INTRODUCERE N STUDIUL MICROBIOLOGIEI

1.1.Definiia i obiectul de studiu al microbiologiei

Microbiologia este astzi o tiin de mare interes, dei a avut un debut destul de trziu, fiind abia cu cteva decenii mai mult dect centenar. Aceast tiin este una dintre cele mai dinamice dintre tiinele biologice, cunoscnd o dezvoltare extrem de rapid i situndu-se astzi printre tiinele primordiale n evoluia omenirii. Obiectul de studiu al microbiologiei l constituie microorganismele, adic organismele cu dimensiuni mici sub 1 mm diametru care nu pot fi vzute cu ochiul liber. Microorganismele alctuiesc un grup vast i heterogen ca morfologie, activitate biologic, poziie sistematic, dar au drept caractere comune: dimensiunile microscopice, organizarea, n general, unicelulara i structura intern relativ simpl. n acest grup sunt incluse: bacteriile, algele, ciupercile microscopice (drojdii i mucegaiuri), protozoarele i virusurile. Acestea din urm sunt definite ca entiti corpusculare de dimensiuni infime, alctuite din proteine i acizi nucleici, dar sunt lipsite de atributele structurale i funcionale ale organizrii celulare. Etimologia microbiologiei provine din limba greac, i anume: mikros = mic, bios = via, logos = tiin, discurs, de altfel, microorganismele mai sunt denumite microbi, iar un alt termen utilizat este cel de germen care definete microorganismele capabile de multiplicare. Cunoaterea i exploatarea microorganismelor a adus numeroase avantaje omenirii: producerea pinii, a berii, antibioticelor, vaccinurilor, vitaminelor, enzimelor i a altor produse foarte importante. Ele stau la baza att a biotehnologiilor tradiionale, ct i a celor moderne, de ultim or. Microorganismele sulfului. Dar, microorganismele reprezint i cauza a numeroase maladii umane; maladiile microbiene au jucat un rol major n evenimente istorice, cum ar fi: cderea Imperiului roman, mrirea Lumii noi; n 1347 pesta a lovit Europa, ucignd peste 25 milioane de persoane, iar 80 de ani mai trziu aceeai maladie a decimat 75% din sunt indispensabile mediului nconjurtor i permit funcionarea n mediul terestru i acvatic a ciclurilor: carbonului, oxigenului, azotului i

populaia Europei, determinnd (dup unii istorici) schimbarea culturii europene i pregtind calea Renaterii (Prescott, Harley, Klein, 1995). Astzi, ntreaga lume medical, la care se adaug i cercettorii din domeniul microbiologiei, lupt n continuare mpotriva altor flagele, cel mai important fiind SIDA.

1.2.Istoricul dezvoltrii microbiologiei ca tiin

nceputurile microbiologiei se pot gsi nc din antichitate cnd Thucidides susine c bolile sunt provocate de nite particule vii contagium animatum observnd chiar fenomenul de imunitate la bolnavii care au supravieuit ciumei i care nu mai fac boala. Cteva evenimente importante au marcat descoperirea lumii microorganismelor i, implicit, dezvoltarea microbiologiei ca tiin. Aceste evenimente au fost grupate n: perioada morfologic, perioada fiziologic i perioada biologiei moleculare. a. Perioada morfologic a microbiologiei Ideea curent la nceputurile omenirii, conform creia bolile sunt manifestri ale mniei divine i, ca atare, se pot vindeca numai prin jertfe sau rugciuni, a fost treptat abandonat i s-a trecut la ncercri de explicare tiinific, bazate pe observaii, desigur n limitele cunotinelor existente la acea vreme. Anastagoras a susinut c viaa poate exista i dincolo de privirile omeneti fapt ce a fost demonstrat ulterior. Lucretius sugereaz c forme de existen invizibile pot provoca maladii. Hypocrat ia n considerare, n explicarea unor maladii, alterarea aerului i exprim o prim ipotez asupra etiologiei bolilor infecioase sub forma teoriei miasmelor (miasma: lb.greac= murdrie, emanaie putrid). Girolamo Fracastor (1488-1553) a ncercat nlturarea acestei teorii, intuind foarte corect contagiozitatea bolilor provocate de ctre microorganisme, infecia fiind produs de ctre seminaria morbi care trec de la un organism bolnav la unul sntos. Anthony van Leenwenhoek (1632-1723) a avut cea mai nsemnat contribuie la descoperirea microorganismelor, examinnd la un microscop construit de el infuzii vegetale, saliv, ap de ploaie, ochi de insecte, .a., descrie animalculele i trimite observaiile sale la Royal Society of London. Astfel, n lucrarea sa intitulat Arcana naturae ape microscopiorum detacto (Tainele naturii descoperite cu ajutorul

microscoapelor) i aprut n 1675, el public primele desene, identificate ulterior ca bacterii. Descoperirea microorganismelor de ctre Leeuwenhoek a dus la o nou concepie dup care bolile epidemice erau produse de ctre ageni patogeni. Descoperirile lui Leeuwenhoek au iniiat perioada morfologic n studiul microorganismelor i au dat o ripost puternic teoriei generaiei spontane (conform acesteia organismele actuale pot lua natere din materia lipsit de via), crescnd, n acelai timp, interesul pentru studiul microorganismelor. b. Perioada fiziologic a microbiologiei Agostino Bassi (1773-1856) a confirmat experimental, pentru prima dat, c bolile epidemice sunt produse de parazii; el a demonstrat c muscardina boal epidemic a viermelui de mtase, este produs de ciuperca Botrytis bassiana. Louis Pasteur (1822-1895) considerat fondatorul microbiologiei moderne, este cel cu care ncepe perioada fiziologic a studiului microorganismelor. Studiind bolile vinului a ajuns la concluzia c acestea se datoreaz unor fermentaii anaerobe, produse de alte microorganisme dect drojdiile ce provoac fermentaia alcoolic specific vinului. Pentru combaterea acestor fenomene, Pasteur propune distrugerea microbiolor duntori prin nclzire, proces ce se numete pasteurizare. Dup descoperirea fenomenului biologic al anaerobiozei, procesele fermentative au nceput s fie utilizate n industria vinului, a berii, a panificaiei, n obinerea produselor lactate, topitul industrial al plantelor textile, n conservarea furajelor prin nsilozare. Pasteur extinde noiunea de specificitate din domeniul fermentaiilor n acela al patologiei omului i animalelor orice boal infecioas este rezultatul activitii vitale a unui anumit microorganism specific, care se dezvolt ca parazit n organismul animal respectiv. Cercetrile lui Pasteur n domeniul viermilor de mtase au condus la descoperirea a dou boli contagioase: pelarina i flageria, a modului lor de transmitere i a mijloacelor eficace de prevenire. Pasteur a mai studiat cauzele unor infecii produse de bacterii cum sunt: dalacul (antraxul), holera aviar, turbarea. El a obinut vaccinul anticrbunos, respectiv antirabic punnd astfel bazele tiinifice ale vaccinrii. Pasteur i colaboratorii si au descoperit o nou proprietate a microbilor, respectiv a bacteriilor, anume aceea c sunt reinui pe medii poroase fine (plci de

azbest) din care se confecioneaz fibrele bacteriologice, permind astfel izolarea unor ageni patogeni din lichidul n care au crescut, pentru a putea fi vzui i studiai. Atras tot mai mult de bolile omului, Pasteur demonstreaz rolul bacililor anaerobi n gangrena gazoas, al cocilor n furunculi, abcese, osteomielit i n febra puerperal, aducnd probe pentru teoria germenilor n apariia bolilor infecioase. Pentru denumirea organismelor microscopice, Pasteur a adoptat termenul de microb, creat cu asentimentul lui Littr de ctre medicul francez Sdillot, termen incorect deoarece semnific via scurt, iar nu dimensiuni mici, denumirea, dei nefolosit n prezent n limbajul tiinific, a determinat numirea tiinei care se ocup cu studiul celor mai mici forme de via: microbiologie. coala de bacteriologie francez condus de Pasteur a creat cea mai mare revoluie medical din istoria uman; timp de 25 ani au fost identificai i descrii majoritatea agenilor patogeni i au fost abordate metode de prevenire a numeroase boli. Robert Koch (1843-1910) este considerat fondatorul microbiologiei moderne; cercetrile sale au condus la identificarea bacilului tuberculozei bacilul lui Koch (Mycrobacterium tubercolosis), al holerei asiatice (Vibrio conma), la demonstrarea etiologiei antraxului (Bacillus anthracis), demonstrnd fr echivoc c bacteria carbonoas este agentul patogen ce cultiv in vitro n ser sanguin i c infecia natural a animalelor provine din sol prin iarba contaminat. Pe baza acestor cercetri Koch stabilete criteriile indispensabile privind specificitatea unui agent patogen, aa-numitele postulate ale lui Koch. 1. 2. 3. microorganismul incriminat s poat fi pus ntotdeauna n eviden, iar distribuia lui s corespund leziunilor caracteristice bolii; s poat fi izolat n cultur pur pe medii artificiale; s reproduc boala i leziunile specifice i dup ce este cultivat in vitro mai multe generaii. Koch a adus contribuii de ordin teoretic i tehnic foarte valoroase n dezvoltarea microbiologiei ca tiin, ntre care conceptul de cultur pur organism cultivat ntr-un mediu lipsit de alte organisme; descoperirea acestei posibiliti constituie un progres care st la baza microbiologiei moderne, deoarece ofer un mijloc simplu i sigur de izolare a bacteriilor n vederea studierii particularitilor lor de specie, a biologiei i ncadrrii lor sistematice.

Mecinikov (1845-1916) descoper anumite celule care nglobeaz i diger intracelular particule de hran la echinoderme i emite ipoteza c, mpotriva microorganismelor ptrunse n organismul animal intervin celule denumite fagocite care, prin nglobare i digestie intracelular distrug microorganismele, determinnd starea de imunitate a organismului. Prin descoperirea fenomenului de fagocitoz, Mecinikov fundamenteaz teoria celular a imunitii, fiind ntemeietorul imunologiei tiina care se ocup cu studiul reaciilor de aprare ale organismului fa de infecii. D.I.Ivanovski (1864-1920) demonstreaz c mozaicul tutunului este produs de un agent patogen invizibil la microscop, care traverseaz filtrele bacteriologice, lansnd astfel ideea originii virale a VMT. M.W.Beijerinck (1851-1931) confirm filtrabilitatea agentului patogen, descoperind c acesta poate fi precipitat cu etanol fr a-i pierde puterea infecioas. A intuit diferenele dintre natura virusurilor i a celorlalte microorganisme, fiind adevratul ntemeietor al virologiei ca tiin. S.N.Vinogradski (1856-1953) a stabilit corelaia dintre fertilitatea solurilor i activitatea microorganismelor fiind ntemeietorul microbiologiei solului. A descris pentru prima oar procesul de asimilare la organismele chimiosintetizate i fenomenul de fixare a azotului atmosferic de ctre microorganisme. n acelai timp, a elaborat metodele speciale pentru cercetarea activitii microorganismelor din sol. Un rol important n dezvoltarea microbiologiei ca tiin de sine stttoare l-au avut o serie de cercettori care au condus la dezvoltarea unor domenii noi de studiu; enzimologia microbian i genetica microorganismelor. I.Bchner (1897) completeaz cercetrile lui Pasteur asupra fermentaiilor, dovedind rolul enzimelor provenind din extractele levuriene n realizarea fermentaiei. Hansen (1842-1909) deschide calea microbiologiei industriale moderne, prin utilizarea culturilor pure ca starteri de fermentaie. Ehrlich (1854-1915) este creatorul teoriei moderne a dezinfeciei i chimioterapiei selective, sintetiznd primele substane chimice active n terapia bolilor produse de spirochete i protozoare. A.Fleming (1881-1955) deschide era antibioticelor, descoperind primul antibiotic produs de unele culturi ale mucegaiului Penicillium, cu proprieti antimicrobiene specifice i denumit penicilina.

Acest prim antibiotic a fost purificat de Florey i Chain (1940), care au oferit un produs atoxic pentru om i animal, activ i in vivo asupra unor anumite specii de microorganisme. n 1944, Waksmann descoper streptomicina, antibiotic elaborat de unele specii de actinomicete, deschiznd calea pentru obinerea din natur a numeroase antibiotice noi. M.V.Beijerinck a efectuat primele observaii privind variabilitatea la microorganisme, artnd c la B.prodigiosus coloniile colorate n rou viu i pot pierde culoarea n cursul trecerilor succesive pe medii de cultur, sau c E.coli i poate pierde n acelai fel capacitatea de a fermenta lactoza. Dodell (1912) demonstreaz natura ereditar a unor modificri permanente, care se produc la un microorganism i care apoi se transmit la generaiile urmtoare. Beadle i Tatum (1941) continu studiile de genetic a microorganismelor ncepute cu analiza recombinrii sexuate la Neurospera i la levuri de ctre Dodge (1935) i Winge (1935); au studiat mutantele biochimice la Neurospora crassa demonstrnd c incapacitatea de a sintetiza anumii metabolii eseniali este controlat de un determinant genetic distinct i au formulat astfel conceptul: o gen o enzim. n anul 1923 apare prima ediie a determinatorului de bacterii Bergey. 1937 Chatton mparte microorganismele n eucariote i procariote.

c) Perioada biologiei moleculare Debutul biologiei moleculare este anul 1944 cnd Avery demonstreaz c ADNul este purttorul informaiei genetice n celul i responsabil de transformarea genetic a bacteriilor evideniat anterior de Griffith (1928). Apariia biologiei moleculatre a adus transformri profunde n influena microbiologiei asupra tiinelor biologice; microbiologia are un rol esenial prin furnizarea modelului experimental unic reprezentat de bacteria E.coli, ca prototip al organizrii structurale i funcionale cele mai simple a sistemelor biologice. Descoperirea plasmidelor i a enzimelor de restricie a permis punerea la punct a tehnicilor de inginerie genetic, cu aplicaii practice, care anun o nou revoluie n biologie revoluia biotehnologic sau bioindustrial. n aceast perioad a biologiei moleculare, pot fi menionate urmtoarele realizri: 1946 Lederberg i Tatum descriu conjugarea bacterian;

1952 Hershey i Chase demonstreaz c bacteriofagii injecteaz ADN-ul lor n celula-gazd pe care o paraziteaz;

1955 Jacob i Wollman descoper factorul F o plasmid; 1970 Arser i Smith descoper endonucleazele de restricie; Temin i Baltimore descoper transcriptaze la retrovirusuri; 1973 Ames dezvolt un test bacterian de detecie a agenilor mutageni i carcinogeni;

1.3.

1977 recunoaterea arhibacteriilor ca grup distinct de bacterii; 1979 realizarea sintezei insulinei prin tehnica ADN recombinant 1982 obinerea vaccinului contra hepatitei B prin tehnici de inginerie genetic 1983-1984 descoperirea virusului uman al imunodeficienei (HIV) de ctre Montagnier i Gallo; 1990 primul test de terapie genetic uman.

