Bacteriologie Generala

BACTERIOLOGIE GENERAL|
1.1.DEFINIIA I OBIECTUL STUDIU AL MICROBIOLOGIEI
DE
Microbiologia (gr.micros=mic, bios=via i logos=tiin) este tiina care se ocup cu studiul vieuitoarelor invizibile cu ochiul liber, denumite microbi sau microorganisme. Microorganismele au aprut pe pmnt n urm cu aproximativ 3 miliarde de ani i au evoluat, cu succesiuni de ordinul minutelor ntre generaii, diversi icndu!se att de mult, nct astzi constituie o lume invizibil imens, ce "usti ic opinia potrivit creia trim ntr!o lume a microorganismelor i nu ntr!o lume cu microbi. #le au o structur celular sau subcelular i sunt oarte di erite ca mor ologie, caracteristici metabolice i poziie n arborele ilogenetic i sistematica biologic. $onsidernd dimensiunea microscopic ca principal element comun i criteriu de ncadrare, specialitii au inclus n categoria microorganismelor, virusurile, bacteriile, ciupercile microscopice (micromiceii sau ungii%, algele i protozoarele. &ermenul de 'microb(, creat de ) e d i l l o t n *+,+ a ost utilizat ns numai pentru desemnarea bacteriilor,
**-
virusurilor i micromiceilor, protozoarele rmnnd prin convenie i tradiie n s era de preocupri a parazitologiei. .elativ recent, n categoria microorganismelor au ost inclui nc doi ageni patogeni neconvenionali/ viroizii (0 i e n e r, *1,*%, cu o structura subcelular mai simpl dect cea a virusurilor i prionii (2 r u s i n e r ! premiul 3obel *11,%, care sunt proteine in ecioase transmisibile, incriminate n etiologia ence alopatiilor spongi orme la om (boala 4reutz eld 5 6acob, boala 7uru, boala 8lzheimer, insomnia amilial atal, boala 9erstmann!)tra:ssler % i la diverse specii de animale (ence alopatia spongi orm a bovinelor sau boala vacii nebune, ence alopatia transmisibil a nurcilor, boala cronic cahectizant a cervideelor, ence alopatia ongulatelor exotice, ence alopatia spongi orm elin, tramblanta oilor sau scrapia, ence alopatia transmisibil a vizonului%. $a urmare a dezvoltrii cunotinelor despre microorganisme, din domeniul vast al microbiologiei s!au desprins treptat ramuri sau tiine distincte, care au un caracter undamental (bacteriologia, virusologia, micologia, protozoologia, algologia% sau aplicativ (microbiologia medical, medical!veterinar, industrial, marin, a alimentelor, a solului, a petrolului, etc.%.
1.2. SISTEMATICA MICROORGANISMELOR

)tabilirea poziiei microorganismelor n sistematica biologic a ntmpinat n decursul anilor di iculti obiective, generate de criteriile care au stat la baza mpririi lumii vii n dou, trei, patru sau chiar cinci regnuri, de marea diversitate a acestor vieuitoare, ct i de aptul c unele categorii de microorganisme se apropie prin unele caracteristici de regnul
***
animal (protozoarele% iar altele de regnul vegetal (algele, ciupercile microscopice, bacteriile%. 2rivite n ansamblu, aceste vieuitoare au ns trsturi distinctive de restul lumii vii, iind situate de apt pe o treapt in erioar de evoluie i organizare. ;undu!se drept criteriu de baz nivelul de organizare biologic (subcelular, unicelular, sau pluricelular< eucariot sau procariot%, la propunerea lui = a e c 7 e l (*+>>%, reluat de )tanier (*1>? %, microorganismele au ost incluse ntr!un al treilea regn, alturi de cel vegetal i animal, regnul Protista, divizat n protiste superioare care grupeaz microorganismele eucariote (algele, protozoarele, micromiceii% i protiste in erioare, reprezentate de microorganismele procariote (algele albastre!verzi i bacteriile%. @n *1>+, M u r r a A ncadreaz bacteriile i algele albastre!verzi(cianobacteriile% n regnul Procaryotae, taxon nsuit de 0eterminatorul BergeA (*1+?% 5 lucrare de o nalt probitate tiini ic, unanim acceptat de ctre bacteriologii din ntreaga lume. Cn an mai trziu (*1>1%, D h i t t a 7 e r creeaz un nou regn!regnul Fungi ! care grupeaz ciupercile microscopice. Eirusurile, deoarece se deosebesc de celelalte microorganisme prin cel puin dou trsturi eseniale 5 structura subcelular i lipsa metabolismului propriu 5 au ost ncadrate ntr!un regn de sine stttor, regnul Vira.
**F
1.3. ISTORICUL MICROBIOLOGIEI

#voluia cunotinelor despre microorganisme poate i mprit n patru etape mai importante (Rducnescu H. B!c"#$%&!! '"(e)!" 1*+,- C")&#C)")e M. 2..1%/ etapa intuitiv, de admitere ipotetic a existenei microorganismelor< etapa descoperirii microorganismelor, a studiului lor mor ologic i a primelor ncercri de di ereniere i clasi icare a acestora< etapa constituirii microbiologiei ca tiin i a dezvoltrii ei pe baze moderne< etapa contemporan de dezvoltare a microbiologiei. 1.3.1. ETA$A INTUITI'/ DE ADMITERE I$OTETIC/ A E0ISTENEI MICROORGANISMELOR 8ceast etap se ntinde din antichitate i pn n a F!a "umtate a secolului G@G. #a este caracterizat prin elaborarea de ctre di erii nvai a unor ipoteze sau teorii care ncearc s explice contagiozitatea unor mbolnviri, dintre care merit a i reinute urmtoarele/ a) Teoria miasmatic a celebrului medic grec =@2H$.8& din $H) (?>-!3+- .e.n.% reprezint prima teorie medical de pro unzime. $on orm acestei teorii, bolile molipsitoare sunt produse de miasme vehiculate prin aer. #ste ns admis i
**3
posibilitatea transmiterii bolilor prin Iape alterate aduse de la distan(. 8st el de consideraiuni teoretice sunt urmate i de recomandri practice, cum ar i executarea de umigaii cu sul sau esene aromate i ierberea apei, n cazul apariiei bolilor molipsitoare. =@22H$.8& este primul care ace observaii privind existena unor cauze comune la bolnavii care prezint aceleai mani estri de boal. &ot n antichitate au mai ost admise puncte de vedere privind cauza transmiterii unor boli, de ctre unii istorici i scriitori/ &=C4@0@0# (?>J!3++ .e.n.% atribuie apariia epidemiilor unor actori de contagiune 5 contagium animatum. .enumitul istoric grec a cut n acelai timp observaii privind imunitatea, menionnd n scrierile sale c dup trecerea prin boal nu se produc mbolnviri a doua oar. M8.$C) &#.#3&@C) E8.H (**>!F, .e.n.% coreleaz apariia unor mbolnviri cu particularitile zonale ale locului respectiv, ca de exemplu existena mlatinilor. Kilozo ul roman admite ca probabil prezena n regiunile palustre a unor animale minuscule 5 aniamlia minuta! ce plutesc n aer i crora le revine responsabilitatea etiologic a mbolnvirilor. &eoria miasmatic a ost ns cea mai bine consolidat, avnd valoarea unei teorii medicale. 0e aceea ea a persistat i n evul mediu, coexistnd cu teoria contagiunii pn n timpurile moderne.
**?
b) Teoria contagiunii, emis de ctre medicul i poetul italian 9@H.H;8MH K.8$8)&H.H (*?,+!*JJ3%, cunoscut i sub numele latinizat =L#.H3@MC) K.8$8)&H.@C). n lucrarea sa IDe contagionibus, de morbis contagios et eorum curatione(, K.8$8)&H.H numete particulele responsabile de boli, seminaria sau contagium vivum i le consider entiti vii, capabile de multiplicare. ;ucrarea cuprinde i precizri asupra modalitilor de contagiune/ direct, indirect, la distan. Cna dintre ideile noi care apar n teoria lui K.8$8)&H.H,este aceea a a initii elective a germenilor pentru anumite specii animale sau pentru unele organe. 1.3.2. ETA$A DESCO$ERIRII MICROORGANISME# LOR A STUDIULUI LOR MORFOLOGIC I A $RIMELOR 1NCERC/RI DE DIFERENIERE I CLASIFICARE A ACESTORA 8ceast perioad ncepe odat cu ultimele decenii ale secolului al GE@@!lea i se ntinde pn n a doua "umtate a secolului al G@G!lea. #a este caracterizat prin cunoaterea nemi"locit a obiectului microbiologiei i este tributar progresului tehnic n plin avnt. a) Inventarea microscopului. 0escoperirea microorganismelor nu ar i ost posibil r apariia instrumentelor de ampli icare optic. 2rima ncercare de construcie a unui microscop se datoreaz lui .H9#. B8$H3 n secolul G@@@, urmat abia peste aproximativ dou secole
**J
de raii M8$$=8.@8) i =83) 6#3)#3 (*J1-% i de 98;@;#H 98;@;#@ (*>*-%. .HB#.& =HH4# (*>>J% aduce per ecionri microscopului i!l olosete pentru cercetarea structurii organismelor vegetale. n aceai perioad au aprut i ali constructori de microscoape, printre care se numr i ;#CD#3=H#$4. b) Descoperirea microorganismelor 83&H3L E83 ;#CD#3=H#$4 (*>3F!*,F3% construiete un microscop care se pare c mrea de 300 ori, cu a"utorul cruia ace cercetri n saliv i puroi, examineaz spermatoizi, solzi de luturi etc. Kiind dotat cu un ptrunztor spirit de observaie i capacitate de sesizare a noului, ;#CD#3=H#$4 observ, descrie i deseneaz ( ig. *% n lucrarea sa I8rcana naturae ope microscopiorum detecta(, microorganisme, astzi omologabile cu bacteriile i ciupercile in erioare, pentru care olosete denumirea animalcula. ;ucrarea este prezentat la S%c!e2"2e" Re3"( de B!%(%3!e d!n L%nd)" n 1,45, este tiprit la 0#;K& n *>1J i reprezint certificatul de natere al microbiologiei.
)ecolul al GE@@@!lea a marcat puine progrese n cunoaterea lumii microbiene descoperite de ;#CD#3=H#$4. $ercetrile ntreprinse s!au concretizat n acumulri de date cu caracter predominant empiric privind mor ologia microorganismelor.
**>
c)
Primele ncercri de diferen!iere i clasificare a microorganismelor . ;@33N (*,-,!*,,+% ine seama de existena acestor vieuitoare i n lucrarea sa I)Astema naturae( aprut n *,3J, le ncadreaz ntr! un singur gen, cruia i d numele de 6c7"%s8 sugestiv pentru stadiul cunotinelor despre microbi din acel timp. Primele ncercri de diferen!iere i clasificare a microorganismelor. ;@33N (*,-,!*,,+% ine seama de existena acestor vieuitoare i n lucrarea sa I)Astema naturae( aprut n *,3J, le ncadreaz ntr! un singur gen, cruia i d numele de 6c7"%s8 sugestiv pentru stadiul cunotinelor despre microbi din acel timp.
d)
**,
BACTERIOLOGIE GENERAL| Fig. 1 Desenul lui LEUWENHOECK n care sunt redate bacteriile observate n saliv
K.@#0.@$= MO;;#. ntre *,,3!*,+> este primul care subliniaz aptul c nu toate microorganismele sunt identice i propune mprirea lor n dou genuri/ '!9)!% i M%n"s. Clterior se ac i alte propuneri de noi genuri i specii. 8par primele sisteme de clasi icare ale microorganismelor. K#.0@3830 $H=3 n *+J? creaz termenul de 9"c2e)!e i mpreun cu #=.#3B#.9 desprind acest grup de microorganisme din )e3nu( "n!:"( i argumenteaz ncadrarea lui n )e3nu( ;e3e2"(, pe baza prezenei peretelui celular. 8st el, n cadrul vieuitoarelor microscopice, bacteriile devin un grup de sine stttor, di ereniat, deocamdat pe baza criteriilor mor ologice. 1.3.3. ETA$A CONSTITUIRII MICROBIOLOGIEI CA TIIN< I A DE='OLT/RII EI $E BA=E MODERNE 8ceast etap cuprinde a doua "umtate a secolului al G@G!lea. #a este strns legat de apariia a dou personaliti/ ;HC@) 28)&#C. i .HB#.& 4H$=, care prin contribuiile lor i a colilor pe care le!au creat, au undamentat microbiologia ca tiin i au declanat dezvoltarea ei impetuoas. &ot n aceast perioad se situeaz i nceputurile !:un%(%3!e!, ramur a tiinelor biologice, astzi de sine stttoare, dar care i are originea i s!a dezvoltat pn nu demult n strns conexiune cu microbiologia.
**+
a) "olul lui !"#$% &'%()#* i a colii sale n revolu!ionarea microbiologiei. ;HC@) 28)&#C. >1+22#1+*5? a ost un savant de larg orizont i de o excepional ecunditate, pro unzime i probitate tiini ic. $u toate c a ost chimist ca ormaie i c n primii si ani de activitate a elaborat cteva valoroase lucrri de chimie, 28)&#C. i!a dedicat ntreaga sa activitate studiului microorganismelor. Mobilul schimbrii domeniului su de cercetare l!a constituit studiul unor procese c+imice care, n inal, s!au dovedit a i produse de microorganisme. 2lecnd de la aceast constatare, 28)&#C. i!a lrgit treptat s era de investigaii asupra microorganismelor. 8st el, s!a a"uns la depirea etapei mor ologice de studiu a microorganismelor i inaugurarea etapei iziologice, n care pe prim plan trece investigarea activitilor enzimatice microbiene, cu implicaiile acestora pentru di erite domenii ale activitii umane. $ele mai importante descoperiri ale lui 28)&#C. n domeniul microbiologiei i a biologiei n general, sunt redate sintetic n continuare. De:%ns2)")e" n"2u)!! :!c)%9!ene " @e):en2"A!!(%). )olicitat iind s elucideze unele probleme ale procesului de vini icaie, 28)&#C. dovedete c orice ermentaie este Iun act corelativ unui enomen vital(. #l in irm teoria lui ;#@B@9, con orm creia ermentaiile erau considerate rezultatul descompunerii microorganismelor. n *+>J, 28)&#C. descoper ermentaia butiric i bacteriile anaerobe. Fund":en2")e" n"2u)!! :!c)%9!ene " !n@ecA!!(%). 28)&#C. stabilete relaia cauzal microb!in ecie pe care o veri ic
**1
experimental. 2ornind de la studiul unor boli ale larvelor luturelui de mtase, 28)&#C. i!a extins mai trziu studiile asupra unor in ecii ale animalelor i omului. #l demonstreaz c prezena germenilor n organele oilor moarte de antrax nu este consecina bolii, ci cauza acesteia. n concluziile sale, 28)&#C. pornete de la analogia existent ntre ermenaie i in ecie, ambele procese iind e ectul activitii biologice a bacteriilor. In@!):")e" de@!n!2!; " 2e%)!e! 3ene)"A!e! s&%n2"ne. 8ctualizat n secolul al G@G!lea de K#;@G!8.$=@M#0# 2HC$=#&, teoria generaiei spontanee constituia n acea perioad o rn n dezvoltarea tiinelor biologice. Bazat pe descoperirile sale privind mecanismele ermentaiilor i a in eciei, 28)&#C. demonstreaz r echivoc c microorganismele nu apar spontan. #le a"ung n substraturile n care se multiplic, din aer, de pe supra aa obiectelor care vin n contact cu aerul etc. Cn substrat nutritiv sterilizat ntr! un recipient nchis la lacr, rmne practic steril la in init. 8ceste experine au stat i la baza introducerii sterilizrii n practica medical. $)e&")")e" un%) ;"cc!nu)!. Eaccinul contra holerei aviare a ost primul vaccin antibacterian bazat pe atenuarera germenilor n condiii de laborator. 8ceast descoperire a ost consecina unei ntmplri. 28)&#C. a uitat o tulpin de &asteurella multocida la termostat i a constatat apoi c ea nu mai
*F-
reproduce in ecia la gini. Mai mult chiar, ginile inoculate au devenit rezistente la in ecia cu o tulpin virulent aparinnd aceleeai specii. @nspirat din aceast ntmplare, 28)&#C. a atenuat i bacilul crbunelui. 2e baza unei experiene tiini ice, organizate dup un protocol bine stabilit n *++*, n localitatea 2ouillA le Kort, este spectaculos demonstrat e icacitatea vaccinului anticrbunos pasteurian pentru oaie. 9eniul lui 28)&#C. este i mai pregnant ilustrat prin prepararea vaccinului antirabic. Kr a cunoate natura agentului etiologic al turbrii, 28)&#C. reuete n *++J s obin prin treceri succesive intracerebrale pe iepure, virusul rabic ix, incapabil s reproduc turbarea pe cale subcutanat, dar cu proprieti imunizante. 2ractica imunizrii antirabice cu virusuri ixe s!a pstrat pn n zilele noastre. IB%(")e" C! !den2!@!c")e" "3enA!(%) e2!%(%3!c! "! un%) !n@ecA!! "(e %:u(u! C! "n!:"(e(%). ;ui 28)&#C. i revine meritul de a i izolat i descris mai muli germeni printre care ,lostridium septicum (vibrionul septic al lui 28)&#C.%, sta ilococii i streptococii. 28)&#C. a avut numeroi elevi, n "urul lui constituindu!se o coal la care s!au ormat o serie de emineni microbiologi, din rndul crora se cuvine a i menionai/ #M@;# .HCG (*+J3!*133%, alturi de L#.)@3, s!a distins, printre altele, n studiul toxinelor microbiene. #0MH30 @)@0H.# #&@#33# 3H$8.0 (*+J-!*1-3% mpreun cu .HCG izoleaz i
*F*
identi ic mai muli germeni cunoscui astzi sub numele de micoplasme. $=8.;#) #0C8.0 $=8MB#.;830 este autorul unor inovaii tehnice deosebit de utile activitii curente de laborator, ca de exemplu primul iltru bacteriologic i autoclavul. 2rintre discipolii lui 28)&#C. se numr i E@$&H. B8B#P, ondatorul colii rom-neti de microbiologie. Marile descoperiri ale lui 28)&#C. n!au ntrziat s!i gseasc laturi aplicative i n alte domenii ale medicinei. 8a a ost cazul introducerii antisepsiei n chirurgie de ctre 6H)#2= ;@)&#. (*+F,!*1*,%, cel mai convins i activ susintor al teoriei biologice a lui 2asteur, cruia i scria/ ,, dac vei veni vreodat la #dinburg, vei gsi, cred, cea mia bogat rsplat vznd n spitalul nostru ce bine aceri pentru umanitate produce opera dumneavoastr.Q(#ste vorba despre considerabila scdere a mortalitii prin in ecia de spital, ca urmare a olosirii enolului. b) "olul lui *".)*( /",0 i a colii sale n dezvoltarea microbiologiei. .HB#.& 4H$= (*+?3!*1*-%, medic de ar, animat de o neobosit sete de cunoatere i o enorm putere de munc, trebuie considerat al doilea ondator al microbiologiei tiini ice. $ontribuiile sale cele mai importante n acest sens au ost urmtoarele/ S2"9!(!)e" c)!2e)!!(%) &e 9"B" c)%)" un :!c)%%)3"n!s: &%"2e @! c%ns!de)"2 "3en2u( c"uB"( "( une! 9%(!. 8ceste criterii sunt exprimate sub orma a trei condiii cunoscute sub numele de postulatele sau triada lui 4H$=. n conceperea i ormularea lor,
*FF
4H$= s!a inspirat din lucrrile pro esorului su 684HB =#3;# (*+-1!*++J%. 2ostulatele elaborate ntre anii *+,+ i *++? precizeaz c, un microb poate i considerat agentul cauzal al unei boli atunci cnd/ ! se gsete la toi indivizii care au prezentat aceleai semne de boal< ! se izoleaz i se menine n culturi pure, care ! inoculate, reproduc n condiii experimentale, o in ecie identic sau asemntoare cu in ecia natural. $u toate c nu oglindesc toate aetele procesului complex al in eciei microbiene, postulatele lui 4H$= au contribuit substanial la undamentarea tiini ic a patologiei bolilor in ecioase. $une)e" (" &unc2 " 2e7n!c!! de !B%(")e " 9"c2e)!!(%) Dn cu(2u)! &u)e. Hbinerea culturilor pure a ost condiionat de introducerea n practica de laborator a mediilor de cultur solide pe care bacteriile se dezvolt sub orm de colonii. 2osibilitatea izolrii n culturi pure a marcat un important pas nainte n practica individualizrii germenilor din punct de vedere taxonomic. Se:n"(")e" &)!:u(u! @en%:en de "(e)3!e C! &)e&")")e" &)!:e! su9s2"nAe )e;e("2%")e. 4H$= a observat o sensibilitate deosebit a cobailor inoculai cu bacilul tuberculozei, care, n cazul unei reinoculri, reacioneaz prin apariia unei in lamaii urmate de un ulcer la locul inocularii. 8ceast reacie este cunoscut sub numele de enomenul lui /",0. &otodat, cu intenia iniial de a prepara un vaccin, .HB#.& 4H$= a obinut tuberculina care, n stare
*F3
puri icat (220%, este utilizat i astzi ca preparat revelator n diagnosticul alergic al tuberculozei. IB%(")e" C! !den2!@!c")e" "3enA!(%) e2!%(%3!c! "! un%) !n@ecA!! 3)";e "(e %:u(u! C! "n!:"(e(%). 4H$= a stabilit etiologia tuberculozei umane, obinnd n culturi pure agentul cauzal (12cobacterium tuberculosis%, pentru care i astzi este uzual apelativul .acilul lui /oc+ ,ca nume comun. H alt bacterie izolat i descris de 4H$= este agentul holerei umane 34ibrio c+olerae). Pcoala german de microbiologie ondat de .HB#.& 4H$= a ost i ea ilustrat prin renumii bacteriologi, printre care s!au numrat Kriedrich ;R ler i =ans $hristian 9ram. K.@#0.@$= ;SKK;#. (*+JF!*1*J%, izoleaz i descrie agenii etiologici ai morvei i ru"etului, imagineaz reeta unor medii de cultur i a unor tehnici de colorare i mpreun cu 28C; K.H)$= (*+>-!*1F+% descoper virusul ebrei a toase. =83) $=.@)&@83 9.8M (*+J3!*13+% introduce n anul *++? metoda de colorare care!i poart numele, rmas pn astzi tehnica de baz pentru examenele bacteriologice curente. n perioada marilor descoperiri ale lui 28)&#C. i 4H$= este elucidat cauza a numeroase in ecii, iind identi icai i descrii agenii etiologici ai acestora de ctre o serie de bacteriologi de renume/ #)$=#.@$=, (#scherichia coli, *++F%, 3@$H;8@#. i 4@&8)8&H, ($lostridium tetani, *++?%, B.C$#, (Brucella melitensis, *++,%, 3H$8.0 i .HHG (MAcoplasma mAcoides, *+1+% etc. a. Descoperirea virusurilor.
*F?
$u toate c anterior descoperirii lor, 6#33#. i 28)&#C. au preparat vaccinuri antivirale , primul virus a ost pus n eviden abia n anul 1+*2. 0@M@&.@ @H)@KHE@$@ @E83HE)4@ (*+>1!*1F-%, un botanist rus, descoper virusul mozaicului tutunului, preciznd c aceast boal este produs de un microb extrem de mic, invizibil la microscop, care traverseaz porii iltrelor bacteriologice. 0up ase ani (*+1+%, ;HKK;#. i K.H)$= descoper primul microb iltrabil patogen pentru animale! virusul ebrei a toase. b. #nceputurile imunologiei. 2e baza marilor descoperiri din domeniul microbiologiei i paralel cu aceasta, ia natere i se dezvolt imunologia. #0D8.0 6#33#. (*,?1!*+F3%, un medic englez, preparase cu aproximativ un secol n urm (*,1+% vaccinul contra variolei umane dintr!o suspensie de cruste recoltate de pe ugerul vacilor cu variol. 0in lucrrile lui 6#33#. se inspir 28)&#C. n prepararea vaccinurilor contra holerei aviare, crbunelui i turbrii. 8ceste importante descoperiri destinate rezolvrii unor probleme practice de mare stringen sunt urmate de cercetri privind mecanismele de aprare antimicrobian ale organismului animal. $ele mai importante probleme elucidate n ultimele decenii ale secolului al G@G!lea, care con er suport teoretic metodelor imunologice de"a intrate n practica prevenirii bolilor microbiene, sunt/ stabilirea proprietilor antimicrobiene ale sngelui i tumorilor de ctre KH0H. n *++,<
*FJ
descoperirea enomenului de agocitoz de ctre @;@8 M#$@3@4HE (*+?J!*1*>%< prepararea primelor seruri imune de ctre B8B#P i ;#22 n *++1, urmai de B#=.@39 i 4@&8)8&H n *+1-< investigarea mecanismelor unor reacii antigen! anticorp (precipitare 54.8C), *++,< imunocitoliza 52K#@KK#. i @)8#KK, *+1?< i5area complementului 5BH.0#&, *+11%. =83) BC$=3#. (*+J-!*1-F% i 28C; #=.;@$= (*+J?!*1*J% sunt autorii primelor teorii privind modul de ormare al cuplului antigen!anticorp. &eoria Icatenelor laterale( a lui #=.;@$= subliniaz substratul chimic care st la baza constituirii cuplului. 1.3.E. ETA$A CONTEM$ORAN/ DE='OLTARE A MICROBIOLOGIEI DE
#tapa pe care microbiologia a parcurs!o de la nceputul secolului GG este dominat de o serie de importante descoperiri, datorate, n mare msur, implementrii n microbiologie a noilor metode corespunztoare progresului tehnico!tiini ic din chimie, optic, electronic, i alte domenii de activitate. $ele mai de seam cuceriri ale microbiologie contemporane pot i considerate urmtoarele/ introducerea substanelor chimioterapice i antibiotice n tratamentul bolilor microbiene, cunoaterea detaliilor structurale i a proceselor iziologice de inee ale microorganismelor, nceputurile, urmate de progresul rapid al studiilor de genetic microbian, descoperirea
*F>
ultrastructurii virusurilor i a mecanismelor in eciei virale, dezvoltarea imunologiei i a irmarea ei ca ramur independent a tiinelor biologice. a) #mbog!irea arsenalului terapeutic antimicrobian. 2n n primele decenii ale secolului GG numeroase boli microbiene erau practic incurabile, apt care a determinat meninerea unui procent ridicat de mortalitate n cazul unor epidemii ca antraxul, pesta, holera etc. C7!:!%2e)"&!ce(e au ost introduse n practica medical de ctre 28C; #=.;@$=, care a obinut salvarsanul, olosit cu succes n tratamentul si ilisului n "urul anului *1*-. $himioterapia i!a lrgit considerabil s era de aplicaii odat cu descoperirea sul amidelor.$u toate c prima sul amid a ost preparat de 28C; 9#;MH nc din *1-+, olosirea lor pe scar larg n tratamentul in eciilor microbiene a nceput abia n anul *13F cnd 9#.=8.0 0HM8$4 a avut iniiativa utilizrii n acest scop, a prontozilului 3sul amida roie), preparat de M@#&)$= i 4;8.#.. An2!9!%2!ce(e au intrat n patrimoniul terapiei antimicrobiene n anul *1?*, cnd #.3)& $=8@3 i =HD8.0 K;H.#L trateaz primii pacieni cu penicilin. # ectul antibacterian al acestei substane a ost descoperit nc din *1F1 de ctre 8;#G830#. K;#M@39, n urma sesizrii antagonismului exercitat de o ciuperc din genul &enicillium a de o cultur de sta ilococ. n anii urmtori au ost identi icate i extrase numeroase alte antibiotice (D84)M83 obine n *1?? streptomicina din %treptom2ces griseus, BC.4=H;0#. extrage n *1?, cloromicetina, din %treptom2ces venezuelae etc.%, iar unele au ost obinute prin sintez sau semisintez, nct astzi medicina dispune de de un
*F,
arsenal oarte bogat de antibiotice, de o mare varietate din punct de vedere al originii i al spectrului de activitate. b) $d%ncirea studiului morfologiei i fiziologiei microorganismelor. $unoaterea detaliilor de structur i a mecanismelor iziologice de inee au ost determinate de progresele din domeniul izicii i chimiei contemporane. Eizualizarea virusurilor i cunoaterea ultrastructurii microorganismelor a ost posibil datorit inventrii microscopului electronic. 2rimele microscoape electronice au ost construite n perioada *13-!*1?- de ctre irma )iemens i aproximativ din aceai perioad dateaz i primele cercetri electronooptice n domeniul microbiologiei. 8pro undarea cunoaterii mecanismelor iziologice ale microorganismelor este tributar dezvoltrii biochimiei i introducerii n biologie a modului de lucru cu izotopi radioactivi. 8st el, a devinit posibil cunoaterea structurii chimice a microorganismelor, studierea activitii lor enzimatice, stabilirea cu a"utorul atomilor marcai a soartei di eritelor substane din mediu n raport cu procesele vitale, etc. c) Descoperirea determinan!ilor genetici microorganismelor i dezvoltarea geneticii microbiene. ai
2rimele observaii, care mai trziu au contribuit la descoperirea sediului in ormaiei genetice, aparin lui 9.@KK@&=. n *1F+, acesta a constatat c pneumococii aviruleni, aparinnd tipului serologic @@, se pot trans orma n pneumococi viruleni aparinnd tipului serologic @@@, dac sunt inoculai la animale n amestec cu o suspensie de pneumococi de tip @@@ omori prin
*F+
cldur. n *1??, relund experimentul lui 9.@KK@&=, H)D8;0 8E#.L stabilete c responsabilitatea trans ormrii revine 830!ului eliberat de pneumococii de tip @@@ omori, care a ptruns n celulele pneumococilor de tip @@, aducnd cu sine mesa"ul genetic ce codi ic nsuirile caracteristice tipului @@@. 0escoperirea lui 8E#.L st la baza geneticii moleculare moderne, ea dovedindu!i valabilitatea pentru toate vieuitoarele. n anii urmtori au ost demonstrate i alte posibiliti de recombinare genetic la bacterii. 8st el, ;#0#.B#.9 i &8&CM au descris n *1?> enomenul de con"ugare, iar M@30#. i ;#0#.B#.9, n *1JF, enomenul de transducie agic. #lucidarea acestuia din urm a ost posibil datorit unei ntregi suite de descoperiri anterioare, ncepnd cu virusurile bacterio age semnalate de &DH.& n *1*J i enomenul de lizogenie descris de BH.0#& i $@C$T n *1F-. H important contribuie la dezvoltarea geneticii bacteriene au avut 68$HB i MH3H0, prin elucidarea mecanismului genetic de reglare a variaiilor enotipice pe baza teoriei operonului. 1.3.5. DE='OLTAREA MICROBIOLOGIEI DN ROMFNIA nceputurile cercetrii i practicii microbiologice n .omnia se situeaz spre s ritul secolului al G@G!lea. a) &coala rom%neasc de microbiologie medical a avut ca ondator pe marele savant E@$&H. B8B#P (*+J?!*1FJ%, care s!a ormat lucrnd n perioada
*F1
*++*!*++? n laboratorul lui 28)&#C. i n *++J n laboratorul lui 4H$=. B8B#P a des urat o prodigioas activitate tiini ic elabornd peste *.--- lucrri, FJ monogra ii i primul tratat de bacteriologie, n colaborare cu E@$&H. $H.3@;, n *++3. 0escoperirea n *++, a incluziilor produse de virusul turbrii n celulele piramidale din cornul lui 8mmon, cunoscute sub denumirea de incluziile lui .abe67egri, a serurilor imune (mpreun cu ;#22 n *++1%, a paraziilor din +ematiile unor specii de animale 5 pentru care a ost creat genului .abesia, n semn de recunoatere a paternitii acestei descoperiri !, reprezint contribuiile cele mai importante ale lui E@$&H. B8B#P la tezaurul tiinei romneti i universale. 2e lng acestea, trebuie menionate numeroasele sale cercetri privind antagonismului bacterian i descrierea granulelor metacromatice din citoplasma bacilului di teriei 3corpusculii .abe6)rnst). 2aralel cu activitatea tiini ic, E@$&H. B8B#P a dezvoltat i o bogat activitate didactic, organizatoric i obteasc, conturndu!se ca o igur luminoas de savant patriot. )avanii care ulterior au dezvoltat n mod strlucit coala de microbiologie medical romneasc au ost/ @H83 $83&8$CM@3H (*+>3!*13?%, $H3)&83&@3 @H3#)$C!M@=T#)&@ (*++3!*1>F%, M@=8@ $@C$8 (*++3!*1>1%, 0CM@&.C $HMB@#)$C (*++,!*1>*%, iar n domeniul virusologiei $H3)&83&@3 ;#E80@&@ (*+,?!*1JF% i P&#K83 ). 3@$H;8C (*+1>!*1>,%. b) &coala de microbiologie veterinar.
*3-
#lev al lui E@$&H. B8B#P, 28C; .@#9;#. (*+>,! *13+% a ost ondatorul colii romneti de microbiologie veterinar. #l a introdus practica diagnosticului bacteriologic n medicina veterinar romneasc i a ondat n *1** @nstitutul de seruri i vaccinuri de uz veterinar (n acea perioad, al treilea de acest el n lume%, care n *1FF primete numele lui 28)&#C.. $a cercettor, a des urat o susinut activitate tiini ic, remarcndu!se prin lucrrile sale privind bacilul morvei. .@9;#. a ost primul pro esor de Microbiologie i 8natomie 2atologic la Pcoala de Medicin Eeterinar din Bucureti, avnd marele merit de a i creat o coal n cadrul creia s!au ormat personaliti de seam, care s!au distins pe plan naional i internaional, continundu!i opera. 8;#G830.C E#$=@C (*+1-!*1J?% s!a remarcat printr!o activitate multilateral. #l a condus, dup .@9;#., @nstitutul 2asteur i $atedra de Microbiologie. E#$=@C a ost printre primii cercettori care au reuit adaptarea virusului pestei porcine, pe iepure. 8;#G830.C $@C$8 (*++-!*1,F% a ost pro esor de Boli @n ecioase la Kacultatea de Medicin Eeterinar din Bucureti. 2rin activitatea sa tiini ic a adus contribuii importante n probleme ca/ in ecia experimental cu bacilul morvei la taurine, tipizarea virusului ebrei a toase prin .K$, tratamentul durinei cu neosalvarsan, etc. $H3)&83&@3 $#.3T@83C (*+1-!*1,F% s!a remarcat printr!un studiu amplu asupra piroplasmelor i o ndelungat activitate ca director al @nstitutului 2asteur. @;@# 2H2HE@$@ (*1-F!*1+F%, personalitate multilateral, a avut contribuii deosebite n domeniul preparrii de noi vaccinuri contra ebrei a toase, turbrii, agalaxiei contagioase a oilor i caprelor i holerei aviare.
*3*
E;80@M@. DL3H=.803@4 (*1-F!*1,F% a adus o contribuie substanial la dezvoltarea cercetrii virusologice n medicina veterinar i a organizat producia biopreparatelor antipestoase porcine n cadrul @nstitutului 2asteur. 3@$H;8# )&8M8&@3 (*1-J!*113%, pro esor de Microbiologie la Kacultatea de Medicin Eeterinar din Bucureti, continund tradiia inaugurat de 28C; .@9;#., a contribuit la n lorirea colii romneti de Microbiologie Eeterinar. 2ractica veterinar i datoreaz, printre altele, dou vaccinuri cu mare valoare pro ilactic/ vaccinul anticrbunos preparat din tulpina acapsulogen **1- . i vaccinul antiru8etic preparat din tulpina E.F ! vaccinuri adoptate astzi i n alte ri. &otodat, cercetrile undamentale ntreprinse n domeniul biologiei sporogenezei, a antagonismului microbian, a bacterio agilor speciilor din genul .acillus, contribuiile aduse n domeniul clasi icrii sta ilococilor i pasteurelelor, completeaz palmaresul care l situeaz pe 3@$H;8# )&8M8&@3 printre reprezentanii de runte ai bacteriologiei veterinare romneti. 3@$H;8# MC3&@C (*1-1!*1,,%, dup o serie de lucrri inedite privind bacilul morvei, a iniiat i organizat cercetarea i producia de biopreparate n domeniul ebrei a toase. 2e lng ,,pionierii( Microbiologiei romneti, se cuvine a i menionate i alte personaliti reprezentative, care au des urat o rodnic activitate pe tarmul microbiologiei veterinare, ca/ 8;#G830.C 2H2, microbiolog, erudit a adus contribuii originale n domeniul brucelozei i al unor probleme de imunologie teoretic.
*3F
$H3)&83&@3 )C.083 a elaborat numeroase lucrri privind pararic7ettsiile. E8;#3&@3 EH;@3&@., pionier al unor domenii de cercetare, a diagnosticat i izolat, primul n ara noastr, ageni etiologici ca !isteria monoc2togenes, 1ora5ella bovis etc. 2H28 H$&8E@83, autor al unor lucrri privind salmonelozele animalelor i cursuri de Microbiologie i @munologie la K.M.E. &imioara. 830.#@ )&H#3#)$C (*1*?!F--*%, strlucit reprezentant al microbiologiei veterinare romneti, a condus destinele disciplinei de Microbiologie i @munologie n cadrul Kacultii de Medicin Eeterinar @ai, din anul *1>F (data n iinrii disciplinei%, pn n anul *1,?. 2ro esorul )toenescu a des urat o prestigioas activitate de cercetare, concretizat n peste *3- lucrri tiini ice originale. 0emne de menionat, datorit prioritii lor naionale, sunt studiile privind ence alomielita in ecioas (boala de &eschen% la porc n nordul Moldovei. 8;#G830.C 9.#$@83C (*13-!*11+%, distins intelectual, remarcabil cercettor microbiolog i cadru didactic de excelen, a continuat consolidarea colii de Microbiologie din cadrul K.M.E. @ai, n perioada *1,?!*11J. 2e plan tiini ic, a adus contribuii originale la metodica identi icrii grupului ). coli i la stabilirea corelaiilor existente ntre serogrup i specia animal receptiv.
*33
@nstitutul 2asteur, disciplinele de Microbiologie i @munologie de la cele patru aculti de Medicin Eeterinar, laboratoarele centrale, reeaua laboratoarelor "udeene i a laboratoarelor din ntreprinderi de industrie alimentar, reprezint astzi cadrul care asigur dezvoltarea practicii i a cercetrii n domeniul microbiologiei veterinare la noi n ar.
2.1. CONCE$TUL DE BACTERIE

Bacteriologia este ramura microbiologiei care se ocup cu studiul bacteriilor.&ermenul de bacterie a ost creat
*3?
de K e r d i n a n d $ o h n n *+,F, odat cu ncercarea de a elabora una dintre primele clasi icri ale acestor microorganisme. Bacteriile sunt microorganisme unicelulare cu structur procariot ! tip de organizare caracterizat prin lipsa membranelor intracelulare, spre deosebire de tipul eucariot la care nucleul i unele organite (cloroplastele, mitocondriile% posed membrane proprii. Materialul genetic sau genomul bacterian este reprezentat de un cromozom ormat dintr!o molecul mare de 803 i de uniti ereditare extracromozomale numite plasmide, constituite din molecule de 803 mult mai mici (aproximativ *U din masa cromozomului%. Bacteriile sunt lipsite de mitocondrii, aparat 9olgi i reticul endoplasmatic propriu!zis. Kunciile acestor structuri, caracteristice celulei eucariote, sunt suplinite de alte componente celulare, mai ales de membrana citoplasmatic.
*3J
C")"c2e)e(e d!@e)enG!"(e Hn2)e &)!nc!&"(e(e c"2e3%)!! de :!c)%%)3"n!s:e >dup9 1.,arp6,9rare, :00;)

C")"c2e)u( d!@e)enG!"( 3umVrul tipurilor de acid nucleic &ipul de organizare Hrganizarea materialului genetic #chipament enzi!matic Xi activitate metabolicV proprie $reXtere Mod de reproducere $apacitate di erenYiere celularV 2arazitism absolut Korme biologice existenYV Zn naturV de de $)!%n! ! 8celular ! 8bsente 8bsentV )intezV ampli icatV prin conversie 3u este cazul '!)%!B! * (8.3% 8celular 8.3 de talie micV 8bsente 8bsentV )unt sintetizaYi de celula gazdV 3u este cazul '!)usu)! *(803 )8C 8.3% niciodatV ambii 8celular 9enom viral 8bsente 8bsentV )unt sintetizate de celula gazdV 3u este cazul $onstant, obligat Eirion in ecYios, temporar extracelular Eirus vegetativ, intracelular, Zn curs de sintezV Eirus integrat, ixat Zn genomul celulei gazdV ;a graniYa dintre viu Xi neviu B"c2e)!! F (803 W 8.3% $elular procariot Cn singur cromozom Xi plasmide 2rezente 2rezentV @ndependent, sciziparitate 8bsentV 8bsent $elulV vegetativV, capabilV de diviziune )por ( ormV de conservare % C!u&e)c! F (803 W 8.3% $elular eucariot Mai mulYi cromozomi 2rezente 2rezentV @ndependent, sau asexuat 2rezentV 8bsent Miceliu sau pseudomiceliu )por ( ormV de reproducere%
sexuat
$onstant obligat $onstant obligat 2.2.$./ proteinV 8.3 mic prionicV celularV intranuclear normalV 2.2.)./ proteinV prionicV din scrapie patologicV ;a graniYa dintre viu Xi neviu @dem
2oziYia pe ilogeneticV
scara
Microorganisme cu organizare procariotV
Microorganisme diverse grade organizare
cu de
**-
Bacteriile sunt metabolic active, dispunnd de un echipament enzimatic propriu care realizeaz reaciile celulare de degradare i biosintez. 3utriia este de tip absorbtiv, din punct de vedere al accesului substanelor nutritive n celul i de tip chimiotro sau ototro , dup modul de obinere a energiei necesare proceselor nutritive. 2rincipala modalitate de multiplicare a bacteriilor este diviziunea simpl binar sau sciziparitatea. Cnele specii bacteriene pot exista n natur sub dou orme biologice alternative/ orma vegetativ care reprezint celula bacterian propriu!zis, dotat cu toate nsuirile caracteristice speciei din care ace parte i orma sporulat, care este o orm de rezisten i de conservare a speciei n condiii ostile, improprii vieii. )pre deosebire de celula vegetativ biologic activ, sporul bacterian este o orm dormand, caracterizat prin absena unciilor de multiplicare i a celor biosintetice i cu o oarte redus intensitate a celorlalte activiti vitale. Bacteriile se di ereniaz de celelalte grupe de microorganisme prin caracterele prezentate n tabelul *.
2.2. NOIUNI DE TA0ONOMIE NOMENCLATUR/ BACTERIAN/

2.2.1. TA0ONOMIA BACTERIILOR
&axonomia (gr. taxon [ grup% sau sistematica biologic este tiina clasi icrii, n a crei s er de preocupri intr urmtoarele obiective/ stabilirea criteriilor taxonomice<
**-
clasi icarea indivizilor sau a unitilor de baz n categorii taxonomice (taxoni% pe baza criteriilor stabilite< nomenclatura sau denumirea taxonilor. identi icarea unitilor necunoscute prin comparaie cu sistemul taxonomic rezultat din primele trei operaiuni. Cn taxon biologic reunete o sum de indivizi asemntori ntre ei n virtutea descendenei dintr!un strmo comun, deci posesori ai unei in ormaii genetice comune. 2rin urmare, clasi icarea organismelor vii este o clasi icare natural sau ilogenetic. $omparativ cu celelalte regnuri, clasi icarea organismelor procariote pe baza acestui criteriu a ntmpinat numeroase di iculti, generate de cauze obiective, dintre care menionm/ numrul redus de caractere mor ologice i insu iciena amprentelor osile care re lect ilogenia < bacteriile nu pot i studiate ca indivizi, ci ca populaii, din cauza di icultilor de manipulare a unei singure celule< apariia recvent n populaiile bacteriene a variantelor. n consecin, clasi icarea bacteriilor s!a spri"init deseori pe criterii enotipice discutabile, din care deriv gradul mult mai mare de convenional i arbitrar al taxonomiei bacteriene, n comparaie cu cel al plantelor i animalelor. 9ruparea bacteriilor n categorii taxonomice pe criterii ilogenetice a devenit posibil relativ recent, prin aplicarea tehnologiilor moderne de biologie molecular i biochimie n studiile de genetic bacterian. 2rincipalii parametri luai n studiu, n acest scop, sunt / *. coninutul relativ de guanin + citozin( 9+$U% al 803 puri icat< cu ct coninutul 9+$ a dou bacterii este mai apropiat, cu att acestea sunt mai nrudite<
***
F. omologia secvenelor nucleotidice ale 803, cuanti icat prin ormarea moleculelor hibride pornind de la dou catene 803 cu origini di erite< 3. studiul secvenelor oligonucleotidice ale 8.3 ribozomal< gradul de nrudire a dou organisme este direct proporional cu omologia secvenelor nucleotidice din 803 sau cu numrul de secvene oligonucleotidice comune din 8.3 ribozomal. ?. studiul structurii primare a enzimelor izo uncionale sau a citocromului $< J. studiul imunologic al proteinelor bacteriene omoloage. 2e baza criteriului omologiei materialului genetic, n ultimii ani clasi icrile convenionale ale bacteriilor au ost supuse unor repetate remanieri. 0ei acest criteriu de identi icare i ncadrare taxonomic a bacteriilor este, indiscutabil, cel mai obiectiv, din cauza gradului crescut de di icultate tehnic i a aparaturii pe care o reclam, n practica bacteriologic curent se recurge n continuare la identi icarea pe baza caracterelor enotipice (mor ologice, culturale, metabolice, antigenice, ecologice, de patogenitate, de sensibilitate la actori izici, chimici i biologici, etc. %.
2.2.1.1. C"2e3%)!! de 2"I%n!

C%nce&2u( de s&ec!e 9"c2e)!"n. Cnitatea taxonomic de baz a lumii vii este specia. \n cazul organismelor superioare, din regnul vegetal sau animal, exist criterii bine stabilite de delimitare a speciilor, cel mai important iind capacitatea de ncruciare. ;und n considerare acest criteriu de baz, specia poate i de init ca o comunitate reproductiv ormat din populaii care habiteaz un anumit areal i ai cror indivizi se ncrucieaz liber n natur cu orice individ de sex opus, dnd natere la descendeni
**F
ertili care menin relativ omogen ondul de gene al populaiei (Bu!uc G. 1***%. )pre deosebire de reproducerea organismelor superioare, diviziunea celular a bacteriilor este o nmulire vegetativ, iar schimbul de material genetic prin con"ugare (vezi cap. 9enetic% este rar i nu reprezint un caracter de specie. 8ceste di erene, la care se adaug deosebirile enotipice mai puin tranante ale bacteriilor i capacitatea mult mai mare de a su eri variaii enotipice i genotipice, sporesc gradul de di icultate n delimitarea speciilor bacteriene i gsirea unui punct de vedere unitar asupra conceptului de specie bacterian. 0in cele cteva ncercri de de inire, crora literatura ultimelor decenii le!a acordat mai mult atenie ( ) t a m a t i n! *1J+< $ o ] a n! *1,J< 9 o r d o n 5 *1,+< ) t a l e A i 4 r i e g 5 *1+?< citai de Rducnescu C! c%(. 1*+,% rezult c speciile bacteriene ar putea i privite ca populaii de celule cu caractere enotipice comune, prin care di er semni icativ de alte populaii. Kiecare populaie care aparine unei specii poart numele de tulpin bacterian (clon sau su%. #a este o cultur pur care i are originea ntr!o singur izolare dintr!un mediu natural. 2entru practica bacteriologic, tulpina bacterian are, prin analogie cu organismele superioare, valoarea unui individ. &oate examenele necesare identi icrii bacteriilor i ncadrrii lor taxonomice se execut pe tulpini i nu pe celule izolate, plecnd de la premiza c o populaie care constituie o tulpin provine din descendena uneia sau a unui numr restrns de celule i c este genetic omogen. )tudiile de taxonomie bacterian se e ectueaz ntotdeauna pe un numr ct mai mare de tulpini. 2entru iecare specie bacterian, ntr!una din coleciile bacteriene recunoscute pe plan internaional, se gsete o tulpin tip sau de re erin la care se raporteaz i cu care se compar celelalte tulpini din specia respectiv.
**3
2eriodic, avndu!se n vedere enomenele de variabilitate care se produc n orice populaie bacterian, tulpinile din colecii se cloneaz. Hperaia de clonare const n dispersarea germenilor pe medii solide, urmat de transplantarea unui numr de colonii izolate. n urma examinrii subculturilor, se selecioneaz pentru a i pstrate mai departe n colecie, clonele ale cror proprieti se apropie, pe ct posibil pn la identi icare, de proprietile iniiale pe care le prezenta tulpina respectiv la izolarea ei din mediul natural. 2strarea tulpinilor bacteriene n colecii se realizeaz prin treceri (pasa"e% pe medii proaspete la intervale de timp impuse de longevitatea n culturi a speciei, sau prin lio ilizare. Su9d!;!B!un!(e s&ec!e! 9"c2e)!ene. $rearea unor subdiviziuni n cadrul speciei se "usti ic prin existena unor di erene de diverse grade de esenialitate ntre tulpini. 8ceste subdiviziuni sunt subspecia i varianta sau tipul. 'ubspecia implic di erene privind caractere importante, r a depi ns limitele admise pentru specie. Varianta (var.% sau tipul se abate de la genotipul speciei printr!un singur caracter di erenial, sau printr!un numr restrns de caractere. #ste taxonul in rasubspeci ic cu care se opereaz cel mai recvent n practica bacteriologic. n uncie de caracterul di erenial se pot distinge mai multe categorii de variante sau tipuri ( tab. F%. T"I%n!! de )"n3 su&e)!%) s&ec!e! n succesiunea lor ascendent, sunt/ genul, amilia, ordinul, clasa i diviziunea (ncrengtura sau phAlum%. (enul reprezint un grup taxonomic alctuit din mai multe specii nrudite cu specia tip. #l poate i ormat dintr!o singur specie (gen monotipic%, sau, obinuit,din mai multe specii. &oate bacteriile i au locul n cadrul unui gen, iar identi icarea genului st la baza diagnosticului bacteriologic curent. Familia grupeaz mai multe genuri nrudite, dintre care unul este considerat genul tip. 3umeroase genuri nu au ost ncadrate nc n amilii.
**?
)rdinul este un taxon ormat din amilii nrudite, mai rar utilizat, puine grupe de bacterii iind ncadrate n ordine. *lasa este un taxon superior, care grupeaz mai multe ordine nrudite. Diviziunea reprezint o grupare de clase nrudite. T"9e(u( 2 T"I%n! !n@)"s&ec!@!c! >du& S2"(eJ C! K)!e3 c!2. de Rducnescu C! c%(. 1*+, c%:&(e2"2 de "u2%")e?
Denu:!)e" 2"I%nu(u! Biovar )erovar 2atovar Kagovar Mor ovar $himio! sau chemovar $olicino! sau bacteriocinovar S!n%n!: Biotip )erotip 2atotip Kagotip Mor otip $himio! sau chemotip $olicino! sau bacteriocinotip C")"c2e)u( d!@e)enA!"( 2roprieti biochimice sau iziologice speciale 2articulariti de structur antigenic 2atogenitatea pentru organisme gazd din anumite specii )ensibilitatea a de anumii bacterio agi $aractere mor ologice aparte 2articulariti metabolice )ensibilitate di erit la anumite colicine sau bacteriocine
2.2.1.2. C("s!@!c")e" 9"c2e)!!(%)

@n ultimele cinci decenii au aprut mai multe ncercri de clasi icare a bacteriilor, 2 r e v o t (*1J, i *1>*%, 4 r a s i l n i c o v (*1J1%, ) 7 e r m a n (*1>,%, M u r r a A (*1,?%. Cltima clasi icare a aprut n *11? n cadrul Manualului de )istematic Bacterian a lui B e r g e A (tab. 3%. $ele patru ilumuri se di ereniaz prioritar prin structura peretelui celular. $lasele, amiliile, genurile i speciile sunt departa"ate pe baza unor caractere mor ologice, iziologice, biochimice, ecologice, etc.
**J
T"9e(u( 3 C("s!@!c")e" 9"c2e)!!(%) (" n!;e(u( 2"I%n!(%) su&e)!%)! D!;!B!une" >$7J(u:?

