Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Capitolul I.:
OBIECTIVELE ACTIVITII LABORATORULUI DE MICROBIOLOGIE.
Organizarea laboratorului de microbiologie. Norme de protecia muncii...............7
Capitolul II :
STERILIZAREA I DEZINFECIA..9
Capitolul III:
RECOLTAREA I TRANSPORTUL PRODUSELOR PATOLOGICE..20
Capitolul IV:
EXAMENUL MICROSCOPIC..27
Capitolul V:
CULTIVAREA I IZOLAREA BACTERIILOR.................................................33
Capitolul VI:
TESTAREA SENSIBILITII IN VITRO LA SUBSTANE
ANTIBACTERIENE I ANTIFUNGICE..41
Capitolul VII:
METODE IMUNOLOGICE DE UZ CURENT 48
Capitolul.VIII:
DIAGNOSTICUL INFECIILOR STAFILOCOCICE.55
Capitolul IX:
DIAGNOSTICUL INFECIILOR STREPTOCOCICE....62
Capitolul X: DIAGNOSTICUL INFECIILOR PRODUSE DE NEISSERII...70
Capitolul XI:
DIAGNOSTICUL INFECIILOR PRODUSE DE BACILI
GRAM POZITIVI74
Capitolul XII:
DIAGNOSTICUL INFECTIILOR PRODUSE DE MYCOBACTERIUM
TUBERCULOSIS (Dr Arghir Oana).79
5
Capitolul XIII:
DIAGNOSTICUL INFECIILOR PRODUSE DE BACILI
GRAM NEGATIVI......83
Capitolul XIV:
DIAGNOSTICUL INFECIILOR PRODUSE DE BACTERII ANAEROBE
(Dr. Barbu Adina) 89
Capitolul XV:
DIAGNOSTICUL SIFILISULUI.93
Capitolul XVI:
DIAGNOSTICUL INFECIILOR PRODUSE DE CHLAMYDIA SI
MYCOPLASMA102
Capitolul XVII:
DIAGNOSTICUL INFECIILOR GENITALE ..107
Capitolul XVIII:
DIAGNOSTICUL INFECIILOR PRODUSE DE LEVURI
(CANDIDA).......................................................................................................112
Capitolul XIX
DIAGNOSTICUL INFECIEI CU TRICHOMONAS VAGINALIS...............117
Capitolul XX:
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECIILOR VIRALE.
DIAGNOSTICUL INFECIILOR CU HERPESVIRUSURI..119
Capitolul XXI
DIAGNOSTICUL HEPATITELOR VIRALE.................................................124
Capitolul XXII
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECTIEI HIV............................128
BIBLIOGRAFIE.................................................................................................132
Capitolul I
OBIECTIVELE ACTIVITII LABORATORULUI DE MICROBIOLOGIE
Organizarea laboratorului de microbiologie
Norme de protecia muncii
Principalele obiective ale activitii n laboratorul de microbiologie sunt:
Izolarea i identificarea microorganismelor prezente n produsele biologice i
aprecierea patogenitii acestora.
Testarea sensiblitii la antibiotice i chimioterapice a tulpinilor patogene
izolate.
Diagnosticul serologic: identificarea i titrarea n serul pacienilor a
antigenelor i anticorpilor dezvoltai mpotriva unor ageni infecioi bacterieni,
virali, parazitari.
Efectuarea unor studii epidemiologice i de cercetare pe baza rezultatelor
obinute n intervale de timp semnificative (ani, sezoane).
Activitatea didactic, de realizare a lucrrilor practice cu studenii i a
stagiilor medicilor rezideni.
Structura general a unui laborator de microbiologie trebuie s cuprind
Spatiul destinat laboratorului
- Sala de asteptare
- Spatiu de recoltare de snge
Spaiul destinal microbiologiei este separat de restul laboratorului , accesul fiind
restricionat la personalul laboratorului i semnalizat printr-un afi special. Acest
spaiu cuprinde:
- Spatiu de recoltare produse patologice i primire probe pentru microbiologie;
- Camera de pregatire medii pentru microbiologie, cu suprafata de 8. m2;
- Camer de lucru pentru microbiologie, cu suprafaa de 12 m2;
- spaiu de sterilizare;
- spaiu de depozitare materiale;
- vestiar pentru personal;
Toata suprafaa laboratorului trebuie pardosit cu materiale lavabile. (linoleum cu
proprieti antibacteriene destinat traficului intens)
Pereii trebuiesc zugravii cu material lavabil, iar n spaiul destinat bacteriologiei,
acetia trebuiesc placai cu faian sau linoleum antibacterian.
Circuitele funcionale
Spaiul trebuie compartimentat astfel nct s fie asigurate circuitele funcionale:
Accesul n laborator se face printr-o intrare separat. Din sala de ateptare exist
acces direct la grupul sanitar, dotat cu dou compartimente, unul destinat
personalului i altul destinat pacienilor.
Din sala de ateptare trebuie s existe accesul la sala de recolt.
7
Capitolul II
STERILIZAREA I DEZINFECIA
Definiii:
Prin sterilizare se nelege orice metod fizic sau chimic prin care sunt
distruse microorganismele, att formele vegetative ct i formele de rezisten
( sporii ) de la nivelul unui substrat.
Rezultatul unei proceduri de sterilizare este starea de sterilitate: un substrat steril,
complet lipsit de microorganisme vii, att formele vegetative ct i formele de
rezisten
Obinerea strii de "sterilitate", precum i meninerea ei (pn n momentul
utilizrii) confer siguran maxim , probabilitatea teoretic a existenei
microorganismelor fiind 106 .
Prin dezinfecie se nelege procesul prin care sunt distruse majoritatea
microorganismelor(n proporie de pn la 99 %) de pe obiectele din mediul inert,
cu excepia formelor de rezisten (sporilor bacterieni). Substanele utilizate n
acest scop se numesc dezinfectante.
Dezinfecia se aplic n cazurile n care curenia nu elimin riscurile de rspndire
a infeciei, iar sterilizarea nu este necesar.
Reducerea numrului de microorganisme de la nivelul pielii, mucoaselor i
esuturilor vii se numete antisepsie. Substanele folosite n acest scop se numesc
antiseptice. Unele substane pot fi folosite att ca dezinfectante, ct i ca
antiseptice, n concentraii diferite.
Decontaminarea se refer la procesul sau tratamentul care se aplic
dispozitivelor medicale utilizate, avnd scopurile urmtoare: diminuarea populaiei
de microorganisme, prevenirea uscrii produselor biologice, protecia personalului
care-l manipuleaz, protecia mediului mpotriva contaminrii
Metodele de sterilizare se clasific, dup agentul sterilizant, n
a. Sterilizare prin metode fizice:
Sterilizarea prin cldur
Sterilizarea prin filtrare
Sterilizarea cu ajutorul radiaiilor
b. Sterilizarea chimic
Sterilizarea prin cldur.
Cldura este un agent relativ ieftin i foarte eficient. Se preteaz la
sterilizarea prin cldur toate materialele termorezistente.
Sterilizarea prin cldur uscat:
9
Fig.II.1. a. Pupinel.
1.b. Principiul
pupinelului
10
de
funcionare
al
extragerea pachetelor din sterilizatorul cu abur sub presiune se folosesc mnui din
bumbac.
Cutiile, casoletele, i pachetele sterilizate se depoziteaz temporar pe o
suprafa special destinat materialului steril i se aranjez n dulapuri special
destinate depozitrii materialului steril.
Cutiile, casoletele, courile, navetele cu pachetele sterilizate se eticheteaz
(banderoleaz) notndu-se data, ora, sterilizatorul cu abur sub presiune la care s-a
efectuat sterilizarea, persoana care a efectuat sterilizarea.
12
Controlul sterilizrii se poate face face prin metode fizice, chimice i biologice.
a. Verificarea temperaturii: Se citete temperatura termometrului sau
temperatura afiat pe monitor. Temperatura se noteaz n caietul de sterilizare.
La autoclav: verificarea presiunii la manometru i a temperaturii.
b. Verificarea indicatorilor fizico-chimicici:
- virarea culorii la benzile adezive cu indicator fizico-chimic.
- virarea culorii la indicatorii fizico-chimici integratori. Indicatorul
integrator plasat n interiorul cutiilor metalice indic dac au fost ndeplinite
condiiile pentru o sterilizare eficient temperatura atins n interiorul
pachetului i timpul de expunere. n situaia n care virajul nu s-a realizat,
materialul se consider nesterilizat i nu se utilizeaz.
O dat pe lun Se utilizeaz indicator biologic cu Bacillus subtillis pentru
controlul eficacitii sterilizrii.
Pentru sterilizarea la pupinel pot fi utilizai indicatori biologici cu Bacillus subtillis
preparai industrial, comercializai, care conin 106 UFC sau preparai n laborator.
Acestea se plaseaz n mijlocul incintei sterilizatorului cu aer cald, odat cu
celelalte pachete pentru sterilizat. Se realizeaz ciclul complet de sterilzare. La
sfritul ciclului, indicatorii biologici se extrag din cutie i se incubeaz 48 ore la
56C, la laborator. Laboratorul va emite un buletin de analiz cu rezultatul
constatat.
Pentru controlul sterilizrii la autoclav sunt admii indicatorii biologici cu
forme diferite de condiionare:
Indicatori biologici cu Bacillus stearothermophylus impregnai pe supori de
bumbac n concentraii de 106 UFC.Acetia se pun n interiorul unei cutiitest. Cutia-test se introduce n autoclav odat cu materialul de sterilizat i se
realizeaz ciclul complet de sterilizare. La sfritul ciclului, indicatorul
biologic este trimis la laborator, unde este extras, nsmnat i incubat;
citirea se face la 7 zile.
Controlul bacteriologic al sterilizrii la autoclav cu indicator tipStearotest
120, pentru controlul sterilizrii la autoclav la temperatura de 120C cu o
durat de 30 minute
Acest produs este o suspensie de spori de Bacillus stearothermophyllus n
soluie nutritiv, cu indicator de pH. Coninutul fiolelor de Stearotest 120 este
limpede de culoare violet. Fiolele de tipStearotest 120 se introduc n autoclav
printre dispozitivele medicale i materialele supuse sterilizrii . Se efectueaz
sterilizarea, la 120C, timp de 30 min; dup sterilizare fiolele sunt aezate ntr-un
incubator de 56C.
