PARTEA I: NOIUNI GENERALE

Curs 1: Principalele organisme patogene, Istoricul microbiologiei Curs 2: Epidemiologia i bolile Curs 3: Imunitatea Curs 4: Principii de sterilizare i dezinfecie

CURS 1. Generaliti
1|Page

Obiectul de studiu al acestei discipline l reprezint organismele care provoac daune sntii omului. Din aceast categorie fac parte virusurile, bacteriile si paraziii. Virusurile sunt entiti infecioase acelulare, reprezentate de complexe macromoleculare alctuite din subuniti moleculare repetitive (Fig. 1.1). Au alctuirea cea mai simpl, datorit creia nici astzi nu exist o prere unic privind ncadrarea lor n lumea vie. Virusurile sunt strict dependente de gazda parazitat, neputndu-se multiplica n afara ei, datorit absenei unui sistem enzimatic care s replice materialul genetic. Astfel, toate virusurile sunt parazite.

(http://news-frist.blogspot.com/2009/08/predicting-future-course-ofh1n1-virus.html) Bacteriile sunt organisme unicelulare, de tip procariot (materialul genetic nu este delimitat de o membran), al cror mod de via este saprofit sau parazit (Fig. 1.2). Bacteriile saprofite consum substana organic moart aflat n descompunere, realiznd transformarea organicului n mineral. Bacteriile parazite se hrnesc pe seama unui organism gazd viu.

Figura 1.1 Virusul H1N1

2|Page

Figura 1.2 Bacterie bacil

(http://ict-science-to-society.org/Pathogenomics/bacteria.htm) Termenul de parazit face referire la un organism ce traiete pe seama altui organism. n cazul de fa, n aceast categorie sunt inclui fungii parazii, protozoarele parazite, viermii parazii si artropodele parazite. Fungii sunt organisme eucariote (materialul genetic este delimitat de o membran celular), heterotrofe, al cror corp este alctuit din hife (filamente lungi uni sau pluricelulare) i se numete miceliu (Fig. 1.3).

Figura 1.3 Candida albicans candidoza

(http://en.wikipedia.org/wiki/Candida_(fungus))

Protozoarele sunt organisme animale unicelulare de tip eucariot (Fig. 1.4). 3|Page

(http://www.avianbiotech.com/diseases/Giardia.htm)
Viermii sunt organisme eucariote pluricelulare, nevertebrate, lipsite de picioare, cu corpul lunguie si cu tegumentul lucios, ce se gsesc de obicei in mediu umed (Fig. 1.5).

Figura 1.4. Protozoar Giardia intestinalis

(http://www.human-healths.com/tag/fish-tapeworm)

Figura 1.5. Taenia solium teniaza

Artropodele sunt organisme animale nevertebrate, al cror corp este segmentat pianjenii, miriapodele, insectele) (Fig. 1.6).

eucariote pluricelulare, (crustaceele, scorpionii,

4|Page

Figura 1.6. Ixodes ricinus cpua (http://en.wikipedia.org/wiki/File:Ixodes.ricinus.searching.jpg)

Multe dintre aceste organisme nu pot fi observate cu ochiul liber, avnd dimensiuni foarte mici, motiv pentru care se i numesc microorganisme. MICROBIOLOGIA (gr. mikros =mic, bios=via, logos=tiin) este tiina care se ocup cu studiul celor mai mici organisme ce pot fi observate doar cu ajutorul microscopului, denumite n sens larg microbi. Obiectul de studiu al microbiologiei l reprezint microorganismele, grup heterogen ce are n comun dimensiunile microscopice, organizarea, n general, unicelular i structura intern relativ simpl. n acest grup al microorganismelor sunt incluse: bacteriile, fungii microscopici, unele alge, protozoarele i virusurile.

Istoricul dezvoltrii microbiologiei ca tiin

Denumirea i clasificarea microorganismelor

n 1735, Karl von Linn pune bazele taxonomiei. Taxonomia reprezint tiina care se ocup cu studiul clasificrii organismelor. Astfel, dezvolt sistemul nomenclaturii binare ce const n denumirea fiecrui organism prin 2 nume latinizate sau cu origine greceasc. Primul nume reprezint genul i se scrie cu majuscul, al doilea specia sau epitetul i se scrie cu liter mic. Spre exemplu, Staphylococcus aureus este o bacterie foarte rspndit. Staphylococcus este genul i aureus specia. n acest caz, genul face referire la forma i dispunerea celulelor, adic staphylos nseamn grup, grmad, iar coccus sfer. Cu alte cuvinte, aceast bacterie este sferic, iar celulele sunt dispuse grupat. Aureus face referire la huloul auriu care se formeaz n jurul celulelor. Uneori, organismul poate fi definit dup un cercettor, spre exemplu Escherichia coli sau bacilul coli este denumit dup cercettorul Theodor
5|Page

Escherich. Specia coli face referire la locul unde triete microorganismul, adic n colon. Organismele au fost iniial clasificate n 2 regnuri: plantae i animale, nainte de a fi descoperite microorganismele. Cnd s-a demonstrat clar existena acestora, acest sistem n 2 regnuri nu a mai corespuns realitii. Carl Woese dezvolt un nou sistem de clasificare ce grupeaz organismele n funcie de caracteristicile moleculare ale acestora i deci de cele celulare. Totui, oamenii de tiin au czut de acord asupra acestui sistem abia n 1978 i, 12 ani mai trziu, a fost publicat noul sistem. Woese mparte organismele n 3 grupe mari, denumite domenii. Un domeniu este mai cuprinztor dect regnul. Aceste domenii sunt: Eubacteria: bacterii care prezint perete peptidoglicanic. Archaea: procariote care nu prezint perete peptidoglicanic. Eucarya: organisme care au materialul genetic delimitat de o membran nuclear i sunt grupate n urmtoarele regnuri: Protista (acesta nc se mai modific): alge, protozoare, mucegaiuri unicelulare Fungi: drojdii, mucegaiuri pluricelulare i ciuperci Plantae: muchi, ferigi, alge, gimnosperme, angiosperme. Animalia: spongieri, celenterate, molute, viermi, artropode (insecte, crustacee, pianjeni, etc.) i vertebrate (ciclostomi, peti, amfibieni, reptile, psri i mamifere). Studiul microorganismelor n 1590, Zacharias Janssen pune la punct primul microscop n Middleburg, Olanda. Microscopul lui Janssen consta din 3 tuburi. Unul dintre ele se gsea la exterior i le coninea pe celelalte dou. La ambele capete ale tuburilor interioare se gseau lentile utilizate pentru amplificarea imaginii. Modelul lui Janssen putea permite ajustarea imaginii prin rsucirea tuburilor interne. Astfel, imaginile puteau fi vzute de 3 sau 9 ori mai mari dect erau n realitate. n 1665, Robert Hooke, un cercettor englez, popularizeaz utilizarea microscopului prin observarea unei seciuni prin plut, n care se puteau distinge cmrue mici, pe care le numete celule. Descoperirea lui duce la dezvoltarea teoriei celulare n secolul XIX de ctre Mathias Schleiden, Theodor Schwann i Rudolf Virchow. Teoria celular sus ine c toate organismele vii au corpul format din celule. Experimentele lui Hooke l-au inspirat pe olandezul Antonie van Leeuwenhoek (1632-1723) s exploreze lumea microscopic. A mbuntit microscopul lui Hooke, putndu-se ajusta mai eficient mrirea imaginilor. Leeuwenhoek a putut observa microorganisme, pe care le-a i descris cu deosebit precizie. Odat cu informa iile aduse de acesta se punea problema originii acestor microorganisme, n acea perioad fiind acceptat teoria generaiei spontane (apariia microorganismelor din materie moart sau de la sine).
6|Page

n sec. XVIII, Lazzaro Spallanzani (Italia) dovedete c prin fierbere prelungit, microorganismele dispar i nu mai reapar dac vasul este nchis ermetic. Acesta descoper existena bacteriilor patogene i a celor anaerobe. Pn n a II-a a secolului XIX s-au realizat doar cercetri privind forma i structura microorganismelor. Louis Pasteur (1822-1895) este considerat printele microbiologiei. Studiile sale au demonstrat clar falsitatea teoriei generaiei spontane. Cercetrile sale asupra fermentaiei au artat natura biologic a procesului, specificitatea procesului (un microorganism are rol ntr-un anumit tip de fermentaie) i natura biologic a bolilor buturilor fermentate. A introdus procedeul de pasteurizare (nclzirea la 56 C previne multiplicarea microorganismelor). Deasemenea, introduce problema prevenirii infeciilor prin vaccinare. Descoper vaccinul antiholeric aviar, vaccinul anticrbunos, antirabic. Alturi de Robert Koch, este considerat fondatorul bacteriologiei medicale. Acesta din urm a devenit cunoscut dupa izolarea bacilului antraxului, bacilului tuberculozei si a vibrionului holeric. n 1905 primete premiul Nobel pentru Medicin i Fiziologie datorit descoperirilor asupra tuberculozei. Dup ce Casimir Davaine demonstreaz modul de transmitere direct a antraxului ntre vite, Koch studiaz bacilul antraxului mai detaliat. Pune la punct o serie de metode de purificare a bacteriei din snge i de cretere a unor culturi pure. Descoper cauza izbucnirii focarelor de antrax ca fiind rezistena timp ndelungat, n sol, a endosporilor. Introduce sterilizarea instrumentelor chirurgicale cu ajutorul temperaturilor ridicate. mbuntete metodele de cultivare a bacteriilor i de colorare, putnd astfel descoperi bacteria responsabil de producerea tuberculozei. La mijlocul secolului al XIX-lea 1 din 7 decese era datorat acestei boli. Studiaz in Egipt holera si identific microorganismul responsabil de aceast boal, fr a putea demonstra existena lui. Probabil la fel de importante ca i studiile asupra tuberculozei, sunt postulatele sale care stabilesc criteriile dup care un organism poate fi considerat cauz a unei boli. Acesta trebuie: s fie identificat n toate cazurile examinate s fie preparat si meninut intr-o cultur pur s fie capabil s produc infecia, chiar i dup cultivri repetate s fie izolat de la un animal inoculat i cultivat din nou Ilia Mecinikov, contemporan cu Pasteur i Koch realizeaz numeroase cercetri n imunologie, demonstrnd nsemntatea reaciilor celulare n aprarea organismului. Dimitrie I. Ivanovski (1869-1920) descoper virusul mozaicului tutunului (VMT) i ncepe dezvoltarea unei noi tiine microbiologice virusologia. Experienele lui Ivanovski sunt confirmate de Martinus Beijerinck, considerat adevratul fondator al virusologiei. VIRUSOLOGIA (lat. virus- otrav) este tiina care se ocup cu studiul virusurilor.

7|Page

Microbiologia a evoluat rapid dup aceast perioad, studiul bacteriilor permind descifrarea codului genetic, a mecanismelor sintezei proteice, a mecanismele reglrii celulare etc. Studiile realizate pe Escherichia coli au permis dezvoltarea unor noi tiine, cum ar fi biotehnolgiile microbiene, ingineria genetic. Distrugerea microorganismelor Eforturi imense au fost depuse spre sfritul secolului XVIII n dezvoltarea de tehnici antiseptice. Acestea au nceput cu un raport al medicului maghiar Ignaz Semmelweis privind scderea considerabil a numrului de cazuri de febr postnatal, atunci cnd s-au utilizat tehnici antiseptice. Joseph Lister (1827-1912), chirurg englez, a dezvoltat una dintre cele mai importante tehnici antiseptice. n timpul operaiei, pacientul era pulverizat cu acid carbolic, apoi rana era bandajat cu pansamente mbibate n acelai acid. Numrul de infecii a sczut net comparativ cu operaiile fr metode antiseptice. Acidul carbolic sau fenolul a fost unul dintre primele antiseptice utilizate. Paul Ehrlich (1854-1915), chirurg german, a pus bazele utilizrii medicamentelor, n vederea omorrii microorganismleor deja ptrunsee n corp. n 1908 primete premiul Nobel pentru sintetizarea medicamentului contra sifilisului, numit Salvarsan. Oamenii de tiin s-au folosit de nceputul pus de Ehrlich pentru a gsi medicamente ce pot vindeca pacienii infectai. Una dintre cele mai mari realizri a venit n anul 1929, cnd Alexander Fleming descoper Penicillium notatum, organismul care sintetizeaz penicilina, substan inhibitoare pentru foarte multe bacterii. Fleming cultiva Staphylococcus aureus n laborator. Deasemenea, fcea experimente pe mucegaiul Penicillium notatum. Accidental, culturile de Staphylococcus aureus au fost contaminate cu P. notatum, ducnd la moartea bacteriilor. Penicilina a devenit una dintre primele antibiotice. n ceea ce privete microbiologia n Romnia, cei mai importani cercettori au fost: Victor Babe (1854-1926). Acesta descoper un sporozoar parazit al cpuelor, numit Babesia, ce provoac o boal rar si grav, numita babesioza. Demonstreaz pentru prima dat existena bacilului tuberculozei in urina bolnavilor infectai. Deasemenea, descoper incluziunile citoplasmatice prezente in celulele nervoase, in cazul turbrii, denumite ulterior corpusculii Babe-Negri. Babe a fost unul dintre iniiatorii utilizrii serului n tratamente, i a fost primul care a introdus vaccinarea antirabic n Romnia. De asemenea, descoper incluziunile metacromatice (metacromaticreferitor la esuturi, a cror elemente se coloreaz diferit, cu acelai colorant), prezente n citoplasma unor bacterii Gram pozitive (bacilul difteric), numite corpusculii Babs-Ernst.
8|Page

Ioan Cantacuzino realizeaz studii n domeniul bacteriologiei, imunologiei, epidemiologiei. A fcut cercetri la Paris, alturi de Ilia Mecinikov. Descoperirile sale au fost importante in tratarea holerei, tifosului exantematic, tubeculozei i scarlatinei. Ca discipol al lui Mecinikov, s-a preocupat de studiul aprrii organismului. n timpul primului rzboi mondial, a fost eful echipei de combatere a epidemiei de tifos. Ali microbiologi romni care au adus contribuii importante au fost: Constantin Levaditi, Constantin Ionescu-Mihieti, Mihai Ciuc, Dumitru Combiescu, tefan S. Nicolau (fondatorul colii romneti de virusologie).

CURS 2. Epidemiologia i bolile

Epidemiologia se ocup cu studiul distribuiei i factorilor determinani ai bolilor ntr-o populaie. Cuvntul provine din grecescul epi deasupra, pe, i demos populaie. Epidemiologistul este cercettorul specializat n identificarea i prevenirea bolilor ntr-o populaie dat. Acesta are n vedere etiologia (cauza) bolii i ncearc s previn i s controleze rspndirea bolilor. Epidemiologia este considerat ramur a microbiologiei deoarece microorganismele sint cele care provoac majoritatea bolilor. Poate fi considerat i ramur a ecologiei datorit rela iilor care se stabilesc ntre patogeni, gazd i mediu. Noiunile cele mai importante legate de epidemiologia infeciilor sunt: morbiditatea: numrul de mbolnviri noi la un numr dat de locuitori (10.000, 100.000); incidena: numrul de mbolnviri noi ntr-o perioad dat de timp; prevalena: numr de infecii la un moment dat ntr-o colectivitate; mortalitate: numrul deceselor printr-o anumit infecie raportat la un anumit numr de locuitori;
9|Page

letalitate: numrul de decese raportat la numrul de persoane infectate; index de manifestare: numrul de boli clinic aparente raportat la numrul total de persoane infectate.

n funcie de spaiu i timp, infeciile apar: sporadic: cazuri izolate necorelate n timp i spaiu; acestea nu reprezint un pericol pentru popula ie. endemic: cazuri relativ frecvente, limitate n spaiu i nelimitate n timp. Numrul de persoane care contracteaz boala i severitatea ei sunt att de reduse , nct nu reprezint o problem de sntate public. epidemic: cazuri numeroase ce apar ntr-un timp scurt i ntr-o zon geografic limitat (holer, febr tifoid, cium); aceasta duce la creterea mortalitii i a morbiditii. Reprezint o problem de sntate public. pandemic: cazuri foarte numeroase ntr-o perioad de timp fr limite geografice (pandemiile de grip, SIDA). Epidemiile se pot clasifica, n funcie de surs, n 2 categorii: epidemii ce au o surs comun: un numr mare de persoane se mbolnvete brusc de la aceeai surs. Aceste epidemii sunt atribuite unei surse de ap contaminate sau unor alimente impropriu preparate. Spre exemplu, holera sau toxiinfeciile alimentare aprute prin consumarea unor alimente de la o cantin. Numrul infec iilor scade brusc, dac sursa este eliminat epidemii propagate: apar prin transmiterea de la o persoan la alta. Agentul cauzator al bolii trece de la o persoan infectat la una sntoas. Numrul de cazuri noi apare mai lent, iar limitarea mnbolnvirilor este mai greu de realizat. Rezervorul de germeni Rezervorul reprezint locul n care microorganismele pot s-i menin capacitatea infecioas. Acestea includ organismul uman, animal, anumite medii nevii i obiecte. Rezervorul uman reprezint principalul rezervor viu de germeni. Importani sunt, purttorii sntoi care reprezint surse oculte de infecie pentru persoanele din jurul lor. Purttorii sntoi sunt acei indivizi la care germenii se multiplic la poarta de intrare fr s produc manifestri clinice i nici imunologice. Nu trebuie confundat starea de purttor sntos cu cea de purttor aparent sntos la care semnele clinice sunt minime sau absente, dar sunt prezente semnele biologie i imunologice (purttori de virus hepatitic B). Rezervorul uman joac un rol important n rspndirea multor infecii: streptococice, febra tifoid, difteria, gonoreea, sifilisul, poliomielita, hepatita, SIDA etc. Rezervorul animal. Att animalele slbatice ct i cele domestice pot constitui sursa multor infecii. Bolile comune omului i
10 | P a g e

Clasificarea bolilor

animalelor se numesc antropozoonoze. Transmiterea poate avea loc prin contactul direct cu animalul infectat, prin contactul cu unele produse animale (piei, blnuri - crbune pumonar), consumul de carne infectat (crbune intestinal), muctura animalelor (rabie), neptura unor insecte (malaria) etc. Rezervoarele neanimate. Apa i solul. Solul este sursa infeciilor produse de unii fungii patogeni, precum i de sporii bacteriilor strict anaerobe (spori de bacil tetanic i botulinic). Apa se contamineaz de la materiile fecale ale omului i animalelor. Transmiterea agenilor infecioi Agenii infecioi se transmit n general prin 3 modaliti: Transmiterea direct a agentului infecios este posibil de la omul bolnav la cel sntos prin: contact direct prin atingere (rujeol, varicel, variol etc.), srut (hepatita B), contact sexual (sifilis, gonoree, SIDA etc.), contact indirect prin obiecte care au venit n contact cu bolnavul, ca, de pild, batiste, lenjerie, vesel, termometre, siringi infectate etc., prin picturile lui Pflgge pe care bolnavul le rspndete n timpul strnutului i a tusei (virusurile gripale, paragripale etc.). Transmiterea prin vehiculi obinuii se refer la transmiterea agenilor infectioi pe cale hidric (salmonelle, shigelle), alimentar (botulism, toxiinfecii alimentare), prin snge (hepatita B, citomegalia, SIDA) etc. Transmiterea prin vectori. Cei mai importani vectori sunt artropodele. Unele dintre ele, ca de pild mutele, sunt vectori mecanici care transport agenii infecioi dintr-un loc n altul. Vectorii biologici sunt cei care particip activ la transmiterea agentului infectios. Astfel, unele artropode inger agentul infecios n timp ce sug sngele persoanei infectate (de pild, narul anofel, care transmite malaria), gzduind o parte a ciclului evolutiv al acestuia i transmindu-l prin neptur altei persoane Patogenia infeciilor n orice infecie au loc urmtoarele evenimente: contaminarea (ntlnirea cu agentul infecios), ptrunderea i multiplicarea n organismul gazd prin eludarea rezistenei antiinfecioase, producerea injuriilor morfologice i funcionale, datorate n parte aciunii directe a agentului infecios i cel mai frecvent, reaciilor de aprare ale organismului, deznodmntul infeciei, care poate fi vindecarea cu sau fr sechele, exitusul sau coexistena pe timp ndelungat a celor doi parteneri ai infeciei: agentul infecios i organismul. n majoritatea infeciilor, evenimentele descrise mai sus se petrec consecutiv, ntr-o perioad limitat de timp. n infeciile produse de germenii condiionat i accidental patogeni, contaminarea, ptrunderea i chiar i colonizarea (multiplicarea la locul de intrare) se petrec cu mult timp nainte
11 | P a g e

ca infecia s se declaneze. Durata intervalului pn la producerea acesteia depinde n mare msur de statusul imunitar ale gazdei care poate permite sau nu producerea unei infecii cu aceti germeni. Aceste etape sunt nsoite de mecanismele de aprare antiinfecioas ale gazdei, ceea ce deosebete agenii infecioi fiind maniera n care sunt capabili s eludeze aceste mecanisme. Contaminarea Prima ntlnire a organismului cu microbii se produce n momentul naterii; ftul- via intrauterin steril din punct de vedere microbiologic; este aprat de membranele fetale, iar placenta permite ptrunderea unui numr foarte redus de microorgansime din circulaia mamei:v.rubeolic, rujeolos, HIV, Treponema pallidum, Toxoplasma gonidii. n timpul naterii nou-nscutul vine n contact cu microorganismele prezente n canalul vaginal i pe pielea mamei. El nu este expus acestei contaminri total neprotejat ci motenete de la mam, pe cale sanguin, un repertoriu bogat de anticorpi la care se adaug cei din colostrul i laptele matern. Acetia i asigur o protecie relativ fa de infecii pn cnd va ncepe s-i dezvolte propriile mecansime de aprare antiinfecioas. Dintre microorgansimele cu care organismul vine n contact pe parcursul existenei sale, o parte vor dispare de pe suprafaa organismului, o parte vor coloniza pielea i mucoasele i doar o mic parte vor produce infecii propriu-zise. Contaminarea poate fi endo i exogen. Infeciile exogene sunt cele care rezult n urma contactului cu agentul infecios din mediul nconjurtor. Agenii infecioi pot contamina organismul n cele mai variate mprejurri: pe cale alimentar, respiratorie, contact sexual, manevre medicale, promiscuitatea cu animalele, mucturile de insecte etc. Modul de contaminare sugereaz aproape ntotdeauna i posibilitile de prevenire nespecifice ale infeciei. n infeciile exogene produse de germenii nalt patogeni, timpul care trece de la contaminare pn la apariia simptomatologiei clinice este n general bine definit (perioada de incubaie). Infeciile endogene rezult n urma contaminrii cu germeni de pe suprafaa mucoaselor i a pielii. Aceste microorgansime produc infecii dac traverseaz barierele anatomice i ptrund n esuturi (E.coli). Pe de alt parte, ageni infecioi din flora normal a organismului, care nu produc infecii la individul sntos, le vor produce la indivizi cu deficiene imune (supui unui tratament imunosupresor, cu deficiene imune genetice, cu deficiene imune dobndite). n ambele situaii contaminarea are loc cu mult nainte de producerea infeciei propriu-zise. Ptrunderea
12 | P a g e

n zone anatomice care sunt n relaie direct cu exteriorul (tubul digestiv, cile respiratorii, cile urinare, cile genitale, conjunctiva etc.) - fr traversarea barierelor epiteliale. Microrgansime: V. cholerae (holera), C.diphteriae, E.coli (infeciile urinare) etc., n esuturile profunde - cu trecerea microorganismelor prin barierele anatomice reprezentate de piele i mucoase. Unele microorganisme pot trece direct prin pielea intact cum sunt leptospirele i unii viermi, ca, de exemplu, filariile, iar altele pot traversa epiteliul mucoasei respiratorii, digestive, a tractului genitourinar i conjunctiva, direct n snge sau n esuturile profunde prin leziuni traumatice, muctura unor animale (virusul rabic, Pasteurella multocida), nepturile unor insecte (Plasmodium falciarum) sau prin diverse acte medicale efectuate fr respectarea normelor de asepsie (HIV, virusul hepatitei B, etc.). Multiplicarea Numrul de microorgansime care ptrund n organism (mrimea inoculului) este n mod obinuit prea mic pentru a produce simptome. Agenii infecioi trebuie s nving mecanismele de aprare antiinfecioas ale gazdei i s se nmuleasc la un nivel corespunztor pentru ca prezena lor n organism s se fac simit. n general, microorganismele se multiplic mai ncet in vivo dect in vitro, tocmai din cauza reaciilor de aprare pe care le declaneaz. Intervalul - de la ptrunderea agentului infecios pn la apariia simptomatologiei clinice se numete perioad de incubaie. Un aspect foarte important, determinant n evoluia infeciei, este sediul multiplicrii microorgansimelor: extra- sau intracelular. Microorgansimele cu habitat extraclelular sunt supuse aciunii complementului, lizozimului, anticorpilor, fagocitozei etc., pe cnd cele cu habitat intracelular sunt protejate de aceti factori, nmulirea lor fiind protejat. Eliminarea lor din organism se face prin distrugerea celulelor n care se afl, ceea ce atrage dup sine producerea unor leziuni tisulare. Localizarea infeciei Un proces infecios poate fi localizat atunci cnd germenii se multiplic ntr-o zon relativ limitat a organismului (abces sau furuncul). Infecia se poate propaga de la poarta de intrare prin continguitate din aproape n aproape i prin diseminare la distan pe cale sanguin sau/i limfatic. n cel din urm caz rezult infecia sistemic sau generalizat. Dintr-un proces infecios localizat, germenii pot fi vehiculai de snge sau limf la diferite organe iniiind o localizare secundar. Un aspect particular al diseminrii microbilor n organism este transportul mediat celular i translocarea. Transportul mediat celular este modalitatea pe care o folosesc microorganismele care rezist digestiei intracelulare a fagocitelor (de exemplu, chlamydiile, gonococii etc.). Ele se vor nmuli n aceste celule i vor fi vehiculate la distan. Translocarea este proprietatea unor germeni de a traversa un epiteliu pentru a ajunge n circulaie (de exemplu, bacilul tific este translocat de ctre celulele epiteliale ale mucoasei digestive i ajunge n circulaie).
13 | P a g e

Prezena bacteriilor n snge se numete bacteriemie iar multiplicarea lor n snge septicemie. Toxemia este prezena n snge a unei toxine secretate sau eliberate de microb fie n afara organismului (toxina botulinic prezent n conserve), fie n organism (endotoxina bacteriilor gram-negative cnd se produce o liz masiv a acestora n snge). ETAPELE EVOLUTIVE ALE INFECIEI perioada de incubaie: intervalul de timp care trece de la ptrunderea microbului n organism pn la apariia primelor simptome. boli cu perioad de incubaie scurt de 1-7 zile (toxinfecii alimentare, meningite, difterie, gonoree etc.), cu incubaie medie de 8-21 de zile ( febra tifoid, tetanus etc.) i cu incubaie lung de zeci de zile (hepatita B, 60-180 de zile) i foarte lung de ani de zile (tuberculoz, SIDA, lepr etc.). Bolile infecioase ciclice (cu evoluie regulat), ca de pild rujeola, rubeola, varicela, variola etc., au o perioad fix de incubaie. debutul bolii reprezint apariia primelor simptome i poate fi brusc sau insidios. perioada de stare. n aceast perioad se manifest semnele clinice i paraclinice caracteristice bolii. perioada de convalescen n care se refac leziuni i se restabilesc funciile perturbate. Aceast perioada este important deoarece acum pot aprea recderi, complicaii sau cronicizarea infeciei. n cazul unei evoluii favorabile se produce vindecarea cu sau fr sechele. n cazuri nefavorabile, boala evolueaz spre exitus sau spre cronicizare. EFECTELE NOCIVE ALE INFECIEI Alterri organice i funcionale datorate agenilor infecioi Alterri mecanice. Obstruciile mecanice se datoreaz reaciei inflamatorii a gazdei ca rspuns la prezena microorganismului. Orice organ tubular poate fi obstruat n anumite infecii, uneori cu urmri nefaste. obstrucia cilor respiratorii - n difterie. ptrunderea germenilor dintr-o infecie a urechii medii la meninge poate duce la dilatarea ventriculilor cerebrali prin obstruarea circulaiei LCR. n infeciile parazitare. Dac agenii infecioi au dimensiuni mari i sunt n numr suficient, ei pot obstruciona unele ci anatomice vitale. ( Ascaris lumbricoides, poate obstrua un canalicul biliar, iar dac se gsete n numr mare produce un ghem care obstrueaz tubul digestiv) Alterri organice i funcionale datorate agenilor infecioi Distrugere celular Bacteriile distrug celulele prin toxinele pe care le secret. Acestea acioneaz fie n apropierea porii de intrare (Shigella), fie la distan de locul unde sunt produse
14 | P a g e

(Corynebacterium diphteriae). La aciunea toxinelor se mai adaug cea a enzimelor hemolitice i leucolitice. Virusurile cu efect citopatogen produc liza celulelor n care se nmulesc.

paralizii spastice, iar cea botulinic interfereaz eliberarea de acetilcolin la nivelul sinapselor colinergice rezultatul fiind paralizia flasc. n ambele cazuri moartea se produce prin paralizia muchilor respiratori. Toxina holeric crete nivelul de AMP-ciclic n celulele epiteliului intestinal, ceea ce are ca rezultat eliminarea unor cantiti mari de ap n intestin cu producerea consecutiv a diareei. Moartea survine prin deshidratare. Alterri datorate reaciilor de aprare antiinfecioas Puroiul: un amestec de leucocite vii i distruse, bacterii i un exudat. El rezult n urma migrrii rapide a leucocitelor n focarul infecios, stimulate de substane chemotactice produse chiar de bacterii dar i de esuturi sau leucocite. Dup distrugerea lor, leucocitele elibereaz n jur hidrolaze puternice din granulaiile lizozomale. Aceste enzime lezeaz esuturile nvecinate, extinznd zona afectat. Abcesul. Cnd puroiul se constituie ntr-o colecie, vorbim de un abces. De exemplu, furunculul se produce prin obstrucia unei glande sebacee, ceea ce ofer stafilococului auriu, prezent n mod normal pe piele, oportunitatea de a se nmuli eficient i de a produce infecia. Localizarea unui abces este esenial pentru prognostic. Astfel, furunculele cutanate sunt dureroase, dar prognosticul nu este grav n general, pe cnd localizarea unui abces la nivel cerebral este fatal. Pacienii cu deficiene genetice ale funciilor leucocitare sufer de infecii purulente recurente, chiar i n condiiile unui tratament corect cu antibiotice. Reacia de faz acut. Prezena bacteriilor n esuturi elicit o reacie generalizat cunoscut sub denumirea de rspuns de faz acut i care este un mecanism al rezistenei antiinfeciose naturale. Dac intensitatea acestei reacii depsete nivelul fiziologic, ea determin tulburri foarte grave. Bacteriile induc secreia IL-1 care acioneaz asupra centrului termoreglrii, rezultatul fiind febra. IL-1 stimuleaz, de asemenea, sinteza unor substane numite prostaglandine care i ele acioneaz asupra centrului termoreglrii i sunt responsabile de starea general de disconfort pe care o resimim n timpul unei infecii. Endotoxinele bacteriilor gram-negative pot induce i ele rspunsul de faz acut. n doze mici, endotoxinele produc febr i mobilizeaz unele mecansime de aprare antiinfecioas. n cantiti mari, ele induc ocul endotoxic i coagularea intravascular diseminat.
15 | P a g e

Alterri farmacodinamice ale metabolismului. Toxina tetanic modific metabolismul celulelor motoare ducnd la

Rspunsul umoral (formarea de anticorpi specifici). n circulaie i n esuturi anticorpii se combin cu agenii infecioi sau cu unele produse ale acestora (toxine, enzime etc.). Aceste complexe antigen-anticorp vor induce, n mod normal, un rspuns inflamator prin intermediul sistemului complement n scopul eliminrii agenilor nfectioi sau a neutralizrii produilor lor toxici. Nu are ntotdeauna un efect protector. La persoane cu predispoziie alergic este posibil sensibilizarea organismului fa de anumite antigenele bacteriene ceea ce duce la instalarea unor stri de hipersensibilitate mediate umoral (de tip I, II sau III). Astfel, de pild, sunt foarte bine cunoscute mecanismele umorale prin care se produc complicaiile alergice poststreptococice cum sunt cardita reumatismal (HS de tip II) i glomerulonefrita acut (HS de tip III). Rspunsul celular mediat de limfocitele T citotoxice i macrofage poate depi n intensitate limitele fiziologice fiind asociat cu inflamaia cronic. Acest aspect se ntlnete mai frecvent n infeciile cu germeni cu habitat predominent intracelular (tuberculoz, lepr) i virusuri. MANIFESTRILE CLINICE ALE INFECIEI Manifestrile clinice ale infeciei sunt multiple, fiind influenate de o serie de variabile: factorii genetici ai gazdei i ai agenilor infecioi, doza infectant, calea de ptrundere, factorii de patogenitate ai microbilor, rezistena antiinfecioas a gazdei, considerente anatomice, factorii de mediu i de ali factori pn n prezent necunoscui. Unele infecii au, n general, acelai tablou clinic la majoritatea indivizilor (holer, cium, dizenterie, rabie etc.). Alteori, evoluia este diferit n funcie de rezistena individului i patogenitatea agentului infecios. Astfel, la unii indivizi infecia poate fi urmat de starea de boal, deci evolueaz cu manifestri clinice, iar la cei la care organismul este capabil s-i mobilizeze rapid i eficient mijloacele de aprare, meninnd multiplicarea agenilor infecioi la un prag sczut, de o infecie inaparent, care va determina doar modificri imunologice, decelabile prin teste de laborator. ntre aceste dou extreme exist diferite nuane care pot fi reprezentate sub forma unui iceberg. (infecia cu virus poliomielitic). Dup aspectul evolutiv, infeciile sunt : Infeciile acute: evolueaz ntr-un timp limitat, rezultatul fiind n general vindecarea. Exemple: bolile infecto-contagioase ale copilriei (rujeol, varicel, rubeol, orellion etc.). n infeciile cronice: agentul patogen acioneaz timp ndelungat n organism. Ele rezult fie din cronicizarea unei infecii acute (hepatita B), fie n urma infeciei cu germeni care dau boli cu evoluie cronic (tuberculoz, sifilis, lepr etc.).

16 | P a g e

Infeciile latente : agentul infecios se gsete n organism pentru o perioad ndelungat, se nmuleste intermitent i produce recidive (infecia herpetic). Infeciile lente: afecteaz ncet i progresiv sistemul nervos central. Unele sunt de natur viral, ca, de exemplu, panencefalita subacut sclerozant produs de virusul rujeolic.

CURS 3. Imunitatea
Sistemul imunitar al unui organism asigur protecia acestuia mpotriva invaziei de ctre alte organisme sau de ctre substane strine, cum ar fi bacteriile, virusurile, fungii, viermii, polenul, esuturile transplantate sau veninul. Pri din aceste substane se numesc antigene sau imunogene. Antigenele pot fi polizaharide sau proteine i provoac un rspuns imun din partea organismului. Imunitatea reprezint rspunsul specific al organismului gazd cnd un alt organism sau o substan l invadeaz. Corpul reacioneaz la antigene prin formarea de anticorpi. Anticorpii sunt proteine sintetizate de ctre corp i care se combin specific cu antigenele, pe principiul lactului i al cheii. Sistemul imunitar recunoate un anumit corp sau substan ca fiind propiu sau strin. Antigenul este recunoscut de ctre sistemul imunitar ca fiind strin. De asemenea, celulele canceroase sunt recunoscute ca fiind strine. Antigenul determin din partea organismului formarea de anticorpi i de limfocite specializate care l atac. Dac respectivul antigen invadeaz din nou, aceti anticorpi i limfocitele specializate l recunosc, inactivndu-l i distrugndu-l. Acesta este numit rspunsul imun mpotriva antigenului. Exist dou modaliti principale de imunitate: imunitatea natural i imunitatea dobndit. Imunitatea natural este o caracteristic a speciei i reprezint protecia organismului mpotriva diferitelor microorganisme, ca urmare a lipsei de receptori a organismului pentru acele microorganisme. Acest tip de imunitate se ntlnete la toi indivizii aceleai specii. Spre exemplu, omul nu se poate infecta cu virusul mozaicului tutunului. Dezvoltarea anticorpilor i a limfocitelor specializate se numete imunitate dobndit, deoarece este ctigat de ctre organism de-a lungul vieii, prin mijloace naturale sau artificiale. n funcie de calea prin care este dobndit, imunitatea se clasific n dou moduri. Un prim mod de clasificare este : Natural: cnd nu se intervine din exterior Artificial: cnd se intervine prin diferite tehnici puse la punct de om (vaccinuri, seruri imune) Aceste dou tipuri de imunitate se clasific la rndul lor, n funcie de efortul depus de organism, n dou tipuri:
17 | P a g e

Imunitatea dobndit

Activ. Imunitatea dobndit activ are loc atunci cnd un individ este expus unui agent patogen i i formeaz anticorpi i limfocite specializate. Imunitatea natural se dobndete prin intrarea n contact cu patogenul, iar cea artificial se dobndete prin vaccinare. Vaccinul este o substan care conine microorganisme slbite sau inactive. Pasiv. n cazul imunitii pasive, anticorpi deja formai sunt introdui sau trecui individului. Acesta nu i produce singur. Cea natural are loc cnd anticorpii IgG de la mam trec la ft prin placent sau cnd IgA sunt trecute nou-nscutului prin colostrul matern. Cea artificial are loc prin seruri imune, ce conin anticorpi.

Figura 3.1. Elementele figurate ale sngelui Serul i anticorpii Prin separarea electroforetic a proteinelor serice se obin diferitele tipuri de imunoglobuline. Exist trei tipuri principale: , i . Imunoglobulinele reunesc cei mai muli anticorpi. Un ser bogat n anticorpi este denumit ser globulinic. Imunoglobulinele pot fi injectate la o alt persoan, aceasta devenind imun la antigenele a cror anticorpi existau
18 | P a g e

printre imunoglobulinele respective. Imunitatea dobndit astfel nu dureaz dect circa trei sptmni, deoarece anticorpii se degradeaz. Tipuri de imunitate Imunitatea mediat umoral (prin intermediul anticorpilor) Imunitatea mediat prin anticorpi, numit i imunitate medait umoral, utilizeaz anticorpii n fluidele extracelulare, precum secreii mucoase, plasm i limf. Aceti anticorpi sunt produi de celulele B sau limfocitele B. Acestea atac n principal bacteriile, toxinele bacteriene i virusurile care invadeaz fluidele corpului. Deasemenea, atac i esuturile transplantate. Imunitatea mediat umoral a fost descoperit de cercettorul german Emil von Behring, la nceputul secolului XX, n cutarea lui de a creea o tehnic de imunizare mpotriva difteriei. Imunitatea mediat celular Imunitatea mediat celular implic limfocite specializate numite limfocite T care atac organismele strine direct i nu prin intermediul anticorpilor. Limfocitele T sunt, deasemenea, eficiente mpotriva viermilor, fungilor i protozoarelor. n plus, aceste celule regleaz diferite aspecte ale sistemului imunitar. Imunitatea mediat celular a fost explicat de cercettorul rus Ilia Mecinikov care, la nceputul secolului al XIX-lea, a observat c celulele fagocitare sunt mult mai active la animalele imunizate. Antigenele Un anticorp recunoate antigenul specific prin una sau mai multe regiuni prezente la nivelul antigenului, numite epitopi, sau determinani antigenici. Epitopii trebuie s aib o anumit form, dimensiune i structur chimic pentru ca anticorpul s poat interaciona cu ei i s poat distruge antigenul. Antigenele au o mas molecular de aproximativ 10.000 Da sau chiar mai mult, dei unele substane strine pot avea o mas molecular mult mai mic i nu sunt percepute ca antigene. Acestea se numesc haptene i pentru a deveni antigene, trebuie s se cupleze cu un transportor (o protein). Anticorpii atac doar haptena, nu i transportorul. Spre exemplu, penicilina este o hapten, nefiind perceput de organism ca antigen. Totui, n unele cazuri, cnd penicilina se ataeaz de proteine serice, se produce o reacie alergic. Persoanele care rspund n acest mod, sunt alergice la penicilin. O reacie alergic este un rspuns tipic imun. Antigenele pot fi proteine, polizaharide cu molecul mare, lipide sau acizi nucleici. Totui, antigenele de tip lipide sau acizi nucleici trebuie s se combine cu proteine sau polizaharide, altfel nu sunt considerate antigene. Anticorpii Anticorpii (Fig. 3.2) sunt cunoscui i sub denumirea de imunoglobuline, un grup de proteine solubile. Un antigen poate determina producia a diferii anticorpi, n funcie de epitopii si. Epitopii sau determinanii antigenici sunt cunoscui ca situs-ul de legare al antigenului.
19 | P a g e

Numrul de situsuri de legare ale antigenului este denumit valena anticorpului. Exist cel puin 2 epitopi pe fiecare antigen, unde un anticorp uman se poate lega. Acesta este cunoscut ca i anticorp bivalent deoarece valena lui este 2. Structura unui anticorp bivalent este numit monomer i const din 4 lanuri proteice. Acestea sunt 2 lanuri grele (heavy) H i lanuri uoare (light) L. Aceste proteine sunt conectate ntre ele i formeaz o structur cu aspect de Y, suficient de flexibil, nct s poat dobndi aspect de T. n aceast molecul se disting dou regiuni: regiunea variabil (braele Y-ului) i regiunea constant (piciorul Y-ului). Regiunea variabil are o conformaie spaial complementar cu epitopii antigenelor. Regiunea constant se numete regiune Fc. Aceast regiune permite legarea de anticorpi complementari, dac ambele situsuri de legare pentru antigene sunt ocupate. Altfel, anticorpii complementari sunt liberi s se ataeze de antigene i s reacioneze cu ele. Exist 5 tipuri de regiuni constante asociate cu 5 clase de imunoglobuline (Fig. 3.3).