I. <racilicutes 5 bacterii 9ram negative II. =irmicutes 5 bacterii 9ram pozitive III. (enericutes 5 bacterii lipsite de perete celular I'. 1endosicutes 5 perete celular lipsit de stratul de peptidoglican
C("s"
@.*. %cotobacteria @.F. 'no52p+otobacteria @.3. "52p+otobacteria @@.*. =irmibacteria @@.F. (+allobacteria @@@.*. 1ollicutes @E.*. 'rc+aeobacteria
$lasi icarea uureaz e ortul de identi icare a speciilor n scopuri practice, acesta iind de alt el, obiectivul principal al manualului amintit anterior. 2.2.2. NOMENCLATURA BACTERIILOR $on orm normelor generale de nomenclatur n biologie, iecare bacterie este denumit, dup sistemul binominal al lui ;inn^, prin dou cuvinte latinizate (de exemplu, .acillus ant+racis%, care caracterizeaz oarte sintetic bacteria respectiv. 2rimul cuvnt indic genul i este un substantiv la singular de origine latin, greac, sau de alt origine, dar latinizat. 3umele genurilor sunt inspirate, de regul, de / unele caractere mor ologice, recvent orma i modul de grupare (.acillus [ baston mic< %tap+2lococcus [
**>
ciorchine de strugure< %arcina [ pachet, etc.%, asociate uneori cu habitatul natural al bacteriei (!actobacillus [ bastona din lapte%< numele bacteriologului care a izolat primul bacteria respectiv sau a avut merite deosebite n studiul ei/ .rucella (Bruce%, &asteurella (2asteur%, )sc+eric+ia (#scherich%, etc. 3umele genului se scrie cu iniial ma"uscul, ntreg sau, n cazul unor enumerri i numai atunci cnd precede numele speciei, prescurtat/ .. ant+racis, ). coli, %. aureus. $el de!al doilea cuvnt denumete specia i este descriptiv pentru substantivul care reprezint genul. #l poate i/ un ad"ectiv acordat gramatical cu numele genului (&roteus vulgaris, ,lostridium septicum, &asteurella multocida, etc.%< un substantiv la cazul genitiv (%treptococcus lactis, 12cobacterium tuberculosis, .acillus ant+racis, etc.%< un nume propriu la cazul genitiv (&rovidencia rettgeri%, etc. 3umele speciei se scrie ntotdeauna cu liter mic. #l se poate re eri la/ un caracter mor ologic, cultural sau biochimic (%tap+2lococcus aureus, !actobacillus acidop+ilus, etc.%< gazda receptiv la care produce in ecii (.rucella suis, %treptococcus e>ui, 12coplasma gallinarum, etc.%< boala, un simptom sau o leziune caracteristic (,lostridium tetani, .acillus ant+racis, 12coplasma agalactiae, !isteria monoc2togenes, etc.%< numele bacteriologului care a descris primul bacteria ('ctinobacillus lignieresii, ,lostridium c+auvoei, ,o5iella burneti, etc.%.
**,
3umeroase specii bacteriene au i nume comune, olosite deseori n vorbirea curent, ca de exemplu / bacilul piocianic sau bacilul puroiului albastru, pentru &seudomonas aeruginosa< bacilul lui 4och sau B.4., pentru 12cobacterium tuberculosis< bacilul tetanosului, pentru ,lostridium tetani, etc. 2entru o tulpin bacterian care nu a ost nc identi icat se olosete denumirea de ,,izolat(, iar dup ncadrarea n gen, pn la precizarea speciei, denumirea genului urmat de abrevierea termenului species? sp. pentru singular i spp. pentru plural (ex. %treptococcus sp., %almonella spp.%. 'ubspeciile i variantele se denumesc adugnd la numele speciei, termenii subspecies (prescurtat subsp.%, respectiv varietas (prescurtat var.%, urmai de numele subspeciei sau variantei respective/ ,amp2lobacter etus subsp. etus< =rancisella tularensis var. palearctica, etc. Eariantele sau tipurile se mai noteaz cu ci re (la %treptococcus pneumoniae i .rucella spp.%, litere (la ,lostridium per ringens i ,lostridium botulinum%, sau prin speci icarea antigenilor H i =, (la )sc+eric+ia coli i %almonella spp.%. Cn caz particular se ntlnete la leptospire i salmonele, unde serotipurile sunt tratate, din punct de vedere al nomenclaturii, la el ca speciile, pentru denumirea serotipurilor de %almonella utilizndu!se recvent numele localitilor de unde au ost izolate / %. dublin, %. panama, %. branderburg, etc. )rdinul i familia sunt denumite cu numele genului celui mai reprezentativ pentru gruparea taxonomic respectiv, la care se adaug su ixele ,,ales( pentru ordin i ,,aceae( pentru amilie (ex. genul reprezentativ *ic@ettsia, ordinul *ic@ettsiales, amilia *ic@ettsiaceae). #ncrengtura i clasa 5 taxoni de rang superior 5 au denumiri constituite dintr!un nume generic i diverse su ixe. ;a ora actual, n taxonomia bacterian se mani est tendina de a se opera
**+
din ce n ce mai puin cu aceste categorii taxonomice, din cauza relativitii i ine icienei lor. \n unele cazuri, clasi icrile opereaz cu ordine, amilii i intermediari (subordine, sub amilii, triburi%, iar alteori, se ignor i acestea, operndu!se direct cu categoriile/ gen, specie (uneori subspecie% i variant (tip%.
2.3. MORFOLOGIA BACTERIILOR
SI
BIOLOGIA
2.3.1. MORFOLOGIA CELULEI 'EGETATI'E $unoaterea caracteristicilor mor ologice ( orm, dimensiuni, mod de grupare, a initi tinctoriale, particulariti mor ologice% are o importan deosebit n cercetarea i identi icarea bacteriilor, deoarece acestea constituie criterii taxonomice de baz. 2.3.1.1. F%):" s! :%du( de 3)u&")e " 9"c2e)!!(%) Korma celulelor bacteriene este greu de apreciat n probele prelevate din mediile naturale, motiv pentru care mor ologia bacteriilor se studiaz pe celulele cultivate n condiii arti iciale, de laborator, pe medii de cultur adecvate. Korma bacteriilor este controlat genetic, dar este in luenat ntr!o mare msur de actorii de mediu (temperatur, p=, compoziia mediului de cultur, etc.% i de vrsta culturii. 0eoarece condiiile de cultur se modi ic n timp putnd cauza apariia unor orme aberante, mor ologia bacteriilor se apreciaz numai pe culturi tinere (proaspete%.
**1
0up orma celulei, bacteriile pot i grupate n patru categorii distincte/ s erice, cilindrice, spiralate sau helicoidale i ptrate ( ig.3.%.
F!3.3 Forme posibile la bacterii

;.coc s ericA :.coc ovalA 3.coc asimetric cu un pol ascuit $ unul rotun8itA B.coc asimetric reni ormA C. orm cocoidA D.cocobacilA E.bacil inA F.bacil asimetric Gn orm de mciucA H.bacil cu capetele retezateA ;0.bacil cu capetele rotun8iteA ;;.vibrionA ;:.spiroc+et cu spire mariA ;3.spiroc+et cu spire miciA ;B. bacterii ptrate
;a cele mai multe specii bacteriene, celulele 5 iice rezultate n urma diviziunii se separ i rmn independente datorit micrii bro]niene, activitii lagelilor n cazul bacteriilor mobile, curenilor de convecie din mediu etc. ;a unele specii ns, ma"oritatea celulelor! iice nu se despart timp de una sau mai multe generaii, ormnd constant grupri caracteristice cu valoare taxonomic. Modul de grupare a bacteriilor este determinat de raportul geometric dintre planurile succesive de diviziune i de tendina celulelor! iice de a rmne unite.
*F-
+acteriile sferice
@n terminologia curent aceste bacterii poart denumirea de coci. #le pot avea orm s eric, oval, lanceolat sau reni orm, diametrele celulei iind aproximativ egale. @n uncie de raporturile care se stabilesc ntre celulele! iice dup diviziune, cocii pot i izolai sau grupai. 2rincipalele moduri de grupare sunt ( ig. ?%/
F!3.E. ,odalit!ile de grupare a cocilor n func!ie de orientarea planurilor de diviziune celular.-dup (ortora I.<. i col.,;HHE)
*F*
a) diplococul, care rezult prin diviziunea celulelor n planuri ucce ive paralele, celulele !iice r"#n#nd $rupate c#te dou% &) treptococul, con tituit din coci nln'ui'i ca ur"are a diviziunilor ucce ive n planuri paralele (i a per i ten'ei le$turilor ntre celulele)!iice pe parcur ul "ai "ultor $enera'ii% c) tetrada au tetracocul ) o $rupare de patru celule rezultat din dou diviziuni ucce ive n planuri perpendiculare% d) arcina ) o $rupare de opt coci u& !or"a a dou tetrade uprapu e, care rezult n ur"a a trei diviziuni n planuri perpendiculare* al doilea pe pri"ul (i al treilea pe pri"ele dou% e) stafilococul, la care planurile succesive de diviziune sunt dispuse n direcii diferite, astfel nct celulele rezultate formeaz grmezi neregulate, asemntoare ciorchinilor de struguri.
+acteriile cilindrice cunoscute sub denumirea comun de bacili, au orm de bastonae. .aportul dintre cele dou axe variaz ns oarte mult, nct, unii bacili au un aspect ilamentos, uneori rami icat, iar alii se apropie de orma s eric! oval, iind numii din acest motiv cocobacili. +acilii pot i drepi sau uor ncurbai la mi"loc sau la una din extremiti, cu capetele tiate drept ca la .acillus ant+racis, rotun"ite ca la ma"oritatea speciilor, ascuite ca la =usobacterium usi ormis, sau dilatate n orm de picot sau de haltere ! caracteristic a genului ,or2nebacterium.
*FF
0iviziunea bacililor are loc dup un singur plan transversal pe axul longitudinal. 0up diviziune, bacilii pot rmne izolai sau grupai cte doi (diplobacili%, n lanuri cu lungimi variabile (streptobacili%, n palisad (asemntor dinilor unui pieptene%, sau sub orm de idiograme chinezeti ( ig. J% Filamentul este considerat de unii autori o orm iar de alii, un mod de grupare. )e pare c ultimul punct de vedere este mai corect ntruct ilamentul reprezint n realitate un plasmodiu, multiplicarea citoplasmei i a materialului nuclear ne iind urmat i de constituirea pereilor celulari i a membranelor citoplasmatice separatoare ntre celule. Formele ramificate sunt o excepie la bacterii. #le reprezint tot plasmodii i sunt caracteristice actinomicetelor ! grup de bacterii limitro e, din punct de vedere mor ologic i al poziiei taxonomice, ciupercilor.
+acteriile spiralate sau .elicoidale

@n uncie de numrul de spire i lexibilitatea peretelui celular, exist trei subtipuri mor ologice de bacterii spiralate /
a% ;!9)!%nu(, cu aspect de virgul sau asemntor literei ,,)(< b% s&!)!(u(, cu mai multe spire i un perete celular rigid, care i con er stabilitate mor ologic i dimensional.< c% s&!)%c7e2", alctuit de asemenea din mai multe spire, dar care sunt lexibile (se pot strnge sau relaxa% datorit elasticitii peretelui celular .
*F3
F!3.5. ,odalit!ile de grupare a bacililor/

;.diplobacilA :.grupare Gn orma literei 4A 3.streptobacilA B. ilamentA C. ilament cu citoplasm granularA D. orm rami icatA E.grupare Gn palisadA F. grupare Gn ideograme c+inezeti.
+acteriile ptrate au ost puse n eviden n probele
de ap hipersalin prelevate din blile 2eninsulei )inai. #le ormeaz adesea placarde de ?!*> celule rezultate din mai multe diviziuni succesive, la care se disting cu mult claritate planurile de diviziune. Korma ptrat a acestor bacterii i aptul c sunt mult aplatizate (-,* 5 -,J _m grosime% se explic prin lipsa presiunii interne a celulelor n mediu hiperosmotic, situaie n care, teoretic,bacteriile pot lua orice orm.
*F?
2.3.1.2. C%ns2"n2e(e @!B!ce

D!:ens!un!(e 9"c2e)!!(%) variaz n uncie de specie, ntre -,* 5*J micrometri (_m% lungime (bacteriile ilamentoase a"unnd pn la J-- _m% i -,-F 5 F _m, diametru transversal. 0in acest punct de vedere, bacteriile pot i grupate n trei categorii/ mici -,3 5 *,J`-,* 5-,J _m (ex. .rucella spp.%< mi"locii F 5 3`-,J 5 * _m (ex.)sc+eric+ia spp.%< mari *- ! *J`* ! F _m (ex. .acillus spp., ,lostridium spp. %. @n general, exist o corelaie ntre lungimea i diametrul transversal al celulelor bacteriene, r ca aceasta s constituie o regul. 8st el, germenii din genurile .acillus i ,lostridium, care sunt cei mai lungi (cu excepia celor ilamentoi%, sunt n acelai timp i cei mai groi, pe cnd bacilul ru"etului ()r2sipelot+ri5 r+usiopat+iae%, a crui lungime poate a"unge la 3 5 ? _m, este oarte subire (-,F 5 -,?_m, diametru transversal %. '%(u:u( 9"c2e)!!(%) oscileaz ntre -,oo3 x *-!*F (ex. 12coplasma spp. % i ,,->+ x *-!*F (.acillus megat+erium %. Dens!2"2e" s"u 3)eu2"2e" s&ec!@!c " ce(u(e(%) 9"c2e)!ene este ceva mai mare dect a apei, situndu!se ntre *,-, i *,-3F. Ealoarea acestui indice di er n uncie de compoziia chimic a bacteriilor, care variaz de la o specie la alta i este in luenat de condiiile de mediu i de vrsta celulei. 8st el, celulele tinere, care sunt turgescente, au o densitate mai mic dect cele mbtrnite, iar la bacteriile cultivate pe medii lichide, densitatea este mai mic dect la cele cultivate pe medii solide. 0atorit densitii apropiate de cea a apei, bacteriile plutesc n mediile lichide, din care pot i separate prin centri ugare.
*FJ
2.2.1.3. S2)uc2u)" ce(u(e! 9"c2e)!ene

$elula bacterin este constituit dintr!un nveli i un coninut. Cnele specii bacteriene sunt prevzute n plus cu organite de micare (cilii sau lagelii% i`sau cu organite de aderen ( pilii sau imbriile%. @n igura numrul > este reprezentat schematic structura unei bacterii ipotetice, cu toate componentele menionate.
F!3., 'tructura unei celule bacteriene tipice 3dup 1zreanu ,, ;HHH)
*F>
1n;e(!Cu(
2rincipalele componente ale nveliului celulei bacteriene sunt/ :e:9)"n" c!2%&("s:"2!c, prezent la toate bacteriile n contact intim cu citoplasma< &e)e2e(e ce(u(") situat la exteriorul membranei, prezent la toate bacteriile cu excepia micoplasmelor< c"&su(" C! 3(!c%c"(!Iu( 5 structuri extraparietale prezente numai la un numr restrns de specii bacteriene i numai n anumite condiii de mediu.
Me:9)"n" c!2%&("s:"2!c
3umit i membran plasmatic sau membran celular, aceast component esenial a tuturor bacteriilor acoper de "ur mpre"ur citoplasma, separnd!o de aa intern a peretelui celular. #xaminat la microscopul electronic, membrana citoplasmatic apare ca o ormaiune triplu strati icat, cu o grosime de ,,J 5 *nanometri, constituit dintr!un strat subire electronotransparent, delimitat de ambele pri de cte un strat mai gros, electronoopac. )cheletul biochimic al membranei este constituit dintr!un strat dublu de os olipide am ipatice cu o orientare polar a regiunilor hidro ile, spre exterior i respectiv spre interior i a celor hidro obe, a n a ( ig.,%. 8cest strat bimolecular os olipidic con er membranei rolul de barier osmotic i o er un sediu numeroaselor proteine enzimatice care se deplaseaz spre exteriorul sau interiorul celulei.
*F,
F!3.4 ,embrana citoplasmatic 0 reprezentare sc.ematic a unui model tridimensional 3dup !odis+ i *ot+man,;HEHA cit.de Jarnea <., ;HF3). Membrana citoplasmatic servete drept iltru selectiv, permind accesul substanelor nutritive n celul i eliminarea cataboliilor ! procese reglate enzimatic de ctre sistemele de transport i permeaze. #a este implicat, de asemenea, n reglarea proceselor de diviziune celular i sporogenez. 2rin invaginarea i plierea membranei spre interiorul celulei bacteriene iau natere nite ormaiuni numite mezozomi ( ig.+%, care se leag de genomul bacterian i care, n uncie de con iguraia pliurilor, pot i veziculari sau saci ormi, lamelari i tubulari.
*F+
F!3.+ 'tructura sc.ematic a mezozomului bacterian 3dup *eusc+ i

.urger, ;HE3A cit.de Jarnea <.,;HF3).
Mezozomii sunt sediul unei intense activiti enzimatice i ndeplinesc urmtoarele uncii biologice/ suplinesc lizozomii i mitocondriile 5 organite absente n celula de tip procariot< regleaz replicarea genomului n procesul de diviziune celular< particip la ormarea septului transversal care separ celulele dup diviziune<
*F1
reprezint zonele specializate pentru ptrunderea n celul a ragmentelor de 803 n cursul procesului de trans ormare genetic.
$e)e2e(e ce(u(")
#ste situat la exteriorul membranei citoplasmatice iind mai gros dect aceasta (*J 5 3- nanometri%, rigid i poros. )tructura mor ochimic a peretelui celular este determinant pentru grosimea, gradul de rigiditate i a initatea sa a de anumite substane colorante (a initate tinctorial%. @n uncie de modul n care se coloreaz prin metoda 9ram, bacteriile se mpart n 9ram pozitive (colorate n violet% i 9ram negative (colorate n rou%, iar prin metoda Miehl 5 3eelsen, n acidorezistente i neacidorezistente. ;a bacteriile 9ram pozitive peretele este gros i rigid, iar la cele 9ram negative este mai subire i mai elastic. 2e baza prezenei, respectiv a absenei peretelui celular i a nsuirilor sale mai sus menionate, 9 i b b s o n i M u r r a A au propus clasi icarea regnului &rocar2otae n trei subdiviziuni/ 1ollicutes 5 bacteriile r perete (micoplasmele%, =irmicutes 5 bacteriile 9ram pozitive cu peretele gros i rigid, <racilicutes 5 bacteriile 9ram negative cu peretele mai subire i mai elastic. 2eretele celular este ormat dintr!un strat bazal care ader la membrana citoplasmatic, similar ca i compoziie chimic la toate bacteriile i un strat super icial cu o structur di erit la cele trei categorii tinctoriale (9ram pozitive, 9ram negative, acidorezistente%, numit stratul structurilor speciale. )tratul bazal este un polimer glicopeptidic numit peptidoglican sau murein (lat. murus [ zid%. #l este ormat din macromolecule lungi de zaharide (3!acetilglucozamin i acid 3! acetilmuramic% dispuse paralel i legate ntre ele prin puni polipeptidice, realiznd ast el o reea care ncorseteaz celula i i con er rezisten mecanic ( ig. 1%.
*3-
F!3.* ,odel de structur molecular a peptidoglicanului 3dup

(ripper i Krig+t,;HEEA cit. Jarnea,;HF3)? < = 76acetilglucozaminA 1 = acid 76acetilmuramicA L = puni polipeptidiceA
;a bacteriile 9ram pozitive, stratul structurilor speciale conine polizaharide i proteine iar la numeroase specii, acizi teichoici, lipoteichoici i teichuronici (reprezentai n ig.1, sub orma unor tuburi lexibile%, care con er peretelui rigiditate. 2eretele bacteriilor 9ram negative, dei mai subire, are o structur mai complex. )tratul bazal este ormat dintr!un complex peptidoglican!lipoprotein, iar stratul structurilor speciale este constituit dintr!o membran extern n care predomin
*3*
liopopolizaharidele (;2)%. $omponenta lipidic a membranei externe di er oarte puin de la o specie bacterian la alta, n timp ce componenta poliglucidic are speci icitate chimic i antigenic (antigenul somatic ,,H(%, pemind identi icarea serologic i serotipizarea mai multor specii bacteriene ()sc+eric+ia coli, %almonella spp, &asteurella multocida, etc.%. 2oliglucidul ,,H( ndeplinete i rolul de receptor pentru bacterio agi, iar n ansamblul su, complexul ;2) are uncia de endotoxin.
F!3.1. ". 'tructura peretelui bacterian la bacteriile (ram pozitive 3dup 0art (. i %+ears &., ;HHE)
*3F
@ntre peretele celular i membrana citoplasmatic a bacteriilor 9ram negative se gsete un spaiu periplasmatic, care conine proteine de legare cu rol n chimiotaxie i numeroase enzime ( os ataz alcalin, enzime hidrolitice, deoxiribonucleaze, etc.% cu rol n pregtirea substanele care au traversat peretele, pentru trecerea lor prin membrana citoplasmatic. )tratul structurilor speciale este mai bine reprezentat cantitativ la speciile 9ram negative, n comparaie cu cel bazal, raport inversat la speciile 9ram pozitive ( ig. *- a, b%. ;a bacteriile acidorezistente, structurile speciale sunt oarte bogate n complexe ormate din acid micolic i ceruri, apt care explic rezistena acestora la decolorarea cu acizi (coloraia Miehl 5 3eelsen%. 2eretele celular are o semni icaie biologic multipl/ prin rigiditatea sa, asigur meninerea ormei celulelor bacteriene< ndeplinete rol protector a de actorii nocivi de mediu, n special a de ocul osmotic, avnd n vedere c mediile de via ale bacteriilor sunt hipotonice n raport cu coninutul celulei bacteriene< prin porii si, mediaz schimbul de substane ntre mediu i celul< particip la procesul de cretere i diviziune celular, urmnd membrana citoplasmatic n ormarea septurilor transversale care separ celula!mam n cele dou celule! iice< conine receptori pentru bacterio agi i bacteriocine< conine enzime autolitice care se activeaz n momentul sporulrii elibernd sporul prin liza sporangiului i n momentul germinrii, determinnd liza nveliurilor sporale.
*33
Hrice actor care altereaz sau inhib sinteza peptidoglicanului ( ermeni litici, antibiotice, carene nutritive , etc.% determin, att ,,in vitro( ct i ,,in vivo(, apariia unor bacterii cu mor ologie modi icat, cunoscute sub denumirile de protoplati i s eroplati. @niial, aceste orme au ost descrise de ctre 4lieneberger 5 3obel n *13J sub denumirea de orme ,,;(, dup numele @nstitutului ;ister din ;ondra.
F!3.1..9. 'tructura peretelui bacterian la bacteriile (ram negative 3dup 0art (. i %+ears &., ;HHE)
*3?
Protoplatii sunt celule bacteriene lipsite de perete celular, obinute prin tratarea bacteriilor 9ram pozitive cu lizozim sau penicilin. #i au o orm s eric, indi erent de orma iniial a bacteriei din care provin i sunt oarte sensibili la ocul osmotic. 0eoarece uncia de barier osmotic a membranei citoplasmatice este mult mai labil n lipsa proteciei con erite de peretele celular rigid, n mediile hipotonice protoplastul se lizeaz. 'feroplatii rezult din bacteriile 9ram negative sub in luena acelorai actori. #i pstreaz ns poriuni din peretele celular, deoarece actorii litici amintii (lizozimul, penicilina% sunt inactivi a de compuii lipidici ai peretelui celular. @n consecin, aceste bacterii cu perete de ectiv iau orme di erite/ ilamentoase, piri orme, cu aspect de nmugurire, etc. )pre deosebire de protoplati, s eroplatii sunt mai rezisteni la actorii de mediu, avnd capacitatea de a!i resintetiza peretele celular n medii de cultur optime, lipsite de actorul care a indus de eciunea.
C"&su("
#ste o ormaiune extraparietal, prezent numai la unele specii bacteriene i numai n anumite condiii de mediu. )peciile patogene capsuleaz de regul n organism sau n cazul prezenei n mediul de cultur a unui lichid organic (ser sanguin, plasm, lichid ascitic, etc.% Bacteriile capsulogene care intereseaz patologia veterinar sunt/ .acillus ant+racis, %treptococcus pneumoniae, /lebsiella pneumoniae , ,lostridium per ringens, &asteurella multocida. $apsulele acestor specii se deosebesc prin gradul de aderen la peretele celular, grosime, consisten i structur chimic. 2e baza aderenei la peretele celular, a grosimii i consistenei, se pot distinge patru tipuri de capsul ( ig.**%/
*3J
:!c)%c"&su(", sub orma unui strat in i aderent, nedetectabil prin metodele microscopice uzuale, caracteristic pentru &asteurella multocida A c"&su(" &)%&)!u#B!s, cu o grosime aproximativ egal cu cea a celulei bacteriene, consistent i evideniabil prin metode speciale de colorare, ntlnit la .acillus ant+racis i %treptococcus pneumoniaeA su9s2"nA" :uc%"s c"&su(") :%"(e, sub orma unei mase amor e care uneori nu mai pstreaz raporturi anatomice cu celula bacterian < B%%3(e" , constnd ntr!o mas mucilaginoas neorganizat care nglobeaz mai multe celule bacteriene, ntlnit la unele specii sapro ite.
F!3.11
Tipurile
de
structuri
capsulare
la
bacterii ?
;.microcapsulaA :.capsula propriu6zisA 3.strat mucosA B.zooglee.&.,. 6 perete celularA 1.,. M microcapsulA mc M membran citoplasmatic.
0in punct de vedere chimic, capsula este ormat din 1+U ap, restul iind reprezentat de polizaharide sau polipeptide, n uncie de specie.
*3>
$apsulogeneza este un proces cu determinism genetic, supus variaiilor enotipice i genotipice. Eariaiile enotipice se produc sub in luena actorilor de mediu, n principal actori nutritivi. 0e regul, organismul animal reprezint un mediu avorabil capsulogenezei, spre deosebire de mediile de cultur abiotice uzuale, care devin avorabile numai prin adugarea unor substane proprii organismului (ser, plasm, lichid ascitic, etc.%. Eariaiile genotipice sunt rezultatul mutaiilor. )electarea n condiii experimentale a mutantelor acapsulogene s!a dovedit a i util n practica preparrii vaccinurilor, deoarece tulpinile acapsulogene sunt nepatogene (ex. tulpina de .acillus ant+racis ;;H0 *, acapsulogen, apatogen, edematogen i imunogen%. Kuncia biologic a capsulei este de a prote"a celula bacterian a de aciunea unor actori nocivi. @n cazul speciilor patogene, capsula are un rol important n evitarea procesului de agocitoz, constituind un important actor de agresivitate. @na ara organismului, prin coninutul crescut de ap, capsula prote"eaz bacteriile de e ectele desicaiei.
G(!c%c"(!Iu(
#ste o structur mai simpl dect capsula, constituit dintr!o reea de ibre de natur poliglucidic cu aspect de psl. #l este prezent numai la unele bacterii i numai n condiii naturale de mediu, iind absent ,,in vitro(. 2entru bacteriile patogene, glicocalixul constituie un actor de colonizare a diverselor epitelii, avnd rol n meninerea unor in ecii urinare i intestinale. 2e lng aderen, aceast ormaiune con er bacteriilor rezisten a de bacterio agi i bacteriile prdtoare.
*3,
C%nA!nu2u(
$oninutul celulei bacteriene se compune din citoplasm i genom bacterian.
C!2%&("s:"
$itoplasma celulei bacteriene are consisten de gel, nu prezint cureni citoplasmatici i n consecin, nici deplasri evidente ale elementelor componente. ;a celulele tinere i n condiii normale de dezvoltare, citoplasma ader la membran i se prezint ca o mas dens, omogen i intens colorabil. ;a celulele mbtrnite, citoplasma i pierde treptat a initatea tinctorial, se retracteaz centripet i capt o structur granular cu numeroase vacuole . $itoplasma reprezint sediul materialului genetic i al unor structuri cu caracter de granule, incluzii i vacuole. )pre deosebire de celulele eucariote, in citoplasma celulelor bacteriene lipsesc mitocondriile, aparatul 9olgi i reticulul endoplasmatic propriu!zis. R!9%B%:!! sau 3)"nu(e(e (u! $"("de reprezint elementele de baz ale citoplasmei, n care apar ca mici granule relativ s erice, cu un diametru de *-!F- nanometri, numrul lor iind de ordinul zecilor de mii. 0in punct de vedere chimic, ribozomii sunt alctuii din acid ribonucleic (>JU% i proteine (3-!3JU%. )ub raport uncional, ribozomii constituie sediul sintezei proteinelor structurale i enzimatice, pe baza in ormaiei genetice preluate de la 803 prin intermediul 8.3!ului mesager. @n aza de cretere activ a celulei bacteriene se ormeaz conglomerate de ribozomi, numite polizomi sau poliribozomi, elementul de legtur reprezentndu!l ilamentele ine de 8.3 5 mesager.
*3+
8ctivitatea ribozomilor bacterieni poate i inhibat de unele antibiotice cum sunt streptomicina, neomicina i tetraciclinele. ;a organismele eucariote, ribozomii sunt insensibili a de antibiotice, apt care permite utilizarea acestora n terapia bolilor in ecioase, r a ectarea organismului. Inc(uB!!(e sunt structuri inerte, prezente inconstant n citoplasma bacteriilor. #le reprezint materiale de rezerv care se acumuleaz n celul direct proporional cu vrsta i coninutul mediului n substane nutritive. 0in punct de vedere chimic, incluziile sunt ormate din polimeri organici (amidon, glicogen, acid poli!!hidroxibutiric%, cristale de substane anorganice (sul , carbonat de calciu% i polimeri anorganici. 0in ultima categorie de substane, la numeroase specii bacteriene sunt prezente incluziile de polimeta os at, cunoscute sub denumirile de corpusculi Babe!#rnst sau granule de volutin (din cauza prezenei lor n numr mare la specia %pirillum volutans%. #le apar la microscop sub orma unor granulaii metacromatice, deoarece se coloreaz mai intens dect restul citoplasmei ( ig.*F%.
Fig.1 +Granulaii
metacromatice evideniate la microscopul fotonic (n cerc)i electronic. (dup Winkler cit. de Zarnea G.,1963).
*31
C)%:"2%@%)!!, prezeni la bacteriile otosintetizante, sunt organite specializate n procesele de biosintez prin mecanisme analoage otosintezei plantelor. '"cu%(e(e sunt variabile ca mrime (-,3 5 -,J _m% i numr (>!F-`celul%, iind mai recvent ntlnite la celulele tinere. #le pot conine lichide cu rol n reglarea presiunii osmotice, sau gaze. Eacuolele cu gaze sunt prezente n citoplasma unor bacterii din sol, capabile s capteze azotul atmos eric i la bacteriile acvatice aerobe pe care le antreneaz la supra aa apei, asigurndu!le contactul cu oxigenul atmos eric. @n citoplasma celulelor bacteriene se gsete cea mai important parte din echipamentul enzimatic rspunztor de metabolismul celulei, precum i di erite tipuri de 8.3 (mesager, ribozomal i solubil%. $!3:enA!! sunt substane colorate prezente n citoplasma bacteriilor cromogene. )peciile patogene pentru om i animale, productoare de pigmeni sunt/ %tap+2lococcus aureus, &seudomonas aeruginosa, *+odococcus e>ui, 12cobacterium tuberculosis. n uncie de structura chimic pigmenii bacterieni se mpart n/ pigmeni enazinici, cum sunt luoresceina de culoare galben i piocianina de culoare albastr!verde, prezente la mai multe specii din genul &seudomonas< pigmeni carotenoizi, de culoare roie, galben sau portocalie, cum sunt lutexina, xantina, licopenul, sintetizai n principal de ctre sta ilococi< pigmeni melanici, de culoare brun, recveni la bacteriile ixatoare de azot din genul 'zotobacter< pigmeni antocianici, elaborai mai ales de actinomicete, printre care i unele specii productoare de antibiotice din genul %treptom2ces<
*?-
derivai pirolinici de tipul cloro ilelor, prezeni la bacteriile otosintetizante. 0up localizarea pigmenilor n celul i posibilitile de di uzare n mediu, bacteriile cromogene se clasi ic n/ bacterii cromo ore, a cror pigmeni rmn cantonai la locul sintezei< bacterii paracromo ore, care au pigmenii localizai n peretele celular< bacterii cromopare, ai cror pigmeni sunt eliminai n mediu, colorndu!l. )emni icaia biologic a pigmenilor bacterieni di er n uncie de natura chimic a pigmentului i de specia pigmentogen, r a i complet elucidat. .olul cloro ilelor n otosintez este bine stabilit, ns asupra unciei celorlali pigmeni, prerile emise au valoare ipotetic. 8st el, pigmenii carotenoizi se pare c prote"eaz bacteriile de aciunea radiaiilor ultraviolete, iar piocianina i unii pigmeni elaborai de actinomicete se comport ca antibiotice, intervenind n enomenele de antagonism microbian. Cnii pigmeni, cum sunt lavoproteina produs de !actobacillus delbruec@ii i tiocolul produs de 12cobacterium p+lei, sunt din punct de vedere biologic, vitamine. n practica identi icrii bacteriilor, prezena pigmenilor este un criteriu taxonomic valoros i uor decelabil. $itoplasma constituie sediul metabolismului bacterian unde se des oar procesele de asimilaie i dezasimilaie, precum i alte uncii vitale ale celulei bacteriene cum sunt reproducerea i sporogeneza.
M"2e)!"(u( 3ene2!c
*?*
Materialul genetic al bacteriilor este constituit din material genetic nuclear i din plasmide . M"2e)!"(u( 3ene2!c nuc(e") este ormat dintr!un singur cromozom i nu este delimitat de o membran proprie. 2entru a marca aceste di erene a de nucleul celulelor eucariote, termenul de ,,nucleu( a ost nlocuit cu termenii de ,, nucleoid, ,,genom bacterian, ,,cromozom bacterian sau ,,nucleozom. *romozomul este constituit dintr!o molecul de 803 bicatenar, pliat prin rsucire i suprarsucire de aproximativ *-- de ori, avnd o orm asemntoare cu a celulei bacteriene ! s eric n cazul cocilor i alungit n cazul bacililor. #l ocup J!*>U din volumul celulei. Plasmidele sunt molecule mici de 803 dublu catenar, independente de cromozom, caracteristice pentru celula procariot. 2entru desemnarea lor se utilizeaz deseori termenii de material genetic auxiliar sau extracromozomal. 2lasmidele reprezint aproximativ *U din mrimea i masa molecular a cromozomului i sunt, n ma"oritatea lor, trans erabile de la o celul bacterian la alta n cadrul enomenului de con"ugare. 8tt cromozomul ct i plasmidele au posibilitatea de autoreplicare. .eplicarea plasmidelor are loc independent de cea a cromozomului. Kuncia biologic a materialului genetic const n determinarea caracterelor care de inesc iecare specie bacterian i transmiterea lor ereditar. 8vnd n vedere posibilitatea de trans er a plasmidelor, se poate aprecia c ele au un rol ma"or n procesul de circulaie a in ormaiei genetice n cadrul populaiilor bacteriene, care are ca rezultat o mai bun adaptare a acestora la condiiile de mediu.
O)3"n!2e(e ce(u(")e
*?F
Hrganitele celulare (cilii sau lagelii i pilii sau imbriile% sunt ormaiuni extraparietale, prezente numai la unele specii bacteriene, cu rol n procesele de adaptare la mediu.
C!(!! >@("3e(!! ?
)unt organite de orm cilindric, cu diametrul de *F!FJ nanometri i lungimea de FJ!3- micrometri, ntlnite mai ales la bacteriile alungite 5 bacili, vibrioni, spirili 5 i mai rar la ormele cocoide. 8u rol n micare, bacteriile ciliate iind mobile. @ntre speciile bacteriene ciliate exist di erene sub aspectul numrului i al modului de dispunere a cililor pe supra aa celulei bacteriene, distingndu!se urmtoarele categorii de bacterii/ atricha (neciliate%, monotricha (un singur cil dispus polar%, am itricha (cte un cil la ambii poli%, lo otricha (un smoc de cili la unul din poli% i peritricha (numeroi cili amplasai pe toat supra aa celulei% 5 ig.
*3
F!3. 13 1umrul i modalit!ile de dispunere a cililor pe
*?3
BACTERIOLOGIE GENERAL| suprafa!a celulei bacteriene/ ;. atric+aA :. monotric+aA3. lo otric+aA B.
lo otric+aA C. peritric+a.A
2rile componente ale unui cil sunt/ corpusculul bazal, articulaia sau crligul i ilamentul helicoidal extracelular ( ig. *?%. C%)&uscu(u( 9"B"( reprezint componenta cilului prin care acesta se ataeaz de celula bacterian. ;a bacteriile 9ram pozitive el este compus din F discuri / discul M (de membran%, numit i rotor, dispus n grosimea membranei citoplasmatice, care se rotete liber n spaiul membranar i, discul ) , sau stator, cu o poziie supramembranar.
*??
BACTERIOLOGIE GENERAL| F!3.1E 2ltrastructura cililor la bacteriile (ram negative -a) i modul de ancorare a acestora n peretele celular
-b)0 dup !arpent i col., ;HH0.
;a bacteriile 9ram negative, structura se complic prin apariia unor discuri suplimentare 5 discul 2, inclus n stratul peptidoglicanic i discul ;, situat n membrana extern ! care au rolul de a asigura ancorarea ntregii structuri ntr!un perete celular mai complex. $ele patru discuri sunt interconectate printr!un ax de transmisie. A)2!cu("A!" sau cL)(!3u( este o zon lexibil care se interpune ntre axul de transmisie i ilament. F!(":en2u( eI2)"ce(u(") sau c!(u( &)%&)!u#B!s reprezint partea lexibil, n general spiralat a cilului. 0in punct de vedere chimic, cilii sunt constituii din lagelin, o protein antigenic (antigenul ,,=aa% cu masa molecular de ?---- daltoni. $u a"utorul cililor, bacteriile se pot deplasa cu viteza de F-!+- micrometri pe secund, echivalnd cu de ?- de ori lungimea celulei bacteriene. 2entru comparaie, menionm aptul c ghepardul, considerat cel mai rapid dintre animale, alearg cu o vitez care nu depete de trei ori lungimea corpului pe secund . Bacteriile realizeaz o micare de rostogolire cnd cilii se rotesc n sensul acelor de ceasornic i o deplasare n linie dreapt cnd acetia se rotesc n sens antiorar. @n determinarea direciei de deplasare intervin mecanismele de tip chimiotactic. )ubstanele utile metabolismului bacterian (glucidele, aminoacizii, ionii de calciu i de magneziu, oxigenul pentru bacteriile aerobe,etc.% sunt
*?J
atractante, exercitnd un chimiotactism pozitiv asupra bacteriilor ciliate, iar cele nocive (alcoolii, ionii de hidrogen, ionii hidroxil, metalele grele, etc.% au un e ect repelant (de respingere%, printr!un chimiotactism negativ. 8nalog capsulogenezei, sinteza cililor este diri"at de actori genetici a cror represare i depresare este realizat de actorii mediului ambiant. Kactorii de mediu capabili s induc variaii enotipice n geneza i motilitatea cililor sunt temperatura i diverse substane chimice. 8st el, Lersinia enterocolitica i !isteria monoc2togenes sunt mobile numai la F-!FF b$ (nu i la 3,b$%, serurile hiperimune speci ice inhib mobilitatea salmonelelor i a altor specii ciliate, iar acidul boric i sul atiazolul inhib mobilitatea speciei &roteus vulgaris. Eariaiile genotipice se traduc prin obinerea de mutante aciliate. 0ei mobilitatea bacteriilor este corelat, n general, cu prezena cililor, exist i bacterii mobile neciliate. #ste cazul mAxobacteriilor, care se deplaseaz prin glisare i a spirochetelor, care, cu a"utorul unor ilamente axiale intracitoplasmatice (endo lageli%, execut micri de rotaie n "urul axului longitudinal, micri de translaie i micri de lexie i extensie, ca e ect al contraciei acestor structuri (L"&)en2 M. $. C! c%(., 1**.%.
$!(!! >@!:9)!!(e%
2ilii sunt apendici ilamentoi mult mai subiri i mai scuri dect cilii dar mult mai numeroi, aezai peritrich pe supra aa bacteriilor i vizibili numai la microscopul electronic. 0enumirile prin care sunt desemnate aceste structuri sugereaz caracteristicile lor mor ologice/ imbrii (lat. imbria = ran8uri%, pili (lat. pilus = pr%.
*?>
)pre deosebire de cili, pilii nu posed un aparat corespunztor corpusculului bazal. @n uncie de unele caractere mor ologice, de numr i de uncia biologic pe care o ndeplinesc, se deosebesc > tipuri de pili, notate cu ci re romane de la @ la E i cu litera K (pilul sexual sau donor%. @n ultimii ani exist tendina de a departa"a, din punct de vedere semantic, cei doi termeni ! ,, imbrii( i ,,pili( ! n sensul utilizrii primului pentru desemnarea tipurilor @!E i a celui de!al doilea, numai pentru pilii de sex. F!:9)!!(e sunt ormaiuni tubulare compacte, r canal axial, cu dimensiuni cuprinse ntre *!F- _m lungime i 3!*? nm diametru. #le sunt dispuse pericelular, uneori polar sau bipolar, numrul lor variind ntre * i *--- per celul. )inteza imbriilor este controlat de gene cromozomale iar creterea lor se ace prin depunere de imbrilin ! o protein cu masa molecular de *>>-- daltoni5 la extremitatea liber a ilamentului. Kimbriile con er bacteriilor capacitatea de a adera la supra aa epiteliilor i a altor substraturi, iind considerate actori de patogenitate. $!(!! de 2!& F, denumii i pili sexuali, sunt structuri tubulare strbtute de canal axial, n structura crora intr o os oglicoprotein (pilina%, ale crei molecule sunt ansamblate dup o simetrie helicoidal. #i sunt codi icai de o plasmid sau un epizom numit actorul ,,K( (de ertilitate sau de sex%, care con er celulei purttoare proprietatea de donor de material genetic sau celul ! mascul KW.
*?,
.olul pililor ,,K( este analog organului copulator, deoarece prin lumenul lor are loc trans erul de 803 de la o celul bacterian KW la una K! n cadrul procesului de con"ugare ! o orm primitiv de sexualitate, singura posibil la bacterii. 2ilii de tip K sunt evideniabili la unele bacterii cu a"utorul bacterio agilor care prezint speci icitate pentru pilii de sex, numii agi masculi.
2.3.2. FI=IOLOGIA BACTERIILOR
2.3.2.1. 9"c2e)!ene
C%:&%B!A!"
c7!:!c
"
ce(u(e!
$ompoziia chimic elementar a bacteriilor, sub aspectul coninutului n elemente biogene, nu di er de a celorlalte organisme vii. $ompoziia molecular se di ereniaz ns de cea a organismelor vegetale i animale prin prezena unor constitueni moleculari speci ici bacteriilor. H celul bacterian conine aproximativ 3---!>--- tipuri de molecule di erite, dintre care aproximativ "umtate aparin compuilor anorganici cu mas molecular mic (apa i srurile minerale%, iar cealalt "umtate, compuilor organici cu diverse grade de complexitate structural.
3.4.3.5.5. *ompuii anorganici

A&" reprezint aproximativ ,J!+- U din greutatea umed a celulei bacteriene, n care se gsete sub orm liber sau legat inseparabil de alte structuri chimice.
*?+
#a constituie mediul care asigur vehicularea substanelor nutritive i a metaboliilor, precum i des urarea reaciilor chimice care stau la baza proceselor vitale. S)u)!(e :!ne)"(e reprezint F 5 3-U din greutatea bacteriilor uscate. #lementele care intr n compoziia lor sunt/ 2, 4, 3a, $l, ), H, =, Ke i n proporii mai reduse, Mg, $u, i Mn. )rurile biologice/ minerale ndeplinesc urmtoarele uncii
asigur reglarea presiunii osmotice la nivelul membranei citoplasmatice< realizeaz sistemul tampon adecvat meninerii p=!ului optim al mediului celular< activeaz unele sisteme enzimatice, rol pe care l ndeplinesc mai ales ionii de $u i de Mg< intr n structura unui important numr de constituieni celulari (rol plastic%.
3.4.3.5.3. *ompuii organici

G(uc!de(e totalizeaz ? 5 FJU din greutatea celulelor bacteriene uscate, proporia lor variind n uncie de specia bacterian, vrsta culturii i compoziia chimic a substratului nutritiv. #le sunt reprezentate de aproximativ F-- tipuri de molecule, incluznd mono!, di!, tri! i polizaharide. )pre deosebire de celula vegetal, n structura bacteriilor nu intr celuloza. )emni icaia biologic a glucidelor este di erit/ glucidele simple iau parte la metabolismul intermediar al celulei, iar polizaharidele ndeplinesc, dup caz, rol plastic, energetic sau de material de rezerv. L!&!de(e6 prezente n celula bacterian n proporie de * 5 F- U din greutatea uscat a bacteriilor, pot i din punct de vedere
*?1
chimic, gliceride, os atide, steride i ceruri. H lipid recvent ntlnit sub orm de incluzii citoplasmatice este poli!! hidroxibutiratul. Kos atidele i cerurile sunt prezente cu precdere la bacteriile acido!alcalo!alcoolo!rezistente din genul 12cobacterium, iar coninutul n steroli constituie o particularitate a micoplasmelor. 8lturi de glucide, lipidele constituie rezervele nutritive ale celulei bacteriene cu un potenial energetic crescut. Ac!B!! nuc(e!c!. )pre deosebire de virusuri, care conin un singur tip de acid nucleic, n celula bacterian sunt prezeni ambii acizi nucleici. 8cidul dezoxiribonucleic (803% reprezint aproximativ */J din coninutul celulei, iind constituientul nucleoidului, respectiv al cromozomului bacterian i al plasmidelor ( ragmente de material genetic extracromozomal%. 8cidul ribonucleic (8.3%, se gsete n citoplasm sub cele trei orme di erite sub aspectul mrimii moleculei i al unciei biologice pe care o ndeplinesc n mecanismul sintezei proteinelor/ 8.3 mesager, 8.3 de transport sau solubil i 8.3 ribozomal. 8.3!ul total constituie *- 5 F- U din greutatea uscat a celulei. .olul biologic al acizilor nucleici este acelai la toate organismele vii. #l a ost menionat la structura celulei bacteriene i urmeaz a i detaliat n capitolul de genetic microbian. $)%2e!ne(e reprezint aproximativ >-U din greutatea uscat a bacteriilor i constituie componentele eseniale pentru viaa celulei bacteriene. #le se gsesc att n stare pur ct i sub orm de complexe lipo! sau glicoproteice.
*J-
0in punct de vedere al rolului pe care l ndeplinesc, proteinele bacteriene pot i grupate n / proteine constitutive, care ac parte din structura di eritelor componente celulare, i proteine enzimatice, care constituie biocatalizatorii ntregii activiti metabolice a celulei bacteriene. .olul lor esenial n viaa celulei "usti ic tratarea lor n continuare mai pe larg. EnB!:e(e constituie, n ansamblul lor, aparatul sau echipamentul enzimatic al celulei bacteriene. #l este caracteristic pentru iecare specie bacterian i reprezint, prin urmare, un important criteriu taxonomic. 2unerea n eviden a enzimelor bacteriene prin reacii sau teste biochimice ace parte din conduita curent a identi icrii bacteriilor. #nzimele bacteriene prezint caracterele generale ale tuturor enzimelor i anume/ sunt e iciente n cantiti extrem de mici< se regsesc nemodi icate la s ritul reaciei< au o mare speci icitate de substrat. 2roteinele enzimatice pot i simple sau con"ugate. n al doilea caz, enzima activ (.oloenzima% este ormat din dou componente, inactive cnd se gsesc separat/ apoenzima (proteina care determin speci icitatea reaciei% i coenzima (ioni metalici, substane organice, vitamine, etc.% 5 ig.*J.
*J*
F!3. 15 'tructura unei .oloenzime. $oenzimele a"ut enzimele s accepte atomii provenii de la substrat sau s cedeze atomii necesari substratului. 0ou dintre cele mai importante coenzime implicate n metabolismul bacterian sunt 380 (nicotinamid!adenin!dinucleotid% i 3802 (nicotinamid!adenin!dinucleotid! os at%. .eaciile mediate enzimatic parcurg urmtoarele etape / *. supra aa substratului intr n contact cu o regiune speci ic a enzimei numit situs activ< F. se ormeaz un complex temporar substrat!enzim< 3. moleculele substratului sunt trans ormate prin rearan"area atomilor, des acerea structurii moleculare sau combinarea cu o alt molecul substrat< ?. moleculele substratului trans ormat, respectiv produii de reacie, se separ de molecula enzimatic< J. enzima ast el eliberat poate reaciona din nou cu o molecul de substrat.
*JF
8ctivitatea enzimelor este in luenat de actorii de mediu (temperatur, p=%, concentraia substratului, prezena sau absena inhibitorilor enzimatici. @nhibitorii enzimatici pot i necompetitivi (srurile metalelor grele, cianurile, acidul tanic, acidul tricloracetic, etc.% i competitivi. 8cetia din urm, numii antimetabolii, sunt substane cu structuri spaiale identice cu acelea ale substratului speci ic enzimei. 0atorit acestui apt, ei sunt capabili s intre n competiie cu substratul, ixndu!se pe situsul activ al enzimei pe care l blocheaz ireversibil. n consecin, substratul rmne nemodi icat iar bacteriile se gsesc n imposibilitatea de a!l utiliza pentru sinteza propriilor constituieni. Kenomenul are o mare importan n practica medical, stnd la baza utilizrii unor medicamente cu aciune bacteriostatic cum sunt sul amidele, antibioticele, etc. #nzimele bacteriene pot i clasi icate dup mai multe criterii i anume/ 0up locul de aciune n raport cu celula, se mpart n/ e7oenzime, sintetizate n celul i eliminate n exterior, unde descompun substanele cu molecul complex n molecule mai mici, accesibile celulei bacteriene< endoenzime nedi uzabile n mediu, care pot i decelate n iltratele culturilor lizate. 8cestea sunt, n ma"oritatea cazurilor, enzime de sintez cu rol n procesele anabolice. 0up permanena sintezei lor n cursul vieii bacteriilor, enzimele se mpart n/ enzime constitutive, elaborate permanent de bacterie indi erent de substratul pe care se dezvolt<
enzime adaptative (inductibile%, sintetizate numai n prezena unui anumit substrat. )ubstratul exercit o aciune de depresare a genelor
*J3
BACTERIOLOGIE GENERAL| responsabile de sinteza enzimei adaptative. 8pariia enzimei adaptative constituie un enomen de variaie enotipic. enzime inductive (mutative% inexistente n mod obinuit la o anumit specie bacterian. #le apar consecutiv unei mutaii, iar sinteza lor are loc numai la mutanta respectiv.
2.3.2.2. Nu2)!A!" (" 9"c2e)!!

