Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
PRIBCIPIUL METODEI Spectrofotometria de absorie molecular n UV VIs se bazeaz pe absorbia radiaiilor de regul ntre 180 800 nm de ctre speciile moleculare din probe lichide, solide sau gazoase. Proba lichid se pune ntr-o cuv i asupra ei se trimite un fascicul primar emis de o surs extern de spectru continuu. Fotonii ntlnesc n calea lor speciile absorbante moleculare, care absorb o parte din radiaia incident. Puterea radiant transmis prin cuv este msurat cu ajutorul unui detector optic sensibil n domeniul UV Vis.
Pt( )
Detector
Sursa
Bilanul puterii radiante, dac se neglijeaz puterea radiant reflectat de pereii cuvei, cea absorbit de pereii cuvei i cea dispersat prin soluie este
P0 = Pa + Pt
Puterea radiant absorbit (Pa) i cea transmis (Pt) depind de
Lungimea de und ( )
CONCLUZIE. Deoarece Pa i Pt depind de lungimea de und i concentraie, prin spectrometria de absorbie molecular se pot face analize calitative i cantitative
MRIMI OPTICE
TRANSMITANA (T)
Pt T= P0
Pt T% = 100 P0
ABSORBANA (A)
A = log T
A = 2 log T%
Scala de transmitan este liniar iar cea de absorban este logaritmic. Pe scala unui spectrofotometru pot fi citite absorbane ntre 0 2. Absorbanele mai mari dect 2 sunt asimilate cu infinit.
A = b c
A = a b c
A absorbana fr unitate de msur b grosimea stratului absorbant (grosimea cuvei , n cm) - absorbtivitatea molar, n l mol-1 cm-1 a absorbtivitatea, n l g-1 cm-1 c concentraia speciilor absorbante n mo l-1 (pentru ) sau g l-1 (pentru a) Absorbana crete liniar cu concentraia speciilor absorbante i grosimea cuvei. Dac grosimea cuvei este constant atunci absorbana depinde liniar numai de concentraie.
ABSORBTIVITATEA MOLAR ( )
A 1 1 1 = = = l mol cm 1 b c cm mol l
Dac b = 1 cm i concentraia speciilor absorbante c = 1 mol l-1 , rezult
A=
Absorbtivitatea molar ( ) este absorbana unui strat de soluie cu grosimea de 1 cm i concentraia speciilor absorbante de 1 mol l-1 Cu ct este mai mare cu att substana absoarbe mai bine radiaia optic.
A = log T A = 2 log T% Pt A bc T = = 10 = 10 P0 Pt = P0 10
bc
Intre absorban i transmitan exist o relaie logaritmic Absorbana concentraia crete liniar cu
Transmitana scade exponenial cu concentraia Puterea radiant transmis scade exponeneial cu concentraia
In metodele prin absorbie spectrometrul msoar transmitana, iar absorbana este calculat pe baza relaiei logaritmice de dependen ntre ele
Absorbana
Co(H2O)62+
380 430 480 530 580 630 680 730 780
Absorbana
Cr(H2O)63+
120 100
Transmitana
80 60 40
Cr(H2O)63+
Transmitana
Co(H2O)62+
10 2 10 0 8 0 6 0 4 0 2 0 0 0 2 4 6 8 1 1 1 0 2 4
Lungimea de und / nm
(+) (-)
Abateri negative
TIPURI DE ABATERI ABATERI POZITIVE Absorbana msurat este mai mare dect cea teoretic n conformitate cu legea lui Lambert- Beer ABATERI NEGATIVE Absorbana msurat este mai mic dect cea teoretic n conformitate cu legea lui Lambert- Beer
Absorban
(+) (-)
Concentraie
Abaterile pozitive i negative de la legea lui Lambert- Beer apar n soluii diluate sau concentrate. Exist un domeniu dinamic al curbei de etalonare, pe care exist o relaie liniar ntre absorban i concentraie. Abaterile duc la erori sistematice pozitive i negative.
Pentru fiecare nivel electronic molecula are mai multe nivele energetice vibraionale i pentru fiecare nivel vibraional mai multe nivele rotaionale.
