CURS I INTRODUCERE Obiectul de studiu al microbiologiei

Obiectul de studiu al microbiologiei este biologia microorganismelor, mai precis forma, structura i activitatea fiziologic a acestora. Microorganismele sunt organisme mici, vizibile doar la microscop. Deoarece micros (gr.) = mic, bios (gr.) = via, logos (gr.) = tiin, termenul de microbiologie ar nsemna tiina despre organisme cu via scurt, provenind de la cuvntul microb, introdus de Sedillot (1878). Acest termen se refer n special la microorganismele patogene i, dei frecvent folosit, nu este tiinific. Noiunea de microorganism nu are semnificaie taxonomic, deoarece reunete un grup foarte vast, heterogen de organisme diferite ca poziie sistematic, dar care prezint o serie de caractere comune: - au dimensiuni microscopice, dimensiunile lor se exprim n m (10 -6m), iar ale organitelor lor n nm (10-9m) sau chiar n (10-10m); - prezint organizare n general unicelular, sub dou forme: o celule de tip procariot o celule de tip eucariot. Chiar dac unele microorganisme formeaz asociaii pluricelulare, acestea nu prezint difereniere celular pentru a forma esuturi i organe, iar o celul izolat din aceste asociaii i pstreaz viabilitatea, crete, se divide i reface asociaia; - structura lor intern este n general simpl. Heterogenitatea microorganismelor este definit prin alte caracteristici: - poziia sistematic diferit; - activitatea biologic divers; - morfologia i structura intern a diferitelor grupe de microorganisme sunt de asemenea diverse. n categoria microorganismelor intr: - celule procariote: o Eubacterii (bacterii adevrate) o Cianobacterii (bacterii albastre-verzi) o Actinomicete (bacterii filamentoase, cu organizare de tip micelial) o Arhebacterii (microorganisme foarte asemntoare din punct de vedere morfologic i structural cu bacteriile adevrate, care se gsesc n medii de via variate i corespund bacteriilor extremofile) - celule eucariote: o Fungi microscopici, care includ: levuri (drojdii) mucegaiuri (fungi filamentoi, cu organizare pluricelular) o Alge microscopice o Protozoare. Microbiologia studiaz i virusurile i entitile moleculare infecioase cu organizare subviral (viroizii i prionii), dei acestea nu sunt microorganisme i nu au structur celular.

Diviziunile microbiologiei
Diversitatea proceselor fiziologice bacteriene, rolul lor esenial n ecosistemele naturale, capacitatea de a sintetiza substane utile sau dea produce procese infecioase la organismele superioare au determinat diversificarea domeniilor de studiu al microorganismelor.

Clasificarea diferitelor domenii se poate face dup criterii taxonomice (bacteriologie, virologie, algologie, micologie, protozoologie), dup criterii funcionale (fiziologia, biochimia, ecologia, genetica microorganismelor), dup mediul din care provin microorganismele (microbiologia solului, hidromicrobiologia, geomicrobiologia) i dup aplicaiile practice ale diferitelor categorii de microorganisme (microbiologie industrial, medical, biotehnologia). Ecologia microorganismelor studiaz legitile generale de evoluie i interaciune a microorganismelor n natur, interaciunile dintre microorganisme i interrelaiile microorganismelor cu macroorganismele. Genetica microorganismelor studiaz substratul molecular al ereditii i variabilitii microorganismelor i mecanismele de transfer al materialului genetic la bacterii. Microbiologia solului studiaz ansamblul microorganismelor din sol, rolul lor n fertilitatea solului i n circuitul elementelor biogene n natur, precum i interaciunile dintre aceste microorganisme i plante. Hidromicrobiologia studiaz microorganismele din mediile acvatice i rolul lor n lanurile trofice. Geomicrobiologia studiaz n principal microbiologia petrolului, avnd un pronunat caracter utilitar. Studiaz rolul microorganismelor n geneza petrolului i a zcmintelor minerale, posibilitatea utilizrii acestora n exploatarea, biodegradarea sau recuperarea petrolului i zcmintelor. Microbiologia insectelor studiaz relaiile dintre microorganisme i artropode, care pot avea un rol important ca vectori n patologia uman, animal i vegetal. Microbiologia industrial s-a dezvoltat pornind de la descoperirea proceselor fermentative de ctre Louis Pasteur. Ea studiaz utilizarea diferitelor microorganisme productoare de substane utile pentru alimentaie, terapeutic sau industrie. Microbiologia medical studiaz microorganismele patogene pentru om i animale, patogenitatea i virulena acestora, factorii care condiioneaz virulena, modul lor de transmitere i modalitile de combatere. Microbiologia general este o tiin biologic fundamental, care studiaz particularitile organizrii structurale i funcionale ale celulei bacteriene, biologia i sistematica bacteriilor, rspndirea lor n natur, relaiile lor ecologice cu alte microorganisme sau cu macroorganismele, originea i evoluia lor, fenomenele de ereditate i variabilitate microbian. Este o tiin de sintez i se bazeaz pe date din domeniile aplicative ale microbiologiei. Cunoaterea principiilor fundamentale ale microbiologiei generale este o necesitate pentru orice biolog, indiferent de domeniul su de activitate.

Istoricul microbiologiei
Descoperirea microorganismelor dateaz din 1676, cnd olandezul Anton van Leevenhoek a examinat picturi de ap din diferite surse naturale, picturi de saliv, picturi de puroi cu ajutorul unui un aparat optic propriu de mrire a imaginii. Cu ajutorul acestui microscop special, care mrea de 270 de ori, el a observat o lume fascinant, ntr-o micare perpetu. n descrierile sale, printre alte organisme, se recunosc i bacteriile, pe care Leevenhoek le-a denumit animalcule, considerndu-le nite pui ale animalelor acvatice mai mari. El nu a sesizat noutatea lumii pe care a vzut-o, de aceea, dei 24 aprilie 1676 este considerat ziua de natere a microbiologiei, Leevenhoek nu este considerat ntemeietorul microbiologiei ca tiin. Botanistul Carl Linaeus, n lucrarea sa Systema naturae (1735), grupeaz sistematic toate vieuitoarele cunoscute, introducnd microorganismele n categoria chaos. ntemeietorul microbiologiei ca tiin este considerat Ferdinand Cohn (1875), cercettor care a intuit caracterele aparte ale microorganismelor, iar lucrrile lui Louis Pasteur (1822 - 1895) au avut o importan deosebit pentru evoluia acestei tiine. Pasteur a nfiinat primele laboratoare de cercetare microbiologic i a studiat procesele fermentative. A demonstrat c fermentaiile sunt procese biologice produse de aciunea unor

microorganisme facultativ anaerobe, fiecare fiind determinat de o categorie specific de germeni. A studiat bolile fermentaiilor, cauzate de contaminarea acestora cu organisme strine care le deviaz cursul normal i a pus la punct o metod de evitare a contaminrii fermentaiilor cu ageni nedorii (pasteurizarea). A nlturat concepia generaiei spontanee care data din antichitate, conform creia vieuitoarele ar putea s apar spontan din materie organic. Prin experimentele sale cu baloane de sticl prevzute cu un tub n form de gt de lebd, a demonstrat c de fapt vieuitoarele aprute spontan erau contaminani din aer i ap. Pasteur a pus la punct teoria originii microbiene a bolilor infecioase studiind mbolnvirea viermilor de mtase i a deschis era prevenirii bolilor infecioase prin vaccinarea antibacterian i antiviral, practic medical de o importan deosebit, ce a dus la crearea unui domeniu nou, imunologia. Medicul german Robert Koch a avut contribuii importante la dezvoltarea domeniului bacteriologiei, fiind considerat fondatorul acestei ramuri microbiologice. Este cel care a introdus n practica de laborator folosirea mediilor solide pentru cultivarea tulpinilor bacteriene. A descoperit mai multe specii de bacterii patogene, printre care bacilul tuberculozei i vibrionul holerei. n urma cercetrilor pe animale de laborator a elaborat principiile generale prin care un anumit germen poate fi considerat agentul etiologic al unei boli (cele 4 postulate ale lui Koch): 1. Microorganismul trebuie s fie gsit cu regularitate n leziunile bolii respective; 2. Microorganismul trebuie s fie izolat de la gazda infectat i cultivat ntr-o cultur pur; 3. Inocularea culturii pure obinute n laborator la un animal sensibil trebuie s reproduc boala; 4. Microorganismul trebuie s se regseasc din nou cu regularitate la noua gazd n leziunile caracteristice bolii. Microbiologul rus Ilia Ilici Mecinikov (1845 - 1916) a studiat digestia intracelular a particulelor de carmin la echinodermele marine la Institutul Pasteur de ctre celule pe care le-a denumit fagocite i a emis ipoteza c astfel de celule exist i n organismele umane i animale. Prin descrierea fenomenului de fagocitoz a pus bazele teoriei imunitii celulare. Biologul rus Dimitri Ivanovski (1864 - 1920) a descoperit n 1892 virusul mozaicului tutunului (VMT), ntemeind tiina numit virusologie. Natura particular a virusurilor a fost intuit n 1897 de ctre Martinus Willem Beijerinck, microbiolog i botanist olandez, care le-a denumit contagium vivum fluidum. Alexander Fleming a descoperit n 1921 lizozimul i n 1929 penicilina, antibiotic produs de Penicillium notatum, care a fost ulterior purificat de ctre savanii britanici Florey i Chain (1940). Cei trei cercettori au primit n 1945 Premiul Nobel pentru medicin pentru descoperirea acestui antibiotic. Winogradski este considerat ntemeietorul microbiologiei solului. La noi n ar, realizri de marc n domeniul microbiologiei au aparinut lui Victor Babe (1854 - 1926), care a lucrat la Institutul Pasteur din Paris i a fost colaborator al lui Robert Koch. El a studiat numeroase boli (lepra, holera, tuberculoza, turbarea, febra tifoid), descoperind peste 50 de microbi. mpreun cu Victor Cornil a scris n 1885 primul tratat de bacteriologie din lume, intitulat Les bactries et leur rle dans l'anatomie et l'histologie pathologiques des maladies infectieuses. A descris corpusculii Babe-Negri n creierul animalelor moarte de turbare, importani pentru diagnosticul bolii, precum i corpusculii Babe-Ernst din citoplasma unor bacterii Gram pozitive. Ioan Cantacuzino (1863 - 1934), ntemeietorul Institutului din Bucureti care i poart azi numele, a fost elev al lui Mecinikov, studiind imunitatea i fagocitoza la nevertebrate, dar i numeroase boli ca scarlatina, holera, tuberculoza, difteria, producnd numeroase seruri i vaccinuri pentru prevenirea diferitelor boli infecioase.

A emis prima lege sanitar din Romnia (1910) i a avut contribuii importante la dezvoltarea nvmntului medical romnesc. Ali cercettori romni care au avut contribuii la dezvoltarea microbiologiei ca tiin au fost Constantin Ionescu Miheti (1883 - 1962), cu realizri n prevenirea infeciilor poliomielitice, Mihai Ciuc (1883 - 1969), renumit pentru descoperirea fenomenului de lizogenie determinat de bacteriofagi, Dumitru Combiescu (1887 - 1961) care a studiat antraxul, leptospirozele, rickettsiozele, Nicolae Nestorescu (1901 - 1969), continuator al colii create de Ioan Cantacuzino, Constantin Levaditi, tefan S. Nicolau, cu studii asupra virusurilor hepatitice, herpetice, asupra oncogenezei i imunologiei virale. Interesul pentru studiul microorganismelor este ntr-o continu cretere, de la descoperirea lor pn astzi, deoarece numeroase specii fie sunt benefice pentru activitatea omului, fie produc infecii la om, animale sau plante. Bacteriile sunt importante i din punct de vedere teoretic, nu numai practic, pentru studiul proceselor vieii n condiii extreme.

Poziia microorganismelor n lumea vie

n sistemul de clasificare a lumii vii propus de Aristotel, erau precizate dou regnuri, Plantae (n care se ncadrau i Virophyta, Bacteriophyta i Fungi) i Animalia (care cuprindea i protozoarele). Ulterior Hogg (1860) i Haeckel (1866) au propus mprirea n 3 regnuri: Protista, Plantae i Animalia. Clasificarea protistelor n dou categorii (inferioare - procariote i superioare - microeucariote), a fost propus de Stanier (1864). Copeland a propus n 1938 sistemul celor 4 regnuri: Monera (bacterii i cianobacterii), Protista (organismele eucariote inferioare, de regul unicelulare: microalge, fungi, protozoare), Plantae i Animalia. n 1969 Whittaker a propus un nou sistem de clasificare, n 5 regnuri: - Monera (organisme unicelulare, cu organizare de tip procariot: bacterii, cianobacterii, actinomicete); - Protista (microorganisme eucariote: alge microscopice, fungi acvatici flagelai, protozoare); - Fungi (organisme eucariote imobile, ce formeaz spori); - Plantae (plante nevasculare i vasculare); - Animalia (organisme pluricelulare, cu nutriie de tip ingestiv). Ulterior, Bergey a schimbat numele regnului Monera n cel de Procaryota. Criteriile de clasificare n 5 regnuri se bazau pe trei niveluri de organizare: procariot, eucariot unicelular i eucariot pluricelular, dar i pe modalitile de nutriie: fotosintetic, absorbtiv, ingestiv. Acest sistem de clasificare evideniaz heterogenitatea microorganismelor. Rezultatele cercetrilor la nivel molecular au artat c sistemul de clasificare a lumii vii n 5 regnuri nu este corect din punct de vedere filogenetic, cele dou regnuri de microorganisme eucariote (Protista i Fungi) fiind artificiale. Deoarece o prim divizare a lumii vii trebuie s se fac n procariote i eucariote, sistemele moderne de clasificare rezerv bacteriilor o poziie sistematic aparte. Virusurile constituie o categorie aparte de ageni infecioi. Ele sunt entiti moleculare infecioase fr organizare celular i nu se pot ncadra alturi de celelalte microorganisme.

CONCEPTUL DE BACTERIE Bacteriile sunt microorganisme procariote unicelulare, care au fost recunoscute ca grup distinct. Stanier a descris conceptul de bacterie, oferind posibilitatea gruprii

microorganismelor pe criterii tiinifice i nu printr-un acord convenional. Conceptul de bacterie trebuie definit n funcie de organizarea de tip procariot i numai prin antitez cu celula eucariot. Celula procariot este mai puin complex, ea reprezint unitatea de structur a bacteriilor i cianobacteriilor. Celula eucariot, complex, este unitatea de structur a tuturor celulelor algelor, fungilor, briofitelor, plantelor vasculare i animalelor. Diferena dintre procariot i eucariot reprezint cea mai mare discontinuitate evolutiv prezent n lumea vie, deoarece ntre cele dou tipuri nu se cunosc structuri intermediare. Principalele caractere difereniale ntre celula de tip procariot i cea de tip eucariot sunt prezentate n tabelul urmtor. Caracterul Dimensiuni
Procariote Foarte mici, 1-10; unele pot fi mai mari, spiralate saude tip filamentos, dar celulele sunt identice n cadrul filamentului Prezent constant la bacterii, cu o structur caracteristic; necesar existenei acestora n condiii naturale; n compoziia peretelui intr constant mureina (marker biochimic al celulei bacteriene), iar la unele bacterii se ntlnesc i acizii teichoici, acidul diaminopimelic. Structural asemntoare cu cea a eucariotelor, cu particulariti datorate compoziiei chimice: - permeabilitate selectiv; doar unele substane liposolubile, fragmentele mici de ADN, apa, enzimele degradative, unii anioni strbat membrana; - bacteriile dispun de sisteme membranare de transport activ (permeaze de natur proteic, precum i proteine de legare, cu funcia de a asigura transportul substanelor prin membrane) - sterolii lipsesc din compoziia chimic a membranei (cu excepia micoplasmelor). n stare de gel permanent, n lipsa membranelor interne i a curenilor citoplasmatici menine intacte structurile intracelulare; schimburile dintre celula bacterian i mediul extracelular se fac direct, fr necesitatea unei circulaii interne a substanelor. Lipsesc la procariote. Eucariote Celule mai mari, 10-100 ; unele sunt microorganisme; cele mai multe sunt uniti de structur ale organismelor de talie mare Exist diferene ntre celulele animale (delimitate doar de membran celular, fr perete celular) i celulele vegetale sau ale fungilor, la care peretele celular este prezent i are o compoziie chimic variat (celuloz, polioze, Si). Celulele animale au membrana caracterizat printr-o mare plasticitate, capabil de endocitoz (fagocitoz sau pinocitoz). Cele vegetale i fungii au membrana acoperit de peretele celular rigid, care i anuleaz proprietile speciale. Sterolii sunt prezeni n mod constant.

Peretele celular

Membrana plasmatic

Citoplasma

Exist o permanent tranziie reversibil gel sol, cureni citoplasmatici i structuri membranare intracelulare.

Organitele celulare

Mitocondriile sunt eseniale i perfect delimitate; cloroplastele sunt prezente la plantele capabile de fotosintez.

Structura i funciile materialului genetic

Organizarea materialului genetic, sediul acestuia i raportul cu citoplasma Procariotele nu prezint un nucleu propriu-zis; materialul nuclear, sediu al informaiei genetice bacteriene, se gsete scufundat n citoplasm ntro zon numit nucleoplasm, n contact direct cu citoplasma, neprotejat de o membran nuclear. Este denumit nucleosom (nucleoid) i e reprezentat de o molecul de ADN dublu catenar, circular, covalent nchis.

Structura molecular a materialului genetic Informaia genetic bacterian e de dou feluri: esenial, absolut necesar existenei celulei, caracteristic speciei bacteriene n ceea ce privete compoziia n baze azotate G+C (nucleosomul) i accesorie (plasmidele), reprezentat de uniti genetice extracromozomale, de dimensiuni mai mici, constituite tot din molecule de ADN dublu catenar, circular, covalent nchis. Mecanismul replicrii materialului genetic Replicarea este de tip semiconservativ: are loc desfacerea celor dou catene ale moleculei de ADN la bifurcaia de replicare, fiecare caten separat fiind folosit pentru sinteza unei catene complementare. Fiecare molecul dublu catenar nou format are o caten veche i una nou sintetizat complementar.

Sediul i mecanismul traducerii informaiei genetice Informaia genetic e tradus n citoplasm la nivelul ribozomilor 70S, structuri tipice specializate pentru aceast funcie. Informaia genetic e nscris continuu n cadrul moleculei de ADN, prin transcrierea ei rezult un ARN mesager i prin traducere proteinele.

Organizarea materialului genetic, sediul acestuia i raportul cu citoplasma Informaia genetic e disociat n nucleu i n organitele celulare (mitocondrii i cloroplaste). Materialul nuclear e separat de citoplasm printr-o membran nuclear dublu stratificat i este organizat n cromozomi. Informaia genetic din organite este protejat prin membranele organitelor respective. Structura molecular a materialului genetic Informaia genetic din nucleu este reprezentat de un numr constant, caracteristic speciei, de cromozomi, care reprezint molecule de ADN asociate cu histone, cu o structur caracteristic. Informaia genetic din organitele celulare este sub form de molecule de ADN dublu catenar, circular, covalent nchis. Mecanismul replicrii materialului genetic Informaia genetic nuclear urmeaz procesul caracteristic de mitoz, cu fazele caracteristice i cu apariia fusului de diviziune. n ciclul celular al eucariotelor prima faz (G1) este lipsit de sinteze, nucleul diploid (2n) este n interfaz, faza de sintez de ADN (S) duce la dublarea informaiei genetice (4n), urmeaz o faz de eclips (G2) care este 4n i mitoza care reface structurile 2n. Informaia genetic din organitele celulare se replic semiconservativ, la fel ca la procariote. Sediul i mecanismul traducerii informaiei genetice Informaia genetic nuclear este tradus la proteine la nivelul ribozomilor 80S din citoplasm, iar cea a organitelor este tradus la nivelul respectiv cu ajutorul ribozomilor 70S. Eucariotele prezint o structur discontinu a informaiei genetice, alctuit din secvene codificatoare (exoni) i necodificatoare (introni).

Transcrierea duce la formarea unui ARN premesager, netraductibil, care conine secvene exonice i intronice. Maturarea ARN premesager duce la ndeprtarea din molecul a secvenelor intronice i legarea celor exonice ntre ele, rezultnd un ARNm matur, care va fi tradus la proteine.

Echipamentul enzimatic oxidativ i de fotosintez

Tipul de diviziune

Procesele de sexualitate

Mecanismele de trasfer de material genetic

Mecanisme de infectare cu virusuri n condiii experimentale

Este nempachetat n structuri specifice, dispus difuz la nivelul membranei plasmatice i a diverticulilor rezultai din aceasta. La nivelul membranei i al mezozomilor se gsete sinergonul respirator (ansamblul reaciilor chimice care duc la realizarea unei anumite ci metabolice, catalizate de o serie de enzime ce acioneaz regulat pentru a ndeplini un anumit proces). - Diviziunea simpl, simetric: celula crete progresiv pn la un punct critic, apoi se divide formnd dou celule fiice identice; - Diviziunea asimetric prin nmugurire; - Diviziuni multiple prin fragmentare la bacteriile filamentoase. Lipsete aparatul mitotic, repartizarea egal a informaiei genetice este asigurat de mezozomi. Sunt absente; exist ns procese de protosexualitate, care constau n transferul de material genetic de la o celul donatoare () la o celul acceptoare (). Caracterul de masculinitate este determinat de prezena unei plasmide (factor de sex, F), transferul este unidirecional, celulele nu fuzioneaz, ci se formeaz o celul numit merozigot (zigot parial). Transferul de material genetic se face intraspecific, interspecific, chiar intergeneric, prin: - conjugare bacterian - transformare bacterian - transducie fagic - sexducie Datorit existenei peretelui celular, infectarea bacteriilor cu un bacteriofag specific se face prin injectarea genomului fagic n celula bacterian, nveliul proteic rmnnd la exterior.

Este mpachetat n structuri caracteristice: mitocondrii, cloroplaste. Sinergonul respirator i cel al fotosintezei sunt autonome, localizate n structuri specifice.

Exist un aparat mitotic, care asigur repartizarea informaiei genetice n cadrul mitozei, cu faze caracteristice.