Microorganismele, ca i celelalte organisme vii, sunt caracterizate printr!o activitate iziologic nentrerupt, mai mult sau mai puin intens, n cursul creia cresc, se divid, i modi ic structura, compoziia chimic i poziia n mediu, etc. #xercitarea acestor activiti presupune prezena n mediile lor de via a unor substane nutritive utilizabile n sinteza constituienilor celulari (surse plastice% i a unor surse de energie. )e nelege prin nutriie bacterian, modalitile prin care bacteriile utilizeaz aceste surse pentru cretere i multiplicare (I;"n%@ A. C! c%(. 1*+2%.
3.4.3.3.5. 87igen!e i tipuri nutritive la bacterii

$onsiderate n ansamblu, microorganismele sunt cele mai omnivore organisme deoarece i realizeaz metabolismul olosind cele mai diverse surse de substane nutritive/ de la 3 molecular, $H F i ), pn la substanele organice complexe. 3ecesitile nutritive ale bacteriilor s!au putut stabili prin utilizarea mediilor sintetice. )!au conturat ast el tipuri principale de
*J?
nutriie pe baza a dou criterii importante/ sursa de energie i sursa de carbon necesar constituirii materialului celular. @n raport cu sursa de energia pe care o utilizeaz, bacteriile se ncadreaz n dou tipuri principale / tipul fototrof6 care utilizeaz energia luminoas, trans ormnd!o n energie de legare chimic cu a"utorul unor pigmeni asemntori cloro ilei, i tipul c.imiotrof, lipsit de pigmeni otosintetizani, pentru care unica surs de energie o reprezint reaciile biochimice de oxidoreducere a unor substane organice sau anorganice. n ceea ce privete sursa de carbon, se di ereniaz / tipul litotrof (lith [ piatr% sau autotrof (n sensul de independent , liber% cruia i aparin bacteriile capabile s!i sintetizeze toi constituenii celulari plecnd de la carbon anorganic ($HF %, i tipul organotrof sau .eterotrof n care se ncadreaz bacteriile dependente de materia organic, care nu se pot dezvolta dect n prezena substanelor organice ca surse de energie i $. 0eci, n timp ce autotro ele prin sintezele lor genereaz substane organice, heterotro ele le descompun. 8nsamblnd cele dou criterii, bacteriile ototro e pot i grupate n fotoautotrofe (fotolitotrofe% i fotoorganotrofe (foto.eterotrofe%, iar bacteriile chimiotro e se pot clasi ica, de asemenea, n c.imioautotrofe (c.imiolitotrofe% i c.imioorganotrofe (c.imio.eterotrofe%. @n rndul bacteriilor chimiotro e se pot di erenia tipuri intermediare capabile s utilizeze att compui organici ct i anorganici. 8st el, exist bacterii capabile s utilizeze carbonul organic sau anorganic i azotul anorganic constituind un subtip numit mezotrof.
*JJ
H redare sintetic a principalelor tipuri nutritive i a caracteristicilor acestora se gsete n tabelul ?. 2osibilitatea de a utiliza diverse substraturi nutritive este condiionat de gradul de dotare a bacteriilor cu echipament enzimatic.
T"9e(u( E T!&u)! nu2)!2!;e (" 9"c2e)!!
T!&u)! nu2)!2! ;e
C"&"c!2" 2e de s!n2eB
Su)se de c")9%n $HF
Su)se "B%2
de Su)se de ene)3!e
Fe(u( 9"c2e)!!(%)
8utotro
&otal
3=3
;umina
( otosintez% )ubstane anorganice Bacterii (reacii chimiotro e chimice% Mezotro @ncomplet pentru 3 Kacultati v pentru $ =etero!tro 8tenuat $ organic 3 organic .eacii chimice $HF sau $ organic 3=3 .eacii chimice Bacterii sul ato! reductoare Bacterii chimio! organotro e
Bacterii ototro e
)ub acest aspect att n rndul bacteriilor autotro e ct i al celor heterotro e exist mari di erene individuale, n sensul c unele specii, ca de exemplu cele din genul &seudomonas, pot utiliza ca unic surs de carbon i energie ,- 5 F-- substane chimice di erite, n timp ce altele sunt oarte ,,specializateQ, utiliznd un numr limitat de nutrieni (bacteriile metilotro e
*J>
utilizeaz numai metanul i metanolul, bacteriile celulozolitice numai celuloza, .a.m.d.%. 0eoarece bacteriile autotro e nu intereseaz bacteriologia medical i medical!veterinar, n continuare vor i menionate numai sursele de substane organice pentru cele mai importante elemente biogene necesare bacteriilor chimioheterotro e, categorie n care se ncadreaz ma"oritatea bacteriilor patogene. 2rincipala surs de carbon pentru aceste bacterii o reprezint glucidele i polialcoolii i ntr!o proporie mai redus di erii acizi organici, cetonele, lipidele, acizii grai, etc. )ursele de azot organic sunt reprezentate n primul rnd de aminoacizi, urmai n cazul a numeroase specii, de alte substane cu azot, di erite ca grad de complexitate/ uree, peptone, proteine. Cnele bacterii patogene pot olosi i surse de azot anorganic, cum este amoniacul rezultat din hidroliza ureei sau din reducerea nitrailor n nitrii i a nitriilor n amoniac. 2e lng de carbon i azot, toate bacteriile au nevoie de macroelemente (2, ), H, =, 4, Mg, Ke, $a, Mn, etc.% i microelemente ($u, Mn, Mo, etc.%, acestea din urm iind indispensabile activitii catalitice a unor enzime. $oncomitent cu sursele plastice i energetice de baz, pentru numeroase bacterii patogene este indispensabil prezena n mediul lor de via a unor substane pe care acestea sunt incapabile s le sintetizeze. #le au ost numite actori de cretere, n cazul unei nevoi permanente, i actori de plecare, n cazul cnd substana respectiv este necesar doar la izolare i uneori n primele subculturi. 8st el de actori sunt reprezentai de vitamine, aminoacizi, hematine, baze azotate purinice i pirimidinice, etc. 0e exemplu,
*J,
bacteriile din genul 0aemop+ilus reclam unul sau doi actori de cretere i anume / @"c2%)u( 0 sau 7e:"2!n", un eropigment prezent n hematii, ast el c sursa de actor G curent olosit n laborator este sngele hemolizat, i @"c2%)u( ' reprezentat 380 sau 3802, care se gsete n esuturi animale i vegetale, bacterii i levuri ( recvent utilizndu!se extractul de dro"die de bere%. 2rin urmare, mediile utilizate n practica bacteriologic pentru cultivarea bacteriilor ,,in vitro( trebuie s aib o compoziie adecvat exigenelor nutritive ale acestora. @n cazurile n care nevoile speci ice de actori de cretere sau de plecare sunt cunoscute, acetia pot i inclui ca atare n compoziia mediilor de izolare. 0eoarece, de cele mai multe ori, aceste necesiti nu sunt precis identi icate, mediile pentru izolarea bacteriilor cu exigene nutritive se prepar din medii uzuale, adaugnd, ca surs de actori de cretere sau de plecare, substane organice complexe i ie tine cum sunt/ extractul de dro"die de bere, serul sanguin, sngele, lichidul ascitic, etc.
3.4.3.3.3. $ccesul substan!elor nutritive n celula bacterian

H parte din substanele nutritive ptrund n celula bacterian, ca atare, strbtnd prin porii peretelui celular i membrana citoplasmatic. $ele care, din caza mrimii moleculelor sau a structurii complexe, nu pot traversa nveliurile
*J+
celulare, sunt n prealabil reduse dimensional i structural de ctre exoenzime. 0ac traversarea peretelui celular este un act pasiv, acesta ndeplinind rolul unui iltru mecanic, ptrunderea prin membrana citoplasmatic se realizeaz prin patru modaliti di erite i anume/ di uzia pasiv, di uzia acilitat, translocaia de grup i transportul activ. D!@uB!" &"s!; (simpl, liber sau nemediat% este procesul de trecere liber a substanelor solubile prin membrana citoplasmatic, de la o concentraie mai ridicat la o concentraie mai sczut, r a interaciona cu moleculele din structura acesteia i r consum de energie. 0eoarece ora de propulsie este gradientul de concentraie, di uzia nceteaz n momentul cnd substratul a"unge la aceeai concentraie att n interiorul celulei bacteriene ct i n mediu. 0i uzia pasiv se limiteaz la ap, unele gaze (oxigen, bioxid de carbon%, acizi grai, substane liposolubile i anumii ioni, deoarece concentraia celor mai muli metabolii este mai mare n interiorul dect na ara celulei. $ondiia esenial pentru substanele care di uzeaz pasiv este mrimea moleculei, care nu trebuie s depeasc -,> 5 -,+ nm. D!@uB!" @"c!(!2"2 se realizeaz prin intervenia unor proteine prezente n membrana citoplasmatic, cu o poziie transmembranar, numite proteine!carrier sau permeaze. #le au rol de purttor speci ic, mrind viteza de traversare a moleculelor dizolvate, de cteva sute de ori n raport cu di uzia liber.
*J1
0i uzia acilitat se des oar n trei aze ( ig. *>%/
F!3. 1, Difuzia facilitat >dup (ortora I.<. i col, ;HHE?
*. recunoaterea i legarea speci ic a substanei transportate de ctre proteina!purttor< F. translocaia substanei prin membran< 3. disocierea complexului substan!purttor, de partea opus a membranei. &ransportul substanelor prin acest mecanism se realizeaz sub impulsul gradientului de concentraie, n ambele sensuri (n sau din celul%, r consum de energie. 2roteinele5 purttor aciliteaz di uzia transmembranar atta timp ct de o parte i de cealalt a membranei exist o di eren de concentraie a substratului respectiv.
*>-
Transloca!ia de grup este o alt modalitate de transport mediat de proteinele!carrier, care presupune trans ormarea chimic a substanelor n timpul trans erului din exterior n interiorul celulei bacteriene. &rans ormarea const ntr!un proces de
os orilare, mediat de un complex enzimatic numit sistemul os otrans erazei.
0atorit aptului c produsul ptruns n celul nu se acumuleaz, deoarece di er chimic de cel iniial, transportul poate continua r consum de energie chiar i atunci cnd concentraia intracelular a substratului modi icat este mult mai mare. 8cest sistem intervine n transportul glucozei, sub orm de glucozo!>! os at i a altor glucide i polialcooli/ ructoza, sorboza, manoza, respectiv sorbitolul, manitolul, etc. )pre deosebire de di uzia acilitat, n translocaia de grup transportul este unidirecional< glucidele os orilate nu pot i eliminate din celul, deoarece sub aceast orm nu mai au a initate pentru proteinele5purttor. Transportul activ este procesul prin care di erite substane solubile (glucide, aminoacizi, peptide, nucleotide, ioni% sunt ,,pompateI n celul prin membrana citoplasmatic, acumulndu!se nemodi icate chimic, n concentraii de sute i mii de ori mai mari dect n exterior. &ransportul se realizeaz cu a"utorul permeazelor, ca i n cazul di uziei acilitate, cu deosebirea c acestea intervin activ consumnd energie, deoarece transportul substanelor se ace mpotriva gradientului de concentraie. 2rocesul este similar cu propulsarea unui lichid ,,la dealI, contra gravitaiei. )ubstanele transportate activ rmn n interiorul celulei, deoarece proteinele!carrier, sub in luena energiei de cuplare, su er modi icri con ormaionale, care ac ca situsul de legare
*>*
ndreptat spre interiorul celulei s devin inaccesibil, n timp ce a initatea pentru substratul extern rmne aceeai. 2rin particularitile sale, transportul activ are o importan deosebit n procurarea de nutrieni din mediile n care acetia se gsesc n concentraii mici i n meninerea unor concentraii interne relativ constante a di eriilor metabolii n raport cu luctuaiile mari din mediul extern. 2rimul sistem de transport activ identi icat este cel al ! galactozidpermeazei la ). coli, care poart situsul de recunoatere i de transport al lactozei. 8cest sistem de transport permite bacteriei s oloseasc lactoza i s acumuleze n celul acest glucid,
sau analogii lui, n concentraie de J-- de ori mai mare dect n mediu.
2.3.2.3. Me2"9%(!s:u( 9"c2e)!"n

2rin analogie cu celula vegetal i animal, metabolismul bacterian implic totalitatea reaciilor biochimice catalizate enzimatic care permit bacteriilor s obin din nutrieni, att compuii necesari pentru sinteza constituienilor celulari, ct i energia necesar pentru aceste sinteze i pentru alte activiti care necesit consum de energie. 8ctivitatea metabolic a bacteriilor poate i di ereniat n metabolism energetic, care include catabolismul i respiraia i metabolism de sintez sau anabolism.
3.4.3.4.5. *atabolismul
)ubstraturile exogene care pot constitui surse energetice i plastice pentru bacteriile heterotro e sunt reprezentate, n
*>F
ma"oritatea cazurilor, de compui organici cu structur complex/ proteine, glucide, lipide. #liberarea energiei prin procesele de catabolism se realizeaz treptat, n trei aze distincte. (Rducnescu H. C! c%(. 1*+,% Faza I . Macromoleculele sunt dezansamblate n unitile lor de construcie/ proteinele n aminoacizi, polizaharidele n monozaharide, iar lipidele n glicerol i acizi grai. @n aceast prim az se elibereaz de obicei mai puin de *U din energia total a macromoleculelor, care se pierde n bun parte sub orm de cldur. Faza II. 8minoacizii, monozaharidele i acizii grai rezultai n prima etap su er o degradare incomplet cu ormarea de produi intermediari (amoniac, acid piruvic, acizi grai in eriori, etc.%, bioxid de carbon i ap. #nergia eliberat reprezint aproximativ o treime din energia total a substraturilor iniiale. @n aceast az, hexozele pot i metabolizate pe diverse ci (glicoliz, calea #ntner!0oudoro sau calea hexozomono os atului% dar produii inali nu sunt oarte di erii. @n mod similar, aminoacizii pot i catabolizai pe ci di erite, ns, indi erent de calea utilizat, rezultatul const n ormarea de acetil!$o 8 sau de intermediari ai ciclului acizilor tricarboxilici (ciclul 4rebs% . Faza III @n cursul acestei aze, produii intermediari sunt descompui pn la $HF i =FH pe calea acizilor tricarboxilici, rezultnd, de regul, cantitatea maxim de energie. 3u toate
*>3
substraturile a"ung ns la aceast ultim az. @n multe cazuri, degradarea se oprete la produii intermediari, care sunt deseori preluai sub orm de precursori i introdui n iliera reaciilor anabolice, sub aciunea enzimelor biosintetizante. 2entru produii inali rezultai din activitatea catabolic, celula bacterian dispune de multiple ci de utilizare, i anume /
hidrogenul rezultat din procesele de oxidare este introdus n

circuitul respirator pentru reaciile de reducere, cu cedare ctre ali acceptori. oxigenul rezultat n urma reaciilor de reducere este valori icat n procesele de oxidare< energia rezultat n di eritele etape ale degradrii catabolice este utilizat n procesele endergonice ale biosintezelor celulare.
3.4.3.4.3. "espira!ia
Bacteriile chimiotro e i procur cea mai important parte a energiei prin procesul de respiraie celular, care const ntr!o succesiune de reacii de oxido!reducere biologic ce pot avea loc n aerobioz sau anaerobiozc(S2":"2!n N. 1*,5- =")ne" G. 1*4. 1*+E%
Bacteriile, ca toate celelalte vie'uitoare, re pir, ceea ce n en ul o&i(nuit al cuv#ntului n ea"n c ele con u" o,i$en pentru a produce cu a-utorul lui reac'ii c.i"ice e,oter"e, eli&eratoare de ener$ie+ /a teur a observat cel dinti c unele pecii &acteriene trie c (i e n"ul'e c n a& en'a o,i$enului "ai &ine c.iar dec#t n prezen'a lui, deci re pir !r o,i$en+ Acea t con tatare, pe l#n$ altele, a du la o lr$ire a con'inutului no'iunii de re pira'ie, n en ul c e nu"e(te proce re pirator orice reac'ie c.i"ic eli&eratoare de ener$ie care e petrece in vivo, n prezen'a au n a& en'a o,i$enului+
c
*>?
2rin oxido!reducere biologic se nelege pierderea atomilor de = (ed i = W% din molecula unei substane chimice ()% care se oxideaz elibernd energie i trans erul lor ctre o substan acceptoare (8% care se reduce, con orm ecuaiei/ SH2 + AN OP S + AH2 + ene)3!e .espiraia la bacterii se rezum, n esen, la preluarea hidrogenului rezultat din reaciile catabolice, prin intermediul unor enzime numite dehidrogenaze i cedarea lui ctre un acceptor inal care poate i oxigenul sau alt substan. 0up natura acceptorului inal de electroni de =, respiraia bacterian este de trei tipuri / *. )es&!)"A!" "e)%9 (oxibiotic%, un proces de de oxidare complet a substraturilor cu a"utorul oxigenului molecular ca acceptor inal de = i eliberarea unei cantiti mari de energie< F. )es&!)"A!" "n"e)%9 (anoxibiotic% n care acceptorul inal de = poate i orice substan anorganic, exceptnd oxigenul (3H3!, )H?!, ), $HF%< 3. @e):en2"A!", un proces de oxido!reducere biologic care are loc n condiii de anaerobioz sau n prezena oxigenului dar r intervenia lui i n care energia este obinut prin utilizarea compuilor organici, att ca donatori ct i ca acceptori de electroni. )pre deosebire de respiraia aerob, n cursul ermentaiei se elibereaz o mic parte din energia coninut n substrat, rezultnd numeroi produi de degradare parial. 8cetia variaz oarte mult n raport cu substratul i calea metabolic c.
01er"enta'ia lactic con t n tran !or"area .e,ozelor n acid lactic+ Ea e te caracteri tic unor pecii din $enurile Lactobacillus (i Streptococcus, re pon a&ile de acidi!ierea laptelui ne!iert+ Ace te &acterii unt utilizate n indu tria prelucrrii laptelui, u& !or" de
e
*>J
0eoarece eliberarea brusc a energiei din substraturile oxidate ! ntr!o singur treapt (aa cum arat reacia de mai sus% ! ar i duntoare pentru celul, trans erul hidrogenului ctre acceptorul inal se realizeaz n mai multe etape, cu participarea unui ntreg arsenal de enzime respiratorii, care servesc ca acceptori tranzitorii de hidrogen. #le se reduc i se oxideaz succesiv prin preluarea i respectiv, cedarea hidrogenului de la una la alta ctre acceptorul inal, constituind sistemul transportor de electroni sau catena de respira!ie celular. @n uncie de structura chimic i ordinea n care intr n aciune de!a lungul catenei de respiraie, enzimele respiratorii bacteriene se ncadreaz n trei grupe. 5. (rupa de.idrogenazelor piridinice ormat din enzimele ale cror coenzime sunt 380 (nicotinamid!adenin! dinucleotid% i 3802 (nicotinamid!adenin5dinucleotid! os at%. Kraciunea activ a acestor coenzime este nicotinamida, care se poate gsi sub dou orme alternative/ oxidat (380 i 3802% i redus (380= F i 3802=F%. .eacia dintre un substrat oxidabil i o coenzim din grupul nicotin!adenin!dinucleotidelor const n dehidrogenarea (oxidarea% celui dinti i hidrogenarea (reducerea% coenzimei. $um 380 i 3802 sunt uor disociabile de
"aiele, pentru o&'inerea di!eritelor orti"ente de iaurturi (i &r#nzeturi+ 1er"enta'ia alcoolic produce alcool din .e,oze+ E te rar nt#lnit la &acterii, !iind caracteri tic levurilor (i unor "ice'i+ 1er"enta'ia acid "i,t e te caracteri tic &acteriilor enterice (i "ultor pecii apro!ite, care eli&ereaz prin !er"entarea $lucozei, acid piruvic, acid lactic, acid !or"ic, acid uccinic (i etanol+ Alte !er"enta'ii po i&ile unt* !er"enta'ia propionic cu !or"are de acid propionic% !er"enta'ia &utilen)$licolic cu !or"are de acetil"etilcar&inol (i &utilen)$licol% !er"enta'ia &utilic)&utiric din care rezult o cantitate "are de aceton 2cu po i&ilit'i de e,ploatare indu trial), alcool izopropilic, &utanol (+a+ *>>
apoenzimele lor, iecare poate participa succesiv la numeroase reacii de oxido!reducere, dup cuplarea lor cu di erite apoenzime. 3. (rupa de.idrogenazelor flavinice este reprezentat de enzimele respiratorii lavoproteice, care conin o grupare prostetic solid ixat (co actor%, reprezentat n ma"oritatea cazurilor de K80 ( lavin!adenin!dinucleotid%. ;a bacteriile aerobe, aceste enzime ndeplinesc rolul de transportori de hidrogen ntre dehidrogenazele piridinice i citocromi. 0e la dehidrogenaze, indi erent de natura lor, atomii de hidrogen cedeaz electronii (ed% citocromilor, iar ei trec n mediul celular sub orm de protoni (= W %. 4. 'istemul citocromilor const ntr!un grup de proteine con"ugate, coninnd iecare un grup prostetic solid ixat numit ,,hem(, n care ierul poate i oxidat i redus n mod reversibil prin ctigarea sau pierderea unui electron/ Q e# FeQQQ N O P FeQQ $itocromul iniial din acest sistem (citocromul b% accept, unul cte unul, electronii trans erai de la dehidrogenaze, pe care i trans er mai departe citocromului c care, la rndul su, e ectueaz un trans er similar citocromului a. 8cesta din urm trans er iecare electron acceptorului inal, reprezentat de oxigenul molecular (HF%, prin intermediul unei enzime speciale numit citocromoxidaz. $nd ierul sub orm redus (KeWW% din hemul ultimului citocrom este reoxidat (KeWWW% sub aciunea citocromoxidazei, oxigenul molecular este redus i se trans orm n ionul H dcapabil s se uneasc cu protonii ( =W % din mediul celular pentru a orma apa (=F H%.
*>,
@n cursul metabolismului, n uncie de natura substratului i de enzimele prezente n celul, bacteriile utilizeaz diverse combinaii de acceptori tranzitorii de hidrogen de!a lungul lanului de respiraie celular ( ig. *,%.
F!3.14 "eprezentarea sc.ematic a modalit!ilor de utilizare a transportorilor de electroni n cursul metabolismului bacterian/
' M reacii de o5ido6reducere la bacteriile aerobe, care utilizeaz o serie complet de transportori de electroniA . M metabolism aerob cu utilizarea e5clusiv a lavinei ca transportor intermediarA , M transportul de electroni Gn procesele ermentative, realizat obinuit de un singur transportor 37'D sau 7'D&).
H parte din energia eliberat prin oxido!reducere se pierde sub orm de cldur sau este utilizat direct pentru unele uncii celulare (transport, biosinteze, mobilitate, etc.%, iar energia suplimentar (care depete nevoile de moment ale celulei bacteriene% este nmagazinat ntr!un compus organic cu os or, sub orma unor legturi intens energetice numite legturi macroergice . 2rincipalul compus macroergic este acidul adenozin! tri os oric (8&2% care deriv din acidul adenozin!mono os oric (8M2% prin dou os orilri oxidative consecutive, cuplate cu lanul respirator ( ig. *+%.
*>+
*>1
F!3.1+ *atena de respira!ie celular cuplat
cu fosforilarea o7idativ.
2rima os orilare duce la ormarea acidului adenozin! di os oric (802% care are o singur legtur macroergic i care, la rndul lui, prin adiionarea unei molecule de os at anorganic se trans orm n 8&2, nmagazinnd o cantitate dubl de energie. 8tt 8&2 ct i 802 pot ceda cu uurin os orul iar energia eliberat prin des acerea legturilor macroergice devine accesibil consumului pentru di eritele nevoi ale celulei
*,-
@n uncie de modalitatea utilizat pentru eliberarea energiei i de comportamentul a de oxigenul molecular, bacteriile pot i grupate n cinci tipuri respiratorii. *. +acteriile strict 9 sau obligatoriu 9 aerobe (.acillus ant+racis, &seudomonas aeruginosa, 12cobacterium tuberculosis, etc.% olosesc oxigenul molecular ca acceptor inal de hidrogen, avnd sistemul citocromilor bine reprezentat (citocromi de tipurile a, a3 , b, c, c*%. 2rin urmare, au nevoie de prezena continu a oxigenului atmos eric. 8viditatea de oxigen a acestor bacterii ace ca ele s se dezvolte oarte bine pe supra aa mediilor solide. @n cazul nsmnrilor e ectuate n masa mediilor agarizate i n mediile lichide, creterea are loc numai la supra a ( ig *1a%. 2entru a obine culturi abundente de bacterii aerobe n mediile lichide este necesar o aerare a mediului. @ncapacitatea de a se dezvolta n anaerobioz s!ar datora lipsei enzimelor necesare respiraiei anaerobe, sau aptului c, pentru aceste bacterii, produii inali ai respiraiei anaerobe sunt toxici.
*,*
F.
toxic i de aceea, n scopul cultivrii, se utilizeaz di erite metode pentru +acteriile strict sau obligatoriu 9 anaerobe
(,lostridium tetani, ,lostridium botulinum, =usobactrium spp, .acteroides spp. .a.% nu se pot dezvolta n prezena oxigenului ( ig *1 c%. 2entru ele oxigenul este eliminarea sau blocarea aciunii lui. $ultivarea n absena oxigenului se realizeaz, n mod curent, prin incubarea culturilor n aparate speciale numite anaerostate sau prin incorporarea n mediul de cultur a unor substane puternic reductoare (tioglicolat de sodiu, cistein, sul it de sodiu, etc.%.
F!3. 1* 8fectul concentra!iei o7igenului asupra creterii bacteriilor.
Bacteriile strict anaerobe sunt lipsite de enzimele respiratorii din categoria citocromilor, implicit de citocromoxidaz. @n aceast de icien rezid i explicaia anaerobiozei lor stricte, deoarece n prezena HF, care se comport ca acceptor inal de =, nu se mai ormeaz apa ci peroxidul de hidrogen (produs toxic%, con orm reaciei/ S R H2Q O2 S P S Q H2 O2
*,F
Bacteriile aerobe, spre deosebire de cele anaerobe, nu sunt expuse aciunii toxice a apei oxigenate, deoarece ele sau nu produc acest peroxid sau, dac!l produc, au dou posibiliti de a!l trans orma n produi ino ensivi/ ie prin intrarea n aciune a catalazei, care l descompune n ap i oxigen >H2 O2 Sc"2"("BS P H2 O Q T O2 ?, ie prin utilizarea lui ca acceptor de hidrogen n oxidrile catalizate de peroxidaze, care l reduc la ap >H2 O2 Q 2 >H?S&e)%I!d"BS P 2 H2 O?. Bacteriile anaerobe sunt lipsite de catalaz i peroxidaz i ca atare sunt susceptibile de a su eri de pe urma aciunii = F HF care se acumuleaz n mediu n concentraii toxice. 0up o alt ipotez, moartea anaerobilor n prezena oxigenului nu s!ar datora acestor de iciene, ci ar i determinat de a ectarea ireversibil a proteinelor enzimatice care, la aceste bacterii, sunt oarte sensibile la oxidare. H dovad n spri"inul acestei ipoteze o constituie aptul c, anaerobii obligai pot i cultivai n prezena oxigenului, dac n mediul de cultur se introduce una din substanele reductoare mai sus menionate, pentru a!i menine potenialul redox la un nivel sczut. 3. +acteriile aerobe6 anaerobe facultativ sunt bacterii aerobe care i!au dezvoltat capacitatea de a supravieui n absena oxigenului. #le sunt dotate enzimatic cu posibiliti de a obine energie att prin procesele de oxidare aerob ct i prin ermentaie, n uncie de disponibilitile de oxigen. $ultivate n bulion i n masa mediilor solide, ele epuizeaz n scurt timp oxigenul dizolvat, continund s se dezvolte n condiii anaerobe ( ig.*1 b%. @n aceast categorie se ncadreaz ma"oritatea speciilor bacteriene care intereseaz patologia uman i veterinar . ?. +acteriile anaerobe6 aerotolerante sunt bacteriile anaerobe la izolare, care n subculturi devin tolerante a de oxigen ( ig.*1 d%. Cn exemplu tipic l constituie specia ,lostridium per ringens.
*,3
J.
+acteriile microaerofile (,amp2lobacter spp, 0elicobacter spp., .rucella spp. .a.% au nevoie de o cantitate de oxigen mai redus dect concentraia existent n aer, ast el nct n tuburile cu medii solide nsmnate prin incorporarea inoculului, cultura se dezvolt ntr!un orizont limitat, acolo unde se realizeaz concentraia respectiv ( ig.*1 e%. 8ceast particularitate ! microaero ilia ! s!ar datora sensibilitii unora dintre enzime la condiiile de oxidare puternic. 2rin urmare, cultivarea acestor bacterii reclam incubarea n termostate cu atmos er reglabil, care s conin oxigen J!,U, bioxid de carbon +!*-U i azot +JU (Bu!uc D. 1***%.
>.
3.4.3.4.4. $nabolismul
8nabolismul const n secvene de reacii enzimatice, des urate n trepte, prin care se e ectueaz sinteza constituienilor celulari pornind de la precursori reprezentai de produii intermediari ai catabolismului sau de substanele preluate direct din mediu. $a i procesele de catabolism, reaciile de biosintez se realizeaz tot n trei aze care se succed n sens invers /
producerea de subuniti care vor intra n componena

macromoleculelor speci ice iecrui constituient celular< activarea subunitilor cu a"utorul energiei eliberate prin descompunerea compuilor macroergici de tip 8&2 , n care a ost stocat pe parcursul degradrii di eriilor compui< ormarea de macromolecule prin polimerizarea sau condensarea subunitilor activate.
*,?
&otui, cile catabolice i anabolice pentru un anumit substrat nu sunt complet reversibile. 8st el, reaciile anabolice au ca punct de plecare, de cele mai multe ori, compui intermediari oarte di erii de cei care rezult din catabolismul compusului respectiv, iar enzimele implicate sunt parial di erite. 0e exemplu, catabolismul serinei duce la ormarea de piruvat, n timp ce sinteza ei ncepe de la 3! os oglicerat< histidina este catabolizat la !cetoglutarat, iar sinteza ei este iniiat de la ribozo!J! os at< degradarea glicogenului la acid lactic este catalizat de *F enzime, dintre care numai 1 catalizeaz reacii reversibile .
2.3.2.E. C)eC2e)e" C! :u(2!&(!c")e" 9"c2e)!!(%) 3.4.3.:.5. *reterea bacteriilor

$elula bacterian crete pe seama depunerii de substan celular rezultat din metabolismul de biosintez i a sporirii coninutului n ap. $reterea se poate realiza uni! sau multidimensional, n uncie de locul i modalitatea de dispunere a substanei nou elaborate. 0up ; a m a n n a (cit. de =")ne" G. 1*+E%, exist urmtoarele posibiliti teoretice de cretere a celulei bacteriene ( ig.F-%/
*,J
*,>
F!3. 2. ,odalit!i de cretere la bacterii/ ; M celula bacterian imediat
dup diviziuneA : M creterea la o singur e5tremitateA 3 M la ambele e5tremitiA B 6 Gn zona septului transversalA C M prin intususcepiuneA D M prin depunere de substan Gn zona peri eric a celulei.
*. creterea la una din extremiti< F. cretera la ambele extremiti< 3. creterea n vecintatea constituirii viitorului sept de diviziune< ?. creterea prin intususcepiune (depunerea de substan nou, diseminat i intercalat printre constituienii celulari preexisteni%< J. cretere prin depunerea materialului nou n zona peri eric a celulei (limitro nveliului%. @n cursul creterii celulei bacteriene, raportul supra a`volum se micoreaz treptat datorit aptului c, n timp ce supra aa bacteriilor se dubleaz, volumul lor se tripleaz. Hri, activitatea normal a bacteriilor este condiionat de existena unui raport optim ntre volumul celulei, care consum i supra aa ei, prin care se ace absorbia substanelor nutritive i eliminarea cataboliilor. @n consecin, pe parcursul creterii, aportul de
*,,
substane nutritive satis ace din ce n ce mai puin exigenele metabolice ale celulei iar echilibrul ei chimic se altereaz, deoarece circulaia substanelor prin di uzie n ambele sensuri devine mai di icil. 0in cauza acestor perturbri, atunci cnd disproporia dintre supra a i volum atinge un anumit punct critic, raportul lor adecvat se restabilete prin diviziunea celulei. 8st el, diviziunea celular este prin ea nsi o orm necesar de reglare a activitii celulei bacteriene.
3.4.3.:.3. ,ultiplicarea bacteriilor

F%):e(e de :u(2!&(!c")e )pre deosebire de organismele pluricelulare, la care multiplicarea celulelor duce la mrirea taliei individului, la bacterii i la toate celelalte organisme unicelulare, ea are ca rezultat creterea numrului de indivizi i implicit a populaiei respective. Ma"oritatea speciilor bacteriene se multiplic numai prin diviziune direct (diviziune simpl, sciziparitate%, unele (micoplasmele, actinomicetele% putndu!se multiplica i pe alte ci/ prin corpi elementari, rami icare , nmugurire, spori. $a regul general, multiplicarea bacteriilor este asexuat, dei uneori ea poate i precedat de orme rudimentare de sexualitate, care constau ntr!un schimb de material genetic ntre dou celule bacteriene prin enomenul de con"ugare (vezi cap.de <enetic bacterian %.
*,+
,ultiplicarea prin diviziune direct const n scindarea unei celule bacteriene care a atins punctul critic de cretere n dou celule! iice, cel mai recvent identice. ;a bacteriile de orm alungit (bacili, spirochete%, diviziunea se ace transversal dup un plan perpendicular pe marele ax al celulei, n centrul acesteia i rareori excentric. ;a coci, diviziunea se poate realiza dup unul, dou sau trei planuri perpendiculare succesive. @n urma diviziunii, celulele rezultate se pot separa sau, la numeroase specii, pot s rmn unite una sau mai multe generaii realiznd grupri caracteristice cu valoare taxonomic. 0iviziunea celulei bacteriene este precedat i iniiat de replicarea semiconservativ a 830!ului cromozomal, n momentul n care corpii nucleari nou ormai sunt disponibili pentru segregare, ast el nct cele dou celule5surori s ie nzestrate cu o copie exact a genomului celulei parentale. )pre deosebire de celulele eucariote, la care separarea materialului nuclear se realizeaz graie aparatului mitotic, la bacterii segregarea este asigurat de mezozomii pe care membrana citoplasmatic i ormeaz prin invaginare pn la nivelul iecrui corp nuclear. @n acest mod, replicarea materialului genetic este corelat cu creterea celular, prin intermediul semnalelor chimice transmise de membrana citoplasmatic n cretere, sistemului enzimatic de reglare a replicrii. )epararea celulei bacteriene n cele dou celule! iice se poate realiza n dou moduri/ prin trangularea celulei i prin ormarea unui sept transversal. Diviziunea prin trangulare, caracteristic bacteriilor care aparin tipului cultural I)' se realizeaz prin ngustarea median a celulei, determinat de invaginarea concomitent a membranei citoplasmatice i a peretelui celular ( ig. F*%.
*,1
Fig. 1
Reprezentarea schematic a diviziunii bacteriilor prin trangulare (dup Bisset cit. de Zarnea, G.,1963.)
Diviziunea prin sept transversal se caracterizeaz prin constituirea, ntr!o prim az, a unui sept rezultat din invaginarea membranei citoplasmatice, pentru ca, n a doua az, s se constituie i partea de perete celular ce urmeaz s despart celulele! iice rezultate. 8cest mod de diviziune se ntlnete cu predilecie la bacteriile aparinnd tipului cultural rugos ! (.' ( ig.FF%.
F!3. 22 "eprezentarea sc.ematic a diviziunii bacteriilor prin sept
transversal -dup .isset cit. de Jarnea <., ;HD3).
*+-
,ultiplicarea prin corpi elementari a ost descris la chlamidii, bacterii la care, pe lng diviziunea direct, exist posibilitatea des urrii unui ciclu vital. 2unctul de plecare al acestui ciclu este reprezentat de structuri mici corpusculare, electronoopace, cu un diametru aproximativ de -,F 5 -,J micrometri, numite corpi elementari. @n celula gazd, iecare corp elementar crete, trans ormndu!se n corp iniial sau reticulat care a"unge la -,+ 5 *,J micrometri. @n continuare, corpii reticulai se multiplic prin diviziune iar celulele! iice se reorganizeaz, n sensul trans ormrii lor n corpi elementari. ,ultiplicarea prin ramificare6 nmugurire i spori ! proprie ciupercilor microscopice (micei ilamentoi i levuri% 5 este ntlnit doar la actinomicete i unele bacterii otosintetizante. D!n":!c" :u(2!&(!c)!! 9"c2e)!!(%) 0eoarece examinarea direct a bacteriilor n di erite medii naturale este oarte di icil, se cunosc puine date re eritoare la multiplicarea populaiilor bacteriene n natur (=")ne" G. 1**E%. $ultivarea bacteriilor n laborator a permis ns un studiu detaliat al dinamicii procesului de multiplicare n condiii experimentale i al relaiilor dintre multiplicare i actorii de mediu. )!a constatat ast el, c o cultur bacterian prezint n cursul existenei sale patru aze, distincte prin viteza de multiplicare a germenilor i prin numrul de celule vii pe unitatea de volum.
*+*
8ceste aze sunt/ aza iniial de adaptare (de laten sau de lag*%, aza de multiplicare exponenial sau logaritmic, aza staionar i aza de declin ( ig. F3%. Cn aspect esenial pentru practica examenului bacteriologic este aptul c proprietile mediului de cultur (starea de agregare, compoziia chimic, p= 5 ul, etc.% genereaz o serie de particulariti ale multiplicrii, re eritoare la viteza de succesiune a diviziunilor celulare, mor ologia bacteriilor, expresia macroscopic a populaiilor bacteriene (caracterele culturale%, longevitatea bacteriilor n culturi, etc. (Rducnescu H. '"(e)!" B!c" $%&!! 1*+,
(engl. to lag [a nt#rzia, a r"#ne n ur"% *+F
*+3
F!3.23 *urba de multiplicare a bacteriilor.
$")2!cu(")!2A!(e :u(2!&(!c)!! 9"c2e)!!(%) Dn ;"s Dnc7!s. $ultivarea bacteriilor n vase nchise, n cantiti determinate de mediu, este metoda uzual de cultivare a bacteriilor n laboratoarele de diagnostic. @noculum este reprezentat, ie de un produs patologic n care se suspecteaz prezena bacteriilor, ie de o cantitate mic de cultur de pe un alt mediu arti icial.
A. Mu(2!&(!c")e" Dn :ed!!(e (!c7!de.
*+?
Faza de laten! este cuprins ntre momentul introducerii celulelor bacteriene n mediu, prin nsmnare sau transplantare i momentul cnd ncep s se multiplice. #ste o perioad de adaptare la noile condiii, eventual de modi icare a acestora (S2":"2!n N. 1*,5%, caracterizat prin lipsa diviziunii i moartea unor celule bacteriene din cauza neacomodrii. Bacteriile viabile acumuleaz n celul metaboliii eseniali i sistemele enzimatice necesare creterii. 0urata perioadei de adaptare este condiionat de urmtorii actori/
specia bacterian (la ma"oritatea speciilor dureaz n

medie dou ore, iar la bacilii tuberculozei, cteva zile%< calitatea nutritiv a mediului nsmnat i di erenele a de mediul din care provine inoculum (atunci cnd acesta provine dintr!un alt mediu sau este un produs patologic, adaptarea reclam o perioad mai lung de timp dect atunci cnd provine din acelai mediu de cultur%< vitalitatea bacteriilor nsmnate (cele provenite din culturi mbtrnite, produse patologice nvechite sau procese supurative cronice se adapteaz mai greu, n timp ce bacteriile din culturi tinere, din procese supurative acute, sunt active metabolic i se adapteaz mai uor%. @n cazul sporilor, trans ormarea lor n celule vegetative presupune uneori o prelungire a perioadei de adaptare. Faza de multiplicare e7ponen!ial sau logaritmic se caracterizeaz prin multiplicarea celulelor bacteriene, la debut cu o vitez progresiv mrit, apoi, ntr!un ritm constant i
*+J
caracteristic pentru iecare specie bacterian n condiii bine de inite (mediu de cultur, temperatur, 2h, etc.%. ;a ma"oritatea bacteriilor patogene i condiionat patogene (vezi cap. 7oiuni de ecologie microbian), n condiii optime, diviziunile se succed la intervale de F-!3- de minute ! timp care reprezint vrsta unei generaii i care este urmat de dublarea populaiei bacteriene. H excepie ac bacilii tuberculozei, la care intervalul dintre dou diviziuni este de 3!*J ore (n uncie de specie%. @n aceast az, culturile bacteriene conin celule tinere care prezint toate proprietile mor o! iziologice caracteristice speciei i o intensitate maxim a tuturor proceselor vitale. 0atorit metabolismului oarte activ, ele sunt considerabil mai sensibile la aciunea agenilor antibacterieni (antibiotice, chimioterapice% dect n celelalte aze ale multiplicrii. 0urata azei de multiplicare logaritmic este n medie de >!F? de ore, cu aceeai excepie 5 bacilii tuberculozei 5 la care ritmul lent de diviziune ace ca aceast perioad s se prelungeasc pn la *J!>- de zile. Faza sta!ionar urmeaz unei scurte perioade (aproximativ F ore% n care multiplicarea nu se mai produce n progresie geometric ci ntr!un ritm care scade progresiv. @ncetinirea multiplicrii este determinat de modi icarea mediului de cultur (scderea concentraiei nutrienilor, acumularea metaboliilor toxici n concentraii inhibitorii, reducerea coninutului n oxigen , etc.%, dar mai ales de realizarea unei concentraii maxime de celule bacteriene pe unitatea de volum (3*-, ! 3*-1 pe ml%. H dovad a aptului c principala cauz este o problem de spaiu, o constituie multiplicarea de nlocuire care caracterizeaz aceast perioad, n care rata de cretere a
*+>
populaiei bacteriene este nul. 2ractic, diviziunile continu numai n limita disponibilitilor de spaiu create prin moartea unor celule. 8ceast az dureaz de la cteva ore pn la ,!+ zile, n uncie de specie. Faza de declin se caracterizeaz prin absena diviziunilor i moartea logaritmic a celulelor bacteriene, pn la sterilizarea mediului. $auzele care duc la moartea bacteriilor sunt multiple i sunt legate n special de epuizarea substane nutritive, diminuarea rezervelor respiratorii i aciunea toxic exercitat de cataboliii acumulai n mediu. Cneori, un numr mic de bacterii poate supravieui cteva sptmni sau luni pe seama substanelor nutritive eliberate prin autoliza celulelor moarte. Kenomenul este cunoscut sub denumirile de reluarea creterii, cretere criptic sau canibalism. )!a estimat c pentru un supravieuitor sunt necesare substanele provenite de la aproximativ J- de celule moarte (G)ec!"nu A(. 1*+, %. @n aza de declin, bacteriile prezint un polimor ism accentuat determinat de prezena celulelor mbtrnite, cu orme atipice (celule s erice, mici sau gigante, de ormate, ilamentoase, rami icate, etc.% i cu a initate tinctorial sczut. #vitarea erorilor generate de aceste modi icri reclam e ectuarea examenelor pentru ncadrarea taxonomic, testarea patogenitii, testarea sensibilitii bacteriilor .a., numai pe culturi n aza exponenial. B. Mu(2!&(!c")e" 9"c2e)!!(%) &e :ed!!(e s%(!de.
*+,
2articularitile multiplicrii pe mediile solide se datoreaz n primul rnd absenei micrilor bro]niene, care asigur dispersarea bacteriilor n masa mediilor lichide i accesul nediscriminatoriu al celulelor la resursele nutritive. 2rin urmare, att pe supra aa, ct i n pro unzimea mediilor solide, n urma multiplicrii bacteriilor rezult aglomerri de milioane de celule, care, n uncie de abundena inoculului i activitatea aparatului ciliar, pot mbrca macroscopic dou orme/ colonia izolat i gazonul bacterian. *olonia reprezint o mas compact de celule, rezultate, de regul, din multiplicarea unei singure celule bacteriene. 0up declanarea azei logaritmice, diviziunile se distaneaz treptat, pe msur ce colonia crete, deoarece ntre celulele bacteriene care o compun se creeaz di erene privind posibilitile de acces la substanele nutritive sau la oxigen (n cazul speciilor aerobe%, n uncie de poziia lor/ limitro mediului sau n centrul coloniei. $elulele de la peri eria coloniilor, care bene iciaz de un aport optim de oxigen i de nutrieni, se multiplic activ, n timp ce bacteriile din centrul coloniei pot i moarte. 0ezvoltarea unei colonii bacteriene este condiionat, nu numai de interaciunile celulelor individuale, ci i de in luena coloniilor vecine. 8st el, cu ct coloniile sunt mai numeroase i mai dese, cu att sunt mai mici, din cauz c se "eneaz reciproc prin eliminarea de metabolii toxici i prin diminuarea concentraiei nutrienilor. $oloniile bacteriene di er prin orm, relie , margini, dimensiuni (-,* mm ! 3!? mm%, supra a, grad de opacitate, prezena sau absena pigmentului, etc.
*++
8ceste particulariti au permis di erenierea a dou tipuri principale de colonii/ colonia de tip ,,)( (neted% i colonia de tip ,,.aa (rugoas%. *olonia de tip 66'; (engl. smooth[neted% reprezint rezultatul multiplicrii n condiii optime, la ma"oritatea speciilor bacteriene (excepie ac .acillus ant+racis, antracoizii i 12cobacterium tuberculosis%. #ste rotund, bombat, cu supra aa neted i lucioas i marginile regulate ( ig.F?%. $oloniile netede se detaeaz cu uurin de substrat i ormeaz suspensii omogene i stabile n soluie salin izotonic (3a$l 1U%. Bacteriile care ormeaz ast el de colonii sunt dispuse izolat sau n grupuri mici (diplo, lanuri scurte% i prezint stratul structurilor speciale al peretelui bacterian i capsula (n cazul speciilor capsulate%, bine sintetizate. 2rin urmare, structura lor antigenic este complet, iar atunci cnd aparin speciilor patogene, corespund ormei virulente cu patogenitate i rezisten la agocitoz, maxime. @n bulion, aceste bacterii cresc repede, tulburndu!l uni orm *olonia de tip < "; (engl. rough [ rugos% este plat, cu supra aa rugoas, zbrcit i marginile neregulate ( ig. FJ%. 8spectul se datoreaz tendinei celulelor de a orma lanuri lungi
*+1
*1-
sau ilamente, care se ntretaie schimbndu!i reciproc direcia i care ormeaz bucle atunci cnd ntlnesc n mediu un obstacol mecanic.
F!3. 2E *olonie bacterian de tip 66'; -dup Jarnea <., ;HE0).
F!3.25 *olonie bacterian de tip 66"; -dup Jarnea <.,;HE0).
*1*
8cest tip de colonie este speci ic variantelor acapsulogene i bacteriilor necapsulate ca specie, care i!au pierdut capacitatea de sintez normal a structurilor speciale de perete. 0rept urmare, aceste bacterii au o structur antigenic incomplet i aparin, de regul, variantelor cu patogenitate atenuat sau nevirulente. Kace excepie specia 12cobacterium tuberculosis, al crei tip cultural la izolare este ,,.( i la care pierderea capacitii de sintez a actorului cord (o glicolipid din structura peretelui celular% se nsoete de o variaie .). $oloniile de tip ' .( ormeaz suspensii neomogene n soluie salin iziologic, iar n bulion cresc aglutinat, ormnd un sediment la undul tubului. 0ezvoltarea bacteriilor pe mediile solide sub orm de colonii izolate st la baza tehnicilor uzuale de izolare a bacteriilor n culturi pure. (azonul sau p%nza reprezint cultura care rezult prin con luarea coloniilor n cazul nsmnrilor abundente, sau prin invazia mediului de ctre bacteriile cu aparat ciliar oarte activ, ca urmare a enomenului de roire sau crare . Cu(2u)! c%n2!nue 0urata azei de cretere exponenial a culturilor bacteriene n vas nchis (culturi discontinue% nu permite acumularea unei cantiti mari de biomas. 0eoarece numeroase bacterii sunt utilizate la scar industrial pentru obinerea unor produse utile (vitamine, enzime, hormoni, etc.%, este necesar conservarea azei logaritmice o lung perioad de timp.
*1F
8cest deziderat se poate realiza dac mediul de cultur este renoit continuu, concomitent cu eliminarea produilor de catabolism. ;a nivel de laborator, culturile continue se pot obine cu a"utorul unei instalaii speciale numit chemostat ( ig. F>%. )pre deosebire de cultura static, n care concentraia substratului scade pe msur ce bacteriile se multiplic, ducnd n inal la diminuarea ratei de cretere, n chemostat, adugarea mediului proaspt n mod continuu stabilizeaz concentraia substratului i rata de cretere.
F!3. 2,. 'c.ema unui c.emostat.
2.3.3. MORFOLOGIA I BIOLOGIA S$ORULUI