Alungire
Forfecare
+ -
+ -
+ -
Prin micarea de rotaie se schimb frecvena de rotaie a moleculelor n jurul centrelor de greutate
Et = E e + E v + E r
Et = h e + h v (v + 1) + hcBJ( J + 1)
e
frecvena radiaiei optice care provoac tranziia energetic electronic frecvena radiaiei optice care provoac tranziia energetic vibraional
REGULI DE SELECIE La absorbia unei radiaii UV Vis nu exist nici o regul de selecie. Astfel sunt posibile orice tranziii energetice n= 1 v = 0, 1, 2, 3, etc E0 J = 0, 1, 2, 3, etc
E1 Emisie cldur
Abs. radiaie
3 2 1 v=0
La absorbia unei radiaii UV Vis molecula sufer o tranziie energetic electronic de pe nivelul fundamental (E0) pe cel excitat (E1). Tranziia electronic a moleculei este nsoit de mai multe tranziii energetice vibraionale i rotaionale. In spectrul de band a moleculei sunt grupate mai multe linii spectrale. Banda molecular are un caracter hiperfin. Conform principiului Frank Condon tranziia de vibraie pentru care este aceeai distan interatomic pe cele dou nivele are loc cu probabilitate maxim. Astfel benzile moleculare de absorbie UV Vis sunt asimetrice spre lungimi de und mari.Spectrele moleculare de absorbie UV Vis sunt spetre electronice vibraionale.
Benzen lichid
Spectrul de absorbie molecular n domeniul UV pentru benzen n stare de vapori i n stare lichid.
Caracterul hiperfin al benzilor moleculare din UV Vis pot fi observate numai pentru probele n stare gazoas sau de vapori (exemplu benzen), deoarece n aceast stare vibraia i rotaia moleculeor absorbante este liber. Pentru probe n stare lichid (exemplu benzen) caracterul hiperfin nu mai poate fi observat, deoarec vibraia i rotaia moleculeor de benzen nu este liber.
CUVA CU PROB
PROBA
MSUR I AFIAJ
Semnal optic
Semnal electric
Sursa primar de radiaie Dispozitivul de monocromare a radiaiei i selectare lungime de und (monocromatoare sau policromatoare) Detectorul optic Sistemul de condiionare a semnalului (amplificatorul) Sistemul de citire i afiare rezultat
SPECTRUL CONTINUU Este format din linii spectrale foarte apropiate ntre ele nct nu pot fi separate SPECTRUL DE LINII Spectrul de linii conine radiaii discrete cu lungime de und bine definit care port fi separate ntre ele.
LAMPA CU HALOGEN
LAMPA DE DEUTERIU
LAMPA DE XENON
Becul cu filament de W
LUNGIMEA DE UND / nm
Lampa de deuteriu
Funcionarea se bazeaz pe o descrcare electric ntre doi electrozi de W imersai ntr-o atmosfer gazoas de deuteriu sau hidrogen. Spectrul este: unul continuu n domeniul UV emis de moleculele de deuteriu (180 380 nm Unul de linii n domeniul vizibil emis de atomii excitai de hidrogen sau deuteriu (liniile hidrogenului din seria Balmer) Spectrul lmpii de deuteriu este mai intens UTILIZAREA LMPII DE DEUTERIU ca surs de spectru continuu n absorbia molecular UV VIS ca surs de spectru continuu n corecia de fond n absorbia atomic UV - VIS
SPECTRU DE LINII
Lungimea de und / nm
Lungimea de und / nm Lampa de Xe emite un spectru continuu foarte intens n domeniul UV VIS (200 1000 nm), pecte care se suprapune spectrul de linii al Xe.
Lampa de Xe se utilizeaz ca surs primar n spectrometria de absorbie n cazul spectrometrelor simultane precum i n fluorescen atomic
LAMPA DE DEUTERIU
LAMPA DE XENON
ROLUL DISPOZITIVELOR. Sursele primare de radiaie sau proba emit de regul un spectru policromatic, format din radiaii cu mai multe lungimi de und. Determinrile spectrale se efectueaz de regul n radiaie monocromatic (radiaie cu o singur lungime de und. Dispozitivele de izolare band spectral de trecere au dou roluri: De a dispersa radiaia policromatic provenit de la surs n funcie de lungimea de und De a izolara benzi spectrale de trecere nguste pe ca se consider c radiaia este monocromatic. Cu alte cuvinte de a selecta radiaii cu anumite lungimi de und din spectrul policromatic.
Semnal
1
Lungimea de und / nm
i lungimi de und selectate din spectrul sursei de radiaie Nu se poate izola din spectru o radiaie perfect monocromatic. Pe banda spectral de trecere se consider ca radiaia este monocromatic.