Procesele de sexualitate sunt frecvente, caracterizate prin formarea gameilor haploizi, precedat de meioz; zigotul care rezult prin unirea gameilor este un zigot propriu-zis, diploid (2n).

Prezint fuziunea gameilor, care este intraspecific, urmat de fuziunea nuclear.

Celulele animale se infecteaz cu virusurile integrale prin endocitoz, formnd o vacuol derivat din membran. Celulele vegetale se pot infecta cu virusuri integrale doar dup lezarea mecanic a peretelui celular.

Sensibilitatea la diferite substane inhibitoare

Penicilina inhib sinteza mureinei din structura peretelui celular bacterian. Bacteriile sunt sensibile. Cloramfenicolul, tetraciclinele, streptomicina acioneaz la nivelul ribozomilor 70S. Bacteriile sunt sensibile. Cicloheximida acioneaz la nivelul ribozomilor 80S. Bacteriile sunt rezistente.

Capacitatea de a forma organisme multicelulare Capacitatea de difereniere celular Temperatura maxim de cretere

Pot forma agregate multicelulare, dar celulele sunt identice ntre ele. ntre celulele unei asociaii pluricelulare pot avea loc interaciuni simple, nutriionale, dar celulele i pstreaz individualitatea i prin diviziune pot reface asociaia. Procariotele sunt incapabile de difereniere celular, cu excepia bacteriilor sporogene. Formarea sporilor de rezisten reprezint o form primitiv de difereniere. Eubacteriile cresc maxim pn la 95C, arhebacteriile pn la 110C.

Penicilina Eucariotele sunt rezistente, deoarece nu au murein. Cloramfenicolul, tetraciclinele, streptomicina Eucariotele sunt rezistente, deoarece ribozomii lor 70S sunt protejai de membranele organitelor n care se gsesc (mitocondrii, cloroplaste). Cicloheximida Eucariotele sunt sensibile. Uneori celulele eucariote constituie organisme unicelulare, dar de cele mai multe ori formeaz organisme multicelulare. Au capacitate mare de difereniere, de la structurile sexuale pn la celule nalt difereniate, ca neuronul . Eucariotele cresc maxim pn la 60C.

Bacteriile reprezint o lume aparte, cu un cadru propriu de evoluie, fr legtur cu lumea plantelor, nici mcar cu a celor inferioare.

CURS 2 MORFOLOGIA BACTERIILOR Forma celulelor bacteriene Forma bacteriilor este controlat genetic i este n strns corelaie cu peretele celular cu un anumit grad de rigiditate. Dei ntr-o cultur pur forma bacteriilor poate varia n funcie de condiiile de mediu, forma caracteristic unei specii date este predominant n populaia bacterian respectiv. Forma bacteriilor este un criteriu taxonomic important. Ea se apreciaz n urmtoarele condiii: - n culturi pure, n condiii artificiale, de laborator; - n culturi bacteriene tinere, aflate n faza activ de cretere; n culturile mbtrnite apar forme aberante necaracteristice (filamentoase, ramificate), datorit degenerrii celulare; - n culturi aflate n condiii de cultur corespunztoare: medii de cultur adecvate, condiii optime de pH, temperatur, concentraie a oxigenului; n condiii improprii de cultivare apar aciuni nocive, care determin alterri ale formei i morfologiei bacteriene. Principalele tipuri morfologice bacteriene sunt: - forma sferic (sferoidal), corespunde celulelor izodiametrice numite coci (de la coccus (lat.) = smn); cocii pot fi: o perfect sferici ex. Staphylococcus aureus o uor ovoidali ex. Streptococcus pyogenes o coci lanceolai ex. Streptococcus pneumoniae (iniial denumit Diplococcus pneumoniae) o coci cu aspect reniform ex. Neisseria meningitidis - forma sferic ovalar, intermediar ntre coci i bacili, corespunde cocobacililor - ex. Pasteurella pestis - forma cilindric, alungit, de bastona drept sau uor curbat, corespunde bacililor; acetia pot avea: o extremitile rotunjite ex. Bacillus subtilis o extremitile drepte ex. Bacillus anthracis o extremiti n form de picot sau mciuc ex. Corynebacterium diphteriae o extremiti ascuite (fusiforme) ex. Fusobacterium fusiforme - forma spiralat, elicoidal, care prezint cteva subtipuri: o vibrionul, cu form de virgul sau semilun ex. Vibrio cholerae o spirilul, cu mai multe ture de spir rigide ex. Spirillum volutans o spirocheta, cu mai multe ture de spir flexibile ex. Treponema pallidum - forma filamentoas, ntlnit la actinomicete (bacterii asemntoare cu fungii); e constituit din filamente lungi i ramificate, asemntoare unor micelii ex. Actinomyces israeli - forma ptrat este caracteristic unor bacterii incluse n genul Quadra, evideniate n unele ape hipersaline din Sinai (Walsby, 1980); aceste bacterii formeaz placarde de 8-16 ptrate cu latura ntre 1,5 i 11m, cu o grosime inegal.

(dup Kayser, Thieme, 2005)

Gruparea bacteriilor Bacteriile sunt organisme unicelulare, care se multiplic de obicei prin diviziune direct. La unele specii, dup diviziune are loc separarea complet a celulelor fiice, astfel nct rezult indivizi izolai. La alte specii, dup diviziune celulele fiice rmn ataate una de cealalt, formnd grupri caracteristice speciei bacteriene. Modul de grupare a doi sau mai muli indivizi bacterieni depinde de orientarea n spaiu a planurilor de diviziune succesive. Gruparea cocilor Bacteriile sferice (cocii) se pot ntlni ca indivizi izolai ( cocul simplu) sau sub forma unor grupri de doi sau mai muli coci: - diplococi diviziunea se face dup planuri succesive paralele, celulele rmn grupate cte dou ex. Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis - streptococi planurile de diviziune succesive multiple sunt paralele, formndu-se n final iraguri de celule de dimensiuni variabile ex. Streptococcus pyogenes - tetrad - planurile de diviziune succesive sunt perpendiculare unul pe cellalt, rezultnd grupri de 4 celule ex. Micrococcus tetragenes - sarcin - planurile de diviziune succesive sunt perpendiculare unul pe cellalt i orientate n trei direcii diferite, rezultnd grupri de celule cu o simetrie cubic ex. Sarcina flava - stafilococi - planurile de diviziune succesive sunt orientate neregulat n spaiu, astfel nct forma final a gruprii celulare este asemntoare cu un ciorchine ex. Staphylococcus aureus Gruparea bacililor Bacteriile alungite (bacilii) se pot ntlni ca indivizi bacterieni izolai (bacilul simplu) sau sub forma unor grupri formate n funcie de orientarea planurilor de diviziune succesive: - diplobacil - diviziunea se face dup planuri succesive paralele, celulele rmn grupate cte dou ex. Klebsiella pneumoniae - streptobacil - diviziunea se face dup planuri succesive paralele, mai multe celule rmn unite ex. Bacillul cereus - grupri sub forma literelor V, M ori sub form de armonic sau palisad dup diviziune celulele rmn mpreun cte dou sau mai multe, aezate una fa de cealalt sub un unghi ascuit sau de 180 grade ex. Corynebacterium diphteriae ANATOMIA CELULEI BACTERIENE Datorit dimensiunilor mici, organizarea intern a bacteriilor a fost mult timp controversat i chiar contestat, existnd opinia c celulele bacteriene ar fi lipsite de o structur intern sau ar avea una foarte rudimentar. Perfecionarea tehnicilor de laborator (tehnici citologice, tehnici de microscopie electronic) a fcut posibil descrierea a numeroase componente ale celulei bacteriene. Constituenii celulari bacterieni pot fi clasificai n dou categorii, n funcie de poziionarea lor fa de peretele celular:

componente extraparietale: o capsula bacterian o stratul mucos o flagelii o pilii o fimbriile - componente intraparietale: o membrana citoplasmatic o mezosomii o citoplasma o nucleosomul o plasmidele o ribozomii o vacuolele o incluziile o endosporul Unele structuri sunt eseniale pentru viaa celulei i sunt prezente invariabil la toate celulele bacteriene (membrana citoplasmatic, citoplasma, nucleosomul, ribozomii), altele sunt accesorii i pot lipsi la unele bacterii (flagelul, plasmidele, endosporul). Alte structuri apar doar n unele perioade de via ale celulei (incluziile, vacuolele, endosporul).

(dup Kayser, Thieme, 2005) Peretele celular bacterian Peretele celular reprezint o structur de nveli bine definit, n general rigid (cu excepia spirochetelor), care delimiteaz celula bacterian. Este situat n afara membranei citoplasmatice, de care ader strns, reprezentnd 20 40% din greutatea uscat a celulei bacteriene.

La microscopul fotonic nu poate fi evideniat la celulele vii, datorit indicelui mare de refracie, dect n urma unor coloraii speciale selective, dar poate fi evideniat la microscopul electronic. Grosimea peretelui celular este de 15 35nm. n funcie de prezena i particularitile de structur ale peretelui celular, n regnul Prokaryotae se disting 4 categorii de bacterii: - Firmacutes (de la firmus (lat.) = tare, cutis = nveli), care cuprinde bacterii cu perete celular gros, rigid, lipsit de o membran extern, caracteristic bacteriilor Gram (+); - Gracilicutes (gracilis (lat.) = subire, fin), care cuprinde bacterii cu perete celular subire, cu o membran extern, caracteristic bacteriilor Gram (-); - Mollicutes sau Tenericutes (mollis, tener (lat.) = moale) cuprinde bacteriile din grupul Mycoplasma, lipsite de perete celular, la care membrana citoplasmatic ce conine steroli devine nveli extern; - Mendosicutes (mendosus = o structur cu defecte), care cuprinde organismele din grupul Archaea, cu un perete celular atipic, din care lipsete mureina, avnd n compoziia lor chimic pseudomurein, ce le permite s triasc n condiii extreme de mediu. Marea majoritate a bacteriilor sunt cuprinse n primele dou categorii, Gram (+) i Gram (-). Structura peretelui celular la bacteriile Gram pozitive La bacteriile Gram pozitive peretele celular este gros (15 30 nm), rigid; componenta sa esenial, care reprezint 80 90% din structura peretelui i asigur rigiditatea peretelui, este mureina (murus = perete), denumit i peptidoglican, glicopeptid, mucopeptid, glucozaminopeptid. Stratul de murein este sensibil la aciunea enzimei lizozim, care atac legturile chimice din structura sa. Mureina este alctuit din dou componente, componenta glicanic (glucidic) i componenta peptidic. Componenta glicanic este format din lanuri paralele polizaharidice alctuite prin legarea alternativ a dou zaharuri aminate: N-acetil-D-glucozamin i acidul N-acetilmuramic. Componenta peptidic este un tetrapeptid, cu o compoziie n aminoacizi variabil n funcie de specie, care conine L-alanin, D-alanin, D-glutamin, L-lizin. Tetrapeptidele se prind pe lanurile glicanice. Tetrapeptidele dintre dou lanuri adiacente se leag ntre ele prin legturi interpeptidice. Cu ct numrul acestor legturi este mai mare, cu att crete rigiditatea peretelui celular. Se formeaz astfel o reea care nconjoar structurile celulare. La acest nivel sunt localizate dou tipuri de enzime ce contribuie la creterea peretelui celular: murein-hidrolazele, care atac legturile chimice ale mureinei i murein-sintetazele, care realizeaz noi constitueni structurali pe care i inser n dreptul rupturilor create. Numai bacteriile Gram pozitive prezint la exteriorul stratului de murein acizii teichoici (teichos (gr.) = zid), polizaharide specifice, sub forma unor molecule polimerice lungi, flexibile, cu aspect tubular. Din punct de vedere chimic acizii teichoici sunt

polimeri de tipul poliribitol-fosfat i 1,3 poliglicerol-fosfat, legai covalent de stratul de murein. Structura peretelui celular la bacteriile Gram negative Bacteriile Gram negative prezint perete celular subire, cu un strat fin de murein sensibil la lizozim, de 0,01 grosime. La aceste bacterii mureina reprezint doar 2,5 10% din greutatea uscat a peretelui. Sacul mureinic este un monostrat molecular, cu structur similar cu cea a bacteriilor Gram pozitive i nu prezint acizi teichoici. Componenta peptidic a peretelui bacteriilor Gram negative conine acid diaminopimelic (derivat al lizinei), punile transversale interpeptidice reunind gruparea NH2 a acidului diaminopimelic cu gruparea COOH a D-alaninei de pe alt lan glicanic. Stratul de peptidoglicani este aderent la membrana citoplasmatic formnd mpreun cu aceasta membrana intern. La exterior stratul de peptidoglicani prezint o membran extern, cu o grosime de 6 20nm, care nu este sensibil la lizozim, ci la EDTA (etilen-diamino-tetraacetat) 30%. ntre cele dou membrane se delimiteaz spaiul periplasmic, care cuprinde stratul de peptidoglicani. Membrana extern are n compoziia sa chimic fosfolipide (35%), proteine (15%), lipopolizaharide (50%) i o structur similar cu cea a membranei citoplasmatice. Fosfolipidele sunt n dublu strat, cu gruprile hidrofile ctre exteriorul membranei i cele hidrofobe ctre interiorul acesteia. Proteinele sunt inclavate n acest dublu strat. Unele proteine (numite porine) strbat complet membrana extern, asigurnd trecerea unor substane din mediu n celule. Lipopolizaharidele (LPS) prezint trei poriuni: lipidul A, legat de stratul de fosfolipide; componenta oligozaharidic numit poriunea central R, care este legat covalent de lipidul A i componenta polizaharidic (antigenul somatic O), variabil ca structur i compoziie chimic, ce determin specificitatea antigenic a celulei bacteriene. n spaiul periplasmic, situat ntre membrana intern i cea extern, se gsesc proteine enzimatice de tipul fosfatazelor, ribonucleazelor i proteine neenzimatice, implicate n transportul substanelor prin membrane, numite proteine de legare. Funciile peretelui celular bacterian Peretele celular bacterian menine arhitectura structural a celulei i forma acesteia, conferindu-i elasticitate i plasticitate. Elasticitatea se refer la capacitatea celulei bacteriene de a-i mri volumul atunci cnd include o cantitate mai mare de ap i de a reveni apoi la volumul iniial. Plasticitatea reprezint capacitatea celulei de a se deforma sub aciunea unei presiuni, fr ca structura sa intern s fie alterat. Peretele celular particip la procesele de cretere i multiplicare bacterian, la procesul de sporogenez i funcioneaz ca o barier de permeabilitate ntre interiorul i exteriorul celulei. Acizii teichoici asigur celulelor bacteriene Gram pozitive concentraii adecvate de ioni metalici n micromediul de la suprafaa celulei, concentraii importante pentru activitatea unor sisteme enzimatice membranare. Ei inhib fagocitoza i mresc astfel gradul de patogenitate al bacteriilor Gram pozitive patogene. Unii acizi teichoici acioneaz ca receptori pentru bacteriofagi.

Membrana extern scade capacitatea de fagocitoz a celulelor gazd fa de bacteriile Gram negative patogene, iar prin intermediul porinelor asigur trecerea unor substane din mediul extracelular n cel intracelular. Antigenul somatic O confer celulelor bacteriene specificitate antigenic, compoziia sa n zaharuri fiind diferit chiar n cadrul aceleiai specii bacteriene. Lipopolizaharidele au rol de endotoxin, rspunztoare de efectele nocive asupra celulelor gazd.

(dup Kayser, Thieme, 2005)

Membrana citoplasmatic Membrana citoplasmatic este o formaiune structural ce acoper de jur mprejur citoplasma bacterian, separnd-o de suprafaa intern a peretelui celular. Grosimea membranei este de 7 10nm. La microscopul electronic apare ca o structur tristratificat, cu dou straturi ntunecate (electronodense), ntre care se gsete un strat mai clar, mai puin electronodens. Pornind de la imaginea electronomicroscopic a membranei, Robertson a numit aceast structur structur n sandwich sau unitate de membran (unit membrane), considernd n mod eronat c cele dou straturi electronodense sunt proteice, iar stratul mijlociu este lipidic. Determinrile biochimice ulterioare au infirmat acest model, deoarece proteinele sunt ntr-o cantitate insuficient pentru a forma dou straturi. Singer i Nicolson au propus n 1972 modelul mozaicului fluid pentru a descrie structura membranei plasmatice. Conform acestui model, membrana plasmatic are structur bidimensional, cu un strat dublu de fosfolipide n care sunt inclavate proteine (un ocean de fosfolipide pe care plutesc iceberguri de proteine). n structura membranei se gsesc fosfolipide, proteine i glucide. Fosfolipidele sunt dispuse ntr-un dublu strat, cu gruprile hidrofobe nepolare fa n fa, reprezentate de doi acizi grai. Extremitile polare hidrofile, reprezentate de o grupare fosfat, sunt orientate spre mediile apoase externe sau interne ale celulei. Moleculele fosfolipidelor se pot deplasa lateral n acelai strat, micare numit turnover, sau se pot deplasa de la un monostrat la altul, proces numit tranziie flip flop. Proteinele sunt inclavate n dublul strat de fosfolipide. Ele pot fi inserate n structura membranei i se numesc proteine integrate (transmembranare i structurale, cele din urm fiind expuse pe suprafaa intern sau extern a membranei) sau pot fi proteine neincluse n structura membranei, numite proteine periferice (de suprafa), care sunt enzime active ctre peretele celular sau ctre citoplasm. Glucidele sunt slab reprezentate n structura membranei plasmatice, ele fiind sub form de glicoproteine sau de glicolipide. Membrana plasmatic reprezint o suprastructur citoplasmatic permanent, esenial pentru viaa celulei, care are rolul de a delimita spaiul celular. Ea este o barier ntre mediul extracelular extrem de variabil i mediul intracelular relativ constant. Permeabilitatea selectiv a membranei este asigurat printr-o asimetrie structural i funcional, care duce la un comportament diferit spre faa sa citoplasmatic n raport cu faa sa dinspre peretele celular. Membrana plasmatic este o structur dinamic, urmare a mobilitii fosfolipidelor i a capacitii de rennoire a constituenilor membranei. Este i o barier osmotic prin permeabilitatea pentru unele tipuri de molecule i impermeabilitatea pentru altele. Rolul membranei plasmatice Prin permeabilitatea sa selectiv, membrana plasmatic este asociat cu transportul substanelor de la exteriorul celulei ctre interiorul acesteia i n sens invers. Unele proteine membranare joac rol de transportori de electroni. La nivelul membranei sunt localizate enzime cu rol n fosforilare (de exemplu ATP-azele), precum i sinergonul respirator i al fotosintezei, echivalentul funcional al mitocondriilor i al cloroplastelor.

Membrana intervine n biosinteza peretelui celular i joac rol de receptor specific pentru substanele utile celulei bacteriene. Membrana intervine n mobilitatea orientat a bacteriei prin recepionarea mesajelor chimice din mediu (prin intermediul proteinelor sale cu rol de chemoreceptori), determinate de substane repelente sau atractante. La nivelul membranei este localizat i corpusculul bazal al flagelului, astfel nct membrana este implicat i n mobilitatea celulei. Membrana plasmatic intervine i n sinteza i eliminarea unor exoenzime i a unor proteine toxice bacteriene (exotoxine), cu rol nociv pentru organismul gazd. Mezosomii Mezosomii (mezos (gr.) = mijloc, soma (gr.) = corp) sunt structuri derivate din membrana plasmatic, ce au deseori poziie median n celul. Ei se mai numesc i corpi de mijloc, plasmalemasomi. Sunt structuri intracitoplasmatice membranare, derivate prin invaginarea membranei, a cror semnificaie biologic a fost controversat. Au fost descrise trei tipuri morfologice de mezosomi: tubulari, veziculari (sacciformi) i lamelari. ntr-o celul bacterian pot exista mai muli mezosomi, mai numeroi, cu structur complex i mai bine dezvoltai la bacteriile Gram pozitive, mai puini i mai greu de observat la bacteriile Gram negative. Structura molecular a mezosomilor este identic cu cea a membranei plasmatice din care provin, cu o grosime de 7 10nm i un dublu strat fosfolipidic n care sunt inclavate proteine structurale i cu rol enzimatic. Mezosomii i au originea n membrana plasmatic, ce crete i se invagineaz datorit faptului c peretele celular rigid crete mai ncet dect membrana. Invaginarea membranei plasmatice duce iniial la formarea unor mezosomi tubulari, apoi la mezosomi veziculari, n final ajungnd la aspectul lamelar. Sunt structuri dinamice, care se formeaz atunci cnd sunt necesari bacteriei. Semnificaia biologic a mezosomilor Unii autori consider mezosomii ca structuri vestigiale, fr semnificaie biologic esenial. Alii consider c mezosomii au funcii multiple n celula bacterian: - Au rol n replicarea i segregarea genomului bacterian i n individualizarea celulelor; - Au rol n controlul replicrii cromozomului bacterian i plasmidelor, prin transmiterea semnalului biochimic de iniiere a replicrii materialului genetic; - Fiind derivai din membrana plasmatic, reprezint mpreun cu aceasta sediul sinergonului respirator, fiind considerai echivalentul funcional al mitocondriei; particip la reacii de fosforilare, oxidoreducere, transport de electroni; - La nivelul lor se gsesc enzime degradative, astfel nct pot fi considerai echivalentul funcional al lizozomilor; - Au rol n procesele secretorii ale celulei, contribuind la producerea i eliberarea unor exoenzime celulare; - Sunt asociai cu procesele de biosintez a nveliurilor celulare (membran plasmatic, perete celular, sept transversal de diviziune); - Unii autori (Tichy i colab., 1969) consider c mezosomii ar reprezenta regiuni specializate de ptrundere n celula bacterian a fragmentelor de ADN exogen n timpul transformrii genetice bacteriene.

Cu toate aceste funcii multiple, unii cercettori (Nanninga, 1985) contest existena mezosomilor, considernd c ei sunt artefacte (structuri artificiale) care apar n timpul pregtirii materialului celular pentru examinarea la microscopul electronic i c prin modificri ale tehnicilor folosite s-ar putea induce producerea de mezosomi tubulari, veziculari, lamelari, dup bunul plac.

