Biochimie Medicala

U n iv e r s ita te a d e S ta t d e M e d ic in
i F a r m a c i e N. T e s t e m i a n u
L. LSI
BIOCHIMIE
MEDICAL
Chiinu 2007
Universitatea de Stat de Medicin i Farmacie
N. Testemitanu
9
L. L S ll
BIOCHIMIE
MEDICALA
..... 665146
I UNIVERSITATEA OB STAT
I DE MEDICINA l FARMACIE
NICOLAE TESTEMIEANU"
'B IB L IO T EC A

C h i in u 2007
Aprobat de Consiliul metodic central al U.S.M.F. Nicolae Testem ianu
Recenzeni:
I.Vaintraub, ef al laboratorului Biochimia proteinelor de la U.S.M., profesor
universitar, doctor habilitat n biologie
V.Gudumac, ef al laboratorului Biochimie n L..C. de la U.S.M.F. Nicolae
Testemianu, profesor universitar, doctor habilitat n medicin
V.Hotineanu, profesor universitar, doctor habilitat n medicin, Laureat al Premiului
de Stat al RM n domeniul tiinei i Tehnicii, Om Emerit
CUPRINS
Cuprins IV-IX
Cuvnt in a in te..................................................................................................... X
Prefa
- Noiuni generale................................................................................................ 1
-Particularitilemateriei v ii................................................................................... 3
Cap.I. Proteinele.Enzimele
- Structura i funcia biologic a proteinelor.......................................................12
- Structura prim ar............................................................................................. 20
- Structura secundar.......................................................................................... 27
- Structura tridimensional...................................................................................31
- Foldingul. Problema mpachetriispecifice a lanului polipeptidic................... 35
- Peptidele active................................................................................................ 40
- Clasificarea proteinelor.................................................................................... 44
- Holoproteinele..................................................................................................45
- Heteroproteinele.............................................................................................. 48
- Proprietile generale ale proteinelor...............................................................49
- Solubilitatea......................................................................................................49
- Proprietile electrochimice.............................................................................. 50
- Precipitarea i denaturarea proteinelor........................................................... 52
- Metodele de identificare a proteinelor.............................................................54
- Enzimele...........................................................................................................58
- Structura enzimelor........................................................................................... 59
- Specifitatea enzimelor....................................................................................... 61
- Exprimarea activitii enzimatice...................................................................... 6 8
- Enzimele alosterice........................................................................................... 70
- Inhibiia activitii enzimelor.............................................................................. 75
- l7X)cnzimele.............................................................................................................. 81
- Clasificarea enzimelor.......................................................................................83
- Coenzimele....................................................................................................... 87
- Metaloproteinazele..........................................................................................94
Cap.II. Acizii nucleici
- Structura chimic................................................................................................95
- Proprietile fizico-chimice.................................................................................96
- Rolul nucleotidelor..............................................................................................98
- DNA. Structura prim ar....................................................................................98
- Structura secundar.......................................................................................... 100
- Structura teriar.............................................................................................. 102
- Structura R N A ................................................................................................ 107
- Replicarea (biosinteza D N A )......................................................................... 111
- Repararea DNA................................................................................................115
- Particularitile biosintezei DNA la eucariote................................................... 117
- Telomeraza....................................................................................................... 118
- Transcrierea (biosinteza RNA) .....................................................................130
- Particularitile transcrierii la eucariote.............................................................136
- Sinteza DNA pe matricea de R N A ................................................................. 137
- Codul genetic.....................................................................................................139
- Mutaiile............................................................................................................. 142
- Recombinarea genetic (ingineria genetic)..................................................... 145
- Biosinteza proteinelor..................................................................................... 152
- Particularitile biosintezei proteice la eucariote................................................ 161
- Inhibitorii sintezei proteinelor............................................................................. 161
- Reglarea biosintezei proteinelor........................................................................ 163
Cap.III. Bioenergetica
- Aspecte generale............................................................. .................................. 171
- Metabolismul.....................................................................................................174
- Ciclul ..........................................................................................................176
- Mecanismele de reglare ale metabolismului......................................................179
- Decarboxilarea oxidativ a piruvatului.............................................................. 181
- Ciclul Krebs.......................................................................................................185
- Reacii anaplerotice...........................................................................................189
- Reglarea ciclului Krebs..................................................................................... 190
- Patologiile medicale...........................................................................................190
- Oxidarea biologic-respiraia tisular.......................................................... 192
- Lanul respirator................................................................................................ 193
- Caracteristica complexelor lanului respirator................................................ 196
- Inhibitorii lanului respirator.............................................................................. 200
- Generarea radicalilior liberi............................................................................... 201
- Mecanismele fosforilrii oxidative(cuplarea oxidrii cu fosforilarea)...............202
- Decuplanii fosforilrii oxidative........................................................................208
- Bolile mitocondriale...........................................................................................209
- Citopatiile mitocondriale...................................................................................210
- Sistemele-navet de transport al echivalenilor de reducere........................... 211
- Reglarea fosforilrii oxidative......................................... ..................................212
- Oxigenazele. Citocromul P4 5 0 i reaciile de oxido-reducere...........................213
Cap.IV. Glucidele i metabolismul lor

- Structura, proprietile, funciile........................................................................ 214
- Oligozaharidele................................................................................................. 220
- Polizaharidele.................................................................................................... 220
- Homozide..........................................................................................................220
- Heterozide.........................................................................................................222
- Digestia i absorbia glucidelor.....................................................................224
- Transferul intracelular al glucozei......................................................................226
- Reglarea exprimrii i afinitii trasportatorilor pentru glucoz........................ 227
- Glicogenoliza......................................................................................................228
- Glicogenogeneza............................................................................................... 231
- Reglarea proceselor de liz i sintez ale glicogenului......................................231
-i G licoliza........................................................................................................... 235
- Reglarea glicolizei..............................................................................................240
- Cile alternative de degradare a glucozei....................................................244
- HMS i celulele roii ale sngelui....................................................................... 247
- Sinteza acidului glucuronic................................................................................249
- Metabolismul fructozei.......................................................................................251
- Patologiile medicale........................................................................................... 251
- Metabolismul galactozei.................................................................................... 253
- M anoza............................................................................................................. 255
\ Gluconeogeneza.............................................................................................. 255
- Principalele substraturi ale gluconeogenezei.................................................... 257
- Reglarea gluconeogenezei.................................................................................257
- Reglarea nivelului de glucoz n snge..........................................................260
- Insulina.............................................................................................................. 260
- Reglarea secreiei insulinei................................................................................. 262
- Efectul insulinei.................................................................................................. 262
- Glucagonul.........................................................................................................268
- Studiul metabolismului glucidic......................................................................... 268
Cap. V. Lipidele i metabolismul lor
- Structura, proprietile, funciile.......................................................................270
- Acizii grai........................................................................................................ 271
- Proprietile..................................................................................................... 272
- Lipidele sapomfiabile....................................................................................... 273
- Lipidele nesaponifiabile....................................................................................277
- Acizii biliari...................................................................................................... 279
- Membranele biologice..................................................................................... 281
- Sistemele transport.......................................................................................... 292
- Digestia i absorbia lipidelor.......................................................................298
- Lipidelesngelui................................................................................................302
- Lipidele organismului um an............................................................................. 308
- Degradarea oxidativ a acizilor grai......................................................... 311
- Transportul acizilor grai n mitocondrii. Camitina......................................... 312
- Oxidarea acizilor grai n mitocondrii..............................................................314
- Oxidarea acizilor grai cu numr impar de atomi de carbon.......................... 316
- Oxidarea acizilor grai n peroxizomi.............................................................. 318
- Cetogeneza...................................................................................................... 319
- Biosinteza lipidelor........................................................................................322
- Biosintezatriacilglicerolilor.............................................................................. 328
- Biosinteza lipidelor membranare......................................................................329
- Metabolismul colesterolului............................................................................. 336
- Ateroscleroza....................................................................................................341
- Patologia lipidelor.............................................................................................343
- Reglarea metabolismului lipidic........................................................................345
- Eicosanoizii - prostaglandinele........................................................................346
Cap. VI. M etabolismul proteinelor i al aminoacizilor.

M etabolismul nucleotidelor, cromoproteidelor
- Digestia proteinelor alimentare....................................................................351
- Absorbia aminoacizilor...................................................................................356
- Fondul metabolic comun al aminoacizilor. Valoarea biologic a proteinelor ..358
- Asimilarea aminoacizilor..................................................................................360
- Metabolizarea NH 2 -grupelor. Dezaminarea................................................... 362
- Decarboxilareaaminoacizilor..........................................................................366
- Soarta amoniacului.......................................................................................... 368
- Utilizarea scheletului de carbon al aminoacizilor..................................... 373
- Familia aminoacizilor cu C3 ............................................................................. 376
- Metabolismul aminoacizilor ce conin s u lf.......................................................378
- Metabolismul aminoacizilor ramificai............................................................. 388
- Metabolizarea fenilalaninei i tirozinei............................................................. 389
- Metabolismul triptofanului................................................................................394
- Metabolismul lizinei......................................................................................... 396
- Sinteza creatinei............................................................................................... 397
- Biosinteza aminoacizilor................................................................................399
- Reglarea sintezei aminoacizilor........................................................................ 404
- Metabolismul nucleotidelor..........................................................................
- Digestia i absorbia nucleotidelor...................................................................406
- Biosinteza nucleotidelor purinice.....................................................................406
- Reutilizarea purinelor....................................................................................... 410
- Reglarea biosintezei......................................................................................... 410
- Catabolismul purinelor..................................................................................... 410
- Patologia metabolismului purinelor..................................................................413
- Metabolismul nucleotidelor pirimidinice.......................................................... 415
- Biosinteza nucleotidelor pirimidinice............................................................... 415
- Reglarea metabolismului pirimidinic................................................................ 419
- Reutilizarea i catabolismul nucleotidelor pirimidinice.................................... 419
- Metabolismul cromoproteidelor. Structura hemoglobinei.........................421
- Hemoglobina. Funciile....................................................................................424
- Patologia molecular a hemoglobinei.............................................................. 42 8
- Sinteza hemului................................................................................................. 430
- Degradarea hemului..........................................................................................431
- Rolulficatului n metabolism........................................................................ 433
- Patologia biochimic a ficatului........................................................................ 438
Cap. VII. Sistem ul horm onal Vitaminele

- Noiuni generale.............................................................................................. 441
- Proprietile comune ale hormonilor............................................................... 444
- Metabolismul molecular al aciunii hormonilor. Mesagerii secunzi..................449
- Sistemul neuroendocrin.................................................................................... 462
- Neurohipofiza.................................................................................................. 464
- Adenohipofiza.................................................................................................. 465
- Glandele paratiroide........................................................................................ 470
- Hormonii tiroidieni............................................................................................ 471
- Hormonii corticosuprarenalieni........................................................................ 475
- Hormonii medulosuprarenalieni....................................................................... 482
- Honnonii sexuali-testiculari............................................................................. 486
- Hormonii ovarieni............................................................................................ 487
- Controlul endocrin al foliculogenezei.............................................................. 488
- Vitaminele. Generaliti.................................................................................... 491
- Vitaminele hidrosolubile...................................................................................495
- Vitaminele liposolubile.......................... ,......................................................... 510
Cap. VIII. Biochimici sngelui i a unor esuturi
- Sngele............................................................................................................. 523
- Funciile. Proprietii le fizico-chimice.............................................................. 524
- Proteinele plasmatice....................................................................................... 526
- Elementele figurate - particularitile compoziiei i ale metabolismului
- Particularitile compoziiei chimice i ale metabolismului eritrocitului..........529
- Particularitile compoziiei i ale metabolismului leucocitelor....................... 535
- Caracteristica biochimic a monocitului..........................................................540
- Caracteristica biochimic a limfocitelor........................................................... 541
- Particularitile compoziiei chimice a trombocitului.......................................541
- Constituenii minerali ai plasm ei.................................................................
- Cationii............................................................................................................. 544
- Anionii.............................................................................................................. 546
- Oligoelementele................................................................................................547
- Componentele organice...................................................................................549
- Substane organice neazotate...........................................................................551
- Enzimele plasmatice......................................................................................... 553
- Sistemele tampon sanguine............................................................................. 554
- Hemostazai fibrinoliza. C oagularea....................................................... 557
- Caracteristicile principalilor factori ai coagulrii..............................................558
- Proprietiile structurale i funcionale ale factorilor sistemului de contact...561
- Fibrinoliza.........................................................................................................566
- Reglareahemostazei........................................................................................ 567
- Biochitnia esutului conjunctiv
- Colagenul.........................................................................................................571
- Biosinteza colagenului...................................................................................... 575
- Elastina.............................................................................................................577
- Proteoglicanii................................................................................................... 578
- Modificrile constituenilor proteoglicanilor.................................................... 583
- Biochimia rspunsului im u n .........................................................................584
- Structura anticorpilor....................................................................................... 592
- Sistemul complement....................................................................................... 594
- T-Iimfocitele i imunitatea celular.................................................................. 596
- Reaciile la transplant....................................................................................... 598
- Rspunsul imun la infecia viral......................................................................560
- Bibliografie selectiv.....................................................................................605
- Index................................................................................................................ 606
Publicarea manualului Biochimie medical costituie o iniiativ meritorie a
profesorului universitar Leonid Lsi, ef catedr biochimie i biochimie clinic, USMF
N.Testemianu, care a extins coninutul cu date relevante n aspect teoretic i aplicativ.
O reediie a manualului precedent, primul manual consacrat biochimiei, e destul de
bine venit pentru coala naional. Biochimia, ca produs al gndirii laborioase i al ateniei
permanente a majoritii savanilor, are n ultimii anii un succes deosebit.
Materialul redat e compact aranjat i ilustreaz esena contemporan a tiinei date.
Progresul n medicin nu poate fi conceput fr o argumentare tiinific, de natur
biochimic, la diferite niveluri. Implicareabiochimici n specificul medical att n explicarea
strilor normale, ct i patologice reclama imperios cunoaterea reaciilor moleculare,
enzimelor specifice, ciclurilor tipice ale metabolismului, care au loc n toate celulele umane,
n fiecare capitol sunt ilustrate compartmentele de baz ale biochimiei modeme, cu adaosul
concis al realizrilor din ultimii ani. Coninutului e mult apropiat de medicina practica -
sunt expuse valorile normale ale majoritii indicilor biochimici ce se utilizeaz n
diagnosticul i pronosticul maladiilor. O importan deosebit are redarea mecanismelor
fine de reglare a metabolismului de ctre diferii factori (hormoni, ioni, vitamine,
medicamente) la diverse niveluri de organizare a materiei vii.
Autorul i-a asumat o responsabilitate distins de a prezenta acest material vast,
profund tiinific, ntr-un volum modest, strict necesar pentru nelegerea i dezvoltarea
capacitilor intelectuale ale viitorului medic.
Manualul prezint o baz tiinific pentru viitorii savani i/sau medici practicieni,
care doresc s ating culmile tiinei moderne, s-i consolideze i s-i completeze
nivelul cunotinelor n domeniul medicinii.
leremia ZOTA
d.h.m., profesor universitar,
Laureat al Premiului de Stat al RM
n domeniul tiinei i Tehnicii,
Om Emerit, membru corespondent a AM
CUVNT NAINTE
Prezentarea manual de biochimie este o ncercare deosebit de dificil la momentul

actual, cauzat de avalanele de infomiaie ce se succed rapid n acest domeniu. Biochimia
nu mai reprezint o enumerare simpl a proceselor biologice i reaciilor fermentative ce
decurg cu participarea unui numr enorm de compui organici.
Evaluarea accelerat a cunotinelor n biochimie, mai ales n ultimul deceniu, precum
i importana tiinei date pentru nelegerea bazelor moleculare ale fenomenelor fiziologice,
patologice i terapeutice impune ca aceast disciplin s ia o poziie privilegiat n cadrul
nvmntului medical, farmaceutic, biologic etc.
Aplicaiile practice ale biochimiei sunt att de imediate n genetic, medicin,
nutriie i n alte domenii de activitate, nct progresul lor nu poate fi conceput far
o argumentaie tiinific de natur biochimic. Aspectul practic farmaceutic este
imprimat de faptul c sunt prezentate substanele biologic active, iar medicamente
le valoroase de origine biologic fac parte din categoria enzimelor, vitaminelor,
hormonilor, aminoacizilor, acizilor grai eseniali etc.
Conform prevederilor programei analitice sunt abordate problemele cardinale
ale cursului disciplinar tratat n opt capitole. Materialul e destinat s contribuie la nelegerea
de ctre studenii n medicin a bazelor moleculare, care asigur funcia i structura
morfologic a organelor i esuturilor din organismul uman. Implicaiile biochimiei n toate
specialitile medicale la explicarea strii normale i patologice, reclam cunoaterea
reaciilor moleculare din ciclurile stereotipe ale metabolismului care se desfoar n
toate celulele din organism.
Voi accepta toate sugestiile i observaiile referitoare la coninutul acestei lucrri.
Am avut ocazia deosebit s fac studiile n Universitatea de Stat de Medicin i
Farmacie N. Testemianu, s fiu discipolul acelor dascli care au stat la temelia ei. Sunt
recunosctor colegilor cu care permanent colaborez n activitatea pedagogic i tiinific
pentru ajutorul acordat, susinere i conlucrare benefic.
nchin aceast carte studenilor care sunt sperana acestui popor, fundamentul spiritual
al neamului, devenind dup o munc enorm, savani ce vor proslvi acest pmnt.
Autorul
PREFA
9
Editarea crii Biochimie medical aflat la a doua ediie are o conotaie deosebit.
Progresele acestei tiine sunt uimitoare, capabile s explice, prin modificri la nivel
molecular i atomar, cele mai dificile comportri ale materiei vii.
La dispoziia studenilor medici se pune un vast volum de cunotine ce corespund
cerinelor actuale, demne de atenia celor ce studiaz viaa. Sunt redate detalii tiinifice
de interes biochimic i medical, sunt expuse diverse aspecte de genetic medical.
Studenilor le sunt oferite aceste date tiinifice pentru -i ajuta s-i pun un fundament
puternic n studiul medicinii contemporane.
Manualul de biochimie medical utilizat de studeni trebuie s asigure realizarea
urmtoarelor deziderate:
a) asimilarea cunotinelor tiinifice despre fenomenele studiate n disciplinile inrudite
preclinice (fiziologie, fiziopatologie, farmacologie);
b) stimularea interesului pentru studierea i nelegerea proceselor fiziologice i
patologice predate n cursul clinic medical;
c) integrarea tiinific n variata cazuistic medical ntlnit n studiul disciplinelor
clinice care poate fi neleas numai dac se va realiza n baza noiunilor i cunotinilor
acumulate n anii precedeni.
Cunoaterea proceselor biochimice fundamentale i bazate pe elucidarea acestor
mecanisme, utilizarea unor teste de diagnostic - acesta e viitorul apropiat pentru diferitele
domenii ale medicinii practice.
Cele reprezentate pot fi i un imbold pentru viitorii savani, care i vor nchina viaa
studiului fascinantelor compartimente ale biochimiei modeme i medicinii.
Exprim cordiale mulumiri tuturor celor care au favorizat realizarea acestui volum, i
ndeosebi colaboratorilor pentru amabilitate i receptivitate.
i m gndesc la studenii care, studiind acest material i descoperind tainele vieii,
vor contientiza c s-a depus un efort considerabil pentru viitorul. M ncred n tinerii, de
azi specialiti redutabili de mine, care vor fauri un viitor demn de naintaii notri.
A u to ru l
NOIUNI
5 GENERALE
Cluzit de relevrile spirituale i practice, omul a depus i depune ncontinuu eforturi
dea ptrunde sensul vieii. La diferite etape de dezvoltare a gndirii el a desprins cele
mai fine legiti ale existenei materiei vii. Anticii nu ncetau s se minuneze de frumuseea
i misterele naturii fiinelor vii, remarend noi i noi fenomene, exprimri ale perfeciunii
ei, dar nu erau n stare s explice esena i armonia lumii nconjurtoare. Marele
adevr era interpretat c Mntuitorul a creat aceast lume.
Calea de acumulare a cunotinelor a fost lung i complicat. Aspectul tiinific i
croia drumul prin scolastica i metafizica materialitilor din epoca timpurie. Descoperirea
lui C. Darwin a contribuit la desctuarea spiritului uman. In baza unor date modeste i
a analizei profunde n domeniul paleontologiei, el formuleaz cea mai vast i universal
concepie n biologie - evoluia biologic continu.
Studiile savanilor din jumtatea a doua a secolului XIX sunt inspirate de aceas
t concepie. Dezvoltarea impetuoas a chimiei organice, anorganice i fizice a
permis i cercetarea unor sisteme vii - crete i numrul compuilor extrai din
organismele vii.
Complexitatea obiectelor materiale a condus la diferenierea cercetrilor tiin
ifice. Emil Fisher a determinat structura multor glucide, a elaborat metode de
extragere a aminoacizilor din hidrolizate proteice, a stabilit configuraiile optice
ale aminoacizilor i glucidelor, a demonstrat specificitatea aciunii enzimelor. Aceste
studii au stat la baza biochimiei.
Termenul biochimie a fost aplicat pentru prima dat n 1903 de ctre Cari Neiberg.
Astfel, pornind de la pilonii chimiei organice i fiziologiei noua tiin s-a structurat n mai
multe aspecte: enzimologie, imunologie, genetic, etc - net astzi optica cercetrilor
eclipseaz oportuniti din cele mai strigente ale problemelor actuale.
Ce reprezint azi biochimia modern?
1. Savanii, n calitate de criteriu, n investigaiile lor iau n considerare mrimea
particulelor studiate. Biochimiei i corespunde aranjamentul atomilor n molecul, adic
la nivel molecular. Bios n limba greac nseamn via. Prin urmare, biochimia este
tiina care studiaz bazele molcculare ale vieii.
2. Compuii organici simpli, constituentele organismelor aparin doar lumii vii i
sunt produse ale activitii biologice. Aceti compui sunt numii biom olecule i
au rol funcional de a servi drept blocuri de construcii n formarea structurilor biologice.
Ele au fost selectate evolutiv datorit capacitii de a ndeplini funcii strict determinate n
celulele vii. n toate organismele vii aceti compui sunt similari, interdependeni, care
interacioneaz, particip la procesele de transfer al energiei i ale transformrilor de
substane. Prin unnare, aceste biomolecule pot fi caracterizate din dou puncte de vedere:
chimic i biologic, ceea ce denot c biochim ia este o superchimie a materiei
organizat perfect, fapt ce ofer largi posibiliti n studiul tainelor organismelor
vii, o chimic a celei mai perfect organizate materii.
Biochimia este una dintre sferele tiinifice cele mai atrgtoare n aplicarea raiunii
umane, a talentului i forelor creatoare ale tineretului. Ea nregistreaz succese
remarcabile i o evoluie continu.
n ce rezid succesul acestei tiine?
1. Biochimia a reuit s elucideze bazele chimice ale unui ir de probleme referitoare
la structurile biomoleculelor i proceselor metabolice ca: dublul helix al DNA, codul
genetic, structura tridimensional a unor proteine, cile generale ale metabolismului.
2. Datorit biochimiei au fost determinate cile generale de transformare a molecule
lor i a principiilor ce stau la baza diferitelor forme de exprimare a vieii. Omul i
bacteriile au mult n comun la nivel molecular - aceleai blocuri de construcii pentru
formarea macromoleculelor, identitatea transmiterii infomiaiei genetice de la DNA *-
RNA protein, iar ATP, valuta energetic, este folosit n ambele cazuri.
3. Biochimia are o influen tot mai surprinztoare asupra medicinei, mai ales n stabilirea
diagnosticului clinic n baza activitatii enzimelor. Coninutul (prezena) unor enzime n
serul sanguin poate servi drept criteriu determinant al diagnosticului infarctului miocardic,
hepatitelor etc. Anume biochimia este suportul medicaiei. O importan deosebit o
are elucidarea mecanismelor moleculare ce stau la baza unor afeciuni ereditare, a
anomaliilor metabolismului.
Biochimia are o vast aplicare, fiind destinat att studenilor, medicilor, biologilor,
chimitilor, ct i oricrui om inteligent. Puini contientizeaz c un termen, azi simplu
pn la banalitate, conine un revers - munca titanic a multor savani, unii dintre care au
fost distini cu premiul Nobel.
4. Evoluia rapid a biochimiei le-a permis savanilor s cerceteze probleme cmciale
n biologie, medicin, cum ar fi: diferenierea celulelor i reglarea creterii lor, determinarea
rolului celulelor la formarea organismului, la dezvoltarea mecanismului memoriei, n
determinarea cauzelor cancerului i schizofreniei etc. Deocamdat rspunsuri complete
la multe ntrebri nu avem, dar un lucru e cert - toate aceste probleme sunt determinate
de factorii moleculari ce se modific continuu.
C h a rles D arw in E m il F ish er

1809 - 1882 1852 - 1919
PARTICULARITILE MATERIEI VII
Constituenii materiei vii sunt compui din moleculele materiei moarte. Ele n parte, se
supun legilor ce caracterizeaz comportarea obiectelor inanimate, cu toate c ntrunesc
caliti neordinare. Cea mai concludent particularitate este complexitatea i gradul nalt
de organizare ce se caracterizeaz prin structura intern compus i diversitatea de
molecule. Organismele vii sunt reprezentate prin milioane de specii. O alt particularitate
const n faptul c orice parte component i are sensul su specific i ndeplinete
ofuncie strict determinat. Aceasta se refer nu numai la structurile macroscopice,
dar i la structurile intracelulare microscopice, cum ar fi nucleul. Structurile acestea sunt
nzestrate cu funcii speciale i compui ce se conin n celul - proteine, lipide. A treia
particularitate care ne apropie de sensul proceselor vitale const n faptul c organismele
vii sunt capabile s extrag, s transforme i s utilizeze energia mediului ambiant
fie sub form a compuilor organici nutritivi, fie sub form a energiei solare. Ultima
particularitate permite organismelor s-i generez sursa lor proprie de energie i s-i
asigure integritatea. Pe contul acestei energii se efectueaz lucrul mecanic, se realizeaz
transferul membranar al substanelor. Organismele vii niciodat nu se afl n stare de
echilibru n ceea ce privete procesele declanate de organismul propriu-zis, precum i
n interaciunea cu mediul ambiant. Dar cea mai surprinztoare particularitate a organismului
este capacitatea de a se reproduce, a se nmuli, a se procrea, nsuire ce poate f i
considerat drept chintesena lui.
Este evident c organismele vii sunt compuse din aceleai molecule, dar care ar fi
totui cauza c materia vie se deosebete radical de cea moart?
De ce organismul viu este ceva mai mult dect totalitatea componenilor
avitali? Anume aceasta este problema principal ce relev sensul biochimiei. Scopul
final al tiinei biochimia rezid n perceperea enigmelor vieii sub toate formele
ei. i, ca rezultat, avem nevoie de un student, viitor medic specialist care s nu fie doar
un dicionar al tennenilor biochimiei, dar i apt s aprecieze critic i constructiv datele
experimentale pe care se bazeaz cunotinele noastre despre procesele vitale.
n studiul disciplinei deosebim trei compartimente:
1. Biochimia static - studiaz n exclusivitate analiza, componena chimic a
organismelor.
2. Biochimia dinamic - elucideaz complexitatea modificrilor de substane n
organism.
3. Biochimia funcional - cerceteaz procesele chimice ce stau la baza diferite
lor manifestri ale vitalitii.
Biochimia este o tiin experimental, succesul creia e legat indispensabil de
capacitatea de a experimenta, bazat pe cunotinele modeme, utiliznd o
tehnic avansat de laborator, precum i de sinteza datelor nregistrate, o interpretare i
analiz veridic a explorrilor efectuate.
n ierarhia structural a milioanelor de proteine diferite, de exemplu, deosebim, mai
multe niveluri de organizare: atomar, molecular, celular. Pentru activitatea organului
respectiv e caracteristic nivelul corespunztor, iar pentru organismul integru - forma
superioar de organizare a materiei vii.
Cea mai important direcie n dezvoltarea biochimiei contemporane e studierea
proceselor biochimice la nivelul molecular. Viteza acestor procese e determinat de
diveri factori ca: concentraia ingredienilor, pH, bariera energetic, activitatea fermenilor
respectivi, prezena activatorilor i inhibitorilor. Interaciunea dintre aceti factori se
efectueaza n mod diferit, cu o reflecie indispensabil n procesele reglatoare la diferite
niveluri.
N ivelu l IV: N ivelu l III: N ivelul II: N ivelu l I:
Complexele
Celula i organitele supramoleculare Macromoleculele Uniti monomerice
Ierarhia structural n organizaia molecular a celulelor
Un alt important nivel de studiu este cel multienzimatic, viznd proteinele specifice
reglatoare, ce intr n componena endo- i exomembranelor.
Compartimentele intracelulare se caracterizeaz prin prezena unor procese bio
chimice dominante. Aceste structuri se deosebesc nu numai morfologic i citochimic, dar
i biochimic. Anume la acest nivel are loc compartimentalizarea i specificarea proceselor
biochimice. Ca obiect pentru studiul metabolismului energetic servesc mitocondriile, iar
procesele biosintetice sunt concentrate n ribozomi i fraciunile citoplasmatice.
La nivelul celular are loc o interaciune ntre procesele biochimice n diferite structuri
intracelulare, cu integrarea lor. La acelai nivel, datorit prezenei n celule a diferitelor
mecanisme reglatoare, se evideniaz o aciune specific evident a substanelor biologice
active: hormoni, mediatori, oligopeptide, stimuleni i inhibitori. Acionnd asupra sistemelor
polienzimatice, apariia mecanismelor reglatorii condiioneaz un echilibru dinamic al
proceselor biochimice i de aceea celula intact e n stare de homeostazie. W.Canon
propune acest termen n 1929 pentru detenninarea constantei mediului intern - condiie
indispensabil pentru existena organismelor vii. Acest echilibru e circumstana primordial
a proceselor de autoasamblare, autoorganizare i autoreglare, ce determin funciile
biologice cardinale: creterea, nmulirea, mitoza i diferenierea celulelor. Starea de ho-
meostazie se pstreaz nu numai n condiii normale, dar i la aciunea diferitor factori
nocivi asupra organismului i, de asemenea, n stri de stres. n aceste condiii
homeostazia e determinat de prezena n organism a sistemelor complexe reglatoare
coordonate de mecanisme adaptive.
Studierea profund i vast a proceselor biochimice ce determin meninerea
homeostaziei, graie mecanismelor de adaptaie, e o problem actual a biochimiei
funcionale. Aceste investigaii determin esena proceselor chimice ce stau la baza
funciilor fiziologice i pot preciza mecanismele reglatorii ce delimiteaz homeostazia n
stri extremale. Aceasta e o problem ce prezint att interes teoretic, ct i practic.
n ultimii 30-40 de ani n studiile biochimice au aprut modificri radicale datorit
utilizrii metodelor moderne de cercetare. A crescut considerabil sensibilitatea i
exactitatea aprecierilor cantitative ale diferitor metabolii n structurile biologice.
Datorit spectroscopiei infraroii se poate studia caracterul structural al molecu
lei, e posibil determinarea diferitor compui strini n microcantiti. Perfecionarea
metodei cromatografice - n straturi subiri - a permis extragerea metaboliilor
individuali din esut chiar i atunci, cnd ei sunt n cantiti minime. O caracteristic
deosebit o au metodele imunochimice care au favorizat i au justificat identificarea
proteinelor individuale, secvena aminoacizilor n lan.
Un rol deosebit aparine metodei de depistare radioactiv, metod care faciliteaz
studierea metabolismului plastic i energetic n condiii adecvate organismului intact.
O rspndire larg o are metoda de nregistrare a izotopilor (scintigrafia) ce ne
permite examinarea perfect a proceselor metabolice la toate nivelurile sistemelor vii. La
baza ei se afl procesul de transformare a energiei particulelor primare radioactive n
energia radiaiei electromagnetice cu lungimea de und 430 nm. Transformarea energiei
este efectuat de scintilator (lichid-pentru -particule i cristal - pentru Y-particule).
Absorbind energia particulelor radioactive, scintilatorul elimin fotoni ce se nregistreaz
pe amplificatorul fotoelectronic.
Incontestabil c succesul biochimiei depinde de realizrile vdite n tiinele nrudite
precum sunt: bioorganica, anorganica, chimia analitic, fizic i coloidal, biologia, fizica
i chiar matematica.
Rolul biochimiei pentru medicin e de netgduit, ca argument servesc doar cuvintele
lui M.V. Lomonosov: Medicul - fr cunotine suficiente n chimie - nu poate fi competent
n materie.
Foarte accelerat se dezvolt biochimia clinic, care studiaz modificrile procese
lor biochimice n organismul uman n diferite patologii i, concomitent, elaborndu-se
metodele depistrii anumitelor devieri cu scopul de a diagnostica i a pronostica evoluia
strilor morbide. n ultimii 1 0 ani, numrul analizelor chimice la un bolnav a crescut n
medie de 4 ori. E necesar de menionat c descrierea datelor de laborator este direct
dependent de gradul i nivelul de instruire a medicului.
Compuii chimici n organismele vii sunt compleci i variai dup structura lor i
sunt supui modificrilor permanente. Masa unor molecule e de milioane de Da (daltoni).
Modificrile conformaionale ale macromoleculelor biologice au loc foarte repede.
Pentru despletirea unei spirale de DNA, util pentru replicare i expresie, e necesar
numai o milisecund.Modificarea poziional a unui domen de protein fa de altul
e de o nanosecund, iar fenomenul de senzaie optic - modificri structurale ale
grupelor luminoabsorbante - are loc n cteva picosecunde.
Pentru a percepe mai profund structura i funciile proteinelor, e necesar s ne amintim
de unele proprieti ale biomoleculelor. Organisme le vii conin n cantiti mai mari 4
elemente: H, , si N. Dac excludem H ,0 , creia i revine 75% din greutate, apoi
90% din masa rezidual Ie revine acestor patru elemente. Din masa total uscat
carbonului i revin 50-60%, oxigenului - 25-30%, azotului - 8 -10% i hidrogenului - 3-
4% .
1. Particularitile chimice deosebite ale organismelor vii constau n prezena
carbonului. El, la fel ca i oxigenul, hidrogenul, azotul, poate fonna legturi covalente,
adic legturi determinate de perechi de electroni aparinnd ambilor atomi.
I I - -- I
: - >
: N : N - : -
I I ' I
Atomii participani la formarea acestor legturi covalente pretind s-i asigure

complexitatea cercurilor externe de electroni. Fiecare pereche de electroni corespunde
unei legturi ordinare.
n biologie o importan prim ordiala o are capacitatea carbonului (C) de a
diviza perechile electronice, acestea adernd la ali atomi de C, fapt ce duce la
formarea unor legturi ordinare foarte stabile. n plus, 2 atomi de se pot mbina
ntre ei, conjugnd 2 perechi de electroni. Astfel se formeaz o legtur dubl.
::
I c ::0 : C = 0
C :
'N: -C=N -
I
Varietatea substanelor are ca schelet atomi de carbon, ce formeaz legturi covalente,
practic infinite: liniare, ciclice, ramurale, structuri combinate etc.
Cele 4 legturi covalente ordinare ale carbonului n spaiu se configureaz n tetraedru,
iar mrimea unghiului dintre 2 legturi indiferente e de 109,5. n moleculele unor substane
acest unghi poate s se modifice puin. Datorit acestei proprieti, com puii
carbonului formeaz diferite structuri tridimensionale. Nici un alt element chimic
nu poate forma molecule att de diferite dup mrime i form, dup complexitatea
lanului periferic i a grupelor funcionale.
2. A doua proprietate de baz a compuilor organici const n faptul c particulele
moleculare sunt capabile, absolut liber, s se roteasc n jurul legturilor C-C ordinare,
'-""-Na V>
Unghiul dintre dou legturi Legtur ordinar Legtur dubl
(a> <b) (c)
Geometria legturilor carbonului
numai dac la atomii de carbon, care iau parte la formarea acestei legturi, nu sunt
ataate grupe foarte mari sau au o sarcin electric mare. n ultimele cazuri rotaia poate
fi limitat. Aadar, moleculele organice cu un numr mare de legturi ordinare pot avea
diferite forme numite conformaii, ce depind de unghiul de rotaie al acestei legturi.
3. A treia proprietate a legturilor covalente fonnate de carbon const n faptul c ele
au o anumit lungime. n medie, lungimea legturilor ordinare e de 0,154 nm; cele
duble sunt mai scurte i, respectiv, egale cu 0,124 nm. Ultimele au o duritate mai mare i
nu permit rotaia liber. Datorit acestei legturi din molecul unghiurile ntre moleculele
ordinare se mresc.
Structura tridimensional (conformaia) a biomoleculelor organice joac un rol
important n multe procese biochimice, dar mai ales n interaciunea centrului catalitic al
enzimelor cu substraturile. Pentru efectuarea funciilor biologice normale molecula
enzimelor i a substraturilor trebuie s fie complementar, adic trebuie neaprat s
coincid. Astfel de complementare strict e necesar pentru fixarea moleculei de hormon
la receptorul su pe suprafaa celulei, pentru procesul de replicare a DNA .a.
Poziia legturilor ordinare n tetraedru atribuie unor compui organici nc o
proprietate deosebit, cu o repercusiune primordial n biologie. S ne amintim c unul
sau mai muli atomi de hidrogen pot fi nlocuii cu diferite grupe funcionale, care
sunt reactibile i pot modifica repartizarea electronilor i poziia electronilor nvecinai,
modificnd astfel i reactibilitatea ntregii molecule. Majoritatea biomoleculelor conin
grupe funcionale de diferite tipuri i de aceea posed diferite insuiri polifuncionale,
determinnd i activitatea biologic.
R -C H 3
M etilic R -C ( R N H C N H 2 R j -R2
II
Carboxil^^ GuanidinicNH O
R NH2 C arbonilic
A min R C O R, R C _ C H R , S R2
R SH O Estcric
I I
HN -N
Tio
* 0
O
T ioesteric
R -O H R -C Im idazolic
\H OH
H idroxil A ldchidic I
R C NH2
R O P = 0
R - O - R , R_ s _ s R, II
O I
E teric D isulfidic A m idic F osforic O H
Unele grupe funcionale n biomolecule
ntotdeauna, cnd n molecula compuilor organici atomul de carbon e legat cu 4
atomi sau grupe funcionale diferite, se spune c acest atom e asimetric, deoarece el
poate funciona n dou forme izomerice, dcosebindu-se printr-o configuraie spaial
proprie - enantiomerii (stereoizomeri sau izomeri optici). n reaciile chimice izomerii
se comport n acelai mod, dar se deosebesc dup o proprietate fizic, i anume - dup
capacitatea de a roti planul luminii polarizate n stnga sau n dreapta.
Deoarece astfel de compui cu atomi de carbon se atest n dou forme, au fost
numii compui chiralici (chiros-din greac - mn).
Atomul central asimetric din aceti compui e numit atom chiralic sau centru chiralic.
n organismele vii moleculele chiralice se afl numai n una din cele dou forme posibile,
cauza fiind structura hiralic a moleculelor enzimelor.
lai Molecul chiral <> Molecul achiral

Imaginea }
n oglind A
n sistemele biologice e foarte rspndit i un alt tip de legtur - cea de hidrogen,

care uor se formeaz ntre atomul electronegativ (O i N) i atomul de hidrogen (H)
legat covalent cu un alt atom electronegativ n aceeai sau alt molecul. Atomii de
hidrogen n asemenea condiii comport ncrcturi parial pozitive, apropiindu-se de
interaciunea electrostatic. Legturile acestea sunt mai slabe dect cele covalente. Una
din particularitile lor este duritatea maxim n condiiile ncarc orientarea reciproc a
moleculelor legate determin o energie maxim a interaciunii electrostatice. Legtura
dat este determinat de o anumit direcie i datorit ei e apt s rein ambele
molecule sau grupe ntr-o orientare reciproc, determinnd complementaritatea
suprafeelor moleculelor activate. Aceste legturi servesc drept orientare, ce creeaz un
contact perfect dintre suprafeele moleculare.
O H 0=C< O H 0=
o H.. N = = N H....... N =
Legturi de hidrogen
La distane reduse acioneaz forele lui Van der Waals ce sunt determinate de
atracia electrostatic a electronilor cu sarcin negativa de ctre un atom de nucleu ncrcat
pozitiv al altui atom.
Atracia ntre grupele electrizate detenninforele electrostatice i apare ntre sarcinile
de for mare care se afl n apropiere, modificnd conformaia moleculelor (COO i
NH,+), (COO i CaTT). Acest tip de legtur dipol-dipol este caracteristic moleculelor
polare care, ajunse n contact, se influeneaz reciproc datorit efectelor electrostatice.
Moleculele polare sub raport structural pot fi identice sau diferite. Dispunerea acestor
molecule n spaiu se face ordonat cu polii de semn contrar proximitate reciproc.
Interaciuni dipol-dipol
Datorit forelor de atracie electrostatice la substanele cu molecule polare tempera

turile de topire i fierbere sunt mai ridicate comparativ cu substanele cu molecule ana-
loage, dar nepolare. Hidratarea ionilor influeneaz simitor interaciunea electrostatic,
fiindc fiecare ion n ap e nconjurat cu un strat de molecule de ap, orientat ntr-un fel
anumit i determinat de atracia dipolilor de ap la ionul ncrcat. Legturile ion-dipol
se afl n sisitemele n care mediul este format din molecule polare. n aceste sisteme se
produce orientarea dipolilor moleculelor polare n jurul ionilor.
Interaciuni ion-dipol
Fenomenul acesta este denumit solvatare, iar n cazul n care moleculele polare aparin
apei este numit hidratare.
Distingem ifore (legturi) hidrofobe, ceea ce denot agregaia grupelor nepolare.
Procesul poate fi explicat ca un transfer al particulelor nepolare ale moleculei de ap n
poriunea hidrofob.Un rol deosebit l joac n acest proces capacitatea pronunat a
moleculelor de ap de a se lega ntre ele.Un efect incontestabil al aciunii acestor fore se
manifest prin creterea vdit a structurii apei-limitarea fluiditii moleculelor de ap.
De interaciunea hidrofob depinde i aa-numita interaciune Stacking (fore de
instivuire), care apare ntre perechile de baze azotate aranjate n stive la distana razelor
Van der Waals. Acestc fore stabilizeaz dublul helix de DNA.
Un caz particular al legturii covalente este legtura coordinativ. n cazul acestei
legturi dubletul de electroni pui n comun aparine doar unuia din atomi, denumit donator
sau atom nucleofil, iar cellalt atom (legat prin acest dublet) se numete acceptor sau
atom electrofil.
Astfel de legturi pot da atomii donatori de azot, oxigen, fosfor i sulf. n cazul azotului,
acesta particip la formarea amoniacului cu trei din cei cinci electroni de valen:
H
3H + -N: : n *.
h

H
rmnnd o pereche de electroni care nu particip la formarea legturii, pereche denumit
dublet neparticipant.
n cazul tratrii unei soluii de acid clorhidric (care este disociat n H+i Cl') cu
amoniac, ionul de H+, neavnd o configuraie stabil, se ataeaz dubletului neparticipant,
formnd ionul de amoniu. Sarcina acestuia se echilibreaz prin anionul Cl':
H H
H * N + H ++ C r ^ h; n jh ci

H L H J
sau
Similar, n cazul interaciunii dintre o amin (RNH,) i un acid oarecare (AH):
o *H
r ! n ; + h ++ a
*
H
sau, n redare curent:

R - NH 2 + H+ + A' [R -N +H 3 ]A-
n astfel de compui ntlnii i ca biomolecule exist: legturi covalente (n radicalul

R, ntre acesta i atomul de azot, ntre atomul de azot i doi atomi de hidrogen); o
legtur coordinativ (ntre atomul de azot i atomul de hidrogen); o legtur ionic (ntre
cationul aminic i anionul acid A).
Legtura coordinativ astfel format se mai numete legtura donator-acceptor.
Ionul fonnat se numete ion complex, iar combinaia astfel rezultat se numete combinaie
coordinativ.
La notarea curent legtura coordinativ sc simbolizeaz printr-o sgeat orientat
cu vrful nspre atomul acceptor.
Exemplu:
H,N NH,

0 - < - P - O H [ n H 3 A g-** N H 3I SO 4
H ,N
NH
in n :3
A cid fosforic C lorura arg en tic S ulfat tetraam in o cu p ric
Dintre acetia, ultimii doi compui sunt combinaii complexe,

n accepia teoriei combinaiillor complexe n aceti compui, se distinge un ion
complex nscris ntre paranteze i unul sau mai muli ioni externi nscrii n afara parantezei.
Ionul complex este format dintr-un atom sau ion central, n jurul cruia se grupeaz mai
muli atomi, molecule neutre sau ioni (de sarcin contrar ionului central). Numml acestora
este denumit numr de coordinaie.
Numrul de coordinaie este independent de valena atomului sau ionului central. Mai
frecvent se ntlnesc numerele de coordinaie 6 (Fe, Co, Cr) i 4 (Cu, Ni), iar mai rar
numerele 2 (Ag) i 8 . Combinaiile complexe sunt ntlnite i n natur n cazul unor
bioconstitueni care conin O, P sau S.
n cazul compuilor organometalici prezeni n sistemele biologice este ntlnit legtura
chelatic. n astfel de legturi ionii metalici (Mn+) stabilesc legturi cu diveri atomi din
biomolecule, legtura fiind caracteristic ndeosebi proteidelor. Dintre ionii metalici, n
legturile chelatice se ntlnesc mai des ionii divaleni (Fe2+, Cu2+, Mn2+, Zn2+, Co2+.a)
Ionul metalic formeaz o legtur chelatic (gr.c/ie/a-clete) n form de complex
intern, spre exemplu, cu un aminoacid sau o caten polipeptidic (considerai liganzi).
Legtura chelatic se stabilete de fapt ntre ionul metalic i atomi de N i O ai
v-v^-v^-v'-y-v' ligand u lu i, fiind o legtur
0 0 u 0 0 0 Lan P0liPcPtidic coordinativ. Ionul metalic poate
stabili legturi coordinative i cu liganzi
Metaloproteid \ i 2+ /
(structur general) M (L) formai din molecule mici. Alturi
de legturile coordinative (menionate
/ tv.
o i n r T Lan'P0 iirePtidic mai sus), n chelai apar legturi
covalente. Astfel de chelai se ntlnesc
n cazul metaloproteidelor, a cror structur general evideniaz prezena acestor legturi.
Un compus chelatic, mai simplu, se formeaz prin
R
legarea unui aminoacid de ionul cupric Cu2+, ca
rezultat al interaciunii dintre aminoacid i hidroxidul H - C nh2 '-=
sau fosfatul cupric. n compusul astfel format apar \ Cu +/
legturi covalente i coordinative (reprezentate prin 4
sgei). \
Se poate conchide c n materia vie pot s apar o=co- NH, Hc-
2+
legturi de natur chimic (covalente, ionice, de Chelatizare Cu - aminoacizi k
hidrogen) i legturi de natur fizic (legturi
dipol-dipol, ion-dipol, Van der Waals etc.), precum i unele interaciuni complexe,
care cuprind mai multe tipuri de legturi. n acest mod se fonneaz asociaiile moleculare
numite cenapse, viznd grupe de substane cum ar fi: proteide-lipide, proteide-glucide,
glucide-lipide sau chiar proteide-glucide-lipide.
c a p i t o l u l 1 . PROTEINELE.ENZIM ELE
STRUCTURA I FUNCIA BIOLOGIC A PROTEINELOR
Majoritatea covritoare a modificrilor biochimice n organismele vii sunt determinate
de proteine: Viaa e nemij locit legat de procesul de rennoire a proteinelor i reprezint
modul de existen a corpului proteic (F. Enghels). Anume proteinele sunt constituentele
chimice cu cel mai nalt grad de complexitate, varietate molecular, care reprezint
specificitate de specie, de organ.
Denumirea de protein provine de la cuvntul grec proteios, care nseamn de
prim rang, pentru via, folosit ca termen pentru prima dat n 1838 de ctre
savantul german Miilder.
Proteinele formeaz clasa de substane dintre cele mai rspndite i de o varietate
funcional excepional.
Proteinele ndeplinesc urmtoarelefuncii fundamentale iminente organismelor vii:
1. Au un pronunat i important rol structural, constituind baza structurilor celulare,
membranare, precum i a organitelor celulare, materialul intercelular al esuturilor i
organelor. Proteinele structurale sunt: colagenul, elastina, keratina,fibroina. Ele
asigur diversitatea i specificitatea de fonn a tuturor fiinelor vii.
2. Exercit cataliza fermentativ. Toate varietile de reacii biochimice i tot
specificul transformrilor din organismele vii sunt determinate de enzime care sunt,
de fapt, proteine. Actualmente, sunt depistate mii de fenneni, muli dintre care separai
n forma cristalic.
3. Funciile contractil i locomotoare (dinamic) sunt asigurate de proteinele
respective: actina, miozina, tubulina - proteina microfilamentelor ce determin
procesele de baz n celul. Micarea coordonat la nivel microscopic (procesul
mitozei) la fel e determinat de aceste proteine.
4. Funcia de transport i de depozitare a unor compui chimici ca: ionii meta
lici, vitamine etc. Hemoglobina aprovizioneaz cu oxigen esuturile, iar o protein
nrudit, mioglobina, l depoziteaz n muchi.Transferina iferitina asigur transportul
i depozitarea fierului n snge, ficat. Lipoproteinele plasmei transport lipidele. Un grup
specific de proteine se afl n membrane, transfernd prin membran n celul diferii
ingredieni.
5. Funcia de protejare fa de corpi strini, virusuri, bacterii, macromolecule e asigurat
de proteinele specifice eliminate, n majoritate, de limfocite. Reaciile imunologice sunt
determinate de imunoglobuline (proteine efectiv specificc). Astfel de proteine ca
fibrinogenul, trombina . a. iau parte la procesul de coagulare a sngelui, protejnd
organismul de impactul lezrii vaselor sanguine.
6 . Funcia reglatoare contribuie la reglementarea creterii i diferenierii celule
lor. ntr-un anumit interval de timp n viaa organismului se produce expresia numai la o
parte mic din genomul celulei. Funcia dat o ndeplinesc aa-numiteleproteine-represor,
care inhib poriuni specifice n DNA celular. Aici pot fi ataate i proteinele ce regleaz
activitatea fiziologic celular.
7. O grup specific de proteine poate stoca, transmite i genera diverse mesaje
chimice, impulsuri nervoase, servind drept receptori (rodopsina - proteina fotore-
ceptorie n retina ochiului) sau transmitori ai impulsului nervos n sinapse etc.
8 . Funcia fizico-chimic a proteinelor e capabil s menin constantele snge-
lui- homeostazia (albuminele determin presiunea oncotic-cantitatea, volumul lichidului

n vasele sanguine).
9. Proteinele ndeplinesc i funcii insolite. De exemplu, sngele petilor antarctici
conine proteine cu proprieti de antigel, protejnd petii de nghe. Locul de fixare
a aripilor la unele insecte conine rizelin - protein purtatoare a unei elasticiti ideale.
Din plantele africane s-a extras o protein foarte dulce - monelina, ce nu favorizeaz
obezitatea, fiind folosit pe larg n raia alimentar.
1 0 . 0 grup interesant i important o alctuiesc proteinele alimentare i de rezerv:
proteinele laptelui, ovalbumina, seminele unor plante (soe, gru etc.), remarcndu-
se prin deosebitul lor rol energetic.
n momentul actual se studiaz mii de proteine, structura i funcia sutelor dintre care
sunt cunoscute. Astzi deseori putem auzi despre obinerea unor proteine noi cu fuAcii
excepionale. Dup zeci de ani de investigaii, un grup de savani de la Universitatea
HARVARD (America) au obinut (1985) o protein pur, susceptibil de formarea
vaselor sanguine Ia om - angiogenina, compus din 123 de aminoacizi ce constitue
un singur lan. Folosind metodele ingineriei genetice, a fost reconstituit gena care
regleaz n organismul uman producerea angiogeninei. Investigaiile prognozeaz sinteza
unor preparate care vor ameliora circulaia sanguin n muchiul cardiac, contracarnd
infarctul, insultul, vor contribui la cicatrizarea leziunilor, ulcerului etc. Blocada angiogeninei,
ns, poate fi util n tratamentul cancerului, bolilor n care apar vase mici nedorite -
psoriazis, rinopatie diabetic, artrit reumatoid; la supravegherea natalitii, preparatele
contraceptive fiind inhibitori ai acestei proteine.
E uimitor faptul c toate proteinele cu diversele lor proprieti i funcii, sunt
constituite din aceiai 2 0 aminoacizi fundamentali, ncepnd cu cea mai simpl bacterie
i pna la om. Se tie c separat fiecare aminoacid nu are nici o funcie biologic. Care
e cauza c o protein are proprietate catalitic, alta honnonal, cealalt - anticorp? Prin
ce se deosebesc ele din punct de vedere chimic?
Rspunsul e foarte simplu: proteinele se deosebesc prin faptul c pentru fiecare
n parte e caracteristic numai o singur secven de aminoacizi. Aminoacizii
sunt alfabetul structurii proteice.
Prin legarea n lanuri polipeptidice, variate ca lungime i succesiune a unitilor,
se poate obine un numr infinit de mbinri de compui. Fiecare specie conine mii
de proteine, dar specii exist circa 10 milioane. Putem oare asigura aceste proteine
numai cu 2 0 aminoacizi? O analiz matematic simpl arat c pentru un polipeptid
din 2 0 aminoacizi diferii, nici unul dintre care nu se repet mcar de 2 ori, numrul
de variaii este de 20x19x18 .a.m.d., ~ 2x1018. Masa moleculei e de 2600 Da.
Dar dac lum o protein cu masa de 34000 Da, unde 12 aminoacizi sunt reprezentai
n acelai raport, atunci cptm 10 30 0 de combinaii. Dac n componena lor vor fi
inclui 20 aminoacizi n acelai raport, numrul va crete enorm. Dac ar exista numai
cte o molecul din fiecare protein posibil, apoi greutatea lor ar fi mai mare dect
a planetei noastre. Variaii din aceti 20 aminoacizi pot fi att de multe, nct ar fi suficiente
nu numai pentru proteinele existente azi, dar i pentru cele care vor apare n viitor.
Potrivit calculelor specialitilor, azi pe pmnt exist 0,001 de specii dintre cele
cunoscute cndva.
Unitatea structural de baz a proteinelor sunt aminoacizii.
Primul aminoacid descris n 1806 a fost asparagina, iar ultimul - treonina - a fost
identificat de abia n 1936. Fiecare aminoacid are denumirea sa tradiional (conform
originii lui), raional (chimic), abreviere din trei litere i simbol de o liter. Aminoacizii
sunt derivaii acizilor grai saturai-aminoderivai. Au o structur n care, cu acelai atom
de carbon este legat grupa carboxilic i aminic.
Aminoacizii se deosebesc ntre ei prin natura acestui radical R _ p j_ c o O H
(R). I
Anume radicalul R la diferii aminoacizi difer dup structur, N H2
sarcin electric, solubilitate n ap.
Dup proprietatea de a interaciona cu H;0 la un pH = 7,0, deosebim 4 grupe de
aminoacizi (tab. 1 . 1 ):
1. Aminoacizi cu radicali hidrofobi, nepolari - hidrocarburi. Reprezentani: alanina,
valina, leucina, izoleucina, prolina, metionina,fenilalanina, triptofanul.
2. Aminoacizii cu radicali polari, dar far sarcin electric. Ei formeaz legturi de
hidrogen cu molecule de H ,0. Reprezentani: serina, tirozina, treonina - polaritatea
e determinat de grupa OH'; asparagina i glutamina - de grupa NH,; cisteina - de
SH, iar la glicin - radicalul (H) ce nu compenseaz polaritatea grupelor NH, i COOH.
3. Aminoacizii cu radicali ncrcai negativ {acidul aspartic i glutamic).
4. Aminoacizii cu radicali ncrcai pozitiv (,Uzina, arginina - grupa guanidinic
i histidina - grupa imidazolic).
n structura unor proteine se remarc i aminoacizi nefundamentali n compo
nena colagenului: 4-hidroxiprolin, 5-hidroxilizin] n miozin - metillizin; n
protrombin - acidul carboxiglutamic; n elastin - desmozin format din 4 molecule
de lizin. Aceti aminoacizi se mai numesc aminoacizi minori (tab. 1.2).
Se mai ntlnesc aminoacizi cu alte funcii ca: ornitina, citrulina, -alanina, etc.
(tab. 1 .2 ).
Solubilitatea aminoacizilor n ap este influienat de prezena srurilor. Cea
mai mic solubilitate n ap o au cistina i tirozina (0,04 g/100 g a.d.), mult mai mare -
prolina i oxiprolina (154 g/l 00 g a.d.). Foarte solubili sunt arginina, lizina i cisteina la
pl n ap distilat i 20C (tab. 1.3). Prolina este singurul aminoacid cu o solubilitate bun
n alcool, ceilali aminoacizi se dizolv foarte greu. Toi aminoacizii sunt uor solubili n
soluii slab acide sau alcaline. De remarcat c triptofanul pur n soluii acide este stabil, n
timp ce n amestecuri sau n hidrolizate proteice uor se oxideaz.
Toi aminoacizii fundamentali, cu excepia glicinei, posed un carbon asimetric
(centru chiralic) care este C a (excepie prezint izoleucina i treonina care au 2 centre
chiraliceC ( 2 x 2 - 4)).
Formulele de configuraie ale enantiomerilor unui aminoacid oarecare, repre-
.Grupa acizilor hidrofobi nepolari.
A lanina (A la) A V alina (Val) V Lcucina (Leu) L

