Lucrarea nr.

3
Analiza calitativ a aminoacizilor si proteinelor. Reacii de culoare.
1. Introducere
Aminoacizii reprezint unitile structurale nehidrolizabile ale poliprotidelor. Dei n natur se
cunosc aproximativ 200 de aminoacizi, doar 20-22 sunt utilizai pentru biosinteza protidelor i sunt
codificai de codul genetic, fiind denumii i aminoacizi proteinogeni (ordinari).
Dintre toate organismele vii, cele vegetale pot sintetiza i deci conine numrul cel mai mare de
aminoacizi, rspndii mai ales n seminele fructelor, plante rdcinoase, conifere, etc. Aminoacizii:
valin, leucin, izoleucin, treonin, metionin, lisin, fenilalanin, triptofan pot fi sintetizai numai de
plante i se numesc aminoacizi eseniali. Lipsa lor n alimentaie provoac grave tulburri ale
metabolismului (boli careniale). Aminoacizii care pot fi sintetizai i de organismul uman i animal se
numesc aminoacizi neeseniali i sunt reprezentai de: glicocol, alanin, serin, cistein, acid aspartic,
glicina, arginin, tirozin, prolin, hidroxipriolin, histidin.
Aminoacizii sunt compui organici difuncionali, care conin grupele funcionale amino (-NH2) i
carboxil (-COOH). Caracteristic acestei structuri este grefarea ambelor grupe funcionale pe acelai
atom de carbon (poziia ) n cazul aminoacizilor din structura proteidelor (-aminoacizi). Legat de
atomul de carbon , n afar de grupa funcional NH2, apare si un rest hidrocarbonat, care poate fi
un rest hidrocarbonat alifatic sau aromatic, sau grupe funcionale.

2. Analiza calitativa a aminoacizilor si proteinelor

Materiale necesare:
Solutie triptofan 0.0.1%
Solutie glicina 0.0.1%
Solutie tirozina 0.0.1%
Solutie gelatina 0.0.1%
Solutie albumina 0.0.1%
Pipete
Cilindri gradati
Eprubete
Grupele functionale din aminoacizi pot reactiona cu diversi reactivi pentru a da produse
colorate caracteristice. Intensitatea culorii obtinute este in stransa legatura cu numarul grupelor ce pot
reactiona, constituind o posibilitate de apreciere a ponderii anumitor aminoacizi in constitutia unor
proteine.
2. 1 Testul cu ninhidrina
Aminoacizii si proteinele care au o grupa amino libera reactioneaza cu ninhidrina dand un
complex albastru-violet:

Mod de lucru

In 5 eprubete se introduc cate 2 ml solutie de triptofan 0.0.1%, solutie glicina 0.0.1%, solutie tirozina
0.0.1%, solutie gelatina 0.0.1%, solutie albumina 0.0.1%. In fiecare eprubeta se adauga 5 picaturi de
solutie de ninhidrina si se incalzeste la fierbere cu atentie timp de 5 min pe baie de apa. Se agita bine
si se noteaza rezultatul.
Obs. 1. Solutia de ninhidrina contine etanol. Atentie la incalzire.
2. Ninhidrina reactioneaza si cu proteinele din piele, dand compusi colorati, care se
indeparteaza greu. Feriti contactul pielii cu solutia de ninhidrina.
Eprubeta nr.
1

Continut
2 ml solutie de triptofan
0.1%
2 ml solutie de glicina
0.1%
2 ml solutie de tirozina
0.1%
2 ml solutie de gelatina
0.1%
2 ml solutie de
albumina 0.1%

2
3
4
5

Culoare proba finala

Observatii

2.2. Testul xantoproteic

Este o reactie caracteristica proteinelor care contin aminoacizi cu inel benzenic (triptofan, fenilalanina,
tirozina, etc.). Acidul azotic concentrat reactioneaza cu inelul benzenic conducand la nitroderivati de
culoare galbena.
NH2
CH2

NH2

CH COOH
O 2N

CH2

CH COOH

+ HNO3
NH

NH

Triptofan

In 5 eprubete se introduc cate 2 ml solutie de triptofan 0.0.1%, solutie glicina 0.0.1%, solutie gelatina
0.0.1%, solutie albumina 0.0.1%, se adauga 0.1ml acid azotic concentrat si se incalzeste la fierbere cu
atentie timp de 5 min pe baie de apa. Se raceste si se adauga apoi 0.5ml solutie NaOH 10%. Se agita
bine si se noteaza rezultatul.
Eprubeta nr.
Continut
Culoare proba finala
Observatii
1
2 ml solutie de triptofan
0.1%
2
2 ml solutie de glicina
0.1%
3
2 ml solutie de tirozina
0.1%
4
2 ml solutie de gelatina
0.1%
5
2 ml solutie de
albumina 0.1%
Obs. Acidul azotic este puternic coroziv. Adaugarea sa in eprubete se face cu atentie si
numai la nisa.