Tipuri morfologice de mezosomi: A vezicular; B sacciform turtit; C form intermediar; D multilamelar, complex (dup G. Mihescu, 2000) Citoplasma bacterian Citoplasma celulelor bacteriene este un sistem coloidal complex, care din punct de vedere fizic corespunde strii de gel i este format din proteine, glucide, lipide, ap i substane minerale. Starea de gel permanent are ca rezultat o imobilitate a coninutului celular n lipsa curenilor citoplasmatici i reprezint o condiie indispensabil a nemiscibilitii nucleosomului cu citoplasma, avnd n vedere lipsa membranelor intracelulare. Citoplasma bacteriilor nu prezint organite citoplasmatice difereniate i delimitate de membrane (de tipul mitocondriilor i cloroplastelor). Aspectul citoplasmei variaz n funcie de vrsta celulei bacteriene i de condiiile de cultivare. Astfel, la celulele tinere (din culturi de 24 48 ore) i n condiii favorabile de mediu, citoplasma ader strns de membrana citoplasmatic i se prezint ca o mas dens, omogen, fin granular, intens colorabil cu colorani de anilin (colorani bazici) datorit coninutului ridicat de acizi nucleici. La celulele mbtrnite i n condiii nefavorabile de mediu, citoplasma i pierde treptat afinitatea pentru coloranii bazici, se ndeprteaz de nveliul celular i capt un aspect granular, neomogen, cu multiple vacuole.

n citoplasm se gsesc: materialul nucleosomal, mezosomii, ribozomii, incluziile i vacuolele. Ribozomii sunt responsabili de structura granular a citoplasmei, prezentnd dou topografii diferite: cei care particip la sinteza proteinelor celulare i a constituenilor citoplasmatici sunt dispui omogen n masa citoplasmei, iar cei care contribuie la sinteza proteinelor care vor fi secretate sau excretate la exteriorul celulei sunt grupai pe faa intern a membranei plasmatice. Citoplasma este foarte bogat n ARN, n special ARN ribozomal (ARNr, 80%), ARN de transfer (ARNt, 10 20%) i ARN mesager (ARNm, 2%), ceea ce explic bazofilia ei intens la celulele tinere, cu sinteze proteice intense. Celulele mbtrnite se coloreaz mai puin intens, deoarece sinteza de ARN ribozomal nceteaz i cel existent este folosit ca surs de azot i fosfor. Nucleosomul bacterian Materialul genetic bacterian este reprezentat de dou tipuri de structuri: nucleosomul, numit i nucleoid, material nuclear, echivalent nuclear, genofor, care corespunde din punct de vedere funcional cromozomului, i plasmidele, care poart gene accesorii. Nucleosomul bacterian reprezint o form primitiv de organizare a nucleului, lipsit de membran nuclear, inclavat direct n citoplasm, n mod obinuit n mijlocul celulei bacteriene, ntr-o zon numit nucleoplasm. Zona nucleoplasmei este mai clar, n raport cu citoplasma propriu-zis, care este mai dens. Studiul microscopic al nucleoidului ntmpin dificulti legate de bazofilia intens a citoplasmei, foarte bogat n ARN, care nu permite diferenierea cu colorani bazici a materialului genetic, constituit din ADN, la fel de bazofil. Dac celula bacterian este supus unui tratament cu dezoxiribonucleaz i apoi unei coloraii cu colorani bazici, n mijlocul celulei se observ o zon clar, incolor, n care a fost localizat nucleoidul. Evidenierea microscopic a nucleoidului se poate face prin coloraii selective, care constau n ndeprtarea ARN citoplasmatic prin hidroliz acid (tehnica Robinow - Feulgen) sau enzimatic (cu ribonucleaz, tehnica Boivin), urmat de colorarea cu colorani bazici de anilin. Dup hidroliza ARN, materialul nuclear apare sub diferite forme: sferic, ovalar, de halter, de bastona, reprezentnd 5 16% din volumul celulei. La microscopul electronic nucleoidul apare n zona central a celulei, mai puin electronodens dect citoplasma bacterian, n contrast cu celula eucariot la care nucleul este mai electronodens dect citoplasma. Celula procariot are un contrast invers al structurilor sale n raport cu celula eucariot, deoarece ADN nu este asociat cu proteine, iar citoplasma bacterian are o densitate foarte mare. Pe seciuni ultrafine regiunea nucleosomal apare ocupat de fibrile fine, cu diametrul de 2,5nm, uneori aranjate n iruri ondulate, paralele. Extras prin metode speciale din celula bacterian, sub forma unui corpuscul dens i compact, nucleosomul s-a dovedit a fi alctuit dintr-o singur molecul de ADN, dublu catenar, circular, covalent nchis, cu o lungime de aproximativ 1400m i diametrul de 2,5nm. Circularitatea moleculei de ADN este o condiie esenial a existenei sale n celula bacterian, n contact direct cu citoplasma n care se gsesc cantiti mare de exonucleaze, care ar ataca moleculele lineare la extremitile lor.

Nucleosomul bacterian este cea mai mare molecul biologic i prin lungimea sa depete de 1000 de ori lungimea celulei bacteriene. n structura dublu catenar a nucleoidului intervin modificri topologice care constau ntr-un proces de mpachetare prin suprarsucire (supraspiralizare), ocupnd astfel un volum de 1500 de ori mai mic. Pentru a ocupa un volum att de mic, molecula de ADN se mpacheteaz dup norme extrem de riguroase, astfel nct n orice moment cele 3000 5000 de gene pe care le conine s fie accesibile sistemelor celulare de transcriere i traducere. Stonington i Pettijohn au elaborat n 1971 un model de mpachetare a ADN n celula bacterian. Ei au demonstrat c ADN-ul poate fi extras din celula bacterian prin metode blnde sub forma unei mase dense, compacte, care corespunde strii mpachetate a nucleosomului. Din aceast mas compact ei au izolat ADN, ARN i proteine. Moleculele de ARN (ARNm, ARNt) i proteinele au un rol esenial n meninerea strii compacte a nucleosomului., materialul genetic fiind reprezentat doar de ADN. Dac nucleosomul extras din celul este tratat cu ARN-az, acesta se deruleaz ntr-o molecul dublu catenar de ADN depliat, circular, nchis, numit form relaxat, cu diametrul de 350m. Modelul de mpachetare prin pliere i supraspiralizare explic mecanismul molecular al drumului invers, de la structura relaxat a nucleosomului la forma sa compact. Dup prerea celor doi autori, forma relaxat a moleculei de ADN, cu diametrul de 350m, ar suferi mai nti un proces de pliere (folding) n 40 60 bucle, rezultnd o structur cu un diametru de 30m. La baza fiecrei bucle se gsesc molecule de natur proteic (ARN polimeraz) i ARN ribosomal sau mesager. Aceste bucle reprezint domenii de suprancolcire prin rsucirea dublului helix spre stnga, rezultnd o structur cu diametrul de 2 - 3m. Domeniile cromozomului bacterian sunt topografic independente. Supraspiralizarea, realizat n cadrul fiecrui domeniu de pliere, este o stare fizic, n care molecula de ADN se pliaz prin rsucire n jurul axei sale.

Supraspiralizarea este urmarea aciunii topoizomerazelor, care sunt de dou tipuri: helicaze, cu rol de suprarsucire a moleculei dublu catenare de ADN (topoizomeraza II, AND - giraza); derulaze, cu rol de a produce dezrsucirea ADN - ului i aducerea lui ntr-o form relaxat (topoizomeraza I).

n urma aciunii helicazelor, structura ADN devine tridimensional, prin plierea zonelor suprarsucite superior i inferior fa de un plan orizontal, ajungndu-se la forma condensat care a fost izolat iniial din celula bacterian.

n mod normal, bacteriile aflate n repaus conin un singur cromozom (sunt haploide). Apariia unor celule multinucleate, cu 2 4 cromozomi, n culture tinere, pe medii ce confer condiii optime de cretere, este rezultatul nesincronizrii ntre diviziunea celular i replicarea ADN ului. Situaia de celul multinucleat este temporar. Funciile materialului genetic nucleosomal Nucleosomul conine informaia genetic esenial necesar existenei celulelor bacteriene n mediul lor natural. Informaia genetic din nucleoidul bacterian este cuprins n aproximativ 3000 4000 gene (determinani genetici). Acestea asigur formarea structurilor celulare bacteriene, metabolismul energetic i biosintetic, reglarea activitilor celulare, replicarea celulei bacteriene, potenialul de evoluie a celulei. Pe medii neobinuite, celulele bacteriene prezint, pe lng nucleosom, o informaie genetic accesorie, reprezentat de plasmide. Acestea sunt molecule de ADN dublu catenar, circular, covalent nchis, numite i minicromozomi, reprezentnd 1 2% din mrimea cromozomului bacterian, cu un numr mic de gene.

CURS 3 Ribozomii Ribozomii sunt particule nucleoproteice intracitoplasmatice, de form aproximativ sferic i cu un diametru de 20nm; pot fi caracterizai prin constanta lor de sedimentare la ultracentrifugare n gradient de concentraie (concentraie de sucroz de 5 25%). Ribozomii eucariotelor sunt de tip 80S, iar ribozomii procariotelor sunt de tip 70S. Ribozomii sunt structuri dinamice, care au capacitatea de a disocia n cele dou subuniti componente, care se reasociaz cnd ribozomii sunt funcionali. Asocierea i disocierea componentelor ribozomale sunt corelate cu variaiile concentraiei ionilor de magneziu: asocierea este favorizat de creterea concentraiei ionilor de magneziu, iar disocierea e corelat cu scderea acestei concentraii. Numrul ribozomilor n celula bacterian este corelat cu activitatea ei fiziologic, fiind mic n celulele aflate n repaus i mare n celulele fiziologic active. El variaz ntre 15000 100000/celul. Unii ribozomi se gsesc liberi n citoplasm i determin structura granular a acesteia, mai ales la celulele tinere. Alii se gsesc pe faa intern a membranei citoplasmatice, la nivelul lor avnd loc sinteza proteinelor care vor fi eliminate la exteriorul celulei. Ribozomii bacterieni 70S au dou subuniti: o subunitate mare, 50S, care are form de fotoliu i o subunitate mic, 30S, care are form de halter asimetric, aezat orizontal pe braele i sptarul fotoliului. Ribozomii 70S conin n total 55 molecule de proteine i 3 molecule de ARN ribosomal. Subunitatea mare are greutatea molecular de 16000000 Da, cu 34 molecule diferite de proteine, notate de la L 1 la L34 (de la large = mare) i dou molecule de ARNr, una foarte mare, 23S, alta mic, 5S. Subunitatea mic are greutatea molecular de 900000 Da, cu 21 molecule proteice, notate de la S1 la S21 (de la small = mic) i o molecul de ARNr, cu o constant de sedimentare 16S.

Subunitatea mare are form de fotoliu, iar subunitatea mic are aspect de halter asimetric, rezemat orizontal pe braele i sptarul fotoliului. ntre cele dou subuniti, mai precis ntre scobitura fotoliului i gtul halterei, rmne un canal lung i ngust, prin care trece ARN mesager, purttorul informaiei genetice necesare sintezei proteinelor. O celul de Escherichia coli n plin cretere sintetizeaz aproximativ 500 ribozomi/minut, acest proces implicnd sinteza coordonat a moleculelor proteice i a ARNr, precum i asamblarea lor funcional. Celulele bacteriene au o capacitate de a sintetiza ribozomi ntr-un ritm accelerat, o capacitate de biosintez proteic rapid i eficient, astfel nct se pot multiplica rapid, pentru a supravieui n natur. Ribozomii sunt constitueni eseniali ai sistemului de traducere a informaiei genetice, reprezentnd adevrate fabrici de proteine. La nivelul lor se desfoar un ansamblu de reacii care formeaz ciclul ribozomal, ce determin iniierea, creterea i terminalizarea lanului polipeptidic, n care ribozomii interacioneaz cu ARN mesager pentru a lega specific moleculele de aminoacizi adui cu ajutorul ARN de transfer, asigurnd formarea proteinelor. Ribozomii se asociaz n polisomi (poliribozomi), grupri funcionale formate din 4 50 uniti ribozomale. Dimensiunile poliribozomilor variaz n funcie de lungimea ARNm. Polisomii se deplaseaz n lungul moleculei de ARNm i permit sinteza concomitent a mai multor molecule proteice pe aceeai molecul de ARNm. Rolul ribozomilor n sinteza proteic n faza de cretere logaritmic a culturii bacteriene, la temperatura optim, cromozomul bacterian este transcris cu o rat de 60 nucleotide/secund. La procariote ribozomii au relaii spaiale strnse cu ADN, deoarece transcrierea i traducerea informaiei sunt dou procese intim coordonate, care se desfoar aproape concomitent. Dup ce a citit integral informaia ARNm, ribozomul se desprinde, elibernd n acelai timp polipeptidul sintetizat. Polisomul este ataat fizic de cromozomul bacterian pentru o perioad scurt de timp. Transcrierea moleculei de ARNm dureaz circa un minut. Rata traducerii este corelat cu rata transcrierii. Pe medii nutritive bogate, ribozomii celulelor bacteriene (ataai de suprafaa intern a membranei citoplasmatice) sintetizeaz exoproteine, care sunt eliminate la exterior. Unele proteine de acest fel nu apar niciodat n citoplasma celulelor bacteriene, sugernd c ele sunt eliminate pe msur ce sunt sintetizate. Ele sunt molecule relativ mici, lipsite de rigiditate.

Incluziile bacteriene Incluziile bacteriene sunt formaiuni structurale inerte, care apar n citoplasma bacteriilor aflate la sfritul perioadei de cretere activ, de regul n condiii de abunden a surselor nutritive i n prezena unui dezechilibru ntre carbon i azot. Ele reprezint rezerve intracelulare pentru microorganisme, care dispar dup trecerea celulelor respective n medii srace n nutrieni. Mrimea, forma, coninutul i numrul incluziilor difer. Ele pot fi: - incluzii anorganice simple (sulf coloidal, carbonat de calciu); - polimeri anorganici (incluzii de polimetafosfat care constituie volutina); - polimeri organici polizaharidici (amidon, glicogen), lipidici (polibetahidroxibutirat) sau proteici (incluziile parasporale de la Bacillus thuringiensis). Dup criterii structurale, se disting incluzii delimitate de membrane (de exemplu cele de polibetahidroxibutirat) sau nedelimitate de membrane (de exemplu cele de glicogen, de volutin). La microscopul optic apar ca structuri granulare, de form neregulat, refringente, cu dimensiuni ntre 50 100nm. Granulele de volutin (corpusculii Babe Ernst) sunt polimeri de polifosfai care au fost evideniate la Spirillum volutans i care se formeaz n condiiile deficitului oricruia dintre nutrieni. Ele reprezint o rezerv de fosfor i de energie intracelular. Incluziile de sulf anorganic sunt structuri refringente, localizate intracitoplasmatic sau la nivelul unor pliuri ale membranei citoplasmatice. Se ntlnesc la bacteriile sulfuroase purpurii (Chromatiaceae) care folosesc n fotosintez H2S ca donor de electroni i la bacteriile filamentoase autotrofe nefotosintetizante ( Beggiatoa), care oxideaz H2S. Dup epuizarea H2S din mediu, sulful depozitat n celule este oxidat la sulfat. O categorie aparte de incluzii e reprezentat de magnetosomi, incluzii ce conin magnetit (Fe3O4), rspunztoare de fenomenele de orientare descrise la bacterii sub influena cmpurilor magnetice slabe sau a cmpului magnetic al pmntului (magnetotaxie). Bacteriile magnetotactice au fost izolate din sedimentele marine i de ap dulce, ca de exemplu Aquaspirillum magnetotacticum, singura obinut n cultur pur. Aceste bacterii au o importan deosebit n studiile asupra cmpului magnetic al pmntului. Incluziile proteice parasporale se sintetizeaz odat cu formarea sporilor. Vacuolele bacteriene Sunt formaiuni sferice cu diametrul de aproximativ 0,3 0,5m, mai puin refringente dect citoplasma. n funcie de mediul de cultur numrul lor ntr-o celul este ntre 6 i 20. Vacuolele conin substane dizolvate n ap i sunt delimitate de un nveli lipoproteic unistratificat, cu grosimea de 3nm, numit tonoplast. Unii autori consider c vacuolele se formeaz ca urmare a ptrunderii unei cantiti mari de ap n celul. n apa aflat n exces se dizolv produi de metabolism hidrosolubili, iar lipidele i proteinele acumulate n jurul picturilor de ap formeaz tonoplastul. Rolul vacuolelor ar fi acela de reglatori ai presiunii osmotice n raport cu mediul extern, precum i de depozite de substane de rezerv n perioada premergtoare formrii incluziilor.

Un tip special de vacuole este reprezentat de veziculele gazoase, numite aerosomi. Ele sunt ntlnite la bacteriile acvatice fotosintetizante imobile, ca de exemplu cianobacterii i bacterii fotosintetizante verzi i roii. Sunt structuri refringente cu aspect ovalar, compartimentate, membranele fiind constituite din proteine hidrofobe. Aerosomii confer bacteriilor o densitate mai mic dect a apei i permit deplasarea celor acvatice imobile ntr-o coloan vertical de ap n zone favorabile fotosintezei. De asemenea, joac un rol protector pentru bacterii, dispersnd lumina i aprnd structurile fotosensibile de aciunea nociv a ultravioletelor. Aerosomii sunt numeroi la cianobacteriile care cresc cu o rat mare i produc fenomenul de nflorire a apelor. Endosporul bacterian Anatomia bacteriilor permite adaptarea lor la habitate diverse. Dintre toate structurile microorganismelor, endosporul este cel mai performant din punct de vedere al rezistenei la condiiile ostile de mediu, care faciliteaz supravieuirea. Sporul bacterian este o form primitiv de difereniere celular, care const n formarea n celula vegetativ a unui nou tip de celul, cu ultrastructur, compoziie chimic i enzimatic diferit. Exist cel puin 10 tipuri diferite de spori, caracteristice anumitor grupuri sistematice de bacterii, cu particulariti structurale i biologice. Cea mai comun form de spor este endosporul, care poate fi considerat sporul tipic. El este frecvent ntlnit la bacteriile Gram pozitive cilindrice (de exemplu la genurile Bacillus, Clostridium) i n mod excepional la bacterii sferice (Sporosarcina). Endosporul are form sferic sau ovalar, cu dimensiuni ntre 0,5 - 1m pentru axul mic i ntre 1 1,5m (3m) pentru axul longitudinal. Are o refringen deosebit i e foarte greu colorabil datorit nveliurilor impermeabile pentru colorani. Se poate colora ns dup permeabilizarea nveliurilor prin tehnici speciale energice. n funcie de aezarea n celula bacterian, sporul poate fi terminal, subterminal sau ecuatorial (central), iar n funcie de diametrul su comparativ cu cel al celulei n care se formeaz, sporul poate fi nedeformant (terminal, subterminal, central) sau deformant (terminal, ecuatorial).

1. 2. 3. 4.

Spor central nedeformant Spor terminal nedeformant, cu cristale proteice parasporale Spor terminal deformant Spor central deformant

Spori de Clostridium difficile n general sporii sunt unici n celula bacterian, dar exist i excepii, cnd n celule se formeaz cte doi spori (celule bisporulate) sau chiar mai muli (celule polisporulate). Ultrastructura endosporului Sporul este alctuit dintr-o poriune central, ce reprezint protoplastul sporal, format din: perete sporal, citoplasm granular denumit sporoplasm, n care se gsesc ribozomii i materialul nuclear inclus n nucleoplasm. Protoplastul sporal este nconjurat de o zon transparent, mai puin dens, numit cortex, alctuit din peptidoglican modificat, acoperit de un nveli sporal lamelar cu 3 straturi suprapuse: la interior este situat intina bistratificat, urmeaz un strat mijlociu i apoi exina multistratificat. La unele bacterii exist n jurul sporului un exosporium, uneori multistratificat, ancorat de spor prin filamente suspensoare. Unii spori au la una dintre extremiti un smoc de apendici sporali, de aproximativ dou trei ori mai lungi dect sporul, cu aspect tubular i cu striaii orizontale sau n form de pan. Rolul acestor apendici ar fi acela de a facilita dispersarea sporilor n natur, precum i nutriia sporului n cursul sporogenezei sau germinrii, prin preluarea nutrienilor din mediu.

Compoziia chimic a sporului Sporul conine toate categoriile de molecule necesare relurii creterii celulei bacteriene. Lipsesc componentele celulare instabile (ARNm i nucleozidtrifosfai), dar exist precursorii lor mai stabili (nucleozid mono- i difosfai). n spor nu se realizeaz deci sinteze proteice. Sporii conin proteine structurale specifice, codificate de gene care sunt active numai n spori, numite gene sporale. De asemenea, conin enzime noi, n general proteaze, lipsindu-le enzimele importante n metabolismul celulelor bacteriene (ca de exemplu cele ale ciclului Krebs). Le lipsesc i sistemele transportatoare de electroni, care n celula vegetativ sunt localizate la nivelul membranei. Enzimele sporale au o greutate molecular mult mai mic dect enzimele celulare. Unele dintre ele provin din enzimele celulei vegetative prin digestia proteolitic a acestora, realizat de proteaze codificate de enzimele sporale. Ele reprezint doar situsul activ al enzimelor celulare, sunt mai termorezistente i sunt stabilizate prin legturi intramoleculare. Sporii conin o cantitate mare de ioni de calciu i magneziu, n raport cu celula vegetativ. Ionii de calciu sunt legai cu o cantitate echivalent de acid dipicolinic, ce reprezint ntre 10 - 15% din greutatea uscat a sporului. Acidul dipicolinic este implicat n termorezistena crescut a sporilor. Concentraia de ATP este foarte sczut n spori. Iniial s-a considerat c sporul se formeaz prin deshidratarea celulei vegetative, ceea ce ar explica lipsa metabolismului la spor. Cercetrile ulterioare au evideniat c deosebirile dintre spor i celula vegetativ nu sunt de ordin cantitativ, ci calitativ, referindu-se la starea apei. Apa liber din spor este n cantitate foarte redus, ntre 3 10%, iar restul de 90 97% este n stare legat de constituenii celulari. Apa legat nu este implicat n procese metabolice. Sporul este n stare vie, dar este o via latent (criptobioz), fr metabolism sau cu un metabolism extrem de redus, nedecelabil. n celula vegetativ 70% din ap este n stare liber, implicat n diverse procese metabolice. Particularitile de structur i compoziie chimic a sporilor determin termorezistena acestora, deosebita rezisten la substanele chimice (antiseptice, dezinfectani), rezistena la radiaii. Sporogeneza este procesul de formare a sporilor, care se desfoar n 6 7 stadii succesive i dureaz aproximativ 8 ore. Este declanat de lipsa unui nutrient esenial pentru celula bacterian (sursa de azot, sursa de carbon). Apar modificri ultrastructurale, biochimice i biologice, n sensul creterii rezistenei la factorii nefavorabili de mediu. Procesul este complex i din punct de vedere genetic, implicnd participarea a cel puin 50 de gene, constnd n blocarea activitii genelor funcionale n celula vegetativ i activarea genelor sporale. Germinarea sporilor este procesul de conversie a sporului n celula vegetativ i are loc atunci cnd sporul ntlnete condiii favorabile de mediu. Se realizeaz printr-o serie de etape succesive, care n general reproduc n ordine invers fenomenul de sporogenez. Sporul se hidrateaz, apa legat trecnd n stare liber, volumul sporului se mrete, are loc gelificarea nveliurilor sporale, dup care celula vegetativ prsete nveliul sporal.

