HISTOLOGIE GENERAL, HISTOLOGIE SPECIAL CORNELIA AMLINEI

SNG ELE Sngele reprezint aproximativ 7,5% din greutatea corporal i poate fi considerat drept un esut conjunctiv datorit similaritii structurale a celor dou esuturi, fiind alctuit din: substan fundamental (plasma) celule (elemente figurate) fibre (fibrina). Serul este obinut din snge coagulat sau defibrinat, coninnd i elemnte elaborate n timpul coagulrii. Plasma Plasma este obinut din snge dup tratarea cu un anticoagulant, urmat de centrifugare. Plasma este un lichid glbui, cu densitatea 1027, constituit din: 91-92% ap 7-8% substane organice 1-2% substane anorganice. Substanele organice sunt: Substanele azotate: Proteinele plasmatice reprezint aproximativ 80% din componentele solide ale sngelui. Studiul proteinelor plasmatice se realizeaz prin electroforez (proprietatea diferitelor fracii proteice de a migra ntr-un cmp electric invers proporional cu greutatea lor molecular). Albumina are o greutate molecular de 50000 Da, fiind cea mai mic i cea mai abundent protein plasmatic. Este sintetizat de hepatocite. Are rolul de a menine presiunea coloid-osmotic a sngelui. Poate cupla molecule insolubile n scopul transportului acestora. Globulinele au o greutate molecular de la 80000 la mai mult de 1 milion de Da. Sunt reprezentate de trei categorii: , i (includ i Imunoglobulinele sau Anticorpii). Globulinele , se combin reversibil cu diferite substane n scopul transportului acestora. Exemplificrile sunt: transferina care este o globulin care transport fierul i ceruloplasmina care transport cuprul. Sistemul complement este reprezentat de un grup de peste 12 proteine serice care interacioneaz ntr-o cascad de evenimente, fiind implicate n rspunsul imun umoral. Ele au rol n iniierea inflamaiei i n liza microorganismelor invadante. C3a, C5a se pot cupla la mastocite care vor elibera histamina, factori chemotactici pentru neutrofile, macrofage care vor ingera i distruge bacteria respectiv. Factorii complementului pot funciona ca opsonine, mpren cu anticorpii. Fibrinogenul Lipoproteinele plasmatice au rolul de a transporta lipidele de la intestin la ficat i de la ficat la esuturi. Chilomicronii au 100-500 m diametru, VLDL au 25-70 nm, fiind bogate n trigliceride, LDL sunt mai reduse ca mrime, au rol n transportul colesterolului ctre receptorii specifici, urmnd o endocitoz mediat de receptori. Lipoproteinele constituie o surs energetic i reprezint componente ale membranelor. Creterea nivelului colesterolului datorit defectelor receptorilor pentru LDL conduc la ateroscleroz. uree acid uric creatina bilirubina.

Substanele organice neazotate: Lipide (colesterol)

1

HISTOLOGIE GENERAL, HISTOLOGIE SPECIAL CORNELIA AMLINEI

Glucide Acid lactic Acid piruvic Vitamine.

Substanele anorganice sunt reprezentate de urmtoarele minerale, ntr-o proporie inversat comparativ cu mediul intracelular: Sodiu abundent Calciu abundent Potasiu redus Magneziu redus.

Elementele figurate Elementele figurate ale sngelui sunt produse n mod continuu n mduva osoas hematogen. Primele elemente celulare ale sngelui apar n insule hematoformatoare extraembrionare din mezenchimul sacului vitelin. Ulterior, ficatul i splina preiau aceast funcie. n final, doar mduva osoas hematogen va prelua hematopoieza. Prin centrifugare, elementele figurate se separ de plasm. Hematocritul reprezint raportul dintre volumul elementelor figurate i volumul plasmei, procentual. Valoarea sa medie este de 45%. Creterea acestei valori se ntlnete n poliglobulii iar scderea n anemiile posthemoragice. Elementele figurate ale sngelui i pot ndeplini funciile n interiorul vaselor sanguine (hematiile, plachetele) sau prsesc prin diapedez vasele pentru a-i ndeplini funciile n esuturile conjunctive i limfoide (leucocitele sunt celule aflate n tranzit prin snge). Frotiul sanguin este utilizat pentru studiul histologic al elementelor figurate. Acesta const din ntinderea pe o lam histologic a unei picturi de snge. Un frotiu corect este subire, cu marginile laterale drepte i cu extremitatea distal franjurat. Frotiul se coloreaz utiliznd o variant a tehnicii Romanovski, May-Grnwald-Giemsa. Prin amestecul de albastru de metilen (bazic, albastru) i eozin (acid, rou) se realizeaz o a treia culoare, azur (bazic, purpuriu) i prin oxidarea parial a colorantului bazic se obine i un colorant neutru (liliachiu). Hematiile Hematiile, sunt predominente n frotiuri, sferice datorit etalrii i colorate rou-portocaliu datorit hemoglobinei coninute. Forma lor este de disc biconcav, cu marginile rotunjite, mai groase la periferie (7-7,5 m) i mai subiri n zona central (1,4-2 m), suprafaa lor fiind de 140 m2. Datorit formei caracteristice, pe frotiuri, apar mai intens colorate la periferie i mai slab colorate central. Hematiile se gsesc n sngele periferic ntr-un numr de 4,5-5 milioane/mm3 la brbai i de 4-4,5 milioane/mm3 la femei. Creterea numrului hematiilor este ntlnit n policitemii. Anemiile se datoreaz fie scderii numrului eritrocitelor, fie scderii coninutului lor n Hemoglobin, cu urmtoarele tipuri: hematii cu diametrul mai mic de 6 m - anemie microcitar hematii cu diametrul mai mare de 9 m - anemie macrocitar hematii cu diametrul normal - anemie normocitar hematii cu mrimi diferite - anizocitoz hematii cu forme diferite - poikilocitoz hematii cu o concentraie redus a hemoglobinei - anemie hipocrom hematii cu o concentraie crescut a hemoglobinei - anemie hipercrom hematii cu o concentraie normal a hemoglobinei - anemie normocrom. Hematiile au tendina de a adera reversibil una la alta in vitro, realiznd rulouri. Plasticitatea reprezint proprietatea hematiilor de a-i modifica forma datorit structurii citoscheletului i a elasticitii membranare. Cnd hematiile strbat vasele capilare iau o form de cup, dup care revin la forma iniial.
2

HISTOLOGIE GENERAL, HISTOLOGIE SPECIAL CORNELIA AMLINEI

Hematiile sunt sensibile la variaiile osmotice ale mediului n care se gsesc, astfel: n mediu slab hipoton, hematiile se umfl, devin uniconcave sau n cup. n mediu puternic hipoton, datorit permeabilitii membranare, are loc hidratarea celulei, transferul hemoglobinei ctre mediul extracelular, cu hemoliz osmotic i transformarea hematiei n fantom eritrocitar. Fenomenul de hemoliz poate fi determinat i de ali factori, cum ar fi: toxice hemolizante, hemolizine. n mediu hiperton se produce deshidratarea hematiilor, deformarea lor, fenomen descris drept crenelare osmotic. Astfel, hematiile vor prezenta 10-30 de proiecii coniforme, ele fiind denumite echinocite. Membrana hematiilor este elastic, avnd structura tipic a membranelor celulare, coninnd 40% lipide (fosfolipide, colesterol, glicolipide), 50% proteine integrale membranare i periferice i 10% hidrocarburi. Membrana conine receptori i glicoforine care le confer alloantigenicitatea. Glicolipidele i glicoproteinele membranei hematiilor conin lanuri hidrocarbonate cu determinani antigenici, constituind baza sistemelor de grupe sanguine ABO i Rh. Astfel, hematiile pot prezenta la nivel membranar fie antigen A, fie B, fie A i B, fie nici unul din aceste antigene. n plasma corespunztoare, se gsesc anticorpi ndreptai mpotriva antigenelor eritrocitare neconinute de hematiile proprii. n cazul transfuziilor incompatibile, are loc o reacie de aglutinare intravascular masiv, cu liza eritrocitelor. Un alt antigen este Rh, indivizii putndu-l avea - Rh pozitivi sau nu - Rh negativi. n cazul mamelor Rh negative a cror fei sunt Rh pozitivi, se pot produce anticorpi anti Rh, care pot traversa placenta i pot determina boala hemolitic a noului nscut. Hematiile sunt lipsite de organite, anucleate. Citoscheletul este compus din proteine care, alturi de hemoglobin, menin forma hematiilor, printr-un proces activ, cu consum de ATP. Citoscheletul este format din filamente intermediare de spectrin, un heterodimer de lanuri polipeptidice i , cuplate cap-coad, pentru a forma tetrameri dublu-catenari de aproximativ 200 nm lungime. La capete se gsesc structuri nodale care conin actina eritrocitar. Actina eritrocitar este realizat din polimeri scuri de 7 nm stabilizai prin tropomiozin. n zona central a tetramerilor de spectrin se realizeaz ancorarea la membrana plasmatic prin ankirin, o fosfoprotein care cupleaz reeaua la domeniul citoplasmatic al proteinei transmembranare de band 3. Aceast legtur, ct i ntreaga reea de citoschelet este stabilizat prin proteinele de band 4,1 i 4,9. n defectele genetice de sintez ale spectrinei, hematiile au o form sferic, afeciune denumit sferocitoz sau elipsoidale - elipsocitoz. Interiorul hematiilor este ocupat n proporie de 66-67% ap, 33% globin, cuplat la o porfirin, formnd mpreun hemoglobina, lipide, enzime ale glicolizei anaerobe, hemoglobinreductaza i anhidraza carbonic. Hemoglobina este o cromoporfirin cu greutatea de 68000 Da, cu proprietatea de a cupla reversibil fierul i de a-l menine bivalent. Acest proces este asigurat de hemoglobin-reductaz care menine fierul n stare redus, conferind reversibilitatea legrii oxigenului la hemoglobin. Globina este alctuit din patru lanuri polipeptidice i de fiecare lan se cupleaz un grup hem care conine fier. Hemul este un pigment alctuit din patru nuclei pirolici legai de patru atomi de fier redus. La adult, 97-98% este hemoglobin A1, cu dou lanuri i dou lanuri , peste 1% este hemoglobin A2, cu dou lanuri i dou lanuri i mai puin de 1% este hemoglobin F (fetal), cu dou lanuri i dou lanuri . Persistena hemoglobinei F n viaa adult determin o anemie denumit talasemie. n siclemie, hematiile conin hemoglobin S, datorit unui defect genetic care determin nlocuirea unui aminoacid, acidul glutamic, cu altul, valina. Hemoglobina S este mai puin solubil, are tendina de a bloca capilarele, sufer uor hemoliz, determinnd anoxie tisular. Funcia principal a hematiei este cea de transport al oxigenului, datorit afinitii hemoglobinei pentru acest gaz. La nivelul alveolelor pulmonare, datorit diferenei presiunilor
3