Citirea i interpretarea rezultatelor:
-meninerea aspectului (culoare, transparen) nemodificat arat o sterilizare
corect;
Capitolul III
RECOLTAREA I TRANSPORTUL PRODUSELOR PATOLOGICE
Recoltarea produselor patologice n scopul examenului microbiologic
reprezint o etap extrem de important , de corectitudinea creia depinde n mare
msur exactitatea diagnosticului. Recoltarea produselor patologice adecvate, n
momentul corespunztor, cu respectarea regulilor de asepsie, transportul n condiii
optime i ct mai rapid spre laborator sunt absolut necesare .
Principii generale
Recoltarea probelor trebuie fcut de medic sau sub ndrumarea acestuia.
Se utilizeaz numai recoltoare sterile, pe care vor fi menionate datele de
identificare: numele pacientului, secia, produsul i data recoltrii, nainte de a se
face prelevarea.
Recoltarea unui produs biologic n vederea evidenierii florei microbiene
trebuie efectuat, pe ct posibil, naintea administrrii tratamentului cu antibiotice .
Din produsul biologic se va recolta poriunea sau fragmentul cu aspect
patologic, caracteristic.
Prelevarea trebuie fcut n momentul optim, n sensul posibilitii prezenei
unui numr ct mai mare de microorganisme i n funcie de evoluia clinic a bolii.
Cantitatea de produs trebuie s fie suficient pentru a permite efectuarea mai
multor examene.
Transportul probelor recoltate la laborator trebuie s fie fcut n timp ct
mai scurt, pentru a evita modificrile cantitative i calitative ale florei, sub aciunea
deshidratrii, modificrilor de temperatur, pH, etc. n probele pstrate prea mult
timp, microorganismele mor datorit deshidratrii, temperaturii prea sczute, sau,
din contr, unele medii ( urina) sunt favorabile multiplicrii excesive a florei
iniiale.
n cazul n care transportul poate dura mai mult timp sau nu exist
posibilitatea nsmnrii imediate a probelor, se folosesc recoltoare cu medii de
conservare i transport.
Transportul probelor se va face n containere speciale, inscripionate cu
meniunea material infectant, manipulate de persoane instruite, evitndu-se
rsturnarea containerelor i vrsarea materialelor .
Hemocultura
Prelevarea unei probe de snge pentru cultivarea pe medii adecvate
hemocultura- are indicaie n suspiciunea de bacteriemie, septicemie sau
endocardit bacterian. De asemenea hemocultura este indicat n strile febrile
prelungite fr o cauz decelabil.
Este foarte important ca puncia venoas s fie fcut n condiii de asepsie,
folosind pentru dezinfectare pielii la locul punciei venoase alcool 80-95% i
compui iodai: tintur de iod, betadin , ce vor fi lsai s acioneze pe piele minim
1 minut. Persoana care recolteaz va purta mnui sterile.
Vor fi recoltate cel puin trei probe, fie ntr-un interval de 24 h , n
suspiciunea de endocardit, fie la intervale de timp determinate de evoluia clinic,
n general n plin puseu febril, timp de 2-3 zile consecutiv. O singur prob este
insufucuent pentru stabilirea unui diagnostic corect, indiferent de rezultatul
acesteia.
Volumul de snge indicat a se recolta pentru hemocultur este de 20 ml la
adult i 1-5 ml la copii, n funcie de vrsta acestora. Sngele se recolteaz cu
seringa i se descarc imediat n mediile de cultur lichide speciale. Se folosete de
regul un set de dou medii de cultur: aerobe i anaerobe. Raportul optim snge:
mediu de cultur este de 1: 10 ( flacoanele cu medii pentru hemocultur au n
general 100 ml, pentru aduli i 20 ml pentru copii ). n cazul n care pacienii au
primit deja antibiotice, exist medii de cultur aerobe i anaerobe cu inhibitori de
antibiotice. Totui este de preferat ca mcar primele prelevri s se fac naintea
instituirii tratamentului antibacterian sau antifungic.
Incubarea hemoculturilor se face la 370 C, timp de 7 zile. n sistem clasic, se
fac treceri pe medii solide la fiecare 24 h. Hemocultoarele automate efectueaz
citiri cu ajutorul unei fotocelule ce nregistreaz modificarea turbiditii mediului
prin creterea bacterian, la intervale de timp de 15-30 minute. Confirmarea
pozitivrii hemoculturii precum i identificarea tulpinii izolate se face tot prin
trecere pe medii de cultur solide. Dac dup 7 zile hemocultura nu s-a pozitivat,
rezultatul definitiv va fi negativ ( hemocultur steril ).
Catetere intravasculare
Meninerea cateterelor intravasculare mai mult de 72h reprezint o surs
important de episoade de bacteriemie i de infecii la locul de inserie al
cateterului. Dup scoaterea cateterului, vrful de cateter segmentul distal, de 3-5
cm, secionat aseptic i introdus ntr-un tub cu capac steril, este trimis la laboratorul
de bacteriologie . Aici, peste vrful de cateter se toarn 2-3 ml bulion steril, astfel
nct s fie complet acoperit i va fi meninut astfel 24 h. Din bulion vor fi fcute
treceri pe medii de cultur solide.
Lichidul cefalorahidian ( L.C.R. )
Examenul lichidului cefalorahidian este indicat n suspiciunea de
meningit:febr, cefalee, fotofobie, redoarea cefei, etc.
Recoltarea L.C.R. se face prin puncie lombar, n condiii de asepsie strict,
dup dezinfecia pielii cu betadin sau ali compui iodai. Prelevarea se face n
sering, fr a aspira, apoi descrcat n flacoane sterile cu dop, sau-i n medii de
cultur lichide pentru hemocultur.
Bila
Recoltarea bilei se poate face prin tubaj duodenal sau, dup colecistectomie,
direct din vezica biliar cu tamponul steril sau n sering.
Tubajul duodenal se efectueaz dimineaa pe nemncate, cu sonda Einhorn
introdus pe nas sau pe gur, dup ce bolnavul a fcut gargar cu ser fiziologic. Se
introduce sonda pn la diviziune 45, apoi se culc bolnavul pe parte dreapt i se
continu introducerea sondei pn la diviziunea 60. Se aspir pe sond iniial bila
A, bil amestecat cu suc duodenal. Se introduc pe sond 30 ml soluie de sulfat de
magneziu sau sulfat de sodiu 40%, cu efect coleretic i colagog. Se aspir apoi bila
B, de culoare verde nchis, vscoas ( bila vezicular), apoi bila C, mai deschis la
culoare i mai fluid ( bila hepatic). Pentru examenul bacterilogic se folosete bila
B, 10-20 ml.
Din bila B se fectueaz culturi aerobe i anaerobe.
Din eantioane de bil A, B i C se efectueaz preparate ntre lam i lamel
pentru examenul parazitologic.
Exudatul faringian i exudatul nazal
Exudatul faringian se recolteaz cu tamponul steril, de unic folosin.
Recoltarea se face dimineaa pe nemncate, nainte ca pacientul s se spele pe dini,
s-i fac toaleta bucal sau s bea ceva. De asemenea, recoltarea se face naintea
oricrui tratament cu antibiotice sau local ( badijonri cu substane antiseptice,
antifungice sau antibacteriene).
Pacientul este aezat cu faa spre lumin , i se indic s deschid gura ct
poate de mult i cu ajutorul unui apstor de limb se preseaz limba astfel nct s
se evidenieze peretele posterior al oro-faringelui i tonsilele palatine. Se
examineaz macroscopic rapid oro-faringele i cu o micare rapid, blnd dar
precis se terg cu tamponul peretele faringian i tonsilele. Nu se ating peretele
superior al palatului i nici limba .( Secreia lingual este o investigaie aparte, cnd
se recolteaz tot cu tamponul strict de pe suprafaa limbii ).
Exudatul nazal se recolteaz n mod similar, cu tampon steril , din fiecare
fos nazal.
Exudatul faringian i cel nazal se transport la laborator i se nsmneazp n
cel mai scurt timp posibil, evitndu-se uscarea tamponului i efectul temperaturii
sczute, care duc la moartea florei bacteriene, n special a streptococilor i
pneumococilor. Pentru a evita aceste neajunsuri se pot folosi tuburi cu medii de
conservare i transport.
Secreiile conjunctivale, otice, secreiile de plag
Secreia conjunctival se recolteaz cu tamponul steril, dimineaa, naintea
efecturii toaletei i naintea aplicrii de coliruri sau de creme oftalmice .
pentru cultur, apoi se depune cte o pictur pe 2-3 lame de microscop, pentru
examenul direct i pentru frotiuri.
n vederea sepistrii parazitului Trichomonas se poate exmina sedimentul
urinar al primului jet de urin recoltat de diminea.
Scuame cutanate, fire de pr
Scuamele cutanate se recolteaz prin raclare uoar, cu o lam de bisturiu,
din regiunea periferic a leziunii, apoi se introduc ntr-o eprubet steril. Firelele de
pr modificate se recolteaz cu pensa prin smulgere, apoi se introduc ntr-o plac
Petri steril. Unghiile parazitate se taie cu o foarfece dezinfectat i se introduc
ntr-o plac petri steril.
Aceste produse vor fi supuse unor examene micologice i eventual
bacteriologice.
Capitolul IV
EXAMENUL MICROSCOPIC
Microscopul permite observarea corpurilor foarte mici, sub limita de
vizibilitate a ochiului liber, ntre care i microorganismele.
A. Microscopul fotonic posed o surs de iluminat, un condensor care
regleaz intensitatea luminii, un sistem de lentile care amplific imaginea, i
platina, suprafaa pe care se aeaz preparatul microscopic.
Lentila obiectiv ( numit n mod curent obiectivul ), este cea din apropierea
platinei . Un microscop are mai multe lentile obiectiv, cu putere de amplificare
diferit ( 10X, 20X, 40X, 100X) fixate pe un dispozitiv mobil numit revolver. n
funcie de necesiti, prin rotirea revolverului se utilizeaz obiectivul dorit.
Lentilele ocular ( sau ocularele), sunt cele din apropierea persoanei care face
examinarea. Ele sunt de obicei 7X sau 10X.