A cid a-am inopropionic A cid a-am inoizovalerianic A cid a-am inoizocapronic
H3 N - C H - C O O ' H 3 N CHCOO' H3 N - C H - C O O '

I I
CH 3 C H -C H 3 CH 2
I
CH 3 H 3 CCHCH 3
Izoleucina (Ile) I M etionina (M et) M Prolina (Pro) P
A cid a-am ino--m etilvalerianic A cid a-am ino-S-m etiltiobutiricA cid pirolidin-a-carboxilic
H 3 N CHCOO' H 3 N CH COO' H2N -C H -C O O '

CHCH 3 CH 2
I
CH 2 CH 3 CH 2
I
S -C H 3
Fcnilalanina (Phe) F Triptofan (Trp) W

Acid a-am ino--fenilpropionic Acid a-am ino--indolilpropionic
H 3 N - C H COO' H3 N - C H - C O O '
2 2
2 .Grupa acizilor cu sarcin negativ.
Acid aspartic (A sp) D A cid glutam ic (Glu)

Acid am inosuccinic A cid a-am inoglutaric
+
H 3 N CHCOO' H 3 N CHCOO'
1
CH 2 CH 2
c=o CH 2
O' c=o
O'

3. Grupa acizilor hidro fiii
A sparagina (Asn) N G lutam ina (G in) Q T reonina (Thr) T

A cid a-am in o - A cid a -am ino- A cid a-am in o -
-am idosuccinic Y -am idoglutaric -hidroxibutiric
+
H3N CH "COO' H3N CH-COO' H 3 NCH COO'
I I I
CH 2 CH2 C H -C H 3
i I
c -n h 2 CH2 OH
II I
o c nh2
I!
0
Serina (Ser) S C isteina (Cys) T irozina (Tyr) Y
A cid a-am ino- A cid a-am in o - A cid p-hidroxifenil-
-hidroxipropionic -tiopropionic alaninic
H3N CH COO' H3N CH COO' H 3 N C H -C O O '

I
1
CH2 CH2
I SH
OH
G licina (Gly) G
A cid am inoacetic
H3N-CH COO'
H
4.Grupa acizilor cu sarcin pozitiv.
Lizina (Lys) A rginina (A rg) R H istidina (His) H

A cid a,e.-diam inocapronic A cid a-a m in o -5 -g u a n id in o A cid a-a m in o - -im id a z o lil
valerianic propionic
H 3 N~ -C H -C O O ' H3N -C H -C O O ' H3N CH- COO'

I
CHo
!
CH 2
I
CH2
CH, CH 2 +
i I NH NH
CH 2 CH 2 n h 2
! .' 1 +
c h 2- - n h 3 NH C = N H ,
H om oserina
acid a - am ino- N orvalina O rnitina
Y -hidroxibutiric acid a-am inovalcrianic acid a , 8 -diam inovalerianic
h2n-ch-cooh h2n-ch-cooh h2n-ch-cooh

j I
CH2 ^H2 CH2
I i H2 CH2
c h 2 OH
I I
CH3 ch2-nh2
C itrulina H idroxilizina
acid a - am ino- N orleucina acid a ,e - diam ino-
5 -carbam ilovalerianic acid a-am inocapronic 5 -hidroxicapronic
H2N CH-COOH H2N - CH-COOH H2N-CH-COOH

I
CH2 :h2 CH2
I I
CH2 CH2
CH2 nh2 I
ch2-nh-c CH2 CH-OH
\> I
CH3 ch2-nh2
A cid Y-carboxiglutamic A cid p - am inobenzoic H idroxiprolina
acid pirolidin-Y - hidroxi-
H2N - CH-COOH COOH a - carboxilic
CH2 HN--CH-COOH
I
CH
HOOC COOH
nh2
W
C am itina
-A lan in a
acid -am inopropionic
HO CH 2- N(CH3)3
CH2 COO' h2n ch2 CH2- COOH
665H G
u n iv e r s it a t e a s t a t
OE MEDICINA l FARMACIE
NICOLAE TESTEMIEANU"
S IB L ilQ T E C A
Selenocisteina A cid 8 - aminolevulinic
H2 NC H -C O O H 0= - 2-2- COOH
I I
CH 2 CH 2
I
SeH NH 2
Ilom ocisteina
Metillizina
acid a - amino-
H 2 N C fb -C O O H Y - tiobutiric
H 2 N C H -C O O H
lzu2 " I
CH 2
1
CH 2
I I
CH 2 NHCH 3 SH
Desmozina
nh2
I
C H -C O O H
I
h 2n (CH 2 ) 3 NH 2
I I
HOOC CH (CH 2 ) 2 -(CH 2 )2 C H -C O O H
(CH 2 ) 4
C H -C O O H
I
NHo
Acid Y - am inobutiric, GABA
CH2 CH2 CH2 COOH

\
NH,
Solubilitate Solubilitate
Aminoacid ( g / 1 0 0 ga.d.) Aminoacid ( g / 1 0 0 ga.d.)
Alanina 22,50 Leucina 3,60
Arginina f solubil Lizina f solubil
Asparagina 2,40 Metionina 3,00

Acid aspartic 0,40 Prolina 154,50
Cisteina f solubil Serina 4,30
Fenilalanina 2,70 Treonina 1,60
Glicina 4,00 Trip to fon 1, 10
Glutamina 3,60 Tirozina 0,04
Acid glutamic 3,70 Valina 6,80
Histidina 4,00
zentate n sistemul D-L, n care substana de referin este aldehidaglicericdextrogir,

sunt redate n felul unntor.
COO- C O ir
Literele se refer numai la configuraia absolut: n cazul D-izomerului gruparea NH,

se afl n dreapta, iar a L-izomerului - n stnga. n structura proteinelor se ntlnesc numai
L - aminoacizi, doar pentru ei exist sisteme enzimatice, care prezint specificitate de
substrat, graie creia se asigur metabolizarea lor.
La valori de pH neutre aminoacizii n soluie se afl n form de ioni bipolari
(Zwitterion). Grupa amin e protoionizat (NH3+), iar cea carboxilic (COO ) -
disociat.
R R
Forma neutr Forma de ion bipolar (amfiion)
Ionizaia aminoacizilor depinde de valorile pH. n soluii acide grupa COOH este
neionizat, iar cea amin - ionizat (NH3+).
H H
I I
RC COO + H - R - C COOH
1+ 1+
NH 3 NFI3
n soluii bazice situaia e contrar, ionizat e grupa carboxilic (COO').
H H
I
R - C - C O O + OH R - C COO + H ,0
!+
NH, NH,
In arhitectonica moleculei proteice deosebim patru niveluri structurale.
STRUCTURA PRIM AR
Cum se leag aminoacizii n proteine? Procesul decurge n felul urmtor: a-grupa
carboxilic a unui aminoacid se unete cu a -aminogrupa altui aminoacid, fonnnd legtura
peptidic, cu eliberarea unei molecule de ap.
O H
II "I-
H 2 N CH + N C H -C O O H
I -I I I -H20
R, OH H R2 o
II
w H2N CH N CHCOOH
I I I
Ri H r 2
Echilibrul acestei reacii nclin mai mult spre procesul de hidroliz, dar nu de sintez.
De aceea procesul de sintez necesit energie, pe cnd hidroliza decurge cu degajarea ei.
La unirea multor aminoacizi cu legturile peptidice se formeaz un lan (caten)
polipeptidic, avnd o structur liniar.
Lanul are o anumit direcie. S-a stabilit condiional c el ncepe cu captul purttor
de aminogrup, captul N. Descrierea unei sccvene de aminoacizi n lan ncepe
anume dc la acest capt terminal. Aminoacidul, care n legtura peptidic particip cu
grupa sa COOH, capt sfritul - il; aminoacidul final, care conine grupa COOH
liber, nu-i schimb denumirea, fonnnd captul -terminal.
Aadar, lanul polipeptidic are un schelet cu o structur strict, repetat i
catene laterale diferite.
Succesiunea aminoacizilor determin structura primar a proteinelor, fiind baza

informaiei genetice. In unele proteine catenele laterale se unesc ntre ele cu legturi
disulfidice, care se formeaz la oxidarea resturilor de cistein. Alte legturi covalente n
structura proteinelor nu se ntlnesc. Astfel de tip de legtur ntre aminoacizi n molecula
proteic l-a stabilit, n 1888, savantul rus A. Danilevschi; dar numai n 1902E.Fischera
naintat teoriapolipeptidic. Azi tiina posed argumente convingtoare ale prezenei
acestei stmcturi:
1. A naliza ro en tg en o stru ctu ral a perm is N NH NH
detenninarea tabloului repartiiei resturilor de aminoacizi
n lanul polipeptidic i conformaia lui. O O
2. Argumentarea de baz este posibilitatea de Biuretul
sintez a proteinelor purificate, precum i a
polipeptidelor cu structur cunoscut, care posed activitate biologic, la fel ca i
proteinele native.
3. Proteinele, ca i compusul biuret, dau o coloraie albastr-violet n prezena
C uS04, n mediu alcalin, ceea ce e o dovad a prezenei legturii peptidice.
Ficcare protein are o structur unic, o succesiune precis de aminoacizi. n 1953,
Frederic Sanger descifreaz aminoacizii n lanurile polipeptidice ale hormonului - insulin.
Prima dat a fost determinat succesiunea aminoacizilor, stabilindu-se c aceasta e
determinat genetic. Sinteza tuturor proteinelor din aminoacizi are mecanism similar.
Care este necesitatea determinrii acestor succesiuni n proteine?
Avem posibilitatea de a stabili:
1. Baza molecular a activitii biologice a proteinelor.
2. Principiile ce stau la baza formrii lanului polipeptidic - la aciunea biologic
activ alctuesc structuri specifice bazale.
3. Modificrile n succesiunea aminoacizilor pot conduce la tulburri ale funciei pro
teinelor i, n consecin, la apariia maladiilor. De menionat c modificarea unui singur
aminoacid provoac tulburri grave n metabolism. Evolueaz o direcie nou n medici
n - patologia molecular.
4. Succesiunea resturilor de aminoacizi furnizeaz informaii sugestive despre evoluia
procesului la nivel molecular.
Care sunt principiile de descifrare a succesiunii aminoacizilor?
1. Proteina trebuie s fie hidrolizat pn la aminoacizi, nclzind-o la 110C
timp de 24 ore n 6 N HC1. Hidrolizatul e separat prin metoda cromatografiei ionice
cu polistcrol sulfonizat. Aminoacizii fracionai se determin prin reacia cu ninhidrin:
a-aminoacizii confer o culoare albastr intensiv, prolina (iminoacid) - galben.
+ + H o N -C H COOH
COH I
R
, C om pui + C 0 ,+ R C H 0 + H20
interm ediari
Purpura Ruhcm ann'
Metoda aplicat este deosebit de efectiv. Cantitatea de aminoacizi e proporional

densitii optice a soluiei dup nclzire cu ninhidrin.
Dac cantitatea de aminoacizi este minim, se folosetefluorescamina. Comparnd
rezultatele obinute cu amestecul standard, determinm compoziia aminoacidic a
proteinei i anume: compoziia, nu ns succesiunea aminoacizilor.
2. Procedeul de identificare a terminalelor N i a fost utilizat de F. Sanger
pentru stabilirea grupei N H , de ctre dinitrofluorbenzen, cc reacioneaz cu
NH2, formnd compui (de culoare galben) ai acestei substane. Legtura e stabil
i se pstreaz la hidroliza legturii peptidice; compusul e determinat cromatografic.
nh2
I
+ R CH HF
I
0=C m
Dinitrofluorbenzcn
I
R CH
I
0 =C
2,4-dinitrofenil - derivat
al polipcptidului
+ Gly A sp Qy
Phe Arg
I
H3c CHCOO
2,4-dinitrofenil - derivat
al restului aminotemiinal
Atunci cnd aminoacizii constituie cantiti mici, e folosit un alt reagent - clorura de
dabsil, care, reacionnd cu grupa NH,, confer compusului sulfamidic o culoare intensiv,
fluorescent.
N- -SO9CI + h2n CH-C^

H3 C ' \ = I II
CH3 o
Clorura de dabsil J.-HC1
H,C
3Vv 7 V n=n^ A - S O ? N H C H - C - w
/ I II
H ,C CH 3 o
Hidroliza
t
4 N- / V _ n = n / \ - S 0 2NHCH C O ' +
H .C 7 \ = / 1 1 Gly Asp Gly
Dabsil-alanina 3 e Arg
Determinarea captului N-termina!prin marcarea cu clorura de dabsil

Resturile -terminale ale catenelorpolipeptidice se identific n felul urmtor:
polipeptida se incubeaz cu carboxipeptidaza (COP), care hidrolizeaz legtura
peptidic la captul -term inal, compusul fiind determ inat cromatografic.
Carboxipeptidaza-A este inactiv la COOH ale argininei, lizinei iprolinei. Carboxi-
peptidaza-B scindeaz COOH ce aparine lizinei i argininei.
Metoda chimic: proteina se incubeaz cu hidrazin la 100(IC, n lipsa apei, rezult
hidrazide ale aminoacizilor, excluzndCOOH-tenninal, care ramne liber. Acest aminoacid
este identificat cromatografic.
Un alt principiu const n scindarea lanului polipeptidic n fragmente, explornd
diferite metode:
a) hidroliza catalitic limitat sub aciunea enzimelor specifice - tripsina (scindeaz
legturile peptidice formate de grupa COOH a Lys i Arg, indiferent de lungimea i
succesiunea aminoacizilor n lan);
b) metode chimice specifice, de exemplu, bromura cianidic (CNBr) scindeaz
legtura peptidic format de COOH a metioninei. Aceast metod e prea dificil.
Peri Edman propune metoda de determ inare a succesiunii fragm entelor
peptidice sau aminoacizilor. n metoda elaborat de F.Sanger hidrolizatul nu poate fi
folosit dublu din cauza c peptida se hidrolizeaz complet.
Peri Edman a reuit s marcheze captul N-terminal i scindarea lui de la peptid,
produendu-se far scindarea altor legturi peptidice. Metoda const n scindarea
fiecrui rest de aminoacid din captul N-terminal. n acest caz se folosete
fenilizotiocianatul care reacioneaz cu NH,, rezultnd formarea feniltiohidantoina
compusului:
N=C=S
+ H 2 N CH G ly -A sp - P h e A rg -G ly COO
Fenilizotiocianatul CH 3
H s 1 PH=9
I II Y
N C NHCH C O GlyA s p -P h e A rg -G ly COO
ii
IrN _c + H2 N GlyAspPheArgGlyCOO
t
C H -C H 3 Degradarea dup Edman
n mediu slab acid are loc disocierea compusului ciclic, iar peptida rmas e mai mic
cu un rest de aminoacid. Produsul este identificat cromatografic. Degradarea dup Edman
este repetat.
n fine, se ajunge la etapa in care succesiunea n fragmente de peptide e clar, dar nu
e identificat succesiunea peptidelor nsei. Ultimele se determin dup suprapunerea
diferitelor segmente de peptide, stabilindu-sc astfel segmentele de coinciden. Se folosesc
i ali fermeni ca: chimotripsina (scindeaz legtura peptidic format de COOH a
Phe, Tyr i Trp\p ep sin a etc.
Metodele descrise mai sus se refer la proteinele compuse dintr-un singur lan
polipeptidic, far prezena legturilor disulfidice. n caz contrar, sunt necesare metode
suplimentare. Disociaia a mai multor catene polipeptidice e posibil sub aciunea
detergenilor ca: ureea, hidroclorura de guanidin, care scindeaz legturile
necovalente, distrugmd structura teriar i cuatemar.
/N H 2
H 2 Nc N H , HN=C -HC1
II " nn h 2
o
Ureea Hidroclorura d e guanidin
Legturile disulfidice se rup la oxidarea n acid performic, cu formarea resturilor de

acid cisteinic.
NH NH
1 : 1 O
CH-CH 2-S-5-S CH,-CH + HC^
c= o : c= o
^ C istin a I A cid perform ic
i
NH NH
I I
C H - C H 2 SO 3 II + HO 3 S CH 2 CH
I ' I
c=o c=o
I A cid ciste in ic I
Analiza structural a proteinei poate fi accelerat prin utilizarea secveniatorului

- aparat ce permite determinarea automat a succesiunii de aminoacizi.
Proprietile funcionale ale proteinelor sunt detenninate de conformaie, aranjamentul
spaial al atomilor, esenial fiind succesiunea de aminoacizi, care, de fapt, i stabilete
conformaia proteinei.
La sfritul anilor 1930 L.Pauling i R.Corey au nceput explorarea structurii
aminoacizilor iapeptidelorcurazeXi au determinat lungimea i unghiul standard ale
legturilor, ca apoi s prevesteasc conformaia proteinei. S-a constatat un fapt
important, i anume: unitatea peptidic posed o structur planic rigid. Atomul de
hidrogen al grupei NH, ocup o poziie trans n raport cu O, a grupei carbonilice
(fig. 1 . 1 ).
(I = 0,1 nm)
- terminal
/V - termi nal
F igura 1.1. Grupa peptidic cu lungimea legturilor
Legtura dintre carbonul

grupei carbonilice i azotul o o 0-
grupei NH din legtura v ----- - x v
p e p tid ic p o se d un a | c< N ca
caracter parial de legtur
dubl. <a)
i, deci, rotirea n jurul
acestei legturi este ngreuiat. Lungimea ei este de 1,32A, media lungimii dintre
legturile ordinare C-N i legtura dubl C=N. Spre deosebire de cazul examinat,
legtura dintre atomul de i atomul de al grupei carbonilice este ordinar. Prin
urmare, n ambele pri ale legturii peptidice rigide gradul rotirii libere este foarte
mare. Fiecare aminoacid e caracterizat prin unghiurile sale de rotire. Rotirea fa
de aceste legturi se noteaz prin unghiurile \j/ i (fig. 1 .2 ).
n concluzie, structura primar nu este
altceva dect succesiunea de aminoacizi n
protein i localizarea punilor disulfidice.
Ea reprezint o caracteristic complet a
legturilor covalente din protein.
Figura 1.2. Determinarea unghiurilor iff i

/ - caracterizeaz rotirea fa de legtura ordinar Ca-C;
tj>- caracterizeaz rotirea fa de legtura ordinar Ca-N
STRUCTURA SECUNDAR se obine n rezultatul interaciunii sterice a
resturilor de aminoacizi localizai alturi n succesiunea liniar.
Unele dintre aceste interaciuni au un caracter reglementat, genernd astfel o anumit
periodicitate. Drept exemplu ne servete oc-elicea, structura sau structura n foaie
plisat i spiral de colagen. E posibil oare ca lanul polipeptidic s obin o structur
din poriuni repetabile?
L.Pauling i R.Corey, studiind un ir de conformaii poteniale, au elaborat modele
moleculare exacte - una din structurile secundare mai des ntlnite i dintre cele mai
avantajoase, lund n considerare rigiditatea geometric a legturii peptidice i variaiile
de unghi admisibile, se dovedete a fi a-elicea (fig. 1.3).
F igu ra 1.3. Modelul a -elice orientat spre dreapta

A - sunt prezentai in elice numai atomii Ca;
- sunt atomii de azot (N) ce formeaz scheletul moleculei; atomii Ca i carbonul carhonilic - C;
- spirala complet, prin puncte sunt reprezentate legturile de hidrogen ntre N H i
grupe, ce stabilizeaz spirala
Spirala are forma unui cilindru, rsucit tensionat, lanul de baz formeaz partea
intern a cilindrului, iar radicalii (lan exterior) sunt orientai spre exterior, miendu-se
conform spiralei. Spirala este stabilizat de legturile de hidrogen dintre N11 i ,
grupe ale lanului de baz. Grupa a fiecrui aminoacid se reunete prin legmra de
hidrogen cu NH, grupa aminoacidului situat n succesiune liniar cu patru resturi n
avans. Deci, toate grupele i NH ale lanului de baz sunt unite ntre ele prin legturi
de hidrogen. Pasul elicei conine 3,6 resturi de aminoacizi, adic aminoacizi separai
n succesiuni liniare de 3 - 4 resturi de aminoacizi, fiind amplasai foarte aproape n
structura spiralei. Dimpotriv, aminoacizii aflai la dou resturi diferen unul de altul,
spaial sunt plasai opus unul fa de altul i, deci, interaciunea reciproc devine imposibil.
Pasul spiralei este de 5,4 (angstrom, unitate de lungime echivalent cu 0,1 nm, denumit
astfel n cinstea savantului spectroscopist A. Angstrom). La ficcarercst, aminoacidul
avanseaz pe vertical cu 1,5. Diametrul acesii bastona n care se afl atomul C -a
estedelO. Sensul rsucirii lanului polipeptidic poate fiatt de la stnga la dreapta, ct
i viceversa. Toate cercetrile a-elicei proteinelor se refer la primul tip.
Cota a-elicei n proteinele studiate pn acum este imens de variabil. n unele
proteine, de exemplu mioglobina i hemoglobina, a-elicea st la baza acestor structuri,
ns proteina chimotripsina e lipsit de ea complet. Elicele formeaz unele elemente
proteice lungi, ajungnd la mai mult de 1000. Dou i mai bine spirale pot s se rsu
ceasc ca firele n fringhie groas. Astfel de structur se numete superspiral i o gsim
n diferite proteine ca: miozina, keratina, tropomiozina, fibrina i n alte proteine sanguine
etc. Asemenea structuri ndeplinesc un rol mecanic, fonnnd fibre, i sunt caracteristice
pentru proteinele fibrilare. L.Pauling cu R.Corey au prezis aceast structur cu 6 ani
nainte de a fi experimental depistat prin metoda analizei R-structurale. A fost descoperit
o er nou n biologia molecular, favoriznd posibiliti de a prezice confonnaia lanului
polipeptidic, n cazul n care sunt explorate proprietile ingredientelor.
ns nu toate polipeptidele sunt capabile s formeze spirale. Exist aminoacizi
dezorganizatori ai elicei n structura primar. Aceste resturi de aminoacizi mpiedic sau
diminueaz tendina de rsucire elicoidal a unui lan polipeptidic. S-a stabilit c:
1. Prezena pralinei ntrerupe rsucirea elicoidal a lanului polipeptidic. Atomul de
azot se include n componena inelului rigid din structura aminoacidului, ce exclude
orice rotire ct de mic n jurul legturii N-C. Atomul de azot care formeaz legtura
peptidic n-are atom de hidrogen i de aceea el nu-i capabil s formeze legturi de
hidrogen intracatenare. n consecin, structura spiralic se deregleaz ntotdeauna acolo
unde e prezent acest aminoacid, formndu-se un cot, o ndoire, o ncovoiere n lan.
2. Dac n succesiunea aminoacizilor sunt alturate multe resturi de acid glutamic,
apoi la pH = 7 apare o for de respingere ntre grupele carboxilice ncrcate negativ,
fora crora e mult mai mare dect forele stabilizatoare ale punii de H a spiralei. Din
aceeai cauz segmentul de caten, cu un numr mare alturat dc resturi ale aminoacizi
lor ca lizina sau arginina, cu o sarcin pozitiv, nu va avea form elicoidal.
3. Resturile unor aminoacizi (valina, serina, treonina, izoleucina, asparagina), avnd
radicali voluminoi la -a, confer o oarecare strngere steric a elicei, servind drept
factori destabilizatori (grupa OH a serinei, treoninei pot forma puni de H). La fel vor
reaciona i resturile de cistein, care formeaz puni disulfidice covalente. Ele vor lega
rigid poziiile lanurilor polipeptidice i n vecintatea acestor regiuni rsucirea elicoloidal
nu mai poate avea loc.
Rezult c avem 4 tipuri de limitri care influeneaz asupra conformaiei catenei
polipeptidice:
1 . rigiditatea legturii peptidice;
2 . forele electrostatice de respingere sau atragere, dac aminoacizii le au n
apropiere;
3. prezena radicalilor voluminoi;
4. prezena iminoacidului - prolina.
S-a stabilit c structura primar const n succesiunea aminoacizilor n lan, legturile
covalente pcptidice aparinnd catenelor. Structura secundar se caracterizeaz prin
conformaia n spaiu a resturilor de aminoacizi n lanul polipeptidic. Exemplu clasic de
a - spiral e a -spirala keratinei ce conine mult cistein. Dup cantitatea de Cys se
evideniaz keratina diferitelor surse. La broasca estoas, de exemplu, coninutul de
Cys este egal cu 18%. Carapacea ei nu numai c are o duritate excelent, dar n
condiii fiziologice e insolubil n ap. Globulinele i mai ales albuminele datorit solubilitii
lor n ap, permit formarea unei soluii de 60%.
Care-i cauza acestei deosebiri? a-keratinele conin aminoacizi care au grupe
hidrofobe localizate pe suprafaa exterioar a elicei, ce ocup o poziie fixat i sunt
orientate spre faza apoas. n proteinele globulare de asemenea avem grupe hidrofobe,
dar ele sunt camuflate, n-au contact cu apa, iar pe suprafaa exterioar sunt ataate
grupe hidrofile sau polare.
In acelai an L. Pauling i R. Corey au descris o alt variant de structur periodic
- aa-numita -structur sau structura n foaie plisat (fig. 1.4).
F igura 1.4. - structur

Ea se deosebete de a -spiral prin:
1. Form plat, dar nu de bastona, n fibroin, de exemplu, catencle polipeptidice
sunt localizate paralel una fa de alta, formnd plise i de aceea astfel de structur se
numete foaie plisat sau de straturi. Fibroina conine 1 0 0 %, iar alte proteine - proporii
variate de asemenea structuri.
2. Distana ntre dou resturi de aminoacizi e de 3,5E (nu de 1,5 ca la oc-spiral).
Structura- e stabilizat prin puni de hidrogen intercatenare, dar nu intracatenare ca la
a-spiral. Radicalii de aminoacizi ies n ambele pri ale structurii-.
Exist a i -keratinele. n nu se fonneaz puni disulfidice ntre catcnc, lanurile
fiind direcionate diferit -antiparalel. Structura , la rndul ei, e determinat de secvena
de aminoacizi n lanul polipeptidic. O condiie obligatorie e ca resturile de aminoacizi s
posede grupe mici. Aadar, n fibrinoina mtasei majoritatea acestor resturi revine glicinei
i alaninei. Fiecare al doilea aminoacid e glicin, -keratinclc aparin tot proteinelor
fibrilare insolubile n ap, dar sunt mai flexibile i mai greu se extind. Periodicitatea
structurii se repet peste 7A.
Aceste concluzionri rezult din unnatoarele experimentri:
Dac a-keratina prului este prelucrat cu unele substane i apoi supus aciunii
aburilor, ca se extinde aproape de 2 ori fa de lungimea iniial. Radiograma acestei
stri e caracteristic fibroinei, adic i pierde a-elicea i capt -structura, ca
rezultat al ruperii legturilor de hidrogen, ce stabilizau a-spirala. Dac a-keratina se
rcete i se ia greutatea respectiv, apoi automat se rentoarce la conformaia de a -
spiral. Procesul e cauzat de faptul c n a-elice radicalul grupelor este mai mare dect
n -structur i de accea ultima conformaie n astfel de compui e mai puin stabil.
Aceast proprietate a a -keratinei se datoreaz i prezenei vdite a legturilor
transversale disulfidice care stau la
baza elasticittii firelor de pr (fig.
f i /
1.5).
Unii aminoacizi destabilizeaz i f/
A
511HS1 Aa* 5 4 A* 1
structura plisat, printre ei: Glu, Pro, is S * SH H $ J b sif ~ -
Lys, Ser, Asp. Ali aminoacizi \j - S - S - \ \ H s~
HS I .~Sff
T
_ l~SH :
favorizeaz formarea structurii
plisate ca: Met, Val, Ile.
-S H HS- fi J 118
I j
/L e8 - - , gI
La6 : g V8 5 ! &
V *"9 1
A l treilea tip de structu r ISSi . > & --
i \ - H s f .= \ ^ \\ \
periodic e spirala de colagen. N =2 \
A ceast stru c tu r sp ec ific / / V V D
determin elasticitatea colagenului - F igura 1.5. Fazele ondulaiei permanente a prului:
component de baz a pielii, oaselor. - a-elicea keratinei e stabilizat de legturi disulfidice;
- agentul reductor transform cistina in cistein;
Ca protein fibrilar el se gsete, - modificrile mecanice schimb poziia gr. S H n catene;
n condiii diverse, aproape n toate I) - oxidarea grupa S H formeaz legturi transversale noi.
organele, determinnd formarea unor
uniti structurale. Fiind insolubil, s-a studiat dificil i numai dup ce s-a observat c
colagenul din esuturile animalelor tinere poate fi extras n stare solubil, deoarece n el
lipsesc legturile transversale, s-a putut stabili unitatea structural de baz - tropocolagenul.
Ultimul e alctuit din trei catene de aceeai lungime i structur, care pot fi similare la
unele tipuri de colagen. 1/3 din aminoacizi i revine glicinei, cantiti deosebite constituind
prolina, rar ntlnit n alte proteine. Conine hidroxiprolin i hidroxilizin. Colagenul arc
o regularitate mare n succesiunea aminoacizilor - al treilea rest aparine glicinei. Foarte
des se repet secvene ca Gly-Pro-Hidroxipro. Spirala de colagen se caracterizeaz
printr-un grad de stabilitate a lungimii, detemiinat de interaciunile cooperative, adic de
fonnarca lanurilor multiple care se amplific reciproc (fig. 1 .6 ).
Christian Anfinsen, studiind ribonucleaza, enzim ce scindeaz RNA, a stabilit un
principiu universal, fudamental n biologia molccular i anume: succesiunea aminoacizi
lor determin i conformaia.
STRUCTURA TRIDIM ENSIONAL
Aceast structur rezult din inter
aciunea strict a resturilor de aminoa
cizi care n succesiunea liniar se loca
lizeaz departe unul de altul, acesta fiind
modul de mpachetare a lanului poli
peptidic ntr-un volum anumit.
Fora motrice la apariia acestei
structuri e interaciunea radicalilor ami
noacizilor cu moleculele de ap. Cu alte
cuvinte, structura e determinat de
mrimea, forma, polaritatea acestor ra
dicali. Anume structura tridimensional
conine informaia funcional, ce sta-
bilete proprietile biologice i
infonnaia nativ a proteinelor.
Un lan polipcptidic adopt, n
msura n care-i permite structura sa
primar, configuraii de tt-elice, de
-structur; mpachetarea lanului caut F i ura i .6. Spirala de colagen
s satisfac i afinitile radicalilor, ccca A - spirala tripl, sim t prezentai atomii Ca;
- .- a - conformaia unei caten
ce fixeaza conformaia ei. Aceasta con- secven(a. c iv - p ro - Pro;
formaie e un compromis, deoarece nu - seciunea transversal prin modelul de colagen -
se pot realiza toate legturile posibile, trei catene umte i)r" les- H>unde Ca e al G,y-
dar acest compromis este cel mai favorabil i cel mai stabil din punct de vedere energetic.
Stabilizarea structurii determinat de aceleai legturi: de hidrogen, electrostatice,
hidrofobe, Van der Waals. Prima protein, a crei structur a fost stabilit, este mioglobina
- protein ce leag 0 2 n muchi. Ea conine n catena polipeptidic 150 aminoacizi i o
grupare neproteic numit hem (fig. 1 .7).
F igura 1.7 .Conformaia catenei mioglobinei (A) i a catenei din hemoglobina (B)
Scheletul are 8 segmente elicoidale, cel mai lung conine 23 aminoacizi, cel mai scurt
-7 aminoacizi, ce includ aproape 80% din resturile de aminoacizi. Radicalii ocup aproape
tot spaiul dintre segmente. Molecula e att de compact, nct n interiorul ei pot s se
acumuleze numai 4 molecule de ap.
Regiunile elicoidale sunt separate de segmente neelicoidale la nivelul crora lanul
polipeptidic i schimb direcia. n aceste puncte finale se posteaz prolina. Interiorul
moleculei e format din aminoacizi cu radicalul nepolar, excepie fiind dou resturi de
histidin ce leag hemul.
Grupele polare se afl pe exteriorul moleculei, n alte rsuciri - resturi de serin,
treonin, asparagin: hemul ce conine Fe leag o molecul de O,.
Cum sunt mpachetate alte proteine globulare, la fel constituite dintr-un lan
polipeptidic?
Citocrom - protein ce conine hem, dar se deosebete dup structura secunda
r, teriar, succesiunea de aminoacizi i proprietile biologice; lizowna - 40% fonneaz
structuri elicoidale; ribonucleaza, la fel protein globular, conine foarte puine a -
segmente, majoritatea se gsesc n -structuri, dar ca i lizozima conine 4 resturi de
cistein ce determin duritatea structurii (fig.
1.8, 1.9).
n proteinele ce funcioneaz n exteriorul
celulei astfel de legturi intracatenare disul
fidice sunt permanente. Fiecare protein se
caracterizeaz prin structur tridimensional
proprie doar ei, special adaptat pentru
ndeplinirea anumitei funcii biologice.
Proteinele acestei clase sunt mult mai
complexe dup conformaie dect cele
fibrilare, ndeplinesc funcii variate i
activitatea lor are un caracter dinamic. n
majoritatea lor proteinele sunt globulare.
Care sunt datele experimentale ce
confirm c anume conformaia molecu
lei e necesar pentru activitatea biologic
Figura 1.8. Scheletul moleculei de citocrom - n a p r o te in e i?
centru hemogrupa fixat covalent , mai intensiv ' _
colorat sunt aminoacizii invariani 1 S-a constatat c
sub aciunea ureei, la
nclzire, structura scheletului covalent
rrnne neschimbat, dar lanul polipeptidic
deine o conformaie neregulat i i pierde activitatea biologic.
2. La compararea lungumii lanului i diametrului spiralei cu mrimile reale ale proteinei
se constat c un lan polipeptidic din 584 aminoacizi are n -structur o lungime de
200 nm i grosime de 0,5 nm, n a-spiral - 90 nm lungime i grosimea de 1,1 nm,
globula acestui lan se cuprinde n lungimea de 13 nm i diametrul de 3 nm. Aadar,
lanul polipeptidic al albuminei este foarte bine mpachetat, n caz contrar nu ar ndeplini
funcia necesar.
Modul de mpachetare a catenelorpoli
peptidice n proteinele globulare ntr-o glo
bul steric e structura teriar. La forma
rea acestei structuri se evideniaz centrele
active, locusurile de fixare i identificare a li-
ganzilor ce detennin funcia proteinelor.
Concluzie: Dac structura secundar e
determinat de interaciunea resturilor de
aminoacizi n segmentele apropiate, apoi
cea teriar - de interaciunea lor din
segmentele deprtate. Un rol deosebit l are
i interaciunea R -grupelor catenelor
nvecinate.
O anumit importan structural n lanurile
F ig u ra 1.9. M odetui spaial al moleculei de polipeptidice au aminoacizii invariani ce
h zo zim a - m ai in te n s colorat su b stra tu l r r . '
polizaharidic. Lizozima e o m olecul fo a rte OCUp O p O Z lie S ta n d a r d 1 la n , i n d i f e r e n t d e
compact specia organismului respectiv (sursa proteinei).
Acetia se grupeaz la unghi, n locul fixrii grupelor prostetice.
La o rcire lent a soluiei proteice sau la evoluarea pi I spre normal, proteina i
restabilete funcia biologic (renaturaie), fapt ce confirm c infonnaia necesar pentru
mpachetare e determinat de structura primar. Proteina se mpacheteaz nu chiar simplu,
de exemplu: ribonucleaza n care se formeaz 4 puni disulfidice n aceleai poziii ca i n
cea nativ, teoretic, din 8 resturi de aminoacizi se pot forma 105 variante, dar se for
meaz numai una. Structura teriar nu-i rigid absolut, se caracterizeaz printr-un grad
de fluctuaie local i o anumit elasticitate. De exemplu, moleculele enzimei la legarea
substratului i schimb conformaia.
Proteinele se fonneaz din aminoacizi, cu o vitez mare. Proteina compus din 100
aminoacizi n 5 sec. i capt conformaia final. Dar dac s-ar cuta toate variantele, ar
fi nevoie de 105 ani. Procesul de asamblare are loc momentan, cu un grad mare de
cooperativitate. Aceasta nseamn c dac s-a mpachetat un segment mic, apoi
instantaneu crete probabilitatea aranjrii celorlalte segmente.
Dup uncie scheme structurale la nivelul organizrii teriare a moleculelor proteice, n
planul de asamblare e inclus un concept nou, care faciliteaz perceperea perfect a
raporturilor dintre structur i funcie, a organizrii pe domenii structurale. Prin cuvntul
domeniu se subneleg regiunile compacte cu organizarea teriar relativ rigid, separate
ntre ele de ctre segmentele mai puin organizate, care permit micarea unui domeniu
fa de altul (fig. 1 . 1 0 ).
Fiecare domeniu structural e responsabil de o anumit funcie a proteinei. Gradul de
flexibilitate a domeniilor variaz de la micri mai ample la altele mai restrnse, n
dependen de natura segmentelor interdomcniale. Domeniile se asociaz cu funciile de
legtur. Centrele active ale enzimelor sunt situate ntre domenii care i schimb poziia
unul fa de altul n procesul funcionrii biologice a proteinei. O alt proprietate foarte
important: domeniile cu structuri i proprieti similare suntprezente n diferite proteine,
exercitnd roluri asemntoare.
Multe proteine sunt alctuite din mai
multe lanuri polipeptidice i se numesc
proteine oligomere (hemoglobina e
constituit din patru lanuri i patru grupe
prostetice cu atomii si deFe) (fig.
1.11).
Fiecare lan (2a i 2) are structura
sa teriar, ocup poziia de tetraedru
unul fa de altul, formnd n ansamblu
s tr u c t u r a c u a te r n a r . Catena a con
tacteaz cu , interaciunea dintre ele (a-
a i -) fiind minim. Hemoglobina
animalelor are aproape aceeai structu
r te r t in r c i 1 n v n H m u l t n F igu ra 1.10. Imaginea schematic a unei
' 1 proteine compuse din 2 domenii. Centrul de fixare a
comun CUStructura mioglobinei, aceleai ligandului se afl ntre domenii
funcii. Cu certitudine, n cadrul
succesiunii aminoacizilor, proteinele omoloage conin un rnd de resturi de aminoacizi
invariani, 9 aminoacizi ocup aceeai poziie; e aceeai histidin distal i proximal, e la
fel de reprezentativ i interiorul nepolar al structurii.
Modul de asociere n spaiu a protomerilor - moleculelor oligomere - se atest
ca s tr u c tu r c u a te r n a r . La o asemenea protein funcia specific se manifest
numai Ia nivelul structurii cuaternare, protomerii separai sunt neactivi. Asamblarea
subunitilor se realizeaz prin fore slabe nccovalente i asocierea devine stabil dac
suprafeele de contact (ale domeniilor) sunt complementare, iar un numr ct mai mare
de atomi se apropie de nivelul razelor
Van der Waals. Complementaritatea
asigur un grad nalt de exactitate i de
specificitate a structurii cuaternare.
Interaciunea prin suprafeele de con
tact reprezint fenomenul de coopera
re, adic primele interaciuni favorizeaz
form area c e lo rlalte. S tru ctu rile
cuaternare permit funcionarea unor
mecanisme fine de reglare a activitii
proteinelor (forma T - tensionat i R -
relaxat). Perturbaia are loc la nivelul
unui protomer (Fe iese la 0 , 6 A din
planul hemului, la oxidare intr un plan -
histidin proximal avnd 15 contacte,
modific conformaia oligomerului, re- F ig u r a 1.11. M od elu l hem oglobinei
. .. .
structureaz spirala i unghiurile ei) (fig. - catene sunt colorate mai intensiv; a-catene sunt
] j2) celelalte; h - hemul n molecul (dup M. Perutz)
F igura 1.12. Modificrile conformafionale induse de deplasarea Fe la oxigenare. Structura
oxigenat e colorat mai intensiv dect cea dezoxigenat
Majoritatea proteinelor oligomere studiate, de regul, au un numr pereche de pro-

tomeri, situai bilateral simetric. Moleculele proteice nu sunt rigide, au o anumit flexibi
litate i manifestri diferite: de la micri simple njurul legturilor ordinare pn la fluctua
ii respiratorii. La fonnarea compuilor flexibilitatea scade. Vibraiile moleculare joac
un rol deosebit n procesul de depistare i stabilizare a strii tranzitorii.
FOLDINGUL. PROBLEM A MPACHETRII SPECIFICE

A LANULUI POLIPEPTIDIC
Au trecut mai mult de 40 de ani de la descoperirea tiinific a lui C. Anfmsen, dar i
acum sute de savani studiaz problema mpachetrii specifice a lanului polipeptidic.
S-a dovedit c a prezice conformaia proteinei n baza succesiunii de aminoacizi (innd
cont de proprietile lor, de solubilitatea n ap) nu e att de simplu. Problema are i
aspect practic: paralel cu dezvoltarea biotehnologiei i n baza reconstruirii genelor se
poate asigura sinteza noilor proteine.
S-a stabilit c la mpachetarea unor proteine imense iau parte i proteinele mult mai
mici, numite ciaperonine, ce se ntlnesc n bacterii, citoplasma celulelor eucariote, matrixul
mitocondrial. Sunt compuse din 2 elemente ce aparin diferitelor familii proteice - Hsp
60 (Gro EL) i Hsp 10 (Gro ES), mai substanial sunt studiate ciaperoninele la E.coli.
Gro EL e constituit din 14 subuniti identice, protomeri cu masa molecular 57 kDa
(548 resturi de aminoacizi), fiecare aranjai simetric cte 7. Analiza roentgenostruclural
a descifrat structura spaial a complexului. Fiecare protomer e compus din 3 domenii -
eucatorial, apical i intermediar.
Gro ES (co-ciaperoninele) sunt compuse din 7 protomeri identici aranjai simetric,
masa molecular a protomerului e de 10 kDa i conine 97 resturi aminoacide. Structura
spaial a protomerului prezint un nucleu de -structur pliant nconjurat de mici
structuri de a-elice (fig. 1.13).
Fiecare protomer n ciaperonine poate fixa cte o molecul de ATP. Au fost
determinate locusurile funcionale, unde are loc fixarea ATP, a polipeptidului substrat i
a Gro ES n Gro EL. Sunt constatate particularitile ciclurilor reactibile n ciaperonine la
formarea complexului activ funcional i fixarea substratului polipeptidic. Sunt propuse
diferite modele ale complexului, posibilele mecanisme de funcionare i asamblare a
proteinelor prin ciaperonine.
Complexul ciaperoninelor posed activitatea ATP-azic, se presupune c complexul
funcional activ e obligat s asigure condiiile cinetice primare pentru asamblarea proteinei
n afara ribozomului, n poriuni mai ndeprtate n citozolul celulei. S-a constatat c
fonnarca complexului activ necesit ionii de K+. Sunt date experimentale ce confirm c
in vivo asamblarea lanului polipeptidic n proteina activ are loc cotranslaional, adic
n acelai timp cu sinteza lanului n ribozom.
Cum are loc procesul de autompachetare a proteinelor?
Lanurile polipeptidice desfurate sau proaspt sintetizate sunt numite ghemuri
dezordonate. Studiul asupra proteinei denaturate a stabilit c n interiorul ei apar regiuni
rsucite, asociate ntr-un mod anume i diferite de ntreaga molecul. Aceste substructuri
(subdomenii) sau numai unele dintre ele sunt nestabilc, fluctuante, servind n calitate de
detonant (fitil), n jurul crora se fonneaz regiuni stabile structurale.
Despre starea denaturat a proteinei se tie mult mai mult dect despre cea desf
urat. Una din primele legiti ale mpachetrii const n faptul c contactul dintre
moleculele de H ,0 i aminoacizii hidrofobi trebuie, pe ct e posibil, s fie minim. A
doua legitate: globula proteic urmeaz s fie mpachetat compact, ns spaiul ci
trebuie s fie umplut astfel net atomii nvecinai s nu se intercaleze.
La momentul actual se disting dou concepii'.
Prima, mai puin pronunat, este cea care presupune c lanul polipeptidic
colapseaz rapid pn la dimensiunile finale ale globulei, cu ieirea aminoacizilor hidrofobi
din contactul cu apa. n starea dat molecula se reorganizeaz rapid, cptnd proprietile
ei de structur secundar i teriar (datele experimentale confirm aceast teorie).
A doua concepie, mai reuit, stabilete c lanul polipeptidic desfurat foarte
rapid formeaz segmente constante, limitate de structura secundar. Ele interacio-
ncaz i temporar se realimenteaz reciproc. Segmentele stabilizate, microdomeniile
respective transform conformaia moleculei proteice n direcia organizrii supreme
prin asociere cu alte segmente, favoriznd contactele dintre segmentele ndeprtate,
n stadiile tranzitorii se fonneaz intermediate, strucmri ce pot fi determinate foarte
greu, dat fiind existena lor de scurt durat.
Caracteristica structurilor vizate:
a) au dimensiuni mai mari dect molccula nativ i posed elemente fonnate de structura
secundar;
P roteina nou- Foldingul proteinei este com plet sau parial finalizat;
sinlelr/at echilibrul procesului este deplasat spre form area
.
P ro te in a nou-
conform aiei native finale
s in te tiz a t sc GroEL
P ro te in a n
ataeaz la GroF.L n co nform atic final
sitc -u l n cb lo c a t de
GroES
oldingul proteinei are loc n

interiorul com plexului
ATP e s te fix at de
Proteinei
s u b u n i t i l e ncconformat
com plet sunt legat
heptam crului G roEL
d in n o u ra p id
G roE L
H id r o liz a A T P-uhsi
d e te rm in e lib erare a a
14 ADP-uri i GroES
A GroES
(a) 7 ATP-uri i GroES

sunt ataate la GroEL
n site-ul localizrii
p ro te in e i
F igura 1.13. C iaperoninele n foldingu l proteinelor:

(a) mecanismul de aciune a ciaperoninelor E.coli GroEl (aparine familiei proteinelor IIsp60) i
GroES. Fiecare complex GroEL posed 2 site-uri formate din 2 inele heptamerice (masa
molecular egal cu 57 000 Da). GroES este, de asemenea, heptamer (masa molecular egal cu 10
000 Da) i poate bloca unul din site-urilc GroEL.
(b) suprafaa i seciunea complexului GroEL/GroES. n imaginea seciunii sc vede spaiul intern al
complexului, n interiorul cruia se amplaseaz alte proteine.
b) savanii au desfurat proteina nativ i apoi au realizat mpachetarea, oprind-o la
diferite etape; au identificat intermediatele dup formarea legturii S-S, ce apreau n
procesul de mpachetare i apoi dispreau pe neobservate n molecula nativ.
S-a demonstrat c unele fragmente formeaz asociaii temporare, altele stabile,
i se pstreaz n globula nativ, avnd un rol fundamental la iniierea procesului dc
mpachetare a lanului. Intermediatele au fost studiate prin metoda izotopilor.
Hidrogenul din grupele peptidice a fost nlocuit cu deiteriu prin incubaia lanului
polipeptidic n ap grea. Apa grea substituit apoi cu cea obinuit favoriza includerea
hidrogenului n legturile neformate, i n continuare, procesul avansa pn la finisarea
deplin. Identificarea regiunilor cu deuteriu a developat fragmentele moleculelor ce
se mpachetau n primul rnd. Aa s-a stabilit consecutivitatea fomirii intermediatelor.
S-a confirmat c n citocromul are loc asocierea primar a dou spirale n capetele
opuse ale lanului polipeptidic. n ribonucleaz, la nceput, se formeaz -structura
situat n centrul moleculei.
mpachetarea poate fi determinat i prin metode matematice, cu utilizarea funciei
energiei poteniale. n computer se introduc valorile n cifre care caracterizeaz forele
de atracie ntre perechile de atomi ai moleculei din lanurile polipeptidice. Apoi se
iau coordonatele atomilor la care energia total a moleculei se micoreaz pn la
minim (n eventualitatea c structurile finale au energie minim). Studiile recente
elucideaz posibilitatea precizrii structurii teriare dup succesiunea aminoacizilor.
O serie de investigaii confirm faptul c pentru mpachetare sunt necesari factori
spaiali i interaciune hidrofob. Rolul diferitelor fore variaz de la o protein la
alta. E posibil c forele electrostatice joac un anumit rol la stabilizarea conformaiei
finale, dar nu i la formarea ei.
Rezultanta final a foldingului este conformerul nativ ce posed activitate biologic.
Un domeniu cu o structur stabil secundar care se fonneaz primar, comparativ cu
cealalt parte a moleculei, e numit foldon.
Asamblarea proteinelor se consider un proces fizic de o valoare biologic deosebit.
Modelarea computerizat a procesului confinn c asamblarea demareaz de la lanul
desfaurat care fluctueaz mult timp far formarea unor contacte native eseniale. Apoi
lanul atinge ntinpltor starea n care persist un ansamblu de contacte native. Dup
aceast situaie, procesul de asamblare decurge foarte rapid pn la starea final - fonnarca
structurii native.
Se consider c un pas-limit n asamblarea acestor catene este formarea primar a
unui complex de contacte native (nivelul asamblrii), care, fulgertor, influeneaz toat
molecula. Acest nucleu nu e identic cu strile intermediare. S-a consolidat ideea c:
a) asamblarea ncepe cu formarea unui complex determinat de contacte native;
b) resturile ce se ihelud n acest nucleu sunt aranjate la diferite distane n lan.
Studiile au stabilit c nucleul asamblrii este constituit din resturi nefuncionale
mai conservative - proteinele legate evolutiv posed 2 complexe de resturi
conservative: unul pentru centrul funcional i altul pentru nucleul de asamblare.
Asamblarea confonn conotaici totul sau nimic corespunde mecanismului nucleaiei
i creterii i e tipic pentru proteinele foarte mici. Asamblarea proteinelor majore trece
prin stri intermediare. Una dintre ele este i globula n fuziune ce sc caracterizeaz prin
stare intermediar compact cu structur nativ asemntoare, dar fr structur teriar
rigid, prin lipsa de cooperativitate la temperatura de topire i micrile intramoleculare
rapide. O stare asemntoare e proprie i intermediatelor.
S-a demonstrat c n globula n fuziune, molecula proteic pstreaz unele particulariti
ale topologiei native (aranjarea reciproc a a i structuri), aranjarea rigid a catenelor
proteice. Aceasta clasific globula ca intermediat ntre catena desfaurat i starea
nativ, stare termodinamic ntre cele dou. Se presupune c molecula proteic poate
exista n trei stri: nativ, globula n fuziune i cea desfaurat.
S-a stabilit c globulele n fuziune, genetic, sunt un intermediat universal pentru
asamblarea proteinelor.
Aadar, prin f o l d i n g se subnelege aranjarea spaial corect de novo a catenei
proteice, iar r e f o l d i n g u l presupune aranjarea spaial dup denaturare.
Studiile contemporane confirm c proteinele auxiliare pot fi mprite n 2 grupe:
ciaperonine moleculare i enzime. Prima grup constituie o clas funcional de
proteine neomogene, care favorizeaz asamblarea corect necovalent a altor structuri
polipeptidice in vivo, nefiind componente ale acestor structuri organizate, ce i ndeplinesc
funciile biologice. Sunt evaluate multe proteine cu funcii asemntoare - proteinele ocului
termic formeaz o grup mare de ciaperonine.
Enzimele denumitefoldaze catalizeaz modificrile covalente, strict necesare la
formarea conformaiilor native funcionale ale diferitelor proteine. Deocamdat sunt
identificate 2 enzime ca foldaze -proteindisulfid izomeraza (PDI) ce catalizeaz formarea
legturilor native disulfidice ipeptidil-prolil-cis-trans-izomeraza (PPI) ce catalizeaz
izomerizarea unor legturi stabile trans-peptidil-prolil n cis-conformaie, necesare pentru
asamblarea funcional a proteinelor. Ambele sunt reacii covalente, rcacii-limite n etapele
foldingului proteinei corespunztoare. Procesul de Folding i formarea disulfidelor native
sunt procese strns legate ntre ele i decurg simultan.
S-a constatat c PDI prezint nu numai o izomeraz ce catalizeaz formarea legturii
disulfidice n peptidele sintetizate, dar i o ciaperonin molecular, ce particip la procesul
foldingului catenelor. Activitatea ciaperoninic nu e dependent de cea izomerazic.
Funcionnd ca foldaz n procesul de folding, este necesar att activitatea izomerazic,
ct i cea ciaperoninic.
PEPTIDELE ACTIVE
Endotelinele reprezint o familie de peptide noi cu o activitate biologic deosebit.
In 1988, M. Yanagisawa i alti savani au cptat din cultura endoteliului vascular un
peptid cu un efect biologic foarte pronunat, numit endotelin. Timp de zece ani s-a
efectuat un studiu amplu referitor la peptida respectiv, receptorii ci, enzima - endotelin
convertaza i inhibitorii ei.
Endotelinele sunt cei mai efectivi factori vasoactivi. Sunt implicate n patogenia
unor forme de maladii hipertonice, ischemii renale, hemoragii subarahnoidale. Este
determinat rolul lor n infarctul miocardic, aritmiile cardiace.
De rind cu endotelin-1 (ET-1), un peptid biciclic din 21 aminoacizi, s-au depistat i
alte 2 izoforme - ET-2 i ET-3, codificate probabil de gene diferite. Aceste peptide sunt
marea speran a savanilor pe viitor! Toate trei endoteline n mod diferit sunt expresate
n esuturile vasculare. Primele dou au o activitate major de vasoconstrictori.
Sunt donate i secvenate 2 tipuri de receptori (ET-A i ET-B), care s-au depistat att
n endoteliul vaselor, ct i n rinichi, plmni, suprarenale, esutul nervos. Constricia
vaselor e mediat de ET-A receptori, structuri fixatoare de G-protein; pe cnd inducia
receptorilor ET-B conduce att la constricia, ct i la dilatarea vaselor. Funcia acestor
receptori e cuplat cu activarea fosfolipazei i A,, cu majorarea nivelului de Ca2+
intracelular, fonnarea intensiv a prostaciclinei i/sau tromboxanului Ar ET-1 i ET-3 n
esutul nervos intensific sinteza fosfoinozitfosfatului.
ET-1 apare ca rezultat al proteolizei limitate a endotelinei majore - (B = ET) n trei
etape:
a) hidroliza protcolitic a preproendotelinei-1 la Arg(92) n endotelina-l-Lys-
Arg (40) sub aciunea convcrtazei (E,);
b) hidroliza captului -terminal = ET-1-Lys-Arg(40) la = -38) de o
carboxipeptidaz (EJ;
c) scindarea premergtorului B-ET-1 la legtura Trp(21) = Val (22) cu formarea
endotelinei ET-1, etap determinat de convertaza respectiv (E3).
Schematic:
Pre-Pro-ET-1 B=ET-1 -Lys-Arg(40) B-ET-1 (38)
, Endotelin-1
E 3 (enzima endotelin convertaza - ECE-1) este o metalproteinaz din grupa celor
fixate n membran, care particip n procesingul postsccrctorial al hormonilor peptidici
i neuropeptidelor. Are unele proprieti asemntoare cu familia Z\r - metaloproteazelor.
n centrul activ este restul Tyr i regiunea fixatoare de Zn2+.
E depistat enzima ECE (endothelin-converting enzyme) n majoritatea esuturilor.
Activitatea ei e determinat att prin metode imunochimice, ct i prin testare biologic.
Ea prezint un dimer cu subunitile de 120-130 kDa fixate prin puni disulfidice. Splaisingul
alternativ a demonstrat variante ale ECE c grupa N terminal e diferit, cu o specificitate
selectiv la substraturi. ECE-1arc o specificitate mare la B-ET-1 i mult mai puin efectiv
la ET-2 i ET-3. Aceste date presupun prezena enzimei n mai multe izoforme ale ECE-
1 ( 1 a i l).
ECE-2, o alt endotelin convertaz, n 59% e omoloag cu ECE-1 - o expresie
major e depistat n esuturile creierului. Ambele enzime au structuri de baz comune:
sunt proteine integrale membranare de tip II, ce conin o secven cu Zn2 caracteristic;
au 1 0 site-uri glicozil, cu o localizare nu chiar identic, sunt inhibate de aceiai inhibitori
cu diferit sensibilitate.
ECE-2 hidrolizeaz B-ET-1 mai efectiv dect B-ET-2 i B-ET-3. Dar cea mai
esenial deosebire e pH optim pentru forma 2, care este egal cu 5,5, i enzima e
neactiv la valori neutre, optime pentru ECE-1. Prezena, de asemenea, a ECE-2 n
esuturile neendoteliale demonstreaz c acest ferment funcioneaz ca enzim extra- i
intracelular, responsabil de hidroliza intravezicular a precursorului ET-1, sintetizat n
aparatul Golgi. Cele prezentate presupun 2 tipuri de sintez a endotelinelor: extra i
intracelular.
Sunt depistate i enzime ce degradeaz fiziologic endotelinele mature-
metaloendopeptidaza cu pH optim de 5,5; endotelinaza (serin proteinaza).
Endotelin i, corespunztor, ECE regleaz tonusul vaselor i, n general,
cardiohemodinamica. Peptidul particip la patogenia hipertensiei eseniale - inhibitorii
ECE previn dezvoltarea hipertensiei pulmonare n experiment. Efectele sunt
dependente de funcionarea sistemului renin-angiotenzin.
S-au depistat unele efecte neurologice ale ET-1 i ET-3, modificri n reaciile de
comportare, efect central cardiorespirator.
n prezent se presupune c endotelinele, de rnd cu ali reglatori ca histamina,
bradikinina, angiotensina II, particip la relisingul difereniat al adrenalinei i/sau
noradrenalinei din suprarenale n stres (situaii extremale). Esenial e rolul lor n
reglarea strii funcionale a endoteliului - stratului intim arterial i venos din diferitele vase
ale organismului. Dereglrile metabolismului nonnal al endotelinelor, expresia intensiv a
precursorilor i receptorilor respectivi, activitatea major a ECE devin factori de dezvoltare
a proceselor patologice din organism, motiv care impune investigarea unor metode de
control i de reglare a activitii lor n organism - inhibitorii metaloproteazelor. Inhibitor
clasic se consider fosfoamidonul. Mult mai activ este analogul tiorfanului. n baza
compuilor acidului fosfonic s-au sintetizat inhibitori ai ECE, foarte puternici i selectivi.
Sunt utilizai i analogi ai ET-1, care blocheaz activitatea ECE att in vitro, ct i in vivo.
n ultimii ani se confirm c unele peptide cu o structurfoarte simpl, predominant
din glicin iprolin (PG, GP, PGP, GPGG), posed o activitate biologic deosebit
referitor la coagularea sngelui, aciunea protectoare a mucoasei, nociceptie. La aceste
peptide se altur i PGc (ciclic) depistat n creier. O particularitate deosebit a acestor
fragmente, ce conin prolina terminal, este stabilitatea major n fluidele organismului
fa de altele (de mii de ori).
Aceste peptide au ca surs i alimentele, cci e stabilit c tripeptidele ce conin
prolin sunt absorbite de celulele endoteliale intestinale nescindate. Un precursor al
lor poate fi i enterostatina (APGPR), precum i colagenul i elastina.
Compartimentalizarea strict a proceselor permite realizarea unor funcii diametral
opuse, de exemplu, acidul glutamic, glicina, care ndeplinesc att rol plastic, ct i energetic
i servesc drept neurotransmitori. Asemenea compartimentalizare e real i pentru
precursorii peptidelor reglatoare (PR). Determinant poate fi esutul, organul, precum i
repartiia local a proteazelor.
S-a stabilit c aceste peptide blocheaz agrcgaia trombocitelor, formarea
trombinei i a fibrinci; sunt inhibitori ai fibrinazei (XIIIa). Posibil c aceste pcptide
simple ce conin prolin (fragmente ale colagenului i elastinei) sunt factori endogeni
cu aciunc de antitromboz i trombolitic.
Prolincomponentele peptidice, POP i GPGG, amplific rezistena mucoasei
gastrice la aciunea factorilor nocivi, devenind protectori antiulceroi. Este inhibat
endo- i exosecrcia pancreasului, motorica stomacului, utilizarea alimentelor (anorexia)
de enterostatin (pentapeptida APGPR).
Peptida GPc are efect stimulator n consolidarea memoriei, posibil se fonneaz
din colagen sau elastin.
Peptidele scurte, ce conin prolin, sunt activatori ai hemotaxisei, favorizeaz
formarea superoxidului, neutralizeaz analgezia provocat de morfin. Comparnd structura
peptidelor respective, se presupune dependena efectului dc prezena prolinei la captul
N-sau C-tenninal al peptidei.
Carnozina - dipeptida -alanil-L-histidina, extras n anul 1900 din muchiul