HISTOLOGIE GENERAL, HISTOLOGIE SPECIAL CORNELIA AMLINEI

pariale, hemoglobina leag oxigenul, lax i reversibil la nivelul hemului, sub form de oxihemoglobin. n capilare, la nivelul organelor, datorit diferenelor de presiuni pariale, hemoglobina va ceda oxigenul esuturilor. n mod concurent, anhidraza carbonic catalizeaz interaciunea CO2 cu apa n hematii pentru a forma acidul carbonic (disociaz imediat n H+ i ion bicarbonat) dar acesta circul, n cea mai mare parte, sub form de acid carbonic n plasm. CO2 reacioneaz i direct cu hemoglobina dar ntr-o proporie redus. CO2 disociaz din bicarbonat i din hemoglobin, la nivel pulmonar i este expirat. Hemoglobina are o mare afinitate pentru CO, formnd cu acesta un compus stabil, carboxihemoglobina, care determin hipoxie i n final anoxie. Oxidarea hemoglobinei prin diveri oxidani anihileaz aciunea hemoglobin-reductazei, fierul nu mai poate fi meninut n stare redus, devenind improprie transportului oxigenului. Durata medie de via a hematiilor este de 120 de zile, interval dup care i pierd plasticitatea i sunt reinute n special n splin unde sunt fagocitate, fierul fiind reutilizat n eritropoiez. Reticulocitele sunt hematii care nu i-au completat maturarea, coninnd o plac albastrcenuie sau policromatofil, n coloraia cu Albastru de cresil, datorit precipitrii ARN ribozomal sub form de reea. Reticulocitele au un diametru de 8-9 m i devin hematii n 2-3 zile. n mod fiziologic, reticulocitele reprezint 0,8-1% din hematiile periferice i o proporie mai ridicat n tratamentul eficient al anemiilor, post-hemoragic i la ascensiuni rapide la altitudini ridicate. Plachetele Plachetele sanguine sunt mici fragmente citoplasmatice derivate dintr-o celul precursoare denumit megacariocit. Numrarea lor este dificil deoarece au tendina de a adera unele la altele. Se gsesc n snge ntr-un numr de 150000-4000000/mm 3. Apar izolate dar mai ales grupate n ciorchini de 4-5, pe frotiuri. Au o form de disc biconvex, uor alungit, diametrul n lungime fiind de 4 m i cel transvers de 2-2,5 m. Pe frotiurile proaspete, se pot distinge urmtoarele zone: zon periferic, moderat bazofil, omogen, denumit hialomer zon central azurofil, de aspect fin granular, denumit granulomer sau cromomer. n microscopia electronic s-a observat c pe faa extern a membranei plasmatice se gsete un strat de glicocalix, care le confer tendina de alipire i adezivitatea pe suprafee. n structura membranei se afl diveri receptori, sub form de dimeri pentru: Factorul de agregare plachetar Substane biologic active Hormoni Fibrinogen. Multiple zone de invaginare a membranei plasmatice, formeaz un sistem tubular deschis care faciliteaz eliminarea produilor de catabolism la exterior. Citoscheletul are rol de meninere a formei celulei, fiind alctuit din: un grup marginal de microtubuli filamente contractile dispuse n zig-zag protein contractil, trombostenina. Granulomerul conine: Glicogen Mitocondrii Lizozomi Sistem tubular nchis sau dens, cu cisterne de reticol endoplasmatic neted, cu o protein de tipul calsechestrinei, pentru ataarea ionilor de calciu Prostaglandine Granule propriu-zise:
4

HISTOLOGIE GENERAL, HISTOLOGIE SPECIAL CORNELIA AMLINEI

, electronotransparente, 0,2-0,3 m diametru, coninnd: Factorul plachetar 4 care contracareaz heparina Factorul plachetar 5 Factorul plachetar 6 (fibrinogenul plachetar) Factorul plachetar de cretere (PDGF) care stimuleaz proliferarea fibroblastelor n scopul reparrii vasculare Trombospondina, glicoprotein implicat n agregarea plachetar Factorul von Willebrand, glicoprotein care faciliteaz adeziunea la peretele vascular. , electronoopace, coninnd promotori ai agregrii plachetare: factorul plachetar 5 (serotonina) catecolamine calciu ADP ATP. sau corpii deni, cu 250-300 nm diametru, coninnd: calciu pirofosfat ADP ATP Serotonin. , ca vezicole de 175-250 nm, coninnd enzime lizozomale. Plachetele iniiaz i particip la realizarea hemostazei i la retracia cheagului. n clinic se utilizeaz urmtorii indicatori: TS timpul de sngerare, reprezentnd intervalul dintre producerea soluiei de continuitate i oprirea hemoragiei TC timpul de coagulare: perioada n care sngele coaguleaz n afara aparatului circulator. Hemostaza fiziologic parcurge mai multe etape: Activarea plachetar (cel mai potent activator plachetar este colagenul polimerizat, ncrcat electronegativ) Adeziunea plachetar pe aria denudat, urmat de hiperhidratare celular, eliberarea calciului din sistemul tubular nchis, contracia filamentelor de actin i miozin cu emiterea de pseudopode, plachetele devenind din discocite echinocite; pe calea sistemului tubular deschis se elimin: serotonin, ADP, Factorul 4 antiheparinic. Agregarea plachetar: sub aciunea AMP, ADP i a trombinei, plachetele libere ncep s adere i s se asocieze cu plachetele care au aderat ntr-o prim faz; datorit receptorilor pentru fibrinogen, acesta acioneaz ca un ligand ntre dou celule; trombospondina se fixeaz ireversibil pe fibrinogen formnd o reea stabil; astfel se realizeaz un dop plachetar. Coagularea se realizeaz n paralel cu formarea reelelor de fibrin i pe scheletul dopului plachetar. Fosfolipidele eliberate n urma degranulrii reacioneaz cu membrana plasmatic formndu-se tromboplastina plachetar care accelereaz coagularea. Un efect similar este atribuit tromboxanului sintetizat din endoperoxizii prostaglandinici, sub aciunea ciclooxigenazelor plachetare (inactivate de Aspirin). Retracia coagulului: trombostenina funcioneaz ca un iniiator al contraciei, elibernd calciul din sistemul tubular nchis, calciul punnd n micare filamentele de actin i de miozin; se produce o contracie accentuat a plachetelor (la jumtate din dimensiunile iniiale, la o or), care apropie reelele de fibrin, excluznd o mare parte din componenta lichid i o serie de molecule, mai puin celulele din coagul. Astfel se separ serul sanguin. Eliminarea factorului 3 plachetar va activa protrombina, care va micora de 5-10 ori volumul coagulului i va declana cascada coagulrii.
5

HISTOLOGIE GENERAL, HISTOLOGIE SPECIAL CORNELIA AMLINEI

Vasoconstricia suplimenteaz ocluzia prin coagul, definitivnd hemostaza. Boala Von Willebrand este determinat de o anomalie genetic, caracterizat prin deficitul factorului von Willebrand al coagulrii, manifestat prin sngerri excesive i/spontane. Plachetele au capacitatea de fagocitoz selectiv fa de virusuri, fr a i putea distruge, multe plachete pot astfel degenera rezultnd o trombocitopenie de origine viral, tranzitorie. Alte forme de trombocitopenii sunt cele medicamentoase i cele autoimune. Purpura trombocitopenic se datoreaz fragilitii anormale a vaselor mici, asociat cu defecte n producerea plachetelor, manifestndu-se prin sngerri capilare spontane care determin apariia unor echimoze. Trombocitopatiile grupeaz anomaliile structurale i funcionale ale plachetelor. n mod fiziologic, timpul de via al plachetelor este de 9-10 zile.