Figura 3.2. Structura unui anticorp bivalent IgG (imunoglobulinele G) IgG neutralizeaz toxinele bacteriene i atac bacteriile i virusurile aflate n circuitul sanguin, prin creterea eficacitii fagocitelor. Aproximativ 80% dintre anticorpi aparin acestei clase. IgG pot strbate pereii vaselor i placenta, ptrunznd n fluidele tisulare. IgM (imunoglobulinele M) IgM reprezin prima clas de anticorpi ce rspund la un antigen sau la o infecie iniial i reprezint cam 10% din anticorpii din ser. IgM au dimensiuni relativ mari i au structur pentameric, fiind formai din 5 monomeri unii printr-un lan peptidic (join-chain). Datorit dimensiunii, IgM rmn n lumenul vasului sanguin. IgM sunt responsabile de hemaglutinare, n timpul transfuziilor incorecte, precum i de sporirea eficacitii fagocitelor. IgM sunt primele care apar n momentul iniial expunerii la antigene. IgA (imunoglobulinele A)
20 | P a g e

IgA sunt cei mai ntlnii anticorpi n secreii i n membranele mucoase. Reprezint 15% din anticorpii serici. IgA protejeaz copiii de infecii gastrointestinale i lupt mpotriva antigenelor ce atac sistemul respirator. Plasmocitele din membranele mucoase produc anticorpi secretori IgA, ce sunt apoi trecui ptin celule mucoase i atac antigenele de la suprafaa mucoaselor, precum bacteriile i virusurile. IgA au o durat de via limitat. IgD (imunoglobulinele D) IgD sunt prezente n snge i n limf, acestea sunt receptori la suprafaa limfocitelor B. asigur de asemenea protecie mpotriva viermilor parazii. IgE (imunoglobulinele E) IgE interacioneaz cu bazofilele i cu mastocite care elibereaz mediatori chimici, de tipul histaminelor care produc reacii alergice. IgE reprezint mai puin de 1% din totalul anticorpilor serici. Asigur aprare mpotriva viermilor parazii. Celulele B Celulele B sau limfocitele B se dezvolt din celuole stem ale mduvei osoase i ale ficatului ftului. Acestea sunt transportate la nivelul ganglionilor limfatici i n splin, unde utilizeaz receptori antigenici pentru a putea identifica antigene. Odat ce un antigen este identificat, limfocitele B i T activeaz un grup de limfocite ce produc anticorpi utilizai n rspunsul imun mediat umoral. Limfocitele T nu produc anticorpi. Cnd limfocitele B intr n contact cu antigenii extracelulari, devin plasmocite productoare de anticorpi, cicrca 2000/s. Cnd limfocitele B sunt stimulate de antigene, se produc i celule cu memorie. O celul cu memorie este o celul care asigur organismului o imunitate de lung durat mpotriva unui anumit antigen. n momentul n care antigenul se leag de receptorul antigenic, limfocitele B se multiplic ntr-o manier clonal. Un anticorp se leag la un epitop al unui antigen i formeaz un complex antigen-anticorp. Acest complex este specific. Totui, cnd exist cantiti mari de antigene, acestea pot fi legate de anticorpi nespecifici, ceea ce face ca respectivul complex s nu prezinte o interaciune perfect. Dac limfocitele B nu intr n contact cu antigenele, sunt distruse prin apoptoz. Apoptoza reprezint moartea programat a celulelor, care vor fi eliminate din organism prin intervenia fagocitelor.

21 | P a g e

Figura 3.3 Clase de anticorpi

Strategii de combatere a antigenelor Formarea complexelor antigen-anticorp este util n rspunsul la organisme infecioase sau substane strine deoarece le ndeprteaz din organism. Metodele de aprare prin formarea complexelor antigen-anticorp constau n aglutinare, opsonizare, neutralizare, citotoxicitate mediat umoral i celular i activarea complementului. Aglutinarea determin legarea antigenelor ntr-un agregat ce va fi uor distrus de fagocite. Opsonizarea reprezint acoperirea bacteriilor ncapsulate de anticorpi ce se leag i de fagocite, facilitnd liza bacteriilor. Neutralizarea determin blocarea antigenelor de a se lega de celulele int, ducnd la neutralizarea antigenelor.
22 | P a g e

Citotoxicitate mediat umoral i celular reprezint legarea anticorpilor de toxinele bacteriene, mpiedicn legarea i ptrunderea n celulele int. Activarea complementului este utilizat cnd agenii infecioi sunt nvelii n proteine reactive ce determin ataarea IgM i IgG la agent, determinnd liza membranei celulare i ingestia de ctre fagocite.

Imunitatea de durat Cnd antigenele sunt ntlnite pentru prima oar, are loc un rspuns imun primar ce determin creterea titrului anticorpilor. Titrul reprezint cantitatea de anticorpi din serul unui organism infectat. Cnd antigenul atac pentu prima dat organismul cantitatea de anticorp este extrem de redus. Apoi titrul anticorpului crete gradual i scade odat cu distrugerea sau neutralizarea antigenului. Cnd organismul intr n contact pentru a doua oar cu antigenul, are loc un rspuns imun secundar ce duce la transformarea rapid a limfocitelor cu memorie n plasmocite productoare de anticorpi. Un limfocit B cu memorie este un limfocit B produs ca urmare a rspunsului primar i care nu s-a transformat atunci n plasmocit. Anticorpii utilizai pentru dignostic Anticorpii sunt utilizai n diagnosticarea bolilor, din moment ce prezint activitate specific. Aceasta este util n identificarea unui agent patogen necunoscut. Anticorpii pot fi produi n laborator prin clonarea unor celule cultivate productoare ale anticorpilor respectivi. Aceti anticorpi se numesc anticorpi monoclonali. Celule maligne ale sistemului imunitar, numite celule mielomice sunt utilizate deoarece se divid continuu. Acestea fuzioneaz cu limfocite ce produc un singur tip de anticorpi formnd celule numite hibridomale. Acestea se divid n continuu i produc mari cantiti de anticorpi. Anticorpii monoclonali sunt utilizai pentru dignosticarea infeciilor streptococice i infeciilor clamidiale. Deasemenea, testele de sarcin utilizeaz anticorpi monoclonali ce leag hormonii prezeni n urin, n timpul sarcinii. Mesagerii chimici Celulele sistemului imunitar comunic ntre ele prin utilizarea de mesageri chimici ce trimit semnale pentru a declana diverse reacii. Aceti mesageri chimici se numesc citokine. Exist circa 60 tiprui citokine. Citokinele utilizate pentru comunicarea ntre leucocite se numesc interleukine. Exist 17 interleukine identificate numeric. Citokinele sunt utilizate ca ageni terapeutici care combat bolile. Spre exemplu, interleukina1 este utilizat n distrugerea tumorilor la animale. Limfocitele T Limfocitele T se dezvolt n mduva osoas i migreaz n timus, unde se maturizeaz. Apoi migreaz n sistemul limfatic pentru a proni lupta mpotriva antigenelor. Odat ce organismul devine adult, abilitatea de a creea limfocite T se diminueaz. Limfocitele T atac un antigen specific situat la suprafaa celulei. Aceste celule se numesc celule ce prezint antigene (antigen-presenting
23 | P a g e

cells) APCs, cum ar fi, macrofagele sau celulele dendritice. Dup ce antigenul este ingerat de APC, fragmente din antigen sunt plasate la suprafaa celulei. Aceste fragmente trebuie s se aflea n apropierea moleculelor proprii ale suprafeei celulare. Moleculele proprii fac parte din complexul de histocompatibilitate, grup de proteine unice pentru fiecare persoan i utilizate n distingerea propriului de nonpropriu. Cnd un receptor antigenic ntlnete fragmente din antigenul complementar, celulele T se transform n celule T efectoare ce ndeplinesc rspunsul imun. Un limfocit T este o celul stimulat antigenic. Unele limfocite T atac antigenele n timpul rspunsului primar, n timp ce altele devin celule cu memorie i au rol n rspunsul secundar imun. Exist 4 tipuri de celule T: Celule T Helper determin formarea de limfocite t citotoxice, activeaz macrofagele, produc citokine i sunt eseniale n formarea de anticorpi de ctre limfocitele B. Celulele T citotoxice distrug celulele infectate de ctre virusuri i bacterii. Celulele T responsabile de prelungirea hipersensibilitii (TD) sunt asociate cu reaciile alergice. Celulele T supresoare opresc rspunsul imun cnd nu exist antigene. Limfocitele T sunt identificate i dup receptorii de suprafa, numii grupuri de difereniere (clusters of differentiation) CD. Acestea sunt de dou tipuri: CD4-Celule T helper CD8-Celule T citotoxice i supresoare Macrofagele i celulele Natural Killer (NK) Macrofagele sunt celule fagocitare ce ingereaz antigene. Acestea sunt n repaus pn cnd primesc citokine de la celulele T Helper, moment n care se mresc i sunt pregtite s atace antigenele. Macrofagele distrug celulele infectate cu virusuri i bacteriile localizate intracelular. Deasemenea, elimin celulele tumorale. Celulele NK sunt limfocite care distrug alte celule, precum celulele tumorale. Celulele NK sunt ntotdeauna active i n cutare de celule infectate. Acestea sunt diferite de celelalte celule ale sistemului imunitar care se activeaz doar n prezena unui antigen.

24 | P a g e

CURS 4 Principii de sterilizare i dezinfecie

Sterilizarea este definit ca fiind omorrea sau ndeprtarea tuturor microorganismelor i virusurilor de pe un obiect sau produs. Dezinfecia reprezint ndeprtarea patogenilor de pe obiecte sau de pe tegument. Termenul asepsie scoper toate msurile luate n vederea prevenirii contaminrii obiectelor sau leziunilor. Dezinfecia i sterilizarea utilizeaz att ageni chimici, ct i fizici. O msur a eficacitii acestui proces o reprezint valoarea D, care exprim timpul necesar reducerii cu pn la 90% a numrului de microorganisme. Agenii pentru sterilizare sunt: aerul cald uscat (180 C, 30 minute; 160 C, 120 minute) aerul cald umed (121 C, 15 minute, o presiune atmosferic; 134C 3 minute, 2 atmosfere). razele sunt utilizate n radiosterilizare Dezinfecia este realizat, de obicei, cu ajutorul agenilor chimici, dintre care cei mai importani sunt: aldehidele, alcoolii, fenolii, halogenii i surfactanii (detergenii). Termeni i noiuni generale Sterilizarea reprezint omorrea tuturor microorganismelor i virusurilor sau completa lor eliminare de pe un material, cu o ct mai mare precizie. Un obiect sterilizat i mpachetat astfel nct s nu fie contaminat este numit steril. Metodele standard de sterilizare cu aplicaii medicale sunt capabile s provoace distrugeri iremediabile microorganismelor patogene, precum bacterii, protozoare, fungi, viermi (inclusiv ou). Proceduri speciale sunt necesare pentru inactivarea prionilor (ex. autoclavarea: 121 C timp de 4 ore i 30 minute). Descoperirile din ultimii ani indic faptul c arheobacteriile hipertermofile rezist la temperaturi de peste 100 C i la autoclavare la 121 C timp de o or. Aceste forme de via extreme, alturi de prioni, nu pot fi distruse prin metode standard de sterilizare. Dezinfecia este un tratament orientat ctre prevenirea transmiterii anumitor microorganisme. Scopul procedurilor de dezinfecie este acela de a face un obiect incapabil s rspndeasc microorganisme. Conservarea este un termen general ce face referire la msurile adoptate n vederea prevenirii sporulrii microorganismelor pe difierite produse (farmaceutice, medicamente). Decontaminarea reprezint microorganisme de pe un obiect. ndeprtarea sau reducerea numrului de

25 | P a g e

Scopul msurilor i tehnicilor aseptice este acela de a preveni contaminarea microbian a obiectelor i leziunilor. Msurile aseptice implic utilizarea unor ageni chimici care s acioneze contra patogenilor din sau de pe esuturi. Mecanisme de aciune Cnd microorganismele sunt distruse prin cldur, proteinele lor (enzimele) sunt denaturate ireversibil. Radiaiile ionizante duc la formarea unor grupe reactive ce distrug ADN-ul i proteinele. Expunerea la radiaii UV modific structural ADN-ul (dimeri timinici), mpiedicnd replicarea. Aceste distrugeri pot fi reparate pn ntrun anumit punct prin expunerea la lumin (fotoreactivare). Majoritatea agenilor chimici (alcooli, fenoli, aldehide, metale grele, oxidani) denatureaz proteinele ireversibil. Surfactanii (amfoterici i cationii) atac membrana citoplasmatic. Derivaii acridinici se leag de ADN, prevenind replicarea i transcripia. Metode fizice de sterilizare i dezinfecie Cldura Aplicarea cldurii este o metod simpl, ieftin i eficient de distrugere a petogenilor. Metodele ce utilizeaz cldura variaz, n funcie de necesiti. Pasteurizarea (Fig. 4.1). Aceasta este un tratament antimicrobian utilizat pentru alimentele n form lichid: La temperaturi joase: 61,5 C, 30 minute; 71 C, 15 secunde La temperaturi ridicate: expunerea cteva secunde la 80-85 C Ultrapasteurizarea: nclzirea la 150 C timp de 2 secunde jumtate ntr-un container presurizat, cu aburi.

Dezinfecia. Aplicarea unor temperaturi mai sczute dect cele necesare sterilizarea. De reinut! fierberea instrumentelor, acelor, seringilor, etc. nu constituie sterilizare. Muli spori bacterieni nu sunt distrui prin aceast metod. Sterilizarea prin cldur uscat (Fig. 4.2). Valorile recomandate pentru sterlizarea la cald sunt: 180 C timp de 30 minute, 160 C timp de 120 minute, n timp ce obiectele pentru sterilizat trebuie s ating aceste temperaturi, pe toat durat procesului. Sterilizarea prin cldur umed (Fig. 4.3). Autoclavele presurizate i saturate n aburi sunt utilizate pentru urmtoarele valori: 121 C, 15 minute, o atmosfer 134 C, 3 minute, 2 atmosfere 26 | P a g e

Radiaiile Radiaiile nonionizante. Razele UV (280200 nm) reprezint un tip de raze nonionizante care sunt rapid absorbite de ctre o varietate de materiale. Razele UV sunt astfel folosite doar pentru a reduce patogenii aflai n aer (teatre chirurgicale, diferite echipamente) i pentru dezinfecia suprafeelor netede (Fig. 4.4). Radiaiile ionizante. Sunt utilizate dou tipuri: Radiaiile gamma constau n unde electromagnetice produse prin dezintegrare nuclear (radioizotopul Co 60). Radiaiile corpusculare constau n electroni produi de generatoare i accelerai pentru a le crete nivelul energetic.

Echipamentele de radiosterilizare sunt scumpe. La scar larg, astfel de echipamente sunt utilizate doar pentru sterilizarea bandajelor, materialelor pentru suturi, echipamente medicale din plastic i farmaceuticele sensibile la cldur. Doza necesar depinde de nivelul de contaminare i de ct de sensibile sunt microorganismele la radiaii. Filtrarea Lichidele i gazele pot fi sterilizate i prin filtrare (Fig. 4.5). Majoritatea filtrelor disponibile rein doar bacteriile i fungii, dar cu ajutorul filtrelor ultrafine, virusuri i chiar molecula mari pot fi filtrate. Filtrele membranare permit reinerea diferiteleor particule, datorit porilot de dimensiuni mici. Cel mai bine cunoscut tip de filtru este acela din coloizi organici. aceste materiale pot fi procesate astfel nct se obin straturi filtratoare foarte subiri cu dimensiunile porilor calibrate. n filtrele obinuite ca grosime, lichidele sunt trecute printr-un material fibros (azbest). Eficacitatea acestui tip de filtru se bazeaz pe adsorbie. Datorit posibilelor efecte toxice, sunt scoase din uz.

Metode chimice de sterilizare i dezinfecie

Etilen oxid (Fig. 4.6). Acest gaz reactiv este infalambil, toxic i puternic iritant al mucoaselor. Etilen oxidul poate fi utilizat pentru sterilizarea la temperaturi joase (20-60 C). Gazul are o capacitate mare de penetrare i poate trece prin unele folii de plastic. Un dezavantaj l reprezint faptul c nu poate distruge microorganismele uscate i necesit un nivel relativ de umiditate, n camera de sterilizare, de 40-90%. Etilen oxidul se comercializeaz sub form de soluii n plastic, cauciuc i materiale similare. Itemii sterilizai necesit o perioad pn este ndepratat etilen oxidul total de pe suprafaa lor. Aldehidele. Formaldehida este cea mai important dintre acestea. Poate fi utilizaz n aparate speciale de sterilizare. Utilizarea sa principal, este n dezinfecie. Formaldehida este un gaz solubil n ap. Este iritant al mucoaselor; 27 | P a g e

contactul cu pielea poate produce inflamaii sau eczeme alergice. Are un spectru larg de aciune asupra bacteriilor, fungilor i virusurilor. La concentraii ridicate, poate distruge i sporii. Aceast substan este utilizat ca dezinfectant al suprafeelor i obiectelor, la o concentraie de 0,5-5%. n trecut, era utilizat sub form gazoas pentru a dezinfecta aerul din ncperi (5g/m3). Mecanismul de aciune se bazeaz pe denaturarea proteinelor. O alt aldehid utilizat n dezinfecii este glutaraldehida. Alcooli. Tipul de alcool utilizat n dezinfecii este etanolul (80%), propanolul (60%) i izopropanolul (70%). Alcooli sunt eficeni mpotriva bacteriilor i fungilor, mai puin mpotriva virusurilor. Nu pot distruge sporii bacterieni. Datorit aciunii rapide i a ptrunderii bune n piele, utilizarea lor se face n dezinfecia igienic i chirurgical a pielii, mai ales a minilor. Un dezavantaj l reprezint faptul c nu au un efect ndelungat. Alcooli dentaureaz proteinele. Fenolii. Lister a fost primul care a utilizat fenolul n medicin. Astzi, derivaii fenolului sunt nlocuii cu cu grupri organice i/sau halogeni (alchilai, arilai, fenoli halogenai). O caracteristic comun a substanelor fenolice este slaba aciune asupra sporilor i virusurilor. Fenolii denatureaz proteine. Ei se leag de materiale organice destul de de slab, fiin potrivii pentru dezinfecia excreiilor. Halogenii. Clorul, iodul i derivai ai acestor halogeni sunt potrivii ca dezinfectani. Clorul i iodul au un efect microbicidal general i distrug sporii. Clorul denatureaz proteinele prin legarea de gurprile amino libere. Acidul hipocloros, pe de alt parte, este produs sub form de soluii apoase, apoi se desface nacid clorhidric i oxigen, acionnd ca un agent oxidant. Clorul este utilizat pentru dezinfectarea apei de but, a apei din piscine (0,5 mg/l). Hipoclorura de var (clorura de var) poate fi utilizat ca dezinfectant nespecific al excrementelor. Cloraminele sunt compui organici ai clorului care desfac clorul n soluie apoas. Sunt utilizai n curarea i splarea produselor i deinfecia excrementelor. Iodul are proprieti similare cu ale clorului. Cele mai importante preparate pe baz de iod sunt soluiile de iod i iodur de potasiu n alcool (tinctura de iod), utilizate pentru dezinfecia pielii i a leziunilor mici. Iodoforii sunt complexe ale iodului cu surfactani (polivinilpirolidona). Iodoforii au efecte mai puin iritante dect iodul pur, dar au i efecte mai slabe germicide. Oxidanii. Acest grup include ozonul, peroxidul de hidrogen, permanganat de potasiu i acidul peracetic. Majoritatea sunt utilizai ca antiseptici moderai ai mucoaselor, pielii sau rnilor. Surfactanii. Aceste substane (cunoscute i ca ageni activi de suprafa, tenside sau detergeni) includ detergenii anionici, cationici, amfoterici sau anionici, dintre care cei cationici i amfoterici sunt cei mai eficieni.

28 | P a g e

Efectele bactericide ale acestor substane sunt doar moderate. Nu au efect asupra bacilului Koch (cu excepia amfotensidelor), sporilor sau virusurilor necapsulate. Eficacitatea lor este bun mpotriva bacteriilor Gram-pozitive, dar mai slab asupra bacteriilor Gram-negative. Avantajele includ nivelul sczut de toxicitate, lipsa mirosului, tolerana bn a pielii i efectul curitor.

Dezinfecia practic
Scopul dezinfeciei chirurgicale a minilor este acela de a ndeprta ct mai multe microorganisme. Procedura este aplicat dup splarea puternic a minilor. Utilizarea alcoolului este cea mai potrivit n astfel de cazuri, cu toate c nu are efect sporicid. Alcooli sun astfel combinai cu ali dezinfectani (compuii amoniului). Iodoforii mai pot fi utilizai. Scopul dezinfeciei igienice a minilor este acela de a cura minile contaminate cu patogeni. i n acest caz, alcooli sunt principalii ageni folosii.. Alcooli i compuii iodului se preteaz pentru dezinfectarea pielii pacienilor n vederea pregtirii pentru operaii sau injecii. Agenii cu miros puternic sunt opiunea logic pentru dezinfecia excreiilor (fecale, sput, urin etc.). Nu este necesar distrugerea sporilor. Preparatele fenolice sunt utilizate n acest caz. Canalizrile contaminate ale spitalelor pot fi dezinfectate termic (80-100C), dac este necesar. Dezinfecia suprafeelor este o parte important a igienii spitalelor. Combinaia ntre curenie i dezinfecie este foarte eficient. Agenii corespunztori includ derivai ai aldehidelor i fenolilor n combinaie cu surfactanii. Dezinfecia instrumentelor este utilizat doar pentru ustensilele ce nu cauzeaz leziuni mucoaselor i pielii (ex. instrumente dentare utilizate n lucrul pe substana dur a dintelui). Aceste pregtiri trebuie s aib i un efect cuitor. Dezinfecia lenjeriei poate fi realizat prin substane chimice sau n combinaie cu tratamente termice. Substanele utilizate includ derivai ai fenolilor, aldehide i clor, precum i i compui surfactani. Dezinfecia trebuie s aib loc n timpul splrii. Clorul este agentul ales pentru dezinfecia apei potabile i a celei din piscine. Este uor de dozat, acioneaz rapid i are un spectru larg de aciune. Nivelul recomandat al concentraiei pentru apa de but este de 0,1-0,3 mg/l. , iar pentru apa din piscine 0,5 mg/l. Dezinfecia final a unei ncperi este procedura aplicat n spital dup finalizarea tratamentului unui pacient infectat i se aplic ncperii, ct i mobilierului. Evaporarea i atomizarea formaldehidei (5g/m3), metoda preferabil, necesit o perioad de expunere de 6 ore. Aceast procedur este acum nlocuit cu metode ce implic dezinfecia de suprafa i prin pulverizarea de produse coninnd formaldehid. Dezinfecia din spitale este important n prevenirea

29 | P a g e

circulaiei infeciilor ntre pacienii aceluiai spital. Procedura trebuie s fie notat pentru fiecare caz n parte.

Figura 4.1 Schema procesului de pasteurizare

Figura 4.2 Etuva sterilizare cu cldur uscat

Figura 4.3 Autoclavul sterilizare cu cldur umed

Figura 4.4 Lampa UV

30 | P a g e

Figura 4.5 Filtre microbiologice

Figura 4.6 Sterilizator cu etilen oxid

PARTEA II. VIRUSOLOGIE

31 | P a g e

Curs 5: Virusologie parte general Curs 6: Virusologie parte special (virusurile hepatitice, virusul poliomielitei, virusul gripal, virusul imunodefienei dobndite

CURS 5 Virusologie parte general

32 | P a g e

Definiie. Virusurile sunt complexe constituite din proteine i genom viral (ADN sau ARN). Sunt lipsite att de structur celular, ct i de procese metabolice independente. Se multiplic doar n celulele gazd, bazndu-se pe propria informaie genetic i exploatnd sistemul enzimatic al acesteia. Virusurile sunt entiti infecioase ce difer radical de alte microorganisme printr-o serie de caracteristici: Nu prezint organizare celular, ci sunt alctuite doar din material genetic i proteine. Nu prezint un sistem metabolic propriu, depinznd de sistemele enzimatice ale celulei gazd, pe care le exploateaz n vederea sintezei propriilor componente. i introduc materialul genetic n celula gazd, aceasta accept materialul genetic i ncepe s sintetizeze structurile proprii virusului. Virusurile infecteaz bacterii (bacteriofagii), plantele, animalele sau omul.

Figura 5.1 Dimensiunile virusurilor

I.

Structura virusurilor

33 | P a g e

Figura 5.2 Structura general a unui virus Particula viral matur (Fig. 5.2) este cunsocut sub denumirea de virion. Acesta prezint dou tipuri de constitueni: eseniali: genomul viral, capsida (nveliul proteic) accesorii: peplosul (anvelopa viral), spiculele implantate n nveliul extern sau glicoproteinele

A. Genomul. Materialul genetic viral este reprezentat de ADN sau ARN, n funcie de acest aspect virusurile sunt caracterizate drept ribovirusuri sau dezoxiribovirusuri. ADN-ul este de obicei dublu catenar, linear sau circular. ARN-ul este de obicei monocatenar, cu excepia reovirusurilor (responsabile de diareea la copii mici ntre 6 luni i 2 ani). La unele familii de virusuri, ARN-ul este segmentat. Virusurile cu ARN monocatenar sunt mprite la rndul lor n 2 categorii:

a. Cu lan +: atunci cnd ARN-ul are aceeai polaritate cu ARNm,

sinteza proteinelor putndu-se realiza utiliznd genomul ca atare; b. Cu lan -: atunci cnd ARN-ul are polaritatea complementar ARNm i nu se poate realiza sinteza proteinelor dect prin transcrierea informaiei ntr-o caten complementar. B. Capsida. Capsida este nveliul virusului ce protejeaz acidul nucleic i este mai mult sau mai puin conectat cu genomul. Capsida mpreun cu genomul formeaz nucleocapsida, mai ales n cazul unei strnse relaii ntre cele dou componenete (myxovirusuri virusul rujeolei). Capsida este format din uniti repetitive numite capsomere. Numrul acestora variaz, dar este constant n cadrul aceleai specii. Capsomerele sunt sferice sau cilindrice i conin cteva polipeptide. Capsida protejeaz acidul nucleic mpotriva degradrii. La toate virusurile, mai puin la cele protejate de anvelop, capsida este responsabil de ataarea virusului la celula gazd i determin specificitatea antigenic. C. Anvelopa. Anvelopa care nconjoar capsida, la o serie de familii virale, este dependent de membranele celulei gazd (nuclear sau celular, uneori cea a reticulului endoplasmatic). Anvelopa are o structur lipoproteic, lipidele aparin membranei, proteinele aparin att gazdei, ct i virusului i sunt 34 | P a g e

integrate sub form de spicule. Virusurile care prezint anvelop nu sunt adsorbite la suprafaa celulei gazd prin capsid, ci prin anvelop. ndeprtarea acesteia cu ajutorul unor solveni organici sau detergeni reduce infectivitatea acestora.

Figura 5.3. Componentele unui virus

D. Alte componente virale. Enzime virale. Virusurile necesit un numr de enzime diferite, n funcie de tipul de genom i modul de infecie. La unele specii virale, enzimele sunt componente ale particulei virale. Ex. neuraminidazele necesare ptrunderii i eliberrii myxovirusurilor; ARNpolimeraza ARN dependent, prezent la virusurile -; ADNpolimeraza la virusul variolei, ADN-polimeraza ARN-dependent (reverstranscripie) la virusul hepatitei B i la retrovirusuri. Hemaglutinina. Unele virusuri sunt capabile de aglutinarea eritrocitelor umane datorit existenei hemaglutininei la nivelul anvelopei, capabil de acest proces. Hemaglutinina joac un rol esenial n adsorbia i ptrunderea n celula gazd. 35 | P a g e

II.

Simetria virusurilor

n funcie de modul de dispunere a capsomerelor i de morfologia capsidei, virusurile pot avea trei tipuri de simetrie: 1) Simetrie radiar (fig. 5.4). Virusurile cu simetrie radiar au aspect de icosaedru (poliedru cu 20 de fee reprezentate de triunghiuri echilaterale). Numrul capsomerelor virionului variaz ntre 32 i 252, n funcie de numrul capsomerelor pentru fiecare latur a triunghiurilor (2 sau 6). Capsomerele aceluiai virion trebuie s fie identice, att ca morfologie, ct i ca proprieti antigenice i biologice. Prin purificare i cristalizare s-au putut obine imagini ale diveselor virusuri. 2) Simetrie helical. Aceasta este prezent atunci cnd unul dintre axurile capsidei este mai lung dect cellalt. Capsida se nfoar n jurul genomului sub form de helix, crend o structur de tip cilindric. 3) Simetrie mixt (complex). Este prezent la bacteriofagi i la virusul variolei. Virusul are aspect de cirea cu coad, capul avnd simetrie radiar i coninnd genomul, iar coada are simetrie helical i ajut la introducerea genomului n celula gazd.

Figura 5.4 Simetria virusurilor

36 | P a g e

III.

Clasificarea virusurilor

Cel mai vechi sistem de clasificare al virusurilor utiliza simptomatologia bolilor produse de acestea. Acest sistem nu este corect tiinific, deoarece acelai virus poate provoca mai multe boli, n funcie de esutul infectat. ncepnd cu anul 1966, virusurile au fost clasificate n ordine, familii i genuri utilizndu-se urmtoarele criterii: Tipul acidului nucleic: ribovirusuri (virusuri cu ARN) dezoxiribovirusuri (virusuri cu ADN);

Particularitile fizico-chimice ale genomului: genom mon- sau dublu catenar, liniar, circular, segmentar; Morfologia: simetria capsidei (helical, radiar, mixt), prezena sau absena anvelopei; Strategia de replicare; Structura i proprietile antigenice; Tropismul: - afinitatea virusurilor pentru anumite gazde naturale (genotropism): virusuri ale omului, animalelor, insectelor, plantelor, bacteriofagi i actinofagi; - afinitatea virusurilor pentru organe int (organotropism), esuturi (histotropism), celule (citotropism): o virusuri respiratorii: virusul gripal; o virusuri dermotrope (cu afinitate pentru piele i mucoase): poxvirus; o virusuri neurotrope (cu afinitate pentru sistemul nervos central): virusul turbrii i al poliomielitei; o virusuri organotrope (cu afinitate pentru organele interne): virusul febrei galbene; o virusuri hematotrope (transmise prin snge): virusul hepatitei B; o virusuri dermoneurotrope (cu afinitate pentru piele i sistemul nervos central): herpes virus; o virusuri pantrope (cu afinitate pentru celulele sistemului reticuloendotelial). Denumirea tiinific a virusurilor utilizez urmtoarele sufixe: - ales pentru ordine-ex. Nidovirales; - viridae pentru familii-ex. Herpesviridae; - virinae pentru subfamilii-ex. Alphaherpesvirinae; - virus pentru genuri-ex. Herpesvirus. O specie viral cuprinde un grup de virusuri care au aceeai informaie genetic i care mpart aceeai ni ecologic. Speciile virale sunt desemnate, de regul, prin caractere descriptive, ca de exemplu virusul imuodeficienei umane (HIV), cu subspeciile notate prin numere. Se mai utilizez i denumiri rezultate prin combinaia unor litere i cifre (ex. SV40, MS2 etc.). 37 | P a g e

IV.

Replicarea virusurilor (fig. 5.5)

Paii urmai n vederea multiplicrii virusurilor sunt urmtorii (fig. 5.6): a. Adsorbia virusurilor la nivelul receptorilor membranari b. Ptrunderea virusului i decapsidarea lui c. Proliferarea componentelor virale d. Asamblarea componentelor virale e. Eliberarea virusului din celul. Aa cum am menionat i mai sus, virusurile se multiplic doar n celule gazd vii. Paii detaliai ai procesului sunt prezentai mai jos. membranari compatibili. Cnd un virus ntlnete o astfel de celul, se adsoarbe fie prin intermediul capsidei, fie prin intermediul anvelopei. Practic receptorii membranari sunt cei care permit infectarea celulei. Unele aspecte privind aceti receptori sunt elucidate. Acetia sunt proteine transmembranare cu rol esenial n viaa celulei, mai ales n comunicarea intercelular. Se cunoate faptul c receptorii CD4 sunt specifici HIV-ului, receptorii complementului (C3) sunt specifici virusului Epstein-Barr. Cunoaterea structurii acestor receptori are un rol practic deosebit de important. Pe de o parte, este important n vederea producerii de medicamente antivirale menite s inhibe adsorbia virusului la celula gazd. Pe de alt parte, identificarea genelor codificatoare ale receptorilor permit realizarea de animale transgenice susceptibile la infecia cu virusul respectiv, la care ele erau, n mod normal, rezistente. Un exemplu n acest sens este obinerea de oareci transgenici susceptibili la virusul poliomielitei, care nu putea fi studiat dect pe maimue.

a. Adsorbia. Virionii pot infecta doar celule care prezint receptori

nivelul receptorilor membranari ptrund n celul prin endocitoz. La virusurile cu anvelop, aceasta poate fuziona cu membrana celular a gazdei, n celul ptrunznd doar nucleocapsida. Urmtorul pas l reprezint decapsidarea, cu eliberarea acidului nucleic viral. Acest proces are loc prin activarea enzimelor gazdei. Mecanismul exact de conservare a materialului genetic viral nu este pe deplin elucidat. c. Replicarea acidului nucleic. Se realizeaz diferit, n funcie de tipul de acid nucleic al virusului. Dezoxiribovirusurile: replicarea ADN-ului viral are loc n nucleul celulei gazd. Unele virusuri (herpesvirusurile) conin propriile lor replicaze. Altele (poliomavirusurile induc tumori) care nu au propriile lor replicaze codific polipeptide care modific polimerazele gazdei pentru a replica propriul lor ADN. La hepadnavirusuri (provoac hepatita B) materialul genetic const dintr-o secven de ADN monocatenar antisens i o scurt secven de ADN sens. Celula infectat transcrie o molecul de ARN sens (catena matri) utiliznd ADN antisens. Acest ARN este integrat n capsida virusului mpreun cu ADN 38 | P a g e

b. Ptrunderea i decapsidarea virusului. Virusurile adsorbite la

polimeraza. Aceasta sintetizeaz o caten de ADN antisens i pentru a stabiliza capetele genomului sintetizeaz o scurt secven sens. o Ribovirusurile: din moment ce eucariotele nu posed enzime pentru replicarea ARN-ului, virsul trebuie s aduc el nsui ARN- polimerazele ARNdependente. Acestea sunt coninute n virion sau exist doar informaia codificat n genomul virusului. Virusurile care conin ARN monocatenar sunt replicate n dou moduri, n funcie de polaritatea moleculei: Cele cu polaritate +: ARN-ul funcioneaz precum ARNm, replicazele putndu-se sintetiza rapid. Cele cu polaritate -: ARN-ul trebuie s fie transcris ntr-o secven complementar care s aib rol de ARNm. n acest caz, polimeraza pentru prima transcripie exist n interiorul virusului. n cazul ribovirusurilor monocatenare, indiferent de polaritate, sunt produse prima dat molecule complementare, care vor fi transcrise n molecule fiice. Acestea din urm vor avea aceeai polaritate cu a genomului din care proveneau. Virusurile care conin ARN dublu catenar transcriu o caten sens de ARN care este segmentat. Aceasta funcioneaz att ca ARNm ct i ca matri pentru sinteza ARN-ului complementar. Virusurile acestea au nglobate ARN-polimerazele ARN-dependente. Retrovirusurile, dei conin un genom ARN cu polaritate pozitiv, replicarea lor este diferit. Genomul const din 2 molecule de ARN monocatenar sens i este transcris de revers-transciptaz n ADN complementar. Acesta devine bicatenar. Transcrierea din ADN n ARN este utilizat att pentru sinteza de proteine, ct i pentru refacerea genomului viral. Indiferent cum este obinut ARN m, acesta este utilizat pentru sinteza de proteine virale. Sinteza este realizat cu informaie viral i cu componente celulare (ARNt, ribozomi, factoride iniiere etc.). n urma sintezei, se obin 2 tipuri de proteine: capsidale (structurale, care apar spre sfritul replicrii) i noncapsidale (enzime produse la nceputul replicrii virusului).

39 | P a g e

Figura 5.5 Replicarea virusurilor n funcie de materialul genetic

40 | P a g e

d. La sfritul replicrii, componentele virusului prezente n numeroase

exemplare sunt asamblate n particule virale noi. La unele specii, aceste particule pot fi acoperite de anvelop. e. Eliberarea virusurilor. n cazul virusurilor cu anvelop, odat cu formarea componentelor acesteia, particulele virale sunt eliberate din celul. n cazul

Figura 5.6 Replicarea virusurilor

V.

Interaciuni nongenetice

n infeciile virale mixte cu 2 (sau mai multe) virusuri, diferite componente virale pot fi schimbate sau se pot completa reciproc (amestecare, complementare sau interferen). Astfel de procese nu duc la obinerea de caractere stabile, motenibile. n cazul amestecrii, genomul virusului A este integrat n capsida virusului B sau ntr-o capsid mixt, ns particula rezultat va transmite caracterele codificate n genomul ei (A). n cazul interferenei, primul virus ptruns n celul (de obicei avirulent) poate inhiba replicare celui de-al doilea virus sau poate exista o inhibiie reciproc. 41 | P a g e

Mecanismul interferenei se poate datora producerii de interferoni sau unei scimbri n metabolismul celulei gazd. n cazul complementrii, speciile virale infecioase au defecte genetice care mpiedic replicarea. Virusul partener compenseaz defectul, suplinind substanele sau funciile necesare printr-un aa numit efect de ajutorare. Ex. Virusul hepatitei D se replic individual, dar necesit material capsidar suplimentar de la virusul hepatitei B. Quasispeciile. Cnd are lor replicarea ARN-ului viral, nu exist un mecanism de verificare a erorilor, ca n cazul ADN-ului. Rezultatul este producerea unui numr amre de mutaii, pentru o singur copie viral (10.000 nucleotide) apare cel puin o mutaie. Consecina este, dat fiind rata mare a replicaiilor, apariia de mutani viabili ai unei specii i existena lor mpreun ntr-o populaie heterogen, numit quasispecie. Presiunea seleciei (sistemul imunitar) determin supravieuirea acelor virusuri care se ncadreaz cel mai bine n organism. Aceasta explic nivelul ridicat de variabilitate existent n cadrul HIV. Apariia de specii noi. Este mai degrab o excepie dect o regul faptul c virusuri ce afecteaz doar animalele i sufer mutaii devin patogeen pentru om. n cele mai multe cazuri, schimbarea condiiilor de mediu este responsabil pentru noi forme de boal, din moment ce noile virusuri sunt de fapt virusuri vechi care au dobndit un echilibru ecologic cu gazdele lor i au intrat n noi cicluri de transmitere, ca rezultat al urbanizrii, migraiilor i incursiunii omului n biotopuri izolate (virusul Ebola, virusurile rabiei liliacului)

VI.

Reaciile celulei gazd

Consecinele posibile ale infeciei virale asupra gazdei sunt: Necroza: replicarea virusului duce direct la distrugerea celular. Apoptoza: virusul iniiaz o cascad de reacii ce duc la moartea celular programat (sinucidere), n cele mai multe cazuri ntrerupnd ciclul de replicare a virusului. Infecii nonnecrotice: replicarea ca atare a virusului nu duce la distrugerea celulei, dei aceasta poate avea loc ca urmare a rspunsului imun. Infecii latente: genomul viral se gsete n interiorul celulei, dar nu se replic, nici nu distruge celula. 42 | P a g e

Transformarea tumoral: infecia viral transform celula gazd ntr-o celul cancerigen, replicarea virusului poate avea sau nu loc, n funcie de virus i celula gazd.

Necroza: moartea celulei gazd apare eventual dup infecia iniial cu multe specii virale. Aceast distrugere a celulei implic, de obicei, producerea de componente virale. Replicarea viral combinat cu distrugerea celular este denumit ciclul litic viral. Distrugerea celulei, necrotic sau apoptotic este motivul apariiei simptomelor n cazul virozelor, efect cumulat cu cel produs de sistemul imunitar. Aceste efecte observate la celulele din culturi celulare se numesc efect citopatic(CPE) i pot fi utilizate n diagnostic. Efectele includ: detaarea celulelor de substrat sau de celelalte celule, formarea de celule multinucleare gigantice, apariia de incluziuni i vacuole. Acestea din urm apar ca urmare a acumulrii de componente virale. Scopul acestor transformri este replicarea virusurilor, moartea celulei aprnd ca o consecin secundar. Apoptoza: celulele posed mecanisme naturale care iniiaz distrugerea programat, prin transformri citoplasmatice i nucleare. Infeciile cu unele virusuri pot duce la apoptoz. Replicarea virusurilor trebuie s fie ncetinit pentru ca apoptoza s precead nmulirea virusurilor. Corpul elimin rapid celulele apoptotice, nainte de apariia proceselor inflamatorii. Apoptoza este considerat astfel un proces de aprare, care poate fi depit de unele virusuri. Infeciile latente. n acest tip de infecie, virusul este integrat n celul, dar nu are loc replicarea. Celula nu este afectat i nu se manifest simptomele bolii. Acest tip de infecii este ntlnit n particular, la virusurile herpetice care pot rmne n stare latent mult timp, n organism. Latena protejeaz virusurile de activitatea sistemului imunitar. Totui, se poate iniia ciclul litic care duce la apariia simptomelor i multiplicarea virusurilor. Transformarea tumoral. Un numr de infecii virale nu duce la moartea celulei gazd, ci mai degrab conduce la transformarea tumoral a ei. n urma infeciilor cu dezoxiribovirusuri tumorale, tipul de celul infectat determin fie cancerizarea, fie replicarea virusurilor, fie iniierea ciclului litic. n urma infeciilor cu ribovirusuri, apare replicarea virusurilor, dar celula i pstreaz viabilitatea sau replicarea este blocat.