Contribuia cercettorilor romni la dezvoltarea microbiologiei n dezvoltarea microbiologiei, savani romni de prestigiu i-au adus o nsemnat

contribuie. Remarcabili sunt:

Victor Babe (1854-1926) este fondatorul microbiologiei n Romnia i

autorul primului tratat de microbiologie din lume (n colaborare cu Corneil, Paris, 1885), a efectuat numeroase cercetri n domeniu studiind lepra, tuberculoza, holera, febra tifoid i, mai ales, turbarea. n sistemul nervos al animalelor moarte a descoperit corpusculii Babe-Negri cu ajutorul crora se poate stabili retrospectiv diagnosticul acestei infecii. Cercetrile sale s-au soldat cu descoperirea a peste 50 germeni patogeni noi, a unor procedee de colectare a bacteriilor i ciupercilor, precum i a importanei pentru terapeutic a antagonismului microbian i a substanelor antibiotice. A introdus vaccinarea antirabic propus de Pasteur n Romnia, fiind cel care a pus bazele seroterapiei la noi.

Ioan Cantacuzino (1863-1934) fondatorul Institutului de microbiologie din

Bucureti, Cantacuzino i-a adus contribuii nsemnate la studiul tifosului exantematic, al tuberculozei, holerei, scarlatinei este cunoscut ca unul dintre organizatorii luptei

mpotriva tuberculozei n Romnia. A creat, de asemenea, noiunea de imunitate prin contact, iar n rzboi a condus compania de combaterea tifosului exantematic (1913).

Constantin Levaditi (1874-1953) microbiolog, virusolog i imunolog,

profesor universitar la Cluj, a fost fondatorul colii franceze de inframicrobiologie. A introdus tratamentul cu bismut n tratarea sifilisului, colabornd cu elaborarea unor studii viznd epidemiologia poliomielitei, cultivarea virusului poliomielitei pe alte celule dect cele nervoase, creind premisele preparrii vaccinului antipoliomielitic; a studiat, de asemenea, patologia herpesului, a encefalitei letargice, zonei-zoster; aducnd contribuii deosebite la perfecionarea tehnicilor de studiere microscopic a virusurilor.

Dumitru Combiescu (1887-1961) a desfurat ample cercetri n domeniul

microbiologiei viznd variabilitatea microorganismelor sub influena mediului de cultur, studiul rickettiozelor i zoonozelor (febra Q, leptospiroza), imunitatea i infecia n antrax etc.

Mihai Ciuc (1897-1967) microbiolog, parazitolog i igienist, autor al unor

lucrri nsemnate referitoare la paludism, salmoneloze, difteriei i bacteriofagiei, patogenia i epidemiologia malariei. Este cel care, mpreun cu J.B.V.Bordet (1921) a pus n eviden lizogenia.

tefan Nicolau (1897-1967) este fondatorul colii romneti de virologie i

a institutului care i poart numele, a adus contribuii fundamentale n domeniul febrei aftoase i galbene, herpesului, turbrii, hepatitelor virotice i n oncogeneza viral. A introdus noiuni, cum ar fi: paraimunitatea, septinevrita, iar cercetrile sale referitoare la hepatita epidermic au dus la izolarea virusului hepatitei epidemice sclerogene. 1.4. Relaiile microbiologiei cu alte tiine Microbiologia este, n egal msur, o tiin fundamental dar i aplicativ. Ea are un puternic impact asupra medicinei, agriculturii, industriei alimentare, ecologiei, geneticii, biochimiei. La rndul ei, dezvoltarea microbiologiei a fost i este condiionat de descoperirile din celelalte domenii ale tiinei, nsi nceputurile sale sunt legate de construirea primului microscop cu lentil biconvex, capabil s mreasc de 50-300 ori i s se pun n acest fel n eviden lumea microorganismelor.

10

n afar de fizic, progresul acestei tiine este legat indisolubil de progresele din domeniul chimiei, a metodelor moderne de cercetare spectofotometrici, electroforeza, izotopii radioactivi etc. Pe msur ce cunotinele din domeniul microbiologiei se contureaz, microbiologia contribuie la dezvoltarea altor tiine biologice cum sunt: Biologia general datele furnizate de ctre microbiologie au permis combaterea teoriei generaiei spontane, au adus clarificri privind natura proceselor de fermentaie i putrefacie, precum i clarificarea unor probleme privind originea, natura i dezvoltarea evolutiv a protoplasmei;

Chimia, n special biochimia prin utilizarea bacteriilor i drojdiilor au fost elucidate o serie de aspecte ale metabolismului intermediar; Fiziologia utilizeaz microorganismele n studiile de respiraie, nutriie celular, n stadiul fotosintezei; Genetica utilizeaz microorganismele ca test biologic, datorit faptului c acestea au o organizare simpl, se reproduc rar sexuat, dar n timp foarte scurt i sunt susceptibile la agenii mutageni;

tiinele medicale prin identificarea agenilor patogeni responsabili de apariia unor boli la om i animale a fost posibil stabilirea mijloacelor eficiente de profilaxie i tratament;

tiinele agricole sunt legate de dezvoltarea microbiologiei, cu deosebire n ceea ce privete fertilitatea solului, a circuitului elementelor n natur, dar i n ceea ce privete profilaxia i combaterea bolilor i duntorilor la plante;

tiinele mediului cunoaterea grupelor de microorganisme a permis studierea relaiilor dintre acestea i habitatul lor; de asemenea, cele mai recente studii vizeaz efectele polurii asupra microorganismelor, dar i modul n care acestea pot influena aceast poluare, diminundu-i efectele.

1.5. Domeniile microbiologiei Microbiologia studiaz particularitile morfologice, fiziologice, biologia i sistematica microorganismelor, dar i ereditatea i variabilitatea lor, originea, evoluia i rspndirea lor n natur, precum i relaiile ecologice ce se stabilesc ntre ele. Datorit multiplelor aspecte pe care le abordeaz, microbiologia poate fi mprit n dou mari ramuri:
11

A.
B.

Microbiologia

general

care

se

ocup

cu

morfologia

fiziologia

microorganismelor pe categorii bine definite. Microbiologia special abordeaz fiecare grup taxonomic n parte (familii, genuri, specii de microorganisme). Fiecare dintre tiinele microbiologice n care s-a diversificat microbiologia are un domeniu propriu de cercetare, n funcie de natura microorganismelor studiate, avnd un caracter aplicativ strict delimitat: -microbiologia medical i imunologia microorganisme patogene la om i animale; -microbiologia industrial utilizarea microorganismelor n industria alimentar, topitul biologic al plantelor textile, conservarea furajelor prin nsilozare, tbcirea pieilor, coagularea latexului; -geomicrobiologia rolul microorganismelor n formarea unor zcminte geologice de petrol, fier, mangan, sulf, crbuni i gaze; -microbiologia marin rolul microorganismelor n transformarea substanelor organice i anorganice din mri i oceane; -microbiologia cosmic viabilitatea i variabilitatea microorganismelor n condiii extraterestre; -microbiologia insectelor mecanismele de transmitere a agenilor patogeni de ctre insecte i microorganismele patogene pentru insectele duntoare; -microbiologia solului activitatea microflorei din sol i rolul ei n circuitul elementelor n natur, fertilitatea solului i nutriia mineral a plantelor.

12

CAPITOLUL II NCADRAREA MICROORGANISMELOR N REGNURI

2.1. ncadrarea n regnuri a microorganismelor
nainte de descoperirea microorganismelor, lumea vie a fost clasificat n dou mari regnuri: regnul vegetal i regnul animal; clasificare fcut de ctre Linn i recunoscut de ctre primii naturaliti. Aceast clasificare a fost rapid confirmat prin argumente tiinifice: -sursa de energie pentru organismele vegetale este lumina; ele fiind fotosintetizante; -celula plantelor posed perete celular, sunt imobile; -plantele sintetizeaz amidon ca substan de rezerv; -organismele animale obin prin oxidarea materiei organice, acumulnd substane de rezerv, grsimi sau glicogen; -celula animal este lipsit de perete celular i are nsuirea de a fi mobil. Anthony van Leenwenhock a pus n eviden, pentru prima oar, lumea microorganismelor prin studierea lor la microscopul creat de el nsui. Perioada morfologic a microbiologiei a fost continuat, n mod firesc, de perioada fiziologic a crui de seam reprezentant, Pasteur, a fcut posibil descrierea i clasificarea microorganismelor. Dar, ncadrarea acestora n unul sau altul din cele dou regnuri devine extrem de dificil, anumite grupe de microorganisme prezentnd trsturi care le apropie de plante, iar altele, de ctre animale. Lumea microbian este reprezentat astzi prin mai mult de 500.000 specii, fiind mprit n urmtoarele categorii: alge unicelulare, protozoare, fungi, bacterii i virusuri, ciuperci microscopice. Virusurile reprezint un grup particular de microorganisme, dar celelalte categorii se caracterizeaz printr-o serie de nsuiri comune: -organizare intern de tip celular; -dimensiuni care le fac vizibile la microscopul optic; -metabolism propriu, independent.

13

Caracteristicile distincte ale grupelor de microorganisme sunt prezentate n tabelul 2.1. Tabelul 2.1. Caracteristici distincte ale grupelor de microorganisme (dup Regnault J.P., 1990)
Caracteristica Organizare celular Organizare biologic Peretele celular Nutriia Fotosinteza Mobilitatea Tip de reproducere Alge prezent Unicelulare/ pluricelulare Prezena celulozei Exclusiv autotrof prezent Asexuat fisiune binar prezent da Protozoare prezent unicelulare Exclusiv heterotrof prezent Asexuat fisiune binar prezent da Micete prezent unicelulare Prezena chitinei Exclusiv heterotrof Fisiune binar Bacterii prezent unicelulare Prezena peptido-glicanului Autotrof/ heterotrof Prezent/absent n funcie de grup prezent Asexuat sciziparitate Virusuri absent Sinteza constituenilor virali prin intermediul celulei-gazd nu

Reproducerea autonom Cultivarea pe medii sintetice

prezent da

prezent da

Pe msur ce lumea microorganismelor a fost cercetat mai atent, a devenit evident c unele microorganisme nu pot fi ncadrate fr rezerve n nici unul din cele dou regnuri tradiionale i c exist grupuri ntregi care au fost revendicate, n egal msur, de botaniti, dar i de zoologi (ex. Euglena, Chlamydomonas etc.) Pentru a clarifica aceast situaie Haeckel (1866) propune crearea unui al treilea regn care grupeaz toate formele inferioare de via denumit Protista; apoi n anul 1937, Chatton propune dou tipuri de organizare celular n lumea vie: celula de tip procariot i celula de tip eucariot, determinnd divizarea protistelor n dou categorii: protiste superioare (eucariote), din care fac parte algele verzi unicelulare, protozoarele i fungii i Protistele inferioare (procariote) cuprinznd bacteriile i algele albastre-verzi (cianobacteriile).

14

Copeland (1938) i apoi Hutchinson (1967) i Weisz (1971) propun sistemul celor 4 regnuri: Monera include bacteriile propriu-zise i cianobacteriile; Protista include organisme eucariote inferioare, unicelulare, fr difereniere celular avansat (algele, cu excepia celor procariote, fungi, mixomicete, protozoare). Plantae include organisme eucariote superioare, multicelulare, cu perete celular (plante terestre i acvatice). Animatia include organisme multicelulare eucariote, cu celule fr perete celular i plastide, cu o avansat difereniere tisular, celular i de organe. Whittaker i Margulis (1978) ncearc s elimine deficienele precedente de clasificare i propun gruparea n 5 regnuri, dup urmtoarele criterii: -nivelul de organizare procariot; eucariot unicelular; eucariot multicelular; -tipul de nutriie fotosintetic (caracteristic plantelor); ingestiv (tipic animalelor); absorbtiv (caracteristic fungilor). n acord cu aceste principii, sistemul celor 5 regnuri are urmtoarea structur: 1. Regnul Monera (Bacterii i Cianobacterii) 2. Regnul Protista (Protozoare i Chrysophyte) 3. Regnul Fungi (Mucegaiuri, levuri, ciuperci adevrate) 4. Regnul Plantae (Alge verzi, brune, roii, Bryophytae)

5. Regnul Animalia (Metazoare)

Conform unei tehnici propuse de C.Woese (1990) s-a rediscutat chestiunea clasificrii procariotelor i a prezenei regnului Monera. Cercetrile au demonstrat existena a dou grupuri distincte de procariote: Arheobacteriile (arheos = vechi) i Eubacteriile (Eo = adevrat) Astzi, se consider c exist 3 linii diferite de microorganisme: Arheobacteriile, Eubacteriile i microorganismele eucariote (tabelul 2.2.).

15

Tabelul 2.2. Caracteristicile arheobacteriilor, eubacteriilor i eucariotelor (dup Mirela Burcea, 2002)
Caracteristica Talia (L) Peterele celular Arheobacterii 1 m Diveri constituieni n lanuri ramificate cu legturi esterice 1 Timidine absente 30S, 50S 1500 nucleotide 2900 nucleotide bacteriorodopsine Fisiune binar Eubacterii 1 m Acid muramic i peptidoglicanul n lanuri drepte cu legturi esterice 1 Timidine, n general absente 30S, 50S 1500 nucleotide 2900 nucleotide prezeni bacterioclorofile Fisiune binar Eucariote 10 m Fr perete celular (animale) Cu perete celular dar fr peptidoglican (vegetale) n lanuri drepte cu legturi esterice prezent ntotdeauna mai muli Timidine, n general, prezente 40S; 60S 1800 nucleotide 3500 i mai multe nucleotide prezeni Clorofile carotenoide Mitoz, Meioz

Lipide membranare Membran nuclear Cromozomi ARN transfer Ribozomi (talia subunitilor) Lungimea ARN-r Lungimea ARN-r 23S Flageli Pigmeni fotosintetici Diviziunea celular

n pofida unor opinii contradictorii exprimate de diferii cercettorii, clasificarea fcut de Whittaker rmne de interes sugernd anumite relaii evolutive ntre diferitele grupe. El are evidente avantaje ce decurg din utilizarea regnurilor ca uniti de clasificare, dar i o serie de limitri evideniate de Whittaker nsui. Datorit progresului nregistrat prin noile tehnicide biologie molecular, au fost bulversate clasificrile existente, conform acestora se poate constata c organisme avnd o organizare celular identic pot fi distincte ca urmare a unor majore deosebiri de ordin molecular.

16

Dup observaiile fcute de C.Woese (1990) s-a precizat locul microorganismelor pe scara evolutiv a lumii vii (fig.2.1.)