Leucocitele Leucocitele, n numr de 5000-9000/mm3, apar rotunde, nucleate, dispersate printre hematii, pe frotiul sanguin. Creterea numrului leucocitelor peste 8000/mm3 este denumit leucocitoz, putnd apare n sarcin, la altitudine, n boli infecioase, n infarctul miocardic i n hiperfunciile medulare. Un numr mai mare de 30000-40000/mm3 corespunde hiperleucocitozelor, denumite i stri leucemoide. Un numr care depete aceste valori corespunde leucemiilor. Scderea numrului leucocitelor sub 5000/mm3, denumit leucopenie, se poate datora citostaticelor, radiaiilor X, hipersplenismului, virozelor etc. Leucocitele migreaz, prin diapedez din snge n esuturi, unde i ndeplinesc funciile. Din punct de vedere morfologice, leucocitele pot fi clasificate dup urmtoarele criterii: Granulaii citoplasmatice - clasificare n granulocite i agranulocite Forma nucleului - clasificare n polimorfonucleare i monomorfonucleare. Granulocitele prezint nuclei multilobai, corespunznd polimorfonuclearelor, pe cnd agranulocitele prezint nuclei fr lobare evident, corespunznd monomorfonuclearelor. Granulocitele se clasific, la rndul lor, dup coloraia granulelor, n: Neutrofile Eozinofile Bazofile. Numrnd pe un frotiu de la 100 la 400 leucocite (insistnd asupra marginilor frotiului, unde leucocitele se aglomereaz), se poate calcula formula leucocitar, reprezentnd proporia leucocitelor de un anumit tip la 100. Valorile normale ale formulei leucocitare sunt urmtoarele: Polimorfonucleare neutrofile 55-70% Polimorfonucleare eozinofile 3-5% Polimorfonucleare bazofile 0,5-1% Monomorfonucleare - limfocite 20-25% Monomorfonucleare - monocite 5-8%. Neutrofilele Neutrofilele au diametrul de 7 m n snge i de 10-12 m, datorit etalrii, pe frotiu. Neutrofilele prezint 2-5 lobi nucleari unii prin puni fine de cromatin. Nucleii pot prezenta apendici, cum ar fi corpusculul Barr, sub forma unei prelungiri cu aspect de b de tob, pe un lob terminal, reprezentnd cromozomul X condensat. Cromatina nuclear este dispus sub form de heterocromatin spre membrana nuclear i eucromatin dispus central. Nucleolii nu sunt evideni. Granulaiile citoplasmatice sunt de trei tipuri: Granulaiile specifice reprezint 80% din totalul granulaiilor, sunt mici, de 0,2-0,4 m diametru, rotunde, cu nuan liliachie, conferind o tent lila, fin pulverulent citoplasmei. Granulaiile specifice conin: lizozim, lactoferin, fosfataz alcalin, colagenaz i proteine bazice, denumite fagocitine, cu activitate non-enzimatic antibacterian. Granulaiile nespecifice reprezint 15% din granulaii, cu diametrul de 0,6 m, colorate cu azur n rou-violet. Aceste granulaii prezint o structur caracteristic de lizozom primar,
6

HISTOLOGIE GENERAL, HISTOLOGIE SPECIAL CORNELIA AMLINEI

coninnd: mieloperoxidaz, fosfataz acid, -glucuronidaz, -manozidaz, arilsulfataz, -galactozidaz, catepsin, 5nucleotidaz, elastaz, colagenaz, lizozim i proteine cationice antibacteriene. Granulele nucleate au fost identificate n microscopia electronic, ntr-un numr foarte redus, cu dimensiuni medii, cu un coninut cristaloid. Citoplasma mai conine: un complex Golgi rudimentar, situat central, mitocondrii, reticol endoplasmatic redus i particole de glicogen. Neutrofilele prezint motilitate, demonstrat prin aplatizarea, urmat de emiterea de pseudopode, la contactul cu un substrat. Pseudopodele conin o matrice fin granular datorit coninutului de actin, miozin, microtubuli i particole de glicogen. Neutrofilele sunt implicate n reaciile inflamatorii, fiind primele care apar n cadrul aprrii nespecifice, realiznd fagocitoza i digestia lizozomal a particolelor nonself. Neutrofilele exprim pe suprafa numeroi receptori pentru: Fc a Ig G, C3, amine biologice, hormoni i factori chemotactici. n scopul realizrii fagocitozei, este necesar adeziunea fagocit-bacterie. ntr-o prim etap are loc migrarea neutrofilelor n zona n care au ptruns bacteriile, prin diapedez i ca o consecin a aciunii factorilor chemotactici, cu reorganizarea citoscheletului care devine polarizat pentru migrarea conform gradientului de concentraie al substanei chemotactice. Fagocitoza poate fi: Nespecific Imun, cu intervenia opsoninelor. Bacteriile, datorit structurii nveliurilor lor prezint proprietatea de a activa cascada complementului. Factorii rezultai, C3b, C3d, C3i, se depun pe suprafaa bacteriei realiznd opsonizarea. C3a i C5a au proprietatea de a degranula mastocitele, cu eliberarea de histamin, factori chemotactici pentru neutrofile i eozinofile, enzime litice i produi nou sintetizai: leucotriene, tromboxani i prostaglandine. Sub influena toxinelor bacteriene, toi aceti factori acioneaz chemotactic pentru leucocite, faciliteaz diapedeza, vasodilataia i determin creterea permeabilitii vasculare. C3 este recunoscut de receptorii neutrofilelor. n cteva zile de la ptrunderea bacteriei, apar ca rspuns imunoglobulinele care se fixeaz de bacterii, realizndu-se o dubl opsonizare. Cuplarea de Fc a IgG i de complement duce la activarea filamentelor de actin i de miozin, cu nceperea emiterii de pseudopode, declanarea activitii untului hexozo-monofosforic, cu producerea de radicali oxigenai liberi. Pe msura formrii pseudopodelor, prin mecanismul de tip fermoar, bacteria este nconjurat i fagocitat (neutrofilele fiind din acest motiv denumite i microfage), formndu-se un fagozom. Pompele protonice din membrana fagozomului creaz un pH n jurul valorii de 4 care permite activitatea maxim a enzimelor lizozomale. Ulterior se realizeaz fuziunea cu granulaiile azurofile i apoi cu cele specifice, realizndu-se fagolizozomi. Elementele bactericide i echipamentul enzimatic determin distrucia nveliului bacteriei, rezultnd superoxizi toxici. Peroxizii eibereaz H+ care se pot cupla cu halogeni, rezultnd produi halogenai bactericizi. n patologie, deficitul de peroxidaz creaz o susceptibilitate ridicat la infecii. Unele bacterii prezint un mecanism de rezisten, cum ar fi bacilul tuberculozei care mpiedic fuziunea lizozomilor cu fagozomii. n timpul fagocitozei, cantiti reduse de enzime se elimin la exterior, avnd efecte litice asupra esuturilor, ct i a neutrofilelor, modalitate de constituire a puroiului. Ulterior, macrofagele fagociteaz resturile, urmnd repararea esuturilor. n condiii fiziologice, granulocitele sunt dispuse n centrul torentului sanguin (circulante). La nivelul vaselor de calibru redus, granulocitele stagneaz la periferie (marginaie leucocitar), favorizndu-se astfel diapedeza. Aderarea la endotelii se datoreaz unei proteine membranare, denumit L CAM1 (molecula 1 de adeziune a leucocitelor la endotelii) i citokinelor: Il-1 i TNF care stimuleaz celulele
7