VII. Patogeneza
Patogeneza se refer al factorii responsabili de originea i evoluia unei boli. n cazul virusurilor, infecia se realizeaz parenteral sau prin mucoase. Virusurile se pot replica doar la poarta de intrare (infecii localizate) sau pe cale sanguin, limfatic sau nervoas ajung s se rspndeasc (infecii generalizate). n ambele cazuri, replicarea virusului induce leziuni degenerative. Rspunsul imun poate 43 | P a g e

contribui la eliminarea virusurilor prin distrugerea celulelor infectate, dar acelai rspuns poate exagera simptomele bolii. Transmiterea. Virusurile pot fi transmise pe orizontal (n cadrul unui grup de indivizi) sau pe vertical (de la mam la ft). Poarta de intrare. Cele mai importante pori de ptrundere a virusurilor sunt reprezentate de mucoasa respiratorie i tractul digestiv. Epiderma intact reprezint o barier mpotriva virusurilor, care pot ptrunde pin microtraume (aproape ntotdeauna prezente) sau prin inoculri mecanice (insectele hemtofage). Rspndirea virusului n organism. Exist dou tipuri de infecii: Infecii locale. n cazul acestora, virusurile sunt rspndite de la o celul la alta. Infecia i simptomele bolii sunt limitate la poarta de intrare. Spre exemplu rhinovirusurile (responsabile de unele rceli) se multiplic doar n tractul respirator superior. Infecii generalizate. n cazul acestora, virusurile sunt rspndite la distan de poarta de intrare, prin intermediul sngelui sau limfei i ajung la organele int. Odat ajunse, ncepe replicarea virusurilor i apariia simptomelor bolii. Spre exemplu enterovirusurile se multiplic la nivelul intestinului, dar nu provoac simptome dect dac ajung n sistemul nervos central sau n musculatur. O alt modalitate de rspndire este cea neurologic, de la poarta de intrare de-a lungul nervilor pn la SNC (virusul rabic). Infecia organelor, organotropism Infectarea unei celule gazd poate fi realizat doar dac prezint pe suprafaa ei receptori specifici. Acest mecanism explic organotropismul observat la virusuri. Totui tropismul este doar aparent, este mai corect spus susceptibilitatea sau rezistena celular (i deci a organelor). Evoluia infeciei. Leziunile aduse organelor de ctre virusuri sunt n principal de natur degenerativ. Inflamaiile sunt procese secundare. Severitatea simptomelor clinice depinde n primul rnd de distrugerea provocat de virus (sau de sistemul imunitar). Majoritatea componentelor virale sunt produse nainte de apariia simptomelor. De asemenea, infeciile pot trece neobservate dac gradul de distrugere celular este nesemnificativ sau lipsete complet. n astfel de cazuri se vorbete de infecii subclinice, opuse celor simptomatice. Infeciile aparente nu sunt acelai lucru cu infeciile latente, n care virusul nu se replic. Pe de alt parte infeciile pot fi exgerate, fie datorit complexelor pe care le formeaz particulele virale cu anticorpii, fie datorit distrugerii celulelor infectate de ctre sistemul imunitar. Aceste proces devin patologie cnd virusul nsui nu producea distrugerea celulei sau o producea ntr-un grad redus. Agravarea infeciei virale datorat anticorpilor (ADE) 44 | P a g e

Procesul mbolnvirii poate fi nrutit cnd virusurile reacioneaz cu anticorpi insuficient de muli. Se formeaz complexe recunoscute de celule care n mod normal nu prezint receptori pentru virusul respectiv, n schimb prezint receptori pentru anticorp. n acest caz, anticorpii sporesc infecia. Excreia virusurilor. Eliminarea noilor virusuri depinde de locul unde se replic virusul. Spre exemplu, virusurile care infecteaz tractul respirator sunt elimintate n aerul expirat prin pin picturi. n cazul infeciilor generalizate, nu doar organul int este implicat n excreia virusului, ci i replicarea la poarta de intrare contribuie la eliminare. Din moment ce replicarea apare naintea simptomelor, persoana infectat devine contagioas nainte de a fi bolnav propriu-zis. Mecanismele de aprare Mecanismele de aprare ale organismului mpotriva infeciilor virale pot fi clasificate n dou categorii. Mecanismele de aprare nespecifice sunt cele mai importante i sunt reprezentate n primul rnd de interferoni. n afara efectelor asupra creterii celulare, rspunsului imun i imunoreglrii, aceste substane pot construi o barier antiviral pentru o scurt perioad de timp. Interferonii nu afecteaz direct virusurile, ci induc un mecanism de rezisten celular care interfereaz cu etapele replicrii virusului. Mecanismele specifice includ imunitatea mediat umoral i imunitatea mediat celular. Rspunsul imun nespecific. Este activat odat cu ptrunderea virusului n organism. Unul dintre cele mai importante procese este fagocitoza. Granulocitele i celulele Natural Killer sunt principalele fagocite. Modificarea pH-ului sau febra pot bloca unele etape ale replicrii virusurilor. Interferonii sunt substane de natur proteic produse de sistemul imunitar. Datorit ingineriei genetice, acetia pot fi produin n cantiti mari. Principalele efecte biologice ale acestora sunt antivirale i antimitotice. O serie de substane pot induce producerea interferonilor (ARN dublu catenar, nucleotide naturale sau artificiale, bacteriile, diferii compui cu mas molecular mic i virusuri). Toate aceste substane determin activarea genelor codificatoare de interferoni. Acetia inhib replicarea viral. Rspunsul imun specific. Include att mecanisme mediate umoral (producerea de anticorpi), ct i mecanisme mediate celular (limfocite T Helper i citotoxice). n general, parazitarea gazdei de ctre virusuri determin exprimarea la nivelul membranei celulare a antigenelor virale. Aceasta induce un rspuns imun mediat celular. Imunitatea mediat umoral. Anticorpii atac doar virusurile aflate extracelular, astfel odat stabilit infecia ntr-un organ, aprarea organismului nu mai ine de anticorpi. Imunitatea mediat umoral este capabil s previn generalizarea infeciei doar dac anticorpii sunt prezeni din primele stadii ale bolii (indui prin vaccinare). IgG i IgM sunt activi n snge, n timp ce IgA sunt activi la 45 | P a g e

nivelul mucoaselor. Efectul de neutralizare a antigenelor este maxim cnd anticorpii reacioneaz cu situsurile de legare pentru receptori ale virusurilor, mpiedicnd astfel adsorbia acestora. Imunitatea mediat celular. Acest tip de imunitate este pe de parte cel mai eficient cnd vine vorba de infecii virale. Limfocitele T recunosc celule infectate cu virusuri i le distrug. Observaiile precum c pacienii cu deficiene ale imunitii umoral rezist mai bine infeciilor virale dect cei cu deficiene ale imunitii mediate celular, subliniaz importana limfocitelor T. Prevenire. Cele mai importante msuri profilactice n faa potenialelor infecii virale sunt vaccinrile active. Vaccinurile ce conin virusuri inactivate sunt mai puin eficiente dect cele care conin virusuri atenuate. Imunizarea pasiv cu imunoglobuline este utilizat doar n cazul postexpunerii, ca msur profilactic. 1. Imunizarea activ. Antigenul (virusul) este introdus n corp, fie inactivat, fie atenuat dar capabil de replicare, pentru a stimula sistemul imunitar. Vaccinurile inactivate. Imunitatea dobndit n urma administrrii de virus inactivat este n principal umoral i nu este de durat. Din acest motiv trebuie repetat vaccinarea. Cele mai importante astfel de vaccinuri sunt antigripal, antirabic, antihepatitei A i B. Unele vaccinuri inactivate conin cele mai importante antigene ale virusului respectiv. Acestea induc o imunizare mai eficient i sunt mai bine tolerate. Vaccinuri atenuate. Aceste vaccinuri confer o imunizare de durat i mai eficient doar dup o singur doz, deoarece virusurile coninute sunt capabile s se replice n organismul gazd, inducnd i un rspunsul celular. Aceste vaccinuri sunt preferabile cnd sunt disponibile. n cazul acestora, exist totui riscuri, n ceea ce privete stabilitatea lor, potenialul crescut de contaminare cu alte virusuri, ce duce la apariia de noi tulpini virulente. Vaccinuri cu virusuri recombinante. Din moment ce este nevoie de un numr mic de proteine antigenice pentru a induce imunizarea, se pot utiliza vectori virali pentru obinerea de vaccinuri. Vectorul viral cel mai potrivit este o tulpin cel mai puin virulent. Pentru vector nu trebuie s existe imunizare anterioar. Virusul utilizat ca vector va integra genele codificatoare de antigene de la virusul virulent i va exprima proteinele imunogene. Astfel de virusuri nu s-au aprobat nc pentru a fi folosite pe om. Vaccinul antirabic utilizat pentru imunizarea animalelor este unica aplicaie practic de acest tip. Vaccinuri ADN. Din moment ce ADN-ul simplu poate fi inserat n celulele eucariote i informaia respectiv s poat fi exprimat, ADN-ul ce codific proteinele virale poate fi utilizat ca surs de vaccin. Avantajul acestor vaccinuri, atualmente n stadiu de testare, include uurina producerii i stabilitatea ridicat.

46 | P a g e

Figura 5.7. Schema obinerii de vaccinuri cu virusuri recombinante

2. Imunizarea pasiv. Acest tip de imunizare implic introducerea de anticorpi utiliznd doar imunoglobuline umane. Protecia conferit de acestea este de scurt durat i este eficient doar n cazul viremiilor. Imunizarea pasiv este administrat de obicei ca msur profilactic postexpunere (dup o infecie sau o situaie ce implic riscul infectrii). Chemoterapie. Substanele care pot inhiba diferitele etape ale replicrii pot fi utilizate ca ageni chemoterapeutici. n termeni practici, este mai important inhibarea sintezei acizilor nucleici dect a proteinelor virale. Principalele obstacole implicate sunt nivelul sczut de specificitate ai agenilor (efectele toxice datorit afectrii metabolismului) i necesitatea nceperii tratamentului foarte devreme n ciclul infecios. Problemele ntmpinate n utilizarea chemoterapeuticelor. Replicarea viral este complet integrat n metabolismul gazdei. Virusul suplinete doar informaia genrtic. Aceast asociere strns ntre virus i gazd este principala surs a dificultilor ntmpinate. Orice interferen cu sinteza viral poate afecta i funcionarea celulei. Intervenia specific este posibil doar n cazul virusurilor carei codific propriile enzime ce vor reaciona asupra substratului viral. O alt problem este necesitatea administrrii terapeuticelor foarte devreme, naintea apariiei simptomelor. Diagnosticul de laborator. Urmtoarele metode pot fi utilizate pentru obinerea unui diagnostic de laborator: A. Izolarea virusului prin cultivarea ntr-o gazd compatibil. De obicei se folosesc culturi celulare, mai rar animale de laborator sau ou embrionate. B. Detectarea direct a virusului. Metodele seroogice, de biologie molecular i microscopie electronic sunt utilizate pentru identificarea virusurilor sau componentelor virale n mod direct. 47 | P a g e

C. Serodignosticul implic punerea n eviden a anticorpilor IgG i IgM n serul pacienilor. Indicaii i metode. Procedurile ce implic diagnosticul de laborator pentru detectare virusurilor sunt foarte scumpe i necesit un timp destul de mare. De aceea, este important de cntrit dac este neaparat nevoie de confirmarea laboratorului n punerea diagnosticului. Medicul care urmeaz s pun diagnosticul trebuie s ia n considerare toate aspectele posibile. Diagnosticul de laborator este justificat doar dac tratamentul pacientului ar fi influeneat de diagnosticul precis sau informaiile sunt necesare ntr-un studiu epidemic. A. Izolarea virusului prin cultivare Culturile celulare primare pot fi obinute utiliznd diverse esuturi proapete. Totui, aceste celule se pot divide doar de un numr limitat de ori. De aceea s-au pus la punct tehnici de obinere a unor celule hibride care se multiplica la infinit. Pentru scopuri dignostice, celulele sunt cultivate ntr-un singur strat numit film celular ce ader la o suprafa de sticl sau plastic. Replicarea virusurilor n culturi celulare determin modificri morfologice ale celulelor, aa-numitul efect citopatic. Aceste modificri sunt adesea suficiente pentru diagnostic. Probele trebuie s fie recoltate n funcie de specia viral presupus i ct mai devreme posibil. De asemenea, condiiile de recoltare trebuie s fie ct mai sterile. Transporul probelor trebuie fcut rapid i n cutii frigorifice, deoarece virusul nu rezist pre mult n afara celulei gazd. Laboratorului trebuie s-i fie oferite ct mai multe informaii privind cursul i stadiul bolii. Datele clinice i un presupus diagnostic pot ghida laboratorul spre identificarea unui anumit virus. Cutarea oricrui tip de virus potenial prezent n prob nu este fezabil din motive financiare i de eficien. Procesarea materialului de ctre laborator. nainte ca celulele gazd s fie inoculate, materialul din probe trebuie s fie supus unor tehnici de ndeprtare a posibilelor bacterii (antibiotice, centrifugare, uneori filtrare). Toate aceste tehnici cresc riscul pierderii materialului viral, din acest motiv sterilizarea nu trebuie s fie prea riguroas. Identificarea virusului este bazat n primul rnd pe modificarea celulelor gazd, apoi se realizeaz examene serologice utiliznd anticorpi cunoscui i microscopie imunoelectronic. B. Detectarea direct a virusurilor Prin aceast metod se identific de obicei particule virale i nu virusul complet. Scopul este identificarea direct a virusurilor n materialul recoltat de la pacient fr cultivare anterioar. Virusurile prezente n fluidele seroaselor, cum ar fi virusul herpetic sau al varicelei pot fi detectate la microscopul electronic. Antigenele virale pot fi identificate n secreii prin reacia imunologic enzimatic, aglutinare pasiv sau cu anticorpi imunofluoreceni. Genomul viral poate fi identificat prin hibridizare utiliznd ADN sau ARN complementar cu cel viral. 48 | P a g e

Detectarea virusului prin amplificare biochimic reacia n lan a polimerazei (PCR). Aceast metod este una dintre cele mai sensibile. n primul rnd este extras acidul nucleic de la pacient. Orice genom riboviral este transcris n ADN de ctre revers-transcriptaz. Acest ADN, precum i cel extras de la dezoxiribovirusuri este replicat in vitro cu ajutorul unei polimeraze. Se introduce n proba supus polimerizrii ADN-ul de la pacient, ADN-polimeraz termorezistent, primeri (secvene oligonucleotidice complementare cu ADN-ul ce urmeaz a fi replicat) i nucleotide. Prin nclzirea probei la 95 C ADN-ul se denatureaz (se rup legturile de H). Se coboar temperatura treptat pn la 75 C, moment n care ADN-polimeraza adaug primerii complementari i n continuare nucleotide, realiznd replicarea ADN-ului. Ciclul acesta de nclziri i rciri repetate duce la obinerea unei cantiti de ADN de cteva mii de ori mai mare dect iniial. ADN-ul astfel obinut este supus hibridizrii. C. Serodignosticul. Dac o infecie viral induce un rspuns mediat umoral, anticorpii rezultai pot fi utilizai n serodiagnostic. Interpretarea datelor serologice se confrunt cu problema deciderii dac anticorpii sunt produi recent sau mai demult. 2 criterii pot ajuta n acest sens: detectarea IgM (fr IgG) demonstreaz prezena unei infecii primare. Testul pentru detectarea IgM se face la nceputul bolii. Identificarea mai trziu att a IgG, ct i a IgM confirm infecia primar. O cretere de 4 ori a titrului anticorpilor IgG n 10-14 zile de la debutul infeciei sau o scdere identic mai trziu reprezint, de asemenea, o confirmare.

49 | P a g e

Figura 5.8 Reacia de polimerizare n lan

50 | P a g e

Curs 6 Virusologie partea special

1. Virusurile hepatitice Hepatita A

Hepatita A este o infecie a ficatului cauzat de un virus de tip ARN care este transmis prin ingerarea alimentelor i a apei contaminate. Spre deosebire de virusurile hepatice B i C, hepatita A nu determin o infecie cronic asupra ficatului. Acesta este primul virus hepatic descoperit i este cunoscut ca fiind cea mai frecvent cauz de inflamaie hepatic.
Perioada de incuba ie

Virusul hepatic A are o perioada de incubaie ce variaz ntre 15 i 45 de zile (n medie 25 de zile). Prima faz, simultan cu debutul acestei afeciuni hepatice, este caracterizat de simptome nespecifice precum oboseal, stare de slbiciune, anorexie, grea, vrsturi, durere abdominal i, mai rar, febr urmat de dureri de cap, erupii cutanate si diaree. Dup 12 sptmni de la debutul bolii hepatice, se poate instala i icterul. n cele dou sptmni ce preced apariia icterului, gradul de contagiune este cel mai ridicat, ntruct concentraia de virusuri este maxim (aceasta scade dup instalarea icterului). Copiii pot rspndi virusul hepatic A perioade mai lungi de timp dect adulii, cei mici fiind contagioi pn la 10 sptmni dup debutul clinic al hepatitei A.
Simptome

Prezena simptomelor n infecia cu virus hepatic A depinde de vrsta pacienilor. n cazul copiilor sub 6 ani, 70% dintre infecii sunt asimptomatice; n mod normal, icterul nu asociaz boala. Acest procent nu se menine n cazul copiilor de peste 6 ani, n cazul crora infecia de obicei este asociat cu simptome, icterul instalndu-se la peste 70% din pacieni. n cele mai multe cazuri, simptomele dureaz mai puin de 2 luni, dar exist un procent de 10% - 15% dintre persoanele infectate cu virusul hepatic A care a experimentat o boal prelungit i recidivant, dar care nu a depit totui 6 luni. Virusul devine inactiv la temperaturi mai mari de 85C, ns n condiii normale de mediu, virusul hepatic A poate supravieui n afara corpului uman i cteva luni. Dac cineva a fost infectat cu virusul hepatic A n trecut, nu se mai poate infecta nc o dat i nici nu l poate transmite altora. Odat ce organismul se vindec de hepatita A, dezvolt anticorpi care l pot proteja de viitoare infecii cu acelai virus hepatic.
51 | P a g e

Transmitere hepatitei A Virusul hepatic A poate fi gsit n materiile fecale ale unei persoane infectate cu acest virus. Este trasmis prin contactul cu aceste materii fecale infectate i din acestea poate trece cu uurin n mancare i ap, i prin ingerare, n organismul uman. Cele mai frecvente ci de transmitere a hepatitei A sunt: ingerarea alimentelor i a apei ce au intrat n contact cu materii fecale infectate; omiterea splrii minilor dup utilizarea toaletei; utilizarea instrumentelor de mncat/but folosite n prealabil de o persoan infectat; sexul neprotejat (de orice form inclusiv oral i anal) Exist cteva grupuri care prezint un risc ridicat de a contacta hepatita A: copii care triesc n comuniti precum cree, grdinite etc.; aduli care triesc n condiii aglomerate i nesanitare; vizitatori ai rilor cu prevalen ridicat de hepatita A; persoanele active sexual; i, de asemenea, exist situaii care favorizeaz trasmiterea virusului hepatic A: dezastrele naturale precum inundaii, cutremure etc. cnd apa potabil poate fi cu uurin contaminat cu virusul hepatic A. Tratament Nu exist tratament specific pentru hepatita A. Totui, tratamentul recomandat cel mai frecvent este odihna n pat. Este de asemenea dezirabil s se bea multe lichide, n special dac apar diaree i vrsturi. O alt msur ce trebuie luat este evitarea alcoolului. Dei nu exist tratament medical dup debutul hepatitei A, exist posibilitatea de a diminua unele simptome (precum durerea i greaa) prin utilizarea unor medicamente prescrise de un medic. Prevenirea infeciei cu virusul hepatic A Cea mai bun metod de aprare mpotriva hepatitei A este vaccinarea. Peste 99% dintre persoanele vaccinate dezvolt imunitate mpotriva acestui virus hepatic, prin urmare, chiar dac vor fi intra n contact cu acesta, nu vor fi infectai. O alta metod de a preveni infectarea cu virusul hepatic A este injectarea cu imuno-globulin (denumita si gamma-globulina). Protecia oferit de aceast injectie nu este permanent, ci este valabil doar pentru o scurt perioad de timp. Imuno-globulina este un preparat care conine un nivel ridicat de anticorpi ai virusului hepatic A i se administreaz de regul persoanelor expuse la virus. Pentru efect maxim, ar trebui administrat n termen de maxim dou sptmni de la expunere, dar este eficient i dac este administrat ntre 2 si 6 sptmni de la posibila expunere la virusul hepatic A. A treia metod de prevenire a mbolnvirii datorate hepatitei A este mai puin eficient dect primele dou i se refer la o igiena personal
52 | P a g e

riguroas i un stil de via sntos. Cteva msuri n aceast direcie trebuie adoptate: splarea minilor cu ap i spun dup fiecare utilizare a bii, nainte i dup prepararea i mncarea alimentelor sau dup schimbarea scutecelor; evitarea mncrurilor insuficient gtite (fierte, coapte, prjite); protejarea n timpul contactelor sexuale (de orice tip).

Hepatita B

Virsul hepatitc B

Figura 6.1 Structura antigenic a virusului hepatitei B Hepatita B este o infecie a ficatului cauzat de un virus de tip ADN care este transmis prin snge sau derivai ai sngelui contaminat n timpul transfuziilor, prin contact sexual cu o persoan infectat, prin utilizarea unor ace sau instrumente similare contaminate. Spre deosebire de virusul hepatic A, virusul B poate cauza att o forma acut de hepatit, ct i una cronic. Hepatita B este cea mai frecvent afeciune cronic din lume. Hepatita B o scurt istorie
53 | P a g e

Dei hepatita este cunoscut de secole, nimeni nu a tiut care e cauza pn n anii 40, cand doctorii au nceput s suspecteze c responsabil pentru aceast afeciune hepatic era un virus transportat prin sngele uman. Primul pas n descoperirea virusului hepatic B a fost fcut n 1963 cnd Dr. Baruch Blumberg i colegii si au identificat o protein (antigenul Australia) care a avut o reacie neobinuit la anticorpii pacienilor care fuseser supui la transfuzii de snge. Asocierea antigenului i infecia hepatic a fost facut 3 ani mai trziu, iar speciali tii au neles c pentru a reduce riscul infeciei cu hepatita B trebuie s testeze sngele nainte de transfuzii. Hepatita B perioada de incuba ie Virusul hepatic B are o perioad de incubaie cuprins ntre 45 i 160 de zile (n medie 100 de zile). De obicei, simptomele apar la 30-180 de zile de la expunerea la virusul hepatic B, dar trebuie spus ca jumtate dintre persoanele infectate cu acest virus nu vor prezenta nici un semn de infecie. Faza acut a hepatitei B genereaz un set de simptome, acest fapt nsa nu este valabil n cazul infeciei cronice, care, cel mai frecvent, este asimptomatic. Persoanele care sufer de hepatita acut B pot experimenta simptome de grip accentuate de grea, anorexie, indispoziie fizic i oboseal, durere n zona ficatului i icter. Simptomele hepatitei acute dureaz, n medie, ntre 1-3 luni. n aceast perioad, persoana infectat este foarte contagioas. Virusul nu este foarte rezistent n mediul normal se consider ca apa fierbinte, utilizat n ma ina de splat n mod normal, este capabil s omoare virusul de pe haine, i de asemenea detergentul de vase i apa cald i vor elimina pe cei de pe tacmuri. Hepatita B simptome n faza acut, hepatita B genereaz simptome de o severitate ce variaz de la una minim, asimptomatic pn la manifestri fatale. Statisticile sugereaz c peste o treime din persoanele infectate nu prezint simptome, la acetia infecia considerndu-se tcut. O alt treime a persoanelor infectate cu virusul hepatic B prezint simptome similare cu cele generate de o grip: slbiciune fizic, dureri, cefalee, febr, lipsa poftei de mncare, diaree, icter, grea i vrsturi. O a treia parte a persoanelor infectate vor prezenta simptome mai severe, care se vor manifesta perioade mai lungi de timp. Pe lng simptomele asemntoare celor provocate de grip, mai pot aprea dureri abdominale puternice i icter accentuat. Icterul apare ca i consecin a faptului a ficatul se afl n incapacitate de a elimina bilirubina (un pigment care, n parametri mai ridicai dect cei normali, cauzeaz nglbenirea pielii i a albului ochilor) din snge. Hepatita B transmitere Infecia cu hepatit B apare cnd snge infectat intr n organismul unei persoane neinfectate. Este de asemenea transmis prin sex neprotejat
54 | P a g e

(fr prezervativ) i, foarte frecvent, de la o mama infectat la copil n timpul naterii. Exista cteva grupuri care prezint un risc ridicat de a contacta hepatita B: persoane cu parteneri sexuali multipli sau diagnosticate cu boli cu transmitere sexual; copii nscui din mame infectate; personal al spitalelor sau pacieni internai pe perioade lungi n spitale; persoane care au contact prelungit cu persoane infectate (familii, prieteni); receptori ai transfuziilor de snge; utilizatori ai drogurilor injectate; persoane care lucreaz n sau sunt ncarcerate n nchisori; persoane ale cror snge ar fi putut intra n contact cu saliva unei persoane infectate cu virusul hepatic B; persoane care cltoresc n ri cu prevalen ridicat de hepatita B; pacieni dializai. Hepatita B tratament Evoluia natural a hepatitei cronice B este ctre ciroz hepatic i cancer, prin urmare, principalul scop al tratamentului este de a stopa aceast evoluie, eradicarea virusului fiind un el foarte dificil de obinut. Pe termen scurt, tratamentul se orienteaz ctre obinerea urmtoarelor: inhibiia replicrii virale; normalizarea valorilor transaminazelor; seroconversia AgHBe i apariia Ac anti HBe; ncetinirea/regresia fibrozei. n prezent, n Romania se folosesc n tratarea infeciei cu virus hepatic B: A) medicamente cu efect antiviral si imunomodulator: A.1. IFN (interferon) standard A.2. IFN (interferon) pegilat B) medicamente cu efect antiviral B.1. Lamivudina B.2 Adefovir B.3. Entecavir Hepatita B - prevenire Vaccinarea mpotriva hepatitei B este cea mai eficient metod mpotriva infectrii cu acest virus hepatic. Vaccinul este disponibil din 1982 i prentmpin infectarea cu virusul hepatic B i a celorlalte infecii asociate cu acesta. Persoanele care se vaccineaz sunt protejate att mpotriva formelor acute de hepatit B, ct i a consecinelor mai grave pe care forma cronic le poate genera: ciroza sau cancerul hepatic. Vaccinul mpotriva hepatitei B produce niveluri eficiente de anticorpi mpotriva virusului hepatic B la majoritatea adulilor, copiilor i nou-nscuilor. Schema de vaccinare cel mai frecvent utilizat este de 3 injecii intramusculare administrate astfel: prima doza, a doua doza la o luna de la cea precedent, i cea de a treia
55 | P a g e

doz la 6 luni de la prima. Vaccinul antihepatic este foarte bine tolerat de majoritatea persoanelor, inclusiv nou-nscui, copii i femei nsrcinate sau care alapteaz. Exist excepii foarte rare de alergii severe la unul din componentele vaccinului. Studiile recente indic faptul c memoria imunologic rmne intact pentru o perioad de cel puin 25 de ani i confer protecie mpotriva mbolnvirii cu virusul hepatitei B chiar dac numrul anticorpilor scade sub limita detectabil. Alte ci de prevenire: utilizarea corespunztoare a prezervativelor de fiecare dat cnd facei sex cu un partener instabil; administrarea imunoglobulinei antihepatit B (HBIG) nou-nscuilor din mame infectate i vaccinarea acestora la 12 ore dup natere; evitarea drogurilor injectate (a acelor sau a seringilor folosite); evitarea utilizrii de ctre mai multe persoane are unor intrumente care ar putea avea snge pe ele: aparate de ras, periue de dinti etc.; evitarea efecturii de tatuaje sau piercinguri n locaii dubioase, care nu prezint ncredere.

Hepatita C
Hepatita C este o afeciune a ficatului cauzat de un virus de tip ARN ce este transmis n principal prin snge n timpul transfuziilor, al utilizrii drogurilor injectate i uneori prin contact sexual neprotejat. Exist 6 genotipuri ale virusului hepatic C identificate pn n prezent, cel mai frecvent fiind genotipul 1. Virusul hepatic C poate cauza att forma acut, ct i pe cea cronic a hepatitei, i este cea mai frecvent form de hepatit dupa cele A i B. Spre deosebire de virusul hepatic B, virusul C produce afeciune cronic ntr-un procent mult mai mare: 80% dintre adulii infectai cu virusul hepatic C vor produce o afeciune cronic (comparativ cu doar 5-10% dintre cei infectai cu virusul B). Forma acut a hepatitei C se refer la primele 6 luni de la infectarea cu VHC. Interesant este c mai puin de o treime dintre pacietii infectai experimenteaz simptome nespecifice precum inapeten, oboseal, durere abdominal, icter i simptome pseudo-gripale, simptome care rareori conduc la o diagnosticare corect cu hepatit C. Persistena VHC pe o perioad mai lung de 6 luni, implic o afeciune hepatic cronic. Ca i faza acut, faza cronica este de asemenea asimptomatic, boala fiind de cele mai multe ori descoperit accidental. Statisticile relev faptul c peste 80% dintre persoanele infectate cu virus hepatic C vor dezvolta hepatita cronic. Dintre ace tia, dac afeciunea rmne netratat, aproximativ o treime vor dezvolta ciroza hepatic n mai puin de 20 de ani de la infectare, o alt treime vor progresa ctre ciroz n aproximativ 30 de ani de la infectarea cu virusul hepatic C, i la o ultim treime progresia spre ciroz este att de lent, nct este puin probabil s dezvolte aceast afeciune n timpul vieii.
56 | P a g e

Hepatita C o scurt istorie Dei virusul hepatic C a rmas neidentificat pn n 1988, existena lui a fost remarcat nc din 1974 cnd un grup de cercettori a demonstrat c cele mai frecvente hepatite ce aprea dup transfuzii era cauzate de un non A non B virus hepatic (NANBH). n ciuda eforturilor susinute, virusul nu a putut fi identificat timp de peste un deceniu, primul articol despre virusul hepatic C aprnd n 1989. Hepatita C - perioada de incubaie i de contagiune Virusul hepatic C are o perioad de incubaie ce variaz ntre 14 i 180 de zile (medie 45 de zile). Majoritatea persoanelor infectate cu virusul hepatic C nu manifest nici un fel de simptome, iar puinii care totui prezint simptome, sunt rareori diagnosticai cu hepatita C. Acest fapt se intampla din cauz c simptomele ce apar anorexie, oboseal, durere abdominal, icter, iritaii cutanate, manifestri pseudo-gripale sunt de obicei asociate cu alte afeciuni. Persoanele care sufer de hepatit C cronic prezint un risc mai ridicat de evoluie ctre ciroz i cancer hepatic. Hepatita C simptome Ca i hepatita B, infecia hepatic cu virus C nu prezint de obicei simptome specifice. Foarte puini pacieni manifest simptome pseudogripale asociate cu pierderea n greutate, oboseal, dureri musculare, iritabilitate, grea, anorexie i icter n faza activ a hepatitei C (aceasta apare ntre 2-26 sptmni de la infectare). Simptomatologia specific (ce apare n hepatita C cronic) presupune: Hepatomegalie Splenomegalie Stelue vasculare Ginecomastie Hepatita C transmitere Hepatita C apare atunci cnd snge infectat cu virusul hepatic C intr n organismul unei persoane sntoase. De asemenea, poate aprea ca urmare a contactelor sexuale neprotejate (fr o barier din latex), i de asemenea, mai rar, de la mama infectat ctre copil n timpul naterii. Exist cteva grupuri care prezint un risc ridicat de a contacta hepatita C: persoane care au suferit transfuzii de snge sau transplanturi de organe; persoane afectate de hemofilie (peste 60% din cazuri); utilizatori ai drogurilor injectate; personal al spitalelor; copii nscui din mame infectate cu virusul hepatic C; familii ale persoanelor infectate; persoane cu parteneri sexuali multipli; adepi ai tatuajelor i a piercingurilor numeroase.
57 | P a g e

Hepatita C tratament Tratamentul afeciunii hepatice C are ca scop primar vindecarea adic eradicarea complet a viruslui, i implicit, creterea calitii vieii. Obiectivul secundar este de a opri evoluia ctre ciroz i cancer hepatic, acolo unde vindecarea nu este posibil. Tratamentul cuprinde trei aspecte: regimul sunt recomandate evitarea alcoolului i curele cu vitamina E; vaccinarea mpotriva virusului hepatic A, a virusului hepatic B i, anual, mpotriva gripei, ntruct suprainfecia cu acestea pot cauza complicaii fatale; medicaia antiviral: interferon ribavirina prescris numai mpreun cu interferon Hepatita C prevenire Nu exist vaccin mpotriva virusului hepatic C. De vreme ce acest virus hepatic este rspndit n special prin snge, singura metoda de a preveni mbolnvirea este aplicarea unor msuri riguroase de igien personala i de sntate, n general: evitarea drogurilor injectabile, a acelor sau a seringilor folosite; evitarea utilizrii de ctre mai multe persoane are unor intrumente care ar putea avea snge infectat cu virusul hepatic C pe ele: aparate de ras, periue de dini etc.; evitarea efecturii de tatuaje sau piercinguri n locaii dubioase, care nu prezint ncredere; utilizarea corect a prezervativelor de cte ori se face sex cu un partener instabil;

Hepatita D
Hepatita D este o infecie acut sau cronic a ficatului cauzat de un virus de tip ARN, ce poate aprea fie simultan cu infecia cu virus hepatic B (coinfecie), fie ulterior acesteia (suprainfecie), fiind o form mai agresiv dect celelalte forme de hepatit. Ca i hepatita B, virusul hepatic D poate cauza att forma acut a bolii, ct i una cronic. Ce este specific acestui virus hepatic delta este incapacitatea acestuia de a cauza o infecie singur, probabil datorit faptului c este o mic i incomplet particul viral. Pentru a se dezvolta, virusul hepatic D are nevoie de acoperirea i protecia virusului hepatic B. Se consider hepatita cronic cu virus D atunci cnd acesta persist mai mult de 6 luni dup infectare n snge. n cazul coinfeciilor (cnd virusurile hepatice B i D apar n acelai timp), majoritatea pacienilor au capacitatea de a se recupera n totalitate, deoarece coinfecia cauzeaz o form acut a hepatitei care poate fi diagnosticat. Doar ntre 2-5% dintre adulii infectai dezvolt hepatit cronic.
58 | P a g e

Situaia este mai dramatic n cazul suprainfeciilor (virusul hepatic D apare dup ce virusul hepatic B a afectat deja organismul). n acest caz, ntre 50-70% dintre persoanele infectate dezvolt hepatita fulminant, n care VHD se reproduce uor, fiind n prezena unui mediu favorabil format dintrun numr ridicat de virusurile hepatici B. Aproape toate suprainfeciile cauzeaz hepatita cronic. Hepatita D scurta istorie Virusul hepatic D (de asemenea numit virusul delta) a fost descoperit n 1978 de ctre gastroenterologul italian Mario Rizzetto i de ctre expertul n virusologie molecular John Gerin de la Universitatea Georgetown din SUA. Gastroenterologul a constat c o parte din pacienii infectai cu virusul hepatic B prezentau o alt form de agent infecios n ficatul lor. Cnd ambele virusuri erau prezeni, infecia acut era mai agresiv. De asemenea, pacienii cu ambele infecii dezvoltau mai frecvent hepatita cronic dect cei infectai doar cu virusul hepatic B. Hepatita D perioada de incubaie i de contagiune Virusul hepatic D are o perioad de incubaie ce variaz ntre 3-7 sptmni. n coinfecie, n general aceasta este perioada de incubaie, ns, n suprainfecii, aceasta se micoreaz la 3 sptmni, ntruct virusul D se replic mai uor n prezena unui mediu propice: virusurile B deja existente. Hepatita D - transmitere Virusul hepatic D este transmis n acelai mod ca i VHB adic prin contactul cu snge infectat, prin sex neprotejat (fr prezervativ) i foarte frecvent de la mam la copilul nou-nscut. Exista cteva grupuri care prezint un risc ridicat de a contacta hepatita D: Persoanele infectate cu virusul hepatic B; Persoane cu parteneri sexuali multipli sau diagnosticate cu boli cu transmitere sexual; Copii nscui din mame infectate; Personal al spitalelor sau pacieni internai pe perioade lungi n spitale; Persoane care au contact prelungit cu persoane infectate (familii, prieteni); Receptori ai transfuziilor de snge; Utilizatori ai drogurilor injectate; Persoane ale cror snge ar fi putut intra n contact cu saliva unei persoane infectate cu virusurile hepatice B+D; Persoane care cltoresc n ri cu prevalen ridicat de hepatita B+D; Homosexuali (brbai); Persoane al cror snge ar putea intra n contact cu saliva persoanelor infectate cu virusurile hepatice B+D. Hepatita D tratament
59 | P a g e

n cazul infeciei acute cu virusul hepatic D, tratamentul este similar celorlalte forme de infecii hepatice virale: odihna, dieta echilibrat i evitarea alcoolului. n cazul tratrii hepatitei cronice cu virus D, lucrurile sunt mai complicate. Dei pn acum au fost ncercate tratamente cu alfa-interferon, lamivudin, ageni imunosupresivi, nici unul nu s-a dovedit eficient n tratarea infeciei cronice cu virusul hepatic D. Transplantul hepatic este o opiune n cazul unui ficat distrus n mare parte sau nefuncional. Dar chiar dac procedura are succes, exist o mare ans ca afeciunea s reapar, caz n care, ciroza poate aprea i evolua mult mai rapid. n Romnia, tratamentul aprobat pentru hepatita cronic B+D se bazeaz pe interferonul standard. Doza este stabilit n funcie de virusul care se replic. n cazul n care virusul hepatic D este cel activ, doza este de 9-10 MU x 3/ sptmn, timp de un an. Hepatita D prevenire Cea mai bun metod de a preveni infectarea cu virusul hepatic D este vaccinarea mpotriva virusului hepatic B, ntruct VHD nu se poate dezvolta dect n prezena VHB. Prin urmare, vaccinul care este disponibil nc din 1982, prentmpin infectarea cu ambele virusuri. Din nefericire, pentru persoanele deja infectate cu virusul hepatic B, nu exist vaccin care s mpiedice suprainfectarea cu virusul hepatic D. Alte maniere de prevenire: utilizarea corect a prezervativelor de fiecare dat cnd avem contacte sexuale cu parteneri instabili; administrarea imunoglobulinei antihepatita B (HBIG) nou-nscuilor din mame infectate i vaccinarea acestora la 12 ore dup natere; evitarea drogurilor injectate (a acelor sau a seringilor folosite); evitarea utilizrii de ctre mai multe persoane ale unor intrumente care ar putea avea snge pe ele: aparate de ras, periue de dini etc.; evitarea efecturii de tatuaje sau piercinguri n locaii dubioase, care nu prezint ncredere.
2.

Sindromul imunodeficien ei acute dobndite (SIDA)

SIDA este o boal produs de virusul HIV (virusul imunodeficienei umane). Acest virus face parte din familia Retroviridae. Virusul HIV este un retrovirus, iar denumirea de retrovirus deriv de la faptul c, aceste virusuri cu ARN au o enzima - reverstranscriptaza (transcriptaza invers) capabil s transcrie (transforme) ARN-ul n ADN. Sindromul imunodeficienei dobndite este, pentru om, o boal emergent: primul caz a fost indentificat n 1981, iar HIV este un virus nou aprut n Africa la sfritul anilor 1970, izolat i identificat n 1983 n Frana i n 1984 n SUA. Deci, etiologia bolii a fost stabilit de francezul Luc Montagner(1983) i americanul Robert Gallo (1984).
60 | P a g e

Virusurile imunodeficienei umane sunt HIV-1 si HIV-2.

Figura 6.2 Virusul imunodeficienei dobndite Structura virusului HIV Particula viral a virusului are forma unei sfere (diametrul 100-120 nm) cu un miez sub forma unui trunchi de con. Are simetrie icosaedrica i anvelopa cu 72 de spiculi externi mciucai formai din proteine majore ale nveliului viral : gp 120 i gp.transmembranara 41. Deci la exterior se afl un nveli alctuit dintr-o membran dublu lipidic i glicoproteic. La interior se gse te un corpuscul central alctuit din ARN monocatenar asociat cu proteinele interne P7 i P9. Corpusculul central este nconjurat de o capsid cilindric compus din proteinele P24 i P18. Nucleoidul este alctuit din 2 segmente de ARN i mai multe uniti ale reverstranscriptazei, integrazei i proteazei. Proteina P18 se gsete n contact cu faa intern a nveliului extern, iar P24 nconjoar nucleoidul. Membrana proteic, aezat ntre anvelop i miez, este alctuit din proteina de membran (P17), dar conine i proteaza viral. Proteina intern P17 este asociat cu suprafaa intern a stratului bilipidic al anvelopei, servind la stabilizarea componentelor externe i interne ale miezului. Genomul virusului HIV reprezint minim 2 segmente cu ARN monocatenar, este format din circa 9200 nucleotide; rar informaia genetic este codificat de 3 gene. Replicarea virusului HIV
61 | P a g e

Infecia cu HIV poate fi iniiat att de virusul liber ct i de cel vehiculat cu celule infecioase. Monocitele macrofage si limfociteleT4 sunt primele celule int ale virusului HIV. Absorbia virusului HIV pe celula int se face la nivelul unor receptori specifici de pe suprafaa celulei. Ptrunderea virusului n celul se face prin unul din cele 2 procese cunoscute sub numele de endocitoz i fuziune. n timpul procesului de ptrundere n celul, nveli ul extern al virusului este ndeprtat. Dup decapsidare, ARN-ul monocatenar viral si enzimele virale sunt eliberate n citoplasm. ARN-ul viral este transcris cu ajutorul reverstranscriptazei n ADN monocatenar complementar, dup care, acesta din urma va fi convertit n ADN dublu catenar care ptrunde n nucleul celulei, unde se circularizeaz. Ulterior, ADN-ul dublu catenar circular se integreaz cu ajutorul integrazei, la ntmplare, n genomul celular ca provirus. Dup integrare, provirusul rmne n stare latent o perioad variabil de timp sau poate s se multiplice, aceasta depinznd de gradul activrii celulare. (Pentru replicare, ADN-ul viral integrat, folosete aparatul celular al gazdei, iar componentele virionului sunt asamblate n membrana celulei gazd; odat cu formarea anvelopei virale sunt nglobate i proteine ale celulei gazd, inclusiv antigene ale complexului major de histocompatibilitate (CMH). n maturarea virionului un rol important l are proteaza). La un moment dat, fr o cauz aparent, provirusul ADN este transcris la ARNm care migreaz n citoplasm, se leag la ribozomi, unde informa ia genetic este tradus n proteine capsidale ienzime. Bazele imunologice ale infec iei cu HIV Capacitatea virusului HIV de a infecta ide a distruge limfocitele duce la o perturbare total a interaciunilor dintre celulele sistemului imunitar, astfel reducerea limfocitelor T4 poate determina scderea capacitii organismului de a recunoate antigenele strine, se reduce capacitatea organismului de a produce limfocite, scade producia organismului n interferon, limfocitele B nu mai produc anticorpi. Toate acestea duc la contractarea de ctre bolnavul de SIDA a numeroaselor infecii produse de bacterii, fungi, parazii, care n mod normal nu afecteaz organismul cu un sistem imunitar normal. Deci, infecia cu HIV determin o afectare numeric i funcional a limfocitelor T4 care scad astfel reactivitatea imunologic a organismului. Diagnosticul de laborator Cea mai modern investigare este prin testul imunoenzimatic (ELISA) care detecteaz prezena anticorpilor fixai pe un antigen cu ajutorul unor reacii enzimatice. Profilaxia bolii Transmiterea virusului se poate realiza prin: transfuzie de snge ace de sering
62 | P a g e

contact sexual homo/heterosexual de la mam la copil Sngele, sperma, saliva, scaunele i urina pacienilor cu HIV sunt contaminate. Virusul HIV este puin rezistent n mediul inconjurator, el supravieuind un timp scurt n afara organismului. Sterilizarea prin caldur uscat sau umed, precum i diferite substante chimice inactiveaza virusul. Simptome sistemice: febr, pierderi n greutate 1. Centrale: dureri de cap, neuropatii 2. Faringite 3. Orale: usturime 4. Ganglionii limfatici: limfadenopatii 5. Esofag: usturime 6. Piele: iritaii 7. Muchi: mialgie 8. Ficat i splin: megalie 9. Stomac: grea, vrsturi Figura 6.3. Aspecte clinice ale SIDA Aspecte clinice ale bolii SIDA Sida prezint un polimorfism clinic foarte evident, boala evolueaz n 4 faze succesive: faza ini ial - apare sub forma unei boli acute cu durat scurt, similar gripei; urmeaz o perioad de laten de la cteva luni la civa ani (1-14, n medie 6). faza complexului de simptome nrudit cu SIDA n care apare febr de o durat de 3 luni, fr a putea fi definit cauza febrei, pierderi n greutate, diaree, oboseal, transpiraii nocturne, mrirea dimensiunilor ganglionilor limfatici. Aceast faz este considerat o faz premergtoare bolii denumit presida. Scderea raportului dintre limfocitele T4 i T8 indic tendina de agravare a bolii. faza clinic n care apar forme tipice de boal: manifestri pulmonare, digestive, infecii cu bacterii, fungi, protozoare care n mod normal nu sunt patogene. Toate aceste forme clinice duc spre o evoluie comun - stare canceroas manifestat prin apariia unor tulburri foarte grave. Forma pulmonar presupune dureri toracice, forma digestiv presupune tulburri digestive produse de microorganisme care n mod normal nu sunt patogene. Forma neurologic presupune meningite, complicaii cerebrale, tumori. Forma general presupune infecii cu localizare n ficat i mduva osoas.