O c u la r e
R e v o lv e r
O b ie c t i v
C ondensor
D ia fr a g m a
M a c r o v iz a
M ic r o v iz a
S u r s a d e l u m in a
C o n t r o lu l m is c a r ii
in p la n o r iz o n ta l
Ocular
7X
10 X
Mrire
140
280
700
200
400
1000
d. Colorarea este o etap esenial n executarea unui frotiu. Coloraiile cel mai
frecvent folosite n bacteriologie se clasific n :
- coloraii simple: coloraia cu albastru de metilen ( A.M.)
- coloraii duble: coloraia Gram
- coloraii speciale: coloraia Ziehl-Neelsen, Coloraia Del Vechio,
coloraia pentru capsul, coloraia pentru spori, coloraia pentru flageli,
etc.
Coloraia cu albastru de metilen este o coloraie simpl, rapid, neagresiv
asupra bacteriilor prin lipsa unor timpi de decolorare i recolorare , i care
permite o orientare rapid asupra prezenei i morfologiei baceriilor. De
asemenea, permite vizualizarea capsulei bacteriene sub forma unui halou clar
n jurul acestora.
Tehnica coloraiei albastru de metilen:
- frotiul bine uscat i fixat se acoper cu soluie albastru de metilen 1%,
timp de 2-3 minute
- se scurge colorantul i se spal cu ap
- se usuc n stativ, la temperatura camerei
La examenul microscopic bacteriile i levurile apar colorate albastru nchis,
iar celulele eucariote: leucocite, celule epiteliale, etc, n albastru deschis, cu
nucleii mai nchii.
Coloraia Gram este cea mai utilizat coloraie n bacteriologie. Imaginat
n 1884 de danezul Hans Christian Gram , a suferit mici adaptri de-a lungul anilor,
dar n esen a rmas neschimbat. Permite vizualizarea marii majoriti a
bacteriilor, cu ncadrarea n categoriile morfologice: coci, bacili, etc. i
diferenierea lor n cele dou mari clase : bacterii Gram-pozitive i bacterii Gramnegative.
Timpii coloraiei Gram ( modificat de Hucker):
- frotiul uscat i fixat se acoper cu soluie de Violet de geniana sau Cristal
violet , 1-3 minute
- se scurge colorantul i se spal cu ap
- se acoper frotiul cu soluie Lugol , 1 minut
- se scurge Lugolul i se spal cu ap
- decolorare cu alcool-aceton 25 secunde (strict)
- se spal cu ap
- se acoper frotiul cu soluie fuxin 10% diluat extemporaneu, 1 minut
- se scurge colorantul i se spal cu ap
- se usuc n stativ, la temperatura camerei
La examenul microscopic, unele bacterii apar colorate n violet Gram
pozitive, altele apar colorate n roz- Gram negative.
Capitolul V
CULTIVAREA I IZOLAREA BACTERIILOR
Mediile de cultur
Mediile de cultur sunt medii care permit dezvoltarea in vitro a bacteriilor.
Primele medii de cultur au fost obinute pornind de la bulionul de carne, medii
complexe cu compoziie incomplet cunoscut. n prezent se utilizeaz medii
sintetice, cu o compoziie bine precizat. Ele se comercializeaz fie gata preparate
i turnate, gata de folosire, fie sub form deshidratat, urmnd a fi rehidratate,
sterilizate i apoi turnate n plci Petri sau tuburi, n funcie de utilitatea lor. ( Fig.
V.1. i V.2.)
n numr mic. Aceste medii sunt medii lichide, bogate n substane nutritive. Cele
mai folosite sunt: bulionul nutritiv, bulionul cu extract de creier i cord. Dac la
aceste medii se adaug, ele devin medii selective favorabile unor anumite specii:
streptococ, pentru stafilococ (Chapmann lichid), pentru bacilul difteric ( OST), etc.
Medii difereniale i selective . Mediile difereniale conin substane
( zaharuri, aminoacizi)care sunt substrate ale unor reacii metabolice i substane
indicatoare, ce evideniaz dac tulpina bacterian testat are sau nu capacitatea de
ale utiliza. (vezi tabel V.1)
Tabel V.1. Aspectul virrii culorii la principalii indicatori
Substana indicatoare Culoarea iniial
Culoarea dup virare
Albastru de brom-timol Albastru-verzui la pH Galben la pH 6
7.6
Rou neutru
Roz - Orange la pH Rou la pH 8
6,8
Rou fenol
Rou la pH 8.4
Galben la pH 6.8
Mediile selective conin substane inhibante: antibiotice, sruri biliare,
compui colorani, care permit dezvoltarea unui numr mic de specii sau chiar ale
unei singure specii.
Unele medii posed att sistemul selectiv ct i sistemul diferenial.
Exemple:
- mediul AABTL , mediul Mac Conkey medii difereniale
- mediul Chapmann solid mediu selectiv pentru stafilococi;
- mediul ABE ( agar, bil, esculin) mediu selectiv pentru identificarea
enterococilor.
- mediul ADCL, mediul Salmonella-Shigella medii selective i difereniale pentru
enterobacterii
Medii pentru anaerobi . Culturile pentru anaerobi pot fi fcute n medii
lichide cu adaus de substane reductoare ( exemplu: bulion thioglicolat cu hemin
i Vit.K) , cu incubare n atmosfer obinuit, sau pe medii solide ( Schaedler blood
agar ) cu incubare n anaerobioz. ( fig. )
Medii pentru antibiograme: medii nutritive care permit creterea
majoritii speciilor bacteriene; se urmrete ca inhibiia creterii s fie datorat
strict antibioticelor. Exemple: Muller-Hinton solid pentru testarea susceptibilitii
antimicrobiene , Muller-Hinton solid cu adaus de Na Cl 2% pentru testarea
sensibilitii la antibiotice a stafilococilor, Muller-Hinton solid cu snge pentru
testarea sensibilitii la antibiotice streptococilor
Medii pentru identificare biochimic sunt medii ce conin un zahar
( glucoz, lactoza, zaharoz, maltoz, etc) sau alte substrate biochimice: uree, citrat,
lizin sau medii cu mai multe substrate: TSI ( triple sugar iron), MIU ( triptofan,
Fig.V.4. Poziia ansei pentru nsmnarea pe mediul solid (dup Benson J.H.)
Capitolul VI
TESTAREA SENSIBILITII IN VITRO LA SUBSTANELE
ANTIBACTERIENE I ANTIFUNGICE
Testarea sensibilitii in vitro la substanele antibacteriene se numete
antibiogram. Testarea sensibilitii in vitro la substanele antifungice poart
numele de antifungigram. Efectuarea lor reprezint un moment important al
activitii n laboratorul de microbiologie iar utilizarea rezultatelor acestor testri
permite un tratament intit, corect i eficient.
Antibiograma difuzimetric standardizat (metoda Kirby-Bauer)
Materiale necesare
Mediul de cultur utilizat este de regul Muller-Hinton, mediu nutritiv i
fr substane inhibitoare, cu pH 7,2-7,4. O excepie o reprezint antibiograma
pentru streptococi, la care mediul utilizat este geloza-snge. Mediul se toarn n
plci Petri n strat de 4 mm grosime.
Inoculul bacterian este reprezentat de o suspensie cu densitatea de 0,5 Mc
Farland ( aproximativ 108 microorganisme / ml ), efectuat din cultura pur a
tulpinii ce urmeaz a fi testate. Aceast densitate se realizeaz cu aproximativ 2-3
colonii la 2 ml bulion , dar obligatoriu se verific i se ajusteaz la un densitometru.
Discurile cu antibiotice conin cantiti standardizate din fiecare antibiotic.
Vor fi folosite 2-3 antibiotice din fiecare clas i cteva antibiotice de rezerv. Ele
vor fi alese n funcie de tulpina bacterian testat i eventual de sediul infeciei , de
exemplu:
setul de antibiotice la care se testeaz stafilococii,
setul de antibiotice la care se testeaz streptococii,
setul de antibiotice pentru bacilii Gram-negativi,
setul de antibiotice pentru bacteriile izolate din infeciile urinare.
Tehnica de lucru:
Suspensia bacterian este nsmnat uniform pe toat suprafaa mediului,
fie cu ajutorul unui tampon steril, fie prin inundarea plcii urmat de ndeprtarea
excesului de inocul prin aspirare cu o pipet steril.
Citire i interpretare:
n tubul martor, fr antibiotic trebuie s existe cretere bacterian )
( tulburarea mediului); eprubetele n care mediul este limpede semnific , prin lipsa
multiplicrii bacteriene, sensibilitatea la antibioticul testat.
Ultima diluie care a inhibat creterea corespunde CMI.
II: Din epubetele cu mediu clar se nsmneaz cte un sector de mediu MullerHinton solid , fr antibiotic. Dup incubare, se noteaz ultima diluie la care
bacteriile nu au crescut pe mediul solid, aceasta corespunznd CMB.
Antibiograma prin diluia antibioticului n mediu solid
Se prepar soluiile stoc de antibiotic, cu concentraii de 5,120 g/ml, din
care se vor face diluii binare, apoi diluia final 1:10 n geloz topit Muller
Hinton. Apoi geloza se toarn n plci Petri n strat de 4 mm grosime, obinndu-se
medii solide cu diferite concentraii de antibiotic. Pentru testarea streptococilor, la
geloza topit se adaug 5% snge defibrinat de cal sau de berbec.
nsmnarea mediului se vaface cu ansa calibrat de 0,001 ml, care se
ncarc cu suspensie dun cultura de testat cu densitatea de 0.5 McFarland.
Se nsmneaz i un mediu ft antibiotic, pentru controlul creterii.
CMI este dat de cea mai mic concentraie de antibiotic la carenu se observ
colonii bacteriene pe suprafaa de inoculare.
Metoda miniaturizat API de diluii n mediu lichid folosete galerii de testare a
sensibilitii, ce conin antibiotice n stare deshidratat.
Exist diferite tipur i de teste
antibiograme convenionale, cu dou concentraii limit i incubare de 18-24h
antibiograme rapide, Rapid ATB, cu incubare de 4h, pentru stafilococi i
enterobacterii.
Principiul metodei
Testele se bazeaza pe determinarea ratei de cretere a bacteriilor n prezena
antibioticului.
Galeriile sunt confecionate din material plastic transparent i conin 32
godeuri .
Primele dou godeuri nu conin antibiotic i servesc drept martor de cretere.
Lipsa creterii sau creterea insuficient n acestea invalideaza rezultatele.