scheletal. n prezena acestei dipeptide, muchiul izolat de broasc se contract ca i la
acumularea cantitilor mari de lactat; pi a camozinei este de 6,9, iar a anserinei - 7,1
- ultima este derivatul ei metilat. Accti compui sunt ideal adaptai pentru rolul de tampon
n regiunea fiziologic a pH - au o cot pn la 40%.
I I CH2 CH NH C CH 2 C H ; NH :
N ^ N H COOH Camo*ina
Capacitatea tampon protonic mrimea - se msoar n slake i se determin
dup numrul de mkmol NaOI I sau HC1, necesari pentru a modifica pH a 1 g esut cu o
unitate - de la 6 la 7 sau 6,5 - 7,5. Se consider c i peptidele nrudite iau parte la
reglarea activitii enzimatice, la diminuarea reaciilor oxidante.
Datele experimentale confinn c carnozina prezint un antioxidant multifuncional,
capabil s inactiveze radicalii liberi, s formeze compui chelai cu metalele prooxidante
(Cu) i posed capacitatea de a fonna conjugate cu produse aldehidice toxice de oxidarc
a lipidelor. n prezena camozinei, limita Heiflikse extinde - celula din cultur mbtrnete
mult mai lent. Posibil, e i rezultatul unic al efectului diferit al camozinei ca: izvor al histidinei,
imunostimulator i neurotransmiter etc.
Glicozilarea nefennentativ a proteinelor este un proces dependent de vrst, activ n
diabet. Formarea legturilor transversale ntre polipeptidele modificate i proteinele
normale este cauza complicaiilor n diabet. S-a confirmat c carnozina este un agent
antiglical natural, ce se conine preponderent n muchii albi cu o glicoliz intensiv.
Carnozina indus de aldehida malonic inhib formarea n proteine a legturilor
transversale, precum i fonnarca gruprilor carbonilice n proteine, specifice la mbtrnirea
proteinelor i celulelor. Carnozina e capabil s reacioneze cu metil-glioxalul i, indus
de el, prentmpin modificrile proteice. Carnozina protejeaz celulele de aciunea toxic
a aldehidelor i cetonelor.
Proteinele glicate sunt imunogene, iau parte la generare n procesul de mbtrnirc a
autoantigenelor. E stabilit c carnozina glicat nu e mutagen, spre deosebire de
aminoacizi. Ea inhib reacia de glicare a lizinei, moduleaz toxicitatea produsului pentru
cultura celulelor.
mbtrnirea proteinelor este nsoit de acumularea polipeptidelor aderante,
ndeosebi ale celor ce conin grupa carbonil. Ultimele apar ca rezultat al oxidrii radicalilor
aminoacidici de FAO, precum i la interaciunea produselor oxidrii lipidelor- aldehida
malonic i hidroxinonenalii - cu lizina i n al treilea rnd, n procesul de glicare n care
aldehidele toxice induc fonnarea gruprilor carbonil n proteine.
S-a constatat c carnozina nu doar se fixeaz de gruparea carbonil din proteine, dar
i moduleaz activitatea lor, inhibnd formarea legturilor transversale n proteine, ca
rezultat al generrii complexului protein-carbonil-camozin aduct.
Deocamdat nu e clar unde anume are loc fonnarca acestui complex: n interiorul
celulei sau n afara ei?
Care este soarta proteinelor camozilate?
Posibil c reprezint o fonn a lipofuscinei - pigmentul mbtrnirii. Lipofuscina
are o natur foarte heterogen i efectele ei sunt controversate. E enorm de mult n
esuturile bogate n camozin- nervos i muchi, creier. Posibil c forma lipofuscinei fr
carnozina e capabil s reacioneze cu alte macromolecule celulare.
O alt variant ar fi proteoliza - scindarea de un sistem deproteozome. Carnozina
mascheaz gruprile carbonil, care sunt rezistente i chiar pot inhiba funcia proteozomelor.
S-a constatat c n prezena camozinei se activeaz metabolizarea unor proteine greu
metabolizante.
Grupele carbonil se fonneaz i la oxidarea fosfolipidelor (etanolamina) meinbranare.
La depurinizare i depirimidinizare a DNA, cu scindarea legturilor glicozidice, se
formeaz o molecul de D-oxiriboz cu proprieti toxice aldehidice. Carnozina fixeaz,
posibil, i aceste fonne toxice, inhibnd formarea legturilor transversale protein - DNA,
cu participarea aldehidelor, i micoreaz numrul de aderaii cromozomiale n cultura
celular. Carnozina favorizeaz procesele de detoxifiere. O dat cu mbtrnirea,
concentraia camozinei se micoreaz: nivelul coreleaz cu durata vieii. Indivizii care au
o statur nalt sunt asigurai cu longevitate mai mare.
Biosinteza camozinei: se sintetizeaz din -alanin i histidin, rea CpCcatalizat
de carnozin sintaza. -alanin aminoacid neproteinogen se produce n ficat ca
mctabolit final n degradarea uracilului i a timinei. Celulele capabile de sintez posed i
un sistem benefic de transport al acestui aminoacid. Cu ct celulele sunt mai difereniate,
absorbia -ala este mai efectiv. n oligodendrocite viteza maxim de sintez corespundc
capacitii majore de expresie a proteinei - mielina - marker al diferenierii
oligodendrocitelor n creier.
Carnozina e legat de cclulele neurogliei, care pot absorbi rapid carnozina marcat
pi int-un mecanism activ de transport al dipeptizilor. E prezent carnozina n neuronii
senzitivi, mpreun cu acidul glutamic, ce marcheaz rolul de neuromediatorn acest
proces. n secreie se consider c sunt prezente mai multe mecanisme (depolarizare
membranar, tumefierea astrocitelor cauzate de ionii K~, inversarea mecanismelor de
transport). Se confirm mecanismul vezicular, exocitoza determinat de Ca2+.
Carnozina este un inliibitor selectiv al NO-dependent-activare a guanilatciclazei, ce o
poate utiliza ca remediu efectiv la tratarea sepsisului, cancerului, astmului, migrenei, toate
fiind legate de activarea sistemului de semnalizare intracelular: NO-Gc solubil- GMPc.
Hidroliza camozinei e cauzat de 2 izoenzime: 1) camozinaza tisular (citozolic) i
2) cea seric (KF.3.4.13.3 i KF3.4.13.20). Forma tisular e zincodependent i poate
fi stabilizat de alte metale bivalente (Cd >Mn Z n C o ).
Carnozina mrete de 2-3 ori longevitatea celulelor cultivate in vitro. E stabilit
efectul de ntinerire a celulelor senile. Carnozina distruge celulele transformate sau
cancerigene. n amestec cu piruvatul (acidul oxaloacetatul i a-cetoglutaratul), efectul se
micoreaz. Citralul, izocitratul, fumaratul, succinatul i malatul nu influeneaz asupra
efectului citotoxic al camozinei.
Efectul camozinei poate consta n:
a) diminuarea gradului sau exprimarea efectelor care conduc la includerea
mecanismelor ce blocheaz ciclul celular. De exemplu: poate favoriza micorarea lungimii
fragmentelor pierdute n DNA-telomeric sau diminueaz metilarea DNA;
b) micorarea efectelor fiziologice determinate de modificrile n RNA, ce ar favoriza
ndeprtarea momentului de oprire tenninal a diviziunii celulelor. Un astfel de efect s-ar
manifesta n ntinerirea fenotipului celular, care se observ la cultivarea cclulclor in vitro
cu camozin. Carnozina, posibil, inhib glicoliza, de altfel i fonnarea de ATP n celulele
cancerigene. Acest efect e reversibil la adaosul piruvatul ui.
CLASIFICAREA PROTEINELOR
Savanii M. Levitt i C. Chothia (1970), examinnd structura proteinelor, le-au divizat
n 5 clase (fiecare clas difer dup prezena i poziia -spiralei i -structurii
(fig. 1.14, a-h)):
I. Proteine ce conin 100% a-elice, formnd o structur globular.
II. Proteine ce conin -structur i, de regul, sunt alctuite din dou straturi
antiparalele sau situate n form de butoiae.
III. Proteine ce includ att a, ct i componente segregate n structura teriar.
IV. Proteine ce nglobeaz a / segmente alternate n structura secundar, formnd
structura teriar cu centrul i ncercuite de a-spiral.
V. Proteine neorganizate cu structur secundar evideniat nesemnificativ. Plie
rea lanului este determinat n exclusivitate de interaciunea radicalilor (coit pro
teic) - punilor disulfidice. Acestea sunt proteinele mici.
Clasificarea sus-numit a fost desvrit de J.S. Richardson (1981).
Aadar, organizarea structural este determinat de modul aranjrii reciproce a
structurilor secundare. De aceea, un imperativ primordial pentru prognosticarea structurii
proteinelor o au principiile de mpachetare a elementelor constituente. Se tie c un rol
deosebit n accst context l joac repartiia resturilor hidrofobe n a-elice i -
stmetur.
Proteinele se mai clasific (W. Bennet i R. Huber, 1984) i dup dinamica dome
niilor structurale:
I. Proteine cu domenii rigide, imobile, dure, unite prin segmente mari, flexibile, ce le
permit acestora fluctuaii n diapazon larg reciproc.
II. Proteine cu domenii rigide, dure, unite prin poriuni mici, denumite Balama, cu o
circulaie mai redus.
. Proteine n care domeniile au roluri diverse - folosesc flexibilitatea pentru asigurarea
unor funcii (de legare); interacioneaz cu grupri determinate de antigen.
Clasificarea proteinelor e o problem dificil, deoarece structura multor protei
ne nu este studiat complet. O clasificare a proteinelor dup funcie e practic imposibil.
Exist proteine cu structuri apropiate, dar care ndeplinesc funcii diferite. Posibiliti
limitate de clasificare prezint i proprietile fizico-chimice.
Dup atitudinea fa de hidroliz se disting proteine simple i proteine conjugate
(proteide). Proteinele simple la hidroliz elimin numai aminoacizi, iar cele conjugate mai
conin i un component neproteic i, deci, deosebim: fosfoproteide, cromoproteide,
nucleoproteide, glico-, lipo-, metaloproteide.
Holoproteinele (proteine simple). Protaminele au o mas molecular mic i un
caracter alcalin, determinat de prezena argininei i lizinei - 60-80%, fiindu-le caracteristic
punctul izoelectric ce se afl n mediul alcalin i la fierbere se coaguleaz la adaosul bazei
n soluie. Proteinele sunt solubile n ap, se dizolv i n soluie de NH4, soluii diluate de
acizi i baze. Aceste proteine se gsesc n cantiti mari n celulele gemiinale naturale ale
petilor: salmina (lapii somnului), scumbrina (scrumbia), clupeina (heringul), n
componena lor triptofanul lipsete. Aminoacizii ce conin sulf n majoritatea lor nu includ,
de altfel ca i tirozina, i fenilalanina.
Histonele din componena nucleului celular iau parte la reglarea metabolic a activitii
genomului. Aminoacizi bazici se conin pn la 30%. Masa lor molecular e mai mare
dect la protamine, conin puin sau deloc triptofan. Sunt solubile n aceiai solveni i
precipitate de soluia NH4, se coaguleaz la nclzire.
Albuminele iglobulinele prezint masa principal a proteinelor sanguine, a lactate
lor, masei musculare, a proteinelor oului. Raportul albumine-globuline n diferite esuturi
rmne constant i este egal cu 1,5-2,3. n patologie acest coeficient se schimb. Albuminele
sunt mai solubile n ap, pe cnd globulinele sunt solubile numai n soluii diluate de sruri,
iar n celelalte cazuri insolubile. Solubilitatea diferit folosit pentru fracionarea i
detemiinarea lor n practica clinic. Pentru ultimele scopuri azi se folosete electroforeza
pe hrtie sau n gel, la cantiti nensemnate de snge. Albuminele conin 575 aminoacizi,
formnd un lan polipeptidic, au un punct izoelectric mic. Ele detennin presiunea oncotic
a sngelui, iau parte la transportul substanelor, prezint o fracie omogen. Globulinele
formeaz o fracie heterogen, fiecare comportnd diferite funcii.
Glutelinele i prolaminele sunt proteine de natur vegetal, se depoziteaz n
seminele cerealelor, masa principal a glutenului.
Prolaminele sunt solubile n soluie apoas de alcool etilic (60-80%). Conin 20-25%
acid glutamic i 10-15% prolin. Reprezentanii prolaminelor sunt: gliadina (gru), zeina
(porumb), orzeina (orez), hordeina (orz).

,
F igura 1.14. Tipologia unor structuri proteice:
a - spiralele sunt n form de cilindre i spirale;
- structura e reprezentat prin sgei;
a)protein n a - structur (miohemeritina);
b) protein n - structur (Cu, Zn-superoxiddismutaza);
c) a / structur (2 proiecii ale domeniului NA D din LDH);
d) Itemaglutenina virusului gripei;
e) a / structur (triozofosfatizomeraza);
f) CAP din E. coli;
g) a+ structur (lizozim);
h) neuroaminidaza virusului gripei.
Heteroproteidele (proteine conjugate) conin, pe ling compui proteici, diverse
grupe neproteice numite grupe prostetice. Acestea sunt mai profund studiate. Ele sunt
indispensabil legate de protein i prezint un anumit interes biologic.
Nudeoproteidele sunt compuse din proteine i acizi nucleici. Denumirea lor e
derivat de la numirea nucleului celular, dar se afl i n alte compartimente ale celulei. De
aceea nudeoproteidele constituie o clas individual de substane organice, cu o
componen, structur i funcie independent de localizarea lor n celul. Astzi putem
afirma c natura proteinelor studiate n celul e determinat de un reprezentant al
nucleoproteinelor - DNA.
Proprietile organismelor vii, ale celulelor i ntregului organism sunt detenninate ns
de proprietile proteinelor sintetizate. La hidroliza perfect se observ descompunerea
nucleoprotcidelor n proteine i acizi nucleici. Componena proteic o alctuiesc histonclc
bogate n arginin i lizin. Natura proteinelor nu este suficient studiat.
Cromoproteidele sunt compuse din compartimentul proteic i cel neproteic colorat,
de unde provine i denumirea lor; iau parte activ i obligatorie la procesele de acumulare
a energiei, ncepnd cu fixarea energiei solare n plantele verzi, utilizarea ei judicioas de
ctre organismul animalelor i al omului: fotosintez, respiraia celular, transportul 0 2 i
CO.,, reaciile de oxido-reducere, senzaiile de lumin i culoare etc.
Reprezentani: clorofila, hemoproteidele, sistemul de citocromi, catalaza, peroxida-
za. La baza structurii grupei prostetice se afl inelul porfirinic, care adiioneaz elemente
chimice diferite (Fe, Mg).
Fosfoproteidele sunt proteine compuse dintr-o parte proteic i acid fosl'oric.
Accstor molecule Ie sunt proprii legturi esterice ale acidului fosforic cu proteina
ce se adiioneaz prin OH al aminoacizilorserina, treonina.
Reprezentanii proteidelorcazeinogcnul (proteina laptelui), fosfovitina, vitelina, vitelinina
(din glbenuul oului), ihtulina (icre de pete)ocup un loc deosebit n compuii ce conin
fosfor, muli dintre acetia se gsesc n sistemul nervos central. Fosfatul labil e absolut
necesar pentru funcionarea celulei i exerc itarea menirii sale biologice. n procesul de
embriogenez, de cretere postnatal i dezvoltare servesc drept material preios energetic
i plastic. Un ir ntreg de enzime, ce regleaz procesclc de metabolism celular, se
caracterizeaz prin legtura strnscu fosforul.
Glicuproteidele, ca exponeni ai grupei prostetice servind glicoaminglicanii, se
includ n esuturi i n form liber. Legtura cu glucozamina, galactozamina com
puilor proteici se realizeaz prin asparagin, serin, treonin. Componena glucidic
determin rolul biologic al glicoproteidelor indispensabili de existena membranelor
celulare, participnd la rcaciile imunologice, schimbul de ioni, adeziunea intercelular.
Lipoproteidele, ca grup prosteic, sunt reprezentate de lipide neutre, acizi grai
liberi, fosfolipide, colesterol, cu funcii variate. Fiind compui ai membranelor cclularc i
organitelor, pot exista i n form liber n plasma sngelui.
Metaloproteidele metalul este legat complex de resturile de aminoacizi (transferi-
n, ceruloplasmin, feritin). Aici se includ i unele proteine enzimatice ca anhidraza
carbonic (Zn), ascorbatoxidaza (Cu) etc.
PROPRIETILE GENERALE ALE PROTEINELOR
Proteinele sunt compui macromoleculan cu proprieti hidrofile, adic sunt solubile.
Aceast nsuire se datoreaz repartizrii pe suprafaa moleculelor a resturilor de
aminoacizi cu sarcini electrice sau a grupelor polare. Proteinele fbrilare sunt insolubile n
ap, pe cnd cele globulare atest grade diferite de solubilitate.
Solubilitatea proteinelor
Solubilitatca n ap este puternic influenat de diverse sruri ale metalelor uoa
re: NaCl, MgCl2, Na2 S 0 4, (NH 4 )2 S 0 4. n concentraii mici ele au un efect favorabil.
De exemplu, globulinele sunt greu solubile n apa pur i se dizolv uor numai n
soluii saline diluate. Efectul nu depinde de natura srii, dar dc concentraia ei i de
numrul de sarcini ale fiecrui ion din soluie. Mai eficace sunt srurile ce conin ioni
bivaleni (Mg), fa de cele ce au ioni monovaleni. Solubilitatea mrit e determinat de
creterea gradului de disociere a grupelor ionizate n proteine.
n concentraii foarte mari srurile amintite reduc solubilitatea proteinelor pn
la precipitarea lor din soluie - salifiere. Procesul e mai efectiv n punctul izoelectric
al proteinelor. Mecanismul e complicat: ionii de sare atrag moleculele de ap
polarizat, micornd cantitatea de ap ce interacioneaz cu proteina, cauza fiind
concentraiile mari de sare n care numrul ionilor este imens fa de numrul grupelor cu
sarcin a proteinei. Dar avnd n vedere c solubi 1itatea proteinelor n ap este dependent
de formarea membranei apoase n juml grupelor ionice hidrofile, transferul molecular de
ap la ali ioni micoreaz solubilitatea proteinei. Procesul decurge mai rezultativ atunci
cnd toate operaiile se efectueaz la temperaturi joase, n condiiile n care proteinele
sunt mai stabile.
Diferite proteine se salifieaz la diferite concentraii de sruri fenomen ce este
utilizat pentru fracionarea lor. Globulinele precipit cnd soluiile care le cuprind sunt
aproximativ semisaturate n (NH4 )2 S 0 4, pe cnd albuminele precipit la concentraii mai
mari de 75% saturaie.
Procesul de salifiere a proteinelor n multe cazuri nu e legat de pierderea capacitii
proteinei de a se resolubiliza dup nlturarea agentului. Eliminarea prin dializ a
(NH4 ) 2 SO, sau Na - sulfat complet conduce la resolubilizarea n ap a proteinei salifiate
cu formarea soluiilor adecvate. Capacitatea de resolubilizare rapid se menine i n
cazul nlturrii imediate a proteinei de la salifiat (alcool): proteina i pstreaz proprietile
native.
Soluiile n ap a proteinelor au un caracter coloidal. Diametrul unor astfel de
particule e de la 1 la 100 n m . Remarcm soluii reale:
a) ioniceparticulele sunt mai mici dect 1 nune, disociaz n ioni, conduc curentul
electric;
b) molecularese descompun pn la molecule, nu disociaz i nu conduc electricitatea
(glucoza, alcoolul)dau spaiu optic nul.
Dac particulele sunt mai mari de 100 ininc i substana rmne solid n faza lichid,
rezult suspensia, iar cea lichid n lichid - emulsie.
Pentru soluiile coloidale (dar proteinele formeaz soluii coloidale) e caracteristic:
a) fenomenul lui Tindal pozitiv;
b) nu di fundeaz prin membrane semipermeabile, care uor transfer apa sau sub
stanele micromoleculare. Procesul e numit dializ i st la baza funcionrii aparatului
rinichiului artificial. Majoritatea membranelor biologice normale nu sunt penneabile pentm
proteine;
c) substanele ce fonneaz soluii coloidale nu se cristalizeaz la mrirea concentra
iei, dar genereaz precipitat amorf. Proteinele pot forma cnstale numai n anumite condiii,
din soluia-mam;
d) soluiile coloidale au o viscozitate mrit ce depinde de masa i fonna mole
culelor. Proteinele de aceeai mas molecular, dar cu molecule asimetrice, au o viscozitate
mult mai mare. Substanele coloidale interacioneaz cu apa. n proteine grupele ionogenice
leag apa: COOI I - 4 molecule de H 2 0 , NH2- 3 molecule, OH i NH - cte 2 molecule;
e) viteza de difuziune e foarte mic. Difuzia este procesul sumar de transfer al
moleculelor dizolvate sub influena gradientului de concentraie. Coeficientul de
difuzie depinde de mrimea i fonna moleculelor, de rezistena detenninat de vis-
cozitatea solventului. Procesul de difuzie constituie baza funcionrii celulei,
transferului de substane. Viteza difuziei i distana la care pot fi transportai diferii
metabolii n celul sunt parametrii principali ce limiteaz metabolismul n celulele
vii i organitele lor;
f) soluiile coloidale n concentraii mari au o presiune osmotic mic. Ea depinde de
numrul particulelor dizolvate n unitate de volum, dar nu de natura lor;
g) au tendina de a fonna diferite complexe moleculare;
h) sunt capabile de absorbie i singure se supun absorbiei;
i) se tumefiaz i se coaguleaz.
Soluiile coloidale capt fonna de so lsoluie lichid cu o anumit fluiditate i
compoziie de gel, pierzndu-i fluiditatea dm cauza fonnrii structurii de reea intern cu
fixarea apei. Atare structuri apar: 1) la tumefierea xerogelului (agar-agar, clei, gelatin);
2) n unna polimerizrii fibrinogenului; 3) n urma condensrii amidonului, gelatinei.
La nvechirea gelului are loc sinereza, proces de expulzare a apei datorit contraciei
structurilor fonnate din particulele coloidale i eliminarea solventului imobilizat. Apa inclus
n reeaua structural e numit imobilizat, pe cnd apa structural e legat de gmpcle
hidrofile interne ale macromoleculei proteice. Sinereza are loc la coagularea sngelui, n
proccsul de retracie a cheagului.
Proprietile electrochimice
Proteinele sunt amfolii macromoleculari, nglobnd un numr redus de grupri acidc
i bazicc. Contribuia cea mai important o au resturile de glutamil, aspartil, lizil, arginil i
histidil. Resturile aminoacide de la capetele i N tenninale nu au o influen semnificativ,
mai ales cnd lanul polipeptidic este mai lung. Grupele ionizate sunt dispuse n interiorul
suprafeei moleculare.
Proprietile acido-bazice sunt determinate de numrul mare dc grupe ionizate ale
resturi lor de aminoacizi. De predominarea lor depind proprietile electrice. n albumin
exist 109 resturi dc C 001I i 120 de NH.,; hemoglobina conine 48 COOH i 48
NH,. Sarcina electric determinat de structura proteinei.
Moleculele proteice, fiind electrolii amfolii, interacioneaz cu acizii i cu bazele,
particip la meninerea pH. n intervalul 6-7 al pH capacitatea-tampon a proteinelor
foarte mic. Numai aminoacidul histidin posed proprieti tampon la valori normale
ale pH. Hemoglobina (Hb) eritrocitelor, transfernd O,, sc caracterizeaz prin coninut
evident de histidin, dc aceea i are Hb - aceste proprieti - tampon la pH = 7.
Particulele proteice n soluie pot s-i schimbe sarcina electric n dependen de
pH. n soluie acid are loc inhibarea disociaiei COOl I i, avnd sarcina pozitiv, proteina
migreaz spre catod, n soluie bazic inversspre anod.
R COOH R COOH RCOOH R ~ COONa

I +HC1 K +NaOH
NH, +H,0
NH 2 NH 3 C 1 nh 2
pH - soluiei, n carc proteina apare cu o sarcin electric nul, numrul gruprilor (+)
este egal cu acela al gruprilor (-), este denumit pH izoelectric sau punct izoelectric
(pi). Valoarea pl depinde de compoziia proteinei n aminoacizi. O protein ce arc surplus
de lizin i arginin denot un pi >7, iar aceea care are o proporie mare de aminoacizi
dicarboxilici - pi < 7.
R COO +H+ R ~ COOIi R -C O O ' +OH- R COO'
1+ !+ > I + 2
NH 3 ~ > NH3 NH3
n tabelele 1.4. i 1.5. sunt date valorile pi ale unor aminoacizi i ale unor proteide.
La pH izoelectric solubilitatea, mobilitatea proteinei n cmpul electric este minim;
pentru fiecare protein e caracteristic pi propriu. Valoarea lui e determinat de numrul
de grupe ionizate i de valoarea constantelor de ionizare (ribonucleaza7,8; citocromul
10,6; pepsina1,0). n p l molecula proteic e cu sarcin nul i ntre moleculele
nvecinate nu apar fore electrostatice de respingere, ceea ce nseamn c n atare condiii
soluiile sunt nestabile.
la o eiu i 1.4. vaiorue pu nctuiui izoelectric pentr u unu aminoacizi proteino em
Aminoacid pi Aminoacid Pi
Acid L-aspartic 2 , 7 7 L-Valina 5,96

Acid L-glutamic 3 . 2 2 L-Leucina 5,89
L-Cisteina 5,07 L-Izoleucina 6,00
L-Cistina 5,66 L-Glicocol 5,97
L-Tirozina 5,66 L-Alanina 6,00
L-Serina 5,08 L-Prolina 6,30
L-Fenilalanina 5,48 L-Histidina 7,59
L-Triptofan 5,89 L-Lizina 9,74
Protcide Pi Proteide pi
Pepsina 1, 0 Fibrinogen 5,5

Cazeina 4,6 - globiilina scric 6,7
Ovalbumina 4,6 Hemoglobina 6,9
Albumina seric 4,9 Mioglobina 7,0
Ureaza 5,0 Chimotripsinogen 9,5
Insulina 5,4 Citocrom 10, 6
Miozina 5,4 Lizozim 11, 0
Evident c prezena sarcinilor antipode pe segmentele distanate ale particulelor cre

eaz condiii pentru o agregare rapid cu fonnarea agregatelor mari. Acest lucru favori
zeaz precipitarea lor i la asemenea valori ale pH au o solubilitate mic. Astfel de
particularitate este caracteristic mai ales proteinelor globulare.
La valori mai mici sau mai mari de pi toate moleculele au aceeai sarcin i, ca
rezultat, sc resping una pe alta, agregarea fiind imposibil. Aadar, sarcina electric e
un factor stabilizant al soluiilor coloidale. n soluii supraacide sau suprabazice
proteina nu va precipita chiar la fierbere, adic nici chiar atunci cnd i va pierde
proprietile hidrofile. Se tie c unfactor stabilizator al soluiilor coloidale e membrana
apoas. Solubilitatea proteinelor e dependent de hidratarea molecular a lor, adic a
gaipelor ionizate. Apa, joncionndu-se de pe suprafaa moleculelor i cuplndu-se sub o
form de dipoli, fonneaz membrana apoas care mpiedic adiia, fuzionarea particulelor
coloidale i n punctul pi.
Apa specific orientat n jurul grupelor hidrofile e numit ap legat i se
caracterizeaz prin :
a) dispunere mai compact, cc o apropie dc un corp solid;
b) proprieti reduse dc solvent;
c) nu nghea la temperaturi joase;
d) constanta diclectric este egal cu 2 ,8 , pe cnd la apa obinuit este de 8 (constan
ta diclectric este fora de atracie a ionilor ncrcai opus). Prin urmare, factorii
stabilizatori ai sistemului coloidal sunt sarcina electric i membrana apoas.
Precipitarea i denaturarea proteinelor
Pentru aplicarea acestor proprieti ale moleculei proteice e necesar de a o lipsi
anume de stabilizatori. Metodele sunt diferite. n medicin ele sunt folosite pentni
caracteristica cantitativ i calitativ a proteinelor, din componeni biologici: urin, snge,
exudatetc.
nlturarea sarcinii electrice se efectueaz prin aducerea proteinei la starea p.I. Dac
drept ion de precipitaie se folosete cationul, precipitarea e mai favorabil n soluie slab
alcalin; dac e folosit anionul, atunci soluia trebuie s fie puin acidpentru a aduce
particulele coloidale n starea electroneutr.
Membrana apoas poate fi nlturat cu ajutorul dehidratanilor (alcool, aceton). Ultimii
leag apa. Dehidratanii au o constant dielectric mic, micornd-o i pe cea a soluiei. n
consecin, ei mresc atragerea ntre dou sarcini antipod, crend astfel condiii pentru
fonnarea perechilor de ioni ce favorizeaz agregarea proteinelor.
Corpurile proteice constituie o confonnaie nativ i posed anumite caliti fizico-
chimice i biologice n condiii normale ale T, pH etc. Conformaiile sunt extrem de
fragile i uor perturbabile sub aciunea multor ageni, care afecteaz interaciunile covalente
din coninutul moleculei. Modificrile conformaiei native unice se numete
denaturare, iar agenii care o provoac ageni denaturani. Denaturarea e o
particularitate a proteinelor.
La denaturare sunt lezate legturile necovalentc; agenii denaturani nu afectea
z legturile covalente, nu sunt lezate nici jonciunile peptidice, nu se elimin ami
noacizi. Structura primar a proteinei rmne neafectat.
Trsturile caracteristice ale proteinei denaturate:
1 ) pierderea sau micorarea activitii biologice;
2 ) micorarea solubilitii;
3) schimbarea fonnei i mrimii moleculelor;

4) modificarea caracterului dispersiunii razelor Roentghen;
5) creterea rcactibilitii unor grupe (SH);
6 ) apariia unor grupe funcionale anterior nedetenninate;
7) pierderea capacitii de a se cristaliza;

8 ) scderea capacitii de rezisten la hidroliz;
9) capacitatea sporit de a da reacii de culoare;

1 0 ) micorarea mobilitii electrice.
Denaturarea este provocat de diferii ageni: temperatura nalt, sruri ale metalelor
grele care n concentraii mici produc denaturarea, coagularea proteinei. Proteina coa
gulat din soluie se leag i se precipit cu factorul nociv. Fenomenul e utilizat n practica
medical. La intoxicaie cu sublimat bolnavului i se administreaz lapte, ovalbumin n
cantiti mari. Proteina fonneaz, n ansamblu cu substanele toxice, un precipitat ce
micoreaz absorbia lui. n unele condiii proteina denaturat poate rmne n soluie,
dac aceasta este acid sau alcalin, chiar i la temperatura de 100C. Precipitatul va
aprea la neutralizarea soluiei.
La o aciune de scurt durat i la eliminarea rapid a agentului denaturant e posibil
renaturarea proteinei cu restabilirea activitii ei biologice. Denaturarea e ireversibil
atunci cnd se mp legturile chimice, n special cele disulfidice inter- i intracatenare.
n procesul de sterilizare are loc denaturarea tennic i, n consecin, insuficiena de
timp sau de t duce la generarea i rspndirea microbului etc.
Multe proteine nu sc denatureaz la sublimare (liofilizare). Totui, unele enzime i
diminueaz activitatea. E necesar s tim c exist substane ce pol mpiedica denaturarea,
i anume: soluia de glucide simpl saturat, alcooli multiatomi (glicerina), unii anioni
organici (dodecilsulfat, unii acizi grai) etc. Pentru a evita denaturarea proteinele se izo
leaz. Ele se pstreaz la rece, n soluii concentrate de sruri i la un pH anumit.
M etodele de identificare a proteinelor. Problema elucidrii complete a
structurii macromoleculare a proteinelor este una dintre cele mai actuale i de o
incontestabil importan teoretic i practic. Pentru determinarea masei moleculare
proteice pot fi utilizate urmtoarele metode: mrimea presiunii osmotice, constanta
ultracentrifugrii (proteinele sedimenteaz n raport cu mrimea i masa lor); metoda
difuziunii luminii (intensitatea difuziunii e dependent dc numrul particulelor i dc masa
lor molecular); mrimea difraciei razelor Roentghen, microscopia electronic; coninutul
unor elemente (n Hb concentraia Fe este egal cu 0,34%), care se conin n cantiti
mici (n albumina seric concentraia triptofanului e de 0,58%).
Masa molecular _ Masa atomului x 100

minim a proteinei Cantitatea elementului n %
Masa molecular _ 204 x 100

a albuminei (T rp )----------^ ~ 34000 Da
Masa molecular _ 56 x 100 _ j

a hemoglobinei (Fe) 0,34
Stabilirea structurii unei proteine ncepe cu izolarea i purificarea ei, determinarea

masei moleculare, identificarea calitativ i cantitativ a aminoacizilor componeni, modului
lor de legare, secvena aminoacizilor, n fine, cu orientarea tridimensional a
macromoleculelor.
1. Proteinele se separ de celelalte componente prin dializ, utilizndu-se membrane
semipenneabile. Pentru accelerarea procesului se aplic electroliza electrodializ.
2. Soluiile proteice se purific, difereniindu-se dup mrime i form prin filtrarea cu
geluri speciale care funcioneaz ca site moleculare moleculele de mrimi mici se
repartizeaz ntre faze, iar cele mai mari nu ptrund n faza intern. Moleculele asimetrice
pot s nu ptrund n faza intern. (Granulele porozitate de gel sunt suspendate ntr-o
soluie, formnd 2 faze - una intern n granule, i alta externn afara lor). n cazuri
aparte la purificarea unor enzime se pot utiliza i alte metode. Se observ afinitatea lor cu
diveri ioni, grupe funcionale cromatografia de afinitate (fig. 1.15 a,b,c).
a) Cromatografia prin schimbtori de ioni este bazat pe distingerea semnului i
sarcinii elecfrice la pH-ul dat. Coloana matrice prezint un polimer sintetic ce conne
grupri fixate. La legarea gruprilor anionice matricea este schimbtoare dc cationi, iar
la fixarea gruprilor cationiceschimbtoare de anioni. Afinitatea proteinei pentru
gruprile fixate n coloan este influenat de pH (starea ionizant a moleculei) i de
concentraia ionilor salini din mediul respectiv. Separarea poate fi optimizat prin
schimbarea succesiv a pH-lui i /sau a concentraiei saline a fazei mobile.
b) Gel -filtrarea separ proteinele n dependen de dimensiuni. Matricea coloanei
prezint un polimer fixat ce conine pori cu anumite mrimi. Proteinele mari migreaz mai
Proteinele trec prin
coloan la rata
Granule polimerice cu determinat de sarcina
grupri funcionale lor la pH-ul dat.
ncrcate negativ Proteinele cu sarcina
negativ trec mai
repede i sunt eluate
mai rapid
Amestecul proteic este adugat n
coloana ce conine schimbtori de
cationi
Amestecul proteic

este adugat n
Granule coloana ce conine
polimerice un ligand fixat la j
cu pori polimer, specific
pentru proteina ce
prezint interes

Amestecul proteic este adugat

n coloana ce conine polimer Proteina ce prezint interes
cu legturi transversale este eluat cu ajutorul soluiei
ce conine ligand liber
Moleculele proteice se separ n dependen de Proteinele nedorite

dimensiune: moleculele mai mari trec mai liber sunt splate din
i apar n fraciile timpurii coloan
Figura 1.15. Metode cromatografice utilizate pentru purificarea proteinelor:

a) cromatografia prin schimbtori de ioni; b) gel-filtrarea; c) cromatografia de afinitate
rapid dcct cele mici (nu ptrund n porii granulelor). Proteinele mai mici intr n pori,
sunt reinute, avnd o cale mai lung de traversat.
c) Cromatografia de afinitate separ proteinele n dependen de specificitatea lor
de legare. Proteinele reinute n matrice sunt fixate specific de liganzi prin legturi
transversale (termenul ligand se refer la o grup sau o molecul care se leag de
macromolecule de tip proteic). Dup eluarea proteinelor nefixate n coloan, proteina
legat de interes particular este eluat prin intennediul unei soluii ce conine ligand liber.
n tiina contemporan este pe larg utilizat metod elecroforezei (fig 1.16a). Diferite
probe sunt introduse n rezervoarele ce conin gel de poliacrilamid. Proteinele trec n
gel, unde este aplicat un cmp electric. Dup cteva ore de la efectuarea elecroforezei,
proteinele pot fi vizualizate prin tratarea gelului cu diferii colorani (albastru de metilen),
care se fixeaz de proteine, dar nu la gel. Fiecare band din gel reprezint o protein
individual. Proteinele mai mici migreaz mai rapid i sunt depistate mai departe de baza
gelului. n fugur este ilustrat purificarea enzimei RNA polimeraza din E.coli. Prima
band corespunde proteinelor prezente n extractul celular nativ.
Necesitile tiinifice impun utilizarea clecroforezei cu cromatografia vertical sau
focalizarea izoelectric electroforez bidimensional.
n focalizarea izoelectric (fig. 1,16b), tehnica modern permite separarea proteinelor
n dependen de punctul lor izoelectric (tab. 1.5).
F igura 1.16. Metode utilizate pentru purificarea proteinelor: a) electroforez, b) focalizarea izoelectric
Un gradient constant al pH-lui este stabilit n gel prin adausul amfoliilor potrivii (1).
Amestecul proteic este plasat ntr-un rezervor n gelul la care se aplic un cmp electric
(2). Proteinele ptrund n gel i migreaz pn ce fiecare atinge pH-ul echivalent pl propriu
(3). Amintim c atunci cnd pH este egal cu pi, sarcina net a proteinei este egal cu
zero. n figur sunt artate proteinele dup coloraie, care sunt distribuite dc-a lungul
gradientului pH-lui n dependen de valoarea pi.
n electroforez bidimensional (fig. 1.16c) proteinele iniial sunt separate prin
focalizarea izoelectric ntr-un gel cilindric. Apoi gelul este amplasat orizontal pe un alt
gel n form de plac, unde proteinele sunt separate prin elecroforez n gel de
_ Mr---------f
w , . . Electroforez
Gelul focalizat
izoelectric este
* \
i
*
1t *
I
plasat n ------- V
gelul de
0 m s ) r>: poliacrilamid \ t
Focalizarea
;
izoelectric
1 '
.: - 1 t j
F igura 1.16. ) elecroforez bidimensional
poliacrilamid. Separarea orizontal reflect diferenele de pi, iar cea vertical masa
molecular. Utiliznd aceast tehnic, pot fi separate mai mult de o 1000 de diverse
proteine din E. coli.
Mobilitatea electroforetic a proteinei n gel de poliacrilamid poate fi utilizat i n
determinarea masei moleculare (fig. 1.17).
Proteinele standarde cu masa molccular cunoscut sunt supuse electroforezei. Aceste
proteine - marker (1.17a) pot fi utilizate pentru a estima masa molecular a proteinelor
necunoscute.
n (1.17b) este redat dependena logaritmului masei moleculare a proteinelor marker
versus migraiei relative la o electroforez liniar. Graficul respectiv pennite determinarea
masei moleculare a proteinei necunoscute. La moment sunt cunoscute metode mult mai
sofisticate de purificare i apreciere structural a proteinelor.
a) 1 2
_ j n n
Miozina 200,000
-galactozidaza 116,250
Glicogen fosforilaza 97,400
P r o te in a
Seraibumina 66,200 studiat
Ovalbumina 45,000
Carhanliidraza 31,000
Inhibitorul tripsinei 21,500

Lizozimul 14400

MT standard
Figu ra 1.17. Estimarea masei moleculare
ENZIMELE
Istoria biochimiei este, n primul rind, istoria studierii enzimelorcelor mai distinctive
i specifice proteine cu proprieti catalitice.
Enzimologia e demult considerat o tiin aparte i s-a dezvoltat efectiv n ultima
perioad de timp, dar nceputurile ei se atest din primele decenii ale secolului al XIX-
lea.
Dac n 1920 erau estimate 10-15 enzime prin observarea efectului aciunii lor,
astzi sunt caracterizate partial peste 2000 enzime, dintre care circa 500 au fost obinute
sub fonna unor preparate perfect purificate (unele cristaline) i studiate din punct de
vedere fizico-chimic i biologic.
Manifestrile aciunii enzimelor (fermentaia, digestia) erau cunoscute de foarte mult
timp, dar explicaia mecanismului acestor procese complexe, rolul i locul enzimelor n
transformrile substanelor celulare rmneau neclucidate. Un ir de mecanisme sunt i
pn astzi nedefinite.
Definiia cnzimei s-a conturat atunci cnd s-a observat c n sistemele biologice
au loc procese catalitice survenite din extractele de orz genninal ce realizeaz hidroliza
am id o n u lu i. Cu a ju to ru l p re c ip it rii re p e ta te cu alco o l etilic
s-a obinut (1833) o pulbere alb extrem de termolabildiastaza (din grecete
didotabis - separare).
n perioada 1834-1837 savantul suedez J.Beizelius formuleaz conceptul de cataliz,
confonn cruia un catalizator mrete viteza reaciilor chimice i rezult la sfiritul
lor nemodificatcantitativ i calitativ. El sugereaz c diferitele fenomene biologice
(fennentaia, digestia) pot fi explicate prin prezena unor catalizatori biologici specifici
materiei vii. n 1860, L.Pasteur stabilete c fermentarea zahrului de drojdii n spirt e
catalizat de fermeni organizai indispensabil de organismele implicate n procesele
fennentative.
Aceast concluzie era n contradicie cu postulatul lui J.Liebig, care considera c
fennentul e solubil, fiind produs de celula vie i nu constituie celula propriu-zis.
n anul 1877, W.Kuhne propune termenul enzim (de la grecescul enzyme n
drojdii) pentru atare grup de substane. O fierbere aparent cauzat dc ferment (n
latinferverea fierbe), cu degajarea C 0 2 n procesul fermentativ, caracterizeaz
aceste fenomene biologice.
Celebra disput tiinific Pasteur Liebig a fost finalizat cu brio n 1897, de ctre
H. i E.Buchner, care au demonstrat c sucul cclular al unei culturi de drojdii conservcaz
ntreaga activitate fermentativ, proprie acestui microorganism.
n ultimii ani ai sec.XIX, E.Fischer, efectund studii asupra unor enzime hidrolitice, a
specificitii enzimelor, elaboreaz teoria interaciunii enzim-substrat. Aceast teorie a
stimulat cercetrile n acest domeniu.
Epoca modern ncepe o dat cu izolarea, purificarea i cristalizarea primelor enzime.
n 1926, J. Sumner a cristalizat ureaza i a determinat c enzimele totalmente sunt de
natur proteic. El nainteaz conceptul c toate enzimele sunt proteine, dar savantul
german Richard Willsttter, o adevrat somitate n materie, confirm c enzimele
sunt substane cu o greutate molecular mic, iar proteina depistat e o simpl murdrie.
Mai trziu, J.Northrop, mpreun cu colaboratorii si, cristalizeazpepsina i tripsina,
confirmnd astfel c i ele sunt proteine. Aadar, natura proteic e stabilit incontestabil.
S-au nceput studii intensivem acest domeniu, ce au dat rezultate rcmarcabi le. Cu toate
acestea, o serie de ntrebri, cutn ar fi: dc ce proteinele joac rol de catalizatori; care
este cauza c molecula enzimeie mult mai tnare dect a substratului; decc aminoacizii
nu posed proprieti similare, dar unite n lan polipeptidic capt proprieti catalitice;
n ce mod are loc reglarea activitii enzimelortoate ateapt rspunsuri explicite.
Ce sunt enzimele?
Enzimele sunt uniti funcionale ale metabolismului celular. Acioneaz strict ntr-o
anumit consecutivitate. Catalizeaz sute de reacii n lan, finaliznd cu eliberarea
moleculelor din substane nutritive. Energia substanelor rcagente trece dintr-o form n
alta cu o eficacitate mare i se acumulcz n ATP ce este utilizat n proccsele vitale.Din
micile biomolecule se asambleaz macromoleculele celulei.
O grup deosebit sunt enzimele reglatoare, care sesizeaz diferite semnale perfect
metabolice i, respectiv, i modific activitatea catalitic. Datorit acestor enzime n
celul totul e coordonat: garantat un echilibru armonios dintre procesele metabolice
necesare pentru meninerea integritii i, n final, a vieii celulelor, viabilitii sistemului i
al ntregului organism.
Insuficiena sau lipsa complet a unuia sau a mai multor fermeni duce la apariia
diferitelor afeciuni ereditare; diferite stri patologice apar la o activitate excesiv a uneia
sau a mai multor enzime. i o dat cu elaborarea unui preparat medicamentos care ar
regla activitatea acestor enzime, vom trata eficient boala.
Enzimele joac un rol important la stabilirea diagnosticului, detenninnd activitatea lor
n lichidul biologic. n industria chimic i alimentar evaluarea enzimelor este utilizat
pe larg. Enzimele au un rol aparte i n agricultur.
Structura enzimelor
Enzimele sunt proteine i posed toate proprietile fizico-chimice specifice accstor
macromolecule (solubilitate, proprieti osmotice, sarcin electric net, denaturare termic,
reacii chimice etc.). Activitatea lor e dependent dc pstrarea structurii native a proteinei.
Confirmrile experimentale ale acestui postulat sunt:
1 . Distrugerea lanului polipeptidic prin fierbere m soluii acide sau prelucrarea lui cu
tripsin ducc la pierderea activitii catalitice. Pentru meninerea ultimei e necesar pstrarea
structurii primare.
2. Modificrile n mpachetarea lanului polipeptidic (nclzind proteina sau acionnd
cu pH de valori extreme, cu ageni denaturani) cauzeaz pierderea activitii catalitice,
ccea ce indic necesitatea meninerii structurii secundare i teriare a proteinei.
Masele moleculare ale enzimelor variaz n limite foarte largi. Ribonucleaza are o
mas molecular egal cu 13700Da. Limita superioar este greu de definit. Numeroase
enzime sunt alctuite numai din resturi de aminoacizi unite ntre ele prin legturi covalente,
peptidice i nu doar printr-un lan, ci prin mai multe lanuri polipeptidice.
Unele enzime sunt asociate cu compui dc mase moleculare mici, dializabili. Cnd
aceti compui organici sunt strns legai n structura enzimei, ei poart denumirea dc
grupri prostetice, ns cnd mbinarea lor este uor disociabilcoenzime.
Aceti biocatalizatori se numesc halo enzime, iar componenta proteicapoenzime.
Pentru totalitatea compuilor neproteici din structura heteroenziinelor se utilizeaz termenul
cofactor. n calitate de cofactori apar frecvent cationii unor metale i foarte rar unii
anioni. Un numr relativ redus de cofactori, de coenzime n asociere cu diferite apoenzi
me dau natere unui numr foarte mare de heteroenzime. Se atest sute de dehidrogcnaze
cu coenzima NAD+. Datorit legturilor foarte slabe ntre NAD+i diverse apoenzime,
un numr mare pot aciona simultan ntr-un compartiment celular, utiliznd o cantitate
nensemnat de coenzime. i n aceste situaii este absolut necesar ca procesele de redu
cere s fie echilibrate cu reoxidarea lor.
Ce e comun i ce e distinct la cataliza enzimatic i cea chimic?
Enzimele sunt catalizatori i respect legile catalizei:
1. Enzimele accelereaz viteza reaciilor chimice posibile din punct de vedere
termodinamic, determinnd o scdere a energiei de activare i conducnd la instaurarea
mai rapid a strii de echilibru; accelereaz reaciile n ambele direcii n mod identic
A B.
Ln lipsa enzimei viteza (A B) e egal, de exemplu, cu 1O' 4 sec., reacia invers
(A - B) decurge n IO' 6 sec.
Constanta acestei reacii este egal:
[] Cd io4
c = --- = 7 = 1 0 0
-
[A ] Ci IO' 6
n stare de echilibru concentraia substanei este de 100 ori mai marc dect a
substanei A, chiar dac prezent sau nu enzima. n lipsa enzimei echilibrul se stabilete
timp de cteva ore, iar cu enzim an cteva secunde. Enzimele accelereaz apariia
echilibrului chimic n reacia catalizat.
2. Viteza reaciei crete de milioane de ori. De exemplu, reacia catalizat de
carbanhidraz: C 0 2 + H ,0 H2 C 0 3
Fiecare molecul de enzim hidrateaz n 1 sec.- 105 molecule dc COn i, prin
urmare, viteza reaciei n prezena enzimei crete dc 1 0 7 ori.
Efectul enzimelor e extraordinar n comparaie cu cel al catalizatori lor sintetici. Enzimele
se prezint n concentraii extrem de mici la concentraii de substrat relativ mari. Eficiena
catalitic a enzimei este net superioar celei nregistrate n cazul catalazei chimice,
exprimndu-sc prin numrul de turnover numrul de molecule ale substratului
transformat ntr-un minut de o molecul de enzim.
3. La sfritul reaciilor chimice enzimele, la fel ca i catalizatorii, se regsesc, din
punct de vedere cantitativ i calitativ, ntr-o stare chimic neschimbat, participnd la un
nou act catalitic.
4. Enzimele sunt substane macromoleculare extrem de instabile, reacionnd n condiii
optime numai la anumii parametri - parametri optimi de aciune a enzimei soluii apoase
diluate, pH valorii fiziologice, T anumit i presiune adecvat.
SPECIFICITATEA EN ZIM ELO R
Cea mai important prioritate a enzimelor e nalta lor specificitate de aciune -
atribut fundamental ce determin succesiunea reaciilor care favorizeaz calea metabolic.
Multitudinea formelor de manifestare a specificitii poate fi ncadrat n 2 categorii -
cea de reacie i de substrat.
1. Specificitatea de reacie este proprietatea de a cataliza un anumit tip de reacie
ce st la baza clasificrii enzimelor. Enzimele proteolitice catalizeaz hidroliza legturilor
peptidice:
O O
H 2 N CH C-i-NHCHC-i-NHCHCOOH + 2H20
I ' I ' I
RI R2 R3
H 2 N C H -C O O H + H 2 N C H -C O O H + H 2 N C H -C O O H
- I - I - I
RI R9 R2
Multe enzime catalizeaz i hidrolizeaz legturile esterice, reacia fiind asemntoare.

