Lucrarea nr.

2
Analiza calitativ a aminoacizilor. Reacii de culoare.
1. Introducere
Aminoacizii reprezint unitile structurale nehidrolizabile ale poliprotidelor. Dei n natur se cunosc
aproximativ 200 de aminoacizi, doar 20-22 sunt utilizai pentru biosinteza protidelor i sunt codificai de
codul genetic, fiind denumii i aminoacizi proteinogeni (ordinari).

O
C

R
CH

OH

NH2
Dintre toate organismele vii, cele vegetale pot sintetiza i deci conine numrul cel mai mare de
aminoacizi, rspndii mai ales n seminele fructelor, plante rdcinoase, conifere, etc. Aminoacizii: valin,
leucin, izoleucin, treonin, metionin, lisin, fenilalanin, triptofan pot fi sintetizai numai de plante i se
numesc aminoacizi eseniali. Lipsa lor n alimentaie provoac grave tulburri ale metabolismului (boli
careniale). Aminoacizii care pot fi sintetizai i de organismul uman i animal se numesc aminoacizi
neeseniali i sunt reprezentai de: glicocol, alanin, serin, cistein, acid aspartic, acid glutamic, arginin,
tirozin, prolin, hidroxipriolin, histidin.
Aminoacizii sunt compui organici difuncionali, care conin grupele funcionale amino (-NH2) i
carboxil (-COOH). Caracteristic acestei structuri este grefarea ambelor grupe funcionale pe acelai atom
de carbon (poziia ) n cazul aminoacizilor din structura proteidelor (-aminoacizi). Legat de atomul de
carbon , n afar de grupa funcional NH2, apare si un rest hidrocarbonat, care poate fi un rest
hidrocarbonat alifatic sau aromatic, sau grupe funcionale.
2. Analiza calitativa a aminoacizilor si proteinelor
Materiale necesare:
O
Solutie triptofan 0.5%
O
Solutie glicina 0.5%
O
OH
Solutie tirozina 0.5%
OH
Solutie gelatina 1%
OH
NH2
Solutie albumina 1%
NH2
NH
NH2
HO
Pipete
Triptofan (Trp)
Cilindri gradati
Tirozina (Tyr)
Glicina (Gly)
Eprubete
Grupele functionale din aminoacizi pot reactiona cu diversi reactivi pentru a da produse colorate
caracteristice. Intensitatea culorii obtinute este in stransa legatura cu numarul grupelor ce pot reactiona,
constituind o posibilitate de apreciere a ponderii anumitor aminoacizi in constitutia unor proteine.
2. 1 Testul cu ninhidrina
Aminoacizii si proteinele care au o grupa amino libera reactioneaza cu ninhidrina dand un complex
albastru-violet:

Mod de lucru
In 6 eprubete se introduc cate 2 ml solutie de triptofan 0.5%, solutie glicina 0.5%, solutie tirozina 0.5%,
solutie gelatina 0.5%, solutie albumina 0.5%, se adauga cate 5 picaturi de solutie de ninhidrina si se
incalzeste la fierbere cu atentie timp de 5 min pe baie de apa. Se agita bine si se noteaza rezultatul.
Obs. 1. Solutia de ninhidrina contine etanol. Atentie la incalzire.

2. Ninhidrina reactioneaza si cu proteinele din piele, dand compusi colorati, care se

indeparteaza greu. Feriti contactul pielii cu solutia de ninhidrina.
Eprubeta nr.
1

Continut
2 ml solutie de triptofan
0.5%
2 ml solutie de glicina
0.5%
2 ml solutie de tirozina
0.5%
2 ml solutie de gelatina
0.5%
2 ml solutie de albumina
0.5%

2
3
4
5

Culoare proba finala

Observatii

2.2. Testul xantoproteic

Este o reactie caracteristica proteinelor care contin aminoacizi cu inel benzenic (triptofan, fenilalanina,
tirozina, etc.). Acidul azotic concentrat reactioneaza cu inelul benzenic conducand la nitroderivati de culoare
galbena.
NH2
CH2