Celelalte godeuri conin antibiotice n form deshidratat, n diferite concentraii.
n funcie de tipul de antibiogram, tulpina izolat poate fi testat la una sau mai
multe concentraii ale unui antibiotic. Godeurile trebuie inoculate cu o suspensie
bacterian n mediu special ATB medium sau NaCl 0,85%.
Galeriile sunt apoi incubate un interval de timp corespunztor- 4h sau 24h la 37OC.
I
8-16g/ml
R
32g/ml
Capitolul VII
METODE IMUNOLOGICE DE UZ CURENT
REACTIILE DE AGLUTINARE, HEMAGLUTINARE,
HEMAGLUTINOINHIBARE
Principiul reaciilor de aglutinare este formarea de legturi ncruciate ntre
imunoglobulinele G ( IgG) bivalente sau imunoglobulinele M ( IgM) pentavalente
i antigenele cu multipli determinani antigenici ( epitopi). Aceasta face ca o
molecul de imunoglobulin s reacioneze cu determinanii antigenici mai multor
celule sau de pe suprafaa mai multor particule , producnd agregarea (aglutinarea)
i eventual sedimentarea acestora.
Reaciile sunt foarte sensibile i specifice.
Excesul de antigene nu inhib reacia, spre deosebire de excesul de anticorpi,
care poate produce fenomenul de pro-zon.
Aglutinarea direct este cea n care celulele sau particulele sunt aglutinate
direct de anticorpi. Hematiile, bacteriile, fungii i alte microorganisme pot fi
aglutinate direct de anticorpii specifici.
Testele de aglutinare direct pot fi efectuate att pentru detecia unor
antigene pe suprfaa celulelor; de exemplu antigenele de grup ABO sau Rh, fie
pentru detecia anticorpilor n ser exemplu: prezena hemaglutininelor la rece;
prezena anticorpilor anti-neutrofile
Aglutinarea indirect ( pasiv) se refer la aglutinarea unor antigene
adsorbite artificial pe suprafaa unor celule (hematii) sau particule insolubile
( latex, carbon)
Reaciile de aglutinare indirect sunt folosite:
-fie pentru detectarea anticorpilor n probe de ser, folosind antigenele
corespunztoare de pe suprafaa unor celule sau adsorbite pe suprafaa unor celule
sau particule . Exemple :reacii de latex-aglutinare pentru: ASLO ( anti-treptolizina
O), F.R. (factor reaumatoid), ANA, SLE (anticorpi antinucleari); RPR-carbon
pentru anticorpii anti-cardiolipinici.
Exemple:
Dozarea anticorpilor
a)
Metoda ELISA INDIRECT presupune urmtorii timpi:
Capitolul VIII
DIAGNOSTICUL INFECIILOR STAFILOCOCICE
Prelevarea produsului patologic se face cu tamponul steril, tergnd cu o
uoar apsare zona afectat a tegumentului, n cazul leziunilor cutanate. Tot cu
tamponul steril se recolteaz puroi din leziunile deschise superficiale sau dup
evacuarea chirurgical a coleciilor profunde. Prelevarile trebuiesc efectuate
inaintea oricarui tratament cu antibiotice .
Examenul direct.
Din produsele patologice se pot efecta frotiuri colorate Albastru de metilen,
care se examineaz la microscopul optic, cu obiectivul 100 x cu imersie.
Stafilococii sunt coci Gram pozitivi, cu diametrul de 0.8-1 micrometri,
grupai tipic in ciorchine, dar i n grmezi, lanuri scurte, sau izolai. Ei sunt in
general necapsulai.
Caractere de cultur
nsmnarea produselor necontaminate i a celor moderat contaminate se
face n bulion i pe geloz snge.
Stafilococii sunt bacterii nepretenioase, care cresc i pe geloza simpl,
nutritiv, dar se prefer geloza snge pentru observarea hemolizei. Se foloseste
geloza cu sange defibrinat de berbec 7% si nu cu sange de om, care contine
inhibitori nespecifici si eventual anticorpi antistafilococici.
Nu este indicata la prima izolare folosirea unui mediu selectiv (Chapmann
sau Baird -Parker), care ar putea falsifica rezultatele prin selectarea exclusiva a
S.aureus, chiar in cantitate mica, neputandu-se face deosebirea dintre o colonizare
si un proces infectios real.
Daca produsul patologic este lichid de vrstur, materii fecale, sau
alimente , n cazurile de toxiinfecie alimentar, atunci este indicat folosirea
mediilor selective hiperclorurate Chapmann lichid i solid
Dupa o incubatie de 18-24h la 37 oC se obtine o cultura abundenta si
caracteristica.
Cultura in bulion are un aspect tulbure, omogen.
Cultura pe geloza -sange: colonii cu diametrul de 1-3 mm, de tip S (smooth),
bombate, lucioase, opace, cu consistenta cremoasa. Pigmentul auriu, caracteristic
speciei S.aureus apare dupa 24 sau 48h.
Alte specii care pot produce colonii pigmentate sunt: S.saprophiticus
(citreus) , S.hominis, S.haemoliticus si S.hyicus, subsp.chromogenes. Pigmentii
sunt carotenoizi, iar culoarea variaza de la galben la oranj.
Fig. VIII.1. Stafilococi pe frotiu colorat Gram din produs patologic (K.Tomae)
Capitolul IX
DIAGNOSTICUL INFECIILOR STREPTOCOCICE
Definiie i caractere generale: familia Streptococcaceae cuprinde coci
Gram-pozitivi, izolai i grupai n lanuri de diferite lungimi sau perechi, imobili,
nesporulai, aerobi facultativ anaerobi; sunt catalaz-negativi i oxidazo-negativi.
Streptococii sunt bacterii pretenioase nutritiv, ce necesit pentru creterea in vitro
medii complexe, nutritive, mediul de elecie fiind geloza-snge. ( Fig. IX.1., IX.2.)
Exist mai multe genuri de streptococi cu importan pentru om: Genul
Streptococcus, genul Enterococcus, genul Lactococcus. Apartenena la familia
Streptococcaceae a fost stabilit pe criterii fenotipice i de biologie molecular.
Principalele criterii de clasificare a streptococilor, care reprezint i criterii
de identificare sunt: aspectul hemolizei produs pe mediul geloz-snge i prezena
antigenului de grup Lancefield.
n funcie de hemoliz, se deosebesc:
- streptococii -hemolitici, care produc hemoliz complet, sub forma unei
zone clare, bine delimitate, cu diamentrul n general mare n raport cu
marimea coloniilor.
- Streptococii -hemolitici, produc hemoliz parial, verzuie ( viridans), mai
slab delimitat.
- Streptococii -hemolitici, produc o zon de hemoliz incomplet delimitat
de o zin nust de hemoliz incomplet
- Streptococii nehemolitici ().
Clasificarea Lancefield se bazeaz pe prezena antigenului de grup
polizaharidul C, de la nivelul peretelui celular. n funcie de cest antigen ,
streptococii aparin grupelor A-H i K-W. Exist i streptococi negrupabili, care nu
posed antigenul de grup, de exemplu streptococii viridans .
Majoritatea speciilor ntlnite la om sunt saprofite condiionat patogene i fac
parte din flora normal a tegumentului, tractului respirator, digestiv, genital. Specia
obligat patogen este Streptococcus pyogenes, dar i aceast specie poate fi izolat
i de la purttori sntoi.
Streptococcus pyogenes
Streptococul -hemolitic de grup A determin:
- infecii respiratorii: faringite, angine
- infecii cutanate: impetigo, erizipel, infecii de plag, in special la ari
- celulite, fasceita necrozant
- scarlatin
- febra puerperal, oc toxic
Capitolul X
DIAGNOSTICUL INFECIILOR PRODUSE DE NEISSERII
Cocii Gram-negativi cuprind genurile: Neisseria, Branhamella, Moraxella,
Kingella i Eikenella
Genul Neisseria
Genul cuprinde Coci Gram-negativi cu form reniforma (de boabe de fasole),
grupati n diplo ( perechi) cu prile concave fa n fa, sunt imobili, nesporulai,
ce pot prezenta capsul. Posed enzima citocrom-oxidaz. Sunt aerobi, dar in vitro
cresc mai bine n atmosfer mbogit cu CO2.
- dou specii patogene: N. meningitidis i N. gonorrhoeae
- specii saprofite: N. sica, N. flava, N. lactamica.
Neisseria meningitidis ( meningococul)
Neisseria meningitidis colonizeaz iniial nazofaringele, determinnd o
rinofaringit uoar sau o stare de portaj ( asimptomatic). De la acest nivel
bacteriile pot trece n circulaia general: bacteriemie, meningococemie tranzitorie
cu febr, stare general modificat, ce se poate fie rezolva sponatan n 1-2 zile, fie
se poate complica cu o meningit acut. Debutul meningitei meningococice poate fi
brusc su insidios. n meningita acut manifestrile clinice sunt febra, starea
general alterat, semnele de hipertensiune intracranian: cefalee, vrsturi, semne
de iritaie meningeal: fotofobie, redoarea cefei. Meningele sufer un proces
inflamator acut, insoit de un exsudat bogat n leucocite PMN.
Septicemia evolueaz cu febr nalt, oc, purpur, coagulare intravascular
diseminat ( CID). Forma fulminant: sindromul Waterhouse-Friderichsen apare la
5 - 15 % din cazuri i are o rat nalt a mortalitii.
Diagnosticul de laborator
Produsele patologice ce trebuiesc recoltate n suspiciunea unei infecii
meningococice sunt: secreie nazo-faringian, L.C.R., hemocultur. Recoltarea se
va face naintea administrrii de antibiotice
Examenul microscopic al frotiurilor colorate Gram efectuate din L.C.R. pot
evidenia prezena de leucocite polinucleare i a cocilor Gram negativi cu form
reniform, grupati n perechi cu prile concave fa n fa, ncapsulai, cu
localizare predominent extraleucocitar. LCR prezint o reacie inflamatorie:
leucocite 100-1000 / l, proteinorahie, hipoglucorahie (glucoza mai mic de 60%
din valoarea simultan a glicemiei).
n suspiciunea de artrit septic se recolteaz lichid sinovial. n oftalmia nounscutului se recolteaz secreie conjunctival. Acestea trebuiesc recoltate nainte
de instituirea tratamentului cu antibiotice.
n suspiciunea de infecie sistemic se recolteaz hemocultur
Examenul microscopic al frotiurilor colorate Gram din secreii evideniaz ( n
peste 90% din cazuri n uretrite i aproximativ 50% din cazuri n cervicite) prezena
de numeroase leucocite polinucleare i a cocilor Gram negativi cu form reniform,
grupati n diplo cu prile concave fa n fa, nencapsulai, cu localizare
predominent intraleucocitar. Prezena acestui aspect este sufucient pentru
diagnosticul prezumptiv de infecie gonococic.