R iC 0 - R 2 + H70 - R. O + Ro OH
II I
O OH
Unele enzime au 2 zone distincte n structura lor proteic, fiecare responsabil
pentru un anumit tip de reacie specific.
2 . O enzim cu o anumit particularitate de reacie poate asigura transformarea
corespunztoare a unui grup dc substane nrudite chimic specificitate relativ,

sau reacia se resfrnge asupra unui substratspecificitate absolut. Drept exemplu
de specificitate absolut pot servi anhidraza carbonic, ureaza, ultima reprezentnd o
enzim ce catalizeaz urmtoarea reacie:
H 22 N C NH
2
2
2
+ H ,0 , + 2NH 3
O
Specificitatea relativ se manifest n diferite ipostaze:
a) posed o arie larg, fa de numrul substraturilor (proteazele n funcie de resturi
de aminoacizi: chimotripsina legtura peptidic, format de COOH a Phe, Tyr, Tip;
tripsina-deC O O H ai Lysi Arg; trombina de COOH ai Arg i NH, ai Gly);
b) formeaz o arie mai ngust: alcool dehidrogenaza dehidrogenaz un grup
de alcooli monohidroxilici cu un numr mic de atomi de (specificitatea de grup),
adic se manifest prin gruparea chimic:
r - c h 2- o h ^ ^ r - c h = o
N A D + NADH+ H +
) n lipazele digestive specificitatea coreleaz cu poziia legturii esterice ntre
glicerin i acizii grai:
O
II
CH2- 0 C - R , c h 2- o h
I Lipaza pancreatic
C H - O c o - r 2 C H - O R2
I
CH2 o c R, 2H20
r , - cooh ch, - oh
II R 3- C O O I I
O
CH2OH
Lipaza intestinal
CH OH
II2 0 r 2- cooh c h 2- o h
Stereospecificitatea de su b strat i de reacie

Majoritatea biomoleculelor posed un atom de asimetric i, fiind chirali, pot exista
sub forma celor 2 enantiomeri. O enzim atac numai un izomerstereospecificitate:
a) n toate reaciile glicoliticc enzima corespunztoare acioncaz asupra esterilor
fosforici ai D-hexozclor i D-triozelor; se utilizeaz numai L-aminoacizii; n aceste cazuri
substratul optic activ se transform n produs care poate fi sau nu optic;
b) cnd substratul este inactiv optic, dar este produsul optic al reacici, sc consider
c reacia este o sintez asimetric Aceeai situaie sc observ i n activitatea fumarazei,
SDH, LDH:
LDH
H 3 C C H -C O O H H 3 C - C COOH
I II
OH NAD+ NADH+ H + o
L-acid lactic Acid piruvic
c) enzimele catalizeaz transformrile doar a unui singur izomer-cis sau trans;
d) pentru a utiliza ambii antipozi optici, organismul dispune de racemaze (epimera-
ze), care transform un izomer n altul:
D-alanin L-alanin
Utilizindu-sc substraturi marcate cu izotopi radioactivi, s-a constatat c unele
enzime sunt capabile s diferenieze dou grupe chimice identice.
Glicerolkinaza fosforileaz asimetric glicerolul, estcrificnd aceeai grup de alcool
primar:
' 2OH 1 CH2OH

2 CHOH ST 2 c h -o h
ATP ADP , I 2
3 CH 2 OH 3 CH2 PO 3
Enzimelor le sunt proprii manifestri absolut specifice, anumite substraturi. Ele
accelereaz diverse reacii chimice, far formarea produselor auxiliare. Moleculele
substratului trebuie s posede anumite particulariti structurale de baz:
a) substratul conine o legtur chimic specific pe care enzima o scindeaz;
b) substratul trebuie s posede o anumit grup funcional, grupa de legtur,
care joncioneaz cu enzima i orienteaz moleculele substratului n ccntrul activ. Cu
alte cuvinte, legtura chimic a substratului trebuie s ocupe o poziie adecvat fa de
grupa catalitic a enzimei.
Ce mecanism de accelerare a vitezei reaciei chimice posed enzimele?
Pentru a ptrunde acest mecanism, e necesar contientizarea unor noiuni ca: ener
gia de activare exprimat n calorii, energie necesar tuturor moleculelor unui mol de
substan, care la o anumit temperatur s ating starea de tranziie corespunztoare
apexului barierei energetice. Factorul ce asigur desfurarea reaciilor n organismele
vii la TC intern constant este delimitarea la valori minime a energiei de activare.
Viteza reaciilor e dependent de diferena valorilor de energie liber (aG) pentru starea
A (s) i complexul de tranziie. Ea este egal cu: aG = Gst - Gs. Se mai numete energie
liber de activare Gibbs.
Viteza reaciilor e proporional cu numrul de molecule, a cror energie liber
este egal sau mai mare dect aG. O dat cu creterea T, numrul moleculelor sporete
de 2 ori la 10 C. Enzimele accelereaz viteza reaciilor chimice (VRC), micornd bariera
de activare, i reacia decurge dup alt mecanism, ce se caracterizeaz printr-o energie
de tranziie mult mai mic (fig. 1.15).
Formarea i scindarea legturii chimice de enzim e precedat de formarea
complexului enzim-substrat [CES]. Substratul e fixat de o zon restrns n
enzim, specific, denumit "centrul activ al enzimei. Aadar, centrul activ (CA)
e o mbinare n timp i spaiu a anumitelor grupe funcionale, ce intr n
legtur cu moleculele substratului i determin activitatea catalitic a enzimei.
Dispunem de numeroase
investigaii experimentale ce G
Starea de tranzitie far enzim
vizeaz formarea complexului j ~
enzim-substrat (CES):
1 .Investigaii demonstrative
' AG..P S
prin intermediul microscopiei I 0
Ijn---------- ^
e lec tro n ice i al an alizei JaGoE
roentgenostructurale.
2.Formarea CES e nsoit 1 _ _ U go_ _
de m o d ificrile fizice ale p Starea final
enzim elor: so lu b ilita te ,
termolabilitate. Durata reaciei
3. Se modific i caracteris
Figura 1.15. Diagrama ce reprezint energia liber de
tica spectroscopic, dac n activare n reaciile chimice: S-substrat A; P-produs fin a l B;
componena enzimei intr grupe E S i EP- compui intermediari,AGo - energia de reacie
prostetice colorante. standard S~*~P
4. Adecvat e i metoda rezonanei electronice de spin (RES) sau rezonana magnetic
nuclear (RMN).
5. La formarea CES se manifest un grad mare de stereospecificitate (D -
aminoacizii nu pot servi ca substraturi, nu se leag cu enzima). Zona de legtur are o
fonn geometric bine conturat (fig. 1.16).
6 . Uneori afinitatea mare a enzimei cu
substratul A (n lipsa B) nlesnete stabilirea

complexului EA.
7. La concentraia constant a enzimei
viteza reaciei sporete o dat cu mrirea
concentraiei de substrat, ajungnd la viteza
maxim.
n 1913, L.Michaelis a explicat noiunea
de vitez maxim a reaciei fermentative fa
de formarea CES. Concluzia c viteza
reaciei devine maxim la concentraia mare
a substratului, n condiiile n care acesta
ocup toate centrele active ale enzimei, e o
argumentare nrdcinat demult i O dovad Figu ra 1.16. Fixarea substratului n centrul
concludent a funcionrii complexului activ al chimotriPstnei
enzim-substrat.
Unele particulariti ale centrului activ (CA)
Centrul activ este alctuit dintr-un centru de legare i un centru catalitic. Mai
exact, n centrul activ unele grupri (sau resturi ale aminoacizilor) sunt implicate n
legarea substratului, altele asigur cataliza propriu-zis, fiind intercalate ca grupe
catalitice.
Enzimele confer o varietate structural destul de mare, la fel de vaste sunt
specificitatea i mecanismul aciunii catalitice. i, totui, rezult unele concluzii generale,
referitoare la proprietile lor:
1. CA ocup o parte relativ mic din
volumul enzimei i majoritatea din restul s.,.1 .
aminoacizilor moleculei de enzim nu ? , jL

contacteaz cu substratul. E o enigm
& > CyJ9>
solicitarea unor dimensiuni att de mari de

a.
ctre enzime. i
2. CA e o structur tridimensional (nu e 4 . V * 4 C y 00

doar punct, linie sau plan) structur
complex, la fonnarea creia particip vel Ctr _ **'
grupe ale diferitelor resturi de aminoacizi \ \ I
Ser- n j
(exemplu: nstructuralizozimului,dincei 129 Sn \
de aminoacizi radicalii aminoacizilor din Os ft
secvena liniar35,52,62,63,101 particip
la formarea CA). Centrele active ale unor F igu ra 1.17. Centrul activ al chintotripsinei
enzime sunt redate n fi guri le 1.17-1.18.
-64
3. Substratul relativ slab se leag cu
enzima. Energia liber a interaciunii e de
3-12 kcal/mol. Fora legturilor covalente
nu deviaz de la limitele 50-110 kcal/mol.
4. CA are form de adncitur sau
cavitate (an, despictur), unde apa n-
are acces, cu excepia dac aceasta servete
drept reagent al reaciei. Aceast cavitate
conine civa aminoacizi polari ce exercit
legarea i cataliza. Regiunea CA are un
caractcr nepolar ce favorizeaz fixarea
substratului. De menionat c forma CA
creeaz un microspaiu, n care resturile Figura 1.18. Centrul activ al elastazei
polare capt nsuiri deosebite, necesare
pentru cataliz.
5. Fixarea specific e dependent de
poziia bine dctenninat a atomilor n CA.
Substratul ptrunde n CA, cu condiia
similitudinii de form. n 1890, Emil Fischer
+
>
a elaborat modelul clasic al structurii Figura 1.19. Formarea complexului enzim-
substrat (ES) dup modelul E. Fischer
spaiale a CA n raport cu structura
substratului. Anume acest principiu' lact
-ch eie a contribuit cu succes la evoluia conceptului catalizei stereospecifice
(fig. 1.19).
n ultimii ani ns s-a constatat c centrul activ nu e o structur rigid cum presupunea
E.Fischer, ci se modific la fixarea substratului. Modelul dinamic, propus de D. Koshland,
presupune o flexibilitate a zonei de cazare a CA n enzima liber. CA este preformat,
ceea ce denot c are o conformaie spaial puin diferit de cea necesar fixrii
substratului. Substratul induce o
modificare conformaional a zonei
CA, realiznd o configuraie optim
fixrii (fig, 1.19a).
Unele enzime fixeaz substratul n
form a lor te n sio n at , ce
corespunde strii de tranziie.
D in p u n ct de vedere
F igura 1.19a. Modificrile conformaionale n molecula
termodinamic, situarea cea mai enzimei la fixarea substratului (modelul D. Koshland)
potrivit a substratului n raport cu
enzima reduce la mi ni m gradele de libertate ale transirii i rotaiei substratului, i micoreaz
entropia, ceea ce favorizeaz obinerea efectiv a strii de tranziie i motiveaz n mare
parte scderea energiei dc activare a reaciei catalizate enzimatic.
E incontestabil faptul c flexibilitatea structurii enzimei determin prezena substratului
n sfera de aciune a grupelor catalitice i ieirea produsului din acest sistem.
Unele enzime induc o peiturbaie a electronilor pe substrat, amplificnd cu mult viteza
catalizei (carboxipeptidaz).
Exist o varietate mare de factori ce influeneaz viteza reaciilor ferm entative
i determin activitatea catalitic a enzimelor.
1. Concentraia fermentului:
a) n condiii standard, 2 molecule de enzime ntr-o anumit perioad de timp vor
cataliza de 2 ori mai multe molecule de substrat dect o molecul de enzim V = R[E]
o relaie strict proporional. La mrirea concentraiei de enzim se observ devieri de la
relaiile strict liniaredevieri imaginare ce in de metoda de studiu;
b) n prezena mai multor enzime, viteza va fi limitat de concentraia uneia dintre ele;
c) o dat cu sporirea concentraiei enzimei, viteza unei reacii complexe se va micora
n cazul n care coenzima practic va fi legat de o enzim inaccesibil pentru celelalte;
d) adaosurile toxice pot fixa enzima. Numai dup legarea lor, enzima va deveni apt
pentru activitate.
2. Concentraia substratului. Concentraia enzimei din esuturi suport variaii mici
n timp (cu excepia enzimelor inductibile), astfel net ea poate fi considerat
constant.
n schimb, concentraia substratului poate varia destul de mult conform strii
metabolice a esutului. Dependena vitezei reaciilor de concentraia substratului constituie
aspectul cel mai important al cineticii
enzimatice (fig. 1.20). v (/min)
Reprezentarea grafic reflect o I V =V_
curb cu afiniti de hiperbol.
E xplicarca ei se datoreaz lui
L.Michaelis i M.Menten. KMeste
egal cu concentraia substratului
pentru care Vo prezint o jumatate
din V . Exprimarea KMse face n
uniti de concentraie i se deduce
din presupunerea de baz precum c
factorul-limit al vitezei reaciilor
fe rm e n ta tiv e este scin d area
complexului ES n produs i enzim. F igura 1.20. Variaiile vitezei reaciilor enzimatice n
Fiecare enzim n parte are valoarea fu n cie de concentraia substratului
KM pentru substratul dat. Unele Ecuaia lui Michaelis-Menten.
enzime (catalaza, carbanhidraza) cer cantiti relativ mari de
substrat pentru a atinge viteza egal cu Vo; altele (hexokinaza) V maxL[S]J
ating mrimea dat la concentraii mici de substrat. V =-
n condiiile de mediu al celulei, enzima nu-i saturat cu
substrat Ti nu funcioneaz
*
cu Vmax. Modificnd concentraia
substratului, posibil, n anumit msur, reglarea proceselor oxidative din celul.
3. pH optim al fiecrei enzime, ce genereaz o aciune maxim a ei, nu coincide
obligatoriu cu valorile pH caracteristice mediului intracelular al enzimei.
Mrind sau micornd pH-ul mediului,
se poate regla activitatea catalitic a
enzimelor. Acest optim pH e dependent de
gradul de ionizare a grupelor funcionale, al
afinittii enzimei cu substratul i stabilittii ei
(fig. 1 .2 1 ).
Ionii H+ i OH' au un efect denaturant
asupra enzim elor rup legturile, ce
determin structura teriar. Dac n CA al
enzimelor se afl grupri ionizabile, acide
sau bazice, acestea interactioneaz direct
cu ionii H+ i OH;, rezultnd creterea sau Figura 1.21. Activitatea unor enzime n
dependen de p H
scderea gradului lor de disociere i
acionnd ca adevrai inhibitori ai enzimelor
(am ilaza n sucul g a stric).
4. Influena temperaturii (T) determin
sta b ilita te a i v iteza de scin d are a
complexului ES, influennd afinitatea enzimei
la substratul activator sau inhibitor. Creterea
vitezei reaciei o dat cu creterea
temperaturii este interpretat prin prisma
energiei de activare. Pentru fiecare enzim
se poate stabili o temperatur optim,
viteza atingnd valoarea maxim. Creterea
temperaturii cu 10C pn la 40C dubleaz
n continuare viteza reaciei. Viteza scade activitii enzimelor
din cauza distruciei enzimei, iar temperatura

inactivaiei enzimei coincide cu punctul de
denaturare a proteinei (fig. 1 .2 2 ).
EXPRIM AREA ACTIVITII ENZIMATICE
Pentru a exprima activitatea enzimei sunt necesari unntorii factori: ecuaia sumar a
reaciei; metoda de analiz; factorii enzimei, ionii sau coenzimcle ei; valoarea constant
dup Michaelis; pH i TC optime.
In practica biochimic curent sunt importante variaiile de activitate, i nu activitatea
absolut. Se ia o anumit unitate arbitrar, care servete drept referin.
- Unitatea Internaional (U.I.) e acea activitate enzimatic ce asigur conversia
a 1jimol de substrat ntr-un minut n condiii standardizate de pH, T (25-30). Cofactorii
i alte condiii optime asigur aciunea enzimelor.
- Katalul (kat) constiftiie activitatea care asigur transformarea unui mol de substrat
ntr-o secund (lm kat = 60U .I),(l U.I. = 16,67 nkat).
Se mai utilizeaz:
- activitatea specific numrul de U.I. cu referin la 1mg protein;
- activitatea molecular - numrul de molecule de substrat transformate de ctre o
molecul de enzim ntr-o secund numrul turnover ( carbanhidraza - 36
milioane pe minut, catalaza - 40.000.000/sec.);
- activitatea oxidoreductazelor cu coenzima NAD+ sau NADP* se exprim prin
creterea sau descreterea extinciei la 340 n m (absorb numai formele reduse). Ca
unitate servete creterea sau scderea cu 0 , 0 0 1 a extinciei ntr-un minut.
La reaciile ferm entative ale metabolismului iau parte enzimele care se leag cu
moleculele diferitelor substraturi. Exemplu:
E
Glucoza + ATP Glucozo-6 -P + ADP (E - hexokinaza)
Reaciile cu participarea a 2 i mai multe substraturi includ transferul atomilor sau

grupelor funcionale de la un substrat la altul. Atare reacii decurg n dou moduri.
Primul tip de reacii reacii de substituie unitar: 2 substraturi A i se leag
specific sau sporadic cu enzima, rezultnd fonnarea complexului EAB cu scindarea lui n
i D (fig. 1.23); al doilea tip de reacii reacii ce decurg confonn mecanismului
substituiei duble (de tipul ping-pong). n astfel de reacii CA al enzimei n fiece
moment leag un substrat.
F igura 1.23. Reacii de substituie unitar
Adiionarea primului substrat e nsoit dc transferul grupei funcionale pe enzim i

numai dup eliminarea produsului fonnat din primul substrat poate s adiioneze la enzim
i al doilea substrat, dup care s rcccpionezc ginpa funcional:
AX + B ^ A + BX (fig.1.24).
F igura 1.24. Reacii de substituie dubl
Am accentuat c enzima accelereaz viteza reaciilor catalizate de IO8 - IO20 ori.

Ureaza la pH = 8 i T= 20 mrete viteza reaciei de 1014 ori.
Care este mecanismul ce atribuie enzimelor o activitate intens n condiii att
de subtile?
Sunt antrenai 4 factori decisivi:
1. Apropierea i orientarea substratului de grupa catalitic. Legtura chimic
explorat a substratului se afl nu numai foarte aproape, dar i direct orientat fa de
grupele catalitice. n consecin, probabilitatea c complexul ES va atinge starea de
tranziie se amplific.
2. Tensionarea i deformarea sunt ntr-o concordan indus: alipirea substratului
produce modificri conformaionale n molecula enzimei, tensionnd structura CA,
concomitent deformndu-se i substratul legat, ceea ce favorizeaz atingerea strii de
tranziie a complexului ES. Apare
concordana indus, adic modificri
n structura teriar i cuaternar a
molcculci enzimaticc.
3. Cataliza general acido-
Ser.195
bazic. n CA al enzim ei 'x TI r-
O
conlucreaz grupe specifice ale
resturilor de aminoacizi, servind /
drept donatori sau acceptori de R2 < - C R 1 < /%
protoni. Grupele acide i bazice O
R2N H ,
rep rezin t catalizato ri
efectivi ai multor substane
COO SH; OH; NH
organice din soluiile apoase
(fig. 1.25). HN NH
4. Cataliza covalent. Enzimele reacioncaza cu substraturile, formnd compui ES

nestabili legai covalent, care n reaciile ulterioare fonneaz produsul reaciei mult
mai rapid dect n reaciile necatalizate. Compusul covalent e nestabil i se hidrolizeaz
mult mai rapid dect R.
RX + E OII R - O H + EX > EX + HOH E OH + HX

Enzimele stimuleaz diferite procese metabolice n celule, fiind organizate n sisteme
(sau complexe) multienzimatice, n care enzimele activeaz coordonat. Ele genereaz
reacii succesive ale unei anumite ci metabolicc. Produsul primei reacii din astfel de
sisteme devine substrat pentru cealalt enzim.
Sistemele multienzimatice pot include 15 i mai multe enzime, carc activeaz
ntr-o anumit succesiune. In fiecare sistem exist un ferment cu rol de dirijor, care
determin viteza tuturor reaciilor catalitice din lan, fiindc catalizeaz stadiul-limit,
adic reacia cea mai lent, ce determin viteza procesului n ntregime. Enzimele de
acest tip ndeplinesc nu numai fimeia catalitic, dar i cea de modificator al propriei
activiti ( ) , ca respondente la diferite semnale. Ca rezultat, fiecare reacie metabolic
i schimb viteza, fapt ce conduce la adaptri rapide. n condiiile noi apare o adaptare
imediat, de avarie. n aceast categorie logic se include transformarea enzimei neactive
n activ, sub influena factorilor att specifici, ct i nespecifici.
n majoritatea sistemelor multienzimatice fermentul-dirijor catalizeaz prima
reacie din lanul lor consecutiv. Cantitatea suficient de ceilali fermeni determin
activitatea catalidc intensiv, ndeplinind indicaiile dirijorului i intensifiendu-i activitatea
la creterea cantitii de substrat.
Enzimele, activitatea crora se gsete sub influena unor semnale molecu
lare, sunt numite enzime reglatoare. Exist 2 clase de astfel de enzime: una
alosteric reglate (Alio stereos - alt loc) de modulatori ce se fixeaz necovalent, i a
doua enzime ce se regleaz prin modificri covalente.
ENZIM ELE ALOSTERICE. Ele posed cu totul alt sau alte centre dect cel
activ, n care sunt fixai liganzii. Ce le este caracteristic acestor enzime?
1. Posed, ca i toate enzimele, centru catalitic, unde se fixeaz i se modific sub
stratul, dar mai posed un alt centru care are o poziie spaial pentru fixarea
metabolitului reglator, numit efector sau modulator. Acest centru e specific pentru
fiecare modulator.
2. Moleculele enzimelor alosterice sunt
mai mari, mai complexe i primordial Mioglobina
oligomere pare.
3. Au cinetica lor viteza reaciilor, n
dependen de concentraia substratului, are
forma sigmoidal, dar nu hiperbolic,
cauzat dc urmrile interaciunii ntre
protomeri ce leag substratul n mod
cooperativ (exemplu mioglobina i
hemoglobinafig. 1.26).
Exist 2 tipuri de enzime alosterice:
a) homotrope n care modulatorul i
substratul constituie aceeai substan. 1.33 2.67 3 38 5.3 6.67 kPa
Acumularea substratului activeaz viteza Figura 1.26. Curbele de oxigenare ale
inioglohiitei (Mb) i hemoglobinei (Hb)
reaciei catalizate dc aceast enzim:
H exokinaza
Glucoza + ATP G - 6 - P + ADP
(de altfel, ca i alcoolul ce activeaz enzima ce l
scindeaz - alcooldehidrogenaza);
b) heterotrope enzimele sunt reglate de
modulatori care difer dup structur de
substrat, muli dintre ei avnd aciune antipod.
La fixarea modulatorului, enzimele alosterice i
modific conformaia. Modulatorii accelereaz
sau inhib utilizarea substratului de enzima
respectiv (fig. 1.27).
Unele sisteme enzimatice manifest o parti pozitivi (+) i negativi (-) asupra cineticii
cularitate deosebit: produsul final al sistemului reaciilor catalizate de enzimele alosterice
inactiveaza enzimaun rezultat al activittii mai
productive a sistemelor multienzimatice, dect e necesar
COO
celulei. Acest produs final acioneaz ca un inhibitor specific
H3N- H
al primei enzime i, ca rezultat, viteza sistemului se echili
I breaz n corespundere cu cerinele celulei - retroinhibi-
H- -C-OH
H,
ie sau inhibiie prin produs final, inhibiie de tipfeed back.
L-treonina Transformrile L-treonina L-izoleucina necesit
. Treonin
: i dehidrataza 5 enzime. Prima enzim e treonindehidrataza, inactivat
de izoleucin, modulator ce se fixeaz n CA. Este un
exemplu clasic de reglare necovalent i e reprodus n
fig. 1.28.
Se nregistreaz enzime reglatoare, la baza activrii
crora se atest modificri covalente ale moleculei:
E
Glicogenn+ P Glicogenn , + Glucozo-l-P
Enzima fosforilaza A (forma activ constituie un

dimer compus din 2 protomeri idcntici, fiecare avnd
rest specific de serin, fosforilat pe grupa OH) catalizeaz
reacia. Fosfataza fosforilazei catalizeaz hidroliza legturii
COO'
P cu serina i transfer F A n F B mai puin
H3N(!)
_ -H
I activ. Kinaza fosforilazei catalizeaz transferul grupei P
- ,
dc la ATP la OH serinei i reactiveaz activitatea enzimei
CH2
L-izoleucina (B ^ A) (fig. 1.29).
CH,
Trecerea dintr-o fonn n alta e nsoit dc modificri ale
F igura 1.28. inhibiia de tipul fe ed structurii cuatemarece atinge centrul activ, regleaz activitatea
e n z ta e i^ ie ^ p ro t^ lo rT a c to X
de enzime. Treonindehidrataza E , Reaciile catalizate de enzimele alosterice sunt
este mhibata de produsul fin a l ireversibile, au AG - negativ. Exist i alte modificri
covalente ale enzimelor metilarea resturilor de ami
noacizi, adiionarea adenilatului etc.(fig. 1.30).
La unele enzime foarte complexe activitatea Oll Oll
I I
poate fi reglat att covalent, ct i necovalent. CH, CH,
O categorie de enzime sunt sintetizate n forma Fosforilaza

neactiv de precursor, care se activeaz la o
proteoliz limitat (proenzimele). Exemplu:
1 ) enzimele digestiei ce scindeaz proteinele 21- 2ATP-,
Kinaza
n stomac i duoden - pepsinogenul, chimotripsi- Fosfataza
, . , , .
nogenul, tripsinogenul, proelastaza, procarboxi
, fosforilazei
y "2 H .O 2ADP j fosforilazei
peptidaza;
2 ) coagularea sngelui e determinat de
avalana de reacii cu aciune proteolitic;
3) hormonii proteici (insulina);
4) proteinele fibrilare (colagenul). - / Fosforilaza A
Exist o grup de proteine-enzime, starea activ
a crora e condiionat de mpachetarea spontan 1 ,29' Res la re< aciyitau ghcogen
1 r fosforilazei prut modificrile covalente
a m oleculelor cu form area unei structuri
tridimensionale caracteristice enzimei date (lizozim).
M o d if ic r ile c o v a le n te Resturile de am inoacizi accep-

tati n modiFicrile covalente
ATP ADP o
II .
Enz E nz P O
F o s fo r ila re a I- T yr, S e r , T h r , IJis
O
ATP PPi
O
E nz E nz P O C H , o A d e n in a Tyr
A d e n ila re a I
O'
UTP PPi
11 T yr
E nz E n z P O C H , o . U ra c ilu l
U rid ila re a
O" II H .
H H
OH OH
NAD Nicotinam ida o
E nz x _ z I?
Enz ,0 CH2 O P O P O C H 2^ o _A d e n in a
A D P - rib o z ila r e a O' O'
H H
H ' A
ou OH OH
S -a d en ozil S -a d en o zil A r g , G in , C y s
M e tila re a m etio n in a h o m o c iste in a
E nz s ______ _
E nz CH 3 Ght
Figura 1.30. Exemple de modificri covalente ale diferitelor enzime
n 1922 Al. Fleming descoper, ntr-un mod deosebit,
lizozimul, iar n 1929 tot dnsul descoper i penicilina.
M ecanismul interaciunii alosterice
n 1965 savanii J. Monod, J. Wyman, J. Changeux au
propus un model fin i clar al interaciunilor alosterice (MWC)
modelul simetric sau concentrat , avnd urmtoa
rele caracteristici cardinale (fig. 1.31):
1 . enzima alosteric este compus din 2 subuniti identice,
simetrice, cu un centru activ, centrele fiind echivalente;

2. enzima (oligomcrul) poate exista n dou stri: T-
tensionat (constrns), cu afinitate mic de substrat, i R-
relaxat, cu o afinitate mare de substrat;
3. conformaia fiecrui monomer este constrns de
asocierea cu ceilali monomeri;
4. formele T i R pot trece din una n alta i se afl n
F ig u r a 1 .3 1 . M o d elu l
echilibm T R; simetric defixare cooperativ
5. pentru acest model se face o excepie: ntru a pstra a substratului
simetria dimerului, ambele subuniti trebuie s adere la
aceeai conformaie.
n lipsa substratului, toate moleculele se afl n forma T Inhibitor alosteric
(la IO4 molecule o molecul poate cpta forma R).
Prezena substratului modific conformaia, ducnd la
apariia formei R. Cnd substratul se leag cu centml activ,
cellalt la fel trebuie s se afle n R - stare. Treccrea de la
T la R i viceversa se produce coordonat. La adiionarea Forma T
substratului partea molecular a enzimei n starea R
A ctivator alosteric
progreseaz i fixarea substratului devine cooperativ. La o
saturaie complet toate moleculele enzimei se fixeaz n R
stare.
Inhibitorul sc leag cu forma T, activatorul cu fonna R,
astfel efectele homolrope devin pozitive, iar celeheterotrope
pozitive sau negative (fig. 1.32). Forma
D.Koshland, G.Nemethy i D.Filmer (KNF) propun
Figura 1.32. Inhibitorul alosteric
modelul secvenial, mai clasic (fig. 1.33). Baza lui constituie stabilizeaz form a T, pe cnd
trei postulate: activatorul respectiv forma R
1 . fiecare monomer poate exista n una din confonna-
iile posibile - T sau R;

2 . fixarea substratului modific forma doar a unei subuniti, cealalt nu sufer modificri
vdite;
3. modificrile conformaionale detenninate de substrat la o subunitate pot mri sau
micora afinitatea la substrat a celorlalte subuniti. Fixarea este cooperativ.
Deosebirile ntre modele: cel simetric nu presupune echilibm ntre formele R i T n
lipsa substramlui, dar din contra, fixarea substratului induce trecerea T R.
n accst model esenial este simetria monomerilor.
Modelul secvenial denot c trecerea de la T la R n diferite
\
subuniti are loc coordonat i ntr-o anumit succesiune. Un rol I J
primordial are fonna hibrid RT. Monomerii interacioneaz cu TT
condiia prezenei formei confonnaionale diferite. n ultimul model
(secvenial) efectul substanelor homotrope poate fi pozitiv i 1
negativ. Fixarea de enzim a dou molecule dc substrat depinde
efectiv de natura modificrilor structurale, detenninate de fixarea
primei molecule de substrat.
?
Recent se consider c aceste modele reprezint dou cazuri TR
aparte de interaciune. n realitate ea e mult mai complex, de +s
pendent de particularitile structurii cuaternare, teriare etc.
E stabilit c sub aciunea guanidinhidroclorurei (G4 HC1) sau a
ureei inactivaia unor enzime are loc la concentraii relativ mici ale
agenilor denaturani, n care nu se observ modificri globale n
conformaia moleculei. Studiile recente confinn c pierderea RR
activitii fermentative e detenninat de micorarea interaciunii n F ig u ra i .3 3 . M odelul
molecule ce are, drept consecin, creterea mobilitii prii ei se cv en ia l de fix a r e
luntrice. i denaturarea tennic prezint date c pentru un ir de Sh
enzime inactivarea este antecedent modificrilor confonnaiei,
care este indus de T nalt. Pierderea activitii enzimatice n
acest caz nu e provocat de efectul inhibitorilor. Posibil c enzimele oligomere (creatin
kinaz), disociind la monomeri, ar putea s se inactiveze n lipsa vdit a desfurrii
moleculei enzimatice. Observaiile denot c disocierea creatin kinazei are loc la
concentraii ale agentului denaturant, cu mult mai majore dect ale celor ce provoac
inactivarea enzimei.
Studiile actuale demonstreaz c micorarea activitii enzimatice n condiii de
concentraii relativ mici ale agenilor denaturani sunt cauzate nu de efectul lor inhibitor
sau de disociaia enzimelor oligomere, dar de dependena de perturbarea conformaiei
centrului activ.
Datele experimentale elucideaz c centrele active ale majoritii enzimelor sunt situate
n regiuni ale moleculei mult mai mobile (ntre domenii) i deci sunt mult mai sensibile la
aciunea agenilor denaturani sau a factorilor fizici. n confonnitate cu ipoteza potrivirii
induse a lui D.Koshland, n fiecare faz a ciclului catalitic regiunea centrului activ capt
o conformaie specific fazei. Activarea enzimei este rezultatul coaptrii CA a confonnaiei,
perfecte, ce detennin efectul catalitic maxim. Dar n caz de sporire a activitii enzimatice
la nclzire i proteoliz, are loc trecerea dintr-o conformaie compact i stabil n alta
relativ mai deschis i structurat mai fin. La proteoliz limitat activarea zimogenului e
cauzat nu de coaptarca CA a conformaiei perfecte cu modificri fine n trcccrea de la
conformaia zimogenului la cea neccsar pentru cataliz, dar de majorarea mobilitii
moleculei proteice n regiunea CA. Anumeflexibilitatea, dar nu structura bine format
a centrului activ, e responsabil pentru funcia catalitic.
INH IBIIA ACTIVITII ENZIM ELOR
Activitatea enzimatic poate fi inhibat de molecule mici specifice, precum i de ioni,
n ansamblu prezentnd un mecanism de control. Distingem inhibiie specific i
nespecific. Inhibiia st la baza aciunii substanelor medicamentoase, a agenilor
toxici i poate fi reversibil i ireversibil.
La inhibiia ireversibil inhibitorul se fixeaz sau se leag covalent att de profund
de enzim, nct disocierea are loc foarte lent. n acest tip de inhibiie se formeaz un
complex enzim-inhibitor stabil, nedisociabil: E + 1 *- EI (reacie ireversibil).
Inhibiia ireversibil prezint urmtoarele caracteristici:
1. Inhibiia se accentueaz progresiv, pn la nlturarea complet a activitii enzimatice
i nu poate fi anulat prin ndeprtarea inhibitorului.
2. Se datoreaz unor modificri covalente i permanente ale gruprilor funcionale
necesare catalizei, transfonnnd enzimele n molecule inactive.
3. La nceput, acest tip de inhibiie este incomplet, dar crete pe durata timpului, pe
msur ce apar modificrile chimice respective.
Aproape toi inhibitorii ireversibili sunt substane toxice, fiind numite i otrvuri
enzimatice. Amintim n acest sens acidul iodacetic, DIPFP, metalele grele, compuii
arsenici, etc. Acetia interacioneaz cu radicalii aminoacizilor din centrul activ al enzimei,
eseniali pentru structura i funcia acestuia.
Exemple: Diizopropilfluorfosfatul (toxina neuroparalitic) se fixeaz de grupa OH
aserincinCAalacetilcolinesterazei cu fonnarea enzimei neactive:
H 3 CC H - C I I 3
I
O O
E CH 2 O P = 0 + HF
:
O o
H 3c CHCH 3 H3c CHCH 3
Iodacetamida se fixeaz de cisteina din centrul activ al enzimelor:

ICH 2 C NH 2 + E CH2 SH *- ECH 2 SCH 2 C NH 2 + HI
II I
O O
Paraclormercur benzoatul de asemena leag grupele SH din centrul activ:
COOH COOH
Ca surse nedietare de cianide poate fi nitroprusidul de sodiu (agent hipotcnsiv),
succinonitrilul (agent antidepresant), acrilonitrilul, ct i fumul de igar. Expoziia
cronic se manifest prin demielinizare, leziuni ale nervului optic, ataxia i depresia funciei
glandei tirade. Intoxicaia acut cu cianidc necesit un tratament rapid. Baza biochimic
a tratamentului efectiv const n crearea unui complex nontoxic al fiero-porfirinei.
Administrnd nitriii (NaNO, - intravenos, amilnitrita - inhalaie) convertim poriunea de
hemoglobin normal n methemoglobin (Fe3+). Ultima e capabil s fixez complexul
CN-citocromoxidazic elibernd citocromoxidaza i genernd cianmethemoglobina.
Methemoglobin este rentoars n proces graie activitii rodanazei (tiosulfat-cianid
sulftransferaza) eritrocitare, care va transforma tiosulfatul n tiocianat.
CH2 = CHCN Oxihemoglobina [H b 2 0 2 (Fe2+]

A crilo n itrilu l
N itriii (N 0 2)
N a 2 Fe(C N )5NO
Form ele reduse
N itro p ru sid u l de sodiu
Methemoglobin [^MetHbOH(Fe3+)|]
NCCH2CH2CN
Succinonitrilul [C it.aa 3 (Fe3 +)CN]

t ^ C i t . a a 3(Fe3+)]
Cianmethemoglobina
Tlios
iosulfat (S 2 0 3 )
Rodana
Rodanaza
Sulfit (S 0 3 )
Methemoglobin + Tiocianat (SCN )
La o inhibiie reversibil echilibrul dintre enzime i inhibitori se instaleaz repe

de. Inhibiia revesibil prezint urmtoarele caracteristici:
1. ntre enzim i inhibitor se formeaz un complex EI, E + 1 EI (reacie
reversibil). Reacia fiind reversibil, inhibiia poate fi nlturat prin deplasarea echilibrului
spre stnga, cu regenerarea enzimei.
2. Sc poate defini i o constant de disociere a inhibiiei complexului EI:
E+ I EI
K . J J E H I]
[ E I]
3. Inhibiia reversibil poate fi competitiv, uncompetitiv i necompetitiv.
La inhibiia competitiv inhibitorul se fixeaz de centrul activ al enzimei, ca
urmare a afinitii structurii cu substratul, concurnd cu el i mpiedicnd fixarea lui.
Nu e posibil fixarea simultan
a substratului i inhibitomlui. Hnzima
va fixa acel competitor care se
acumuleaz ntr-o concentraie mai
mare. Inhibiia competitiv diminu
eaz viteza catalizei, micornd
cota moleculelor de enzima fixatoa
re ale substratului.
Se poate prevedea efectul unor
inhibitori pentru o enzim dat, F igura 1.34. Reprezentarea grafic a ecuaiei
utiliznd ecuaia Lineweaver-Burk Lineweaver-Burk
- o form invers reciproc a ecuaiei
Michaelis-Menten. Grafic este reprezentat n fig. 1.34.
1/Vo = 1/Vmax X KM/[S] + 1/Vmax
M L J
Km 1 1
n cazul inhibiiei competitive: 0 + - ) + V,
V Vnmax [S ]
Analiznd aceast ecuaie se constat c dac concentraia S crete foarte mult, 1/[S]
tinde spre zero, iar ecuaia devine: 1 _ 1
V Vmax
n inhibiia competitiv, unde are loc interaciunea de tipul E + 1 =?== EI, KM
crete, Vmax rmne nemodificat, panta curbei L - variaz la intersepta constant
(fg. 1.35 a i b).
Prin urmare, n cazul inhibiiei
competitive viteza de reacie poate
atinge Vmax, ca i cum inhibitorul nu
ar fi prezent, dac se m rete
suficient de m ult concentraia
substratului.
Inhibitorii competitivi ns mresc
considerabil panta curbei KM, scznd
afinitatea enzimei pentru substrat.
Se ob serv c a d u g a re a
inhibitorului nu modific Vmax, deci
Figu 1.35a. Curba Michaelis-Menten n absena i atmgndu-Se viteza maxim. l l acelai
prezena inhibitorilor competitivi. timp crete mult , scznd afinitatea
a) Jaru inhibitor; b) cu cantitai nuci ile inhibitor; c) . . M
cu cantiti mari de inhibitor enzimei pentTU substrat.
Exemplu:
SDH
H O O C -C H 2 - C H 2- C O O I I - IIOO - -C O O H

Acid succinic fad F A D lb Acid lumaric
T/tS]
1/Km
F igura 1.35b. Inhibiia competitiv a) - cu inhibitor
b) - far inhibitor
O structur similar o au acizii malonic, oxalic, malic, care pot servi drept inhibitori
competitivi ai SDH.
HOOC CH2-C O O H H O O C -C O O H hoocch - c h 2- c o o h
I
Acid malonic Acid oxalic OH
Acid malic
Inhibitorul nu se scindeaz fennentativ. O particularitate esenial const n faptul c
efectul se nltur la cretcrea concentraiei de substrat (succinat). Acest principiu st
la baza tratamentului intoxicaiilor cu etilenglicol(CH2OU)2, component al antigelului.
Produsul oxidrii, (COOH)2, este toxic i apare ca rezultat al aciunii alcool
dehidrogenazei (ADH). Cristalele de oxalai uor se precipit, dereglnd funciilc rinichilor.
Administrarea etanolului n doze aproape toxice inhib reacia de oxidare i
etilenglicolul se elimin din organism far consecine grave.
CH 3 OH (metanol) (CH 2 OH ) 2 (etilenglicol)

Etanol ADH
O
HCHO (formaldehida) (glicoaldehida)
H
HCOOH (acid formic)
CH 2 O H -C O O H (acid glicolic)
H O C - COOH (acid glioxilic)
HCOOH (acid formic) (COOH ) 2 (acid oxalic)

Acelai mecanism st la baza tratrii intoxicrilor cu metanol. Produsul oxidrii este
acidulformic (HCOOH). Foarte sensibile la intoxicaii cu metanol sunt celulele retinei
ochiului, sistemului nervos central (depresie). O terapie ntrziat nclude hemodializa i
administrarea bicarbonailor exogeni.
O categorie important de inhibitori competitivi suntsulfamidele i derivaii respectivi.
Aciunea antibacterian a sulfamidelor const n substituirea aciduluip-aminobenzoic
(PAB) din acidulfolie, indispensabil pentru creterea microorganismelor, mpiedicnd
dezvoltarea lor. Metabolismul n organismul gazdei nu este afectat deoarece acidul folie
este asigurat de aport alimentar. Eficacitatea sulfamidelor e dependent de cantitile
administrate.
La o inhibiie necompetitiv, dar reversibil, inhibitorul i substratul se leag si
multan cu enzima, dar locusurile sunt diferite. Aciunca inhibitorului const n
micorarea numrului turnover al enzimei, dar nu i a numrului de molecule de sub
strat. Mrirea concentraiei de substrat nu micoreaz inhibiia.
Inhibiia necompetitiv prezint urmtoarele caracteristici:
1 . ntre inhibitor i substrat nu se realizeaz o competiie pentru a se lega de enzim.
2. Inhibitorul nu prezint asemnri structurale cu substratul.

3. Inhibitorul se leag de enzim n alt loc dect centrul activ.
4. Inhibitorii necompetitivi scad Vmax, dar nu afecteaz KM.
Deoarece inhibitorii se leag de enzim n alt loc dect centrul activ, este posibil
formarea complexului ES, ct i a complexului ESI. Deoarece complexul ESI nu se poate
scinda pentru a fonna produsul de reacie, la o vitez de fonnare a complexului ES mai
marc dect a complexului ESI, reacia este ncetinit, dar nu oprit.
La o inhibiie necompetitiv (noncompetitiv) de tipul
E+I 1 EI i
ES + I ESI,
KMnu se modific, Vmaxdescrete, iar panta i intersepta variaz (fig. 1,36a i b).
Se observ c 1/Vmaxcrete, deci n inhibiia necompetitiv Vm.ixscade.
Practic, n cazul inhibiiei
necompetitive inhibitorul, chiar
dac nu se leag de centrul activ v max
t al enzimei, acioneaz asupra
acesteia deformnd-o, astfel net
ea nu mai poate fonna complexul V|T>ax
ES la vitez normal pe de o
p arte, iar pe de alt parte
complexul ES format nu se mai
descompune cu vitez normal
pentru a forma produsul de
reacie. Este evident c n acest
caz inhibiia nu poate ti nlturat
prin m rirea co n ce n tra ie i
i substratului.
ES *~E + P
+
I
j
ESI
=
[
Q
Cei mai vdii inhibitori de acest tip n celulele vii sunt produsele intermediare ale
metabolismului, care se fixeaz reversibil cu locusurile specifice pe suprafaa unor
enzime reglatoare, modifcnd activitatea lor.
Iat cteva exemple:
1. Cel mai comun tip dc inhibiie necompetitiv este produs de agenii chimici care se
pot combina cu unele grupri funcionale ale enzimei; acestea, chiar dac nu fac parte din
centrul activ al enzimei, sunt eseniale pentru meninerea structurii tridimensionale i, prin
urmare, pentru activitatea catalitic a acesteia.
Spre exemplu, ionii metalelor grele (I Ig2+, Ag+, Pb2+), unele substane organice ca
acidul iodacetic, PCMB, DTNB etc. sunt inhibitori necompetitivi pentru numeroase
enzime.
2. Unele enzime metaloactive sunt inhibate necompetitiv de ageni capabili s lege
aceste metale, precum este EDTA care complexeaz ionii Mg2+, Ca2+, Mn2+.
3. Inhibitori necompetitivi sunt i CN' i pentru citocromi, substane care intervin
n ultimul segment al lanului respirator mitocondrial.
Inhibiia uncompetitiv (incompetitiv) prezint urmtoarele caracteristici:
1. Inhibitorul nu sc combin cu enzima liber i nu afecteaz relaia ei cu substratul.
2. Inhibitorul se combin cu complexul ES, formnd un complex ESI ce nu poate
genera produsul dorit.
3. Se ntlnete rar n reaciile cu un substrat, dar este frecvent n reaciile cu dou sau
mai multe substraturi.
Dcci, la o inhibiie incompetitiv panta este constant, intersepta variaz, KMi Vmax
se micoreaz (fig. 1.37a i b).
Reprezentarea grafic a ecuaiei Lineweaver-Burk n diferite cazuri de inhibiie este
redat n fig. 1.38.
E+ S
,'
ESI
F igura 1.37a. Curba Michaelis-Menten n absena i

prezena inhibitorilor incompetitivi.
a) fr inhibitor; b) cu inhibitor incompetitiv
F igu ra 1.37b. Inhibiia incompetitiv
Activitatea enzimatic poate fi inhi

bat la interaciunea
diferitor subunitti
ale enzimelor oligomere - inhibiia alos-
teric.
Izoenzim ele. Se atest enzime ce
exist n form e moleculare multiple, la
aceeai specie, n acelai esut i chiar
n aceleai celul. Catalizeaz aceeai
reacie, dar se deosebesc dup proprie
tile cinetice, dup aminoacizi ca com
ponen i succesiune. Atare fonne mul
tiple se numcsc izoenzinte.
E studiat mai detaliat LDH - lactat l/K n i a) - competitiv; b) - incompetitiv;
dehidrogenaza ce catalizeaz transfor c) - noncompetitiv; d) - f r inhibitor.
marea lactatului npiruvat. Ficcarc izo-

F igura 1.38. Reprezentarea grafic a ecuaiei
enzim e compus din 4 lanuri polipep- Lineweaver-Burk n diferite cazuri de inhibiie
tidice cu masa molecular aproximativ egal cu 33500 Da, care conin dou tipuri de
lanuri polipeptidice n diferite raporturi: A(M) i B(H), codificate de gene diferite.
Enzima ce conine H 4 se localizeaz n inim - LDHp iar cea compus din M 4 - n
muchi - LDH5. Izoenzimele difer att dup Vmaxi KMpentru substratul lor, ct i dup
sensibilitatea la modulatori alosterici (fig. 1.39-1.40). E bine cunoscut i creatin kinaza
care are 3 izoenzime (M, B, MB) la asocierea a 2 lanuri polipeptidice.
0
Originea LD, ld 4 LD, LD, LD,
M4 M 3H M 2H2 MH3 H*
Figu ra 1.39. Repartizarea electroforetic a izoenzintelor lactat dehidrogenazei
F igura 1.40. Subunitile componente ale izoenzimei lactat dehidrogenazei
Care-sfactorii ce determin prezena izoenzimelor? Acetia sunt:

1. Particularitile metabolice ale diferitelor organe.
2. Localizarea si rolul metabolic al enzimei anumite n celulele aceleiai specii -
(mitocondrii sau citozol-malat dehidrogenaza-MDH).
3. Procesul de evoluare i difereniere a esutului omului matur din formele iniial-
embrionare (LDH ficatului la embrion are o anumit caracteristic, ce se schimb o
dat cu evoluia organului; scindarea glucozei la tumori e catalizat de aceleai enzime,
proprii i embrionului).
4. Sensibilitatea la modulatorii alosterici care permit o reglare fin a reaciilor
metabolice.
5. Rezultatul mutaiilor ce modific activitatea catalitic a enzimelor i cauzeaz
maladii genetice, dar nu ntotdeauna. Se pot observa i fenomene opuse - adaptarea la
factorii nocivi.
Enzimele din celule se pot afla i n stare liber (n citozol), se pot fixa de structuri
supramolecularc (n matricea mitocondrial); se organizeaz n complexe multienzimati
ce sau asociate, ndeosebi cele ce conin mai multe subuniti (fosforilaza). Unor enzime
le este caracteristic o localizare dubl: n citozol i n mitocondrii (MDH).
Exist enzime ataate la membrane (membrana citoplasmic - adenilatciclaza);
mitocondriile nzestrate cu dou membrane se caracterizez printr-o distribuie complex
a enzimelor.
Complexele enzimatice sunt fixate de diferite structuri. P. Srerc (1985) propune tennenul
metabolon care reprezint un complex enzimatic supramolecular ce catalizeaz consecutiv
fazele unei ci metabolice i elementele structurale ale celulei. Adic noiunea includc i
substructura celular n care este absorbit complexul. Exemplu: enzimele glicolitice cu proteina
respectiv n membrana eritrocitului; complexul PDH cu elementele structurale ale
membranei interne mitocondriale; sintetaza acizilor grai etc. Dimensiunile metabolonilor
oscileaz vdit (2-5 rnJn kDa) cu diametrul particulelor 20-50 nm. Enzimele ciclului Krebs
la fel reprezint o organizare de enzime de tipul metabolonului. Este evident c enzimele n
cclule agregheaz n complexe i structuri bine determinate. Interacioneaz cu fonnarea
asocierilor de grad nalt, asigurind integritatea celulei.
CLASIFICAREA ENZIM ELOR

Principiul cardinal ce st la baza clasificrii i denumirii enzimelor e detenninat de tipul
reaciei catalizate i mecanismul ei. Criteriile acestei sistematizri constau n unntoarele:
1. Reaciile i enzimele respective sunt aranjate n ase clase, n fiecare clas se
difereniaz cteva subclase (de la 4 la 13).
2. Denumirea enzimei e compus din dou pri: prima - de numirea substratului (sau
a substraturilor), a douatipul reaciei catalizate i se finalizeaz cu -aza.
3. Fiecare ferment are codul su dup clasificarea dat: prima cifr reprezint clasa
de reacii, a doua subclasa, i a treiasubsubclasa (acceptorul), ultima cifr indic
numrul de ordine.
Enzimele, n afar de denumirea lor sistemic, mai posed i o denumire trivial. Mai
jos sunt redate cele 6 clase de enzime i unele exemple.
1. Oxidoreductazele
Enzimele date catalizeaz reaciile de oxidoreducere, transferul electronilor cu
participarea a dou substraturi: Sr + S o '= ^ = S 0 + Sr'. Sunt catalizate reaciile cu
participarea grupelor: CFI-OH (1), C-OH, C = 0 (2), CH-CH (3), CH-NH,(4) i CFI-
NH- (5).
Unele exemple de subclase:
1.1. Enzimele ce acioneaz asupra grupei CH-OFI ca donatoare.
1.1.1.1. Alcool: NA D f - oxidoreductaza (alcool dehidrogenaza)
Alcool + NAD+ Aldehid sau Ceton + NADH + FP
1.2. Enzimele ce acioneaz asupra gmpelor C-OH sau C = 0 ca donatoare.
1.2.1.12. D-gliceraldehid-3-fosfat: NAD+- oxidoreductaza (gliceraldehid-
fosfat dehidrogenaza)
D-GA-3-P +P. + NAD+ ===== D -1,3-difosfoglicerat +N A D H + H +
1.3. Enzimele ce acioneaz asupra grupei CH-CH ca donatoare.
1.3.1.3.4,5-dihidrocortizon: NADP+- oxidoreductaza (cortizon rcductaza).
4,5-dihidrocortizon + NADP+ Cortizon + NADPH + H+
1.4. Enzimele ce acioneaz asupra grupei CH-NH 2 ca donatoare.
1.4.1.3. L-glutamat: NAD(P)+- oxidoreductaza (dezaminaza). Denumirea
trivial - glutamat dehidrogenaza. Forma NAD(P)+confirm c acccptori
de electroni pot fi att N A D \ ct i NADP+.
L-glutamat + H ,0 + NAD(P) a-Cctoglutarat + N H f++
+ NAD(P)H + iP
1.5. Enzimele ce acioneaz asupra grupei C-NH ca donatoare.
1.5.1.3.5,6,7,8-tetrahidrofolat: NAD(P)+- oxidoreductaza (tetrahidrofolat
dehidrogenaza).
5,6,7,8-THF + NAD(P)+ 7,8-DHF + NAD(P)H + H+
1.6 . Enzimele ce acioneaz asupra grupelor NADH sau NADPH ca donatoare.
1.6.4.2. NAD(P)H: glutation-oxidoreductaza (glutation reductaza).
NAD(P)II + H+ + GSSG NAD(P)+ +2G SH
1.8 . Enzimele ce acioneaz asupra grupelor ce conin sulf ca donator.
1.8.4.1. Glutation: homocistin-oxidoreductaza (glutation-homocistin
transhidrogenaza).
2GSH + Homocistin = ^= GSSG + 2Homocistein.
1.11. Enzimele ce acioneaz asupra H ,0 , ca acceptor.
1.11.1.6 . H 2 0 2: H ,0 , - oxidoreductaza (catalaza).
+ H 20 2 O, + 2 H ,0
1.11.1.7. Donator: H 2 0 2 - oxidoreductaza (peroxidaza).
Donator + H 2,0 ,2 D o + 2H2,0
1.99. Alte enzime ce utilizeaz O, ca oxidant - lipooxigenaza, homogentizat oxigenaza
etc.
2. Transferazele sunt enzime ce catalizeaz transferul grupelor funcionale (G) (diferite

de atomul de hidrogen) de la un substrat la altul: S-G + S'=r-^S'-G + S.
Catalizeaz aceste enzime transferul grupelor: monocarbonice(l), cetonice sau
aldehidice (2), acil (3), glicozil (4), azotice (6 ), ce conin fosfor (7) i sulf ( 8 ). Unele
exemple:
2.1. Transferul grupelor monocarbonice.
2.1.2.1. L-scrina: tetrahidrofolat-10-oximetiltransferaza (serin-oximetil-
transferaza).
L-serina+TH F ===== Glicina + 10-oximetil-THF
2.2. Transferul grupelor aldehidice i cetonice.
2.2.1.1. D-sedoheptulozo-7-fosfat: D-gliceraldehid-3-fosft-glicolaldcbid
transferaza (transcetolaza).
D-sedoheptulozo-7-P + D-GA-3-P ===== D-R-5-P + D-X-5-P
2.2.1.2. D-scdoheptulozo-7-fosfat: D-gliceraldehid-3-fosfat-dioxiaceton
transferaza (transaldolaza).
D-sedoheptulozo-7-P + D-GA-3-P ^?^= D-E-4-P + D-F-6 -P
2.3. Transferul grupelor acil.
2.3.1.6 . Acetil-CoA: cholin-o-acetil-transferaza (cholin-acetil-transferaza)
Acetil-CoA +Cholina === CoA +o-Acetil-cholina.
2.6. Transferul grupelor azotice.
2.6.1.1. L-aspartat: 2-cetoglutarat-aminotransferaza (aspartat-aminotrans-
feraza)
L-aspartat + 2-cetoglutarat = ?= Oxaloacetat + L-glutamat
2.7. Transferul grupelor ce conin fosfor:
a) ca acceptor servete grupa alcoolic:
2.7.1.1. ATP: D-hexozo-6 -fosfat transferaza (hexokinaza).
ATP +D-hexoza ADP + D-hexozo-6 -P
2.7.1.11. ATP: D-fructozo-6 -fosfat-1-fosfotransferaza (fosfofructokinaza)
ATP + D-F- 6 -P ADP + D -F-l, 6 -diP
2.7.1.40. ATP: piruvat-fosfotransferaza (pimvatkinaza)
ATP + Piruvat *.. ADP + Fosfoenolpiruvat
b) ca acceptor servete grupa fosfat:
2.7.4.3. ATP: AMP-fosfotransferaza(adenilatkinaza):
ATP + AMP ^ ADP + ADP
2.8. Transferul grupelor ce conin sulf.
2 .8 .2 . 1 . 3 '-fosfoadenilil-sulfat: fenol-sulfotransferaza (aril-sulfotransferaza)
3 '-PAS + Fenol Adenozin-3 ',5 '-diP + Aril-sulfo-eter.
3. Hidrolazele catalizeaz reaciile de hidroliz, cu utilizarea moleculelor de ap.

3.1. Acioneaz asupra legturilor esterice.
3.1.1.3. Hidrolaza esterilor glicerolului (lipaza).
Trigliceraldehida+H20 Digliceraldehida+ Acid gras.
3.2. Acioneaz asupra compuilor glicozilici.
3.2.1.1. a-1,4-glucan-4-glucano-hidrolaza (a-amilaza)
Hidrolizeaz legturile 1-4 npolizaharide.
3.3. Acioneaz asupra legturilor eterice.
3.3.1.1. S-adenozil-L-homocistein-hidrolaza (adenozil-homocisteinaza)
S-adenozil-L-homocisteina +H20 Adenozina +L-homocisteina
3.4. Acioneaz asupra legturilor peptidice.
3.4.1.2. Aminopeptidaza. Hidrolizeaz di- i tripeptidele, scindnd restul
N-terminal.
3.4.4.1. Pepsina. Hidrolizeaz peptidele prin grupele aminice ale aminoacizilor
aromatici sau ale acizilor dicarboxilici.
3.5. Acioneaz asupra legturilor C-N.
3.5.1.2. L-glutamin-amidohidrolaza (glutaminaza)
L-glutam ina+H 20 - L-glutamat +N H 4+
3.5.1.5. Carbamid-amidohidrolaza (ureaza)
Ureea + H20 ^ , + 2NH 3
3.6. Acioneaz asupra legturilor anhidrice.
3.6.1.8 . ATP - pirofosfohidrolaza (ATP-aza)
ATP + H 2,0 ^ AMP + PP.I
4. Liazele catalizeaz adiia la legturile duble i reaciilc inverse.
4.1. C-C liazele
4.1.1.1. Carboxiliaza 2-cetoacizilor (piruvat decarboxilaza)
2-cetoacid Aldehid + ,
4.1.2. Aldchid-liazele.
4.1.2.7. Cetozo-l-fosfat-aldehid-liaza(aldolaza).
Cetozo-l-P DHOAP + Aldehid
4.1.3. Liazele cetoacizilor.
4.1.3.7. Citrat-oxaloacetat-liaza (CoA acetilat) (Citrat-sintaza sau citrat
-enzima de condensare)
Citrat + CoA Acetil-CoA + Oxaloacetat
4.2. C -0 liazele.
4.2.1.2. L-malat-hidro-liaza (fumaraza)
L-malat Fumarat + H ,0
4.2.1.3. Citrat-hidro-liaza (aconitaza).
Citrat - cis-aconitat + H20
5. Izomerazele determin transferul grupelor n interiorul moleculei, cu fonnarea
izomerilor.
5.1. Racemazele i epimerazele.
5.1.1.1. Alanin racemaza.
L-alanina D-alanina.
5.1.3.2. UDP-glucozo-4-epimeraza.
UDP-glucoza UDP-galactoza.
5.3. Oxidorcductazele intrainoleculare.
5.3.1.1. D-gliceraldehid-3-fosfat-cetoizomcraza(triozofosfat-izomeraza)
D-GA-3-P DI
5.4. Transferazele intramoleculare.
5.4.2.1. D-fosfoglicerat-2,3-fosfomutaza (fosfogliceratfosfo mutaza)
1-3-P-D-glicerat ===== 2-3-P-D-glicerat.
6. Ligazele catalizeaz reaciile, formnd legturile covalente cu utilizarea ATP.