Protozoare Mycete

Animale Vegetale Citoplaste Cilisi Chromabacterii Bacterii gram +

Bacterii termoacidofile

flageli Protozoare Animale Mitocondrii

Pinochete Bacterii fotosintetice purpurii

Eucariote

Bacterii fotosintetice verzi

Arheobacterii

Progenate (grup ancestral comun)

Eubacterii

Evolutia chimica

17

2.2. Caracteristicile fundamentale ale microorganismelor

Microorganismele se caracterizeaz printr-o serie de proprieti structurale i funcionale care le deosebesc de celelalte uniti vii. Caracteristicile fundamentale ale microorganismelor sunt: organizarea celular, unicelularitatea i invizibilitatea, talia i volumul celular, potenialul metabolic i de reproducere, omniprezena i abundena

2.2.1. Organizarea celular Caracteristica general a microorganismelor este organizarea celular celula fiind unitatea funcional a lumii vii; excepie fac virusurile care, aa cum am artat n subcapitolul anterior, sunt lipsite de organizarea celular. Microorganismele se clasific n dou mari grupe, n funcie de tipul de organizare celular: procariote eucariote

Aceti termeni provin etimologic din limba greac (procariote = pro (nainte) i caryon (nucleu) = deci, nainte de organizarea nuclear, iar eucariotele = eu (adevrat) i caryon (nucleu) cu nucleu adevrat. Aflate pe o treapt superioar de organizare celular, eucariotele au un nucleu bine delimitat de membrana nuclear, cu mai muli cromozomi dect procariotele care au nucleu fr membran nucleaz proprie i cu un singur cromozom. Mai mult, microorganismele procariote sunt unicelulare, iar cele eucariote pot fi uni- sau pluricelulare, dar fr s prezinte difereniere sau specializare celular, fapt care este specific doar organismelor eucariote superioare (plante, animale). Tabelul 2.3. Caracteristici generale ale celulelor eucariote i procariote (dup Mirela Burcea, 2002) Caracteristica Organizare celular Organizare nuclear Procariote Simpl nucleoid, aparat nuclear Eucariote Complex Nucleu bine delimitat de o membran

18

Organite specializate Tip de organizare Grupe de microorganisme

Rare unicelular bacterii

numeroase Unicelular, pluricelular Alge, protozoare, fungi (ciuperci microscopice)

n plus, celula eucariot are numeroase organite specializate fa de celula procariot care are un volum celular mai mic, iar numrul organitelor specializate este foarte mic. Fa de aceste forme de organizare celular, virusurile nu au citoplasm, nu au un metabolism propriu, ci ele se dezvolt obligatoriu n celula pe care o paraziteaz sunt, cu alte cuvinte, - parazite obligat intracelulare. n sintez, caracteristicile anatomice i funcionale ale celulelor procariote i eucariote sunt prezentate n tabelul 2.4. Tabelul 2.4. Caracteristicile anatomice i funcionale ale procariotelor i eucariotelor (dup Mirela Burcea, 2002)
Caracteristici a) Anatomice Peretele celular Membrana celulozic Membrana citoplasmatic Membran nuclear Nr.cromozomi ADN independent de nucleu Citoplasma Procariote animale prezent prezent Un singur grup linkage (cromozom circular) ADN plasmidial Gel permanent fr cureni citoplasmatici Subuniti de 30S i 50S libere n citoplasm prezent prezent Mai mult dect 1 ADN mitocondrial Sol-gel (transformri reversibile), cureni citoplasmatici Subuniti de 40S i 60S asociate reticulului endoplasmatic prezente prezente prezent prezeni prezente prezent Eucariote vegetale prezent prezent* prezent prezent Mai mult dect 1 ADN mitocondrial i cloroplastic idem

Ribozomi

idem

Mitocondriile Reticul endoplasmatic Aparatul Golgi Lizozomii Cloroplastele Vacuolele Centriolul

prezente prezente prezent prezeni prezente, excepie fungii prezente prezente

19

Caracteristici b) Funcionale Tipul respirator Diviziunea mitotic Diviziunea meiotic Mobilitatea

Procariote animale Aerob; anaerob Flageli simpli, alunecare aerob

Eucariote vegetale Aerob, fermentativ la unii fungi prezent prezent Absent**

prezent prezent Flageli sau cili compleci, micri amoeboide

- la fungi este prezent chitina unele alge i unii fungi produc celule reproductoare mobile

2.2.2. Unicelularitatea i invizibilitatea cu ochiul liber nc din definirea obiectului de studiu al microbiologiei am precizat faptul c intr sub incidena ei, doar organismele cu dimensiuni mai mici de 1 mm. Dac facem precizarea c, talia celui mai mare microorganism nu depete cteva sute de microni (cu cteva excepii), se nelege c microorganismele nu pot fi vzute cu ochiul liber, trstur ce le separ de alte grupe de vieuitoare. 2.2.3. Talia i volumul celular ntre microorganismele procariote i cele eucariote exist deosebiri importante n ceea ce privete volumul celular i dimensiunile, evident eucariote fiind mai mari dect procariotele, spre exemplu, diametrul mediu al unei bacterii (celul procariot) este de 0,5-1mm, iar amoeba i parameciul (celule eucariote unicelulare din grupa protozoarelor) msoar 400-600 mm, respectiv 150-200 mm. Talia i volumul celular la unele procariote i eucariote sunt prezentate n tabelul 2.5.

Tabelul 2.5. Talia i volumul unor procariote i eucariote (dup J.P.Regnault, 1990) Grupa de microorganisme Talia Volumul mediu

20

(m) EUCARIOTE Alge unicelulare (Micromonas) Protozoare (Amoeba proteus) Levuri (Saccharomyces cerevisiae) PROCARIOTE Staphylococcus aurens Escherichia coli Salmonella typlii 1 400-600 1-30 0,5-1 0,5-2,5 0,5-3

(m3) 5-15000 10.000-50.000 20 50 1-5

2.2.4. Potenialul metabolic i de reproducere al microorganismelor n pofida taliei mici i a simplitii de organizare microorganismele dispun de multe mijloace de a-i procura energia necesar activitii lor vitale: n funcie de specie, potenialul metabolic poate s se dezvolte pornind de la materii minerale sau de la cele mai variate substane organice din natur. Acest potenial metabolic considerabil i adesea superior altor organisme este dat de raportul suprafa / volum care este foarte mare, capacitatea de absorbie a elementelor nutritive fiind direct proporional cu acest raport. Astfel, bacteriile au o putere metabolic mult superioar tuturor vieuitoarelor, fiind de 2,5 milioane ori mai intens dect a omului. Ct privete potenialul de reproducere, microorganismele i, n special, procariotele se caracterizeaz prin valori foarte ridicate. Comparnd chiar microorganismele cu organismele superioare s-a constatat c o populaie bacterian i dubleaz masa la fiecare 3 minute, o plant la 2 sptmni, iar un animal la 3 luni. Un alt exemplu edificator este specia Staphylococcus aurens creia i sunt suficiente 2 zile pentru a ajunge la o mas egal cu masa Terrei. Pornind de la aceste valori considerabile ale potenialului metabolic i reproductiv o practic frecvent aplicat n rile puternic industrializate este obinerea, spe exemplu, din 1 ton de reziduuri petroliere a peste 1 ton de levuri uscate sau 0,75 t protein brut, ceea ce echivaleaz cu 1,7 tone de soia, iar exemplele ar putea continua. 2.2.5. Omniprezena i abundena Una din cele mai importante caracteristici ale lumii microorganismelor o constituie abundena lor: ele pot exista n aer, n ap, n sol, la suprafaa esuturilor vegetale i animale. Dei nu toate microorganismele sunt periculoase pentru om, sau alte organisme vii, acestea i-au dezvoltat un sistem imunitar caracteristic, capabil s lupte contra
21

agresiunii lor. Dar, exist i microorganisme utile, prezena lor fiind important pentru producerea de O2, descompunerea i reciclarea materiilor organice, circuitul elementelor minerale, sau utile direct alimentaiei omului i animalelor. ncercnd un clasament al celor mai abundente vieuitoare / unitate de suprafa, cercettorii au ajuns la concluzia c microorganismele au densitatea cea mai mare: 1 miliard / g sol fertil, sau 1 miliard / ml tub digestiv al animalelor, iar masa tuturor microorganismelor depete n biosfer pe a altor vieuitoare.

CAPITOLUL III VIRUSURILE

3.1. Conceptul de virus

22

Iniial, virusurile au fost considerate ca substane chimice sau ca organisme primitive, au dimensiuni foarte mici, alctuite din acizi nucleici i proteine componentele definitorii ale organismelor vii. Diveri cercettori au ncercat, de-a lungul timpului, s ncadreze virusurile fie n categoria organismelor vii, fie a substanelor chimice cu nsuiri deosebite. Pentru Lwoff (1981), un organism viu este un sistem ordonat i independent de structuri i funcii independente, capabil de metabolism, cretere i reproducere; cu alte cuvinte, cele mai simple entiti vii i, n acelai timp, unitatea funcional care st la baza organizrii tuturor sistemelor biologice este celula. Dintre toate celulele cunoscute, bacteriile reprezint cea mai mic unitate de integrare i reproducere. Aceast concluzie este sintetizat de F.Jacob (1970) conform creia bacteriile constituie, ca s spunem aa, un minim vital. Cu ele debuteaz biologia molecular; nivelul inferior lor se definete n termeni de chimie i fizic, iar nivelul superior, n termeni de organizare. n afara celulei, particula viral este un obiect inert. (F.Jacob, 1970) Aceast concepie a fost unanim acceptat i, de altfel, n toate sistemele de clasificare ale lumii vii, indiferent c se refer la dou, trei, patru sau cinci regnuri, virusurile nu sunt recunoscute ca organisme. Definind virusurile conform lui tefan Nicolau acetia sunt ageni patogeni infinit de mici, avnd dimensiuni cuprinse ntre 10200 m. Sunt puin evoluate, situndu-se pe primele trepte ale scrii taxonomice a microorganismelor. Sunt forme primitive de via, att de incomplet organizate nct nui pot realiza singure metabolismul; aceasta ar fi explicaia parazitismului lor obligatoriu pe celula vie. n lucrrile lui Aristotel i Cornelius Celsus au fost menionate pentru prima dat n istorie date referitoare la rabie; apoi, n China antic n anul 2500 .e.n. sunt consemnate date referitoare la variola uman. Abia n anul 1796 se conseneaz primele vaccinri antivariolice (Jenver). Ct privete lumea vegetal, bolile virotice ale plantelor au fcut obiect al cercetrilor mult mai trziu, fiind menionat anul 1720 cnd Crave demonstreaz, fr a fi descoperit agentul patogen, posibilitatea transmiterii mozaicului panaat al lalelelor prin gref la o plant sntoas. Datorit lipsei mijloacelor optice perfecionate, Pasteur este obligat s admit existena unui microb al turbrii, dar fr a-l putea decela, descoperind, n perioada 1881-1885 vaccinul antirabic.

23

Preocuprile fa de aceste entiti se amplific printre cei care pot fi menionai sunt: Mayer (1886) care arat chiar c principiul infecios poate fi inactivat la cldur sau prin tratare cu alcool, Ivanovski (1892) care, referindu-se la VMT, demonstra multiplicarea agentului patogen n plantele bolnave la care este transmis n serie, iar bazat pe aceasta i pe faptul c trece prin filtrele bacteriologice, l consider un agent viu filtrabil, dar de tipul bacteriilor foarte mici. Beijerinck (1898) adaug la acestea rezistena ndelungat (2 ani) n frunzele uscate i difuzibilitatea n agar, denumind virusurile contagium virum fluidum, iar nu microorganisme, precum i faptul c acestea sunt capabile s se multiple n celula vie odat ncorporate n citoplasma acesteia. Beijerinck devine astfel, primul cercettor care a intuit natura deosebit a virusurilor fa de ali ageni patogeni. Odat cu progresele realizate n domeniul tehnicilor de izolare, perfecionare i purificare ale virusurilor s-au fcut descoperiri remarcabile n domeniu: bacteriofagii (Twart i DHerelle, 1917), natura nucleoproteic a fagilor (Schlessiger, 1936), a naturii ARN a materialului genetic al UMT (Bowden i Pirie, 1937) faptul c energia necesar pentru sinteza constituienilor virali este furnizat de celula-gazd (Cohen, 1946). Meritul de a fi definit particula viral matur virien a principalelor particulariti ale virusurilor permind astfel delimitarea lor de lumea microorganismelor, revine lui Andre Lwoff (1953). El a definit virusurile ca entiti infectante nucleo-proteice, potenial patogene, posednd un singur tip de acid nucleic i care se reproduc prin materialul lor genetic. Ele sunt incapabile de cretere, diziviune, nu-i pot sintetiza un sistem propriu de energie, avnd nevoie pentru a se reproduce de ribozomii celulei-gazd pe care o paraziteaz.

3.2.

Caracteristicile generale ale virusurilor

Virusurile au urmatoarele particularitati: virusurile sunt ageni infecioi de tip special i nu au organizare celular; unitatea lor de structur i funcie este VIRIONUL, adic virusul infecios matur; alte stri posibile de existen: virus vegetativ - care poate fi replicat i provirus genom viral integrat n cromozomul celulei-gazd; conin ADN sau ARN, niciodat ambele tipuri de acizi nucleici, exclusiv n genomul viral. n compoziia chimic a virusurilor intr a lturi de acizii nucleici proteinele cu rol structural lipsind glucidele i lipidele;
24

Echipamentul enzimatic de biosintez i catabolism este absent i de aceea se reproduc numai n celulele vii; Nu au capacitate de cretere i de diviziune, Ca o consecin a acestor nsuiri virusurile sunt parazii obligat intracelulari la om i animale, plante, alge albastre, ciuperci i bacterii. Parazitismul virusurilor este un parazitism absolut, caracter discriminatoriu fa de cel al bacteriilor sau al protistelor (Lwoff, 1981).

3.3.

Modul de apariie a virusurilor

Concepia unanim acceptat privind apariia virusurilor este aceea c ele au aprut n urma unor evenimente repetate i independente; la ora actual exist n jur de 30 tipuri majore de virusuri ntre care nu exist intermediari, comparativ cu gradaia observat ntre celule i organisme. Mai mult, dac modificrile genomului viral ca mrime (prin deleie, respectiv adiie) pot fi uor de explicat, casida viral este foarte riguros structurat i nu poate exista nici prin pierderea unei capsomere, dar nici prin modificarea dimensiunilor ei. n privina modului de apariie, virusurile nu au evoluat unul din altul, cu excepia fagilor cu coad, iar principalul argument este acela c, nu exist forme intermediare ntre membrii diferitelor grupuri morfologice. Numai coada fagilor este singura structur viral care prezint variaii structurale i morfologice care pot fi puse pe seama unei ci evolutive. Anumite virusuri care fac parte din acelai grup major pot avea un strmo, iar altele nu. Spre exemplu, unele virusuri care infecteaz insectele i vertebratele sau insectele i plantele i care au morfologie comun ar putea avea origine comun, dar acest lucru nu se ntmpl ntotdeauna. Faptul c virusurile animale au proprieti genetice similare cu cele ale celulelor n care se replic, este nc o dovad a faptului c ele au evoluat n paralel cu speciile pe care le paraziteaz. n concluzie, evoluia virusurilor a urmat ci i mecanisme care le sunt absolut proprii, la ora de fa, mai multe concepii care ncearc s explice apariia i evoluia virusurilor: virusurile molecule primordiale, virusurile rezultat al unei evoluii regresive, virusurile originare din material genetic celulat etc.