*13
BACTERIAN )porul bacterian este o orm de conservare a unor specii bacteriene n condiii ne avorabile, prin rezistena sa crescut la actorii nocivi pentru celula vegetativ. 2rocesul de ormare a sporului are loc n interiorul celulei vegetative (endospor% i poart denumirea de sporogenez. @n condiii de mediu optime are loc germinarea sporului, din care va rezulta o nou celul vegetativ. Kaptul c ntr!o celul vegetativ se ormeaz un singur spor, iar prin germinarea acestuia rezult o singur celul vegetativ, demonstreaz c sporogeneza la bacterii nu reprezint o cale de nmulire. #xcepie ac actinomocetele, singurele bacterii la care, ca i la ciupercile microscopice, sporul reprezint o orm de reproducere. 8tt sporogeneza ct i germinarea se gsesc sub controlul unor gene cromozomale (aproximativ J-% care acioneaz alternativ, iind represate sau depresate de diveri actori interni sau din mediul ambiant. )peciile sporogene patogene pentru om i animale aparin genurilor .acillus i ,lostridium. $ocii, cu excepia speciei %porosarcina ureae , nu ormeaz spori.
2.3.3.1. S&%)%3eneB"
)porogeneza este un proces de ormare n interiorul celulei bacteriene a unei celule de tip nou, di erit din punct de vedere chimic, enzimatic i iziologic. @n celula vegetativ, asupra genelor care codi ic acest proces acioneaz inhibitor un represor sintetizat pe baza unor compui chimici preluai din mediu. $nd substanele respective sunt epuizate i represorul nu mai este prezent n celul, genele
*1?
sunt depresate i se exprim enotipic prin declanarea procesului de sporogenez. 8li actori care in lueneaz avorabil sporogeneza sunt/ anumite limite de temperatur (la .acillus ant+racis ntre *+o $ i ?-- $%, uscciunea, prezena oxigenului la bacteriile aerobe i absena lui la cele anaerobe, o anumit densitate a germenilor pe unitatea de volum, etc. )porogeneza evolueaz n trei aze succesive ( ig. F,%/ stadiul preparator, ormarea presporului i maturarea acestuia.
F!3. 24 Fazele sporogenezei/ ; M celula bacterian Gn stadiul premergtor
sporogenezeiA : M scindarea materialului genetic cromozomalA 3 M ormarea presporului prin constituirea septului de sporogenezA B M ormarea corte5uluiA C M ormarea celorlalte Gnveliuri sporaleA D M spor liber 3dup *ducnescu 0. i col.,;HFD).
*1J
Pregtirea celulei pentru procesul de sporogenez const n replicarea semiconservativ a 830!ului nuclear cu ormarea a doi cromozomi distinci. Formarea presporului presupune, ntr!un stadiu incipient, separarea celor doi cromozomi printr!un sept transversal rezultat din invaginarea membranei citoplasmatice. $ele dou segmente celulare vor evolua pe ci di erite, unul devenind prespor iar cellalt, sporangiu. 2resporul i mrete gradul de re ringen i de opacitate a de lumin i electroni, paralel cu ncetarea replicrii cromozomului i iniierea organizrii nveliurilor sporale. )porangiul, reprezentat de restul celulei vegetative, se autolizeaz sub aciunea unor enzime speci ice elibernd sporul (ex. .acillus cereus%, sau rmne ataat de spor un timp nede init (ex. ,lostridium tetani%, r a se putea preciza dac pstreaz sau nu nsuirile vieii ,aturarea sporului reprezint stadiul inal de organizare a constituenilor sporali, nsoit de dobndirea nsuirilor biologice caracteristice. #a se realizeaz prin urmtoarele trans ormri care se petrec n prespor/ mor ogeneza nveliurilor sporale< apariia unor compui chimici speci ici, inexisteni n celula vegetativ< reducerea sensibil a activitii metabolice< dobndirea rezistenei la actorii izici i chimici a de care celula vegetativ este sensibil.
2.3.3.2. M%)@%(%3!" s&%)u(u!

@n rotiuri, sporii se pot gsi liberi, ataai de celula n care s! au ormat sau n interiorul acesteia, avnd orm rotund, oval sau
*1>
cilindric. @n cazul cnd sporul rmne n interiorul sporangiului, el poate i aezat central, subterminal (n apropierea unui capt%, terminal (la unul din capete% sau lateral ( ig. F+%. 0iametrul sporului poate i egal, mai mare sau mai mic n comparaie cu diametrul transversal al celulei bacteriene. @n uncie de poziia sporului i raportul dintre cele dou diametre, bacteriile sporulate pot adopta di erite orme cu semni icaie taxonomic, i anume/ 9"c!( nede@%):"2 (bacteridie% cu sporul situat central, caracteristic pentru bacteriile din genul .acillus< 9"c!( de@%):"2 de sporii care depesc diametrul transversal al celulei vegetative (clostridie%, avnd aspect de/ lmie, cnd sporul este situat central< sticl de lamp de petrol, cnd sporul este situat subterminal< rachet de tenis sau b de chibrit, cu spor s eric terminal< 9"c!( "s!:e2)!c cu sporul excentric, caracteristic speciei .acillus laterosporus.
F!3.2+ "aporturi posibile ntre spor i sporangiu/
; M spor liberA : M spor central nede ormantA 3 M D, di erii spori cu diametrul transversal mai mare dec-t al celulei 33 6 centralA B M subterminalA C M terminalA D M lateral).
*1,
2.3.3.3. U(2)"s2)uc2u)" s&%)u(u!

2rile componente ale sporului bacterian, pornind de la interior spre exterior sunt ( ig.F1%/
F!3.2* $natomia sporului/
; M s-mburele sporuluiA : M sporoplasmaA 3 M nucleoplasmaA B M ribozomiA C M corte5A D 6 Gnveliuri sporale e5terneA E M e5osporium.
*1+
*. !n!:" s&%)u(u! numit i smbure, ,, core I sau protoplast sporal, cuprinde/ sporoplasma, corespunztoare citoplas! mei, dar mai dens i cu aspect granular, i materialul nuclear sau nucleoplasma. F. :e:9)"n" !n2e)n (intina% similar membranei citoplasmatice, care rezult din creterea septului sporal n "urul protoplastului< 3. c%)2eIu( s&%)"( constituit din peptidoglican modi icat, similar peretelui bacterian< ?. Dn;e(!Cu( eI2e)n (exina sau tunicile sporale%, pluristrati icat< J. eI%s&%)!u:, un nveli suplimentar analog capsulei, prezent numai la sporii anumitor specii< >. c%)&!! &")"s&%)"(!, ormaiuni cristaloide obseservate pe supra aa sporilor unor specii bacteriene patogene pentru insecte (ex. .acillus t+uringiensis% 8 initile tinctoriale ale sporului di er de cele ale celulei vegetative, ast el nct prin metoda 9ram se coloreaz palid numai conturul sporului, nu i coninutul. 2entru colorarea acestuia sunt necesare metode energice, care presupun colorarea la cald cu soluii concentrate, capabile s impregneze structurile dense ale sporului.
2.3.3.E. $")2!cu(")!2A!(e s&%)u(u! Particularit!ile bioc.imice

0in punct de vedere biochimic, sporii se caracterizeaz printr!un coninut mai redus n ap liber, sruri de os or, sruri de potasiu i acizi nucleici. #i conin ntr!o proporie mai mare dect celula vegetativ, cistein, ioni de calciu i ioni magneziu.
*11
@n spor se gsesc i unii compui chimici abseni n celula vegetativ, cum sunt enzimele litice sporale i acidul dipicolinic (circa *-U din greutatea uscat a sporului%, prezent sub orm de sare de calciu (dipicolinat de calciu%.
Particularit!ile fiziologice ale sporului constau n

aptul c procesele metabolice se des oar cu o intensitate mult redus, sporul iind o celul dormant, care nu realizeaz schimburi de substane cu mediul ambiant, care nu crete i nu se multiplic.
Insuirile biologice
)porii bacterieni se caracterizeaz printr!o rezisten oarte mare la cldur, radiaii, uscciune i aciunea substanelor chimice, asigurnd supravieuirea speciei n natur o perioad ndelungat (zeci, sute, sau chiar mii de ani%F. 0e exemplu, sporii de .acillus ant+racis i pstreaz capacitatea de germinare timp de peste ,- de ani i rezist cteva ore la *F- - $ i cteva minute la *+-- $ cldur uscat. )porii altor specii i menin viabilitatea timp de o sptmn n enol JU i mai multe sptmni n alcool. .ezistena sporilor la actorii nocivi din mediul extern este asigurat de un complex de actori dintre care o importan ma"or prezint / starea de deshidratare (ap ?-!J-U, a de +-!1-U la ormele vegetative% i coninutul oarte sczut n ap liber< apa ,,legat( de diverse structuri nu poate participa
)!au gasit spori viabili n roci care )au !or"at n era cuaternar (i care au !o t coa e de la ad#nci"i de 34)56 "+ /rezen'a unui nu"r de 6)78 pori pe $ra" de roc, e,clude conta"inarea ulterioar 29arnea G+, 7:;3) +
F
F--
la reaciile chimice de denaturare i coagulare a proteinelor prin cldur, antiseptice i dezin ectante < prezena unei cantiti mari de dipicolinat de calciu, care are rolul de a modi ica con ormaia proteinelor enzimatice, con erindu!le ast el termostabilitate< numrul mare de nveliuri protectoare.
2.3.3.5. Ge):!n")e" s&%)u(u!

9erminarea sporului reprezint procesul de trans ormare a sporului n celul vegetativ activ. 9erminarea este declanat de umiditate, o temperatur apropiat de optimum termic al speciei, dar i de ocul termic (nclzirea brusc la >-! +-- $ %, 2h!ul cuprins ntre > i +, prezena n mediu a glucozei, aminoacizilor, nucleozidelor i a altor substane utile metabolismului bacterian. 9erminarea biologic distincte/ se realizeaz n dou aze mor ologic i
iniierea germinrii, cnd sporul se mrete n volum consecutiv absorbiei de ap i elimin n mediu dipicolinat de calciu, peptidoglican i alte substane de origine sporal, pierzndu!i ma"oritatea nsuirilor speci ice. distrugerea nveliurilor sporale i trecerea n aza vegetativ prin reluarea activitii metabolice i redobndirea tuturor nsuirilor mor ologice i iziologice caracteristice celulei vegetative. 8u o aciune inhibant asupra germinrii, apa distilat, glicerina, i unele antibiotice care inter ereaz cu sinteza peretelui celular, a proteinelor i a acizilor nucleici.
F-*
2.3.3.,. I:&(!c"A!!(e s&%)%3eneBe! Dn &"2%(%3!e C! e&!de:!%(%3!e

Bacteriile sporogene se caracterizeaz printr!o existen sapro it. 3ia ecologic natural a speciilor sporulate patogene pentru om i animale este solul. 0e aici, bacteriile pot a"unge accidental n organism, provocnd mbolnviri cunoscute sub denumirea generic de in ecii telurice (antraxul, tetanosul, crbunele em izematos%, sau n alimente, unde elaboreaz toxine determind intoxicaii (,lostridium botulinum% i toxiin ecii alimentare (.acillus cereus, ,lostridium per ringens%.
2.3.E. GRU$E DE BACTERII CU $ARTICULARIT<I MORFOFI=IOLOGICE
2.3.E.1. R!cUe22s!!(e
Microorganismele din acest grup au ost considerate o lung perioad de timp ca avnd o poziie intermediar ntre bacterii i virusuri, datorit dimensiunilor reduse i parazitismului intracelular obligatoriu. )tudiul ultrastructurii i al iziologiei ric7ettsiilor au convins pe sistematicieni s le ncadreze de initiv n rndul bacteriilor, pe baza urmtoarelor argumente/ conin ambii acizi nucleici< au un echipament enzimatic propriu< au aceleai componente structurale (citoplasm, aparat nuclear, membran citoplasmatic i perete celular%<
F-F
nu sunt sintetizate de celula pe care o paraziteaz, asemntor virusurilor, ci se multiplic prin diviziune simpl binar. 2arazitismul intracelular obligatoriu al acestor bacterii s!ar datora, ie permeabilitii excesive a membranei citoplasmatice care nu poate reine unii metabolii eseniali (de ect compensat prin dezvoltarea intracelular%, ie di icultilor de acoperire a nevoilor energetice prin mi"loacele enzimatice proprii, iind deci parazii de energie. 2rimul reprezentant al acestui grup de germeni a ost izolat i descris de cercettorul american = o ] a r d & e A l o r . i c 7 e t t s n *1*-, ca agent etiologic al unei boli la om, transmisibil prin cpui, cunoscut sub denumire de ,, ebra ptat a munilor stncoiI. @n cursul experienelor, . i c 7 e t t s s!a in ectat cu acest bacterie i a murit la vrsta de numai ?- de ani. @n *1*J, cercettorul austriac )tanislas 2rovaz e 7 izoleaz i descrie al doilea reprezentant al grupului ric7ettsiilor, care produce la om ti osul exantematic, avnd parte n cursul lucrrilor de aceeai soart tragic ca i . i c 7 e t t s. 8lte entiti morbide produse de aceti germeni sunt ti osul endemic cauzat de *.mooseri i ebra f ( engl. guerA[ necunoscut, bizar % produs de ,o5iella burneti. 2entru a cinsti memoria tnrului savant a crui via a ost sacri icat pe altarul tiinei, toate microorganismele cu caractere asemntoare agentului ebrei ptate a munilor stncoi au primit denumirea generic de ,, ric7ettsii(. #le au ost ncadrate n ordinul *ic@ettsiales, care cuprinde trei amilii, *3 genuri i peste J- de specii. Mor ologic, ric7ettsiile sunt bacterii mici (-,* 5 F _m% de orm bacilar sau cocoid, imobile, necapsulate, nesporulate, 9ram negative. 0eoarece prin metoda 9ram se coloreaz slab, avnd o uoar acidorezisten, ric7ettsile se coloreaz n mod
F-3
obinuit prin metode speciale/ )tamp, Machiavello, 9iemsa, $astaneda .a.. Kiind obligatoriu parazite, ric7ettsiile se gsesc numai n organismele in ectate. H caracteristic a acestor bacterii este transmiterea lor la om prin intermediul insectelor hemato age (purice, pduche, cpu%, care constituie vectori activi i rezervor natural . .ic7ettsiile se cultiv, la el ca virusurile, pe ou embrionate de gin i pe culturi celulare. Ersta optim a embrionilor este de >!1 zile iar calea de inoculare cea mai e icient este cea intravitelin, deoarece provoac moartea embrionilor n F!? zile. $ontrolul multiplicrii ric7ettsiilor se ace n rotiuri din sacii vitelini, n care se observ un numr mare de germeni.
2.3.E.2. C7(":!d!!(e
$hlamidiile sunt bacterii parazite obligatoriu intracelular, deoarece sunt incapabile s produc compui macroergici de tip 8&2 pentru stocarea energiei. 2rin urmare, asemntor ric7ettsiilor, chlamidiile sunt parazii de energie. (Marnea 9., *1+3< .ducnescu =. i col., *1+>< .puntean 9h., .puntean )., *111< Mzreanu $., *111%. E(e "(c2u!esc ordinul ,+lamidiales, c")e c%nA!ne % s!n3u) @":!(!e 5 ,+lamidiaceae, cu d%u s&ec!!/ ,+lamidia trac+omatis i ,+lamidia psittaci. Mor ologic, se prezint sub orm cocoid i dimensiuni de -,F 5 *,J _m.
F-?
$hlamidiile au un ciclu vital speci ic, caracterizat prin alternana a dou stadii/ unul in ecios i altul reproductiv ( ig. 3-%.
*iclul de multiplicare la *.lamidia psittaci - dup 1oulder, ;HDB, cit. de Jarnea <., ;HF3)
F!3.3.
$iclul este iniiat de orme extracelulare in ecioase numite corpi elementari, care, ,,in vitro, au o via latent. 8cetia au orma unor s erule electronoopace de -,F 5 -,J _m, cu un perete celular rigid i un nucleoid compact, ne uncional. n celulele! gazd, n care ptrund prin endocitoz, corpii elementari su er un proces de activare, nsoit de trecerea nucleoidului, din orma compact ntr!o reea ibrilar lax, accesibil enzimelor de transcriere i replicare. $a urmare a activrii, corpii elementari se
F-J
divid, dnd natere ormelor vegetative metabolic active numite corpi reticula!i, lipsite de in eciozitate. $orpii reticulai cresc n dimensiuni (-,+ 5 *,J _m%, peretele celular devenind subire i ragil, apoi se multiplic prin diviziuni binare repetate, prin ragmentare sau nmugurire, rezultnd mai muli corpi mici, care, prin maturare se trans orm n noi corpi elementari. 8cetia se elibereaz din celula parazitat consecutiv lizei pereilor celulari, ast el nct, dup aproximativ 3- de ore de la debutul in eciei, ciclul se repet. 2atogenitatea chlamidiilor se mani est printr!o serie de boli cauzate omului i animalelor/ ,+lamidia trac+omatis produce di erite in ecii la om (trahom, con"unctivite, uretrite% iar ,+lamidia psittaci cauzeaz psitacoza i ornitoze la om i psri, pneumonii (ovine, bovine, porcine%, poliartrite (viel, porc%, enterite, in ecii genitale, etc.
2.3.E.3. M!c%&("s:e(e
0escrise iniial sub denumirea de germeni 22;H (,,pleuropneumonia li7e organisms( [ organisme asemntoare cu agentul pleuropneumoniei bovideelor%, micoplasmele sunt bacterii lipsite de perete celular. 0atorit acestei caracteristici, unic n lumea bacteriilor, ele au ost incluse ntr!un ilum distinct 5 (enericutes, cu o clas ! 1ollicutes i un ordin 5 12coplasmatales. 0enumirea de ,,1ollicutes( este inspirat de proprietatea esenial a nveliului acestor germeni, care, din cauza absenei peretelui celular, este moale i elastic (lat. mollis [ moale< cutis [ piele%.
F->
<icopla "ele "ani!e t o pla ticitate "or!olo$ic deo e&it 2poli"or!i "), n en ul c, n cadrul aceleea(i pecii !or"a celulelor poate varia "ult* celule cocoide, &acilare, !ila"entoa e 2!i$+ 37)+ 1aptul c !or"a !ila"entoa ) caracteri tic "ice'ilor = e te !recvent nt#lnit la ace te &acterii, a u$erat denu"irea ordinului n care ele au !o t ncadrate+ Kig. 3* ,icoplasma pneumoniae (dup (ortora i col., ;HFH, citat de
1zreanu ,.,;HHH%
8ceast varietate nu mpiedic ns di erenierea speciilor, deoarece, cultivate n condiii de mediu bine controlate, iecare specie se prezint cu o mor ologie caracteristic ( ig. 3F%. $elulele micoplasmelor sunt oarte mici, variind ntre -,* 5 -,FJ _m. n uncie de specie, sunt imobile sau se deplaseaz prin alunecare (glisare%, rotaie, lexiune, sau cu a"utorul unui cil (=")ne" G. 1*+3%. Cltrastructura lor este oarte simpl, iind alctuite numai din structurile eseniale pentru cretere i multiplicare/ membrana citoplasmatic, ribozomi i o molecul de 803 dublu catenar. )tructura, dimensiunile reduse i lipsa peretelui celular con er micoplasmelor urmtoarele proprieti/ sensibilitate osmotic, rezisten la antibioticele care acioneaz asupra peretelui celular, capacitatea de a traversa iltrele impenetrabile pentru bacteriile cu perete celular. Multiplicarea pare s mbrace mai multe modaliti/ diviziune, nmugurire, ragmentarea ilamentelor.
F-,
2e mediile arti iciale, micoplasmele se dezvolt dac se adaug n compoziia acestora steroli i ali actori de cretere. $oloniile sunt oarte mici (sub * mm diametru%, vizibile doar cu lupa binocular i au aspectul de,, ou ochiuri(. Dn condiii naturale, micoplasmele sunt recvent parazite, enomen acilitat de natura chimic a membranei citoplasmatice (similar membranelor gazdei%, care ace ca celulele bacteriene s nu ie recunoscute de agocite ca ,,nonsel (.Cnele micoplasme s!au dovedit patogene, iind considerate agenii etiologici ai unor entiti clinice bine conturate (pleuropneumonia contagioas " 9%;!ne(%)
Kig.
Dou specii de micoplasme? A. ,icoplasma genitalium- B. 'piroplasma sp. >(!n!" O . 1 V:? R dup ,zreanu *.6 5===.
3F
agalaxia contagioas a oilor i caprelor, boala cronic respiratorie la gini, etc.% i a unor in ecii cu diverse localizri/ mamite, poliartrite, con"unctivite, septicemii, etc. 2ractic, sunt a ectate toate speciile de animale domestice i slbatice, psrile i animalele marine.
F-+
2.3.E.E. F%):e(e L8.

Kormele ,,;( ale bacteriilor au ost descoperite de 4lieneberger 3obel n *13J la @nstitutului ;ister (;ondra%, de unde i denumirea de orme ,,;(. )tudiind o tulpin de %treptobacillus monili ormis izolat din pulmonul unor oareci de laborator, cercettoarea a constatat coexistena n culturi a dou orme mor ologice distincte/ orme bacilare caracteristice speciei i orme granulare mici pe care le numete orme ,,;( i le consider iniial germeni provenii dintr!o contaminare exogen. Clterior ns, asemenea orme au ost descrise i la alte specii aparinnd genurilor %almonella, &roteus, )sc+eric+ia, %treptococcus, %tap+2lococcus, %+igella, .acillus, ,lostridium, 7eisseria, etc., dovedindu!se c ele reprezint variante mor ologice lipsite de perete celular. 8ceast concluzie s!a bazat pe observaia c ambele orme, att cele bacilare ct i cele granulare, au proprieti biochimice i serologice identice (=")ne" G. 1*+3- G)ec!"nu A(. 1*+,%. Kormele ,,;( pot s apar spontan sau prin inducie cu substane care distrug peretele celular sau inhib sinteza acestuia, cum sunt lizozimul i penicilina. n geneza lor au mai ost incriminai di erii ali actori ne avorabili, ca/ radiaiile, anticorpii speci ici, bacterio agii, substane cu un anumit grad de nocivitate (glicina, cromul hexavalent, etc.%. 2e lng particularitile mor ologice, lipsa peretelui celular con er ormelor ,,;( i alte caractere distinctive a de specia de origine i anume / ! au o sensibilitate crescut la variaiile de presiune osmotic< ! nu se coloreaz prin metoda 9ram, ci cu soluie 9iemsa< ! sunt rezistente la antibioticele care acioneaz asupra peretelui celular, n special la penicilin, dar sunt mult
F-1
mai sensibile a de antibioticele care acioneaz la nivelul citoplasmei bacteriene< ! sunt lipsite de antigenii ,,=(, ,,4( i de receptorii pentru bacterio agi< ! coloniile au aceeai mor ologie (mici, cu diametrul de F! 3 mm, slab delimitate, ncrustate n geloz%, indi erent de specia bacterian din care provin< ! cnd deriv din specii patogene, au n general o patogenitate mult mai redus< Kormele ,,;( au o importan de ordin epidemiologic prin rezistena lor a de antibiotice, in eciile n care intervin iind cronice i cu tendin la recdere. 0eoarece micoplasmele au multiple analogii cu ormele ,,;(, iniial acestea au ost considerate ca iind orme ,,;( stabilizate (ireversibile la orma iniial%, aprute spontan n natur ca rezultat al unei mutaii. )tudiile de genetic molecular au in irmat ns aceast ipotez, pe baza lipsei de omologie a 803.
2.3.E.5 S&!)%c7e2e(e
)pirochetele se di ereniaz de restul bacteriilor prin urmtoarele caracteristici/ *. structura intern helicoidal, care le imprim orma spiralat< F. raportul oarte mare dintre lungime (3!J-- _m% i diametrul transversal (*+ nm%, iind att de subiri nct strbat membranele iltrante impermeabile pentru celelalte bacterii< 3. mobilitatea accentuat datorat endo lagelilor. $orpul celulei bacteriene este constituit din urmtoarele elemente ( ig. 33%/ cilindrul protoplasmatic, lagelii periplasmici i teaca extern.
F*-
C!(!nd)u( &)%2%&("s:"2!c (protoplast helical%, nvelit de membrana citoplasmatic i peretele celular, are o organizare intern de tip procariot, identic din punct de vedere structural i biochimic cu a bacteriilor clasice. n "urul cilindrului protoplasmic helical sunt n urate nite structuri ilamentoase numite fibrile periplasmice sau filamente a7iale, al cror numr variaz de la o specie la alta (ntre F i *--% i care sunt asemntoare lagelilor, ca structur, compoziie chimic i uncie.
F!3. 33 'tructura spiroc.etelor a) amplasarea i Gn urarea ilamentelor a5ialeA b) seciune transversal printr6o spiroc+et cu un numr mare de ilamente a5iale 3dup 1zreanu ,., ;HHH).
F**
8nsamblul reprezentat de cilindrul protoplasmatic i ibrilele periplasmice este nvelit de o membran subire, triplustrati icat, numit teac e7tern, echivalent membranei externe a peretelui celular la bacteriile 9ram negative 0atorit prezenei acestei ormaiuni, ibrilele periplasmice, spre deosebire de cilii propriu!zii, sunt structuri endocelulare, localizate n spaiul delimitat de peretele celular i teac. #le sunt ixate cu un capt la un pol al celulei, cellalt rmnnd liber. $apetele libere de la cele dou smocuri de ilamente axiale depesc zona ecuatorial a celulei i se ntreptrund, dnd impresia unui ilament continuu. ;a unele specii, ilamentele depesc extremitile cilindrului protoplasmatic, devenind parial lageli externi. )pirochetele sunt mobile datorit ilamentelor axiale, care imprim corpilor bacterieni trei tipuri de micare/ rotaie n "urul axului longitudinal, lexie i translaie. )pirochetele se ntlnesc n medii oarte variate/ ape curgtoare, lacuri, mri, ape uzate, substane organice n descompunere, corpul animalelor i omului. )unt aerobe, acultativ anaerobe sau anaerobe. 3u sporuleaz i se nmulesc prin diviziunea binar. Cn numr important de specii sunt patogene pentru om i`sau animale. #le ac parte din genurile (reptonema ((. pallidum 5 agentul etiologic al si ilisului%, %erpulina (%. +2od2senteriae 5agentul etiologic al dizenteriei treponemice a porcului%, .orrelia (.. anserina 5 patogen pentru psri% i !eptospira (!. interrogans 5 pluripatogen%.
2.3.E.,. Ac2!n%:!ce2e(e.
8ctinomicetele reprezint un grup de bacterii polimor e, recvent ilamentoase, cu tendin la rami icare, 9ram pozitive ( ig. 3?%. 0atorit prezenei miceliului la ma"oritatea speciilor i a sporilor de diseminare, poziia lor sistematic a ost controversat,
F*F
iind considerate iniial ungi. ncadrarea taxonomic a actinomicetelor n clasa .acteria, ordinul 'ctinom2cetales, amilia 'ctinom2cetaceae, s!a e ectuat pe baza unor caractere, ca/ structura de tip procariot, dimensiunea in erioar ungilor (diametrul transversal al ilamentelor este de aproximativ zece ori mai mic%, compoziia chimic (lipsa celulozei i a chitinei din structura peretelui celular%, activitatea metabolic (prezena unor orme strict anaerobe i cu nutriie de tip chimioautotro %, sensibilitatea la aciunea unor agi de tip bacterian, sensibilitatea la antibioticele antibacteriene i rezistena la cele<or!olo$ic, anti ungice, etc. actino"icetele prezint o "are varietate n !unc'ie de pecie, "aterialul n care e $ e c (i v#r ta culturii+ ctino!"ces bo#is, pre e,e"plu, n culturi are a pectul unui &acil "ic (i !in, pe c#nd n !rotiurile din leziuni e prezint u& !or"a unor !ila"ente lun$i (i u&'iri, uneori ra"i!icate (i cu e,tre"it'ile dilatate+ /e "ediile de cultur, "a-oritatea peciilor !or"eaz colonii co"ple,e alctuite din "icelii "ultinucleate, ra"i!icate+ F!3 3E. $spectul filamentos al actinomicetelor - $ctinomyces israellii) #le se di ereniaz mor ologic i uncional n regiuni cu rol vegetativ i regiuni cu rol reproductiv. Ma"oritatea speciilor de actinomicete produc pigmeni de di erite culori/ galben, portocaliu, rou, violet, albastru, verde,
F*3
cenuiu. Cneori pigmentul di uzeaz n mediu, care, la rndul lui, poate in luena pigmentogeneza prin compoziie. S&%)!! "c2!n%:!ce2e(%), numii i actinospori, au di erite orme/ s erici, ovali, alungii, cilindrici, unii prezentnd i di erite ornamentaii (epi, butoni, peri%. 0up modul de ormare, ei se pot grupa n trei tipuri principale/ sporangiospori, endospori i spori hi ali. 3utriia actinomicetelor este omnivor, permindu!le s se dezvolte pe substraturi dintre cele mai di erite (lipide, para ine, enoli, lignin, taninuri, cauciuc, etc.%. Ma"oritatea speciilor sunt sapro ite n sol, pe resturi vegetale, plante, blegar, n apa i nmolul lacurilor, avnd un rol important n mineralizarea rezidurilor organice. 2e medii de cultur arti iciale, aceste bacterii sintetizeaz substane din grupul vitaminelor (B*, BF, B*F, biotin, acid olic, acid pantotenic, acid nicotinic% i di erii compui care dau culturilor un miros caracteristic de pmnt, de cam or sau de ructe. 0intre actinomicete, oarte cunoscut i studiat pentru importana sa n practica medical este genul %treptom2ces. #l cuprinde un mare numr de specii productoare de anlibiotice. 0e alt el, peste J-U dintre actinomicetele izolate din sol produc antibiotice, iar cca. >-U dintre antibioticele cunoscute sunt produse de actinomicete. Cnele actinomicete sunt patogene pentru om, animale i plante (=")ne" G. 1*+3- R&un2e"n G7. C! c%(. 1***%. %treptom2ces scabies produce ria comun la carto i, 'ctinom2ces bovis este considerat agentul etiologic al actinomicozei bovine (o osteomielit supurativ localizat la nivelul maxilarelor%, '. vGscosus i '. +ordeovulneris sunt patogene pentru cini la care provoac abcese cu diverse localizri, '. israelii este patogen n principal pentru om.
F*?
2.3.5. GENETICA BACTERIAN/

9enetica este ramura biologiei care studiaz dou enomene biologice undamentale/ ereditatea i variabilitatea speciilor. 8reditatea este nsuirea biologic general a vieuitoarelor de a conserva proprietile structurale i uncionale ce caracterizeaz specia i de a le transmite nemodi icate din generaie n generaie. Variabilitatea reprezint latura opus stabilitii ereditare, care duce la apariia unor di erene ntre descendeni i genitori, asigurnd evoluia speciilor. 8ezarea geneticii pe bazele ei actuale se spri"in, n principal, pe studiile e ectuate pe bacterii i virusuri, cu toate c aceste microorganisme au intrat relativ trziu n s era de preocupri a geneticienilor. #xperimentul microbiologic cu semni icaie pentru genetica modern, e ectuat n *1F+ de 9 r i i t h i reluat n *1?? de H.&. 8 v e r A i colaboratorii (vezi enomenul de trans ormare%, a demonstrat pentru prima dat rolul acizilor nucleici de purttori ai in ormaiei genetice. 0in momentul acestei descoperiri epocale, geneticienii au realizat c utilizarea bacteriilor ca model experimental n studiile de genetic prezint cteva avanta"e ma"ore i anume/ simplitatea i rapiditatea e ecturii experimentului< numrul imens de indivizi ntr!un volum oarte mic (miliarde ` ml%< durata oarte redus a intervalului dintre dou diviziuni (*J!F- de minute%, care ace ca n F? de ore s se succead ,F de generaii< posibilitatea detectrii rapide a variaiilor<
F*J
accesibilitatea investigrii i manipulrii materialului genetic. 8st el, caracterul rudimentar de organizare a microorganismelor, considerat cndva o piedic n e ectuarea experienelor de genetic, a devenit un argument. $a urmare, genetica microbian s!a dezvoltat rapid i a devenit o tiin de avangard a biologiei, conturnd i undamentnd, de apt, aproape toate cunotinele actuale de genetic molecular. ;egea unitii lumii vii, n diversitatea ormelor ei de mani estare, a dobndit prin cercetrile moderne de genetic microbian i molecular, o baz biologic de interpretare pro und tiini ic i obiectiv.
2.3.5.1. E)ed!2"2e" (" 9"c2e)!! C! :ec"n!s:e(e e! 3.4.>.5.5. *ompozi!ia molecular a materialului genetic
)uportul material al ereditii este acidul dezoxiribonucleic (803% care constituie genomul bacterian. #l este constituit din dou lanuri (catene% polinucleotidice paralele, legate ntre ele prin puni de hidrogen ast el nct ormeaz un dublu helix cu spire regulate. Kiecare nucleotid este ormat dintr!o pentoz (dezoxiriboza%, o baz azotat purinic (adenina, guanina% sau pirimidinic (timina, citozina% i un radical os oric ( ig.3J%.
F*>
F!3.35
Structura i orientarea celor dou catene polinucleotidice ale $1D -dup $a!a% &., %i col., 19'1)
@n structura unui lan polinucleotidic, succesiunea bazelor azotate se poate ace ntr!o in initate de variante, n timp ce legtura dintre polinuclotidele adiacente este n mod constant de tip covalent 3h 5 Jh os odiester. 8ceste legturi se realizeaz ntre o grupare H= din poziia 3h a dezoxiribozei aparinnd unui mononucleotid i gruparea H= situat n poziia Jh a dezoxiribozei din mononucleotidul adiacent, prin intermediul radicalului os oric ( ig. 3>%. $atenele dublului helix sunt reunite prin puni de hidrogen care leag gruparea aminat a bazei situat pe un lan cu cea hidroxilic a bazei de pe lanul complementar. mperecherea bazelor este guvernat de ,,legea complementarit!ii bazelor azotate( con orm creia, o purin se leag n mod constant de o pirimidin i invers. )peci icitatea acestui mod de legare are un caracter riguros i const n aptul c adenina se leag ntotdeauna cu timina prin dou
F*,
puni de hidrogen, iar guanina de citozin prin trei puni de hidrogen. .ezult ast el patru tipuri de legturi posibile/ 8 ! &, & ! 8, 9 ! $ i $ ! 9. .aportul 8 + &/ 9 + $ este constant pentru 803!ul unei specii, dar variaz de la o specie la alta, constituind un criteriu taxonomic de baz.
3.4.>.5.3. 2nit!ile func!ionale ale materialului genetic la bacterii

)ecvena bazelor azotate pe traiectul longitudinal al catenei 803 st la baza unitilor uncionale ale materialului genetic. Gen" este secvena de 803 care, transcris ntr!una sau mai multe molecule de 8.3m, este capabil s controleze sinteza unei proteine responsabil pentru un anumit caracter. Kiecare gen are o poziie determinat pe cromozom, numit locus. Cn locus poate i ocupat de o singur gen (de tip nonalelic% sau de gene alternative numite alele, care controleaz exprimri di erite ale aceluiai caracter. n cadrul genei se pot distinge dou uniti in ragenice/ cistronul i poziia.
F*+
F!3.3, 'tructura unor fragmente din macromolecula de $D1 i $"1.
,istronul este o secven uncional din gen la nivelul creia se poate transcrie o molecul de 8.3!m responsabil pentru
F*1
sinteza unei proteine date. @n ma"oritatea cazurilor, o gen este constituit dintr!un singur cistron. &oziia (mutonul, reconul% este cea mai mic secven dintr! un cistron la nivelul creia poate i localizat o mutaie sau un enomen de recombinare genetic. O&e)%nu( este un complex uncional de gene care acioneaz sub controlul aceleeai gene operatoare i reglatoare. C)%:%B%:u(6 care la bacterii se identi ic cu genomul, reprezint totalitatea materialului genetic nuclear (nucleoidul%. $("s:!de(e, constituind n ansamblul lor plasmonul, sunt molecule de 803 extracromozomale, a cror replicare este independent de cromozom.
Gen%:u( 9"c2e)!"n >nuc(e%!du( c)%:%B%:u(?

9enomul bacterian este constituit dintr!o singur molecul de 803 dublu catenar, cu o con iguraie circular, avnd lungimea de **--!*?-- micrometri i diametrul de FJi. Masa molecular a 803!ului nuclear este de ordinul *-1 daltoni, permindu!i stocarea in ormaiei pentru sinteza a J--- 5 >--- molecule proteice di erite. $omparativ cu celula eucariot, cantitatea de material genetic din celula bacterian este de *---!FF--- de ori mai mic. ntruct molecula de 803 depete de mai multe sute de ori lungimea celulei bacteriene, ea este pliat pe baza rsucirii i superrsucirii n "urul propriului ax, alctuind un corp cromatic compact de aproximativ *J-- de ori mai mic dect propria sa dimensiune n stare des urat. @n mod normal, bacteriile a late n aza de repaos (n culturi staionare i vechi% au un singur cromozom, deci sunt uninucleate. @n aza de cretere exponenial a culturilor pe medii optime, celulele bacteriene pot i multinucleate avnd doi sau mai muli cromozomi, ca rezultat al unei lipse de sincronizare ntre ritmul mai accelerat de replicare a 803!ului i ritmul normal de diviziune celular.
FF-
F!3.34 ,ecanismul replicrii moleculei de $D1. %geile negre curbate

indic direciile de rotaie ale catenelor 3dup Jarnea <.,;HE0).
8pariia bacteriilor multinucleate se mai poate datora aciunii unor actori care inter ereaz diviziunea celular, cum este spre exemplu penicilina, care blocheaz sinteza componentei muramice
FF*
a peretelui celular. 8cesta nu mai poate participa la ormarea septului transversal de diviziune i ast el apar celulele ilamentoase sau globuloase cu mai muli nuclei. @ndi erent de numrul nucleilor prezeni la un moment dat n celul, bacteriile sunt organisme haploide deoarece nucleii provin dintr!un singur cromozom parental i sunt genetic identici. Multiplicarea cromozomului i transmiterea echivalent a in ormaiei genetice la celulele! iice sunt asigurate prin replicarea semiconservativ a macromoleculei de 803 ( ig. 3,%. $hiar i atunci cnd celula bacterian primete material genetic exogen prin trans er de la o alt celul, diploidia nu este dect parial i tranzitorie. $u a"utorul mi"loacelor moderne de cercetare s!au putut identi ica genele componente i locusul iecreia pe cromozomul bacterian, a"ungndu!se pe aceast cale la alctuirea de hri genetice detaliate ale unor specii bacteriene. )sc+eric+ia coli 5 specia de re erin n cercetrile de genetic ! este bacteria cu cele mai multe gene cartogra iate ( ig.3+%. $romozomul bacterian poart in ormaia genetic esenial pentru existena bacteriei, in ormaie codi icat de genele care controleaz metabolismul energetic i de biosintez, creterea, diviziunea i reglarea di eritelor activiti celulare.
$("s:!de(e >$("s:%nu(?
2lasmidele sunt molecule mici de 830 dublu catenar extracromozomial, cu o con iguraie circular. #le reprezint sub aspect cantitativ, aproximativ *U din masa genomului
2lasmidele pot i clasi icate pe baza mai multor criterii.
a% n uncie de capacitatea lor de integrare n cromozom, se mpart n dou categorii/ ! &("s:!de propriu!zise, care au ntotdeauna o existen autonom i sunt neintegrabile n cromozom, i
FFF
e&!B%:!, care pot avea o existen autonom, de az plasmidic, dar care se pot integra temporar n cromozom. @ntegrarea se realizeaz prin deschiderea ambelor ormaiuni circulare 5 plasmid i cromozom 5 urmat de reunirea lor prin extremiti ntr!un singur dublu helix inelar.
F!3.3+ ?arta cromozomului la 8.coli.