63 | P a g e

faza final - bolnavii slbesc foarte mult ise instaleaz un sidrom de epuizare total, stare de nelinite, tulburri psihice grave i n final moartea.

3. Virusul poliomielitei
Poliomelita este o neuroinfecie sever cauzat de virusul polio care aparine familiei picornaviridae i care poate duce la sechele neurologice grave (paralizii, convulsii). Frecvena manifestrilor severe este de 1 caz de paralizie la 200 de infecii subclinice. E cauzat de trei tipuri de poliovirusuri. Virusul polio a fost primul virus uman descoperit, n 1909. Virusul poliomielitei infecteaz celulele umane prin legarea de un receptor CD155 (numit i receptorul poliovirusului). Interaciunea dintre virus i receptor modific conformaional virusul, ceea ce permite ptrunderea lui n celule. Poliovirusul este un ribovirus cu polaritate +. Astfel genomul poate fi utilizat direct ca ARNm, realizndu-se sinteza proteinelor. Se cunosc 3 serotipuri ale poliovirusului (PV1, PV2, PV3), n funcie de proteinele capsidale. Acestea definesc tipul de receptor de care se leag virusul. PV1 este cea mai ntlnit form, dei toate sunt la fel de infecioase. PV1 este rspndit cu precdere n India, Pakistan, Afganistan i Egipt. PV2 este considerat eradicat, ultimul caz a fost semnalat n octombrie 1999 n India. PV3 se gsete n Nigeria, Niger, Pakistan, India i Sudan. Patogenitate. Virusul ptrunde n organism pe cale oral prin mucoasa orofaringian i a tractului respirator superior. Aici, probabil n celulele sistemului reticuloendotelial, se produce prima multiplicare dup care prin intermediul secretiilor orale ptrunde n tubul digestiv. Din stomac, trece nealterat, nefiind afectat de aciditatea gastric, in intestinul subtire unde urmeaza o noua faz de multiplicare. Majoritatea cazurilor se opresc n aceast faz clinic inaparent. Cnd nsa bariera intestinal este depit se produce stadiul de viremie. In acest stadiu virusul poliomielitic poate fi neutralizat de anticorpii specifici circulani i evoluia bolii este jugulat sau dimpotriv virusul poate invada sistemul nervos central si apare boala clinic. Virusul poliomielitei traverseaz bariera hematomeningeal sau trece prin sinapsa mioneural i prin cilindroaxoni imduv iajunge la creier. n sistemul nervos central, virusul se multiplic n celulele nervoase, n special n neuronii motori pe care i distruge. n funcie de numrul neuronilor afectai i de localizarea acestora se produc pareze sau paralizii ce pot fi uneori urmate i de contracturi spastice.

64 | P a g e

Figura 6.4. Virusul poliomielitei PV1 Diagnosticul de laborator. Diagnosticul de certitudine se bazeaz pe izolarea i tipajul virusului poliomielitic la care se adaug testele serologice. Pentru izolarea virusului poliomielitic se iau probe din splturi nazofaringiene, din materii fecale, L.C.R. sau esut nervos (poriuni de mduva spinrii i din creier) recoltat la necropsie. n primele dou sptmni de boal virusul este gsit ntr-o mare proporie n aceste produse patologice. Fragmentele de esut nervos pot fi examinate i din punct de vedere histopatologic. nainte de a fi inoculate pe culturi de celule probele trebuie decontaminate de bacterii prin tratare cu antibiotice (penicilin + streptomicin). Virusul poliomielitic produce efecte citopatice caracteristice. Pentru ca virusul poliomielitic s fie identificat i tipizat se practic neutralizarea specific a acestor efecte citopatice cu seruri antipoliomielitice monospecifice de tip l, 2 i 3. Ca teste serologice se folosesc R.F.C. i testul de neutralizare. Pentru acestea este se recolteaz seruri-perechi, la nceputul bolii i dup 23 sptmni. Diagnosticul se consider pozitiv cnd titrul anticorpilor neutralizai sau fixatori de complement cresc de cel puin 4 ori de la o prob la alta. Epidemiologie. Poliomielita este rspndit pe ntreg globul. Rezervorul de virus este omul bolnav sau purttorii sntoi de virus. Agentul patogen se transmite pe cale focal-oral sau pe cale aerogena, prin contact direct interuman sau indirect prin intermediul alimentelor, apei si obiectelor contaminate, a mutelor etc. Imunitatea dobndit este solid i de lung durata.
65 | P a g e

Profilaxia bolii se face prin mijloace nespecifice ce se impun n cazul bolilor cu poart de intrare digestiv sau aerian, precum i prin mijloace specifice vaccinul poliomielitic trivalent inactivat prin formol, administrat parenteral sau vaccin cu virus viu atenuat administrabil pe cale oral. Transmiterea poliovirusului survine cel mai adesea prin traseul oralanal, datorit neglijrii splrii minilor sau consumului de ap i mncare contaminat. Persoanele infectate pot s continue excreii cu virui timp de cteva sptmni. Perioada de incubaie este de 7 -14 zile. Simptomele poliomelitei Majoritatea persoanelor (90-95%) nu au deloc simptome. Poliomelita prezint o evoluie uoara i scurt a bolii i are urmtoarele simptome: - febra (peste 39,5 C) - o stare general proast - lipsa poftei de mncare - constipaie - vom - dureri abdominale - dureri n gt. Tratamentul poliomielitei Poliomielita se poate preveni, dar nu exist vindecare pentru persoanele infectate. Prin tratament simptomele pot fi ameliorate, iar starea imbuntit. Se recomand: - odihna la pat pn cnd scade febra - dieta adecvat - exerciiu fizic minim - aplicarea de surse de cldura pentru durerile musculare. Prevenire - igiena (splarea minilor) - imunizare mpotriva virusului, prin vaccinare. Exist 2 versiuni ale vaccinului poliomielitic Poliovaccinul Inactivat (IPV) se administreaz acestuia nu cauzeaz poliomielita i poate fi sistemul imun slbit. Poliovaccinul Oral (OPV) se

care poate fi administrat. prin injecii. Administrarea folosit de indivizii care au administreaz pe cale oral.

66 | P a g e

Figura 6.5. Efectele lezrii motoneuronilor de ctre virusurile poliomielitei

Figura 6.6. Pacient afectat de poliomielit

4. VIRUSURILE GRIPALE
Gripa este o boal infecioas acut caracterizat clinic prin manifestri severe ale aparatului respirator printr-o contagiozitate mare cu producerea de valuri epidemice care periodic, la intervale de 20-40 ani, se extind pe ntreg globul sub form de pandemii. Gripa este produs de virusul gripal (Myxovirus influenzae) cu genomul constituit din ARN, fcnd parte din genul Influenza-virus, familia Orthomyoviridae. Virionul gripal are o form sferic, uneori filamentoas, cu diametrul de aproximativ 100 m. La suprafaa sa se gsesc mici proeminene filamentoase alctuite din glicoproteine care constituie hemaglutinina i respectiv neuraminidaza, ambele avnd un rol important n activitatea biologic a virusului (infectivitate, efecte toxice). Acestea sunt implantate ntr-un nveli lipidic al particulei virale care la rndul su este plasat pe o matrice proteic. n interiorul acesteia se afl
67 | P a g e

nucleocapsida constituit din nucleoprotein conectat la 8 fragmente de ARN. Antigenul nucleocapsidic confer virusului gripal specificitate de tip (A, B, C).

Figura 6.7. Virusul gripal Hemaglutinina asigur absorbia virusului pe hematii i pe celulele ciliate ale aparatului respirator. Aglutinarea se produce prin interaciunea dintre hemaglutinin i receptorii specifici de pe hematii. Fenomenul este mpiedicat de anticorpii specifici (principiul reactiei de inhibare a hemaglutinrii). Neuraminidaza este o enzim care permite eliberarea particulelor virale din celule, jucnd astfel un rol important n gradul de infeciozitate al tulpinii respective. Hemaglutinina i neuraminidaza sunt glicoproteine cu specificitate antigenic, ele conferind virusurilor gripale specificitate de subtip i de variant. Astzi sunt cunoscute 3 tipuri de virul gripal - A, B i C - care difer ntre ele prin structura nucleoproteinei interne i a antigenelor proteice de suprafa. In tipul de virus gripal A se pot ntlni 3 subtipuri de hemaglutinina (H1, H2, H3) i dou subtipuri de neuraminidaza (N1, N2), n diverse combinaii. Aceast complexitate a structurii antigenice poate explica apariia unor variaii antigenice majore la virusul gripal de tip A (recombinri genetice, mutaii etc.), care, surprinznd populaia fr o imunitate corespunztoare, a provocat marile pandemii cunoscute. Virusul gripal de tip B are o structur mai unitar. La aceasta nu apar dect variaii antigenice minore far implicaii epidemiologice importante. Virusul gripal tip C nu prezint variaii antigenice. Fiecare tulpin de virus gripal este codificat astfel: tipul antigenic de ribonucleoprotein (A, B,-C), ara sau localitatea n care a fost izolat; numrul de ordine al tulpinii, anul n care a fost izolat pentru prima dat i, n parantez, simbolurile structurii antigenice ale subtipului de hemaglutinin
68 | P a g e

i ale subtipului de neuraminidaz. De exemplu, marea pandemie de grip asiatic din 1957-1958 care a afectat 1/3 din populaia globului a fost provocat de tulpina de virus gripal Al/Singapore/l/57(H2N2). Virusul gripal poate fi conservat timp de cteva sptmni la 0-+4C. Puterea sa infecioas este distrus prin nclzire timp de cteva minute la 56C, prin radiaii cu U.V. sau tratament cu eter, formol, fenol. Hemaglutinina i antigenele fixatoare de complement sunt mai rezistente la agenii fizici i chimici dect particula viral. Patogenie. Virusul gripal ptrunde n organism prin intermediul aerosolilor i afecteaz mucoasa cilor respiratorii. Neuraminidaza scade vscozitatea stratului mucos expunnd astfel receptoroi de la suprafata celulelor la patrunderea virusului gripal care produce leziuni distructive urmate de descuamarea celulelor ciliate, infiltrate cu celule mononucleare i edem submucos. Cnd procesul afecteaz i parenchimul pulmonar, apar leziuni de tip interstiial. Starea toxic general (febr, astenie, dureri musculare) nsoete de regula sindromul gripal dar viremia apare in cazul cand organismul este complet lipsit de aprare. Decesele si cazurile grave se intlnesc n special la copiii cu afeciuni pulmonare sau cardiovasculare cronice. Unele animale de laborator (dihor, oarece) sunt sensibile la infecia gripal dar, in practic, cultivarea virusului se face pe oul de gin embrionat prin inoculare n cavitatea amniotic. Diagnostic de laborator Diagnosticul clinic de grip nu poate fi realizat n afara perioadelor epidemice, deoarece numeroase alte infecii acute respiratorii se manifest n mod asemntor. Certitudinea unui diagnostic corect este dat de laborator prin izolarea i identificarea virusului gripal din spltur nazal, secreii nazale sau faringiene, sput. Titrurile de virus n aceste produse patologice sunt cu att mai nalte cu ct sunt recoltate mai aproape de debutul bolii (1-3 zile). Identificarea specific a virusului gripal poate fi determinat cu antiseruri specifice prin testul de hemaglutinoinhibare. Diagnosticul rapid al infeciei gripale se poate face prin detectarea virusurilor cu ajutorul testului de imunofluorescen n celulele epiteliale ale tractului respirator sau prin detectarea acestora n secreii prin testul ELISA sau prin determinarea fluorometric a neuraminidazei in aceste secreii. Diagnosticul serologic al infeciei gripale este de o importan primordiala pentru investigaiile epidemiologice sau pentru confirmarea etiologic a unui diagnostic clinic prezumtiv, n aceste situaii se observ o cretere semnificativ a anticorpilor antivirali (de cel puin 4 ori) n probele de ser recoltate la debutul bolii i n convalescen, dup 2-4 sptmni. n acest scop este util cercetarea curbei anticorpilor seroneutralizani, dar testul este greoi i scump. Mai ieftin i mai simplu este testul de hemaglutinoinhibare care are o sensibilitate aproape egal cu testul de neutralizare, mai ales dac serurile sunt n prealabil tratate pentru ndeprtarea inhibitorilor nespecifici ai hemaglutinrii virusurilor.
69 | P a g e

Epidemiologia gripei. Transmiterea gripei de la un om la altul se realizeaz direct prin picturi din secreia nazofaringian i, mai rar, indirect prin intermediul obiectelor proaspt contaminate cu secreii infectante. Contagiozitatea este mare, transmiterea agentului patogen facndu-se rapid, mai ales n colectiviti, n numai cateva sptmni gripa se poate propaga n numeroase ri i continente. Receptivitatea fa de grip este general putnd afecta toate grupele de vrst. Imunitatea n grip este specific pentru tipul de virus gripal care a produs-o. In convalescen apar n snge anticorpi specifici fa de antigenul nucleocapsidic i fa de antigenele de nveli ale virusului, anti-hemaglutin i anti-neuraminidaz. Rezistena fa de boal este dat, n principal de anticorpii fa de hemaglutinin care au capacitatea de a neutraliza virusul gripal. Profilaxia specific se poate realiza prin vaccinarea antigripal cu vaccinuri integrale inactivate (mono sau polivalente) sau preparate numai din subuniti ale particulei virale (hemaglutinin, neuraminidaz), sau cu vaccinuri cu virus viu atenuat. De asemenea, pentru prevenirea gripei se pot utiliza i unele chimioterapeutice cu aciune antigripal (amantadina). Ca msuri generale n caz de epidemie menionm: izolarea bolnavilor la domiciliu sau n spital pe durata bolii acute; limitarea circulaiei persoanelor expuse; educaie sanitar etc. De asemenea orice apariie epidemic a bolii se anun i pe plan internaional la OMS iar tulpinile izolate se trimit la Centrele naionale i internaionale; se instituie supravegherea mersului epidemiei prin examene serologice de mas i se prepar vaccinuri antigripale corespunztoare.

70 | P a g e

PARTEA III. BACTERIOLOGIE

71 | P a g e

Curs 7: Bacteriologie partea general Curs 8: Bacteriologie partea special (cocii patogeni, bacilii patogeni, bacteriile spiralate patogene)

CURS 7 Bacteriologie partea general

Definiie. Bacteriile reprezint un grup de microorganisme procariote, unicelulare, de dimensiuni microscopice, cu morfologie variat i cu un echipament enzimatic mai mult sau mai puin complex, n funcie de specie. I. Morfologia bacteriilor II. Ultrastructura celulei bacteriene III. Fiziologia bacteriilor IV. Diagnosticul de laborator V. Principiile terapiei cu antibiotice

I.

Morfologia bacteriilor

Forma i dimensiunile bacteriilor sunt elemente importante pentru diferenierea i clasificarea lor. Forma bacteriilor este controlat genetic. Dei variaz destul de mult n funcie de condiiile de mediu, polimorfismul acestor microorganisme este relativ limitat i caracterizat prin predominana unei forme tipice pentru o specie dat. Forma bacteriilor este greu de apreciat direct n mediile lor naturale. Morfologia bacteriilor se stabilete, de obicei, pentru celulele cultivate n condiii artificiale de laborator, caz n care forma celulelor poate fi influenat de vrsta culturii, de compoziia mediului, de temperatur etc. Datorit acestui fapt, forma bacteriilor, care reprezint un criteriu taxonomic important, se apreciaz n mod convenional pe celule provenite din culturi tinere, n faza de
72 | P a g e

cretere activ, pe medii de cultur corespunztoare i n condiii optime de temperatur, pH etc. Dup forma celulei, bacteriile pot fi grupate n urmtoarele tipuri morfologice:

bacterii sferice (cocoidale); bacterii cilindrice (bacilare); bacterii spiralate (elicoidale); bacterii filamentoase.

Bacteriile sferice. Sunt bacteriile cunoscute sub numele generic de coci. Cocii pot fi perfect sferici (Staphylococcus aureus), elipsoidali (Streptococcus viridans), lanceolai (Streptococcus pneumoniae) sau reniformi (Neisseria meningitidis, Neisseria gonorrhoeae). La majoritatea bacteriilor sferice, celulele fiice rezultate n urma procesului de diviziune nu se despart la sfritul diviziunii, ci formeaz grupri caracteristice cu valoare taxonomic. n funcie de poziia celulelor fiice dup diviziune, cocii prezint urmtoarele ase subtipuri morfologice (fig. 7.1):
a. cnd diviziunea cocilor se face dup un singur plan, iar celulele fiice

rmn izolate rezult micrococii (Micrococcus roseus);

b. dac diviziunea celulelor se face dup planuri succesive paralele,

celulele rmn ataate n perechi, formnd diplococii (Streptococcus pneumoniae);

c. cnd diviziunea are loc tot dup planuri succesive paralele, dar celulele

rezultate formeaz lanuri de lungimi variabile, ca un irag de mrgele, rezult streptococii (Streptococcus pyogenes); n cazul n care planurile succesive de diviziune sunt perpendiculare unele fa de altele, iar celulele rezultate sunt dispuse cte patru, se formeaz tetracocii sau tetrada (Gafkya tetragena); perpendiculare unul pe altul, rezult o grupare sub form de pachete cubice numit sarcina (Sarcina flava, Sarcina aurantiaca); rezult coci aranjai n ' form de ciorchine sau stafilococii (Staphylococcus aureus).
73 | P a g e

d.

e. cnd planurile de diviziune sunt orientate n trei direcii diferite,

f. dac diviziunea se face dup mai multe planuri dispuse neregulat

Bacteriile cilindrice. Sunt cunoscute sub denumirea de bacili sau bastonae i au diametrul longitudinal de cteva ori mai mare dect cel transversal. Forma bacililor prezint unele variaii (fig. 7.2) care se refer la laturile i extremitile celulei. Bacilii sunt drepi, uor ncurbai la mijloc sau la unul din capete. Extremitile bacililor pot fi tiate drept, ca la Bacillus anthracis sau rotunjite, ca la majoritatea bacililor: Mycobacterium tuberculosis. Marginile laterale ale bacililor sunt de regul paralele, sau pot fi i apropiate la extremiti, dnd bacilului aspectul de fus (Fusobacterium fusifformis) sau ndeprtate i rotunjite la una sau la ambele capete. n urma procesului de diviziune bacilii pot fi grupai cte doi (diplobacili), n lanuri cu lungimi variabile (streptobacili) sau n palisad (ca scndurile unui gard). Unii bacili formeaz grupri sub form de rozet sau stea. Raportul dintre cele dou diametre - longitudinal i transversal variaz mult, unele bacterii putnd lua un aspect filamentos sau sferic - oval, fiind denumite cocobacili. Acestea din urm sunt uneori greu de difereniat de coci. Bacteriile spiralate (helicoidale). Aceste bacterii au form cilindric, alungit, dar prezint curburi ale axului longitudinal. Se cunosc trei subtipuri morfologice (fig. 7.3):

vibrionul: n form de virgul (Vibrio cholerae) spirilul: n form de spiral, cu mai multe ture de spir rigide (Spirillum mutans) spirochete, n form de spiral, cu mai multe ture flexibile, care se pot comprima sau relaxa (Treponema pallidum). tip morfologic se ntlnete la

Bacteriile filamentoase. Acest actinomicete (bacterii miceliene). Dimensiunile bacteriilor

Bacteriile au dimensiuni foarte mici, de ordinul micrometrilor (1 m 10 m), din care cauz nu pot fi observate dect la microscop.
-6

n medie, dimensiunile bacteriilor sunt cuprinse ntre 0,5-1 m x 3-6 m. Cele mai mici ca dimensiune sunt nanobacteriile descoperite recent, cu dimensiuni de 0,02-0,03 m; cele mai mari pot ajunge intre 10-20 m lungime, iar n cazul formelor filamentoase, n mod excepional, chiar la 500 m.
74 | P a g e

Dimensiunile cocilor variaz ntre 0,1-2 m; bacilii au lungimea de 0,5 - 10 m i grosimea de 0,3 - 1,5 m; spirilii i spirochetele au dimensiuni ce variaz ntre 0,25 - 3,5 m diametrul transversal i 6 - 100 m diametrul longitudinal. Dimensiunile mici ale bacteriilor apar ca o condiie esenial pentru creterea i multiplicarea lor rapid, n comparaie cu celulele eucariote, ce le confer un mare avantaj biologic n natur, asigurnd supravieuirea lor.

II.

Ultrastructura celulei bacteriene (fig. 7.4)

Descrierea constituenilor structurali ai celulei bacteriene a fost posibil datorit perfecionrii tehnicilor de studiu, n special cele de citochimie i de microscopie electronic. Elementele structurale ale celulei bacteriene au fost i clasifcate n: elemente structurale constante sau permanente i elemente structurale inconstante sau nepermanente. Elemente structurale constante:

Peretele celular Membrana citoplasmatic Citoplasm Materialul nuclear Organitele citoplasmatice Incluziunile citoplasmatice

Peretele celular bacterian Celula bacterian este delimitat de un perete celular. Acesta acoper membrana citoplasmatic i poate fi la rndul su acoperit, la unele specii, de o capsul sau de un strat mucos. Peretele poate fi pus n eviden prin coloraie sau prin examinare la microscopul electronic. Examinat la microscopul electronic peretele celular izolat are aspectul unui sac gol, care conserv forma bacteriei din care provine i are o constituie asemntoare ochiurilor unei plase.Ultrastructura peretelui celular este diferit la cele dou grupe mari de bacterii (clasificate n funcie de afinitile tinctoriale): bacterii Gram pozitive i bacterii Gram negative. La bacteriile Gram-pozitive peretele celular (fig. 7.5) apare la microscopul electronic ca un strat unic, omogen. Componentul care se gsete n cea mai mare parte n peretele celular al acestor bacterii (80-90 % din greutatea uscat a celulei) este pegtidoglicanul sau mureina. n afara acestui component, peretele celular mai conine proteine, polizaharide i acizi teicoici. Peptidoglicanul poate fi atacat de lizozim, o enzim
75 | P a g e

mucolitic i de antibioticul penicilin. Acizii teichoici (grec. tekhos = zid. perele) sunt prezeni numai n peretele celular al bacteriilor Gram-pozitive, conferindu-le o serie de proprieti importante: influeneaz pasajul ionilor ia nivelul peretelui celular. La bacteriile Gram-negative peretele celular (fig. 7.6) este mai subire, dar are o structura mai complex. El este alctuit din urmtoarele structuri:

membrana extern a peretelui celular: fosfolipide, proteine i lipopolizaharide (LPS) spaiul periplasmic (cuprins ntre membrana citoplasmatic i membrana extern a peretelui celular): complexul peptidoglican lipoproteine

Semnificaia biologic a peretelui celular:

Peretele celular reprezint sistemul de susinere mecanic al ntregii celule. Datorit rigiditii sale determin forma caracteristic a celulelor bacteriene i o protecie mpotriva factorilor nefavorabili din mediui. Asigur protecia celulei fa de ocul osmotic; fr suportul rigid al peretelui celular, membrana plasmatica nu ar putea rezista presiunii interne. Particip la procesul de cretere i diviziune celular, urmnd membrana citoplasmatic n formarea septului transversal care separ celula mam n cele dou celule fiice. Datorit porilor, peretele celular permite ptrunderea n celul a substanelor nutritive i eliminarea substanelor rezultate din metabolism. n cazul bacteriilor mobile, constituie suportul rigid pe care se sprijin flagelii in contracie. Conine substanele care dau specificitatea antigenic a celulelor i receptorii specifici pentru fixarea bacteriofagilor (virusuri care paraziteaz bacteriile).

Protoplatii i sferoplatii Unele bacterii sunt n mod normai lipsite de perete celular. Aa sunt, de exemplu, micoplasmele, un grup de bacterii parazite intracelular. Izotonismul celulei parazitate asigur micoplasmelor supravieuirea n lipsa peretelui celular. Dac se trateaz cu lizozim (enzima care hidrolizeaz peptidoglicanul din peretele celular) celulele bacteriene Grampozitive, peretele celular este distrus integral. Rmne doar membrana citoplasmatic ce menine forma aproximativ sferic.
76 | P a g e

Aceste forme poart numele de protoplati. Protoplatii nu-i mai pot reface prin sintez peretele celular daca acesta a fost complet distrus. La bacteriile Gram-negative peretele celular bacterian nu poate fi degradat complet sub aciunea lizozimului ci, i slbete numai structura. La aceste bacterii lizozimul nu distruge dect ptura de murein, membrana extern a peretelui celular rmnnd aproape intact. n medii hipotonice celulele astfel tratate lizeaz, iar n medii hipertonice se transform n sferoplati. Acetia se deosebesc de protoplati prin aceea c peretele lor celular este numai parial distrus.

Membrana citoplasmatic (fig. 7.7) Membrana citoplasmatic acoper citoplasma celulei bacteriene, separnd-o de suprafaa intern a peretelui cclular de care este, de obicei, strns lipit. Poate fi pus n eviden i la microscopul fotonic, dup colorare selectiv cu albastru Victoria sau fr colorare, la bacteriile vii examinate in cmp ntunecat, caz in care apare ca o linie net, luminoas, strlucitoare. La bacterii, membrana citoplasmatic prezint o structur bilaminar, fiind format dintr-un dublu strat fosfolipidic, n grosimea cruia exist diferite proteine i polizaharide. Membrana citoplasmatic este prevzut cu numeroase invaginri de form vezicular, lamelar sau tubular care ptrund n citoplasm. Aceste invaginri sunt denumite mezozomi i mpreun cu membrana citoplasmatic din care deriv formeaz sistemul membranar unic sau "unit membrana". Datorit sistemelor enzimatice pe care le conine, ea are importante funcii n metabolismul energetic. La celulele eucariote aceste funcii sunt ndeplinite de organite specializate (mitocondriile). Mezozomii sunt structuri multifuncionale. Au o deosebit importan, ca rspuns la nevoile variate ale celulei. Formarea lor reprezint o modalitate prin care celula bacterian i mrete suprafaa membranei citoplasmatice, n funcie de condiiile de mediu. Mezozomii sunt legai att de membrana plasmatic, ct i de materialul nuclear, avnd rol important n controlul replicrii cromozomului bacterian. Mezozomii sunt implicai i n sinteza membranei plasmatice, a peretelui celular i a septului transversal care separ celulele dup diviziune. Semnificaia biologic a membranei citoplasmatice
77 | P a g e

 Membrana citoplasmatic reprezint o component permanent a celulei bacteriene, avnd rolul de a delimita spaiul intracelular. Pentru celula bacterian membrana citoplasmatic reprezint o barier osmotic semipermeabil, ce asigur o rapid echilibrare a ionilor de sodiu ntre interiorul i exteriorul celulei, o concentrare intracelular a ionilor de potasiu i de magneziu, precum i ptrunderea sau evacuarea unor molecule de dimensiuni mici Membrana citoplasmatic este sediul a numeroase enzime respiratorii, reprezentnd o important structur cu rol energetic Membrana citoplasmatic coordoneaz creterea i diviziunea celular, iniiind replicarea cromozomului bacterian i asigurnd separarea cromozomilor fii, prin formarea septului transversal de diviziune. Citoplasma Citoplasma este un sistem coloidal complex format din proteine, lipide i glucide, ap (80%), sruri minerale i o serie de substane rezultate n urma metabolismului. Citoplasma bacterian nu are o organizare definit, similar celei din celulele eucariote, care conine organite difereniate i delimitate de membrane. Aspectul ei este variabil n funcie de vrsta culturii i de condiiile dc mediu. La celulele tinere i n condiii normale de dezvoltare, citoplasma ader de peretele celular i se prezint ca o mas dens, omogen i intens colorabil. La celulele btrne citoplasma i pierde treptat afinitatea tinctorial, se ndeprteaz de peretele celular i capt o structur granular cu numeroase vacuole. n interiorul citoplasmei se gsete materialul nuclear, incluziunile, vacuolele i ali constitueni. O caracteristici a citoplasmei bacteriene este prezena unei mari cantiti de ARN, care i confer caracterul de bazofilie, mai intens la celulele tinere. Materialul nuclear (fig. 7.8) Spre deosebire de celulele eucariote, care au un nucleu cu structur bine definit, mrginit de o membran, coninnd un numr definit de cromozomi capabili de diviziune mitotic, materialul nuclear bacterian are o form primitiv de organizare, lipsit de membran, situat in partea central a celulei i care nu sufer modificri de tip m itotic in cursul ciclului de diviziune. Datorit caracteristicilor sale particulare, aceast structur a fost desemnat cu numeroi termeni: nucleoid, nucleozom. material nuclear, nucleoplasm. cromozom bacterian etc. Din punct de vedere chimic materialul nuclear conine 60% ADN, 30% ARN i 10% proteine. Se pare c ARN-ul i proteinele contribuie la conservarea unitii structurale a nucleoplasmei, n lipsa unei membrane proprii. Pe seciuni ultrafine s-a observat c regiunea nuclear este plin cu filamente foarte fine, uneori aranjate n iruri ondulate, paralele, care
78 | P a g e

seamn cu o jurubi de a, cteodat rsucit. Aceste filamente sunt formate din ADN i corespund cromozomului bacterian. Prin metode speciale cromozomul bacterian a fost extras din celul, constatndu-se c este alctuit dintr-o singur, molecul, gigant. (aproximativ 1 mm lungime la Escherichia coli) de ADN de form circular, cu extremitile reunite, cu lungimea de 1400 m i un diametru de 2,5 nm, pliat foarte strns n dou rnduri de bucle succesive, stabilizate de ctre proteine. Semnificaia biologic a materialului genetic Determin arhitectura capacitatea ei de evoluie. celulei bacteriene, ereditatea i

Datorit lipsei membranei proprii, un contact direct ntre ADN i ribozomii din citoplasm face ca transferul informaiei genetice s se realizeze foarte rapid. Ribozomii Ribozomii sunt particule nucleoproteice intracitoplasmatice, de form aproximativ sferic. La procariote, n faza de cretere activ, se gsesc n citoplasm 1500 - 100.000 (n medie 20 - 30.000) particule ribozomale. Ribozomii sunt componeni eseniali ai sistemului de traducere a informaiei genetice i au rol n sinteza proteinelor.

Vacuolele Vacuolele sunt formaiuni sferice, cu diametrul de 0,3-0,5 m, mai puin refringente dect citoplasma, care apar n celula bacterian n perioada de cretere activ. Numrul lor este variabil n raport cu mediul de cultur (620/celul). Conin diferite substane metabolice i sunt nconjurate la periferie de un nveli lipoproteic unistratificat numit tonoplast. Incluziunile citoplasmatice Incluziunile citoplasmatice sunt formaiuni structurale ce conin o serie de substane inerte, depuse n citoplasma celulei, cu rol de substane de rezerv. Dup structura lor, evideniat la microscopul electronic, ele sunt de dou tipuri:
79 | P a g e

incluziuni nconjurate de membrane: incluziunile de poli hidroxibutirat, incluziunile cu sulf i carboxizomii, incluziuni nenconjurate de membrane: incluziunile de polimeri anorganici, incluziunile polizaharidice Incluziunile de poli--hidroxibutirat sunt specifice numai procariotelor. Aceste incluziuni se observ uor datorit gradului mare de refringen sau pot fi puse n eviden dup o colorare specific pentru grsimi (negru de Sudan). n celulele vii apar ca granulaii rotunde, foarte refringente i reprezint un material de rezerv tipic pentru procariote.

Incluziunile de polimeri anorganici au fost denumite de ctre Grimm (1902) incluziuni de volutin deoarece au fost gsite n numr mare la bacteria Spirillum volutans. Aceste incluziuni au fost descoperite de ctre V. Babe n 1897 la Corynebacterium diphtheriae i Mycobacterium tuberculosis i apoi de Ernst n 1899 la alte bacterii, fapt pentru care mai sunt numite i corpusculii Babe-Ernst. Datorit coninutului mare n polifosfai anorganici produc efecte metacromatice (se coloreaz n rou - violet cu albastru de metilen), motiv pentru care au fost denumite i granulaii metacromatice. Granulele de volutin reprezint o rezerv de fosfor i energie intracelular. Incluziunile polizaharidice cuprind incluziunile de glicogen i amidon. Acestea se ntlnesc ca substane de rezerv la bacteriile aerobe sporulate. La microscopul fotonic pot fi observate dup o prealabil tratare a celulelor cu iod n iodur de potasiu. n aceste condiii, incluziunile de glicogen se coloreaz n brun rocat, iar cele de amidon n albastru, n contrast cu citoplasma care apare colorat n galben pal. Elemente structurale inconstante: Capsula i stratul mucos Glicocalixul Flagelii Pilii i fimbriile Sporul Cromatoforii Aceste elemente apar doar la unele specii bacteriene.

Capsula i stratul mucos (fig. 7.9) Unele bacterii au proprietatea de a elabora, n anumite condiii de mediu, substane mucilaginoase cu caracter vscos. Dupa unii autori, aceast proprietate ar exista potenial la toate bacteriile, dar s-ar manifesta regulat numai la unele specii, in timp ce la
80 | P a g e

altele s-ar traduce doar prin prezena unei formaiuni foarte bine organizate, invizibil cu mijloacele uzuale de cercetare. n funcie de structura i raporturile cu celula bacterian substana mucoid se poate prezenta sub urmtoarele forme: a) Microcapsula - la care substana mucoid alctuiete un strat foarte fin n jurul celulei bacteriene b) Macrocapsula sau capsula adevrat se prezint ca o formaiune morfologic distinct care nvelete de jur-mprejur fecare celul sau perechi de celule. c) Stratul mucos - apare ca o mas amorf, neorganizat, n jurul celulei bacteriene. d) Zooglea este un strat mucos ce leag ntre ele mai multe celule, formnd adevrate colonii mucilaginoase de bacterii. Spre deosebire de stratul mucos, care formeaz n jurul bacteriilor o reea lax i difuz de exopolizaharidc, fr o structur definit, capsula adevrat este strns aderen de jeretele celular. Exemple de bacterii capsulate: Bacillus anthracis, Streptococcus pneumoniae., Klebsiella pneumoniae. Dei capacitatea de a elabora capsul sau strat mucos constituie un caracter ereditar - determinat genetic - pentru anumite specii bacteriene, ea poate s nu se manifeste atunci cnd condiiile de mediu sunt neadecvate sau poate fi pierdut prin mutaie. Celulele bacteriene care nu au aceast capacitate o pot dobndi prin recombinare genctic, dup ce au primit prin transfer determinantul genetic corespunztor, de la o bacterie care formeaz capsul sau strat mucos. Semnificaia biologic a capsulei Capsula este un produs inert care rezult din activitatea metabolic a celulei bacteriene i care poate fi ndeprtat, celula bacterian pstrndu-i viabilitatea. Capsula are un rol ecologic n supravieuirea bacteriilor n natur. Ea protejeaz celula bacterian de efectul nociv al deshidratrii, datorit proprietilor sale higroscopice i reprezint un rezervor pentru stocarea substanelor nutritive sau a celor rezultate din metabolism La bacteriile patogene, capsula are rol protector fa de aciunea fagocitelor. Bacteriile patogene capsulate au o virulen mai mare pentru om i animale. Astfel, pneumococul capsulat este virulent, n timp ce tulpinile necapsulate sunt nevirulente i fagocitabile. Glicocalixul Glicocalixul este alctuit dintr-o mas de filamente polizaharidice ataate de lipopolizahariele de pe suprafaa bacteriilor, formnd n ansamblu o structur ca o psl pe suprafaa celulei, asigurnd fixarea acesteia de alte celule sau suporturi. n mediile naturale competitive,
81 | P a g e

populate de mai multe specii de bacterii, selecia favorizeaz celulele protejate de glicocalix. Semnificaia biologic a glicocalixului Glicocalixul reprezint un rezervor de hran pentru bacterii, prin legarea diferiilor ioni i molecule care provin din mediul nconjurtor sau sunt eliberate prin digestia enzimatic a celulelor moarte. Prin glicocalix, bacteriile se leag de structurile poiizaharidice similare de pe suprafaa celulelor vegetele, iar n cazul bacteriilor patogene, aceast fixare are un gradient de specificitate. Spre exemplu, vibrionul holeric se leag de "marginea n perie" a celulelor intestinale umane, iar gonococul de celulele vaginale.

Prezena glicocalixului la bacteriile patogene reprezint o protecie pentru celul, asigurnd fixarea i meninerea ei n mediile naturale sterile (ex. cile urinare), fr a fi ndeprtat, precum i o rezisten mrit fa de bacteriofagi sau protozoare.

Flagelii Flagelii sunt apendici filamentoi, dispui la suprafaa bacteriilor, reprezentnd organite de locomoie. Posibilitatea de deplasare se ntlnete numai la anumite bacterii ca: bacili, vibrioni i spirili. Morfologie Flagelii sunt structuri filamentoase subiri, flexibile, de form helical. Lungimea lor este mult mai mare dect aceea a celulelor care i poart. De asemenea, ei sunt mai lungi la celulele btrne i la cele care triesc n medii lichide. Forma lor este cilindric dei, uneori, apar turtii ca o panglic. Numrul flagelilor pe suprafaa unei celule variaz ntre 1-100, fiind caracteristic pentru o anumit specie. n funcie de dispunerea flagelilor pe suprafaa celulei bacteriene, acestea pot fi (fig. 7.10):
atriche (bacterii imobile, fr flageli - majoritatea bacteriilor) monotriche (cu un singur flagel polar, exemplu Vibrio cholerae); lofotriche (cu un smoc de flageli situat la un pol al celulei, exemplu

Spirillum marinus) amfitriche (cu un flagel la ambii poli ai celulei) peritriche (cu flageli pe toat suprafaa celulei, exemplu Proteus vulgaris).

Existena flagelilor este controlat genetic i reprezint un caracter care poate fi pierdut i redobndit prin mutaie.

82 | P a g e

Micarea este determinat de reacia celulei la diferii stimuli din mediu. Cnd celula se deplaseaz n direcia stimulului se vorbete de un tactism pozitiv, iar cnd se ndeprteaz de stimul de un tactism negativ. n funcie de natura stimulului deosebim urmtoarele tipuri de tactisme: chemotactism, fototactism, aerotactism. termotactism etc. Chemotaxia - este o modalitate de deplasare preferenial a bacteriilor sub efectul unor concentraii inegale de substane chimice din mediu. Se manifest fie prin atragerea, fie prin respingerea bacteriilor din zonele n care concentraia substanei este mai ridicat. Din punct de vedere al atragerii i respingerii bacteriilor, exist dou grupe mari de substane chimice: substane chemotactic pozitive (atractante): zaharuri, aminoacizi, O2, Ca ; substane chemotactic negative: acizi grai, alcooli, H\ OH Aerotaxia - reprezint deplasarea celulelor bacteriene ntr-un anumit mod n funcie de gradientul de O2 Prin aceast micare fiecare bacterie caut zona de concentraie n oxigen adecvat tipului su respirator, aerob, anaerob, microaerofil. Pilii i fimbriile Sunt apendici filamentoi, pericelulari. prezeni la barteriile Gram negative(Escherichia coli, Proteus, Klebsiella, Shigella, Salmonella) i mai rar la bacteriile Gram pozitive. Pot fi evideniai numai prin microscopie electronic. Sunt mai numeroi dect flagelii, mai subiri i mai casani. Dup structur, funcie i determinism genetic, aceti apendici au fost grupai n dou categorii: o pilii de sex - apendici filamentoi care reprezin receptori specifici pentru bacteriofagi i calea de transfer a ADN-ului bacterian i plasmidial n procesul de conjugare o fimbriile care nu sunt implicate n transferul ADN cromozomal, viral sau plasmidial. Pilii de sex sunt n numr de 1-10/celul. Sunt codificai de informaia genetic extracromozomal (plasmidul de sex). Semnificaia biologic a pililor
Pilii de sex sunt organite eseniale pentru transferul ADN cromozomal

sau plasmidial n cursul conjugrii celulelor bacteriene

Pilii poart receptori pentru fixarea bacteriofagilor de celulele bacteriene i servesc drept conduct prin care se realizeaz transferul genomului fagic n celula bacterian. Pierderea pililor prin mutaie determin rezistena fa de infecia cu bacteriofagi. Fimbriile sunt alctuite dintr-un numr variabil de molecule de fimbrin. Fimbriile rmn legate de protoplati i sferoplati, ceea ce arat originea lor intracclular.
83 | P a g e

Semnificaia biologic a fimbriilor

Creterea suprafeei de absorbie a substanelor nutritive. Creterea activitii respiratorii a bacteriilor. Facilitarea aderrii bacteriilor de diferite substraturi sau alte organisme. Formarea unor pelicule de bacterii reunite prin fimbrii la suprafaa mediilor lichide. Servesc ca organite de transport a unor metabolii Contribuie la stabilizarea cuplurilor de conjugare Influeneaz virulena bacteriilor patogene prin: fixarea bacteriilor patogene de celule i esuturi, determinarea unei specificiti de esut; inducerea formrii de anticorpi datorit antigenelor din fimbrii; conferirea unei rezistene deosebite a bacteriilor la fagocitoz.

