1

Avantajele hibridrii somatice

Student,








Decembrie 2013



Introducere

2

Hibridarea sexuat a fost folosit ca metod de ameliorare a culturilor de foarte mult timp dar are
propriile sale limitri , deoarece poate fi utilizat numai ntre membri ai acelorai specii sau cu
specii slbatice nrudite . Astfel , acest aspect limiteaz utilizarea hibridrii sexuate ca mijloc de a
produce noi soiuri . Prin urmare, dezvoltarea hibrizilor de celule viabile prin hibridare somatic a
fost considerat ca o abordare alternativ pentru producerea de hibrizi superiori depind bariera
speciilor . Tehnica poate facilita creterea i transferul de gene, ocolind problemele asociate
ncrucirii sexuate convenionale , cum ar fi incompatibilitatea intergeneric i interspecific.
Aceast tehnic de producere a hibridului prin fuziunea protoplatilor permite combinarea de celule
somatice ( integrale sau pariale ) de la diferite soiuri , specii sau genuri rezultnd noi combinaii
genetice , inclusiv hibrizi somatici simetrici , hibrizi somatici asimetrici sau cibrizi somatici .
Cea mai frecvent utilizat n hibridarea somatic este gena hibrizilor simetrici care conin genomuri
nucleare complete i organite citoplasmatice de la ambii prini . Hibridarea somatic incomplet
asimetric ofer de asemenea oportuniti pentru transferul de fragmente ale genomului nuclear ,
inclusiv unul sau mai muli cromozomi intaci de la un printe( donator) n genomul intact al celui
de al doilea printe ( destinatar ) .
Aceste metode ofer manipularea genetic a plantelor depind obstacolul incompatibilitii
sexuale, prin aceasta servind ca o metod de reunire a trsturilor benefice de la specii taxonomic
distincte, care nu pot fi obinute prin ncruciri sexuate . Mai muli parametri cum ar fi sursa
esutului , mediul de cultur i factorii de mediu influeneaz capacitatea protoplastului derivat din
celulele hibride s se dezvolte ntr-o plant fertil.
1l, s-ealizat cu succes izolarea
protoplastelor la soia din pedunculi, cotiledoane, semine, apexuri i s-au efectuat ncercri de
contopire a acAstfel, s-a realizat cu succes izolarea
protoplastelor la soia din pedunculi, cotiledoane, semine, apexuri i s-au efectuat ncercri de
contopire a acestora cu protoplastele unor culturi ca orzul, mazrea, tutunul, lucerna, trifoiul i
orezul.estora cu protoplastele unor culturi ca orzul, mazrea, tutunul, lucerna, trifoiul i
I. ETAPE ALE HIBRIDRII SOMATICE
1. Izolarea i fuziunea protoplatilor
Protoplatii pot fi izolati din diferite tesuturi vegetale: mezofilul sau epiderma frunzei, radacinii,
nodozitati ale radacinilor, petale, graunciori de polen, din culturi de celule 'in vitro' etc. Protoplatii
sunt izolai de obicei din fragmente de limb, acestea sunt introduse ntr-o soluie unde au loc dou
operaii simultane: plasmoliz i degradarea peretelui celular.
3

Fuziunea protoplastilor ar putea fi spontan n timpul izolrii acestora sau poate fi indus prin
mijloace mecanice , chimice i fizice.
In timpul procesului spontan , protoplatii adiaceni fuzioneaz n urma degradrii enzimatice a
pereilor celulari formnd homocarionii fiecare cu doi sau mai muli nuclei. Deoarece hibridarea
somatic necesit fuziunea de protoplati de origini diferite , fuziunea spontan nu are nici o
valoare. Prin fuzionarea protoplatilor de la diferite specii este posibil manipularea informaiei
genetice i hibridarea celular interspecific, cu rol deosebit n lucrrile de ameliorare, oferind
numeroase posibiliti de combinri genomice pentru a crea forme cu totul noi. Se obin celule
hibride, interspecifice sau intergenerice, cu o nou zestre ereditar i cu caracteristici noi.
n urma fuzionrii protoplatilor se formeaz produi de fuziune homocariotici (n cadrul celulelor
ce aparin aceleiai specii) i heterocariotici (n cazul fuzionrii celulelor ce aparin la dou specii
diferite).
Hibridarea somatic ntre dou specii diferite const din urmtoarele faze:
- preluarea materialului iniial folosind esuturi de meristem foliar;
- izolarea celulelor prin tratamente enzimatice;
- obinerea de protoplati i fuzionarea lor pn la realizarea heterocarionului;
- nceperea diviziunilor mitotice;
- formarea calusului;
- obinerea plantelor din culturi de calus selecionat;
- regenerarea plantelor ntregi transplantate la sol.
Uneori din hibridarea celular nu regenereaz plante, ci se obin numai linii celulare hibride.
Binding i Nehls (1978) au obinut astfel de linii celulare hibride ntre speciile Vicia faba *
Pethunia hybrida din care a generat un calus, fr a evolua n formarea de plante ntregi. Alte
hibridri somatice, capabile s rup barielele interspecifice s-au mai realizat ntre Pethunia parodii
i Pethunia parviflora, Pethunia hybrida i Atropa belladona, Datura innoxia i Atropa belladona,
etc.
Pentru a realiza fuziunea indus este necesar un agent chimic adecvat ( fusogen ) cum ar fi NaNO3,
ioni de Ca2 + , polietilen glicol ( PEG ) sau stimul electric.
i . Fuziune prin intermediul NaNO3 : A fost demonstrat pentru prima dat de ctre Kuster n 1909
c soluia hipoton de NaNO3 induce fuziunea protoplatilor izolai formand heterocarion (hibrid).
Aceast metod a fost descris de Evans si Cocking ( 1975) , ns este limitat deoarece genereaz
4