2.3 Testul biuretului

Este unul din cele mai importante teste pentru proteine. Cand o proteina reactioneaza cu sulfatul de
cupru(II) testul pozitiv este dat de formarea unui complex de cupru care are culoarea violet.

Testul este pozitiv pentru orice proteina ce contine doua sau mai multe din urmatoarele grupe:

Mod de lucru
In 5 eprubete se introduc cate 2 ml solutie de triptofan 0.1%, solutie glicina 0.1%, solutie
tirozina 0.1%, solutie gelatina 0.1%, solutie albumina 0.1%, In fiecare eprubeta se adauga 5 picaturi
de solutie NaOH 10% si 2 picaturi de solutie 5% CuSO4 Se agita bine si se noteaza rezultatul.
Eprubeta nr.
Continut
Culoare proba finala
Observatii
1
2 ml solutie de triptofan
0.1%
2
2 ml solutie de glicina
0.1%
3
2 ml solutie de tirozina
0.1%
4
2 ml solutie de gelatina
0.1%
5
2 ml solutie de
albumina 0.1%
2.4 Denaturarea proteinelor
Sub actiunea caldurii sau a diferitilor agenti chimici are loc modificarea structurii proteinelor, fenomen
cunoscut sub numele de denaturare. Acest proces este des insotit de coagularea sau precipitarea
proteinelor, fapt detectabil prin cresterea opalescentei solutiei de proteina.
Mod de lucru
a. Denaturarea prin incalzire
Intr-o eprubeta se introduc 10 ml solutie albumina. Se introduce termometrul in eprubeta si se
incalzeste usor pe baie de apa. Se noteaza temperatura la care solutia devine opalescenta.

b. Denaturare sub actiunea agentilor chimici

In 5 eprubete se introduc cate 10 ml dispersie de albumina (albus de ou). Se adauga apoi in eprubete
ingrediente conform tabelului de mai jos. Eprubetele se agita bine si apoi se observa transformarile.
Eprubeta nr.
1
2
3
4
5

Continut
0.1g NaCl
5 ml solutie acetat de
plumb 5%
0.1g NaHCO3
2 ml HCl 36.5%
10 picaturi solutie NaOH
10%

Aspect proba finala

Observatii

Intrebari
1. Care din urmatorii aminoacizi contin nuclee aromatice: glicina, alanina, tirozina, acidul aspartic,
triptofanul?
2. Care din urmatorii aminoacizi contine sulf: alanina, glicina, prolina, acidul glutamic, cisteina,
metionina, fenilalanina?
3. Desenati formulele structurale pentru urmatorii aminoacizi: alanina, glicina, tirozina.
4. Scrieti structurile predominante majoritar :
a. pentru cisteina (pKA COOH=1.26, pKA NH2= 8.18, pKA SH= 10.28) la pH=1, pH= 5, pH=12.
b. pentru prolina (pKA COOH=1.99, pKA NH2= 10.96) la pH=3, pH= 6, pH=12
c. pentru tirozina (pKA COOH=2.20, pKA NH2= 9.11, pKA OH= 10.07) la pH = 3, pH=7,
pH=12.
5. Avnd la dispoziie glicin, alanin i triptofan scriei structurile chimice ale tuturor tripeptidelor ce
se pot obine
6. Cromatografia in strat subtire se utilizeaza cu succes si pentru identificarea amestecurilor de
aminoacizi. In acest caz se utilizeaza placute de silicagel, iar ca eluent alcool izoamilic:apa:acid acetic
= 6 : 5 : 3 v/v.
a. Pentru un amestec ce contine fenilalanina, tirozina, glicina si acid glutamic indicati ordinea
crescatoare de separare in functie de valorile Rf. (indicatie: scrieti structurile compusilor!).
b. Avand in vedere ca solutiile aminoacizilor sunt incolore propuneti o metoda de vizualizare a
spoturilor acestora pe placua cromatografic.