Semnificaia biologic a sporilor Sporogeneza este o form primitiv de difereniere celular, dar i o modalitate de adaptare a celulei la condiii de mediu nefavorabile. Mecanismele criptobiozei nu sunt cunoscute. Unul dintre ele ar putea fi starea special a enzimelor, care sunt inactivate n mod reversibil. Endosporul este i o form de conservare viabilitii celulelor i deci a speciei, nefiind o form de multiplicare. Are rol n diseminarea celulelor bacteriene n natur, deoarece pot fi rspndii la distane foarte mari i au o longevitate deosebit. Sporogeneza poate fi asociat cu unele procese biologice importante. Componentele extraparietale Capsula bacterian Capsula bacterian reprezint o structur accesorie, care acoper de jur mprejur celula bacterian. Este alctuit dintr-un material macromolecular, gelatinos, vscos, inegal dezvoltat de la o specie bacterian la alta. Se ntlnesc mai multe forme de capsul: 1. Microcapsula este forma cea mai simpl, reprezentat de o pelicul fin, cu o grosime mai mic de 0,2m, care acoper de jur mprejur peretele celulei bacteriene. 2. Macrocapsula este o structur organizat, aderent de celul, cu o grosime mai mare de 0,2m, demonstrabil prin metode citologice. 3. Stratul mucos este o mas amorf neorganizat, ale crei componente vscoase se dispun fr o semnificaie anatomic n jurul celulei bacteriene, cu o grosime mult mai mare de 0,2m. 4. Zoogleea (zoon = animal; glee = substan vscoas) const din acelai material ca i stratul mucos, dar cuprinde mai multe celule bacteriene, formnd o asociaie bacterian mucilaginoas. La unele bacterii din mediul natural se ntlnete un glicocalix adevrat, care are caracter adaptativ i confer celulei un avantaj selectiv, disprnd dac bacteria este trecut pe medii artificiale. Acesta este constituit dintr-o reea de filamente polizaharidice i glicoproteice, legate de lipopolizaharidele membranei externe la bacteriile Gram negative sau de mureina bacteriilor Gram pozitive. Formeaz o structur pericelular dezordonat, ca o psl, prin care celulele se ancoreaz de diferite substraturi.

Flagelul bacterian Flagelii sunt structuri extracelulare, care reprezint organite de motilitate, cu o structur rudimentar n raport cu flagelul eucariotelor. Flagelii se mai numesc i undulipode (undula = und mic, podos = picior). Au originea n celula bacterian, strbat nveliurile celulare i prezint un filament extracelular. Acest filament are o grosime constant pe toat lungimea lui, egal cu 20nm. Lungimea flagelului este variabil, de la 4 - 5m pn la 15m, ajungnd uneori pn la 70m, flagelii fiind mult mai lungi dect celula bacterian. Flagelii nu se pot observa direct la microscop, prezena lor poate fi dedus pe baza mobilitii accentuate a bacteriilor, care se deplaseaz n cmpul microscopic la ntmplare, n diferite direcii. n funcie de prezena sau absena flagelilor, numrul i gruparea lor, au fost descrise mai multe tipuri de bacterii: - bacterii atriche (fr flagel) - bacterii monotriche (cu un singur flagel) - A - bacterii amfitriche (cu doi flageli, situai de obicei apical) - C - bacterii lofotriche (cu un smoc de flageli la unul din poli) - B - bacterii peritriche (cu flageli de jur mprejurul celulei) - D Flagelul poate fi situat polar sau subpolar, smocul de flageli poate fi dispus ecuatorial.

Ultrastructura flagelului bacterian Flagelul este format din trei componente: o poriune bazal rotatorie, situat n nveliurile celulei bacteriene; o poriune n form de crlig, care se continu extracelular cu flagelul propriu-zis, cu un diametru constant de 20nm. Poriunea bazal are caracter de motor rotativ i prezint o structur diferit la bacteriile Gram pozitive fa de cele Gram negative. La bacteriile Gram pozitive poriunea bazal e simpl, format din dou discuri unite ntre ele printr-un ax central, precum butonii unei manete. La bacteriile Gram negative poriunea bazal este format din mai multe discuri unite printr-un ax central: - discul M, la nivelul membranei plasmatice, este un disc mobil, cu funcie de rotor (cu aproximativ 4000 rotaii/minut), reprezint partea rotatorie a flagelului; - discul S, situat n regiunea supramembranar, n spaiul periplasmatic, cu rol de stator, imobil;

discul P, imobil, legat de lanul de peptidoglicani, n spaiul periplasmatic; discul L, situate la nivelul lipopolizaharidelor membranei externe a peretelui celular. n jurul discurilor M i S exist o pereche de proteine Mot, care acioneaz ca un motor al flagelului, determinnd rotaia filamentului i proteinele Fli, care funcioneaz ca un comutator al motorului, determinnd sensul de rotaie al acestuia n funcie de semnalele primate din interiorul celulei. Crligul are caracter de articulaie flexibil universal, putndu-se roti mpreun cu filamentul cu 360. Filamentul extracelular este flagelul propriu-zis, situat la exteriorul celulei, cu micri de bici, nu ondulatorii. El are un diametru constant pe toat lungimea sa. Micarea rotatorie se transmite spre crlig datorit discurilor fixe. La o bacterie cu un singur flagel situat polar, acesta se nvrte n sens antiorar i propulseaz bacteria nainte. La bacteriile peritriche flagelii se grupeaz ctre extremitatea opus direciei de naintare. Prin rotirea flagelului n sens orar, bacteria se rostogolete si i schimb direcia de deplasare (flagelii dispui peritrich se rsfir). Motorul rotativ conine 15 proteine diferite. Filamentul este alctuit dintr-o protein major, flagelina, reprezentat de cteva mii de molecule de acelai tip, cu greutate molecular de 40.000 65.000 Da. Moleculele de flagelin sunt grupate n 11 iruri de filamente dispuse dup o simetrie helicoidal, conferind flagelului o structur tubular.

Semnificaia biologic a flagelului Prezena flagelilor asigur deplasarea activ a bacteriilor n medii lichide. S-a demonstrat c n medii neutre din punct de vedere chimic bacteriile se deplaseaz la ntmplare: o secund n linie dreapt, apoi o rostogolire n 0,1 secunde cu schimbarea direciei de deplasare, urmat de o nou deplasare n linie dreapt timp de o secund. Viteza de deplasare a bacteriilor este mai mare dect a macroorganismelor, raportat la dimensiunile proprii. Bacteriile flagelate se deplaseaz cu 20-80m pe secund, ceea ce reprezint o vitez de 40 lungimi/secund. Micarea orientat preferenial a bacteriilor este numit taxie. Ea se poate realiza n funcie de substanele chimice din mediu (chimiotaxie), de lumin (fototaxie), de concentraia de oxigen (aerotaxie), de temperatur (termotaxie).

Substanele chimiotactic pozitive (atractante) determin deplasarea bacteriilor mpotriva gradientului de concentraie, din zone n care concentraia substanelor respective este mic, spre zone n care ea este mare. Substanele atractante sunt n general substane utile bacteriilor (aminoacizi, zaharuri, ioni de calciu i magneziu). n prezena atractanilor se mrete deplasarea bacteriilor n linie dreapt i se micoreaz numrul de rostogoliri. Substanele chimiotactic negative (repelente) determin o deplasare a bacteriilor n sensul gradientului de concentraie, spre zone n care concentraia substanelor respective este mic. Ele sunt reprezentate de substane nocive pentru bacterii (produse de excreie, alcooli, acizi grai, ioni ai metalelor grele). n prezena repelenilor se micoreaz deplasarea bacteriilor n linie dreapt i se mrete frecvena rostogolirilor. Din punct de vedere ecologic, mobilitatea bacteriilor este foarte important n natur, deoarece asigur supravieuirea bacteriilor. Ea le ofer bacteriilor posibilitatea de a se deplasa spre regiuni n care condiiile de existen sunt favorabile.
Pilii Pilii sunt apendici fi1amentoi neflagelari, a cror sintez este codificat de gene localizate pe plasmide. Aceste plasmide se numesc "plasmide de sex" sau conjugoni. Celulele purttoare de pili au capacitatea de a dona material genetic celulelor lipsite de pili. Numrul pililor este de aproximativ 1 - 10/celul, au lungimea de aproximativ 20m, iar diametrul de 6 15nm la exterior i 2,5nm la interior. Pilii sunt alctuii din molecule identice de pilin, care se sintetizeaz n celul, este transferat n lumenul pilului i este asamblat dup o simetrie helical la extremitatea liber a pilului. Celulele care poseda pili sunt considerate celule "mascule". Pilii pot fi ndeprtai mecanic prin agitare. Capacitatea de sintez a pilinei se pierde odat cu pierderea plasmidei de sex i este redobndit odat cu rectigarea plasmidei. Rolul pililor Prezena pililor este asociat cu procesul de conjugare bacterian, fiind implicai n transferul de material genetic de la celula donoare la celula receptoare. Rolul pililor n conjugare este argumentat de faptul c pierderea pililor este nsoit de pierderea capacitii de conjugare a bacteriilor. Fimbriile Fimbriile sunt structuri de tipul apendicelor filamentoase drepte i rigide, mai scurte i mai subiri dect flagelii. Sinteza componentelor fimbriilor este codificat de gene situate pe cromozomul bacterian. Fimbriile pot fi pn la 1000/celul. Lungimea lor este variabil (1 - 20m), iar diametrul este cuprins ntre 3 - 15/m. Dac sunt numeroase, au o dispoziie pericelular. Fimbriile sunt alctuite din molecule de fimbrilin aezate dup o simetrie helical, determinnd o structur tubular. O bacterie posed cteva tipuri de fimbrii, n funcie de grosime, lungime, specificitate antigenic. Fimbriile sunt comune la bacteriile enterice i nu se ntlnesc la bacteriile Gram pozitive. Semnificaia biologic a fimbriilor Semnificaia biologic a fimbriilor nu este nc bine precizat. Ele sunt considerate structuri adaptative, cu rolul de a mri suprafaa de contact a bacteriei cu mediul nconjurtor, fiind utilizate pentru absorbia nutrienilor. Fimbriile favorizeaz asocierile dintre celule, formndu-se astfel pelicule fine ( filme) de bacterii la suprafaa apei, asigurnd condiii bune de aerare pentru bacteriile aerobe i condiii de luminozitate pentru cele fotosintetizante.

CURS 4 CRETEREA I MULTIPLICAREA BACTERIILOR Ca rezultat al metabolismului de sintez, bacteriile cresc prin formarea de noi constitueni celulari, dup care se multiplic. Creterea i multiplicarea bacterian prezint anumite particulariti, ca urmare a intensitii deosebite a metabolismului bacterian i a reglrii lui perfecte. Studiul creterii i multiplicrii bacteriene este important din punct de vedere teoretic, pentru a explica dinamica, mecanismul i factorii care influeneaz aceste procese, dar i din punct de vedere practic, pentru utilizarea eficient a bacteriilor n biotehnologie (pentru obinerea de biomas, produi de fermentaie, produi secundari de metabolism). Creterea bacteriilor Creterea bacteriilor reprezint mrirea coordonat a tuturor constituenilor celulari. Ea este rezultatul sintezei specifice i echilibrate, pornind de la substanele nutritive din mediu, a unor compui de baz, care sunt ulterior asamblai pentru a forma copii fidele ale constituenilor celulari. Specificitatea creterii este determinat de intervenia unor mecanisme de control genetic. Procesul creterii depinde de natura i concentraia substanelor nutritive din mediu, precum i de aprovizionarea continu a celulei cu energia necesar reaciilor de sintez. Mrirea masei totale a celulei bacteriene nu reflect ntotdeauna creterea normal a celulei, deoarece ea poate rezulta prin sinteza i acumularea de substane de rezerv, care nu sunt specifice creterii sau prin sporirea accentuat a coninutului n ap. Creterea celulei bacteriene se realizeaz prin adugarea de constitueni noi la peretele celular rigid, care are loc n moduri diferite: - polar; - bipolar; - ecuatorial, n zona septului de diviziune; - intercalar, prin intususcepiune, n zone specifice de cretere; - prin depunere pe suprafaa intern a peretelui celular. Creterea bacteriilor se realizeaz prin depunerea de substane noi uni-, bi- sau tridimensional. De obicei creterea bacteriilor cilindrice se face n sensul axului longitudinal, iar celulele sferice cresc n sensul celor trei dimensiuni. Creterea bacteriilor nu se face la infinit, ci doar pn la un moment critic, n care creterea este ntrerupt i este urmat de diviziunea celular. Mecanismul ntreruperii procesului de cretere nu este pe deplin cunoscut. Se admite ipoteza c activitatea normal a celulei bacteriene este urmarea unui raport echilibrat ntre volumul celulei bacteriene (care reflect masa celular ce consum nutrienii i produce catabolii) i suprafaa celulei (aria prin care se realizeaz schimburile cu mediul extracelular, care constau n absorbia nutrienilor i eliminarea unor produi de catabolism). n cursul creterii celulei, acest raport echilibrat se modific n sensul diminurii suprafeei (care crete cu o rat ptratic, n timp ce volumul crete cu o rat cubic), astfel nct aportul de substane nutritive devine insuficient i inadecvat necesitilor metabolice ale celulei. Se ajunge astfel la momentul critic, ce declaneaz diviziunea celular, care restabilete raportul echilibrat ntre suprafaa i volumul celulei bacteriene.

Multiplicarea bacteriilor Multiplicarea bacteriilor se realizeaz prin patru mecanisme: diviziune direct (simpl), nmugurire, fragmentare i prin producerea de spori. Diviziunea direct (izomorf) Este forma cea mai rspndit i cea mai bine cunoscut de multiplicare a bacteriilor. Ea const n scindarea celulei mam, ajuns la punctul critic de cretere, n dou celule fiice surori, cel mai adesea identice. La bacteriile cilindrice i spiralate diviziunea se face ntr-un plan transversal, perpendicular pe axul longitudinal al celulei, i numai excepional, la unii spirili, se realizeaz dup un plan longitudinal. Cocii se divid dup unul, dou sau trei planuri, perpendiculare unul pe cellalt, fcnd posibil gruparea celulelor n diplococi, tetrad, sarcin. n general, diviziunea evolueaz n trei etape distincte: - formarea unei membrane ce separ protoplatii ce vor forma celulele fiice; - sinteza peretelui celular pe suprafaa membranei respective sau formarea unui sept transversal prin creterea spre interior a peretelui celular periferic; - separarea celulelor rezultate n urma diviziunii. Exceptnd situaiile anormale, (care se finalizeaz cu formarea unor minicelule sferice, lipsite de ADN, ca urmare a localizrii anormale a situsului de diviziune), bacteriile fr nucleu apar extrem de rar. Acest fapt sugereaz existena unei legturi obligatorii ntre replicarea ADN-ului i diviziunea celulei, precum i existena unui mecanism de control, care permite ca diviziunea s aib loc doar atunci cnd n celula mam exist doi nuclei noi, care vor fi separai n cele dou celule fiice.

n procesul de diviziune celular are loc nti replicarea ADN-ului, apoi formarea septului de diviziune. Aceast corelaie a fost studiat la Escherichia coli, la care timpul de apariie a unei noi generaii este de 45 minute. - timpul 0 informaia genetic este reprezentat de un singur cromozom bacterian; - timpul 18 min. ADN-ul cromozomal este parial replicat; - timpul 20 min. ncepe migrarea celor doi cromozomi obinui prin replicare ctre extremitile celulei; - timpul 25 min. segregarea informaiei genetice a avut deja loc, cresc membrana plasmatic i peretele celular n spaiul dintre cele dou molecule de ADN; - timpul 30 min. ncepe formarea septului transversal de diviziune; - 35 38 min. cele dou celule fiice, fiecare cu cte un nucleosom propriu, sunt n situaia de a se separa; - timpul 45 min. are loc separarea celor dou celule fiice nou formate. Cercetrile ulterioare ale corelaiei dintre replicarea ADN-ului bacterian i ritmul de diviziune au scos n eviden particulariti ale acestui fenomen. Acestea se refer la acumularea unei proteine iniiator, capabil s declaneze ciclul de replicare a cromozomului, ntr-un ritm care depinde de condiiile de mediu, dar i la faptul c n general timpul de replicare a cromozomului este fix, la Escherichia coli durnd 20 minute. Dinamica procesului de multiplicare bacterian n culturi Culturile bacteriene sunt de dou tipuri: continue i discontinue. Culturile continue sunt cele n care mediul de cultur este rennoit permanent cu o anumit rat, o parte din masa bacterian format fiind ndeprtat n acelai timp din cultur, cu aceeai rat. Aceste culturi se realizeaz n aparate speciale i asigur o concentrae constant de celule n cultur (dup principiul turbidostatului) i o concentraie constant a substanelor chimice din mediu (dup principiul chemostatului). Culturile discontinue sunt cele obinute ntr-un mediu de cultur nennoit, n vase nchise. Se pot realiza n dou variante: culturi asincrone i culturi sincrone. Culturile sincrone sunt cele n care majoritatea bacteriilor se multiplic n acelai timp. Culturile asincrone sunt cele n care bacteriile se multiplic n momente diferite. Culturile obinute n laborator n mod curent sunt culturi discontinue asincrone. Acestea prezint urmtoarele particulariti: mediul de cultur nu este rennoit pe timpul cultivrii, fiind ntr-un volum fix pe ntreaga durat a obinerii culturii; compoziia chimic a mediului se schimb pe parcursul formrii culturii (substanele nutritive sunt consumate, se acumuleaz produi de catabolism, se modific pH-ul, ); numrul de celule viabile este variabil, la nceput crescnd progresiv, ulterior scznd datorit mbtrnirii i morii celulelor; ritmul de diviziune este inegal, la nceput, cnd populaia bacterian este tnr i condiiile de mediu sunt optime, fiind mai mare, ulterior scznd; vrsta celulelor bacteriene este diferit; numrul de generaii este limitat, datorit condiiilor de mediu fixe.

Procesul multiplicrii bacteriilor n culturi discontinue asincrone evolueaz n cteva faze succesive: faza de lag (de laten, de cretere bacterian 0) este cuprins ntre momentul iniierii culturii i nceperea multiplicrii bacteriene; numele ei vine de la to lag (engl.) = a ntrzia; numrul celulelor bacteriene din inoculul iniial rmne relativ neschimbat; dei considerat faz de laten, este n realitate o faz activ, n care celulele se pregtesc pentru multiplicarea ce va urma (i refac structurile i sistemele enzimatice necesare, cresc n dimensiuni, prezint un metabolism intens). Aceast faz are o durat diferit n funcie de vrsta inoculului folosit: dac inoculul provine dintr-o cultur tnr, faza de laten este scurt; dac inoculul provine dintr-o cultur mai veche sau aflat n condiii de mediu total diferite de mediul cel nou, faza de laten este de mai lung durat, celulele fiind ntr-o faz activ de adaptare la noile condiii de cultivare. faza de accelerare const n iniierea multiplicrii bacteriene ntr-un ritm progresiv, care determin i numele fazei; faza de cretere logaritmic (exponenial) este faza n care multiplicarea se realizeaz cu un ritm constant i maxim, populaia bacterian practic dublndu-se la fiecare diviziune; celulele au o mrime uniform, mai mare dect a celulelor normale, caracteristice speciei, cu citoplasm omogen, bogat n ARN, cu sinteze proteice intense, fr materiale de rezerv. Acest stadiu corespunde celulelor bacteriene tinere, potrivite pentru cercetarea de laborator; faza de ncetinire este aceea n care ritmul de multiplicare este ncetinit, datorit condiiilor de mediu. Unul dintre factorii nutritivi eseniali din mediul de cultur devine limitant, fiind epuizat treptat i devenind insuficient; faza staionar a creterii este caracterizat printr-un numr de celule viabile maxim i constant pentru o perioad de timp care depinde de specia bacterian; se consider c n timp ce unele celule bacteriene mor, dispariia lor este compensat de multiplicarea lent a altor celule, astfel nct, n ansamblu, numrul de celule viabile este acelai. Aceast faz corespunde celulelor bacteriene mature, cu morfologie considerat normal, tipic unei specii date; celulele din aceast faz se folosesc pentru coloraii. Spre sfritul fazei staionare ncep s apar primele incluzii bacteriene, vacuole i chiar spori; faza de nceput al declinului este aceea n care numrul celulelor viabile ncepe s scad ca rezultat al morii unora dintre celule; ulterior scade i densitatea celular, deoarece intervin procese de autoliz, produse de enzime proteolitice endogene; faza de declin i moarte celular este faza n care se intensific reducerea numrului de celule viabile i fenomenele de autoliz bacterian; este foarte variabil ca durat, de la 24 48 ore pn la sptmni i chiar luni de zile; celulele bacteriene au o morfologie alterat, apar forme filamentoase, spiralate, ramificate, necaracteristice speciei; celulele au afinitate pentru coloranii acizi, conin substane de rezerv, se ntlnesc muli spori.