POLICROMATOR
ELEMENTE COMPONENTE I SCHEMA OPTIC A UNUI DISPOZITIV DE DISPERSIE I SELECTARE LUNGIME DE UND
Lentil Fant de intrare Colimator Reea Focalizator
Plan focal
1 3
Monocromator O singur fant de ieire Reeaua se rotete pt select Policromator Mai multe fante de ieire Reea fix
1 2
TIPURI DE MONOCROMATOARE
MONOCROMATOARE
PRISM
Utilizeaz ca element dispersiv a spectrului o prism din sticl sau cuar Utilizeaz o rea ca element dispersiv. Reeaua este o suprafa striat cu un numr de 1200 2400 linii / mm.
REEA
MONOCROMATORUL CU REEA
Reeua este o suprafa striat (1200 2400 linii/mm). Funcionarea reelei se bazeaz pe dispersia radiaiei incidente de ctre suprafaa striat i pefenomenul de interferen constructiv ntre radiaiile reflectate de ctre suprafaa striaiunilor.
C D unghiul de inciden unghiul de reflexie d distnaa dintre striaiuni Diferena de drum optic ntre raze se caluleaz cu relaia, unde m este ordinul de interferen m = 0,1, 2, 3....
= AC + BD = d (sin d sin ) = m
Monocromatorul cu reea are putere de dispersie mai mare dect cel cu prism Scala lungimii de und este liniar Monocromatorul cu reea acoper domeniul spectral UV VIS ntre 190 800 nm. Pentru domeniul spectral 120 180 nm, monocromatorul trebuie vidat i umplut cu argon sau azot. Radiauiile din acest domeniu sunt absorbite de aer.
Fanta de intrare
optic
2
Sursa de radiaie
Reea
In montajul optic Czerny Turner, reeua este montat simetric fa de colimator i focalizator. Selectarea lungimii de und se realizeaz prin rotirea reelei, cd se modific unghiul de inciden i sunt focalizate diferite radiaii asupra fantei de ieire. Inregistrarea spectrului se realizeaz prin baleiaj.
S = S0 + k P
Unde S semnalul electric
S = S0
daca
P=0
S0 semnlul curentului de ntuneric (zgomotul detectorului) generat de detector n absena semnalului optic. Cu ct semnalul de ntuneric este mai mic cu att detectorul este mai sensibil.
FOTOCELULA
FOTOMULTIPLICATORUL
FOTOCONDUCTIVE
FOTELEMENTUL CU SELENIU
ARIA DE FOTODIODE
Au n construcia lor electrozi pe suprafaa crora este depus un material care pune uor n libertate electroni sub aciunea radiaiilor UV Vizibil, genernd un semnal electric ca urmare a deplasrii electronilor generai ntre electrozi sub aciunea unei tensiuni aplicate ntre electrozi.
FOTOMULTIPLICATORUL
Anod CONSTRUCIE Fotomultiplicatorul are trei electrozi 1. Un catod 2. Un anod 3. Mai multe dinode. ROLUL ELECTROZILOR 1. Catodul pune n libertate electroni primari sub aciunea fotonilor 2. Dionodele au rol de transportare a lectronilor pn la nod i rol de amplificare intern a semnalului prin generarea a 2 5 electroni secundari pentru fiecare electron care atinge suprafaa sa 3. Anodul are rol de colectare a electronilor
Radiaie optic
Dinod
Electroni
Catod
3001000 V
CARACTERISTICILE FOTOMULTIPLICATORULUI
1. Semnalul fotomultiplicatorului depinde de mrimea semnalului optic i tensiunea aplicat pe fotomultiplicator. La semnale optice mici se aplic o tensiune mai mare, respectiv invers. Dac se menine tensiunea constant semnalul electric depinde liniar de semnalul optic. 2. Fotmultiplicatirul are cea mai mare sensibilitate dintre detectoarele optice utilizate n UV - VIS. Aceasta se datoreaz amplificrii interne mari (numarul electronilor care ajung la anod este cu 8 9 ordine de mrime mai mare dect al electronilor primari generai de catod. 3. Fotmultiplicatorul acoper domeniul UV VIS ntre 190 900 nm 4. Se interzice ca fotomultiplicatorul s fie sub tensiune i pe suprafaa catodului s cad lumina zilei.
REACII DE DERIVATIZARE
Me + mL [ MeLm ]
n+
Specie de determinat Reactiv de culoare
+ ( n m )
Specie absorbant
Ex: determinarea ionilor Fe3+ cu acid sulfosalicilic n mediu acid sau bazic
3-
Fe
3 +
+3
HO3S
COOH OH
HO3S
CO O Fe
3
Compexul Fe3+ cu acidul sulfosalicilioc este galben n mediu bazic i rou n mediu acid. Reaciile de derivatizare sunt totale i astfel n calcule se utilizeaz concentraia speciei de determinat (Fe3+ ) i nu concentraia speciei absorbante. Prin reacia de derivatizare crete sensibilitatea metodei (crete ).