Distanele sunt msurate Gn minute necesare trans erului prin con8ugare. %unt menionate c-teva locusuri din cele c-teva sute cunoscute? locusuri ale genelor de sintez a treoninei 3t+r),leucinei 3leu), etc.,de utilizare a unor za+aruri ca lactoza 3lac), galactoza 3gal), de rezisten cromozomal la streptomicin 3str), acid nalidi5ic 3nal). Gn interior sunt marcate c-teva din punctele de integrare a actorului =, d-nd natere la diverse tulpini 0 rA orientarea sgeii arat ordinea Gn care sunt trans erate genele cromozomale Gn con8ugare 3dup $vano '.i col., ;HF:).
FF3
b% 2e baza posibilitii de a se trans era de la o celul bacterian la alta prin procesul de con"ugare, plasmidele se mpart n/ 5 &("s:!de nec%nWu3"2!;e sau criptice, incapabile de a se trans era prin con"ugare, i 5 &("s:!de c%nWu3"2!;e (con"ugoni% care au capacitatea de a trece de la o celul bacterian la alta prin con"ugare. 2lasmidele, ca i cromozomul bacterian, sunt ataate de membrana citoplasmatic prin intermediul mezozomilor i sunt dotate cu proprieti autoreplicante. @n stare autonom replicarea lor este independent i necorelat cu replicarea genomului, iar n stare integrat se replic simultan cu acesta. 2rezena plasmidelor nu este esenial pentru de inirea genotipului i nici pentru supravieuirea bacteriilor n condiii normale de mediu, deoarece ele nu codi ic des urarea activitilor vitale ale celulei. 2lasmidele poart o in ormaie genetic accesorie, ,,de con ort(, care permite bacteriilor o mai bun adaptare la condiiile de mediu noi sau modi icate, motiv pentru care mai sunt numite minicromozomi, material genetic auxiliar sau suplimentar. 2rin urmare, plasmidele pot lipsi, sunt transmise de la o celul bacterian la alta, sau pot i pierdute, r ca celula de origine s su ere. 2rincipalele tipuri de plasmide sunt/ plasmidele K (de ertilitate%, plasmidele . (de rezisten a de antibiotice%, plasmidele ,,col((de colicinogenez sau bacteriocinogenez%, plasmidele ,,ent(de enterotoxicitate% i genomul agic integrat. Plasmidele F. @denti icarea plasmidelor K, numite i actori de ertilitate sau de sex, este strns corelat cu descoperirea de ctre ; e d e r b e r g i & a t u m (*1?>% a enomenului de con"ugare.
FF?
2rezena plasmidelor K ntr!o celul bacterian i con er capacitatea de donor de material genetic, deoarece ele codi ic sinteza pilului sexual sau con"ugativ, prin lumenul cruia are loc trans erul. 2lasmidele K sunt plasmide mari (F- x *- > daltoni%, trec cu uurin din aza plasmidic n aza epizomal i invers i sunt con"ugative. n a ar de trans erul lor propriu, plasmidele K sunt capabile s ,,mobilizeze( n vederea trans erului i alte categorii de material genetic, cum ar i unele plasmide care n starea lor obinuit sunt necon"ungative i ragmente de cromozom. n uncie de prezena sau absena plasmidelor K n celul, de aza plasmidic sau epizomal n care acestea se a l, celulele bacteriene se mpart n/ # ! F ! lipsite de plasmide K, echivalente unor celule emele, care sunt receptoare de material genetic< Q ! F ! cu actorul K n aza plasmidic, echivalente unor celule mascule donatoare de material genetic prin transmiterea actorului K < ! H@) (0ig+ re>uenc2 o recombination [ cu mare recven de recombinare% 5 cu plasmide K n aza epizomal, considerate supermascule avnd n vedere posibilitatea lor de a trans era un numr variabil de gene cromozomale, uneori o replic a cromozomului n ntregime < ! FX 5 celul mascul purttoare de actor K n aza plasmidic, n urma reversiei lui din aza epizomal. n acest caz, actorul K conine secvene din materialul genetic cromozomal pe care le va trans era celulelor receptoare. =arta genetic a plasmidelor K este constituit din aproximativ *F gene, posibilitatea de trans er prin con"ugare iind controlat de genele ,,tra(, care codi ic sinteza pilul sexual prezent la bacteriile KW.
FFJ
2lasmidele K i exprim cu o recven relativ redus capacitatea de trans er, datorit controlului de tip represiv cruia le sunt supuse genele ,,tra(. 0erepresarea acestora i iniierea con"ugrii este de regul rezultatul unei mutaii plasmidice. Bacteriile KW sunt, de cele mai multe ori, incapabile de a primi material genetic de la ali donori ! proprietate numit Iexcluzia intrrii(. Plasmidele " (de rezisten% sunt implicate n determinismul genetic al rezistenei extracromozomale la antibiotice. Cnele sunt con"ungative, iar altele necon"ungative. 2lasmidele . con"ungative se transmit cu uurin de la o celul bacterian la alta, enomen cunoscut sub denumirea de ,,.! in ecie(. #le sunt mai mari dect cele necon"ugative, avnd o mas molecular de aproximativ F- 5 +- x *-> daltoni, iar genle care le compun sunt grupate n 3 ansambluri uncionale/ 9enele care condi ic capacitatea autoreplicant (replicatorul%< genele care determin rezistena a de antibiotice (determinanii r %. genele care controleaz posibilitatea de trans er, constituind actorul .&K (,,rezistance trans er actor(%, absent la plasmidele . necon"ugative. 8ceast secven de gene se poate desprinde de plasmida ., devenind independent i comportndu!se asemntor cu o plasmid K.
3umrul determinanilor r poate varia de la * pn la un numr care asigur rezistena la toate antibioticele utilizate n terapie la un moment dat.
2rin urmare, antibiorezistena indus bacteriilor de prezena actorului . este de tip ,, multi steep I, deosebindu!se de rezistena cromozomal la antibiotice (consecutiv unei mutaii%, care este de tip ,,one6 steep(( a de un singur antibiotic%. @n mod obinuit, plasmidele de rezisten conin pn la > determinani r , pentru
FF>
notarea crora se utilizeaz prescurtrile uzuale pentru antibiotice, urmate de litera ,,r(. 2rima hart genetic a unei plasmide . ( ig. 31% a ost ntocmit n anul *1>3 de ctre cercettorul de origine "aponez D a t a n a b e, cel care a demonstrat c rezistena multipl a de antibiotice este in ecioas, n sensul c ea se poate transmite de la o celul bacterian la alta.
F!3.3* ?arta genetic a unui factor "6

cuprinz-nd determinanii genetici ai rezistenei la antibiotice i actorul de trans er al rezistenei 3*(=) M dup Katanabe cit. de Jarnea <., ;HE0.
&rans erul actorului . se realizeaz prin con"ugare ( ig. ?-% sau, n cazul plasmidelor necon"ugative, prin transducie mediat de agii cu dimensiuni mari. &rans erul prin con"ugare se realizeaz
FF,
ns n egal msur de la donatori K W i K5 , necesitnd sinteza unei substane cu rol n ormarea punilor de con"ugare. )tructura mor ologic a acestor puni este asemntoare cu cea a sexpililor de con"ugare.
FF+
F!3.E. Transmiterea rezisten!ei infec!ioase la antibiotice

implicnd trans erul actorului . prin con"ugare (dup Marnea 9.,*1,-%. FF1
F3-
B8$&#.@H;H9@# 9#3#.8;8
)pre deosebire de antibiorezistena dobndit prin mutaie, care nu apare dect dup prima diviziune celular, exprimarea enotipic a antibiorezistenei prin actor . are loc imediat dup trans er/ instalarea rezistenei la sul amide necesit doar F minute, la cloram enicol ? minute, la tetracicline J minute i la streptomicin ** minute. 0e asemenea, rezistena in ecioas la antibiotice se propag n populaia bacterian cu o recven ridicat, care contrasteaz vizibil cu recvena "oas a instalrii rezistenei prin mutaie (o celul dintr!o populaie bacterian de *-, 5 *-+ celule%. 2lasmidele . se integreaz rareori n cromozom, ns ntre ele au loc deseori enomene de reasortare care se realizeaz prin inseria sau desprinderea de elemente genetice mobile. ntre di eritele plasmide . pot exista relaii de incompatibilitate, exprimate prin imposibilitatea coexistenei lor n celulele aceleeai specii bacteriene. 8ceast constatare a dus la clasi icarea plasmidelor n grupe de incompatibilitate (peste *J grupe la #. coli, > grupe la &seudomonas, etc.%. 2lasmidele . au ost evideniate la ma"oritatea membrilor amiliei )nterobacteriaceae, la bacteriile din genurile &seudomonas, %tap+2lococcus, %treptococcus, ,lostridium, .a. &rans erul actorului . se realizeaz ntre tulpinile bacteriene din aceeai specie dar i ntre speciile nrudite taxonomic, oriunde exist o lor bacterian mixt/ n intestin, de exemplu, dar i na ara organismului, n produsele patologice recoltate de la animalul bolnav. 8cest aspect prezint importan epidemiologic avnd n vedere posibilitatea de trans er a actorului . de la bacteriile purttoare nepatogene, care constituie microbiota normal a organismului, la bacteriile patogene invadatoare, nrudite taxonomic. 0e exemplu, tulpini de ).coli i de &roteus spp. pot transmite actorul ., bacteriilor din genurile %almonella i %+igella, care devin ast el rezistente la acelai spectru de antibiotice (Duc" Eu3en!" C! c%(. 1*4*- G)ec!"nu A(. 1*4,%.
*?-
B8$&#.@H;H9@# 9#3#.8;8
na ar de .!in ecie, deci ctig de rezisten la antibiotice, s!a constatat c plasmidele . se pot pierde cu uurin, avnd un grad slab de ixitate n celula bacterian. #le pot i eliminate spontan sau sub aciunea unor actori izici (raze ultraviolete, pstrarea timp ndelungat n anumite condiii de temperatur% i chimici (di erite substane colorante, detergeni, etc.%. 8spectele privind ctigarea i pierderea actorului . impun o anumit conduit n practicarea antibiogramei. 2entru ca testul s evidenieze situaia real a sensibilitii a de antibiotice a tulpinilor bacteriene testate, este obligatorie nsmnarea produsului patologic n prima or sau imediat dup recoltare i e ectuarea antibiogramei pe cultur primar, ori de cte ori este posibil (densitate su icient a bacteriei in ectante, produs necontaminat sau slab contaminat%. .ezistena a de antibiotice determinat de plasmidele . se realizeaz prin cel puin patru mecanisme (=")ne" G. 1*+E%/ *. blocarea transportului antibioticului n celul de ctre proteinele!purttor prin modi icarea stucturii acestora< F. alterarea intei asupra creia acioneaz antibioticul, reprezentat de ribozomi sau 8.3!polimeraza, prin nlocuirea unor aminoacizi din structura proteinelor constitutive< 3. utilizarea unei ci alternative (paralele% celei perturbate de antibiotic< ?. producerea unor enzime care inactiveaz antibioticele. .e eritor la ultimul mecanism de aciune, 8 n d e r s o n i 0 a t t a (cit. de G)ec!"nu A(. 1*+,% au demonstrat n *1>, c rezistena la penicilin determinat de actorul . se datoreaz producerii unei enzime hidrolitice 5 penicilinaza 5 care trans orm penicilina n acid penicilinoic, derivat inactiv. Clterior, au ost identi icate i alte enzime capabile s inactiveze antibioticele i a cror sintez este controlat de plasmidele .. )pre exempli icare, menionm streptomicin! adeniltrans eraza i cloram enicol!acetiltrans eraza, enzime care prin
*?-
B8$&#.@H;H9@# 9#3#.8;8
adenilarea i respectiv acetilarea antibioticelor respective, mpiedic legarea lor de ribozomi. $("s:!de(e C%( (de colicinogenez sau bacteriocinogenez% sunt determinanii genetici ai colicinelor sau bacteriocinelor. 8cestea sunt substane antibiotice active a de tulpini bacteriene din aceeai specie sau aparinnd unor specii strns nrudite taxonomic. $elulele bacteriene care conin actor ,,col( sunt imune a de colicina omolog. $a i celelalte plasmide, plasmidele ,, col( pot i con"ungative i necon"ungative. 2lasmidele ,,col( con"ungative sunt mai mari, cu masa molecular de ?- ! +- x *-+ daltoni i sunt compuse din *--!F-gene. 2lasmidele ,,col( necon"ungative sunt mai mici, avnd masa molecular de numai ?,F 5 + x *- > daltoni. 8ctivitatea lor autoreplicant este mai intens, n celul gsindu!se totdeauna un numr mai mare de copii, comparativ cu cel al plasmidelor ,, col( con"ugative. 9rupele de gene comune ambelor tipuri de plasmide sunt/ genele care codi ic autoreplicarea< gena determinant a sintezei bacteriocinei< gena responsabil pentru sinteza proteinei de imunitate. 2lasmidele ,,col( con"ungative posed n plus genele ,, tra(, responsabile de trans er. Gen%:u( @"3!c !n2e3)"2. Eirusurile pot exista n natur sub trei orme/ virion (virus matur sau complet%, virus vegetativ i virus integrat sau provirus. Korma de virus integrat sau provirus se caracterizeaz prin integrarea reversibil a genomului viral n genomul celulei gazd, unde se comport ca un ragment de material genetic propriu celulei, replicndu!se i transmindu!se celulelor iice n timpul diviziunilor celulare.
*?-
B8$&#.@H;H9@# 9#3#.8;8
8cest enomen a ost semnalat prima dat virusurile bacterio age (virusuri care paraziteaz bacteriile% de ctre B o r d e t i $ i u c n *1F* (cit. de Rducnescu H. C! c%(. 1*+,%. 9enomul agic integrat n cromozomul bacterian (pro agul% are toate nsuirile unei plasmide n aza ei epizomal. @ntegrarea pro agului n genomul bacterian poart numele de lizogenie, iar populaiile bacteriene la care s!a produs acest enomen sunt numite lizogene. &ulpinile bacteriene lizogene sunt imune a de in ecia cu acelai bacterio ag. n *1?1, . o u n t r e e (cit. de Rducnescu H. C! c%(. 1*+,% dovedete ns posibilitatea polilizogeniei, adic a integrrii mai multor agi di erii n genomul aceleeai celule bacteriene. &ermenul ,,lizogenie( a ost inspirat din caracteristica populaiilor lizogene, rezistente la liza agic datorit imunitii mai sus menionate, dar generatoare de liz agic n contact cu o populaie lizosensibil, care nu conine agul integrat. 2osibilitatea populaiilor lizogene de a provoca liza populaiilor sensibile se datoreaz aptului c, la o tulpin lizogen genomul agic nu se integreaz n *--U din celulele populaiei respective. ntr!un numr oarte redus de celule, virusul este multiplicat, iar virionii eliberai prin liz sunt insesizabili n populaia lizogen. n contact cu populaia lizosensibil, ei genereaz ns liza evident a acesteia. Kenomenul de integrare a bacterio agilor a ost studiat n detaliu de ; e d e r b e r g n *1J*, pe modelul agului j la )sc+eric+ia coli. 9enomul agic este constituit din aproximativ 3J gene, din care > particip la stabilirea i meninerea lizogeniei prin inserarea genomului agic n cromozomul bacterian. )tabilizarea sistemului ag integrat 5 bacterie este asigurat de o protein represor care reprim transcrierea in ormaiei genelor agice responsabile de replicarea, biosinteza i mor ogeneza noilor virioni. )ingurele gene virale care rmn n uncie sunt cele care controleaz biosinteza genomului agic integrat.
*?-
B8$&#.@H;H9@# 9#3#.8;8
2oziia genomului agic pe cromozomul bacterian este, n cazul unor agi, ntotdeauna aceeai, n timp ce ali agi se pot integra n mai multe regiuni ale cromozomului. 8cest tip de ciclul evolutiv al virusurilor este numit ciclu reductiv sau lizogenizant, n opoziie cu cel productiv sau litic, n care genomul agic rmne n stare autonom, sau trece n stare autonom desprinzndu!se din cromozom i diri"eaz activitatea celulei gazd n sensul producerii de noi virioni ( ig.?*%. Hdat cu reluarea ciclului productiv, unii agi pot ancora ragmente din cromozomul bacterian sau din plasmide, trans ernd genele ast el preluate, la bacteriile pe care le vor in ecta ntr!o etap urmtoare, prin enomenul de transducie. 2rezena unui genom agic n cromozomul bacterian poate determina nsuiri di erite celulelor populaiei lizogene, n uncie de suplimentul de in ormie genetic coninut n bacterio agul integrat. 0obndirea unor proprieti noi de ctre o populaie lizogen, consecutiv integrrii bacterio agului, se numete conversie fagic sau lizogen. 0eterminanii genetici ai acestor proprieti sunt asociai constant cu genomul agic, ceea ce deosebete conversia6 de transduc!ia fagic. 8st el de proprieti bacteriene sunt toxinogeneza la ,or2nebacterium dip+teriae, producerea eritrotoxinei la streptococii de grup 8, schimbarea structurii antigenice la %almonella t2p+i, creterea ratei de sporogenez la .acillus ant+racis, sinteza de bacteriocine, etc.( Marnea 9., *1+>%
3.4.>.5.4. Transcrierea i traducerea informa!iei genetice

@n ormaia din genomul bacterian este transpus n activitatea vital a celulei prin mecanismele de transcriere i traducere, al cror suport material l constituie acizii ribonucleici. Ac!B!! )!9%nuc(e!c! au o compoziie chimic asemntoare cu cea a acidului dezoxiribonucleic, de care se deosebesc prin urmtoarele particulariti/
*?-
B8$&#.@H;H9@# 9#3#.8;8
*?-
B8$&#.@H;H9@# 9#3#.8;8
F!3.E1 "aporturile dintre genomul fagilor tempera!i i cromozomul bacterian n cazul bacteriilor lizogene/
dup in ecie, genomul agic poate s rm-n autonom Gn citoplasm, unde se replic i iniiaz o in ecie litic, sau este integrat ca pro ag Gn cromozomul bacteriei, care ast el devine lizogen 3dup Katson, cit. de Jarnea <., ;HE0)
*?-
B8$&#.@H;H9@# 9#3#.8;8
*?-
!"C#E$%OLO&%E &ENE$"L"
pentoza este reprezentat de riboz, n locul dezoxiribozei< uracilul (C% substituie timina (&%< con iguraia molecular a secvenei nucleotidelor este monocatenar. 2e baza unciei pe care o ndeplinesc, acizii ribonucleici se mpart n trei categorii/ acizi ribonucleici mesageri (8.3m%, solubili sau de transport (8.3s% i ribozomali (8.3r%. Ac!B!! )!9%nuc(e!c! :es"3e)! >ARN:? au o con iguraie molecular linear i aceeai secven de baze ca 830!ul de pe care sunt transcrii, cu deosebirea c n locul timinei conin uracil. @n ormaia genetic este determinat de succesiunea bazelor azotate pe lanul de 803, transcris pe 8.3m, iar combinaiile de cte trei baze de pe traseul lanului de 8.3m, sunt responsabile de poziia aminoacizilor n structura polipeptidelor. )ecvena a trei baze care codi ic sinteza unui aminoacid poart denumirea de triplet sau codon. n a ar de codonii purttori de in ormaie genetic, exist i triplete care nu codi ic aminoacizi (triplete non sens%, ci intervin n mecanismele de stopare a sintezei lanurilor peptidice. n toate sistemele vii, acelai aminoacid este codi icat de acelai codon ! corelaie care poart numele de cod genetic. $aracterul universal i legic al codului genetic st la baza unitii i diversitii lumii vii. Ac!B!! )!9%nuc(e!c! s%(u9!(! s"u de 2)"ns&%)2 >ARNs s"u ARN2? sunt constituii dintr!un lan pliat n aa el nct molecula are aspectul unui tri oi cu patru oi ( ig. ?F%. ;a extremitatea a dou din cele ? ramuri ale moleculei se gsesc sedii de cuplare cu un nalt grad de speci icitate i anume/ anticodonul (nodocul%, reprezentat de bazele azotate complementare celor din codonii care se succed de!a lungul lanului de 8.3m (de exemplu, unui codon
*?*
8$95 adenin!citozin!guanin i va corespunde un anticodon C9$! uracil 5 guanin!citozin %< zona de acceptare pentru aminoacid, reprezentat de o grupare chimic complementar acestuia, ast el nct iecrui aminoacid i corespunde un 8.3s speci ic. Ac!B!! )!9%nuc(e!c! )!9%B%:"(! >ARN)%, intr n structura ribozomilor.
F!3. E2 *onfigura!ia moleculei de $"1 solubil -dup *ducnescu 0.,

i col.,;HFD).
*?F
R!9%B%:!! (granulele lui 2alade% sunt ormaiuni corpusculare diseminate n citoplasm, la nivelul crora are loc traducerea in ormaiei genetice, concretizat n sinteza proteinelor prin ansamblarea aminoacizilor n lanuri polipeptidice. n celula bacterian se gsesc n medie F---- 5 3---- de ribozomi de tip ,- ). 0in punct de vedere al structurii chimice, ribozomii sunt ribonucleoproteine, grupate n dou subuniti di erite ca orm i mrime ( ig. ?3%/ o subunitate mic, asemntoare cu o pereche de haltere asimetrice i o subunitate mare, avnd orma aproximativ a unui otoliu. $ele dou subuniti se unesc i se disociaz reversibil. n timpul sintezei proteinelor, ele sunt cuplate n aa el nct gtul halterei se spri"in de sptarul otoliului, delimitnd un canal prin care se deplaseaz 8.3m.
F!3. E3 "eprezentarea sc.ematic a structurii ribozomilor

*?3
.ibozomii prezint dou sedii sau situsuri de cuplare/ unul destinat atarii aminoacidului nou transportat de 8.3s (situsul 8! acceptor sau aminoacid%, situat pe subunitatea mai mic i altul pe care este translocat i meninut 8.3s sosit anterior, pn n momentul ormrii legturii dintre cei doi aminoacizi (situsul 2 5 peptidic sau donor%, n vederea ormrii lanului peptidic. T)"nsc)!e)e" const n sinteza 8.3m, avnd ca matri o secven de pe un lan al moleculei de 803 (un cistron%, sub aciunea unei transcriptaze/ 8.3m polimeraza 803 dependent. @niierea sintezei 8.3m se declaneaz ntr!o regiune a 803 numit promotor. ;a bacterii, promotorii au, de regul, aceeai secven de baze. 8st el, la distana de *- nucleotide naintea situsului de iniiere a 8.3m se gsete suita de baze C 8 C 8 8 & 9, cunoscut ca secven! Pribno@. )inteza 8.3m durez pn n momentul interveniei mecanismelor de stop, reprezentate de semnale de transmitere, constituite din secvene poli 8 i de unele proteine speci ice, cum este cazul actorului ,,r.o( evideniat la )sc+eric+ia coli. T)"duce)e" este un mecanism complex prin care mesa"ul genetic, transmis de la 803 prin 8.3m, este recepionat i citit la nivelul ribozomilor, n vederea constituirii lanurilor peptidice. 8cestea se ormeaz prin secvenializarea aminoacizilor transportai la ribozomi de ctre 8.3s. n traducerea in ormaiei genetice se pot distinge mai multe aze i anume/ *. ataarea 8.3m de ribozomi la nivelul situsului 8, n cursul deplasrii acestuia prin canalul delimitat de cele dou subuniti constituiente ale ribozomilor<
*??
F. iniierea lanului peptidic pe baza semnalului reprezentat de un codon de iniiere (8C9 sau 9C9%, care recunoate un anumit tip de 8.3s ce transport metionina ormilat< complexul 8.3s!aminoacid este ataat la situsul 8 al ribozomului, iind apoi translocat pe situsul 2. Hdat cu aceast translocare, situsul 8 este eliberat, 8.3m deplasndu!se i atand de ribozom, codonul urmtor. 3. creterea lanului peptidic prin ataarea de aminoacizi printr!un mecanism similar celui de iniiere< ?. ncheierea sintezei lanului peptidic prin aciunea unui mecanism de stop, declanat de sosirea la nivelul ribozomului a unuia dintre codonii non sens (C88. C89 i C98%. 8ceast colinearitate 830 8.3m proteine, n trans erul i materializarea in ormaiei genetice, este un exemplu concludent de aplicare n biologie a ,,teoriei informa!iei(.
2.3.5.1.E. Au2%)e3(")e" &)%cese(%) de 9!%s!n2eB

$elula bacterian dispune de mecanisme e iciente de autoreglare permanent a proceselor de biosintez, care!i permit s uncioneze ca un veritabil sistem biocibernetic, pe principiul maximei e iciene i economii. 8ceste mecanisme sunt/ *. !nducA!" enB!:"2!c care reprezint introducerea n uncie a unor dispozitive de producie celular< F. )e&)es!" enB!:"2!c care reprezint procesul invers, de scoatere din uncie a acestor dispozitive< 3. !n7!9!A!" "c2!;!2A!! enB!:e(%), care const n modi icarea nivelului de activitate a unor dispozitive, r a merge pn la scoaterea lor din uncie.
*?J
2rimele dou categorii de mecanisme au ost explicate pe baza unui model general de reglare genetic a sintezei proteinelor conceput de K. 6 a c o b i 6. M o n o d (*1>*%, cunoscut sub denumirea de Ateoria operonului;. C%n2)%(u( 3ene2!c &)!n %&e)%n "( !nducA!e! C! )e&)es!e! s!n2eBe! enB!:e(%). )peronul inductibil. &eoria lui 6 a c o b i M o n o d a ost elaborat pe baza studiului reglrii genetice a sintezei enzimelor prin care )sc+eric+ia coli descompune lactoza. 0e aceea autorii au desemnat acest operon cu simbolul Ilac(. Ma"oritatea tulpinilor acestei specii (tulpini lacW% au proprietatea de a olosi lactoza ca unic surs de carbon i energie. 0izaharidul este introdus n celul prin transport activ, cu participarea beta!galactozid!permeazei, apoi este scindat n glucoz i galactoz sub aciunea beta!galactozidazei i a tiogalactozid! transacetilazei. 3umrul moleculelor de beta!galactozidaz ntr!o celul de )sc+eric+ia coli este oarte redus n cazul cnd mediul nu conine lactoz i a"unge pn la aproximativ 3--- n prezena substratului. $ontrolul genetic al sintezei celor trei enzime se realizeaz prin gene cu poziii limitro e pe cromozom. )tudiul relaiei dintre concentraia substratului din mediu i nivelul sintezei enzimelor menionate au permis lui 6 a c o b i M o n o d ormularea Iteoriei operonului(, pe care ei l de inesc ca pe o secven de gene structurale care se gsesc sub controlul acelorai gene operatoare i reglatoare. (enele structurale dein in ormaia genetic privind structura enzimelor care catalizeaz reaciile metabolismului
*?>
bacterian. n cazul operonului ,,lac( ele au ost notate cu simbolurile z, A i a. (ena operatoare -operonul) este segmentul cromozomic adiacent genelor structurale, care uncioneaz ca receptor speci ic de semnale induse din citoplasm. 2e baza acestor semnale, gena operatoare iniiaz sau ntrerupe transcrierea in ormaiei genetice de pe genele structurale pe 8.3m. 9ena operatoare poate adopta a de genele structurale, dou poziii alternative/ a. deschis (poziie de start%, declannd transcrierea in ormaiei genetice i sinteza enzimelor sau b. nchis (poziie de stop%, blocnd transcrierea in ormaiei genetice i procesul de biosintez. Promotorul este un segment al moleculei de 830 cu poziie intermediar ntre genele structurale i gena operatoare, care declaneaz transcrierea. (ena reglatoare, numit i gen de represor este o unitate genetic de control care ndeplinete uncii multiple i anume/ acioneaz ca transmitor de semnale< determin viteza de transcriere a in ormaiei genetice pe 8.3m i prin aceasta, rata sintezei enzimei< codi ic sinteza represorului. 8ciunea operonului este declanat sau oprit de semnale chimice, reprezentate de inductor, de regul prezent n mediu i de represor sintetizat de celul. .olul de inductor l are substratul a de care celula sintetizeaz enzima sau secvena de enzime capabile s!l descompun (lactoza constituie inductorul pentru beta!galactozid! permeaz, beta!galactozidaz i tiogalactozid 5 transacetilaz%. .epresorul este un constituent citoplasmatic polipeptidic sau proteic a crui sintez este codi icat de gena reglatoare, care!i determin totodat structura i speci icitatea de aciune. $ompoziia chimic i masa molecular a represorilor variaz n uncie de inductor i de enzima n a crei sintez intervin. #i sunt sintetizai n cantiti oarte mici, o singur molecul iind su icient pentru
*?,
reglarea sintezei a *-- --- molecule proteice. .epresorul acioneaz ca un semnal chimic asupra operatorului, determinndu!l s blocheze transcrierea genelor structurale pe 8.3m. .epresorul este sintetizat permanent n celul i se poate gsi, sub aspectul uncionalitii sale, n dou ipostaze/ aporepresor inactiv, care rezult din combinarea represorului cu inductorul pe baza unor structuri alosterice complementare< represor activ sau uncional, care se cupleaz cu gena operatoare, n vecintatea primei gene structurale (n cazul operonului lac, limitro genei z%, blocnd ast el transcrierea< 0eci, reglarea sintezei enzimelor implicate n reaciile catabolice este asigurat de operonii inductibili, prin inducie i represie. Induc!ia este determinat de prezena inductorului (substratul speci ic enzimei% i const n urmtoarele enomene/ inductorul se combin cu represorul, inactivndu!l prin trans ormarea n aporepresor< gena operatoare rmne nereprimat i intr n poziie deschis, de start, declannd transcrierea in ormaiei genetice de pe genele structurale pe 8.3m< 8.3m se ataeaz de ribozomi, unde in ormaia genetic este decodi icat i se exprim enotipic prin sinteza enzimei sau grupului de enzime codi icate de operon. "epresia este mecanismul declanat de absena inductorului, cnd represorul, rmas liber sub orma activ, se cupleaz cu gena operatoare blocnd ast el sinteza enzimelor codi icate de genele structurale.
*?+
O&e)%nu( )e&)es!9!( )pre deosebire de operonii inductibili, care controleaz descompunerea di eritelor substane pentru a le ace accesibile metabolismului bacterian, operonii represibili sunt ma"oritatea celor care codi ic sinteza substanelor necesare celulei bacteriene. Modelul operonului represibil se bazeaz pe studiile lui L a n o s 7 A (*1,>% i ) o o l (*1,,% privind controlul genetic al sintezei tripto anului (operonul Itrp(%. 2rezena tripto anului n mediul de cultur al unei tulpini de )sc+eric+ia coli ,,trp(W inhib selectiv ormarea tripto an!sintetazei, enzim care particip la biosinteza acestui aminoacid. 2rodusul terminal al cii de biosintez a tipto anului reprezint, prin urmare, un semnal pentru celul, care, printr!un enomen de eedbac7 negativ, adic de represie prin produs final, oprete sinteza enzimei devenit inutil. 2rincipala deosebire n reglarea uncionrii celor dou tipuri de operoni, const n aptul c gena reglatoare a operonului inductibil codi ic sinteza represorului n orma lui activ, acesta trans ormndu!se n aporepresor inactiv n urma cuplrii lui cu inductorul din mediu, n timp ce, n cazul operonilor represibili, gena reglatoare codi ic represorul sub orma lui inactiv. 8ctivarea represorului se ace n prezena substratului speci ic enzimei, care are rol de corepresor. 8st el, tripto anul ndeplinete rolul de corepresor n meninerea n stare inactiv a ansamblului de gene capabile s!i codi ice sinteza. n absena tripto anului, operonul ,,trp( este depresat datorit revenirii represorului n starea lui inactiv, din cauza lipsei corepresorului. H orm particular de represie, caracteristic metabolismului glucidic, este represia prin catabolit. n acest caz, rolul de corepresor este ndeplinit de un catabolit. 8cesta va activa represorul, care, la rndul su, va bloca sinteza enzimei ce urmeaz s catalizeze urmtoarea treapt a ilierei anabolice.
*?1
In7!9!A!" "c2!;!2A!! enB!:e(%)

@nhibiia activitii enzimelor, numit i in.ibi!ie prin produs final, retroin.ibi!ie sau in.ibi!ie prin feedbacB este un mecanism de reglare genetic a activitii enzimelor, de mare promptitudine i inee. #a se aseamn ca e ect cu represia, dar di er de aceasta prin mecanism, oportunitate i vitez. n cazul represiei, este oprit sinteza enzimei prin aciunea represorului, n timp ce, n cazul retroinhibiiei este blocat activitatea enzimelor, nu ns i sinteza lor. 2entru explicarea mecanismului retroinhibiiei, M o n o d, $ h a n g e u x i @ a c o b (*1>*, *1>3% au elaborat un model bazat pe principiul reaciilor alosterice. $on orm acestuia, proteinele enzimatice au dou sedii reactive cu speci icitate stereochimic, a de dou substane di erite/ un sediu speci ic de combinare cu substratul, care reprezint ,,locul activ(, rspunztor de activitatea biologic a enzimei i un al doilea sediu, cu o con iguraie stereochimic complementar unui metabolit. 8cest sediu reprezint ,,supra aa alosteric(, iar metabolitul care se cupleaz cu enzima este numit ,,e ector alosteric(. #nzima i poate modi ica reversibil activitatea biologic n uncie de sediul i natura substanei cu care se combin. n momentul cnd pe supra aa enzimei se ixeaz e ectorul alosteric, aceasta devine incapabil de a se mai cupla i de a aciona asupra substratului. # ectorul alosteric are deci o aciune inhibitoare asupra enzimei, care devine inactiv biologic. $elula are posibilitatea s selecteze ntre cele dou mecanisme prin eedbac7 (represie sau retroinhibiie%, n uncie de nevoile activitii celulare. .epresia, reprezentnd anularea unei activiti productive (sinteza unei enzime%, este un proces mai lent i mai tardiv, care nu
*J-
poate rspunde unei nevoi imediate a celulei. .etroinhibiia ns, blocheaz extrem de rapid o cale metabolic, iind ast el mult mai e icient n satis acerea unor nevoi imediate de reglare a metabolismului bacterian. Kigura numrul ?? red modelul general de control al biosintezei proteinelor la bacterii, dup Monod, $hangeux i 6acob (cit. de =")ne" G. 1*4.%, ilustrnd mecanismele de aciune ale induciei, represiei prin produs inal, represiei prin catabolit i retroinhibiiei. 0escoperirea mecanismelor de reglare genetic a metabolismului bacterian a o erit explicaia extraordinarei capaciti a acestor organisme de a se adapta la medii noi i de a utiliza cu o e icien maxim, resurse nutritive dintre cele mai di erite. 9raie acestor mecanisme, celula bacterian nu risipete niciodat nutrienii sau energia n sinteze inutile, ci produce ntotdeauna metabolii intermediari i enzime n cantiti echilibrate.
*J*
F!3.EE. ,odelul general de control al biosintezei proteinelor la bacterii

3dup 1onod,,+angeau5 i Iacob).
2.3.5.2. '")!"9!(!2"2e" (" 9"c2e)!! C! :ec"n!s:e(e e!

\n cursul multiplicrii microorganismelor, la el ca la celelalte grupe de vieuitoare apar enomene de variaie. \ntruct n bacteriologie nu se poate opera curent cu celula bacterian ca individ, variaiile enotipice se urmresc pe tulpini bacteriene, care sunt populaii relativ omogene din punct de vedere genetic, innd seama de aptul c se obin prin operaiunea de clonare (transplantarea unei colonii izolate%. )pre deosebire de plante i animale, la microorganisme variabilitatea este mult mai accentuat, datorit simplitii tipului de organizare i activitate biologic, precum i a succesiunii rapide a
*JF
generaiilor. n uncie de mecanismul de producere i de caracteristicile lor, variaiile bacteriene pot i grupate n dou categorii/ enotipice i genotipice (tabel J%. T"9e(u( 5 *aracterele distinctive ntre varia!iile fenotipice i genotipice '")!"A!! *aracterul c o n s i d e r a t Fenotipice (enotipice
)e realizeaz 8ciunea mediului prin )tarea 3u comport modi icri genomului
Mutaii i recombinri genetice $omport modi icri struc tural e ai varia ntelo r
.olul actorilor @nductori al variaiei prin de mediu actualizarea unei )electivi posibiliti genetice
*J3
2roporia &oate sau ma"oritatea celulelor a ectate dintr!o populaie bacterian &ransmiterea variaiei la 7u descendeni
Foarte mic
(*/*-+ ! *-1 % 0a< descendenii ormeaz o clon variant
3.4.>.3.5. Varia!iile fenotipice

9enotipul reprezint complexul de gene care determin realizarea unui anumit enotip (caracter, nsuire%. #xprimarea aceluiai genotip prin mai multe enotipuri este posibil datorit genelor alele. Eariaiile enotipice (negenetice sau iziologice% sunt dependente de actorii de mediu, a de care constituie enomene de adaptare. Kactorii de mediu determinani ai acestor variaii, care acioneaz ca inductori sau corepresori, pot i di erite substane din mediul de cultur, temperatura de cultivare, etc. Eariaiile enotipice a ecteaz o ntreag populaie bacterian simultan, sunt instabile (n sensul c dispar odat cu actorul inductor% i nu se transmit ereditar, deoarece nu implic nici o modi icare n structura genomului. Eariabilitatea enotipic poate interesa toate caracterele celulei bacteriene/ mor ologice, culturale, biochimice, antigenice, etc. .edm n continuare cteva exemple ilustrative. 1.'")!"A!! "(e c"&su(%3eneBe!.
*J?
)peciile capsulate .acillus ant+racis i Diplococcus pneumoniae i sintetizeaz capsula numai n organismul animalului in ectat sau pe mediile de cultur care conin lichide organice (ser, snge J!*-U%. 2e mediile simple, n absena substanelor necesare capsulogenezei, ele ormeaz culturi de variante acapsulogene. 2ierderea capsulogenezei poate deveni i un caracter ereditar. Cn exemplu n acest sens l constituie tulpinile de .acillus ant+racis acapsulogene obinute prin cultivarea pe snge de ibrinat de cal (tulpina **1- . ! )tamatin, *13>% sau pe ser de cal, n atmos er de bioxid de carbon (tulpina 3? KF 5 )terne, *13,%. 8mbele tulpini i!au pierdut de initiv capacitatea de a se ncapsula n organismul animal, caracterul de acapsulogenez devenind genotipic. 0eoarece capsula con er bacteriilor protecie anti agocitar, prin pierderea ei bacteriile i pierd implicit virulena i capacitatea de a determina procese septicemice. 2.'")!"A!! "(e "&")"2u(u! c!(!"). )peciile ciliate pot deveni imobile n prezena unor actori de mediu care au e ect inhibitor asupra cilogenezei. 8st el, sinteza cililor la speciile !isteria monocitogenes i Lersinia enterocolitica are loc la F- 5 FJ- $, iind inhibat la 3,- $. n mod asemntor, o serie de substane ca insulina, acidul boric, sul atiazolul, tripa lavina, serurile anti!,,=(, dac sunt incluse ntr!un mediu de cultur solid pot anula enomenul de roire la bacteriile din genul &roteus. 3.'")!"A!! &)!;!nd s&%)%3eneB". $ultivarea speciilor sporogene pe medii cu antiseptice sau pe medii bogate n ioni de calciu poate induce apariia de variante asporogene. 8celai e ect represor asupra genelor responsabile de sporogenez l exercit anumite valori termice. ;a .acillus ant+racis, de exemplu, sporogeneza are loc numai n intervalul *F5 ?F,J- $. Earianta asporogen se deosebete de tulpina original
*JJ
sporogen prin caractere culturale noi i printr!o virulen mai redus (G)ec!"nu A(. 1*4,%. E.'")!"A!! &)!;!nd c")"c2e)e(e cu(2u)"(e. 8spectul coloniilor este caracteristic iecrei specii i variaz n raport cu mediul (msura n care sunt asigurate sursele nutritive pentru sinteza di eritelor structuri% i cu starea genetic a bacteriei . n general, tipul de colonie ,,)( este considerat ca iind normal pentru ma"oritatea speciilor bacteriene. #xcepiile sunt .. ant+racis, antracoizii i 1. tuberculosis care, pe medii adecvate exigenelor lor nutritive, ormeaz colonii de tip ,,.( . )!a constatat ns c prin nvechirea culturilor, coloniile de tip ,,)(, la unele specii, au tendina de a se trans orma treptat n colonii de tip ,,.(, enomen cunoscut sub denumirea de disocia!ie 66'; 66"; sau rofizare. n producerea acestei variaii, rolul inductor este atribuit acumulrii de catabolii i epuizrii substanelor necesare pentru sinteza unor structuri de nveli (capsul, perete%. 0eoarece genomul bacteriei nu su er modi icri, trans ormarea este reversibil n urma transplantrii pe medii proaspete, cu o compoziie adecvat exigenelor nutritive ale speciei. .o izarea este nsoit de o serie de modi icri de ordin cultural, iziologic i de patogenitate, pe care le redm n tabelul >. T"9e(u( , C")"c2e)e(e d!s2!nc2!;e "(e @%):e(%) S8 C! R8 (" 9"c2e)!!
C")"c2e)u( c%ns!de)"2 F%):" S8 F%):" R8
*J>
Mor ologia celulei $ultura solide $ultura lichide $apsula )tabilitatea n soluie -,+U 3a$l )tabilitatea n soluie */J-- de tripa lavin 2atogenitatea @n ecia indus pe n medii medii
n limitele speciei $olonii netede, lucioase, cu margini regulate &urbiditate uni orm 2rezent )tabil )tabil 2rezent 8cut
Korme ilamentoase $olonii mate, rugoase, cu margini neregulate )ediment loconos 8bsent 8glutineaz 8glutineaz 8tenuat sau absent $ronic
5.'")!"A!! "(e DnsuC!)!(%) de &"2%3en!2"2e. 2atogenitatea unei bacterii poate su eri variaii n sensul atenurii sau, dimpotriv, n sensul exaltrii ei. .educerea patogenitii bacteriilor se realizeaz prin mi"loace izice, chimice i biologice, n scopul obinerii de tulpini vaccinale. 0intre mi"loacele izice, n mod curent se utilizeaz temperaturile disgenetice, superioare con ortului termic al speciei supuse atenurii. Kactorii chimici atenuani sunt reprezentai de diverse substane care, introduse n mediul de cultur, rneaz dezvoltarea normal a germenilor. 8pelnd la cel de!al doilea mi"loc, $ a l m e t t e i 9 u ^ r i n au obinut atenuarea unei tulpini de 12cobacterium bovis (tulpina ,,;ait 3ocard(% n urma a *1+ de treceri pe carto glicerinat cu bil de bou, pe parcursul a ** ani (*1-+ 5 *1*1%. Eaccinul B.$.9. este utilizat i astzi pe scar larg n medicina uman pentru vaccinarea antituberculoas a copiilor.
*J,
Mi"loacele biologice de atenuare constau n inocularea n serie a unei tulpini bacteriene pe o specie animal care, n mod natural, este rezistent la in ecia respectiv. $onsecutiv acestor pasagii repetate, se obine o reducere a patogenitii a de specia sau speciile natural sensibile. #xaltarea patogenitii bacteriilor se realizeaz prin trecerea repetat a unei bacterii pe o gazd n mod natural sensibil (de la animalul bolnav la ce sntos, n cursul in eciilor naturale%. ,. '")!"A!! "(e c")"c2e)e(%) 9!%c7!:!ce. Eariaiile enotipice ale caracterelor biochimice constau n sinteza enzimelor adaptative indus de substrat, care exercit o aciune de derepresare a genelor respective. ;a ). coli, de exemplu, sinteza beta!galactozidazei i a celorlalte enzime codi icate de operonul ,,lac( este condiionat de prezena lactozei n mediul de cultur. 9ama caracterelor care sunt supuse variaiilor enotipice este extrem de larg i numrul exemplelor de elul celor prezentate mai sus este nelimitat pentru lumea bacterian.
3.4.>.3.3. Varia!iile genotipice