6.1. Formarea legturilor C-O.
6.2. Fonnarea legturilor C-S.
6.2.1.1. Acetat: CoA-ligaza (ATP) (acetil-CoA-sintetaza)
ATP + Acetat + CoA AMP + PP.I + Acctil-CoA
6.3. Fonnarea legturilor C-N.
6.3.2.3. y-L-glutamil-L-cistein: glicin-ligaza (ATP)(glutation-sintetaza)
ATP + y-L-glutamil-L-cistein + L-glicina - ADP+ P. + GSII
6.4. Fonnarea legturilor C-C.
6.4.1.1. Piruvat: ,- ligaza (ATP) (piruvat-carboxilaza).
ATP + , + Piruvat*- ADP + P. + Oxaloacctat.
6.4.1.2. Acetil-CoA: CO,-ligaza (ADP) (Acetil-CoA-carboxilaza).
ATP + Acetil-CoA + ,2 ADP + P.I + Malonil-CoA.
COENZIMELE
Drept constitueni coenzimatici servcsc vitaminele. Ele nu reprezint materie
structural (de felul proteinelor, glucidelor, lipidelor), nu au valoare encrgetic, dar particip
la multiple i variate reacii metabolicc. Pentru ndeplinirea acestor roluri funcionale
organismul are nevoie de cantiti mici de vitamine. Animalele superioare i omul au
pierdut capacitatea de a sintetiza vitamina, i coninutul ei n raia alimentar e obligatorie.
Vitamina . Drept coenzim servete fonna ei activ tiamin pirofosfatul.
HUC
Tiamin pirofosft (vit.Bi)
Particip la reacii enzimatice de transfer al unei uniti de aldehid activ (n reacia

de decarboxilare oxidativ a a-cetoacizilor - piruvat, a-cetoglutarat), n reacia de
transcetolare a metabolismului glucidic; se include n alte complexe multienzimatice.
n ciclul tiazolic, datorit ionizrii azotului (N+), carbonul C, devine carbanion i
declaneaz un atac nucleofil asupra C, din molecula acidului piruvic. Ca unnare, se
fonneaz un compus de adiie, care apoi se decarboxileaz, rczultnd hidroxietil TPP
Ulterior, accsta elimin acetaldehid i regenereaz TPP.
R. Ri
CH 3
N- -CH 3 I H3c n ' CII 3
+
c=o h o o c -R o
-r2
COOH
OII
R R,
CH,
H3C N- -CH 3 N- -CH,
c=o
-. H -C - r 2 R, +
H H
La insuficiena de vitamin B, sufer dereglri sistemul nervos central, sistemul

cardiovascular, tractul gastrointestinal, drept consecin a deficitului de energie, prin
defectarea degradrii glucozei.
Vitamina , riboflavinae componenta coenzimelor flavinice.
Centrul activ al enzimelor conine unele metale, de aici i denumirea enzimelor
respectivemetaloflavoproteine. FAD i FMN sunt coenzime implicate n procesele
de oxidoreducerc. Enzimele respective se numesc fiavoenzime sauflavoproteine. In
cadrul reaciilor de oxido-reducere, concomitent, ciclul izoaloxazinic sufer reduceri
reversibile prin fixarea la azotul N ( 1 , 1 0 ) a 2 atomi de hidrogen preluai de la substrat
substratul se oxideaz, iar flavinele se reduc FMNH, sauFADH,. Acest sistem
FAD - FADH 2 sau FMN - FMNH, dispune de un potenial electric standard.
HCOH
I
HCOH
I
C lh O P 0 2 O PO 2 Riboza Adenina
Riboflavma (B2 )
FMN
~F A D
Vitamina PP niacina, niacinamida, B ,. Se include n structura a dou coenzime
nicotinamidice, care particip la reaciile de oxidoreducere NAD" i NADP'. Ambele
contribuie la dehidrogenarea substraturilortransferul unui hidrid-ionH'(H+i 2e ),
alt proton se permut n soluie (H+). Legtura cu componenii proteici este slab (enzimele
NAD+dependente particip la procesele catabolice, cele NADP+dependente anabolice).
-COOH -CONH 2
4 ,
N N'
Acid nicotinic Nicotinamida (NA)
Structura NAD + i i\ADP~
H
CONl-b -c o n h 2
0 -----CH 2 O N -----Gbb N
0 = 0 = . - _
nh2 nh2

N- N. N
= - ' < 0= - ' <
N- N^ N-
-----? 2/0.
.
II

NADH NADPH
Structura DH i NADPH
Vitamina Bhpiridoxina. Drept coenzim servesc formele activepiridoxalfosfat
i piridoxaminfosfat.
: h 2o h :o h : h 2 n h 2
2-
HO- -CH 2 OH HO- -CH 2 OPO 3 H O ' -CH 2 OPO 3
H3 O h 3c- N. 3 -
N N' N
Piridoxina Piridoxalfosfat Piridoxaminofosfat
Enzimele Bftdependente iau parte la:

1 ) procesele de transaminare, transformnd un aminoacid n cetoacid i, viceversa,
servind ca coenzim n aminotransferaze (mecanismul ping-pong) prin formarea

de baze Schiff intermediare;
2 ) reaciile de decarboxilare a am inoacizilor, ap licndu-se acelai
mecanism;
3) procesul de transsulfiirare a unor aminoacizi;
4) determinarea activitii glicogen fosforilazei (degradarea glicogenului).
Vitamina B3 acidulpcmtotenic componenta CoA. Conlucreaz la transferul gru
pelor acil, datorit grupului reactiv SHcu formarea tioesterilor.
H CH 3
I I
H O O CCH 2 - C H 2N C -C H -C -C H OH
il I i
2
O OH CH 3
-alanina Acidul pantoic
Acid pantotenic
0 H CH,
II I I
C - C H 2- CH2 N - C - ^ H - C - C H 2O
NH O OH CH
1
CH 2
CH 2
SH
Coenzim A
Vitamina H biotina servete drept coenzim a carboxilazelor ce leag ,
i-l transfer la substraturi. , se activeaz, unindu-se cu biotina i utiliznd ATP.
C O -E C O -E
I , I
(CH2)4 (CH 2 ) 4

\
c=o
V V -W
I ,o
c< -
Biotina Carboxibiotina O
Vitamina Bc - acidulfolie. Vitamina Bc n organism se reduce, formnd fermentativ

acidul tctrahidrofolic (FH4) ce servete drept coenzim (5,6 ,7,8 ), transfernd de la o
molecul la alta gruprile atomilor de carbon n cadrul diverselor reacii fermentative.
OH COOH
- N H CH Acid
I glutamic
(CH 2 ) 2
COOH
Pteridina Acid p-aminobenzoic
Acid folie (vitamina Bc)

Gruprile atomilor de carbon care sunt transferate de ctre acidul folie:
CH 3 CH2, = , , C H = N H , C H 2OH
Vitamina acidul ascorbic (organismul uman nu e apt s-l sintetizeze).
Vitamina joac un rol esenial la:
1. Reacii de hidroxilare, cu implicarea O,.
2. Hidroxilarea poate avea loc i n baza reducerii formei oxidative (pe seama
acidului dehidroascorbic).
Triptofanul 5-hidroxitriptofan.
3. Diverse reacii de oxicloreducere, n care funcioneaz cuplat cu glutationul sau
coenzimele NAD 1 si FAD - dependente.
4. Drept cofactor activator al anumitelor enzime (degradarea oxidativ a tirozinei,
fonnarea adrenalinci, etc).
O OH OH OH
II I I I
C C = C C H -C H -C H 2OH
I------- o
Acid ascorbic ( vitamina )
-91 -
Vitam ina B n ciaricobalamina posed o structur complicat, depistat n
1957. Gruparea CN din coenzim este substituit prin adenozil. Servete drept co
enzim pentru unele transmetilaze i anumite mutaze (izomeraze):
1. La transformarea homocisteinei n metionin, se utilizeaz FH4 ca donator de
CH3, dar enzima accept metil-cobalamina drept coenzim.
2. La transformarea metilmalonil CoA n succinil CoA (restructurarea scheletului de
atomi de C), drept coenzim servete 5-dezoxiadenozil cobalamina.
Vitaminele liposolubile:
Vitamina servete drept cofactor al sistemului cnzimatic (carboxilaza), ce exercit
carboxilarea acidului glutamic n gama-carboxiglutamic cu asocieri de oxigen. Acest
acid se conine n protrombin ( 1 0 resturi de acid) ce poate chelata calciul.
Se presupune c ea particip
activ la fosforilarea oxidativ,
fiindc sub aciunea antivitamine- C IL
lor acest proces se decupleaz. I
Vitamina e necesar pentru (CH 2 C H = c CH 2 )n H
coagul are (vezi capitolul
respectiv). Vitamina Kt
Vitamina A retinoluleste un derivat poliizoprenoidic, care conine nucleul
ciclohexenului i mai multe uniti izoprenice.
Retinolul (retinalul) este un component al rodopsinei din bastonaele retinei (opsina
i 1 1 -cis-retinal).
CH
I 3
3 CH
!
3
C H = C H - C = C H C H = C H C = C H CH2OH
CH 3
Retinol (vitamina A)
La absorbia de ctre rodopsin a cuantumurilor dc lumin are loc descompunerea

ei n opsin i trans-rctinal, care vor izomera ncis sub influena enzimei specifice
retinol izomeraza. Acidul retinoic particip la transportul prin stratul bilipidic al
oligozaharidelor ncoiporate n glicoproteine (graie modificrilor cis-trans.)
Vitamina E este un antioxidant. Ea protejeaz celulele de diveri oxidani toxici,
exclude oxidarea vit. A, a acizilor grai eseniali. Conlucreaz cu selenul n procesele
antioxidante i previne, de altfel, aciunea distructiv a peroxizilor.
CH 3
I
CH 2 (CH2 CH2- C H - CH2)3- H
Vitamina E
Pentru funcionarea normal a organismului sunt necesare i unele m ic r o e le m e n te

n cantiti mici (miligrame). Ele funcioneaz drept cofactori sau grupe prostetice.
Rolul pe care-1 comport:
1. Au funcie catalitic vizavi de o anumit reacie chimic, viteza creia se amplific
n prezena proteinei fermentative (Fe, Cu).
2. Ionul poate fonna simultan un complex cu substratul i centml activ al enzimei i,
atandu-se, trec n fonn activ, modificnd confonnaia.
3. La un stadiu anumit al ciclului catalitic, ionul de metal joac rolul de acceptor al
electronilorsunt antrenate metaloenzimele.
4. Ionii stabilizeaz structura enzimelor.
Exemple de diverse enzime ce conin metale:
Fe: Citocromoxidaza, catalaza, peroxidaza, proteinele fiero-sulfidice (nu conin hem,
ci un numr par de Fe i S ntr-o fonn labil).
Cu: Liziloxidaza i citocromoxidaza, conlucrnd la mpachetarea colagenului i
elastinei.
Zn: Enzimele NAD' dependente, alcool dehidrogenaza, RNA i DNA polimeraze-
lc, carbanhidraza, carboxipeptidazele.
ntre Zn2+i Cu2+sunt sesizabile fenomenele de antagonism, la fel ca i ntre Mg2" i
Ca2+.
ngrminte le minerale conin sulfat de amoniu, care surcleseaz seleniul necesar
pentru activitatea glutation peroxidazei (scindrii H ,0,). Organismul uman, pentru
funcionarea lui normal mai necesit: nichel ureaz: crom pentru asimilarea
glucozei de ctre esuturi: plumb pentru procesul de calcifiere a scheletului;
cobalt intr n componena vit. p: molibden n structura xantin oxidazei.
M etaloproteinazele reprezint o grup important de enzime care comport o
activitate major n celulele tumorale, activitate ce coreleaz cu procesul invaziv i
mctastazic. Toate au structur asemntoare, dar difer dup tipul de protein ce
scindeaz. Exemplu: scindarea colagenului (IV) din membrana bazal.
Metaloproteinazele se sintetizeaz n forma neactiv detenninat de o secven foarte
conservatoare de 9 aminoacizi. La acest capt se afl cisteina foarte reactibil, care
leag metalul n centrul activ al enzimei i blocheaz scindarea, adic capacitatea de
a scinda proteinele - int.
Ce iniiaz scindarea acestui peptid, transformnd MP n form a activ?
S-a stabilit c forma activ a metaloproteazclor nu acioneaz n prezena inhibito
rului tisular al proteazei (TIMP) o familie de proteine ce regleaz creterea
esutului. Celula tumorilor la fel le sintetizeaz, activitatea fermentativ fiind detenninat
dc echilibrul aciunii pozitive i negative a proteinelor reglatoare. TIMP sunt
supresori ai metastazei, depistndu-se deja gena absent sau inactiv din tumorile
maligne. Proteinaprodusul e ilipsete n celulele cancerigene.
Celulele ce nu metastazeaz, conin cantiti mari de protein nm 23 ( nonmetastazic),
corelnd cu trecerea celulelor de la stare normal la tumoare, cu capacitate de
invaziune. Determinarea proteinei joac un rol important n diagnosticul, pronosticul
i tratamentul bolnavului (cancer mamar).
Cum inhib proteina procesul metastazic al celulelor?
Proteina activ nm 23 favorizeaz adiia grupelor fosfat la moleculele proteice,
modificnd transferai semnalelor ce influeneaza creterea celulelor.
Pe parcursul a milioane de ani de evoluie proteina dat nu s-a modificat, i practic
rmne intact att la om, ct i la anul. La ultima e absolut necesar pentru dezvoltarea
normal a organelor ce se difereniaz din epiderma embrionului - creierul, ochii, aripile,
picioarele, organele genitale. Se poate de presupus, dup analogie, c i la om proteina
joac un rol determmant n organizarea i comunicarea intercelular. Reglarea aberant
a nm 23 conduce, n consecin, la o stare celular nestabil, ce stimuleaz comportri
autonome ale celulelor cancerigene i metastazarea lor.
Modificrile comunicaiei intercelulare, prin interniediul preparatelor sintetice, precum
i modificrile fluxului de ioni de calciu n celule pot bloca metastazele celulelor
cancerigene.
c a p it o l u l . ACIZII NUCLEICI
Studiile fundamentale (1868) ale lui F. Mischer au pus temelia chimiei nucleului celular.
Dnsul a extras nucleele cclulelor din puroiul tifoanelor chirurgicale utilizate i a demonstrat
c n aceste nuclee se afl un compus ce conine fosfor, pe care l-a denumit nuclein.
S-a constatat c aceasta e o nucleoproteid. Drept izvor de nucleoproteide servete
timusul. Aceast gland se utilizeaz ca materie experimental pentru toate investigaiile
tiinifice. A fost nevoie de decenii de cercetri, pn cnd mai multe generaii de savani
au stabilit compoziia chimic a acizilor nucleici i componentelor lor de baz.
STRUCTURA CH IM IC
Acizii nucleici sunt compui macromoleculari, degradnd hidrolitic n nuclcotide i
nucleozidc, dealtfel ei suntpolinucleotide, compui dintr-un numr foarte mare de
mononucleotide. La hidroliza complet degradeaz i mononucleotidele, genernd
baze azotate (purinice i pirimidinice), pentoze i acid fosforic n cantiti echimolare.
Bazele azotate pirimidinice sunt derivai ai pirimidinei, se ntlnesc n acizii nucleici.
De notat trei baze majore: uracilul, citozinai timina.
NH,
H
.C
ti I
. C .'sx CH, C.
n 3:
4
, HN' CH HN CH
I !!
11 CH CH
^ 6 /'/' 'S, M
N N N o N
H II
Uracilul Timina Utozina
Pirimidina 2,4-dioxipiri- 5-metil-2,4-dioxi- 2-oxi-4-amino-
midina pirimidina pirimidina
Exist i unele baze minore pirimidinice ca: 5-metil-citozina i 5-hidoximetil-

citozina, metiluridina, tiouridina, pseudouridina.
0
Riboza
H N ^ S lf
i !
( " N /
H
5-rrEtil-citozina 5-hidroximetil-citozina Pseudouridina (\)/) 4-tiouridina

Acizii nucleici conin i bazepurinice adenina iguanin. Purina este derivatul
pirimidinei: molecula conine inele condensate ale pirimidinei i imidazolului.
NH, O
H II
.N ,N ^ ^N
Ni -,C A\ N" C' HN C ^ \\
I II CH I I! CH CH
HC* , / HC c. C.
N N 'N 'N H,N
H H
A denina G uanina
Purina (6-am ino-purina) (2-am ino-6-oxipurina)
Se ntlnesc n acizii nucleici i baze purinice minore ca: 2-metil-adenina, 6-metil-

adenina, 1-metil-guanina, 7-metil-gunina i inozina. Bazele minore se conin n circa
5% i difer mult de la o specie la alta.
HN N
>
- N 'N ' NH
'N H
Riboza I
6-metil-adenina 2-metil-guanina Inozina 7-metil-guanina
Proprietile
Bazele azotate prezint fenom enul de tautomerie (structuri ce difer prin poziia
unui atom de hidrogen i a unei duble legturi): formele lactim sau lactam, ultimele mai
stabile, predomin n structur.
O OH OH
HN | j _______ a N ^K , N ^ j
O '^ N ^ 0 '^ " 'N HO '4 N'"

H H
Laclarn I.actim Dublul lactim
Bazele azotate sunt slab solubile n ap; cele pirimidinice au o structur plan, cele
puriniceaproape plan, puin pliat. Bazele pirimidinice sunt mai stabile dect cele
purinicc. Bazele azotate posed maxim capacitate de absorbie de ultraviolet (ntre
260-280 nm), ceea ce permite determinarea cantitii dc acizi nuclcici (cu att mai
mult ai componentelor- baze, nucleozide). Pentru identificare se utilizeaz i cromatografia
etc.
La o hidroliz menajat nucleotidele degradeaz n nucleozide i acid fosforic.
Nucleozidul constituie N-nucleozide ale bazelor purinice sau pirimidinice, n care glucidul,
pentoza (riboza sau dezoxiriboza) cu atomul su de C, formeaz legtura glicozidic cu
Nj (pirimidina) sau N 9 (purina). Legtura glucozidic n nucleozidele naturale este .
Pentozele sunt prezente n forma furanozic, fonnnd legtura cu hidroxilul semiacetalic.
Distingem ribonucleozide i dezoxiribonucleozide. Nucleozidele sunt mai solubile n
ap dect bazele azotate, mai stabile n soluii alcaline i uor sc hidrolizeaz la nclzire n
mediul acid, producnd baze libere i pentoze. n organism nucleozidele sunt hidrolizate
de nucleozidaze specifice. Denumirea nucleozidelor deriv de la bazele azotate prin
adugarea sufixelor: -uzina, pentru derivaii purinici i -idina, pentru cei pirimidinici.
Adenina i riboza rezult n adenozin, respectiv: guanozina) aceiai analogi cu
dezoxiriboza; uridina, citidina, timina, cu dezoxiriboza, se numete timidin, iar
compusul timinei din tRNA poart denumirea de riboziltimin.
Din punct de vedere steric, nucleozidele pot avea dou conformaii: sin i anti. Forma
anti este caracteristic compuilor naturali, fiind cerut de aezarea corect a bazelor
complementare n structura dublu helicoidal a DNA. n forma Z conformaia sin
alterneaz cu anti.
Esterii fosforici ai nucleozidelor egaleaza cu nucleotidele la legturile C 5 i C 3 ale
pentozei. n dezoxiribonucleotide se manifest numai aceste dou poziii, iar
ribonucleotidele se completeaz i cu poziia Cr Modificnd condiiile de hidroliz, se
pot obine toate tipurile. Celulele n stare liber coopteaz, preponderent n poziia 5',
grupa fosfat. Structural, pentoza sau dezoxipentoza ocup o poziie dc legtur ntre
fosfat i baze azotate.
Nom enclatorul nucleotidelor i nucleozidelor
Purinice Pirimidinice
BAZELE
A denina (A) G uanina (G) Citozina (C) U racilul (U) Tim ina (T)
A denozin G uanozina Citidina U ridina
N uclcozidul n: dA dcnozina dG uanozina dCitidina Tim idina
A denilat G uanilat Citidilat U iidilat
N uclcotidui n: dCitidilat
D NA dA denilat dG uanilat Timidilat
N ucleozid ADP GDP CDP UDP

difosfai dADP dGDP dCDP TDP
N ucleozid ATP GTP CTP UTP
trifosfai dATP dGTP dCTP TTP
Ambele mononucleotide reprezint acizi deosebit de activi i se afl sub fonn de 5'-
mono, di- sau trifosfai. Grupa fosfat 2 i 3 uor poate fi hidrolizat de enzime specifice,
far scindarea altor legturi.
Rolul nucleotidelor
1. Element structural al acizilor nucleici.
2. ATPpurttorul energiei chimice n celul, servete la transferul grupelor fosfat
macroergice i prezint cheia de legtur ntre procesele ce decurg cu eliminarea,
degajarea energiei i ntre cele ce utilizeaz energia. ADP i AMP se fonneaz n
rezultatul defosforilrii ATP, fosforilnd pn la ATP n procesul respiraiei tisulare. Ciclul
ADP-ATP n celul constituie sistemul principal de transfer al grupei fosforice.
3. Acizii nucleici iau parte la transfenil unor blocuri de constmcie (acidul acetic,
glucoza, cholina), transfonnndu-le n substane biologice active uridinddifosfatglucoz,
citinddifosfatcholina etc.
4. Servesc ca precursori macroergici ai unitilor mononucleotidice la sinteza
fermentativ a DNA i RNA, cednd grupa pirofosfat, se transform n resturi de
nucleozidmonofosfatbaza structural a lanului polinucleotidic.
5. Unele mononucleotide primordiale conin i ali compui - nicotinamida n nicotin-
amidmononucleotid, precursorul NAD, vit. B, n flavinmononucleotid i FAD.
6 . n organisme sunt prezente 2 feluri de esteri fosforici ai nucleotidelor (AMP, ADP,
ATP), n alte cazuri fosfatul leag 2 atomi de O, ai pentozei n cadrul aceluiai nucleotid,
fonnndu-se nucleotide ciclice - 2',3' i 3',5'.
OH OH 0:-P - 0
AMP AMPc 2,3' AMPc 3',5
Produsul 2',3' rezult ca intermediar la degradarea ribonucleotidelor, pe cnd AMPc

3',5' este un ribonucleotid natural, ce posed proprieti unice i o activitate biologic
deosebit, reglnd metabolismul ca mesager al efectului hormonal.
DNA. Structura primar. Polinucleotidele sunt realizate prin stabilirea legturilor
covalente ntre nucleotidele ce se succed n lan. Gruparea '-hidroxil a unui nucleotid
este legat de gruparea 5'-hidroxil a mononucleotidului urmtor prin legtura fosfo-
diesteric. Att DNA, ct i RNA au proprieti comune chimice i fizice sunt greu
solubile n soluii acide, dar uor se extrag din esut cu ajutorul soluiilor de sruri neutre
i fenol.
Bazele azotate sunt responsabile de informaia genetic, pe cnd grupele glucidi-
ce i fosfatul au o funcie structural. DNAconceptul actual structural s-a fonnat prin
anii 1950. Moleculele de DNA din celulele tuturor speciilor sunt compuse din 4
mononucleotide dAMP, dGMP, dCMP i TMP, legate intr-o secven variat cu punile
3',5'-fosfodiesterice. Dar raportul i succesiunea nucleotidelor, greutatea molccular a
DNA din diferite organisme vor fi diferite. Se nregistreaz i o cantitate nu prea mare de
derivai metilai ai bazelor.
DNA e un polimer cu o catena extrem de mare zcci dc mii dc uniti monomcrc.
Lanul poate fi reprezentat schematic n felul urmtor: pentru baze servesc simbolurile:
A,G,C,T; liniile verticale corespund pentozelor, iar linia diagonal cu simbolul P reprezint
legtura fosfodiesteric ca leag captul unei linii verticale cu mijlocul celeilalte.
Locusul legrii corespunde '-OI I i 5'-OH.
3'
a 4 OII
Lanul are o direcie i o polaritate specificcapetele 5'-OH i '-OH care nu
sunt angajate ntr-o legtur internucleotidic. S-a convenit c structura unei
catene polinucleotidice va fi indicaia strict dc la captul 5' spre stnga, iar cel 3' spre
dreapta. Direcia 5' 3'.
Pna la mijlocul secolului trecut enigma DNA nu era descoperit, pe cnd istoria
DNA ncepe cu F. Mischer. n 1944,0.Colin, C.McLeod i M.McCarty au demon
strat c acizii nucleici de tipul dezoxi sunt factorul detenninantn transfonnnle extractului
de pneumococi III forme le neviru lente se transformau n virulente, la adugarea
DNA extrase din formele virulente ale pneumococilor. Proprietile virulente se transmit
prin ereditate.
Cu ajutorul izotopilor radioactivi, Alfred Hershey i Martha Chase au demonstrat
c informaia genetic pentru replicarea virusului T, n celulele Escherichia coli e
transmis nu dc componenta proteic, dar dc DNA. S-a constatat c anume DNA este
componenta cromozomilor, purttoarea informaiei genetice n cclulcle vii.
Un merit major la descoperirea tainelor structurii DNA i aparine lui Erwin Chargaff,
care, la sfritul anilor 40 al secolului trecut, a ajuns la urmtoarele concluzii:
1. Preparatele de DNA obinute din esuturile aceleiai specii de organisme au
componena nucleotidic identic.
2. Componena nucleotidic a DNA e diferit la diferite specii.
3. Componena nuclcotidic a DNA la aceeai spccic nu se modific cu vrsta, nu
depinde de alimentare i de influena mediului ambiant.
4. Numrul resturilor de adenin n orice DNA, indiferent dc spccic, este egal cu cel
al timinei A = T; G = C. Din acest raport rezult c A + G = T + C.
Aceste relaii au facilitat nelegerea codificrii informaiei gcneticcn DNA i transmiterii
de la o generaie la alta. Secvena mononucleotidelor n lanulpolinucleotidic al
DNA reprezint structura sa primar, structura covalent. Aceast structur e
stabilizat de legturile fosfodiesterice.
S tru ctu ra secundar. n 1953, J.Watson i F.Crick au depistat structura
tridimensional a DNA i au propus mecanismul posibil al replicaiciun fenomen
excepional n istoria biologiei, ce a deschis calea conceptului funcionrii genei la
nivel molecular. Ei au analizat tabloul difraciei razelor X, efectuate pe cristale de DNA
de ctre R.Franklin i M.Wilkins, au propus modelul structural, care n linii generale e
justificat i const n urmtoarele caracteristici:
1. Dou lanuri polidezoxiribonucleotidice se rsucesc helicoidal n jurul unei axe
comune. Lanurile au sens opus, sunt antiparalele, formnd o dubl elice cu orientare
spre dreapta (fig.2 . 1 ).
2. Bazele azotate, hidrofobe sunt orientate spre interior i perpendicular pe axa
elicei, inelele glucidice, legate prin resturi fosfat, constituie schcletul extern al dublului
helix i sunt orientate aproape sub un unghi drept fa dc baze. Toate gruprile fosfat
la pH = 7 sunt ionizate i ncrcate negativ (fig. 2.2).
3. Cilindrul ce ncadreaz dublul helix are un diametru de 20, distana ntre bazele
azotate nvecinate e de 3,4 A, iar poziia uneia fa de alta este de 36 grade. Structura se
repet dup 10 nucleotide, avnd o perioad de identitate (pasul) de 34 (3,4nm) (fig.
2.3.).
Figura 2.1. Spirala ile DNA, F ig u r a 2 .2 . M o d elu l spiralei F ig u r a 2 .3 . M odelul schem atic
al
potrivit axei spiralei duble de DNA bazele ocup dublului helix de DMA. Structura se
interiorul, iar scheletul glucido- repet dup 36 , ce corespunde la III
fo s fo r ic - exteriorul cilindrului n ,v ,r/ nflecare caten
4. Stabilitatea dublului helix e asigurat de
interaciunile hidrofobe ntre bazele azotate, precum
i dc legturile de hidrogen ce se stabilesc ntre
bazele azotate de pc o caten i cele complemen
tare de pe cealalt. Dublul helix este de tip plecto-
nemical(adic transversal n acelai plan), i nu
paranemical (adic longitudinal). Legturile de
hidrogen determin primordial mperecherea spe
cific a bazelor.
5. n seciune, dublul helix are trei straturi:
a) unul intem, cu bazele nucleice;
b) unul mij lociuglucidiccu planurile dispu
se radiar;
c) altul periferic resturi de acid fosforic;
d) cele dou catcne delimiteaz pe suprafaa
moleculei 2 caneluri:mareimic(fig. 2.4.).
6 . Nu exist limitri n succesiunea bazelor azo
tate din lanul polinucleotidic; o anumit secven- Figura 2 4 ModeM spaial al dMului
determin O informaie genetic concret. helix de DNA. Se vd cele 2 caneluri -
O proprietate primordial a dublului helix "Iare ^ l m,c ^
e mpachetarea specific a bazelor azotate.
Rcieind din limitrile sterice i din capacitatea de a fonna legtura de hidrogen, se
postuleaz c adenina se mperecheaz numai cu timina, guanina cu citozina. Acest
spaiu poate fi ocupat numai de perechea purin-pirimidinic: pentru 2 purine e mic,
pentru 2 pirimidine e mare i nu pot forma legturi de hidrogen. mpachetarea depin
de i de regulile de formare a legturii de hidrogen. Hidrogenul ocup o anumit
poziie n baze. Adenina nu sc poate mperechea cu citozina, la fel cum guanina nu se
poate mperechea cu timina, fiindc n locul unei legturi s-ar gsi doi atomi de hidro
gen, iar n alt locnici unul.
Adenina fonneaz cu timina dou legturi de hidrogen, pe cnd guanina cu citozina
trei. Orientarea acestor legturi i deprtarea dintre ele e optim pentru o interaciune
puternic ntre baze.
E de menionat c cele dou catene antiparalele ale dublului helix de DNA nu
sunt identice nici dup succesiunea bazelor, nici dup componena lor. Ele sunt
numai complementare una fa de alta. Una conine adenina, cealalt neaprat
timina; guaninei i corespunde citozina.
Investigaiile efectuate la dou Universiti din Cambridge au confirmat c s-a sintetizat,
cristalizat i descifrat structura a dou fragmente de DNA deosebite. n mijlocul lor
se afl o secven, n care catena conine multe A, iar cea complementarT. E curios
faptul c aceast DNA are proprieti uimitoare e rezistent la aciunea factorilor
externi. Care-i cauza? Aceeai a-elice de dreapta, n care A i T n fiecare pereche
sunt dispuse una fa de alta aidoma clicelor la elicopter, adic nu sunt n acelai plan.
Efcctul este neordinar: 1) e mai ngust cnelui spiralei; 2) NH, a A ocup o poziie de
mijloc ntre O, a dou T nvecinate, formnd legturi de hidrogen n plus cu T din lan
o legtura vertical ce joncioncaz longitudinal stivele dc baze azotate. Rezult o
rezisten mai mare la factorii nocivi ai mediului. Astfel, legturile sunt proprii i proteinelor,
dar n DNA s-au stabilit pentru prima dat.
n dependen de cantitatea de ap i fora ionic a mediului, configuraia dublului
helix al DNA se poate modifica. Este elocvent prezena ctorva fonne de DNA.
Forma B spirala clasic a lui Watson i Crickconine lOresiri, ca perioad de
identitate e de dreapta i planul bazelor e perpendicular pe axa spiralei. Forma A -
pasul e compus din 1 1 resturi i planul deviaz aproximativ cu 2 0 grade fa dc
perpendicular de pe axa spiralei. Se fonneaz la dehidratarea fonnei beta. Dac A
ndeplinete rolul de matrice n transcripie, apoi rolul dc matrice la replicarea DNA
(ambele sunt n confomaia anti). Forma Z rsucit spre stnga, conine 12 resturi la
pas (fig. 2.5).
Dublul helix are o rezisten deosebit, concordat cu rolul de purttor al
informaiei genetice. Nu este o structur rigid, fixat pe toat lungimea ei. Ea este
supus permanent unor defonnaii interne, ce oscileaz dc la o parte a moleculei la alta,
adic posed un anumit dinamism. Acestor devieri le e caracteristic dependena de
anftirajul extern al moleculei de DNA.
Structura teriar. n procesul de izolare a DNA s-a stabilit c n unele segmente
dublul helix poate fi mpachetat ntr-o structur tridimensional superhelix sau
form deschis - inelar, ce presupune integritatea catenei, dar nu fonn geometric.
28
F igu ra 2.5. Compararea form elor , i Z de
I DNA. Structurile se deosebesc dup pasul
spiralei i orientarea perechilor de haze fat
de ax (20" ,6" ,7), diametru! (26A., 20A ,
18A l distanta dintre bazele azotate nvecinate
(2,6A ; 3,4A ; 3,7A )
z
Forma negativ superspiralizat

dc DNA
ADP*.
DNA-giraza
ATP3 a)
Fonna relaxat de DNA
A
b)
DNA-giraza
Fonna pozitiv superspiralizat de DNA

F igu ra 2.7. Lk numr. n poziia (a) este
Figura 2.6. Superspirulizarea DNA sub egal cu 1, iar n (b) = 6
aciunea DNA-girazei
Unele molecule ale DNA sunt liniare, altele, la virusuri,
X,
li sc pot transformam inelare, cptnd o proprietate
nou. Forma inelar, far spire, e denumit relaxat.
V)
!'j Pentru transformarea ci n spiral e nevoie de energie.
\X Se consider c energia unei DNA spiralate e
V'\
proporional cu ptratul numrului de spire n helix
DNA relaxat (fig. 2 .6 ).
I.k * 200 Superspiralizarea denot funcii biologice: 1 )
' V mpachetarea DNA ntr-o fonn mai compact dect
cea relaxat; 2 ) determin gradul de desfacere a du
6( ) ^ blului helix i interaciunea cu alte molecule.
Superspiralizarea negativ favorizeaz desfacerea

\) helixului. Aproape toate formele inelare din natur sunt
negativ superspiralizate.
ii U jj
v:J O caracteristic esenial a DNA inelar este
Ul =198 !.h202
Figura 2.7a. Superspirala numml de rsuciri, adic de cte ori un lan l va ntretia
negativ i pozitiv pe altul, dac se vor proiecta pc acelai plan (fig.2.7).
Acest numr (Lk- linking number) trebuie s fie ntreg,
e o caracteristic tipologic i poate varia, dac ntr-un lan sau n ambele se fac
rupturi. S-au izolat enzime ce au atare funcie.Densitatea superhelical (o) reprezint
relaia dintre diferena numrului de
spiralizri () faa de numrul de spire
prezente n DNA relaxat (Lko) =/ DNA dublul helix
Lko. Semnul negativ al densitii
superhelicale indic superspiralizarea
negativ a DNA underwound, iar
pozitiv superspiralizarea pozitiv
overwound ( fig 2.7.a)
O particularitate distinctiv a mole
culei de DNA naturale e lungimea ei
lanul DNA al omului constituie aproxi
mativ 2 m; organismul dispune de apro
ximativ IO13 celule. Lungimea tuturor
f \ \ Asocierea
Disocierea'
DNA ale omului este de 2x10 10 km.
catenelor i j catenelor
Comparm cu distana pn la Soare
1,44x 108 km i perimetrul Pmntului
4x104 km. Unitatea de lungime egal cu
1 0 0 0 perechi sau nucleotide este o kilo-
V J /V
baz (aproximativ are o mas molecular
egal cu 660 kDa i o lungime de 3,4
mkm). Separarea complct a catcnclor
nclzind soluia dc DNA, adugind F igura 2.7b. Denaturarea reversibil i
acid sau baz, putem disocia catenele renaturarea DNA
de DNA. La o Cromozomi mitotici
anumit tempera 1
Linker DNA Cromatida
tur are loc procesul
Hi stone de d e sfacere a (diam etrul ~ 600 nm)
d u b lu lu i h elix -
denaturarea lui.
iHistone Degradarea unei
D NA
core jumti de structur
spiralic are loc la
Nucleozom te m p e ratu ra de
topire. Dublul helix
F igura 2.8. Nucleozomul cu
e o structur cu un
DNA linker i histonele H t
grad mare de coo-
perativitate. Temperatura de topire depinde de compo
nena nucleotidic. Moleculele bogate n i G au o
temperatur mai nalt dect cele nnobilate cu A i T. Dac
temperatura e mai joas dect cea de topire, lanurile de
DNA reasociaz cu fonnarea dublului helix, produendu-
se regenerarea renaturarea (fig 2.1b).
Aproape tot DNA n celula eucariotelor se afl n
cromatina nucleului, care formeaz cromozomi naintea
mitozei. Cromatina conine DNA (35%), RNA (5%),
proteine specifice (60%). DNA n cromatin este legat de Fibra de
proteine-histone, care mpacheteaz compact DNA i crom atin
(diam etrul - 30
formeaz uniti structuralenucleozomi. Ele sunt sta
bilizate de fore electrostatice. Nucleozomii au o struc
tur asementoare fonnei discului.
DNA ncolcete histonele. ntre nucleozomi se situ
eaz DNA de legtur (linker) (fig. 2.8.). Nucleozomii (diam etrul ~ 10
ocup o anumit poziie n spaiu. Modelul mpachetrii
DNA n nucleozomi, cromatin, cromatide cromozomi
mitotici este redat n fig. 2.8.a.
mpachetarea DNA cu proteinele n spaiu reprezint
structura sa cuaternar. Un rol deosebit l au hertonele
proteine nehistonice. Diametrul unei superspirale de
DNA e egal n medie cu 90 ntr-o spir sunt localiza
te 80 de perechi de baze pasul ei.
Cristalografia cu raze Roentgen a constatat c buclele DNA
pe carc se ncolcete DNA reprezint octameri, fiecare
fiind constituit din 8 molecule proteice a cte 2H4,2 H 3,
H, A i H,B (fig 2.8.b). Octamerul este nfurat de DNA Figura 2.8a. Modelul
npachetrii DNA n
(dublul helix) cu lungimea de 146 nucleotide cromozomi
nucleozomul, ce recent s-a confirmat, cu ajutorul
F igura 2.9. PoHnucleozomii constituind
un solenoid cu diametru! de 30
2 4
( )
F igura 2.8b. Reprezentarea spaial a proteinelor in itucleozom
nucleazclor. In cromatina eucariotclor polinucleozomii fonneaz un superhelix, dispunn-

du-se dup un solenoid cu un pas de 10 nm i diametrul de 30 nm (fig. 2.9.).
Molecula Hj de histone este ataat de partea exterioar a catenei de DNA i dc ambele
capcte ale DNA de legtur. S-a stabilit c proteinele ce formeaz octam erul
nucleozomului nu se deosebesc mult la diferite sp e c iinu exist o diferen
esenial a succesiunii aminoacizilor, ceea ce confirm c nu doar mpachetarea
DNA constituie funcia acestor proteine. n caz contrar, n-ar fi fost nevoie de a pstra
timp de milioane de ani consecutivitatea aminoacizilor, fiindc orice protein cu un
coninut mare de aminoacizi pozitivi, ar detennina mpachetarea DNA ncrcat negativ,
n alte capitole vom examina rolul acestor histone n reglarea genelor.
J.W atson F.Crick

STRUCTURA RNA
Acizii ribonucleici sunt produi macromoleculari, fiind rezultani ai policondensrii
ribonucleotidelor. Nucleotidclc se racordeaz prin fosfat diesteric3'5'. Numrul de
nucleotide variaz de la 75 - la multe mii. Structura covalent a RNA se deosebete de
DNA prin urmtoarele:
1. Restul de zahr e riboza, dar nu dezoxiriboza.
2. Una din bazele azotate n RNA e uracilul i nu timina care fonneaz o pereche cu
adenina. De rnd cu aceste baze majore, RNA mai conine baze minore, rezultnddin
metilarea, tiolarea celor majore.
3. Molecula de RNA este monocatenar (cu excepia vimilor). De aceea, compozi
ia nucleotidic nu se supune legitii complementare coninutul de adenin nu e egal
cu al uracilului i al guaninei cu citozina, adic structura dubl catenar complementar
pentru RNA este exclus. Se evideniaz ns unele poriuni, unde complementaritatea
bazelor permite organizarea n structuri duble helicoidale. Poriunile de baze
necomplementare sunt expulzate n fonne de bucle n afara zonelor de dublu helix,
mpachetarea bazelor nu e perfect, unele dintre ele nefiind complementare. Cota dublului
helix n diferite RNA variaz mult, atingnd 50%. Cantitatea de RNA, spre deosebire de
cea de DNA, variaz de la o celul la alta i chiar n cadrul aceleiai celule, n funcie de
intensitatea proceselor metabolice.
Deosebim 3 tipuri de RNA:
RNA mesager (mRNA) (informaional, matriceal) fiecrei gene i corespunde
molecula sa de mRNA, de aceea acest tip de RNA este foarte heterogen. Conceptul de
mRNA a fost postulat de F. Jacob i J.Monod n 1961. Studiind reglarea sintezei
proteinelor la E.coli, au ajuns la concluzia prezenei unui mesager structural de durat
scurt ce transmite mesajul genetic din nucleu n citoplasm i are urmtoarea caracteristic:
1. acest intennediar trebuie sa fie polinucleotid;
2. componena nucleotidic trebuie s corespund celei din DNA ce o codific;
3. este foarte heterogen dup lungime. Savanii nominalizai au presupus c trei
nucleotide codific un aminoacid i au constatat c masa mesagerului nu e mai mare de
500 kDa;
4. e asociat temporar cu ribozomii loc de sintez a proteinelor;
5. se sintetizeaz i degradeaz foarte rapid.
Savanii au demonstrat experimental cele argumentate i, ca rezultat, au mai conclu
zionat: ribozomii sunt structuri nespecializate ce sintetizeaz n anumit moment acca
protein care este codificat de mRNA i se afl n ribozomi.
Folosind metoda hibridizrii propus de Sol Spiegelman (1961), s-a constatat c
secvena bazelor n mRNA e complementar secvenei din DNA matriceal.
Lungimea catenei de mRNA e dependent de lanul polipeptidic ce implic sintetizarea.
mRNA poate s mai conin secvene neinformative la captul 5' terminal de diferit
lungime (lider). Dac mRNA conduce un singur mesaj, e numit monogen, dac mai
multe poligen. Ea poate conine regiuni intergenenetranslabilc denumite linker.
Timpul de supravieuire e variabil (minute- ore). Nucleazele reprezint enzimele ce
degradeaz acizii nucleici.
RNA de transfer (tRNA) reprezint 10-20% din RNA celular, fiind molecule mici
(70-90 nucleotide) cu o mas molecular de circa 30.000 Da. n structura primar, pe
lng cele 4 nucleotide majore (A,G,C,U), se mai ntlnesc pseudouridina, A,G,C metilate.
Pseudouridina (vezi mai sus) -C-l al ribozei este legat n poziia 5 (C5) a uracilului (nu
e legtura N-glicozidic, ci C-C). Sunt prezente dihidrouridina, inozinanucleozidul
ribozei i al hipoxantinei.
NH
HOH2C o N
V?
OH
Dihidrouridina
Inozina
Moleculele de tRNA reprezint o conformaie aidoma foii de trifoi, unde mai mult
de 1/2 din baze sunt complementare. Toate moleculele de tRNA posed particulariti
structurale comune, fiindc toate interacioneaz n acelai mod cu mRNA i ribozomii
cu enzimele ce catalizeaz activarea aminoacizilor i fonnarea legturilor peptidice (fig.
2.10.).
Caracteristica tRNA:
1. Sunt monocatenare cu un numr mic
de ribonucleotide.
2. Conin baze minore (metilate)
metilarea mpiedic mpachetarea unor baze
capabile de alte interaciuni, modific
capacitatea hidrofob a unor segmente de
RNA.
3. Posed 4 zone de perechi comple
mentare i 3 necomplementare, expulzate n
form de bucle:
a) captul 5' tenninal are rest guanilic
fosforilat;
b) captul 3' term inal - secvena
nucleotid CCA. Aminoacidul activat se
leag de '-OH al adenozinei;
c) la captul buclei inferioare se afl
poriunea anticodon compus din 7 baze -
Pir - Pir - X - Y - Z, purin modificat, baz
variabil. Tripletul (XYZ) e complementar F igura 2.10. Structura tRNA atu cu secvena
nucleotidic
secvcnei nucleotidicc din mRNA;
Bucla TtyC Bucla am inoacidic
------------------ _ 1(----- ----------
3'
Captul 3'
Bucla 5'
dihidroU
1 0 -2 5
B ucla
anticodon
A nticodon
F ig u ra 2 .1 1 a . F otografia structurii Figura 2.11b. imaginea schematic a structurii

tridimensionale a tRNA Phe din drojdii tridimensionale a tRNA Phe din drojdii
d) secvenele normale din bucla ^ riboziltimidilat asigur legarea n ribozom a

complexului AA - tRNA sintetazic cu rRNA;
e) secvena de nucleotide din bucla dihidrouridinic recunoate o anumit secven
din rRNA ce se leag cu A A tRNA sintetaz.
Studiile cristalografice au stabilit structura tridimensional a tRNA (fig.2.11. a i b).
1. Are fonna de L.
2. Molecula include 2 segmente de dublu helix situate perpendicularfiecare
helix are circa 10 perechi de baze.
3. Majoritatea bazelor formeaz n afara spiralei legturi de hidrogen deosebite.
Interaciuni teriare apar ntre baze necomplementare (A-A, C-G, A-). Resturile
ribozofosfat pot interaciona cu baze i ntre ele (2-OH pentoza). Multe baze sunt
aranjate n stive. Aceast interaciune hidrofob determin arhitectonica molecular.
Viruii segreg RNA mono sau bicatenar n molecule native mpachetate n membrana
proteic (specificitate).
rRNA (RNA ribozomal) sunt macromoleculc flexibile i deformabile, conin mai
puine baze metilate dect tRNA; zonele duble catenarc sunt ntrerupte de zone
monocatenare, extrem de heterogene dup form i mrime. n funcie de constanta de
sedimentare distingem mai multe tipuri. Fiecarc tip are structura sa tridimensional. Din
totalul de RNA celular rRNA i revine aproximativ 75%. rRNA se leag cu diverse
proteine, constituind o particul ribonucleoproteic denumit ribozom, care este ataat
reticulului endoplasmatic (fig. 2.12).
Ribozomii pot disocia reversibil n 2 subuniti 50S i 30S la procariote (A) i 60S-
40S la eucariote (B). Subunitatea mare integreaz rRNA 23S, 5S i 34 tipuri de
proteine L34 (large-mare). Subunitatea mic - rRNA -1 6S i 21 proteine S21 (small-
mic). La eucarioterespectiv, vezi fig.2.12.
80S
60S
50 S A 2 .5 0 0 .0 0 0 D a X 30S 40S
4 .2 0 0 .0 0 0 Da
1.600.000 Da 9 0 0 .0 0 0 Da 2 .8 0 0 .0 0 0 Da
1.400.000 Da
/ \ / \ \
*''**'**
160 120
120 nuclcotidc
n u cicu u u c --- nuclcotidc
2900 1540 1900 5,8S RN A r f 5S RNAr
nuclcotidc nuclcotidc n u c lc o tid c , r , , nuclcotidc nuclcotidc,
5S RNAr 23S RNAr 16S RN A r 18S RNAr 28S RNAr
34 proteine 21 proteine 45 proteine 33 proteine
Figura 2.12. Structura ribozomului la procariote (A) i la eucariote (B)
n 1987 a fost elaborat harta siturii celor 21 proteine n subunitatea 30S la

E. coli. Modelul tridimensional al proteinelor e practic canonizat i e inclus n manualele
contemporane de biochimie. Utilizarea metodei bombardrii cu tritiu (planigrafii cu
tritiu) a pennis stabilirea perfect a proteinelor expuse la suprafaa subunitii ribozomale
i celor din interior. S-a constatat c suprafeele de contact ale subunitilor la asocicre n
ribozomul integru nu au protein, adic subunitile interacioneaz numai cu RNA-ul lor.
Studiile mai recente (1996) au confirmat conturul subunitii 30 S n corespundere cu
ultimele date ale microscopiei crioelectronice, ceea ce a permis corectarea hrii
tridimensionale a interpoziiei proteinelor n aceast subunitate.
Pe suprafaa fiecrui ribozom se profileaz 2 situsuri: situsul aminoacidic (A) i
situsul peptidilic (P). Experienele efectuate de Masayasu Nomura, prin metoda asamblrii
subunitii mici, au demonstrat c:
1) Toat informaia necesar pentru asamblare se conine n componentele ei structurale.
2) Pentru asamblare nu sunt necesari factorii neribozomali.
REPLICAREA (BIOSINTEZA DNA) DNA parental
Organismele vii trebuie s-i pstreze nu numai

integritatea secvenei nucleotidclor din DNA (repa I
rarea), dar s-i reproduc foarte exact i subtil DNA in 1
p&,. Ml 1
propriu n mitoza celular. Enzimele replicrii acio &-.mi**'
neaz perfect i rapid (la bacterii ntr-o secund se
polimerizeaz pn la 500 nucleotide). Operativitatea
i precizia sunt datorate unui complex multienzima-
ticmecanism perfect compus din diferite proteine. ^ **. V*1
n proccsul de replicare infonnaia codificat n ta Mb
secvena bazelor moleculei de DNA parental este * im^4 \/svr/
||
Ml 4*- I\ I
transferat cu o exactitate maxim cclulei-fiice de III Ml
DNA. Replicarea se bazeaz pe mpachetarea com 1 1> * *

. f mi*"
plementar a bazelor nucleice. Activitatea matricea IM *- AMI .
l a DNA se manifest prin faptul c secvena Ml s' 1 V-**!
mi
nucleotidic se reproduce prin aceast mpachetare \ |, I% I -?
Ml "
111
** M i t
complementar a bazelor (fig. 2.13).
Replicarea const n desfacerea dublului helix / * IM
l \I / J"* * 1 V'Wk
parental i construirea catenelor pe fiecare dintre cele fj m * . m i *- 111 w v
*. M l v r ' \ y m mi yr
2 catene complementare replica cclor dinti. Re 'I * \ / - 4-
zult 2 molecule de DNA identice cu parentala. DNA M olcculc DNA
parental fiicc p a re n ta l
Fiecare dintre ele conserveaz o caten parental
veche. Aadar, proccsul replicrii e semiconserva- F igura 2.13. Replicarea DNA
dup J. Watson i F.Crick
tiv.
Precizrile lui J. Watson i F.Crick au fost confirmate de M.Meselson i F.Stahl,
care au cultivat Escherichia coli n diferite medii cu izotopi marcai. n 1956 a fost
descris prima enzim ce catalizeaz polimerizarea fennentativ DNA -polimeraza.
Procesul de biosintez este deosebit de complex i necesit urmtoarele:
1. Prezena matricei DNA (templat).
2. Prezena celor 4 dRN trifosfai dATP, dGTP, dCTP si TTP.
3. Prezena ribonucleozid trifosfailorATP, GTP, CTP, UTP
4. Prezena ionilor de magneziu.
5. Sistem multienzimatic n baza constituenilor:
a) helicaza enzim ce realizeaz desfacerea dublului helix parental n dou
catene complementare. Desfacerea decurge treptat, n poriuni mici de DNA, pe
msur ce replicarea avanseaz. Cele dou catene vor rmne separate ca urmare a
interveniei proteinelor de stabilizare (SSB) a DNA monocatenare. La desfacerea unei
perechi de baze se utilizeaz minimum 2 molecule de ATP. Un rol important la desfacere
i revine unei enzime topoizomerazei;
b) RNAprimaza sintetizeaz mici fragmente de RNA - primer;
c) DNA polimeraza preia indicaiile dc la matricea care decide-secvena mononu-
cleotidelor n catena nou-sintetizat (o sintetizeaz n direcia 5' 3'). Enzima are
i o aciune exonuclcazic, exciznd nucleotidele de la ambele capetc alccatcnci.
Sunt atestate trei enzime de DNA-polimcraza (I, II, III). Enzima exercit i funcia
de control a replicrii, asigurnd procesului o eficien sporit. Cele expuse sunt confirmate
prin:
1. Sinteza ce evolueaz n prezena celor 4 dezoxiribonucleotidtrifosfai i a DNA
matriceal.
2. Componena nucleotidic a DNA sintetizat, dependent de caracterul matricei, dar
nu de numrul relativ al nucleotidelor.
3. Cea mai convingtoare prob - DNA fagului FX174 replicat in vitro de DNA
polimeraz e complet contagioas erorile la sintez sunt extrem de rare.
d) DNA - ligazaenzima ce catalizeaz formarea legturilor fosfodiesterice ntre 3'-
OH ale unui fragment i 5'- monofosfat ale celuilalt. Reacia necesit ATP sau NAD'
(la procariote). Capetele trebuie s aparin moleculelor bicatenare de DNA, n
cadrul reconstituirii sau splicing-ului catenei de DNA la recombinarea genetic.
Procesul decurge n felul urmtor:
1.E + ATP E-AMP + PP I
(aminogrupa lizinei din enzim se leag cu fosfatul din AMP)
2.E -A M P + P-5'-DNA E + AMP-(P)-5'-DNA.
3. DNA-3'-OH + AMP-(P)-5'-DNA DNA-3'-(P)-5'-DNA + AMP
4. PP I + HOH *- 2P.1
Fora motrice a procesului de sudare a catenei e hidroliza pirofosfatului.
Recent s-a stabilit c sinteza DNA se cupleaz cu desfurarea DNA parental. Lo
calizarea acestui proces e denumitfurc de replicaie. Ea ncepe ntr-un loc anumit cu
extinderea la aceeai vitez n ambele direcii (fig. 2.14).
Topoizomeraza < j
Dna - Helicaza
Proteine de stabilizare
Prim ozom a DnaB
DnaC complex
Primaza
Prim er
rN M P
dNMP
5
Lanul lider
r Lanul succesor
F igura 2.14. Imaginea schematic a proceselor fermentative n regiunea bifurcaiei
DNA templat Enzima helicaza (Dna B), ce desfoar DNA,
conduce la formarea superspirelor (torsiuni
pozitive) ntr-o molecul inelar. In regiunea furcii
DNA parental se rsucete cu o vitez de 100
rotaii pc secund. Continuarea procesului de
S egm ente
replicare implic lichidarea acestor structuri
repetabile -9pb formate de rotaie. Topoizomeraza (DNA
T andem ul A =T (13)
giraza) efectucaz rupturi monocatenare, apoi
sudeaz legtura fosfodiesteric i favorizeaz re
DnaA laxarea structurii teriare a DNA.
Iniierea specific a unui ciclu nou de
replicaie este determinat de complexul de
proteine specifice (Dna A), aductor al complexului
dc protein Dna - Dna la poriunea anumit a
genei, adic punctul (origine) de replicaie(OR).
Timpul de iniiere a replicaiei este o valoare critic
coordonat cu mitoza celulei. Proteinele Dna se
deplaseaz pe DNA, utiliznd energia hidrolitic a
ATP. Enzima servete drept semnal pentru
activarea primazei. n fig. 2.14a este redat iniierea
replicaiei la E.coli.
S-a stabilit c DNA polimeraza nu e capabil
s iniieze sinteza catenei. Ea are nevoie de un
fragment cu grup liber '-OH. Acest fragment
este sintetizat de primaz (Dna G - proteina) -
Replicarea un fragment complementar cuplat la DNA
T andem ul A = T (13) Site-urile dc fixare a Dna A proteine dc segm ente repetabile -9pb
------- ----- \ !-----------------------------------------------r------------- T--------------1
w
&
djGATCTNTTNTTTT TTATCCACA
F igura 2.14a. Iniierea replicaiei (model) la E.coli:

a) Aproximativ 20 molecule proteice Dna A legate cu A TPse fixeaz de cele 4 segmente repetabile ce conin
9 perechi de baze. DNA se ataeaz la acest complex.
b) Tandemul compus din cele 3 segmente A= T (13) cu baze repetabile este denaturat secvenial.
c) Hexamerul DnaB proteine se asociaz cu proteinele DnaC. DnuB helicaza pregtete despiralizarca
DNA pentru sinteza primerului in replicare.
d) Aranjamentul secvenelor n crearea fu rcii replicative ori C.
matrice. Primaza nu solicit iniiator al sintezei. DNAp supravegheaz fragmentul

sintetizat de primaz i nltur toate nucleotidele necomplementare (activitatea
exonucleazic 3' - 5'), posednd funcia de autocorecie, numai dup care ncepe
procesul de sintez catalizat de un complex multienzimatic (holoenzim). Grupa 3'-
OH a ribonucleozidului e un iniiator al sintezei DNA.
Cum se produce elongarea? Se declaneaz un atac nuclcofil al captului '-OH pe
atomul de fosfor (P), n apropierea ribozei din dRNTP ulterioar. Sc formeaz o
legtur fosfodiesteric i se elibereaz pirofosfatul-hidroliza, cruia determin
polimerizarea propriu-zis. Elongarea se produce n direcia 5' 3'.
O'
I
O -P-O '
I
o
0 P-0- 0~
O P-0
o - P -o 0
5 0 3' ; o 5 L o- P-0
5# 6
P r im e r - ' .' I OH 1 OH
te o* I i fc
A $ i t
'a'
@ fi 0 iA- G
D N A tem plat i i m j
si Elongarea catenei de DNA
3 'm "m
D ezoxiriboza
Fenomenul e procesiv, adic enzima adiioneaz multe nucleotide, fiind legat i

dirijat de matrice. Catenele DNA parental nu sunt paralele, adic orientarea sintezei
pentru o caten e 5' 3', iar pentru alta - 3' 5'. Toate DNA cunoscute pn
la moment sintetizeaz numai n direcia 5' - 3'. Cum are loc sinteza celorlalte catene?
R.Okazaki, renumit savant japonez, a determinat c o bun parte a acestei catene se
prezint sub forma unor
segm ente de nucleotide
DNA Lanul lider
g iraza
(100-200 la eucariote i
1000-2000 la procariote)
(fig.2.15).
"DnaB P e rsiste n a lo r e
helicaza frag m en tar, de scurt
DNA SSB RNA prim er durat i se apropie efectiv
primaza RNA n fr.O kazaki
p r im e r dc bifurcaie.
O dat cu avansarea
bifurcaiei, fragmentele se
leag covalent cu ajutorul
DNA-ligazei i se formeaz
Sinteza lanului
succcsor DNAp III catena fiic, catena n care
polimerizarea fragmentelor n
d ire c ia 5' 3' se
produce la nivel atomic, pe
cnd la nivel general se
F igura 2.15. Sinteza fragmentelor Okazaki ex tin d e n d ire c ia
3' -- 5'. Sinteza fiecrui;segment Oka
zaki necesit primer; DNA polimeraza I
sintetizeaz n continuare catena i, avnd
o aciu n e e x o n u c le a z ic , exclude
primercle. In fine, fragmentele vor fi sudate
de DNA ligaze, cu consum de ATP. Dar
fiindc replicarea e bidirecional, pe cea
lalt bifiircaie a replicrii procesul decurge
identic. Datorit fidelitii sporite, se
menine capitalul genetic al speciei (fig.
2.16).
Ce fa c to r i reclam sin te za
primerului? De ce DNAp nu sintetizeaz
catena de novo? S-a stabilit c dac
enzima ar avea o anume capacitate
F igura 2.16. Modelul replicrii n replizont, rezultant, ar fi incompatibil cu fidelitatea
cu replicarea simultan a ambelor catene
nalt a acestui proces. Pentru a forma o
nou legtur fosfodiesteric enzima controleaz perfect geneza perechii de baze
complementare. Funcia de redactor permite reducerea greelilor pn la minimum.
RNAp nu posed o atare funcie i, eventual, apar falsuri de mperecheri. De aceea, se
sintetizeaz un fragment de nucleotide cu o fidelitate joas, dar numai temporar, DNAp
le controleaz i exclude greelile (o eroare Ia 109' 10perechi de baze). Se cunoate c
sistemele enzimatice autocorectoare nu pot iniia
5
sinteza de novo i toate enzimele care iniiaz o astfel
n r
de sintez nu sunt capabile de autocontrol i, n felul 3'
acesta, crete mult numrul de mutaii.
R epararea DNA. Totui, o mulime de reageni
chimici i fizici provoac lezri sttucturale n DNA.
Celulele posed mecanisme specifice de reparare.
Multe modificri pot fi reparate datorit faptului c DNAp
informaia genetic se conine n ambele catene i
poate fi pstrat n secvena de nucleotide, dat fiind
funcionarea unui ansamblu de enzime de reparaie
care controleaz DNA i-l repar. Procesul decurge
conform fig. 2.17. D NAp
1. Una dintre metodele de reparaie o constituie
excluderea dimerului de pirimidin, care apare sub T f r r r m 11
influena razelor ultraviolete:
a) Endonucleozidazele specifice (E) taie catena DNA
ligaza
i fragmentul iese din helix. J i m 11 m
b) DNAp (I) repar, concomitent sintctiznd Figura 2.17. Repararea fragm entului de
normal catena. Ca primer servete '-OH liber al DNA
lanului ntrerupt, iar ca matrice se utilizeaz catena
complementar.
c) Dimerul este exclus sub aciunea exonucleazic a DNAp.
d) Sudarea o execut DNA-ligaza.
Menionm maladia xeroderma pigmentosum n care pielea e deosebit de sensibil
la razele soarelui, la ultraviolet. Epiteliul devine uscat, se atrofiaz, apare cheratoza,
sunt afectai ochii. In consecin, apare cancerul pielii, bolnavii mor de timpuriu.
Studiind fibroblatii pielii, s-a constatat c la aceti
bolnavi nu sunt exclui dimerii pirimidinici. Faptul se expli Rest glucozofosfat
o CT c a c c
c prin lipsa activrii endonucleazei ce hidrolizeaz catena
de DNA n preajma dimerului. G A T A G O
Dimerul poate fi scindat i fotochimic. Toate celulele I D czam inarc

conin enzima fotoreagent, care-1 identific i-l scindeaz, j spontan
G t( u)
utiliznd energia luminii (DNA fotoliaza).
Fluctuaiile termice dezordonate ale moleculelor din ce giis
ia as
G A G GG
lule pot modifica mult starea genelor. DNA al fiecrei ce
U raci!-D N A
lule n 24 ore pierde 5000 de resturi de purin (apurini- glucozidaza
zare), 100 de citozine i pierd grupa NH2(pag.l42 ).
GOT AT
Dimerul de timin (legturile covalente ntre 2T) deja a
fost descris. Cum se menine stabilitatea genelor? 1
GA TAGG
1. n mod analog, cu excluderea dimerului dc timin. Nucleazclc
scindcaz
Alte modificri vor fi excluse datorit funcionrii diverse segm entul n
lor nucleaze de reparaie. care lipsete baza