3. Se prepar proba martor care nu conine analitul, dar conine reactivii de derivatizare utilizai la prepararea ealoanelor i probei necunoscute. 4. Se traseaz spectrul de absorbie A = f( ) prin msurarea absorbanei unui etalon fa de martor la diferite lungimi de und. Se determin lungimea optim de analiz corespunztoare maximului de absorbie. 5. Se msoar absorbana etaloanelor la lungimea optim de analiz, fa de martor. 6. Se traseaz dreapta de etalonare A = f(c) 7. Se msoar absorbana probei analitice concentraia speciei analitice prin interpolare. i se determin
Absorban
m
Se
mx ai
1. Metoda are sensibilitatea maxim (panta dreptei de etalonare este maxium) 2. Dreapta de etalonare are cea mai bun liniritate (nu prezint abateri semnificative de la legea lui Lambert Beer. 3. Se pot determina precis concentraii mai mici de analit.
o ti p
Absorban
Absorban prob
Panta dreptei de etalonare este tg = b Cu ct absorbtivitatea molar ( ) este mai mare cu att dreapta are o pant mai mare, metoda este mai sensibil i pot fi determinate concentraii mai mici.
Ax
Concentraie prob
cx
Concentratie
Lungimea de und / nm m
1. Situaia A. Dac se lucreaz pe maximul peakului (la m) i fanta este infinitezimal se obine liniaritate prefect a curbei de etalonare 2. Situaia B. Se lucreaz pe maximul absorbiei i ef este 1/10 din semilrgimea benzii de absorbie, abaterile de la liniaritate sunt neglijabile 3. Situaia C. Se lucreaz pe maximul absorbiei dar fanta este larg apar abateri negative n soluii concentrate. 4. Situaia D. Se lucreaz la alat lungime dect maximul de absorbie. Panta dreptei scade semnificativ i abaterile de la liniaritate sunt cele mai mari.
Absorban
Concentraie
Absorbtivitate
CURBA ERORILOR PENTRU SPECTROFOTOMETRE DE SLAB I INALT PERFORMAN. DOMENIUL OPTIM AL ABSORBANEI
CURBA A.
5 4 3 2 1
T = k1
Curba erorilor vpentru un sepctrofotometru de slab performan. Incertitudinea este dat aparatul de msur . Domeniul optim al absorbanie este 0.2 0.8. Eroarea minim este la A = 0.434.
0 0 .5 1 1 .5 2
T = k1
3
CURBA B i C.
T = k 2T 1/ 2 T = k3T
E A B
Absorban
Curba erorilor pentru un spectrometru de nalt performan. Incertitudinea este datorat detectorului, fluctuaiei sursei i transmisiei luminii prin cuv. Domeniul optim al abasorbanei este mai larg 0.2 2 sau 0.2 3. CURBA D i E. Curbe acare includ 2 sau 3 surse de incertitudini.
At = Ai = i b ci i i
Unde Ai absorbana componentului (i) la lungimea de und ( ) i absorbtivitatea molar a componentului (i) la lungimea de und ( )
At = A1 + A2 = b c1 + b c2
1 2
Din aceast ecuaie nu puten calcula concentraiile c1 i c2 din amestec. Pentru a determina concentraiile din amestecul binar trebuie s se cunoasc absorbana amestecului la dou lungimi de und ( 1 i 2)
At 1 = 1 bc 1 + 2 bc 2 At 2 = 1 bc 1 + 2 bc 2
Pentru Pentru
Dac se cunosc absorbanele amestecului la cele dou lungimi de und i coeficienii sistemului se pot calcula concentraiile celor dou componente.
amestecurilor
de
substane i
sunt
2 i
3. Determinarea absorbanei amestecului la cele dou lungimi de und i rezolvarea sistemului Condiiile care se impun la determinarea a amestecurilor de substane: 1. Substanele s nu reacioneze ntre ele 2. Substanele s nu prezinte interferene spectrale 3. Substanele s aib absotbtiviti molare diferite, pentru ca determinantul sistemului ( ) s fie diferit de zero. 0
Se aleg lungimile optime corespunztoare maximelor, deoarece la aceste lungimi de und dreptele de etalonare au panta maxim, respectiv abaterile de la liniaritate sunt neglijabile. Implict metoda are sensibilitate i precizie foarte bune.
Absorbana
Compus I
Compus II
Lungimea de und / nm
Comp. I
Absorban
Comp. II
Absorban
1 1b
Comp. II
2 2b
Comp. II
2 1b
Concentratie
1 2b
Concentratie