puini sau chiar nici un hibrid , n special atunci cnd sunt implicai protoplati mezofili extrem
vacuolizai.
ii . Tratamentul cu PH ridicat i Ca + +: Aceast tehnic a condus la dezvoltarea hibrizilor intra- i
interspecifici . Aceasta a fost demonstrat de Keller i Melcher n 1973 . Protoplatii izolai de la
dou specii de plante sunt incubate n soluie 0,4 M manitol cu un continut ridicat de Ca + + ( 50
mM CaCl2.2H2O ) cu pH puternic alcalin de 10,5 la 37 C timp de aproximativ 30 min .
Agregarea protoplatilor are loc imediat i fuziunea are loc n 10 min.
iii . Tratamentul cu polietilenglicol : Polietilenglicol ( PEG ) este cel mai popular fusogen datorit
capacitii sale de a forma frecvent heterocarioni binucleai cu citotoxicitate sczut. Cu PEG
agregarea a avut loc in cea mai mare parte ntre doi sau trei protoplati spre deosebire de fuziunea
indus de Ca + + care implic formarea unei mari grmezi . Protoplatii proaspt izolai de la doi
prini selectai sunt amestecai n proporii adecvate i tratai cu 15-45 % PEG (1500 - 6000MW )
pentru 15-30 de minute , urmat de splarea treptat a protoplatilor pentru de a elimina PEG .
Fuziunea protoplatilor are loc n timpul splrii. Mediul de splare poate fi alcalin ( pH 9-10 ) i
conine o concentraie mare de ion Ca + + ( 50 mM ) . Aceast abordare combinat a PEG i Ca + +
este mult mai eficient dect fiecare tratament n parte . PEG este ncrcat negativ i se poate lega de
cationi Ca + + , care, la rndul lor , se pot lega la moleculele ncrcate negativ prezente n
plasmalem. n timpul procesului de splare , moleculele de PEG pot scoate componentele
plasmalemei legate ele . Aceasta perturb organizarea plasmalemei i poate duce la fuziunea
protoplatilor situai aproape unul de altul. Tehnica este neselectiv astfel c induce fuziunea ntre
oricare doi sau mai muli protoplati.
iv . Electrofuziunea : este rapid , simpl , sincron i mai uor de controlat. Mai mult dect att,
hibrizii somatici produi n acest mod arat o fertilitate mult mai mare dect cele produse de
fuziunea indusa cu PEG.
Electrofuziunea este un proces n dou etape. n primul rnd, protoplatii sunt introdui ntr -o
camer mic de fuziune care conine fire paralele sau plci care servesc ca electrozi . n al doilea
rnd , este aplicat un cmp de curent alternativ de joas tensiune i oscilant care provoac
protoplatii s devin aliniai n lanuri de celule ntre electrozi . Acest lucru creeaz un contact
complet celul - celul n cteva minute . O dat ce alinierea este complet, fuziunea este indus
prin aplicarea de impulsuri scurte de nalt tensiune. Ca urmare are loc o defalcare reversibil a
membranei plasmatice la locul de contact al celulelor ducand la fuziunea acestora si ulterior
reorganizarea membranei . ntregul proces poate fi finalizat n termen de 15 minute.
2. Selecia produilor de fuziune
Hibridarea somatic prin electrofuziune permite fuziunea unu la unu pentru perechile dorite de
protoplasti i prin urmare este uor s se cunoasc soarta produselor de fuziune. Cu toate acestea
suspensia de protoplati recuperai dup tratamentele chimice (fusogeni) este format din
urmtoarele tipuri de celule :
5