$ercetrile de genetic a microorganismelor au demonstrat aptul c stabilitatea materialului genetic nu este absolut, el iind susceptibil, ntr!o anumit msur, s su ere diverse modi icri structurale. 9enotipul modi icat este stabil, transmisibil ereditar i se exprim printr!un enotip di erit de cel normal (corespunztor genotipului slbatic%. Mecanismele de producere a variaiilor genotipice sunt mutaiile i recombinrile genetice.
*J+
,uta!iile sunt consecina unor modi icri n structura genomului, care se produc att n aza stabil a 803!ului ct i n cursul autoreplicrii acestuia, r aport de material genetic strin. "ecombinrile genetice sunt rezultatul unui proces de trans er unidirecional de material genetic, de la o celul donatoare la una acceptoare, care dobndete caractere noi n uncie de in ormaia genetic cuprins n materialul primit.
Mu2"A!!(e
Mutaiile reprezint modi icri ale numrului sau secvenei bazelor azotate din structura moleculei de 803. #le survin brusc i se exprim enotipic prin apariia n snul unei populaii omogene, a unei ,,mutante(, adic a unui individ capabil de a transmite descendenilor caractere noi, prin care se deosebete de populaia omogen n care a aprut. Cna din teoriile cele mai pertinente asupra mecanismelor moleculare ale mutaiilor este teoria 66copierii greite; a in ormaiei genetice de pe catena complementar n cursul autoreplicrii semiconservative a 803 5 ului (D a t s o n i $ r i c 7, *1J3%. 8ceste erori de transcriere pot consta n/ substituia unei baze azotate cu alta< deleia sau suprimarea unei baze sau a unui bloc de baze< inseria sau adiia unei baze sau a unui bloc de baze suplimentare< inversarea succesiunii bazelor, care n cursul copierii i schimb poziia. $lasi icarea mutaiilor se poate e ectua dup mai multe criterii. 5. Dup modul de apari!ie, mutaiile se mpart n induse i spontane.
*J1
1utaiile induse sunt consecina aciunii diri"ate, n scop experimental, a unor actori de mediu numii ageni mutageni deoarece sunt capabili s determine modi icri n structura 803. (Rducnescu H. C! c%(. 1*+,- =")ne" G. 1*+,%. 8genii mutageni mai recvent utilizai sunt actori izici (radiaiile ultraviolete, radiaiile ionizante,% i chimici (J! bromuracilul, F!aminopurina, acidul nitros, coloranii de acridin, hidroxilamina, nitrozoguanidina, etc.%, care acioneaz asupra 803 n di erite moduri. Cnii ageni mutageni, cum sunt analogii bazelor azotate, induc erori de replicare a 803 prin substituirea bazelor normale (ex. J!bromuracilul se substituie timinei, determinnd ncorporarea n catena complementar a guaninei n locul adeninei, rezultatul iind nlocuirea perechii de baze originare 8!& cu 9!$%, alii acioneaz asupra precursorilor necesari sintezei 803, iar alii asupra unor sisteme enzimatice corelate cu sinteza 803. Mutaiile induse sunt utilizate n practic n scopul obinerii unor tulpini bacteriene cu nsuiri dorite, utile n diverse domenii de activitate. 8st el, exist preocupri privind obinerea de mutante bune imunogene (necesare preparrii vaccinurilor i serurilor%, mutante capabile s determine caliti gustative deosebite unor produse alimentare, mutante bune productoare de antibiotice sau vitamine, mutante auxotro e utilizate n experienele de inginerie genetic, etc.
Mutantele (variantele% au(otro)e rezult din &acteriile prototro)e 2tulpini l&atice, izolate din natur), prin pierderea au do&#ndirea capacit'ii de a "eta&oliza di!eri'i co"pu(i c.i"ici+ <utantele au,otro!e au per"i de coperirea reco"&inrii la &acterii+
e
*>-
1utaiile spontane sunt cele care apar n natur datorit unor cauze necunoscute, n condiii de mediu obinuite i r intervenia unui actor decelabil. &otui, plecnd de la datele cunoscute privind mecanismele moleculare ale mutaiilor induse ! date care arat c nici o mutaie nu se produce r o cauz ! M a m e n h o (cit. de =")ne" G. 1*+,% interpreteaz caracterul ,,spontan( al mutaiilor ca rezultnd din aptul c actorii lor determinani reali sunt omniprezeni n natur i necunoscui. 8u ost incriminai ca avnd un rol n producerea mutaiilor ,,spontane(, numeroi actori izici naturali (temperatura, radiaiile CE, radiaiile cosmice, radioactivitatea unor substane, etc.%, dar i unele substane rezultate din metabolismul celular normal. )!a constatat, de exemplu, c unele purine i di erii derivai ai purinelor au e ect mutagen asupra speciei )sc+eric+ia coli, ast el nct i unele mutaii ,,spontane( ar putea i induse n realitate de mutageni endogeni. 3. Dup mrimea segmentului genetic modificat , mutaiile pot i puncti orme i extinse. 1utaiile puncti orme corespund alterrii unui singur nucleotid (cea mai mic unitate structural a materialului genetic% sau a unui singur codon (cea mai mic unitate uncional%. 1utaiile e5tinse sunt cele care a ecteaz o gen alctuit din mai muli codoni (mutaie genic%, sau chiar mai multe gene (mutaie poligenic%. 4. Dup sens, mutaiile se mpart n mutaii nainte i mutaii napoi. 1utaiile ,,Gnainte ( ore]ord mutations% implic o modi icare de la o stare genetic considerat, arbitrar, ca iind ,,normal( (corespunztoare tipului slbatic%, la o stare nou (mutant%, cum ar i, de exemplu, pierderea capacitii de a capsula la o specie capsulogen sau obinerea unei mutante
*>*
auxotro e, capabil s metabolizeze o substan inaccesibil speciei bacteriene respective. 1utaiile ,,Gnapoi sau regresive, retromutaiile (,,bac7( sau ,,reverse mutations(% a ecteaz o celul mutant, determinnd revenirea acesteia la tipul slbatic, iniial, al speciei. 2e baza acelorai exemple date la mutaiile ,,nainte(, mutaiile ,,napoi( vor consta n redobndirea capacitii de a capsula i respectiv pierderea proprietii de a metaboliza substana accesibil metabolic numai mutantei auxotro e. :.Dup posibilitatea e7primrii fenotipice se pot deosebi 3 eluri de mutaii. a% 1utaii imperceptibile, cnd modi icarea structurii din genom nu se exprim enotipic. b% 1utaii perceptibile, care se exprim apariia sau pierderea unor nsuiri sesizabile. enotipic prin
c% 1utaii letale, n care alterarea mesa"ului genetic este incompatibil cu viaa, iar consecutiv producerii mutaiei, bacteria moare. >. n func!ie de caracterul fenotipic afectat, mutaiile pot i/ a% mor ologice, cilogeneza, sporogeneza, etc.< care privesc capsulogeneza,
b% metabolice sau bioc+imice, care constau n dobndirea sau pierderea capacitii de sintez a unei enzime i implicit, obinerea mutantelor auxotro e< c% antigenice, care se exprim de cele mai multe ori prin modi icarea tipului antigenic< d% de patogenitate, generatoare de mutante apatogene, cu patogenitate atenuat sau exacerbat<
*>F
e% de rezistena la agenii inhibitori izici, chimici sau biologici, cum este cazul mutantelor antibiorezistente. @ndi erent de tip, mutaiile la bacterii au urmtoarele caracteristici comune/ spontaneitatea, discontinuitatea, raritatea, stabilitatea i speci icitatea. 'pontaneitatea. Modi icrile produse de actorii mutageni apar ntr!un moment imprevizibil, iar aptul c intereseaz o anumit gen este un enomen ntmpltor. Mutaia are deci un caracter spontan, enomenul mutaional iind distribuit aleator n timp i spaiu genetic. $aracterul spontan mai rezid i n aptul c mutaia se produce n lipsa actorului de mediu a de care celula bacterian cu genom modi icat mani est un comportament mutant. ; u r i a i 0 e l b r : 7 (cit.de Rducnescu H. C! c%(. 1*+,% au ost primii care au demonstrat n *1?3 c mutantele streptomicinorezistente de ).coli apar n absena antibioticului. 2unerea n eviden a mutantelor este posibil ns numai pe agar cu streptomicin, care permite dezvoltarea mutantelor, inhibnd restul celulelor bacteriene sensibile. 0eci, mediul cu antibiotic nu induce mutaia, ci o relev. Discontinuitatea se re er la aptul c, o mutant poate s apar brusc sau trecnd prin etape succesive.
*>3
"aritatea. 2robabilitatea ca o bacterie s su ere o mutaie ntr!o unitate de init de timp, de obicei egal cu timpul unei generaii, este oarte mic. n ma"oritatea cazurilor, ea se situeaz n "urul valorii de * dintr!o populaie de *-J!*-1 celule bacteriene. 'tabilitatea. )pre deosebire de variaiile negenetice, proprietile noi obinute prin mutaie persist n absena agentului care a servit la selecie i se transmit ereditar. 'pecificitatea. Kiecare caracter poate su eri o mutaie, independent de celelalte caractere. .ezistena la penicilin, de exemplu, este independent de rezistena la sterptomicin. 2robabilitatea ca o bacterie s devin, prin mutaie, rezistent la ambele antibiotice este egal cu produsul probabilitilor individuale ale celor dou mutaii.
Rec%:9!n)!(e 3ene2!ce
.ecombinrile genetice constau n trans erul de material genetic cromozomal sau plasmidic de la o celul donatoare la o celul receptoare, urmat de recombinarea acestuia cu genomul endogenot. #le au un grad de asemnare cu procesele sexuale, de care se deosebesc prin urmtoarele particulariti/ absena unei veritabile uziuni a celor dou celule i genomuri< caracterul unidirecional al trans erului. contribuia inegal a celor dou celule implicate. $elula acceptoare de 803 devine temporar i parial diploid, deoarece conine pe lng materialul genetic propriu (endogenotul% i materialul genetic strin (exogenotul% primit de la donor. #a dobndete ast el caracterul unui merozigot. )tarea
*>?
normal, haploid, a celulei receptoare se restabilete prin integrarea exogenotului n materialul genetic propriu. $a urmare a integrrii exogenotului, celula acceptoare dobndete unul sau mai multe caractere noi, care constituie ,,mar7erii( genetici prin care se identi ic recombinrile. )tudiile privind enomenul de recombinare genetic la bacterii au ost e ectuate n condiii de laborator, optime sub raportul densitii tulpinilor bacteriene, al compoziiei mediilor de cultur, al temperaturii, 2h! ului, etc. &endinele de extrapolare a datelor obinute n laborator, la mediile naturale, au oscilat ntre dou extreme/ de la negarea posibilitii producerii lor n mediile naturale, pn la ideea c bacteriile ar i ntr!o stare de lux genetic permanent (prin intermediul plasmidelor transmisibile% datorit creia, n urma nglobrii de 803 strin, ar putea i compromis nsi identitatea speciilor (=")ne" G. 1**E%. .ecombinrile genetice se realizeaz prin 3 categorii de mecanisme/ trans ormarea, transducia i con"ugarea. T)"ns@%):")e" &rans ormarea const n trans erul de material genetic de la o celul donatoare, din care este eliberat prin autoliz sau extracie chimic, ctre o celul receptoare n care ptrunde prin traversarea nveliurilor acesteia. Kenomenul de trans ormare a ost descoperit de 9 r i ith n *1F+ cu ocazia experienelor privind patogenitatea pneumococului ( ig.?J%. @n"ectnd la oareci dou tipuri de pneumococi distinci antigenic, tipul ) @@@ capsulogen i virulent (sub orm de suspensie de germeni omori% i tipul . @@ acapsulogen i
*>J
nevirulent (sub orm de suspensie de germeni vii%, 9 r i ith a izolat de la oarecii mori, pneumococi aparinnd tipului virulent. #l nu a putut s explice atunci, cum a ost posibil trans ormarea pneumococilor neviruleni sub in luena germenilor viruleni omori.
F!3. E5 87perien!a de transformare a pneumococilor efectuat de
(riffit..
3atura agentului trans ormant care opera n experienele lui 9ri i t h a ost cunoscut abia n *1??, cnd 8 v e r A, Mc $artA i Mac ; e o d au artat c ragmente de 803, eliberate prin liza bacteriilor moarte sau prin extracie chimic, ptrund n celulele pneumococul viu nzestrndu!l cu determinanii genetici ai sintezei polizaharidelor capsulare de tip ) @@@.
*>>
n mod similar pot i transmii determinanii genetici ai rezistenei la antibiotice, ai sintezei enzimelor implicate n catabolismul sau anabolismul celular, etc. 0escris iniial la pneumococ (%treptococcus pneumoniae%, trans ormarea genetic a ost pus n eviden ulterior la cel puin nc *, specii aparinnd genurilor/ %treptococcus, 0aemop+ilus, .acillus, 7eisseria, %almonella, &asteurella, etc. 2e lng trans ormarea genetic intraspeci ic, au ost descrise i numeroase cazuri de trans er interspeci ic ( 0aemop+ilus in luenzae 0aemop+ilus parain luenze, .acillus subtilis .acillus niger, &seudomonas luorescens &seudomonas aeruginosa, etc.% i chiar intergeneric ( 7eisseria 1ora5ella, 1icrococcus %tap+2lococcus, etc.%. Kenomenul de trans ormare se realizeaz n mai multe etape i depinde de unele condiii pe care trebuie s le ndeplineasc materialul genetic trans erabil i celula receptoare. 'D7 trans ormant trebuie s ie dublu catenar, s aib con iguraie ciclic i o mas molecular minim de *!J x *- > daltoni. 3umrul celulelor trans ormate crete proporional cu lungimea 803 donator, concentraia acestuia n mediu i durata perioadei de contact cu bacteriile receptoare. 2e de alt parte, trans ormarea este posibil numai dac bacteria receptoare se gsete n aa!numita 66stare de competen!;, care i permite s interacioneze cu un ragment de 803 exogen i s!l nglobeze ireversibil. 8ceast nsuire este determinat genetic, iind dovedit posibilitatea mutagenezei spre competen a unor tulpini bacteriene necompetente, precum i obinerea de mutante necompetente din tulpini competente. )sc+eric+ia coli, de exemplu, nu su er procesul de trans ormare genetic n mod natural, datorit lipsei strii de competen.
*>,
$ompetena este o stare iziologic tranzitorie a celulei bacteriene, care variaz mult n cursul di eritelor aze ale multiplicrii i de la o specie bacterian la alta. ;a %treptococcus pneumoniae, de exemplu, maximum de competen se situeaz la mi"locul azei de multiplicare exponenil, iar la .acillus subtilis, la s ritul ei. )e pare c agentul inductor al strii de competen este o ,,protein activator( sintetizat de celula receptoare. #a iniiaz o serie de alterri ale peretelui bacterian prin intermediul enzimei murein!hidrolaza, demascnd receptorii pentru 803 din structura membranei citoplasmatice (=")ne" G. 1*+,%. $elulele competente au peretele celular mai poros i o supra a intens electropozitiv, avoriznd legarea ragmentelor de 803, ncrcate electronegativ. &otodat, la nivelul mezozomilor se produc modi icri care sugereaz posibilitatea implicrii acestora n transportul 803! ului trans ormant. 2roporia celulelor competente dintr!o populaie bacterian variaz de la *-!F-U la .acillus subtilis, la *--U n cazul unor specii din genul 0aemop+ilus. 2rocesul de trans ormare se realizeaz n mai multe etape, dup cum urmeaz/ ixarea ragmentului de 803 exogen pe celula receptoare la nivelul receptorilor speci ici < nglobarea 803!ului trans ormant n celul, sub orm monocatenar, cu a"utorul unei endonucleaze localizate n membrana celular, care hidrolizeaz una din catene n timp ce ,,mpinge( cealalt caten prin membran< legarea reversibil a catenei 803!ului strin de o secven complementar a 803!ului endogen, prin interaciuni ionice<
*>+
!"C#E$%OLO&%E &ENE$"L" integrarea ireversibil a catenei 803!ului trans ormant n structura
803!ului receptor, prin substituirea unui segment de caten pe baza omologiei nucleotidelor la situsul de legare. replicarea materialului genetic integrat odat cu replicarea ntregii molecule de 803 endogen, a crei parte component a devenit i transmiterea ereditar a in ormaiei genetice dobndite. $aracterele noi ale celulelor trans ormate reprezint ,,mar7eri(, adic nsuiri pe baza crora celulele care au su erit trans ormarea pot i izolate de restul populaiei bacteriene cu a"utorul mediilor selective. 0ei trans ormarea este un proces descoperit n laborator, numeroase observaii pledeaz pentru existena sa n natur, unde acioneaz ca un mecanism prin care unele specii ,,motenesc( de la bacteriile moarte determinanii genetici ai unor caractere, care le con er o capacitate mai mare de adaptare la condiiile de mediu. T)"nsducA!" @"3!c &ransducia este procesul prin care un ragment de cromozom bacterian este trans erat de la o celul bacterian la alta prin intermediul capsidei anumitor agi temperai. Kenomenul a ost descoperit de M i n d e r i ; e d e r b e r g (*1JF% care, studiind enomenul de recombinare genetic pe dou tulpini auxotro e di erite de %almonella t2p+imurium, au realizat c se pot obine celule prototro e n absena contactului direct ntre celulele mutantelor auxotro e, trans erul de gene iind mediat de un bacterio ag temperat (2FF %.
*>1
&ransducia presupune, aadar, trei parteneri (celula donatoare, agul transductor i celula receptoare% i urmtoarele etape ( ig. ?>% / *. in ectarea tulpinii bacteriene donatoare cu virusul bacterio ag< F. evoluia in eciei agice n celulele donatoare sub orma ciclului litic (productiv% sau a ciclului lizogenizant (reductiv%, cnd agul preia un ragment de 803 din genomul celulei gazd, devenind ast el ag transductor< 3. eliberarea agului transductor din celule donatoare prin liza acesteia< ?. in ectarea tulpinii bacteriene receptoare cu virusul transductor< J. ncorporarea ragmentului de 803 preluat de ag din celula donatoare, n genomul celulei receptoare, enomen care poate i asociat cu lizogenizarea acesteia. \n uncie de ciclul evolutiv al bacterio agului transductor i de materialul genetic trans erat prin ag, transducia poate i mprit n dou tipuri distincte/ transducie generalizat i specializat
*,-
F!3.E, "eprezentarea sc.ematic a unei e7perien!e de transduc!ie - dup Jarnea <., ;HE0).
*>,
Trasduc!ia generalizat presupune transducerea oricrei gene cromozomale, indi erent de poziia ei n cromozom. #a se realizat n ma"oritatea cazurilor atunci cnd in ecia agic evolueaz sub orma ciclului litic, care presupune replicarea 803!ului viral i traducerea in ormaiei genetice virale, concretizat n sinteza proteinelor care intr n structura capsidei. Kagii de transducie generalizat se ormeaz printr!o greeal de ansamblare, cnd unele capside agice ncorporeaz 803 bacterian n loc de 803 agic, sau 803 bacterian i o cantitate mic de 803 agic. Mrimea ragmentului cromozomal ncorporat este proporional cu cea a genomului agic normal, ast el nct ei nu se deosebesc ca dimensiuni, orm, caracteristici de adsorbie i proprieti antigenice, de agii normali, alturi de care se ormeaz (=")ne" G. 1*+,%. Kagii de transducie generalizat sunt ntotdeauna de ectivi, n sensul c nu se replic i nu lizeaz celula gazd, deoarece sunt lipsii de genele virale eseniale. 0up in ecia unei celule bacteriene cu un ag de transducie generalizat, genele bacteriene introduse n celula receptoare se recombin cu 803 cromozomal din celula respectiv prin nlocuirea unor determinani genetici ai receptorului cu cei provenii de la donator. Transduc!ia specializat6 cunoscut i sub denumirea de transducie restrictiv sau localizat, presupune proveniena agului transductor dintr!o bacterie lizogen. #a are loc n momentul reversiei agului din orma epizomal de pro ag n cea de virus vegetativ, iar ragmentele de 803 transduse sunt ntotdeauna cele din vecintatea situsului unde a ost integrat genomul agic. Hdat cu excizia genomului viral din cel bacterian, de genomul viral vor rmne ataate secvenele nucleotidice adiacente acestuia, care vor i vehiculate de ag la populaia
*>1
acceptoare. 8st el, s!a stabilit c agul (lambda%, care in ecteaz celulele de )sc+eric+ia coli, se integreaz ntr!o regiune a cromozomului situat ntre operonii Igal( i Ibio( pe care i transduce n mod obinuit.
*,-
n cazul transduciei specializate, plusul de 803 preluat din genomul bacterian nu nlocuiete nici o secven din genomul agic, de aceea masa genomului agic transductor este mai mare dect a agului normal. ncorporarea materialului genetic transdus n genomul celulei receptoare are un caracter instabil n cazul cnd se integreaz mpreun cu genomul viral i stabil n condiiile neintegrrii genomului viral transductor. Kenomenul de transducie are o inciden sczut< ntr!un iltrat n care se gsesc bacterio agi, numai un virion din *- J!*-+ particule agice se comport ca ag transductor, iar la bacteriile receptoare, care au primit material genetic nou prin transducie, caracterul dobndit (mar7erul% corespunztor materialului genetic primit, se exprim enotipic numai la una din *-J bacterii. C%nWu3")e" $on"ugarea este o modalitate de trans er de material genetic printr!un pil sexual, n urma contactului direct dintre celula donatoare i cea receptoare, opuse ca sexualitate . 0escoperirea enomenului de con"ugare s!a datorat cercetrilor e ectuate de ; e d e r b e r g i & a t u m n *1?>, pe trei tulpini de )sc+eric+ia coli, di erite din punct de vedere al exigenelor nutritive/ % 2u(&!n s(9"2!c (prototro % de ). coli 4*F , capabil s sintetizeze singur ? aminoacizi (biotina, metionina, treonina i leucina% i
*,*
d%u 2u(&!n! "uI%2)%@e, din care una capabil s sintetizeze doar biotina i metionina, iar cealalt, treonina i leucina. 8utorii au cultivat cele trei tulpini pe medii de cultur minimale (uzuale%, care nu conineau cei ? aminoacizi menionai mai sus. &ulpina slbatic s!a dezvoltat bine pe acest mediu, deoarece i!a sintetizat cei ? aminoacizi necesari, n timp ce nici una din mutantele auxotro e n!a crescut, ele ne iind capabile s!i sintetizeze cte F din cei ? aminoacizi necesari. nsmnnd ns pe acelai mediu minimal un amestec din ambele mutante auxotro e, s!au dezvoltat aproximativ F- de colonii. 0eci, mpreun ele au ost capabile s sintetizeze cei ? aminoacizi. $utndu!se explicaia acestui enomen, s!a avut n vedere aptul c, utilizarea unor tulpini dublu mutante, de iciente n ceea ce privete sinteza a cte doi actori de cretere, exclude posibilitatea unei retromutaii spontane la condiia prototro , deoarece probabilitatea acestui enomen este extrem de redus. .mnea ca plauzibil ipoteza unui trans er genetic ntre cele dou tulpini di erite genotipic, nsmnate mpreun pe mediul minimal. $ultivarea lor ntr!un mediu lichid, n cte una din ramurile unui tub n orm de ,,C(, separate printr!un iltru poros, nu a mai avut ca e ect apariia de celule prototro e, ceea ce a con irmat presupunerea c dezvoltarea de colonii prototro e pe mediul solid era rezultatul unui trans er genetic, realizabil numai n condiiile unui contact direct ntre celulele celor dou tulpini. Kaptul c deplasarea repetat, sub presiune, a lichidului de cultur dintr!o parte n alta a iltrului separator, era ine icient pentru reconstituirea prototro iei, excludea intervenia ca agent trans ormant a 803! ului eliberat din celulele lizate i sugera necesitatea unui contact obligatoriu ntre celulele intacte, vii.
*,F
Clterior, studii de microscopie electronic i analiza genetic au con irmat aceast ipotez, dovedind realizarea trans erului de material genetic printr!un proces de con"ugare ntre celulele bacteriene (=")ne" G. 1*+,%. 0e!a lungul anilor, s!a demonstrat c recombinarea genetic prin con"ugare are loc la numeroase alte bacterii 9ram negative, na ar de )sc+eric+ia coli, dar i la unele specii 9ram pozitive (streptococi%. I. C%nWu3")e" (" 9"c2e)!!(e G)": ne3"2!;e $apacitatea acestor bacterii de a trans era material genetic prin con"ugare este determinat de prezena n celul a plasmidelor K, sau a plasmidelor . i $ol con"ugative, care au n structura lor determinanii genetici ce controleaz sinteza pililor sexuali/ genele ,,tra( ( la plasmidele K i $ol % i genele ,,K&.((la plasmidele .%. Mor ochimic i uncional exist o similitudine ntre pilul sexual i coada bacterio agilor cu structur complex. 8nalogia const n structura tubular a ambelor ormaiuni i n uncia pe care o ndeplinesc/ aceea de a servi drept canal pentru in"ectarea de material genetic n celula bacterian. $ele mai con"ugative sunt plasmidele K care, spre deosebire de celelalte dou tipuri, au capacitatea de a se integra reversibil n cromozom i de a trans era gene cromozomale. n uncie de starea autonom sau integrat n care se gsete actorul K n celula donatoare, receptorul iind n toate cazurile o celul K!, exist mai multe tipuri de con"ugare. a) *onCugarea dintre bacteriile FD i F #ste orma cea mai recvent i mai simpl, care presupune prezena actorului K n starea lui plasmidic. 0up sinteza pilului
*,3
sexual i ormarea cuplurilor, celulele K+(mascule% trans er o copie a plasmidei K, celulelor K ( emele% 5 ig. ?,. &rans erul se caracterizeaz printr!o e icien mare, de pn la *--U, ast el nct n populaiile bacteriene n care are loc aceast orm de con"ugare, proporia celulelor KW crete considerabil, n relaie direct cu scderea celulelor K!. n urma con"ugrii, iecare celul K! care primete actorul K, devine KW. Kactorul K poate i distrus prin tratarea celulelor K W cu acridinorange ! substan care inhib selectiv autoreplicarea actorului de sex. n cadrul acestei orme de con"ugare nu se trans er niciodat material genetic cromozomal
*,?
F!3. E4. "eprezentarea sc.ematic a conCugrii ntre bacteriile F D i
F0 -dup Jarnea <., ;HE0).
*,J
b).*onCugarea ntre bacterii ?fr -?ig. freEuency of recombinants) i F0, numit recombinare de nalt recven, presupune integrarea prealabil a actorului K n cromozomul celulei, n regiuni ale acestuia n care exist similitudini de secven a bazelor azotate (trecerea lui n aza epizomal% 5 ig.
?+.
F!3.E+. "eprezentarea sc.ematic a procesului de conCugare la ). coli
ntre o celul ?fr i una F0 / sus M trans erul integral al cromozomului, inclusiv actorul =A 8os M trans erul parial 3un singur mar@er genetic) datorit Gntreruperii procesului.
*,>
2rezena n cromozom a actorului K con er acestuia capacitatea de a i trans erat parial sau total prin con"ugare i este determinant pentru calitatea de = r sau de ,,supermascul( a celulei bacteriene. n stare integrat, actorul K se comport di erit de orma sa plasmidic, n sensul c nceteaz s se mai replice autonom i nu mai este trans erabil dect excepional de rar, deoarece el constituie ntotdeauna ragmentul terminal al cromozomului anga"at n trans er. n plus, replicarea actorului K integrat, sincron cu cea a cromozomului, nu mai poate i inhibat de acridinorange. .ecombinarea urmtoarele aze/ de nalt recven se des oar n
I. deschiderea inelului cromozmic n zona de inserie a actorului K i trecerea lui de la con iguraia ciclic, la cea linear< II. trans erul cromozomului ctre celula K!, ncepnd cu extremitatea opus actorului K< III. ncheierea procesului de con"ugare, care poate avea loc ie ca urmare a trans errii cromozomului n ntregime, ie ca urmare a ntreruperii trans erului pe parcurs. n prima situaie, care presupune trans erul actorului K, procesul dureaz 1- 5 *-- minute, iar celula receptoare devine K+ . n a doua situaie, actorul K rmne n celula donatoare (avnd n vedere poziia sa terminal%, motiv pentru care celula receptoare, dei a primit prin trans er material genetic, rmne K !. 0urata con"ugrii depinde, n cazul trans erului parial, de mrimea segmentului trans erat, innd seama c viteza de con"ugare este de aproximativ *-J perechi de baze pe minut.
*,,
@@@ 2e baza ntreruperii la di erite intervale de timp a trans erului s!a putut stabili succesiunea genelor pe cromozom i au ost alctuite hrile genetice. $on"ugarea de nalt recven nu duce la srcirea materialului cromozomic n celula donatoare, apt care se explic prin replicarea 803!ului cromozomal n timpul con"ugrii, materialul trans erat iind, de apt, o copie. *onCugarea ntre bacterii FF i F ducia% 5 ig. ?1.
c).
(sexducia sau K!
&ulpinile = r au uneori tendina s redevin K + , prin reversia actorului K din starea epizomal n starea plasmidic. n acest caz, actorul K poate conine un numr variabil de gene cromozomale, pe care le!a ncorporat n momentul reversiei din regiunile adiacente locului su de inserie, devenind actor Ka. $onsecutiv trans erului unui actor Ka, celula receptoare K! dobndete calitatea de KW prin primirea actorului de sex, caracterele codi icate de genele cromozomice integrate n structura sa, precum i caliti = r. &rans erul actorului Ka poate i comparat cu transducia, rolul agului transductor iind suplinit n acest caz de actorul Ka, care vehiculeaz genele cromozomice ctre celula receptoare. $on"ugarea iniiat de actorii ,,.( poate duce la trans erul plasmidei n ntregime, numai a componentei .&K (care se poate desprinde de plasmid, devenind independent i comportndu!se asemntor cu o plasmid K%, sau numai a determinanilor r . &rans erul .&K con er celulei receptoare, ca i n cazul trans erului de actor ,,K(, numai proprietatea de ertilitate. n aceast situaie, dac n receptor exist determinani r, se poate re ace o plasmid . speci icnd o alt rezisten.
*,+
&rans erul numai al determinanilor r con er antibiorezisten, dar nu i capacitate de trans er
II.
C%nWu3")e" (" s2)e&2%c%c!
$on"ugarea la streptococi este mediat de unele plasmide (p, 80* % care nu conin n structura lor determinanii genetici ai pilului sexual. .olul acestuia n con"ugare este preluat de un sistem alctuit din .ormoni de se7 ( eromoni%, secretai de celula receptoare, care activeaz n donator o gena plasmidic ce speci ic sinteza unei substane de agregare. ;a coliziunea ntmpltoare a celor dou tipuri
*,1
F!3.E*. Fenomenul de se7duc!ie la bacterii -dup Jarnea <.,;HE0). *+-
de celule, substana de agregare prinde celula mascul de receptorii celulei emele (asemntor ixrii pililor K% i activeaz genele de trans er. &rans erul ar putea avea loc ie printr!o punte intercitoplasmatic, ie traversnd membranele citoplasmatice ale celor dou celule a late n contact, asemntor ptrunderii 830 n procesul de trans ormare (I;"n%@ A.C! c%(. 1*+2%. E2"&e(e &)%cesu(u! de c%nWu3")e , indi erent de specia bacterian i de materialul trans erat, sunt urmtoarele/ a% ormarea cuplurilor specifice donator!receptor, prin aderarea celulelor donatoare la nivelul unor receptorii speci ici de pe supra aa celulei receptoare ! proces condiionat de o anumit densitate de celule bacteriene pe unitatea de volum<
b% trans ormarea cuplurilor specifice n cupluri eficiente prin constituirea unor puni de legtur donator!receptor (pil de sex, punte citoplasmatic%< c% mobilizarea materialului genetic pentru trans er, prin des acerea dublei catene ciclice a 803!ului n dreptul unui situs, care reprezint originea trans erului (,,ori &(%. ;a plasmidele K, ,,ori &( are un sediu distinct de cel n care are loc iniierea replicrii autonome a plasmidei. d% trans erul materialului genetic prin replicarea de tip ,,inel rotativ( a 803 i anga"area uneia din cele dou catene replicate, n canalul punii care leag perechea donator! receptor, n timp ce a doua caten i reconstruiete perechea complementar. .ealizarea trans erului necesit
*+*
un metabolism energetic activ, donatorului, ct i a receptorului.
att
din
partea
Mec"n!s:e(e 3ene2!ce
:%(ecu(")e
"(e
)ec%:9!n)!(%)
&rans erul de material genetic prin mecanismele naturale descrise anterior, are loc numai ntre celulele aceleai specii bacteriene i n unele cazuri, ntre specii apropiate . n celula gazd, materialul genetic strin poate su eri dou eluri de procese/ restricia sau modi icarea. 1. Res2)!cA!" const n degradarea enzimatic a 803 exogenot de ctre endonucleaze ! enzime care se pot ncadra n dou tipuri distincte prin masa molecular, compoziia chimic i condiiile n care acioneaz. )ndonucleazele de tip $ au masa molecular de aproximativ FJ---- daltoni, sunt constituite din mai multe subuniti i acioneaz condiionat de )!adenozil!metionin, 8&2 i ionii de magneziu, care ndeplinesc rolul de co actori. )ndonucleazele de tip $$ au molecula mai mic (*----- daltoni% i mai simpl, necesitnd numai intervenia ionilor de magneziu. 2n n prezent au ost identi icate peste *-- de endonucleaze cu situsuri di erite de recunoatere a secvenelor de nucleotide la nivelul crora cliveaz catenele de 803.
2rin te.nici de in$inerie $enetic a devenit po i&il tran !erul de "aterial $enetic inter$eneric (i c.iar ntre re$nuri di!erite
e
*+F
2. M%d!@!c")e" este un mecanism celular prin care 803 este prote"at de aciunea endonucleazelor de restricie, care se bazeaz pe e ectul inhibitor al reaciilor de metilare a unor baze (adenin sau citozin% asupra activitii de clivare a secvenelor de nucleotide. #xogenotul rmas nealterat datorit modi icrii, se recombin cu genomul endogenot prin una din cele dou modaliti posibile de recombinare/ generalizat i situs speci ic (nelegitim%. "ecombinarea generalizat are loc pe baza omologiei bazelor de la extremitile celor dou segmente recombinate. n ma"oritatea cazurilor, se produce la nivelul anumitor secvene nucleotidice, numite ,,zone ierbini( (hot spots%. ;a )sc+eric+ia coli s!au evideniat pn n prezent > gene la nivelul crora e iciena recombinrii este mai mare. #le sunt desemnate cu simbolul ,,rec(. ;a rndul lor, e iciena genelor rec nu este egal, iind de exemplu mai mare la genele rec 8 dect la genele rec B i $. 2entru mecanismul molecular al ncorporrii ragmentului de 803 strin n genomul gazdei, au ost descrise dou modele/ a% :%de(u( )u&e)e C! )eun!)e ( brea@age6reunion% al lui M e s s e l s o n i D e i g l e, admis astzi ca cel mai probabil, con orm cruia cele dou materiale genetice se unesc la extremitile lor libere n puncte omologe< b% :%de(u( c%&!e)!! "(2e)n"2!;e sau al alegerii modelului (cop2 c+oice%, dup care materialele parentale nu se unesc ntre ele dar, ca orice material genetic, se autoreplic. 2e baza acestui model, 803 nou ormat rezult din copierea alternativ, cnd de pe matria catenei de 803 din celula receptoare, cnd de pe cea a 803 primit prin trans er de la donator. Materialul genetic al recombinatului este ast el integral sintetizat Ide novo(, n structura sa iind ns nscris in ormaia genetic din ambele materiale parentale.
*+3
@ndi erent de model, n genomul recombinat se pot deosebi dou eluri de regiuni/
)e3!un! 7%:%du&(eI situate la extremitile zonei unde s!a produs
recombinarea, care pot proveni de la acelai ragment genomic parental sau de la ragmente parentale di erite i )e3!une" 7e2e)%du&(eI situat n centrul zonei unde a avut loc recombinarea, n care cele dou catene provin din cele dou genomuri parentale di erite. 0up recombinare, n regiunea heteroduplex au loc enomene de separare a 803 n punctele de neomologie, ceea ce poate duce la pierderea unor gene alele i la o segregare asimetric a acestora, enomen numit conversie genic. "ecombinarea situs0specific sau nelegitim este posibil ntre tulpini aparinnd unor taxoni mai ndeprtai. #a se realizeaz prin translocare (transpoziie%, enomen care const n deplasarea unor ragmente de material genetic de la un situs la altul. )ecvenele de 803 translocabil identi icate la bacterii sunt de dou eluri/ secvene de inserie i transpozoni. )ecvenele de inserie sunt mai mici i nu se exprim enotipic, n timp ce transpozonii sunt mai mari i codi ic unele caractere cum sunt/ rezistena la antibiotice, actori de patogenitate, unele proprieti metabolice, etc. 2rocesul de translocare are urmtoarele particulariti/
este unilateral, n sensul c inseria la un situs nu este

dependent de excizia de la un alt situs<
*+?
are un grad de speci icitate mai redus n comparaie cu

recombinarea generalizat, prezena unei secvene speci ice la locurile de inserie ne iind necesar<
poate
determina scoaterea din uncie a unor operoni situai n regiunea n care s!a integrat materialul translocat, care are deseori n structura sa codoni non sens< grade variabile de e icien, n uncie de originea elementelor recombinate< translocrile plasmid!plasmid i cromozom!plasmid sunt mai e iciente dect cele plasmid!cromozom. DE MEDIU
are
2.3.,. INFLUENA FACTORILOR ASU$RA BACTERIILOR
$a i viaa organismelor superioare, viaa microorganismelor este dependent i permanent in luenat de complexul actorilor izici, chimici i biologici, care constituie mediul ambiant. $itoplasma bacteriilor este ormat dintr!un ansamblu heterogen de substane n stare coloidal sau cristaloid, oarte sensibil la aciunea di eriilor ageni externi. n condiii avorabile de mediu, reaciile metabolice implicate n procesele de cretere i multiplicare se des oar normal, n timp ce n urma unor aciuni ne avorabile pentru aceste reacii sau pentru substraturile lor, apar dezechilibre care se pot traduce prin/ moartea bacteriei (e ect bactericid%<
*+J
oprirea reversibil a multiplicrii (e ect bacteriostatic%< trans ormarea n spori, n cazul bacteriilor sporogene< modi icarea bacteriei, ie prin inducerea mutaiilor, ie prin selectarea mutantelor rezistente (vezi cap. <enetic%. 0eterminarea unuia sau altuia dintre aceste e ecte depinde de caracteristicile actorului activ (intensitatea sau concentraia lui%, particularitile mor o iziologice ale bacteriei supus aciunii sale (structura nveliurilor celulare, sporogeneza, antibiorezistena, etc.%, natura mediului n care are loc aciunea (bacteriile nglobate n produse patologice, alimente, medii de cultur i alte substane organice complexe sunt mai rezistente dect cele a late ntr!o suspensie apoas%, timpul de aciune (pentru acelai e ect, timpul de aciune este direct proporional cu intensitatea actorilor izici i concentraia celor chimici%, etc. )tudiul aciunii actorilor de mediu asupra microorganismelor a avut drept rezultat deducerea i elaborarea ma"oritii metodelor nespeci ice i a produselor de care dispune astzi medicina pentru prevenirea i terapia in eciilor/ metodele de sterilizare, conduita lucrului aseptic, chimioterapia, antibioterapia.
2.3.,.1. AcA!une" 9"c2e)!!(%)
@"c2%)!(%)
@!B!c!
"su&)"
3.4.G.5.5.$c!iunea temperaturii
)pre deosebire de temperaturile extreme, care sunt nocive, temperaturile moderate permit des urarea normal a proceselor metabolice i prin aceasta, creterea i multiplicarea bacteriilor.
*+>
8nsamblul acestor valori termice reprezint zona temperaturilor de dezvoltare. n aceast zon, cuprins ntre 5J i ,-!+--$, exist valori care corespund temperaturii optime, minime i maxime de dezvoltare pentru o specie dat. 0i erena dintre temperatura minim i cea maxim este mare la bacteriile euriterme ( >- $ i respectiv J--$% i oarte mic la cele stenoterme (3J- $ i respectiv ?-- $%. Te:&e)"2u)" %&2!: de deB;%(2")e este de init convenional ca iind temperatura la care diviziunile celulare se succed cu o vitez maxim, avnd ca rezultat ormarea celui mai mare numr de celule bacteriene ntr!un timp dat (=")ne" G. 1**E%. 2ractic, s!a constatat ns c numrul cel mai mare de celule nu se acumuleaz cnd diviziunea se ace oarte rapid, ci dimpotriv, n condiiile unei diviziuni mai lente deoarece se reduce ritmul de producere i acumulare a produilor toxici de catabolism ( ig.J-% Te:&e)"2u)" :!n!: de deB;%(2")e reprezint valoarea termic cea mai sczut la care bacteriile se mai multiplic nc n mod evident. ;a aceast temperatur, metabolismul este sczut, iar ritmul diviziunilor celulare este diminuat n mod semni icativ. 8st el, intervalul dintre dou diviziuni se prelungete de la *J 5 F- de minute la > 5 , ore i chiar mai mult. ;imita ei in erioar este determinat teoretic de temperatura de congelare a apei, dar n mod practic se situeaz sub --$ datorit aptului c punctul de congelare al constituienilor celulari este mai sczut dect cel al apei pure, n prezena moleculelor organice i minerale pe care le conin n soluie.
n condiii particulare care mresc zona de stabilitate

izic a apei celulare (coninutul bogat n di erite substane, presiunea osmotic ridicat, etc.%, temperatura minim tolerat de bacterii poate s scad pn la 5*+-. 8ceasta explic de ce anumite specii bacteriene se multiplic n apa mrii la ! J -$, !
*+,
**-$, iar unele specii din genul &seudomonas se multiplic n soluii concentrate de zahr (sirop de ructe% chiar la 5 *+- $.
F!3. 5. 8fectul temperaturii asupra formrii de biomas la

'tap.ylococcus aureus6 n raport cu timpul. ,i rele indic durata generaiei Gn minute, pentru iecare temperatur 3dup <ra+am i %mit+, ;HF0 cit. de Jarnea <., ;HHB).
;a asemenea temperaturi sczute, toate reaciile metabolice se des oar att de lent, nct durata unei generaii este de sptmni i chiar luni. Te:&e)"2u)" :"I!: de deB;%(2")e reprezint valoarea cea mai ridicat la care activitatea biologic a unei bacterii este nc posibil, iar multiplicarea poate i evideniat. #a este de obicei cu *-!*J-$ superioar temperaturii optime a speciei respective i corespunde cu limita de termotoleran a proteinelor i acizilor nucleici.
*++
n uncie de pre erinele termice, bacteriile, ca i celelalte microorganisme, au ost grupate n trei categorii/ psichro ile (crio ile%, mezo ile i termo ile (tabel ,%. @ntervalele de temperatur minim, optim i maxim speci ice grupelor ecologice de temperatur nu sunt rigide i di er de la autor la autor.
T"9e(u( 4 C("s!@!c")e" 9"c2e)!!(%) du& &)e@e)!nAe(e 2e):!ce

G)u&" ec%(%3!c C")"c2e)u ( Te:&e)"2u)" . C
M!n!: 2sichro ile ($rio ile% Mezo ile &ermo ile =ipertermo ile obligate acultativ e !J ! J !J ! J *- 5 *J ?- ! ?J J- ! +F
O&2!: *J 5 *+ FJ ! 33- 5 ?JJ ! ,J +*-J !
M"I!: F- 5 FJ 3- ! 3> 3J 5 ?, >- ! ++J ! **-
+acteriile psic.rofile, de exemplu, au ost considerate iniial ca organisme capabile s se divid n intervalul -!3--$. n realitate, exist dou grupe distincte de bacterii care se dezvolt la asemenea temperaturi.
*+1
0enumirea de ,,psic+ro ile este rezervat bacteriilor care se dezvolt optim la cca *J-$ i i nceteaz creterea la valori termice de peste F--$. 0in acest motiv, cultivarea lor n termostate reglate la temperaturi superioare acestei valori nu d rezultate. $ealalt grup este constituit din speciile capabile s se multiplice la temperaturi pozitive apropiate de --$, dar i la temperaturi de FJ!3--$ i chiar mai mari. #le au ost denumite psic+rotro e sau psic+ro ile acultative i sunt adesea identi icate cu bacteriile care se pot multiplica n condiiile termice din rigider (?-$%. Cnii autori grupeaz cele dou subgrupe ntr!una singur! microorganisme psic+ro ile 5 care cresc la temperaturi cuprinse ntre -!3--$, cu un optimum termic de *J ! F--$. Microorganismele psichro ile sunt de regul sapro ite i i au habitatul n apele reci, n solul regiunilor de altitudine i polare precum i n alimentele conservate prin rig. +acteriile mezofile au temperatura optim de dezvoltare ntre 3i ?-- $, cu limita superioar n "ur de ?J - $ i cea in erioar n "ur de *-- $. 8cest grup cuprinde ma"oritatea bacteriilor patogene pentru om i animalele homeoterme, dar i o mare parte dintre speciile sapro ite. +acteriile termofile au un pre erendum termic cuprins ntre JJ i ,J-$. #le sunt prezente n apele uzate calde provenite de la di erite industrii, ura"ele nsilozate, plat ormele de gunoi. +acteriile .ipertermofile se dezvolt optim la temperaturi cuprinse ntre +-!*-J-$, iind inactive la temperaturi mai mici de >-!+--$. =abitatul acestor specii l reprezint izvoarele termale terestre i submarine. Ma"oritatea sunt anaerobe i au capacitatea de a metaboliza sul ul. &emperatura maxim la care s!ar putea
*1-
des ura nc procesele metabolice a ost extins, pe baza unor date experimentale, pn la *J--$. Mecanismele prin care bacteriile termo ile i hipertermo ile sunt capabile de asemenea per ormane nu sunt nc elucidate, iind propuse doar o serie de ipoteze< dup unii autori, proteinele structurale i enzimatice ale acestor bacterii ar avea o structur special care le con er termostabilitate. n cazul speciei .acillus stearot+ermop+ilus, s!a constatat c os olipidele sunt ormate aproape integral din s ingomieline, care au un punct de topire ridicat n raport cu cel al os olipidelor din celula bacteriilor mezo ile. AcA!une" 2e:&e)"2u)!(%) su&)":"I!:"(e &emperaturile care depesc limitele maxime tolerabile ale bacteriilor sunt nocive determinnd moartea acestora. # ectul bactericid al cldurii 5 actorul cel mai utilizat n sterilizare ! este atribuit n primul rnd denaturrii proteinelor celulare, n special a enzimelor, care sunt termosensibile. ;a aceasta se adaug i o grav intoxicare celular legat de aptul c, la temperaturi nalte procesele metabolice sunt intensi icate, determinnd o cretere rapid a concentraiei cataboliilor toxici. n plus, la bacteriile aerobe apare o stare de as ixie ca urmare a creterii nevoii de oxigen a celulelor i a reducerii solubilitii lui n mediu. $u excepia temperaturilor oarte ridicate, moartea unei populaii bacteriene nu este instantanee ci se produce treptat, ceea ce permite evidenierea unor actori care in lueneaz sensibilitatea bacteriilor la cldur i anume/ particularitile de specie, gradul de umiditate, p=!ul i compoziia chimic a mediului, numrul iniial de germeni, durata expunerii, etc.
*1*
$a regul general, ormele vegetative sunt mult mai sensibile dect sporii bacterieni, iar umiditatea crescut mrete sensibilitatea la cldur, ca rezultat al hidratrii celulare care avorizeaz coagularea proteinelor. 2rin urmare, ormele vegetative sunt omorte n *minute la temperaturi de J- 5 >-- $ cldur umed i >- 5 +--$ cldur uscat, n timp ce sporii sunt omori n F- de minute la temperaturi ntre *-- 5 *F-- $ cldur umed i *?- 5 *+-- $ cldur uscat, n uncie de specie. )ensibilitatea bacteriilor a de temperaturile ridicate este apreciat convenional prin doi indicatori 5 punctul termic mortal i timpul termic mortal ! care re lect temperatura letal i respectiv, durata ei de aciune (Duc" Eu3en!" Duc" M. Fu)2unescu G. 1*4*%. Punctul termic mortal reprezint temperatura cea mai sczut care omoar n *- minute toi indivizii unei populaii microbiene, n condiii standard/ * 5 F ml suspensie cu o concentraie de J---- microbi/ml, n tampon os at p= ,, n tuburi de sticl ermetic nchise (pentru sterilizarea prin cldur umed%. Timpul termic mortal exprim cel mai scurt interval de timp necesar pentru ca toi indivizii unei populaii microbiene s ie omori la o temperatur dat, n condiii standard. n mod corect, sensibilitatea bacteriilor la temperaturi ridicate se apreciaz prin corelarea celor doi indici, deoarece, cu ct temperatura este mai ridicat, cu att durata expunerii cu e ect letal este mai mic i invers. AcA!une" 2e:&e)"2u)!(%) su9:!n!:"(e
*1F
&emperaturile sczute sunt mai bine tolerate de microorganisme dect temperaturle supramaximale. $oncomitent cu scderea temperaturii sub limita minim de dezvoltare, metabolismul se reduce treptat i nmulirea nceteaz. ;a temperaturile rigiderului (+?, + *-- $%, ma"oritatea bacteriilor trec ntr!o stare de via latent, care poate s dureze luni i chiar ani de zile dac se evit uscarea. #xcepie ac unele specii adaptate la comensalism i parazitism, cum sunt gonococul i meningococul, care mor repede sub temperatura optim de multiplicare. )tocarea n rigider reprezint i la ora actual metoda curent de conservare a culturilor bacteriene, alimentelor, medicamentelor i a altor produse biologice. 2rocesul de ngheare lent, la temperaturi puin sub -- $, are un puternic e ect bactericid determinat de aciunea asociat a trei actori/ *. F. 3. denaturarea structurilor celulare prin deshidratarea lor< pierderea prin nghe a apei cu rol de solvent, ceea ce determin o concentrare a electroliilor n celul (,,moarte prin sare (%< ruperea nveliurilor celulei bacteriene sub aciunea cristalelor de ghia intra! sau extracelulare.
;a temperaturi de congelare mult mai sczute (! 3-- $, ! ?-- $%, e ectul bactericid este practic anulat, deoarece nghearea brusc mpiedic cristalizarea apei, care trece ntr!o stare amor , vitroas (=")ne" G. 1*4.- Duc" Eu3en!" 1*4E %. 0econgelate brusc pn la temperaturile optime de multiplicare i introduse n medii avorabile, bacteriile i reiau metabolismul, creterea i multiplicarea.
*13
nghearea, dar i dezghearea lent a bacteriilor compromit viabilitatea acestora, iar ngheul i dezgheul repetat reprezint chiar o metod de dezintegrare a bacteriilor pentru extracia coninutului celular. L!%@!(!B")e" 3gr. lio=lic+idA ilein=a atrage%. $apacitatea microorganismelor de a rezista i de a!i conserva timp ndelungat viabilitatea atunci cnd su er, n anumite condiii, aciunea unor temperaturi oarte sczute, le ace accesibile procedeului de conservare prin uscare n vid, precedat de congelare la temperaturi "oase (!3--, !+--$%. 8cest procedeu, denumit lio ilizare, este aplicat n practic pentru conservarea culturilor microbiene i a di eritelor produse biologice (preparate enzimatice, extracte celulare, toxine, antibiotice, etc.%. #l asigur o conservare ndelungat (timp de ani sau zeci de ani% n vid sau n prezena unui gaz inert (argon%. 0ei, n cazul culturilor microbiene aceast modalitate de conservare se nsoete de o diminuare a numrului de celule viabile, n mod obinuit rmn totdeauna su iciente celule capabile s iniieze dezvoltarea unei culturi. 8socierea congelrii la uscare are scopul de a diminua nocivitatea desicaiei, determinnd modi icri ale citoplasmei similare celor care, n mod natural, nsoesc sporularea. 2rodusul inal al lio ilizrii este o pulbere oarte solubil n di erite lichide.
3.4.G.5.3. $c!iunea gradului de ionizare

Ma"oritatea proceselor vitale sunt condiionate de p=!ul mediului de cultur. Kiecare specie se dezvolt la un anumit p= optim, caracteristic speciei respective. n general, p=!ul optim pentru bacteriile patogene este neutru sau uor alcalin, cuprins ntre ,,F!,,? ! p= care corespunde cu gradul de ionizare al esuturilor i umorilor
*1?
organismului. #xist ns patogeni adaptai la aciditatea gastric (p= [*,>!F,-%, cum este cazul speciei 0elicobacter p2lori, creia i se atribuie responsabilitatea etiologic n ulcerul gastroduodenal la om. @onii de = (mediile acide% sunt mai toxici dect ionii oxidrilici H= (mediile alcaline%
3.4.G.5.4.$c!iunea presiunii osmotice

)e tie c presiunea osmotic a unei soluii este direct proproional cu concentraia total a di eriilor ioni i molecule prezente n soluie. n condiii normale, o soluie molar a unui ion oarecare are o presiune osmotic de FF,? atmos ere. n general, presiunea osmotic din interiorul celulelor bacteriene este mai mare dect a mediilor de cultur uzuale, datorit aptului c citoplasma conine n stare solvit cantiti mari de substane minerale i organice. $a urmare, apa din mediu tinde s ptrund n celul pentru egalizarea concentraiilor intra! i extracelulare a substanelor solvite, determinnd o stare de turgescen a acesteia, caracteristic de alt el tuturor celulelor vii. 0ezvoltarea bacteriilor decurge normal atunci cnd mediul lor de via are o presiune osmotic aproximativ echivalent cu cea intracelular, deci n condiii de izotonie. #xcepie ac bacteriile osmo ile, care se dezvolt numai n medii cu presiune osmotic ridicat i bacteriile osmotolerante sau acultativ osmo ile, care se pot dezvolta la presiuni osmotice variabile. #le se numesc +alo ile atunci cnd se dezvolt n condiiile unei saliniti crescute (apa mrilor i a oceanelor, a lacurilor srate i a salinelor, n care concentraia de 3a$l poate atinge *> 5 3J U % i za+aro ile cnd se dezvolt n prezena unei concentraii mari de zahr (J- 5 ,-U%. 0intre bacteriile patogene, doar sta ilococii, vibrionii i listeriile (L")&en2 M.$. 2...% sunt capabile s se dezvolte n
*1J
medii hipersaline. =alo ilia constituie un important criteriu taxonomic i reprezint proprietatea pe care se bazeaz izolarea acestor bacterii n culturi pure olosind mediile selective hiperclorurate. )pre deosebire de celulele animale care, iind lipsite de un perete celular rigid sunt oarte sensibile la variaiile osmotice, ma"oritatea bacteriilor ! prote"ate de un perete celular su icient de rezistent (mai ales la 9ram pozitive% 5 suport relativ uor modi icrile presiunii osmotice, dac abaterile de la izotonie survin lent. Micoplasmele ! bacteriile lipsite de perete celular 5 evit apariia unor di erene mari de presiune osmotic prin acumularea n celul a unor concentraii mici de 3a+ i 4+ . n cazul variaiilor mari i brute ale presiunii osmotice, bacteriile su er dou tipuri de modi icri/ plasmoliza i plasmoptiza. $("s:%(!B" sau ,,uscarea osmotic( se produce n mediile hipertonice, deoarece apa din celul trece n mediul extracelular. n consecin, volumul celulei se reduce iar citoplasma se retracteaz odat cu membrana celular, dezlipindu!se de peretele celular. n aceast stare, unele bacterii intr ntr!o az de via latent, iar altele mor. Cscarea osmotic are aplicaii n conservarea alimentelor prin saramurare i n siropuri concentrate de zahr. 2rezena bacteriilor osmo ile n aceste condiii nu determin ntotdeauna alterarea alimentelor, unii halo ili avnd chiar o aciune util prin participarea la procesele de ,,maturare( a unor alimente (brnzeturi, carne srat, .a.%. $("s:%&2!B" are loc n cazul suspendrii bacteriilor ntr!un mediu hipotonic (de exemplu, apa distilat%. 0in cauza ptrunderii apei din exterior, turgescena celulei crete pn cnd presiunea intracelular, depind capacitatea de distensie a peretelui celular,
*1>
determin ruperea nveliurilor i moartea bacteriei prin dispersia citoplasmei n mediu.
3.4.G.5.:. $c!iunea presiunii .idrostatice

.ezistena bacteriilor la aciunea presiunilor nalte este variabil n uncie de habitatul lor natural i este avorizat de capacitatea de sporogenez, sporul iind de dou ori mai rezistent dect orma vegetativ. n uncie de comportarea lor n raport cu valoarea presiunii hidrostatice, bacteriile pot i (=")ne" G. 1**E%/ a% 9")%@%9e, sensibile la presiuni care depesc F-- de atmos ere 5 categorie n care se ncadreaz bacteriile din sol, apele puin adnci, zonele de supra a a oceanelor i mrilor< b% 9")%@!(e ! bacterii care populeaz adncul mrilor (! *J--m% i sunt adaptate la presiuni de ?--!J-atmos ere, n lipsa crora unele specii (baro ilele absolute% nu se pot dezvolta< c% 9")%2%(e)"n2e, care pre er presiunea normal (* atm.% dar suport i presiuni moderat ridicate< d% 9")%du)e sau abisale, izolate de pe undul mrilor i din adncul oceanelor (! J*-- m%, capabile s reziste la *--5 *?-- atmos ere (ex. &seudomonas bat+2cetes%. Ma"oritatea bacteriilor sunt oarte sensibile la modi icrile brute alternative ale presiunii, ast el nct compresarea i decompresarea poate constitui un procedeu de distrugere a celulelor bacteriene.
*1,
3.4.G.5.>. $c!iunea radia!iilor

.adiaiile electromagnetice emise de soare au lungimi de und di erite, pe baza crora au ost grupate n categorii distincte (tabel +%. # ectul aciunii radiaiilor asupra microorganismelor di er n uncie de lungimea de und a acestora. 8st el, radiaiile cu lungimi de und mai mari de *F--- 8 - (radiaiile heriene i cele in raroii% au un coninut energetic att de slab, nct sunt incapabile s produc o schimbare n structura chimic a materiei vii care le absorarbe. .adiaiile cuprinse ntre *F --- 8- i F--- 8- au un coninut energetic su icient pentru a provoca modi icri otochimice cu e ect bactericid. 0intre acestea, o larg utilizare n practica decontaminrii o au radiaiile ultraviolete (CE%. # icacitatea bactericid maxim a CE se mani est n intervalul F>-- 5 F,-- 8-, care corespunde cu absorbia maxim a radiaiilor de ctre acizii nucleici. 8ceast energie suplimentar determin ruperea punilor de hidrogen intercatenare i nlocuirea lor cu legturi mai solide, de tip dimer timin ! timin, blocnd ast el replicarea 803!ului (=")ne" G. 1*4.%. T"9e(u( +
C("s!@!c")e" )"d!"A!!(%) e(ec2)%:"3ne2!ce T!&u( )"d!"A!!(%) .adiaii cosmice .adiaii .adiaii G .adiaii ultraviolete )pectrul vizibil Lun3!:e" de und -,---* 5 -,-* 8-,-* 5 *,- 8*-- 8*-- 5 ?--- 8?--- 5 >--- 8*1+
BACTERIOLOGIE GENERAL| .adiaii roii .adiaii in raroii .adiaii hertziene >--- 5 J- --- 8J- --- 8- 5 * cm * cm 5 J?J m
# ectul letal al CE se exercit i n mod indirect, prin aciunea otochimic asupra mediului ( ormarea de ozon n aer i peroxizi n ape%. 2rintr!un mecanism necunoscut nc, un numr de indivizi dintr!o populaie bacterian iradiat letal cu CE ,,renvie( n urma expunerii acesteia la lumin n urmtoarele trei ore. Kenomenul poart denumirea de fotorestaura!ie. n general, la aciunea radiaiilor ultraviolete sunt mai sensibile ormele vegetative dect sporii bacterieni. .acillus ant+racis, de exemplu, n stare vegetativ este distrus n 3- de minute, iar sub orm sporulat, numai dup dou ore. Ctilizarea radiaiilor ultraviolete n decontaminare a devenit posibil prin realizarea lmpilor cu vapori de mercur, care emit CE cu lungimi de und de FJ? nm, oarte active. 8ceste lmpi sunt utilizate pentru sterilizarea aerului din laboratoare, sli de operaie, clinici veterinare i alte spaii, precum i pentru sterilizarea supra eelor de lucru pe care CE cad perpendicular/ mese de laborator, mese de operaie, etc. .adiaiile cu lungimi de und sub F--- 8- au un coninut energetic att de ridicat nct moleculele situate pe traiectul lor sunt ionizate prin desprinderea electronilor, de unde i denumirea de radiaii ionizante dat radiaiilor G, particulelor al a, beta i gama i radiaiilor cosmice. # ectul ionizrii este mutagen sau letal, n uncie de capacitatea de penetrare a radiaiei.
*11
8ciunea radiaiilor gama, cele mai penetrante i microbicide, este din ce n ce mai utilizat n sterilizarea la scar industrial a unor produse armaceutice, medicale (seringi, sonde, etc.% i alimentare, care nu suport sterilizarea termic.
3.4.G.5.G. $c!iunea factorilor mecanici