3.4. Morfologia virusurilor

25

Abordarea morfologiei virusurilor, respectiv a formei i dimensiunilor lor se raporteaz la virion virus infecios matur care este unitatea integrat de structur i funcie a virusurilor i care se caracterizeaz prin infeciozitate. Forma virusurilor poate fi: sferic (izometric) sau sferoidal (virusul gripal etc.) cilindric alungit sau de bastona rigid sau flexibil (VMT etc.) paralelipipedic (grupa Pox, respectiv variola vaccinal); obuz sau cartu (grupa Rhabdovirus) mormoloc, spermatozoid, cireaa cu coad (fagii cu coad) macrovirusuri cu limite cuprinse ntre 275-300 milimicroni; microvirusurile cu dimensiunile cuprinse ntre 8-10 milimicroni.

Ct privete dimensiunile virusurilor acestea se ncadreaz n dou categorii:

Exist trei posibiliti de msurare a dimensiunilor virusurilor, frecvent utilizate n cercetarea microbiologic, i anume: msurarea imaginii fotografice la microscopul electronic metoda direct; msurarea vitezei de sedimentare n urma centrifugrii i ultrafiltrare prin membrane de colodiu metode indirecte.

3.5.
obligatorii:

Anatomia virusurilor

Indiferent de forma i dimensiunile lor, virusurile au dou componente eseniale, genomul viral i capsica viral

care, mpreun alctuiesc nucleocapsida. Aceasta poate avea uneori un al treilea component, la exterior, anume nveliul extern. 3.5.1. Genomul viral n componenta genomului viral intr, ntotdeauna, un singur tip de acid nucleic, fie ADN, fie ARN, niciodat ambele.Genomul viral conine informaia genetic necesar pentru autoreplicare, precum i pentru sinteza celorlali constitueni virali i a precursorilor lor. Acizii nucleici virali determin infeciozita virusurilor. Genomul viral are o mrime variabil, avnd greutatea molecular cuprins ntre 1,2-1,8 x 106 dal (grupul Parvovirus), la 25 x 106 dal (grupul Adenovirus), pn la 200 x 106 dal (grupul Pox).
26

Numrul de gene este, de asemenea, variabil, cu limite cuprinse ntre 3 (Polyoma) la 160 (Pox). Exist o serie de avantaje ale genomurilor mici, i anume: necesit mai puin timp pentru replicare i traducere, cu un consum mai mic de energie necesar replicrii i morfogenezei, deduce posibilitatea decodificrii greite a transcrierii i traducerii informaiei genetice. n funcie de tipul de acid nucleic conin n genom, virusurile pot fi: cu genom ADN dezoxivirusuri, cu genom ARN ribovirusuri.

Dezoxivirusurile conin ADN mono- sau bicaternar (dublucatenar), prezentnd 7 tipuri principale de structur: monocatenar liniar (Parvovirusurile); monocatenar circular (fagul x 174, fagul filamentar fd1); dublucatenar linear (fagul T7). dublucatenar linear, respectiv (redundant) terminal (Adenovirus) dublucatenar linear, redundant terminal, permutat circular (fagii de tip T-par) dublucatenar linear cu extremiti monocatenare complementare (fagul ); dublucatenar circular inclus covalent (virusurile Polyoma i SV40); genom ARNm.c. linear (VMT) genom ARN m.c. intens pliat (fagii R17, MS2, f2); genom ARN m.c. circular (virusul encefalomiocarditei oarecelui); genom ARN d.c. divizat (Reovirus, Myxovirus). Ribovirusurile conin ARN i prezint patru tipuri principale de structur:

Demonstreaz iniial pentru ADN fagic (Hershey i Chase, 1952), apoi pentru ARN din VMT (Gierer i Schramm, 1956), infeciozitatea acizilor nucleici virali izolai este mai mic de 103 10 ori dect aceea a virionilor din care sunt extrai, datorit degradrii lor rapide precum i a faptului c sunt slab fixai de ctre celule, demonstrnd astfel rolul capsidei virale n adsorbia i fixarea virionilor pe celule. 3.5.2. Capsida viral

27

Este nveliul proteic ce acoper genomul (kapsa-cutie, lb.greac); este alctuit din unul sau mai multe tipuri de protein, asigurate n mod regulat, formnd structuri caracteristice pentru tipul morfologic al virionului respectiv. Rolul capsidei virale este: -protejarea materialului genetic de degradarea de ctre nucleaze; -mrete rezistena virusurilor fa de mediul extern i infeciozitatea lui; -contribuie la fixarea i ptrunderea virusurilor n celule; -determinarea spectrului de gazde al virusurilor; -conine determinani antigenici rspunztori de producerea rspunsului imun i a anticorpilor protectori n organismele animale infectate. Lwoff i Tournier (1967) consider c, capsida viral este alctuit din uniti morfologice numite capsomere (mervos, lb.greac = parte). Capsomerele se asociaz ntre ele dup reguli simple, dar precise, au forme i mrimi variabile de la un virus la altul i realizeaz structuri cu simetrie helical sau icozoedric. Numrul i dimensiunile capsomerelor din structura unui virion, sunt constante i controlate genetic. Moleculele de protein care alctuiesc capsida se grupeaz n mod obinuit, dup trei tipuri de simetrie: helical (VMT, virusul grupal); cubic (icozaedric) (Adeno-,Polio-,Herpes virus) binar, complex (virusuri de tip variol vaccin, bacteriofagi)

3.5.3. nveliul extern n cazul anumitor virusuri nucleocapsida este acoperit de un nveli lipoproteic care se matureaz n timpul nmuguririi lor n membrana celular a celulei-gazd nainte de a o prsi. Aceast structur poart denumirea de nveli extern sau peplos (peplos, n lb.greac = manta), care este alctuit din lipidele celulei-gazd i la exteriorul su pot exista proeminene de suprafa sau prelungiri denumite spicule (formate din glicoproteine virale). Rolul nveliului extern (peplos) este: pstrarea stabilitii nucleocapsidei; favorizarea fixrii virionului pe celulele-gazd i, deci, infecia celulei-gazd.

28

Dac virusurile posed nveli extern, ele se numesc mbrcate, sau acoperite, iar cele care sunt alctuite din nucleo-capsid se numesc virusuri nude sau neacoperite. 3.6.

Replicarea virusurilor

Replicarea virusurilor (producerea de noi copii de genom viral) are loc numai n celulele-gazd comportament ce corespunde relaiei de parazitism absolut. Celula vie furnizeaz virusurilor aminoacizi, baze nucleice, dar i tot dispozitivul celular efector. Virusul invadant introducnd informaia specific propriului su genom n celula-gazd, inhib sau stopeaz sinteua de constituieni celulari (ADN, ARN, proteine), astfel nct celula ce a fost infectat produce aproape exclusiv constituieni virali. Acest proces de multiplicare a virusurilor are loc n etape succesive, care se ntreptrund, i anume: fixarea i absorbia virusului; ptrunderea virusului n celula-gazd; faza de decapsidare; transcrierea ARN-m de la genomul parental; traducerea informaiei pentru enzimele virale; replicarea genomului viral; biosinteza proteinelor structurale i de reglare; morfogeneza virusurilor; eliberarea virusului din celul i iniierea unui nou ciclu de replicare.

n prima etap, de fixare i absorbie a virusului pe suprafaa celulei-gazd, are loc interaciunea dintre constituienii peretelui celular al celulei-gazd (receptori specifici de virus) i anumite structuri speciale aflate pe suprafaa virusului i care recunosc receptorii celulei-gazd. Cu alte cuvinte, exist o anumit specificitate de fixare. Celulele vegetale nu au receptori de virus, de aceea, virusurile plantelor nu au specificitate de fixare, deci nu ader i nu strbat peretele celular dect dac acesta prezint leziuni mecanice, de aceea, infectarea plantelor are loc doar cu cantiti mari de virus, dar, odat produs, infecia este nsoit de o multiplicare viral intens.

29

Cel mai nalt grad de specificitate l prezint interaciunea fag bacterie, structura cea mai adecvat pentru fiecare fiind cea a bacteriofagilor, iar receptorii cei mai bine cunoscui sunt cei de pe suprafaa celulei bacteriene. Virusurile animale ns, se fixeaz mai puin specific i mai puin eficient. Dup faza de adsorbie nespecific reversibil determinat de atracia ionic, avnd loc ciocniri ntmpltoare (micare brownian) ntre virusuri i celula-gazd, urmeaz faza de adsorbie specific ireversibil, a crei szabilitate depinde de fore electrostatice. Rata fixrii este de aproximativ 3-5 x 109, deoarece o particul viral trebuie s se loveasc de mai multe ori de o celul aninte de a se fixa specific pe ea. Dup ce virionul a fost fixat de receptorii celulei, ncepe faza de nglobare, sau de ptrundere a virusurilor n celula-gazd, care se desfoar dup mecanisme diferite, spre exemplu, n cazul bacteriilor i celulelor vegetale, mecanismele de infecie sunt diferite fa de celula animal (care nu are perete celular). Indiferent de natura mecanismelor de adsorbie, ptrunderea virusurilor n celul se poate realiza pe dou ci (Dalis, 1973, 1978). a) Endocitoza proces activ de ingestie, analog celui de captare nglobarea picturilor de lichid prin invaginarea membranei celulare, asigur ptrunderea intact a virionului n interiorul celulei-gazd. Constituie mecanismul predominant de nglobarea virusurilor animale. b) Fuziunea fuziunea suprafeei virusului cu membrana celular n zona de contact i, prin urmare, are loc dizolvarea nveliului viral i formarea unui canal prin care virionul trece n citoplasm. Constituie mecanismul de ptrundere n celul n cazul virusurilor cu peplos (nveli extern), la virusurile vaccin (Pox), paramixovirusuri. Cele dou mecanisme ns, pot coexista frecvent n aceeai celul pentru acelai virus. Decapsidarea este faza de trecere a virionilor, la cea de virui vegetativi, fiind descris ca o faz de dispariie a virusurilor (faza de eclips). Genomul viral este eliberat de nveliurile sale i devine mai greu de evideniat. Durata perioadei de eclips variaz de la un virus la altul i oscileaz de la 1-2 ore de Poliovirus, 3-5 ore la Herpesvirus, 4 ore la Poxvirus, 8-10 ore la Adenovirus, pn la 12-14 ore la Paponavirus. Aceste prime trei faze ale ciclului de multiplicare viral sunt procese relativ ineficiente, de aceea, raportul dintre numrul particulelor virale infecioase raportat la numrul total de virioni introdui, este aproape ntotdeauna subunitar.

30

Dup ce au ptruns n celul, virusurile se deplaseaz la locul de sintez n nucleu, fr a fi cunoscute cile prin care virusurile circul pn la nucleu, dar se presupune c migrarea virusurilor n interiorul celulei este vectorial. Urmtoarea etap a deplasrii const n biosinteza constituienilor virali, care are loc n trei etape succesive: biosinteza proteinelor timpurii (early proteins), care ndeplinesc funcii specifice inhib sinteza ADN, ARN, a proteinelor celulei-gazd, formeaz matricea incluziunilor nucleare sau citoplasmatice n care are lor replicarea acidului nucleic viral i morfogeneza virusurilor, iniiaz replicarea ADN, ARN sau ADN-polimeraze, nucleare sau ADN-ligaze; replicarea genomului viral, etap n care celula-gazd furnizeaz odat cu materialul de construcie i funcii pentru biosinteza de virus nonreprezentnd o etap esenial n evoluia infeciei virale. Odat cu formarea ARN-m viral nceteaz activitatea infectant a virusului i ncepe sinteza de proteine virale specifice. Biosinteza proteinelor tardive (late proteins) sunt, n cea mai mare parte proteine structurale, de capsid, care controleaz expresia genelor timpurii, n cursul acestei biosinteze are loci replicarea genomului viral. Durata perioadei de biosintez a proteinelor tardive este limitat de capacitatea celulei-gazd de a furniza energia necesar acestor sinteze. nc din faza de sintez a proteinelor tardive genomurile nou formate sunt ansamblate pentru a forma structura organizat a particulei virale mature, proces denumit morfogenez a virusurilor. Replicarea i morfogeneza virusurilor sunt procese intracelulare care au loc n nucleu sau n citoplasm. Ribovirusurile sunt replicate n citoplasm (excepie: virusul gripal), iar genomul dezoxivirusurilor este replicat i transcris n nucleu, iar sinteza proteinelor se face exclusiv n citoplasm, dup care ele sunt transportate n nucleu unde are loc morfogeneza.

Eliberarea particulelor virale patogene din celul se poate face rapid i explosiv, prin ruperi mecanice, sau dimpotriv, lent i controlat prin strbarea membranei celulare.

31

Acest proces are loc n mod diferit de la un virus la altul; spre exemplu virusurile mici sunt eliberate mai uor (Poxvirus), pe cnd cele mai mari au tendina de a fi reinute timp ndelungat n celulele n care s-au multiplicat. La fel, funcii de tipul de acid nucleic al virusului, eliberarea particulelor virale progene este diferit: virusurile cu ADN sunt reinute n celule chiar dup apariia efectului citopatic (excepie Herpes virus), deci sunt eliberate cu frecven mic, n timp ce virusurile cu ARN sunt rapid eliberate.

3.7.
-

Tipuri de infecii virale

infecii acute; infecii inaparente; infecii cronice.

Infeciile virale se pot clasifica n:

Infeciile acute sunt ntlnite frecvent la virusurile animale care produc infecii acute cu durat limitat la om i animale. Aceste infecii evolueaz la nivel celular ca infecii productive, virusul fiind replicat cu producere de virus progen i chiar cu moarte celular. n funcie de virulena agentului patogen i de intensitatea reaciei de aprare a sistemului imunitar, virusul poate fi eliminat din organism lsnd, dup caz, o stare de imunitate mai mult sau mai puin solid. Infeciile inaparente apar n situaia n care infecia i multiplicarea virusurilor nu sunt nsoite de manifestri clinice; n aceast situaie virusul este eliminat din organism lsnd o stare de imunitate. Infeciile persistente sunt infecii de lung durat i pot fi infecii cronice (cu producere continu de virus), care urmeaz uneori unei stri de boal, cum ar fi n cazul hepatitei B i infecii latente, cnd infecia viral este, cel mai adesea inaparent i nu este nsoit de producerea unui nou virus. Uneori cele dou tipuri de infecii persistente pot aprea la acelai animal, ele fiind foarte greu de deosebit la nivel de organism. Infeciile cronice au o evoluie ndelungat i sunt determinate de incapacitatea organismului de a elimina virusul din organism, marea lor majoritate evolund fr manifestri clinice evidente. Dar, aceste infecii cronice pot determina, dup o perioad ndelungat de evoluie, fie mbolnviri cu caracter malign (leucoza aviar), fie complicaii imunopatologice (glomerulonefrita sau complexe imune). Cea mai cunoscut infecie viral cronic rmne, pentru om, hepatita seric de tip B.