i. protoplati nefuzionai ai celor dou specii / tulpini;
ii. produi de fuziune ntre doi sau mai muli protoplati din aceeai specie (homocarioni);
iii. protoplati hibrizi produi prin fuziunea ntre unul (sau mai muli) protoplati de la fiecare dintre
cele dou specii (heterocaroni).
Heterocarionii care sunt poteniala surs de viitori hibrizi constituie o foarte mic (0,5-10 %)
proporie din amestec. Prin urmare, o strategie eficient trebuie s fie utilizat pentru identificarea i
izolarea lor. Au fost propuse i ncercate diferite metode de selecie eficient a hibrizilor, inclusiv
bazele morfo-fiziologice, complementarea trsturilor biochimice i genetice ale partenerilor de
fuziune, sortarea manual sau electronic a heterocarionilor/celulelor hibride.
2.1. Bazele morfo- fiziologice: ntregul amestec al protoplatilor este cultivat dup tratamentul
fuziunii i caluii rezultai sunt testai pentru caracteristicile lor hibride. Ocazional caluii hibrizi ies
din coloniile de celule parentale i sunt identificai prin morfologia lor intermediar, adic celule
colorate n verde i violet. Cu toate acestea, procesul este laborios. Metoda este limitat la anumite
combinaii care prezint diferene n potenialul lor de regenerare n condiii de cultur specifice.
2.2. Complementarea: n acest caz, complementarea deficienelor genetice sau metabolice ale celor
doi parteneri de fuziune este utilizat pentru a selecta componenta hibrid. Cnd protoplatii de la
doi prini (un printe care poart trstur citoplasmatic albinoas i cellalt printe care poart
trstur verde) fiecare parinte transportand un defect genetic sau morfologic sunt fuzionai, rezult
o celul hibrid viabil, de tip slbatic n care ambele defecte sunt reciproc eliminate prin
complementare iar celulele hibride sunt capabile s creasc ntr-un mediu minimal non-permisiv la
dimensiunea celulelor parentale care poart trstur verde. Mai trziu caluii de natur hibrid ar
putea fi deosebii cu uurin de esutul de tip parental (trstur albinoas) prin culoarea lor verde.
Selecia complementar poate fi aplicat i caracterelor dominante, cum ar fi rezistena la
antibiotice, erbicide sau aminoacizi.
2.3. Izolarea heterokarionilor sau a celulelor hibride: Izolarea manual sau electronic a
heterocarionilor sau celulelor hibride este cea mai sigur metod. Izolarea manual necesit ca cei
doi protoplati de tip parental s aib markeri morfologici diferii i uor de distins. Metoda
fluorescenei ajut de asemenea la identificarea cu uurin a produselor de fuziune. n acest caz
protoplatii etichetai verde prin tratare cu diacetat de fluorescein (FDA, 1-20 mgl
-1
) sunt fuzionai
cu protoplati care emit o fluorescen roie, fie de la clorofila autofluorescent sau de la aplicarea
de izotiocianat de rodamin (10-20 mgl
-1
). Etichetarea poate fi realizat prin adugarea compusului
n amestecul enzimatic. Acest lucru poate fi aplicat chiar si pentru protoplatii imposibil de distins
morfologic de la cei doi prini.
3. Verificarea i caracterizarea hibrizilor somatici
6

Nici un sistem nu este foarte simplu de manevrat i are propriile lui avantaje i dezavantaje. Prin
urmare, chiar i dup selectarea hibrizilor dorii n urma fuziunii protoplatilor, este necesar s se
efectueze una sau mai multe teste pentru a compara liniile protoplatilor parentali cu cele ale
presupuilor hibrizi. Unele dintre tehnicile care pot fi ncercate sunt:
3.1. Analiza morfologic : Hibrizii somatici, n cele mai multe cazuri arat caractere intermediare
ntre cei doi prini, cum ar fi forma frunzelor, pigmentarea corolei, nlimea plantelor, morfologia
rdcinilor i alte caractere vegetative i florale. Metoda nu este foarte exact deoarece mediul de
cultura al esutului poate modifica unele caractere morfologice, de asemenea hibridul poate avea
trsturi cu totul noi care nu au fost prezente la nici unul dintre prini.
3.2. Analiza izoenzimei :Numeroase forme moleculare ale aceleai enzime care catalizeaz similar
sau reacioneaz identic sunt cunoscute sub numele de izoenzime. Izoenzimele utilizate n mod
obinuit pentru identificarea hibrizilor sunt: fosfataza acid, esteraza i peroxidaza.
3.3. Analiza citologic: Numrarea cromozomilor hibridului este o metod mai uoar i fiabil de
a demonstra hibridarea deoarece ofer informaii privind nivelul de ploidie. Citologic, numrul de
cromozomi al hibridului ar trebui s fie suma numrului de cromozomi de la ambii prini. Numarul
cromozomilor n hibrizii somatici este n general mai mare decat numrul total al celor 2 protoplati
parentali. Dac numarul cromozomilor hibridului reprezint suma cromozomilor celor 2 protoplati
parentali rezult un hibrid simetric.Hibrizii asimetrici au variaii anormale sau largi n ceea ce
privete numrul cromozomilor decat totalul exact al celor 2 specii. Pe lng numrul de
cromozomi, mrimea i structura cromozomilor pot fi monitorizate. Cu toate acestea, abordarea nu
este aplicabil pentru toate speciile, n special n cazul n care fuziunea implic specii ndeaproape
nrudite sau n cazul n care cromozomii sunt foarte mici. Mai mult dect att, uneori variaiile
somaclonale pot da natere la un numr diferit de cromozomi.
3.4. Analiza molecular: Restricia specific structurii ADN-ului nuclear, mitocondrial i
cloroplastic caracterizeaz plastomul hibrizilor. Markeri moleculari, cum ar fi RFLP, RAPD, ISSR
pot fi utilizaii pentru a detecta variaii i similitudini n analiza structurii benzilor colorate de catre
markeri din protoplatii fuzionai n vederea analizrii hibridului.