Cultura i identificarea este necesar pentru confirmarea diagnosticului i
precizarea speciei, avnd n vedere c i alte specii nepatogene de Neisseria pot
ocazional habita mucoasele genitale.
Cultura se va face pe medii nutritive, Neisseriile fiind bacterii pretenioase:
geloz-snge i geloz chocolat, Muller-Hinton sau Thayer-Martin. Incubarea se
face la 37O C, n atmosfer cu 5-10% CO2. Citirea se va face la 24 i 48h. Coloniile
sunt mici 0.5-1mm, de tip S sau M, transparente sau opace, albe-gri. Coloniile
suspecte se verific prin testul oxidazei ( pozitiv) i frotiu colorat Gram ( coci
Gram-negativi). Testul catalazei este de asemenea pozitiv.
Identificarea biochimic este necesar pentru precizarea speciei i se bazeaz
pe fermentarea zaharurilor glucoz, maltoz, lactoz i zaharoz sau fructoz cu
producerea de acid. Pentru N. meningitidis reaciile sunt: glucoz pozitiv, maltoz
lactoz i zaharoz sau fructoz negative.
Diagnosticul imunologic poate fi fcut prin:
-imunofluorescen direct, cu anticorpi monoclonali cuplai cu fluorocromi
- ELISA pentru antigene ale N. gonorrhoeae
- biologie molecular: PCR sau LCR ( Ligase chain reaction) pentru detecia
DNA propriu N. gonorrhoeae.
Antibiograma este indicat datorit apariiei tulpinilor rezistente la Penicilin.
Trusa de antibiotice care va fi folosit va cuprinde: Penicilin, Amoxicilin,
Amoxicilin+ac. Clavulanic, Ceftriaxon, Cefixim, Doxiciclin, Spectinpmicin,
Gentamicin, Clindamicin, Ofloxacin, Ciprofloxacin, Pefloxacin.
Capitolul XI
DIAGNOSTICUL INFECTIILOR PRODUSE DE BACILI GRAMPOZITIVI
Genul Corynebacterium. CORYNEBACTERIUM DIPHTERIAE
Genul Corynebacterium cuprinde bacili Gram pozitivi nesporulai, imobili,
drepi sau uor ncurbai, cu extremitile ngroate, n form de mciuc, colorai
neuniform. Pot prezenta incluziuni de polimetafosfat (granulaiie metacromatice
Babe-Ernst) care se coloreaz n rou cu albastru de metilen. Au o grupare
caracteristic n form de litere chinezeti sau palisade. ( Fig.1.)
Principala specie patogen pentru om este C.diphteriae ( bacilul difteric).
Exist i specii saprofite, numite corineformi sau difteromorfi.
Caractere de cultur: C. Diphteriae este o bacterie pretenioas. Crete i
pe geloza-snge, dar crete mai bine pe medii speciale: mediul selectiv Tinsdale cu
telurit de potasiu cu ser, mediul electiv Loffler , mediul de mbogire OCST ( cu
ou, cistin, ser, telurit) sau OST ( cu ou, ser, telurit)
Majoritatea speciilor cresc la 37 o C, n aerobioz sau n atmosfer cu 5%
CO2. Dup aspectul coloniilor pe geloza snge cu cistin i telurit se disting 3
variante: var. gravis, var. mitis, var. intermedius, numite astfel deoarece s-a
considerat c determin forme grave, uoare , respectiv medii de boal.
Grupul Corynebacterium diphteriae cuprinde 3 specii toxigene:
C.diphteriae ( cu biotipurile gravis, mitis, intermedius i belfanti), C.ulcerans i
C.pseudotuberculosis.
C.diphteriae poate fi izolat att de la bolnavii de difterie ct i de la purttorii
sntoi. Difteria este deteminat de formele toxigene ale bacteriei i se manifest
n principal prin faringit, amigdalit cu false membrane, adenopatie
laterocervical, semne de toxicitate sistemic. Tulpini netoxigene de C.diphteriae
pot determina manifestri clinice locale uoare: faringit, amigdalit, dar i
endocardit.
C.ulcerans produce infecii cutanate i ale esuturilor moi i poate fi izolat de
la bolnavi din leziuni , dar i la purttori sntoi din nazofaringe.
C.pseudotuberculosis are habitatul natural animalele ( oi, cai) i ocazional
produce infecii cutanate, ale esuturilor moi i limfadenit necrozant la om.
Recoltarea produselor patologice depinde de natura infeciei:
n suspiciunea de difterie se recolteaz trei tampoane cu secreii
faringiene, cel mai corect din zonele profunde, dup detaarea cu grij a falselor
membrane i un tampon nazal.
n cercetarea portajului dou tampoane faringiene i un tampon nazal.
n infeciile cutanate sau cu alt localizare se recolteaz de la nivelul
leziunilor respective i obligatoriu un tampon nazal i unul faringian.
Din tampoanele faringiene se efectueaz:
Diagnosticul antraxului.
Produsele patologice sunt: secreie sau puroi, sput, snge, LCR, materii
fecale. Bacillus antracis este o bacterie ce rezist bine n produsul patologic
recoltat, cu sau fr mediu de conservare i transport.
Examenul microscopic al unui frotiu din produsul patologic evideniaz
bacili Gram -pozitivi, cu morfologie caracteristic ( fig.XI.5.)
Capitolul XII
DIAGNOSTICUL INFECTIILOR PRODUSE DE MYCOBACTERIUM
TUBERCULOSIS
Genul Mycobacterium include bacili aerobi , cu dimensiuni de 2-5 m /
0.3m, drepi sau uor ncurbai, imobili, nesporulai, nencapsulai. Ei sunt numii
bacili acid-alcoolo rezisteni ( BAAR), datorit proprietilor tinctoriale specifice.
Mycobacteriile nu se coloreaz n coloraiile uzuale i nici nu se decoloreaz, la
temperatura camerei. Aceast proprietate se datoreaz prezenei cerurilor n
structura peretelui celular.
M. tuberculosis este strict aerob. M. Bovis i africanum pot fi microaerofili.
Exist dou specii obligat patogene pentru om:
M.tuberculosis, care determin tuberculoza
M. Leprae, care preoduce lepra.
Tuberculoza la om mai poate fi produs i de alte specii, ca M. Bovis i M.
Africanum.
M. ulcerans poate determina infecie cutanat.
Alte specii, numite micobacterii atipice, sunt saprofite, condiionat patogene,
putnd determina infecii n special la bolnavii imunodeprimai: M. Kansanii, M.
Avium. M. intracelularae, M fortuitum, M. Chelonei.
Tuberculoza poate afecta orice organ, dar cea mai frecvent este
tuberculoza pulmonar. Tuberculoza pulmonar primar afecteaz n special
subieci tineri: copii sau aduli tineri. Tuberculoza secundar este caracteristic
adulilor. Alte forme de tuberculoz -tuberculoza extrapulmonar- sunt: tuberculoza
ganglionar, tuberculoza osoas, tuberculoza uro-genital, tuberculoza digestiv,
tuberculoza S.N.C., tuberculoza cutanat, tuberculoza asociat H.I.V., produs
adesea de mycobacterii atipice.
Recoltarea produselor patologice se va face n funcie de localizarea
infeciei: sput, lichid de aspiraie sau lavaj bronic, lichid pleural, probe obinute
prin biopsie, urin, lichid de spltur gastric, LCR, lichid pericardic, lichid
peritoneal. n tuberculoza miliar se recomand i hemocultura.
n suspiciunea de tuberculoz pulmonar se recomand recoltarea a trei
probe de sput succesive, obinute dimineaa.
Recoltarea se va face n recipiente sterile cu capac, evitndu-se contaminarea
mediului, i urmrind protecia personalului medical implicat.
De asemenea, laboratoarele n care se desfoar diagnosticul microbiologic
al tuberculozei acesta se va desfura n spaii separate, cu dotare adecvat.
Prelucrarea produselor patologice n vederea izolrii mycobacteriilor
presupune anumite reguli generale:
- eliminarea sau reducerea numeric a celorlalte microganisme n produsele cu
flor de asociaie, prin decontaminarea acestora;
Capitolul XIII
DIAGNOSTICUL INFECTIILOR PRODUSE DE BACILII GRAM
NEGATIVI
Familia Enterobacteriaceae
Familia Enterobacteriaceae este format din peste 200 specii de bacili
Gram negativi, cu habitat natural tractul intestinal al omului i animalelor. Au
dimensiuni variabile, dar cuprinse ntre 10 16 m lungime i 0.3 m diametru,
aerobi facultativ anaerobi; unii mobili datorit unor cili peritrichi, alii imobili;
majoritatea nencapsulai, iar unii ncapsulai; nesporulai.
Lizin
Citrat
M. Simmons
H2S
Alte teste
Identificarea antigenelor somatice pentru tulpinile enteropatogene ( EPEC)
prin reacii de aglutinare sau de latex-aglutinare .
Identificarea toxinelor
prin
teste ELISA, latex aglutinare sau
seroneutralizare.
Identificarea serologic a tulpinilor enteroinvazive ( EIEC)
Testarea cacterelor de patogenitate ale ECEH : producerea de enterocolit
hemoragic la purcel. Efect citopatic n culturi celulare ( celule Vero).
Teste de biologie molecular: PCR pentru detectarea genelor de patogenitate.
GENUL KLEBSELLA
Cultura:
Pe mediul geloz-snge formeaz colonii mari, bine vizibile, 1-3 mm
diametru, semitransparente, de tip M .
H2S
+
Alte teste
Identificarea antigenelor capsulare prin reacii serologice de aglutinare.
Lizotiparea testarea sensibilitii tulpinilor de Klebsiella izolate la un set de
fagi litici, n special n scopuri epidemiologice .
GENUL PROTEUS
Cultura:
Pe mediul geloz-snge formeaz colonii de talie medie (1-2 mm diametru),
de tip S, greu vizibile datorit fenomenului de migrare n valuri i de invazie a
plcii.