HISTOLOGIE GENERAL, HISTOLOGIE SPECIAL CORNELIA AMLINEI

endoteliale s secrete i s poziioneze la nivelul membranei plasmatice E LAM1 (molecula 1 de adeziune a leucocitelor la endotelii). Acidul arahidonic din membrana celulelor fagocitice creaz posibilitatea producerii de leucotriene: LTA4, LTB4 care promoveaz adeziunea neutrofilelor la endotelii, migrarea n esuturi i chemotactismul asupra eozinofilelor, monocitelor i a altor neutrofile LTC4, LTD4, LTE4 care conin cistein i cresc permeabilitatea la nivel postcapilar, cu edeme la locul inflamaiilor, determin vasoconstricie cu insuficien respiratorie, simptome evidente n astmul bronic. Dup un tranzit de 6-8 ore n snge, neutrofilele trec prin diapedez n esutul conjunctiv, unde i ndeplinesc funcia i mor n 1-4 zile. Neutrofilia (creterea numrului neutrofilelor) apare n infecii acute. Neutropenia (scderea numrului neutrofilelor) apare n viroze. Eozinofilele Eozinofilele au un diametru de 13-14 m. Eozinofilele conin granulaii mari, alungite, de mrime constant (0,6-0,8 m), refringente, colorate cu eozin n rou strlucitor sau rou portocaliu i dispersate n toat citoplasma. Microscopia electronic evideniaz: Zona central electronoopac, uneori de aspect cristaloid, de forme variate, denumit internum Matrice fin granular n jur, denumit externum. Granulele reprezint lizozomi, coninnd urmtoarele enzime: perozidaz, fosfataz acid, arilsulfataz, -glucuronidaz, catepsin, fosfolipaz, ribonucleaz, histaminaz i trei proteine cationice care nu se gsesc n lizozomii altor celule, denumite: proteina bazic major (MBP) proteina cationic eozinofilic (ECP) neurotoxina eozinofilic. Primele dou proteine bazice realizeaz pori transmembranari n celulele int i elibereaz ioni superoxizi i H2O2 care distrug membranele prin oxidarea lipidelor. Neurotoxina i datoreaz denumirea sindromului de paralizie pe care l induce dup injectarea la animalele de laborator. Produii de catabolism eliberai de parazii determin apariia Ig G antiparazitar. Eozinofilele prezint receptori pentru Fc a IgG i pentru C3b. Suprafeele paraziilor pot activa complementul care, prin intermediul anafilatoxinelor, determin degranularea mastocitelor i bazofilelor, cu eliminarea de mici cantiti de factori chemotactici pentru eozinofile i vasodilataie. Se produce un aflux de eozinofile care exociteaz granulele. Nucleul este tipic bilobat, n desag, cu lobii alungii unii printr-o punte fin de cromatin. Organitele sunt slab dezvoltate. Eozinofilele sunt capabile de a emite pseudopode i de a fagocita complexele Ag-Ac (fagocitoz selectiv). Eozinofilele sunt sensibile la glucocorticoizi. Durata lor de via este de pn la 12 ore. Eozinofilia (creterea numrului eozinofilelor) apare n alergii i n parazitoze. Bazofilele Bazofilele prezint un diametru de 8-12 m i conin granulaii sferice, cu mrimea de pn la 1 m diametru i forme variate, datorit solvirii pariale n ap i glicerin, intens bazofile, metacromatice cu Albastru de toluidin i cu tionin. Granulaiile prezint un aspect electrono-opac, granular, omogen sau lamelar, coninnd urmtoarele substane: peroxidaz, heparin, histamin, factori chemotactici pentru neutrofile i eozinofile i dup activare produc i: leucotriene, prostaglandine, tromboxan i factor de activare plachetar.

HISTOLOGIE GENERAL, HISTOLOGIE SPECIAL CORNELIA AMLINEI

Nucleul este n mod uzual acoperit de granulaii pe frotiuri, caracteristicile sale fiind observabile n ME: 2-3 lobi unii prin puni scurte i groase, n litera S, cu heterocromatin periferic i eucromatin central. Membrana bazofilelor exprim receptori pentru Fc a IgE, pentru C3a i C5a. Bazofilele contribuie la aprarea antibacterian i antiparazitar prin revrsarea coninutului granulelor. Pot fi degranulate i de C3a, C5a. n strile alergice, bazofilele eacioneaz ca i mastocitele. n organismele sensibilizate se produce o degranulare masiv i determin, mpreun cu mastocitele, un rspuns exagerat. Proteoglicanii din granulaii activeaz lipoproteinlipaza i, prin heparin, contribuie la reglarea lipemiei i la hidroliza lipoproteinelor. Bazofilele i mastocitele prezint un precursor comun n timpul vieii embrionare dar mastocitele populeaz precoce esutul conjunctiv unde se vor cantona, pe cnd bazofilele sunt produse n tot timpul vieii de ctre mduva osoas, avnd un tranzit scurt prin snge. Bazofilia (creterea numrului bazofilelor) apare n stri alergice i n intoxicaiile cronice cu plumb. Limfocitele Limfocitele reprezint tipul predominant de agranulocite, przint un diametru de 8-12 m, putnd fi clasificate n trei grupe, dup mrime: Mici, mature, cu un diametru de 8 m Medii, n curs de maturare, cu un diametru de 10 m Mari, tinere, cu un diametru de 12 m. Limfocitele mici i medii conin o citoplasm redus, pe cnd cele mari prezint o citoplasm abundent, de culoare albastru deschis. Nucleul este unic, intens colorat, rotund sau uor indentat, indentaia corespunznd locului unde citoplasma este mai abundent. Nucleolul este vizibil doar n celulele vii sau n microscopia electronic. Limfocitele mici conin ribozomi liberi care confer bazofilia citoplasmei, mitocondrii, restul organitelor fiind mai slab reprezentate. Limfocitele medii prezint n zona indentrii nucleului un complex Golgi moderat dezvoltat, observabil uneori ca o zon perinuclear mai palid, apropiat de centriol, mitocondrii, ribozomi liberi i RER. Limfocitele pot avea o via scurt sau medie (zile, luni) sau lung (ani, zeci de ani), acestea din urm avnd rolul de a rspunde rapid la contacte repetate cu un acelai antigen. Limfocitele se divid n dou mari clase: Limfocitele T prezint precursori produi n mduva osoas hematogen i maturai la nivelul timusului, avnd rol fie n imunitatea celular, prin citotoxicitate, fie faciliteaz rspunsul imun umoral. Limfocitele B sunt produse n mduva osoas hematogen i au rol n imunitatea umoral mediat de anticorpi. Cele dou tipuri pot fi deosebite n microscopia electronic de baleiaj, n care se constat c suprafaa este relativ neted la limfocitul T i viloas la limfocitul B. Tehnicile de imunohistochimie pot deasemenea diferenia cele dou tipuri prin capacitatea limfocitelor T de a forma rozete simple cu eritrocitele ovine, pe cnd limfocitele B realizeaz doar rozete eitrocitare induse. n sngele periferic, 80% din limfocite sunt limfocite T, 18% sunt B i 1-2% sunt nule. Limfocitele T prezint urmtorii markeri mai importani: TcR, receptorul pentru antigen CD2, cu ajutorul cruia se realizeaz rozete simple CD3, cu rol de transductor CD4, care recunoate antigenele de histocompatibilitate de clas II CD8, care recunoate antigenele de histocompatibilitate de clas I
9

HISTOLOGIE GENERAL, HISTOLOGIE SPECIAL CORNELIA AMLINEI

CD25, receptor pentru interleukine, n special pentru IL-2. Populaia de limfocite T este format din subpopulaii specializate. Fenotipic, deosebim dou subclase: T4 (CD2+, CD3+, CD4+, CD8) T8 (CD2+, CD3+, CD4, CD8+). Funcional, deosebim mai multe subclase: Inductoare, T4 Reglatoare: T4 helper (ajuttoare), Th T8 supresoare, Ts Efectoare: T8, citotoxice. Celulele reglatoare pot avea i funcie efectoare. Ts pot fi supuse unui sistem de reglare negativ de ctre limfocitele T contrasupresor, cu proprietatea de a elibera limfocitele B de sub controlul negativ al limfocitelor Ts. Funciile limfocitelor T sunt urmtoarele: Recunosc substanele non self Sunt activate i prolifereaz dup stimularea antigenic Dezvolt funcii citotoxice sau citolitice Dezvolt funcii specifice de reglare a interaciunilor celulare Th, Ts Produc efecte importante pentru aprarea organismului: activitate citotoxic mediat celular, activitate antiviral, efecte antifungice, respingerea transplanturilor. Limfocitele T recunosc antigenul cnd acesta este prezent pe suprafaa unei celule APC n asociere cu moleculele complexului major de histocompatibilitate (HCM). Rolul complexului TCR-CD3 este major. Activarea survine n urma contactului direct, moleculele de suprafa ale limfocitelor T se leag de moleculele de suprafa ale APC. Declanarea semnalului de transformare blastic a limfocitului T presupune coexistena structurii antigenice cu molculele de clas II i adiional producerea de Il-1. Sub aciunea acestor dou semnale se modific organizarea molecular a CD3 care transfer n citoplasm semnalul de activare. La nivel molecular sunt dou ci: fosfatidil-inozitolului i tirozin-kinazei care determin deschiderea canalelor de calciu, activarea proteinkinazei C i sinteza de proteine. Limfocitele T sintetizeaz Il-2 i molecule receptor pentru Il-2. Il-2 este capabil s determine activarea limfocitului T. Se realizeaz astfel o reacie de amplificare care determin expansiunea clonal. n urma proceselor de transformare blastic i expansiune clonal rezult dou tipuri de celule: celule efectorii i celule cu memorie. Limfocitele B prezint urmtorii: receptori Pentru C3b, C1 Pentru C3d, C2 Pentru C3i, C3 Pentru Fc a Ig G, cu ajutorul crora formeaz rozetele eritrocitare induse Pentru Il-2, Il-3, IL-4, IL-5, IL-6 Pentru virusul Epstein-Barr etc. Rspunsul imun umoral se realizeaz prin intermediul antigenelor solubile care pot fi: Timoindependente, cu proprietatea de a activa limfocitele B n mod direct, fr ajutorul limfocitelor T. Antigenele timoindepenente sunt molecule mari, polimerice, cu structur monoton, cu determinani antigenici identici, n serie, sub form de uniti repetitive. Ei pot lega ncruciat un numr mare de receptori, determin transformarea blastic i expansiunea clonal, formnd o clon de celule care vor evolua n totalitate spre celule sintetizante de imunoglobuline, de regul de clas M, fr a produce celule cu memorie.