II. AVANTAJE I APLICAII ALE HIBRIDRII SOMATICE
ntre reproducerea sexuat la plantele superioare i fuzionarea protoplatilor exist diferene
eseniale. n cadrul reproducerii sexuate, informaiile citoplasmatice sunt transmise n general
numai de planta mam i nu exist surse de variabilitate citoplasmatic. De asemenea, nu apar
recombinri ntre diferite tipuri de formaiuni cloroplastice sau mitocondriale.
a)Avantajele hibridrii somatice sunt:
7

- realizarea hibridrilor ntre organisme foarte ndeprtate pe scara evoluiei care, obinuit, nu se pot
hibrida pe cale sexuat;
- obinerea de hibrizi care nu mai segreg n urmtoarele generaii;
- crearea de hibrizi ntre plante care se reproduc vegetativ;
- obinerea hibrizilor ntre plante care nu se pot ncrucia, datorit unor anomalii n morfogeneza
genitorilor;
- obinerea de hibrizi asimetrici care s posede material genetic de la unul din parini i numai caiva
cromozomi (sau gene, sau numai citoplasma i organitele celulare) de la cellalt partener;
- realizarea hibrizilor multiparentali rezultai n urma fuziunii simultane a mai mult de dou celule
parentale;
- obinerea hibrizilor heterozigoi pentru genele extranucleare.
b) Aplicaiile hibridrii somatice:
1.Obinerea de variaii somaclonale. n cazul hibridrii de protoplati, prin combinarea
genotipurilor de la speciile incompatibile apropiate sau ndeprtate din punct de vedere taxonomic,
se obin variaii somaclonale din care pot fi selecionate noi forme valoroase sub aspect genetic,
utilizate ca material iniial n lucrri de ameliorare, dimensiunea celulelor ct i structura,
funciunea i, respectiv, condiia lor metabolic.
2.Obinerea de hibrizi celulari (cibrizi)
Cnd fuziunea de hibrizi de protoplati este urmat de o recombinare genetic, se poate realiza o
hibridare att a nucleilor, ct i a organitelor citoplasmatice (cloroplaste, mitocondrii). Dac unul
dintre nuclei este eliminat n cursul divizunilor succesive, se obin hibrizi citoplasmatici numii
cibrizi n care apar, cel mai frecvent, recombinri mitocondriale.
Din heterocarioni rezult hibrizi somatici, care nglobeaz cromozomii celor 2 specii, sau cibrizi
care nglobeaz cromozomii i genele nucleare de la o specie, cu genele extranucleare de la cealalt.
n unele cazuri apar himere formate din esuturi i celule diferite genetic. De aceea, selecia
adevrailor produi de hibridare somatic este o problem cheie a hibridrii parasexuate.
n sectorul vegetal pot fi menionai cibrizii: gru + orz, tomate + cartofi, Vicia + Petunia, ntre
specii de Nicotiana, etc.
3.Transferul de material genetic n protoplati
Elaborarea unor metode eficiente de obinere a unor cantiti mari de protoplati a fcut posibil
folosirea acestora n vederea unor manipulri genetice la plante.
Transferul direct de gene, prin hibridare somatic se poate realiza n faza de protoplast, protejat la
exterior numai de membrana plasmatic (plasmalema).
8