Sporul bacterian (fig. 7.11) La unele bacterii, forma vegetativ se poate transforma ntr-un spor. Aceste bacterii se numesc sporogene. La bacterii se ntlnesc mai multe tipuri de spori: Endosporul (sporul propriu-zis) - este o formaiune intracelular, refringent i rezistent la factorii nefavorabili de mediu. Este caracteristic pentru genurile Clostridium i Bacillus.
Exosporul - reprezint o formaiune rezistent, care se ntlnete la

bacteriile metanooxidante

Artrosporul - constituie o formaiune intracelular, cu o rezisten

mai sczut comparativ cu a endosporului, dar superioar formei vegetative. Se formeaz prin fragmentarea celulei vegetative. Adevratul spor bacterian sau endosporul este ntlnit la speciile genului Bacillus i Clostridium. Datorit caliti lor sale deosebite de rezisten, endosporul conserv n stare dormant, timp ndelungat, toate proprietile genotipice ale celulei vegetative din care provine. Indiferent de morfologia celulei n care se constituie, forma sporului (endosporului) este rotund sau oval, cu diametrul variabil. Poziia sporului n celul este diferit i reprezint un criteriu taxonomic. Astfel, sporul ocup o poziie central la Bacillus anthracis, subterminal la Bacillus cereus sau o poziie terminal la Clostridium tetani. La unele specii, diametral sporului este mai mare dect al celulei n care se formeaz, din care cauz deformeaz celula. Sporii deformani i
84 | P a g e

ntlnim la bacilii telurici, anaerobi, aparinnd genului Clostridium i pot avea poziie central, dndu-le acestora aspect de fus (Clostridium pasteurianum), poziie subterminal aspect de rachet de tenis (Clostridium sporogenes) sau b de tob, dac sporul este terminal. Sporul este unic i numai excepional s-au descris mai muli spori n aceeai celul. La microscopul fotonic sporii apar ca formaiuni refringente distincte, incolore, deoarece nu sunt permeabili la colorani. Pot fi ns colorai prin metode speciale (ex. cu verde malachit). Ultrastructura. (fig. 7.12) tunicile (nveliurile sporale) - reprezint trei straturi suprapuse: unul extern (exina), unul intern (ntina), ntre care se gsete stratul mijlociu; i reprezint 26-30 % din structura sporului,coninnd 80% din proteinele sporale; cortexul este o zon situat sub tunica intern, formatnnat dintr-un peptidoglican (altul dect mureina)

membrana sporoplasmei citoplasmatic a celulei vegetative;

este

identic

cu

membrana

sporoplasma (inima sporului) - reprezint 60-70% din greutatea sporului i conine elementele biologic active ADN, ARN, mai puin ARN mesager, ribozomi).

Sporogeneza Reprezint un proces de morfogenez n urma cruia n interiorul unei celule bacteriene se difereniaz o alt celul diferit din punct de vedere chimic, enzimatic i fiziologic. Sporogeneza este nsoit i de unele modificri biochimice. Astfel, unele substane care se sintetizau n celula vegetativ nu se mai sintetizeaz n celula pe cale de sporulare, n schimb n aceasta din urm apar substane noi. n cursul sporogenezei la unele bacterii aerobe sau anaerobe se elibereaz n mediu substane biologic active: enzime, antibiotice, toxine. Fenomenul este deosebit de important pentru industria microbiologic, bacteriile respective fiind utilizate n producerea industrial a enzimelor (Bacillus subtills), antibioticelor (specii de Bacillus i Streptomyces), toxine (specii de Clostridium) etc. Germinarea sporului Reprezint fenomenul de transformare a sporului n celula vegetativ, respectiv trecerea sporului din stare dormant, metabolic inactiv, la starea
85 | P a g e

metabolic activ. Se realizeaz in trei faze succesive: activarea, iniierea germinrii i creterea postgerminal. Activarea germinrii - este produs n condiii favorabile de umiditate, temperatur, pH i de unele substane chimice.

Iniierea germinrii - este marcat de creterea sporului n volum, ca urmare a absorbiei de ap, de pierderea refringenei, tumefierea cortexului, a tunicilor sporale i pierderea termoiezistenei. Creterea postgerminal - dezintegrarea structurilor sporale nceput n faza de iniiere se desvrete in faza de cretere postgerminal paralel cu dobndirea activitii respiratorii i a altor activiti metabolice. Cortexul i tunicile sporale dispar, iar noua celul vegetativ ce se constituie n centrul sporului crete, se alungete i herniaz din spor. Creterea postgerminal se sfrete n momentul n care celula vegetativ intr n prima diviziune.

Semnificaia biologic a sporului Sporul reprezint o etap normal a ciclului de dezvoltare a bacteriilor sporogene, deoarece sporogeneza necesit condiii de mediu similare celor reclamate de celula vegetativ, se deosebete de celula vegetativ prin mai multe caractere i se comport ca o form de rezisten ce pstreaz toate caracterele fenotipice i genotipice ale speciei
Sporul bacterian nu reprezint o form de multiplicare ca la fungi. Rezistena sporului bacterian la factorii nefavorabili de mediu este deosebit de mare; pot rezista cteva ore la 120 C cldur umed sau 200C cldur uscat. S-au evideniat spori viabili i dup mai bine de 100 ani (Bacillus anthracis).

Cromatoforii Cromatoforii sau aparatul fotosintetic reprezint un complex de structuri membranoase implicate n procesul de conversie a energiei luminoase n energie chimic. Plasmidul (fig. 7.13) Plasmidele sunt molecule de ADN independente de cromosomul bacterian localizate n citoplasm. Plasmidele de dimensiuni mari sunt prezente, de obicei, n una sau dou copii, n timp ce plasmidele de dimensiuni mici pot fi prezente n 10 -100 copii. Plasmidele nu sunt eseniale pentru supravieuirea celulei. Multe dintre ele poart gene codificatoare ale anumitor caractere ale celulei gazd. Urmtoarele tipuri de plasmide sunt relevante din punct de vedere medical:
86 | P a g e

 Plasmide ale virulenei. Poart determinani ai virulenei bacteriei, ex. genele enterotoxinei sau hemolizinei. Plasmide ale rezistenei. Poart informaie genetic ce confer rezisten la ageni antiinfecioi.

III. Fiziologia bacteriilor

1. Necesiti nutritive ale bacteriilor Pentru creterea i multiplicarea lor, microorganismele necesit prezena n mediu a unor substane nutritive care s conin att elemente chimice necesare pentru sinteza constituenilor celulari i activitii enzimatice, ct i substane necesare producerii de energie. Aceste elemente se clasific n:
1. bioelemente majore (macroelemente, macronutrieni): C, H, O,

(molibden), Cu, Mn- dei se gsesc ntr-un procent extrem de mic, au rol esenial n metabolismul bacteriilor, intrnd n alctuirea unor enzime. Carbonul. Reprezint cam jumtate din greutatea uscat a bacteriilor, fiind elementul principal dintre macrolelemente. Unele bacterii pot folosi C din substane anorganice (CO2, srurile acestuia- CaCO3, Na2CO3, etc), iar altele doar din substane organice (aminoacizi, acizi nucleici etc.) Azotul. Dup carbon, azotul reprezint un element important. Este obligatorie prezena lui n proteine, acizi nucleici. Majoritatea bacteriilor l folosesc n biosinteze pornind de la NH3, unele ns pot fixa azotul atmosferic, pe care mai apoi l transform n amoniac.

2. bioelemente minore (microelemente, micronutrieni): Zn, Mo

N, K, S, Mg, Na, Cl etc.

Factorii de cretere. Sunt substane pe care, n general, microorganismele sunt incapabile s le sintetizeze n cursul metabolismului lor i n absena crora multiplicarea lor este imposibil. La unele microorganisme, aceste substane sunt sintetizate n timpul metabolismului lor i nu sunt necesare n mediu, dar alte microorganisme nu posed aceast capacitate, fapt ce implic prezena acestor factori n mediu. Factorii de cretere sunt: vitaminele, aminoacizii i bazele azotate. 2. Tipuri trofice Microorganismele se caracterizeaz printr-o mare diversitate metabolic, multe dintre ele, avnd capacitatea de a se dizolva pe substraturi anorganice, utilizn ci metabolice inaccesibile pentru plante i animale.

87 | P a g e

Exist 2 criterii de baz, n funcie de care microorganismele pot fi clasificate n mai mmulte tipuri nutriionale: sursa de energie i sursa de carbon. n funcie de sursa de energie:
-

fototrofe: bacteriile care utilizeaz ca i surs de energie, lumina chemotrofe: bacteriile care utilizeaz ca i surs de energie substanele chimice.

Acestea la rndul lor se mpart n: o chemoorganotrofe, care utilizeaz ca surs de energie substanele organice o chemolitotrofe (gr. litos-piatr, cu sensul de mineral), care utilizeaz ca surs de energie substanele anorganice n funcie de sursa de carbon:
-

autotrofe: bacteriile care utilizeaz ca surs de carbon CO2 i srurile sale minerale (compuii anorganici). heterotrofe: bacteriile care utilizeaz ca surs de carbon substanele organice.

Dac se iau n considerare ambele criterii, bacteriile se clasific n:

-

fotoautotrofe: bacteriile care utilizeaz ca i surs de energie, lumina i ca surs de carbon CO2 i srurile sale minerale (compuii anorganici). fotoheterotrofe: bacteriile care utilizeaz ca i surs de energie, lumina i ca surs de carbon substanele organice chemoautotrofe: bacteriile care utilizeaz ca i surs de energie substanele chimice i ca surs de carbon CO2 i srurile sale minerale chemoheterotrofe: bacteriile care utilizeaz ca i surs de energie substanele chimice i ca surs de carbon substanele organice.

3. Creterea bacteriilor Creterea este definit n sens biologic, ca procesul de mrire coordonat a tuturor constituenilor unui organism, ca rezultat al producerii sau adugrii de substan nou. La toate speciile unicelulare creterea are ca rezultat multiplicarea acestora, respectiv creterea numrului de indivizi. La organismele pluricelulare creterea are ca efect sporirea volumului, respectiv a taliei individuale. Celulele bacteriene care cresc ca mas i volum nu i mrec proporional toate dimensiunile. De exemplu, la bacteriile cilindrice, n timpul
88 | P a g e

creterii echilibrate, diametrul cilindrului rmne fix, n aa fel nct are loc doar creterea n lungime a celulei. Creterea nu continu la nesfrit, deoarece la un moment critic este ntrerupt, fiind urmat de diviziunea celular. Creterea unei populaii de microorganisme este rezultatul creterii i diviziunii organismelor individuale care formeaz populaia respectiv, ntrun mediu de cultur corespunztor, bacteriile perfect adaptate au o cretere echilibrat. Culturile aflate n stare de cretere echilibrat i menin o compoziia chimic constant deoarece creterea biomasei este nsoit de o cretere comparabil a celorlalte componente ale populaiei (proteine, ARN, ADN, ap intracelular). 4. Multiplicarea bacteriilor Multiplicarea reprezint creterea numrului de de celule bacteriene, ce se poate realiza prin mai multe mecanisme: 1) 2) 3) 4) 5) Diviziune direct (simpl, binar sau sciziparitate) nmugurire Fragmentare Prin spori (de propagare) Conjugarea

1) Diviziunea direct

Reprezint forma cea mai rspndit de multiplicare a bacteriilor, constnd n scindarea celulei mam n dou celule fiice, cel mai adesea identice, egale ca mrime (diviziune izomorf) sau uneori inegale (diviziune heteromorf). Procesul de diviziune implic 3 etape succesive: a. Apariia unui sept transversal format din membrana citoplasmatic, ce mparte spaiul citoplasmatic n 2 compartimente; b. Invaginarea peretelui celular la nivelul septului transversal i ptrunderea lui centriped, cu separarea lui n dou foie; n aceast etap celulele fiice astfel formate vor avea toi constituenii proprii, dar peretele celular rmne comun; c. Separarea celulelor fiice prin scindarea peretului celular comun; n unele cazuri, celulele fiice rmn legate ntre ele prin septul transversal, deoarece peretele celular nu se divide. Diferenele care apar n proceselde clivaj a septului creeaz tipuri caracteristice, reflectate n forma i modul de aranjare al celulelor bacteriene. Astfel, diplococii sunt formai prin clavajul incomplet al septului; streptococii se formeaz prin sinteza de septuri succesive orientate paralel.
89 | P a g e

2) Multiplicarea prin nmugurire nmugurirea reprezint o modalitate particular de reproducere, constnd n formarea pe suprafaa celulei a unui mugure terminal sau lateral, care va deveni o nou celul, ce rmne legat de celula mam printr-un tub de legtur, la nivelul cruia apare septul transversal. Celulele rezultate prin nmugurire prezint uneori tendina de a rmne ataate e celula mam, formnd colonii cu celule unite prin ramificaiile lor tubulare. Ex. Pasteurela 3) Multiplicarea prin fragmentare Multiplicarea prin fragmentare este o form special de nmulire vegetativ observat la majoritatea bacteriilor filamentoase (actinomicete). Reeaua de celule se fragmenteaz, masa celular rmne iniial constant, crescnd doar numrul de celule. Acestea cresc prin acumularea de mas la extremiti. 4) Multiplicarea prin spori Este ntlnit la unele bacterii (filamentoase) care formeaz spori (exospori) la suprafaa reelei de celule (hife) sau n vezicule sporale (sporangii). Sporii pot fi localizai i n interiorul celulei, asemntori cu sporii de rezisten.
5) Conjugarea (fig. 7.14)

Conjugarea reprezint transferul de ADN de la o celul donatoare la o celul receptoare, proces ce implic contactul dintre celule. Conjugarea este posibil dac exist 2 componente: plasmidele pentru conjugare i traspozonii. n procesul conjugrii aceste componente sunt ele nsele transferate. Conjugarea este ntlnit mai ales la bacteiile Gram-negative (E. coli)

IV. Diagnosticul de laborator

Infeciile pot fi diagnosticate fie direct, prin detectarea patogenului, fie indirect prin punerea n eviden a anticorpilor. Domeniul microbiologiei care se ocup cu diagnosticarea de laborator a infeciilor se numete microbiologie clinic. Materialul analizat n laborator este recoltat, n funcie de aparatul n care se localizeaz infecia. Poate fi recoltat de la nivelul aparatului respirator (de pe amigdale, fluid din sinusuri, secreii pulmonare), urogenital (urin, secreii genitale), snge, rni, abcese, tractul gastro-intestinal, LCR, exudate, transudate.
90 | P a g e

Bacteriile au dimensiuni de ordinul micrometrilor, astfel nct este nevoie de amplificarea imaginii de 1000 ori (limita maxim a microsocopului optic). La o astfel de amplificare pot fi detectate bacterii a cror densitate celular este de minim 104-105/ml. Examinarea microscopic a unui astfel de material necesit realizarea unor preparate:

Preparate native: cu sau fr colorani vitali, sunt utilizate pentru observarea bacteriilor vii. Contrastul redus al unor astfel de preparate face necesar utlizarea unui microscop cu cmp ntunecat sau cu contrast de faz. Preparate colorate: au un contrast mai bun, astfel nct pot fi observate bine la microscopul optic. Bacteriile sunt n prealabil aplicate pe lam, uscate la temperatura camerei i fixate prin cldur sau alcool metilic. Dup fixare se aplic colorantul. Metodele de colorare pot fi: simple: utilizeaz un singur tip de colorant: albastru de metilen, fucsin fenicat etc. compuse: coloraia Gram (fig. 7.15), coloraia ZiehlNeelsen coloraii speciale: utilizate pentru a pune n eviden unele elemente structurale ale bacteriilor ( spori, incluziuni cu glicogen, nucleoidul) Microscopia fluorescent: o alt tehnic special. O substan fluorocrom absoarbe lumin cu lungime de und mic i emite lumin cu o lungime de und mai mare. Preparatele colorate cu fluorocromi sunt expuse la lumin cu o anumit lungime de und. Prile colorate apar clare pe un fond ntunecat. Aceast tehnic necesit un echipament special. Se utilizeaz pentru observarea micobacteriilor (bacilul Koch, leprei). Fluorocromul (izotiocianatul de fluorescein) este legat de un anticorp care, la rndul lui, se va cupla cu antigene prezente la nivelul celulei bacteriene.

Pentru a putea fi studiate i identificate, bacteriile pot fi cultivate n laborator. Medii de cultur (fig. 7.16) Microorganismele se pot dezvolta i n afara mediului lor natural pe medii de cultur artificiale, care reprezint substraturi nutritive (lichide sau solide, organice sau anorganice) ce pot asigura dezvoltarea i multiplicarea lor. Mediile se folosesc pentru izolarea i pstrarea sub form de culturi pure a microorganismelor, precum i pentru identificarea speciilor n funcie de
91 | P a g e

proprietile lor fiziologice. De aceea, asemntoare cu substraturile naturale.

ele

trebuie

fie

ct

mai

Mediile de cultur trebuie s ndeplineasc anumite condiii pentru ca specia microbian s se poat dezvolta: s conin substanele necesare microorganismului precum i ingredientele care s condiioneze creterea sa; substanele trebuie s corespund indicaiilor tehnice, s fie cntrite exact i s fie introduse n recipient n ordinea strict indicat; s aib gradul de alcalinitate sau aciditate (pH) corespunztor dezvoltrii microorganismului respectiv i s-i asigure meninerea n limite compatibile cu creterea lui (prin sisteme tampon); s fie stabil, adic s-i pstreze toate calitile iniiale pe toat durata incubrii; sterilizarea nu trebuie s altereze mediul; acesta trebuie s rmn steril pn n momentul nsmnrii; s asigure condiiile de aerobioz/ anaerobioz corespunztoare microorganismului rspectiv; s fie repartizate n recipiente care s mpiedice contaminarea culturii care se dezvolt n ele, att nainte ct i dup nsmnare; s asigure un anumit grad de umiditate. Clasificarea mediilor de cultur Diversitatea extrem a compoziiei chimice a mediilor de cultur nu permite o clasificare propriu-zis, deoarece suprapunerile apar foarte frecvent. criteriile de clasificare sunt urmtoarele: a. Dup provenien:

medii naturale: de origine vegetal: must de mal, cartof glicerinat etc. de origine animal: lapte, bil, etc

medii artificiale: lichide: bulionul, apa peptonat solide: geloza, gelatin b. Dup compoziie: o

medii uzuale: folosite curent n laborator, pentru cultivarea unui numr mare de microorganisme (bulionul, apa peptonat, geloza, gelatina)
92 | P a g e

medii complexe (compuse): folosite pentru izolarea i creterea unor microorganisme care se dezvolt slab sau nu se dezvolt pe medii simple (geloz-ser, geloz-snge, bulionser etc.) o medii speciale: prin compoziia lor permit creerea preferenial a anumitor specii dintr-un amestec heterogen de microorganisme (dintr-o prob natural). Aceste medii conin un indicator de pH, un zahr fermentescibil, antiseptice selective, antibiotice: medii de mbogire, medii selective, medii elective, medii de conservare, medii de identificare. Prepararea mediilor de cultur se face dup reete, respectnd cu strictee ordinea ingredientelor i condiiile de sterilitate.
o

Culturi i colonii microbiene Cultivarea microorganismelor se face n medii lichide i pe medii solide: Culivate n medii lichide, microorganismele formeaz culturi (fig. 7.17) al cror aspect este diferit n funcie de grup, de specie i de proprietile fizico-chimice ale mediului. Culturile prezint o serie de caracteristici care pot fi utile pentru identificarea speciilor cultivate i pentru eventualele forme de variabilitate: gradul de tulburare a mediului; mirosul pigmentarea culturii

Cultivate pe medii solide, microorganismele se dezvolt sub form de colonii (fig. 7.18). Colonia reprezint o populaie celular rezultat din creterea i multiplicarea uneia sau nai multor celule aparinnd aceleai specii sau tulpini. Caracterizarea coloniilor implic precizarea urmtoarelor aspecte: dimensiunile aspectul marginilor profilul coloniei consistena transparena sau opacitatea culoarea i aderena.

Identificarea bacteriilor Principiul de baz al identificrii bacteriilor este acela de asocia o cultur necunoscut cu locul ei n sistemul de clasificare bazndu-ne pe ct mai multe caracteristici posibile:
93 | P a g e

morfologice: forma, mrimea, coloraia, spori, flageli, capsul fiziologice: determinate cu indicatori din mediu. Sunt disponibile n prezent sisteme miniaturale de cultivare a bacteriilor. Ex. de caractere: enzime ale lanului respirator, heolizine, lipaze, lecitinaze, enzime ale diverselor ci metabolice (glucidice, proteice etc), produi finali de metabolism, chimice: ADN, structura peretelui celular, structura antigenic.

Metodele de genetic molecular sunt extrem de importante i n plin ascensiune. Obiectivul principal al acestor metode este identificarea direct a secvenelor de nucleotide din materialul analizat. Aceste metode sunt utilizate, mai ales, n cazul bacteriilor care nu pot fi cultivate, sunt greu cultivabile sau prezint un timp de nmulire foarte lung. Sunt utilizate urmtoarele metode:

probe de ADN. Din moment ce ADN-ul este dublu catenar, este posibil detectarea secvenelor monocatenare cu tehnici de hibridizare ce utilizeaz lanuri monocatenare marcate radioactiv sau nu. Amplificarea. Obiectivul principal este creterea sensibilitii pentru detectarea mai uoar a ADN-ului, din moment ce acesta se gsete natural, n cantiti extrem de mici. Cea maim utilizat metod este PCR-ul.

*Identificarea prin metode de amplificare i de cipuri genice. n cadrul acestei tehnici, mii de nucleotide specifice bacteriilor patogene umane sunt prezente pe suprafaa unui cip de 2 pe 2 cm. Acest cip este ncrcat cu ADN amplificat din materialul de analiz. Apoi gradul de legare cu secvene complementare este msurat pe baz de fluorescen la un microscop cu laser. Prezena genelor ce dau rezisten la antibiotice poate fi msurat i ea astfel.* Detecia direct a antigenelor bacteriene Antigenele specificae pentru anumite specii sau genuri pot fi detectate direct, utiliznd anticorpi. Exemplele includ detectarea antigenelor bacteriene din LCR n meningitele acute purulenete, detecia antigenelor gonococice din secreiile tractului urogenital.
94 | P a g e

Utilizarea de animale de laborator Testarea pe animale este o tehnic utilizat mai ales n trecut. Pn nu demult, toxinele bacteriene (difteric, tetanic, botulinic) puteau fi confirmate dora pe animale d elaborator. n prezent, sunt utilizate metode genetice care evidenoiaz genele codificatoare de toxine.

V.

Terapia cu antibiotice

Terapia antibacterian specific se bazeaz pe tratarea infeciilor cu ageni specifici mpotriva respectivului patogen. O trstur a acestor farmaceutice este toxicitatea selectiv, ce se refer la aciunea n doze mici asupra bacteriilor, ce nu provoac ru macroorganismului infectat. Cel mai important grup de ageni antiinfecioi este reprezentat de antibiotice. Aceste substane sunt produse de fungi sau bacterii (de obicei Streptomycetes). Fiecare agent antiinfecios are un anumit spectru de aciune, ceea ce nseamn c acioneaz asupra unei nie de bacterii care prezint sensibilitate natural la respectiva substan. Unele antibiotice au un spectru limitat de aciune (vancomicina). Majoritatea au un spectru mai larg, cum sunt tetraciclinele care afecteaz toate bacteriile. Eficacitatea unui agent antiinfecios definete modul n care acesta afecteaz populaia bacterian. Se disting dou efecte de baz: efectul bacteriostatic (reversibilitatea inhibiiei creterii) i efectul bactericid. Multe substane pot dezvolta ambele efecte, n funcie de concentraie, tipul de organism i faza de cretere. Multe dintre aceste antibiotice au i un efect postantibiotic. Acesta const n leziunile pe care le provoac la nivelul populaiei bacteriene, acesteia trebuindu-i o anumit perioad pentru a se recupera i a-i putea relua activitatea. Acest efect poate dura cteva ore. Un agent bacteriostatic singur nu poate elimina total agentul infecios. Vindecarea rezult prin efectul combinat al agenilor antiinfecioi i al sistemului imunitar. n esuturile n care sistemul imunitar este ineficient (endocard), n mijlocul unei infecii purulente, n care nu mai exist fagocite funcionale sau la pacienii imunosupresivi, este nevoie de substane bactericide. Astfel, este important de tiut dac un antibiotic este bactericid sau bacteriostatic. O populaie bacterian care infecteaz un organism va conine ntotdeauna cteva celule rezistente. Dac tratamentul este realizat discontinuu, aceste celule duc la posbile recderi. Tratamentul cu antibiotice poate avea efecte secundare:
95 | P a g e

Efectul toxic se datoreaz lezrii celulelor sau esuturilor gazdei. Trebuie verificat concentraia sanguin a unor substane, n timpul tratamentului, n special n cazul substanelor care se elimin dificil (vancomicina).

Reaciile alergice

Efecte secundare biologice. Ex. nlocuirea sau ndeprtatarea florei normale a organismului. Bacterii problematice. Tulpinile cu rezisten dobndit sunt ntlnite printre enterobacteriacee, stafilococi. Tratamenul acestor infecii ntmpin adesea dificulti. Aceste bacterii sunt responsabile de majoritatea infeciilor nosocomiale. Cauza incidenei ridicate n ceea ce privete rezistena la antibiotice este variabilitatea genetic pronunat. Cu ct sunt administrate mai des tratamente cu antbiotice, cu att mai mult crete numrul de tulpini care dobndesc rezisten. Exist dou teste standard de verificare a nivelului rezistenei bacteriei la antibiotice:

Testul seriei diluiilor: se determin minimul concentraiei substanei inhibitoare pentru blocarea proliferrii celulelor bacteriene. Antibiograma (fig. 7.19): const n inocularea bacteriei pe mediu i aplicarea unor discuri mbibate n diferite tipuri de antibiotice. Cu ct raza cercului format n jurul discului repectiv, unde nu se mai dezvolt bacterii, este mai mare, cu att microrganismul repectiv este mai puin rezistent la antibiotic.

96 | P a g e

Fig. 7.1 Coci

97 | P a g e

Fig. 7.14 Conjugarea la bacterii a. conectarea bacteriilor prin pilii de sex; b. conjugarea efectiv prin formarea unui pod ntre celula receptoare i cea donoare; c. mobilizarea i transferul plasmidului d. ncheierea procesului de replicare a ADN-ului plasmidial

98 | P a g e

Fig. 7.15 Etapele coloraiei compuse Gram

99 | P a g e

Fig. 7.16 Mediu de cultur geloz-snge

Fig. 7.17 Creterea bacteriilor n culturi diverse moduri de dezvoltare a culturii

Fig. 7.18 Colonii bacteriene criterii de identificare a bacteriilor (forma, profil, aspectul marginilor)

100 | P a g e

Fig. 7.19 Antibiograma

CURS 8 Bacteriologie partea special

COCII PATOGENI
Stafilococii sunt bacterii sferice grupate sub form de grmezi. Sunt imobile, productoare de catalaz. Genul Staphylococcus include peste 30 de specii i subspecii. Staphylococcus aureus (i E. coli) sunt printre cele mai frecvente organisme responsabile de infeciile bacteriene la om.

1. Staphylococcus sp.

Staphylococcus aureus (Stafilococul auriu )

101 | P a g e

Figura 8.1 Staphylococcus aureus Microscopie electronic

Figura 8.2 Coloraia Grampozitiv a stafilococului auriu

Figura 8.3 Cultivarea stafilococului auriu pe mediu geloz-snge

Figura 8.4 Furuncule datorate infeciei Staphlococcus aureus la un pacient

Habitat. Este foarte rspndit n natur, stafilococul saprofit se ntlnete n aer, ap, sol, pe tegumente i n cavitile naturale ale oamenilor i animalelor, fcnd parte din flora normal a acestora. n afara celor saprofii, se gsesc i stafilococi potenial patogeni n rinofaringele i intestinul oamenilor sntoi, ntr-un procent de 50%. Acetia, eliminai prin tuse, strnut sau dejecte, pot provoca, atunci cnd ntlnesc organisme sensibile, mbolnviri variate. Caractere morfotinctoriale i de cultur. Stafilococii sunt coci Gram-pozitiv, facultativ anaerobi, necapsulai. Cresc pe mediile uzuale, la 37C. Pe geloz, coloniile sunt rotunde cu diametrul de 1-2 mm, cu
102 | P a g e

marginile regulate. Incolore la nceput, se coloreaz apoi datorit unui pigment, distingndu-se 3 variante : stafilococul alb , citrin si auriu. Rezistena la agenii fizici, chimici i biologici . Stafilococul este un germene rezistent. Rezist 60 minute la 60C. n produsele uscate rezist cteva luni. Alcoolul de 70 l omoar n 60 minute. Iniial sensibili la antibiotice, stafilococii au devenit ulterior din ce in ce mai rezisteni. Caractere de patogenitate. Stafilococul auriu secret numeroase enzime i toxine care determin, mpreun cu antigenele de suprafa, patogeneza. Cele mai importante sunt:

coagulaza, enzim cu ajutorul creia, germenele, prin coagularea plasmei n organism, i creeaz un nveli de fibrin, punndu-se astfel la adpostul aciunii fagocitare. Ea este prezent la 98% din stafilococii patogeni -toxina poate avea efecte letale asupra sistemului nervos central, afecteaz membranele (producnd hemoliz) i este responsabil de o form de dermonecroz hialuronidaza, enzima care, prin degradarea acidului hialuronic, permite difuzarea infectiei in organism. leucocidina afecteaz macrofagele i microfagele prin degranulare exfoliatinele sunt responsabile de de o form de epidermoliz enterotoxinele (A-E, H, G, I) sunt responsabile de toxinfeciile alimentare. Aceste enterotoxine sunt superantigene. Toxina-1 a sindromului de oc toxic (TSST-1) este produs de aproximativ 1% din tulpinile de stafilococ auriu. Este un superantigen care determin apariia ocului toxic, printr-o exagerare a rspunsului imun.

Boala la om. Stafilococul auriu este responsabil de trei tipuri de boli:

Infecii invazive. n acest tip de infecii, patogenii rmn la locul de ptrundere n organism, provocnd infecii locale purulente: infecii ale pielii: furuncule, acnee, foliculite, orjelet (ulcior), suprainfeciile plgilor. infeciile esutului subcutanat: mastite (boal care const n inflamarea glandelor mamare), hidrosadenite (inflamaie purulent a glandelor sudoripare), abcese infecii respiratorii: faringite, bronite, sinuzite, pneumonii, empieme (acumulare de puroi ntr-o cavitate a organismului) infecii ale scheletului: artrite, osteomielite (inflamaie simultan a osului i a mduvei osoase) infecii generalizate: meningite, septicemii, endocardite cu diseminri secundare, cu formare de abcese n diferite organe.
103 | P a g e

Toxicoze. Toxiinfeciile alimentare rezult prin ingerarea de alimente contaminate cu enterotoxine. La cteva ore de la ingestie apar grea, vrsturi i diaree masiv. Formele mixte: Dermatita exfoliativ (eritrodermia sau sindromul omului rou este o afeciune inflamatorie a pielii cu eritem i descuamare care afecteaz ntreaga suprafaa cutanat) cauzat de tulpinile productoare de exfoliatine, care infecteaz suprafaa pielii. Sindromul de oc toxic este cuzat de tulpinile productoare de toxina-1 a sindromului de oc toxic. Simptomele principale sunt hipotensiune, febr, erupie cutanat scarlatiniform. Diagnosticul de laborator. Implic identificarea bacteriilor prin cultivare i microscopie. Diferenierea stafilococului auriu de speciile coagulazo-negative se realizeaz prin detecia coagulazei. Enterotoxinele i TSST-1 sunt identificate prin metode imunologice.

Tratament. n afara metodelor chirurgicale, terapia este bazat pe utilizarea de antibiotice. Agentul antiinfecios este o penicilin penicilinazorezistent, din moment ce 70-80% din tulpini produc penicilinaze Epidemiologie. Sursa de infecie este reprezentat de omul bolnav, n special de cel cu leziuni deschise, dar i de purttorii sntoi. Transmiterea poate fi direct, dar i indirect, prin aer, praf, lenjerie. n mediul spitalicesc, determinrile de laborator au artat c, spre deosebire de restul mediului, proporia de stafilococi rezisteni la antibiotice este de peste 75%. n sectiile de chirurgie, interveniile pot fi compromise prin infectarea pacientului cu stafilococi rezisteni, din mediul nconjurtor. n materniti, mortalitatea cea mai ridicat este provocat de stafilococ. Avnd n vedere rezistena sczut a nou-nscutului, rolul nociv al unui purttor de stafilococ patogen n rndul personalului din aceast secie este evident. Profilaxie. Se vor lua msuri de igiena riguroas n unitile sanitare : -

splarea meticuloas a minilor dup contactul cu pacienii, utilizarea mnuilor la contactul cu plgile i cu mucoasele contaminate, administrarea profilactic de antibiotice pre- i post-operatoare, pentru a preveni infecia plgilor postoperatorii,
104 | P a g e

tratamentul prompt al tuturor infeciilor streptococice, chiar i a celor superficiale, ale pielii i ale esuturilor moi.

Stafilococii coagulazo-negativi
Aceti stafilococi sunt elemente ale florei normale din pielea i mucoasele umane. Sunt oportuniti clasici care produc infecii doar anumitor gazde, cu o predispoziie de ordin imunologic. S. epidermitidis. Este patogenul cel mai frecvent n acest tip de infecii (70-80% din cazuri). Infeciile provocate de stafilococii coagulazonegativi se dateoreaz introducerii n organism a unor corpuri strine. Exemple: catetere sanguine, pace-makers, valve cardiace artificiale etc. Infeciile apar cnd aceste corpuri sunt acoperite de un matrix proteic (fibrinogen) la care se pot ataa bacteriile formnd un biofilm. Stafilococii din acest biofilm sunt protejai de sistemul imun al gazdei i reprezint focare de infecie, producnd septicemii. S. saprophyticus. Este patogenul responsabil de aproximativ 10-20% din infeciile urinare acute, n cazul femeilor tinere.

Streptococul (Streptococcus sp.)

Figura 8.5 Streptococul izolat din lichidul pleural

Figura 8.6 Colonii de streptococ pe agar-snge -hemoliz

Streptococii sunt bacterii de form rotund spre oval, gram-pozitivi, imobili, nesporulai, a cror celule sunt dispuse n lanuri. Nu produc
105 | P a g e

catalaz. Majoritatea sunt componeni ai flori normale a mucoasei. Unii pot fi patogeni. Clasificarea streptococilor se face n funcie de 2 criterii importante: I. Tipul de hemoliz: -hemoliza: pe mediu de cultur agar-snge, coloniile apar nconjurate de zon verde. Aceasta se datoreaz apei oxigenate, care transform hemoglobina n methemoglobin. -hemoliza: pe mediu agar-snge coloniile sunt ncojurate de o zon ntins glbuie, n care nu mai exist hematii ntregi, iar hemoglobina este descompus. -hemoliza: acest termen (impropriu) indic absena unei zone hemolitice vizibile macroscopic. II. Substana C (carbohidrat) sau antigenul Lancefield: exist varieti antigenice numerotate de la A la V. Caractere biochimice si de metabolism. Streptococii sunt n general aerobi, dar exist i tulpini anaerobe. Nu sunt sensibili la aciunea bilei i a srurilor biliare. Rezistena la ageni fizici, chimici i biologici - Indiferent de specie, streptococii sunt distrui la 60 C n 60 min. Apa oxigenat 3%, fenolul 2-5%, tinctura de iod, detergenii cationici omoar streptococii destul de repede. Streptococul beta hemolitic, este foarte sensibil la penicilina.

Streptococcus pyogenes (A Streptococci)

Streptococcus pyogenes este de tip -hemolitic, datorit existenei streptolizinei. Conine antigenul A. Cele mai importante toxine i enzime responsabile de infecie sunt:

Streptolizina O, streptolizina S. Distrug membrana eritrocitelor i a altor celule. Streptolizina O este un antigen. Exotoxinele pirogenice streptococice A, B, C sunt responsabile de febr, exantem (erupie tipic scarlatinei), septicemie i oc toxic. Aceste toxine sunt superantigene. Streptokinazele: dizolv fibrina, facilitnd rspndirea streptococilor n esuturi. Hialuronidaza: degradeaz acidul hialuronic din esutul conjunctiv, care cimenteaz esuturile. Dezoxiribonucleazele: distrug ADN-ul.

Boala la om. Streptococii determin numeroase i foarte variate afeciuni:

106 | P a g e

unor pete roii acoperite de bicue), (boal infectioas, contagioas ce se manifest prin inflamarea i nroirea pielii, localizat cel mai adesea la fa i membre), Adenite (inflamarea ganglionilor limfatici), Angine (inflamaie a gtului), Faringite, Sinuzite, Pleurezii (inflamaie a pleurei), Bronhopneumonii, Peritonite, Pericardite, endocardite, flebite (inflamarea pereilor unor vene), Artrite (inflamarea articulaiilor), Febra puerperal (boal infecioas care apare la luze datorit ptrunderii n uter a unui agent patogen), abcese, flegmoane (inflamatie purulent a esutului subcutanat), Infecii urinare, Septicemii. Sechele:
Erizipel

Impedigo (boal de piele contagioas care se manifest prin apariia

Glomerulonefrita Febra acut reumatic Tratamentul. n afar de antibiotice i chimioterapice, se ntrebuineaz vaccinoterapia sau seroterapia cu ser antitoxic. n cazul streptococilor hemolitici din grupa A, penicilina va fi suficient. Diagnosticul de laborator :

Diagnosticul bacteriologic: izolarea i identificarea germenului. Recoltarea se face n condiii de sterilitatea, i nainte de tratament. Diagnosticul serologic, se face prin dou reacii care urmresc punerea n eviden a unor anticorpi serici : ASLO (antistreptolizina O anticorpul care neutralizeaz streptolizina O, dozarea acestuia este important n urmrirea evoluiei reumatismului) i ASK (antistreptokinaza).

Epidemiologie. Epidemiologia infeciilor streptococice vizeaz n primul rnd scarlatina (boal contagioas la copii, care se manifest prin febr i erupie pe tot corpul, urmat de descuamarea pielii) i angina streptococic, boli frecvent ntlnite n regiunile temperate ale globului, unde afecteaz n general copiii. Sursa de infecie este reprezentat de : Bolnavii de scarlatin tipic, ce sunt infecioi nc din perioada de incubaie.
107 | P a g e

Bolnavii cu amigdalite i faringite streptococice al cror numr, n mediul epidemic este foarte mare. Purttorii sntoi i cei cu infecii inaparente, al crui procent variaz ntre 5-20%. Epidemiile de scarlatin apar n valuri, la intervale de 7 ani.

Streptococcus pneumoniae (pneumococul)

Pneumococul este o bacterie din genul streptococilor, care a fost izolat pentru prima dat n anul 1881, din sput de ctre Louis Pasteur, n Frana. Este un microb aerob, facultativ anaerob. Habitat. Se gsete n flora orofaringian normal la majoritatea populaiei, dar poate fi i un important agent patogen uman, fiind principalul agent patogen al infeciilor pneumococice invazive i non-invazive la copii. Infeciile pneumococice invazive includ pneumonia, meningita i bacteriemia (septicemia); manifestrile non-invazive includ otita medie, sinuzita i bronita. Aproximativ 80% dintre pneumoniile bacteriene sunt determinate de pneumococ. Caractere morfotinctoriale. n produsele patologice i n culturile proaspt izolate din infecii, pneumococii au o form caracteristic de coci ovalari, dispui n diplo sau n lanuri scurte, lanceolai, cu diametrul cuprins intre 0,5-1,25. Sunt imobili, nesporulai.