32

n privina infeciilor latente, aceasta depinde de tipul de celul infectat cu un anume virus, dei n prezent nu se cunosc mecanismele biochimice care condiioneaz latena viral. Exemple de infecii latente: infeciile produse de virusurile din grupul Herpes (la om i aproape toate speciile de animale). Factorii activatori ai infeciei latente acioneaz probabil asupra celulei i nu direct asupra virusului i ei pot fi: specifici pentru celul (corelai cu un tip particular de celul infectat) i nespecifici pentru celul (activeaz infeciile virale prezente ntr-o gam larg de celule). n ceea ce privete rolul reaciilor de aprare ale gazdei n contextul infeciilor latente acetia se pare c pot juca un rol important n stabilirea i meninerea lor.

CAPITOLUL IV BACTERIILE
Procariotele formeaz un grup vast compus din dou subgrupe: Arhebacteriile i Eubacteriile. Bacteriile reprezint grupul cel mai important de microorganisme att din punct de vedere al numrului de reprezentani ct i al importanei ecologice i practice pentru om, precum i ca fiind cel mai important grup de microorganisme care au condus la cunoaterea fenomenelor de biologie molecular. ns conceptul de bacterie a fost mult controversat, fiind definit pentru prima oar n urm cu aproape trei decenii. S-a demonstrat (Stanier, 1989) c ntreaga evoluie a avut loc prin diversificarea celulei bacteriene, respectiv a celulei procariote i c unitatea de structur a bacteriilor i a algelor albastre-verzi o reprezint celula procariot.

4.1.

Proprieti fizice ale bacteriilor

4.1.1. Dimensiunile bacteriilor

Bacteriile se caracterizeaz printr-o talie redus, de circa 100 ori mai mic dect aceea a celulei eucariote; dimensiunea celulei bacteriene este totui variabil, n funcie de specie, fiind o caracteristic determinat genetic. Dimensiunile bacteriilor se situeaz, n medie, ntre 0,5-1 m x 3-6 m; cele mai mici aparin genului Mycoplasma, ce au diametrul de 125-250 m, avnd talia apropiat de cea a celor mai mari virusuri (Pox).

33

Cele mai mari bacterii pot avea o talie destul de mare cum este n cazul unor Spirochete (Saprospira grandis) care pot atinge chiar 500 m lungime. La fel, cianobacteriile genului Oscillatoria au circa 7 m diametru, adic acelai diametru pe care l are o globul roie. Specia Escherichia coli este considerat o bacterie de talie medie, avnd dimensiuni cuprinse ntre 1,1-1,5 m lime i 2-6 m lungime. Cu alte cuvinte, cele mai mici bacterii pot fi vizibile la microscopul fotonic, iar cele mai mari depesc mrimea celor mai mici protiste eucariote. De aceea, dimensiunile bacteriilor nu se pot utiliza ca un caracter diferenial absolut ntre acestea i alte entiti; totui, putem afirma c, dimensiunile medii ale bacteriilor sunt cu mult mai mici dect ale celulelor eucariote. Dup Stanier (1970), volumul este baza pentru a aprecia mrimea celulei bacteriene, ntruct forma acesteia variaz foarte mult. Acest volum se poate calcula cu ajutorul formulelor de calcul aplicate corpurilor geometrice regulate, n care se pot ncadra cele mai multe bacterii (sfera i cilindrul). n general, limita inferioar de mrime a unei celule bacteriene este determinat de posibilitatea ei de a conine toi constituienii celulari necesari pentru cretere i diviziune. Cea mai mic bacterie vizibil la microscopul fotonic are dimensiuni foarte apropiate de aceast limit molecular necesar pentru meninerea funciilor celulare, dac dimensiunile celulare ar fi mai mici, ele nu ar fi fizic suficient de cuprinztoare pentru a ngloba ntreg echipamentul enzimatic i molecular necesar vieii. Limita superioar de mrime este corelat cu raportul suprafa/volum, avnd n vedere c toi nutrienii trebuie s ptrund n celul, n timp ce produii de catabolism trebuie s fie eliminai. Dac dimensiunile unei celule cresc, volumul crete mai rapid (la cub n raport cu raza celulei), iar din cauza acestui dezechilibru, celula nu poate ngloba nutrieni i nu poate elimina substanele reziduale n acord cu necesitile crescute ale volumului celular mrit. Dimensiunea celulei bacteriene apare ca o condiie obligatorie pentru creterea i multiplicarea lor rapid, conferindu-le un mare avantaj biologic n natur, deoarece celulele mari au nevoie de mult timp pentru ptrunderea nutrienilor n celul i metabolizare.

4.2.

Forma bacteriilor

34

Forma celulei bacteriene este, la fel ca i dimensiunile ei, o caracteristic determinat genetic, deci stabil intraspecific. n ceea ce privete forma, n lumea bacterian exist o mare diversitate. Deoarece forma bacteriilor este dificil de apreciat n mod direct, n mediile naturale i poate fi influenat de o serie de factori (vrsta culturii, compoziia mediului etc.), s-a convenit c forma bacteriilor criteriu taxonomic foarte important s fie apreciat n culturi tinere, n faza de cretere activ, n condiii optime de temperatur, O2, pH. Exist cteva tipuri morfologice de baz n ceea ce privete forma celulei bacteriene, i anume: bacterii sferice, cilindrice, spiralate, filamentoase i ptrate; n cadrul fiecrui tip morfologic exist ns o anumit variabilitate care face posibil mprirea acestor tipuri n subtipuri. Diversitatea morfologic a bacteriilor reprezint, de cele mai multe ori, o strategie de supravieuire. Diversitatea formelor poate fi exprimat prin anumite funcii: bacteria sferic are raportul S/V foarte mic, fiind avantajat de mediul bogat n nutrieni. Opus acestui caz, ntr-un mediu srac n materii organice, bacteriile sub form bacilar (o suprafa mai mare) vor capta mai uor elementele nutritive dispersate. De asemenea, se constat o legtur i ntre forma bacteriilor i proprietile hidrodinamice: bacteriile sferice sunt frecvent mobile, pe cnd cele adaptate la alunecare sunt bacilare; leptospirele (au forme spiralate) sunt eficace n deplasarea n medii relativ vscoase. Cu alte cuvinte, marea variabilitate a formei bacteriilor corespunde adaptrii fiecreia unei nie ecologice specifice.

4.3.

Organizarea celulei bacteriene

Datorit dimensiunilor foarte mici i particularitilor fizico-chimice ale structurilor componente, ultrastructura celulei bacteriene a fost mult timp dispersat i chiar contestat. Totui, prin perfecionarea tehnicilor de studiu, cu deosebire de cito... macroscopie electronic, s-a reuit descrierea constituienilor structurali ai celulei bacteriene, lund ca reper peretele celular, aceti constituieni pot fi grupai n dou mari categorii:

35

structuri intraparietale: membrana plasmatic, mezonius citoplasma, nucleoidul, ribozomii, sporul, aparatul fotosintetic, incluziunile, vacuolele etc.;

structuri extraparietale: capsula, stratul mucos, spinii, flagelii, fimbriile i plii.

4.3.1. Peretele celular Peretele celular delimiteaz celula bacterian, avnd o consisten rigid i fiind bine definit structural. Peretele celular, datorit indicelui de refracie mic, este greu vizibil, sau invizibil la celulele vii examinate la microscop; el poate fi pus ns n eviden prin colorare selectiv sau prin examinare la microscopul electronic. Cu ct celulele sunt mai tinere, cu att citoplasma este mai abundent, compact i omogen, iar peretele celular mai intim aderat la coninutul celular subiacent. n schimb, peretele celular devine evident, fiind deprtat de citoplasm i uor vizibil, la celulele btrne sau n curs de liz. Peretele celular izolat are aspectul unui sac gol care conserv forma bacteriei din care provine, avnd o grosime de 15-35 nm, rar (Lactobacillus acidophilus) ajungnd la 80 nm. Aceast structur anatomic bacterian are funcii i structuri diferite, ca urmare a necesitilor adaptative caracteristice. Spre exemplu, o bacterie care triete n mediul acvatic trebuie s reziste unei presiuni mai mari asupra citoplasmei, s aib mijloacele de fixare pe un anumit suport; o bacterie parazit intracelular nu are ns nevoie de un perete celular rigid pentru a se proteja de ocurile osmotice. n funcie de structur i de compoziie chimic i pe baza unei coloraii puse la punct de dr.Christian Gram, pereii celulari aparin la trei categorii, respectiv Gram pozitiv, Gram negativ sau acidorezistent; am drept constituient comun peptidoglicanul, dar se deosebesc n ceea ce privete raportul, natura i cantitatea proteinelor, a polizaharidelor i lipidelor. Unele bacterii sunt lipsite, n mod excepional de peretele celular; aici se ncadreaz: mycoplasmele lipsa peretelui celular este specific; bacteriile L i-au perdut prin mutaie peretele celular; protoplatii (sferoplastii) bacterii care n anumite condiii nu-i pot sintetiza peretele celular a) Mycoplastele au fost evideniate prin afeciunile respiratorii provocate la animalele domestice.

36

sunt procariote lipsite de perete celular, singura lor protecie fiind membrana citoplasmatic; triesc ca parazii obligai n esuturile i fluidele omului i animalelor; au un pleomorfism accentuat, respectiv o mare instabilitate morfologic; subbacterii Gram negative, insensibile la penicilin; produc infecii ale aparatului respirator (Mycoplasma pneumoniae) i urinar (Ureaplasma irealyticum)

a) protoplatii i sferoplatii reprezint ansamblul structurilor celulare rmase dintr-o bacterie Gram-pozitiv, dup ndeprtarea integral a peretelui celular sub aciunea lizozimului; se menine ca formaiune sferic pstrnd, n general, proprietile i activitile vitale ale celulei din care provine; nu mai este capabil de refacerea peretelui celular; funcia de barier osmotic este preluat de membrana citoplasmatic; la bacteriile Gram negative, n medii hipertonice celula lipsit de peretele celular se transform n sferoplast echivalent cu protoplastul, nconjurat de constituienii peretelui celular care au rezistat la aciunea lizozimului. Semnificaia biologic a peretelui celular este urmtoarea: determin forma bacteriilor i asigur susinerea mecanic a celulei; asigur protecia fa de ocul osmotic; fr suportul rigid al peretelui celular, membrana plasmatic nu ar putea rezista acestei presiuni interne i nici nu ar asigura protejarea protoplastului; particip la procesul de cretere i diviziune celular prin procese de biosintez localizat n zona septurilor transversale; conine enzime autolitice capabile s atace structura glicopeptidului n cazul sporulrii, al eliberrii sporului prin liza sporangelui, al germinrii, precum i n biosinteza peretelui celular;

37

este sediul unor enzime de transport specifice (vitamina B12, maltoza, maltodextrine) i este implicat n nglobarea unor bacteriocine i n adsorbia unor fagi.

Acioneaz ca o barier impermeabil pentru moleculele hidrofobe, potenial nocive pentru celul, dar permite, n acelai timp intrarea n celul a unor compuin precum: oligopeptide, oligozaharide etc.

Asigur patogenitatea bacteriei prin intermediul lipopolizaharidelor prezente n peretele celular al bacteriilor Gram negative; se presupune c peretele celular al bacteriilor este sediul determinanilor antigenici care induc rezistena celulei bacteriene la fagocitoz i virulena acestora.

4.3.2. Membrana plasmatic (citoplasma) i spaiul periplasmic Membrana citoplasmatic este o formaiune structural ce acoper de jur mprejur citoplasma bacterian i separnd-o de peretele celular. Poate fi pus n eviden i la microscopul fotonic dup o colorare selectiv cu albastru Victoria, sau chiar fr colorare la bacteriile vii examinate n cm ntunecat. Examinat la microscopul electronic ea apare ca o formaiune triplu stratificat, cu o grosime de 7,5-10 nm i reprezint principalul punct de contact cu mediul celular i elementul de legtur cu mediul exterior. Membrana citoplasmatic bacterian conine proteine i lipide n proporie variabil; lipidele sunt reprezentate de fosfolipide i joac un rol important n meninerea integritii membranei. De asemenea, ea mai conine glicolipide i o cantitate mic de acizi grai, precum i dou categorii de proteine (periferice i intrinsece sau integrate). Deseori, la suprafaa extern a membranei plasmatice sunt ataate glucide. n concluzie, membrana citoplasmatic este o structur foarte organizat, cu o arhitectur asimetric flexibil, dinamic i care are urmtoarea semnificaie biologic: reprezint singura suprastructur citoplasmatic permanent a celulei bacteriene cu rolul de a delimita spaiul intracelular; nu reprezint ns o grani fizic inert ci o structur funcional capabil s asigure o deosebire net ntre interiorul i exteriorul celulei; este bariera osmotic fr de membran citoplasmatic celula sar liza, ns aceasta i confer elasticitate i rezisten la gonflare;

38

aplicaii practice ale acestui fenomen n conservarea alimentelor sunt: suprasrturarea i deshidratarea; controleaz schimburile celulare astfel se asigur aprovizionarea celulei cu hran i eliminarea deeurilor rezultate din activitatea metabolic a acesteia; are o ermabilitate selectiv, schimburile ntre mediul extern i cel intern efectundu-se prin membrana citoplasmatic, fie direct prin difuziune, prin porii din reeaua ei molecular sau prin transport activ cu ajutorul unor enzime i a unor transportori. este sediul endocitozei cmembranei citoplasmatice se formeaz o vezicul prin care se ingereaz lichide (pinocitoza) sau solide (fagocitoza);

este sediul unor procese metabolice fie care categorii de molecule din membrana citoplasmatic particip la un tip particular de activitate;

este locul de fixare a organitelor responsabil cu deplasarea bacteriilor flagelii; locul de recepionare a mesajelor chimice sau fizice prin intermediul unor molecule receptoare specializate, care asigur intervenia celulei n fenomenele de chimiotaxie

4.3.3. Citoplasma bacterian Reprezint cea mai mare parte a protoplastului, fiind nconjurat de o membran citoplasmatic. Din punct de vedere al organizrii, citoplasma bacterian nu are o organizare definit (ntlnit la eucariote) ci este un sistem coloidal complex, alctuit din proteine, glucide, lipide, ap i substan minerale. n interiorul citoplasmei se gsesc: materialul nuclear, incluziunile, vacuolele i ceilali constituieni ai protoplastului. O caracteristic a citoplasmei bacteriene este prezena unei mari cantiti de ARN, ceea ce ar explica bazofilia ei intens, mai evident la celulele tinere. 4.3.4. Aparatul nuclear (nucleul) Spre deosebire de celulele eucariote care au un nucleu cu o structur bine definit, mrginit de membran i coninnd un numr definit de cromozomi, nucleul bacterian reprezint o form primitiv de organizare, lipsitde membran inclavat

39

direct n citoplasm i fr a suferi modificri de tip mitotic n cursul ciclului de diviziune (tip procariot). Se denumete: aparat nuclear, nucleoid, nucleozom prin analogie cu structura echivalent a celulelor eucariote. Punerea n eviden a nucleului la bacterii a fost ngreunat de prezena ARN n citoplasm n cantitate mare, care mascheaz ADN din nucleu, chiar i atunci cnd se folosesc colorani b Aparatul nuclear al bacteriilor este constituit din fibre de ADN bicaternar care formeaz un cromozom unic circular, cu o lungime de maximum 1 nm; cromozomul bacterian reprezint circa 2-3% din greutatea celular i ocup mai puin de 10% din volumul celular. S-a evaluat c aparatul nuclear bacterian conine aproximativ 2000 de gene. Semnificaia biologic este:

poart n structura sa ntreaga informaie genetic esenial pentru existena unei celule; determin i arhitectura celulei bacteriene, ereditatea i capacitatea de evoluie a acesteia.