2. DNA glucozidazele (peste 20) exclud bazele
modificate. S-au depistat multe enzime (circa 50), ce G A G T A G
repar DNA modificat. Care-i cauza c DNA posed ONA-

p o lim craza
timina, dar nu uracilul cu toate c ambele baze se DNA-ligaza
C A. c c
mperecheaz cu adenina. De ce uracilul metilat se identific
numai n DNA? Cert e c metilarea utilizeaz mult energie. CG A C T A G G
S-a stabilit c citozina n DNA spontan se dezamineaz,
fonnnd uracil (proces mutagen). F igu ra 2.18. Uracilul din DNA
Mutatia aprut se repar sub aciunea sistemului de est.e exf ls ?' [nlocult cu hazu
. . . . . _ primara - citozina
reparaie, care identifica uracilul strin (fig. 2.18).
1. Uracil-DNA glucozidaza hidrolizeaz legtura glucozidic a uracilului cu
dezoxiriboza (baza este eliminat).
2. Endonucleaza specific identific defectul i scindeaz scheletul n preajma
bazei n lipsa ei.
3. DNAp sintetizeaz catena include citozina complementar guaninei n catena
intact.
4. DNA-ligaza sudeaz catcna nou-sintetizat.
Prima enzim uracil-DN A glucozidazanu exclude timina, fiindc grupa CH, e
indiccle diferenierii de citozina dezaminal. Dac n-ar fi acel CI L, uracilul adecvat nu s-
ar deosebi de cel format din citozin i defectul ar rmne neobservat, conducnd la o
mutaie.
Sistemul de reparaie solicit un astfel de uracil aprut (mutagen) i las intact timina,
inhibnd mutaiile. Se consider c timina se utilizeaz pentru amplificarea exactitii
informaiei genetice. RNA nu se repar i utilizeaz uracilul ca bloc de construcie mai
ieftin.
Particularitile biosintezei DNA la eucariote
Rcplicarea DNA la eucariote sc desfoar dup un mecanism asemntor cu cel de
la procariote, prezentnd unele particulariti:
1. Replicarea la eucariote este la fel semiconservativ.
2. Complexitatea organizrii materialului cromozomial la eucariote face ca fragmentele
Okazaki s fie mult mai scurte (150-200 nucleotide), fa de procariote (1000-2000
nucleotide).
3. Tot datorit nucleozomilor, furca de replicare se deplaseaz mai lent la eucariote
fa de procariote; la eucariote se adaug lanul de DNA 3.000 nucleotide/min, iar la
procariote 16.000 nucleotide /min.
4. Datorit mrimii moleculei de DNA, la eucariote exist mai multe FR, de unde
sinteza ncepe simultan (~100). Dac ar exista o singur origine de replicare, sinteza
DNA pe un cromozom ar necesita circa 800 ore; dar ntreaga replicare se desfoar n
faza S a ciclului celular, deci n 8-10 ore, ceea ce se explic prin nceperea replicrii
simultan, n mai multe puncte de replicare.
5. Originea furcilor de replicare nu este ntmpltoare de-a lungul unui cromozom; ele
sunt grupate ntr-o anumit zon a cromozomului, alctuind o unitate de replicare sau
replizom.
6. La eucariote DNA-polimerazele sunt de asemenea de mai multe feluri: a, , , 8.
- DNA-polimeraza a este implicat n replicarea DNA nuclear. Este o protein
oligomer alctuit din patru subuniti i se pare c este responsabil de sinteza lanului
succesor.
- DNA-polimeraza are mai degrab un rol reparatoriu datorat aciunii sale
exonucleazice 5' 3'.
- DNA-polimeraza este implicat n replicarea DNA mitocondrial.
- DNA-polimeraza 5 este rspunztoare de sinteza lanului conductor, manifestnd
i o activitate.3' - 5' exonucleazic; este asociat cu o protein numit antigen nuclear,
care-i stimuleaz activitatea.
7. Biosinteza DNA are loc numai n faza S a ciclului celular, separat dc mitoz prin
fazele de gol sintetic G, i Gr n cursul acestei faze DNA nuclear este replicat n ntregime
i o singur dat per ciclu celular; respectarea acestui imperativ este posibil datorit
unor procese de metilare, care marcheaz covalent molecula de DNA ce a trecut prin
experiena replicrii. Metilarea se realizeaz la citozin, formnd 5-metil-citozin i are
loc sub aciunea unor metilaze carc folosesc S-adcnozilmetionina ca donatoare de grupri
metil. Secvcna recunoscut de metilare este: 5-CG-3'
3-GC-5'
La cucariotele superioare un numr restrns de celule se divizeaz activ; cclc mai
multe sunt reinute n faza G(| de nondiviziune. Decizia intrrii din faza G()n G : i apoi S
este luat de proteine cu activitate kinazic, activare prin interaciunea cu diverse cicline,
a cror concentraie sufer modificri profunde de-a lungul ciclului celular.
8. Ritmul sintezei de histone este similar celui de sintez a DNA -ului; n faza S a
ciclului celular cantitatea de DNA i histonele se dubleaz. Cele vechi rmn n nucleozom
pe una din celulele-fiice. Cele noi sintetizate se unesc n nucleozom pe cealalt caten.
Telomeraza
Incontestabil, complexul rcplicativ
se mic pe cafenele antiparalele ale I DNA parental i
dublului helix, simultan n direcii 5------------- I l y L j
diferite. Sinteza unei catene-fiice este
continu, iar cealalt se sintetizeaz 3
sub forma fragmentelor Okazaki, care Replicarea

sunt reparate prin excizie, completate
^ Lanul lider*
cu dezoxiribonucleotide i apoi cusute
Primer
de DNA-ligaz. DNAp pot aduga
nucleotide numai la captul 31 al
catenei crescnde, fiindc nu exist
Prime r
enzime pentru elongarea nucleotidelor
la cap 5'.
Ultima din RNA primer nu poate fi Primerul scurtat
>_3
completat ca replic de DNA, dat
fiind c eventual nu exist ceva ce Gap
necesit prelungire. De aceea, captul
3' al catenei-sens din DNA parental
este nereplicat, iar captul 5' al catenei
antisens-fiic de DNA este mai scurt
i, deci, captul 3' al catenei-sens
parentale este necuplat (fig. 2.19).
Savantul A.Olovnicov (1971) a
sugerat ideea c, potenial, exist un
m ecanism biologic specific, ce
F igura 2.19. Rolul telomerazei n meninerea
prevede efectul dat. Se presupune, de structurii DNA
altfel, c acest posibil mecanism e activ
n celulele sexuale, cancerigene i n celulele organismelor ce se nmulesc vegetativ. Nu
este activ mecanismul n majoritatea altor cazuri i, n particular, n majoritatea celulelor
somatice.
Studiile au confirmat, mult mai trziu, prezena enzimei ce compenseaz scurtarea
DNA n majoritatea celulelor enumerate i ea a fost numit telomeraz transferaz
terminal a telomerei.
Funcia const n creterea unui hexanucleotid repetabil multiplu (TTAGGG) la
capetele DNA nuclear, ce formeaz aa-numita telomer la om. n final, nu se pierde
mesajul genetic i nu e dereglat mecanismul de descifrare a lui. Aadar, problema azi
const n replicarea incomplet a catenei ntrerupte de DNA, ns dac cromozomul
dispune la captul 3' de proeminen unicatenar overheng, apoi are loc o replicare
incomplet i a catenei lider.
Telomeraza prezint o enzim-ribonucleoproteid compus din RNA i protein. Ea
compenseaz marginalitatea replicm obinuite, utiliznd dezoxiribonucleotidc i ca matrice
o parte din succcsiunea RNA, subunitate a telomerazei. Enzima posed funcie de
transcriptaz invers celularrevers transcriptaza.
Telomeraza protejeaz cromozomul de degradare i prentmpin alipirea
cromozomilor ntre ei. E tiut c DNA-polimeraza e capabil s sintetizeze n direcia
5 3', utiliznd RN A-primer ca iniiator, apoi, dup nlturarea lui, captul 5'-terminal
al replicii rmne nereplicat. i, n consecin, la fiecare diviziune celular cromozomii se
micoreaz. Aceste particulariti ale replicrii determin formarea conccptului c
telomeraza posed un mecanism specific deosebit, ce determin longevitatea celulei.
Studiul genelor ce codific subunitile RNA a favorizat aplicarea testelor genetice-
cheie, ce au confirmat c RNA-telomeric dicteaz succesiunea nucleotidelor n
telomerele cromozomiale in vivo.
Subunitatea proteic TRT (Telomerase Reverse Transcriptase) a fost depistat n
organismele filogenetic nenrudite (de la unicelulare pn la om), ce confirm c poate fi
universal pentru eucariote care posed telomeraz.
Unele proprieti ale TRT nu difer de cele ale cunoscutelor revers transcriptaze i
funcioneaz n complexe ribonucleoproteice stabile. S-a stabilit c RT (revers
transcriptaza) SID-ei poate fi transformat n enzima ce funcioneaz ca telomeraz,
preschimbnd simplu ionul Mn~*' n Mg*+. n atare condiii RT (revers transcriptaza) rmne
n complex stabil cu matricea RNA i multiplu copie un fragment mic din lungimea sa.
Aceste enzime posed i unele particulariti ce le deosebesc dc RT cunoscute. Sunt mai
mari, au domeniul N-terminal de baz i o distan neobinuit de mare ntre motivele A i
B. Sunt modificri n resturile aminoacizilor n domeniile RT, care au caracter de
conservatism vdit printre celelalte RT obinuite.
Datele recente pennit reprezentarea schemei construciei moleculare a TRT. Activitatea
catalitic a telomerazei necesit numai 2 componente: RNA i proteina TRT. Un argument
convingtor este reconstrucia activitii telomerazei din subunitile recombinate izolate,
purificate de RNA i TRT. Alte proteine sunt fixate de acest complex i pot avea un alt
rol dect acel de participare la formarea centrului catalitic iau parte la proccsul dc
reglare a activitii telomerazei.
Mecanismul elongrii capetelor cromozomului este redat n figura 2.20. Se alungete
captul 3' al DNA, i datorit lui punctul extrem din replica 51se mic spre dreapta. n
continuare catena complementar se elongheaz, cu implicarea DNA-polimerazci.
Mecanismul sintezei G-catenei de telomeraz se studiaz mult mai intens, dect acel al
sintetizrii catenei complementare C.
Exist, posibil, 2 mecanisme de sintez a catenei C.
a) Prin utilizarea catenei G ca primer, formnd bucle:
Telomeraz RNA templat
B ucla este un su b strat
nefavorabil pentru DNAp care
(a) DNA nu po ate fo rm a p erech i
3'' Watson-Crick; proteinele nu
sunt capabile s se fixeze dc
orice structuri.
b) E mai verosimil mecanis-
IPolimerizarea i hibridizarea mul standard de iniiere a
sin te ze i, cu p a rtic ip a re a
OH<3*> enzimelor care iau parte la
sinteza catenei ntrerupte:
primaza, DNA polimeraza n
complex cu proteinele cores
punztoare:
iTranslocarea i rehibridizarea
-//--------- ------------------------r
--------------------------------------- 5'
5 TTTTGGGGTrTTGGQGTG ;3')^ Analiza telom erelor din
,, diferite organisme denot c
sinteza C-catenei a DNA-
Ic) telomerice are loc la fel ca i la
o replicare bidirecional a DNA
sau, n alte cazuri, fiind rezultatul
Polimerizarea Proteine fixate unei reacii de completare,
de telomere
care substituie fragmentele G-
0 O
CA lant repetabile unicatenare n DNA
(d) TG lant
b ic aten a r telo m eric.
Asemenea reacii de nlocuire
sunt necesare n foarte multe
cazuri de detenninare a lungimii
TRF 1 i TRF2 telomerei. -catena joac un rol
activ n detenninarea numrului
Figura 2.20. Mecanismul elongrii capetelor cromozomiale de repetri pe care telomeraza
le poate aduga la captul
DNA. Replicarea telomerei se afl sub un control complex, implicnd i nucleaze.
S-a confirmat, la mijlocul anilor 1990, c telomeraza ce compenseaz tierea
cromozomilor este o enzim caracteristic pentru celulele cancerigene. n aceste celule
cancerigene telomera este scurt i stabil, iar activitatea telomerazei este foarte intens.
Totodat, activitatea telomerazei nu e detectat n celulele somatice la om, unde DNA
telomeric lung la natere (12-15 mii de nucleotide) se scurteaz cu vrsta, conform
ipotezei expuse.
E studiat suficient telomeraza la Tetrahymena theirnophila care conine peste 40000
telomere la o celul. Aceast enzim e depistat i caracterizat, utiliznd metoda direct,
precum i reacia polimerazic n lan.
Caracteristica fermentativ a telomerazelor (TM):
a) In vitro TM sunt neprocesive, adic alungesc cromozomul numai o singur dat,
cu o telomer repetabil.
Telomeraza la om e un ferment inalt procesiv, ce alungete DNA-primer la sute de
repetri. Procesivitatea e dependent de anumite condiii. S-a stabilit c dac primeml
are o lungime mai mic dect 10 nucleotide, el se alungete o singur dat. Procesul
poate fi intensificat, dac se adaug din abunden oligonucleotide. Dac primeml are
mai mult de 10 nucleotide, procesul devine procesiv i DNA poate conine mii de
nucleotide.
Se presupune c n telomeraz, pe lng fragmentul-matrice al RNA, e prezent i un
alt fragment de fixare ancor- site. E posibil c primerii majori se fixeaz de acest
fragment, ceea ce evit disocierea produsului i-i permite telomerazei s funcioneze
procesiv. Exist modele schematice referitoare la acest proces.
b) Specificitatea de substrat elongaia primerilor netelomerici are loc la o
concentraie de M g^ nu mai puin de 1,25 mM i n lipsa de K.+i Na+. Primar e alungit
captul 3' cu blocul dGGGGT. Eficacitatea e dependent de structura primar att 5', ct
i 3' a oligonucleotidelor. Telomeraza cu aceeai eficacitate utilizeaz n catena
polinucleotidic dezoxi, precum i didezoxiribonucleotid trifosfai. n ultimul caz are loc
finalizarea sintezei DNA.
n calitate de substrat se utilizeaz rGTP i rTTP, procesul e procesiv la concentraii
de 10-100 mkM de rTR. Pot fi utilizai i primere DNA-RNA. Ca substrat, ns, mai
convenabil din punct de vedere termodinamic este duplexul RN A-RNA.
Cele descrise, precum i datele dc secven aminoacidic n proteina telomerazica
p95, confirm c evolutiv tclomerazele au provenit din RNA polimeraze RNA-
dependente.
c) Activitate exonucleazic i permite s hidrolizeze att primerile, ct i produsele
sintezei femientative. Ea nltur toate resturile nucleotidice netelomerice i ncepe sinteza
DNA ntotdeauna cu dG (la procariote, la eucariote date deocamdat lipsesc). Care-i
sensul acestei activiti? Activitatea de corecie determin o sintez corect, aseamntoare
cu RNAp DNA dependent.
Structura i funcia RNA telomerazice. Sinteza la om a acestei subuniti
j determinat dc RNAp III, la eucariotele primare de RNAp II. Conservatismul n
structura RNA e foarte mic, chiar i la organismele nrudite.
Structura primar difer nu numai n succesiunea nucleotidelor, dar i n lungimea
lor, care se mrete spre eucariote.
La majoritatea RNA telomerice regiunea matriceal se afl la o deprtare de 50
I nucleotide de la captul 5'. Omologia e foarte mic i la genele RNA telometrazice
I coincidena la om i oarece este de 65%.
Structura secundar e bine studiat la tetrahimene: compus din 4 bucle i un
I fragment unicatenar, ce conine matrice pentru sinteza DNA tclomcrice. Unele sunt regiuni
I conservative, altele formeaz unghiuri una fa de alta (60), motive ce ar fi recunoscute
I de proteinele telomerazice. Se presupune i prezena ccntrului fermentativ (fig. 2.21).
Un component al centrului activ este regiunea matriceal a RNA telomerazicc. Orice
modificare n aceast secven a RNA
telomerazic conduce la modificri
complementare n structura primar a
telomerei.
A ceste schim bri (m utaii) nu
modific activitatea telomerazei, dar
modific telomera, cu consecinele
respective o mbtrnire precoce sau
moartea celulei. Dac unele mutaii se
ra 2.21. Structura secundar a RNA telomeruzice
manifest imediat, apoi altele acioneaz Flaigu tetrahimene
ca o bomb genetic, ce va aprea dup
600 replicaii, conducnd la o cretere necontrolat.
E clar c, pe lng funcia sa de matrice pentru sinteza DNA telomerazic, RNA
telomerazic ia parte la funcia catalitic a telomerazei.
A fost realizat reconstrucia activitii telomerazei i la om. S-a stabilit c fragmentul
funcional ntre 1-203 resturi; fragmentul 1- 44 spre 5' terminal nu e esenial pentru
activitatea fermentativ, iar mutaiile ntre 170 -199 complet inactiveaz enzim. Posibil
c aceast regiune interacioneaz cu proteinele telomerazice.
Proteinele complexului telomerazic.
Spirala dubl de DNA telomeric umana este fixat de proteina TREI, care modific
conformaia DNA, formnd o
superspiral. n care o rotaie e
format din sute de perechi de
baze. S -a constatat recent c o
alt proteinTRF2, ce se leag
la captul 5'-terminal al catenei C,
fixeaz telom era la baz
(trunchi), cu formarea unei bucle
telom erice gigant (t-bucl)
comparabil cu dimensiunile
telomerei (fig.2.22).
Structura domenic a TRF1 e
redat schematic n desen.
Ca proteina s interacioneze cu
acidul nucleic este necesar
oligomerizarca polipeptidelor
pentru care i servete TRF
o
domenul. Fiecare molecul de
TRF1 am
H,N T~1 TRF 1nfoar DNA sub un unghi
TRF2 coon
H,N-CZ ~n de 120. E x p erim en tal s-a
0 constatat c n prezena TRF1 e
Figura 2.22. Modelul schematic al buclelor telomerice i
facilitat circulaia moleculei
structura domenic a proteinelor telomerice T R F l i TRF2.
Structura domenic a proteinelor telomerice TRFI i TRF2 scurte de DNA, compus din
segmente telomerice repetate, ce confirm rolul proteinei n formarea structurii spaiale
telomerice.
Proteina TRF2 dup structur e asemntoare cuTRFl, dar domenul final nu interacioneaz
cu domeniile omoloage ale reprezentantei urmtoare din familia respectiv i deci ambele
proteine n molecul pot exist n fonn de homodimeri. TRF2, ca i TRF1, n consecina
splaisingului alternativ formeaz dou variante.
S-a constatat c TRF2 se ataeaz n regiunea contactului telomeric cu baza (desenul).
Buclele telomerice s-au depistat n cromozomii celulelor HeLa, n leucocitele periferice la om,
n hepatocitele oriceilor etc. Cele mai mici bucle conin circa o mie de perechi de baze.
Fixarea TRF2 la captul cromozomului necesit un segment de DNA telomeric ce conine nu
mai puin de 6 nucleotide (TTAGGG). Cu ct mai multe sunt segmentele repetabile, cu att
procesul de fixare e mai favorizat. Se consider c n acest ioc DNA unicatenar-3', hibridizat
cu poriunea antiparalel parial desfurat a spiralei duble trunchi, fonneaz aa - numita
bucla-d (displacement loop).
Consecinele fenotipi.ee n modificrile activitii proteinelor TRF. Lungimea
telomerelor este asociat cu vrsta celulelor fenotipice. In celulele somatice, graie lipsei
telomerazei sau a altor cauze, numrul segmentelor repetate telomerice se micoreaz la
fiecare diviziune celular. La fibroblati in vitro, dublarea numrului de celule duce la
micorarea telomerei cu 48-21 perechi nucleotidice. In vivo, la fibroblatii umani valoarea
e de 75 perechi la o mitoz. Telomera celulelor sanguine periferice la copii pierde mai mult
de 1000 perechi nuclcotidicc n an. Sc consider c ntre 4 i 20 ani telomerele se micoreaz
mai ncet, dar la vrst matur i senil se micoreaz cu o vitez constant de 30-60
perechi nucleotide anual.
Cu vrsta, telomerele ating o lungime critic, la fibroblatii omului circa 5-7 mii perechi, la
care apare o mbtrnire replicativ i n consecina inhibiia i stoparea proliferaiei.
Expresia artificial a telomerazei prentmpin mbtrnirea i e posibil de imortalizat celulele
respective, ce ntlnim n celulele cancerigene. n ultimele inhibnd telomeraza, e posibil stoparea
rspndirii celulelor.
S-a constatat c expresia proteinei TRF 1n cultura celular duce la o mitoz prematur i
moartea celulelor. Reglarea expresiei permite celulelor s supravieuiasc, dar dup cteva
cicluri celulare are loc micorarea telomerelor. n condiiile de inhibare a sintezei TRF1 n
celule, ce exprescaz telomeraza, are loc o cretere lent a lungimii telomerelor. Posibil, TRF1
favorizeaz fonnarea t-buclei, mpiedicnd creterea telomerelor din contul activitii
telomerazice. S-a artat c TRF 1 in vitro inhibib lungirea catenei - telomerice.
Inhibiia proteinei TRF2 conduce la o stopare imediat i ireversibil a proliferaiei. La
modificri morfologice n celulele, caracteristice mbtrnirii i induciei markerilor celulari ai
procesului, cromozomii formeaz structuri inelare, neperznd segmentele telomerice. n
telomerele nemodificate dispar segmentele unicatenare, far modificri n activitatea telomerazei.
Se confirm c nu telomera apar cromozomul de nucleaze, de adiie i niperi n mitoz -
asta-i funcia proteinei TRF2.
Creterea concentraiei de TRF2 n cultura de fibroblati conduce la majorarea vitezei dc
micorare a telomerelor n procesul de mbtrnire. Efectul nu duce la o mbtrnire
precoce celulele continu s prolifereze. Dac numrul limit la o mbtrnireede
6-7 mii perechi nucleotide la celule in control, apoi la cele care expreseaz mai mult TRF2
aceast limit e de 2-2,7 mii de perechi mai mic, ce permite ca ele b se divizeze de i 5 ori
mai mult pn la mbtrnire. De altfel, sunt prentmpinate alipirea i ruperea cromozomilor.
Se consider c nu lungimea telomerei e cardinal pentru inducerea mbtrnirii celulare, ci
starea lor, determinat de funcia protectoare a proteinei TRF2.
Experimental s-a demonstrat c inhibiia TRF2 nu numai c conduce la modificri
fenotipice caracteristice mbtrnirii, dar i provoac modificri genetice: alipirea cromozomi lor,
activarea p53, creterea concentraiei p l 6, micorarea nivelului ciclinei A i
hipofosforilarea pRb. Inactivarea simultan a p53 i pRb prentmpin mbtrnirea
celulelor experimentale, determinat de inhibiia TRF2. Proteina p53 are o afinitate major
faa de segmentul unicatenar al telomerei, ctre locul de fixare a t-buclei i favorizeaz
formarea ei n prezena TRF2.
Reglatorii naturali ai proteinelor TRF umane.
Efectul TRF2 asupra telomerei e stabilit cert n condiii de experiment, dar modulatorii
proteinei nu sunt nc identificai. A fost identificat proteina hRapl, care are influen,
fiind fixat pe telomere, dar ea poate interaciona i cu alte poriuni ale cromozomului.
Proteina TRF1 uor modific lungimea telomerei, fiind reglat in vivo diferit.
Proteina TRF 1 poate fi poli-ADP-ribozilat, cu disocierea consecutiv de la DNA. O
aa modificaie spaial e catalizat de tankiraz (poli-ADP-ribozil-polimeraz ankirat
de telomer). Proteina (K.F.2.4.2.30) e partener al TRF 1, care ptrunde n nucleu i n forma
sa neactiv e fixat de proteina telomeric. Dup activare, tankiraz poli-ADP ribozileaz pe
sine, ct i pe TRF 1, ce conduce la disocierea complexului nucleoprotidic i eliberarea
telomerelor. Ultimele sunt disponibile pentru aciunea telomerazelor i a altor enzime.
Tankiraz se consider reglator pozitiv al telomerazei.
La om i la vertebrate sunt depistate dou izoforme ale tankirazei TNKS (1) i
TNKL (2) cu masa molecular, respectiv, de 142 i 127 kDa. Tankiraz posed un
domen enzimatic, alt domen fixat (ankorat) compus din 24 repetri i al treilea domen-
SAM; ultimele particip n interaciuni proteo-proteice. Tankiraz 1, spre deosebire de
tankiraz 2, posed i un domen suplimentar - N-terminal domen, care deocamdat nu-
i asociat cu nici o funcie. Nu are localizaie nuclear i majoritatea enzimei se gsete n
citozol, unde este supus fosforilrii i activrii de MAP-kinaza. Nu e clar dac enzim activ
este transferat n nucleu sau pulul nuclear al tankirazei este activat de M AP-kinaz
(proteinkinaz, activat de mutageni).
Ultima poate fi translocat n nucleu. MAP-kinaza este reglat de insulin i factorii de
cretere i se consider c graie tankirazei organismul menine telomercle celulelor sub controlul
hormonal.
A fost depistat o alt protein telomeric, ce interacioneaz cu TRF1 numit TINF2
(TRF-1-interacting nuclear factor 2) cu o mas molecular aproximativ de 40 kDa.
Structural e asemntoare cu proteinele TRF, avnd la captul C-tenninal un domen fixator
de DNA de tipul Myb. Acest factor favorizeaz scurtarea telomerei i negativ regleaz
activitatea telomerazei, intermediind efectul TRF1. Mecanismul de aciune aTRFl const
nu numai n superspiralizarea DNA i favorizarea formrii buclei t. Graie interaciunii cu
diferite i multiple proteine TRF 1, le poate conccntra n apropierea telomerelor. Ea poate
fixa proteina PinXI-inhibitor, puternic al telomerazei, care acioneaz direct asupra enzimei,
spre deosebire de ali modulatori, care vizeaz disponibilitatea telomerelor.
Recent, s-a depistat o alta protein telomeric - Potl, ce se fixeaz de segmentul
unicatenar. Posibil, funcia proteinei respective const n protejarea acestui fragment de efectul
nucleazelor, agenilor chimici, radiaiei. Pot 1 (Protection O f Telomeres)un polipeptid
de 71 kDa, interacioneaz cu TRF1. Acionnd asupra procesului de fixare a Potl,
proteina TRF 1, concentraia creia este proporional cu lungimea telomerei, transmite
la capetele unicatenare informaia despre mrimea total a DNA telomerice. Toate
proteinele cunoscute i necunoscute ale complexului nucleoprotidic fonneaz telozoma.
E de constatat c numai unele proteine telomerice au omologie la alte eucariote. n
organismele model nu au fost depistate toate proteinele cunoscute n genomul uman. Evoluia
a parcurs alt cale, dar studiind, se poate obine informaie utilizant.
Telomera si sistemul reparativ
Radiaia ionizant i ali factori nocivi provoac rupturi n DNA bicatenar - DSB (Double
Strand Break). De altfel, transformrile n DSB sunt considerate ca metod de reiniiere
a furcilor replicative lezate, ce prentmpin dublarea normal a cromozomilor n faza S.
Deosebim 2 ci concurente de reparaie a DSB: 1) mperecherea cromozomilor omologi,
recombinarea i resinteza catenelor scurte; 2) legarea neomologic a capetelor DNA (NHEJ
- Non-I Iomologous End Joining). Se consider c prima cale predomin n fazele S i G,
ale ciclului celular i la celulele ce se nmulesc activ (drojdiile), a douan fazele Go, si G ,
i la cclulele ce se divizeaz rar (fig.2.23).
C apetele telom erei,
dac nu sunt protejate de t- M - M itoza (diviziunea nuclear) i
bucl, sunt identice cu DSB citokineza (diviziunea celular)
Go - C e l u l e l e
i trebuie s fie reparate G , - Sinteza DNA stopat. difereniate definitiv,
Continu sinteza RNA i
fie p rin fo rm area a proteinelor eite din ciclu l
c e lu la r p e tim p
cromozomilor inelari sau a nedefinit
cromozomilor cu dou sau P - Punctul de reintrare -
celula rentoars din Go
mai multe centromcrc, dup ntr n faz G1
mecanismul NHEJ. Ultima se
G1 - Sinteza RNA i a
observ n celulclc cu proteinelor. Sinteza DNA
telomere scurte la limit. e stopat
Indiferent de mecanismele S - D ublarea DIVA n PR - P unctul de restricie

celul cu sinteza RNA i a celula ce trece acest punct i se
reparative att DSB, ct i permite s treac n faza S
proteinelor
telom erele neprotejate
activeaz proteinkinaza F igura 2.23. Ciclul celular la eucariote (n ore)
ATM, ce succede n activarea
p53 i la blocarea proliferaiei, induciei mecanismelor celulare ale mbtrnirii i apoptoza.
Cnd ns se fonneaz bucla-t, segmentul unicatenar telomeric se mperecheaz cu trunchiul,
tind recombinaia i n anumite condiii stimuleaz reconstrucia catenei DNA.
n componcna complexului nucleoprotcidic la om. ca i la drojdii, e prezent permanent
proteina Ku - o component a cii NHEJ. E compus din dou subuniti diferite cu
masa molecular de 69 i 83 kDa (Ku 70 i Ku 80). Depistat n anii 80 ca autoantigen,
la care, la unii bolnavi cu maladii autoimunc, se formeaz anticorpi utilizai n donare.
Proteina leag rupturile n DNA nu numai n zona telomeric, dar i n orice alt consecuti vitate
cu fisuri uni- sau bicatenare i posibil prentmpin degradarea acizilor nucleici. Isuficiena
proteinei Ku duce la generarea unor compui cu erori (deleia) multiple.
La mamifere, fixarea Ku pe DNA duce la formarea unei proteinkinaze-DNA
dependente (DNA-PK) compus din dou subuniti Ku i a treia subunitate catalitic (DNA-
PKCS), activat graie fixrii celor dou. Participarea Ku n funcionarea telomerelor se studiaz
intens i unele date confirm c durata vieii i simptomele precoce ale mbtrnirii la
oricei sunt rezultatul inactivaiei genelor, ce codific subunitile Ku. Date analogice s-au
nregistrat i pe cultura celulelor de om. Rolul diferii n procesele de reparaie a DSB i n
protejarea telomerei e explicabil, graie faptului c ambele sunt contrare dup sens. Se
consider c Ku are numai funcie de protejare i evaluarea proceselor e n dependen de
proteine specifice fiecrui proces: fie TRF sau sistemele de reparaie i recombinaie. Dup
fixarea proteine Ku i activrii DNA-PK, n reparaie particip multiple proteine. Printre
ele i complexul Rad 50/Mre 11/Nbsl. Aceste proteine sunt implicate att n recombinaii
omologe ct i n meninerea integritii telomerei.
Proteina Rad 50 (Radiation mutant 50) are omologie i la om, dup form seamn cu
miozina. Are aceeai mas molecular 153 kDa. Polipeptidul arc dou domenii ce
leag DNA, aranjate la capetele N- i C-terminale, care posed activitate enzimatic
ATP-azic. Identitatea aminoacidic e de 50%. Domeniile enzimatice sunt legate cu un
segment superspiralizat, aranjat sub un unghi nZ-motiv n centrul moleculei. Domeniul-Zn de
legtur servete pentru dimerizaia Rad 50, ce va menine simultan moleculele de DNA,
aranjate la o distan de 1200.
Mre 11 (Meiotic recombination 11) este o nucleaz, care-i prezent att n drojdii, ct i n
lumea animala i om. hi reparaie, proteina degradeaz buclele i alte structuri incorecte n
molecula de DNA. Complexul Rad 50/Mre 11 posed activitate att endo-, ct i cxonucleazic
n dirccie 3' 5'. Funciile acestci proteine nu sunt identice n reparaie i n meninerea
structurii telomcricc.
Al treilea component ai complexului n-are omologie la drojdii i la om. La om este o
protein - nibrina (Nbs 1 - Nijmegen breakage syndrome), mutaia creia la nivelul celular
provoac modificri asemntoare cu mutaia ATM (Ataxia-Telangiectasia Mutated), dar cu
o clinic diferit. Ambele molecule (Nbs 1 i ATM) iau parte la transmiterea semnalului n
aceeai cale. Nbs 1 moduleaz activitatea enzimatic a Rad 50 i Mre 11 i-i transmite
complexului capacitatea de a relaxa dublul helix de DNA n prezena ATP.
Informaia despre mecanismele n funcionarea complexelor proteice este insuficient, dar
se poate, la moment, clasifica proteinele respective n unntoarele gmpe:
a) proteinele ce menin structura spaial a telomerei (TRF);
b) proteine ce determin i cauzeaz formarea hcterocromatinei telomerice, moduleaz
activitatea genelor, incluzindu-le n hetero-cromatin (Rap, Rif, Sir, acetilazele histonice,
metiltransferazele);
c) proteine ce realizeaz repararea telomerelor distinse, posibil negativ regleaz
mrimea lor nucleazele (Rad 50/Mre 11/Nbs 1 i Ku);
d) proteinele-semnale ce transmit informaia despre starea telomerelor altor structuri
(subcelulare) i iniiaz mbtrnirea celular i apoptoza (PK ATM, p53, pRb), i altele ce
regleaz proliferarea i moartea celulelor.
mbtrnirea molecular i dependent de ea, regenerarea esuturilor sunt probleme,
studiul crora continu intens. Sunt deocamdat cunoscute dou tipuri de mbtrnire rapid
patologic, mecanismele moleculare ale crora fiind studiate. Sindromul Verner sau
progeria btrnilor determinat de mutaia n gena helicazei (112), ce ngreueaz replicarea
DNA i proliferarea celulelor. Bolnavii decedeaz de blrnee la vrsta dc 35-50 ani. Sindromul
Hatcimon-Gilford sau progeria dependent de mutaia laminei A (113), ce ngreueaz
proliferarea, ca consecina a disfunciei membranei celulare, nbtrnirea apare pn la 20
de ani. In ambele cazuri anomaliile genetice duc la inhibiia patologic a rennoirii esuturilor,
care nu este consecina scurtrii telomerelor. Imbtrnirea natural e cauzat de istovirea
limitei I layflick - mrimea telomerei se apropie de limita 1-2 mii perechi nucleotide, necesare
pentru formarea t-buclei. E posibil c mecanismul telomeric al mbtrnirii e cauza
schimbului natural al generaiilor la om.
Sunt depistate proteine noi telomerice (studiu bazat pe omologie cu cele cunoscute);
s-au stabilit i genele ce le codific. Spectrul funcional al acestor proteine e foarte variat:
regleaz nmulirea celular, transcripia genelor, semnalizarea celular, transmembranar,
modificaia RNA-mesager, transportul vczicular, fonnarea complexelor multiproteice.
D uplicrii numeroase ARS Abflp Ttflp

internale fat de X
Asocierea temporal a telomerei

-orin factori SlK 2-4. RAP. etc. /
Recombinare tntra-
i extra grupal
terminal detection
Recombinare teloraeric
X-internal este inhibat
Succesiuni unicale
Centru! X
Factorii silencing
Nuclcu
Factorii de ancorare
RAP1, alii
F igura 2.23a. Schema arhitecturii nucleului

Un numr limitat de organisme nu posed activitate telomerazic i menin lungimea
telomerei prin alte mecanisme: posibil, prin recombinarea sau transpoziia unor fragmente
mici - durata i viteza transpoziiei sunt strict controlate de celul. Se presupune
participarea telomerei, n afar de replicarea i formarea Chep, la organizarea nucleului
i a cromozomilor, segregaia meiotic i mitotic. Se atest c poziia telomerelor n
nucleu e perfect specializat i depinde de interaciunea lor n membrana nucleului; au
tendina de a forma claustru de partea nucleului, contrar cromocentrului (fig. 2.23a).
Telomerele intcracioneaz (claustre), formnd complexe poliproteice direct sau
indirectprintr-un component al membranei nucleare. O astfel de interaciune, posibil
i cu matricea nuclear, are atribuie la represia genelor.
Genele aranjate n vecintate sau la captul telomerei sunt expuse represiei
transcripionale nestabile efect telomeric de poziie. Ultimul e strns legat de procesul
excluderii genelor (silencers - inhibiie) proces transcripional ce determin tipul de
conjugare.
Silencers const n formarea unei structuri cromatinice speciale de represie, cu
participarea unor proteine specifice.
R eglarea telom erazei n celulele som atice normale. La anumite etape ale
dezvoltrii, i unele celule specializate somatice posed activitate telomerazic, care se
regleaz foarte fin i precis. Ca reglatori pot servi unii factori de cretere.
Concluzii:
a) Nu s-a depistat activitatea telomerazei n celulele somatice normale difereniate
terminal. De exemplu: fibroblatii, fie c se gsesc n stare normal sau proliferativ.
Deci, determinanta primar a activitii telomerazice e originea celulei de anumit tip.
Activitatea telomerazei integral e dependent exclusiv de capacitatea celulelor la
autorestabilire.
b) Al doilea factor ce influeneaz asupra activitii telomerazice e activitatea mitotic
celular. Activitatea telomerazei se evideniaz n celulele mai primitive, bazale i
proliferative.
c) Activitatea telomerazei se regleaz n procesul ciclului celular. Un factor decisiv n
reglarea activitii telomerazice ar trebui s fie nivelul expresiei genelor proteinelor ce
fonneaz centrelc catalitice ale telomerazei. Reglarea fin e dependent i de reglarea
sintezei proteinelor asociate cu telomeraza i genele RNA matriceale.
Activatorii i inhibitorii telomerazei. Reglarea sintezei DNA de diferite preparate
vezi fig.2.32.
Dup cc a fost determinat legtura ntre activitatea telomerazic i oncogenez,
senilitate, se exploreaz dou direcii:
a) crearea DNA antisens fa de telo-RNA i
b) studierea inhibitorilor revers transcriptazelor.
Ca inhibitori servesc oligonucleotidele modificate, complementare regiunii-matrice a
RNA-telo. Ele sunt rezistente la aciunea proteinelor i a nucleazelor. Atare nucleotide
se fixeaza n mod specific de matricea RNA-telo a omului, efectiv inhibnd activitatea
telomerazic in vitro. In vivo apare problema transportului inhibitorilor prin membrana
celular i micarea dirijat n nucleul cclular.
3 '-A z id o -2 \3 '- dideoxitimidina (AZTi 2 ,3 - didioxiinozinaD D I)
Ca inhibitori au fost testai i inhibitorii revers transcriptazelorazidotimidina (AZT),

dideoxiguanozina (DDG), 2\-dideoxiinozina (DDI). Efect semnificativ asupra
celulelor imortalizate de om nu s-a nregistrat. Dup micorarea iniial a lungimii telomerei,
dimensiunea se stabilizeaz i efect asupra proliferaiei, morfologiei celulare nu se mai
atest. Studiul, eventual, va continua.
TRANSCRIEREA (BIOSINTEZA RNA)
Spre deosebire de replicare, care antreneaz simultan
ntregul cromozom, transcrierea vizeaz numai anumite poriuni
de DNA, i anume acelea care codific proteinele necesare -c G -
celulei la momentul dat. Structura RNA este concludent, - u A
dictat de structura matricei, ln vivo, transcrierea este asi - u A
metric, adic ntr-o anumit regiune se copiaz o singur A T
catena de DNA, desemnat drept caten sens, spre G -
deosebire de cea netranscris caten antisens. - G -
n 1961, Sol Spiegelman elaboreaz metoda hibridiz IG C
rii, ce const n ncalzirea dublului helix DNA; depind L a T
temratura de topire, el trece ntr-o form unicatenar. La G c-
rcirea lent a soluiei, catenelereasociaz i formeaz dublul
3
helix cu o structur nativ. Dublul helix se formeaz numai n Catena Catena
cazul n care catenele de DNA provin din organismele unei RNA DNA
specii sau ale speciei nrudite. Dac secvena bazelor din
Figura 2.24. Secvenele
mRNA e complementar, apoi n combinarea catenelor de compl ement ar e
DNA i RNA trebuie s formeze fragmente hibrid DNA- formeaz hibridul RNA-
DNA
RNA (fig. 2.24).
Experimentele au demonstrat c succesiunea bazelor azotate n mRNA sunt
complementare succesiunii DNA matrice. n 1960 a fost descoperit enziina ce sinte
tizeaz RNA corespunztor succesiunii din DNA matrice.
Pentru sinteza mRNA sunt necesarc:
1. Matricea DNA de preferin dublu helix;
2. Precursori activai cele 4 ribonucleotide ATP, GTP, CTP, UTP;
3. Ionii de M g^ sau Mn4'*';
4. Enzim RNAp, ca i DNAp, necesit zincul pentru funcionare;
5. Sinteza are loc n aceeai direcie 5' 3'. E analog i mecanismul de elongaie
a lanului nucleotidic favorizant atacului nucleofil al fosfatului intem din unntorul ribonu-
clcotidtnfosfat de grupa '-OH ai catenei crescnde. Fora motrice a procesului e hidroliza
pirofosfatului respectiv.
Particularitile procesului de sintez RNA:
a) RNAp nu neccsit prezena primerului; I
b) DNA matricea se pstreaz intact; fl'v
c) RNAp nu posed proprieti nucleazice.
La eucariote deosebim trei RNAp: RNAp-I ce asigur
sinteza rRNA 28 i 18S; RNAp-II-mRNA i acele RNA care Figura 2.25. Structura
RNA polimerazei !a E.coli
pot fi marcate la capete; RN Ap-III asigur sinteza tP.NA i
5S rRNA. precum i RNA mult mai mici. RNA-polimeraza folosete infonnaia nscris
n DNA matrice, acest fapt este argumentat experimental (succesiunea bazelor n mRNA
e ntocmai copia complementar a succesiunii lor n DNA matriceal).
RNAp este o enzim compus din cteva subuniti (a ,a , !), adic e o
holoenzim (fig.2.25). Sigma subunitatea alege segmentul de iniiere. Enzim fr sigm
poart denumirea decore ferment (ferment minim): a subunitile sunt centrele
catalitice, ' se leag de DNA, iar subunitatea fixeaz substratul
ribonucleotidtrifosfaii. Sinteza decurge n mod similar, implicnd unntoarele etape:
I. Iniierea sintezei ncepe n anumite fragmente de DNA, cu o secven specific
ce poart denumirea de promotor. n promotor particip aproximativ 40 de nucleotide
i deosebim dou locusuri unul de recunoatere, depistat cu ajutorul subunitii sigma,
i o alt secvenlocusul de legare lax a RNA-polimerazei. Sigma amplific afinitatea
enzimei pentru acest locus de IO4ori n raport cu alte locusuri de pe DNA.
1.0 importan deosebit i se atribuie locusului de recunoatere (7 nucleotide) situat
la o distan de 25 nucleotide de locusul de legare i circa 10 nucleotide de punctul de
iniiere (+1). Punctul de start al transcrierii va dicta captul 5' al transcriptului primar
RNA. Promotorii sunt situai n amonte i notai cu minus (convenional). Secvenele n
aval fa de punctul de start sunt notate cu plus.Se considcr c secvena Pribnow la
procariote sau Hogness la eucariotc e responsabil de exactitatea iniierii (fig. 2.26).
Punctul de iniiere
A. Prom otorul procariot -15 bp 9-18 bp i ? i\.
+ 1 T )TR
S ecvene Pribnow ( 5----------- *-
5 Transcript RN A
B. Prom otorul eucariot H o g n ess

Punctul start
(R N A p II) 40-200 bp _________ _ -25-35 bp
1
f f io f i'o n f c r *
G C casete casete TATA casete
54ilJTR,
Transcript RN A
P unctul start
C. Prom otorul eucariot
(5s tRNA )
51--------- ---------------------------------------- Transcript
Figura 2.26. Secvenele tipice n promotor la pro- fi eucariote
2. Sigma activeaz identificarea secvenelor de RNA-polimeraz.