Figura 8.7 Streptococcus pneumoniae Hemocultur

Rezistena la agenti fizici, chimici si biologici. Pneumococii sunt puin rezisteni la aciunea luminii, uscciunii i a frigului. Germenii mor n 10 min la 52 C. Sunt foarte sensibili la toate antisepticele, i sensibili la
108 | P a g e

aciunea sulfamidelor, penicilinei i la majoritatea antibioticelor cu spectru larg de aciune. Caractere de patogenitate. n mod obinuit, pneumococul se comport ca un microorganism condiionat patogen i devine patogen n anumite condiii, favoriznd morbiditatea, n special n rndul copiilor i btrnilor. Este agentul etiologic al mai mult de 80% din pneumoniile bacteriene i a numeroase cazuri de otite medii, viroze respiratorii, rujeola, tuberculoza , sinuzita , mastoidita (infecia i inflamaia spaiilor de aer cuprinse n osul mastoidian), pleurezia (inflamarea pleurei), bronhopneumonia meningita si septicemia , fiind astfel o cauz important de mortalitate i morbiditate. Pneumonia pneumococic. Simptomele caracteristice sunt: debut brutal, cu febr ridicat (> 39C), frisoane, tuse, junghi toracic. n general este localizat la nivelul lobului inferior al plmnului; bronhopneumonia este mai frecvent la copii i vrstnici. n general, dup o terapie cu antibiotice eficient, vindecarea survine n 2-3 sptmni. Complicaiile sunt rare. Sinuzita i otita medie . Episoadele de otit medie pot s apar la orice vrst, dar cel mai adesea n copilrie, mai ales ntre 3 luni i 3 ani, n timp ce sinuzitele apar mai frecvent la aduli. Otita medie acut este caracterizat de apariia rapid a simptomelor sistemice sau ale urechii medii, incluznd unul sau mai multe din urmtoarele: otalgie (durere de ureche), otoree (scurgere de lichid provenind din ureche), febr, iritabilitate, anorexie, vrsturi. Cea mai comun complicaie a otitei este pierderea temporar a auzului. Afectarea grav a auzului poate s apar dup episoade repetate de otit. Meningita. Are o rat de mortalitate ridicat. Supravieuitorii unei meningite pneumococice pot rmne cu sechele deosebit de importante. Sechelele pe termen lung includ deteriorarea auzului, probleme neurologice focale i narziere mental. Bacteremia (septicemia). 3-5% dintre copii cu vrsta cuprins ntre 3-36 luni fr focare aparente de infecie prezint bacteriemie ocult. Singurul semn clinic al bacteriemiei oculte este febra. Bacteriemia ocult poate progresa spre o bacteriemie nalt, care mult mai probabil poate determina complicaii focale sau boal invaziv sever. Septicemia apare ca o complicaie la 25-30% dintre pacienii cu pneumonie pneumococic i la 80% dintre cei cu meningit pneumococic. Nu apare de obicei ca urmare a sinuzitelor sau otitelor medii. Diagnosticul de laborator const n :

109 | P a g e

recoltarea produselor patologice : secreii nazofaringiene n amigdalite , secreii mucopurulente, expectoraie mucopurulent, exudat pleural purulent, LCR purulent, exudat purulent peritoneal, sput, snge. - examenul direct micro i macroscopic din produsul patologic - izolarea germenului prin nsmnri pe medii adecvate. - identificarea pneumococului prin reacii biochimice i serologice - antibiograma. Imunitatea poate fi dobndit prin boal sau prin vaccinarea antipneumococic. Tratamentul.Terapia antimicrobian este tratamentul etiologic al infeciei cu pneumococ. Majoritatea tulpinilor sunt sensibile la penicilin i eritromicin, ns, deoarece s-au semnalat tot mai frecvent tulpini rezistente la penicilin, eritromicin i azitromicin, efectuarea antibiogramei a devenit necesar. Dozele, calea de administrare i durata tratamentului sunt n funcie de forma clinic de boal. Epidemiologie. Transmiterea se realizeaz pe cale aerian, direct (prin strnut, tuse, contact cu un purttor asimptomatic), sau indirect prin praf contaminat. Purttorii nazofaringieni de pneumococ contribuie la rspndirea infeciei (mai ales n instituiile de ngrijire i n alte spaii comune), avnd un rol important n transmiterea tulpinilor rezistente la antibiotice. Infecia pneumococic are caracter sezonier: n zonele temperate, incidena atinge nivele ridicate iarna i primvara. Factorii de risc pentru infecia cu pneumococ sunt:
splenectomia sau disfuncii grave ale splinei

HIV) vrsta, copiii i btrnii fiind mai frecvent afectai. Factorii favorizani sunt:
instituionalizarea

imunodeficien sau imunosupresie (inclusiv toate stadiile infeciei cu

boli cronice

(risc major pentru transmiterea infeciilor pneumococice rezistente la antibiotice) apartenena la un grup socio-economic defavorizat poluarea aerului expunerea copiilor la fumul de igar este asociat cu creterea incidenei otitei medii. Alptarea este strns asociat cu scderea riscului la otit mediein primul an de via.

Neisseria meningitidis (meningococul)

Meningococul i gonococul sunt cele dou specii de Neisseria strict patogene pentru om. 110 | P a g e

Figura 8.8. Neisseria gonorrhoeae (gonococul)

Figura 8.9. Neisseria meningitidis (meningococul)

Principala boal produs de meningococ este meningita cerebrosplinal meningococic (MCSM). Tipurile serologice de meningococi sunt : A, B, C, x, y, z. Habitat. Germenul nu este ntlnit n natur n stare liber. El se gsete numai la omul bolnav i n secreiile nazofaringiene ale persoanelor purttoare de meningococ. Caractere morfologice i tinctoriale. Meningococii sunt coci Gramnegativi, cu diametrul de 0,6, sferici, ovalari, imobili, nesporulai care, n special n produsele patologice se prezint sub forma caracteristic de diplococi cu aspect de boabe de cafea. Caractere de cultur. Meningococul nu crete pe medii de cultur simple (bulion, geloz); pentru a se dezvolta are nevoie de lichide organice cu coninut bogat n proteine native, ca: sngele, serul. Caractere biochimice i de metabolism. Meningococul este un germene aerob, care se cultiv la temperatura optim cuprins ntre 35-38 C i la un pH optim (7,2-7,4). Rezistena la ageni fizici, chimici i biologici. Sunt germeni extrem de sensibili la variaii de temperatur i pH. Lumina solar, frigul i uscciunea l omoar rapid. Culturile lsate la temperatura laboratorului mor repede. Sunt foarte sensibili la aciunea antisepticelor, sulfamidelor i antibioticelor, n special penicilina.

111 | P a g e

Figura 8.10. Neisseria meningitidis Microscopie electronic

Caractere de patogenitate. La purttorii sntoi de meningococ, germenul populeaz mucoasa rinofaringian, fr a produce leziuni locale sau complicaii. Dintre infeciile cauzate de meningococ, MCSM este boala cea mai important. Infecia meningococic poate disemina pe cale limfatic sau sanguin, producnd meningita sau poate fi localizat la distan pe seroase (articulare, pleurale, endocardice, pericardice). La nivelul tegumentelor, meningococul poate produce erupii eritematoase, pete siale (hemoragice) sau pustuloase. Imunitatea poate fi dobndit cu ajutorul vaccinului antimeningococic. Boala la om. Meningita este o infecie a esuturilor creierului (meningele) i uneori i a lichidului cefalorahidian (LCR) care nconjoar creierul i mduva spinrii. Meningita const n tumefierea (umflarea) esuturilor creierului, i n unele cazuri i a esuturilor mduvei spinrii, numit meningita spinal. Atunci cnd esuturile creierului sunt tumefiate, la celulele creierului ajunge mai puin snge i prin urmare mai puin oxigen. Dac nu se trateaz, n unele cazuri pot s apar sechele ale creierului. Infecia apare mai frecvent la copii, la tinerii cu vasta cuprins ntre 15 - 24 de ani, la vrstnici i la persoane care au o afeciune cronic, precum scderea sistemului imunitar. Meningita poate mbrca forme uoare sau severe, ce pot amenina viaa. De regul, severitatea depinde de microorganismul care a cauzat infecia i de vrsta persoanei, precum i de starea general de sntate a organismului n momentul infectrii. Simptomatologie. Cele mai frecvente simptome ale meningitei includ: - febra; - durere de cap sever i persistena;

112 | P a g e

- gtul este nepenit i dureros, cel mai bine evideniindu-se la ncercarea de a atinge pieptul cu brbia; - vrsturi; - confuzie i un nivel sczut de contien/luciditate; - convulsii (contracii involuntare brute, tonice ale unuia sau mai multor grupe de muchi care apar n accese i sunt nsoite sau nu de pierderea cunotiinei). - oboseal/lenevire, slbiciune, dureri musculare i senzaii ciudate ( furnicturi) sau slbiciune n ntregul corp; - sensibilitatea ochilor i dureri ale ochilor la lumina puternic; - erupie cutanat; - momente de ameeal. La unii oameni pot s apar simptome neobinuite de meningit. Astfel, sugarii, copiii mici, vrstnicii i persoanele cu alte afeciuni medicale pot s nu prezinte simptomele comune ale meningitei. Este posibil s nu se simt bine i s aib energie puin; la sugari semnele de meningit pot fi febra, o iritabilitate care este greu de calmat, scderea poftei de mncare, erupie cutanat, vrsturi i un ipt ascuit. Copii cu vrsta mai mic de 18 luni pot s nu prezinte "nepenirea" gtului; Sugarii mai pot prezenta de asemenea nite pete uor umflate la nivelul capului, care nu se datoreaz plnsului i corpul ncordat. Ei pot plnge atunci cnd sunt luai n brae. Copiii mici cu meningit pot avea manifestri asemntoare gripei, tusei sau tulburri de respiraie. Vrstnicii i persoanele care au alte afeciuni medicale pot prezenta doar o durere de cap uoar i febr. Tratamentul se face prin administrare de antibiotice, de obicei penicilina i sulfamide. Diagnostic de laborator. Se recolteaz probe de LCR, snge, secreii nazofaringiene. Epidemiologie. Microorganismele care cauzeaz meningita pot fi transmise de la o persoan la alta sau transmise de la roztoare sau insecte la oameni. De la o persoan la alta, se poate transmite astfel: n timpul naterii. O mam poate transmite copilului ei microorganismul care cauzeaz meningita, chiar dac mama nu are nici un simptom. Naterea copilului prin cezarian i nu pe cale normal nu l protejeaz ntotdeauna pe copil mpotriva infectrii. prin intermediul materiilor fecale 113 | P a g e

prin tuse sau strnut prin srut, prin contact sexual neprotejat sau prin contactul cu sngele infectat. Profilaxie: evitarea persoanelor care au meningit; separarea persoanelor cu meningit de ceilali din cas; splarea frecvent a minilor n cazul n care avei meningit sau dac avei n ngrijire o persoan cu meningit. evitarea insectelor i a roztoarelor purttoare de microorganisme ce pot cauza meningita.

Neisseria gonorrhoeae (gonococul)

Gonococul este agentul patogen al gonoreei sau al bleronagiei, cea de-a doua boal veneric bacterian major, dup sifilis. Este o specie microbian strict patogen pentru om, care atac cu predilecie mucoasele genitourinare. Habitat. Gonococul paraziteaz omul, fiind gsit pe mucoasa uretral, endocervicala vaginal, rectal. Caractere morfotinctoriale. Sunt coci Gram-negativi, cu diametrul de 0,6-1m, reniformi, nesporulai, aezai cte doi, semnnd cu dou boabe de cafea.

Figura 8.11. Neisseria gonorrhoeae Microscopie electronic Caractere de cultur. Gonococul este un germene aerob, facultativ anaerob, foarte exigent, care nu se cultiv pe medii simple. Rezistena la ageni fizici, chimici i biologici. La temperatura ambiant, gonococii sunt puin rezisteni la uscciune i lumin. Supravieuiesc 2-3h att n secreii ct i n culturi. Cldura i antisepticele l
114 | P a g e

omoar rapid. Sunt, n general, sensibili la penicilin i la antibiotice cu spectru larg. Caractere de patogenitate. Patogenitatea gonococului se manifest prin virulen. La brbat, gonoreea se manifest la nceput, ca o uretrit acut anterioar cu eliminare de puroi prin uretr. Netratat, infecia se extinde la uretra posterioar i apoi la organele anexe ale tractusului urogenital. La femei, se produce mai nti inflamaia colului uterin (endocervicit), nsoit de eliminarea unei secreii mucopurulente prin vagin, iar apoi infecia se poate extinde, producnd inflamaia mucoasei uterine (endometrit), a trompelor (salpingit) i a mucoasei rectale (rectit). Netratat, boala se cronicizeaz. Ocazional, microbul poate infecta mucoasa conjunctiv a nounscutului, genernd oftalmia gonococic i poate provoca vulvovaginita acuta gonococic la fetie. Frecvente sunt complicaiile locale ale aparatului urogenital: cistita (inflamaia vezicii urinare), pielita (inflamaie a mucoasei bazinetului i a rinichilor), orhiepididimita (inflamaia acut sau cronic a testiculului i epididimului) i prostatita (la brbat). Tratamentul se face prin administrare de antibiotice (antibiograma). Diagnosticul de laborator. Se recolteaz secreii mucopurulente uretrale, endocervicale, vaginale, conjunctivale. Simptomatologie. n jumtate dintre cazuri, gonoreea (blenoragia) evolueaz asimptomatic. De multe ori, simptomele ncep s apar atunci cnd infecia s-a extins i n alte regiuni ale corpului. Simptomele iniiale la femei sunt uoare i pot fi confundate cu o infecie urinar. Apar semne precum usturime la urinare, prurit, scurgeri vaginale anormale, sngerri vaginale anormale, dureri pelviene, durere la contact sexual, febra i stare general de oboseala. Atunci cnd gonoreea s-a rspndit i n alte pri ale corpului, apar erupiile cutanate i durerile articulare. La brbai, primele simptome de gonoree apar, n general, la 2-14 zile dup expunerea la bacterie. La inceput, apare o senzaie de furnictua n uretra. Urinatul devine, mai apoi, dureros i se constat o secreie lptoas. Pe msur ce infecia evolueaz, durerea uretral devine mai pronunat i se elimin mari cantiti de secreie dens.

115 | P a g e

Epidemiologie. Blenoragia este o boal transmis pe cale venerian. Sursa de infecie este reprezentat de omul bolnav. Principalele mijloace de prevenire ale infeciei gonococice constau n:

depistarea activ a blenoragiei, prin controale periodice bacteriologice i executarea unui examen de laborator complet, n cazurile n care exist suspiciunea unei infecii cu gonococ. educaie sanitar la nou-nscui, oftalmia gonococic poate fi prevenit prin instilarea n conjunctiv a unei soluii bactericide cu nitrat de Ag (1%), sau cu penicilin, dar mai ales prin diagnosticarea i tratarea corect a gravidelor.

Bacilii patogeni
Bacilii gram pozitivi 1. Bacillus anthracis (bacilul crbunos)

Figura 8.12. Sporii bacilului crbunos

Figura 8.13. Coloraia Gram a bacilului

116 | P a g e

Figura 8.14. Crbunele cutanat

Rspndire. Antraxul se ntlnete n mod primar la animale, n special la erbivore. Patogenii sunt ingerai odat cu alimentele i produc o infecie grav, adesea letal. Morfologie i cultivare. Bacteria crbunoas se prezint sub forma unui bacil lung, cu capetele tiate drept, Gram-pozitiv, imobil, dispus sub forma unor filamente. Este capsulat i sporulat. Sporii sunt foarte rezisteni la cldur, uscciune; n pmnt pot rezista foarte muli ani. Este un microb aerob i facultativ anaerob. Crete uor pe toate mediile de cultur la o temperatur de 37 C, ntr-un mediu neutru sau alcalin. n bulion formeaz un depozit floconos. Pe geloz formeaz colonii mici cu marginile dantelate, culoarea alb-cenuie. Dup 48 de ore devin filamentoase cu margini neregulate. Patogenez i tablou clinic. Patogenitatea bacteriei se datoreaz capsulei antifagocitice, precum i unei toxine care provoac edem i necroz celular. Oamenii se infecteaz de la animale bolnave sau de la produse de origine animal, contaminate. Crbunele (antraxul) este cunoscut ca o boal profesional. Poate invada organismul pe 3 ci principale provocnd tot attea forme de boal: o Pe cale cutant crbunele cutanat o Pe cale respiratorie crbunele respirator o Pe cale digestiv crbunele digestiv. Crbunele cutanat: apare dup o perioad de incubaie de 1-3 zile sub forma unei pustule cu centrul negricios hemoragic nconjurat de o serie de vezicule cu umflarea accentuat a regiunii i a ganglionilor respectivi. Uneori acest proces poate duce la septicemie. Contaminarea se face prin contact cu animale bolnave. Se observ mai ales la persoanele care prin meseria lor intr n contact cu animale.

117 | P a g e

Crbunele pulmonar apare n urma inhalrii sporilor de crbune. Boala ncepe cu frisoane, febr mare, vrsturi, dureri de cap, sput sanguinolent. Este o form grav i moartea poate surveni n 3-5 zile. Crbunele intestinal apare n urma consumrii de carne insuficient fiart, provenit de la un animal bolnav. Boala ncepe cu frisoane, febr, colici abdominale i scaunediaretice cu mucus i snge. Starea general se nrutete, apar fenomene septicemice i moartea survine n 3-6 zile. Diagnosticul de laborator: se examineaz coninutul pustulelor, sngele, sputa sau fecalele omului sau animalelor bolnave. Frotiurile din aceste produse biologice se coloreaz cu metoda gram. Dac este vorba de o infecie crbunoas gsim bacili caracteristici, mari cu capetele tiate drept, colorai n violet, ncapsulai, dispui n lanuri. Pentru punerea diagnosticului chiar n organe putrezite, recoltate de la animale moarte de crbune se utilizeaz o reacie numit reacia Ascoli. Aceast reacie se efectueaz astfel: buci mici din organul respectiv se fierb cteva minute n soluie de clorur sodic izotonic. Se filtreaz apoi prin hrtie de filtru. Lichidul obinut prin filtrare este pus n contact cu serul specific anticrbunos. n caz de reacie pozitiv se produce un precipitat sub forma unui inel la locul de separare al lichidelor. Tratamentul specific al infeciei crbunoase const n administrarea serului specific anticrbunos. Tratamentul cu ser este cu att mai eficace cu ct este ntrebuinat mai aproape de nceputul bolii. n cazurile grave, serul se administreaz n doze mari, utiliznd i calea intravenoas. Antibioticul utilizat este penicilina G. Doxicilina sau ciprofloxacina sunt alternative posibile. Profilaxie: controlul animalelor nainte de tiere, prin dezinfecia pieilor, blnurilor i prului provenit de la animale suspecte, prin vaccinarea preventiv anticrbunoas.

Corynebacterium diphtheriae (Bacilul difteric)

Morfologie i cultivare. Bacilul difteric este o bacterie gram pozitiv, celulele avnd tendin a de a se grupa sub forma literelor V, Y sau sub form de palisad. Prezint incluziuni de polifosfai (corpusculii Babe-Ernst). Mediul Lffler, ce const n ser coagulat i bulion, este nc utilizat pentru culturile primare. De asemenea, se folosete un indicator, care sub aciunea enzimelor produse de bacterie, i modific culoarea. Toxina extracelular. Toxina difteric este alctuit din dou fragmente A i B.

118 | P a g e

Fig. 8.15. Cultivarea bacilului difteric pe mediu cu indicator

Fig. 8.16. Incluziunile de polifosfa i

Fig. 8.17. Pseudomembranele difterice Patogenez i tablou clinic.

Fig. 8.18. Colora ia Gram a bacilului difteric

Infec ia local . Determin infecii ale mucoasei tonsilelor, faringelui, nazale i a conjunctivei. Leziunile tegumentare pot fi, de asemenea, infectate. Patogenul invadeaz gazda prin aceste pori, se reproduce i elibereaz toxina, fapt ce determin distrugeri tisulare. Reacia inflamatorie duce la o colecie de exudat alb-verzui i formarea unei matrici pseudomembrana difteric constnd din fibrin, granulocite moarte i celule epiteliale necrozate. Aceast matrice ader strns la suprafaa mucoasei. Se poate extinde spre laringe, blocnd respiraia. Ganglionii limfatici locali sunt extrem de mrii.
119 | P a g e

Intoxica ia sistemic . Apare degenerarea parenchimal n muchiul cardiac, ficat, rinichi i suprarenale. Nervii cranieni motori paralizeaz. Sechele ulterioare pot aprea dup ce faza acut se retrage. Tulpinile neproduc toare de toxine pot fi rspunztoare de o serie de endocardite sau infecii dermice.

Diagnostic. Metoda cea mai indicat este detecia i identificarea patogenului n culturi realizate din probele biologice. Pe mediul Lffler i pe un mediu selectiv este inoculat secreia recoltat. Identificarea se bazeaz att pe caracterele morfologice, ct i pe cele fiziologice. Toxina este deectat printr-un test de imunodifuziune Outcherlony 1. O metod molecular este utilizat pentru detectarea genei codificatoare de toxin. Detecia toxinei este necesar pentru diferenierea tulpinilor toxigenice de cele nontoxigenice. Tratament. Serul antitoxic reprezint tratamentul primar i trebuie administrat ct mai repede posibil, dac este suspectat aceast infecie. Tratamentul este suplimentat cu penicilin sau eritromicin. Epidemiologie i prevenire. Omul reprezint singurul rezervor pentru aceast bacterie. Sursele de infecie includ persoanele bolnave i purttoare. Boala este transmis prin picturi, mai rar indirect, prin obiecte contaminate. Perioada de incubaie este de 2-5 zile. n Europa incidena este redus. Din 1975 pn n 1984, doar 113 cazuri au fost raportate n Germania. Imunizarea protectiv cu toxoid difteric este cea mai important msur preventiv.

Infec ii provocate de bacili gram pozitivi anaerobi

Infeciile importante din punct de vedere clinic cu bacterii anaerobe sunt relativ comune. Infeciile sunt adesea polimicrobiale bacteriile anaerobe sunt prezente n infecii mixte cu ali anaerobi, facultaiv anaerobi i aerobi. Bacteriile anaerobe sunt prezente n corpul uman pe piele, la suprafaa mucoaselor i, n concentraie ridicat, n tractul gastrointestinal ca parte normal a microbiotei. Infeciile apar atunci cnd anaerobii sau alte bacterii ale florei normale contamineaz regiuni sterile ale corpului. Infecii severe sunt provocate de specii ale genului Clostridium din mediu sau din flora normal: botulism, tetanus, gangren gazoas, toxiinfecii alimentare.

Imunodifuzia radial dubl Ouchterlony este o tehnic de analiz n imunologie n care antigenul i anticorpul difuzeaz radial din godeuri practicate la distan e convenabile n stratul de gel. n zona dintre godeuri unde reactanii au realizat cantitiechivalente apare o linie de precipitare. Metoda este utilizat pentru caracterizarea antigenului dintr-un amestec.
1

120 | P a g e

Clostridium tetani (Bacilul tetanic)

Figura 8.19. Coloraia Gram a bacilului tetanic

Figura 8.20. Contraciile provocate de tetanospasmin

Tetanusul este o boal clostridial acut, manifestrile clinice nu se datoreaz propriu-zis invaziei bacteriene, ci unei neurotoxine. Toxina. Tetanospasmina este un polipeptid care se leag de receptorii neuronali, afectnd transmiterea sinaptic n coarnele anterioare ale mduvii

121 | P a g e

spinrii. Aceasta duce la blocarea impulsurilor inhibitorii dinspre cerebel spre placa motorie. Patogenez i tablou clinic. Acest patogen invadeaz esuturile, n urma unor leziuni. n condiii anaerobe, se nmulete intens i elibereaz toxina care ajunge la nivelul coarnelor anterioare ale mduvii sau la nivelul bulbului rahidian prin transport axonic retrograd. Tabloul clinic datorat efectelor toxinei este caracterizat prin creterea tonusului muscular i apariia de spasme induse de stimuli acustici i vizuali. Contractura apare adesea n muchii faciali (rs sardonic) i se rspndete spre muchii gtului i spatelui (opistotonus). Pacientul rmne lucid. Diagnostic. Metoda cea mai indicat este detectarea toxinei pe un animal de laborator (oarece) n proba recoltat din leziune, pe baz de neutralizare sau pe detectarea genei codificatoare de toxin prin PCR i electroforez. Patogenul este dificil de cultivat. Tratament. Terapia antitoxic cu ser imun este aplicat dup o curare corespunztoare a leziunii. Musculatura pacientului trebuie relaxat cu substane curara2 sau ageni similari. Epidemiologie i profilaxie. Tetanusul este destul de rar n rile dezvoltate datorit practicilor de vaccinare, cu o rat a incidenei de 1 caz la 1 milion locuitori/an. Frecvena bolii este mai mare n rile n curs de dezvoltare sau subdezvoltate. n toat lumea, circa 300.000 persoane contracteaz anual acest agent infecios, cu o rat a letalitii de 50%. Astfel, importana vaccinrii active ca msur de prevenire nu este deloc exagerat. O doz de Td (vaccin ce conine toxoid tetanus i difteric) trebuie administrat o dat la 10 ani pentru a asigura protecie. O doz suplimentar este necesar n cazul unor leziuni severe la pacieni vaccinai cu mai bine de 5 ani n urm, iar n caz de leziuni minore, cu mai bine de 10 ani n urm. Imunoglobulina tetanic uman (250 UI) trebuie administrat la persoane sever afectate, cu o protecie insuficient din partea vaccinului sau dac nu se cunoate isoricul vaccinrilor.

2. Clostridium botulinum (Bacilul botulinic)

Curara compus cu molecul mare ce acioneaz la nivelul receptorilor acetilcolinei, mediator pe care l concureaz; se fixeaz la nivelul receptorilor acetilcolinici de la nivelul plcii motorii, receptori pe care i blocheaz.
2

122 | P a g e

Figura 8.21. Bacilul botulinic

Figura 8.22. Simptomele unei persoane intoxicate cu Clostridium botulinum Botulismul nu este o infecie, ci mai corect o intoxicaie datorat ingerrii toxinei odat cu alimentaia. Botulismul infantil implic ingestia de spori, de asemenea acesta poate aprea ca urmare a contaminrii leziunilor cu toxina botulinic. Toxina. Neurotoxina botulinic este o protein termo-labil. Exist 7 tipuri toxigenice diferite, fiecare producnd o form de toxin imunologic specific. Tipurile A, B i E produc intoxicare la om. Toxina este o metaloproteaz care
123 | P a g e

acioneaz la musculaturii.

nivelul

plcii

motorii,

determinnd

paralizia

flasc

Patogenez i tablou clinic. Botulismul clasic este rezultatul ingerrii de alimente contaminate cu toxina botulinic. Aceasta este absorbit prin tractul gastrointestinal, i apoi transportat pe cale sanguin spre sistemul nervos periferic. ntr-un decurs de cteva ore pn la cteva zile, apar simptomele paraliziei, n special la nivelul nervilor cranieni. Simptomele cele mai frecvente includ vedere dubl, dificulti n nghiire i vorbire, constipaie, uscarea mucoaselor, paralizia pleoapei superioare. Rata letalitii este de 25-70%, n funcie de cantitatea de toxin ingerat. Moartea survine prin paralizia muchilor respiratori. Botulismul prin intermediul leziunilor este foarte rar. Botulismul infantil, descris pentru prima dat n 1976, rezult din ingestia de spori odat cu alimentele (ex. miere). Probabil datorit condiiilor intestinale ale sugarilor pn n 6 luni, sporii sunt capabili s prolifereze i s produc toxina. Letalitatea datorat botulismului infantil este redus (<1%). Diagnostic. Se bazeaz pe detecia toxinei pe oarece prin teste de neutralizare. Tratament. Adminstrarea imediat a antitoxinei polivalente. Epidemiologie i prevenire. Botulismul este o boal rar. Expunerea la toxin se datoreaz lipsei de igien, ce poate fi evitat prin asigurarea unor condiii optime de producere, depozitare i comercializare a alimentelor. Toxina botulinic aerosolizat a fost testat ca arm biologic. Botoxul este un binecunoscut brand pentru un medicament ce conine toxina botulinic de tip A. Preparatele injectabile cu botox pot fi folosite pentru a slbi sau paraliza o parte din muchii faciali care ntind pielea i cauzeaz ridurile i i permit pielii s devin neted. Dup aproximativ 2-7 zile de injecii, ridurile i liniile fine cauzate de expresiile faciale ncep s dispar. Deoarece terapia cu botox are obiective specifice, capacitatea de a forma expresii faciale nu ar trebui s fie afectat. 3. Clostridium perfringens

124 | P a g e

Figura 8.23. Gangrena gazoas

Este agentul cauzator al gangrenei gazoase. Exist cel puin 12 antigene solubile diferite, multe dintre ele fiind toxine. Toate varietile acestei specii produc toxina, o exotoxin hemolitic, necrotic. Celelalte toxine au diverse activiti enzimatice. Patogenul este prezent n mediu. Gangrena gazoas apare cnd cnd esuturile moi sunt contaminate cu acest patogen, cum se ntmpl n cazul accidentelor, avortului septic, rnilor de rzboi. Bacteremia asociat cu acest patogen este, adesea, fatal. Odat ce infecia este iniializat, microorganismele ncep s elibereze toxinele. CO2 i H2 se acumuleaz n esuturi i pot fi detectate clinic (gazele de gangren). Bacteria determin necrozarea esuturilor, care progreseeaz rapid de la nivelul porii de intrare. Diagnosticul. Include depistarea patogenului prin cultivare i microscopie, n urma recoltrii de probe biologice. Identificarea se bazeaz pe caractere morfologie i fiziologice. Tratament. Tratamentul principal este cel chirurgical, nsoit de antibioticoterapie (peniciline, cefalosporine). Tratamenul cu O2 hiperbaric, n centre speciale, a indicat o eficacitate destul de bun. Epidemiologie i prevenire. Gangrena gazoas este relativ rar. Cea mai bun msur preventiv este curarea corespunztoare a leziunilor.

Bacilii acid alcoolorezisten i

125 | P a g e

Mycobacterium tuberculosis (bacilul tuberculozei, bacilul Koch)

Istoric. Bacteria tuberculozei include trei specii. Etiologia tuberculozei, boal cunoscut de mult timp la om, a fost lmurit n 1882 de ctre Robert Koch, pe baza izolrii regulate a patogenului din leziuni. Tuberculoza este, fr ndoial, una dintre cela mai studiate boli la om. innd cont de faptul c poate infecta orice organ din corp, este de neles de ce este studiat de mai multe discipline, n afar de microbiologie i patologie. Morfologie i cultur. Bacilul este subire, nesporulat i imobil. Poate fi pus n eviden prin coloraie special (Ziehl-Neelsen, fluorescen). Este obligat aerob. Celulele sunt cultivate pe medii cu un coninut ridicat de lipide (ex. medii pe baz de glicerin i extract de ou). Timpul necesar cultivrii este de 3-8 sptmni, la 37 C. Peretele celular conine acizi micolici, micozide care mpiedic fixarea coloraiei Gram. Tuberculina este o protein produs de acest agent patogen i utilizat pentru testarea expunerii la acesta. Patogenez i tablou clinic. Este necesar diferenierea ntre tuberculoza primar i cea secundar (reactivarea celei primare). Simptomele clinice se bazeaz pe reaciile sistemului imunitar la antigenele bacilului Koch. Tuberculoza primar . n majoritatea cazurilor, patogenul ptrunde n plmn prin picturi. La nivelul plmnilor, ptrunde n macrofagele alveolare, unde se nmulete. n 10-14 zile, apare o reacie inflamatorie, aa-numitul focar primar. De aici, bacteria migreaz n ganglionii de la nivelul hilului, unde determin mrirea acestora. Att n focarul primar, ct i n ganglioni apar granuloame. De asemenea, rezult o reacie alergic la tuberculin. Evoluia bolii depinde de imunitatea celular a organismului gazd. Se poate observa diseminarea bacteriei, inclusiv n alte organe, pe cale sanguin. Gazda reu ete, n 90% dintre cazuri s izoleze patogenul: granuloamele se fibrozeaz, cicatrizeaz sau se calcific i infecia rmne silenioas.

126 | P a g e

Figura 8.24. Bacilul Koch Figura 8.25. Stadiile infec iei cu imagine la microscopul electronic bacilul Koch Figura 8.26. Pl mn formolizat afectat de tuberculoz

127 | P a g e

Figura 8.27. Organele afectate de tuberculoz Tuberculoza secundar . La 10% din persoanele cu tuberculoz primar, se reactiveaz, devenind o tuberculoz organic. Reinfecia exogen este rar. Reactivarea ncepe cu o necroz din centrul granuloamelor (tuberculilor) ce poate evolua spre cavern. Reactivarea se produce ncepnd din focarele cele mai vechi. Sistemul imunitar este dep it datorit numrului mare de celule patogene. Pe cale sanguin sau limfatic, bacteriile se pot rspndi spre alte organe. Teoretic, toate organele pot fi infectate de aceast bacterie, astfel de infecii numindu-se tuberculoz extrapulmonar. Imunitate. Omul prezint un grad ridicat de rezisten genetic la acest bacil. n afara acesteia, organismul dobndete o imunitate incomplet n urma expunerii iniiale. Aceast imunitate este caracterizat prin prin localizarea bacilului ntr-o regiune cu diseminare limitat. Reac ia la tuberculin . Un organism infectat cu bacilul tuberculozei prezint un mecanism de reacie alterat, alergia la tuberculin. Reacia la tuberculin, pozitiv dup 6-14 zile de la infecie, confirm alergia. Proteinele tuberculinice sunt izolate drept tuberculin purificat. 5 uniti tuberculinice sunt aplicate intracutant n testul tuberculinei. Dac reacia este negativ, doza este crescut secvenial pn la 250 uniti tuberculinice. O reacie pozitiv apare n 48-72 ore sub forma unei inflamaii cu diametrul de minim 10 mm n diametru, la locul de injecie. O reacie pozitiv indic faptul c o persoan este fie infectat, fie vaccinat cu BCG. Este important a se nelege c o reacie pozitiv nu indic obligatoriu o infecie activ sau statusul imun. n timp ce o persoan testat pozitiv ar putea avea un grad de imunitate specific, nu nseamn i c aceasta este total. Jumtate dintre
128 | P a g e

cazurile de tuberculoz simptomatic sunt reactivri secundare care apar la persoane testate pozitiv. Diagnosticul implic microscopie i identificarea patogenului prin cultivare sau prin analize ale ADN-ului. Tratament. Metoda anterioar de terapie pe termen lung n sanatorii a fost nlocuit cu o chemoterapie standardizat. Epidemiologie i prevenire. Tuberculoza are o rspndire endemic. Boala a devenit mai puin frecvent n rile dezvoltate, incidena fiind de 515 noi cazuri la 100 000 de locuitori/an, iar rata mortalitii este de 1/100 000 de locuitori/an. Vzut dintr-o perspectiv global, tuberculoza continu s reprezinte o problem medical major. Se estimeaz c anual se mbolnvesc 15 milioane de persoane i mor 3 milioane. Sursa principal de infecie este reprezentat de omul purttor. Nu exist purttori sntoi. Vitele bolnave nu reprezint o surs semnificativ de infecie. Transmiterea patogenului se face, n general, direct, prin picturi eliminate odat cu tusea. Transmiterea indirect prin praf sau lapte este mai degrab o excepie dect o regul. Perioada de incubaie este de 4-12 sptmni. Profilaxie. Pacienii cu tuberculoz activ trebuie izolai n faza secretorie. Obiectele care intr n contact cu secreiile acestora trebuie dezinfectate. Este disponibil un vaccin activ (BCG) care scade riscul contractrii infeciei la jumtate. Vaccinarea persoanelor testate negativ la tuberculin induce alergie i o imunitate (incomplet) care persist aproxiamtiv 10 ani. n rile cu un nivel sczut al prevalenei tuberculozei, nu se recomand vaccinarea BCG dect copiilor cu un risc ridicat sau adulilor expui la bacterie.

Mycobacterium leprae (bacilul leprei)

129 | P a g e

Figura 8.28. Mycobacterium leprae imagine la microscopul optic

Figura 8.29. Tatuu singurul animal susceptibil la lepr

Morfologie i cultivare. Mycobacterium leprae este agentul responsabil pentru lepr. n termeni morfologici, aceast bacterie este identic cu bacilul tuberculozei. Difer prin faptul c aceasta nu poate fi cultivat pe medii de cultur. Singurul animal susceptibil la lepr este tatuul. Patogenez . Mecanismul patologic este identic cu cel al bacteriei tuberculozei. Organismul gazd ncearc s izoleze infecia prin formarea de granuloame. Granuloamele leproase sunt histopatologic identice cu cele tuberculinice. O cantitate mare de bacterii este adesea prezent n macrofagele granuloamelor. Imunitate. Sistemul imunitar mobilizat mpotriva infeciei este strict celular. Testarea dermic la lepr poate detecta o alergie postinfecie. Testul nu este, ns, foarte specific (poate aprea o reacie pozitiv chiar atunci cnd nu exist o infecie cu bacilul leprei). Cursul clinic diferit al infeciei se datoreaz rspunsurilor diferite ale sistemului imunitar. Tablou clinic. Lepra se manifest, cu precdere, la nivelul pielii, mucoaselor i nervilor periferici. Exist o diferen clinic ntre lepra tuberculoid i cea lepromatoas. De asemenea, exist o serie de forme intermediare. Lepra tuberculoid este forma benign, nonprogresiv caracterizat prin leziuni dermice sub forma unor pete. Forma lepromatoas este caracterizat printr-un curs malign, cu leziuni nodulare i ngroarea nervilor care duce la neuroparalizii. Focarele inflamatorii conin un numr mare de bacterii.

130 | P a g e

Figura 8.30. Leziune leproas Figura 8.31. Macul tuberculoid marginat hipopigmentat n lepra (http://images.md.laneproxy.stan tuberculoas ford.edu) (http://images.md.laneproxy.stan ford.edu/)

Figura 8.32. Leziune tuberculoid Figura 8.33. Noduli n lepra (http://images.md.laneproxy.stan lepromatoas ford.edu/ ) (http://images.md.laneproxy.stan ford.edu/)

131 | P a g e

Figura 8.35. Leziuni active nodulare la nivelul fe ei, n cazul leprei lepromatoase (http://pathmicro.med.sc.edu/fox /leptosy-who4.jpg (WHO/TDR/McDougall)) Diagnostic. Detectarea patogenilor n probele biologice recoltate din mucoasa nazal sau din piele se realizeaz prin examinare la microscop, utiliznd coloraia Ziehl-Neelsen. Este posibil confirmarea molecular a secvenelor de ADN prin PCR i electroforez. Tratament. Formele n care exist un numr mic de celule bacteriene se trateaz timp de 6 luni cu dapsone i rifampicin. Formele n care cantitatea de bacterii este mare necesit tratament timp de cel puin 2 ani cu dapsone, rifampicin i clofazimin. Epidemiologie i prevenire. Lepra este rar n rile dezvoltate, n rile n curs de dezvoltare este nc frecvent. Se estimeaz c exist circa 11 milioane de victime pe glob. Persoanele infectate transmit cel mai frecvent boala, mai rar se poate lua i de la tatuu. Modul exact de transmitere a patogenului este nc necunoscut. Se consider c are loc prin contactul direct cu leziunile mucoasei, tegumentului sau pe cale aerogen. Perioda de incubaie este cuprins ntre 2 i 20 ani. Izolarea pacienilor care urmeaz tratament nu mai este necesar.

Figura 8.34. Ulcera ie la nivelul piciorului ca urmare a leprei

Bacilii gram negativi Enterobacteriaceae

132 | P a g e

Defini ie i importan . mpreun cu familia Vibrionaceae i cu alte familii, aceasta formeaz grupul bacililor gram negativi, facultativ anaerobi. Habitatul lor natural este reprezentat de tractul intestinal al omului i animalelor. Unele specii produc infecii specifice. n timp ce unele sunt facultativ patogene, reprezint totui cele mai frecvent izolate bacterii patogene (ex. Escherichia coli). Sunt adesea responsabile de infecii nosocomiale. Un criteriu important n diferenierea reprezentanilor acestei familii este capacitatea de a degrada lactoza. Morfologie i cultivare. Enterobacteriaceele sunt bacili gram negativi, scuri. Multe specii sunt flagelate. Unele prezint capsul. Toate bacteriile acestei familii pot fi cultivate uor. Structura antigenic. Cele mai importante antigene sunt: Antigenele O polizaharide specifice ale membranei externe Antigenele H antigene flagelare cu structur proteic Antigenele K polimeri proteici sau glucidici ai membranei externe. Antigenele F antigene proteice ale fimbriilor. Determinani ai patogenitii. Un numr de factori au rol n patogenitate. Cei mai importani sunt: Factorii adeziunii antigenele de ataare ale fimbriilor, pililor i factorilor de colonizare. Factorii invazivitii invazinele localizate n membrana extern ce faciliteaz ptrunderea n celulele gazd. Exotoxinele: enterotoxinele perturb funcionarea enterocitelor, ceea ce are ca rezultat pierderea de ap i electrolii. Citotoxinele exercit un efect toxic asupra enterocitelor i celulelor endoteliale. Endotoxinele

Salmonella (gastroenterite, febra tifoid i paratifoid)

Toate salmonelele sunt grupate sub o singur specie, Salmonella enterica cu 7 subspecii. Apoape toate subspeciile patogene pentru om sunt reprezentate de Salmonella enterica subsp. enterica. Salmonelele sunt subclasificate n peste 2000 de serovarieti, n funcie de antigenele O i H. Febra tifoid este cauzat de serovarietile typhi i paratyphi A, B i C. Patogenez i tablou clinic. Salmonelele sunt clasificate drept tifice sau enterice, n funcie de tabloul clinic i epidemiologie. Nu se tie de ce salmonelele tifice afecteaz doar omul, n timp ce salmonelele enterice afecteaz i animalele. Febra tifoid . Salmonelele se ataeaz la nivelul celulelor jejunului. Invazia are loc prin endocitoz, transfer i exocitoz. La nivelul ganglionilor mezenterici se multiplic, De aici, pe cale sanguin i limfatic are loc diseminarea. Focare secundare apar n splin, ficat, mduva osoas, ductele biliare, piele. Boala se manifest prin febr care cre te progresiv pn la 41 C. Alte simptome: confuzie (gr. typhos cea), leucopenie, bradicardie,
133 | P a g e

splenomegalie, roseole abdominale, n a treia sptmn apare diaree, uneori cu sngerri intestinale.

Figura 8.36. Modalitatea de infectare cu bacilul salmonelei

Figura 8.37. Imagine la microscopul electronic a salmonelei la nivelul jejunului Salmoneloza enteric . Celulele se ataeaz la nivelul enterocitelor ileonului i colonului. Invazia mucoasei este indus de ctre invazine. n enterocite produce enterotoxin, inflamaii locale. Se mainifest prin diaree brusc, stare de vom, nsoit uneori de de febr ridicat. Simptomele pot disprea n cteva zile fr terpaie specific. n caz de diaree masiv, pot fi observate simptome datorate pierderilor de ap i electrolii.
134 | P a g e

Diagnostic. Metoda indicat este detectarea patogenului n culturi. Sunt utilizate medii selective pentru izolarea salmonelei din materiile fecale. Identificarea se realizeaz n funcie de metabolismul bacteriei. Clasificarea serovarietile este determinat cu ser specific prin aglutinare. Cultivarea necesit cel puin 2 zile. Febra tifoid poate fi diagnosticat indirect prin msurarea titrului anticorpilor mpotriva antigenelor O i H. Tratament. Febra tifoid trebuie tratat cu ageni antiinfecioi, n timp ce infeciile enterice necesit doar tratament simptomatic. Tratamentul simptomatic implic ncetinirea activitii intestinale (loperamid) i reechilibrarea balanei hidroelectrolitice. Epidemiologie. Cazurile de febr tifoid existente n Europa central i de nord sunt reprezentate de cltori. Omul reprezint singurul rezervor de infecie. n mod contrar, salmonelozele enterice apar att endemic, ct i epidemic. Datele privind morbiditatea real sunt greu de obinut datorit cazurilor neraportate. Patogenul este transmis prin alimente contaminate cu fecale. Vaccinarea mpotriva febrei tifoide pentru cei care cltoresc n zone endemice se face cu vaccinul atenuat, oral Virotif Ty 21a.