Includerea n protoplaste a unor microorganisme, virusuri, organite, macromolecule exogene se
poate realiza pe 3 ci:
- prin endocitoz prin strbaterea membranelor plasmatice dup degradarea peretelui
celular. Pe aceast cale au fost incluse n protoplati: alge, virusuri, bacterii, drojdii, nuclei,
cloroplaste, mitocondrii, ADN exogen, etc. Membrana plasmatic poate fi uor traversat de
molecule de ADN extern care va migra pn la nucleu i se va integra n cromozomi.
- fuzionarea membranelor;
- transfer prin intermediul lipozomilor, care sunt vezicule artificiale de fosfolipide ce pot
include diverse materiale, inclusiv ADN, pe care l pot transfera n protoplati, prin fuzionarea
acestor tipuri de celule.
4.Mrirea rezistenei plantelor la factorii chimici sau fizici (toxine, erbicide) i la factori abiotici
(ger, secet, salinitatea solului)
Tehnicile de inginerie genetic, molecular i celular pot contribui la crearea unor noi forme
adaptate la stresul biotic i osmotic, prin cercetri care vizeaz funcionarea sistemelor enzimatice,
reglarea i transferul informaiei genetice de la formele rezistente la cele sensibile.
5.Ameliorarea plantelor i crearea de soiuri noi
Rezultatele obinute pn n prezent arat c ameliorarea plantelor i biotehnologiile sunt domenii
complementare care pot asigura progrese remarcabile pentru viitor, prin valorificarea realizrilor
ingineriei genetice privind hibridarea somatic interspecific i intergenetic.
Hibridarea somatic a devenit o surs important de variabilitate, fie la nivel nuclear (recombinri
ntre genomuri), fie la nivel citoplasmatic (modificri de ADN mitocondrial sau ADN -
cloroplastic).
Totodat, este posibil apariia unui numr ct mai mare de mutaii, precum i livrarea de hibrizi
somatici i cibrizi. Hibridarea somatic poate fi un mijloc rapid de introducere a unor gene strine
n interiorul unei specii cultivate.
Transferul unor caractere de la speciile slbatice la cele cultivate asigur mrirea rezistenei
plantelor hibride, att la factori patogeni, ct i la factori abiotici, inclusiv pesticide.
Tehnologia hibridrii prin fuziuni de protoplati este relativ simpl n comparaie cu alte tehnici de
inginerie genetic, n mod particular cu tehnologia ADN-recombinat.
Pn n anul 1992 au fost regenerate pornind de la culturi de protoplati circa 50 de specii
ornamentale, att monocotiledonate, ct i dicotiledonate (Ochatt i Power - 1992). Exemple de
genuri i specii regenerate: - Chrysanthemum Otsuka i col.-1985; Gaillardia grandiflora
Binding - 1981; Pelargonium hortorum Yarrow i col. 1987, etc.
Tehnici de hibridare somatic au fost testate cu succes n cazul cartofului Solanum tuberosum.
9

Alte exemple includ hibrizi de Nicotiana tabacum cu Petunia hibrid sau Atropa belladonna cu
Datura inoxia .
Produsul de fuziune dintre Datura innoxia i Datura stramonium denumit Datura straubii, dezvoltat
de O. SCHIEDER (Institutul Max-Planck-Institut , Kln) a produs chiar seminte fertile. Prin
urmare, poate fi considerat ca o noua specie denumit Datura straubii. Speciile Datura sunt utilizate
pentru producerea de alcaloizi de importan medical (hiosciamine i scopalamine). Datura straubii
are o capacitate mai mare cretere economic i un 20-25 la sut coninut de alcaloizi mai mare
dect cele dou specii parentale.
Cercetrile actuale ce se efectueaz prin culturi de protoplati vizeaz numeroase aspecte:
introducerea de gene responsabile de fixarea azotului atmosferic, de sinteza de noi pigmeni, de
rezistena la boli, frig, secet, poluare etc.










III. HIBRIDAREA SOMATIC A UNOR PLANTE DIN GENUL SOLANUM
REZULTATE OBINUTE LA NIVEL MONDIAL
n ultimii ani s-au produs numeroi hibrizi somatici intraspecifici prin fuziunea unor linii dihaploide
de cartof. Astfel s-a reuit introducerea la speciile dihaploide n genofondul hibrizilor a unor gene
dominante pentru inducerea rezistenei la boli (de exemplu la atacul virusului cartofului PVX i
PVY) sau duntori (de exemplu la nematodul Globodera rostochiensis, Mollers i Wenzel, 1992).
Caracterizarea fenotipic a permis identificarea la majoritatea hibrizilor somatici a fenomenului de
vigoare hibrid (heterosis), conducnd la accentuarea caracteristicilor genetice cantitative,
comparativ cu clonele parentale i soiurile standard cultivate. Ocazional hibrizii somatici pot fi
utilizai direct n cadrul procesului de ameliorare, de exemplu la obinerea de soiuri tetraploide
heterozigote de cartof, prin fuziunea de clone dihaploide. n general n cazul n care speciile
parentale sunt suficient de nrudite filogenetic, hibrizii rezultai sunt echilibrai genetic.
10