3. De asemenea ia parte la desfacerea dublului helix al DNA pentru ca aceasta s
serveasc drept matrice i conlucreaz la fonnarea primei legturi fosfodiesterice n noua
caten a RNA.
Complexul de iniiere e format, sigma-subunitate e disociat de la holoferment i
cor fermen tul continu procesul de elongare. Sigma se ataeaz la alt corferment i ia
parte la iniierea unui alt ciclu de transcriere (fig. 2.27).
II. Elongarea decurge dup acelai mecanism descris mai sus. O molecul de RNAp
sintetizeaz tot transcriptul fenomenul e procesiv i activeaz cu o vitez de 50
nucleotide pe secund (fig. 2.28). RNAp nu controleaz catcna sintetizat, reduendu-
se precizia. Se comite o greeal la IO40
nucleotide sau de 105 mai multe dect n
DNA.
RNAp III. Finalizarea transcrierii: se reglea
z foarte fin, la nivelul unor secvene nu-
cleotidice specifice de pe catena DNA ce
conin un numr mare de G, C, T, recu
noscute de RNAp. Un rol important l joa
c proteina p (rho), care se asociaz cu
enzim i se mic cu ea. La identificarea
semnaleleor de terminare coboar de
pe matrice, ncetnd aciunea enzimei i
producnd transcriptul cu folosirea ener-
giei ATP. T ran scrip tu l o binut e
autocomplementar i poate forma pe
Q i Enzim cor
rechi de baze, ceea ce genereaz struc
turi simetrice, favoriznd expulzarea lui din
proces (fig. 2.29).
F ig u r a 2 .2 7 . Iniierea transcrierii i fo rm a rea Dac catena se extinde n direcia
complexului de iniiere. Reciclarea factorului sigma 5' 3', este evident c enzim RNA-
polimeraza se mic pe DNA n direcia
3' 5 '(antiparalel).
(b) Dirccia transcripiei
Figura 2.28. Transcripia la E.coli. a) RNAp fi procesele ce sunt cauzate de activitatea ei, b) direcia
elongrii
Dup procesul de transcriere con
tinu fonnarea moleculelor funcional \R N A p \
active de RNA aa-num itu l " 3'
J\ ' aten a
procesing, care const n unntoarele: CTACCCGCTAAGCCCTATCTTAOCOQA/ , _.
IIIHIIUIIIlUinilllllilIllilll tem p lat
1. Cap-area. La captul 5' este ----------G
V
A T G G G e G A T T C G G O A T A G A A C C C C r A A
, -
A A A T -
adiionat guanozina metilat. n c ,

51/ C"> o-o
o-
proces sunt utilizate ca substrat GTP, O (5
0 0
iar donator de grupe C H 3 este O
c -<
o
adenozilmetionina. Sunt implicate >-D
>-=
0*y
enzimele: fosfohidrolaza, guanil
transferaza i metil transferazele. V
F igura 2.29. Terminarea independent de Rho
2.Poliadenilarea. La 3'o secven
mare de A (100-200). Acest fe
nomen are loc pn la terminarea sintezei ntregii molecule (e catalizat de poli-A-
polimeraz). Astfel de coad e necesar pentru exportul moleculelor de RNA din
nucleu.
3. Se modific bazele i resturile glucidice 2'-OH este metilat (1:100) de S+-
adenozilmetionin, la procariote6-dimetil-adenina;se atest n tRNA, dealtfel
i pseudouridilatul, ribotimidilatul.
4. Modificarea intensiv pe care o sufer transcriptul primar const n scurtarea lui.
S-a constatat c mRNA nuclear este mult mai lung dect acelai mRNA ajuns n
citoplasm. S-a ajuns la concluzia c RNAp realizeaz o reproducere primar identic
cu ntreaga gen, apoi intronii sunt excizai i exonii se leag ntre ei, fonnnd mRNA
matur, traductibil (fig.2.30).
Transcripia
DNA V
Kxort Intron
..C a p
Completarea
transcriptului primari
Transcriptul primar Segvene necodificatc
Clivarea, poliadenilarca
i splaisingul
F igu ra 2.30. Formarea transcriptului primar i maturizarea RNAm la eucariote
- 133-
Secvenele intronilor au dimensiuni de 10-100 ori mai mari dect exonii.
Cum se manifest excizia intronilor? Aa-numitul splicing are loc n nucleul celulei.
a) unele enzime specifice identific secvenele de baze la jonciunea intron-exon
(excizia pe introni este o excizie incorect i conduce la generarea unui RNA inactiv ce
conine un intron rezidual. n unele -talasemii are loc descreterea sintezei a lanurilor
-globin);
b) n excizia intronilor un rol important i revine unei categorii de RNA nuclear cu
mas molecular mic, desemnat RNA U (snRNAs), care are o secven a bazelor
complementar cu secvenele de la capetele fiecrui intron. Intronii sunt scoi de
RNA nuclear i capetele exonilor corect juxtapuse, apoi sunt sudate ntr-un aparat enzi-
matic specializat (fig. 2.31);
Intron
Figura 2.31. Sudarea exonilor i excizia intronilor de snRNAs
c) Thomas Cech a stabilit c pentru excizia intronilor i sudarea exonilor n epru-

bet e nevoie numai de RNA, ioni Mg2-*4- i guanozin. Molecula n spaiu ocup atare
poziie, nct capetele secvenei de introni se localizeaz foarte aproape. Excizia i
sudarea decurs n regim autocatalitic, unde singura RNAsegmentul intron - denot
comportamentul enzimei. Guanozina iniiaz procesul, iar Mg2++stabilizeaz structura de
RNA - autosplicing. Astfel de RNA a fost denumit ribozim. Ribozimul de 10ori mai
repede scindeaz legtura fosfodicsteric dect prin hidroliza nefermentativ.
Prezena RNA cataliz e demonstrat n multe studii. S-a depistat, bunoar, o enzim
(Escherichia coli .a.) RNA-aza P cu o funcie specific la maturizarea tRNA taie
din molecula precursoare un fragment la un capt. Enzim e compus din compartiment
proteic i nucleotidic. n unele condiii, enzim este efectiv i fr componenta proteic
i nu contrar, cum era de ateptat. Unele compartimente ale enzimei pot scinda nu
RNA, ci polizaharideceva nou n enzimologie. Demult s-a observat c extragerea
moleculelor mari intacte de RNA e dificil. i numai dup descoperirea ribozimelor,
s-a clarificat c RNA-aza activ este atributul constant al moleculelor de RNA.
Ribozimul scindeaz molecula de RNA conform combinaiei = CUCU =, ceea ce se
poate aplica n practic pentru scindarea RNA virotic i a celei de SIDA.
Transcripia i translaia au loc n diferite compartimente ale celulei. Replicarea,
transcripia pot fi modulate prin intermediul diferitelor substane. Efectul preparatelor
medicinale sunt ilustrate n figura 2.32.
Cronomicina Proflavina
Echinimicina Etidium
Hedamicina Daunomicina
Netropsina Nogalamicina Mitomicina
Distamicina Cloroquina N-gaze
Fleomicina Miracil D Acid nalidixic
Kancanomicina Actino- / Streptonigrina Alcool
Luteoskirina micjna f Bleomicina fenetil 4 /
Antramicina
rS
/
Rifampicin^ Bazeanaloage Azaserina
Streptovaricina Nucleotide Metotrexat
Antibiotice
Figura 2.32. Locul aciunii unor medicamente
1. O fixare noncovalent cu DNA, ce mpiedic replicarea.
2. Se leag rigid n duplex, joncionnd cu guanina i inhibnd activitatea DNA ca matrice pentru RNA
olimeraz.a (inhib transcripia). Acioneaz similar: doxorubicina (adriamicina), cronomicina A i
I distamicina.
3. Se fixeaz de DNA, fr a modifica structura helixului.
4.Medicamente ce rup punile n DNA.
\ 5. Preparate ceformeaz legturi covalente ntre spiralele de DNA.
14 Substane ce Jixndu-se n bifurcaie mpiedic replicarea.
i 7. Inhib sigma i beta subuniti de RNAp, ngreuind iniierea procesului de transcripie.
I S. Inhib RNA-polimeraza I I (o.-amanitina etc.); preparatele ce conin platin (cisplatina i carboplatina)

induc formarea legturilor transversale n DNA.
Structura subnucleozomic a cromatinei se menine n procesele de transcriere i

I replicare.Dret matrice servete complexul DNA histonic, dar nu DNA liber. RNA
sintetizat se mpacheteaz n complexe ribonucleoproteidice.
DNA netranscriptibil (linker) ia parte la procesul de reglare a transcrierii, servind
^pt promotor pentru RNAp II.
Elementele mai importante sunt blocurile TATA i CAAT situate la o distan de 25-
lOOpn dc la punctul de iniiere. Este dcscris prezena unor elemente reglatoare
localizate n diferite regiuni ale DNA, numite enhancers i silancers.
Se presupune o modalitate anume n mpachetarea RNA. Dup cum mpachetarea
DNA n cromatin e menit s determine funcionarea ei normal n celul, procesul
(insuficient studiat) condensrii RNA cu proteinele nucleicee necesar pentru decurgerea
perfect a procesingului primar RNA transcript cu transportul lorn citozol. Se tie
c numai 5% din masa total a RNA transcript prsete nucleul celular. Semnalele
specifice care servesc ca permis pentru prsirea nucleului nu sunt identificate. E do
vedit faptul c astfel dc semnale apar n procesul de splicing al RNA. S-a argumentat c
dac n secvena nucleotidic nu sunt intronii, RNA transcript va rmne n nucleu.
Particularitile transcrierii la eucariote
Procesul de transcriere la eucariotc este foarte complex, dei n principiu dccurgc
dup acelai mecanism ca i la procariote.
a) Dac la procariote toate tipurile dc RNA sunt sintetizate de aceeai RNA-
polimeraz, la eucariote intervin mai multe tipuri, fiecare transcriind seturi diferite de
gene. De asemenea, dac la procariote RNA-polimeraza era format din 5 subuniti, la
eucariote acestea sunt constituite din 9-11 subuniti.
n sinteza RNA la eucariote intervin patru tipuri de polimeraze: trei expuse mai sus i
al patrulea tip - RNA-polimeraza mitocondrial ce sintetizeaz toate tipurile de RNA
mitocondrial.
RNA-polimeraza 11 i RNA-polimeraza III sintetizeaz i RNA nuclear dc mici
dimensiuni. Fiecare tip de RNA-polimeraz utilizeaz promotori diferii, acetea fiind
extrem de variai pentru RNA-polimeraza II care produce sinteza mRNA.
Dac considerm poziia dc start 1 (locul unde ncepe transcrierea genei structurale
RNA-polimeraza II), exist mai multe regiuni care condiioneaz aceast poziie:
- n poziia 35 se afl caseta Hogness care este recunoscut de RNA-polimeraza II i
prin urmare e responsabil de acurateea transcrierii;
- spre captul 5, la o distan mai mare de promotor se afl caseta CAAT, care se
pare c este responsabil de frecvena cu care se transcrie gena structural.
Elementele de control enhancers i silancers i exercit aciunea numai n urma
interaciunii cu nite proteine specificc numitefactori de transcriere, carc induc modificri
n molecula dc DNA, avnd ca rezultat modificarea vitezei de transcriere a genei.
b) La eucariote transcrierea se realizeaz pe DNA complexat n nucleozomi, far s
fie ncccsar desprinderea lui.
c) Frecvcna cu care sc transcrie o gen este foarte diferit i depinde de necesarul
de protein codificat de gena respectiv.
Pentru majoritatea genelor transcrierea se face rar, astfel net transcriptaza parcurge
ntreaga gen naine ca o alt transcriptaz s se lege. Pe alte gene ns transcrierea arc
loc cu frecven mare; este vorba de genele care codific sinteza unor proteine de care
organismul are nevoie n cantitate mare. n acest caz de gen se leag simultan mai multe
transcriptaze, alctuind o aa-numit unitate de transcriere.
d) S-au depistat mecanisme alternative ale procesingului n complexul transcripional
la eucariote (fig.2.32a).
Poli A secven gt Secvcn 3' Secven Poli A secven
A| Transcript primar
Transcript primar |
Cap Cap
Clivarea i Clivarea i Clivarea i poliadenilarea

poliadenilarea A, poliadenilarea A2 (),.
mRNA matur (a) mRNA matur (b)

F igu ra 2.32a. Mecanisme alternative ale procesingului la eucariote
e) RNA nou-sintetizat este mpachetat imediat sub forma unor complexe

ribonucleoproteice, prin asocierea cu proteinele specifice. Aceste complexe sunt similare
nucleozomului, avnd forme globulare.
f) Transcrierea DNA la eucariote, ca de altfel i la procariotc, poate fi oprit; aceasta
se realizeaz (fig.2.32):
- fie prin distorsionarea structurii DNA, astfel nct acesta nu mai poate servi ca matrice;
- fie prin inhibarea RNA-polimerazei.
Sinteza DNA pe m atricea de RNA

n viruii oncogeni s-a identificat o enzim care a completat conceptul exprimat
prin dogma central a geneticii moleculare, n care fluxul de informaie are sensul
DNA RNA proteina. Enzim e revers transcriptaza - i prezint o DNA
polimeraz RNA dependent. Ea posed proprietatea, ptrunznd n celula-gazd, de a
sintetiza un hibrid DNA-RNA, adic pe matricea de RNA a virusului genereaz o
caten de DNA. RNA viral este degradat cnzimatic, iar catena DNA se autoreplic,
dnd natere la dublul helix de DNA, ce conine informaia prezent n RNA viral. DNA
se insereaz n genomul-gazd, avnd capacitatea de a se exprima ca protein. Se
consider c fiecare subiect este purttorul unor gene oncogene neexprimate, fiind un
rezultat al ptrunderii anumitor retro virui n organism ntr-un moment al evoluiei. n
anumite condiii nefavorabile pentru organism, poate avea loc transcrierea, traducerea
i malignizarea celulei. Cu ajutorul acestei enzime se poate construi artificial pe orice
matrice de RNA un DNA complementar, adic se pot obine gene sintetice care, prin
tehnicile ingineriei genetice, produc mari cantiti de protein codificat.
Biosinteza RNA pe matrice de RNA
Materialul cromozomial al unor virui RNA este replicat n celula gazd sub aciunea
unei replicaze RNA polim eraza RNA dependent.
Ca rspuns la infecia viral, ele se sintetizeaz n celula-gazd, au o aciune
surprinztoare, folosind RNA virusului ce se replic. RNA sintetizat nu e complementar,
ci identic cu al virusuluiRNA viral (+).
Catena RNA (-) va servi ca matrice pentru sinteza numeroaselor catene comple
mentare (+) virale, care (RNA viral) vor funciona ca RNA matrice pentru sinteza
proteinelor virale (spre deosebire de RNA al retroviruilor).
+ + . + + + +
RNA RNA M oleculele fiice

viral duplex + omoloage
RNA viral
Francois Jacob Laques Monod Tomas Cech
Paul Zamccnik George Palade

CODUL GENETIC
Noiunea de gen s-a concretizat i am putea afirma c gena este un fragm ent al
DNA, transcris n molecula de mRNA ce codific un lan polipeptidic sau are o
semnificaie funcional particular (tRNA etc). Dup descoperirea din a. 1977 a
intermitenei genelor, noiunea nu s-a schimbat, ns unele fragmente ale DNA, datorit
splicingului alternativ al RNA primartranscript, pot asigura sinteza a mai mult de 2
mRNA i, n consecin, a mai mult de 2 proteine, fiecare cu funcia sa. Rmne admisi
bil ideea c o gen determin sinteza unui lan polipeptidic.
Informaia genetic referitor la biosinteza proteinelor se transmite cu ajutorul
codului genetic ce reprezint fonna de exprimare a relaiei dintre secvena de nucleotide
din DNA i succesiunea dc aminoacizi din lanul polipeptidic.Avnd 4 nucleotide i 20
de aminoacizi, este evident c un aminoacid este reprezentat de 3 nucleotidecodul
este triplet i poate oferi 64 de posibiliti pentru cei 20 de aminoacizi. i toate tripletele
sunt numite codoni. Ei (codonii) sunt identificai consecutiv de moleculele de tRNA,
care ndeplinesc rolul de adaptor n sinteza proteinelor (tab.2.1).
T abelul 2.1. C odul genetic
I II III
(5) A G (3)
UUU'i UCTP U A U'l yr U
Phe
/ ucc UACJ
> Ser
UUA'l UCA U A A 'lC o d o n UGA Cod.ter A
Leu
uugj UCG; UAG > te m i UGG Trp G
CU I P C A U \ U. CGU^ U
c u c > Leu
CUA
CCC
CCA
> Pro
CA J CGC
CGA
> Arg

A
cug J CCG; CAG i CGGJ G

Ue
AAU\ A CU)
Ser
U
AUC ACC A A C / A sn A G C/
> T hr
aua J A A A \ Lys AGA\ A
Arg
AUG M et \C< ,y aag/ AGGJ G
cum GCU^ GAU\ . GGU'' U
G GUC Val GCC
Ala
GAC J GGC
> Gly

GUA GCA GGA A
gugJ GCG-' gggJ G
Proprietile codului genetic

Este un triplet n care 61 codoni codific aminoacizii corespunztori, 3 codific
tenninaia sintezei proteice.
Codul este degeneratunui aminoacid poate s-i corespund mai muli codoni:
Arg, Leu, Ser, fiecare fiind codificat de cte 6 codoni, ns Met i Trp sunt specificai
de ctre un singur codon (tab.2.1 a). Codonii unui aminoacid sunt sinonime. Specifi
citatea codonului e determinat de primele dou litere. Degenerarea se refer la nivelul
nucleotidului 3 din codon. Primele dou baze sunt constante. F.Crick a conchis c
asocierea nucleotidelor 1 i 2 din codon cu nucleotidele 3 i 2 din anticodon este fix,
respectndu-se principiul complementaritii, n timp ce mpachetarea nucleotidelor 3 din
codon i, respectiv, 1 din anticodon este lax. Aceasta se datoreaz particularitii
nucleotidelor 1 din anticodon (5') de a se mperechea i cu alte nucleotide, n pofida
regulilor lui Watson i Crick.
Foarte des nucleotidul 1 din anticodon e inozina, care oscilcaz (este baz
ovielnic) i dispus s ncalce regulile (efectul Wobble).
OH OH
HO
OH
Inozitol
Inozina
Dac toate legturile vor fi de tip W-C, atunci orice aminoacid ar fi acceptat de
un singur codon, iar deblocarea din complexul de sintez s-ar complica, ceea ce ar
micora considerabil viteza procesului de sintez, Anume degenerarea codonului
favorizeaz eliberarea din complex a tRNA.
Degenerarea codului minimalizeaz efectele nocive ale T ab elu l 2.1a. D egenerarea co d u lu i
mutaiilor i permite componenei nucleotidice a DNA g en e tic
s varieze n diapazon larg, nemodificnd secvena
N um rul
aminoacidic n proteina codificat de acest DNA. A m inoacidul
de codoni
Codul nu are virgule sau alte semne de
punctuaie ce ar indica nceputul i sfritul fiecrui Ala 4
codon. Citirea mesajului genetic se face nentrerupt Arg 6
de la codonul start pn la cel final. Asn 2
Asp 2
C odul g e n e tic este u n iv ersa l to ate
Cys 2
vieuitoarele utilizeaz acelai mecanism de a asimila Gin 2
informaia (abaterea prezint codul genetic al Glu 2
mitocondriei). Gly 4
Codul genetic nu este ambiguu (acelai triplet His 2
Ilc 3
nu semnific 2 aminoacizi diferii), nu se suprapune Leu 6
(prezint excepie la virusuri). Lys 2
Codul genetic prezint o structur liniar (este Met 1
coliniar, adic exist o concordan liniar ntre gen Phe 2
Pro 4
i aminoacizii proteinei codificate).
Ser 6
De remarcat c tripletul AUG reprezint Thr 4
codonul de iniiere, iar cei trei UAG, UAA, UGA de Trp 1
terminare (nonsens). Exist unele deosebiri n secvena 2
nucleotidic la DNA mitocondrial. Val 4
Studiile mai recente au confirmat c proprietile chimice ale unor aminoacizi sunt
reflectate n structura codonului: toi codonii cu U (n poziia 2) codific aminoacizi
hidrofobi, iar cei ce au n poziia 2 adenina codific aminoacizii polari sau cu sarcin;
guanina, respectiv, aminoacizi polari sau nepolari, iar uracilul n poziia 1 prezint
codonii nonsens.
Dac n anticodon n direcia (5' 3') prima baz nucleotidice:
a) citozina sau adenina, el va citi un singur R ecunoaterea a unui codon:
codon; Anticodon (3 ') X-V-C (5') (3) X-Y-A (5')
b) uracilul sau guanina, el va citi 2 codoni; Codon (S ') V-X-G (3 ') (5 1 Y-X-U (3 )
c) inozina, respectiv, va citi 3 codoni. R ecunoaterea a doi codoni:

Anticodon (3 ') X Y U (5 ') O ') X Y G (5 ')
S-a demonstrat c codonii sinonimi
Codon (5 ') Y -X -S <3 ) (5') Y-X-S (3')
pentru aminoacid, dac se deosebesc
dup cel puin una din cele dou baze RAnticodon ecunoaterea a trei codoni:
(3') -V- 1(5')
(1-2), au nevoie de tRNA diferite: UUA
Codon (5 ) Y -X- ( 3 )
i CU A codific leucina, dar se atest de
tRNA diferite.
In 1977 s-a stabilit c genele au structur ntrerupt gena lanului al hemoglobi
nei (exonul) este ntrerupt de secvene netranscriptibile numite introni. Gena ovalbuminei
are 8 exoni i 7 introni (fig. 2.33). 50 introni are gena colagenului. Lungimea intronilor
variaz de la cteva nucleotidc pn la zcci de mii de perechi. O proprietate a intronilor
este localizarea conservativ n genele nrudite la acceai spccic sau n aceleai gene la
diferite specii. Dar secvena nucleotidic e puin conservativ. Practic, conservative sunt
primele 2 i ultimele 2 baze n introni (G T ... AG) n locusun de site ai splicingului.
G ena ovalbum inei h- 7,700 bp

1 2 3 4 5 6 7
DNA A f ET" I
Transcript
^ Transcripia (RN A p II) Extra RNA
primar RNA
1 2 3 4 5 6_________________ 7
0 E )
.jF f 7[ G
.
Cap ; !__ ; S p licin g u l, c liv area i
11 - . ~ L poliadenilarea
^ I Extra RNA
L 12 3 4 5 6
Intronii iff AAA(A)n
m RN A
1,872
nuclcotidc
Figu ra 2.33. Structura genei ovalbuminei i modificrileposttranscripionale ale RNA primar transcript cu
formarea unei mRNA mature (zonele haurate prezint intronii)
O proprietate dc expresie a genei este: localizarea exonilor n mRNA i n DNA n

aceeai secven. Intronii confirm caracterul evolutiv al materiei vii formate n urma
evoluiei genei corespunztoare. Fiecare exon corespunde unui domeniu, care apoi,
unindu-se, fonneaz proteine cu proprieti noi. Actualmente, e cert c fiecare domeniu
este codificat de gena sai intronii sunt o dovad concludent a structurii polidomenice
a proteinelor.
S-a subliniat tnai sus c excizia intronilor regleaz torentul de RNA din nucleu n
citozol i, n final, proteina ce va sintetiza celula.
MUTAIILE
Mecanismele de corecie i reparaie ale DNA sunt eficace, dar totui o parte din
leziuni i erori din DNA rmn intacte. Apar modificri n genomul organismului care se
menin i se transmit prin ereditate. Aceste evoluri constante n secvena de
nucleotide transmise ereditar poart numele de mutaii.
n viaa real a unui individ ele se manifest rar cu o probabilitate egal cam cu 10'5.
Mutaiile sunt schimbri intermitente i rare care constau n modificri ale informaiei
genetice i care devin apoi stabile n succesiunea generaiilor.
D ezam inarea p rin hidroliza spontan

(transform area citozinei n uracil)
Uracil
Citozina
O
\ /
N
Lanul DNA
Lanul DNA O
O
Lanul DNA
Lanul DNA Form a tautom eric

OH
Modificrilor pot fi supuse o pereche de baze (mutaii punctiforme) sau un grup de

baze pe una sau pe ambele catene ale unei molecule de DNA.
Mutaiile punctiforme decurg prin:
1. Substituie (misens mutaii), n care deosebim 2 tipuri:
a) tranziie o pereche de purin este nlocuit tot cu o purina sau o baz
pirimidinic, nlocuit tot cu una pirimidinic.
Acidul azotos produce mutaii prin tranziie, dezaminnd adenina (A=T) n hipoxanti-
n care se mperecheaz cu citozina (HX=C); tot acest acid modific guanina la xantin
i citozina la uracil, producnd mutaiile respective.
Apurinizarea prin hidroliza spontan
Lanul DNA
(eliminarea guaninei)
0
O 1
0= p- o - h ,c o
1L0
w
N I
Lanul DNA NH o-
H J\
0
1 H Lanul DNA
o = p- o H,C Guanina
t
o-
Lanul DNA NH,

Guanina
Tranziie provoac i astfel de ageni mutogeni ca 5-brom-uracil, 2-amino-purin,
modificnd legile complementaritii la replicare: 5-brom-uracil, analog al timinei, dar se
mperecheaz cu guanina i 2-amino-purina, analog al adeninei, dar se leag cu
citozina.
Watson i Crick au postulat perfect mecanismul tranziieiatomii de hidrogen din
cele 4 baze i schimb poziiase dispun n forme tautomere care, la rindul lor,
formeaz perechi cu alte baze ca: iminofonna A ce se mperecheaz cu citozina etc.
b) transversie o pereche de baze purinice este substituit cu una pirimidinic sau
viceversa.
2. Inserie. Acest mecanism const n introducerea unei perechi de baze suplimentare
n catena de DNA. Acridina, intercalndu-se n DNA, la replicare pe catena
complementar se mperecheaz cu o baz
suplimentar sau duce la deleia unei baze din
acel lan. Sar Sar
3. Deletia const n excluderea unei perechi L-Pro t.'-meVal L-Pro L-meVal
I 1
J /S o
de baze: posibil la hidroliz, modificri de pH, 1

D-Val D-Val JO
temperatur; unii ageni modific o baz n aa \
L-Thr
L
mod, nct ea nu mai poate fi complementar, /
i la replicare apare golul n ambele catene. C^-0
ft
4. Unele modificri n secvena nucleotidic T H"
pot forma codonul sinonim i succesiunea L .
aminoacizilor nu se va schimba (mutaii

benigne). A ctinom icina D
La afectarea segmentelor mari de gen apar
mutaii extinse. Agenii mutageni pot provoca
att mutaiile spontane, ct i mutaiile induse.
n dependen de consecinele modificrilor,
deosebim mutaie benign, neutr, nociv.
O grup deosebit prezint mutaiile nonsens, A crid in a
unde are loc nlocuirea unui codon cu altul
Dezami narea
N. Al
N"
FI'
//
V
Xantina
O
H
N1/
Nu se supune dezam inrii
N
Timina
nonsens, ce provoac ntreruperea lanului polipeptidic. S-a confirmat existena unor

mutaii supresoare bazate pe funcionarea unor tipuri de tRNA, care, dei poart
anticodonul corespunztor unui triplet nonsens, sunt ncrcai cu aminoacizi. Ca rezultat,
lanul polipeptidic nu se ntrerupe fiind introdus un nou aminoacid. Provocnd n cadrul
investigaiilor experimentale un proces mutaional, regenerm caracterul slbatic n locul
celui mutant. Atare mutaii sunt denumite mutaii inverse - reversii.
n ultimii ani s-au elucidat mutaiile la hotarul exon-intron, unde se inactiveaz site-
ul splicingului, ce nu scindeaz intronul de exon n locul cuvenit. Deseori funcia acestui
site o preia alt locus din secvena nuclcotidic i molecula de mRNA e rar modificat.
S-au depistat i mutaiile punctiforme n introni ce modific splicingul; aa mutaii
au loc la unele tipuri de talasemii, unde dispar mai mult semnalele de splicing
favoriznd sinteza a dou tipuri de mRNA normal i defect (respectiv, 10% mRNA
normal i 90% defect).
Cum se pot depista mutagenii cancerigeni? Examinnd efectul mutagen pe bacterii,
Bruce Ames a elaborat o metod simpl i sensibil pentru a depista mutagenii chimici,
n piulia Petri se aranjeaz un strat subire de agar-agar ce conine 109celule de tulpin
special de Salmonel (tulpin ce nu se dezvolt n lipsa histidinei, fiindc confer
mutaii n gena biosintezei acestui aminoacid). Mutagenii genereaz multe mutaii, iar o
parte din ele conduc la reversii i, ca rezultat, celulele ncep s sintetizeze i histidina.
Aceti revertani aprui se nmulesc n lipsa histidinei exogene i formeaz colonii
aparte. Dup incubaia ce dureaz dou zile la temperatura de 37C, se atest efectul
mutagen al substanelor chimice.
Studiile recente confmn c acumularea catastrofal a erorilor n moleculele de DNA
e cauza mbtrnirii organismului. La cele amintite mai sus se adaug i varianta cu
modificarea tabloului metilrii bazelor nucleice. Savanii de la Institutul de Gerontologie
al Institutului Naional al Cancerului SUA( 1987) au stabilit c la oarecii cu durata
vieii de 42 luni numrul nucleotidelor metilate din DNA la o celul se micoreaz cu
47 mii ntr-o lun. La o alt specie, cu o longevitate de 96 luni, timpul de pierdere e
de 23 mii pe lun adic de 2 ori mai mic. oarecii pier atunci cnd scderea metil-
citozinei ajunge pn la 2 milioane la celul.
S-au studiat celulele omului, constatndu-se c viteza pierderii e mai mic. Celulele
bronhiilor pierd lunar 1,3 mii, avnd acelai numr de baze metilate 13-10 milioane.
Dac admitem c legitatea stabilit la animale valabil i pentru oameni, atunci ci pot
tri circa 125 de ani.
De altfel, este remarcabil c n celulele cancerigene nivelul bazelor meti late se menine
permanent la nivelul standard. E posibil c ceasul metilic e veriga principal n lanul de
cauze i consecine ce determin mbtrnirea i moartea individului.
RECOM BINAREA GENETIC (INGINERIA GENETIC)

Unele modificri n gene i cromozomi reprezint un fenomen normal n viaa celulei -
un schimb biologic adecvat ntre gene sau grupri de gene din diferite focare cu
formarea unui cromozom metamorfozat capabil de replicare, transcriere i translare.
Procesul se numete recombinare genetic.
Recombinarea genetic decurge n toate organismele i, firete, e posibil numai n
cadrul aceleiai specii, constituind n final criteriul de definire a speciei. Pentru
eucariote e caracteristic recombinarea reciproc, unde cantitatea de material
genetic transformat este proporional. Ea presupune segregarea i sinaptizarea regiunilor
omoloage din cromozomi i schimbul reciproc de nucleotide realizai prin ruperea
moleculelor de DNA, translocarea segmentelor rezultante i reunirea lor. Recombinarea
e determinat de un aparat complicat enzimatic ce implic consum de energie enorm.
Modificrile pe care le sufer molecula de DNA reprezint mecanismul principal al
evoluiei i al polimorfismului, de rnd cu selecia natural.
Recombinarea genetic experimental presupune includerea n genomul unui organism
a unor gene ce nu figureaz n patrimoniul ereditar al acestuia. Se atest mai multe tipuri:
1. Transformaia DNA celulei donatoare se implic n genomul recipientului
(implantarea virusului n celula sntoas).
2. LizogenieDNA sc ncadreaz n cromozom, dar nu se manifest. Un fenomen
neordinar stimuleaz mecanismul de expresie a genei mute i n final se formeaz
particule ce vor distruge celula-mam (virusul herpesului).
3. Transducia transferul unei pri de informaie de la DNA (ataat covalent) n
DNA parental celulelor-fiice i replicarea lor n continuare.
4. Conjugaiaproces natural de unire a genelor la eucariote, cu o maxim precizic
far modificri conjugaie sexual.
Unele gene sau grupe de gene la pro- sau eucariote pot abandona poziia iniial,
ocupnd alt loc n genom. Atare elemente genetice flexibile se numesc transpozoni.
Capacitatea de inserie se datoreaz unor fragmente scurte la capetele transpozonului -
secvene inserionale numite IS-elemente. Procesul determinat de un sistem ce recunoate
secvenele i le sudeaz n loc nou.
Un tip neobinuit de recombinare genetic se observ n procesul fonnrii genelor, ce
detennin sinteza anticorpilor imunoglobulinelor produse de limfocite, ca rspuns la
ptrunderea n organism a antigenului. Fiecare antigen capabil s joncioneze cu
imunocitcle unui tip specific, provocnd creterca, mitoza celulelor respective, formnd
clona unical, adic un aliniament de limfocite identice, care vor elabora un tip de
imunoglobuline specifice i vor fixa antigenul care a condiionat nmulirea lor. n inter
aciunea antigen-anticorp se fonneaz complexul n care antigenul i pierde activismul.
E uimitor fptui c organismul nostru poate
sintetiza milioane de anticorpi drept rspuns
la orice macromolecul. Oare e posibil aa
ceva? Celulele noastre nu conin att DNA,
nct s codifice milioane de anticorpi,
nemaivorbindde activitatea individual a
organismului uman.
Rspunsul a fost cptat, studiind structura
anticorpilor i a genelor ce-i codific (fig.
2.34, 2.35). M olecula anticorpilor e
compus din 2 catene lungi (II)cucte446
aminoacizi fiecare i 2 catene scurte (L),
respectiv, cu cte 214 aminoacizi fiecare.
Catenele sunt unite prin legturi disulfidice;
legturile S-S sunt i intracatenare. Fiecare
'ooc: coo-
lan dispune de regiuni segmentare de
aminoacizi constante i o regiune varia
= dom eniul constant
v = dom eniul variabil bilV; -fragment e compus din 3 domenii
H. L = catene lungi, scurte Hi 1 domeniu L. V-regiunile au locusuri
.... 1 de o variabilitate extraordinar de mare, nu-
F igura 2.34. Structura igG mite hipervariabile. Fiecare lan conine cte
trei locusuri centre antigenofixatoare, compatibile cu antigenul. Fixarea e datorat
legturii de hidrogen, punilor saline, interaciunii hidrofobe, legturii Van der Waals.
Localizarea n anticorpi a regiunilor i V ne pennite s concluzionm c DNA
F igura 2.35. Structura domenic conformaional a moleculei de imunoglobulin
ce le codific e rezultatul sudrii a dou gene pentru i V - fragmente. S-a adeverit

experimental aceast ipotez. Ulterior, s-a stabilit c DNA ce codific fragmentele va
riabile att n H, ct i n L-catene sunt compuse din gene de diferite tipuri care-i
schimb poziia i pot forma diverse mbinri. n DNA - V - fragmentele au aproximativ
400 V gene, 12 D (Diversity), 4 J (de legtur) gene. Combinarea acestor gene face
posibil mai mult de 20000 de variante, care, la rndul lor, se modific n secvena
nucleotidic la adiionarea cu fragmentele de DNA ce codific regiunea C. n consecin,
pot fi formate milioane de gene diferite cu circa 1010centre antigenofixatoare responsa
bile de sinteza anticorpilor.
Combinaii noi de gene o recombinaie artificial pot ti create i n eprubet.
Un rol decisiv l-au jucat elaborrile enzimelor de restricie endonucleaze ce recu
nosc n molecula de DNA o secven anumit de baze. Enzimele cliveaz legtura
fosfodiesteric de pe ambele catene ntr-un loc special al secvenei recunoscute
secvenele cunoscute suntpalindroame. Evident, capetele rezultante pot fi nccoezive
sau coezive (conin nucleotide complementare).
Un alt ferment este terminal-transferaza
, o enzim care posed capacitatea de a ad- a g g
uga la capetele '- ale celor dou molecule , , . t. \ > 1
ce trebuie sudate cozi homopolimerice - A t g t g g a t t
Palindrom
plementare (poli G, poli C) (fig.2.36).
Enzim revers transciptaza permite
sinteza unui DNA recombinat pe mRNA, adugind poli T i dezoxiribonucleotidele
respective, apoi se nltur mRNA i cu ajutorul DNAp I reconstruim catena comple
mentar.
Genele recombinate se includ ntr-un vector potrivit (o molecul de DNA), care se
introduce ntr-o celul, unde se produce replicarea i exprimarea genotipic. Ca vector
se folosescplasmidele (DNA bicatenar din citozolul majoritii bacteriilor). Ele se
deplaseaz uor de la o celul la alta. Aceste molecule mici trec prin membrana celulei-
gazd i pot asimila cu uurin gene strine (2.36.a). Ele se replic autonom i rapid,
fapt ce pennite amplificarea genei incluse. Selecionarea lor prin screening ne permite
s identificm genele respective (fig. 2.36).
Figura 2.36. Ingineria genetic: donarea genelor
Clonarea genelor a rezolvat problema insulinei, interferonuhn i a multor alte

substane biologice activc ca hormonul somatotrop etc.
Interferonul reprezint o glicoprotein cu 160 aminoacizi; fiecare specie produce,
n unna infeciei virotice, cel puin 3 tipuri de
Eco R1
interferon n: l)leucocite; 2)T-limfocite; 3)
fibroblatii esutului conjunctiv.
Fixndu-sede membran, interferonul sti
muleaz sinteza enzimelor specifice, care-s
capabile s lezeze RNA - virale i s inactiveze
factorii de iniiere a sintezei proteice n
ribozomi. n 1980, n SIJA a fost identificat
i separat gena interferonului leucocitar al
omului, inclus apoi n E.coli pentru a o sinte
tiza n cantiti substaniale.
Se preconizeaz ca celulele modificate
prin metoda ingmeriei genetice s fie inocu
late i n organismul uman. Se procedeaz
la ncorporarea genelor funcionale n locul Figura 2.36a. Plasmida pRR322: conine 2 gene
celor defectate sau pierdute de organismul cu rezistena programat la tetraciclin (tet) i
ampicilina (bla)
um an, ca metod de tratam ent -
genoterapia.
Adaosul de material genetic este
cficient cnd defectul const n insufi
ciena sau lipsa com plet a unei
proteine. Nu se consider raional cnd
mutaia conduce la surplus de protei
ne sau sinteza unor substane nocive
precum are loc la anemia falciform.
Corecia unor atare tulburri necesit
nu numai ncadrarea unei gene func
ionale, dar i a unei gene capabile
s inactiveze gena mutant. Savanii
studiaz posibilitile inoculrii genei
funcionale n celulele separate ale pa
cientului, reincluse apoi n organism. "'vôiuT3
Sperm c n viitorul apropiat va de- F igura 2.37. Ciclul vital al retroviruilor
veni posibil tratarea bolnavilor prin
metoda integrrii genelor legate cu substane, ceea ce ar pennite o fixare direct a genei
n celulele-int. Azi integrarea n genom a genei dorite e nesemnificativo celul la
IO3'6. Se constat c integrarea n genom nu e ntotdeauna necesar la expresia
genei, doar e limpede c gena integrat se va pstra mult mai mult n celul. Apoi ea e
apt de a se replica cu DNA cromozomial, se va transmite la alte generaii de celule i va
determina sinteza produsului n dccursul vieii pacientului.
Pentru ncorporarea genei se utilizeaz capacitatea natural a viruilor de a ptrunde
n celule i de a-i aduce materialul genetic propriu. Cel mai promitor sistem de transfer
al genelor n celule o prezint retroviruii, ei sunt vectorii cardinali, dar tot ei sunt
capabili s se nclud n DNA cromozomial al celulelor apte de reproducere activ. Un
minus extrem de mare comport pericolul provocrii cancerului i, deci, apare o sarci
n importantposibilitatea de a stopa reproducerea acestor virui. n figura 2.37 e
redat ciclul vital al retroviruilor.
S-a elaborat o metod efectiv de recepionare a retroviruilor, care posed att o
membran extern normal, ct i toate proteinele virale. ns RNA viral nu conine
informaie de sintez a acestor proteine i locusurile secvenei nucleotidelor corespun
ztoare sunt ocupate de gena ce are a fi introdus n celul (fig. 2.38).
Dac bolnavului i se integreaz celule proprii ale sistemului imun preventiv, cultivate
i prelucrate cu interleukina-2, se produce ptrunderea limfocitelor n tumoare, se
nregistreaz regresia celulelor cancerigene. Din 15 bolnavi tratai (dup Rozenberg), la
9 (melanom n stare grav) s-a stabilit regresic vdit, la unul - complet.
n apropierea de Edinburg exist o stn cu oi transgenice (100), laptele crora
conine o cantitate suficient de proteine ce favorizeaz coagularea sngelui. Laptele
acestor oi e suficient pentru toi bolnavii de hemofilie din Europa.
La Institutul de Fiziologie din Cambridge se experimenteaz nite purcelui neobi
I . Crearea unui provirus ce ducc o gen curativ nuii. Lorii s-au introdus gene ce codi
nlocuirea genei virale fic hormonul somatotrop al animalelor
cu cea curativ
mari comute folosit n tratamentul diver
selor patologii ale omului.
G ene virale
In baza investigaiilor efectuate, ame
Provirus
ricanii au obinut porci ce cresc foarte
repede, iar carnea lor n-are slnin.
2. Inseria n celul, unde sc form eaz vccto
Aceste animale sunt slab rezistente la
P rovirus curai NA auxiliap temperaturi joase. S-au cptat cartofi
cc nu se foarte rezisteni la fiig etc.
include n
RNA cu gen particule no n perspectiv se va modifica i sto
curativ cc sc virale
include n noi matologia: se concep dini naturali n caz
particule
virale
4 dac gena omului va fi introdus n
genomul bacterii lor care vor sintetiza dinii
respectivi.
Deocamdat transferarea mai multor
Celula n carc si gene e imposibil, deoarece organismul
form eaz viru:
v c c to r nu recepioneaz mai mult dect o sin
gur gen. Savanii modific forma i
dimensiunile multor animale. Se poate
schimba i omul. Lui i se pot conferi pro
prieti noi, pozitive, dar i dimpotriv
negative. E un domeniu interzis de
experimentri. Azi nu sunt cunoscute
genele ce detennin capacitile mintale,
dar unele informaii referitoare la omul
bolnav sunt elucidate. Includerea gene
lor ar modifica vdit annonia organismului
uman.
C clula-int disponibil pentru im plantare La Institutul de Studii Biomedicale de
F igura 2.38. Vectoriiretroviruilor inofensivi pe lng Universitatea Washington, din
se form eaz n celule 1991 se studiaz tripanosoma, un
m icroorganism ce paraziteaz n
organismul omului i al animalelor.Savanii examinau proteina (III) i mRNA respectiv.
RN A s-a descoperit, dar gena nu. ns copie far original nu exist. Dup analogie
cu organismele nrudite, au stabilit DNA care potenial ar trebui s conin gena i au
comparat-o cu RNA iniial. S-a dovedit complementar dup toate bazele, cu excepia
U. Gena exista, dar RNA era modificat cam de 60%. S-a constatat c asemenea
modificri nu sunt un original, fiindc sc nregistreaz i copii precise.
Carc este, totui, cauza? Se consider c n celul are loc o transferare efectiv a
informaiei de pc DNA, ulterior, un redactor face unele corecturi n textul mRNA.
direcionat specific. Evident c n gene, copiile crora se corecteaz iniial, lipsete
semnalul de asamblare a proteinei. Rezultatul redactrii e apariia lui n mRNA.
astfel proteina poate fi sintetizat. Redactorul tie ce face. Acelai lucru s-a stabilit i
la speciile superioare. Funcia respectiv o ndeplinete RNA de corecie, care nu numai
c determin locul inciziei nucleotidelor, dar i prezint materialul respectiv. Enzimele
favorizeaz acest proces datorit prezenei unei gene informative (1991). Principiul
transmiterii mesajului genetic se complic ntructva (fig. 2.39).
M etoda ingineriei genetice e
R cplicarca _ . . R eplicarea
utilizat pentru crearea vaccinei T ra n sc rip ia ^__i -
contra SIDA, maladie provocat de T ra n sc rip ia )
7nversa* RNA
o familie de virui ce conin RNA. DNA
Viruii posed revers transcriptaze i
T ran slarc a
sunt foarte instabili. Sistemul imun
Polipeptid..
reacioneaz la proteinele superficiale
ale virusului care se m odific
permanent, modificri legate de
P roteina biologic-acliv
deriva genei. Pentru crearea vacci
F ig u ra 2.39. Dogma de transmitere a informaiei
nei e folosit virusul varioleica vector
genetice
incluzndu-se gena SIDA.
Moss a obinut o atare vaccin. La maimue apar anticorpi, dar rmn neprotejate de
SIDA. Efectul imun e de fa, ns nu i de protejare. Capacitatea de aprare este
detenninat de alte caracteristici ale antigenului. D.Zaguri a creat o vaccin pentru o alt
variant a SIDA, dar cu acelai impact. Pentru diagnosticul SIDA e utilizat metoda de
amplificare enzimatic a genei SIDA. Se confirm prezena virusului dup o or de
infectare, dac din 5000 de celule e afectat mcar una. Dup 12 ore de la contaminare,
diagnosticul se confirm la afectarea unei celule din 500.000. La tratamentul efectiv al
SIDA contribuie azidotimidina i 2'- 3' - dezoxicitidina nucleozide ce inhib revertaza
virusului.
S-au sintetizat i alte preparate asemntoare dup structur cu tranchilizanii, ce
sunt inhibitori activi ai revertazei la HIV-1 i nu la HIV-II (virusul african).
n omida fluturelui Hyalophora cecropina s-a descoperit o substan peptidic
cecropina B, ce lezeaz bacteriile i infecteaz omida. Biochimitii de la Universitatea
din Louisiana (1990) au sintetizat un ir de peptide cu o structur identic, deosebindu-
sedupciva aminoacizi. Una din aceste peptide are o for distrugtoare fantastic
i a fost numit Siva-1 (dup numele divinitii indiene, ce nu-i crua niciodat dumanii).
Peptidele contribuie la formarea porilor intracelulari i, n consecin, apa ptrunde
n celul, distrugnd-o. Siva-1 acioneaz i asupra membranelor celulelor mamiferelor,
dar celulele nu mor, fapt determinat de prezena citoscheletului ce pstreaz forma
celulei. n celulele cancerigene i n cele afectate de virusul SIDA citoscheletul e lezat.
Secvena aminoacizilor din aceste peptide e identic cu fragmentele semnale din
fibrinogenul omului protein cauzat de stres, rni. S-a stabilit c aceste fragmente
sunt mai efective dect iva-1, la distrugerea celulelor cancerigene. Aadar, organismul
uman n stare de stres elimin activ substane anticancerigcnc, antistresante i, deci,
este concludent c rezervele proprii ale organismului sunt deosebit de efective n lupta
cu factorii nocivi, rezerve care necesit o studiere ampl i profund.
BIOSINTEZA PRO TEIN ELO R
Mecanismul biosintezei proteinelor, cu diversitatea activitii biologice, s-a impus drept
problem dintre ccle mai dificile n istoria biochimiei. Azi, n temei, el este studiat, dar
posibil c aceasta e o mic parte din acel ntreg, care trebuie cunoscut. Evident, meca
nismul biosintezei e unul din celc mai complcxe procese n natura vie, implicnd conlu
crarea a peste 300macromoleculc specifice, reprezentate deproteinenzime, diferite
tipuri dc RNA cu funcii distinctive. Sinteza, cu o complexitate vast, decurgc cu o
vitez rapid: pentru sinteza lanului polipeptidic din 100 resturi de aminoacizi ribozomului
E. coli i sunt destule 5 secunde.
Sinteza n fiecare celul conlucreaz cu metabolismul. Procesul de biosintez presupune
traducerea limbajului de 4 litere al acizilor nucleici n limbaj de 20 de litere (aminoacizi) al
proteinelor.
Baza cunotinelor noastre de azi au fost cimentate de trei mari descoperiri ale anilor
50 din secolul precedent:
1. Paul Zamecnik (1950) stabilete c locul sintezei proteice e ribozomul.
2. Paul Zamecnik i Mahlon Hoagland (1957) au demonstrat c activarea
aminoacizilor i adiionarea lor la tRNA e catalizat de aminoacil-tRNA-sintetaze.
3. Francis Crick a expus ipoteza transferului mesajului genetic codificat n acizi
nucleici cu 4 litere n limbajul celor 20 aminoacizi, concluzionnd: tRNA ndeplinete
funcia de adaptoro poriune racordeaz aminoacidul specific, iar alta identific n
mRNA o secven mic de nucleotide ce codific acest aminoacid.
Biosinteza proteinelor include 5 etape:
I. Activarea aminoacizilor. Procesul are loc n citozolul celulei, n care cei 20
aminoacizi adiioneaz la tRNA prin legtura esteric. Procesul e catalizat de enzime
diferite numite aminoacil-tRNA-sintetaze. Ele sunt caracteristice fiecrui aminoacid i
tRNA, corespunztor. Activarea are loc n anumite faze:
a) n centrul activ (CA) al enzimei decurge unntoarea reacie:
AA + ATP + E -=^= E-AAAdenilat + PP.I
Legarea aminoacidului (COOH) are loc la gruparea 5'-fosfat a AMP din molecula
enzimei.
b) Transferul de la E-AAA pe tRNA specific a restului de aminoacid:
E-AAA + tRNA = s = AAtRNA + AMP + E
Adiionarea aminoacidului are loc la grupele de OH n poziia 2' sau 3' a restului de
adenozin n molecula tRNA (legtura e macroergic). Hidroliza ulterioar a
pirofosfatului, sub aciunea pirofosfatazei, face reacia ireversibildeplaseaz echilibrul
spre dreapta. 2.
Aminoacid + tRNA+ATP ' ^ AAtRNA + AMP + 2Pi
A A tR N A s , , T, .
Pirofosfataza AG ~ - 29 kJ/mol
Enzimele sunt foarte specificeau 4 locusuri care particip la identificare, cataliz,
posednd capacitatea de autocontrol: 1)AA; 2) tRNA; 3)ATP; 4) IIOH ultimul e
indicat pentru hidroliza aminoacidului impostor. Specificitatea e detenninat exclusiv
de structura tRNA (1 eroare la 400 resturi dc aminoacid).
Sigurana procesului de traducere n mare msur e condiionat de capacitatea de
autocontrol a sintctazelor. Activarea necesit ATP i ioni de magneziu.
Deosebim 2 clase de aminoacil - tRNA-sintetaze:
Clasa I - Arg, Cys, Gin, Glu, Ile, Leu, Met, Trp, Tyr, Val (OH-2' terminal tRNA).
Clasa II - Ala, Asn, Asp, Gly, His, Lys, Phe, Pro, Ser, Thr (OH-3' terminal tRNA).
Structura general a unui aminoacil-tRNAs e redat mai jos. De asemenea sunt ilustrate
i conformaiile celor dou sintetaze - tip 1i tip II.
O Aminoacidul
Structura general a AA -tRNAs Aminoacil- tRiSA sintetaza.

a)Gin -tRNAs, b)Asp -tRNAs
Sinteza lanului polipeptidic ncepe cu captul N-tenninal, la care adiioneaz ulterior

resturile de aminoacizi spre -terminal. Aminoacidul iniiator la procariote este N-
formilmetionina, la eucariote - metionina. N-fonnilmetionina se fonneaz n dou etape:
1. Met + tRNAfmcl + ATP ^ Metionil-tRNAfmel + AMP + PP
2.N l0-fonniltetrahidrofolat + Met-tRNAfmel *- N-formilmet- tRNArmel + FH4
(tetrahidrofolat).
Reacia este catalizat de transformilaza specific. Sunt 2 tRNA specifice la met-
I tRNA' i N-fonnilmet-tRNA^. Prima conduce la includerea metioninei n lanul polipeptidic,
a II - la legtura cu un anumit locus n ribozom.
11. Formarea complexului de iniiere decurge n 3 etape (fig. 2.40). Sunt necesare:
I 1) subunitatea mic a ribozomului; 2) mRNA ce codific pol ipeptidul necesar; 3)N-
I fmet tRNAfmcl; 4) 3 proteine-factori de iniiere-IF-1, IF-2, IF-3; 5) GTP.
Etapa 1. Subunitatea mica leag IF-3 i previne reasociaia subunitilor ribozomiale.
La subunitate adiioneaz mRNA astfel codonul de iniiere AUG sc fixeaz ntr-un loc
specific al subunitii. Fixarea lui corect e de
terminat de un fragment al mRNA aranjat la
cap 5' tenninal adiacent codonului AUG (com
pus din 6-8 resturi de A i G). Acest fragment
Shine-Dalgarno este perfect complementar
cu o succesiune de nucleotide de la cap 3'-
OH al rRNA 16 S (fig.2.41). Sensibilitatea ri-
bozomului la semnalul de iniiere moduleaz
Codonul de inicre
viteza traducerii. Semnalul indic locul de fixa mRNA
re a N~fmet-tRNAf,"et.
Etapa 2. La complexul format adiioneaz
IF--2 legat de GTP i fmet-tRNAfme, care se
fixeaz n centrul peptidilic (P).
Etapa 3. Complexul interacioneaz cu
subunitatea 50S, implicnd simultan hidroliza
GTP pn la GDP i Pi, care se elimin din
complex. Prsesc ribozomul IF-1,1F-2 i
3 ' UAC 5
IF-3. n consecin, se formeaz complexul
Anticodonul
de iniiere, alctuit din ribozomul 70S, 6'
funcional activ, i mRNA, N-frnet-tRNAfmet.
Fixarea corect a ultimei e determinat de
formarea perechii complimentare dintre tripletul
anticodon i codonul mRNA ct i de fixarea
tRN A de locusul P al ribozomuiui.
Aceast etap la eucariote este mult mai com
plex i include o mulime de factori (fig.2.42).
III. Elongaia lanului polipeptidic
Ea reprezint un proces repetat. Pentru
realizarea lui sunt ncccsare: complexul meni
onat deja, urmtorul AA-tRNA corespunz
tor tripletului ulterior al mRNA, trei proteine
solubile citozolicc, factori ai elongaieiTu,
Ts, G i GTP.
Procesul decurgc n trei faze: F igura 2.40. Formarea complexului de iniiere
a) Aminoacidul unntor activ (A A,-tRNA) rR N A 16S
se fixeaz cu Tu i GTP, formnd complex ce

adiioneaz la complexul de iniiere. Simultan,
are loc hidroliza GTP, rezultnd abandonarea
complexului Tu-GDP de ctre ribozom.
Ultimul e reactivat cu GTP iTsnTu-
GTP. AA,-tRNA se fixeaz de locusul mRNA
aminoacidic datorit interaciunii complemen F igura 2.41. Segmentul complementar
tare antiparalele ntre anticodon i codonul Shine-Dalgarno
C om p o nente iniiale Procariote
Subunitatea?
m ic
Factorii
deiniere Gp
ATP
Subunitatea fM ct-
m are
IS S tR N A
30S com plcxul de iniiere
GD P
70S/80S
<S>
GDP
ADP
F igu ra 2.42. Formarea complexului de iniiere la pro- i eucariote
mRNA. Fixarea adecvat e determinat i de interaciunea n locusul A ntre tRNA i

rRNA. S-a stabilit perfect c n bucla W C se localizeaz unele fragmente ce
formeaz perechi cu bazele din 16S rRNA - la fixarea anticodonului. n 16S rRNA
secvena C-C-A-A este complementar T ^ C din tRNA (fig.2.10). Legarea se
marcheaz numai dup interaciunea corect dintre codon i anticodonefect alosteric
al fixrii (fig. 2.43).
b) Elongarea continu prin fonnarea legturii peptidice ntre aminoacizi din locusu-
rile P i A. Complexul de iniiere cu N-formilmetionina de la tRNA este propriu-zis
transferat pe grupa aminic a noului aminoacid n centrul A. Reacia catalizat dc
peptidil transferaz, ce intr n compoziia subunitii 50S i n final se formeaz
dipeptidil-tRNA, iar n centrul P rmne tRNA liber (fig. 2.44).
c) n faza urmtoare ribozomul parcurge pe mRNA spre captul 3 'o distan egal
cu un codon, cu transferarea dipeptidului tRNA n centrul P, iar tRNA (hidroliza liber)
abandoneaz ribozomul i se permut n citozol. n centrul A se afl al treilea codon al
mRNA. Micarea, alunecarea ribozomului se numete translocare. Procesul este ca
talizat de o translocaz i presupune hidroliza unei molecule dc GTP Procesul e
condiionat de existena factorului de elongarc. n aceast faz au loc modificri
confonnaionale a ntregului ribozom. El e gata de urmtorul ciclu de elongare.
La legarea n lan sunt antrenate dou molecule dcGTP (fig. 2.44a).
F igura 2.43. Etapa I a elongrii F igura 2.44. Etapa I I a elongrii, formarea legturii peptidice
IV. Finalizarea sintezei lanuluipolipeptidilic (fig. 2.44b). Procesul se oprete

atunci cnd ribozomul ntlncte unul dintre codonii nonsens, ce semnific finalizarea. n
ansamblu, acioneaz i factorii de finisare R, i S care efectueaz urmtoarele
operaii:
a) detaarea hidrolitic a polipeptidului de la tRNA i eliminarea lui (hidrolaza);
b) eliminarea tRNA, purttor al ultimului aminoacid din locusul peptidilic;
c) disocierea ribozomului n subunitile respective, apte s resintetizeze un alt lan
polipeptidic.
Biosinteza proteinelor cere un consum substanial de energie minimum 4 legturi
macroergice sunt necesare pentru formarea unei legturi peptidice, ce asigur ireversi
bilitatea procesului i stabilitatea lui. Lanul de mRNA poate reine mai muli ribozomi
mpreun, fonnnd polizomi ce accelereaz considerabil sinteza i eficacitatea matricei
(fig. 2.45).
Factorii de
Uf \ finisare
Dipcptidil
5 -
Hidroliza
polipeptidului
sintetizat
<:oo
Micarea ribozomilorv '
F igura 2.44a. Etapa III a elongrii, translocarea F igura 2.44b. Finalizarea sintezei proteinei
Dac sinteza proteinei nu e necesar, nucleazele deprim mRNA.

n procesul de sintez sau imediat dup ea, proteina se autoasamblcaz, formnd
conformaia nativ structura tridimensional. Probabil lanul polipeptidic sintetizat
sufer modificri covalente, numite modificri posttranslaionale (prelucrri posttra-
ucere faza V), ce constau n:
r 1) modificarea captului N- i C- terminal, N - mai frecvent se acetileaz;

2) ndeprtarea secvenei semnalizante cu ajutorul unor peptidaze;
3)ataarea unor grupri funcionale fosfat, biotin, glicozil pentru formarea
fosfoproteinelor, carboxikinazelor, glicoproteinelor etc.;
4) clivarea unor oligopeptide (preproinsulina);
, 5)metilarea(lizmanmuchi); iodurarea reziduului de tirozina n tircoglobulin;
-----------------------------------------------------------------------
7) formarea punilor disulfidicc; Subuniti ribozom iale
8) modificarea unor aminoacizi lipsii de cod

(hidroxiprolina, hidroxilizina etc.).
In ce mod proteina sintetizat se locali
60S
a
r

f 40S
zeaz n celul?
La captul N-terminal se pstreaz secven
e specifice- lider 15-30 de aminoacizi. Ei
sunt sintetizai n primul rnd i sunt identificai
de locusurile receptoralspecifice de pe
suprafaa exterioar areticululuiendoplasmatic
adiacent sintezei complete. Aceast poriune-
lider, de obicei, e hidrofob, liposolubil, uor
ptrunde prin membran in interiorul cisternelor
reticulului endoplasmatic i trage dup sine restul
lanului. Ideea original i aparine lui George
Palade, laureat al Premiului Nobel, original din
Moldova.
n cisterne, o peptidaz specific o cliveaz.
Proteina matur n aparatul Golgi este
incapsulat, apoi prsete celula n forma unei
bule secretoare (fig. 2.45a).
n ultima perioad se postuleaz dou
concepii de asamblare a proteinelor n forma
nativ , stru c tu r unic trisp a ia l :
cotranslaional i p o sttra n sla io n a l .
Confonn concepiei cotranslaionale, proteinele
se aranjeaz spaial n procesul sintezei lanului
polipeptidic n ribozom, iar potrivit concepiei
S ccvcn sem nai