Shigella (Bacilul dizenteric)

Clasificare. Genul Shigella include 4 specii: S. dysenteriae, S. flexneri, S. boydii i S. sonnei. Primele trei specii sunt mprite n 10, 6 i respectiv 15 serovaraiante, n funcie de structura antigenic. Fiind imobile, nu prezint antigene flagelare. Patogenez . Shigelele sunt patogene doar pentru om. Patogenii sunt ingerai pe cale oral. Cteva sute de bacterii sunt suficiente pentru a produce infecia. Se localizeaz la nivelul ileonului terminal i la nivelul colonului, unde ptrund n mucoas n enterocite. Shigella dysenteriae produce shigatoxina. Toxina inhib sinteza proteinelor celulelor eucariote, contribuind la distrugerea acestora. Tablou clinic. Dup o perioad de incubaie de 2-5 zile, boala se manifest prin diaree apoas. Mai trziu, materiile fecale pot conine mucus, puroi i snge. Dureri abdominale, tenesme i febr sunt observate n decursul infeciei. Complicaiile includ sngerri intestinale masive i perforarea peritoneului. Diagnosticul necesit identificarea patogenului n culturi. Pentru cultura primar este necesar combinarea mediilor selective cu cele care conin indicatori. Serovarientele sunt identificate prin aglutinare cu ser specific. Tratament. Agenii antiinfecioi formeaz prima linie a tratamentului (aminopeniciline, cefalosporine). Pierderile de ap i electrolii trebuie nlocuite.

135 | P a g e

Figura 8.38. Imagine la microscopul electronic bacilul dizenteric

Figura 8.39. Imagine care surprinde transmiterea bacteriei n cazul persoanelor ncarcerate

Epidemiologie i prevenire. Dizenteria bacterian este rspndit n toat lumea, doar sporadic n rile dezvoltate. Sursa de infecie este reprezentat doar de om, persoanele infectate care elimin patogenul pn la 6 sptmni. Transmiterea se face direct, prin contactul ca materiile fecale sau indirect prin ap i alimente contaminate. Controlul dizenteriei include msuri de prevenire a contactului cu patogenul.

Escherichia coli (bacilul coli)

Caractere generale. Habitatul natural al E. coli este reprezentat de intestinul omului i animalelor. Aceast bacterie este utilizat ca un indicator al contaminrii apei potabile, menajere i a alimentelor cu fecale. Apa de but nu trebuie s conin deloc patogenul. Apele pentru scldat nu trebuie s conin mai mult de 2000 celule/100 ml. Bacilul coli este un important patogen pentru om. Este cea mai frecvent izolat bacterie din materialele patologice. Morfologie, cultur i structur antigenic . Celulele sunt bacili drepi, peritrichi. Degradeaz lactoza. Structura antigenic complex a acestei bacterii se bazeaz pe antigenele O, K i H. Patogeneza i tabloul clinic al infeciilor extraintestinale. Infeciile extraintestinale rezult din relocalizarea bacterii n alte regiuni ale corpului, unde nu ar trebui s se gseasc. Aici, dac gsesc condiii favorabile, se nmulesc producnd leziunile specifice. Infec ii ale tractului urinar. Aceste infecii se pot manifesta doar n partea inferioar a tractului (uretrite, cistite, uretrocistite) sau pot afecta pelvisul renal i rinichii (cistopielite, pielonefrite). n infecii urinarea acute,
136 | P a g e

bacilul coli este agentul incriminat n 70-80% din cazuri i n 40-50% din cazurile cronice. Infeciile tractului urinar apar ca urmare a ascensiunii patogenului de la nivelul orificiului uretral. Dezvoltarea infeciei este fvorizat de anomalii obstructive, de un reflux vezicouretral. Infeciile care nu se datoreaz anomaliilor fizice, sunt adesea provocate de varianta UPEC (E. coli uropatogen). Tulpinile UPEC se pot ataa specific la receptorii mucoasei pelvisului renal. Septicemie. E. coli cauzeaz circa 15% din septicemiile nosocomiale. Septicemiile provocate de E. coli sunt provocate mai ales de serovarianta SEPEC, ce prezint sero-rezisten. Alte infecii cu E. coli. Infecii ale leziunilor, infecii ale colecistului i ductelor biliare, apendicite, peritonite, meningite la nou-nscui i la btrni.

Figura 8.40. E. coli imagine la microscopul electronic

Figura 8.41. E. coli imagine la microscopul optic (colora ia Gram)

Patogeneza i tabloul clinic al infec iilor intestinale. E. coli care provoac infecii intestinale sunt clasificate n 5 variante cu tablou clinic diferit: E. coli enteropatogen. Aceast bacterie cauzeaz diaree epidemic sau sporadic la copii, mai rar n rile dezvoltate, dar un important factor al mortalitii infantile n rile n curs de dezvoltare. E. coli enterotoxic. Patogenitatea acestei bacterii se datoreaz unor enterotoxine. Unele tulpini produc toate aceste toxine, altele doar una. Se manifest prin diaree apoas masiv. Boala poate aprea la orice vrst. Imunitatea rezultat n urma infeciei poate dura cteva luni. E. coli enteroinvaziv. Aceast tulpin poate ptrunde n mucoasa colonului, unde provoac ulcere i leziuni inflamatorii. Patogeneza i tabloul clinic sunt la fel ca n dizenteria bacterian. E. coli enterohemoragic. Aceste bacterii sunt responsabile de colitele hemoragice i sindromul hemolitic-uremic care apar n 5% din cazurile
137 | P a g e

cu o astfel de infecie. Acestea sunt nsoite de trombocitopenie, anemie i cedarea acut a funciei renale. E. coli enteroagregativ. Aceast bacterie produce diaree apoas i uneori hemoragic la nou-nscui i copii mici. Diagnostic. Infeciile extraintestinale sunt diagnosticate prin identificarea patogenului n materiale biologice relevante. Diagnosticul infeciilor urinare necesit numrarea celulelor bacteriene, pentru a distinge contaminarea de infecie. Mai mult de 105 celule/ml indic infecie, sub 103/ml contaminare, 104/ml putnd reprezenta att contaminare, ct i infecie. Identificarea genic este utilizat pentru identificarea mai rapid a tulpinii. Tratament. Antibioticoterapia trebuie s ia n considerare rezistena patogenului. Aminopenicilinele, cefalosporinele, ureidopenicilinele sau cotrimaxizolul sunt ageni posibili. Diareele severe necesit nlocuirea fluidelor i electroliilor. Cnd este cazul, motilitatea intestinal este ncetinit cu loperamid. Epidemiologie i prevenire. Transmiterea infeciilor intestinale se face, de obicei, indirect prin alimente, ap de but sau menajer. 50% dintre cazurile de diaree la cei care cltoresc sunt cauzate de E. coli. Cea mai eficient msur de prevenire a infeciilor intestinale este consumul de ap dezinfectat i alimente bine preparate termic. Se mai poate utiliza o chemoprofilaxie, cu ageni antiinfecioi care s nu reduc microbiota intestinal. Aceast metod este greu de pus n practic, datorit numrul mare de cltori.

Vibrio cholerae (vibrionul holeric)

Morfologie i cultur . Vibrionii holerici sunt bacterii Gram-negative, cu aspect de virgul, monotriche. Vibrionul poate fi cultivat la 37 C, pe un mediu nutritiv simplu, n atmosfer normal. Bacteria prefer un mediu uor alcalin (pH 9). Toxina holeric. Toxina holeric este singura cauz a patogeniei acestei bacterii. Substana determin creterea secreiei de electrolii, mai ales a Cl-, fapt ce determin i pierderea de ap.

138 | P a g e

Figura 8.42. Vibrionul holeric imagine la microscopul electronic

Figura 8.43. Epidemie de holer

Patogenez i tablou clinic. Infecia rezult prin ingerarea patogenului. Doza infectiv trebuie s fie mare, din moment ce multe celule sunt distruse de pH acid al sucului gastric. Datorit stabilitii ridicate la pH alcalin, celulele pot coloniza mucoasa poriunii proximale a intestinului subire i produc toxina holeric. Patogenul nu invadeaz mucoasa. Perioada de incubaie este de 2-5 zile. Tabloul clinic se caracterizeaz printr-o diaree i vom abundente. Cantitatea de fluide pierdute n fiecare zi poate depi 20 l. Alte simptome derivate din deshidratare sunt: hipotensiune, tahicardie, anurie, hipotermie. Letalitatea dep ete 50%, n cazul lipsei tratamentului. Diagnostic. Necesit identificarea patogenului din materiile fecale i din vom. Uneori, un diagnostic microscopic rapid poate evidenia celulele Gram-negative. Cultivarea se face pe medii selective lichide sau solide (ap peptonat alcalin). Coloniile suspecte sunt identificate prin metode biochimice sau prin detecia antigenelor n reacii de aglutinare. Tratament. Cel mai important tratament este restabilirea echilibrului hidro-electrolitic al corpului. n al doilea rnd, se pot utiliza tetracicline i cotrimoxazol, mai ales pentru a reduce cantitatea de materii fecale i perioada de secreie a patogenului. Epidemiologie i prevenire. Europa secolului al XIX-lea a experimentat o serie de pandemii holerice. n ultimele decenii, cu excepia unor epidemii minore n Spania i Italia, Europa i SUA au fost cruate de acest patogen. n America de Sud s-au nregistrat n ultimii ani o serie de epidemii. Omul reprezint singura surs de infecie. Persoanele infectate elimin o cantitate mare de microorganisme. Persoanele aflate n convalescen pot continua s elimine patogenul timp de cteva sptmni sau chiar luni dup ce infecia a fost stopat. Transmiterea microorganismului se face de obicei prin alimente contaminate, n particular prin apa de but. Aceasta explic de ce aceast infecie ia proporii epidemice n rile n care igiena este precar. n general, controlul holerei se
139 | P a g e

face prin pstrarea unei igiene riguroase a apei i alimentelor i ndeprtarea corespunztoare a materiilor fecale. n caz de epidemii, persoanele infectate trebuie izolate. Dejeciile infectate i obiectele contaminate trebuie dezinfectate. Chiar i cazurile neconfirmate nc trebuie anunate autoritilor sanitare. Este disponibil un vaccin ce conine microorganismul inactivat i unul ce conine microorganismul atenuat. Imunitatea nu este permanent, fiind valabil doar 6 luni.

Spirochetele Treponema sp. (spirochetele sifilitice)

Generalit i. Treponema pallidum subsp. pallidum este agentul responsabil al sifilisului. Celulele pot fi evideniate foarte uor cu ajutorul unui microscop cu cmp ntunecat. Nu pot fi cultivate pe medii de cultur artificiale. Sifilisul afecteaz doar omul. Patogenul este transmis prin contact direct, mai ales prin cel sexual. Invadeaz estul conjunctiv subcutanat i subseros prin microtraume ale pielii sau mucoaselor. Infecia progreseaz n 3 stadii, denumite sifilis primar, secundar i teriar. Stadiul primar se caracterizeaz printr-o leziune primar nedureroas i limfadenit local. Diseminarea duce la stadiul II, caracterizat prin polilimfadenopatie, precum i exantem i enantem generalizat. Stadiul III este submprit n sifilis cardiovascular, neurosifilis i gomele sifilitice. n stadiile I i II, patogenul zolat din leziuni poate fi observat la microscop. Serodiagnosticul include Reacia de floculare VDRL, TP-PA i testul indirect de imunofluorescen FTAABS. Tratamentul const n administrarea de penicilin G. Boala este rspndit n toat lumea. Msurile preventive constau mai ales, n protecia fa de expunerea la patogen. Morfologie i cultivare. Aceste organisme se prezint sub form alungit, cu 10-20 ture de spir, deplasndu-se prin rotaii de-a lungul axului longitudinal. Diametrul transversal, fiind foarte ngust, nu permite evidenierea celulelor prin coloraie. Pot fi observate in vivo utiliznd microscopul cu cmp ntunecat. Nu au putut fi cultivate in vitro.

Figura 8.44. Treponema pallidum imagine la microscopul optic cu

Figura 8.49. Sifilisul primar ( ancrul sifilitic) localizare la

140 | P a g e

fond ntunecat

nivelul minilor

Figura 8.50. Sifilisul primar ( ancrul sifilitic) localizare la nivelul glandului penisului

Figura 8.51. Sifilisul secundar

Patogenez i tablou clinic. Sifilisul afecteaz doar omul. Boala este transmis, cel mai adesea, prin contact sexual. Infecia are loc datorit contactului direct cu leziunile care conin patogenul. Acesta ptrunde n organism prin microtraume ale pielii sau mucoaselor. Perioada de incubaie este de 2-4 sptmni. Netratat, evolueaz n mai multe stadii: Stadiul I (sifilisul primar). Se manifest prin apariia unei leziuni dure, nedureroase care apoi se infiltreaz i se dezintegreaz sub forma unei ulceraii. Aceast leziune poart denumirea de ancru de inoculare. Este nsoit de limfadenit, nedureroas. Treponemele pot fi detectate n ulcer. Stadiul II (sifilisul secundar). Generalizarea infeciei apare dup 4-8 sptmni de la sifilisul primar. Cele mai frecvente simptome clinice includ micropolilimfadenopatie i exantem macular sau papuloscvamos i enantem. Pot fi detectate numeroase microorganisme n rozeolele sifilitice. Sifilisul latent. Stadiul bolii n care nu sunt prezente simptome clinice vizibile, dar patogenul este prezent n corp i anticorpii serici sunt pozitivi. Aceast perioad este submprit ntr-una incipient (4 ani) i una trzie (peste 4 ani). Stadiul III (sifilisul ter iar). Se manifest prin apariia gomelor sifilitice la nivelul pielii, mucoasei i diferitelor organe. Dezintegrarea esuturilor este destul de frecvent. Leziunile sunt puin contagioase. Sifilisul cardiovascular: endarterit obliterant, aortit sifilitic. Sifilisul nervos: se observ dou mari categorii: sifilisul meningovascular (endarterit obliterant a vaselor mici meningeale, encefalice i ale mduvei spinale; sifilisul parenchimatos (distrugerea neuronilor din cortexul cerebral sau din mduva spinrii. Sifilisul congenital. Const n transmiterea patogenului de la mam la ft dup patru luni de sarcin. Duce la avort sau la afectarea sever a ftului.
141 | P a g e

Diagnostic. Examenul de laborator include att izolarea, ct i identificarea patogenului i a anticorpilor. Identificarea patogenului. Acesta este detectabil doar n fluidul extras din ancrul primar, din secreiile rozeolelor sifilitice sau din biopsia ganglionilor limfatici. Metode: imunofluorescen direct sau microscopie cu cmp ntunecat. Identificarea anticorpilor. Pot fi identificate dou categorii: Anticorpii antilipoidali. Produi ca rspuns la fosfolipidele mitocondriilor celulelor somatice dezintegrate. Antigenul utilizat pentru reacie este cardiolipina, un extract lipidic din miocardul bovinelor. Acest test serologic este realizat n acord cu standardele Laboratoarelor de Cercetare A Bolilor Venerice (Veneral Disease Research Laboratory) din SUA i este cunoscut sub denumirea de reacia de floculare VDRL. Anticorpii antitreponema: Aglutinarea particulei Treponemei pallidum (Treponema pallidum particle agglutination) TP-PA. Acest test nlocuiete o variant mai veche (Analiza hemaglutinrii Treponemei pallidum) TP-HA. Antigenele (suspensii ultrasonicate de Treponema pallidum cultivate n testicule de iepure) sunt cuplate cu hematii. Testul de imunofluorescen (FTA-ABS). n acest test de absorbie fluorescent a anticorpilor treponemei, antigenul const n celule omorte i montate pe lam, acoperite cu serul pacientului. Legarea anticorpilor este detectat prin anticorpi anti IgG umane marcai cu fluorescein. Pot fi identificai i anticorpii IgM antitreponema prin reacie cu anticorpi anti IgM umane (19S-FTA-ABS). Serodiagnosticul este utilizat astfel: Screening: TP-PA sau TPHA (calitativ) Diagnosticul primar: TP-PA sau TPHA, VDRL, FTA-ABS (calitative) Diagnostic special: VDRL (cantitativ), 19S-FTA-ABS Reuita tratamentului este dat de testul cantitativ VDRL. Testul 19S-FTAABS este utilizat pentru a lmuri dac rezultatul pozitiv al diagnosticului primar se datoreaz unei infecii mai vechi sau este o infecie recent. Tratament. Antibioticul utilizat este penicilina G. Doza i durata tratamentului depind de stadiul bolii i de formula penicilinei utilizate. Epidemiologie i prevenire. Sifilisul este rspndit n toat lumea. Nivelul prevalenei anuale n Europa i SUA este de 10-30 cazuri noi/100 000 locuitori. Msura de prevenire cea mai important este evitarea oricrui contact cu leziunile sifilitice. Cnd se diagnosticheaz un caz, trebuie determinat sursa primar, pacientului respectiv trebuind s i se administreze de urgen tratament. Nu exist vaccin.

Leptospirele
Generalit i. Specia Leptospira interrogans este subclasificat n peste 100 serovarieti, n funcie de antigenele de suprafa. Aceste organisme se prezint sub forma unor spirochete i pot fi cultivate in vitro.
142 | P a g e

Leptospiroza este o zoonoz rspndit n toat lumea. Singura surs de infecie este reprezentat de ctre animalele domestice (porcii) i roztoare care elimin patogenul prin urin. Dup contact, leptospirele ptrund n piele sau mucoase, pe cale sanguin sunt diseminate i produc o vasculit generalizat n diferite organe. Perioada de incubaie este cuprins ntre 7 i 12 zile. Boala se prezint iniial ca septicemie, urmat de 3-7 zile de aanumitul stadiu imun. n forma moderat, leptospiroza anicteric, cea mai frecvent manifestare este meningita aseptic. Forma icteric poate determina disfuncii hepatice i renale, disrupii cardiovasculare i hemoragii. Metoda de diagnosticare este identificarea anticorpilor n reacia de liz-aglutinare. Antibioticul utilizat este penicilina G.

Figura 8.52. Modalitatea de transmisie a spirochetelor prin intermediul urinii obolanilor Morfologie i cultur . Leptospirele sunt spirochete subiri, lipsite de flageli, motilitatea datorndu-se rotaiilor executate de celule. Vizualizarea leptospirelor se poate face prin utilizarea microscopului cu cmp ntunecat sau cu contrast de faz. Leptospirele pot fi cultivate pe medii speciale n condiii aerobe la temperaturi cuprinse ntre 27 i 30 C. Patogenez i tablou clinic. Leptospirele invadeaz organismul uman prin microleziuni ale pielii sau prin mucoasa conjunctival intact. Nu exist semne de inflamaie la poarta de intrare. Microorganismele se rspndesc n tot corpul, inclusiv n sistemul nervos central, pe cale sanguin. Leptospiroza este o de fapt o vasculit generalizat. Patogenul afecteaz mai ales celulele endoteliale ale capilarelor, ceea ce duce la o mai mare permeabilitate i la hemoragii, ntrerupnd transportul oxigenului spre esuturi. Icterul este provocat de disfuncia non necrotic a hepatocitelor. Perturbarea funciei renale se datoreaz hipoxiei de la nivelul tubilor renali.
143 | P a g e

O distincie clinic se face ntre leptospiroza anicteric, cu o evoluie mai puin grav i forma icteric, mult mai sever. Ambele forme sunt caracterizate prin febr cu frisoane, dureri de cap i mialgie, care se instaleaz dup o perioad de incubaie de 7-12 zile. Stadiul septic iniial dureaz ntre 3 i 7 zile i este urmat de stadiul al doilea, aanumitul stadiu imun, care dureaz ntre 4 i 30 zile. Cea mai important manifestare clinic a stadiului doi al formei anicterice este meningita aseptic. Stadiul al doilea al formei mai severe este caracterizat prin disfuncii renale i hepatice, hemoragii extinse, simptome cardiovasculare i tulburri de con tien . Imunitatea dobndit n urma infeciei este de durat, dar mpotriva unei singure serovarieti. Diagnostic. Detecia i identificarea leptospirelor este realizat prin creterea microorganismelor n culturi. Sngele, lichidul cefalorahidian, urina sau biopsia de organe, care trebuie s nu fie contaminate cu alte bacterii, sunt incubate n medii speciale la 27-30 C timp de 3-4 sptmni. O analiz la microscopul cu cmp ntunecat este realizat sptmnal pentru a se observa dac bacteria se dezvolt. Leptospirele sunt identificate serologic printr-o reacie de aglutinare. Anticorpii produi dup prima sptmn de infecie sunt detectai n serul pacienilor printr-un test cantitativ de lizaglutinare. Tratamentul. Se utilizeaz penicilina G. Epidemiologie i prevenire. Leptospirozele sunt zoonoze tipice. Sunt raportate cazuri n fiecare continent att la om, ct i la animale. Cea mai important surs de infecie sunt roztoarele i animalele domestice, n special porcii. Animalele elimin patogenul n urin. Leptospirele sunt puine rezistente la uscciune, astfel nct infeciile au loc datorit mediului umed contaminat cu urin. Persoanele cele mai expuse sunt fermierii, mcelarii, muncitorii care lucreaz cu animale. Prevenirea infeciilor implic evitarea contactului cu materiale ce conin patogenul, controlul roztoarelor i tratarea corespunztoare a animalelor domestice. Nu este necesar izolarea persoanelor infectate. Nu exist un vaccin comercializat.

144 | P a g e

PARTEA IV. MICOLOGIE

145 | P a g e

Curs 9 micozele)

Micologie

(partea

general,

Curs 9 Micologie
Micozele sunt boli provocate de ciuperci parazite, iar micologia este tiina care se ocup cu studiul acestor ciuperci i cu tulburrile pe care le provoac n organismul invadat. Micozele sunt rspndite pe ntreaga suprafa a globului pmntesc, ns distribuia diferitelor specii este, n general, limitat la anumite regiuni. ntre microorganisme, ciupercile formeaz un grup aparte, cu caracteristici care le fac s ocupe un loc special, insuficient precizat. Fungii sunt organisme eucariote rspndite peste tot n natur. Doar 200 dintre cele cteva mii de specii cunoscute au fost identificate ca patogeni ai omului, i dintre acestea, mai puin de o duzin sunt responsabile de 90% dintre infeciile fungice la om. Elementul morfologic de baz al ciupercilor filamentoase l reprezint hifa, iar o reea de hife interconectate formeaz miceliul. Forma tipic a fungilor unicelulari este reprezentat de drojdii. Fungii dimorfici se gsesc sub form unicelular n stadiul parazit, i sub form de miceliu n stadiul saprofit. Peretele celular al fungilor const din circa 90% carbohidrai (chitin, glucani, manani), iar membranele fungilor sunt bogate n steroli diferii de cei prezeni n alte membrane biologice. Fungii filamentoi se reproduc fie asexuat, prin creterea hifelor i extinderea vrfurilor, fie prin spori asexuai. Drojdiile se nmulesc prin nmugurire. Reproducerea sexuat (meioza) pe de alt parte, const n formarea de spori sexuai. Fungii imperfeci sau deuteromicetele sunt un tip de fungi la care lipsete sau nu se cunoate stadiul sexuat. Fungii sunt microorganisme eucariote. Prezint o difereniere mai slab dect plantele, dar mai mare dect a bacteriilor. Regnul fungi grupeaz peste 50 000 de specii diferite, dintre care doar 200 au fost identificate ca patogene pentru om. Multe dintre infeciile micotice sunt relativ inofensive, spre exemplu dermatomicozele. n ultimii ani, totui, numrul crescut de pacieni cu sistemul imunitar deficitar a dus la apariia de micoze mult mai periculoase pentru om. Taxonomia fungilor se bazeaz pe morfologie. n micologia medical, fungii sunt clasificai n funcie de aspectele practice ca: dermatofii, drojdii, mucegaiuri i fungi dimorfici. Mucegaiurile se dezvolt sub form filamentoas, drojdiile unicelulare, iar dermatofiii cauzeaz infecii ale
146 | P a g e

Defini ie i taxonomie

esuturilor cheratinizate (piele, pr, unghii, etc). Fungii dimorfici se pot gsi att sub form unicelular, ct i sub form de reea de filamente. Din punct de vedere al carbonului, fungii sunt heterotrofi. Fungii saprofii preiau carbonul din materia aflat n descompunere, n timp ce fungii biotrofici (parazii sau simbioni) necesit organisme vii. Unii fungi pot fi i saprofii i parazii. Exist dou forme de fungi (Fig. 9.1.): Hifa: element de baz al fungilor filamento i, cu o structur tubular, ramificat. Miceliul reprezint reeaua de hife. Miceliul poate fi difereniat ntr-o parte specializat pentru absorbia nutrienilor din substrat i o parte aerian, specializat n reproducere. Talul fungilor reprezint tot corpul ciupercii. Drojdia: elementul de baz al fungilor unicelulari. Este rotund spre oval, 310 m n diametru. O serie de levuri (drojdii) elipsoidale pot rmne legate ntre ele sub form de hife formnd pseudohife. Dimorfismul: unii fungi se pot gsi att sub form unicelular, ct i sub form de miceliu, n funcie de condiiile de mediu. n stadiul parazit, sunt unicelulari, iar n stadiul saprofit se dezvolt sub form de miceliu. Toi fungii sunt dependeni de o surs de carbon organic, i cu puine excepii, sunt obligatoriu aerobi. Multe specii sunt capabile s-i menin activitatea metabolic n medii simple. Tipurile metabolice cele mai cunoscute sunt: termofile, acidofile i halofile. Proprietile metabolice ale fungilor sunt exploatate n industria alimentar (obinerea pinii, vinului, brnzeturilor, berii sau a unor proteine) i n cea farmaceutic (producerea de antibiotice, enzime, acid citric, etc.). Activitatea metabolic a fungilor poate fi un factor duntor. Infestarea cu fungi poate deteriora alimentele, structurile din lemn, textile etc. Fungii produc numeroase boli ale plantelor, mai ales ale celor cultivate. Reproducerea asexuat. Aceast categorie include propagarea vegetativ a hifelor i fungilor unicelulari, precum i formarea de spori asexuai. Alungirea hifelor ntr-o zon din apropierea vrfului hifelor, unde peretele celular este relativ elastic. Aceast cre tere apical poate include formarea de noduri care dau natere la hife laterale. Drojdiile se nmulesc prin nmugurire. Procesul ncepe prin apariia unei excrescene la suprafaa celulei mam care se dezvolt ntr-o celul fiic (blastoconidie). Orificiul de comunicare ntre cele dou celule este blocat prin formarea unui sept. nmul irea vegetativ . n acest proces se formeaz spori asexua i. Aceste structuri sunt rezistente la factorii externi perturbatori i asigur
147 | P a g e

Morfologie

Metabolismul fungilor

nmul irea fungilor

rspndirea fungilor. Sporii asexuai se gsesc n diferite forme: conidii, sporangiospori, artrospori i blastospori. Aceste forme se dezvolt rar n stadiile parazite. Morfologia sporilor asexuai ai fungilor este un criteriu morfologic important n taxonomie. Reproducerea sexuat. Reproducerea sexuat la fungii perfeci urmrete acelai tipar ca la orice organism eucariot superior. Nucleii a doi parteneri haploizi fuzioneaz pentru a forma un zigot diploid. Nucleul diploid sufer meioza pentru a da natere la nuclei haploizi, celulele cu astfel de nuclei poart denumirea de spori sexua i: zigospori, ascospori i bazidiospori. Sporii sexuai se gsesc rar la fungii parazii la om. Fungii la care nu se cunoate stadiul sexuat se numesc fungi imperfeci.

Aspecte generale ale micozelor

n afara alergiilor fungice (alveolite alergice extrinseci) i micotoxicozelor, infeciile fungice sunt cele mai frecvente boli fungice. Din punct de vedere clinic, micozele sunt clasificate astfel (Fig. 9.2.): Micozele primare (coccidiomicoze, histoplasmoze, blastomicoze) Micozele oportuniste (micoze superficiale i profunde, aspergiloze, mucormicoze, pheohifomicoze, hialohifomicoze, criptococoze, peniciloze, pneumocistoze). Micozele subcutanate (sporotrichoze, cromoblastomicoze, micetom picior de Madura). Micozele cutanate (pityriasis versicolor, dermatomicoze). Se cunosc puine aspecte despre factorii implicai n patogenitatea fungilor. Rezistena natural a macroorganismelor la infecii fungice se bazeaz mai ales pe fagocitoz, iar cea specific se bazeaz pe imunitatea celular. Fungii oportuni ti se dezvolt mai ales la pacienii cu imunitatea sczut. Metodele de diagnosticare ale infeciilor fungice includ cultivare i microscopie pentru a detecta patogenul direct i identificarea anticorpilor specifici. Tratamentul micozelor include poliene (amfotericina B), azoli (itroconazol, fluconazol, voriconazol), alilamine, antimetabolii (5fluorocitozin) i echinocandine (casponfungin). Antimicoticele sunt administrate de multe ori n combinaie.

Alergiile i toxicozele fungice

Sporii fungilor ubicuitari ptrund permanent n tractul respirator odat cu aerul inspirat. Aceti spori conin poteniali alergeni la care indivizii susceptibili pot prezenta hipersensibilitate. n funcie de localizarea reaciei, se poate manifesta ca o rinit alergic, astm bron ic sau alveolit alergic. Multe dintre aceste alergii se datoreaz profesiei (fermieri, lemnari).

Alergiile micotice

Micotoxicoze
Unii fungii produc toxine, cel mai bine cunoscute fiind aflatoxinele produse de specii ale genului Aspergillus. Aceste toxine sunt ingerate cu
148 | P a g e

alimentele n care se dezvolt aceti fungi. Aflatoxina B1 poate contribui la carcinom hepatic primar, o boal ntlnit frecvent n Africa i Asia de sudest. Datele privind incidena general a infeciilor micotice pot fi doar aproximate, din moment ce nu este necesar raportarea cazurilor la autoritile sanitare. Se crede c micozele cutanate sunt printre cele mai frecvente infecii din lume. Micozele primare i oportuniste sunt, pe de alt parte, destul de rare. Micozele oportuniste au crescut n ultimele decade, fiind semnalate mai ales la persoanele cu sistemul imunitar deficitar. Numrul tot mai mare de pacieni cu defecte ale sistemului imunitar i tratamentele agresive sunt factorii care au contribuit la creterea semnificativ a numrului de micoze. Interac iunile gazd -patogen. Factorii care determin tabloul clinic, severitatea unei micoze includ interaciunile dintre patogenitatea fungilor i mecanismele defensive ale gazdei. Comparnd cu bacteriologia, trebuie menionat faptul c se cunosc nc puine aspecte privind cauzele i mecanismele patogenitii fungilor. Omul prezint o rezisten natural destul de ridicat la micoze, prin mecanisme mecanice, umorale i celulare. Printre aceti factori, fagocitoza realizat de neutrofile i macrofage este cea mai important. Contactul intens cu fungii duce la dobndirea unei imuniti specifice, mai ales de tip celular. Rolul imunitii umorale n aprarea specific mpotriva fungilor este secundar. Diagnostic. Problema esenial este identificarea patogenului. Microscopie. Preparate native: fixarea materialului pe lam la cldur cu KOH 10%. Preparate colorate: albastru de metil, albastru de lactofenol, cerneal, etc. Cultivare. Este posibil pe medii uzuale sau selective. Mediu Sabouraud dextroz-agar poate conine ageni selectivi (cloramfenicol). Principalele structuri identificate sunt morfologice, n particular structuri reproductive asexuate sau sexuate. Testele biochimice sunt utilizate pentru identificarea fungilor unicelulari i sunt mai puin importante dect n bacteriologie. Testele serologice. Se realizeaz prin identificarea anticorpilor din serul pacienilor cu antigene fungice. Interpretarea rezultatelor serologice este destul de dificil n infeciile fungice. Detectarea antigenelor. Se face n anumite infecii fungice (criptococoze) prin identificarea antigenelor specifice n materialul supus diagnosticului, utiliznd anticorpi cunoscui. Teste cutanate. Se bazeaz pe alergia la o serie de antigene specifice. Detectarea acizilor nucleici. Combinat cu amplificarea materialului genetic, acest test este util n detectarea rapid a bolilor micotice la pacienii imunodeprimai. Tratament. Este disponibil un numr limitat de ageni antiinfecioi mpotriva fungilor: Amfotericina B. Utilizat n micoze sistemice. Efect fungicid cu frecvente reacii secundare.
149 | P a g e

Micozele

Nistatin, natamicin. Utilizate n micoze ale mucoaselor. Azoli. Aceti ageni blocheaz sinteza ergosterolului. Efectele sunt fungistatice, cu posibile efecte secundare gastrointestinale. Parametrii fiziologici hepatici trebuie monitorizai n timpul tratamentului: Ketoconazol. Unul dintre primii azoli. Nu se mai utilizeaz datorit efectelor secundare. Fluconazol. Administrare oral sau intravenoas. Utilizat mpotriva micozelor de suprafa i sistemice, a meningitelor criptococale la pacienii cu SIDA. Itroconazol. Administrare oral sau intravenoas. Utilizat mpotriva micozelor sistemice i cutanate, de asemenea i mpotriva aspergilozelor. Voriconazol. Administrare oral sau intravenoas. Activitate bun mpotriva aspergilozelor i a candidozei. Antimetaboli ii. 5-fluorocitozina interfereaz cu sinteza ADN-ului (analog al cisteinei). Alilaminele. Terbinafina. Administrat oral sau local. Utilizat n tratarea dermatomicozelor. Inhib sinteza ergosterolului. Echinocandinele. Caspofungina a fost aprobat ca tratament n cazul aspergilozelor refractare. Este util n candidoza orofaringian i esofagian. Inhib biosinteza glucanului din peretele celular. Griseofulvina. Este un antibiotic mai vechi utilizat n tratarea dermatomicozelor. Se administreaz oral, iar tratamentul trebuie continuat pe o perioad de cteva luni.

Micozele primare
Micozele primare sistemice includ histoplasmoza (Histoplasma capsulatum), blastomicoza nord american (Blastomyces dermatitis), coccidioidomicoza (Coccidioides immitis) i blastomicoza sud american (Paracoccidioides brasiliensis). Habitatul natural al acestor parazii este reprezentat de sol. Sporii acestor ciuperci sunt inhalai odat cu praful, ajung n plmni, de unde, pe cale sanguin sau limfatic, ajung la alte organe, inclusiv n piele, unde produc foci infecioi puruleni, granulomatoi. diagnosticul de laborator include detectarea direct a patogenilor la microscop sau n culturi, precum i identificarea anticorpilor. Tratamentul utilizat const n amfotericina B i azoli. Toate micozele primare sunt endemice, destul de limitate geografic. Europa Central nu este afectat de aceste boli. Nu sunt transmisibile de la om la om.

Histoplasma capsulatum (histoplasmoza)

Histoplasma capsulatum (Fig. 9.3.) este agentul responsabil al histoplasmozei, o micoz intracelular a sistemului reticulo endotelial. Stadiul sexuat poart denumirea de Emmonsiella capsulata. Morfologie i cultur . H. capsulatum este o ciuperc dimorf. Ca patogen n organismul uman se gse te sub form unicelular. Celulele sunt localizate adesea n interiorul macrofagelor. Peretele celular nu fixeaz coloraia Giemsa sau Gram, din acest motiv, n jurul celulelor apare un
150 | P a g e

spaiu, considerat incorect ca fiind capsul. De aici vine i denumirea speciei. Patogenul poate fi cultivat pe medii uzuale. Pe mediu Sabouraud se dezvolt n 2-3 sptmni, la 20-30 C, sub form de miceliu. Patogenez i tablou clinic. Habitatul natural pentru aceast specie este solul. Sporii sunt inhalai n tractul respirator, de aici sunt preluai de macrofagele alveolare, unde are loc germinarea sporului i formarea celulei vegetative. Se formeaz mici focare inflamatorii granulomatoase. Patogenul este rspndit pe cale hematogen (Fig. 9.4.). Sistemul reticuloendotelial este puternic afectat. Se dezvolt limfadenopatii, splina i ficatul fiind afectate. Peste 90% dintre infecii sunt clinic silenioase. Tabloul clinic depinde foarte mult de factorii predispozani ai gazdei i de doza infectant. Histoplasmoza poate evolua ca o simpl infecie respiratorie. Histoplasmozele diseminate se ntlnesc mai frecvent la pacienii bolnavi de SIDA. Diagnostic. Materialul biologic cel mai important este reprezentat de secreii bronice, urin sau mostre din focarele infecioase. Pentru examinarea microscopic, se utilizeaz coloraia Giemsa, iar celulele sunt cutate n interiorul macrofagelor i a lecucocitelor polimorfonucleare. Culturile pe snge sau pe mediu Sabouraud necesit incubare timp de cteva sptmni. Anticorpii sunt detectai prin testul de fixare al complementului i prin precipitare n gel de agaroz. Tratament. Singurul tratament indicat n infecii severe, mai ales n forma diseminat este amfotericina B. Epidemiologie i prevenire. Histoplasmoza este endemic n vestul SUA, n America Central i de Sud, Indonezia i Africa. Cu puine excepii, Europa de Vest este scutit de acest patogen. Nu se transmite de la om la om. Nu exist msuri specifice de profilaxie.

Micozele oportuniste
Micozele oportuniste care afecteaz pielea i mucoasele, precum i organele interne sunt produse de levuri i mucegaiuri. O condiie esenial pentru dezvoltarea unor astfel de micoze este un sistem imunitar slbit. Candidoza este o infecie endogen. Celelalte micoze oportuniste sunt exogene, cauzate de ctre fungi care populeaz, n mod normal, solul sau plantele. Aceti fungi ptrund n organism pe cale respiratorie. Cele mai importante astfel de micoze sunt: aspergiloza, criptococoza i mucormicoza. n afara Candidei i a altor levuri, pheohifomicetele i hialohifomicetele pot produce infecii sistemice. Toate micozele oportuniste prezint un focar primar, de obicei tractul respirator superior sau inferior. De aici, pe cale sanguin sau limfatic, infecteaz alte organe. Este de preferat ca focarele infecioase s fie ndeprtate chirurgical. Agenii antimicotici sunt utilizai n chemoterapie. La pacienii imunocompromii, prognosticul este rezervat. Candidoza
151 | P a g e

Cel puin 70% din candidozele umane sunt produse de ctre C. albicans, restul fiind produse de ctre alte specii ale genului. Morfologie i cultivare. Coloraia Gram indic faptul c aceast specie este unicelular, Gram-pozitiv, se nmulete frecvent prin nmugurire. Pseudohife Gram pozitive sunt ntlnite frecvent, mai rar miceliu septat (Fig. 9.5). Candida albicans poate fi cultivat pe medii obinuite. Dup o perioad de incubaie de 48 ore pe agar, se formeaz colonii rotunde, albicioase, zbrcite. Se pot diferenia de alte specii pe baz de criterii morfologice i biochimice. Patogenez i tablou clinic. Candida este un microorgansim care populeaz n mod normal mucoasele omului i animalelor (comensal). Infeciile cu candida pot fi considerate endogene. Candidoza apare la persoanele a cror imunitate este compromis, mai ales imunitatea mediat celular. Mucoasele sunt afectate cel mai frecvent, mai rar pielea sau organele interne (candidoza profund). n infeciile cavitii bucale, se poate observa un vl albicios, aderent la suprafaa mucoasei obrajilor i a limbii (Fig. 9.6.). Morfopatologic similar cu infecia oral este vulvo-vaginita (Fig. 9.7). Dintre factorii predispozani cei mai importani sunt: - diabetul necontrolat, - sarcina, - tratamentul cu progesteron i cel intensiv cu antibiotice care duce la eliminarea florei microbiene normale. Pielea este afectat mai ales n zonele umede. Candida se poate rspndi, genernd infecii secundare ale plmnilor, rinichilor i ale lator organe. La dependenii de droguri poate fi observat candidoz endocardic i endoftalmit. Candidoza cronic muco-cutanat poate fi observat ca o consecin a distrugerii sistemului imunitar. Diagnostic. Acesta implic examinarea microscopic a preparatelor native i colorate obinute din diferite probe biologice. Candida crete pe medii de cultur obinuite, mai ales pe mediul Sabouraud. Coloniile tipice sunt identificate la microscop i pe baz de caractere metabolice. Detectarea antigenelor din ser este posibil utiliznd o reacie de aglutinare cu anticorpi monoclonali. Pentru identificarea anticorpilor, n cazul candidozelor profunde, sunt utilizate metode diferite (aglutinare, precipitare n gel, analize imunoenzimatice, imunoelectroforez). Tratament. Nistatin i azolii pot fi utilizai local. n cazul candidozei profunde, se folosete amfotericina B, adesea administrat cu 5fluorocitozin. Echinocandinele (caspofungina) pot fi utilizate n candidoze esofagiene i orofaringiene severe. Epidemiologie i prevenire. Infeciile provocate de Candida sunt, cu excepia celor de la nou-nscui, endogene, microorganismul gsindu-se n microflora uman.

Aspergillus (aspergiloza)
152 | P a g e

Aspergilozele sunt produse cel mai frecvent de speciile Aspergillus fumigatus i A. flavus. Aceste ciuperci sunt rspndite peste tot n natur. Se afl n cantitate mai mare pe plantele aflate n descompunere. Morfologie i cultur. Aspergillus este recunoscut n preparate tisulare, exsudat i sput prin hifele filamentoase, septate, aproximativ 3-4 m grosime, bifurcate cu aspect de Y. Aspergillus crete rapid sub form de miceliu pe diferite medii de cultur uzuale. Mediul Sabouraud este preferat ca mediu selectiv (Fig. 9.8.). Patogenez i tablou clinic. Poarta principal de intrare a acestui patogen este sistemul bronic, dar poate ptrunde i prin leziuni ale mucoaselor i pielii. Urmtoarele localizri sunt cunoscute pentru aspergiloze: Aspergiloza tractului respirator. Aspergiloma (Fig. 9.9.) este un ghem fungic care se dezvolt n anumite spaii (caverne). O alt form de aspergiloz pulmonar este o pneumonie cronic, necrotic. Aspergiloza pulmonar acut, invaziv este observat la pacienii bolnavi de neutropenie sau SIDA sau cei care au suferit transplant de organe i are un prognostic rezervat. O alt form de aspergiloz a trctului respirator este traheobronita. Dintre toi fungii, aspergilii sunt cel mai frecvent responsabilide sinuzit. La persoanele cu alergii atipice, astmul poate fi provocat de un aspergillus. Alte aspergiloze. Endoftalmita se poate dezvolta la 2-3 sptmni de la o intervenie chirurgical a nivelul globului ocular sau n urma unor leyiuni ale acestuia i duce de obicei la pierderea ochiului afectat. Aspergiloza cerebral apare ca urmare a diseminrii sanguine. Mai rar, Aspergillus poate provoca endocardite, miocardite i osteomielite. Diagnostic. Din moment ce Aspergillus contamineaz adesea materialele supuse diagnosticelor, detecia direct a patogenului este dificil. Identificarea hifelor tipic ramificate n preparate primare i n culturi repetate face diagnosticarea probabil. Dac aceste hife se gsesc n biopsii din esuturi colorate cu methenamine silver, diagnosticul poate fi considerat sigur. Utiliznd particule de latex acoperite cu anticorpi monoclonali, antigenele specifice ale speciei pot fi detectate n ser prin reacia de aglutinare. Anticorpii n aspergiloze sistemice sunt cel mai bine detectai prin imunodifuziune i prin testul ELISA. Metoda PCR detecteaz ADN-ul ciupercii. Tratament. Agentul utilizat este amfotericina B administrat la timp. De asemenea, pot fi utilizai azoli. ndeprtarea chirurgical a focarelor infeciilor locale este o metod utilizat.