Descendenii obinui prin hibridarea somatic care conin n ntregime informaia genetic a celor
dou specii parentale, pot fi adesea ncruciai cu cartoful cultivat i ei constituie legtura necesar
pentru transferarea genelor speciilor slbatice ntr-un program de ameliorare.
Activitatea genelor pentru rezisten viral n cadrul hibrizilor somatici simetrici obinui ntre
Solanum Brevidens specia spontan rezistent la PVX, PVY i PRLV i Solanum Tuberosum,
respectiv ntre linii dihaploide de cartof complementare pentru inducerea rezistenei la PVX i
respectiv PVY a variat ntre cele aparinnd speciilor parentale, fiind influenat de:
- mutaiile structurale cromozomice sau genomice respectiv substituiile de baze azotate, n
cursul etapei de regenerare (faza de calus);
- efectul de dozaj genic;
- interaciile nucleare i nucleocitoplasmatice ntre cele dou genotipuri parentale.
Tehnica de hibridare somatic interspecific simetric prezint avantajul introducerii de gene
specifice care codific caracteristici de interes din genofondul unei specii spontane n germoplasma
unui soi cultivat sau a unei linii ameliorate, pstrnd trsturile intrinseci ale acesteia. Pan n
prezent, s-au raportat mai mult de 20 hibrizi somatici interspecifici simetrici n cadrul genului
Solanum reuindu-se transferul unor gene de interes pentru rezistena la viroze, man, insecte sau
nghe de la speciile spontane n germoplasma cartofului cultivat inclusiv a unor soiuri ameliorate
de cartof. n acest ultim caz, s-a demonstrat valoarea potenial a hibrizilor somatici hezaploizi
obinui ntre cartoful cultivat i specia spontan Solanum brevidens care au prezentat rezisten la
boli i producie crescut de tuberculi, iar rezistena i sensibilitatea la diferite viroze a fost asociat
cu pierderea de cromozomi individuali aparinnd speciilor parentale. Unele rezultate au dovedit c
genele care determin rezistena la atacul produs de Erwinia carotovora subspecia atroseptica n
cadrul hibrizilor somatici dintre Solanum tuberosum i Solanum brevidens segreg n generaiile
unu i doi de retroncruciare cu cartoful cultivat transmind un nivel mai sczut de rezisten la
descendeni .
Sisteme experimentale similare au fost utilizate pentru obinerea hibrizilor somatici simetrici ntre
Solanum etuberosum (E), specie spontan rezistent la virusul Y al cartofului i respectiv Solanum
tuberosum (T) ori Solanum berthaultii (B). Hibrizii somatici (E+BT) au prezentat comparativ cu
hibrizii somatici (E+T) un cromozom suplimentar derivat de la specia Solanum berthaultii integrat
n locul cromozomului 12 al cartofului conferind vigoare i fertilitate crescut plantelor hibride din
prima categorie. Plantele hibride regenerate i liniile lor de retroncruciare cu Solanum tuberosum
au fost evaluate n condiii de cmp experimental manifestnd o rezisten la PVY intermediar
ntre speciile parentale.n aceste cazuri menionate fertilitatea hibrizilor somatici este esenial,
ntruct acetia urmeaz s fie introdui n cadrul unor programe de ameliorare, pentru eliminarea
caracteristicilor genetice nedorite derivate de la specia spontan.
11