10

HISTOLOGIE GENERAL, HISTOLOGIE SPECIAL CORNELIA AMLINEI

Timodependente care au nevoie de limfocitele T pentru a determina sinteza de anticorpi. Marea majoritate a antigenelor circulante prezint epitopi diferii, nerepetitivi, care nu pot lega ncruciat un numr mare de receptori. Limfocitele T4 i APC preiau antigenul polivalent, l prelucreaz, exprim apoi pe suprafa diferite peptide antigenice, mpreun cu HCM de clas II. Limfocitul T recunoate cuplajul antigen-HCM clas II, primete un stimul prin Il-1 i ncepe producerea de Il-2 i de receptori pentru Il-2. Dintre epitopii exprimai de APC, limfocitul B poate recunoate cu un receptor un determinant antigenic dar acesta nu este suficient pentru activare. De aceea este necesar cooperarea celular, prin: T helper produce Il-3 Il-4, Il-5 determin evoluia limfocitelor B activate spre plasmocite Il-6 comuteaz sinteza de imunoglobuline, de la M la G. Celulele NK sunt limfocite medii sau mari, nonT nonB sau nule care pot prezenta cteva granulaii azurofile, fiind implicate n aprarea antiviral i antitumoral, realiznd citoliza prin perforine. Limfocitele au capacitate de diapedez, de recirculaie i pot trece prin peretele venulelor postcapilare cu endoteliu nalt, n organele limfatice, datorit recunoaterii unor molecule ale suprafeei endoteliale. Limfocitoza (creterea numrului limfocitelor) apare n infecii cronice, n viroze. Monocitele Monocitele sunt cele mai mari celule de pe frotiul sanguin, avnd un diametru de 15-16 m. Nucleul monocitului este mare, central sau uor excentric, reniform, n potcoav sau trapezoidal, mult mai indentat dect cel al limfocitului, indentaiile fiind dispuse spre zona citoplasmatic mai abundent. Cromatina este mai dispersat dect cea a limfocitului, rareori nucleolul fiind evident. Citoplasma are o culoare albastr-cenuie, cu aspect de sticl pisat, datorit unor granulaii foarte fine, azurofile, dense, omogene n microscopia electronic, cu structur de lizozomi primari. Monocitele exprim pe suprafa receptori pentru Fc a imunoglobulinei G, pentru C 3 i peste 50% din ele exprim molecule HCM de clas II. Monocitele persist n circulaia periferic aproximativ 3 zile, apoi ajung prin diapedez n esuturi, unde genereaz diferite componente ale sistemului fagocitar mononuclear. n cursul maturrii, unele devin puternic fagocitante, dezvoltndu-i receptorii pentru complement i pentru imunoglobuline iar altele dezvolt mai intens antigene HCM de clas II, devenind n esuturi APC. Monocitoza (creterea numrului monocitelor) apare n infectiile cronice, n mononucleoza infecioas, cauzat de virusul Epstein-Barr (EBV), nrudit cu herpes-virusul etc.

11

HISTOLOGIE GENERAL, HISTOLOGIE SPECIAL CORNELIA AMLINEI

H E M AT O P O IE Z A Celulele mature ale sngelui au o via relativ scurt, astfel nct trebuie s fie continuu rennoite de celulele stem progenitor produse n organele hematopoietice (haima-snge, poiesisproducere). n producerea elementelor figurate ale sngelui se pot distinge urmtoarele etape: 1. Etapa prenatal a. prehepatic, din sptmna a III-a (intravascular) pn n luna a II-a n stadiile iniiale ale embriogenezei, celulele sanguine iau natere din mezodermul sacului vitelin. Din insulele Wolff-Pander, celulele vor coloniza oganele hematopoietice cu celule stem i se va diferenia megacarioblastul i hematogonia. b. hepato-spleno-timic, din luna a II-a pn n luna a IV-a Mai trziu, ficatul i splina servesc drept esuturi hematopoietice tranzitorii. La acestea se adaug i timusul care i ncepe funcia. c. medulo-ganglionar, din luna a IV-a nc din luna a II-a, clavicula ncepe s se osifice i ncepe s dezvolte mduv osoas (MO) n interiorul su. Pe msur ce osificarea prenatal a restului scheletului se accelereaz, mduva osoas devine un esut hematopoietic din ce n ce mai important. 2. Etapa postnatal Dup natere i n copilrie, eritrocitele, granulocitele, monocitele i plachetele deriv din celulele stem ale mduvei osoase. Hematopoieza are loc la nivelul epifizelor proximale a oaselor lungi, coastelor, corpilor vertebrali, sternului, coxalului, claviculelor i craniului. Originea i maturarea elementelor figurate ale sngelui poart denumirile urmtoare: Eritropoiez (erytros-rou) Granulocitopoiez Monocitopoiez Trombocitopoiez Limfopoiez. nainte de a atinge maturitatea i a fi eliberate n circulaie, celulele sanguine trec prin stadii specifice de difereniere i maturare, dup cum urmeaz: celule stem, progenitor i precursor.

Celulele stem, factorii de cretere i de difereniere Celulele stem sunt celule pluripotente (PPSC- pluripotent stem cell) care se pot divide continuu i a cror celule fiice formeaz tipuri celulare ireversibil difereniate. Studiul celulelor stem din MO este posibil datorit unor tehnici experimentale care permit analiza hematopoiezei in vivo i in vitro. Tehnicile in vivo se realizeaz prin injectarea MO a unui oarece donor normal la un oarece iradiat letal, ale crui celule hematopoietice au fost distruse. La aceste animale, celulele MO transplantate dezvolt colonii de celule hematopoietice n splin. Investigaiile in vitro ale hematopoiezei se realizeaz prin utilizarea unui mediu de cultur cu esut semisolid realizat printr-un strat de celule derivate din stroma MO. Acest mediu creeaz condiii de microclimat favorabile hematopoiezei. Date provenite dintr-o serie extins de experimente arat c, n condiii adecvate de micromediu, stimularea de ctre factorii de cretere influeneaz dezvoltarea unor variate tipuri de celule sanguine. Celulele stem pluripotente i multipotente n prezent se consider c toate celulele sanguine provin dintr-un singur tip de celul stem din MO (Teoria monofiletic). Deoarece aceast celul poate produce toate tipurile de celule sanguine, este denumit celul stem pluripotent.
12

HISTOLOGIE GENERAL, HISTOLOGIE SPECIAL CORNELIA AMLINEI

Aceste celule prolifereaz i formeaz dou linii celulare de celule stem multipotente: celule limfoide care genereaz limfocite (celula stem multipotent limfoid- CFU-L); celule mieloide (CFU-GEMM (celul stem multipotent mieloid din care se dezvolt n MO: granulocite, monocite, eritrocite i megacariocite). Precoce, n timpul dezvoltrii lor, celulele limfoide migreaz din MO spre ganglionii limfatici, splin i timus, unde i completeaz diferenierea spre limfocite.

