt, cu o durat de cteva minute.
5. Telofaza. Telofaza ncepe cnd cromozomii separai ajung la polii fusului.
a. Microtubulii kinetocorici se dezasambleaz i se formeaz microtubulii
interfazici.
b. Se asambleaz un nou nveli nuclear n jurul fiecrui set de cromozomi care
ncep apoi s se disperseze. Nucleoli care au disprut n profaz, reapar.
c. Acesta este sfritul mitozei. Nucleii celulelor fiice sunt observabili, dar formarea
celor celulelor fiice separate are loc numai odat cu citokineza.
C. Diviziunea celular. Diviziunea celular este complet dup kariokinez i citokinez.
1. Kariokineza este diviziunea nuclear.
a. Kariokineza ncepe n anafaz i este complet n telofaz cnd se asambleaz
un nou nveli nuclear n jurul noului set de cromozomi pentru a forma nucleii
celulelor fiice.
b. Replicarea ADN fr a fi urmat de kariokinez determin poliploidia.
(1) Nucleii poliploizi conin orice multiplu din numrul haploid de cromozomi (ex.
3N, 4N, etc.).
(2) Un megacariocit este un exemplu de celul poliploid.
2. Citokineza. n timpul citokinezei, citoplasma se divide printr-un proces denumit
clivare, rezultnd n producerea de dou celule fiice identice.
a. Citokineza ncepe n anafaza trzie, se ntinde prin telofaz i este complet n
interfaza timpurie cnd cele dou celule se separ.
83
(1) Un inel fin, compus din filamente de actin i filamente de miozin II asociate,
se formeaz la mijlocul celulei, perpendicul pe axul fusului mitotic, ntre cele dou
celule fiice.
(2) n timp ce inelul se contract, se formeaz un an de clivare. anul de
clivare se adncete pn cnd cele dou celule sunt separate i membrana
plasmatic din interiorul inelului fuzioneaz cu acesta.
b. Kariokineza neurmat de citokinez determin formarea de celule binucleate sau
multinucleate. Un osteoclast este un exemplu de celul multinucleat.

IX. MEIOZA
Meioza este un tip special de diviziune celular ce determin producerea de gamei
haploizi 1N (spermatozoizi i ovule) din celule diploide 2N. Aceste celule haploide
conin o singur copie din genomul original.
A. Generaliti.
1. Evenimente nucleare. Meioza este mprit n dou etape: meioza I i meioza II.
Fiecare etap prezint profaz, metafaz, anafaz i telofaz. naintea meiozei I, la fel
ca i la diviziunea celulelor somatice, un ciclu de replicare ADN produce cantitatea de
4N din ADN. n opoziie cu mitoza, totui, n meioz aceast duplicare a ADN-ului
cromozomial este urmat de dou diviziuni celulare separate ce produc 4 celule
fiice, fiecare cu cantitatea de 1N din ADN. Nu exist faz S ntre meioza I i meioza II
(Figura 5-6).
a. Cromozomii omologi. Cu excepia cromozomilor sexuali, un nucleu diploid
conine 2 seturi similare de autozomi, unul patern i altul matern.
b. Meioza versus mitoza. Cromozomii omologi duplicai se comport diferit n
mitoz i meioz.
(1) n mitoz, cromozomii omologi duplicai se aliniaz la nivelul plcii metafazice
independent unul de cellalt.
(a) Cromatidele surori se separ n timpul anafazei i devin cromozomi
individuali.
(b) Fiecare celul fiic motenete o copie a cromozomului patern i o copie a
cromozomului matern.
(2) n meioza I, nainte de alinierea n placa metafazic, fiecare pereche de
omologi duplicat devine se mperecheaz. Acest proces este denumit sinaps i
este unic meiozei. Fiecare celul fiic primete dou copii a unuia din omologi, fie
o copie patern, fie o copie matern.
84
2. Evenimente citoplasmatice. Evenimentele citoplasmatice din meioz difer pentru
spermatozoid i ovul.
a. La sexul masculin, meioza determin producerea de 4 spermatozoizi haploizi, de
dimensiuni egale, fiecare fiind capabil de a fecunda un ovul.
b. La sexul feminin, ia natere un singur ovocit haploid ce conine aproape toat
citoplasma. Celelalte celule rezultate din diviziunea meiotic sunt corpi polari
haploizi ce primesc cantiti minimale de citoplasm. Corpii polari sufer mai apoi o
degenerescen.
B. Meioza I: prima diviziune meiotic
1. Profaza I. Profaza I este o faz n care cromozomii omologi devin pereche i pot
avea loc recombinrile genetice.
a. Sinapsa. Cromozomii omologi duplicai, fiecare coninnd o pereche de cromatide,
trec prin procesul de sinaps rezultnd tetrada. O tetrad conine 4 cromatide.
b. Crossing-over. n timpul sinapsei, regiuni mici ale ADN-ului cromozomilor omologi
sunt schimbai reciproc ntre cromatidele non-surori. Acest proces, denumit crossing-
over, determin un amestec genetic a cromozomilor, rezultnd diversitatea genetic.
2. Metafaza I. Tetradele se aliniaz n placa metafazic, asociindu-se cu fusul de
diviziune nc din prometafaz.
3. Anafaza I. Perechile omologe de cromozomi se separ i se deplaseaz spre polii
opui ai fusului. Deoarece centromerul nu se divide, cromatidele din fiecare pereche
acioneaz ca un tot unitar.
a. Cromozomii omologi materni i paterni segreg independent i la ntmplare. Nu
sunt predispui s fie trai spre un pol sau altul.
b. Att aranjarea cromozomilor la ntmplare ct i crossing-over contribuie la
diversitatea genetic.
4. Telofaza I. Ca i n mitoz, cromozomii ajung la polii fusului i se formeaz nucleii
celulelor fiice.
a. Fiecare nucleu conine numrul haploid (1N) de cromozomi, fiecare cromozom
coninnd dou cromatide.
b. Fiecare nucleu conine cantitatea de ADN, 2N.
C. Meioza II: a doua diviziune meiotic. La sfritul meiozei I ncepe o scurt interfaz.
Cromozomii se pot decondensa uor n timpul telofazei I i dar se recondeseaz i profaza
II ncepe. n timpul acestei interfaze ADN-ul nu este duplicat.
1. Profaza II este scurt. nveliul nuclear se dezasambleaz i se formeaz un nou
fus de diviziune.
85
2. n metafaza II, cromatidele surori se asociaz cu microtubulii kineocorici i sunt
separate ca i n mitoz.
3. Anafaza II i telofaza II urmeaz rapid. Celulele fiice rezultate din cea de a doua
diviziune meiotic conin numrul haploid (1N) de cromozomi i cantitatea haploid
(1N) de ADN.