Strategia de hibridare somatic asimetric, pentru introducerea unui fragment redus de ADN din
genomul donor al speciei spontane, izolat prin iradiere cu radiaii X sau gamma sau prin tratament
cu substane chimice variate depete problemele de fertilitate sczut a hibrizilor somatici n
retroncruciarea urmtoare. Hibrizii somatici asimetrici interspecifici pot fi obinui prin eliminare
spontan de cromozomi sau n urma iradierii prin eliminare a protoplatilor aparinnd speciei
donoare prin inducerea de translocaii intergenomice. S-a stabilit o corelaie ntre doza de iradiere,
dependent de specie i respectiv gradul de fragmentare i eliminare a cromozomilor speciei
donoare, n cazul combinaiilor intragenerice spre deosebire de combinaiile intergenuri n care
distana filogenetic nflueneaz compoziia genomului hibrid iar iradierea direcioneaz
eliminarea cromozomic.
Strategia de selecie bazat pe utilizarea ca parteneri de fuziune a plantelor transformate genetic
care conin gene-markeri pentru rezistena la antibiotice este aplicat att n cazul metodei hibridrii
somatice simetrice, ct i n cadrul hibridrii somatice asimetrice. De asemene prin asocierea unor
markeri genetici selectivi cu genele de interes agronomic i aplicarea presiunii de selecie asupra
caracterelor induse, s-a realizat direcionarea i selecia segmentelor specifice ale cromozomilor n
hibrizii somatici asimetrici. Utilizarea cu succes a strategiei de selecie necesit cunoaterea
localizrii cromozomice a genelor cu importan agronomic, situate pe acelai cromozom sau pe
civa cromozomi diferii.
Hibridarea somatic interspecific cu specii slbatice aparinnd aceluiai gen a dat rezultate
deosebit de interesante. Pentru realizarea ameliorrii n scopul introducerii caracterelor de rezisten
de la speciile spontane n germoplasma cartofului cultivat sunt urmrite urmtoarele etape:
- Hibridarea interspecific;
- Fertilitatea hibrizilor n etapele de retroncruciare;
- Introgresia caracteristicilor de rezisten n genomul cartofului prin intermediul fenomenului
de crossing-over.
Pentru extinderea i mbuntirea fondului genetic al cartofului s-a realizat hibridarea somatic
interspecific cu specii spontane din cadrul genului Solanum cum ar fi Solanum brevidens, Solanum
bulbocastanum, Solanum chacoense, Solanum circaeifolium, Solanum commersonii, Solanum
nigrum, Solanum pinnatisectum, Solanum torvum. De asemenea s-au produs hibrizi somatici ntre
speciile compatibile sexual Solanum tuberosum i Solanum berthaulti. Rokka i colab. a obinut
recent haploizi prin culturi de antere pornind de la hibrizii somatici interspecifici dintre Solanum
brevidens i Solanum tuberosum. Androgeneza hibrizilor somatici interspecifici poate favoriza
apariia de recombinaii ntre cele dou genomuri distincte constitutive i respectiv mbuntirea
caracteristicilor genetice valoroase (capacitatea de tuberizare) n etapele consecutive de ameliorare.
Dac unii hibrizi somatici au prezentat o mare variabilitate genetic (Solanum tuberosum +
Solanum brevidens) sau caracteristici neinteresante din punct de vedere al ameliorrii cartofului
(Solanum tuberosum 4x + Solanum chacoense) alii dimpotriv prezint caracteristici ncurajatoare.
12

Cu alte cuvinte este vorba despre hibrizii somatici ntre linii diploide de cartof i unele specii
spontane diploide, hibrizi care menin starea tetraploid manifestnd totodat caracterele de
rezisten la stresul biotic i abiotic de la specia spontan.
- Hibridul somatic Solanum tuberosum 2x+ Solanum brevidens a manifestat rezisten la
virusul rsucirii frunzelor (PRLV) i virusul Y al cartofului, respectiv la atacul bacterian
produs de Erwinia sp.;
- hibrizii ntre cartoful diploid i Solanum bulbocastanum, respectiv Solanum pinnatisectum
au prezentat rezisten la Phytophthora infestans;
- hibrizii somatici fertili Solanum tuberosum 2x+ Solanum pinnatisectum obinui prin
electrofuziune au prezentat rezisten la man;
- hibrizii somatici fertili dintre cartoful dihaploid i Solanum commersonii au manifestat
introgresia genelor de toleran la nghe i de adaptabilitate la frig;
- hibridul Solanum tuberosum 2x + Solanum berthaultii a prezenat peri globulari de la specia
spontan care i confer rezinten la afide principalii vectori ai virusurilor;
- hibridul Solanum tuberosum 2x + Solanum circaeifolium a manifestat rezisten la
Phytophthora infestans i Globodera pallida;
- S. tuberosum + S. torvum a prezentat rezisten la Verticilium dahliae;
- Hibridul somatic mai recent obinut Solanum tuberosum 2x+ Solanum chacoense
evideniaz rezisten la atacul gndacului de colorado.
Trebuie remarcat i faptul c unii hibrizi somatici menin i calitile de producie ale soiurilor
cultivate. Mai mult, n unele cazuri, cum ar fi de exemplu liniile hibride Solanum tuberosum 2x+
Solanum phureja analizate n cmpul experimental n anul 1990, o linie hibrid a produs o cantitate
de tuberculi de trei ori mai mare dect soiul Bintje din care a provenit.
Deosebit de interesante sunt i rezultatele obinute n experimentele de cibridizare, respectiv
hibridare asimetric intergenuri. Obinerea de cibrizi se realizeaz prin ncorporarea ADN-ului
nuclear al speciei donoare, iradiat cu raze X sau gamma pentru stoparea diviziunii ADN, n nucleul
protoplastelor speciei recipiente tratate cu un inhibitor metabolic care inactiveaz ADN-ul
genomurilor organitelor citoplasmatice. Hibridarea somatic intergenuri s-a realizat ntre cartof i
speciile Lycopersicon esculentum, Lycopersicon pimpinellifolium i Lycopersicon pennellii. Pentru
aceste combinaii producerea de semine este extrem de rar. Totui n 1994, Jacobsen i colab. au
raportat obinerea unor hibrizi somatici asimetrici fertili ntre cartof i tomate. Plantele hibride
tetraploide i hexaploide regenerate au fost retroncruciate cu cartoful cultivat i analizate n cursul
generaiilor de rettoncruciare, coninnd cteva gene derivate de la Lycopersicon esculentum
introduse prin introgresie genetic, datorit fenomenului de crossing-over i genomul cartofului
cultivat. Sunt de remarcat i cibrizii androsterili obinui prin transferul organitelor de la
Lycopersicon esculentum la cartof, respectiv hibrizii asimetrici cu specii aparinnd genului
Nicotiana.
13