Viteza de multiplicare a celulelor bacteriene se msoar prin durata unei generaii i se numete timp de generaie. El este intervalul de timp scurs ntre dou diviziuni succesive. n general, acest timp este mai mic la bacterii dect la macroorganisme, existnd bacterii care se multiplic foarte rapid ( Bacillus subtilis 9-10 minute), altele mai puin rapid (Lactobacillus 100 minute), iar altele foarte lent (Mycobacterium tuberculosis 1600 minute). Dei au un potenial imens de multiplicare, bacteriile nu i-l realizeaz n practic, ntruct intervin factori de mediu nefavorabili, ce limiteaz acumularea unui numr imens de celule bacteriene. De exemplu, n condiii aerobe obinuite de cultur n laborator, numrul maxim de celule care se acumuleaz este de 200 milioane de celule/ml mediu. n condiii de agitare, care favorizeaz aerarea i contactul celulelor cu nutrienii, se poate atinge un numr de 5 miliarde celule/ml. Un coc cu o greutate de 5x10-13 g, cu un timp de generaie de 20 minute, poate determina dup 132 de diviziuni formarea unei mase celulare cu greutatea de 6x1027g. Multiplicarea prin nmugurire nmugurirea reprezint o modalitate particular de reproducere, care const n separarea a dou celule asimetrice, ca rezultat al formrii de ctre celula mam a unei protuberane locale mai mici dect ea. Aceasta creeaz un spaiu nou, n care vor migra constituenii noii celule sau n care constituenii vor fi sintetizai de novo (din nou).

Bacteriile care nmuguresc prezint o mare diversitate taxonomic i sunt mai puin cunoscute. Ele pot fi fototrofe sau chemotrofe; cele mai studiate aparin genurilor de bacterii prostecate: Rhodomicrobium, Rhodopseudomonas etc., dar aparin i genurilor de bacterii care nu sunt prostecate: Nitrobacter, Pasteuria etc. Formarea unei celule noi de ctre o bacterie poate fi cu adevrat un proces de nmugurire dac se ndeplinesc 3 criterii fundamentale: 1) criteriul morfologic: celula nou trebuie s fie mult mai mic dect celula mam i s rmn temporar ca atare (mic) i dup separare; 2) criteriul de dezvoltare: nmugurirea reprezint un caz particular de cretere a peretelui celulei parentale prin slbirea lui localizat, urmat de o cretere numai ntr-o zon foarte limitat. n cazul nmuguririi, nveliurile celulare sunt integral sintetizate de novo, astfel c nici un constituent parental din peretele celular nu e ncorporat n mugure. Diferena dintre diviziunea direct (a) i nmugurire (b): celula mam a) Materialul peretelui celular e distribuit egal celor dou celule fiice. b) 3) criteriul funcional: mugurele trebuie s reprezinte singurul mod de formare a unei celule noi la specia respectiv. Apariia mugurilor poate fi localizat unipolar sau bipolar. 3) Multiplicarea prin fragmentare E o form de reproducere vegetativ, observat la multe actinomicete, cum sunt cele din genul Nocardia, Actinomyces. n prima parte a ciclului celular are loc o cretere activ a masei celulare, sub forma unui miceliu, fr creterea numrului de celule viabile. Ulterior, n faza staionar a creterii, n care masa celular rmne constant, miceliul e supus unei fragmentri multiple, cu formarea unor septuri transversale, obinndu-se structuri cilindrice. Primul sept transversal apare aproape de mijlocul hifei i progreseaz secvenial de-a lungul filamentului spre extremiti. Urmeaz apoi eliberarea unor celule cilindrice, scurte, egale, cu extremitile tiate drept i care vor ncepe s creasc i s dea natere unui miceliu. 4) Multiplicarea prin spori Actinomicetele care au un miceliu nesegmentat se reproduc de obicei prin formare de exospori (spori de dispersare, de propagare). Fenomenul a fost mai bine studiat la Streptomyces coelicolor. Sporii sunt de tip asexuat, dispui de regul pe hifele aeriene, n lanuri de diferite lungimi, sau n vezicule sporale numite sporangi. Unele hife prezint o teac extern fibroas, care le nvelete ncepnd cu extremitatea liber, pe toat lungimea lor. nveliul celular este format din peretele hifei, acoperit de teaca fibroas. n anumite puncte ale peretelui hifei ncepe formarea septumului sporal prin depunerea n hifa aerian a unui disc inelar cu grosime dubl. Prin creterea acestui disc paralel cu peretele hifei ncepe formarea peretelui viitorului spor. Sporii se rotunjesc, se separ, se matureaz, vezicula sporal se rupe i elibereaz sporii formai.

METABOLISMUL BACTERIAN Metabolismul reprezint totalitatea reaciilor biochimice prin intermediul crora microorganismele preiau din mediu energie i nutrieni, pe care i folosesc n activitile lor fundamentale. Aceti nutrieni reprezint elemente eseniale pentru viaa celulei i se numesc elemente biogene. Substanele pot fi folosite ca atare sau sub o form mai mult sau mai puin complex. Caracteristic pentru metabolismul bacterian este reglarea lui perfect, supus legii economiei i optimalitii. Aceste principii asigur desfurarea perfect reglat, corelat a activitii celulare, astfel nct beneficiul pentru celula bacterian s fie maxim. Substanele din mediu sunt folosite n 4 scopuri fundamentale: - producerea de energie; - sinteza de constitueni celulari; - creterea celulei i desfurarea normal a activitilor ei fiziologice; - producerea de metabolii, unii dintre ei utili pentru om. Metabolismul bacterian se realizeaz printr-o serie de ci metabolice, reprezentate de secvene de reacii chimice catalizate de enzime. Sunt dou direcii fundamentale de evoluie a acestor ci: degradarea substanelor nutritive preluate din mediu, cu eliberare treptat de energie (deoarece o eliberare brusc de energie este duntoare celulei bacteriene, ducnd la distrugerea ei); folosirea energiei eliberate n procesele de biosintez a constituenilor celulari (cale diametral opus celei dinti); excesul de energie se acumuleaz n legturile macroergice ale moleculelor de ATP, ce reprezint acumulatorul universal de energie. Se cunosc 4 tipuri de ci metabolice: cile catabolice (catabolismul), cile anabolice (anabolismul), cile amfibolice i cile anaplerotice. a) Cile catabolice reprezint ansamblul cilor biochimice prin care se realizeaz degradarea nutrienilor preluai din mediu, cu eliberare de energie. Reaciile catabolice se desfoar n trei faze succesive: 1) macromoleculele nutrienilor sunt degradate pn la subunitile lor de construcie (ex. proteinele pn la aminoacizi), cu eliberarea aproximativ a 1% din energia nutrienilor, care se pierde sub form de cldur; 2) moleculele rezultate n prima faz sunt degradate n continuare, cu formarea unui numr limitat de molecule mai mici, ce reprezint compui intermediari ai cii centrale; numrul acestor compui intermediari este diferit n funcie de bacterie, putnd ajunge la maxim 12; n aceast etap se elibereaz aproximativ 1/3 din energia existent n compuii respectivi; 3) cea de a treia faz este diferit n funcie de natura reaciilor metabolice; n aerobioz reaciile evolueaz cu metabolizarea complet a compuilor intermediari pn la CO2 i H2O, cu eliberare masiv de energie, care este apoi nmagazinat n ATP; n anaerobioz reaciile evolueaz dup modelul reaciilor fermentative, caz n care eliberarea de energie este redus. b) Cile anabolice se desfoar n sensul utilizrii compuilor intermediari ai cii centrale n vederea sintezei de constitueni proprii celulei bacteriene, proces care

evolueaz n faze succesive. n cursul proceselor de anabolism se sintetizeaz macromolecule de depozit, adic polimeri uniformi, formai prin legarea unor monomeri n lanuri de diferite dimensiuni (ntr-o prim faz monomeri, ntr-o a doua faz, numit diataxie, subunitile constituite n prima faz fiind aezate ntr-o ordine riguroas, dictat exact de informaia genetic din genom). c) Cile amfibolice sunt reprezentate de cile metabolice centrale, care ndeplinesc n acelai timp dou funcii: de eliberare de energie i de furnizare a unor precursori necesari biosintezei. Cile catabolice i cele anabolice se desfoar simultan n celula bacterian. Caracterul amfibolic este reprezentat de faptul c la anumite nivele energia eliberat este utilizat la biosinteze, iar la alte nivele intermediare se menine calea catabolic ce duce la degradarea compuilor intermediari. d) Cile anaplerotice sunt cunoscute sub denumirea de ci auxiliare sau de reaprovizionare, deoarece compuii intermediari ai cilor centrale sunt n permanen ndeprtai din celul, pe de o parte n cursul degradrii progresive enzimatice, cu eliberare de energie, n catabolism, iar pe de alt parte prin utilizarea lor n diferite biosinteze ce au loc n celul. Pentru buna funcionare a acestor ci metabolice este necesar o reaprovizionare permanent cu intermediarii respectivi. n urma epuizrii materialului de la care s-a pornit, calea metabolic este frecvent reaprovizionat cu diferite substane provenite din alte ci metabolice, catalizate enzimatic, ce se desfoar simultan n celula bacterian. Cile metabolice auxiliare asigur astfel completarea deficitului cilor metabolice principale, prin aprovizionarea cu diveri compui i permit funcionarea ndelungat a acestora. Particulariti ale metabolismului bacterian Dac iniial se considera greit c bacteriile, avnd o structur simpl, au doar un metabolism rudimentar, cercetrile moderne au demonstrat caracterul remarcabil de asemntor al cilor centrale ale metabolismului la toate formele de via. Microorganismele i realizeaz activitile metabolice prin mecanisme similare cu cele implicate n metabolismul organismelor superioare. Natura i diversitatea nutrienilor folosii n metabolismul bacterian Microorganismele prezint o capacitate unic de degradare a unor substane complexe din mediu i de a sintetiza anumii metabolii, unii folositori omului. Luate ca grup, bacteriile sunt cele mai omnivore organisme din natur. i pot realiza metabolismul folosind numeroase i diverse surse de substane nutritive, ncepnd cu azotul molecular i sulful, pn la cele mai complexe substane organice (se pot dezvolta pe diferite soluii de acizi: oxalic, formic, sulfuric, pe substraturi cu fenoli, proteine, iei; pot degrada asfaltul, masele plastice, cauciucul, lemnul, parafinele, chiar i unele substane antibiotice). Aceste particulariti explic faptul c, dei n natur au fost depuse numeroase produse de uzur i de excreie, cadavre, reziduuri, acestea nu s-au acumulat, pentru c au fost descompuse de ctre microorganisme i reintroduse n circuitul elementelor biogene. n acelai timp, exist unele microorganisme care pot utiliza doar un numr limitat de nutrieni (microorganismele celulozolitice au nevoie absolut de prezena celulozei n mediul nutritiv; nitratbacteriile au nevoie de nitrii n mediu, iar unele bacterii patogene au nevoie de snge n mediul de cultur). Plasticitatea metabolismului microorganismelor

Bacteriile au capacitatea de a folosi alternativ diferite surse de azot i de carbon, n funcie de condiiile de mediu. Se adapteaz, deci, la tipul i cantitatea de nutrieni existeni n mediu. S-a demonstrat c multe bacterii considerate ca autotrofe (capabile s foloseasc substanele anorganice din mediu) pot utiliza uneori substanele organice cu complexitate diferit din mediu. Unele microorganisme heterotrofe (organotrofe) au capacitatea de a se adapta la utilizarea compuilor anorganici din mediu, atunci cnd substanele organice lipsesc. Diversitatea mecanismelor enzimatice i a produilor de metabolism Diversitatea cilor metabolice se manifest n metabolismul bacterian prin existena unor ci alternative care pot fi folosite pentru un anumit compus. n funcie de condiiile de mediu i cele intracelulare, celula bacterian poate opta pentru una dintre cile prin care un anumit substrat poate fi degradat (de exemplu glucoza poate fi degradat prin trei ci metabolice diferite). Intensitatea deosebit a metabolismului bacterian Metabolismul bacterian se caracterizeaz printr-o intensitate excepional n raport cu activitile omoloage de la organismele superioare. Astfel, activitatea respiratorie a unui gram de bacterii aerobe (greutate uscat) este de cteva sute de ori mai intens dect cea a omului. Potenialul metabolic al microorganismelor din cei 25 cm superficiali ai solului de pe o suprafa de un hectar este echivalent cu acela pentru cteva zeci de mii de oameni. Un gram de bacterii lactice hidrolizeaz circa 15000 g lactoz/or. Pentru a atinge un asemenea nivel de activitate metabolic, organismul uman ar avea nevoie de mai multe mii de tone de alimente pe or. Metabolismul bacterian deosebit de intens este corelat cu o multiplicare rapid a microorganismelor, cu producerea unei mari cantiti de biomas. n acest sens, un exemplu dat de UNESCO se refer la aceast capacitate extraordinar de sintez a bacteriilor: - la bovine un organism de 500 kg fabric n condiii normale n 24 ore aproximativ 1/2 kg de proteine; - n condiii de mediu favorabile, 500 kg de mas bacterian sintetizeaz n 24 ore 550 tone de proteine. Aceste date sunt numai teoretice, pentru c n diferite condiii concrete de mediu se mpiedic realizarea acestui uria potenial de replicare. Metabolismul bacterian deosebit de intens, unic n lumea vie, este urmarea faptului c celula bacterian prezint o suprafa foarte mare raportat la volumul i greutatea ei, favoriznd schimbul intens de substane ntre celule i mediu. Dup Luria i Stanier, ar exista o regul conform creia n natur viteza metabolismului ar fi invers proporional cu mrimea organismului.

Transportul substanelor prin membrana celulei bacteriene Membrana plasmatic reprezint o barier care asigur transportul selectiv al substanelor de la exteriorul la interiorul celulei bacteriene i invers. Este denumit i barier osmotic de permeabilitate. Principalele mecanisme de transport prin membrana plasmatic bacterian sunt: 1) difuzia pasiv este un tip de transport nespecific, reprezint o trecere lent a substanelor de la exteriorul la interiorul celulei bacteriene i invers, fr consum de energie. Trecerea este determinat de concentraie, se realizeaz de la o concentraie mare la o concentraie mic; difuzia se oprete cnd concentraia se egalizeaz. Prin difuzie pasiv sunt transportate: apa, O 2, CO2, acizii grai, substanele liposolubile. 2) mecanisme de transport cu participarea unui transportor specific (carrier) transportorul specific este situat n membrana plasmatic i este o protein cu greutate molecular ntre 30000 50000 daltoni, cu rolul de a fixa o anumit substan i de a o transporta, traversnd membrana plasmatic. Sunt 3 tipuri de astfel de mecanisme: a) difuzia facilitat se desfoar fr consum de energie i este determinat de gradientul de concentraie, dar se realizeaz cu ajutorul unei proteine transportor (carrier). Trecerea se realizeaz de la o concentraie mare la o concentraie mic, pn se produce un echilibru al concentraiilor de o parte i de cealalt a membranei. Proteina transportor are rolul de a mri viteza de difuzie a substanei n raport cu difuzia pasiv. b) transportul activ este un proces specific, care se realizeaz cu consum de energie. Se poate realiza mpotriva gradientului de concentraie, de la o concentraie mic la o concentraie mare. Astfel se produce o acumulare de substan n celula bacterian, care poate depi de cteva mii de ori cantitatea din mediul extern. Proteina transportor prezint un situs de legare specific pentru substanele respective. c) translocarea n grup se realizeaz cu consum de energie i cu participarea sistemului enzimatic fosfo-transferazic; substana transportat sufer o modificare chimic la trecerea prin membran, astfel c substana din interiorul celulei difer de cea iniial ce exista n mediu; prin acest mecanism se pot transporta: adenina, hexozele (glucoz, fructoz). Tipuri de respiraie microbian Dup comportarea fa de oxigenul atmosferic, se pot descrie 4 tipuri de microorganisme: microorganisme strict aerobe, care au ca tip de respiraie celular respiraia aerob; pentru a se dezvolta, aceste microorganisme au nevoie de oxigen molecular, folosindu-l ca acceptor final de electroni; Ex.: Bacillus subtilis, Azotobacter sp., Mycobacterium tuberculosis, microalgele, majoritatea protozoarelor

microorganisme strict anaerobe, care nu se pot dezvolta n prezena oxigenului; ele au nevoie de condiii de anaerobioz i ca tip de respiraie celular au fermentaia sau respiraia anaerob; Ex.: Clostridium tetani, Lactobacillus sp., Desulfovibrio sp. microorganisme anaerobe, facultativ aerobe, care au n general un metabolism de tip anaerob, dar pot tri i n prezena oxigenului molecular, caz n care prezint un metabolism aerob; tipul de respiraie celular este diferit, n funcie de prezena sau absena oxigenului (respiraie anaerob sau aerob); Ex.: Escherichia coli, Streptoccoccus sp., Staphylococcus sp., Saccharomyces cerevisiae microorganisme microaerofile, care au nevoie de o cantitate de oxigen mai mic dect n atmosfer pentru a se dezvolta, concentraiile mari de oxigen fiind nocive pentru ele; tipul de respiraie celular este o respiraie cu tendin spre fermentaie. Ex.: Leptospira sp., Spirochaeta sp., Thiospirillum sp.

Tipuri de nutriie la microorganisme Criteriile dup care se poate caracteriza nutriia microorganismelor sunt: natura sursei de carbon i azot i capacitatea de sintez a metaboliilor eseniali, n funcie de care microorganismele pot avea nutriie: * autotrof * heterotrof sursa de energie, n funcie de care microorganismele pot avea nutriie: * fototrof * chemotrof. Autotrofia este capacitatea de sintez a tuturor metaboliilor eseniali pornind de la substane anorganice simple ca surs de carbon i azot (CO2, NH3, NO3-, NO2-). Heterotrofia este capacitatea de a sintetiza metabolii eseniali pornind de la substane organice preformate. Bacteriile heterotrofe se pot dezvolta doar n prezena unor substane organice, care joac rol de surs de carbon i azot. Fototrofia este capacitatea de a sintetiza metaboliii eseniali cu ajutorul energiei luminoase; este caracteristic microorganismelor fotosintetizante (fototrofe), capabile de fotosintez. Dup natura donatorilor de protoni sau electroni, microorganismele fototrofe se mpart n: - microorganisme fotolitotrofe care folosesc ca donor de protoni sau electroni substane anorganice oxidabile (H2O, H2S, S, H2); se numesc i fotoautotrofe; - microorganisme fotoorganotrofe care folosesc ca donor de protoni sau electroni substane organice oxidabile; se numesc i fotoheterotrofe; Chemotrofia este capacitatea de a sintetiza metaboliii eseniali cu ajutorul energiei chimice nmagazinat n legturile chimice ale substanelor. Sursa de energie este reprezentat n acest caz de energia chimic eliberat din reaciile de oxido-reducere. Microorganismele chemotrofe se numesc i chemosintetizante, sunt capabile de chemosintez. Dup natura donatorilor de protoni sau electroni, microorganismele chemotrofe se mpart n: - microorganisme chemolitotrofe care folosesc ca donor de protoni sau electroni substane anorganice oxidabile; se numesc i chemoautotrofe; - microorganisme chemoorganotrofe care folosesc ca donor de protoni sau electroni substane organice oxidabile; se numesc i chemoheterotrofe.

Pe baza acestor clasificri, nutriia microorganismelor poate fi: Nr. cr. 1 2 3 4 Tip de nutriie Fotolitoautotrof Fotoorganoheterotrof Chemolitoautotrof Chemoorganoheterotrof Surs de energie Radiaia luminoas Radiaia luminoas Oxidarea substanelor anorganice Oxidarea substanelor organice Surs de carbon i azot Subst. anorg. (CO2,NH3) Substane organice Subst. anorg. (CO2,NH3) Substane organice Donator de protoni sau electroni Substane anorganice (H2O,H2S,S,H2) Substane organice Substane anorganice (NH3,H2S,S,H2) Substane organice Exemple Cianobacterii Bacterii sulfuroase roii i verzi Bacterii sulfuroase roii Bacterii nitrificatoare Bacterii sulfoxidante Hidrogenbacterii Majoritatea microorganismelor (bacterii, drojdii, mucegaiuri, protozoare)

CURS 5 VIRUSURILE Virusurile reprezint o categorie specific de ageni infecioi, fundamental diferii, structural i funcional, de oricare dintre organismele cunoscute. Din cauza dificultilor de observare, cultivare i studiere, foarte mult vreme au fost analizate prin prisma unor caractere evidente: filtrabilitatea, dimensiunile foarte mici, parazitismul obligatoriu intracelular, inactivarea prin cldur. Aceste caractere s-au dovedit a nu fi definitorii n raport cu ali ageni infecioi, fapt care explic ncadrarea greit i absurd a bacteriilor mici filtrabile, parazite obligatorii intracelular, ca intermediari ntre bacteriile adevrate i virusuri. Primele date referitoare la natura i caracterele specifice ale unor boli virale sunt foarte vechi, fiind consemnate n China antic (anul 2500 .e.n., despre variola uman) sau n lucrrile lui Aristotel (despre turbare). Anul 1796 marcheaz momentul primelor vaccinri antivariolice efectuate de ctre medicul englez Eduard Jenner n Anglia. Metoda vaccinrii copiilor cu puroi recoltat din leziunile bovinelor s-a extins n Asia, unde variola producea epidemii foarte grave. Ulterior aceast metod a fost abandonat n favoarea scarificrii, deoarece se puteau transmite concomitent i ali ageni patogeni, care determinau boli grave la om. n perioada 1881 -1885 Louis Pasteur a pus la punct un vaccin antirabic eficient, care, administrat la timp la persoanele mucate de animale turbate, mpiedic apariia bolii, care este letal. n 1886 Mayer a demonstrat transmisibilitatea mozaicului tutunului prin frecarea plantelor sntoase cu plante bolnave i inactivarea principiului infecios prin tratament cu alcool sau prin nclzire la 80C. El a considerat c boala este produs de un "ferment organizat". n 1892 Ivanovski confirm infectivitatea sucului acelular extras din plantele de tutun bolnave, demonstrnd multiplicarea agentului infecios n plantele sntoase, care ulterior au manifestat simptomele bolii. El consider agentul patogen ca fiind un agent viu, ultrafiltrabil, de tipul bacteriilor foarte mici. n 1898 Beijerink confirm multiplicarea i transmisibilitatea n serie a agentului patogen al mozaicului tutunului, dar i rezistena sa ndelungat n frunzele uscate de tutun i difuzibilitatea lui n agar. El ajunge la concluzia c agentul patogen nu este nici microorganism, nici toxin, ci o substan molecular special solubil, capabil s se multiplice n celulele gazd dac este ncorporat n citoplasma acestora. El l numete "contagium vivum fluidum". Toate aceste date, reconsiderate astzi, au dus la concluzia c Beijerink este descoperitorul virusurilor, deoarece el este primul care a intuit natura lor deosebit de a celorlali ageni patogeni. Recunoaterea tiinific a virusurilor ca entiti particulare se datoreaz lui Andre Lwoff, care n 1953 i n 1981 a ncercat s stabileasc ansamblul caracterelor originale ale lumii virusurilor, descriind deosebirea dintre virus i non-virus. Concluzia a fost c virusurile aparin unui grup de ageni infecioi ce posed n comun un numr important de trsturi specifice, marcnd diferene absolute, care sunt absente la toate entitile aparinnd grupului Procariota.