Celulele progenitor i celulele precursor Celulele stem multipotente proliferative formeaz celule fiice cu potenialitatea redus. Aceste celule uni- sau bipotente genereaz celule precursor sau blaste, n care caracteristicile morfologice se difereniaz pentru prima dat (spre deosebire de acestea, celulele stem i progenitor nu pot fi distinse morfologic i se asemn limfocitelor), sugernd tipul de celul n care se vor transforma. Celulele stem pluri- i multipotente se divid la o rat suficient pentru a-i menine populaia lor relativ redus- autoreproductibilitate (la MO de oarece doar 0,1-0,3% din celule sunt multipotente). Aceste celule sunt prezente i n circulaie, fiind denumite celule nule. Rata mitotic este accelerat n celulele progenitor i precursor, producnd numere mari de celule mature, difereniate (n MO uman 3 109 eritrocite i 0,85 109 granulocite pe zi). Pe cnd celulele progenitor se pot divide i pot produce att celule progenitor ct i celule precursor, celulele precursor produc doar celule sanguine mature. Acest fapt atest scderea treptat a potenialitii. Astfel, hematopoieza este rezultatul proliferrii simultane, continui i al diferenierii celulelor derivate din celulele stem al cror potenial este redus pe msur ce diferenierea progreseaz. Acest proces poate fi observat n studiile in vivo i in vitro, n care apar colonii celulare derivate din celulele stem cu variate potenialiti. Coloniile derivate dintr-o celul stem multipotent mieloid pot produce eritrocite, granulocite, monocite i megacariocite, toate n aceeai colonie. n aceste experimente, totui, unele colonii produc granulocite i monocite, sau eritrocite i megacarioblaste, exprimnd o bipotenialitate. Celulele care formeaz colonii sau clone de tipuri celulare specifice sunt denumite celule formatoare de colonii (CFC) sau uniti formatoare de coloniii (CFU). Exist convenia de a denumi aceste variate tipuri de colonii celulare cu litera iniial a celulei produse de acea colonie. Astfel, M-CFC denot o colonie formatoare de monocite, E- CFC formeaz eozinofile, MC-CFC formeaz monocite i granulocite etc. Hematopoieza depinde de prezena unui micromediu adecvat i de factori de cretere. Condiiile de microclimat sunt furnizate de celulele stromei organelor hematopoietice care produc matricea extracelular. O privire da ansamblu asupra hematopoiezei, ne arat c, pe msur ce acest proces are loc, att potenialul de difereniere i de auto-nnoire a celulelor iniiale scade gradat. n contrast, rspunsul mitotic la factorii de cretere se amplific gradat, atingnd maximum la mijlocul acestui proces. De aici, morfologia i activitatea funcional se dezvolt i se formeaz celulele mature. Factorii care afecteaz proliferarea i diferenierea celular sunt denumii factori de cretere, factori stimulatori ai coloniilor (CSF) sau hematopoietine sau poietine. Acetia prezint compoziii chimice diferite, fiind n general glicoproteine cu un lan polipeptidic bazic de aproximativ 20000 Da. Funciile ndeplinite de aceste substane sunt suprapuse, complexe, acionnd prin stimularea proliferrii (a activitii mitogenice) a celulelor imature (mai ales a celor progenitor i precursor), susinnd diferenierea celulelor imature pe msur ce se matureaz i amplificnd funciile celulelor mature. Aceste funcii pot fi prezente n acelai factor de cretere sau pot fi exprimate cu intensiti variabile n diferii factori de cretere. Izolarea i clonarea genelor mai multor factori de cretere permit att producerea lor ct i studiul efectelor lor in vivo i in vitro. Factorii de cretere mai cunoscui sunt urmtorii: G-CSF stimuleaz formarea granulocitelor, le crete metabolismul i stimuleaz celulele leucemice; este produs de macrofage, celule endoteliale i fibroblaste; gena care l codific este situat pe cromosomul 17;

13

HISTOLOGIE GENERAL, HISTOLOGIE SPECIAL CORNELIA AMLINEI

GM-CSF stimuleaz in vitro i in vivo producerea de granulocite i macrofage; este produs de limfocitele T, celule endoteliale i fibroblaste; gena care l codific este situat pe cromosomul 5; M-CSF stimuleaz formarea macrofagelor in vitro i crete activitatea antitumoral a macrofagelor in vivo; este produs de macrofage, endotelii i fibroblaste; gena codificant este situat pe cromosomul 5; IL-3 stimuleaz producerea de celule mieloide; este produs de limfocitele T CD4+; gena codificant este situat pe cromosomul 5; EPO sau Eritropoietina stimuleaz formarea hematiilor; este produs de celulele interstiiale renale; gena codificant este situat pe cromosomul 7; Trombopietina (TPO) stimuleaz CFU-Mega i megacariocitele; Multi-CSF stimuleaz celulele progenitor multipotente, seria mieloid i mastocitele tisulare; IL-1 este produs de neutrofile, monocite, macrofage, celule endoteliale, inta aciunii sale fiind limfocitele T i B; IL-2 este produs de limfocitele T CD4+ i stimuleaz limfocitele; IL-4 este produs de limfocitele T CD4+i mastocite i stimuleaz limfocitele i mastocitele tisulare; IL-5 limfocitele T CD4+ i stimuleaz CFU-Eo, eozinofilele i limfocitele B; IL-6 prezint ca surs celulele endoteliale, neutrofilele, macrofagele, limfocitele T i stimuleaz limfocitele, granulocitele,celulele progenitor multipotente, macrofagele i hepatocitele; IL-7 este produs de celulele adventiceale ale MO, inta aciunii lor fiind limfocitele pre-T i pre-B; IL-8 este produs de macrofage, endoteliale, inta aciunii lor fiind limfocitele T i neutrofilele; IL-9 prezint ca surs de producere limfocitele T CD4+; inta aciunii fiind limfocitele T CD4+, CFU-GEMM, CFU-E; IL-10 este produs de macrofage, limfocite T, stimulnd limfocitele T, B i NK; LIF sau factorul inhibitor al leucemiei acioneaz pe monocite-macrofage; IL-12 are ca surs macrofagele i ca int CFU-GEMM, CFU-E, CFU-GM, limfocitele B, T, macrofagele, megacariocitele; Interferonul (IFN-) are ca surs de producere limfocitele T CD4+, NK i ca int limfocitele B, T, NK, neutrofilele i monocitele.

Mduva osoas Mduva osoas (MO) se gsete n canalele medulare ale oaselor lungi i n cavitile oaselor spongioase. Capsula este realizat de endostul osteogenic. Dup aspectul su macroscopic s-au descris urmtoarele tipuri: Roie sau hematogen, a crei culoare se datoreaz predominenei celulelor liniei eritrocitare; aproximativ jumtate din MO este hematoformatoare; se gsete la copii i adolescenii tineri. Galben, a crei culoare se datoreaz unui numr mare de lipocite; la aduli poate redeveni mduv roie n condiii de cretere a necesitilor de celule sanguine. Cenuie, n care predomin elementele fibrilare; se ntlnete la vrstnici; nu mai are capacitatea de a redeveni MO roie. MO roie este compus din : Strom; Cordoane hematopoietice; Capilare sinusoide. Stroma este reprezentat de o reea tridimensional de celule reticulare ancorate pe o reea delicat de fibre reticulare. Celulele sunt:
14

HISTOLOGIE GENERAL, HISTOLOGIE SPECIAL CORNELIA AMLINEI

De tip fibroblastic, de aspect stelat; prelungirile lor vin n contact prin intermediul jonciunilor distanate; se situeaz n jurul celulelor n curs de dezvoltare din seria granulocitar; De tip macrofagic, dispersate, situate n interiorul insulelor eritroblastice; De tip adventiceal, reprezentate de celule de tip fibroblastic, situate n apropierea capilarelor sinusoide; De tip adipos sau lipocite, care au capacitatea de a stoca lipide, furniznd un substrat metabolic i au funcia de a menine cavitile osului medular pe msura reducerii mduvei roii. Matricea conine: Colagen tip I i III; Fibronectin; Laminin; Hemonectin; Proteoglicani. Sinusoidele sunt formate din: endoteliu continuu; membran bazal discontinu; strat discontinuu de celule adventiceale care variaz n funcie de afluxul elementelor celulare spre sinusoid. Eliberarea celulelor mature este controlat de factorii de eliberare: C3; Glucocorticoizi; Androgeni; unele toxine bacteriene. Leucocitele trec prin motilitate prin peretele sinusoidal, eritrocitele intr n sinusoide printr-un gradient existent la nivelul peretelui. Megacariocitele formeaz fine procese care traverseaz peretele i se fragmenteaz la capete, elibernd plachetele.