4.3.5. Ribozomii Sunt particule nucleoproteice intracitoplasmatice de form sferic, avnd diametrul de 20-30 nm, avnd aspectul unor particule uniforme care dau aspectul granulat specific al citoplasmei. Sunt particule complexe, alctuite din proteine i ARN, toi ribozomii bacterieni fiind identici. n faza de cretere activ n citoplasma celulelor bacteriene se gsesc 1500-100.000 particule ribozomale, a cror mrime i stabilitate sunt dependente de concentraia de Mg2+ i K+. Unii ribozomi noat liberi n citoplasm, n timp ce alii apar ca legai de fa intern a membranei plasmatice. Semnificaia biologic a ribozomilor este: sunt componeni eseniali ai sistemului de traducere a informaiei genetice, reprezentnd adevrate fabrici de proteine; la nivelul lor se desfoar un ansamblu de reacii ce formeaz ciclul ribozomal n cursul procesului de biosintez ribozomii individuali au tendina de a se grupa (4-50 elemente) formnd polisomi, care confer o eficien crescut procesului de biosintez a proteinelor.

40

4.3.6. Aparatul fotosintetic Este reprezentat de un complex de structuri membranoase care particip la procesul de conversie al energiei luminoase n energie chimic. La celulele eucariote aparatul fotosintetic este localizat ntr-o structur denumit cloroplast delimitat de membran; la celulele procariote el este mai puin evident i este localizat n membrana plasmatic sub forma unor vezicule i sisteme lamelare din acest motiv membrana plasmatic a bacteriilor este inclus ca etitate structural a aparatului fotosintetic. Se pot distinge mai multe tipuri morfologice de structuri interne cu rol n realizarea proceselor fotosintetice ale bacteriilor.

a) la bacteriile purpurii sulfuroase (Thiorhodaceae) componentele aparatului

fotosintetic iau natere din membrana citoplasmatic puternic invaginat i ptrund mult n citoplasm; sunt sub form vezicular, tubular, lamelar n pachete sau fascicule;

b) la cianobacterii aparatul fotosintetic se prezint sub forma unui sistem de saci

membranoi turtii tilacoizi iar antena care capteaz lumina este reprezentat de ficobiliproteine (un ir de granule ataate la suprafaa membranei externe a tilacoizilor); c) la bacterii filamentoase (excepie genul Heliothrix) i lacele sulfuroase, receptorii pigmentari sunt localizai n nite structuri ovoidale, lenticulare, ataate la suprafaa intern a membranei, denumii clorosomi. 4.3.7. Incluziunile celulare n citoplasma bacterian apar, la sfritul perioadei lor de cretere activ, formaiuni structurale inerte denumite incluziuni; acestea se formeaz n condiiile ncetrii creterii sau a inhibrii ei ca urmare a epuizrii unui anumit factor limitativ sau a prezenei unui agent inhibitor condiii frecvente n mediile srace n elemente nutritive. n funcie de compoziia chimic incluziunile se clasific n: a) polimeri organici glicogen, amidon;

b) polimeri anorganici polimetanfosfatul;

c) incluziuni anorganice simple granule de carbonat de calciu i sulf coloidal. Dup structura lor, pus n eviden cu ajutorul electronografiilor, incluziunile sunt de dou tipuri: a)incluziuni nconjurate de membrane (poli-b-hidroxibutirat, de sulf, carboxizomii); b)incluziuni nenconjurate de membrane (granule de glicogen, volutin, cianoficin etc.).

41

4.3.8. Vacuolele Vacuolele sunt formaiuni sferice cu diametrul cuprins ntre 0,3-0,5 m, care apar n citoplasma bacterian n perioada ei de cretere activ. Conin diferite substane dizolvate n ap, la exterior fiind nconjurat deonoplast nveli lipoproteic alctuit dintrun singur strat. Ca numr, vacuolele difer n funcie de mediu de cultur, n mod obinuit numrul lor fiind cuprins ntre 6-20/celul. Prezena vacuolelor n celul constituie obiect de disput ntre cercettori: unii consider c ele sunt o entitate permanent (vacuom), fiind indispensabile celulei bacteriene, n timp ce alii le consider structuri temporare care apar de novo sub influena condiiilor de mediu. Semnificaia biologic este aceea c vacuolele ndeplinesc rolul de reglatori ai presiunii osmotice n raport cu mediul extern sau acela de depoziie de substane de rezerv n perioada premergtoare formrii incluziunilor. Exist ns trei tipuri de procariote fotosintetice care prezint vacuole cu gaz: algele albastre-verzi, bacteriile purpurii i halobacteriile; vacuole cu gaz apar i la genul Clostridium. Aceste vacuole cu gaz sunt formate dintr-un numr mare de agregate cilindrice, mrginite de o membran exterioar lipsit de lipide, dar format dintr-o singur protein mic; subunitile proteice se asambleaz pentru a constitui un cilindru rigid, gol pe dinuntru i impermeabil la ap dar permeabil pentru gazul atmosferic. Semnificaia biologic a acestor vacuole cu gaz este aceea c, avnd o densitate global mai mic dect apa plutesc la suprafaa acesteia, ele fiind un dispozitiv celular care permite bacteriilor acvatice imabile s-i modifice poziia ntr-o coloan vertical de ap, mecanism care funcioneaz cu eficien, vacuolele avnd n acelai timp un efect de dispersie a luminii aprnd structurile fotosensibile la expunerea la intensiti duntoare de lumin. 4.3.9. Sporul Sporii sunt forme latente de evoluie pe care le-au adoptat anumite bacterii pentru a putea supravieui ntr-un mediu ostil, adoptnd condiii mai propice de via activ. Sporogeneza reprezint un caracter de specie, cu valoare taxonomic important la bacteriile din familia Bacillaceae; este excepional la coci (Sporosarcina

42

ureae) i apare ca o structur constant la bacteriile anaerobe aparinnd genului Clostridium i facultativ la bacteriile aerobe din aceast familie. Cea mai cunoscut i frecvent form de rezisten la bacterii este endosporul prezint un interes deosebit pentru microbiologia industrial i cea medical, datorit rezistenei acestei forme la diferite tratamente chimice i fizice de dezinfecie. Endosporul prezint i un interes teoretic considerabil; formarea endosporului este un subiect de cercetare asupra sintezei unor structuri biologice complexe. Semnificaia biologic a sporului i a sporogenezei este urmtoarea: ca alternativ a creterii vegetative reprezint una din strategiile de adaptare a celulelor procariote la un mediu sistematic schimbtor i care adesea fluctueaz ntre limite ce depesc condiiile normale de cretere; sporul este o form de via latent, capabil de o ndelungat supravieuire, dotat cu capacitatea de a reveni la faza de cretere vegetativ n condiii de mediu corespunztoare; sporul se comport ca o form de rezisten care pstreaz intacte toate caracterele genotipice ale formei vegetative originare i le transmite, ca atare, celulei rezultate din germinarea lui; Sporii au o mare rezisten la cldur, tolernd chiar expuneri la 120C, suportnd contactul ndelungat cu unele substane antibacteriene; Datorit marii lui rezistene i lipsei aproape complet de metabolism, sporul are o longevitate foarte mare, asigurnd supravieuirea speciei n natur (ex. B.anthraces rezist 70 ani, unele bacterii saprofite din conservele alimentare 14 ani).; Endosporul bacterian reprezint, n esen, o form obligatorie de conservare a speciei i nu de reproducere; Sporogeneza reprezint un model foarte adecvat pentru studiul i nelegerea mecanismelor ce determin procesele de difereniere celular; Structurile extraparietale ale celulei bacteriene sunt reprezentate de: capsula i stratul mucos, flagelii, cilii, pilii i fimbriile. 4.3.10. Capsula i stratul mucos

43

n anumite condiii de mediu, unele bacterii au proprietatea de a elabora un material macromolecular, gelatinos, denumit capsul. Capsula nu joac un rol vital n existena bacteriilor, dar, elaborarea substanelor capsulate este favorizat de mediu. Substanele capsulare reprezint suportul unor proprieti fiziopatologice i imunologice i joac un rol important n asigurarea puterii patogene a bacteriei, aceste substane fiind deci, factori de virulen bacterian. Ele mpiedic aprarea organismului gazd s se manifeste, protejnd bacteria mpotriva fagocitozei datorit chimiotactismului negativ manifestat fa de leucocite i macrofage. Capsula apare la microscop ca un halou incolor n jurul celulei bacteriene; dimensiunile ei variaz foarte mult n raport cu corpul bacterian, fiind lipsit de o membran morfologic difereniat. Capsula este strns aderent de peretele celular, are o afinitate slab pentru colorani i este puin opac pentru electroni; n consecin capsula nu apare clar sau este chiar invizibil la microscopul electronic. Stratul mucos este ns o mas amorf neorganizat ale crei componente vscoase se dispun fr semnificaie anatomic n jurul celulei bacteriene. Prezena stratului mucos i a capsulei d culturilor pe medii lichide un caracter vscos, datorit difuzrii n mediu a unora dintre substanele capsulare. Pe medii solide coloniile au un aspect umed, lucios, mucoid. Din punct de vedere al compoziiei chimice, capsula i stratul mucos sunt, n general, de natur polizaharidic, fapt care explic i consistena vscoas ct i refringena caracteristic. Unele bacterii pot elabora simultan att un strat mucos ct i o capsul, cele dou tipuri de formaiuni coninnd polizaharide cu compoziii chimice diferite. Uneori, compoziia chimic a capsulei este corelat cu specificitatea antigenic a celulelor respective i permite diferenierea lor serologic n scop de diagnostic. capsula nu este parte integrant din celula bacterian, ci un produs inert, care rezult din activitatea ei metabolic i care poate fi ndeprtat fr ca viaa celulei s sufere; desicaie; datorit proprietilor sale higroscopice capsula protejeaz celula de reprezint un rezervor pentru stocarea substanelor nutritive sau a celor rezultate din metabolism;

44

la bacteriile patogene are un rol protector fa de aciunea fagocitelor direct, prin mpiedicarea adeziunii la suprafaa leucocitului, sau indirect prin efectul antifagocitar al substanelor pe care le conine;

bacteriile capsulate au deci, o mai mare virulen pentru om i animale, iar pierderea capsulei poate determina pierderea virulenei. 4.3.11. Flagelii Multe specii bacteriene sunt capabile s se deplaseze n mediu lichid sau semilichid datorit unui aparat locomotor. Prezena mobilitii este un criteriu de departajare pentru grupuri de bacterii, familii, genuri sau chiar specii. n general, cocii sunt mai rar mobili fa de bacili. Dei mecanismul micrii nu este cunoscut, primul tip de mobilitate descris la bacterii este cel realizat prin intermediul flagelilor. Este vorba despre o adaptare, un mod de deplasare spre zone mai bogate n nutrieni, bacteriile prsind zonele unde acetia s-au epuizat. Flagelii sunt structuri filamentoase subiri, flexibile i fragile, de form helical, cu spire de amplitudine neuniform. Lungimea lor poate atinge 10 mm (de 10 ori lungimea bacteriei), cu un diametru de 20 nm. Ei sunt mai lungi la celulele btrne i la cele care triesc n mediile lichide, iar la aceeai celul pot avea lungimi diferite; pot fi uneori acoperii de o teac de nveli (Vibrio). Semnificaia biologic a flagelilor const, n primul rnd, n faptul c asigur micarea bacteriilor flagelate. Flagelii au rol i n tactism att fa de fotostimulatori ct i fa de excitanii chimici. Rolul flagelilor n declanarea i evoluia infeciei nu este clar, deoarece variantele aciliate ale bacteriilor patogene sunt capabile s reproduc infecia 4.3.12. Pilii i fimbriile Bacteriile Gram negative posed, uneori, apendici scuri, filiformi, mult mai fini dect flagelii i care nu sunt implicai n micare. Evideniai graie microscopiei electronice se denumesc fimbrii (Dinguid, 1955) ceea ce n limba latin nseamn filament sau fibr, iar pentru cea de-a doua categorie termenul de pili (Brinton, 1959) ce nseamn n limba latin pr. Pilii sunt apendici filamentoi flexibili prezeni pe suprafaa celulelor (E.coli, Salmonella typhimurium etc.). Mrimea lor este de ordinul a 10 microni, iar ca numr

45

sunt per celul circa 1-10. Ei sunt implicai n transferul ADN ntre bacteriile mascule i femele, deci sunt apendici cu funcii sexuale. De asemenea, bacteriofagii fixeaz specific la nceputul ciclului lor de reproducere la nite receptori prezeni pe pilii de sex. Unele bacterii din sol formeaz grupri n form de stea datorit legrii lor prin intermediul pililor. Este probabil ca n aceste grupri ar avea loc i procese de conjugare. Pierderea pililor prin mutaie ar putea avea drept consecin deci, dobndirea rezistenei fa de infecia cu fagii respectivi. Fimbriile sunt apendice filamentoase aparent rigide, a cror sintez este controlat genetic; numrul lor variaz ntre 1 i 1000/celul. Ele sunt scurte (1 micron lungime), cu diametrul deprins ntre 3-14 nm, fiind alctuite n exclusivitate dintr-un numr variabil de subuniti identice alctuite din fimbrilin resturi de aminoacizi asamblai dup o simetrie helical. Prezena fimbriilor este n raport direct cu proprietile hemaglutinante ale bacteriei i cu puterea lor de adeziune la suprafaa altor celule. Ca i pilii, fimbriile rmn legate de protoplati i sferoplati, dup ndeprtarea peretelui celular, ceea ce demonstreaz originea lor intracelular. Exist dou tipuri morfologice de fimbrii: sub form de bastonae de 5-7 nm diametru, rigide i sub form de fibre flexibile de 2-3 nm diametru; la bacteriile Gram negative fimbriile sunt o apariie constant, n timp ce bacteriile Gram pozitive au rar asemenea formaiuni (Corynebacterium i Actinomycetes). Semnificaia biologic a fimbriilor este aceea c, prezena lor confer unele avantaje biologice legate de creterea suprafeei active n absorbia de substane nutritive. Fimbriile pot servi ca organite de transport ale unor metabolii importani, probabil macromoleculari. Uneori pot determina formarea unor pelicule de bacterii reunite cu ajutorul fimbriilor la suprafaa unor ape stagnante, slab oxigenate n profunzime (bacterii saprofite). 4.3.13. Spinii Spinii sau spiculele bacteriene sunt apendici pericelulari rigizi, tubulari, prezeni la anumite bacterii Gram negative. Denumirea lor (lb.latin spina = spin) este dat de aspectul lor observat la microscopul fotonic.