Nr. crt. 1 2

DEFINIREA CONCEPTULUI DE VIRUS Caracterele discriminatorii ale virusurilor i bacteriilor Caracterul VIRUSURI PROCARIOTE Tipul de organizare Unitatea de structur i funcie Stri posibile de existen organizare acelular virionul organizare celular de tip procariot celula bacterian

virionul - particula viral matur, complet, infecioas, form n care virusul se gsete la sfritul procesului de replicare n celula gazd i este eliberat n mediul exterior virusul vegetativ - genomul viral aflat liber n celula gazd, pregtit de replicare provirusul - genomul viral integrat n genomul celulei gazd
virionul cuprinde: - constitueni eseniali - genomul viral - capsida viral - constitueni accesorii: peplosul Genomul i capsida alctuiesc mpreun nucleocapsida, caracteristic virusurilor nude, neacoperite. Genomul e reprezentat de o molecul de acid nucleic, fie ADN, fie ARN, cu o greutate molecular diferit de la un virus la altul. Molecula de acid nucleic este monocatenar sau bicatenar, linear sau circular, dispus helical, mpachetat pentru a forma o structur compact. Genomul viral poart informaia genetic necesar pentru propria replicare i pentru devierea metabolismului celulei gazd n sensul sintezei de constitueni virali. Acidul nucleic viral determin infeciozitatea virusurilor. Capsida este nveliul proteic ce acoper i protejeaz genomul viral. Este alctuit din uniti morfologice de natur proteic, numite capsomere. Peplosul este un nveli extern prezent la virusurile acoperite, cu nivel complex de organizare, cu rolul de a pstra stabilitatea nucleocapsidei i de a favoriza fixarea virionului pe celula gazd. E alctuit dintr-un dublu strat lipidic, n care sunt implantate formaiuni de natur glicoproteic, numite spicule. Spiculele pot fi prismatice alungite (de exemplu hemaglutininele) sau n form de ciuperc (de exemplu neuraminidazele).

celula bacterian vegetativ, capabil de cretere i replicare sporul bacterian, form facultativ de rezisten celula bacterian cuprinde: - perete celular - membran - citoplasm - nucleoid - ribozomi - vacuole - incluzii - spori - capsul - flageli

Structura intern

Simetria la nivel molecular

simetrie constant a aranjrii moleculelor proteice n capsid: - helical - icosaedric - binar (mixt)

lipsete o simetrie molecular

Compoziia chimic - acizii nucleici - fie ADN (la dezoxiribovirusuri) - fie ARN (la ribovirusuri) - proteinele - virusurile mici au n structura capsidei un numr fix de molecule proteice de acelai fel; virusurile complexe au n capsid mai multe tipuri diferite de molecule proteice, dar numrul este limitat i fix; rolul proteinelor virale este structural i n mod excepional enzimatic; O consecin a numrului fix de proteine este dispunerea lor simetric n capsid, ntr-un mod unic. - virusurile nu au glucide i lipide, cu excepia unor proteine glicolizate; uneori sunt prezente n nveliul extern, provenind de la celula gazd n care s-au replicat, deoarece peplosul nu este codificat de genomul viral - virusurile sunt lipsite de echipament enzimatic, neputnd s i sintetizeze constituenii, s produc energie i s utilizeze resursele mediului; nu se pot cultiva pe medii acelulare; Uneori virusurile prezint enzime cu rol n replicarea genomului viral, n favorizarea ptrunderii virusului n celul sau a eliberrii din celula gazd.

- ADN n genomul bacterian - ARN n citoplasm (ribozomal, de transfer, mesager) - bacteriile au un potenial de aprox. 3-4 mii de proteine diferite, cu rol structural sau enzimatic. Numrul lor este variabil, randamentul sintezei de proteine fiind inegal, funcie de importana proteinei respective pentru celula bacterian. - glucidele i lipidele sunt prezente n mod constant n structura bacteriilor

- glucidele i lipidele

- echipamentul enzimatic

- bacteriile au n mod constant un echipament enzimatic cu grad diferit de complexitate, n funcie de nutriia bacteriilor; este mai complex la bacteriile autotrofe, se simplific la cele heterotrofe i la bacteriile parazite obligatoriu intracelular

Proprietile biologice

Virusurile nu au capacitatea de a produce energie cu potenial nalt (ATP), nu fac sinteza independent a constituenilor proprii, nu au capacitatea de a crete i de a se divide. Se reproduc obligatoriu n celula gazd vie, pornind exclusiv de la genomul viral.

Utilizarea sistemelor structurale i biochimice ale gazdei n cursul parazitismului intracelular Parazitismul absolut

Virusurile utilizeaz sistemele enzimatice, ARN de transfer i ribozomii gazdei. Pentru virusuri este constant i obligatoriu. n celulele infectate cu virusuri, metabolismul celular sufer modificri eseniale, fiind deviat n sensul sintezei constituenilor virali, pornind de la informaia genetic strin, adus de genomul viral n celul. Procesele de sintez celular continu cel puin un timp, deoarece metaboliii eseniali celulari sunt necesari n sinteza de constitueni virali. Competiia dintre virus i celula gazd are loc la nivelul diataxiei (producerea de constitueni): diataxia celular este blocat sau diminuat sub aciunea unor constitueni proteici virali din capsid sau peplos, iar diataxia viral este activ. Multiplicarea virusurilor se realizeaz prin replicare viral (replicarea informaiei genetice virale, sinteza componentelor virale, asamblarea particulelor).

Bacteriile au un metabolism energetic propriu, chiar i cnd sunt parazite intracelular; au capacitatea de a sintetiza proprii constitueni, de a crete pn la un punct critic urmat de diviziune. Multiplicarea bacteriilor e independent, pornind de la ansamblul integrat al constituenilor celulari. Bacteriile nu utilizeaz sistemele enzimatice ale gazdei, ci pe cele proprii. La bacterii parazitismul nu este absolut.

10

Multiplicarea virusurilor

Bacteriile se multiplic prin diviziune direct, fragmentare, nmugurire, prin spori.

MORFOLOGIA VIRUSURILOR Descrierea morfologic i dimensiunile unui virus se raporteaz la virion, particul viral matur, unitate integrat de structur i funcie. Din punct de vedere morfologic se disting mai multe tipuri de virioni: - virioni de form cilindric alungit, adic de bastona rigid (VMT) sau flexibil (bacteriofagii filamentoi) - virioni de form sferic (izodiametric, de exemplu virusul poliomielitei din Familia Picornaviridae) sau sferoidal (virusurile gripale, adenovirusurile, herpesvirusurile) - virioni de form paralelipipedic (poxvirusurile) - virioni cu form de cartu (virusul rabic, din Familia Rhabdoviridae) - virioni n form de cirea cu coad sau mormoloc (bacteriofagii T par). Dimensiunile virusurilor sunt submicroscopice. Cele mai mari au dimensiuni apropiate de cele ale bacteriilor foarte mici, 240 - 300 m, iar cele mai mici au dimensiuni apropiate de cele ale ribozomilor, de 25 - 30 m. Bacteriofagii cei mai mari ating 200 m.

MODELUL GENERAL DE STRUCTUR VIRAL Virionii posed doi constitueni eseniali i definitorii: genomul i capsida, care alctuiesc mpreun nucleocapsida virusurilor nude, fr nveli extern (poliovirusul, reovirusurile, adenovirusurile). Genomul viral este reprezentat de o molecul de acid nucleic, ADN sau ARN: ADN, pentru dezoxiribovirusuri (adenovirusurile, poxvirusurile, herpesvirusurile, papovavirusurile); ARN, pentru ribovirusuri (virusurile gripale, paragripale, virusul rujeolic, virusul rabic, poliovirusul, VMT). Majoritatea virusurilor infecioase pentru om, animale i plante sunt ribovirusuri. n virion genomul ribovirusurilor este asociat cu nucleoproteine i cu proteine de replicare, dar se disociaz de nucleopreoteine cnd ajunge n citoplasma celulei gazd. Majoritatea ribovirusurilor au ca genom o molecul de ARN monocatenar de polaritate pozitiv, care funcioneaz ca ARNm i este tradus n proteine fr o transcriere prealabil sau negativ, care nu este tradus direct, ci este transcris mai nti n ARNm. Numai reovirusurile au genom ARN dublu catenar. Genomul dezoxiribovirusurilor este complexat cu proteine att n starea mpachetat n virion, ct i ca genom liber n citoplasma celulei gazd. La virusurile infecioase pentru celulele animale informaia genetic are caracter discontinuu, ca i a gazdelor lor. Structura genomului este variat: o monocatenar sau dublu catenar o linear sau circular o genom segmentat, n aceeai capsid sau capside diferite. Genomul viral dublu catenar poate fi linear sau circular nchis, cu diferite grade de supraspiralizare i de condensare. Unele virusuri au informaia genetic sub form de segmente multiple ncapsidate ntr-o capsid comun sau n capside diferite, caz n care infecia se poate produce numai cnd n organismul gazd ptrund toate capsidele ce poart informaia genetic necesar replicrii virale. Avantajul genomului segmentat const n aceea c mesajele genetice mai mici sunt mai uor replicate i transmise n celula eucariot animal sau vegetal, putnd fi traduse simultan, facilitnd procesul de replicare viral. Segmentarea genomului viral reprezint un avantaj pentru supravieuirea virusurilor n natur, fiind o adaptare la celula eucariot animal sau vegetal. Una dintre particularitile virusurilor este aceea c fac economie de informaie genetic. Aceast economie este necesar datorit dimensiunilor mici ale virusurilor i se realizeaz pe mai multe ci: la virusurile mici capsida viral este format dintr-un singur tip de proteine dispuse simetric, a cror sintez este asigurat de o gen sau de puine gene; virusurile pot utiliza unele proteine din celula gazd pentru efectuarea unor funcii virale; virusurile cu un genom defectiv (care nu au n structura genomului lor genele necesare pentru codificarea proteinelor din capsid) utilizeaz informaie genetic furnizat de alte virusuri (virusuri helper), asociate cu cele defective, care suplinesc deficienele virusului principal, determinnd o sintez n exces de capsomere. Unele polipeptide capsidale ndeplinesc n acelai timp funcii structurale i funcii de reglare n procesul de replicare viral. Aceeai informaie genic poate fi folosit n mai multe

cadre de citire (citire defazat, care are o alt semnificaie genic) n procesul de translaie, cu producerea a dou sau mai multe polipeptide sub controlul aceluiai determinant genetic. Genomul viral conine informaia genetic necesar desfurrii ciclului de replicare n celula gazd sensibil: pentru replicarea genomului, pentru devierea metabolismului celulei gazd n sensul de constitueni virali, pentru sinteza proteinelor structurale i de reglare, pentru asamblarea i eliberarea din celula gazd a virionilor nou formai. Genomul viral asigur potenialul de variabilitate a virusurilor i infeciozitatea acestora. Capsida viral este un nveli proteic, cu o structur difereniat n funcie de tipul de virus. Unitatea structural a capsidei este capsomera, care este alctuit dintr-un lan polipeptidic sau un agregat de catene polipeptidice identice sau diferite. Capsomerele sunt cele mai mici uniti structurale vizibile la microscopul electronic. n funcie de dispunerea capsomerelor, virusurile prezint trei tipuri de simetrie: helical (helicoidal), icosaedric, mixt (binar). La virusurile cu simetrie helical capsomerele sunt formate dintr-un singur polipeptid (sunt monomere), reprezentnd att unitatea morfologic, ct i unitatea structural a capsidei. La virusurile cu simetrie icosaedric, capsomerele sunt alctuite din mai multe tipuri de proteine (sunt oligomere), ele reprezentnd numai unitatea morfologic a capsidei, alctuit din mai multe uniti structurale. Capsomerele pot fi pentoni (conin 5 subuniti de structur, sunt pentamere) sau hexoni (conin 6 uniti de structur, sunt hexamere). Rolul capsidei virale este acela de a proteja materialul genetic viral de degradarea produs de nucleazele celulare, de a contribui la fixarea i ptrunderea virusului n celula gazd, de a determina spectrul de gazd a virusului prin specificitatea interaciunii capsidei virale cu receptorii specifici complementari prezeni pe suprafaa celulei gazd. Capsida viral conine determinani antigenici responsabili de producerea rspunsului imun n organismele infectate. nveliul extern (peplosul) este derivat din membrana celular cnd virusul prsete prin nmugurire celula gazd n care s-a replicat. Este o structur accesorie, caracteristic virusurilor "acoperite". n structura peplosului intr un dublu strat fosfolipidic provenit din membrana celular, n care sunt implantate proteine proprii celulei gazd i proteine specific virale, codificate de genomul viral. Lipidele din nveliul extern sunt diferite, n funcie de celulele n care s-a replicat virusul. La nivelul peplosului se gsesc formaiuni de natur glicoproteic, numite spicule, de form prismatic sau de buton, care sunt codificate de genomul viral. Proteina din componena spiculelor este de natur cert viral, glicolizarea fiind efectuat de celula gazd n timpul parcurgerii drumului intracelular de la locul de sintez pn la suprafaa celulei de ctre proteina viral. Semnificaia biologic a capsidei i a peplosului Capsida viral este o structur ce protejeaz genomul viral i particip la infectarea celulei gazd. nveliul extern consolideaz funciile capsidei, asigurnd stabilitatea nucleocapsidei, iar spiculele favorizeaz faza de adsorbie a virusurilor pe celula gazd i ptrunderea acestora n celul.

n componena virusurilor intr 3 tipuri de proteine: proteinele capsidale, cu greutate molecular de 12 - 110 kdal; la cele mai multe virusuri ele sunt identice, la altele sunt diferite; proteine interne, situate n interiorul nucleocapsidei virale, alctuind mpreun cu acidul nucleic viral corpul central (nucleoidul viral); rolul lor este de a menine genomul viral n form condensat; proteine cu rol enzimatic, prezente la unele virusuri animale; existena acestor enzime nu infirm faptul c virusurile nu au echipament enzimatic de biosintez, ele avnd rol n replicarea genomului viral. Exemple: ARN-polimeraza poxvirusurilor i a virusului gripal este o transcriptaz ce sintetizeaz ARN pe matri de ADN; ARN-polimeraz ARN - dependent realizeaz sinteza de ARN pe matri de ARN; neuraminidaza virusului gripal, localizat la nivelul spiculelor din nveliul extern, degradeaz mucoproteinele i receptorii celulari de la nivelul cilor respiratorii ale animalelor, favoriznd infecia viral; reverstranscriptaza este o ADN polimeraz ARN - dependent prezent la virusurile ARN oncogene (HIV, retrovirusuri). MULTIPLICAREA VIRUSURILOR Multiplicarea virusurilor (replicarea viral) are loc exclusiv n celula gazd vie, care le furnizeaz materialul de construcie (aminoacizi, baze nucleice, polizaharide) i dispozitivul celular de biosintez (ribozomi, sisteme generatoare de energie, ARNt). Aceast comportare corespunde parazitismului absolut pe care virusurile l exercit asupra celulei gazd. Virusul invadant introduce n celula gazd informaia specific a genomului su i deviaz metabolismul celulei, pe care l folosete pentru propriile biosinteze. Replicarea virusurilor este rezultatul activitilor celulei infectate, care urmeaz programul genetic adus de virus. Replicarea decurge ntr-o serie de etape succesive: - Adsorbia i fixarea reversibil a virusurilor pe celul este o consecin a ciocnirilor ntmpltoare ntre virusuri i celul, proces nespecific, reversibil. Este determinat de atracia ionic, eficiena procesului fiind dependent de numrul de virioni din suspensia viral. - Fixarea ireversibil a virusurilor pe celul este un proces ireversibil, datorat diferitelor grade de specificitate a fixrii virusului pe celula gazd; este determinat de complementaritatea geometric i electrostatic ntre structurile de pe suprafaa virusurilor i receptorii specifici de virus de pe suprafaa celulelor, care recunosc aceste structuri. Cea mai mare specificitate de fixare exist ntre bacteriofag i bacterie, cea mai mic ntre virusul vegetal i celula vegetal (aceasta nu are receptori pentru virus). Virusurile animale prezint citotropism pentru anumite tipuri de celule, pe care le infecteaz.

Ptrunderea virusurilor n celul se face diferit: virusurile animale ptrund integral prin endocitoz (viropexie) sau fuziune; virusurile vegetale ptrund prind leziunile mecanice ale peretelui celular; bacteriofagii i injecteaz genomul n interiorul celulei bacteriene. Endocitoza este un proces similar pinocitozei. Decapsidarea i eclipsa reprezint eliberarea genomului viral de nveliul proteic, pentru ca acesta s se poat replica. Capsomerele sunt dezintegrate i trec n rezerva celular, iar genomul viral eliberat de capsid reprezint virusul vegetativ. n aceast faz virusul nu se poate evidenia la microscopul electronic. Migrarea intracelular pn la locul de replicare se poate face direct (transmembranar) sau indirect prin structuri canaliculare preformate. La virusurile care se replic n nucleu, aceast faz dureaz mai mult dect la cele care se replic direct n citoplasm. Sinteza proteinelor timpurii se realizeaz pornind de la genomurile virale infectante (iniiale), sub controlul genelor precoce din genomul viral. Ele sunt proteine de reglare, enzimatice (cu rol n replicarea genomului) i proteine de matrice (care delimiteaz matricea n care va avea loc replicarea acidului nucleic viral i morfogeneza viral). Replicarea genomului viral este o etap complex, n funcie de structura genomului viral. n urma acestei faze rezult mii de genomuri virale progene. Sinteza proteinelor tardive se realizeaz pornind de la genomurile progene, nu de la cele parentale; ele sunt proteine structurale, de reglare, de morfogenez (eafodaj) i proteine care faciliteaz eliberarea virusurilor din celul. Se sintetizeaz n numr mare, deoarece vor constitui viitoarele virusuri mature. Morfogeneza viral se realizeaz prin autoasamblarea componentelor virale sau prin depunerea simetric a acestora pe suprafaa unor proteine de morfogenez. Eliberarea virusurilor din celul este lent sau exploziv. Eliberarea exploziv este caracteristic n special celulelor bacteriene infectate cu bacteriofagi i duce la liza celulelor n momentul eliberrii virusurilor progene. Eliberarea prin nmugurire (lent) este caracteristic virusurilor nvelite, celula gazd fiind meninut n stare viabil pn se elibereaz toi virionii formai. Se pot forma 5 - 6 muguri n acelai timp. nveliul extern viral poart constitueni ai membranei celulare, membrana refcndu-se dup desprinderea virusurilor cu peplos.

CURS 6 ECOLOGIA MICROORGANISMELOR. MICROORGANISMELE N HABITATELE LOR NATURALE Cele mai multe cunotine referitoare la activitatea microorganismelor n natur au fost deduse din studierea lor n condiii de laborator. Ulterior au fost efectuate studii n mediile naturale cu metode progresiv perfecionate. nelegerea proceselor realizate de microorganisme n natur implic efectuarea de studii asupra microorganismelor aparinnd unei singure specii (efectul acesteia asupra mediului nconjurtor, dar i impactul mediului asupra lor), dar i asupra populaiilor, comunitilor sau sistemelor de microorganisme (complexul de microorganisme i asocierea speciilor cu componentele abiotice ale mediului). Solul ca mediu natural pentru microorganisme Solul este considerat ca un complex de substane (surse de nutrieni i energie pentru unele organisme), descris ca un sistem dinamic cu trei faze: solid, lichid i gazoas. El este rezultatul dezagregrii rocilor sub aciunea factorilor fizici, chimici i biologici. Faza solid a solului, care reprezint aproximativ 1/2 din volumul acestuia, e alctuit din: - substane minerale: roci vulcanice (granit, bazalt), roci sedimentare (gresie, marn, isturi argiloase, calcare), roci metamorfice (isturi cristaline); - substane organice: resturi organice neanimate, provenite din litier, lemn, rdcini, organisme i microorganisme, dar i fragmente aflate n diferite grade de descompunere. Diferitele substane cu rol de nutrieni se gsesc n stare solubil, insolubil sau sunt adsorbite pe diferite substraturi. Faza lichid e reprezentat de apa din porii solului i de pe suprafaa particulelor de sol, care conine diferite substane organice sau minerale dizolvate ori n suspensie (soluia solului). Faza gazoas corespunde aerului prezent n porii liberi din sol i are fa de aerul atmosferic mai mult CO2 i mai puin O2. Factorii de mediu care influeneaz numrul, activitatea i natura microorganismelor din sol sunt: - apa i umiditatea asigurat de aceasta; solurile foarte uscate i cele foarte umede limiteaz dezvoltarea microorganismelor. Bacteriile devin inactive cnd solul argilos conine mai puin de 12% ap. Fungii sunt mai rezisteni la uscciune (de aceea unele boli fungice sunt limitate la anumite regiuni); - aerarea nu este uniform n sol, de aceea solul este o colecie de microhabitate aerobe i anaerobe;

temperatura este variabil n straturile de la suprafaa solului, datorit razelor solare, prezentnd variaii diurne i sezoniere; pH-ul solului este cuprins ntre 4,8 8,5 i este influenat de activitatea microorganismelor din sol (de exemplu degradarea litierei poate determina un pH acid); adncimea solului influeneaz densitatea microorganismelor prin variaia concentraiei de O2, CO2, a nutrienilor, a umiditii. Frecvena microorganismelor n sol scade cu adncimea, cele mai multe se gsesc n stratul de suprafa.