Bacteriile, avnd dimensiuni mici i un perete rigid, sunt n general rezistente la leziunile de ordin mecanic. &otui, particulele mici i dure, sub orm de pudre ine cu granule de ordinul micrometrilor, pot distruge peretele celular dac sunt agitate energic cu o suspensie bacterian.
3.4.G.5.H. $c!iunea ultrasunetelor

Cltrasunetele (vibraiile cu o recven mai mare de F- --- =z% produc moartea bacteriilor prin ruperea pereilor celulari, ca o consecin a enomenului de cavitaie. 8cesta const n bombardarea bacteriilor de ctre bulele oarte mici de gaz care se ormeaz n lichidul de suspensie, ca rezultat al agitaiei produse de vibraiile cu recven nalt. 8ciunea bactericid a ultrasunetelor a gsit aplicaii n industria vaccinurilor pentru dezintegrarea celulelor bacteriene n scopul eliberrii antigenelor somatice, n separarea endoenzimelor bacteriene sau a altor constituieni chimici ai celulei bacteriene i n sterilizarea anumitor produse.
2.3.,.2 AcA!une" @"c2%)!(%) c7!:!c! "su&)" 9"c2e)!!(%)
F--
BACTERIOLOGIE GENERAL| n
uncie de natura i concentraia lor, substanele chimice pot exercita asupra bacteriilor un e ect avorabil, atunci cnd pot i utilizate ca surse plastice i energetice, sau un e ect nociv (bacteriostatic sau bactericid%, prin producerea unor dezechilibre izico 5 chimice. 0e exemplu, n concentraie de *U zaharoza reprezint o surs de carbon i energie, iar n concentraii mari (?-U% se comport ca un agent bacteriostatic a de ma"oritatea speciilor. 8ciunea substanelor chimice di er nu numai n raport cu natura i concentraia unei substane date, ci i n uncie de particularitile iziologice ale bacteriilor supuse aciunii ei. 12cobacterium tuberculosis, de exemplu, reclam pentru dezvoltare, prezena n mediul de cultur a glicerinei ! substan nociv pentru restul speciilor bacteriene. )ubstanele cu e ect antibacterian au o larg utilizare n aciunile de prevenire i combatere a bolilor in ecioase prin decontaminare (dezin ectantele i antisepticele%, precum i n terapia acestora (chimioterapicele de sintez%. )ubstanele utilizate n decontaminare 5 aciunea de ndeprtare, neutralizare sau distrugere a microorganismelor de pe supra aa elementelor animate i neanimate ! se numesc dezinfectante dac, din cauza e ectelor iritante sau toxice, pot i aplicate numai pe supra ee inerte (duumele, "gheaburi, perei, instrumentar, etc.% i antiseptice, dac toxicitatea mai redus permite aplicarea lor pe tegumente, mucoase sau plgi ( C%:"n I. BL)7"( He(en"#M")!" F(%)escu R%d!c" 1**4- Bu!uc D. Ne3uA M. 1***%. Cneori, aceeai substan (de exemplu, cloramina% n soluii diluate este antiseptic, iar n soluii concentrate, dezin ectant.
8genii decontaminani i exercit aciunea nociv asupra
microorganismelor pe diverse ci/
F-*
modi icarea permeabilitii peretelui celular i a membranei citoplasmatice ( enolul, spunurile, detergenii anionici i cationici%< denaturarea proteinelor, determinnd suprimarea activitii enzimatice i precipitatea sau coagularea proteinelor structurale (acizii, alcalii, alcoolii%< inter erena cu gruprile active ale enzimelor, blocnd sau modi icnd activitatea enzimatic ( ormaldehida, srurile metalelor grele, permanganatul de 4, peroxizii, clorul %< etc. *.imioterapicele sunt produse de sintez a cror aciune toxic se exercit selectiv asupra microorganismelor, r a leza celulele organismului gazd, ceea ce permite utilizarea lor n terapia in eciilor. 2rincipalele grupe de substane chimioterapice sunt/ sul amidele, nitro uranul i derivaii acestuia, acidul paraaminosalicilic (28)%, hidrazida acidului nicotinic (=@3%, etanbutolul, acidul nalidixic i derivaii si, etc. Ma"oritatea au e ect bacteriostatic i acioneaz ca, inhibitori competitivi ai unor produi de metabolism eseniali pentru celula bacterian. )ul amidele, de exemplu, acioneaz prin blocarea sintezei acidului olic ! actor indispensabil pentru ormarea acizilor nucleici, respectiv pentru creterea i multiplicarea bacteriilor. 0atorit analogiei sterice cu acidul paraaminobenzoic (vitamina =%, care este precursor n sinteza acidului olic, sul amidele intr n competiie cu acesta, substituindu!l i ormnd analogi ne uncionali ai acidului olic ( ig.J*%. Bacteriile cu unciile de cretere blocate din cauza sul amidelor, care acioneaz ca o antivitamin, sunt distruse de organism prin elementele naturale de aprare ale acestuia.
F-F
$elulele organismul gazd, precum i unele bacterii care nu sintetizeaz acidul olic ci sunt dependente de aportul exogen, nu sunt sensibile la aciunea toxic a sul amidelor. 0e asemenea, sunt rezistente la sul amide speciile bacteriene care produc masiv acid p!aminobenzoic i care nving ast el n competiia cu sul amidele. n cadrul speciilor sensibile (gonococ, streptococ, pneumococ, etc.%, pot s apar mutante sul amidorezistente. 8cestea sunt relevate de mediile cu sul amide, care permit multiplicarea mutantelor, inhibnd celule bacteriene sensibile. 0up obinerea unor antibiotice prin sintez chimic, unii autori au introdus i antibioticele n categoria chimioterapicelor. n sens strict ns, termenul de substan chimioterapic trebuie rezervat produselor obinute exclusiv prin sintez chimic i nu plecnd de la un model de natur biologic.
F-3
Kig.J* Mecanismul de aciune a sul amidelor
2.3.,.3. AcA!une" @"c2%)!(%) 9!%(%3!c! "su&)" 9"c2e)!!(%)

.elaiile care se stabilesc ntre microorganismele care ocup o ni ecologic, precum i relaiile dintre microorganisme i organismele superioare, animale i vegetale, constituie de apt relaii sau raporturi ecologice. 0e aceea considerm ca iind oportun detalierea lor n capitolul ce urmeaz.
2.3.4. NOIUNI DE ECOLOGIE MICROBIAN/ #cologia microorganismelor este unul dintre cele mai noi domenii ale microbiologiei, care studiaz relaiile biologice dintre microorganismele prezente ntr!un habitat comun i interaciunile care apar ntre componenii biotici i abiotici ai acestuia (=")ne" G. 1**E%. 2entru a caracteriza poziia unei populaii de microorganisme ntr!o comunitate se utilizeaz n mod curent termenii de ,,habitat(, ,,ni ecologic( sau ,,biotop(, dei semni icaia lor nu este n ntregime superpozabil. ?abitatul unui microorganism reprezint locul n care acesta triete, se reproduce sau, cel puin, supravieuiete. 0imensiunile habitatelor variaz de la oarte mari (oceane, mri%, la oarte mici (intestinul unei insecte% iar numrul lor este
F-?
imens, deoarece, puine regiuni de pe supra aa planetei sunt lipsite de microorganisme. 3atura habitatelor este de asemenea oarte variat incluznd solul, apele dulci i marine, aerul, animalele, plantele, etc. 8tunci cnd n perimetrul unui habitat parametrii actorilor izico!chimici sunt neuni ormi, se creaz regiuni, uneori oarte apropiate, care o er condiii avorabile pentru anumite specii i intolerabile pentru altele, numite micro.abitate. &ractusul intestinal al mami erelor, de exemplu, nu reprezint un habitat unic ci un mozaic de microhabitate, situate n lumenul di eritelor segmente anatomice, pe supra aa epiteliilor i n criptele mucoaselor care cptuesc aceste segmente. $onceptul de 66biotop; i cel de 66ni ecologic; au o semni icaie mai larg, deoarece se re er nu numai la spaiul ocupat de un microorganism ci i la uncia lui n habitat. 8nsamblul de microorganisme care populeaz un biotop constituie microbiocenoza sau microbiota biotopului respectiv.
2.3.4.1. Rs&Lnd!)e" :!c)%%)3"n!s:e(%) Dn n"2u)

Microorganismele sunt prezente, din abunden, n toate mediile n care au ost cutate/ sol, ape, aer, corpul iinelor vii (om, animale, plante%, materia organic moart, etc. 8ceast ubicvitate decurge din capacitatea de a coloniza i de a supravieui n habitatele cele mai puin adecvate vieii ( undul oceanelor, gheurile polare, zcmintele de iei, izvoarele hidrotermale, etc.% i de a metaboliza cele mai neobinuite substraturi anorganice (3F, ), $H, $HF% i organice (hidrocarburi, enoli, crezoli, lemn, as alt, etc.%. n ceea ce privete rspndirea pe vertical a microorganismelor, ea este de asemenea neobinuit de extins n raport cu a celorlalte vieuitoare. $u a"utorul unor sonde speciale, bacteriile au putut i detectate n atmos er la nlimea de *F.--F-J
m, la ?--- m adncime n pmnt i la **--- m n adncul mrilor i al oceanelor. 2ractic, nu exist mediu natural la nivelul cruia s ie posibil viaa i din care microorganismele s lipseasc. 0istribuia microorganismelor n natur, aspectele calitative i cantitative ale micro lorei sunt determinate n cea mai mare parte de particularitile biotopului. 0e exemplu, n lacurile srate predomin bacteriile halo ile, n apele termale se gsesc microorganisme termo ile i termotolerante, care lipsesc n izvoarele reci, iar n regiunile polare i n adncul oceanelor, unde temperatura rmne tot timpul cobort, triesc numai bacterii psichro ile. n mediile naturale obinuite, mai puin selective, micro lora este mult mai heterogen i mai uni orm rspndit, ast el nct graniele comunitilor de microorganisme sunt greu, sau uneori chiar imposibil de delimitat. $u toate acestea, pe baza unor criterii cum sunt prezena constant i n numr mare, microorganismele din iecare biotop pot i grupate n dou categorii/ *. microorganisme adaptate ilogenetic la condiiile izico5 chimice o erite de biotop, care alctuiesc o comunitate de populaii (specii% relativ stabil, ormnd microbiota auto.ton ( normal sau rezident % i F. microorganisme provenite din alte medii, a cror prezen este n mod obinuit tranzitorie, deoarece sunt mai puin adaptate la noile condiii. #le constituie microbiota alo.ton sau strin a biotopului respectiv. #liminarea alohtonilor este determinat de incapacitatea lor de a competiiona cu microorganismele autohtone, mai numeroase i mai bine adaptate, sau cu actorii abiotici di erii. )tudiul comunitilor de microorganisme care ocup constant un biotop a artat c structura lor evolueaz n timp i c stabilitatea inal a acesteia este condiionat de nlocuirea unor populaii cu
F->
altele mai bine adaptate i care, prin interaciuni de tip cooperant, asigur cea mai bun exploatare a habitatului. Kenomenul este cunoscut sub denumirea de succesiune ecologic6 iar ecosistemul terminal stabilizat este numit clima7.
2.3.4.2.M!c)%9!%2" "&e(%)
Micobiota autohton a apelor variaz, sub aspectul structurii populaiilor de microorganisme, n uncie de caracteristicile izico! chimice ale mediului acvatic i este corelat cantitativ cu bogia n nutrieni. $ea mai redus ncrctur microbian o are apa de izvor n apropiere de surs, datorit suportului nutritiv oarte redus. Microorganismele prezente sunt cele antrenate din straturile subterane n cursul trecerii spre supra a. n cazul izvoarelor minerale, apa conine o microbiot autotro speci ic, capabil s metabolizeze Ke, ), sau alte minerale i compuii lor anorganici. $ea mai abundent i mai variat micro lor se gsete n apele de supra a (ruri, lacuri%, deoarece conin cantiti relativ mari de substane organice provenite din lora i auna proprie. n plus, ele sunt expuse contaminrii cu microorganisme din sol i din apele reziduale deversate de centrele urbane i marile complexe zootehnice. 2e lng bacteriile provenite din sol, ('zotobacter spp, bacterii nitri icatoare, etc.%, )Lu)!(e conin comuniti bacteriene ce se diversi ic pe msura ndeprtrii de izvoare. Microbiota normal, cu un caracter permanent, este compus din bacterii aprinnd genurilor 'c+romobacter, 'cinetobacter, ,aulobacter, =lavobacterium, 02p+omicrobium, 1ora5ella, &seudomonas, 'eromonas, etc., din cianobacterii, levuri i micro ungi.
F-,
L"cu)!(e i alte ape stttoare au o microbiot extrem de variat, care include practic toate categoriile de microorganisme/ bacterii, micro ungi, microalge i protozoare. M!c)%9!%2" :)!(%) C! " %ce"ne(%) este alctuit din microorganisme psichro ile, baro ile i halo ile ! nsuiri care constituie adaptri la particularitile acestui biotop. #le prezint i un pleomor ism accentuat, determinat probabil de e ectele presiunilor hidrostatice mari (=")ne" G. 1**E%. Ma"oritatea microorganismelor al cror habitat natural l constituie apele, nu triesc liber ci sunt asociate cu planctonul i cu detritusurile organice, avnd un rol ma"or n mineralizarea acestora. 0intre bacteriile asociate zooplanctonului, unele prezint potenial patogen pentru peti, iind capabile s produc in ecii cu evoluie endemico!epidemic i pierderi economice apreciabile ('eromonas +2drop+ila, 'eromonas salmonicida, 4ibrio anguillarum, etc.%, iar altele, prezente la diverse specii din auna marin (peti, crabi, scoici, etc.%, sunt ageni ai toxiin eciilor alimentare (4ibrio para+aemol2ticus, 4ibrio vulni icus, 'eromonas +2drop+ila, ,lostridium botulinum tip ), etc.%. Microbiota alohton, contaminant, a apelor de supra a se compune deseori din bacterii patogene pentru om i pentru animale, apa reprezentnd sursa de in ecie pentru un numr mare de boli in ecto!contagioase (leptospiroza, salmoneloza, tuberculoza, ebra a toas, etc.%. @n eciile pentru care sursa principal de contaminare este apa, sunt cunoscute sub denumirea generic de in ecii hidrice. Bacteriile patogene, a"unse accidental n mediul acvatic, au o existen temporar din cauza urmtorilor actori inhibani / a. diluia mare a substanelor nutritive i temperatura relativ sczut a apei< b. competiia cu populaiile microbiene acvatice rezidente, mult mai numeroase i mai adaptate la condiiile o erite de acest mediu<
F-+
c. prezena n ap a bacterio agilor, care le distrug prin bacterioliz< d. aciunea bactericid a razelor solare, care sunt e iciente, dac apa este limpede, pn la * m adncime. 0atorit actorilor menionai, apele de supra a su er un proces de autopuri icare, graie cruia, la aproximativ *-!F- 7m n aval de sursa contaminant, apele rurilor sunt n general lipsite de germeni patogeni. A&e(e su92e)"ne rezult din ploi, topirea zpezilor i in iltrarea apei din lacuri i ruri pn la nivelul unor straturi impermeabile. ncrctura microbian a acestor ape este invers proporional cu adncimea i dependent de natura subsolului strbtut, care acioneaz ca un iltru mai mult sau mai puin sterilizant. .ocile nisipoase au proprietatea de a reduce numrul germenilor din ap, reinndu!i n cursul itrrii, n timp ce rocile calcaroase, care sunt parial dizolvate, permit trecerea microorganismelor. H l s o n i colaboratorii (cit. de Marnea 9.,*11?% au evideniat prezena bacteriilor sul ito!reductoare la adncimea de *F>? 5 *,JF m.
2.3.4.3. M!c)%9!%2" s%(u(u!

)olul conine un numr imens de virusuri bacterio age, bacterii, micro ungi, protozoare i alge, de o diversitate mai mare dect alte medii naturale. Microorganismele autohtone sunt cele mai numeroase i sunt caracteristice pentru un anumit tip de sol. Ma"oritatea sunt autotro e, ast el nct dezvoltarea lor nu este condiionat de nutrienii din a ara solului i nu sunt expuse la luctuaii numerice semni icative (=")ne" G. 1**E%. .olul lor este imens pentru nutriia plantelor i asigurarea ertilitii solului, deoarece sunt singurele organisme
F-1
capabile s mbogeasc solul n azot prin ixarea azotului molecular din marele rezervor atmos eric. Cnele dintre ele 5 microorganismele zimogene, sau de ermentaie ! sunt heterotro e, iind dependente de substanele organice provenite din exterior (resturi vegetale, excrete, cadavre animale, etc.%. 2rin activitatea lor metabolic, aceste bacterii realizeaz mineralizarea rezidurilor organice, avnd un rol esenial n circuitul natural al carbonului i azotului. #le sunt puin numeroase i au o activitate periodic, dezvoltndu!se luxuriant dup adugarea substanelor organice exogene, pentru a reveni la normal cnd concentraia nutrienilor accesibili a diminuat. Microbiota alohton a solului se compune din patogenii pentru plante, animale i om, care a"ung n sol odat cu esuturile vegetale in ectate, apele reziduale, de"eciile, secreiile i cadavrele animalelor bolnave. )olurile cele mai contaminate se a l n perimetrul spitalelor, ermelor zootehnice, staiunilor de ecarisa", cimitirelor de animale, etc. 8ceste microorganisme au un caracter tranzitoriu, deoarece n sol nu gsesc condiii de multiplicare ci numai de supravieuire temporar, condiionat de actorii de mediu i de eventualitatea ntlnirii cu specia!gazd. $ea mai mare longevitate o au bacteriile patogene sporogene (genurile .acillus i ,lostridium%, care rezist n sol zeci sau chiar sute de ani. @n eciile pentru care sursa primar de contaminare este solul, poart denumire de in ecii telurice (antraxul, tetanosul, crbunele em izematos%. $oncentraia microorganismelor n sol este maxim n straturile superioare ale acestuia (primii J cm< rareori pn la *Jcm%, exceptnd stratul extern cu o grosime de civa milimetri, unde numrul de germeni este mai redus din cauza actorilor de mediu
F*-
care acioneaz direct asupra lor (razele ultraviolete, cldura, variaiile brute de temperatur i umiditate, etc%. )traturile pro unde ale solului, cu excepia celor care prezint isuri, sunt lipsite de microorganisme, din cauza rolului de iltru pe care l "oac straturile succesive.
2.3.4.E. M!c)%9!%2" "e)u(u!

8erul nu poate i considerat un biotop n sensul strict al cuvntului deoarece, iind lipsite de un suport nutritiv, microorganismele nu se pot multiplica. n acest mediu, ele gsesc doar condiii de supravieuire temporar, cel mai adesea n stare latent (sub orm de spori%. 0e aceea, ideea mai veche a existenei unei microbiote speci ice aerului, a ost abandonat ( =")ne" G. 1**E%. 8erul reprezint ns cel mai important mi"loc de dispersare a microorganismelor, curenii de aer putnd s le vehiculeze, att pe orizontal ct i pe vertical, la distane apreciabile. 8ntrenate de curenii de aer i prote"ate de picturile mici de ap sau pra , bacteriile a"ung pn la nlimea de J-- m, dar s!au putut izola i la *F.--- m, unde au ns o supravieuire redus din cauza e ectului bactericid al razelor ultraviolete, temperaturilor sczute i variaiilor mari ale umiditii relative. )paiul cosmic explorat pn n prezent este microbiologic steril. 2rincipalele surse de contaminare microbiologic a aerului sunt solul (prin particulele de pra , secreii i excreii uscate, care sunt antrenate n atmos er de curenii de aer% i aerosolii ini, microscopici, numii picturi 2 l:ge, expulzai din cile respiratorii ale omului i animalelor prin expiraie, tuse i strnut. $ele mai importante implicaii ale prezenei microorganismelor n aer sunt transmiterea pe cale aerogen a unor
F**
boli in ecioase (tuberculoza, di teria, micoplasmoza, gripa, etc.% i contaminarea culturilor microbiene n timpul operaiunilor de nsmnare i transplantare. $el de!al doilea nea"uns poate i evitat prin e ectuarea manoperelor microbiologice n hote (boxe% cu aer laminar pentru siguran microbiologic ( ig. JF%. )paiul de lucru din aceste boxe este scldat de aer sterilizat prin iltrare, cu a"utorul iltrelor =#28 (0ig+ ) icient2 &articulate 'ir =iltres %.
F!3. 52 ?ot cu flu7 de aer laminar pentru siguran! microbiologic

F*F
2.3.4.5. M!c)%9!%2" un%) "(!:en2e de %)!3!ne "n!:"(

2rin nutrienii din compoziia lor, alimentele constituie un mediu de cultur optim pentru multiplicarea unui numr mare de specii bacteriene i micro ungi i asigur supravieuirea pentru un timp limitat a microorganismelor strict parazite (ric7ettsii, chlamidii, virusuri%. Microbiota autohton a alimentelor este constituit din microorganismele sapro ite pe care iecare aliment le ntlnete n circuitul su, de la obinere pn la consumator. 2rezena acestor microorganisme n numr mare reprezint un indicator al condiiilor de igien necorespunztoare i in lueneaz negativ sntatea consumatorului prin produii rezultai din degradarea enzimatic a alimentelor (alterare%. 0e asemenea, prin microorganismele patogene pe care le vehiculeaz i prin metaboliii lor toxici, alimentele pot genera toxiin ecii alimentare i boli in ecioase grave cu poart de intrare digestiv ( tuberculoza, antraxul, hepatitele virale, etc. %.
3.4.H.>.5. ,icrobiota laptelui

;aptele provenit de la animalele sntoase i recoltat n condiii igienice conine de obicei un numr redus de microorganisme (3-- 5 J--`ml%. ncrctura microbian a laptelui este mai mare n primele "eturi, deoarece antreneaz micro lora existent pe mucoasa canalelor galacto ore, apoi scade treptat. n laptele provenit de la animalele cu in ecii ale glandei mamare, cazate n adposturi insalubre, sau la care mulsul se e ectueaz n condiii necorespunztoare (recipiente sau instalaii de
F*3
muls neigienizate, mulgtori cu minile murdare, uger murdar, etc.%, numrul microorganismelor pe mililitru poate i de ordinul sutelor de mii sau chiar mai mult ( G)ec!"nu A(. C! c%(. 1*43% @mediat dup muls, microorganismele sunt repartizate uni orm n masa laptelui. n timpul pstrrii ns, odat cu ridicarea grsimilor, ele sunt antrenate ctre supra a, concentrndu!se n stratul de smntn. Microbiota normal a unui lapte igienic se compune n cea mai mare parte din bacterii aparinnd genurilor !actobacillus (!. acidop+ilus, !.casei, .a. % i %treptococcus ( ). lactis, %. cremoris, %. t+ermop+ilus, etc.% ! bacterii care prin activitatea lor ermentativ imprim produselor lactate gustul speci ic. Mirobiota de contaminare a laptelui este dependent calitativ i cantitativ de condiiile de recoltare i de pstrare. #a poate nsuma specii bacteriene aparinnd genurilor/ &seudomonas, 'c+romobacter, !euconostoc, 1icrococcus, &ropionibacterium, &roteus, )sc+eric+ia, )nterobacter, ,lostridium, etc. (Mnescu S. 1*+*%. 0at iind originea intestinal a unora dintre aceste bacterii ()sc+eric+ia coli, &roteus spp., ,lostridium per ringens%, prezena lor denot o poluare de origine ecal i constituie un indicator al condiiilor sanitare pe circuitul laptelui. )peciile patogene care pot contamina laptele i care produc in ecii la om n urma consumului de lapte ne iert sunt/ 12cobacterium bovis, .rucella abortus, %tap+2lococcus aureus, )sc+eric+ia coli, %treptococcus p2ogenes etc.
3.4.H.>.3. ,icrobiota crnii

$arnea conine o lor microbian oarte variat, dependent de posibilitile de contaminare n timpul vieii animalului (n cursul in eciilor septicemice% i dup sacri icare. $ondiiile de mediu, n special temperatura crescut i umiditatea, permit micro lorei
F*?
existente s se multiplice i s produc, ntr!un timp relativ scurt, alterarea (putre acia% crnii prin proteoliz enzimatic. Microorganismele care iau parte la procesul de putre acie se succed n uncie de condiiile avorabile multiplicrii, existente la un moment dat. 8st el, bacteriile aerobe i anaerobe acultativ, cum sunt micrococii, streptococii, speciile aparinnd genurilor &seudomonas, &roteus, 'c+romobacter, bacilii sporulai aerobi (.acillus subtilis, .acillus m2coides% intervin primele, consumnd oxigenul de la supra a i crend condiii avorabile dezvoltrii bacteriilor anaerobe din genul $lostridium. 2utre acia crnii poate avea loc i la temperaturi sczute, cnd intervin bacteriile crio ile i mucegaiurile din genurile 1ucor, &enicilium, 'spergillus, ,ladosporium, etc. 2rin intermediul crnii contaminate se pot transmite la om numeroase boli in ecioase ca antraxul, tuberculoza, salmoneloza, ru"etul, bruceloza, tularemia, morva i altele. 0in acest considerent, carnea constituie unul din obiectivele principale ale expertizei sanitar!veterinare.
3.4.H.>.4. ,icrobiota oulor

;a depunere, oule psrilor sntoase sunt sterile. #le se contamineaz ulterior cu microorganismele din cuibare sau de pe grtare i n timpul manipulrii. 0e pe coa"a oulor proaspete se izoleaz recvent bacterii din genurile &roteus, &seudomonas, 'c+romobacter, 'eromonas, )sc+eric+ia, etc. $a o consecin a nvechirii oulor, aceste bacterii ptrund n interior determinnd alterarea coninutului prin putre acie (G)ec!"nu A(. 1*+,- Mnescu S. 1*+*%. 8lterarea prin mucegire apare sub orm de pete colorate pe aa intern a co"ii i pe glbenu. Mai recvent implicate n mucegirea oulor sunt genurile/ ,ladosporium, &enicillium, %porotric+um i 1ucor.
F*J
n albuul oului proaspt, microorganismele sunt absente sau n numr oarte redus, datorit aciunii bactericide a lizozimului ( erment glucidolitic activ a de bacteriile 9ram pozitive%, care se gsete n cantitate apreciabil. 0intre bacteriile patogene pentru om, mai recvent vehiculate prin ou sunt salmonelele, deoarece pot i transmise pe cale vertical de psrile purttoare. $onsumul de ou contaminate cu salmonele, ca atare, sau sub orm de preparate neprelucrate sau insu icient prelucrate termic, constituie o cauz recvent a toxiin eciilor alimentare.
2.3.4.,. M!c)%9!%2" %)3"n!s:u(u! "n!:"(

$orpul animalelor i al omului o er condiii avorabile de dezvoltare pentru numeroase microorganisme/ bacterii, micro ungi i protozoare. #le gsesc pe i n corpul animalelor, suport nutritiv, condiii constante de p= i presiune osmotic, iar n cazul homeotermelor, i condiii de temperatur constante. n cursul vieii intrauterine, organismele animale sunt sterile. 2opularea cu microorganisme ncepe la natere, n timpul trecerii prin vagin i continu prin contactul cu indivizii i obiectele din "ur, prin inspiraie, alimentaie, etc., pe tot parcursul vieii. #le colonizeaz pielea i mucoasele care cptuesc di erite regiuni i caviti ce comunic cu mediul extern/ nazo aringele, con"unctiva, tubul digestiv i cile genitourinare in erioare. Microorganismele asociate cu organismele animale se constituie n cele dou tipuri de microbiot de"a cunoscute/ microbiota autohton i microbiota alohton.
F*>
M!c)%9!%2" "u2%72%n este reprezentat de comuniti de microorganisme a cror asociere cu organismul animal a ost stabilit ilogenetic, n cursul evoluiei comune i a cror structur di er n cursul evoluiei ontogenetice a iecrui individ. @mediat dup natere, colonizarea tegumentelor i a mucoaselor aparente este ortuit i dependent de primele microorganisme ntlnite, un rol important revenind microbiotei organismului matern. 0up cteva sptmni ns, ca urmare a contactului cu ali indivizi i cu diverse medii naturale, organismul nou!nscutului este populat de o microbiot asemntoare celei a adultului sntos. 0eoarece iecare regiune a corpului animal di er din punct de vedere izico!chimic de celelalte regiuni, organismul animal constituie n ansamblul su un mozaic de microhabitate. 2entru a le coloniza, microorganismele trebuie s nving numeroase obstacole, care di er n uncie de natura habitatelor respective. 2rintre acestea se numr sistemele de eliminare mucociliare i peristaltismul intestinal (care ndeprteaz bacteriile nelegate de epitelii%, procesul periodic de ndeprtare a celulelor epiteliale senescente, imunitatea local, variaiile de 2h, competiia cu alte microorganisme, etc. H condiie esenial a colonizrii este complementaritatea care terbuie s existe ntre adezinele bacteriene i receptorii de pe supra aa celulelor epiteliale ale gazdei. $el mai recvent, adezinele sunt reprezentate de imbrii, care se leag de receptori de natur glicoproteic. n ultimii ani s!a semnalat existena unei nrudiri imunologice ntre microorganismele i mucusul sau mucoasa intestinal n care acestea ocup n mod normal un habitat ( =")ne" G. 1**E%.
F*,
2rin urmare, aptul c aceste microorganisme sunt recunoscute ca proprii (,,sel (% de sistemul imunitar al gazdei, constituie un alt actor avorizant al colonizrii habitatelor respective. ntre di eritele specii de microorganisme care alctuiesc microbiota normal a microhabitatelor organismului animal exist un echilibru dinamic, care poart denumirea de eubioz. .uperea acestui echilibru din diverse cauze ( recvent, antibioterapia de lung durat i modi icrile de 2h% se numete disbioz i avorizeaz apariia mbolnvirilor prin multiplicarea n exces a unor specii rezidente, sau prin implantarea microorganismelor strine patogene. M!c)%9!%2" "(%72%n sau strin a organismului animal se compune din microorganismele provenite din mediul extern (aer, ap, sol, alimente% sau de la alte animale. $omparativ cu microbiota autohon, ea are un caracter tranzitoriu deoarece este incapabil s se adapteze la noile condiii i implic posibilitatea de a conine specii patogene. Microorganismul strin poate ocupa doar o ni eliberat de un autohton, atunci cnd aceasta este perturbat i adus la o condiie anormal. $nd sistemul revine la normal, microorganismul autohton i va reocupa nia, eliminnd specia alohton. $apacitatea microorganismelor alohtone de a coloniza un anumit habitat i de a se multiplica n el numai n circumstane anormale reprezint, dup ) a v a g e , *11, (citat de Marnea 9., *11?%, distincia undamental dintre microbiota alohton i cea autohton. $ele mai studiate dintre microhabitatele organismului animal sunt cele o erite de segmentele anatomice ale tubului digestiv. Menionm aptul c la acest nivel, un microorganism poate i autohton pentru un anumit segment i alohton pentru altul, pe
F*+
care!l tranziteaz dup ce s!a desprins din habitatul su natural. 0e exemplu, un microorganism din colon poate i alohton dac provine din segmentele superioare (cavitatea bucal, stomac, intestin subire% sau chiar de la nivelele in erioare colonului (n cazul animalelor copro age%.
3.4.H.G.5. ,icrobiota gastric

Microorganismele a"ung n stomac odat cu alimentele ingerate i apa. 8cest contaminare este oarte accentuat n cazul animalelor copro age (iepure, porc%, care pot ingera zilnic cantiti imense de microorganisme alohtone provenite din ecale. 0eoarece, odat a"unse n stomac, ma"oritatea microorganismelor sunt distruse de aciditatea sucului gastric (2h [ *,, 5F,F% i de enzime, mult vreme stomacul a ost considerat steril. &otui, din coninutul gastric se izoleaz recvent specii acido!tolerante aparinnd genurilor !actobacillus, ,andida i (orulopsis. n numr mai mic au mai ost semnalate/ .i idobacterium spp., ,lostridium spp., %treptococcus spp., 4eillonella spp., &eptostreptococcus spp., .acteroides spp., 0elicobacter spp., .a. 2entru a i considerate ca semni icativ prezente n stomac, microorganismele trebuie s ie prezente la mai muli indivizi investigai i s depeasc densitatea de *-3 celule` ml.
3.4.H.G.3. ,icrobiota intestinului sub!ire

8cest segment al tubului digestiv cuprinde cel puin trei habitate di erite sub aspectul gradientului de 2h/ duodenul (2h apropiat de cel al stomacului %, "e"unul (2h [ J,1 5 >,>% i ileonul (2h [ , 5 ,,3%.
F*1
n duoden i "e"un, din cauza aciditii nc destul de crescute, este prezent un numr redus de specii ( %treptococcus spp., !actobacillus spp. i ,andida albicans%, unele dintre ele iind derivate n mod cert din cavitatea buco aringian. 3umrul acestora poate crete ns, n aclorhidrie i n alte stri patologice. @leonul, datorit 2h!ului uor alcalin, constituie un habitat optim. 0intre speciile prezente n densiti semni icative sunt de menionat cele aparinnd genurilor/ !actobacillus, %treptococcus, .i idobacterium, ,lostridium, .acteroides, 4eillonella, %tap+2lococcus, 'ctinobacillus, crora li se altur bacteriile coli orme i bacilii anaerobi 9ram pozitivi. 8li actorii care limiteaz prezena i multiplicarea bacteriilor n intestinul subire, na ar de aciditate, sunt peristaltismul rapid i existena unor substane care inhib multiplicarea acestora.
3.4.H.G.4. ,icrobiota intestinului gros

.ezervor ma"or de microorganisme, intestinul gros conine o comunitate microbian exterm de complex. #a este alctuit, la cele mai multe mami ere, inclusiv la om, din cteva sute de specii bacteriene, dintre care numai puine au ost cultivate in vitro i identi icate. Ma"oritatea aparine genurilor/ )sc+eric+ia, &roteus, 'erobacter, =usobacterium, .acteroides, )nterococcus, ,lostridium, .a. 0in numrul total al bacteriilor, contrar statisticilor mai vechi, coli ormii reprezint doar -,* ! *U (=")ne" G. 1**E%. Microbiota intestinului gros include i microorganisme alohtone provenite din alimente sau din segmentele superioare ale tubului digestiv. 8 late n tranzit, ele sunt nesemni icative numeric i uncional comparativ cu populaiile microbiene stabile. 0in cauza tranzitului lent, care permite multiplicarea bacteriilor, n ultimul segment al intestinului gros (rectum% numrul
FF-
acestora atinge densiti enorme/ aproximativ *-*- celule bacteriene`gram, ceea ce reprezint *-U din greutatea coninutului total al colonului sau FJU din greutatea uscat a ecalelor. 8ceast micro lor des oar o activitate metabolic considerabil, n cea mai mare parte bene ic pentru organism/ la ierbivore ermenteaz celuloza, punnd la dispoziia organismului o surs suplimentar de energie< ! sintetizeaz cantiti importante de vitamine din grupul B, vitamina 4, vitamina 22, acid pantotenic, acid olic, etc., acoperind o parte din necesarul organismului. 8spectele negative legate de prezena microbiotei intestinale constau n eliberarea de produi toxici (indol, scatol, amoniac, etc.% prin hidroliza enzimatic a unor proteine i aminoacizi. 0eoarece membranele celulare ale epiteliului intestinal sunt extrem de permeabile a de amoniac i din cauza toxicitii cronice a acestui catabolit, se consider c microbiota colonului ar avea rol n geneza unor boli, printre care i cancerul de colon. !
3.4.H.G.:. ,icrobiota rumenului

)ucurile digestive la ierbivore, ca i la celelalte mami ere, sunt lipsite de enzime digestive pentru celuloz i alte polizaharide complexe (pectine, amidon, etc.%, dei acestea reprezint substratul de baz al nutriiei lor vegetale. 0in aceast cauz, ierbivorele olosesc microorganismele celulozolitice prezente n tubul digestiv pentru a asigura trans ormarea substanelor polizaharidice complexe n orme solubile i asimilabile. $ontribuia microorganismelor la nutriia gazdei este di erit n uncie de compartimentul n care i des oar activitatea. ;a erbivorele nerumegtoare, degradarea esuturilor vegetale are loc, dup digestia n stomac i intestinul subire, ntr!un cecum
FF*
lrgit i uneori oarte lung, unde gradul de digerare a celulozei i a altor polizaharide este de F- 5 3- U. ;a iepuri i la cobai aceast ine icien este parial compensat prin copro agie.
2.3.4.4. Re("A!!(e ec%(%3!ce "(e 9"c2e)!!(%)

ntre speciile bacteriene componente ale microbiocenozelor, ntre acestea i alte categorii de microorganisme care colonizeaz un habitat sau se gsesc n tranzit (virusuri, micromicei, protozoare%, precum i ntre microorganisme i macroorganisme, apar interaciuni care pot i grupate n trei categorii/ indi erente (neutralism%, de tip bene icial sau cooperant i de tip antagonic.
3.4.H.H.5. "ela!ii ecologice interbacteriene i ale bacteriilor cu alte microorganisme

Neu2)"(!s:u(, care presupune lipsa unor in luene reciproce ntre dou sau mai multe specii, este considerat de muli cercettori ca o relaie puin probabil n natur sau, n orice caz, cu o importan minim. #l este ntlnit atunci cnd populaiile microbiene sunt destul de ndeprtate unele de altele i n cazul microorganismelor oarte di erite sub raportul exigenelor nutritive, care nu competiioneaz pentru aceiai nutrieni. In2e))e("A!! :!c)%9!ene de 2!& 9ene@!c!"( >c%%&e)"n2? .elaiile de tip bene icial sau cooperant presupun ca cel puin una dintre speciile care interacioneaz s aib un bene iciu. n uncie de gradul de reciprocitate al bene iciului, de gradul de dependen care se creaz ntre speciile partenere i de e ectele
FFF
aciunii cooperante a bacteriilor asupra substratului, relaiile bene iciale pot i de mai multe eluri. 5. *omensalismul sau metaboliza este un tip de relaie n care una dintre specii pro it de asociere, iar cealalt, n aparen, nici nu pro it i nici nu este in luenat negativ. .elaiile comensale, la rndul lor, mbrac mai multe aspecte. .elaii n care bene iciul const n punerea la dispoziia bacteriei care pro it, a unei substane nutritive necesare activitii ei vitale, care este un metabolit produs de cealalt bacterie. 2e baza unui asemenea tip de relaie se realizeaz circulaia n natur a principalelor elemente biogene (3, $, )%, unele specii bacteriene producnd substratul necesar celorlalte. Cn exemplu n acest sens l constituie bacteriile din sol care oxideaz nitriii n nitrai (7itrobacter, 7itroc2stis% i care nu se pot dezvolta dect n prezena bacteriilor care oxideaz n prealabil amoniacul n nitrii (7itrosomonas, 7itrosoc2stis%, urnizndu!le subsatana azotat absolut necesar nutriiei. .elaii n care una dintre bacteriile asociate urnizeaz celeilalte un actor de cretere esenial. Cn exemplu tipic pentru acest gen de relaie este asocirea dintre hemo ili ! bacterii care reclam prezena n mediul de cultur a actorului E (380 sau 3802 % ! i unele specii capabile s!l sintetizeze, desemnate din acest considerent cu termenul de doic/ sta ilococi albi, .acillus spp., )nterococcus aecalis, &seudomonas aeruginosa, %arcina lutea, levuri (Bu!uc G. 1*** %. $oloniile de 0aemop+ilus se dezvolt cu precdere limitro coloniilor!doici, datorit concentraiei mari de actor E n aceast zon, enomen ce poart denumirea de satelitism8.
FF3
.elaii n care bene iciul rezult din degradarea sau neutralizarea unei substane cu e ect nociv pentru partener. 8st el, )sc+eric+ia coli i ali 9ram negativi produc penicilinaz ! enzim cu a"utorul creia degradeaz penicilina, crend condiii de multiplicare bacteriilor penicilinosensibile . .elaii bazate pe modi icarea mediului, ast el nct acesta devine avorabil pentru comensal, sub raport iziologic. Microorganismele aerobe i acultativ anaerobe, consumnd oxigenul, diminueaz potenialul redox al mediului i creaz condiii avorabile pentru anaerobii strici. Cn exemplu caracteristic este cel al gangrenei gazoase, n care bacteriile contaminante creaz condiiile necesare pentru dezvoltarea agenilor patogeni speci ici (,lostridium per ringens, ,lostridium oedematiens, ,lostridium septicum, etc.%.
3. 'imbioza este o relaie cu caracter speci ic i permanent (se creaz o dependen complementar ntre parteneri%, n care bene iciul este bilateral. 8cest tip de relaie este ntlnit mai recvent la cianobacterii, licheni i protozoare. 4. ,utualismul sau simbioza nutri!ional reprezint o relaie ntre dou specii de microorganisme, care au nevoie una de alta pentru dobndirea anumitor metabolii eseniali. )pre deosebire de simbioza propriu!zis, n cadrul relaiilor mutuale asocierea nu este permanent i nu constituie o condiie sine >ua non a existenei celor doi parteneri. .elaia poate i pus n eviden pe medii de cultur de iciente, n care nici unul dintre microorganisme nu poate crete separat. )peciile 0aemop+ilus canis i 0aemop+ilus parain luenzae, de exemplu, nu cresc atunci cnd sunt nsmnate separat n ap peptonat, dar, dac sunt asociate ormeaz pe acelai mediu culturi abundente. 8naliza activitii lor metabolice a artat c iecare dintre
FF?
ele realizeaz sinteza unui actor de cretere absolut indispensabil celeilalte, care ns nu are capacitatea de a!l elabora/ 0. canis sintetizeaz actorul E, iar 0. parain luenzae, actorul G (hematina%. Cn alt exemplu l constituie asocierea 1ucor 5 *+odotorula, dou ciuperci microscopice care nu cresc pe medii lipsite de tiamin (vitamina B*%. $ultivate mpreun, ele nu mai necesit aport exogen de tiamin, deoarece 1ocor sintetizeaz o parte din molecula vitaminei (nucleul tiazolic% iar *odot+orula, cealalt parte (nucleul pirimidinic%. :. 'inergismul este o relaie acultativ, n care dou bacterii care se multiplic la nivelul aceluiai biotop produc un e ect (degradare, sintez, leziune, etc.% pe care nici una dintre ele nu este capabil s!l produc singur. .elaia este ntlnit n mediile naturale, n cadrul microbiocenozelor organismului animal i chiar n etiopatogeneza unor in ecii. 8st el, arginina este descompus pn la stadiul de putrescein numai prin aciunea sinergic a speciilor )sc+eric+ia coli i %treptococcus aecalis< pigmentul prodigiosina poate i sintetizat uneori de tulpini apigmentogene de %erratia marcescens cultivate mpreun< n pododermatita in ecioas a bovinelor i ovinelor, specia .acteroides nodosus declaneaz procesul patologic, iar =usobacterium necrop+orum i alte specii asociate n mod constant (sta ilococi, actinomicete, treponeme, etc.% poart responsabilitatea tabloului lezional. .elaiile sinergice dintre microorganisme au gsit aplicaie n diverse domenii de activitate, printre care i industria laptelui. Maelele obinute din asocierea unor bacterii lactice (%treptococcus lactis, %. cremoris, !actobacillus acidop+2lus, etc.%, din bacterii i levuri, sunt utilizate la prepararea di eritelor produse lactate, pentru a le con eri caliti gustative speci ice.
FFJ
In2e))e("A!! :!c)%9!ene de 2!& "n2"3%n!s2 .elaiile de tip anatagonist presupun un e ect ne avorabil sau nociv al unuia dintre parteneri pentru cellalt. n uncie de mecanismul de aciune, relaiile antagonice pot i, la rndul lor, de mai multe eluri. Parazitismul este un tip de relaie n care un microorganism se multiplic pe seama celuilalt, distrugndu!l. H relaie tipic de parazitism n lumea microorganismelor este bacterio agia ! enomenul de parazitism al virusurilor bacteriene, numite i bacterio agi sau agi, n celula bacterian. # ectul multiplicrii bacterio agilor de ctre celula bacterian este liza celulei gazd (bacterioliza%. #l este vizibil n gazonul bacterian pe medii solide, sub orma unor discontinuiti circulare numite Ipla8e(. )peci icitatea de gazd a bacterio agilor a permis valori icarea enomenului de bacterio agie n scopul identi icrii unor genuri i specii bacteriene prin test agic ( %almonella spp., .rucella abortus, .acillus ant+racis, etc.%, i al crerii de subdiviziuni n cadrul unor specii ( agovariante, agotipuri sau lizotipuri%. Kagotipizarea este util mai ales n stabilirea ilierelor epidemiologice a unor in ecii bacteriene cum sunt cele produse de %almonella t2p+i, %tap+2lococcus aureus, &seudomonas aeruginosa, .a. 2arazitarea unei bacterii de ctre o alt bacterie este un enomen mai rar ntlnit dect bacterio agia, dar care are acelai rezultat / bacterioliza. Cn caz oarte cunoscut este endoparazitismul speciei .dellovibrio bacteriovorus la numeroase bacterii din genurile )sc+eric+ia, %almonella, %erratia, &roteus, &seudomonas,
FF>
%treptococcus, etc. 0atele de microscopie electronic arat c, dup un atac mecanic direct asupra peretelui celular, oarte probabil asociat cu aciunea unei exoenzime, parazitul ptrunde n celula 5 gazd determinnd dezorganizarea i digestia coninutului celular pe seama cruia crete i se multiplic, producnd n cele din urm liza celulei parazitate. *ompeti!ia este o interaciune cu importan undamental pentru toate organismele i probabil cea mai important ca mecanism selectiv. #a este observat recvent n cazul microorganismelor stabilite n acelai habitat, care au nevoie de aceiai nutrieni, iar acetia se gsesc n cantiti limitante, adic prea mici pentru a le satis ace cerinele. Cnii cercettori extind conceptul de competiie, de la nutrieni, la spaiu, lumin, oxigen i oricare alt necesitate comun a de o surs limitat a biotopului comun. )pre deosebire de parazitism, n competiie in luenele adverse se realizeaz indirect, prin lupt bilateral pentru satis acerea unor necesiti comune. )pecia privilegiat este aceea care se multiplic mai repede, eliminnd din biotop specia sau speciile competitoare care au un ritm de multiplicare mai lent.
FF,
F!3.53 *ompeti!ia dintre 8sc.eric.ia coli i 'tap.ylococcus aureus