Vascularizaia MO Vasele MO sunt urmtoarele: Artera nutritiv intr printr-un foramen nutritiv la nivelul diafizei. Arterele metafizelor intr la nivelul capetelor osului i se unesc cu artera nutritiv. Arterele longitudinale centrale sau arteriole iau natere din artera nutritiv, fiind situate la nivelul MO hematogene. Arterele radiale sau capilarele arteriale comune iau natere din arterele longitudinale, avnd dou traiecte posibile: Unul spre osul compact al diafizei pe care l prsesc prin mici vene periostale; Altul d natere sinusurilor medulare. Venele longitudinale centrale colecteaz sngele sinusoidelor. Vena nutritiv colecteaz sngele din venele longitudinale centrale i iese prin foramenul nutritiv. Celulele unei linii sunt situate n insule sau cordoane hematopoietice. Fiecare insul n care se dezvolt eritrocitele prezint central un macrofag i prezint o poziie nvecinat peretelui sinusoidal. Megacariocitele sunt situate tot n vecintatea peretelui sinusoidal i i descarc plachetele direct n sinus prin deschideri tranzitorii denumite aperturi sau pori transcelulari. Granulocitele se dezvolt n insule situate la distan de peretele sinusului. Cnd sunt mature, granulocitele migreaz spre sinusoid i intr n fluxul sanguin. Eritropoieza Maturarea eritrocitelor- eritropoieza semnific diferenierile care au loc spre un stadiu n care au capacitatea de a-i exercita toate funciile specifice.

15

HISTOLOGIE GENERAL, HISTOLOGIE SPECIAL CORNELIA AMLINEI

Procesul esenial n maturarea eritrocitelor l constituie sinteza de hemoglobin, cu formarea unui corpuscul mic, anucleat, biconcav. n timpul acestui proces, au loc cteva modificri majore: volumul scade, nucleolii diminu pn devin invizibili n MO, scade diametrul nuclear i cromatina devine din ce n ce mai dens, pn cnd nucleul capt un aspect piknotic i este n final exclus din celul. Apare o scdere gradat a numrului de poliribozomi din citoplasm, exprimat prin diminuarea bazofiliei, urmat de o cretere simultan a proporiei de hemoglobin, exprimat prin apariia i creterea acidofiliei citoplasmei i mitocondriile dispar treptat. Au loc 3-5 diviziuni intermediare ntre proeritroblast i eritrocitul matur. Dezvoltarea unei hematii de la prima celul recognoscibil a seriei pn la eliberarea reticulocitelor n snge are loc n aproximativ 5-7 zile. Un rol important n producerea hematiilor l au: Eritropoietina care este o glicoprotein produs de celulele interstiiului renal care stimuleaz ARNm pentru globin, proteina component a moleculei de hemoglobin; Aminoacizi; Fier; Acid folic Vitamina B12; Factorul intrinsec Castle; Hormonii androgeni. GEMM-CFU, sub influena Epo, a GM-CSF i a IL-4 se transform n EM-CFU. Celula EMCFU d natere, sub influena IL-3, celulei BFU-E (burst forming units erythroid- unitate formatoare de explozii eritrocitare), din care rezult E-CFU care, sub influena Epo se transform n Proeritroblast, capul de serie al liniei eritrocitare. Diferenierea i maturarea eritrocitelor implic formarea, n ordine, a urmtoarelor celule: 1. Proeritroblastul: are o durat de via de 20 de ore, dimensiunile sale sunt de 12-20 m i reprezint prima celul recognoscibil a seriei eritroide; nucleul su este mare, eucromatic, cu 2-3 nucleoli evideni, cu citoplasma redus, bazofil, datorit abundenei poliribozomilor. 2. Eritroblastul bazofil are o durat de via de 20 de ore, dimensiuni de 16 m, prezint un nucleu condensat, fr nucleoli evideni i o citoplasm puternic bazofil datorit RER i poliribozomilor implicai n sinteza de hemoglobin care ncepe s fie prezent sub forma unor mici particole. 3. Eritroblastul policromatofil (chroma-culoare; philein-a place, lb. Greac) rezult n urma a trei mitoze, urmate de maturare, are o durat de via de 25 de ore, dimensiuni de 10-16 m; nucleul este condensat, fr nucleoli, poliribozomii se reduc i cteva arii citoplasmatice devin ncrcate cu hemoglobin, cptnd culori variate; reprezint ultima celul a seriei capabil de diviziune. 4. Eritroblastul ortocromatofil sau Normoblastul are o durat de via de 25-30 de ore, dimensiuni de 8-9 m, nucleul apare i mai condensat, citoplasma pierde orice arie de bazofilie, devenind uniform acidofil, granular datorit hemoglobinei, mitocondriilor i a ribozomilor; datorit microfilamentelor coninute emit pseudopode prin care se insinueaz prin porii celulelor endoteliale. 5. Reticulocitul sau Eritrocitul policromatofil are o durat de via de 3 zile i rezult n urma excluderii nucleului, fiind nconjurat ntr-o capsul citoplasmatic redus, restul citoplasmei ajungnd n sinusoid; conine un numr redus de poliribozomi, RER care agreg n reea la tratarea cu un colorant supravital- Albastru strlucitor de crezil; este prezent n proporie de 1-2 % din hematiile sanguine i se matureaz, cu dispariia RER n 2-3 zile. 6. Eritrocitul rezult n urma pierderii poliribozomilor. Celulele seriei eritroide sunt situate n insule eritroblastice, n apropierea unui macrofag. Acesta distruge eritrocitele mbtrnite i transfer fierul prin feritin/hemosiderin i complexul proteic care conine fier ctre eritroblaste; globina este transformat n aminoacizi
16

HISTOLOGIE GENERAL, HISTOLOGIE SPECIAL CORNELIA AMLINEI

care sunt reutilizai; de asemenea distruge nucleii exclui de eritroblaste i produce factori de cretere care influeneaz hematopoieza. Granulocitopoieza (maturarea granulocitelor) (Leucopoieza) GEMM-CFU , sub influena GM-CSF, G-CSF i a IL-3 se transform n NM-CFU. NMCFU (pentru neutrofile i monocite) se transform sub influena IL-3 n N-CFU din care vor deriva neutrofilele i n M-CFU din care se vor dezvolta monocitele. Eozinofilele provin dintr-o celul precursor diferit, E-CFU care este stimulat de IL-5 i bazofilele din alt celul: B-CFU. Granulocitopoieza dureaz 11 zile i nregistreaz urmtoarele etape: 1. Mieloblastul este cea mai tnr celul recognoscibil din seria mieloid, are dimensiuni de 14-20 m, nucleul este mare, cu o cromatin fin, dispersat, cu 1-5 nucleoli evideni, citoplasma este palid bazofil, coninnd complex Golgi i mitocondrii, sufer 2-4 mitoze transformndu-se n urmtorul stadiu. 2. Promielocitul prezint dimensiuni de 18-24 m; nucleul su este sferic sau reniform, cromatina mai dens la periferie, cu o ancoare n dreptul zonei citoplasmatice mai clare corespunztoare centrozomului; citoplasma este mai abundent, bazofil, cu ribozomi, aparat Golgi, mitocondrii, RER i granule azurofile care conin enzime lizozomale i mieloperoxidaz; sufer 1-2 mitoze i se transform n urmtorul tip de celul. 3. Mielocitul neutrofilic, bazofilic i eozinofilic sunt mai mici, cu granule specifice care cresc treptat n cantitate, nucleul devine mai condensat, reniform; 4. Metamielocitul prezint nucleul curbat situat la periferie, cromatina condensat i o citoplasm acidofil, cu mai mult de 80% granulaii specifice care determin subtiparea n: neutrofilic, eozinofilic i bazofilic. 5. Granulocitul neutrofilic prezint un stadiu intermediar al crui nucleu are aspect bastoniform, curbat, fiind denumit celul n band. Dac acestea apar n proporie important n snge, apare un viraj la stnga semnificativ clinic, indicnd de obicei o infecie bacterian. 6. Granulocitul prezint o lobare evident a nucleului: multipl n cazul neutrofilului, bilobare pentru eozinofil i lobare puin evident pentru bazofil. Neutrofilele sufer n general 3 mitoze n cursul dezvoltrii liniei lor. Neutrofilelor li se pot descrie o serie de compartimente funcionale i anatomice, dup cum urmeaz: 1. Compartimentul formator medular care conine celula stem, mielocitul i granulocitul; acest compartiment se poate divide ntr-un compartiment mitotic de aproximativ 3 zile i un compartiment de maturare de aproximativ 4 zile. 2. Compartimentul medular de stocaj acioneaz ca un sistem de tampon, capabil de a elibera un numr mare de neutrofile mature, la cerere, n aproximativ 4 zile. 3. Compartimentul circulant const n neutrofile suspendate n plasm circulnd n vasele sanguine. 4. Compartimentul de marginaie conine neutrofilele prezente n snge dar care nu circul, fiind temporar excluse din circulaie prin vasoconstricie sau- n special n plmni- pot adera la endotelii; reprezint cam aceeai proporie ca i compartimentul circulant cu un schimb constant de celule ntre ele. Timpul de njumtire n aceste compartimente este de 6-7 ore. Primele 2 compartimente sunt de aproximativ 10 ori mai mari ca al II-lea i al IVlea. Neutrofilele, ca i alte granulocite, intr n esutul conjunctiv prin traversarea jonciunilor inter-endoteliale ale capilarelor i a venulelor postcapilare prin procesul de diapedez. 5. Compartimentul situat n esutul conjunctiv are o durat de 1-4 zile, dup care neutrofilele mor chiar dac nu i-au ndeplinit funcia de fagocitoz.