Pe mediul AABTL: colonii de talie medie (1-2 mm diametru), de tip S, lactozononfermentative (L-): incolore sau de culoare verzuie. Culoarea mediului rmne
nemodificat. Uneori se observ fenomenul de migrare.
Pe mediul ADCL: colonii de talie medie (1-2 mm diametru), de tip S, lactozononfermentative (L-): incolore sau de culoarea mediului. Culoarea mediului
rmne nemodificat.
Examenul microscopic al unui frotiu colorat Gram efectuat din cultur:
bacili Gram negativi.
Identificarea biochimic:
Mediu TSI
Uree Indol Mobilitate
Glucoz +
Lactoz v
Zaharoz v
+++
Lizin
Citrat
M. Simmons
H2S
GENUL SALMONELLA
Diagnosticul este bacteriologic i serologic.
Diagnosticul bacteriologic. n febra tifoid i paratifoid, n funcie de stadiul
evolutiv al bolii se recolteaz urmtoarele produse patologice:
BOLNAVI BOLNAVI BOLNAVI BOLNAVI CONVA
LESCENTI
SAPT. I
SAPT. II SAPT. III SAPT. IV
PURTA
TORI
CRONICI
HEMOCULTURA
+++
++
+/-
+
+
++
-/+
+
+++
+
+
+
+
+/-
+/+/-
+/_
-
+/-
COPROCULTURA
UROCULTURA
MEDULOCULTUR
A
BILICULTURA
Lizin
Citrat
M. Simmons
H2S
+/-
++/-
GENUL SHIGELLA
Diagnosticul de laborator al disenteriei bacilare se bazeaz pe efectuarea
coproculturii. Aceasta se recolteaz dun scunul emis spontan, de preferin din
zonele cu aspect modificat: cu mucus i snge. La bolnavii cronici i purttori
recoltarea se face cu sonda Nelaton steril, prin aspirare din colonul sigmoid. Se
mai pot recolta probe direct de la nivelul leziunilor rectosigmoidiene cu ocazia
examinrii endoscopice.
Se va folosi mediul de conservare i transport Carry Blair.
Cultivarea se face pe medii selective i difereniale (AABTL, ADCL).
Incubarea se va face 24h, unele tulpini necesitnd 48h. Creterea este sub forma
unor colonii de tip S lactozo-non-fermentative.
Identificare biochimic
Mediu TSI
Uree Indol Mobilitate Lizin
Citrat
H2S
M. Simmons
Glucoz +
Lactoz -/+
Zaharoz v
Tulpinile confirmate biochimic ca aparinnd genului Shigella vor fi testate
prin reacii de aglutinare cu seruri polivalente ( Flexner, Sonne, Large-Sachs ,
Boyd), apoi cu seruri monovalente.
Caracterele de patogenitate ( enteroinvazivitatea i producerea toxinei
Shiga).
GENUL YERSINIA
n pest produsele patologice ce se recoltez sunt: puroi din bubon, sput,
snge pentru hemocultur.
Hemocultura se efectueaz n mod obinuit, cu treceri ulterioare pe gelozsnge, mediu favorabil creterii Y. Pestis i pe medii selective i difereniale.
Identificare biochimic
Mediu TSI
Uree Indol Mobilitate Lizin
Citrat
H2S
M. Simmons
Glucoz +
Lactoz +
Zaharoz Transform nitraii n nitrii.
Identificarea de specie este confirmat prin aglutinare cu ser specific.
n infecia cu Yersinia enterocolitica se efectueaz coprocultura i
hemocultura. Diagnosticul serologic pune n eviden n 90% din cazuri anticorpi
anti Y. Enterocolitica ce persist n ser n titru ridicat 2-4 luni.
Capitolul XIV:
DIAGNOSTICUL INFECIILOR PRODUSE DE BACTERII ANAEROBE
Bacteriile anaerobe sunt bacterii hipersensibile la aciunea oxigenului.
Majoritatea anaerobilor nu posed enzimele clasice citocromi, catalaze i
perioxidaze, producndu-se energia propie n cursul proceselor fermentative.
Sensibilitatea anaerobiilor la oxigen este varialbil. O mare parte din
anaerobi tolereaz 0,1-5%O2 anaerobi moderai, alii nu tolereaz nici 0,1%O 2
bacterii extrem de sensibile la oxigen. Aceste bacterii extrem de sensibile la oxigen
sunt bacterii comensale ale tubului digestiv i ale pielii.
Anaerobii se mpart n 2 mari grupe:
- anaerobi sporulai
- anaerobi nesporulati
Bacili Gram negativi nesporulai
1. BACTEROIDES
2. PORPHYROMONAS
3. PREVOTELLA
4. FUSOBACTERIUM
Coci Gram pozitivi
1.
PEPTOSTREPTOCOCCUS
2.
PEPTOCOCCUS
Coci gram negativi
1.
VEILLONELLA
Bacili gram pozitivi nesporulai
1.
ACTINOMYCES
2.
ARACHINIA
3.
BIFIDOBACTERIUM
4.
PROPIONIL BACTERIUM
5.
EUBACTERIUM
Bacili gram pozitivi sporulai
1.
CLOSTRIDIUM
Diagnosticul de laborator al infeciilor cu bacterii anaerobe nesporulate
Bacteriile anaerobe nesporulate includ coci i bacili Gram pozitivi,
coci i bacili Gram negativi, fiind prezente pe tegumente i pe mucoasele tractului
b.Propionilbacterium
b.Peptostreptococcus
infeciilor produse
Capitolul
de treponeme
XV
i leptospire
Diagnosticul de laborator al
GENUL TREPONEMA cuprinde trei specii patogene pentru om:
T.pallidum, T.pertenue i T. Carateum.
Treponema pallidum include bacterii spiralate, subiri ( 5-15 m lungime
i 0.2 m diametru), cu spire regulate, la distan de aproximativ 1m ntre ele.
Prezint micri active, n jurul axei, de pendulare, de progresie i de flexie.
Diagnosticul de laborator
In sifilisul congenital
La nou nascutii cu sifilis congenital sau suspiciune de sifilis congenital, se
recolteaza LCR inainte de inceperea tratamentului. Pot exista semnele clinice
( malformatii congenitale, hepatomegalie, splenomegalie).
La mam se efectueaza teste serologice : VDRL sau RPR si TPHA sau FTAabs.
La copil se efectueaz
- testele serologice : VDRL sau RPR si TPHA sau FTA-abs.
- Examenul LCR pentru prezenta treponemelor si a anticorpilor ( VDRL sau
RPR).
RPR carbon
Principiu
RPR ( rapid plasma reagin) este o reacie de aglutinare ntre antigenele
reprezentate cardiolipina adsorbit pe suprafaa unor particule de carbon i
anticorpii anticardiolopinici reaginele din serul bolnavilor de sifilis.
Tehnica testului calitativ
Sngele se recolteaz, pe nemncate, prin puncie venoas, n vacuum fr
anticoagulant. Se separ serul care trebuie s fie limpede, serurile lipemice sau
hemolizate nefiind adecvate. Serurile se pot pstra prin congelare la minus 20O C.
Se folosesc plcue de carton plastifiat, de unic utilizare, ce au imprimate
cercuri cu diametrul de 18 mm.
Se utilizeaz obligatoriu un ser control pozitiv i un ser control negativ.
n momentul efecturii testului serurile i reactivii trebuie s fie la
temperatura camerei.
n fiecare cercule se pipeteaz, cu vrfuri separate sau cu pipetele de
unic utilizare din trus, cte 50 l ser n fiecare cercule : ser control pozitiv, ser
control negativ i serurile de cercetat. Se disperseaz fiecare ser pe ntreaga
suprafa a cerculeului.
Suspensia antigenic se omogenizeaz prin agitarea 10-15 secunde a
sticluei-dispenser. Cu sticlua n poziie vertical se depune cte o pictur de
antigen n fiecare cercule, peste ser.
Se agit prin micri rotative, cu rotatorul automat la 100 rpm sau
manual, timp de 8 minute. ( Fig. XV.3.)
++++
+++
++
Negativ
Testul cantitativ
Pentru fiecare ser de testat se folosete un ir de 5 cerculee.
Se pregtesc serurile de cercetat n diluii binare: 1.2, 1:4, 1.8, 1:16.
Se pipeteaz cte 50l ser nediluat i serurile dilute n cte un cercule. n
continuare se procedeaz similar cu testul calitativ.
Citirea i interpretarea: Ultima diluie de ser la cere se mai observ
aglutinare d titrul reaciei. De exemplu Reacie pozitiv, diluia 1.4
TPHA (Treponema pallidum haemagglutination)
TPHA este o reacie de hemaglutinare pasiv (indirect) folosit pentru
depistarea anticorpilor ndreptai mpotriva antigenelor specifice ale
treponemelor patogene.
Principiu:
Hematii aviare pe suprafaa crora au fost adsorbite antigene de
Treponema pallidum ( sua Nichols) sunt suspendate ntr-un diluent care
mpiedic aglutinarea nespecific.
Hematiile astfel sensibilizate, puse n contact cu serul unui pacient ce
posed anticorpii corespunztori, vor aglutina. Reacia poate fi efectuat
calitativ sau cantitativ.
Tehnica testului calitativ ( exemplu)
Pentru fiecare ser de testat se folosete un ir de 4 godeuri.
Se utilizeaz obligatoriu un ser control pozitiv i un ser control negativ.
1.Pentru fiecare ser se pipeteaz diluent: 25l n godeurile 1,3 i 4 i
100l n godeul 2.
2. Se adaug 25l ser n godeul 1, se amestec i se transfer 25l n
godeul 2; se amestec i se transfer cte 25l n godeurile 3 i 4. Se amestec
i
se arunc 25l din godeurile
3 i 4. Se realizeaz astfel diluii de ser de 1:20
3. Se adaug 75 l suspensie hematii de control ( nesensibilizate ) n
godeul 3 i 75 l suspensie hematii sensibilizate ( hematii test) n godeul 4.
4. Se amestec prin lovire uoar sau prin folosire unui agitator mecanic
30 sec.
A.
B.