Pentru eliminarea genelor recombinate nedorite, introduse de la specia donoare, hibrizii simetrici
sau asimetrici trebuie retroncruciai repetat cu specia parental recipient, etape urmate de
selecie. n vederea reducerii acestor etape suplimentare ale procesului de ameliorare, producerea de
linii monosomice constituie o alternativ pentru transferul direcionat al cromozomilor unici care
conin gena de interes ntre specii nrudite, dar incompatibile sexual.
Ramulu i colab. (1996) au realizat producerea de plante hibride monosomice urmrind transferul
direcionat de cromozomi de la o linie donoare de cartof transformat genetic la o linie recipient de
Lycopersicon peruvianum, prin fuziunea chimic a microprotoplastelor sub aciunea PEG.
Valoarea potenial a hibrizilor somatici n cadrul programelor de ameliorare depinde de mai muli
factori:
- Combinaia genotipurilor parentale;
- Diferenele dintre nivelurile de ploidie ale speciilor parentale, respectiv dozajul genomic al
hibrizilor factori care pot influena morfologia i vigoarea plantelor rezultate,procesul de
tuberizare, determinarea lungimii stolonilor, rezistena viral, activitatea enzimatic n
rezistena la atacul produs de insecte, aranjamentele cromozomice meiotice, viabilitatea
polenului i fertilitatea plantelor hibride.
Analizai n condiii de ser i cmp experimental, hibrizii somatici produi sunt caracterizai printr-
o variabilitate accentuat, datorat fenomenelor de variabilitate somaclonal, mutaii, poliploidie,
respectiv interaciunea nucleu citoplasm.
Hibrizii somatici simetrici sau asimetrici rezultai prezint potenialul utilizrii ca linii de legtur
ntre speciile spontane ale genurilor Solanum sau Lycopersicon i soiurile cartofului cultivat.
Rezultatele demonstereaz succesul aplicrii acestor strategii de hibridare somatic, cu potenial
deosebit n transferul de material genetic ntre specii cu grade variate de nrudire, nenrudite
filogenetic sau incompatibile sexual, n ameliorarea neconvenional a cartofului.
Pentru aplicabilitatea practic este de mare importan att introducerea ADN-ului alogen care
conine genele de interes ct i motenirea stabil a acestor caracteristici genetice n decursul mai
multor generaii succesive. Aceste rezultate, obinute dup mai mult de dou decenii de
experimentare n hibridarea somatic a cartofului au prevzut conform prognozei lui Ferreira i
Zelcer (1989) introducerea pe pia a primelor soiuri de cartof rezultate din metode neconvenionale
de ameliorare.

Concluzii:
Hibridarea somatic este o modalitate nou de depire a schimbului de material genetic prin
nmulire sexuat.
14

Prin hibridarea somatic se inving urmtoarele bariere dintre cele 2 specii sau genuri utilizate ca
parteneri de fuziune:
- Incompatibilitatea la ncruciare
- Necoincidena nfloritului
- Embrioni neviabili
- Sterilitatea hibrizilor.
Hibridarea somatic reprezint un mijloc rapid de introducere a unor gene strine n interiorul unor
specii cultivate cu importan n ameliorarea plantelor i obinerea de noi soiuri.












Bibliografie:
Antohi, t., Gavril, L., 1981 - Progrese n genetica molecular. Editura tiiific i Enciclopedic,
Bucureti
Dinu, Ioana, 2003- Studii privind hibridarea somatic a unor plante din genul Solanum,Casa crii
de tiin, Cluj-Napoca
rdea, Gh., 1966 - Genetica i ameliorarea plantelor, Lito, USAMV, Iai
http://www.biotechnology4u.com
http://www.biologie.uni-hamburg.de/b-online/e29/29c.htm
15

http://ro.wikipedia.org