46

Sunt n numt variabil de la 1 la 15, distribuii pe celul aparent la ntmplate, perpendicular pe suprafaa bacteriilor. Spinii sunt alctuii dintr-un filament helical cu seciunea de circa 12 nm, iar lungimea variabil cuprins ntre 1-3 m. Spinii sunt legai de suprafaa membranei externe a peretelui celular, care are o structur absolut normal, prin intermediul unor proteine. Spinii pot fi detaai foarte uor prin tratare cu proteaze sau prin agitare. Compoziia chimic a spinilor este proteic molecule de spinin, avnd aminoacizi similari cu flagelina (din flageli) sau pilina (din pili). Spinina este alctuit la rndul sau din subuniti morfologice (oligomere) lungi de 11 nm i late de 5,6 nm. Pn la ora actual, semnificaia biologic a spinilor nu este cunoscut.

4.4. Creterea bacteriilor

n general, prin cretere se nelege procesul biologic care determin mrirea n timp, a dimensiunilor spaiale i a volumului unui organ sau organism (n ontogenez), ca rezultat al metabolismului de biosintez care faciliteaz adugarea de substan nou. Acest fenomen este vizibil la organismele pluricelulare i mai puin pregnant la bacterii. De aceea, noiunea de cretere bacterian are dou nelesuri: creterea propriu-zis (mrirea volumului celular) sporirea numrului de indivizi ntr-o populaie (multiplicare). Creterea propriu-zis la bacterii const n sintetizarea din mediu a unor substane nutritive noi, identice cu constituenii celulei. Acest proces este controlat genetic. Nu orice mrire a volumului celular este o consecin a creterii normale. Ea poate fi determinat i de acumularea de substane de rezerv i de mrirea accentuat a coninutului n ap a celulelor. La un moment dat, creterea sisteaz i urmeaz diviziunea sau multiplicarea bacteriilor. Creterea bacteriilor poate fi influenat de numeroi factori de de compoziia chimic a mediului. mediu: temperatur, pH, lumin, presiunea hidrostatic, condiiile osmotice, oxigenul, precum i

47

4.5. Multiplicarea bacteriilor

Acest fenomen se poate realiza prin diviziune direct (simpl sau binar), nmugurire, fragmentare, spori (de propagare). a) Multiplicarea prin diviziune Diviziunea direct este forma cea mai frecvent de multiplicare a bacteriilor i const n scindarea celulei-mam n dou celule-fiice, adesea identice (diviziune izomorf) i mai rar inegale (diviziune heteromorf). La bacilli i spirili, diviziunea se face frecvent n plan perpendicular pe axul longitudinal al celulei, iar la coci dup 1,2 sau 3 planuri perpendiculare succesive, ceea ce face posibil o grupare caracteristic a celulelor-fiice. Dac la unele bacterii Gram-pozitive etapele diviziunii celulare sunt vizibile, la cele Gram-negative exist nc unele controverse, mecanismul diviziunii nefiind nc bine cunoscut. Cert este c diviziunea direct se desfoar n dou moduri: prin strangulare sau prin formarea unui sept transversal. In ambele cazuri, constituie diviziunea nucleului. Intre dou diviziuni, ntreaga mas de constitueni celulari, inclusiv ADN i dubleaz coninutul, iar cei doi corpi nucleari se despart unul de altul. b) Multiplicarea prin nmugurire Acest tip de multiplicare este caracteristic numai unor specii de bacterii i const n formarea de ctre celula-mam, pe suprafaa ei, lateral sau terminal, a unei protuberane n form de mugure, mai mica dect ea, n care migreaz constituenii noii celule sau n care vor fi sintetizai de novo. Mugurele format crete treptat i, cnd ajunge la o anumit mrime, se separ de celula-mam. Procesul de diviziune care duce la separarea mugurelui este, n esen, similar cu cel al diviziunii simetrice. Deosebirile ntre ele constau n faptul c nmugurirea este o diviziune asimetric, n urma creia rezult dou celule mama i fiic, una btrn i alta imatur, n loc de dou celule-surori imature. c) Multiplicarea prin fragmentare A fost observat la cele mai multe actinomicete (filamentoase cu ramificaii adevrate) i const ntr-o diviziune multipl a bacteriilor care n ciclul de cretere au o perioad hifal cenocitic, cnd hifa se alungete, La un moment dat apare la mijlocul hifei primul sept transversal i apoi altele de-a lungul filamentului, rezultnd mai multe fragmente prima etap a celulei o

48

scurte, egale, ale cror extremiti devin situsuri de cretere, facilitnd astfel formarea de noi celule bacteriene.. d) Multiplicarea prin spori Aceast multiplicare a fost studiat la actinomicetele care formeaz exospori sau spori de dispersare de tip asexuat, dispui deseori pe hifele aeriene n lanuri de diferite lungimi sau n vezicule sporale speciale (sporangii). La unele actinomicete hifele sporulente care formeaz exospori sunt nvelite ntro teac extracelular independent de transformrile peretelui sporoforului. Exosporii se formeaz prin fragmentarea hifelor, datorit apariiei unor septuri transversale care cresc inelar sau se invagineaz. Dup o serie de modificri structurale are loc maturarea sporilor i formarea structurii interne. Urmeaz apoi ruperea tecii, care a acoperit sporii n timpul formrii lor i eliberarea sporilor n vederea dispersrii lor. In general, o celul-mam nu formeaz mai mult de patru celule-fiice care sunt imature n momentul formrii lor, comparativ cu celula-mam care sufer un proces de mbtrnire. Viteza de multiplicare este determinata genetic, de aceea variaz de la o specie la alta. In cadrul aceleiai specii, poate fi influenat de condiiile de mediu. Durata unei generaii este minima cnd condiiile de cultur sunt optime. Aceast proprietate de multiplicare rapid a bacteriilor explic supravieuirea lor n natur, adesea n condiii de mediu nefavorabile. Ea se datoreaz, printre altele, valorii foarte mari a raportului dintre suprafaa celulei i greutatea ei (de 400.000 de ori dect la om).

4.6. Nutriia bacteriilor

Nutriia const n totalitatea proceselor prin care bacteriile i asigur necesitile i plastice, de sintez a constituenilor celulari, de activare a enzimelor i a sistemelor de transport. Nutriia constituie un etalon de clasificare a bacteriilor care pot fi grupate att dup sursa de energie ct i dup cea a materialelor plastice. Funcie de sursa de energie, bacteriile se clasific dup cum urmeaz:

fototrofe (fotosintetizante), a cror surs primar de enrgie este lumina (energie fotonic); chemotrofe (chemosintetizante), a cror surs de energie este obinut n lipsa luminii, n urma unor reacii de oxidoreducere a unor substane exogene anorganice sau organice

49

Metabolismul energetic, n funcie de natura compuilor folosii ca donatori de electroni ofer posibilitatea clasificrii bacteriilor n:

litotrofe, bacterii care metabolizeaz substane anorganice; organotrofe, bacterii care utilizeaz substanele organice (inclusive ca surs de carbon). In ce privete respiraia la bacterii, ele pot fi dup cum urmeaz: aerobe, care necesit prezena oxigenului; anaerobe, cu acceptori finali anorganici diferii de oxigen; de fermentaie, bacterii care folosesc compuii organici ca acceptori de electroni.

Bacteriile mai pot fi clasificate i dup sursa materialelor plastice dup cum urmeaz:

autotrofe, care i sintetizeaz toi metaboliii organici din substane anorganice (bioxid de carbon, amoniac, ap, sruri minerale), fiind independente de orice surs organic de energie;

heterotrofe, cele a cror dezvoltare este dependent de prezena unor substane organice. Bacteriile heterotrofe au un metabolism de tip chemosintetic. Unele bacterii heterotrofe utilizeaz sa surs de energie exclusiv hidraii de carbon (bacterii de fermentaie) iar altele compuii cu azot (bacterii de putrefacie). Exist i bacterii cu nutriie mixotrof.

Richettsiile
Considerate iniial ca un grup intermediar ntre bacterii i virusuri, ricketsiile aparin indubitabil grupului bacteriilor cel puin din urmtoarele considerente: organizare celular de tip procariot; structura intern a constituienilor tipic bacterian; compoziie chimic complex; prezena activitilor metabolice; multiplicarea prin diviziune; natura parazitismului diferit fa de parazitismul absolut al virusurilor.

Filogenetic vorbind, rickettsiile au fost la origine parazii naturali ai artropodelor, de la care au trecut apoi la mamifere i om avnd ca vectori vectorii hematofagi.

50

Din punct de vedere morfologic, celula tipic are form de bastona cu dimensiuni de 0,3-0,7 m x 1,5-2,0 m, fiind Gram negative; prezint totui un pleiomorfism accentuat, rickettsiile putnd fi sub form de coci izolai sau grupai n perechi, cocobacili, filamente subiri i flexuoase. Majoritatea speciilor sunt parazite sau simbioante; formele parazite se dezvolt la vertebrate n eritrocite i n celule endoteliale, dar i la artropodele hematofage (purici, pduchi) care pot fi vectori sau gazde primare pentru aceste microorganisme. Exist ns i specii nepatogene pentru mamifere, prezente n organismul artropodelor, la care joac rol de simbioni. Multiplicarea se realizeaz prin diviziune simpl transversal n citoplasma celulelor, att la vertebrate ct i la artropode i doar la anumite specii, la nivelul nucleului (R.conorii). n general, multiplicarea rickettsiilor nu produce modificri majore n celule, pn n faza final, cnd aceasta este distrus. Din punct de vedere sistematic, Bergey (1974) le include n ordinul Rickettsiales, clasa Microtatobiotes, phylum Protophyta; sunt grupate n trei genuri: Rickettsia, Rochalimaea, Cariella. Importana practic este dat de faptul c produc rickettsioze, care sunt la om boli febrile cu exantem. Printre cele mai importante maladii amintim: tifosul exantematic, tifosul murin (de obolan), febra Q (tifos pulmonar). Agenii patogeni ai acestor boli sunt transmii la om prin intermediul artropodelor vectoae, iar n cazul febrei Q n special pe care respiratorie, digestiv i transcutanat.

Chlamidiile
Sunt organisme procariote, parazite obligat n celula eucariot, producnd infecii la om i animale. Considerate iniial virusuri, chlamidiile sunt bacterii dei au un parazitism obligat i i menin structura celular procariot de-a lungul ntregului lor ciclu de via. Chlamidiile aparin ordinului Chlamydiales, care are o singur familie Chlamidiaceae i un singur gen. Chlamydia, avnd dou specii: C.Arachomates i C psittaci, dar cele dou specii nu prezint omologie genetic, fiind probabil derivate din doi strmoi diferii. Chlamidiile sunt bacterii cocoidale, lipsite de mobiliti Gram

51

negative, cu dimensiuni cuprinse ntre 0,2-1,5 m. Conin citoplasm i ribozomi, iar n zona central conin un nucleoid compact. Genomul este alctuit dintr-o molecul de ADN circular nchis, alctuit din peste 600 gene (circa 25% din genomul E.coli). Ele conin enzime pentru sinteza ADN, ARN i pentru metabolismul glucozei, dar sunt incapabile s produc compui macroergici (ATP) pentru stocarea i utilizarea energiei (sunt parazii de energie). Chlamidiile nu se pot reproduce dect n vacuolele din citoplasma celulei gazd, acumularea lor face ca vacuolele d devin mai mari i vizibile chiar i la microscopul optic. n privina patogenitii, chlamidiile sunt importani ageni patogeni la om i animale cu snge cald: C.trachomatis produce uretrite, trahoame, conjunctivite, la om i la curcani, oi, pisici, papagali, invadnd tractul lor intestinal, respirator sau genital, chiar i ftul n viaa intrauterin. C.psittaci determin psittacoza i ornitoze la om, psri slbatice, domestice. Recent a fost descoperit o nou specie C.pneumoniae care provoac pneumonii la om, la ovine, porcine, bovine.

Micoplasmele
Micoplasmele reprezint un grup de celule procariote mici, lipsite de peretele celular, fiind delimitate doar de o membran lipoproteic i cu o compoziie chimic similar celulei animale. Reprezint cele mai mici i primitive forme capabile de cretere autonom pe medii acelulare. Morfologia i modul de multiplicare al micoplasmelor fac obiectul unor discuii contradictorii, derivat din faptul c, lipsite de peretele celular, ele au o plasticitate natural extrem de mare. La ora actual se cunosc mai multe forme morfologice sfericecocoidale, filamentoase, sunt Gram negative, cu dimensiuni cuprinse ntre 125-250 mm (sferice), pn la 150 m la formele filamentoase. Sunt imobile, dar unele sunt mobile prin alunecare pe suprafeele acoperite cu lichide; n general sunt anaerobe facultative, doar cteva fiind anaerobe obligate. Pe un mediu de cultur gelozat, marea majoritate se dezvolt formnd colonii caracteristice cu form de ou ochiuri. Sistematica micoplasmelor: formeaz o clas aparte Mollicutes (moli=moale, cute= piele), cu dou genuri Mycoplasma (cretere dependent de prezena sterolilor n mediu) i Acholeplasma (se dezvolt independent de sterili). Cele mai reprezentative

52

specii

sunt:

Mycoplasma

pulmonis,

M.hominis,

M.mycoides,

M.pneumoniae,

Spiroplasma sp. Datorit structurii lor simple i a activitii biochimice limitate, micoplasmele reprezint modele experimentale foarte convenabile pentru studierea proceselor biologice i biochimice fundamentale, legate, n special, de structura i funciile membranelor.