Fig.XV.6. Leptospira: A. Imagine de microscopie electronic, B. impregnare
argentic
(Dup Dr. P. PEROLAT Institut Pasteur Paris)
Capitolul XVI
din cazuri. Nou nscutul poate dezvolta conjunctivit, cel mai frecvent, cu secreie
purulent, la 5-12 zile dup natere. Ca urmare a colonizrii faringelui, poate
dezvolta o pneumonie tardiv, n 10% din cazuri.
C. Trachomatis serotipurile L1, L2, i L3, determin limfogranulomatoza
venerian (LGV) sau boala Nicolas - Favre, boal sistemic cu punct de plecare
genital ce se ntlnete n zonele tropicale din Africa, Asia, America se Sud.
Diagnosticul de laborator
Produsele patologice sunt recoltate de la nivelul mucoasei conjunctivale,
cervicale sau uretrale, cu tampoane sterile, prin raclare uoar care s permit
antrenare de celule epiteliale (deoarece Chlamydia este un microorganism
intracelular, probele trebuie s fie bogate n celule epiteliale din zona infectat). Tot
n infeciile genitale se mai pot recolta: urin, sperm, secreii purulente. Pentru C.
Pneumoniae pot fi secreii faringian, nazal, sput , iar n suspiciunea de LGV:
aspirat ganglionar, puroi .
Examenul microscopic
Frotiurile efectuate din produsul patologic pot fi colorate prin metode
speciale: metoda cu lugol, coloraia Machiavello, coloraia Gimenez. Se urmrete
prezena leucocitelor, semn al inflamaiei i a celulelor epiteliale . Incluziunile se
evideniaz ca aglomerri intracitoplasmatice de material , colorat diastinct de
restul celulei (rou n coloraiile Gimenez i Machiavello, brun n coloraia cu
lugol)
Imunofluorescena direct sau indirect pune n eviden incluziunile
intracitoplasmatice i corpusculii elementari. Sensibilitatea metodei este de pn la
80%, iar specificitatea de 99%. Necesit reactivi relativi scumpi, microscop cu
lamp UV i personal specializat n examinarea pentru IF. Este ns o metod de
diagnostic de elecie.
Cultivarea nu este o metod de rutin. Chlamydiile cresc dificil, numai pe
medii celulare ( HeLa, McCoy, Hep-2). Metoda este scump, laborioas, i se obin
multe rezultate fals negative ( sensibilitatea metodei este preciat la 50%-90% de
diferii autori)
Diagnosticul imunologic
Detectarea antigenelor de Chlamydia n produsele patologice se poate face
prin mai multe metode : teste rapide imunocromatografice, (fig.2), ELISA, PCR.
Produsele patologice sunt recoltate cu tampoane sterile, prin raclare uoar care s
permit antrenare de celule epiteliale, apoi se introduc n tuburi cu medii speciale.
Dup descrcarea produsului i eventual centrifugare, supernatantul este folosit
pentru detectarea antigenelor prin metodele amintite.
Diagnosticul de laborator
Examenul microscopic nu este sugestiv, deoarece mycoplasmele sunt foarte
mici i se coloreaz greu sau nu se coloreaz n coloraia Gram
Cultivarea este puin utilizat n diagnosticul de rutin deoarece
Mycoplasmele sunt bacterii fastidioase i cresc ncet pe mediile de cultur.
Diagnosticul serologic este cel mai accesibil
testul aglutininelor la rece; reacia este nespecific i n plus, numai
50% dintre bolnavi dezvolt hemaglutinine la rece
reacia de fixare a complementului pentru anticorpi anti M.
pneumoniae. Este mai specific i o cretere de 4X a titrului anticorpilor ntre
debutul bolii i convalescen precizeaz diagnosticul
ELISA pentru IgM i IgG anti- M. Pneumoniae. Specificitatea i
sensibilitatea sint de 98-99%. Este testul cel mai indicat n prezent.
Alte metode mai rar folosite sunt: Imunofluorescena direct, ELISA pentru
depistarea antigenelor n sput, RIA, i recent PCR.
n infeciile genitale, Mycoplasmele sunt depistate mai ales prin culturi ale
secreiilor uretral sau vaginal i prin teste imunologice.
Cultivarea se face pe medii speciale: bulion cu extracte de cord bovin i ser
de cal, urmat de trecere pe geloz mbogit cu aceleai elemente. Ureaplasma
crete de obicei n 2-3 zile, iar Mycoplasma hominis ntr-o sptmn. Mycoplasma
genitalium necesit pentru cretere 1-2 luni. Coloniile sunt foarte mici, cu centrul
dens i marginile clare, aspect caracteristc de ou ochiuri.
Diagnosticul imunologic este disponibil n prezent.
Tratament
n infeciile tractului respirator superior tratamentul cu antibiotice nu este
necesar.
n pneumonie, dei este autolimitat, se recomand antibioterapia, n scopul
reducerii duratei bolii i scderii riscului pentru contacii cu bolnavul.
- Antibioticele de elecie sunt macrolidele, tetraciclinele, fluorochinolone
numai la adulii cu pneumonie din comuniti; sunt contraindicate la copii i
gravide.
n infeciile genitale Tetraciclina i Doxiciclina sunt antibiotice de elecie,
ele avnd o bun aciune i pe Chlamydia trachomatis. La gravide se recomand
Capitolul XVII
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECIILOR GENITALE
Flora normal a tractului genital feminine
Flora vulvar prezint o flor asemntoare cu a regiunii perineale.
Cantitativ i calitativ este n strns legtur cu igiena local a fiecrei persoane.
Flora vaginal este mai specific i influenat de statusul hormonal i de
activitatea sexual.
- n copilrie, pn la instalarea ciclului menstrual i n post-menopauz , n vagin
sunt prezente numeroase specii de bacterii aerobe i anaerobe.
- n perioada de activitate a funciei ovariene, sub influena estrogenilor, are loc o
modificare radical a florei normale vaginale. Depozitele abundente de glicogen
din celulele epiteliale ale mucoasei vaginale favorizeaz dezvoltarea genului
Lactobacillus (fig. XVII.1), ce utilizeaz acest substrat nutritive i produc acid
lactic, cu scderea pH vaginal . PH de 3,8-4,5 este nefavorabil altor specii
bacteriene, saprofite sau patogene. Levurile (Candida) pot supravieui, n numr
limitat n aceste condiii.
Colul uterin, n zona exocolului are o flor asemntoare florei vaginale, dar
n zona de tranziie flora se reduce numeric. Mucusul cervical, prin substanele
antimicrobiene pe care le conine: lizozim, lactoferin i imunoglobuline, are un rol
de barier mpotriva ptrunderii microorganismelor .
Uterul i trompele uterine sunt sterile.
Infecii ale regiunii vulvare se manifest de obicei prin: prurit , senzatie de arsura
sau iritatie;
Infecii specifice.
Sifilisul primar: leziunea specific ancrul dur : ulceraie cu margini bine
delimitate, baza indurat, prezentnd o serozitate clar. Leziunea este nedureroas,
nepruriginoas i se nsoete de obicei de adenopatie inghinal . n sifilisul
secundar, pe mucoasa vulvar pot apare leziuni papuloase: condiloame.
Diagnosticul se face prin examen microscopic n cmp ntunecat al unui preparat
proaspt ntre lam i lamel efectuat din serozitatea din ancru. Se indic i testele
serologice ( VDRL, TPHA), care pot fi negative dac boala se afl la debut, dar se
recomand repetarea acestora dup 2 spt., o lun.
Candidoza vulvar nsoete de obicei candidoza vaginal ( vulvovaginita
candidozic). Doagnosticul de laborator se bazeaz pe
- examenul microscopic al frotiurilor efectuate din secreie i
- culturi pe mediul Sabouraud cu Cloramfenicol
Infecia cu Trichomonas vaginalis nsoete infecia vaginal. Diagnosticul
se face prin
secreie albibicioas, pstoas sau granuloas. Pot fi prezente eroziuni sau papule.
Leucorea este uneori abundent, alb-glbuie, vscoas.
Diagnosticul de laborator: pH vaginal acid, din secreia vaginal se
efectueaz frotiuri colorate A.M. sau Gram .
Cu tamponul steril se recolteaz secreie pentru cultura pe mediul Sabouraud
cu cloramfenicol.
Cervicitele
La nivelul exocolului uterin, epiteliul pavimentos este asmntor celui
vaginal, iar infecia cu Trichomonas vaginalis i Candida poate evolua i la acest
nivel. De asemenea, ancrul dur se poate localiza la nivelul exocolului. HPV
determin infecii la acest nivel la 1% dintre femei.
La nivelul endocolului, unde epiteliul mucoasei este cilindric , se localizeaz
infecii cu Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis serotipurile D-K, Herpex
simplex tip 2 .
Secreia endocervical normal este clar, uor mucoid, mai vscoas n
perioada progesteronic a ciclului luteal. n cervicite secreia devine mai
abundent, muco-purulent. Dup ndeprtarea secreiilor stagnante la nivelul
exocolului, se recolteaz din endocol, prin introducerea pe o distan de 1-2 cm, a
dou tampoane: unul pentru efectuarea de frotiuri i unul pentru cultur. Pentru
testele imunologice (de ex. ELISA pt antigene C.trachomatis, HSV ) se recolteaz
tampoane separate ce vor fi introduse n tuburi cu medii speciale.
Pe frotiurile colorate Gram i Giemsa sau o coloraie special pentru
Chlamydia ( Gimenez) se urmrete prezena reaciei inflamatorii i a gonococilor ,
a levurilor sau a incluziunilor intraepiteliale specifice C.trachomatis.
Endometritele acute survin de obicei post-abortum sau post-partum i se manifest
prin febr, dureri hipogastrice, scurgeri vaginale purulente sau lohii cu aspect
purulent. Bacteriile ce determin endometrite sunt aerobe i anaerobe, cel mai
frecvent izolate fiind de origine endogen, vaginal: Streptococul de grup B, D, A
sau alte grupe, enterobacteriacee, Gardnerella vaginalis, anaerobi: Streptococi
anaerobi, Bacteroides fragillis, Clostridium perfringens, sau Mycoplasma hominis .
Culturile se fac ntotdeauna aerobe i anaerobe. n caz de satre febril
prelungit se recolteaz i hemoculturi, deoarece bacteriemia este o complicaie
destul de frecvent a endometritelor .