17

HISTOLOGIE GENERAL, HISTOLOGIE SPECIAL CORNELIA AMLINEI

Limfocitopoieza Limfocitele se disting mai ales pe baza mrimii, structurii cromatinei i a prezenei nucleolilor. Pe msur ce limfocitele devin mature, cromatina devine mai compact, nucleolii devin mai puin evideni i celulele scad n mrime. n plus, subseturi adiioneaz receptori distinctivi de suprafa n timpul diferenierii, posibil a fi detectai prin tehnici de imunocitochimie. Toate celulele progenitor ale limfocitelor i au originea n MO, Ly-CFU reprezentnd circa 30% din celulele nucleate medulare. Unele din limfocite relativ nedifereniate migreaz n timus, unde capt atributele LT. Ulterior vor popula regiuni specifice din organele limfoide periferice. Alte limfocite rmn n mduv, se difereniaz n LB i migreaz spre organele limfoide periferice unde se multiplic, ocupndu-i compartimentele specifice. Stadiile parcurse n cursul limfopoiezei sunt: Celule tranziionale: 1. Limfoblastul este o celul mare, de 15-20 m, cu nucleul central, cu 1-2 nucleoli evideni, cu citoplasma bazofil; ncorporez TMT, se divide de 2-3 ori i se transform n stadiul urmtor. 2. Prolimfocitul este mai mic, cromatina nuclear relativ mai condensat, fr antigene de suprafa care marcheaz LT sau LB; n timus sau n MO, sintetizeaz receptori caracteristici ai suprafeelor celulare dar nu se recunosc n coloraiile de rutin ci prin tehnici de imunocitochimie. Prolimfocitele T migreaz n timus, pe cnd prolimfocitele B rmn n MO. Limfocitele B dezvolt receptori de tip imunoglobulinic, prin sinteza lanurilor grele , i a lanurilor uoare , , prin rearanjamente genice. Monocitopoieza Din GM-CFU, sub influena M-CSF, GM-CSF i a IL-3 se formeaz M-CFU, care se va transforma n Monoblast. Monocitopoieza dureaz 8-10 zile, cu un interval de circa 55 de ore pn la stadiul de Premonocite i nregistreaz urmtoarele stadii: 1. Monoblastul reprezint o celul angajat virtual identic cu mieloblastul ca morfologie, cu dimensiune de aproximativ 20 m, cu cromatina nuclear dispersat, nucleolul fiind vizibil i citoplasma abundent, moderat bazofil. 2. Promonocitul are dimensiuni de 15-18 m, cu un nucleu mare, uor indentat, cu cromatina lax, nucleolii evideni i citoplasma mai puin bazofil, coninnd granule azurofile numeroase, RER, complex Golgi i mitocondrii; prezint receptori de suprafa pentru C; se divide de 2 ori i d natere urmtorului stadiu. Cam prezint o replicare lent, reprezentnd populaia de rezerv i prezint o diviziune rapid 3. Monocitul are dimensiuni de 15-16 m, un nucleu reniform eucrom, citoplasma conine o cantitate ridicat de RER care i confer bazofilia, complex Golgi extins, n care se formeaz granule de condensare care reprezint lizozomi primari, ca granule fine azurofile; suprafaa prezint receptori pentru C, Fc , Ag HLA. Ele constituie sectorul de rezerv sau intr n fluxul sanguin, circul de la 8 ore pn la maximum 3 zile i ajung n esutul conjunctiv, unde se matureaz n: 4. Macrofage care funcioneaz cteva luni (75-100 zile). Trombocitopoieza Din EM-CFU ia natere Mega-CFU care devine, sub influena Trombopoietinei Megacarioblast.
18

HISTOLOGIE GENERAL, HISTOLOGIE SPECIAL CORNELIA AMLINEI

Megacarioblastul este situat n apropierea sinusoidelor, are dimensiuni de 15-50 m diametru, nucleul este mare ovoidal sau reniform, cu numeroi nucleoli; devine nalt poliploid (x 30 ADN) nainte ca s aib loc diferenierea citoplasmatic; citoplasma este redus, omogen, intens bazofil datorit coninutului de ribozomi, polizomi i a aparatului Golgi, conine i granule azurofile; se divide prin endomitoze i n 10 zile se transform n urmtorul stadiu. 2. Promegacariocitul prezint dimensiuni de circa 45 m, o citoplasm abundent i un nucleu mare. 3. Megacariocitul este o celul gigant, de 35-150 m, de form rotund, cu cteva procese scurte, cu un nucleu lobulat, neregulat, cu cromatina condensat, fr nucleoli evideni, cu 32-64 n; citoplasma conine numeroase mitocondrii, centrioli multipli, RER bine dezvoltat i un complex Golgi extins din care se produc granule i vezicole cu enzime lizozomale- granule . Invaginri ale membranei plasmatice se ramific n interior, sub forma unor membrane de demarcaie care definesc arii care vor fi eliminate sub forma unor benzi, nucleii rmnnd n MO unde vor fi fagocitai. Se pot descrie 3 stadii: a. trombocitogen care conine ribozomi perinucleari, complex Golgi situat n zona medie i la periferie filamente i microtubuli; b. granular care concentreaz vezicole, lizozomi, mitocondrii, conferindu-i intensitatea culorii i caracteristica fin granular; c. vacuolat care prezint microvacuole golgiene i 5-8 invaginri ale membranei spre care se orienteaz vezicolele de demarcaie, n care se descriu 1000-1500 de teritorii secundare care vor da natere proplachetelor i acestea plachetelor. 4. Plachetele: un numr de 4000-6000 plachete ia natere dintr-un megacariocit.
1.

19

HISTOLOGIE GENERAL, HISTOLOGIE SPECIAL CORNELIA AMLINEI

B IB L IO G R A F IE Amlinei C.; Histologie general, Ed. Corson, Iai, Romnia, 2001. Amlinei C.; Histologie special, Ed. Junimea, Colecia Esculap, 117, Iai, 2005. Amlinei C., Balan R., Cotuiu C.; Histology-microscopic diagnosis of organs, Ed. Cantes, Iai, Romnia, 2000. 4. Bdescu A., Amlinei C., Stratone C., Bdescu M.E.; Histology, Ed. BIT, , Iai , 2001. 5. Bdescu A., Cruntu I., Amlinei C., Floarea-Strat A., Adomnici M.; esuturi normale-curs de Histologie, Ed. Graphix, Iai, Romnia, 1994. 6. Bdescu A., Cruntu I., Amlinei C., Floarea-Strat A., Adomnici M.; esuturi normale-curs de Histologie, Ed. Graphix, Iai, Romnia, 1994. 7. Burkitt H. G., Young B., Heath J. W., Deakin P. J.; Wheaters Functional Histology-a text and atlas, Ed. Churchilll Livingstone, New York, U.S.A., 1995. 8. Cruntu I. D., Cotuiu C.; Histologie special-ghid pentru lucrri practice, Ed. Apollonia, Iai, 1998. 9. Cotran R.S., Kumar V., Collins T.; Robbins pathologic basis of disease, sixth edition, W. B. Saunders Company, Philadelphia, 1999. 10. Fawcett D. W., Bloom W.; A textbook of Histology, Ed. Chapman & Hall, New York, U.S.A., 1994. 11. Gartner P.Leslie, Hiatt L. James, Strum M. Judy; Cell Biology and Histology, third edition, Williams &Wilkins, Baltimore, Maryland, USA, 1998. 12. Johnson E. Kurt; Histology and Cell Biology, Second Edition, National Medical Series from Williams & Wilkins, Baltimore, Maryland, 1991. 13. Junqueira L. C., Carneiro J., Kelley O. R.; Basic Histology, Ed. Appleton & Lange, Stamford, Connecticut, U.S.A., 1995. 14. Kuhnel Wolfgang; Atlas de Poche DHistologie, 2e edition francaise, Medecine-Sciences Flammarion, France, 1997. 15. McGee OD. J., Isaacson P.G., Wright N.A., Oxford Textbook of Pathology, Oxford University Press, New York, USA, 1992. 16. Poirier J., Ribadeau-Dumas J. L., Catala M., Gherardi R. K., Bernaudin J. F.; Histologie molculaire, Ed. Masson, Paris, France, 1997. 17. Ross H. M., Kaye G. I., Pawlina W.; Histology-a text and atlas, fourth edition, Ed. Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, Philadelphia, 2003. 18. Ross H. M., Romrell J. L., Kaye J. G.; Histology-a text and atlas, third edition, Ed. Williams & Wilkins, Baltimore, Maryland, 1995. 19. Stevens A., Lowe J.; Human Histology, third edition, Elsevier Mosby, Philadeplphia, 2005.
1. 2. 3.

20