NH2

CH COOH
O 2N

CH2

CH COOH

+ HNO3
NH

NH

Triptofan

In 6 eprubete se introduc cate cate 2 ml solutie de triptofan 0.5%, solutie glicina 0.5%, solutie tirozina 0.5%,
solutie gelatina 0.5%, solutie albumina 0.5%, se adauga cate 0.1ml acid azotic concentrat si se incalzeste la
fierbere cu atentie timp de 5 min pe baie de apa. Se raceste si se adauga apoi 5 picaturi solutie NaOH 10%.
Se agita bine si se noteaza rezultatul.
Eprubeta nr.
1

Continut
Culoare proba finala
Observatii
2 ml solutie de triptofan
0.5%
2
2 ml solutie de glicina
0.5%
3
2 ml solutie de tirozina
0.5%
4
2 ml solutie de gelatina
0.5%
5
2 ml solutie de albumina
0.5%
Obs. Acidul azotic este puternic coroziv. Adaugarea sa in eprubete se face cu atentie si numai
la nisa.
2.3 Testul biuretului
Este unul din cele mai importante teste pentru proteine. Cand o proteina reactioneaza cu sulfatul de
cupru(II) testul pozitiv este dat de formarea unui complex de cupru care are culoarea violet.

Testul este pozitiv pentru orice proteina ce contine doua sau mai multe din urmatoarele grupe:

Mod de lucru
In 6 eprubete se introduc cate 2 ml solutie de triptofan 0.5%, solutie glicina 0,5%, solutie tirozina
0.5%, solutie gelatina 0.5%, solutie albumina 0.5%. In fiecare eprubeta se adauga 5 picaturi de solutie
NaOH 10% si 2 picaturi de solutie 5% CuSO4, se agita bine si se noteaza rezultatul.
Eprubeta nr.
Continut
Culoare proba finala
Observatii
1
2 ml solutie de triptofan
0.5%
2
2 ml solutie de glicina
0.5%
3
2 ml solutie de tirozina
0.5%
4
2 ml solutie de gelatina
0.5%
5
2 ml solutie de albumina
0.5%

2.4. Denaturarea proteinelor

Sub actiunea caldurii sau a diferitilor agenti chimici are loc modificarea structurii proteinelor, fenomen
cunoscut sub numele de denaturare. Acest proces este des insotit de coagularea sau precipitarea
proteinelor, fapt detectabil prin cresterea opalescentei solutiei de proteina.
Mod de lucru
a. Denaturarea prin incalzire
Intr-o eprubeta se introduc 10 ml solutie albumina. Se incalzeste usor pe baie de apa (Obs. se porneste
cu apa din baie la temperatura camerei!) si se noteaza temperatura la care solutia devine opalescenta.

Temperatura de denaturare (0C)

b. Denaturare sub actiunea agentilor chimici

In 5 eprubete se introduc cate 10 ml dispersie de albumina (albus de ou). Se adauga apoi in eprubete
ingrediente conform tabelului de mai jos. Eprubetele se agita bine si apoi se observa transformarile.
Eprubeta nr.
1
2
3
4
5

Continut
0.1g NaCl
10 picaturi solutie acetat de
plumb 5%
0.1g NaHCO3
5 ml solutie HCl 0.1M
10 picaturi solutie NaOH 10%

Aspect proba finala

Observatii

Intrebari
1. Care din urmatorii aminoacizi contin nuclee aromatice: glicina, alanina, tirozina, acidul aspartic,
triptofanul?
2. Care din urmatorii aminoacizi contine sulf: alanina, glicina, prolina, acidul glutamic, cisteina, metionina,
fenilalanina?
3. Desenati formulele structurale pentru urmatorii aminoacizi: alanina, acid aspartic, tirozina.
4. Avnd la dispoziie glicin, alanin i triptofan scriei structurile chimice ale tuturor tripeptidelor ce se pot
obine.
5. Scrieti structurile predominante majoritar :
a. pentru cisteina (pKA COOH=1.26, pKA NH2= 8.18, pKA SH= 10.28) la pH=1, pH= 5, pH=12.
b. pentru prolina (pKA COOH=1.99, pKA NH2= 10.96) la pH=3, pH= 6, pH=12
c. pentru tirozina (pKA COOH=2.20, pKA NH2= 9.11, pKA OH= 10.07) la pH = 3, pH=7, pH=12.