Capitolul XVIII
DIAGNOSTICUL INFECIILOR PRODUSE DE LEVURI
(CANDIDA)
Ciupercile levuriforme sunt un grup heterogen de ciuperci, formate dintro singur celul ( celula levuric), eucariot, de form sferic, ovalar, sau, mai
rar , neregulat.
Ele se nmulesc n general prin nmugurire ( formarea de blastoconidii sau
muguri), form de reproducere asexuat i se mai numesc fungi imperfecti.
Sporii asexuai ai levurilor sunt blastospori ( blastoconidii) celule sferice sau
ovalare izolate, formate prin nmugurirea levurilor i care se separ de celula
mam.
Unele levuri dezvolt pseudo-filamente ( pseudohiphae): lanuri de celule
levurice alungite, rezultate din formarea blastoconidiilor din unul n altul, n
linie, fr separarea complet a celulelor. ntre celule nu exist ns legturi
stabile spre deosebire de fungii filamentoi, ai cror micelii sunt ramificaii ce
constituie o unitate fiziologic.
Alte levuri pot dezolta filamente adevrate ( hiphae) : fig.1 : Candida ciuperc dimorfic: celule levurice (C) i forme filamentoase (D)
prea mult timp) sau unei infecii reale, recoltarea i manipularea corect a
probelor este esenial n obinerea unui diagnostic de laborator corect. De
exemplu, cteva celule de Candida prezente ntr-o sput lsat la temperatura
camerei se pot nmuli rapid, dnd impresia unei infecii candidozice.
Levurile se coloreaz n albastru nchis, fiind foarte evidente n coloraia A.M.,
i n violet intens n coloraia Gram. Candida prezint celulele levurice de 3-4
m, de obicei prezentnd nmugurire unic. Pseudohifele au 5-10 m, au
capetele subiate i rmn ataate. Hifele adevrate dac sunt prezente au perei
paraleli i sunt septate. Dac pe frotiurile din produsele patologice se observ
sub form de pseudohife sau cuiburi de blastoconidii, este o indicaie a faptului
c modul lor de via nu mai este saprofit ci parazit .
Antifungigrama
Testarea sensibilitii la antifungice (antifungigrama) poate fi efectuat prin
metoda difuziei,
E-test sau
metoda diluiilor ( microdiluiilor).
Metoda difuzimetric, conform NCCLS, folosete ca mediu de cultur
geloza RPMI, inoculul standard de 0.5 Mc Farland i discuri cu substane
antifungice ( Amfotericina B 10g, Ketoconazol 15 g , Itraconazol 8 g,
Fluconazol 25 g, Voriconazol 1.0 g, 5-Fluorocitozin 1 i 10 g.
E-test folosete benzi impregnate cu substane antifungice n concentraii
descresctoare, putndu-se determina i CMI. Mediul de cultur indicat este geloza
RPMI cu glucoz. ( fig.4 )
Metoda diluiilor este folosit pentru determinarea CMI, iar mediul folosit
este bulionul RPMI . Exist truse comerciale pentru antifungigrame prin metoda
microdiluiilor ( fig.5)
Fig. XVIII 6
Capitolul XIX
DIAGNOSTICUL INFECIEI CU TRICHOMONAS VAGINALIS
Parazitul Trichomonas vaginalis este un protozoar urogenital, mobil, care
exist numai sub forma vegetativ, neavnd forme de rezisten.
T. vaginalis este piriform, cu lungimea de 18-26 m, uneori putnd ajunge la
30 m. Nucleul este mare i poziionat anterior. Citoplasma este granular. Posed
patru flageli anteriori liberi i un flagel recurent ce se gsete pe marginea unei
membrane ondulante. n zona median prezint un axostil puternic, ce menine
forma celulei. ( fig. Fig.XIX.1.)
Diagnosticul de laborator :
1. Metoda de diagnostic de elecie este examenul microscopic al unui
preparat proaspt ntre lam i lamel, n ser fiziologic la 37 0 C din secreia
vaginal recoltat cu valva n primele zile postmenstrual. Pe acest preparat se
observ paraziii vii, care se recunosc uor dup form, dimensiuni i micrile vii.
2. Tot din secreia vaginal recoltat cu valva sau cu tamponul se efectueaz
i frotiuri colorate albastru de metilen, Gram sau Giemsa. Pe frotiuri se observ un
numr mare de leucocite , parazitul T. vaginalis i se urmrete prezena eventual
a altor microorganisme cu transmitere sexual.
Capitolul XX
Capitolul XXI
DIAGNOSTICUL HEPATITELOR VIRALE
Virusurile hepatitice sunt virusuri cu structuri diferite care se caracterizeaz
prin tropism pentru celula hepatic, fiind denumite: Virusul hepatitei A, B, C, D,
E, F, G, etc.
Exist i alte virusuri care afecteaz n mod secundar ficatul ( virusuri
facultativ hepatotrope): enterovirusuri, herpesvirusuri, flavivirusuri, etc.
Virusurile hepatitei A, E i F se transmit enteral
VIRUSUL HEPATITEI A ( HAV)
Clasificat ca Enterovirus tip 72, n prezent este considerat prototipul genului
heparnavirus, din familia Picornaviridae. Virus ARN, cu dimensiuni de 27-32
nm, form sferic, simetrie eicosaedric, nenvelit. Exist un singur serotip.
Transmiterea este pe cale fecal-oral.
Diagnosticul etiologic se pune de obicei prin evidenierea anticorpilor antiHAV de tip IgM, care atest infecia recent. Anticorpii anti HAV de clas igG
persist n ser ani de zile, artnd o infecie HAV n antecedente.
Virusul ca atare, sau Ag HAVpoate fi demonstrat n materiile fecale i snge
2 sptmni nainte i o sptmn dup instalarea icterului.
Capitolul XXII
DIAGNOSTICUL INFECTIEI HIV
Posibilitile actuale de diagnostic includ:
Detecia direct i indirect a virusului HIV
- Izolarea i cultivarea virusului
- PCR
- Hibridizarea in situ
- ELISA pentru antigenul p24
- Imunofluorescena indirecta
Detecia anticorpilor anti HIV
- Teste rapide imunocromatografice
- ELISA pentru detecia anticorpilor
- Imunofluorescena indirect
- Immunoblotting ( Western-Blot)
Detecia anticorpilor specifici se poate realiza doar dup 6-8 sptmni de la
contactul infectant, moment n care se produce seroconversia apariia n serul
pacientului a anticorpilor anti-HIV.
Viremia dureaz n majoritatea cazurilor pn cu o sptmn naintea
apariiei anticorpilor.
In perioada de fereastr imunologic, virusul este prezent n sngele celui
infectat, acesta putnd transmite infecia pe cile enunate mai sus, dar nu poate fi
diagnosticat prin metode serologice.
Testele standard pentru diagnosticul infeciei HIV sunt testele serologice
pentru detecia anticorpilor anti-HIV1 i HIV2, teste care n prezent au o foarte
bun sensibilitatea i specificitate: fie prin metoda ELISA (indirect, competitiv,
sandwich), fie teste rapide imunocromatografice.
Testul standard de confirmare a infeciei HIV este Western-Blot, folosit
pentru soluionarea rezultatelor incerte obinute prin metodele precedente.
Bibliografie selectiv
1. Ballows, A., Haissler W. J., Herrmann, K., Isenberg H.D., Shadomy H.G.,
Manual of Clinical Microbiology, Fifth Edition, American Society of
Microbiology, Washington, D.C., 1992
2. Barousse MM, Van Der Pol BJ, Fortenberry D, et al: Vaginal yeast
colonisation, prevalence of vaginitis, and associated local immunity in
adolescents. Sex Transm Infect 2004 Feb; 80(1): 48-53
3. Barbeyrac B -Universit Victor Sgalen, Bordeaux 2, Centre National de
Rfrence des Infections Chlamydia- Chalmydia. Cours de bacteriologie
medicale, 2003
4. Buiuc, D. Microbiologie Medical , Ed. Didactic i Pedagogic, Bucureti
1992
5. Buiuc D., Negu M., Tratat de Microbiologie Clinic, Ed. Medical,
Bucureti, 1999
6. Callahan DB, Weinberg M, Gunn RA: Bacterial vaginosis in pregnancy:
diagnosis and treatment practices of physicians in San Diego, California,
1999. Sex Transm Dis 2003 Aug; 30(8): 645-9
7. Crstina D, Sac IC, Sac N, Laza-Stanca V, Tifrea D, Slavcovici A,
Sac F. E-test, diluii n mediu solid i tehnica difuzimetric n aprecierea
rezistenei stafilocilor la bata-lactami. Bacteriologia, Virusologia,
Parazitologia, Epidemiologia, 2001, vol.46 nr.4, 213-218.
8. Codi I., Israil A., Balotescu C., Popa M., Testarea rezistenei la antibiotice:
standard NCCLS sau CA-FM ? Comunicare , Reuniunea anual de
microbiologie, Timioara, 2003.
9. Hammill HA: Normal vaginal flora in relation to vaginitis. Obstet Gynecol
Clin North Am 1989 Jun; 16(2): 329-36
10. Jawetz, Melnick , Adelberg Medical microbiology, Lange Ed. 1991.
11. Lenette E., Ballows A., Manual of Clinical microbiology, Am. Society of
Microbiology, Washington D.C., 1993.
12. Murray P.R., Kobayashi G.S., Pfaller, M.A., Rosenthal K., Medical
Microbiology, Second Edition, 1994, Mosby-Year Book Inc., Missouri
13. Popa C. E-Test o nou metod pentru testarea rezistenei la substane
antimicrobiene. Bacteriologia, virusologia, parazitologia, epidemiologia,
vol.44, nr.1-2, 1999, p.127-130.
14. Popa, M.I. Diagnosticul de laborator n microbiologie, Ed. INFOMEDICA,
Bucureti, 2004
15. Sobel JD, Chaim W, Nagappan V, Leaman D: Treatment of vaginitis caused
by Candida glabrata: use of topical boric acid and flucytosine. Am J Obstet
Gynecol 2003 Nov; 189(5): 1297-300
16. Valenti W.M. AIDS 25 zears later: monitorizing HIV testing. AIDS Read.
2006 Sept: 16 (9). 461-3.
17. Weber B, Orazi B, Rainieri A, Thorstensson R, Burgisser P Multicenter
evaluation of a new 4th generation HIV screening assaz Elecsys HIV combi.
Clin Lab. 2006: 52( 9-109: 463-73.