3dup "ber+o er i =razier, ;HD;, citat de Jarnea <., ;HHB)
Cn exemplu n acest sens l constituie evoluia n culturi mixte a speciilor ). coli i %. aureus. Kigura 53 prezint curbele de cretere, practic identice, n culturi monospeci ice i e ectul cultivrii lor asociate. )e observ diminuarea net a numrului de celule bacteriene aparinnd speciei %. aureus, determinat de ritmul mai rapid de multiplicare a ). coli, care, consumnd nutrienii, limiteaz creterea speciei asociate.
FF+
Cn alt avanta" pentru o specie a lat n competiie, pe lng viteza mai mare de multiplicare, este mobilitatea. Bacteriile invadante, care roiesc de obicei pe supra aa mediilor solide, sunt capabile s ocupe un habitat naintea celor imobile i a celor cu un aparat ciliar mai puin activ. $ompetiia este observat recvent in vitro pe plcile 2etri/ coloniile oarte apropiate ntre ele, care competiioneaz pentru spaiu i nutrieni, sunt mult mai mici comparativ cu cele distanate. 0e asemenea, n culturile mixte nu se a"unge niciodat la densitatea maxim observat n culturile monospeci ice, deoarece, n ma"oritatea cazurilor, exist o specie avanta"at prin viteza de multiplicare i`sau mobilitate, care va inhiba multiplicarea celorlalte prin spolierea mediului n nutrieni eseniali. n condiii naturale, competiia dintre microorganisme este in luenat i de o serie de parametri abiotici ai mediului (2h, temperatur, concentraia oxigenului sau a srurilor, etc.%, care pot a ecta viteza de cretere a populaiilor de microorganisme. 8cest enomen este evident n cazul populaiilor de bacterii psichro ile i psichrotro e, care, prezente asociat, competiioneaz pentru aceiai nutrieni. ;a temperaturi "oase sunt avanta"ate microorganismele psichro ile, care se multiplic cu viteze mai mari, putnd exclude psichrotro ele. ;a temperaturi mai ridicate, situaia se inverseaz, iind avanta"ate psichrotro ele. n habitatele cu variaii periodice de temperatur, avanta"ele evolueaz cnd ntr!un sens, cnd ntr!altul, determinnd predominana uneia sau alteia din cele dou populaii. $ntagonismul propriu0zis sau antibioza se realizeaz prin intermediul unor substane sintetizate i eliminate n mediu de unele specii microbiene, care exercit un e ect nociv asupra altor specii. n uncie de natura acestor substane i de modalitatea de aciune, antagonismul microbian poate i speci ic i nespeci ic.
FF1
$ntagonismul specific se realizeaz pe baza unor substane sintetizate de unele specii de bacterii i ungi, denumite antibiotice. n uncie de toxicitatea pentru celula animal i de spectrul antibacterian, antibioticele se mpart n dou categorii/ antibiotice propriu!zise i bacteriocine. 2rimul antibiotic a ost descoperit de 8 l e x a n d e r K l e m i n g n *1F1, n urma sesizrii antagonismului exercitat de o ciuperc din genul &enicillium a de sta ilococ. 2lecnd de la observaia lui K l e m i n g, o echip de cercettori de la Cniversitatea din Hx ord, condus de $ h a i n i K l o r A, a reuit n *1?- s extrag din culturile de &enicillium i s puri ice substana activ cu e ect antibiotic (penicilina%, introducnd!o pe scar larg n terapia in eciilor. n anii urmtori au ost identi icate i extrase numeroase alte antibiotice. $ele mai multe se obin din actinomicete aparinnd genului %treptom2ces (streptromicina, cloram enicolul, tetraciclina, eritromicina, etc.%, din bacterii aparinnd genului .acillus (polimixina, bacitracina, etc.% i din ciuperci microscopice, cum este cazul genurilor &enicillium i ,ep+alosporium (penicilina, ce alosporina, etc.%. 2e lng antibioticele de biosintez, exist numeroase antibiotice obinute prin sintez chimic i semisintez. 8ntibioticele acioneaz selectiv, numai asupra celulei bacteriene (ma"oritatea avnd un e ect bacteriostatic%, iind lipsite de nocivitate pentru celula animal. #le pot i clasi icate dup mai multe criterii/ compoziia chimic, spectrul antibacterian, mecanismul de aciune, etc. 2e baza spectrului antibacterian, antibioticele se mpart n / "n2!9!%2!ce de 2!& &en!c!(!n!c, predominant active a de bacteriile 9ram pozitive (penicilina, eritromicina, novobiocina, etc.%< "n2!9!%2!ce de 2!& s2)e&2%:!c!n!c, predominant active a de bacteriile 9ram negative (streptomicina, neomicina, 7anamicina, polimixina B, etc.%<
F3-
"n2!9!%2!ce cu s&ec2)u (")3, active a de bacteriile 9ram pozitive i 9ram negative (tetraciclinele, cloram enicolul, ce alosporinele, etc%. 2e baza mecanismului de aciune, antibioticele pot i grupate ast el / "n2!9!%2!ce cu e@ec2 !n7!9!2%) asupra sintezei peretelui celular, care blocheaz di erite aze ale sintezei peptidoglicanului (penicilina, ce alosporinele .a.%< "n2!9!%2!ce c")e "(2e)e"B !)e;e)s!9!( structura membranei citoplasmatice i implicit uncia de barier osmotic a acesteia, ast el nct celula pierde ioni eseniali pentru des urarea normal a metabolismului (polimixina B, nistatina, colistina, .a.%< "n2!9!%2!ce cu e@ec2 de)e3("2%) asupra transcrierii sau traducerii in ormaiei genetice, care acioneaz prin blocarea replicrii 803, blocarea azei de iniiere a transcrierii in ormaiei genetice de pe 803 pe 8.3 mesager, modi icarea secvenei aminoacizilor n cursul sintezei lanurilor peptidice prin schimbarea con ormaiei ribozomilor, etc. Kiecare specie bacterian se caracterizeaz printr!un spectru de sensibilitate i de rezisten natural la antibiotice, controlat genetic de gene cromozomale sau plasmidice. 8cest spectru se poate modi ica datorit posibilitii dobndirii antibiorezistenei prin di erite mecanisme genetice i biochimice. Mecanismele genetice de dobndire a rezistenei la antibiotice sunt mutaiile la nivel cromozomal (cu o rata de *-!J ! *-! ** % i recombinrile genetice consecutive primirii de material genetic exogen prin trans ormare, transducie, con"ugare. .olul cel mai important n dobndirea antibiorezistenei l are, ns, trans erul plasmidelor .. Mecanismele biochimice de rezisten la antibiotice constau n/
F3*
inactivarea antibioticului n a ara celulei bacteriene cu a"utorul unor exoenzime< stoparea accesului n celul< alterarea sediului!int al antibioticului. 2ractica medical i cea veterinar trebuie s urmreasc limitarea posibilitilor de dobndire a antibiorezistenei de ctre bacterii, prin utilizarea ct mai raional a antibioticelor n scopuri terapeutice i olosirea ct mai limitat i mai atent supravegheat a deeurilor rezultate de la abricarea antibioticelor, ca biostimulatori n zootehnie. &endina actual este de nlocuire a acestora ntr!o proporie ct mai mare, mai ales n reetele ura"ere, cu probioticele. B"c2e)!%c!ne(e reprezint o clas special de substane antibiotice cu aciune bactericid, sintetizate de un numr mare de specii bacteriene purttoare de in ormaie genetic speci ic, coninut n plasmidele ,,col(. 2rimele bacteriocine au ost identi icate i descrise la specia )sc+eric+ia coli de 8 n d r ^ 9 r a t i a (*1FJ%, care le!a dat denumirea generic de Icolicine(. Clterior, deoarece s!au identi icat substane asemntoare la numeroase alte specii bacteriene, s!a creat termenul mai general de Ibacteriocine(, iar n uncie de specia bacterian care le produce, ele au primit denumiri inspirate din epitetul de gen (listeriocine, vibriocine, etc.% sau de specie (colicine, piocine ]elchicine, etc.%. 0in punct de vedere al structurii, bacteriocinele se mpart n dou categorii/ bacteriocine cu nivel de organizare molecular i bacteriocine cu structur corpuscular, vizibile electronooptic, asemntoare cu bacterio agii sau cu ragmente din particula agic (capete, dar mai ales cozi%. Bacteriocinele produse de bacteriile 9ram!negative au un spectru ngust de activitate, limitat, n cele mai multe cazuri, la tulpini bacteriene din aceeai specie sau aparinnd unor specii nrudite taxonomic. Bacteriocinele 9ram!pozitivilor sunt lipsite de speci icitate, iind active a de unele bacterii 9ram!pozitive ndeprtate taxonomic de specia productoare.
F3F
Mecanismele prin care aceste substane i exercit e ectul bactericid sunt elucidate doar n cteva cazuri. n general, bacteriocinele se leag iniial de celulele sensibile prin intermediul unor receptori speci ici de pe supra aa acestora (asemntor bacterio agilor%, apoi ptrund n interior i acioneaz dereglator asupra unor ,,inte( vitale (metabolism energetic, biosinteza de 803 i 8.3, etc.%. $aracteristica principal a bacteriocinelor, care le deosebete undamental de antibioticele propriu!zise, const n aptul c biosinteza lor are e ect letal asupra celulelor productoare. n acest caz, perpetuarea proprietii de bacteriocinogenez n rndul populaiilor bacteriene se explic prin numrul redus de celule n care acest caracter letal potenial devine actual i prin aptul c restul celulelor bacteriene purttoare de actor ,,col( sunt imune la aciunea colicinei exogene omologe. 2rin urmare, odat elaborat n mediu, o anumit colicin are e ect antibiotic numai asupra celulelor aparinnd aceleeai specii, dar care nu o pot elabora, iind lipsite de actorul ,,col( respectiv. 8vndu!se n vedere aciunea bactericid a tulpinilor purttoare de plasmide ,,col(, centrat n "urul speciei omologe, se poate presupune c enomenul de bacteriocinogenez are un rol de reglare a populaiilor bacteriene n di erite ecosisteme naturale (Bu!uc G. 1***%. n practica diagnosticului bacteriologic, bacteriocinogeneza i bacteriocinosensibilitatea sunt acceptate uneori ca mar7eri ai patogenitii. )!a constatat, de exemplu, c n cadrul speciei )sc+eric+ia coli tulpinile colicinogene sunt de regul i patogene, iar cele bacteriocinosensibile, nepatogene. H alt aplicaie a bacteriocinelor n practica de laborator este bacteriocinotipia. Bacteriocinotipul (bacteriocinovarianta% este o subdiviziune a speciei bacteriene care grupeaz toate tulpinile sensibile la aceleai bacteriocine. Bacteriocinotipia are implicaii asemntoare cu ago(lizo%tipia, n urmrirea unor iliere
F33
epidemiologice, sau n evidenierea altor proprieti corelate n mod constant cu bacteriocinotipul. $ntagonismul nespecific este impus de speciile bacteriene capabile s produc substane nocive pentru alte specii, asupra crora acioneaz neselectiv (Duc" Eu3en!" C! c%(. 1*4* %. Cn exemplu l constituie bacteriile acido!lactice componenete ale microbiotei normale a intestinului, mucoasei bucale, mucoasei vaginale, care inhib dezvoltarea bacteriilor patogene prin acidi ierea mediului. 2e baza acestui considerent, n tratamentul unor in ecii intestinale se recomand nlocuirea antibioticelor cu preparatele probiotice. Ma"oritatea cercettorilor de inesc drept probiotice, produsele ce conin bacterii vii, n stare vegetativ sau sub orm de spori, care administrate la om i animale mpiedic nmulirea bacteriilor potenial patogene. 2robioticele conin culturi pure sau mixte de tulpini bacteriene aparinnd genurilor !actobacillus (!. acidop+ilus, !. casei, !. +elveticus, !. lactis, !. bulgaricus%, .i idobacterium, %treptococcus (%. t+ermop+ilus%, )nterococcus ( ). +irae%, etc., levuri, sau amestecuri de bacterii i levuri (de exemplu, !actobacillus spp. i %ac+arom2ces spp.%. 8dministrarea de suspensii sau preparate comerciale de !actobacillus acidop+ilus este considerat astzi indispensabil pentru ameliorarea echilibrului microbiotei normale a intestinului, compromis n cursul administrrilor orale de antibiotice cu spectru larg. @ l i a Me c i n i c o v 5 laureat al premiului 3obel ! a ost primul cercettor care a avut ideea nlocuirii terapeutice a micro lorei patogene a tubului digestiv, cu o micro lor ,,impusI ormat din lactobacili i streptococi, prin consum de iaurt i lapte btut (Duc" Eu3en!" C! c%(. 1*4*- C")&#C)")e M. 1**1%.
F3?
$aracteristicile unui bun probiotic nsumeaz/ lipsa de patogenitate i toxicitate pentru organismul animal< capacitatea de a supravieui i de a i metabolic activ n mediul gastro!intestinal< e ectele bene ice asupra organismului< accesibilitatea din punct de vedere economic. # ectele produselor probiotice sunt, n principal, urmtoarele/ *. reducerea numrului unor grupe de microorganisme cu potenial patogen, prin producerea de metabolii cu e ect toxic (acizi organici, =FHF, antibiotice% i`sau prin competiie pentru nutrieni sau pentru situsurile de adeziune de pe supra aa epiteliilor intestinale (experimental, s!a demonstrat c !actobacillus spp. ader la peretele intestinal, rezistnd la cel puin patru splri succesive cu soluie tampon%< F. stimularea creterii animalelor prin stimularea apetitului, mbuntirea conversiei hranei i protecia o erit a de in eciile intestinale ( ig. J??< 3. e ect anticancerigen (n special, !actobacillus spp.% prin inhibarea creterii celulelor tumorale sau supresia bacteriilor care produc enzime (beta!glucuronidaz, nitroreductaz% rspunztoare de eliberarea unor substane cancerigene din compui ino ensivi< ?. stimularea imunitii prin creterea activitii macro agelor sau a concentraiei imunoglobulinelor anticorp ! e ect condiionat de trecerea probioticelor n circulaia general (B e a l m e r i col. citai de =")ne" G. 1**E%. 0up cum s!a demonstrat, lactobacilii pot strbate mucoasa intestinal, supravieuind cteva zile n splin, icat i pulmon.
F3J
8nimal nou nscut
Contact li"itat cu "ediul (i cu or$ani "ul "atern
>ezvoltare nor"al+/o i&ilitate de conta"inare din "ediu
<icro&iot de!icitar 2neprotectoare)
<icro&iot nor"al co"plet
<icroor$ani "e pro&iotice
&rotecie
F3>
F!3. 5E
"eprezentarea sc.ematic a modului de interven!ie al microorganismelor probiotice 3dup Jarnea <., ;HHB)
3.4.H.H.3. "ela!ii macroorganisme
ecologice
ntre
bacterii
ntre bacteriile componente ale microbiotei rezidente (autohtone% i tranzitorii (alohtone% a organismelor animale i vegetale i gazd se stabilesc relaii de tip cooperant sau antagonic, asemntoare celor existente ntre microorganismele care interacioneaz. Re("A!!(e de 2!& 9ene@!c!"( *omensalismul este relaia dintre organismul animal i ma"oritatea bacteriilor rezidente pe tegumente i mucoase, unde gsesc surse de hran (celule descuamate, mucus% i condiii de multiplicare, de care bene iciaz r a pre"udicia gazdei. 'imbioza reprezint tipul de interaciune al bacteriilor din tubul digestiv al ierbivorelor cu animalul!gazd. 2rin activitatea lor biologic, aceste bacterii degradeaz unele polizaharide inaccesibile enzimelor digestive (celuloza, hemicelulozele, lignina, etc.%, trans ormndu!le n produi absorbabili cu un potenial energetic de obicei considerabil. &otodat, bacteriile intestinale i cele ruminale sintetizeaz ma"oritatea vitaminelor complexului B. 8lte activiti biosintetice de natur bacterian au ca rezultat convertirea unor compui simpli care conin n molecula lor azot, n proteine microbiene, digerabile prin aciunea unor enzime proteolitice prezente n segmentele posterioare ale tubului digestiv. .elaiile de tip simbiotic ntre bacterii i plante sunt cunoscute ndeosebi la leguminoase, care preiau azotul atmos eric
F3,
prin intermediul bacteriilor ixatoare de azot din genul *+izobium, prezente n nodozitile de pe traiectul rdcinilor. n categoria interaciunilor cooperante micro!macroorganism se situeaz i antagonismul impus microorganismelor alohtone patogene de ctre microbiota normal, prin ocuparea nielor anatomice, elaborarea de substane antibiotice, competen mai mare n utilizarea nutrienilor i a altor resurese din habitat, etc. Re("A!!(e de 2!& "n2"3%n!c 2rincipala relaie con lictual macro!microorganism este in ecia (lat. in icere [ a otrvi, a deteriora%. n sens larg, prin in ecie se nelege ptrunderea i multiplicarea microorganismelor patogene n organismele cu organizare superioar, precum i reacia de rspuns pe care o provoac acestora. #a poate mbrca orma unei stri poteniale (in ecie inaparent clinic sau latent%, nsoit doar de restructurarea imunologic a organismului, sau poate avea o evoluie asociat cu perturbarea strii normale de sntate a organismului!gazd i cu enomene de discon ort caracteristice strii de boal (boala in ecioas%. @n ecia este o interrelaie ecologic dinamic, la apariia i evoluia creia particip activ ambii parteneri/ microorganismul prin mecanismele sale de patogenitate i organismul!gazd prin actorii aprrii antiin ecioase (genetici, iziologici, imunologici%. 3umeroi actori endogeni i de mediu pot in luena aceast relaie de tip con lictual n avoarea unuia sau a celuilalt partener.
F3+
$ATOGENITATEA BACTERIILOR I MECANISMELE EI &ermen discutabil din punct de vedere semantic, patogenitatea de inete n sensul cel mai larg, aptitudinea unui microb de a determina, n mod natural sau n condiii experimentale, un e ect nociv asupra organismului!gazd. 2atogenitatea bacteriilor este legat n general de parazitismul lor, dei cele dou proprieti nu sunt superpozabile. 2rincipalele nsuiri care condiioneaz patogenitatea intrinsec a bacteriilor sunt virulen!a i to7icitatea6 la care se adaug uneori capacitatea de sensibilizare alergic a organismului. A. 'IRULENA I FACTORII DE 'IRULEN/ '!)u(enA" reprezint capacitatea bacteriilor de a coloniza la poarta de intrare (de a se adapta i de a se nmuli% i, eventual, de a invada umorile i esuturile, evitnd sau neutraliznd mecanismele de aprare nespeci ic ale gazdei. Kactorii care con er bacteriilor virulen sunt reprezentai de structuri ale celulei bacteriene i enzime. #i pot i grupai n uncie de modalitatea de aciune n dou categorii/ actori de colonizare i ptrundere n organism i actori de invazie . 1. F"c2%)!! de c%(%n!B")e C! &2)unde)e Fimbriile -pilii) de aderen! i alte adezine (acizii lipoteichoici, proteinele membranei externe a bacteriilor 9ram! negative, etc.%, asigur legarea bacteriilor de epiteliile mucoaselor dar i de celulele epiteliale cheratinizate, endotelii,
F31
dini, etc., mpiedicnd ast el eliminarea lor prin luxul di eritelor secreii, tuse, micarea cililor, peristaltism. &otodat, se creaz posibilitatea de acces a bacteriilor patogene la nutrieni, temperatur avorabil, protecie a de anticorpi i lizozim, etc. $a dovad, celulele de )sc+eric+ia coli aderente la epiteliul intestinal, dup o perioad de lag mai scurt, se multiplic mult mai intens dect celulele neaderente. ;egarea este condiionat de existena unor receptori celulari speci ici adezinelor bacteriene, avnd uneori un important grad de selectivitate. 8st el, imbriile de tip ! * permit aderarea la mucoasa intestinului gros, iar imbriile 2 sau 2ap ( &2elonep+ritis associated pili% i adezina -,JG avorizeaz colonizarea cilor urinare (=")ne" G. 1**E%. \n baza acestei speci iciti, %treptococcus p2ogenes i ,or2nebacterium dip+teriae ader la epiteliul aringian, )sc+eric+ia coli enteropatogen i 4ibrio c+olerare ader la mucoasa "e"un!ileonului, iar 7eisseria gonorr+oeae ader n mod special la epiteliul uretral i cervical (Duc" Eu3en!" C! c%(. 1*4*%. $ele mai multe bacterii au ns dou sau mai multe tipuri de adezine cu speci iciti de legare di erite. .olul receptorilor celulari n producerea in eciilor a ost demonstrat r echivoc de ) e l l ] o o d i colaboratorii (citai de Marnea 9., *11?% n *1,J. 2orcii oarte rezisteni la in ecia cu tulpini de )sc+eric+ia coli /FF, productoare de enterite severe, nu au receptori pentru aceast bacterie, spre deosebire de animalele oarte sensibile, care poart numeroi receptori de adezine. \n mod asemntor, sensibilitatea omului la pielone rita cu )sc+eric+ia coli este corelat cu numrul receptorilor de pe membrana uroepiteliului, oarte variabil de la o persoan la alta. )e pare c n in eciile urinare ascendente cu ). coli uropatogen, colonizarea se datoreaz i lagelilor (cililor ), cu
F?-
a"utorul crora bacteria se deplaseaz contra curentului de scurgere a urinei. Ig $ proteazele reprezint un actor important de colonizare, deoarece permite bacteriilor patogene s supravieuiasc pe supra aa mucoaselor, prin clivarea moleculei anticorpilor de tip @g 8. #le au ost evideniate la %treptococcus pneumoniae, 0aemop+ilus in luenze, 7eisseria gonorr+oeae, 7eisseria meningitidis, etc. 2trunderea n organism a bacteriilor se realizeaz prin mecanisme incomplet elucidate. ;a ma"oritatea speciilor, ea este condiionat de apariia unor discontinuiti accidentale (plgi, microleziuni% sau dis uncii la nivelul barierelor naturale antiin ecioase. Bacteriile oarte mobile i oarte subiri aparinnd genurilor !eptospira, .orrelia i (reponema sunt capabile s ptrund prin mucoase i chiar prin tegumentele intacte. ,obilitatea acestor bacterii se datoreaz lagelilor periplasmatici numii i ilamente axiale. Cnele bacterii (ca de exemplu, ,or2nebacterium dip+teriae% sunt dotate cu fimbrii i cu enzime de alterare, prin care produc leziuni locale, crendu!i pori de intrare i coloniznd n mucoas. ;a bacteriile parazite intracelular, mecanismul cel mai recvent de ptrundere n celula!gazd este endocitoza facilitat de parazit prin intermediul unor lipopolizaharide i proteine membranare (procedeu descris la %+igella le5neri, )sc+eric+ia coli enteroinvaziv (#@#$%, 7eisseria gonorr+oeae% i prin mecanisme nc necunoscute (Duc" Eu3en!" C! c%(. 1*4*< =")ne" G. 1**E?.
F?*
Bacteriile endocitate sunt incluse n vacuole delimitate de o membran derivat din membrana celulei!gazd, n interiorul crora se multiplic i supravieuiesc, rezistnd la agocitoz. 2. F"c2%)!! de !n;"B!e @nvadarea organismului este condiionat, n principal, de actorii bacterieni anti agocitari i de enzimele care aciliteaz di uzarea bacteriilor n esuturi. ". F"c2%)!! "n2!@"3%c!2")! de !n7!9")e " Dn3(%9)!! Dn @"3%c!2 C"&su(" reprezint pentru speciile capsulate (.acillus ant+racis, %treptococcus pneumoniae, ,lostridium per ringens% un important actor de virulen, deoarece bacteriile dotate cu acest nveli vscos nu sunt nglobate de leucocitele polimor onucleare neutro ile, prin neaderarea acestora la supra aa bacteriei. $a exemplu clasic de patogenitate datorat n exclusivitate prezenei capsulei, poate i citat pneumococul< tulpinile de tip ) (smooth% capsulate sunt patogene, iar cele de tip . (rough% necapsulate sunt lipsite de patogenitate (vezi e5periena lui <ri it+, cap. de <enetic bacterian%. C%:&uC!! &")!e2"(! ce ac parte din structurile speciale ale peretelui bacterian prezint proprieti anti agocitare bine demonstrate pentru proteina ,,M( a streptococilor beta!hemolitici grup 8, antigenul ,,Ei( prezent la unele specii de %almonella (%. t2p+i, %. parat2p+i ,, %. dublin), antigenul 4 prezent la )sc+eric+ia coli, etc. Cnii autori identi ic aceti actori cu imbriile de virulen, care asigur aderena speci ic la esutul parazitat i implicit rezistena la agocitoz.
F?F
.olul anti agocitar al acestor actori este demonstrat experimental prin anularea virulenei consecutiv tratrii bacteriilor cu ser imun speci ic actorului respectiv/ ser anticapsular, antiprotein M, anti!Ei. C%"3u("B" (!9e), o enzim elaborat de %tap+2lococcus aureus, este din punct de vedere chimic i uncional asemntoare cu protrombina. #a coaguleaz plasma sanguin n "urul celulelor bacteriene, ormnd un manon cu rol antichimiotactic pentru agocite. 8vnd la supra a acest strat protector, bacteriile nu mai sunt recunoscute ca non!sel , iind vorba deci, de un mimetism la scar celular. M%9!(!2"2e", dup B r u b a 7 e r, *1+J (citat de Marnea 9., *11?%, ar constitui un actor important pentru virulen. 8st el, prin capacitatea lor de a se deplasa rapid n mediile vscoase, cum sunt cele din organism, spirichetele ( !eptospira, .orrelia, (reponema% se sustrag procesului de agocitoz, nct leucocitele le captureaz cu mare di icultate. 9. F"c2%)!! "n2!@"3%c!2")! de !n7!9")e " d!3es2!e! Dn @"3%c!2 Cnele bacterii, numite bacterii parazite acultativ intracelular, supravieuiesc n interiorul agocitelor, iar unele reuesc chiar s se multiplice, trans ormnd aceste celule n actori de diseminare a in eciei n organism. .ezistena la digestia n agocit se realizeaz prin mecanisme incomplet elucidate, ce di er de la o specie bacterian la alta (=")ne" G. 1**E%.
F?3
5. mpiedicarea fuziunii fagolizozomale este un mecanism comun, ntlnit la 12cobacterium spp., ,+lam2dia spp., !egionella pneumop+ila, etc., dar care are baze moleculare di erite. 8st el, la 12cobacterium tuberculosis, uziunea este blocat de ,,cord! actor(! o glicolipid (>,>!dimAcoltrehaloza% din structura peretelui celular< la 12cobacterium microti, prin creterea concentraiei intracelulare a 8M2< la ,+lamidia psittaci, prin modi icarea structurii membranei agozomului n care este coninut. 3.8vadarea din fagozomi la scurt timp dup ptrunderea n celule a ost descris la ric7ettsii (*ic@ettsia mooseri, *ic@ettsia tsutsugamus+i%. Cn rol esenial n acest proces l are os olipaza 8, care atac membrana agozomului. 4."ezisten!a la ac!iunea enzimelor lizozomale n macro agele din organismul neimunizat este ntlnit la unele bacterii 9ram!pozitive (!isteria monoc2togenes, )r2sipelot+ri5 insidiosa%, la numeroase genuri 9ram!negative (%almonella, .rucella, Lersinia, %+igella, ,o5iella, =rancisella, 0aemop+ilus% i la bacteriile acidorezistente (12cobacterium spp.%. Mecanismele rezistenei sunt incomplet cunoscute. ;a unele specii, se pare c actorul care opune rezisten enzimelor lizozomale l constituie lipidele de perete ( actorul cord, lipopolizaharidele 9ram!negativilor%. c. A3)es!ne(e # enB!:e c")e @";%)!Be"B d!@uB")e" Dn Aesu2u)! ?ialuronidazele sunt exoenzime care cliveaz acidul hialuronic din structura substanei undamentale a esutului con"unctiv, realiznd ast el permeabilizarea barierelor iziologice (epiteliale, mucoase, tisulare%, avorabil di uzrii bacteriilor n organism.
F??
#le sunt sintetizate sta ilococi, clostridii, etc.
de
streptococii
beta!hemolitici,
Fibrinolizinele produc liza barierei de ibrin pe care organismul o ormeaz n "urul ocarelor in lamatorii pentru a limita diseminarea germenilor n esuturi. 2rin intermediul acestor agresine, unii sta ilococi i streptococi determin in ecii septicemice. *olagenaza, enzim puternic proteolitic elaborat de ,lostridium per ringens, hidrolizeaz colagenul din structura esutului con"unctiv, crend ast el bree adnci pe care apoi le invadeaz. 8lte enzime bacteriene, ca proteazele, lipazele, dezoxiribonucleaza, ureaza, os ataza acid, etc., r a avea o valoare deosebit n determinarea patogenitii, o poteneaz. +. T)II*IT$T8$ +$*T8"IIJ)" &oxicitatea este proprietatea unor bacterii de a exercita un e ect alterativ sau dereglator asupra unui organism neimunizat, prin componente structurale sau prin secreii celulare, numite toxine. #le sunt neutralizate n organismul imunizat ( C")&# C)")e M., 1**1< Duc" Eu3en!" 1*4E%. @deea c unele mani estri patologice sunt produse de anumite substane chimice (,,sepsine(% a ost ormulat pentru prima dat de 4 l e s s (*+,F%, re erindu!se la leziunile produse de sta ilococi. ; R l e r (*++-% a demonstrat aptul c specia ,or2nebacterium dip+teriae rmne localizat n nazo aringe, iind absent in organele interne (miocard, rinichi, icat, sistem
F?J
nervos, etc.%, care sunt cele mai a ectate de leziunile produse la distan de locul in eciei. 4 o c h (*++?% a descris holera ca pe observaiilor c agentul patogen rmne invadeze structurile acestuia i esuturile administrarea oral a iltratului de cultur timp ce, pe cale parenteral este ino ensiv. o toxicoz, pe baza n intestin, r s nvecinate. n plus, reproduce boala, n
. o u x i L e r s i n (*+++% au olosit primii termenul de ,,toxin(, pe care o considerau ,,un el de enzim(. n prezent, termenul de inete orice substan toxic de provenien biologic, sintetizat de bacterii, ungi (micotoxine%, celule vegetale sau animale (=")ne" G. 1**E%. &ermenul de ,,otrav( este rezervat substanelor chimice organice sau anorganice (stricnin, sruri de argint, arseniu, etc.% care, introduse ntr!un organism pe diverse ci, produc leziuni celulare sau tisulare, perturbarea sau suspendarea unor activiti iziologice normale i, n uncie de doz, chiar moartea organismului. C("s!@!c")e" 2%I!ne(%) 9"c2e)!ene 8u ost propuse mai multe sisteme de clasi icare a toxinelor. 2robabil, aptul c nici unul nu satis ace exigenele unei clasi icri riguros tiini ice, explic utilizarea curent (cu toat ambiguitatea sa% a conceptului dualist de mprire n e7oto7ine (toxine extracelulare% i endoto7ine (legate de corpul bacterian sau reinute n celul%. 2rincipalele di erene ntre cele dou categorii de toxine sunt sintetizate n tabelul numrul +. \n uncie de esutul sau celula int asupra crora acioneaz i e ectul pe care!l produc, se cunoate o mare varietate de toxine/
F?>
hemolizine, leucocidine, neurotoxine, toxine cu e ect necrotic, enterotoxine, etc. ?emolizinele sunt enzime bacteriene care determin n principal liza globulelor roii dar i a altor categorii de celule (leucocite, trombocite, celule tisulare%. #le au ost puse n eviden la numeroase specii bacteriene/ ,lostridium tetani, ,lostridium per ringens, ,lostridium septicum, sta ilococi, streptococi, enterobacteriacee, etc. Jeucocidinele sunt actori eliberai de unele bacterii dup nglobarea lor n agocite, determinnd moartea acestora. Bacteriile T"9e(u( + C")"c2e)e d!s2!nc2!;e Dn2)e eI%# C! end%enB!:e
C")"c2e)u( d!@e)enA!"( $ategorii de bacterii productoare $ompoziia chimic EI%2%I!ne 9ram!pozitive End%2%I!ne 9ram!negative
2roteine
*.;ipopolizaharide (;2) prezente n membrana extern a peretelui celular la toate bacteriile 9ram! negative%< F.2roteine holeric i shiga% (toxina toxina
Mecanismul eliberrii din celul
)unt eliminate pe parcursul sintezei. $oncentraia in! tracelular este

F?,
0ezintegrarea celulei
negli"abil. )ensibilitatea la >-- $ i la enzi!mele proteolitice # ectul toxic Modul separare de )ensibile .elativ rezistente
)peci ic i puternic n doze mici 2rin iltrarea sau centri ugarea culturilor
3especi ic i slab 0ezintegrarea celulelor bacteriene prin metode/ @!B!ce (ultrasonare, nghe! dezghe%< c7!:!ce (tripsin, acid tricloracetic%< 9!%(%3!ce (bacterio agi% 3u se trans orm n anatoxine
.spunsul la aciunea ormo!lului -,?U i a cldurii (?-$%
)e trans orm n anatoxine (toxoizi% netoxice dar antigenice
@munogenitat 2uternic (induc ormarea e unor cantiti mari de anti! corpi antitoxici neutra! lizani%
)lab
productoare de leucocidine, ca sta ilococii i streptococii, sunt denumite bacterii ,,piogene(, deoarece leucocitele moarte se acumuleaz n ocarul in lamator, contribuind la ormarea puroiului. 1euroto7inele sunt exotoxine cu tropism pentru esutul nervos, determinnd tulburri n transmiterea in luxului nervos ctre organele e ectoare. 2rincipalele specii productoare de
F?+
neurotoxine sunt ,lostridium tetani (toxina tetanic%, ,lostridium botulinum (toxina botulinic% i %+igella d2senteriae (toxina shiga%. To7inele cu efect necrotic acioneaz asupra esuturilor, determinnd moarte local prin citoliz sau citotoxicitate. .eprezentative pentru aceast categorie sunt toxina di teric i lecitinaza. &oxina di teric (,or2nebacterium dip+teriae% acioneaz att local, la nivelul mucoasei aringiene, ct i la distan, ca urmare a di uzrii pe cale sanguin i a ixrii mediate de receptori, pe diverse esuturi i organe (miocard, esutul nervos, icat, rinichi,etc.%. ;ecitinaza este o toxin!enzim produs de ,lostridium per ringens i de unele tulpini de %tap+2lococcus aureus, care scindeaz lecitina (lipid ce constituie o important substan de cimentare a membranelor celulare i a mitocondriilor% i produce liza rapid a globulelor roii, leucocitelor i a unor celule tisulare. 8nteroto7inele constituie un grup particular de exotoxine, implicate n ma"oritatea toxiin eciilor alimentare ( BL)B%! B. Me!c" S. Ne3uA S. 1***%. #le sunt elaborate de specii bacteriene 9ram!pozitive (%tap+2lococcus aureus, ,lostridium per ringens, ,lostridium di icile, ,lostridium sordellii%, dar mai ales de bacterii 9ram!negative/ )sc+eric+ia coli enterotoxigen (#&#$% i enterohemoragic (#=#$%, 4ibrio c+olerae, 4ibrio para+aemol2ticus, %almonella spp., %+igella d2senteriae, 'eromonas +2drop+ila, ,amp2lobacter 8e8uni, etc. \n general, enterotoxinele acioneaz direct asupra mucoasei intestinale, determinnd enomene citotoxice i distructive (liza i descuamarea enterocitelor% sau tulburri uncionale, care modi ic luxul apei i ionilor prin bariera epitelial.
F?1
0ereglrile uncionale sunt cauzate de activarea enzimelor adenilat!ciclaza sau guanilat!ciclaza din membrana celular, urmat de creterea cantitilor de 8M2c (adenozin!mono os at ciclic%, respectiv 9M2c intracelular. $onsecina acestei acumulri este inversarea polaritii uncionale a enterocitului, care, din celul absorbant devine celul excretoare de ap i electrolii (3aW, $l!%. 8lterrile histologice i uncionale produse de enterotoxine se traduc, din punct de vedere clinic, printr!o diaree abundent. Cn alt mecanism de aciune, speci ic enterotoxinelor sta ilococice, ar consta (du& Rducnescu H. B!c"#$%&!! '"(e)!" 1*+,- BL)B%! D. C! c%(. 1***% n stimularea terminaiilor nervului vag la nivelul stomacului, stimuli care, a"ungnd la centrul vomitiv din creier, declaneaz contracii peristaltice i antiperistaltice i, consecutiv acestora, descrcri diareice i vomismente dup o perioad scurt de incubaie (*!> ore%. &ulburrile se accentueaz pn la stare de oc dup trecerea toxinei n circulaia sanguin, unde interacioneaz cu macro agele i lim ocitele &, determinnd eliberarea n exces a cito7inelor. *. F$*T)"II D8 '81'I+IJIK$"8 Kactorii de sensibilizare sau actorii de alterare secundar sunt substane bacteriene corpusculare sau excretate (enzime, toxine%, puternic antigenice, care complic boala in ecioas dup apariia anticorpilor, prin cuplare cu acetia. 3u toate reaciile antigen!anticorp care au loc n organism sunt avorabile acestuia. Cneori, alterri grave pot i produse de prezena concomitent a antigenului (bacterie, produs microbian,
FJ-
antigene tisulare similare antigenelor bacteriene% i a anticorpilor corespunztori. \n principiu, orice microorganism care a produs o in ecie, dac nu a ost repede eliminat din organism, poate 5 cu condiia ntrunirii anumitor proporii i cantiti antigen!anticorp 5 s determine enomene de sensibilizare mediate de anticorpi i`sau lim ocitele &. Bacteriile care determin recvent complicaii prin enomene de sensibilizare sunt prezentate n tabelul numrul 1. T"9e(u( * F"c2%)! 9"c2e)!en! de sens!9!(!B")e B"c2e)!" &)%duc2%")e MAcobacterium spp. Bul7holderia mallei Brucella spp. &reponema pallidum Krancisella tularensis )treptococcus pAogenes serogrup 8 Bacterii negative 9ram! N"2u)" c7!:!c 2rotein 2rotein 2rotein 2rotein 2rotein ;2) Denu:!)e" &uberculin Malein Brucelin ;uetin &ularin Kactor ,,reumatogen( Kactor ,,ne ritogen( #ndotoxine
FJ*
RELAIA DINTRE $ATOGENITATEA BACTERIILOR I $ARA=ITISM Modul de via parazitar implic, pe de o parte, pierderea unciilor ce asigur supravieuirea n mediile naturale, iar pe de alt parte, o adaptare complex la mediul intern, ostil, al organismului!gazd, care s le permit supravieuirea i chiar multiplicarea n prezena actorilor aprrii antiin ecioase (=")ne" G. 1**E%. . &eoretic, dobndirea actorilor de virulen necesari, care sunt codi icai genetic, poate avea loc ca rezultat al unui proces ndelungat de evoluie sau brusc, ca urmare a primirii unor gene de virulen prin intermediul plasmidelor trans erabile sau al agilor lizogeni. \n uncie de gradul de dependen a bacteriilor de organismul!gazd i de dotarea cu actori de patogenitate sunt descrise trei categorii de bacterii parazite/ extracelulare, acultativ intracelulare i obligat intracelulare. B"c2e)!!(e &")"B!2e eI2)"ce(u(") colonizeaz n mod normal pielea i mucoasele. )upravieuirea lor in vivo este condiionat de rezistena la agocitoz, care este asigurat ie prin colonizarea unor regiuni inaccesibile agocitelor, ie prin sinteza unor substane cu aciune anti agocitar de tipul leucocidinelor sau al polizaharidelor i polipeptidelor capsulare. B"c2e)!!(e &")"B!2e @"cu(2"2!; !n2)"ce(u(") sunt bacterii adaptate la viaa intracelular, iind capabile s ptrund i s se multiplice n celulele organismului!gazd, r a!i pierde ns capacitatea de supravieuire n mediul extracelular.
FJF
0up B r u b a 7 e r , *1+J (citat de Marnea 9., *11?%, acestea sunt de dou tipuri. *.Bacteriile parazite acultativ intracelular ,,specializate( sunt capabile s ptrund i s se multiplice n agocitele ,,nepro esioniste( sau n alte tipuri de celule, dar nu i n macro age (ex. %+igella spp.%. F.Bacteriile acultativ intracelulare care practic un parazitism ,,generalizat(, n sensul c sunt capabile s se multiplice i n agocitele ,,pro esioniste(, devenind uneori rezideni stabili ai acestora (ex. %almonella t2p+imurium, 12cobacterium tuberculosis% . 8tt bacteriile parazite extracelular ct i cele parazite acultativ intracelular nu sunt dependente de organismul!gazd, avnd posibilitatea de a se dezvolta i in vitro, pe medii de cultur lipsite de celule vii. B"c2e)!!(e &")"B!2e %9(!3"2 !n2)"ce(u(") se multiplic exclusiv n celulele vii, dei pot supravieui perioade lungi de timp i n mediile extracelulare. 0ependena lor de celula!gazd are la baz cauze diverse, n mare parte nc neelucidate. n cazul bacteriilor din genurile ,+lamidia, *ic@ettsia i ,o5iella, parazitismul obligatoriu este generat de pierderea capacitatii de a stoca energia sub orm de compui macroergici, iind dependente de rezerva de 8&2 a celulei!gazd.
FJ3
CONDIIONAREA $ATOGENIT<II BACTERIILOR I CRITERIILE DE IM$LICARE ETIOLOGIC< 0inamica relaiilor microorganism!gazd este dependent de interaciunea dintre gradul de patogenitate intrinsec a microorganismelor (dotarea cu actori de patogenitate% i rezistena organismului (dotarea cu actori de aprare%. \n acest context, patogenitatea bacteriilor ormeaz un spectru continuu care se extinde de la bacteriile nepatogene la bacteriile nalt patogene (Duc" Eu3en!" C! c%(. 1*4*- Bu!uc D. Ne3uA M. 1***%. B"c2e)!!(e ne&"2%3ene, incapabile s determine mbolnviri, sunt autotro ele sapro ite din mediul extern, care nu gsesc n esuturile i umorile organismului animal condiiile izico! chimice i nutrienii necesari dezvoltrii, iind lipsite totodat de virulen i toxicitate. B"c2e)!!(e "cc!den2"( &"2%3ene sunt bacterii rezidente pe tegumente sau mucoase, cu un potenial invaziv redus, nct, ptrunse accidental n esuturi i umori sunt uor lichidate de agocite i de actorii umorali ai aprrii antiin ecioase. #le pot iniia in ecii doar atunci cnd, prin leziuni traumatice (traumatisme craniene, vertebrale, racturi% sau chirurgicale (chirurgie cardiovascular%, a"ung n situsuri pro unde, lipsite (sau aproape lipsite% de actori de aprare (lichidul ce alorahidian, zonele de cretere a osului, depozitele de ibrin de pe supra aa valvulelor cardiace, etc.%, n care agocitoza este practic absent, iar lizozimul i ali actori umorali sunt abseni sau n cantitate redus.
FJ?
8daptndu!se greu i nmulindu!se ncet, bacteriile accidental patogene dau in ecii cu evoluie lent, dar cu leziuni grave, adesea irecuperabile/ meningite posttraumatice, endocardite subacute, osteomielite, etc. B"c2e)!!(e c%nd!A!%n"2 &"2%3ene ac parte din microbiota normal a organismului i a mediilor naturale. #le posed actori de virulen i toxicitate, dar sunt e icient reinute de tegumentele i mucoasele normale. $a urmare, mani estarea patogenitii lor este condiionat de apariia unor bree n sistemul barierelor antiin ecioase naturale i de lipsa imunitii speci ice, de unde i denumirea de ,,in ecii oportuniste( (engl. opportunit2[ocazie bun< mpre"urare avorabil pentru a!i ataca gazda% atribuit mbolnvirilor pe care le produc. Hdat cu restabilirea integritii barierelor antiin ecioase ale gazdei i apariia rspunsului imun, bacteriile condiionat patogene revin la relaia de comensalism, limitat la nveliuri. @mplicarea n etiologia in eciilor a speciilor accidental patogene i condiionat patogene (sta ilococi, streptococi, pasteurele, corinebacterii, actinomicete, etc.% di er dup cum bacteria este izolat dintr!un produs normal steril (snge, lichid ce alorahidian, mduv osoas, colecii nchise, etc.%, sau din produse contaminate. \n primul caz, nsi prezena n asemenea prelevate con er microorganismelor depistate (prin microscopie direct, izolare%, semni icaie clinic. &otui, pentru bacteriile accidental patogene, rezidente ale tegumentului (sta ilococi coagulazo!negativi, streptococi viridans, etc.%, se impune eliminarea suspiciunii de contaminare a probelor n timpul recoltrii, prin argumente suplimentare, ca/
FJJ
izolarea aceleeai bacterii n hemoculturi repetate n condiiile unei asepsii stricte< prezena n rotiul direct, a unei bacterii cu aceleai caractere microscopice (de exemplu, n probele de puroi%< contextul clinic (la om, %tap+2lococcus epidermidis capt semni icaie clinic n hemoculturi de la pacienii cu endocardit subacut i protez valvular cardiac, n aspirat din peritoneul pacienilor imunocompromii supui dializei extrarenale%. \n cazul prelevatelor contaminate pe traiectele de eliminare natural (urin, secreie lactat, sput, etc.%, se impune argumentarea semni icaiei clinice a bacteriilor oportuniste, care contamineaz uzual aceste prelevate. n acest caz, principalul criteriu de incriminare etiologic este concentraia semni icativ mai mare a acestor bacterii n ocarul de in ecie dect atunci cnd contamineaz probele corect recoltate. \n prelevatele din zone normal colonizate (tegument, mucoase aparente%, examenul bacteriologic urmrete, n uncie de tabloul clinic, depistarea principalelor bacterii patogene care!l pot cauza (de exemplu, izolarea salmonelelor din ecalele diareice, izolarea brucelelor sau a campAlobacteriilor din avortoni, placent, lichide etale%. 8bsena din prob a bacteriilor patogene, care s explice tabloul clinic, orienteaz investigaia spre bacteriile condiionat patogene. n aceast situaie, implicarea etiologic a bacteriilor depistate se ace pe baza testelor de patogenitate. B"c2e)!!(e Dn"(2 &"2%3ene au su icieni actori de agresivitate pentru a mbolnvi o gazd cu aprare antiin ecioas normal. #le depesc cu uurin barierele aprrii nespeci ice (externe i interne% ale organismului neimunizat (susceptibil%, iind agenii
FJ>
etiologici ai bolilor in ecioase clasice, cu letalitate crescut i`sau complicaii cronice grave. )impla prezen a unei specii nalt patogene (12cobacterium tuberculosis, 12cobacterium bovis, .acillus ant+racis, %almonella spp., .rucella spp. !eptospira spp.,etc.% ntr!un produs patologic, alturi de mani estarea clinic ! deseori tipic ! reprezint criterii su iciente pentru a!i atribui responsabilitatea etiologic.
FJ,

Bacteriologie Generala

Încărcat de

Informații document

Titlu original

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Bacteriologie Generala

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

BACTERIOLOGIE GENERAL|

1.1.DEFINIIA I OBIECTUL STUDIU AL MICROBIOLOGIEI

1.2. SISTEMATICA MICROORGANISMELOR

1.3. ISTORICUL MICROBIOLOGIEI

2.1. CONCE$TUL DE BACTERIE

C")"c2e)e(e d!@e)enG!"(e Hn2)e &)!nc!&"(e(e c"2e3%)!! de :!c)%%)3"n!s:e >dup9 1.,arp6,9rare, :00;)

Microorganisme cu organizare procariotV

Microorganisme diverse grade organizare

2.2. NOIUNI DE TA0ONOMIE NOMENCLATUR/ BACTERIAN/

2.2.1.1. C"2e3%)!! de 2"I%n!

2.2.1.2. C("s!@!c")e" 9"c2e)!!(%)

T"9e(u( 3 C("s!@!c")e" 9"c2e)!!(%) (" n!;e(u( 2"I%n!(%) su&e)!%)! D!;!B!une" >$7J(u:?

2.3. MORFOLOGIA BACTERIILOR

F!3.3 Forme posibile la bacterii

+acteriile spiralate sau .elicoidale

F!3.5. ,odalit!ile de grupare a bacililor/

+acteriile ptrate au ost puse n eviden n probele

2.3.1.2. C%ns2"n2e(e @!B!ce

2.2.1.3. S2)uc2u)" ce(u(e! 9"c2e)!ene

F!3., 'tructura unei celule bacteriene tipice 3dup 1zreanu ,, ;HHH)

F!3.+ 'tructura sc.ematic a mezozomului bacterian 3dup *eusc+ i

F!3.* ,odel de structur molecular a peptidoglicanului 3dup

BACTERIOLOGIE GENERAL| suprafa!a celulei bacteriene/ ;. atric+aA :. monotric+aA3. lo otric+aA B.

-b)0 dup !arpent i col., ;HH0.

3.4.3.5.5. *ompuii anorganici

3.4.3.5.3. *ompuii organici

2.3.2.2. Nu2)!A!" (" 9"c2e)!!

3.4.3.3.5. 87igen!e i tipuri nutritive la bacterii

Su)se de c")9%n $HF

3.4.3.3.3. $ccesul substan!elor nutritive n celula bacterian

0i uzia acilitat se des oar n trei aze ( ig. *>%/

F!3. 1, Difuzia facilitat >dup (ortora I.<. i col, ;HHE?

2.3.2.3. Me2"9%(!s:u( 9"c2e)!"n

hidrogenul rezultat din procesele de oxidare este introdus n

F!3.1+ *atena de respira!ie celular cuplat

producerea de subuniti care vor intra n componena

2.3.2.E. C)eC2e)e" C! :u(2!&(!c")e" 9"c2e)!!(%) 3.4.3.:.5. *reterea bacteriilor

F!3. 2. ,odalit!i de cretere la bacterii/ ; M celula bacterian imediat

3.4.3.:.3. ,ultiplicarea bacteriilor

F!3. 22 "eprezentarea sc.ematic a diviziunii bacteriilor prin sept

transversal -dup .isset cit. de Jarnea <., ;HD3).

(engl. to lag [a nt#rzia, a r"#ne n ur"% *+F

F!3.23 *urba de multiplicare a bacteriilor.

A. Mu(2!&(!c")e" Dn :ed!!(e (!c7!de.

specia bacterian (la ma"oritatea speciilor dureaz n

F!3. 2E *olonie bacterian de tip 66'; -dup Jarnea <., ;HE0).

F!3.25 *olonie bacterian de tip 66"; -dup Jarnea <.,;HE0).

F!3. 2,. 'c.ema unui c.emostat.

2.3.3. MORFOLOGIA I BIOLOGIA S$ORULUI

F!3. 24 Fazele sporogenezei/ ; M celula bacterian Gn stadiul premergtor

2.3.3.2. M%)@%(%3!" s&%)u(u!

F!3.2+ "aporturi posibile ntre spor i sporangiu/

2.3.3.3. U(2)"s2)uc2u)" s&%)u(u!

F!3.2* $natomia sporului/

2.3.3.E. $")2!cu(")!2A!(e s&%)u(u! Particularit!ile bioc.imice

Particularit!ile fiziologice ale sporului constau n

2.3.3.5. Ge):!n")e" s&%)u(u!

2.3.3.,. I:&(!c"A!!(e s&%)%3eneBe! Dn &"2%(%3!e C! e&!de:!%(%3!e

2.3.E. GRU$E DE BACTERII CU $ARTICULARIT<I MORFOFI=IOLOGICE

2.3.E.E. F%):e(e L8.

2.3.5. GENETICA BACTERIAN/

3.4.>.5.3. 2nit!ile func!ionale ale materialului genetic la bacterii

F!3.3, 'tructura unor fragmente din macromolecula de $D1 i $"1.

F!3. E2 onfigura!ia moleculei de $"1 solubil -dup ducnescu 0.,

F!3.E. Fenomenul de se7duc!ie la bacterii -dup Jarnea <.,;HE0). +-

O&2!: J 5 + FJ ! 33- 5 ?JJ ! ,J +*-J !