Spirochetele
Sunt bacterii chemoheterotrofe caracterizate printr-o anatomie celular

particular i o modalitate fr echivalent n lumea procariotelor. Astfel, s-a constatat c unele specii de spirochete pot traversa cmpul microscopic ntr-o fraciune de secund, ceea ce face dificil examinarea lor n preparate proaspete. Violena cu care se deplaseaz face s antreneze brusc n drumul lor i alte celule bacteriene sau chiar particule cu o mas superioar aceleia a propriului corp; particularitate utilizat pentru decelarea prezenei lor n snge, la bolnavii infectai cu unele specii patogene. Celulele spirochetelor sunt de form helical, avnd drept principal component structural cilindrul protoplasmic, alctuit din constituienii citoplasmatici i nucleari fiind nconjurai de membrana plasmatic i peretele celular. Dimensiunea celulei variaz n funcie de specie, ntre 0,1-0,2 x 5-6 m pentru spirochete mici, pn la 0,75-3x 500 m la cele mari. Spirochetele sunt larg rspndite n natur: n apele din lacuri, ruri, mri i oceane, altele fac parte din flora indigen a unor gazde eucariote (corpul unor protozoare, interstiiul termitelor, colonul mamiferelor). Aceste specii sunt nepatogene, dar altele sunt patogene pentru om: Treponema pallidum (sifilis), Borrelia recurrentis (febra recurent), sau om i animale: Leptospira canicola (leptospiroza).

Mixobacteriile
Mixobacteriile sunt microorganisme procariote care prezint un ciclu de via cuprinznd secvene de dezvoltare complex i procese rudimentare (Zarnea, 1973). Se deosebesc de alte tipuri de bacterii prin: natura mobilitii asemntoare cu cyanobacteriile i bacteriile filamentoase; flexibilitatea celulei lor, determinat de lipsa unui perete celular rigid; ciclu de via care implic morfogeneza celular i colonial.

53

Celulele vegetative au forma unor bacili mici, cilindrici sau cu extremiti ascuite i au o structur celular tip Gram negativ, fr flageli, inclavai ntr-un strat de mucus consistent. Mixobacteriile sunt organisme chemoheterotrofe, strict aerobe, care fac hidrolixa extracelular a unor macromolecule insolubile (amidon, celuloz, proteine) folosind constituienii acestora de cretere. Unele sunt bacteriotrofe avnd proprietatea de a omor i liza bacterii i alte microorganisme (mucegaiuri, drojdii, alge), nainte de a face hidroliza constituienilor lor. Sunt rspndite n sol, pe materiale vegetale pe cale de descompunere, rolul lor n natur fiind corelat cu proprietatea de a hidroliza macromolecule insolubile. Sunt i numeroase specii patogene producnd mbolnviri masive n pstrvrii. n concluzie, mixobacteriile reprezint grupul de organisme cu tipul de comportament i ciclu de via cel mai complex dintre toate procariotele.

Actinomicetele
Actinomicetele sunt un grup de bacterii filamentoase, ramificate, Gram-pozitive i caracterizate printr-o mare varietate de tipuri morfologice. Actinomicetele formeaz o reea ramificat de filamente care poart denumirea de miceliu, motiv pentru care, mult vreme au fost considerate ca fcnd parte din categoria fungilor microscopici. Prin caracteristicile generale, actinomicetele aparin nendoielnic lumii bacteriilor; aceste caracteristici discriminatorii sunt: organizarea celular de tip procariot; material genetic reprezentat de nucleoid, perete celular mureinic, absena mitocondriilor i a reticulului endoplasmic; prezena flagelilor de tip procariot la formele mobile; diametrul hifelor, structura i dimensiunile constituienilor interni diferite de ale fungilor; forme strict anaerobe i chimioautotrofe ce nu se ntlnesc la fungi; sensibilitatea la fagi de tip bacterian (actinofagi) i la aciunea antibioticelor ce inhib bacteriile Gram pozitive; rezistena fa de antibioticele strict antifungice.

54

Actinomicetele au o structur de colonie complex, din micelii multinucleate, ramificate. Forma actinomicetelor este, n general, alungit, filamentoas, cu o tendin de ramificare (monopodial, dihotomic sau verticilat), de unde aspectul lor de miceliu. Hifele miceliului au un diametru de 0,5-2,0 nm i o lungime de peste 20 nm, prezentnd o structur de tip procariot, corespunztor unor celule foarte lungi, multinucleare, fr perei transversali n cursul creterii vegetative. Numeroase actinomicete au un miceliu aerian care se mprtie pe suprafaa substratului pe care se dezvolt i care formeaz conidii. Sporii asexuai au un nveli fin i se numesc conidii sau conidiospori i se gsesc la extremitile filamentelor. Dac sporii sunt localizai n sporange el se numete sporangiospor; sporii pot avea forme foarte variate i se dezvolt prin separarea unor extremiti ale filamentelor ca replic la apariia unor condiii nefavorabile de via (lipsa nutrienilor). Sporii suport bine deshidratarea, dei nu au o rezisten deosebit la cldur, avnd astfel, o valoare adaptativ deosebit. Cele mai multe actinomicete sunt saprofite nsol (la suprafa, dar i n profunzime) i sunt frecvente n solurile uscate, alcaline, arate, n general n solurile bogate n substane organice; de asemenea, actinomicetele se dezvolt i pe resturi vegetale, plante, n apele lacurilor i n nmol. Exist ns i specii parazite ale plantelor, omului i animalelor. Actinomicetele nu sunt, n general, mobile, dar dac este prezent mobilitatea, ea se concretizeaz prin prezena unor spori flagelai. O particularitate a actinomicetelor este modul de nutriie omnivor, permindu-le s se dezvolte pe substraturi organice dintre cele mai diferite. Practic, actinomicetele ncep s se dezvolte pe resturile vegetale dup ce substanele uor asimilabile au fost descompuse i asimilate de predecesori: bacterii i ciuperci. Actinomicetele nu au nevoi speciale de substane nutritive i de factori de cretere; ele folosesc N n stare mineral, dar i organic, C sub form de acizi organici, dextrine i amidon. Capacitatea lor de a degrada substanele organice dintre cele mai complexe le confer un rol important n natur, mai ales n descompunerea substanelor organice din nmoluri i sol. Taxonomia actinomicetelor are la baz o serie de proprieti, cum ar fi: morfologia i culoarea miceliului, a sporangilor, % G + C din ADN, compoziia peretelui celular, toate reflectnd o gam variat de diferene comparativ cu alte bacterii. Astfel, actinomicetele aparin ordinului Actinomycetales (Bergey, 1974), principalele grupe fiind cuprinse n 8 familii: Actinomycetae, Mycobacteriaceae,

55

Frankiaceae, Actinoplanaceae, Dermatophilaceae, Nocardiaceae, Streptomycetaceae. Micromonosporaceae; primele dou familii nu formeaz micelii, se caracterizeaz prin lipsa sporilor, pe cnd celelalte produc miceliu adevrat i pot fi: simbioni n noduli pe rdcinile plantelor i fixatori de N molecular (Frankiaceae), precum i saprofite sau facultativ parazite. Importana practic a actinomicetelor este urmtoarea: particip, n mare msur, la procesele de degradare biologic i mineralizarea substanelor organice, numeroase specii prezente n sol fiind saprofite; actiomicetele se pot regsi n simbioze (actinorize), cu specii de plante superioare, participnd la procesul de fixare biologic a azotului; sunt actinomicetele parazite care produc boli grave la om i animale: Mycobacterium tuberculosis (produce tuberculoza), Mycobacterium leprae (lepra), Actinomycetes i Nocardia (infecii ale cavitii bucale, organelor interne), Dermatophylus i Micromonospora (infecii cutanate), dar i fitopatogene, producnd boli ale plantelor (Str.scabies); reprezint, prin speciile genului Streptomyces, cei mai activi productori de antibiotice (peste 500 de antibiotice distincte separate pn n prezent), peste 50% din actinomicetele izolate din natur produc substane antibiotice; au pretenii nutritive reduse, avnd un echipament enzimatic complex ceea ce le face utile n numeroase biotehnologii moderne: la degradarea unor resturi vegetale din industriile alimentare, prelucrare a lemnului, cerealelor, biosinteza unor vitamine la scar industrial etc.

Bacteriile fotosintetizante
Bacteriile fotosintetizante grupeaz bacterii de trei tipuri: a) bacterii purpurii; b) bacterii verzi; c) cyanobacterii. Bacteriile verzi i bacteriile purpurii se grupeaz i alctuiesc bacteriile fotosintetizante anoxigenice, iar cyanobacteriile alctuiesc grupul bacteriilor fotosintetizante oxigenice.

56

Bacteriile fotosintetizante anoxigenice sunt incapabile a folosi apa ca surs de electroni; pentru a forma NADH i NADPH ele utilizeaz molecule reduse: H2S, S, H2, materii organice. Cu alte cuvinte, bacteriile verzi i cele purpurii nu produc oxigen i formeaz granule de sulf care se acumuleaz fie n interiorul celulelor (bacterii sulfutoase purpurii), fie la suprafaa celulelor (bacterii sulfuroase verzi). Bacteriile purpurii nesulfuroase utilizeaz molecule organice ca surs de electroni. Bacteriile fotosintetizante oxigenice utilizeaz apa ca donor de electroni i produc oxigen n cursul fotosintezei. Cel mai vast grup de bacterii fotosintetizante oxigenice l reprezint Cianobacteriile. Cianobacteriile sunt microorganisme cu o organizare de tip procariot, care posed un aparat fotosintetic similar din punct de vedere molecular, structural i funcional celui din cloroplastul eucariotelor, posednd clorofila a i fotosistem II (fotosintez oxigenic). Cianobacteriile au form sferic sau bacilar, cu dimensiuni cuprinse ntre 1-10 m; se afl sub form de celule izolate, asociaii coloniale sau filamente, formele filamentoase fiind cele mai complexe, prezentnd dou tipuri adiionale de celule akineii i heterochitii (rezultate prin diferenierea celulelor vegetative). n genomul cianobacteriilor exist o molecul de ADN dublu helical, cu dimensiuni variabile. Tipic pentru cianobacterii este prezena granulelor de cianoficin (nu au fost gsite la nici un alt grup de organisme), care apar sub forma unor granule mari, refringente, vizibile la microscopul fotonic, de forma neregulat-sferoidal i care se acumuleaz n celulele vegetative n faza staionar de cretere i n akinei. Cianobacteriile sunt microorganisme fotoautotrofe aerobe i folosesc energia obinut prin reacii de fotosintez productoare de oxigen, pentru a face biosinteza constituienilor celulari pornind de la substanele anorganice; sunt i specii facultativ chemoheterotrofe i se pot dezvolta mult mai lent la ntuneric, utiliznd o gam limitat de zaharuri. Reproducerea la cianobacterii se face prin sciziune binar, nmugurire, fragmentare i sciziune multipl.

57

MICROORGANISME EUCARIOTE
5.1. Organizarea celular
Microorganismele eucariote sunt reprezentate printr-un numr mare de specii i indivizi. Marea lor majoritate sunt microorganisme unicelulare, sau pluricelulare, dar cu un grad de complexitate i o difereniere extrem de limitate. Organizarea celular la eucariote este mult mai complex dect a organismelor procariote. Tabelul 5.1. Elementele structurale ale celulei eucariote i funciile acestora Elementul structural Citoplasma Microfilamente, filamente intermediare i microtubuli Reticulul endoplasmatic Ribozomii Aparatul Golgi Lizozomii Mitocondriile Cloroplastele Nucleul Nucleolul nveliurile celulare Cilii i flagelii 5.1.1. nveliurile celulare Funcia Sediul organitelor celulare i al numeroase procese metabolice Citoscheletul celulei Transport de materiale, sinteza lipidelor i a proteinelor Sinteza proteic Rezervor i loc din care se realizeaz secreia de substane, sediul genezei lizozomilor Digestia intracelular Eliberare de energie, transport de electroni, fosforilare oxidativ Fotosinteza producere de glucide pornind de la CO2 Sediul informaiei genetice, centrul de control al celulei Sinteza ARN ribozomal Arhitectura celular i rigiditatea caracteristic Mobilitatea celular

Exist diferene ntre microorganismele eucariote i cele procariote n ceea ce privete structurile lor de protecie i susinere aflate la exteriorul membranei lor plasmatice; multe din microorganismele eucariote tind spre organizarea specific celulei eucariote animale, spre exemplu protozoarele care sunt lipsite de perete celular.

58

De obicei, peretele celular este foarte rigid, dar compoziia lui variaz n funcie de organism; totui, n general sunt prezente: celuloza, chitina i glucanul, dei polizaharidele din peretele celular au eucariotelor au o structur mai simpl comparativ cu procariotele. Diferena const n prezena sterolilor la eucariote n membrana celular, fa de bacterii (procariote). De asemenea, una din funciile membranei citoplasmice la eucariote lipsete este vorba despre producerea de energie cum se ntmpl n cazul procariotelor. La protozoare i unele alge apare un nveli extern denumit cuticul stratul rigid de elemente localizate deasupra membranei plasmatice; dei cuticula nu este o structur la fel de solid i rigid ca i peretele celular, ea d celulelor o form caracteristic. 5.1.2. Citoplasma, microfilamentele, microtubulii Matricea citoplasmatic este o parte foarte important a celulei ca sediu a numeroase procese biochimice; fa de citoplasma procariotelor, la eucariote aceasta se caracterizeaz prin stri alternative sol-gel i prin prezena unor cureni citoplasmatici. Nucleul este delimitat de o membran proprie, citoplasma fiind un sistem coloidal complex care i schimb starea n funcie de starea fiziologic a celulei. Apa (70-85% din greutatea celulei eucariote) poate exista ca: ap liber (osmotic activ); ap legat (apa de hidratare) legat la suprafaa unor proteine i a altor molecule; pH-ul citoplasmei este aproape de neutralitate (6,8 7,1), dar poate varia; astfel, vacuolele digestive ale protozoarelor pot avea un pH = 3-4. Matricea citoplasmatic a eucariotelor conine formaiuni numite microfilamente, de natur proteic i care au rol important n circulaia celular i n schimbarea formei. Ct privete rolul tubulilor acesta este acela de a menine forma celulei, implicare n micrile celulare, precum i n transportul intracelular de substane i organite. 5.1.3. Reticulul endoplasmic Citoplasma celulei eucariote este transversat de un sistem neregulat de tubuli membranari ramificai ce conin saci plai numii cisterne. Reeaua de tubuli i vezicule se numete reticul endoplasmic a crui natur depinde de starea funcional i fiziologic a celulei. Funcia i geneza reticulului endoplasmic sunt extrem de variate. El este sistemul de transport graie cruia proteinele, lipidele i alte substane excretate. Reticulul

59

endoplasmic este, de asemenea, sediul principal al sintezei membranei celulare, noii reticuli endoplasmici iau natere din extensia celor deja existeni.

60