Microbiota din sol Solul constituie un habitat favorabil dezvoltrii microorganismelor (bacterii, fungi, alge, protozoare), care se gsesc aici n numr mare. Multe dintre microorganismele din sol nu sunt fiziologic active la un moment dat, datorit faptului c substanele nutritive din sol sunt limitate. Microorganismele din sol intervin n aproape toate reaciile chimice care au loc la acest nivel, jucnd un rol activ n fertilitatea solului, ca rezultat al implicrii lor n ciclul nutrienilor necesari pentru creterea plantelor. Unele microorganisme din sol sunt responsabile de descompunerea materiei organice ajunse n sol i n reciclarea nutrienilor. Fungii din micorize cresc disponibilitatea nutrienilor minerali pentru plante. Bacteriile fixatoare de azot mresc cantitatea de nutrieni din sol. Astfel de microorganisme pot fi utilizate ca biofertilizatori. Alte microorganisme sintetizeaz i elibereaz n sol substane de tipul vitaminelor, care mbuntesc sntatea plantelor i productivitatea; aceste microorganisme sunt considerate fitostimulatori. Exist n sol i microorganisme duntoare pentru plante, pe care le infecteaz prin rdcini. Fa de aceti ageni patogeni, microorganismele autohtone (considerate biopesticide) au de obicei aciune antagonist, care se manifest prin competiia pentru nutrieni, prin producerea de substane inhibitoare ca metabolii secundari sau enzime extracelulare, sau prin sinteza de substane care stimuleaz mecanismele de aprare natural ale plantei i mresc rezistena la patogeni. Microorganismele din sol sunt capabile s supravieuiasc unor condiii extrem de variabile de temperatur, umiditate, pH, resurse nutritive i de energie, de concentraii de sare i de oxigen. Ele au un rol complex n formarea structurii solului, condiionat n esen de capacitatea lor de a produce polizaharide sau alte materiale aderente, contribuind la n stabilizarea structurii solului. Habitatul microorganismelor este reprezentat de porii solului. Acetia pot fi pori fini (cu diametrul mai mic de 0,2m), care rein apa inaccesibil plantelor, pori mijlocii (cu un diametru ntre 0,2 10m), care nmagazineaz apa disponibil organismelor vii sau pori mari (cu diametrul mai mare de 50m), care au un rol esenial n aeroreglare. Micropopulaiile din sol sunt alctuite din bacterii (eubacterii, actinomicete, cianobacterii), microfungi, alge i protozoare. Winogradski (1949) a propus mprirea microorganismelor din sol n dou categorii:

microorganisme autohtone (permanente, constante, indigene), care sunt numeroase i caracteristice unui anumit tip de sol. Ele cresc lent, fiind perfect adaptate la viaa din solul lipsit de procese de fermentaie sau putrefacie a materiei organice. Nu prezint fluctuaii numerice semnificative i nu depind de surse exogene de nutrieni. - microorganisme zimogene (temporare sau de fermentaie), care au o activitate periodic, intermitent, cu faze de activitate i de repaus. Ele nu sunt capabile s degradeze substane complexe din sol, dezvoltndu-se pe substane organice uor utilizabile, provenite de la exterior. n mod obinuit sunt puin numeroase, dezvoltndu-se luxuriant dac se adug substane organice exogene, dup epuizarea crora numrul lor scade brusc. Cele dou categorii de microorganisme nu pot fi ns cert separate. Unii cercettori susin c microorganismele zimogene provin de la exterior odat cu resturile organice ajunse n sol, n timp ce alii susin c ele ar fi microorganisme heterotrofe autohtone, care sunt permanent prezente n sol n stare latent. Acetia din urm consider c microorganisme alohtone sunt numai cele patogene pentru plante, animale i om, care ajung n sol odat cu esuturile animale sau vegetale infectate i care nu gsesc aici dect condiii de supravieuire temporar, nu de multiplicare. Bacteriile sunt cele mai mici, mai numeroase i mai diverse microorganisme din sol (ca form, modalitate de nutriie, condiii de supravieuire). Predomin bacteriile Gram negative. Bacteriile prezint un pleomorfism accentuat fa de morfologia descris drept clasic. Valorile medii determinate prin diverse metode ar fi de 10 6109 celule/g sol uscat prin tehnica de cultivare a celulelor viabile, ajungnd pn la 10 10 celule prin determinarea numrului total de celule (vii i moarte). De cele mai multe ori, bacteriile se gsesc sub form de microcolonii pe diferite resturi vegetale, adsorbite pe argile i pe humus. Tehnicile de apreciere a numrului de bacterii din sol prin cultivare n laborator reflect n general numai 1 10% din situaia real, deoarece nici un mediu de cultur nu poate satisface enorma diversitate a exigenelor lor nutriionale (Mihescu, 2000). n sol se gsesc bacterii implicate n circulaia carbonului, azotului (Nitrosomonas, Nitrobacter, Azotobacter, Rhizobium), fosforului (Bacillus megaterium), sulfului (Thiobacillus thiooxidans, Desulfovibrio), fierului (Gallionella, Siderocapsa), bacterii implicate n formarea i degradarea humusului, n solubilizarea compuilor organici i anorganici, inaccesibili plantelor. La acestea se adaug microorganisme heterotrofe, relativ constante n toate solurile: Acinetobacter, Achromobacter, Agrobacterium, Alcaligenes, Arthrobacter, Bacillus, Brevibacterium, Cellulomonas, Chromobacterium, Clostridium, Corynebacterium, Flavobacterium, Micrococcus, Mycobacterium, Pseudomonas, Sarcina, Staphylococcus, Streptococcus, Xanthomonas. Bacteriile din sol particip la procesele de mineralizare, eseniale pentru nutriia plantelor i asigurarea fertilitii solului. Prin polizaharidele extracelulare particip la agregarea particulelor de sol i la formarea humusului.

Actinomicetele sunt n numr de 105 108 celule/g sol i sunt prezente n sol de regul sub form de spori, fiind mai numeroase n straturile de la suprafaa solului. Sunt filamentoase, nu se dezvolt dac pH-ul scade sub 5,0; prefer solurile bogate n substane organice. Actinomicetele se caracterizeaz printr-o rezisten deosebit la uscciune. Se dezvolt lent, heterotrof, utiliznd surse de carbon simple sau complexe (glucide, acizi organici, polizaharide, hidrocarburi alifatice, aminoacizii, peptonele). Degradeaz celuloza (Streptomyces violaceus, Streptomyces cellulosae ), lignina, chitina, parafinele, fenolii. Cele mai frecvente specii aparin genurilor: Actinomyces, Actinoplanes, Nocardia, Streptomyces. Actinomicetele au rol n mineralizarea compuilor rezisteni la aciunea bacteriilor i fungilor (chitina), contribuie la formarea humusului i produc o gam larg de substane antibiotice (streptomicin, kanamicin, micostatin), contribuind ntr-o mare msur la echilibrul microbian al solului. Unele dintre ele sunt fitopatogene. Cianobacteriile se dezvolt n stratul superior, iluminat al solului. Se pot dezvolta i la ntuneric, chemoorganotrof, transformnd compui organici simpli, eseniali pentru fertilitatea solului. Dintre cianobacterii, mai frecvent ntlnite n sol sunt cele din genurile: Anabaena, Calothrix, Chrococcus, Nodularia, Nostoc, Oscillatoria, Phormidium, Plectonema, Scytonema.
Fungii reprezint o parte important din biomasa microbian din sol, datorit creterii hifale, dar numrul lor este mai mic dect cel al bacteriilor. Se apreciaz c numrul unitilor fungice variaz ntre 20.000 i 1.000.000/g de sol. Dup unii autori, fungii din sol aparin la peste 600 de specii, din clasele Phycomycetes, Ascomycetes, Fungi Imperfecti; foarte frecveni sunt cei din genurile: Mucor, Rhizopus, Pythium, Chaetomium, Morchella, Alternaria, Aspergillus, Cladosporium, Fusarium, Penicillium. Ciupercile sunt microorganisme cu metabolism predominant aerob, adaptate s triasc pe substraturi cu un coninut relativ mare de substan bogat n energie i coninut redus de azot mineral. Sunt microorganisme libere sau asociate cu rdcinile plantelor. Degradeaz o gam larg de substane organice (proteine, celuloz, lignin), printr-un proces mai lent dect cel bacterian, desfurat n mai multe etape. Cnd nutrienii lipsesc, trec n stare de laten. Prefer mediile neutre sau acide. Unele ciuperci sintetizeaz antibiotice active asupra bacteriilor, ciupercilor, chiar i substane toxice sau cancerigene. Alte ciuperci sunt patogene pentru plante. Algele sunt abundente n habitatele umede i iluminate de la suprafaa solului i pn la adncimea de civa centimetri. Activitatea lor e puin semnificativ pentru transformrile biochimice din sol. Algele verzi sunt mai frecvente n solurile acide ( Chlorella, Chlamydomonas, Pleurococcus, Ulothrix). Unele specii sunt specifice pentru sol (de exemplu Chlorococcus humicola). Dezvoltarea intens a algelor pe suprafaa solului umed l mbogete n materie organic rezultat prin fotosintez. Protozoarele din microbiota permanent sunt prezente mai ales la suprafaa solului umed i n stratul superficial (pn la 15 cm). Numrul lor variaz ntre 10.000 3.000.000/g sol, dar ca biomas sunt mai importante dect bacteriile. Pot prezenta fluctuaii mari de la o zi la alta, n funcie de temperatur, umiditate, disponibilitatea nutrienilor. Unele protozoare utilizeaz compui organici solubili, altele au nutriie de tip animal, ingernd materie organic complex (bacterii, alge sau chiar protozoare). Cele mai rspndite protozoare din sol fac parte din clasa Sarcodina ( Acanthamoeba, Amoeba, Nuclearia), clasa Flagellata (fitomastigofore i zoomastigofore) i din clasa Ciliata (Balantidium, Colpidium, Oxytricha, Vorticella ). Protozoarele au rol n meninerea echilibrului biologic al solului, corelat cu capacitatea lor de a ingera i distruge o serie de bacterii.

Zona de interaciune ntre rdcinile plantelor i sol este reprezentat de rizosfer. Rizosfera este definit cu ambiguitate, drept regiunea din sol care conine rdcinile unei plante i microorganismele care le nsoesc. Rizosfera se poate extinde cu 2 cm de la suprafaa rdcinii n teritoriul bogat n nutrieni (aminoacizi, glucide, vitamine) pentru care competiioneaz microorganismele permanente din sol. Limitele rizosferei depind de cantitatea de substane exudate din rdcini, de proprietile fizice i chimice ale solului, care influeneaz numrul i natura microorganismelor. Rizosfera este o regiune periradicular care conine un gradient de microorganisme i de activiti mai importante n solul adiacent sistemului radicular, diminund progresiv pe msur ce distana fa de acesta crete. n rizosfer are loc o intens activitate microbian, care influeneaz creterea plantelor. Frecvent bacteriile de pe rdcinile plantelor sunt asociate cu hifele fungilor. Rdcinile plantelor elibereaz un exudat cu o compoziie complex, cu efect stimulator, descris sub denumirea de efect de rizosfer. Cele mai frecvente substane din exudat sunt glucidele (glucoz, fructoz, xiloz, maltoz, rafinoz, arabinoz, zaharoz), aminoacizii (alanin, acid aspartic, glicocol, leucin, valin, serin, fenilalanin, cistein, metionin, lizin, triptofan, treonin), acizii organici (acetic, propionic, butiric, oxalic, citric, tartric, fumaric, glicolic, malic, succinic), vitaminele (biotin, tiamin, niacin, acid pantotenic, piridoxin, mezoinositol), factorii de cretere (auxine). Prezena microorganismelor stimuleaz producerea de exudate. Rizosfera stimuleaz multiplicarea bacteriilor i fungilor. Bacteriile din rizosfer sunt reprezentate predominant de bacili Gram negativi i de un numr mic de coci, bacili i bacterii pleomorfe Gram pozitive. Numrul bacteriilor din rizosfer este estimat la 5x106 1x109 celule/g sol. Microorganismele exercit asupra plantelor numeroase efecte, unele benefice, altele negative. Diferitele grupe de microorganisme din sol produc variate procese biochimice, care au o influen direct asupra productivitii i dezvoltrii plantelor. Microorganismele faciliteaz absorbia nutrienilor din sol, mai ales atunci cnd acetia sunt factori limitani pentru cretere. Desfoar permanent o aciune de reciclare i solubilizare a nutrienilor minerali. n ceea ce privete activitatea biochimic a bacteriilor din sol, pot fi descrise urmtoarele procese biochimice: - descompunerea aerob i anaerob a celulozei , de ctre bacterii celulozolitice; - descompunerea aerob i anaerob a substanelor proteice i a altor compui organici azotoi este realizat de bacterii i ciuperci din sol; se realizeaz de ctre bacteriile nitrificatoare (nitribacterii i nitratbacterii); - reducerea azotailor la azot molecular este realizat de ctre bacterii denitrificatoare i are un efect negativ asupra plantelor, deoarece azotul asimilabil se transform n azot atmosferic inaccesibil plantelor; pentru evitarea acestui proces solul trebuie bine lucrat; - fixarea azotului atmosferic este produs de bacteriile fixatoare de azot,care folosesc drept surs de carbon substane organice fr azot, fixnd azotul din atmosfer i utilizndu-l pentru sinteza diferitelor componente celulare. O parte din azotul fixat este eliberat n mediul ambiant, iar o parte este mineralizat, dup moartea bacteriilor, de ctre bacteriile de putrefacie i

trece ntr-o form accesibil plantelor superioare. Rolul bacteriilor fixatoare de azot n bilanul compuilor azotoi este deosebit de mare. Bacteriile fixatoare de azot pot fi bacterii libere ( Azotobacter, Clostridium) sau simbiotice (Rhizobium). - formarea i descompunerea substanelor humice din sol se realizeaz n urma activitii vitale a diferitelor microorganisme din sol (bacterii, actinomicete, ciuperci), care determin nu numai structura solului, ci i rezervele humice din sol. - transformrile compuilor sulfului i fosforului sunt realizate n general de bacterii, care descompun proteinele elibernd sulf sub form de hidrogen sulfurat i fosfor sub form de acid fosforic. Aceti compui pot fi oxidai de sulfobacterii i de tiobacterii, transformnd hidrogenul sulfurat toxic n sulfai accesibili plantelor. - oxidarea hidrocarburilor se realizeaz sub aciunea microorganismelor pn la CO2 i ap; - metabolizarea polizaharidelor se realizeaz sub aciunea a numeroase enzime; bacteriile secret la exterior enzime care scindeaz polizaharidele n molecule mai mici, metabolizate apoi intracelular (amidonul sub aciunea amilazelor extracelulare este transformat n maltoz, iar aceasta, sub aciunea maltazei, n glucoz). Enzimele capabile s descompun mono i oligozaharidele sunt frecvente n lumea microbian, mai rar se ntlnesc enzimele capabile s descompun polizaharidele. De exemplu, amidonul este descompus de ctre o microbiot nespecific, n care bacteriile anaerobe din genul Clostridium sunt foarte active. Interaciunile nutriionale cele mai cunoscute dintre plante i microorganisme sunt cele de tipul simbiozelor (simbioze fixatoare de azot i micorize). Fungii din micorize exercit un efect benefic asupra plantelor prin stimularea creterii i ramificrii rdcinilor, creterea rezistenei la infecii, explorarea unui volum mai mare de sol prin dezvoltarea hifelor. Microorganismele pot exercita efecte negative asupra plantelor atunci cnd intr n competiie cu acestea pentru factorii nutritivi minerali sau pentru oxigen, cnd intensific activitatea unor ageni patogeni sau produc substane fitotoxice. Rolul microorganismelor este determinat nu att de greutatea lor, ct de suprafaa lor activ, care vine n contact cu solul. Noiuni de microbiologia apelor Mediile acvatice naturale se clasific n funcie de natura habitatelor caracteristice i n funcie de concentraia n sruri. n funcie de natura habitatelor caracteristice, apele se mpart n: - ape de suprafa (medii adecvate pentru numeroase microorganisme): ape dulci stagnante (lentice): bli, lacuri, mlatini curgtoare (lotice): izvoare, ruri, fluvii ape marine i oceane - ape subterane (freatice sau acvifere).

n funcie de concentraia n sruri, apele naturale se mpart n: - ape dulci (0 1g/l) - ape salmastre (1 25 g/l) - ape srate (25 50 g/l) - ape foarte srate (peste 50 g/l). n apele deschise i la distan de sol sau sedimente, densitatea microorganismelor este rareori semnificativ pentru o contribuie eficient n ecosistem. Cele mai multe bacterii nu triesc libere n apele naturale, ci sunt legate de plancton, de detritusuri sau sunt agregate. n apele marine microorganismele sunt rspndite pe suprafee mari datorit curenilor orizontali i verticali i prin amestecul apelor de suprafa produs de vnt. Microorganismele din apele dulci au mai multe caractere comune cu cele din sol dect cu cele din apele marine. Apele curgtoare transport frecvent microorganisme din sol la distane mari. Ajunse n mediul marin, acestea nu supravieuiesc, deoarece factorii de mediu le sunt nefavorabili (salinitatea, temperatura, presiunea, diluia nutrienilor). Apele freatice sunt lipsite de obicei de microorganisme, deoarece acestea sunt reinute n straturile superioare ale solului. Factorii care influeneaz prezena microorganismelor n mediile acvatice sunt: 1. Lumina reprezint un factor esenial pentru asigurarea vieii n ecosistemele acvatice. n funcie de gradul de turbiditate a apei, lumina poate fi util pentru fotosintez numai pe o adncime de civa metri, iar n largul oceanelor pe o adncime pn la 200m. Zonele mai puin iluminate sunt populate de bacterii fototrofe anaerobe purpurii i verzi, care fac fotosintez anoxigenic, utiliznd H2S i diferii compui organici ca donori de H2 i cantiti foarte mici de lumin. Microorganismele fototrofe mobile i pot regla poziia n coloana de ap, datorit fenomenelor de fototaxie. Lumina foarte intens poate produce efecte inhibitorii sau distructive asupra microorganismelor din straturile superficiale ale apelor, care ar explica numrul redus de bacterii la suprafaa apelor oceanice clare. Microorganismele care conin pigmeni carotenoizi sunt protejate de efectele nocive ale radiaiilor. 2. Temperatura este rspunztoare de ncetinirea activitilor metabolice. La suprafaa apei mrii ea se apropie de 28C la tropice i de punctul de nghe la poli. n funcie de nivelul termic s-a realizat o zonare ecologic a apelor: psihrosfera e reprezentat de regiunile cu temperaturi sub 10C, iar termosfera cuprinde regiunile mai calde. Mediul marin este populat cu microorganisme psihrofile, care cresc lent pe medii nutritive la 0 - 5C, dar se dezvolt mai repede la 20 - 25C. 3. Presiunea hidrostatic crete linear cu adncimea (1atm la fiecare 10m) i influeneaz natura microorganismelor i procesele biologice din mediul marin, proprietile fizico chimice ale apei (gradul de ionizare, pH-ul i vscozitatea), structura teriar i cuaternar a proteinelor, morfologia bacteriilor, solubilitatea i viteza de transport a nutrienilor prin membranele celulare. Microorgansmele alohtone nu se pot dezvolta sub 200m. Bacteriile din marile abisuri (de la 500m adncime) nu cresc la presiuni mai mici de 350atm. Barofilele sunt frecvente n habitatele bogate n nutrieni (dejecii ale animalelor marine, carcasele lor n curs de descompunere), mrind rata de descompunere a substanelor organice din adncuri, a cror mineralizare este completat de microorganismele oligotrofe.