Micozele subcutanate
Fungii care provoac micoze tipic subcutanate se gsesc n sol i pe plante senescente. Ptrund prin leziuni ale pielii n esutul conjunctiv subcutanat, unde produc infecii granulomatoase locale, cronice. Aceste infecii sunt ntlnite mai ales n zonele tropicale i subtropicale.
153 | P a g e

Sporotrichoza este provocat de ctre Sporothrix schenckii, un fung dimorfic care se gsete sub form unicelular n corpul gazdei. Sporotrichoza este caracterizat printr-o leziune ulceroas primar, de obicei la extremitile corpului i numeroi noduli i abcese de-a lungul vaselor limfatice. Cromomicoza poate fi provocate de ctre diverse specii de mucegaiuri negre. Nomenclatura acestor patogeni nu este clar stabilit. Dup cteva sptmni sau luni dup ce sporii ptrund n gazd, se dezvolt leziuni ulceroase sau granulomatoase, de obicei la nivelul extremitilor inferioare. Piciorul de Madura sau micetomul (Fig. 9.10.) poate fi provocat de o mare varietate de fungi, precum i de ctre bacterii filamentoase (Nocardia sp., Streptomyces somaliensis). Dintre fungii poteniali se numr Madurella sp., Aspergillus sp. Tabloul clinic este caracterizat prin abcese subcutanate, de obicei la nivelul piciorului sau minii. Abcesele se pot rspndi n muchi i oase. Adesea se formeaz fistule.

Micoze cutanate Dermatofiii (dermatomicoze sau dermatofitoze)

Dermatofiii sunt fungi care infecteaz esuturile ce conin keratin (piele, pr, unghii). Clasificare. Dermatofiii sunt clasificai n trei genuri: Trichophyton (cu specii importante T. mentagrophytes, T. rubrum, T. schoenleinii, T. tonsurans); Microsporum (M. audouinii, M. canis, M. gypseum) i Epidermophyton floccosum. Unele specii sunt antropofile, altele sunt zoofile. Habitatul natural pentru specia geofil M. gypseum este solul. Morfologie i cultur. Dermatofiii sunt fungi filamentoi. Cresc rapid pe medii nutritive la 25-30 C. Dup 5-14 zile, se dezvolt culturi de diferite culori, cu aspect lnos. Patogenez i tablou clinic. Dermatomicozele sunt infecii care se transmit prin contact inter-uman direct, contact ntre animale i om sau contact indirect cu obiecte (haine, covoare, picturi sau praful din duuri, piscine, vestiare, sli de sport). Localizarea primar se face la nivelul zonei de contact. Astfel, picioarele, pielea neacoperit (prul, capul, tegumentul feei) sunt cel mai frecvent afectate. Diferite specii pot provoca acelai tablou clinic. Cele mai frecvente dermatomicoze includ: Micozele cutanate: Tinea corporis (Fig. 9.11.): Microsporum canis i Trichophyton mentagrophytes. Afecteaz pielea glabr. Tinea pedis (picior de atlet) (Fig. 9.12.): Trichophyton rubrum, Trichophyton mentagrophytes i Epidermophyton floccosum. Afecteaz n principal piciorul. Tinea capitis: Trichophyton tonsurans i Microsporum canis. Afecteaz scalpul. Tinea barbae: Trichophyton rubrum i Trichophyton mentagrophytes. Ciuperca brbii.
154 | P a g e

Tinea unguim: Trichphyton rubrum, Trichophyton mentagrophytes i Epidermophyton floccosum. Onicomicozele: diferii dermatofii i specii ale genului Candida. Diagnostic. Materialul cel mai pretabil pentru diagnosic este reprezentat de probe din tegument, unghii i pr infectat. Fungii sunt observai la mcroscop n preparate pe baz de KOH. Identificarea se face pe baza morfologiei hifelor, precum i a macroconidiilor i a microconidiilor din culturile fungice. Tratament. Dermatomicozele pot fi tratate cu ageni antimicotici aplicai local. n cazul infeciilor masive ale prului i mai ales a unghiilor pot fi utilizai azolii sau terbinafina. Griseofulvina este mai rar utilizat astzi. Epidemiologie i prevenire. Dermatofiii sunt rspndii n mod natural peste tot n lume. M. gypseum poate cauza infecii la persoanele care lucreaz constant i intensiv cu solul. Msurile profilactice pentru toate dermatomicozele constau n evitarea contactului direct cu patogenul. Dezinfecii regulate ale duurilor i ale vestiarelor pot contribui la prevenirea piciorului de atlet, o infecie destul de frecvent.

Pityriasis (tinea) versicolor este o infecie de suprafa a pielii cauzat de Mlassezia furfur. Aceast infecie este observat mai ales la tropice, dar este rspndit n toat lumea. Produce o hipopigmentare. M. furfur este dependent metabolic de o surs de acizi cgrai cu lan lung. Acest fung este un component normal ntlnit al florei pielii. Patogeneza infeciei nu a fost nc lmurit. Tinea nigra, ntlnit mai ales la tropice, este cauzat de Exophiala werneckii. Infecia se manifest prin eflorescene maculoase, maro sau negre.

Alte micoze cutanate

Figura 9.1. Morfologia fungilor

155 | P a g e

Figura 9.2. Fungii patogeni

Figura 9.3. Histoplasma capsulatum

Figura 9.4. Modalitatea de infectare a organismului de ctre Histoplasma

156 | P a g e

Figura 9.5. Candida albicans

Figura 9.6. Candidoz bucal

Figura 9.7. Candidoz genital

Figura 9.8. Aspergillus

Figura 9.9. Localizarea aspergiloamelor

Figura 9.10. Piciorul de Madura

157 | P a g e

Figura 9.11. Tinea corporis

Figura 9.12. Tinea pedis (picior de atlet)

158 | P a g e

PARTEA IV. PARAZITOLOGIE

Curs 10: Protozoologie Curs 11: Helmintologie Curs 12: Entomologie

Protozoare generaliti
159 | P a g e

Scurt istoric: Denumirea de protozoare a fost introdus n tiin pentru prima dat de Goldfuss n 1817. Protozoarele cuprind organisme unicelulare eucariote. Sunt considerate cele mai simple animale, corpul lor fiind reprezentat printro singur celul, care ndeplinete toate funciile vieii. Sunt ntlnite cu preponderen n mediul acvatic, dar se cunosc i numeroase specii care triesc n pmnt umed, precum i specii care triesc n sau pe alte organisme. Diversitatea habitatelor a dus la o diversificare specific foarte mare n cadrul acestui grup, n prezent fiind cunoscute aproximativ 60000 de specii. Studiul protozoarelor a nceput dup anul 1674, dup perfec ionarea microscopului de ctre Leeuwenhoek. Acesta este primul cercettor care observ protozoarele i le numete animalcule (animale mici), motiv pentru care este considerat printele protistologiei. Dimensiuni: majoritatea speciilor sunt microscopice. Cea mai mic specie cunoscut este Anaplasma marginale cu dimensiuni de aproximativ 1 micrometru (10-6 m), parazit n hematii la bovine. Porospora gigantea are dimensiuni de pn la 10 mm i paraziteaz n intestin la homari. Unele specii de numulii pot atinge dimensiuni de pn la 10 cm n diametru. Structura corpului: este deosebit de simpl, corpul fiind alctuit din: membran, citoplasm i nucleu. Membrana: n unele cazuri conine constituieni tari, motiv pentru care forma corpului la reprezentanii acestor clase este aproximativ constant. n alte cazuri, aceti constituieni lipsesc, iar forma corpului este ntr-o continu schimbare, deoarece n permanen sunt emise pseudopode. La nivelul membranei are loc un intens schimb de substan ntre citoplasm i mediu. Membrana este cunoscut i sub denumirea de membran plasmatic (plasmalem). n unele cazuri, alturi de membran poate exista i un nveli secundar de natur celulozic, chitinoas, silicioas, calcaroas sau proteic. Citoplasma: este constituit din 2 zone: - o zon subire situat chiar sub membran, numit ectoplasm. Aceasta este lipsit de granula ii i privit la microscop este translucid, motiv pentru care a fost denumit i hialoplasm. - o zon situat n interiorul celulei, nconjurnd nucleul, numit endoplasm. Conine numeroase granula ii, motiv pentru care e numit i granuloplasm. Granula iile pot fi vii (organitele celulare) sau moarte (substane de rezerv, incluziuni etc.). Nucleul este individualizat. La exterior prezint anvelopa nuclear. Celula care reprezint n cazul protozoarelor ntreg organismul ndeplinete toate funciile acestuia: - funcia de relaie - funcia de nutriie - funcia de reproducere Deplasarea: se realizeaz cu ajutorul flagelilor, pseudopodelor i al cililor.
160 | P a g e

Nutriia: - o parte dintre protiste se hrnesc autotrof (holofitic), iar altele se hrnesc heterotrof (holozoic). Protozoarele heterotrofe se pot hrni prin: fagocitoz, pinocitoz, osmoz, acest din urm mod fiind ntlnit cu precdere la speciile parazite. n cazul acestora substanele nutritive din gazd intr n parazit pe ntreaga suprafa a corpului. Respiraia: - schimbul de gaze are loc pe ntreaga suprafa a corpului. Excreia: are loc n cea mai mare msur pe ntrega suprafa a corpului. Substanele de excreie sunt eliminate i cu ajutorul vacuolelor excretoare, numite i vacuole pulsatile. Totui, principalul rol al vacuolelor pulsatile este cel osmoregulator. Reproducerea: poate fi asexuat i sexuat. Reproducerea asexuat se poate realiza prin: - diviziune binar longitudinal la Euglena - diviziune binar transversal la Paramaecium - diviziune multipl la majoritatea protozoarelor (este reprezentata prin schizogamie si prin sporogamie). Reproducerea sexuat: este reprezentat prin: - conjugare (caz n care organismele implicate fac schimb doar de material nuclear) - formare de gamei urmat de copulare. NCHISTAREA reprezint procesul de formare a unui nveli rezistent (mai multe membrane suprapuse) a protozoarului respectiv. Rol: de protecie a parazitului n afara gazdei, uureaz trecerea la o nou gazd de reproducere: nucleul sufer o diviziune nr. crescut de exemplare dup dechistare iniiat de: deficitul de hran acumularea excesiv de produse catabolice modificri n concentraia ionilor de hidrogen suprapopulare DECHISTAREA datorat: gazdei: aciunii enzimatice a esuturilor gazdei, modificri osmotice aprute n mediu protozoarului din interiorul chistului: aciune mecanic, aciune biochimic CICLUL DE VIA Simplu: stadiu trofic ntr-o singur gazd nmulire binar Trichomonas vaginalis, Entamoeba gingivalis Complex a. n plus stadiu de chist (Amibe) b. necesit 2 gazde Clasificarea protozoarelor. Se grupeaz n 4 mari categorii:
161 | P a g e

Rhizopode (amibe): sunt protozoare a cror form a corpului se poate modifica prin emiterea de pseudopode. Ex. Entamoeba hystolitica Flagelate: sunt protozoare ce prezint flageli, cu ajutorul crora se deplaseaz. Ex. Giardia intestinalis, Trichomonas vaginalis Sporozoare: protozoare ce prezint cel pu in 2 gazde, iar pentru trecerea de la o gazd la alta necesit nmulire sexuat. Ex. Plasmodium malariae, Toxoplasma gonidii. Ciliate: sunt protozoare ce au corpul acoperit de cili, total sau parial. Ex.: Balantidium coli

Protozoologie partea special

Entamoeba hystolitica
Entamoeba hystolitica este agentul cel mai adesea ntlnit n amibiozele intestinale, boala manifestndu-se cu prevalen n rile calde. Stadiul vegetativ al parazitului se localizeaz n intestinul gros i formeaz chisturi eliminate odat cu excrementele. Infecia se transmite de la o persoan la alta prin chisturi. Stadiul vegetativ poate ptrunde prin peretele intestinal i pe cale sanguin, invadeaz ficatul i alte organe. Cele mai ntlnite forme sunt dizenteria amibian i amibioza hepatic. Rspndire. n zone endemice din Africa, Asia i America Central i de Sud, pn la 70-90% din popula ie este purttoarea acestui parazit. n SUA i Europa, procentul de populaie purttoare este de 1-4%. Numrul de cazuri noi aprute anual este de 48 milioane, cu o cifr a letalitii de 70.000 (WHO, 1998). Parazitul. Microorganismul se ntlnete sub dou forme: Trofozoidul (stadiul vegetativ) este reprezentat de celule de forme variabile, capabile de a emite pseudopode. Trofozoizii care au ptruns n n esuturi conin adesea eritrocite fagocitate. Chistul prezint un perete rezistent. Iniial, fiecare chist conine o amib uninucleat. Chistul eliminat n materiile fecale conine 4 nuclee, rezultate n urma a do diviziuni. Ciclul de via i patogeneza. Ciclul de via este prezentat n fig. . Amibioza intestinal simptomatic. n urma ingerrii chisturilor mature, parazitul tetranuclear este eliberat, se divide formnd 4 sau 8 trofozoizi care continu s se divid i o parte din ei se nchisteaz. Trofozoizii colonizeaz mucoasa intestinului gros sau lumenul acestuia. Potenialul de invazie i deteriorare a esuturilor este ridicat din cauza unor procese caracteristice: adeziunea la suprafaa enterocitelor prin intermediul unor proteine membranare, distrugerea celulelor cu ajutorul unor peptide i degradarea matriei extracelulare, cu ajutorul proteazelor. Aceste procese permit ptrunderea n peretele intestinal, unde se multiplic i produc modificri patologice.
162 | P a g e

Amibioza extraintestinal. E. hystolitica poate disemina spre alte organe, mai ales spre ficat. n urma distrugerii parenchimului se formeaz mici focare necrotice, aa-numitele abcese, care se mresc i pot afecta poriuni mari din organ. Bacteriile intervin doar n 5% dintre cazuri, astfel nct reaciile inflamatorii sunt moderate. Leziunile conin un lichid maroniu sau galben cu aspect de puroi, lipsit de bacterii; ulterior se vor transforma ntr-o mas necrotic. Microorganismele sunt detectabile n zona de tranziie dintre leziuni i parenchimul sntos. Abcesele hepatice pot perfora n spaiul pleural sau n plamni; mai rar diseminarea sanguin a amibelor duce la invazia splinei, creierului sau a altor organe. Amibioza cutant este localizat mai frecvent la nivelul regiunii perianale, nsoit de modificri rectale. Epidemiologie. Omul reprezint rezervorul pentru acest parazit (mai rar: maimuele, cinii, pisicile). Infecia se datoreaz transmiterii chisturilor mature prin alimente contaminate (fructe, legume), ap de but sau prin minile contaminate. Mutele sau gndacii de buctrie pot funciona ca vectori, transportnd chisturile din excremente pe alimente. Fa de forma vegetativ, chisturile sunt rezistente n mediu (supravieuiesc la 28-34 C, timp de 8 zile i la 10 C o lun). Cantitatea de clor adugat n mod normal n apa de but este insuficient pentru a distruge chisturile. Manifestri clinice. Simptomele pot aprea cel mai devreme dup 2 sau 4 sptmni de la infecie sau dup perioade asimptomatice de cteva luni sau chiar ani. Formele intestinale: Forma asimptomatic. Parazitul poate coloniza mucoasa intestinal, se poate reproduce i persista lungi perioade fr a deveni invaziv sau a provoca alte modificri. Forma invaziv rezult prin ptrunderea parazitului n peretele intestinal i determin afectarea intestinului gros. Prile intestinale afectate (colon, cecum, rect, uneori partea terminal a ileonului) prezint leziuni circulare sau extinse ce variaz n intensitate, de la edem i nroirea mucoasei pn la focare cu centrul necrozat, ulcere profunde. Ulcerul poate adesea ajunge pn n cavitatea peritoneal. Procesele de vindecare cu formarea de cicatrici, reduc adesea lumenul intestinului; procese inflamatorii accentuate pot duce la o ngroare cu aspect de tumor a peretelui intestinal (amibom). Forma acut debuteaz cu discomfort abdominal i episoade diarecice cu durat variabil, la nceput semisolide, apoi din ce n ce mai mucoase, inclusiv sanguinolente. n astfel de cazuri, anticorpii sunt prezeni n ser. Simptomele pot disprea spontan, dar adesea se poate dezvolta o colit cronic recidivant de cteva luni sau chiar ani. Formele extraintestinale. Acestea apar datorit diseminrii parazitului din intestin. Forma cea mai frecvent este abcesul hepatic. La persoanele care au aceast form, examenul coprologic nu indic prezena protozoarului. Abcesele hepatice determin febr (uneori ridicat), dureri n partea superioar a abdomenului, hepatomegalie, ridicarea diafragmului, slbiciune general i alte simptome. Abcesele hepatice mari, netratate la timp sunt letale. Celelalte forme extraintestinale sunt extrem de rare.
163 | P a g e

Imunitate. Reinfecia este posibil din moment ce nu se confer suficient imunitate n timpul infeciei. Anticorpii sunt, de obicei, detectabili n ser doar n forma intestinal invaziv i n cea extraintestinal. Diagnostic: Coprodiagnostic. Identificarea parazitului din materiile fecale la microscop n soluie SAF (acetat de sodiu-acid acetic-acid formalin) Diagnosticul diferenial. Are ca scop diferenierea acestui protozoare de alte specii ale aceluiai gen sau de alte specii din alte genuri. Se folosete un nou tip de PCR. Detecia coproantigenelor. Identificarea antigenelor se poate face direct din materiile fecale, utiliznd un test ELISA bazat pe anticorpi monoclonali. Detectarea anticorpilor serici este posibil la circa 95% din pacienii cu amibioz hepatic. Amibioza extraintestinal este detectat cu ajutorul metodelor clinice (ultrasunete, computer-tomograf) i serologic. Tratament. Derivaii nitroimidazolici sunt eficieni mpotriva formelor intestinale simptomatice i a celor extraintestinale. Pe de alt parte, medicamentele cu activitate luminal sunt eficiente mpotriva formei asimptomatice (diloxanid fuoranat). Un medicament nou mpotriva infeciilor ambiene este nitozoxanid. n afara chemoterapiei, pot fi necesare alte msuri, precum cele chirurgicale i tratamentul simptomatic n cazul abceselor hepatice. Prevenire. Cei care cltoresc n zone endemice trebuie s decontamineze apa de but prin fierbere sau filtrare, s nu consume salate, s ndeprteze coaja fructelor i s fie precaui n schimbarea alimentaiei. Medicamente profilactice nu sunt disponibile.

Giardia intestinalis
Giardia intestinalis (Giardia lamblia, Giardia duodenalis), parazit cu distribuie global, se ntlnete i n Europa relativ frecvent. Este parazit al intestinului subire al omului, provocnd enterite. Infeciile au loc datorit ingerrii chisturilorde Giardia. Rezervorul este reprezentat de om, dar i de unele mamifere. Rspndire. Giardia intestinalis este rspndit pe tot globul cu o rat a prevalenei, n rile dezvoltate, de 2-5% i cu rate de pn la 50% n rile n curs de dezvoltare. Copiii pn la 5 ani sunt adesea infectai. Parazitul i ciclul de dezvoltare. Giardia se prezint sub dou forme: Stadiul vegetativ, mobil (trofozoid). Se localizeaz la nivelul mucoasei intestinului subire; prezint 8 flageli, partea dorsal este convex, partea ventral concav, sub forma unui disc adeziv. Forma vegetativ se multiplic prin fisiune binar. Stadiul de chist. Este eliminat odat cu materiile fecale.
164 | P a g e

Epidemiologie. Omul reprezint principalul rezervor de infecie, alte mamifere fiind rezervoare secundare. Chisturile excretate odat cu materiile fecale sunt responsabile de rspndirea infeciei. Infecia are loc pe cale fecal-oral, chisturile fiind transmise de o persoan la alta (n grdinie, n familie, ntre homosexuali etc.) sau prin intermediul apei i alimentelor contaminate. O serie de epidemii se datoreaz contaminrii apei de but. Patogenez i tablou clinic. La nivelul intestinului subire, G. intestinalis determin inflamaii i malabsorbie. Au fost descrise i infeii ale vezicii biliare. Patogeneza este nc neclar. Se pare c parazitul produce toxine cu structur proteic. Infecia este frecvent asimptomatic. Parazitul poate fi eliminat spontan timp de cteva sptmni. Pacineii cu infecii simptomatice manifest diaree, semne de malabsorbie, dureri n partea superioar a abdomenului, vom, ocazional febr i pierderi n greutate. Diagnostic, tratament i prevenire. Diagnosticul standard este examinarea materiilor fecale utiliznd tehnica SAFC. Trofozoidul poate fi detectat, de asemenea, n aspiratul duodenal. Antigenele pot fi detectate prin tehnicile IFAT i ELISA, bazate pe imunofluorescen. Compuii nitroimidazolici sunt folosii pentru tratarea infeciei (metronidazol, ornidazol i tinidazol), precum si nitazoxanid. Msurile preventive sunt aceleai ca i n cazul amibiozei. Exist un vaccin eficient doar pentru cini i pisici.

Trichomonas vaginalis
Trichomonas vaginalis este o specie flagelat rspndit n toat lumea i transmis pe cale sexual. Provoac vaginit la femei i uretrit la brbai. Distribuie. Numrul de cazuri noi este estimat la 170 milioane/an (WHO, 1998). n rile n curs de dezvoltare, rata infeciei este de 5-20% la femei i sub 5% la brbai. Parazitul, ciclul de dezvoltare i epidemiologie. Trichomonas vaginalis este un protozoar cu aspect piriform. Prezint 5 flageli, dintre care unul se prelungete posterior, formnd o membran ondulant. Parazitul colonizeaz mucoasa urogenital i se nmulete prin diviziune binar. Nu se nchisteaz. Omul reprezint singurul rezervor pentru acest protozoar. Paraziii se transmit mai ales prin contact sexual. Aproximativ 2-17% dintre fetiele nscute din mame infectate, contracteaz la natere acest microorganism. n mediul extern, este destul de labil. Totui, puini trofozoizi pot supravieui pn la 5 ore n apa din saune i ntre 5 minute i 24 ore n apa tratat cu clor. Se poate ca infecia s fie contractat i prin apa netratat cu clor, prin costumele de baie ude, bureii de baie, prosoape.
165 | P a g e

Manifestri clinice. La femei, T. vaginalis colonizeaz n mod primar mucoasa vaginal, mai rar cervixul. n 20-50% dintre cazuri infecia este asimptomatic, dar vaginitele pot aprea dup o perioad de incubaie de 224 zile. Infecia se manifest printr-o scurgere glbuie, subire, purulent, n care se gsesc protozoare, celule ale mucoasei i bacterii. Microorganismele pot ptrunde n uretr n 75-90% din cazuri, unde pot determina inflama ii, dar foarte rar infecteaz uterul sau vezica urinar. Infecia la brbai este, n general, asimptomatic (50-90%), dar se poate manifesta i printr-o uretrit simptomatic, mai rar fiind afectate prostata i veziculele seminale. Infecia nu confer imunitate de durat. Diagnostic. O pictur din secreia vaginal sau uretral este amestecat cu soluie salin i examinat la microscop. Protozoarele pot fi uor recunoscute prin micrile tipice. Mai pot fi identificate prin colora ie Giemsa sau prin teste de imunofluorescen cu anticorpi monoclonali. De asemenea, se pot obine culturi n medii lichide. Alte metode de diagnosticare se bazeaz pe identificarea antigenelor (ELISA) sau a ADN-ului (PCR). Tratament i prevenire. Este ntotdeauna necesar ca ambii parteneri sexuali s primeasc tratament. Preparate nitroimidazolice eficiente administrate oral la femei vaginal includ metronidazol, tinidazol i ornidazol. Acestea sunt contrindicate n primul trimestru de sarcin. Msurile preventive sunt aceleai ca pentru orice infecie veneric.

Toxoplasma gondii
Rspndire. Toxoplasma gondii este rspndit n toat lumea. Nivelul sczut de specificitate pentru un organism gazd explic capacitatea de a infecta un spectru larg de vertebrate homeoterme (omul, ovinele, vitele, cabalinele, porcinele, cinii, pisicile, mamifere slbatice, psri). Se estimeaz c aproximativ o treime din popula ia lumii este infectat cu acest parazit. Un studiu seroepidemic realizat n Elveia (1995) arat c din 4000 persoane cu vrste cuprinse ntre 1 i 70 ani, 52% erau infectate cu acest protozoar. Procentele, n funcie de vrst, sunt urmtoarele: de la 1 la 9 ani 24%, de la 20 la 39 ani 43%, de la 40 la 70 ani 69%. Din 9000 de femei nsrcinate, 46% erau infectate. Ciclul de dezvoltare al parazitului. Ciclul de dezvoltare al T. gondii implic 3 faze: intestinal, extern i extraintestinal. Faza intestinal cu producerea formelor sexuate are loc doar n eritrocitele gazdelor definitive. Doar pisicile i alte cteva specii de feline pot funciona drept gazde definitive. n corpul gazdelor intermediare (porci, oi i alte specii), parazitul se dezvolt doar extraintestinal. Dup infecia primar a pisicii cu chisturi de Toxoplasma, formele asexuate se dezvolt n celulele intestinului subire. Dintre acestea, o parte formeaz gamei care se contopesc i formeaz oochisturi. Acestea sunt eliminate prin materiile fecale dup 3-9 zile. Cnd pisica este infectat cu oochisturi, perioada pn la eliminarea acestora n materiile fecale este de 20-35 zile, deoarece n aceste
166 | P a g e

cazuri, dezvoltarea intestinal a protozoarului este precedat de o repreoducere asexuat extraintestinal. Faza extern. Oochisturile eliminate n materiile fecale sporuleaz la temperatura camerei n 2-4 zile, devenind capabile de infecie. Meninute la umiditate, rmn viabile pn la 5 ani i nu sunt distruse de agenii dezinfectani standard. Mor n cteva minute la temperaturi mai mari de 55 C. Faza extraintestinal. Aceast faz urmeaz ingerrii de oochisturi sau chisturi i se ntlnete la gazdele intermediare, precum i la cele definitive. De la nivelul intestinului, protozoarul trece n circuitul sanguin sau limfatic spre diferitele organe, multiplicndu-se n celulele nucleate, n special n sistemul reticulohistocitar, n muchi i n sistemul nervos central. Prin multiplicarea parazitului apar focare necrotice i reacii inflamatorii. Generalizarea infeciei poate duce la colonizarea placentei i infecia ftului. Chisturile care nu produc reacii inflamatorii se gsesc n sistemul nervos central, n muchiul inimii, n retin. Pot rmne viabile muli ani fr a produce leziuni gazdei. Patogenitate i tablou clinic. Focarele necrotice, procesele inflamatorii i imunopatologice sunt bazele patogenezei i ale diverselor manifestri clinice observate n toxoplasmoz. Cazurile sunt difereniate n infecii postnatale i prenatale. Forme ale toxoplasmozei postnatale: Infecia primar la persoanele imunocompetente. Aceasta este forma cea mai frecvent, fr manifestri clinice, identificat prin anticorpii specifici. Infecia poate persista toat viaa gazdei. Infecia primar n timpul sarcinii. Aceasta poate provoca infecii ftului. Infecia primar la persoanele imunodeficitare. Infecia se manifest prin stri febrile, cu exantem maculopapulos, limfadenite generalizate, pneumonii interstiiale necrotice, hepatomegalie, miocardite, meningoencefalite, afeciuni oculare i alte manifestri. Toxoplasmoza prenatal. Infecia prenatal apare doar n cazul n care mama intr n contact cu protozoarul pentru prima dat n timpul sarcinii. Nu exist niciun risc de infecie prenatal la femeile care au fcut infecia naintea sarcinii i prezint anticorpi serici. Consecine posibile ale infeciei prenatale: 10% cazuri clinice severe (85% dintre acestea leziuni cerebrale (hidrocefalie, calcifieri intracerebrale), 15% dintre acestea - letale). 15% simptome medii (99% corioretinite, 1% leziuni cerebrale) 75% cazuri subclinice (15% fr leziuni, 85% corioretinite). Copiii din aceast categorie par normali la natere, dar semnele de leziuni oculare i cerebrale se pot manifesta mai trziu, n timpul copilriei. Diagnostic. La adulii imunocompeteni, toxoplasmoza este diagnosticat serologic prin detecia IgG specifice i IgM. IgM pot fi detectate nc din prima sptmn dup infecia primar. n diagnosticul prenatal, se folosete tot mai frecvent PCR pentru identificarea patogenului n lichidul amniotic.
167 | P a g e

Tratament. Urmtoarele cazuri necesit tratament: infeciile acute sau subacute la copii sau aduli, precum i infeciile primare simptomatice sau asimptomatice la femeile nsrcinate. n infeciile primare acute n timpul sarcinii, riscul de infecie al ftului poate fi eliminat prin tratament. Exist diferite scheme terapeutice. Spre exemplu, spiramicin zilnic, timp de 4 sptmni de la diagnosticare pn la sfritul celei de-a 15 sptmni de sarcin, iar din sptmna a aisprezecea pirimetamin zilnic timp de 4 sptmni, mpreun cu sulfadizin i acid folic. Epidemiologie i prevenire. Omul se infecteaz prin ingestia de carne insuficient preparat termic cu chisturi sau prin ingestia de chisturi sporulate. T. gondii este transmis i transplacentar, de asemenea i prin transplant de organe.

Plasmodium
Malaria, cea mai frecvent parazitoz tropical, prezint o semnifica ie medical n Europa central i n alte regiuni, ca fiind o boal a cltorilor. Infecia este provocat de Plasmodium (P. vivax, P. ovale, P. malariae, P. falciparum) transmis prin neptura narului anofel. Infecia debuteaz cu simptome nespecifice (febr, oboseal, dureri de cap, grea ). Malaria tropical netratat se poate finaliza rapid cu decesul. Astfel, este important diagnosticarea rapid a parazitului n snge i aplicarea tratamentului. Msurile profilactice sunt eseniale pentru acele persoane care cltoresc n regiunile unde malaria este endemic. Rspndire. Malaria este una dintre infeciile umane cele mai importante. Datele furnizate de WHO (2000, 2004) indic faptul c boala este n prezent endemic n mai mult de 100 ri sau teritorii din Africa sub Saharian, Asia, Oceania, America Central i de Sud i n Caraibe. Circa 2,4 miliarde de oameni (40% din populaia lumii) triesc n regiuni n care exist malaria. Incidena anual a malariei n lume este de 300-500 milioane de cazuri clinice, cu 90% dintre cazuri nregistrndu-se n Africa sub-Saharian. Malaria singur sau n combinaie cu alte boli omoar 1,1-2,7 milioane persoane anual, dintre care 1 milion de copii cu vrste de sub 5 ani n Africa tropical. Parazitul. Exist 4 specii de Plasmodium responsabile de infecia la om: P. vivax, P. ovale, P. malariae i P. falciparum. Aceste specii pot fi difereniate ntre ele prin examinare la microscopul optic a eritrocitelor parazitate. Ciclul de via . Ciclul de dezvoltare a parazitului include faza de multiplicare asexuat n interiorul gazdei umane i faza de multiplicare sexuat, n urma creia se formeaz sporozoizii, preluai de vectori (narii din genul Anopheles). Ciclul de dezvoltare n interiorul gazdei umane: Infecia i dezvoltarea exoeritrocitar. Omul este infectat prin neptura femelei de Anopheles sp. care inoculeaz sporozoizii n snge. Este nevoie de o cantitate extrem de mic de sporozoizi pentru
168 | P a g e

a determina boala (cca. 10 indivizi). Dup 15-45' de la inoculare, sporozoizii ajung la ficat, unde ptrund n hepatocite. Aici au loc diviziuni asexuate. Sporozoizii dau natere unor celule mari, plurinucleare, numite schizoni. Dup diviziunea citoplasmei acestor celule rezult merozoizii. Aceste procese dureaza ntre 6 i 15 zile, n funcie de specie. Merozoizii liberai din hepatocite ajung n snge unde infecteaz eritrocitele. Infecia eritrocitar. Merozoizii produi n ficat sunt eliberai n snge, unde ptrund n eritrocite pe baza receptorilor specifici. Aici se nmulesc asexuat i sunt eliberai n snge prin ruperea membranei hematiilor. De aici, ptrund n alte eritrocite i ciclul se repet. Ciclurile de reproducere au loc la intervale regulate (48 h P. vivax, ovale i falciparum i 72 h P. malariae). Febra apare atunci cnd schizonii explodeaz i cnd numeroase eritrocite sunt distruse, aprnd atacurile intermitente de febr. Dup una sau mai multe generaii schizogonice, unele celule din fiecare generaie evolueaz n forme sexuate, gamei masculi i gamei femeli. Formele sexuate persist o perioad n snge, dup care, dac nu sunt preluate de femelele Anopheles, mor. Manifestri clinice. Perioada de incuba ie. Manifestrile clinice ale malariei se datoreaz stadiilor eritrocitare asexuate i ncep imediat dup infectare. Perioada de incubaie variaz, n funcie de specie, de la 7 la 35 zile dup infecie. Aceast perioad se poate extinde pe cteva sptmni sau chiar luni, mai ales dac infecia este supresat de medicaie profilactic. Manifestri clinice propriu-zise. Manifestrile clinice ale malariei depind de factorii implicai, mai ales de specia de Plasmodium i de starea imun a pacientului. P. falciparum este specia care produce forma cea mai grav. Copiii i adulii neimunizai din zonele lipsite de malarie, sunt precum i copiii din regiunile endemice cu vrste sb 3 ani sunt cei mai susceptibili. Simptomele ini iale. Malaria debuteaz cu simptome iniiale nespecifice care dureaz cteva zile, precum dureri de cap, oboseal general, frisoane, ocazional ameeli i febr intermitent. Acestea pot fi confundate uor cu gripa. Tiparul strilor febrile: cteva zile pn la o sptmn dup simptomele iniiale, ciclurile schizogonice se sincronizeaz din 48 n 48 de ore sau din 72 n 72 de ore. Paroxismul clasic al malariei. Dup o cre tere iniial a temperaturii de la circa 39 C, vasoconstricia periferic determin perioade de frisoane (care dureaz de la 10 minute la o or), apoi temperatura crete din nou la 40-41 C (timp de 2-6 ore), dup care apare vasodilataie periferic i transpiraie abundent. Acestea din urm se manifest dup-amiaza i seara. Dup ce febra scade, pacientul se simte mai bine pn la urmtorul ciclu de diviziune. Evolu ia infec iei i recuren a. Manifestrile ciclice ale malariei se repet pn cnd multiplicarea eritrocitar a parazitului este suprimat de chemoterapie sau de sistemul imunitar al gazdei. Paraziii care
169 | P a g e

supravieuiesc n corpul gazdei pot produce recderi dup luni sau chiar ani de la infecia iniial. Epidemiologie. Temperaturile minime constante 16-18 C (optim: 2030 C) i umiditatea timp de cteva sptmni sunt precondiiile pentru transmiterea malariei prin intermediul vectorilor, Pentru realizarea ciclurilor plasmodiale este nevoie de existena n populaie a unui rezervor de microorganisme i de prezena unor vectori corespunztori. Paraziii malariei pot fi transmii de ctre femele aparinnd la cca 80 specii ale genului Anopheles. Stadiile de larv i de pup ale acestor nari se desfoar n ochiurile de ap, n apropierea locuinelor umane. narii sunt activi de la apusul soarelui pn la rsrit. Femelele neap at n afar, ct i n locuine. Malaria apare adesea n sezonul ploios care asigur prezena ochiurilor de ap. Boala este endemic, putnd uneori izbucni i epidemii. Cile de transmitere alternative pentru Plasmodium includ infecia diaplacentar, transfuziile de snge (pot supravieui circa 5 zile n sngele depozitat) i acele contaminate folosite de ctre dependenii de droguri. Diagnostic. Confirmarea etiologic a diagnosticului clinic se face prin detectarea parazitului n snge. Sngele este analizat anterior tratamentului, de preferat naintea ciclurilor febrile; analiza se face la microscop, att pe snge necoagulat, ct i pe cel coagulat, colorat cu Giemsa. Exist diverse metode rapide dezvoltate n ultimii ani pentru detectarea parazitului: ParaSight, MalaQuick (utilizeaz anticorpi monoclonali pentru a identifica antigenul HRP2 (Plasmodium falciparum) OptiMAL detecteaz toate speciile de Plasmodium prin identificarea enzimei lactat-dehidrogenaza. Detectarea anticorpilor specifici n serul unei persoane infectate pentru prima dat nu este posibil dect dup 6-10 zile de la inoculare. Detecia ADN-ului prin metoda PCR se poate face pentru a identifica diversele specii patogene. Metoda este utilizat cu precdere pentru cercetare. Tratament. Pacienii infectai pentru prima oar pot suferi forme acute i severe de malarie. Astfel, este nevoie de de tratament i monitorizare medical de urgen. Cei mai folosii ageni chemoterapeutici sunt: chinina, sulfonele (dapsona), doxicilina (utilizate n stadiile asexuate sanguine), artemisinina (stadiu gametocit), aminoquinoline i naftochinone (n cam toate stadiile). Prevenirea recderilor. n vederea acestui scop, formele tisulare pot fi eliminate cu primachin, dup ncheierea tratamentului acut. Prevenire. Persoanele care cltoresc n regiuni n care exist focare de malarie trebuie informate asupra riscurilor care pot aprea i a necesitii aplicrii msurilor profilactice. Msurile profilactice sunt necesare n cazul celor care cltoresc n regiuni din Africa, America Central i de Sud i Asia. Africa subsaharian este considerat o zon cu risc mare. ntr-o zon n care exist malarie, riscul infeciei poate varia mult n funcie de sezon, localitate i durata ederii. Msurile profilactice trebuie s ia n considerare aceste aspecte. Urmtoarele metode pot fi utilizate pentru prevenirea infeciei:
170 | P a g e

- Prevenirea neprii de ctre nari - Chemoprofilaxie - Tratament urgent imediat dup neptur. Scopul principal este evitarea malariei teriare (malaria tropical) provocat de P. falciparum. Prevenirea n ep rii de c tre n arii purt tori: important de reinut este faptul c sunt activi de la apus pn la rsrit, neap att afar, ct i n locuine. Riscul este mai mare n zonele rurale. Sunt recomandate urmtoarele msuri: Purtarea hainelor dup apusul soarelui (bluze cu mnec lug i fuste sau pantaloni lungi) care s previn nepturile. Este de preferat ca pe haine s fie aplicat un insecticid cu efect rapid (piretrina). Aplicarea pe pielea neacoperit de substane repelente pentru insecte (produse cu 20% dietil-m-toluamid asigur protecie timp de 3-5 ore). ndeprtarea insectelor din locuine (utilizarea de plase fine la geamuri i la ue) Utilizarea de insecticide n ncperi Utilizarea unor plase (perdele) n jurul paturilor (mai ales ale copiilor); impregnarea acestora cu insecticide sporete efectul. Chemoprofilaxia i tratamentul de urgen . Chemoprofilaxia const n administrarea de medicamente antimalarice profilactice nainte i dup revenirea dintr-o zon n care exist malarie. n funcie de scop, trebuie fcut o distincie ntre profilaxia supresiv i cea cauzal: medicamentele supresive previn simpomele clinice prin afectarea stagiilor asexuate eritrocitare, n timp ce medicaia cauzal acioneaz asupra schizonilor de P. falciparum din ficat, prevenind ciclurile eritrocitare. Majoritatea agenilor cureni sunt cu efect supresiv. Pentru ederi scurte n zone cu risc redus, poate fi indicat renunarea la chemoprofilaxie i utilizarea unui tratament de urgen. Tratamentul poate fi iniiat ca rspuns la simptome ale malariei, n lispa unui medic, timp de 12 ore. Utilizarea acestui tratament este necesar dac exist riscul infeciei cu P. falciparum i dac nu se tie clar dac chemoprofilaxia poate asigura suficient protecie. De reinut sunt urmtoarele aspecte: Nu exist pn n momentul de fa un regim profilactic care s garanteze 100% eficacitate. De aceea, trebuie consultat un medic dac apare febra dup sau n timpul unui tratament profilactic. Trebuie respectat tratamentul chemoprofilactic sau de urgen recomandat de specialist. Aceste medicamente pot avea efecte secundare. Sunt importante sfaturile specifice fiecrui tip de situaie (sarcin, vrst, alergii, copii mici etc.). nceperea tratamentului chemoprofilactic cu cel trziu o sptmn, dou, nainte de cltorie. n aceast perioad, efectele secundare pot fi recunoscute i se pot lua alte msuri, eventual schimbarea medicaiei.
171 | P a g e

 Tratamentul chemoprofilactic trebuie aplicat att n timpul cltoriei, ct i 4 sptmni dup revenirea din zona afectat. Medicamentele trebuie nghiite cu lichide, dup mas. Dozajul, intervalele la care se iau i alte restricii (sarcina) trebuie urmate ntocmai. Controlul bolii. Principalele metode aplicate sunt controlul narului Anopheles prin utilizarea de insecticide n locuine, msuri profilactice ecologice pentru eliminarea mediilor de nmulire a narului i ultilizarea de perdele impregnate cu insecticid n jurul paturilor. Alte msuri n zonele endemice sunt diagnosticarea timpurie i tratarea cazurilor de malarie, precum i aplicarea chemoprofilaxiei. Nu exist un vaccin disponibil.

172 | P a g e

Figura

10.1. Ciclul de dezvoltare la Entamoeba hystolitica

173 | P a g e

Figura 10.2. Ciclul de dezvoltare Giardia intestinalis

174 | P a g e

Figura 10.3. Ciclul de dezvoltare la Toxoplasma gondii

175 | P a g e

Figura 10.4. Ciclul de dezvoltare la Plasmodium sp.

176 | P a g e

177 | P a g e