Turbiditatea apei este determinat de materia vie i nevie aflat n suspensie i care duce la formarea sedimentelor. Ea condiioneaz adncimea pn la care radiaiile solare pot asigura procesul de fotosintez. 5. Curenii determin importante efecte ecologice ale apelor, producnd amestecul unor mase importante de ap, amestecul nutrienilor i o redistribuire a microbiotei. 6. Gazele dizolvate n apele naturale sunt n concentraii mici i sunt reprezentate de CO2, O2, N2 i uneori de H2S, H2, CO. Dioxidul de carbon i are originea n atmosfer i n respiraia organismelor acvatice, este necesar pentru fotosintez, variaiile sale fiind corelate cu valorile pH ale apelor naturale. Se poate gsi n stare liber, sub form de carbonat i bicarbonat. Oxigenul provine din atmosfer i este produs prin fotosinteza oxigenic a algelor i cianobacteriilor. Concentraia sa este mare n apele curgtoare, scade cu adncimea i n apele lente i stagnante. n lacurile adnci i n mri concentraia sa se coreleaz invers cu cea a CO2. 7. Salinitatea difereniaz net apele dulci de cele marine i oceanice i influeneaz natura microorganismelor care le pot popula. Puine microorganisme sunt comune ambelor tipuri de ape. Concentraii extreme de sruri se gsesc n Marea Moart (n special sub form de NaC i MgCl). Salinitatea apelor oceanelor este relativ constant. Aproximativ 99% din srurile dizolvate sunt formate prin combinarea a 1012 ioni anorganici (Cl-, Na+, Mg2+, K+, SO42-, HCO3-, CO32-), la care se adaug Fe, Mn, Cu, Zn, Mb. Microorganismele din apele dulci sunt halofobe, care transferate n mediul marin mor ntr-o perioad scurt de timp; cele halotolerante supravieuiesc n mediul marin, dar cresc mai lent dect n mediul lor natural; microorganismele halofile, autohtone n mediul salin, nu se dezvolt n apele dulci, prefernd o salinitate de 2,5 4%. Majoritatea microorganismelor halofile nu au nevoie de o presiune osmotic crescut a mediului, ci unele au nevoie absolut de Na+, iar altele de Cl-. Devierea de la salinitatea optim are consecine negative asupra bacteriilor, producnd modificri morfologice sau fiziologice (celulele cocoide i cele bacilare devin filamentoase, durata unei generaii este prelungit). Halofilia este frecvent ntlnit la alge, cianobacterii i la bacteriile care fac fotosintez anoxigenic. Bacteriile chemoheterotrofe marine autohtone sunt reprezentate de genuri ca: Vibrio, Alteromonas, Alcaligenes, Pseudomonas. Durata unei generaii n cazul bacteriilor oligotrofe este de 4 8 ore. Incapacitatea lor de a se dezvolta pe medii bogate n nutrieni s-ar datora probabil producerii unor metabolii toxici. Microbiota apelor curgtoare n izvoare microbiota este foarte redus, format din microorganisme provenite din apele freatice sau din straturile de sol splate n trecerea spre suprafa. Sunt prezente n special bacterii Gram negative (Pseudomonas) i forme prostectae (Caulobacter). Izvoarele termale, acide sau srate, au temperaturi de peste 50C, care permit dezvoltarea numai a microorganismelor procariote.

4.

Izvoarele minerale care conin, de exemplu, compui ai Fe, sunt populate de ferobacterii (Gallionella). Rurile prezint un numr mare de factori variabili (viteza de curgere, debitul, adncimea, coninutul mineral). Cursul superior este mai pur i mai clar, cu grad ridicat de oxigenare, rapid, cu temperatur i grad de productivitate reduse. n cursul mijlociu ncep s se manifeste influene antropogene. Cursul inferior este lent, cu turbiditate crescut, depunere de sedomente, putnd fi poluat cu pesticide, ape uzate, ngrminte, metale grele, compui toxici. Dup gradul de poluare apele pot fi: oligosaprobe (cu coninut redus de substan organic i concentraie mare de oxigen), mezosaprobe (cu grad mediu de poluare i diminuarea concentraiei de oxigen), polisaprobe (cu grad mare de poluare i concentraie redus de oxigen). Microbiota rurilor este heterogen, n funcie de condiiile locale. Microorganismele alohtone provenite din sol i din diferite surse de contaminare se adaug celor autohtone. Cele alohtone nu supravieuiesc deoarece nu se pot adapta la condiiile oligotrofe i sunt sensibile la aciunea radiaiilor UV i a bacteriofagilor. Lacurile sunt: oligotrofe, eutrofe (mai puin adnci i eutrofe -bogate n nutrieniconinnd un numr mare de organisme saprobionte; microorganismele aerobe sunt treptat nlocuite cu cele anaerobe, bacterii sulfat reductoare i sulfuroase incolore), distrofice (ape cu o cantitate mare de substane organice dizolvate i fragmente de esuturi vegetale). Lacurile cu ap dulce au o microbiot heterogen: eubacterii, actinomicete, cianobacterii, microfungi, microalge, protozoare. Lacurile cu ap srat sunt populate de un numr redus de bacterii halotolerante i n special halofile, care conin frecvent vacuole cu gaze ce le permit deplasarea pe vertical i pigmeni carotenoizi cu rol protector fa de intensitatea mare a luminii solare. Mediul marin este unic prin suprafaa i volumul foarte mari, salinitatea relativ mare, temperatura sczut i un gradient de presiune n raport cu adncimea. Microbiota marin este alctuit din: - microorganisme autohtone, permanente, adaptate la condiiile mediului marin; - microorganisme alohtone, temporare, care contamineaz mrile provenind din sol, aflueni, ambarcaiuni, fiind frecvente n zonele litorale i supravieuind scurt vreme; - microorganisme ubicvitare, care sunt comune solului i mediului marin (de exemplu Welchia perfringens). Bacteriile marine nu se dezvolt sau se dezvolt slab n absena NaCl, sunt oligotrofe, psihrofile, cu excepia celor din apele de suprafa. n funcie de habitat sunt barofobe, barotolerante sau barofile, sunt frecvent cromogene. Majoritatea sunt Gram negative, mobile, aerobe, facultativ anaerobe, iar cele din adncul sedimentelor sunt obligat anaerobe. Pot fi fototrofe, chemoautotrofe sau heterotrofe. Se ncadreaz n grupele funcionale de bacterii nitrificatoare i denitrificatoare, sulf-oxidante i sulfat-reductoare, ferobacterii, bacterii proteolitice, chitinolitice, celulozolitice, uneori patogene pentru organismele marine. Se ntlnesc frecvent bacterii din genurile: Alcaligenes, Alteromonas, Corynebacterium, Flavobacterium, Bacillus, Pseudomonas, Sarcina, Spirillum, Vibrio, Streptomyces.

Cianobacteriile marine sunt rspndite ubicvitar, foarte multe fiind halotolerante. Unele dintre ele produc nfloriri n zonele eutrofizate (Anabaena flosaquae, Nodularia spumigena). Fungii marini sunt reprezentai de specii autohtone halofile sau de specii terestre ori limnetice halotolerante. Levurile sunt reprezentate de aproximativ 200 de specii (Candida, Saccharomyces, Torulopsis). Algele marine sunt productorii primari, eseniali pentru viaa din mediul marin. Formeaz fitoplanctonul, majoritatea sunt fotoautotrofe, dar unele cresc i heterotrof la ntuneric. Sunt clorofite, diatomee, dinoflagelate, rodoficee, euglenofite. Protozoarele marine sunt flagelate, rizopode, ciliate, componente ale zooplanctonului, cele autohtone cu un grad ridicat de halofilie. Microorganismele din adncuri se caracterizeaz prin ritmul lent al metabolismului, datorit disponibiulitii reduse a nutrienilor, presiunea hidrostatic mare i temperatura sczut a mediului. Microbiota organismului animal Colonizarea organismului animal cu diferite specii de microorganisme ncepe la natere, procesul fiind benefic att pentru microorganisme, ct i pentru gazd. Ftul este steril n uter, dar se infecteaz n cursul naterii de la mam i de la orice surs din mediu la care este expus. n cursul procesului de colonizare, multe microorganisme contaminante mor, deoarece nu se pot adapta. La sugarul hrnit la sn primele bacterii din sistemul digestiv sunt cele din genul Lactobacillus, urmate dup 1 2 zile de cele din genul Bifidobacterium, care devine predominant numeric. Ulterior se instaleaz alte specii facultativ aerobe (Escherichia coli, Streptococcus faecalis). Modificarea microbiotei este important cnd se trece la alimentaia solid, aprnd n intestinul gros bacterii strict anaerobe, numrul celor facultativ anaerobe scznd progresiv. Mecanismele colonizrii sunt puin cunoscute; microorganismele trebuie s nving sistemele de eliminare, fluxul unidirecional al lichidelor pe suprafaa epiteliilor, peristaltismul intestinal, sistemele imunitare locale i variaia pH-ului, precum i competiia cu alte microorganisme. Microbiota normal a tractului respirator este reprezentat de un numr mic de microorganisme. La nivelul cilor respiratorii superioare (nazofaringe) se ntlnesc n special Staphylococcus aureus i specii coagulaznegative (Corynebacterium, Peptostreptococcus, Fusobacterium). n nazofaringe predomin specii de Streptococcus (-hemolitici) i Neisseria. Colonizarea cu N. meningitidis atinge un procent de pn la 95% la adulii tineri din aglomerrile umane. n orofaringe predomin cocii Gram pozitivi i Gram negativi, cei anaerobi depindu-i pe cei aerobi n proporie de 100/1. Cile respiratorii inferioare sunt sterile. Microbiota tractului digestiv depinde de diferitele zone ale acestuia, care prezint habitate caracteristice. n saliv i pe suprafaa limbii se ntlnesc streptococi din grupul viridans (Streptococcus salivarius). Suprafaa dinilor este colonizat cu S. sanguinis, S. mutans, iar mucoasa oral cu S. vestibularis. S. pyogenes, care produce faringita streptococic, poate coloniza temporar persoanele sntoase.

La nivelul orofaringelui se gsesc i ali coci Gram pozitivi (Peptostreptococcus), coci Gram negativi anaerobi, bacili Gram pozitivi ( Corynebacterium, Lactobacillus), bacili Gram negativi anaerobi (Fusobacterium, Bacteroides, Haemophilus influenzae, H. parainfluenzae). Din grupul fungilor, Candida albicans se gsete aproape la toi indivizii. Protozoarele din orofaringe sunt reprezentate de Entamoeba gingivalis i Trichomonas tenax, dar nu produc boli. Ecosistemul gastrointestinal este complex, deschis, integrat i format din mai multe habitate pentru microorganisme. Fiecare habitat este colonizat de mai multe specii de microorganisme autohtone. Stomacul este considerat steril, deoarece este un habitat ostil dezvoltrii microorganismelor. El poate conine ns microorganisme ingerate odat cu alimentele i apa (la animalele coprofage acest fenomen este foarte accentuat). Bacteriile care pot fi prezente sunt acidotolerante: Lactobacillus, Streptococcus, Helicobacter pylori, ultimul fiind cauza ulcerului gastric i asociat cu malignitatea gastric. n intestinul subire microbiota este limitat, predominnd anaerobii (Lactobacillus, Streptococcus, Candida albicans, Bacteroides, Clostridium). n poriunea terminal (ileon) pot fi gsite bacterii provenite din colon, mai ales dac are loc o obstrucie a tractului intestinal. n intestinul gros microbiota este reprezentat de cteva sute de specii bacteriene intolerante la O2, dintre care puine au fost cultivate in vitro i identificate. Microorganismele alohtone devin semnificative dac depesc 10 6 celule/g de coninut intestinal i provin din alimentele ingerate sau din etajele superioare ale tractului digestiv. La om, numrul speciilor strict anaerobe este de peste 10 11 celule/g, n care predomin Bacteroides fragilis, Bifidobacterium, Enterococcus, iar coliformii sunt numai n proporie de 0,1 1%. n colonul normal nu se gsesc protozoare. Bacteriile coliforme din colon pot produce infecii urogenitale. Microbiota normal a intestinului realizeaz fermentaia bolului intestinal, grbete tranzitul digestiv, are funcie de barier antiinfecioas, uneori furnizeaz vitamine din grupul B. Tractul urogenital este steril cu excepia uretrei i a vaginului. Microorganismele pot migra ascendent prin uretr, dar de obicei sunt rapid eliminate de anticorpii din secreii i de fluxul urinar descendent. Uretra feminin este colonizat de lactobacili, streptococi i stafilococi coagulaz negativi. Microorganisme de origine fecal pot infecta uretra i dac ajung n vezica urinar prolifereaz i determin infecii urinare ( Escherichia coli, Proteus mirabilis, Enterococcus faecalis, Candida albicans). Microbiota vaginal este abundent i diversificat. Predomin lactobacilii, deoarece sunt acidotolerani. Ali anaerobi vaginali sunt: Bifidobacterium, Peptostreptococcus, iar dintre aerobi: Staphylococcus, Streptococcus, Corynebacterium, Mycoplasma, Candida. Microbiota pielii este reprezentat de un numr mic de microorganisme comparativ cu alte habitate oferite de organismul animal. Unele sunt rezidente pe suprafaa pielii, altele sunt tranzitorii, provenind din mediul extern, altele sunt endogene. Pe suprafaa pielii bacteriile anaerobe sunt mai numeroase dect cele aerobe, predominnd bacteriile n raport cu levurile, n special cele Gram pozitive: Staphylococcus, Micrococcus, Corynebacterium, Propionibacterium.

Bacteriile Gram negative sunt sensibile la aciunea detergenilor, de aceea colonizeaz tranzitoriu suprafaa pielii. Microorganismele prolifereaz n mediul umed, de aceea pielea feei, aria perirectal sau perigenital au o microbiot mai complex. Microbiota din rumen este reprezentat de o comunitate microbian complex, alctuit din bacterii specifice anaerobe, protozoare ciliate i flagelate, puini fungi anaerobi. Bacteriile pot fi libere, imobile sau mobile, ori aderente la celulele mucoasei ruminale prin intermediul fimbriilor, glicocalixului sau polizaharidelor extracelulare. Activitatea bacteriilor este de degradare a materialului vegetal, fr a avea o eficien prea mare. Se ntlnesc: Bacteroides amylogenes, B. ruminicola, Clostridium locheadii, Ruminococcus albus.

CURS 7 INTERACIUNILE DINTRE POPULAIILE DE MICROORGANISME Majoritatea habitatelor naturale sunt populate de asociaii heterogene de microorganisme, numrul speciilor fiind dependent de complexitatea i diversitatea chimic a substanelor nutritive. Interaciunile dintre microorganisme se pot clasifica pe baza mai multor criterii: - dup localizare i modul de existen n raport cu altele - dup rezultatul asocierii - dup gradul de dependen a asociaiei, care poate fi accidental, facultativ sau obligatorie. Unele interaciuni sunt pozitive (benefice), altele sunt negative, unele sunt benefice pentru un partener i duntoare pentru cellalt, iar altele sunt indiferente. Interaciunile posibile ntre populaiile a dou specii de microorganisme (G. Zarnea, 1994, adaptat dup Odum, 1971) Tipuri de interaciune Neutralism Comensalism Protocooperare Mutualism Competiie prin interferen direct Competiie prin utilizarea nutrienilor Amensalism Parazitism Prdare A 0 + + + 0 + Specia B 0 0 + + 0 Natura general a interaciunii Nici una din populaiile asociaiei nu este afectat Populaia A beneficiaz, cea asociat B nu este afectat Interaciune neobligatorie, bilateral benefic Interaciune obligatorie, bilateral benefic Fiecare dintre cele dou specii o poate inhiba direct pe cealalt Fiecare dintre cele dou specii o poateafecta pe cealalt prin consumarea unui nutrient puin abundent Populaia A este inhibat, cealalt este neafectat Populaia A, cu dimensiuni mai mici, paraziteaz populaia B Populaia prdtoare A atac populaia gazd B

1.

Neutralismul este o asociere lipsit de influene reciproce, considerat puin probabil n mediile naturale. Este favorizat de mediile cu condiii restrictive, care permit creterea microorganismelor cu o rat minim, care nu intr n competiie pentru nutrieni.

2. Interaciuni pozitive Interaciunile pozitive sunt relaii de tip cooperant, care mresc rata de cretere a microorganismelor asociate i se produc chiar i ntre celulele aceleiai specii. Ele sunt foarte importante n mediile naturale. a. Comensalismul definete creterea asociat a dou specii de microorganisme, aflate ntr-o relaie n care una profit de asociere, iar cealalt este indiferent (nici nu profit, nici nu este afectat negativ). Se disting dou categorii de microorganisme comensale: - ectocomensale situate pe suprafaa altor microorganisme, plante sau animale, fixate de obicei prin structuri specializate (fimbrii, iar la Caulobacter crampon); - endocomensale, prezente n tubul digestiv al animalelor. b. Protocooperarea este o relaie de mutualism neobligatoriu i nespecific, n care cei doi parteneri beneficiaz reciproc. De exemplu, Azotobacter fixeaz N2 utiliznd substane organice simple pe care le furnizeaz alte microorganisme, care hidrolizeaz substanele complexe. c. Sinergismul este o form de protocooperare ntre dou sau mai multe tipuri de microorganisme prezente ntr-un mediu, ce pot avea activiti foarte diferite, calitativ sau cantitativ fa de activitile nsumate ale acelorai specii cultivate separat n mediul respectiv. De exemplu, E. coli i Streptococcus faecalis produc putresceina din arginin, numai dac sunt cultivate mpreun, nu i dac sunt cultivate separat. d. Mutualismul este o asociaie reciproc benefic, cu diferite grade de asociere. De exemplu, Lactobacillus arabinosa 17-5 necesit fenilalanina pentru cretere, iar Streptococcus faecalis R necesit acid folic. Nu cresc pe un mediu minimal dup cultivare separat, dar cultivate mpreun dau culturi abundente. Fiecare specie sintetizeaz i elibereaz n mediu factorul de cretere, solubil i dializabil, necesar celeilalte specii. Relaiile mutuale caracterizeaz asociaiile dintrte bacterii i alge n mediul marin (bacteriile produc vitamina B12 necesar algelor, algele realizeaz fotosinteza). 3. Interaciuni negative Interaciunile negative sunt prezente n special la densiti populaionale mari de microorganisme i afecteaz viteza de cretere a uneia dintre cele dou populaii, datorit competiiei pentru un substrat nutritiv, producerii de compui toxici, cu efect nociv pentru cealalt specie, acumulrii de produi de metabolism cu efect inhibitor pentru cealalt specie. a. Competiia este rezultatul diversitii microorganismelor, iar dezvoltarea lor depinde de fondul comun de resurse din mediu. Ea definete efectul negativ al unui organism asupra altuia, ca rezultat al epuizrii unei surse nutritive din mediu. Competiia poate fi: - interspecific, de exemplu bacteriile din mediile naturale sunt mai bine adaptate dect cele alohtone; - intraspecific, ntre tulpinile aceleiai specii. n relaia de competiie, influenele advrse se realizeaz indirect. Competiia ntre dou specii de microorganisme diferite fiziologic, cu rate diferite de multiplicare, dar care necesit aceeai surs de energie, duce la excluderea unuia dintre competitori.

Competiia avantajeaz microorganismul cu o rat mai mare de cretere, care decurge din eficiena superioar de utilizare a nutrienilor limitani, cu o capacitate mai mare de a stoca substane de rezerv i de a sintetiza factori de cretere. Factorii abiotici influeneaz competiia. b. Amensalismul este o interaciune ntlnit n comunitile cu densiti populaionale mari, fiind caracterizat prin producerea de ctre o specie de microorganisme a unor substane solubile organice sau anorganice, care afecteaz negativ creterea altor microorganisme asociate din mediu. Amensalismul are un caracter unidirecional; producerea de cizi organici sau anorganici modific mediul natural, fcndu-l inaccesibil microorganismelor sensibile. De exemplu, bacteriile sulf-oxidante din apele de drenaj din mic produc H 2SO4, care scade valorile pH-ului i microorganismele acidosensibile nu se mai pot dezvolta. c. Parazitismul corespunde relaiei n care un organism se hrnete cu celulele, esuturile sau lichidele altui organism, care poate suferi prejudicii mai mult sau mai puin severe. Relaia parazit gazd variaz, ntlnindu-se: - ectoparazitism - parazitism intracelular obligat parazitism absolut (virusuri celul gazd). n unele cazuri interaciunea are un grad nalt de specificitate, alteori paraziii au un spectru larg de gazde. d. Prdarea este o interrelaie n care un organism mai viguros (prdtorul) atac un alt organism (prada), provocndu-i moartea, rapid n cazul przii unicelulare, ori distrugerea parial sau total n cazul przii multicelulare, urmat de utilizarea constituenilor lor ca material nutritiv. Simbioza Simbioza definete viaa mpreun a unor organisme diferite, indiferent dac asocierea lor are efect benefic sau duntor asupra unuia sau ambilor parteneri. Ea este o coabitare de lung durat, n cursul creia dou sau mai multe specii diferite triesc n relaii spaiale directe, beneficiind reciproc din interaciunile lor. n funcie de localizarea microorganismelor simbionte se disting: - ectosimbioze; - endosimbioze. n funcie de gradul de dependen se disting: - simbioze facultative (ntre Ehizobium i plantele leguminoase, care pot exista i inependent); - simbioze ecologic obligate (bacteriile i protozoarele din rumenul rumegtoarelor, care asigur degradarea celulozei pn la compui accesibili gazdei); - simbioze efectiv obligate sau ereditare (unele nevertebrate marine care au nevoie absolut de alge endosimbionte).

n funcie de natura relaiei se disting: - simbioze mutualiste, n care adaptarea ambelor organisme este superioar fiind mpreun dect atunci cnd triesc separat; - simbioze parazitare, cnd unul dintre parteneri este mai adaptat n asociaie dect separat. Insectele i acarienii sunt adesea asociai cu diferite microorganisme: bacterii, fungi, protozoare. Gradul de asociere este diferit, de la contaminani temporari din mediu pn la asocieri ectosimbiotice constante localizate n structuri specializate. Capacitatea insectelor xilofage de a se dezvolta pe substratul lemnos (cu mare deficit de proteine i vitamine) este condiionat de asocierea lor cu levuri i mucegaiuri. Interaciunea Rhizobium plante leguminoase implic existena unor fenomene de compatibilitate ntre cei doi parteneri, iar incompatibilitatea limiteaz infecia. Polizaharidele bacteriene sunt foarte importante pentru iniierea procesului de infecie, mutantele necapsulate nu produc deformarea perilor radiculari. Dei celulele de Rhizobium interacioneaz cu toi perii radiculari, numai aproximativ 25% dintre ei sunt deformai efectiv, printr-un proces de stimulare local a creterii. Celulele de Rhizobium sunt atrase prin chimiotactism pozitiv n rizosfer de flavonoidele capabile s induc exprimarea genelor nod. n prezena exudatului radicular i a flavonoidului luteolin, Rhizobium sintetizeaz i excret un factor extracelular, produs al genelor nod. Cianobacteria Anabaena azollae fixatoare de azot este rspndit la toate speciile de ferigi acvatice din genul Azolla. Asociaia este mutual benefic, cianobiontul este protejat, fixeaz azotul atmosferic i l cedeaz gazdei. Planta furnizeaz sursa de carbon, probabil maltoza. Micorizele reprezint sociaii simbiotice ntre radicelele plantelor i fungii specifici. Sunt foarte larg rspndite n natur, prezena unor plante neinfectate reprezentnd mai degrab excepii. Micorizele pot fi: - ectomicorize; - endomicorize; - ectoendomicorize; - micorize peritrofe.