C itozol
R ibozom ial receptor
F igu ra 2.45a. Compartimentalizarea proteinelor n reticulul endoplasmatic

posttranslaionale- forma nativ apare numai n urma eliberrii complete a lanului
polipeptidic din ribozom.
Sunt rezultatele unor experimente biochimice in vivo i pe sisteme-inodel, care confinn
conccptul cotranslaional de asamblare.
De regul, foldingul proteinelor are loc n compartimentele corespunztoare ale celulei
- mitocondrii, reticulul endoplasmatic, citozol ribozomial. Proteinele penetreaz mai multe
membrane n calea spre locul de asamblare. Unele se pot asambla alturi de membranele
corespunztoare.
In citozol i n plasma organitelor celulare, unele proteine se asambleaz cu participarea
complexului ciaperonic.
Azi se pot evidenia trei cazuri de asamblare a proteinelor, n dependen de localizarea
acestui proces: lng ribozom, n apropierea membranei sau cu participarea ciaperonilor.
Asamblarea proteinelor lng ribozom. tim c lanul polipeptidic prsete
ribozomul ntr-un anumit mod: ncepnd cu captul N-terminal i, consecutiv, parcurge,
segment dup segment, lanul din centrul polipeptidilicprin canalul ribozomial ngust
spre suprafaa ribozomului, cu ieirea cotraslaional n citoplasm.
Dac lanul polipeptidic nu are secvena-lider, el nu este transportat i se asambleaz
n citoplasm lng ribozom. n ce constau mecanismele de asamblare, ce reprezint
acest model? Asamblarea ncepe cu momentul translocrii primului rest terminal-N al
lanului din ribozom n citozol (de la acest moment au loc modificri confonnaionale sub
influena forelor moleculare, ce cauzeaz asamblarea proteic). n continuare, asamblarea
are loc simultan, cu translocarea lanului, i se finiseaz dup ieirea ultimului C-rest
terminal din ribozom.
- Asamblarea are loc n etape consecutive, analogice cu ciclurile de translocaie a
lanului din ribozom. Numrul de etape e identic cu fenomenul de translaie la sinteza
lanului.
- La fiecare etap se formeaz o confonnaie a captului N-terminal al lanului ce iese
din ribozom. Aceasta este o structur iniial n formarea confonnaiei unui lan mai lung
n etapa unntoare a foldingului (are loc scindarea unor legturi moleculare, cu fonnarea
altora).
- Elementele de structur secundar (a - spaial, - lan, domeniile) formate n
fiecare etap a foldingului se distrug, se modific sau pot rmne nemodificate n etapa
urmtoare.
- Fonnarea unei conformaii a lanului sintetizat la toate etapele foldingului, precum i
a conformaiei native a proteinei la ultima etap, dureaz nu mai mult dcct este necesar
ribozomului pentru realizarea unui ciclu de elongaie. Durata foldingului este egal cu
timpul sintezei lanului polipeptidic de ribozom.
Sunt propuse i cteva concepii referitoare la mecanismul asamblrii cotranslaionale:
a) dctenninat de viteza de translaie a diferitelor segmente ale lanului polipeptidic;
b) e determinat dc viteza de translaie a diferitelor segmente din mRNA, cauzat de
clasterele codoanelor rar ntlnite, ct i dc codul degenerat;
c) alt concepie susine c modificrile confonnaionale temporare sunt detenninate
de codoanele aminoacizilor iniiatori i terminali pe suprafaa a-spiralei.
Cu alte cuvinte: structura secundar, teriar proteic nu e dependent de resturile
aminoacidice dm lanul polipeptidic.
Asamblarea lng inembran.Trans\ocaha lanului polipeptidic prin membran are
loc prin canalul respectiv membranar i coincide cu periodicitatea ciclului de elongaie
ribozomial. Sc presupune c procesul de asamblare lng membran pe partea opus a
organitelor celulare este analogic cu schema propus la asamblarea proteinei lng
nbozomi. Se consider c regiunea suprafeei respective, unde arc loc asamblarea lanului
polipeptidic n structura nativ, conine resturi de aminoacizi polari i e foarte hidratat.
Acest fapt protejeaz lanul de interaciune cu complexul translocaional proteic.
Schema propus presupune c asamblarea proteinelor este un proces dinamic de
autoorganizare a structurii spaiale a lanului polipeptidic, ce ncontinuu se alungete, n
funcie dc etapele de timp. n compartimentele celulei ndeprtate de ribozom, lanurile
polipeptidice se vor asambla posttranslaional, adic dup finisarea sintezei lor n ribozom
(cu excepia acelor proteine care se sintetizeaz n ribozomii alturai la membrana
reticulului endoplasmatic).
Conform acestei ipoteze, asamblarea cotranslaional a proteinelor indic faptul c
asamblarea lanului n structur nativ are loc simultan cu translocarea lui n locul de
asamblare.
Foarte multe aspecte sunt neelucidate. Unele proteine, primar fiind native, pierd
structura teriar rigid la interaciunea cu membranele. Asemenea modificri sufer
toxinele, diversele proteine de transport. Datele confirm c membrana poate servi ca
factor denaturant n celula vie, cauzat de prezena n membran a sarcinii negative. Acest
potenial electrostatic al suprafeei membranare manifest o atracie a proteinelor din
soluie, cauznd micorri locale de pH pe suprafaa ei, cu formarea unui gradient de pH
n microspaiu. Se consider c acest fapt, n ansamblu cu micorarea permeabilitii
dielectrice a mediului, poate transforma molecula proteic n stare denaturat cu
proprietile caracteristice globulei nfuziunestarea a treia termodinamic a moleculei
proteice.
Una din caracteristicile moleculei proteice nenative este proprietatea ei major de
asocierc. n procesul dc renaturare, proteinele sunt capabile s formeze asociaii de
intermediate.
Anionii sunt capabili s induc n proteinele globulare, parial denaturate, asociaii,
care se amplific odat cu diminuarea coninutului dc structur secundar.
Se consider c asocierea proteinelor o problem cardinal n biomedicin i
biotehnologie, fiind cauza unor astfel de maladii ca: boala Down, mieloma, cataracta,
afeciunile prion.
n condiii extremale, adaptarea e cauzat de mutaiile la nivelul DNA i al proteinei
cu participarea unor grupe prostetice, care pot stabiliza att starea nativ, ct i
intennediatele foldingului. S-a constatat experimental c:
a) glicozilarca majoreaz mult stabilizarea i solubilizarea proteinelor;
b) glicozilarea nu modific mecanismul foldingului i al asociaiei proteice;
c) componenta glucidic, graie capacitii solubilizante, protejeaz partea proteic
de agregare termic, manifestndun efect ciaperoninic.
n diferite situaii extremale, datorit reglrii sintezei polioxizii a compuilor, se produc
concentraii locale mari ale grupelor glucidice, ce posed efect de protejare. Asemenea
fenomene sunt nregistrate la bacterii, plante i animale mici.
La plantele rezistente la secet proteinele nviate sunt bogate n lizin, serin, treonin,
ce joac rolul de imitatori ai apei intracelulare, n condiii extremale.
Organismele pot anihila stresul prin neutralizarea acidittii anormale sau echilibrarea
concentraiei mari de sruri, graie concentraiei izoosmotice de substane corespunztoare
sau a mutaiilor respective. Organismele termofile i barofile sunt capabile de adaptarea
celulelor cauzat de mprejurrile extremale pe parcursul ntregului ciclu vital. La
hipertermofile limita creterii optime este de 80-110, presiunii hidrostaticepn la
120 mPa, pil - de 0-11. Hipertennitele posed o strategie de protejare puin cunoscut
azi. Foarte puin se cunoate i despre degradarea hidrotermal a aminoacizilor. Degradrii
oxidante sunt supuse cisteina, metionina; dezamidrii asparagina i glutamina.
Ionii, cofactorii, metaboliii conjugai cu componentele neproteice modific esenial
stabilitatea proteinelor i denaturarea termic, ce poate ti permutat spre limita maxim
pn la aproximativ 120C.
Particularitile biosintezei proteice la eucariote
Procesul biosintezei proteice la eucariote se desfoar confonn unui mecanism similar
procariotelor, dar cu unele particulariti:
a) Aminoacidul iniiator nu esteN-fonnilmetionina, ci metionina.
b) Pe molecula mRNA, la eucariote, exist un singur semnal de iniiere, reprezentat
de 7-metil-guanozin trifosfat, legat printr-o succesiune de nucleotide metilate de codonul
iniiator AUG; deci, mRNA la eucariote este monocistronic. Este singura succesiune de
nucleotide AUG apropiat de 7-metil-guanosin care servete drept codon de iniiere;
aceasta este posibil datorit exigenelor de legare a ribozomului. La procariote muli
mRNA suntpolicisronici, codificnd sinteza a dou sau mai multe proteine. Pe un astfel
de mRNA exist multiple semnale de iniiere, care vor codifica sinteza a tot attea proteine.
c) Ribozomul eucariot nu sare peste codonii tenninali ca cel procariot. i acest fapt
pledeaz pentru caracterul monocistronic al mRNA la eucariote.
d) Viteza procesului de traducere este mai mare la eucariote; n plus, pentru creterea
eficienei traducerii, mai muli ribozomi se angajeaz simultan n citirea mRNA, toi ncepnd
citirea de la captul 5'.
Asocierca mai multor ribozomi, ce traduc simultan aceeai molecul dc mRNA, se
numete poliribozom sau polizom.
Inhibitorii sintezei proteinelor
Majoritatea toxinelor bacteriene se comport ca inhibitori ai biosintezei de proteine.
Aciunea specific a antibioticelor este incontestabil. Aproape fiecare etap a sintezei
proteinelor e inhibat de un anumit antibiotic i aceast inhibiie se poate ntlni n orice
moment al transferului de mesaj. S-au stabilit urmtoarele (vezi fig.2.46):
1. Streptomicina produce erori n reproducerea mesajului genetic; interfereaz n
locul de iniiere, cu legarea fmet.-tRNAfmcI. De asemenea, ncomicina, kanamicina,
gentamicina produc erori n reproducerea codului genetic.
2. Mitomicina, acyclovir (acelai mecanism) mpiedic separarea catenelor
com plem entare ale DNA, acidul E ritrom icina
nalidixic inhib DNA helicaza (giraza), sacptogramina Peptidii
Purom icina
actinomicina D se leag trainic de DNA,
Cloram fcnicol
mpiedic transcrierea. S parsom icina
3. Tetraciclin blocheaz A situs n 50S
ribozom (iniierea). T hiostrepton
4 .E ritro m ic in a se leag de
subunitatea 50S i inhib translocarea. 30S Strcptomicina
mRNA'
5. Puromicina blocheaz elongarea,
e analoag cu captul '-OH al AA
Acid Aeid fuzidie Tetraciclin
tRNA i formeaz peptidii puromicin, aurintricarboxilic
aa nct nu mai adiioneaz nici un F igura 2.46. Site-urile le aciune ale antibioticelor
aminoacid.
6. Toxina difteric inhib translocaza.
7. Cloramfenicolul inhib peptidii transferaza.
8. Ciclogeximida inhib sinteza n ribozom 80S (translocaza).
9. Tunicamicina inhib ataarea catenelor oligozaharidice. Rifampicina i amanitina
s-au descris mai sus (RNA-polimeraza).
10. Spiramicina previne fixarea n site-ul P ribozomial.
11. Acidul fuzidie sechestreaz G-factor i GDP n site-ul GTP-azei.
12. Acidul aurintricarboxilic previne fixarea RN Am n subunitatea 30S ribozomial.
13. Thiostreptona interacioneaz cu factorii G i T n site-ul GTP-azei.
H3CX y C lh
N
c=o
I c=o
Hc R
NH2CH C H f" \ -0 -
. NH2
A m inoacil-tR N A Purom icina
REGLAREA BIOSINTEZEI PROTEINELOR
Graie procesului de reglare a sintezei, n celule se stabilete un complex adecvat de
enzime ce asigur activitatea normal a fenomenelor celulare. Dei fiecare celul conine
un set de genom caracteristic acestui organism, celulele lui exprim numai o parte din
genele structurale. Toate celulele conin un set de enzime de baz, necesar pentru
manifestarea metabolismului. Diferite celule, ns, conin structuri proprii numai lor i
ndeplinesc anumite funcii biologice. Biosinteza diferitelor tipuri de proteine specializate
sunt programate strict n timp i consecutivitate, ceea ce permite o adaptare biochimic
la aciunea diverilor factori.
Celulele dispun de trei tipuri de enzime: 1. enzime inductibile; 2. enzime represibile;
3. enzime constitutibile. Ultimele se reprezint n cantitate constant, indiferent de sta
rea metabolic a organismului (glicoliza). n alte celule reglarea e asigurat de cele induc
tibile i se sintetizeaz numai atunci cnd este necesar, sub influena inductorului. Induc
torul poate determina sinteza unui grup de enzime inducie coordonat, ceea ce
permite o adaptare imediat i econom n utilizarea substanelor nutritive. Concentraia
enzimelor represibile depinde de prezena sau absena din mediu a unui compus
denumit corepresor. Enzimele acestea sunt implicate n cile anabolice, cele inductibile,
respectiv, n catabolice. Ne confruntm i cu represie coordonat, represieprin produs
final.
Represia, ca i inducia, e reflectarea principiului economiei celulare. Explicarea pro
ceselor de inducie i represie enzimatic se datoreaz lucrrilor lui EJacob i J.Monod
(1961) teoria lac-operonului , adic reglarea la nivelul transcripiei.
Utilizarea lactozei la bacterii implic creterea sintezei -galactozidazei necesare pentru
hidroliza lactozei cu scop energetic, enzim codificat de gena Z. -galactozidele (-
galactoza i oc-glucoza) sunt transportate prin membrana plasmatic printr-un proces
cuplat cu gradientul dc protoni. Proteina implicat n acest proces este -galactozid
permiaza cu o mas molecular de 46,5 kDa; sinteza ei este codificat de gena Y. Unele
-galactozide sunt acetilate sub aciunea transacetilazei, care vor traversa membrana
plasmatic, ieind din celula. Enzim este un dimer i este codificat de gena A. Genele
structurale care codific sintez celor trei enzime sunt controlate de alte dou gene: gena
reglatoare Lacl i gena operatoare O. Ultima, mpreuna cu genele structurale, alctuiete
operonul lactozei (Lac - operon) (fig. 2.47).
Gena reglatoare se afl la distan mic de operon i detennin sinteza unei proteine
numit represor, care, legndu-se de gena operatoare, mpiedic transcrierea genelor
i structurale. Inductorul (metabolit) se leag de proteina represor, modific conformaia,
blocnd fixarea ei de gena operatoare. n acest caz are loc transcrierea genelor i sinteza
enzimelor codificate de ele.
Teoria modernizat const n urmtoarele (fig. 2.47a).
n lipsa glucozei sau la concentraiile mici ale acesteia (ca rezultat al activitii
I adenilatciclazei i inhibrii fosfodiesterazei), apare AMPc, concentraia cruia crete,
I reprezentnd astfel semnalul foamei pentai bacterii. n consecin, se formeaz complcxul
I cu proteina receptoare, cu legarea acesteia de promotor (p-locus). Proteina receptoa-
i r e e numit proteina activatoare a genei catabolice (CAP). Acest proces favorizeaz
a . R epresia
p la c I la c Z lac Y lac A
T ran scrip ia
T ran slarc a
R c p rcso r T e tra m e r
. Inducia
p lac I p lac Z lac Y lac A
T ran scrip ia
T ran slarc a
in activ
In d u cto r
. S tim ulare +
P Ia ci ^ p o lac z lac Y lac A
CRP<'< i
D im cr
cA M P
F igura 2.47. Reglarea activitii Lac - operonului (CRP-protein receptor penru AMPc)
ptrunderea RNA-polimerazei n locusul de reglare. CAP dispune de dou centre

pentru AMPc i pentru DNA.
Proteina represor a fost izolat. Ea are dou centre pentru a se lega de locusul ope
rator i de inductor. Atunci cnd concentraia glucozei e mare, concentraia AMPc e
mic. Lipsete i complexul CAP-AMPc. n final, RNA polimeraza nu se leag de pro
motor, iar genele Lac nu sunt transcrise, indiferent dac exist sau nu lactoza, adic
indiferent de faptul dac operatorul este sau nu ocupat de represor (fig. 2.47a).
Aceast dubl modalitate de reglare (de CAP-AMPc i represor-inductor) confer
organismelor o mare flexibilitate metabolic, permindu-le s-i rezolve problemele de
adaptare n diverse medii nutriionale.
Promotorul e localizat n apropierea regiunii codificate. In anii 80 au fost depistate i
alte elemente reglatoare, denumite e n h a n e r s (activatori), localizate la mii de
nucleotide de la promotor sau regiunea codificat. Sunt depistate i elementele
reglatoare s i l a n c e r s , carc servesc ca inactivatori.
Posibil c astfel se regleaz i aceste structuri. Promotorii i enhancersele sunt compuse
din cteva subiecte secvene de nucleotide scurte care formeaz locusuri de fixare a
proteinelor reglatoare. Proteinele se ataeaz de subiecte bilateral simetric.
Glucoza ( -) \
cA M P (+) /
/
Glucoza ( +) L a c to z a
...........
cA M P (- )
Lac represor
Figura 2.47a. Efectele combinate ale glucozei i lactozei n expresia Lac - operonului
Enhancers prezint un puternic reglator pozitiv, efectul lui nu depinde de localizarea

fa de gena reglat. Fiecare gen poate avea unul sau mai muli enhancers.
Proprietile acestor elemente sunt:
1) cis-elemente active, numai dac se afl n structura anumitului DNA cu gena reglat;
2) n-are polaritate, direcia sa poate fi reorientat, far a diminua practic activitatea
lor;
3) localizarea poate fi schimbat fa de gen, mai des e precedent lui, la sute
sau mii dc nucleotide. S-a determinat prezena lor i n introni;
4) indiferent dc gena pe care o regleaz, schimbnd-o pe alta, o activeaz pe ultima;
5) posed o slab pronunare de specie, ns n celulele sale acioneaz mai efectiv;
6) muli i manifest o exprimat specificitate de esut. Enhancers genei FIb sunt
maximum activi n celulele eritrocitare; enhancers ale H catenelor imunoglobulinei
sunt activi n celulele liinfocitare. Enhancers prezint factori primordiali ai diferenierii;
7) o gen poate avea mai muli enhancers;
8) enhancers sunt reglai de factorii celulari, de glucocorticoizi. Exist mai multe
secvene ce sunt identificate dc receptorii glucocorticoizilor. Eliminarea lor inactiveaz
enhancers, fapt argumentat la virusul cancerului glandei mamare.
9) hotarele enhancers nu-s strict delimitate, dar aflm regiuni discrete, n carc
mutaiile brusc micoreaz activitatea. Aceste regiuni corespund unor zone omoloage
ntre enhancers; spre exemplu, blocul izolat - activ (GCTGTGCAAAG). Se nregistreaz
i alte zone conservative;
10) un enhancers are mai multe zone de acest tip premergtor. ntre blocuri se
manifest sinergismul n aciune;
11) enhancers (unii) activeaz transcripia genei, dar nu o menin. Gena mutanilor
I celulari cc au pierdut enhancers, i pierde activismul n alte celule. Activitatea se
prestabilete numai dac sc ataeaz enhancers corespunztori.
Silancers constituie elemente de control negativ, cu aceleai proprieti. Expresia
genei va fi suficient numai n cazul n care cu toate motivele n promotoare sau enhancers
se vor fixa proteinele corespunztoare. De aceea, expresia genelor va fi pronunat
doar n acele celule care sunt apte de sinteza unui complet de proteine reglatoare, capa
bile s recunoasc anumite motive. Se cunoate c albumina se sintetizeaz numai n
hepatocite, ns celulele creierului, ale splinei conin proteine care pot idcntifica elemen
tele reglatoare ale genei de albumin, dar nu sintetizeaz albumina. Concluzia e unic:
activarea genei e un proces mult mai complex.
S-a dovedit c proteinele ce se ataeaz de DNA trebuie s corespund dup
structur proteinelor fixate n vecintate. Fiecare promotor i enhancers este capabil
s reacioneze cu cteva combinaii diferite de molecule proteice, dar numai o singur
combinaie activeaz gena. Proteinele reglatoare formeaza homodimere (perechi de
proteine identice) sau heterodimere. Ultimele confer organismului unele avantaje
(identific 2 secvene nucleotidice diferite n acelai subiect de DNA) i lrgete spectrul
de reglare.
E argumentat i faptul c activarea genei poate ti realizat de ctrc fragmentele pro
teice reglatoare, care n-au nimic n comun cu locusurile responsabile de fixarea DNA
- aceste domenii activatoare ntr-un mod anumit interacioneaz cu RNA-polimeraza.
Domeniile active pot servi ca locusuri de contact cu alte proteine i, n consecin, cercul
de interaciune se lrgete, ndeosebi la heterodimere.
n ce mod interacioneaz proteinele ataate la DNA ?
Parial rezolv problema aa-numitele fermoare de leucin (fig.2.48 a, b, c).
F igura 2.48a. Fixarea ferm oar a dou molecule proteice F igura 2.48.b. Fermoarul
prin leucin. Ea favorizeaz fixarea proteinelor reglatoare leucin (fiecare al aptelea
cu DNA, modificnd activitatea genelor aminoacid) n -elicea proteic
F ig u r a 2 .4 8 e . M odelul F igu ra 2.48d. Fermoarul leucin contacteaz cu DNA, favoriznd
com puterizat (im aginea fixarea. Asparagina i ali aminoacizi n aceste fragm ente sunt
m ai n ch is indic invariabile
resturile de leucin)
n proteinele vizate aminoacidul al aptelea este Ieucina aminoacid hidrofobce
permite moleculei de protein s se asocieze n perechi cu locusurile lor, formnd astfel
dimere - superspiral. Fragmentele sunt aranjate paralel, ca-n colagen, determinnd du
ritatea spiralei. Pot asocia diferite proteine, dar la fixarea DNA nu particip.
n apropierea acestor fragmente sunt situate secvene bogate n arginin i lizin, care
contacteaz cu DNA. Poziia adecvat a fragmentelor de arginin i lizin, ce
determin fixarea cu subiectele bilateral simetricc din DNA, este asigurat de asocierea
a 2 molecule de proteine (fermoar (g )-picioaiul - fermoar; umerii-aminoacizi bazici).
Spirala e deformat dc asparagina, cc-i permite spiralei s contactezc cu DNA. Aceste
fragmente au un grad mare dc conservatism, un rezultat evident evolutiv i posibil
relev formarea heterodimerilor din proteinele neidcntice(fig.2.48.d).
Reglarea fin a biosintezei proteinei necesar pentru funcionarea normal att
a celulei, ct i a ntregului organism. Generarea insuficient sau excesiv mcar a unei
proteine poate conduce la consecine nefaste. Surplusul unor factori de evoluie provoac
tnalignizarea celulelor.
E clar c durata sintezei fiecrei proteine e direct proporional cantitii de
mRNA. Factorii ce regleaz cantitatea dc mRNA, n final, determin i nivelul de
sintez a proteinei. Cantitatea de mRNA i protein corespunztoare din celul era
determinat, dup presupuneri, numai de durata procesului de sintez. Recent, s-a
I stabilit c un rol important l joac i durata de degradare a mRNA. Producerea protei-
I nei depinde nu numai de intensitatea sintetizrii mRNA, dar i de durata scindrii lui.
Ce determin durata degradrii tnRNA?
mRNA degradeaz n citozol sub aciunea enzimelor denumite ribonucleaze, carc
I activeaz sub influena unor factori ce se fixeaz de moleculele de mRNA. Unul dintre
I factorii principali este structura lor proprie (fig.2.49.a,b).
Semnal slart Semnal stop Poli A

Ii i i I I I il
( ............ I 11 I I i i
I 1 1I IIII 11 I I I i i I I I li I I 11
5 netranslabi! Secvena 3 netrans labil

codificat
F igura 2.49a. Molecula de mRNA
S cgm ant
netraslabil
Pentru sinteza proteinelor rolul pri
mordial l are secvena codificat, unde
acioneaz ribozomii. Acest proces
este influenat efectiv de celelalte
fragmente.
a) Lipsa 5'-fragment netranslabil n
Stop
- ----- ;C^ ..... i
- rfaIQ' gena C-myc (gen protooncogen, ce
codific proteina necesar pentru mi-
toza normal. Dac, ns, proteina e
S tart Stop modificat saue n exces, celula nor
mRNA stabil
mal se malignizeaz) mrete perioa
mRNA nestabil da de njumtire (P 1/2) a mRNA,
genereaz surplus de protein n
m RN A hibrid nestabil
3' celulele ganglionilor limfatici i
mRNA hibrid stabil fenomene de anomalie exprimate n
celule cancerigene.
Figura 2.49b. Influena diferitelor poriuni de mRNA la
n 1984, K .D ani i F.Janter
stabilitatea m o lecu lei proprii. M o d ific n d p oziia (Frana) au demonstrat c mRNA
semnalului stop, se mrete sau se micoreaz zona normal la transcripia genei e relativ
codificat, ce conduce la majorarea P 1/2 mRNA, cu
creterea numrului de ribozomi fixa i (2,3). Modificnd stabil i are o perioad de njumtire
n mRNA stabil cap.3 netranslabil cu fragm entul analog egal cu 10 minute. Tot ei au stabilit
din 5, hibridul devine foarte nestabil (6) i invers, la
modificarea n mRNA nestabil (5) a segm entului 3 c n c elu lele can cerig en e ale
netranslabil cu cel din molecula stabil, durata vieii e ganglionilor limfatici mRNA e mai
prolongat (7) scurt, fr segmentul 5'-netranslabil
i, deci, au un P 1/2 mult mai mare.
b) S-a dovedit c modificrile din dimensiunule fragmentului de codificare a
mRNA deregleaz P 1/2 i influeneaz mult degradarea mRNA.
c) S-a studiat P 1/2 al mRNA la i 8 globine n celulele mduvei osoase a omului,
gene ce codific compartimentele proteice ale moleculelor din dou variante de hemo-
globin. S-a stabilit c mRNA la 8 degradeaz dc 4 ori mai rapid dect mRNA la
globin. Ele, ns, se deosebesc dup fragmentul '-netranslabil. Savanii n materie din
Cambridge (SUA) au determinat c viteza de degradaie depinde de coninutul de
adenin i uracil n acest segment. Cu ct e mai mare coninutul lor, cu att mai rapid
degradeaz mRNA.
d) Un anumit mesaj l confer i poli A. Se consider c coada poli A trebuie s fie
nlturat anterior degradrii mRNA. E posibil c nu singurul poli A, ci o protein
ligand sporete stabilitatea mRNA. Aceast protein (PABP) se racordeaz la coad
de 100 ori mai puternic dect la alte poriuni de molecula mRNA. Anume aceast pro
tein stabilizeaz mRNA, durabil protejndpoli A de invazia ribonucleazelor (fig. 2.49c).
Este elocvent i faptul c n cadrul stabilitii legturii proteina poli A influeneaz i
cclelalte segmente ale mRNA. Prin urmare, nu numai fiecare segment influeneaz
stabilitatea mRNA, ci, n unele cazuri, stabilitatea e determinat i de combinarea pro
prietilor acestor segmente, n ansamblu.
Dar care sunt mecanismele anume,
SSg mai concret va arta viitorul.
RNA
Putem, totui, afinna c:
tra n sc rip t p o lim e ra z a 1. Stabilitatea mRNA depinde i de
m RNA m atur
\w
Nucleu virui. Ei grbesc degradarea mRNA
Membrana nuclear
celulare, activnd ribonucleazele i po-
lizomii liberi, sintetizeaz proteine
virotice proprii.
2. Estrogenii mresc stabilitatea, la
fel ca i hormonul de cretere, cortizonul
etc.
3. n unele cazuri, proteina i
regleaz coninutul propriu al mRNA.
Autoreglarea de tipul dat e descris la
compartimentul sinteza histonelor
(fig.2.49d,e).
V J
Histonele libere, nelegate cu DNA,
Figura 2.49c. Ciclul vita! al mRS'A
favorizeaz scindarea mRNAhistonice,
probabil legndu-se cu fragmentul 3'-
netranslator, care se scindeaz primul.
Histonele iau parte la activarea genelor, reglarea transcripiei. Pentru iniierea tran
scripiei e necesar o interaciune direct sau indirect a proteinelor activatoare, cu o
poriune din coada histonei H4 pe TATA-bloc al DNA n promotor. Ca urmare, are loc
o disociaie menajat a octamerului histonic, prin detaarea histonelor H2A i H2B.
Gl G2 M
mRNA pentru
h isto n e
Viteza dc scindare
N ivelul m RN A pentru
relativ h isto n e
H istonele n
cito p lasm
Histona iRibonuclcaza
activ
F igura 2.49d. Ipoteza autoreglrii coninutului de histone la diferite fa ze ale ciclului celular
F igura 2.49e. Mecanismul induciei lizei mRNA propriu de tuhulin (a) i histone (b)
n consccin, TATA-bloc e disponibil pentru asocierea cu factori bazali (inclusiv i

RNA- polimeraza) i fonnarea complexului preiniial i nceputul transcripiei cu o vitez
mic.
Sunt cunoscui civa factori sus-menionai, dar mecanismul de reglare a biosintezei
proteinelor rmne a fi, n multe cazuri, neclar. Cnd savanii vor putea modifica intenio
nat stabilitatea mRNA, posibil vom stvili nmulirea celulelor anomale, vom reduce sau
complet vom suprima incidena cancerului.
n calea de la DNA la protein, controlul se poate realiza, practic, la fiecare faz. Se
remarc urmtoarele puncte de
G en e
control: una-
1) control la nivelul transcripiei
T ra n s c rip ia
timpul i caracterul transcripiei
T r a n s c r ip t
genei respective; p r im a r < v v w V- N u c le o tid e
2) co n tro l la nivelul / D egradarea
P ro c esin g u l
p ro c e sin g u lu i carac te ru l p o s tt r a n s c r ip io n a l| m P \!
procesingului al transcriptului RNA

mRNA W A / W
primar;
3) control la nivelul de trans
port selecia n nucleu a mRNA
mature, menit exportului n citozol;
4) control la nivelul translaiei
selecia n citozol a mRNA, menit
translrii n ribozomi;
5) co n tro l la n ivelul de
degradaie a mRNA stabilizarea
D eg rad area
specific a unor tipuri de mRNA n
P ro te in a a c tiv p ro te in e i
citozol.
Succesiunea proceselor n
stabilirea concentraiei de proteine,
S e c re ia i tra n sp o rtu l p ro te in e i
ct i punctele poteniale de control i
sunt redate n fig, 2.50, F igura 2.50. Punctele poteniale de control n
reglarea echilibrului proteic
c a p ito lu lu i. BIOENERGETICA
ASPECTE GENERALE
ntreaga biosfer desfoar o lupt continu pentru meninerea structurii
proprii i a funciilor inerente acestora. Pentru a exista i a supravieui, organis
mele vii se afl ntr-un schimb permanent de energie cu mediul nconjurtor.
Energia chimic a substanelor nutritive, dup transformarea ei ntr-o form
convenabil, este utilizat pentru efectuarea de travalii specifice vieii - cretere, reparaii
tisulare, activitate contractiv, osmotic. Organismele vii posed dispozitive de
transformare a energiei, deosebit de subtile i eficiente.
Care sunt legile fundamentale ce guverneaz procesele nsoite de schimbri
energetice? tiina care studiaz transformrile i utilizarea energiei se numete
bioenergetic. Obiectul ei de sidiu sunt sistemele termodinamice care constituie poriuni
din Univers, separate real sau imaginar. Ceea ce nu face parte din sistemul considerat
(restul Universului), constituie mediul nconjurtor. ntre un sistem i mediul nconjurtor
se efectueaz schimburi de energie. Ca sisteme termodinamice pot fi cercetate (n
cadrul schimbului de energie) att indivizii unei specii, celulele izolate, ct i reaciile
biochimice. Organismele vii sunt sisteme deschise, traversate de un flux de energie i
materie, adic o dat cu mediul nconjurtor se schimb att substana, ct i energia.
Termodinamica clasic studiaz sisteme nchise (nu pierd i nu ctig nimic n cazul
transformrilor ce le sufer). Legile tennodinamicii (TD) sunt deduse din dou principii
fundamentale:
1. Principiul conservrii energiei const n faptul c energia Universului este
constant. Energia nu poate fi creat i nici distrus, e posibil doar transformarea
ei dintr-o form n alta n cantiti echivalente, energia nu se pierde.
2. Principiul evoluiei stabilete posibilitatea i sensul transformrilor nsoite de
schimburi de energie. Procesele asociate de transfer de energie se desfoar de la
1 sine numai ntr-o direcie i numai pn la o anumit limit (de exemplu, cderea unui
corp; revenirea la iniial a unui arc ntins etc).

Care este factorul ce determin spontaneitatea unei transformri, de ce la
; o anumit limit procesul nceteaz?
Putem prevedea sensul i limita desfurrii libere a unui proces cu ajutorul
I entropiei (S), definit ca grad de dezordine a unui sistem. Ea reprezint micarea
dezordonat, haotic a particulelor, atomilor care alctuiesc acest sistem. Cu ct
libertatea de micare a acestor particule este mai marc, au o distribuie mai dezor
donat, cu att entropia sistemului este mai mare. Moleculele organice complexe,
proteinele, acizii nucleici sunt compui cu entropii mici. Celulele vii,
organismele pluricelulare sunt de asemenea sisteme naturale cu entropii dintre
[cele mai mici.
Principiul al doilea al termodinamicii atest c entropia Universului crete.
I Ordinea se poate transforma spontan n dezordine. ns procesul inversdiminuarea
I dezordinii nu poate avea loc dect dac sistemul absoarbe energie din mediu i
I diminueaz entropia. Ultima (S) poate fi msurat (n calorii /grad/ mol.). Modificrile
entropiei sunt greu de evaluat, de apreciat, n foarte multe cazuri. S-a definit o alt
funcie termodinamic legat de entropie, care servete drept criteriu de manifes
tare liber a proceselor energia liber.
Totalitatea factorilor (nucleul, electronii, rotaia, translaia, legturile)
determin energia intern (E) a sistemului. Energia intern a substanelor simple nu
se supune calculelor sau msurrilor. Termodinamica opereaz cu valori ale modificrilor
n cursul unor transformri pe care le suport sistemul.
Avnd n vedere c reaciile biochimice au loc n soluii apoase, n care variaiile de
volum, presiune, T sunt neglijate n cursul transformrilor, n bioenergie pot fi efectuate
diferite simplificri ale modului de evaluare a schimbrilor energetice i sensului n
care transformarea poate decurge liber, spontan. n reaciile biochimice efectuate n
condiiile sus-numite, modificrile energetice sunt datorate exclusiv unor transformri
intrinseci ale sistemului: formare sau desfacere de legturi covalente, transfer de electroni,
schimb de protoni, interaciuni hidrofobe, formare de asociaii intermoleculare etc.
Dac n starea iniial sistemul a avut o valoare energetic egal cu E i n final cu
E,, apoi diferena E, - B] = indic variaia energiei interne a sistemului, modificrile
energetice totale ce nsoesc acest proces. Dac AE este negativ, sistemul are energie
intern, n final, mai mic. Dac AE are valoare pozitiv, sistemul capteaz energie din
mediu, n decursul transformrilor.
O poriune din energia intern depinde de entropie i atest produsul ei (S) i
temperatura absolut (ST), aceasta fiind componenta energetic ce nu poate fi
transformat n travaliu, n lucru util (la T constant). Un anumit lucru nseamn o
micare ordonat, iar factorul TS este o energie de calitate inferioar, o energie degradat
a sistemului. Componenta energiei sistemului, convertibil n lucrul util (la T
constant) poart denumirea de energie liber (G). E = G + TS. Rezult c
variaia energiei interne () ntr-o reacie este determinat de variaiile energiei sale
libere (AG) i de variaiile entropiei (AS):
AE = AG + TAS.
Reaciile au loc spontan, cnd entropia sistemului n stare final este mai mare, respectiv
energia sa liber scade. Oricc reacie chimic sau proces are loc n sensul n care
energia liber a sistemului diminueaz capacitatea sa de a efectua travaliul. Fora
motrice a reaciilor este tendina sistemului att de a-i spori gradul de dezordine, ct i
de a-i reduce coninutul de energie liber, ordonat.
Energia liber a unui compus depinde de cantitatea de substan, ceea ce
constituie o valoare extensiv. Energia a 2 molccule este de 2 ori mai mare dect a unei
singure molecule. Energia liber este o mrime aditiv: Gs = Ga + Gb+ Gc.
Variaia energiei libere ntr-o reacie n care un mol reactant s-a transformat
ntr-un mol rezultant fiecare n stare standard poart denumirea de energie
liber de reacia standard i se noteaz cu AGn. Ea se calculeaz confonn formulei:
(1) AG= -2,303 X R X T X lg K; = -1,36 X IgK
(R - constanta gazului = 1,987 cal/mol, T = 298K).
Dac: l ) K e q = l , atunci A G = 0;
2) Keq > 1, AG este negativ;
3 )K e q < l, AG este o valoare pozitiv.
Keq = IO'1, AG = 1,36; Keq =10, A G = -1,36.
Spre exemplu: n amestecul echilibrat G -l-P ===== G-6-P concentraiile sunt egale
respectiv, cu Keq, = 0,001(lm M )i K eq,= 0,019 (19 mM).
0,019
Keq = --------- = 1 9 ; lg 19 =1,28.
0,001
AG = -1,36 X 1,28 = - 1,74 kcal/mol.
n concluzie, transformrile G -1-P n G-6-P la conccntraii iniiale de 1,0 mol decurg
cu pierderea energiei libere.
Formula precedent (1) ne permite s determinm constanta reaciilor n condiii
standard (2):
lg K e q = 10'AGo/(2'303RT) = 10'AGo/1*36. Dac AG=- 1,36 kcal/mol, apoi Keq=10.
Aadar, energia liber standard i constanta de echilibru a reaciei sunt legate printr-
o formul simpl. Corelaiile dintre constanta de echilibru i valorile modificrilor energiei
libere standard ale reaciilor chimice la T = 25C sunt redate n tabelul de mai jos:
Keq AG, kcal/mol Keq AG, kcaFmol

10'5 6,82 10 -1,36
IO'4 5,46 IO2 -2,73
io-3 4,09 103 -4,09
io-2 2,73 IO4 -5,46
io-1 1,36 105 -6,82
1 0
Valorile modificrilor energiei libere standard caracteristice unor reacii chimice sunt
urmtoarele:
ATP + H20 ADP + Fosfat AG =: -7,3 kcal/mol
Glucozo-6-fosfat + PI20 - Glucoza + Fosfat A G : : -3,3 kcal/mol
Maltoza + H20 - 2Glucoz A G : : -3,7 kcal/mol
Lactoza + H ,0 - Glucoz + Galactoz A G : : -3,8 kcal/mol
Glucozo-1 -fosfat - Glucozo-6-fosfat A G : -1,74 kcal/mol
Fnictozo-6-fosfat Glucozo-6-fosfat A G: -0,40 kcal/mol
Malat Fumarat + H ,0 A G: +0,75kcal/mol
Glucoz + 6 0 , 6C O ,+ 6H70 A G : ; -686 kcal/mol
Acid palmitic + 230., 16C02+ 1 6 H 20 A G0= -2338kcal/mol
Studiind biochimia, ar trebui s rezolvm dou probleme principale: 1) n ce

mod celula recepioneaz energia i capacitatea reductoare din mediul ambiant i 2)
Cum celulele sintetizeaz blocurile de construciebaza macromoleculelor?
n general, aceste procese au loc datorit prezenei unor sisteme superintegrate de
reacii chimice denumite metabolism.
METABOLISMUL
Metabolismul este o activitate celular concordat, determinat de participarea
multor sisteme multienzimatice strns legate ntre clc.
Care sunt funciile metabolismului?
1. Aprovizionarea cu energie chimic, carc se formeaz la scindarea substanelor
nutritive bogate n energie sau ca urmare a transformrii energiei radiaiei solare.
2. Transformarea moleculelor substanelor nutritive n blocuri de construcie necesare
pentru sinteza macromoleculelor.
3. Asamblarea proteinelor, acizilor nucleici, polizaharidelor, lipidelor i a altor
componeni celulari din aceste blocuri.
4. Sinteza i catabolismul biomoleculelor necesare pentru activitatea specific a
diferitelor celule.
Un organism simplu ca E.coli produce cel puin o mie de reacii chimice diferite.
Sistematizarea lor la prima vedere pare imposibil, dar la o analiz mai profund se
dovedete a fi mult mai simpl metabolismul reprezint un sistem coordonat cu
motivaii comune. Numrul de reacii n metabolism e mare, dar numrul de tipuri
de reacii e relativ mic.
Rolul primordial n toate formele vieii i aparine unui grup de molecule, num
rul total al crora nu depete 100. De remarcat c exist mecanisme comune ale
reaciilor cilor metabolice. Cu alte cuvinte, cile metabolice centrale sunt reduse i
identice aproape la toate vieuitoarele.
In procesul metabolismului o parte din energia captat se pierde, iar cantitatea
energiei neutilizate crete. Cldura i alte fonne de energie se eman n mediul
exterior, trec ntr-o fonn nesistematizat i inutil pentru organismele vii. Torentul
de energie n biosfer e un proces direcionat, neciclic, cheltuindu-se o energie
anumit pentru activitatea n cile metabolice, deoarece energia utilizabil nu poate
fi regenerat din cea inaccesibil, disipat. i dac elementele C, O, au rotaiile lor,
sunt antrenate n cicluri noi, atunci energia util degradeaz ncontinuu, se transform n
una inutil.
Fiecare tip de celule se caracterizeaz printr-o solicitare specific de sursele
O,, N, C, ct i de surse corespunztoare de energie. Metabolismul celular e un sistem
de modificri fennentative ale substanelor i energiei provenite din produsele iniiale
i pn la biosinteza materiei vii. Produsele intermediare a cilor metabolice sunt
numite m e ta b o lii.
La diferite etape au loc modificri chimice neeseniale adiia, deleia, transferul
atomilor, moleculelor, grupelor funcionale. n urma acestor modificri reglementate pe
etape, molecula iniial se transfonn n metabolitul rezultant. Unele ci metabolice
se expun liniar, altele ciclic.
De obicei, cile metabolice au diferite ramificri, de unde circul produsele
reaciilor. ntr-un sens mai ngust, prin metabolism se subneleg transformrile
substanelor n celul de la momentul iniial pn la formarea produselor finale.
Evideniem dou faze ale metabolismului catabolism i anabolism.
Catabolismul constituie faza degradrii compuilor preluai din exterior, a propriilor
constitueni ca rezerve la compui simpli. Procesele catabolice sunt nsoite de
degajarea energiei libere, ncadrat n structura complex a substanelor organice. La
o anumit etap a proccsului energia liber se acumuleaz pe durat scurt graie
reaciilor fermentative cuplate n form macrocrgic ATP. Poate fi acumulat i n
intermediari (o parte) bogai n energieatomii de hidrogen ai coenzimei NADP n stare
redus NADPH.
Anabolism ul sau biosinteza este faza procesului de sintez a diverilor com
pui organici (proteine, acizi nucleici i alte blocuri macromoleculare) constituii
din mici blocuri de construcie. Procesul necesit utilizarea energiei libere. Drept
surs servete scindarea ATP. Biosinteza solicit i atomi de H, donatori fiind NADPH.
Catabolismul i anabolismul decurg simultan n celule, ns viteza lor se reglea
z independent. Hans Krebs a descris trei etape de generare a energiei laoxidarea
substanelor nutritive. Aceste ci catabolice joncioneaz, converg, dnd natere
unui numr redus de metabolii.
Etapele catabolismului aerob sunt urmtoarele:
a) Macromoleculele alimentelor se scindeaz n componente mici: proteinele n 20
aminoacizi, polizaharidele n hexoze i pentoze, lipidelen acizi grai i glicerin.
La aceast etap nu are Ioc eliminarea energiei biologice utile.
b) n faza a doua, din moleculele primei faze (numeroase) se formeaz cteva
componente simple, ce joac un rol primordial n structura metabolismului, i anume
pimvatul un compus intermediar, ce se transform n component acil al acetil-
coenzimeiA, ultimul ncheind etapa a doua.
c) n etapa a treia, graie ciclului acizilor tricarbonici i fosforilrii oxidative, ce
finalizeaz cile de oxidare a moleculelor nutritive, se formeaz FLO, CO,, NFL
(sau alte substane azotoase). Generarea energiei arc loc, mai cu seam, la aceast
etap. Cile catabolice, n fine, fuzioneaz fenomenul de convergen.
Anabolismul decurge la fel n trei etape, ncepnd cu moleculele mici de
precursori. Spre deosebire dc catabolism, cile metabolice la anabolism se ramific
(fenomen de divergen). Dintr-un numr mic dc precursori se formeaz, n final,
un complex de macromolecule de structur vast.
Cile centrale conin multe ramificri, facilitnd astfel sintetizarea a sute de com
ponente, reaciile biochimice fiind catalizate de sisteme multienzimatice. Succcsiu-
nea modificrilor chimice n aceste ci este n principiu identic la toate
organismele vii. De exemplu, scindarea glucozci decurge n acelai mod la toate
organismele.
Coincide oare direcia cilor catabolice i celor anabolice?
Datele confmn c ea nu este identic. Or, acest factor e favorabil celulei?
Exist cauze serioase ce determin necoincidcna cilor metabolice:
1. Calea de scindare a biomoleculei poate Ii incompatibil cu cea de biosintez
din considerente energetice (e clar, dac procedm n analogie cu cderea unei
pietre dc pe munte i intenia de a o urca n vrful lui). Calea de biosintez necesit
energie suplimentara, cheltuicli enonne.
2. Neidentitatea const i n faptul c succesiunea reaciilor trebuie reglat separat.
Dac ar exista aceeai cale, ar avea loc o simpl inversare a succesiunilor de reacii.
Inhibarea catabolismului ar conduce i la inhibarea proceselor anabolice. Pentru ca
sinteza i scindarea unei molecule s fie reglate independent, aceste ci trebuie s
fie diferite. Dac, ns, posed faze fermentative comune, apoi viteza procesului
este reglat de acele enzime care n cadrul succesiunii reaciilor cilor contrare nu
particip.
3. Este exclus identitatea i din motivul c difer (cele antidirecionale) i dup
localizare (catabolismul acizilor grai are loc n mitocondriibiosinteza lor n citozol.
n aceste structuri este situat un complet de enzime specifice).
Nefiind identice, cile menionate sunt legate prin etapa a III-a ce include ciclul
acizilor tricarboxilici i fosforilarea oxidativ. Aceast etap e numit J'aza
amfibolic a metabolismului, ndeplinind un rol bifuncional. Catabolismul finalizeaz
cu scindarea i formarea moleculelor relativ mici; anabolismul furnizeaz molecule
miciprecursorii biosintezei.
Ciclul ATP. Reaciile metabolice sunt indispensabile, constituind o reea de reacii
fermentative corelate necesitilor urgente ale celulei; decurg foarte econom, cu
minimum consum energetic. n procesul de oxidare se elimin o cantitate enorm de
energie nevalorificat, utilizat ulterior pentru ndeplinirea unui lucru la T i P constante.
Ea se fixeaz i se conserveaz. Energia termic e necesar pentru meninerea T
constante a corpului. Sistemul universal de transfer al energiei n toate celulele vii este
ATP - ADP i P. O mare parte a energiei libere se pstreaz n baza sintezei cuplate a
ATP din ADP i P..
Energia chimic ncorporat n ATP este utilizat drept:
1. Surs dc energic n micare, contracie i transfer de ingredieni prin membra
ne contra gradientului de concentraie etc.
2. Surs de energie n biosintez. Sub aciunea enzimelor respective fosforul (P)
terminal este transferat moleculelor mici, activndu-le i folosindu-le ulterior la asamblarea
macromoleculeior.
3. Mobilizator al mecanismelor fine ce determin transmiterea informaiei genetice.
n reaciile cuplate cu utilizarea energiei celulare ADP se ncarc. ATP joac
rolul de expeditor al energiei i cupleaz procesele active, cu eliminarea i utilizarea
energiei.
NH2
HOp o PO Po 0
OH OH OH
ATP OH OH
Fiind depistat ATP n extractul din muchii scheletali, n 1929, de ctre
K.Lohmann (Germania) i C.Fiske, i J.Subbarow (SUA), abia n 1941, Fritz Lip-
mann a naintat conceptul care prevedea existena n celul a ATP - ciclului, n care
ATP joac principalul i universalul rol de remitor al energiei chimice. Prezena ATP,
ADP, AMP este determinat la toate vietile i ndeplinesc aceleai funcii. Se conin
n toate compartimentele celulei, cota ATP fiind 80% din coninutul total.
La hidroliza ATP, n condiii standard, se elimin energie:
ATP + HOH ADP + P. + H+ + 7,6 kcal/mol
ATP + HOH AMP. + pp. + H- + 7,6 kcal/mol
; + ===== 2P. + H++ 6,9kcal/mol (dup alte date (-7,3-8,0)kcal/mol)
ATP + 2HOH AMP + 2. + 1-+ 14,6 kcal/mol
Energia liber constituie diferena dintre energia liber a substanelor iniiale i
cea a produselor rezultante n condiii standard (T = 298K, P = 1atm., concentraie
= 1,0 mol, pH = 7,0). Se noteaz prin AG n cal/mol sau J (joule);
leal = 4,184 J i se calculeaz conform ecuaiei descrise mai sus.
ATP este principalul donator al energiei libere n sistemele biologice, ceea ce nu
egaleaz cu forma de rezerv a energiei. n celul molecula de ATP se utilizeaz timp de
un minut dup sinteza sa. Omul n repaus utilizeaz n 24 ore circa 40 kg de ATP; la
exerciii intensive viteza utilizrii de ATP ajunge la 0,5 kg/min. Turaia ATP e foarte
mare.
Unele reacii biosintetice sunt iniiate de ctre alte nucleotide, n care GTP, UTP, CTP
servesc drept tumizori de energie.
La hidroliza unor compui fosforilai se elimin mai mult energie liber dect la
scindarea n condiii standard a ATPului:
fosfoenolpiruvatul -14,8 kcal/mol
carbamoilfosfatul -12,3 kcal/mol
3-fosfogliceroilfosfatul -11,8 kcal/mol
creatinfosfatul -10,3 kcal/mol
acilfosfatul - 10,3 kcal/mol
ATP, ADP ocup o poziie intennediar, care are o importan primordial pentru
funciile lor biologice - 7,6 kcal/mol.
AM P - 3,4 kcal/mol
G -l-P - 5,0 kcal/mol
G-6-P - 3,3 kcal/mol
F-6-P - 3,8 kcal/mol
GA-3-P -2,2-kcal/mol
Ocupnd acest loc n scara termodinamic, ATP servete la remiterea grupelor fosfat
de la substanele supermacroergice la acceptorii de fosfat, compuii crora se
caracterizeaz prin valori mici dcAG0 la hidroliz. n procesele de catabolism se
_ formeaz substane supermacroergice (X - P). Cu ajutorul enzimelor specifice din gmpa
kinazelor grupa fosfat este transferat la ADP, cu formarea ATP.
I
X - P + ADP - - ^ X + ATP
- 177-
La etapa a doua, o alt kinaz specific transfer P terminal din ATP pe molecula
acceptomlui de fosfat (Y), mrind energia lui.
ATP + Y *. ADP + Y -P.
ATP ndeplinete funcia de remitor al energiei chimice, deoarece celula nu conine
kinaze specifice, ce ar transfera grupa fosfat de la substanele supermacroergice la
acceptori.
Ce particulariti determin molecula de ATP, la hidroliza fosfatului terminal,
s elimine energie?
Efectul e determinat de trei factori structurali:
1) gradul de disociaie a ATP i a produselor hidrolizei la pH = 7,0
ATP4' + HOH ^ ADP3' + ,2" 4
+ 1
ionii de hidrogen deplaseaz reacia de hidroliz spre dreapta;
2) repulsia electrostatic: cele 4 sarcini negative sunt situate foarte aproape n spaiu
la hidroliza ATP tensiunea intramolecular scade, produsele reaciei posed sarcin
negativ, se resping reciproc i nu pot forma molecula de ATP;
3) gradul de stabilitate, cu rezonana mai mare a ADP +P. dect pentru ATP; primele
au forme structurale mult mai stabile. Stabilitatea e determinat de faptul c o parte
din electroni sunt dispui n configuraii cu energie mult mai mic dect n configuraiile
caracteristice pentru ATP. Cu alte cuvinte, electronii n ADP i P. se situeaz la niveluri
energetice mai joase i conduc la micorarea rezervei de energie liber;
4) prezena ionilor de Mg++afinitatea ADP de Mg2+, este de 6 ori mai mare dect
a ATP, reacia de hidroliz este mpins spre fonnarea ADP i P..
Energia nu se afl n legtur macroergic i contrar se utilizeaz pentru scindarea ei.
La hidroliza esterilor acidului fosforic energia este condiionat nu de ruperea legturii,
dar de reducerea energiei din produsele iniiale. Sistemul dc generare a ATP n cclul
menine raportul ATP/ADP x P. la nivel nait-circa 500. Hidroliza unei molecule de ATP
deplaseaz raportul concentraiei produselor la concentraia substanelor iniiale n
reaciile cuplate = 10s ori. Succesiunea de reacii imposibile, din punct de vedere
tennodinamic, devine posibil, se realizeaz prin cuplarea hidrolizei unui numr mare de
molecule de ATP.
De exemplu: AG transformrii substanei A n este egal cu 4 kcal/mol.
Astfel de transformare devine imposibil far surplus de energie. Fiind
Keq = 10'^ G'1,36, obinem egal cu 1,15 x 10"3, adic, dac relaia molar e egal
sau mai maredect 1,15 x IO'3, substana A nu poate fispontan transformat n B.
Acest lucru va fi posibil numai dac reacia se va cupla cu hidroliza ATP.
A + ATP + H20 + ADP + P. + H
AG - -7,3 + 4 = - 3,3 kcal
Keq = 10'3-3/!36 = 2,67 x 10"2
[B] [ADP] [P ]
Keq = X---------------- -- 2,67 X IO'2
[A] [ATP]
[] [ATP]
= K eq -------------= (2,67 x IO2 ) x 500 = 1,34 x IO5.
[A] [ADP][P. ]
Aceasta nseamn c hidroliza ATP asigur posibilitatea transformrii A *-
atta timp, ct raportul B/A va atinge valoarea 1,34 x 105. Fr ATP, valoarea e egal cu
1,15 X 10 3; hidroliza ATP modific raportul B/A aproximativ de 108ori.
La utilizarea a dou grupe fosfat se formeaz AMP, care se rentoarce n ciclu sub
aciunea unei enzime prezente n toate esuturile - adenilatkinaza.
M g2+
ATP + AMP ^ ADP + ADP
Enzim are i funcia de a menine ATP n celule, cnd reacia catalizat va decurge
n direcie invers.
Metabolismul celular e bazat p e o economie maxim. Viteza metabolismului e
determinat de necesitile n ATP i NADPH. Celula utilizeaz la moment acea cantitate
de substane nutritive, care-i permite satisfacerea necesitilor energetice, precum i
viteza de sintez a blocurilor de construcie i macromoleculelor celulare.
Substanele din multe organisme i plante nutritive trec n rezerv i servesc drept surse
de energie i de carbon (glucidele, lipidele), cu excepia proteinelor i acizilor
nucleici.
Procesele catabolice sunt foarte sensibile i reacioneaz fin la modificrile i
necesitile energetice ale celulei. La musca domestic, bunoar, utilizarea 0 2 i a
surselor celulare n timpul zborului n decurs de 1 sec. crete de 100 ori.
M ECANISM ELE DE REGLARE ALE METABOLISMULUI
Mecanismul cardinal este indispensabil de efectul enzimelor alosterice. In calitate
de inhibitor servete ATP, iar de modulator pozitiv ADP i AMP. Pot participa i alte
rezultante finale sau intermediare ale altor ci metabolice.
Multe reacii sunt reglate de starea energetic a celulei. Indicatorul ei e sarcina
energetic care se detennin: (ATP conine dou legturi anhidrice, ADPuna):
Viteza
s _ 1 + 1/21ADP1
C [ATP]+[ADP]+[AMP]
Valoarea oscileaz de la 0 (n sistem numai

AMP) la i (numai ATP). Daniel Atkinson a
demonstrat c toate cile metabolice, res
ponsabile de sinteza ATP, sunt inhibate de sar
cina energetic nalt, pe cnd cile de utilizare
ale ATP sunt simultan stimulate (fig.3.1).
Reglarea menine sarcina energetic ca i pH-
ul celulei n oscilaii limitate (0,80-0,95).
Un indice reglator al metabolismului celular Sarcina energetic
e potenialul fosforilrii - PF. El e depen- Figura ' Reglarea metabolismu,ui
dent de fosforul compartimentai i e direct de
pendent de energia liber degajat la scindarea ATP:
[ATP]
PF = ----------------- = 500.
[ADP] X [P.]
Mccanismclc ce regleaz metabolismul sunt dependente de homionii care accele

reaz activitatea enzimelor (adaptare imediat) sau de viteza sintezei enzimelor (adaptare
de lung durat), respectiv, adrenalina i steroizii.
Sunt mecanisme legate de modificrile concentraiei enzimelor n celul, detenninat
de relaiile sintez-scindare. Inducia enzimatic condiionat de concentraia substanelor
particip activ la reglarea metabolic (vezi cap. I).
Distingem i metabolism secundar, care i are funcia sa aparte la formarea
substanelor specifice necesare celulei n cantiti mult mai micicoenzime, hormoni.
Sute de biomolecule absolut specifice se produc n aceste ci metabolice, studiate
insuficient pn n prezent.
Toate animalele i celulele plantelor, n condiii normale, sunt aerobe i combustibilul
lor organic i-l oxideaz complet pn la , i I f O-Energia biologic liber accesibil
este eliminat din substane organice numai n cazul n care toi atomii de hidrogen,
legai de atomii de carbon din molecul, vor fi substituii de oxigen, formnd ,.
Cantitatea de energie liber, ce se elimin la arderea total a oricrei substane
organice, e aproximativ proporional cu raportul dintre numrul de atomi de hidrogen
legai de carbon i numrul total al atomilor de carbon: CH4(4); CH.011(3); CHOH( 1);
CH20(2); CO,(0).
DECARBOXILAREA OXIDATIV A PIRUVATULUI
Procesul de respiraie studiat n biochimie se refer la mecanismele moleculare de
utilizare a O, i formarea , n celule. Unul din produsele principale ale procesului de
catabolism este piruvatul (la scindarea glucozei, n primul rnd). Dup transformarea
sa n acetil-CoA, va fi utilizat n ciclul acizilor tricarboxilici (ciclul Krebs sau ciclul
acidului citric) etap final de oxidare a moleculelor substanelor nutritive.
n ce const procesul de oxidare a piruvatului n acetil-CoA ?
Cum se scindeaz alte molecule pn la fonnarea acetil-CoA se va studia n alte teme.
Piruvatul se oxideaz pn la acetil-CoA i C 0 2, cu participarea mai multor enzime
unite structural n complexulpimvat-dehidrogenazic. Sistemul multienzimatic n cadrul
eucariotelor se afl n mitocondrii, al procariotelorn citozol, cataliznd urmtoarea
reacie sumar:
CH3 CH3
I
COOH + NAD++ CoA-SH C~SCoA+ H+ + NADH + ,
II II
O o
(-8 kcal/mol)
n procesul comun de dchidrogenare i decarboxilare a piruvatului se includ

diferite enzime: E^piruvat-dehidrogenaz, E,-dihidrolipoil-transacetilaza i E3-
dihidrolipoil-dehidrogenaza, K-E, kinaza specific, F-fosfo-E, fosfataza, X-proteina
ligand n Er
Particip, de altfel, i 5 coenzimeTPP - tiaminpirofosfatul (E,), FAD, NAD+, CoA-
SH (E3), acidul lipoic(E2). Cu alte cuvinte, pentm funcionarea acestui sistem multienzimatic
sunt necesare 4 vitamine , B PP, acidul pantotenic i acidul lipoic.
Lister Rid, savant de la Universitatea din Texas, a cercetat minuios acest complex
la E.coli, stabilind c e compus din 48 de lanuri polipeptidice, neesenial depind
mrimea unui ribozom. Nucleul l ocup E2(transacetilaza), E si E3se leag n exterior
de nucleu. Lanurile polipeptidice sunt consolidate de fore necovalente. La pH alcalin
sau neutru, n prezena ureei, complexul disociaz n componentele sale. Complexul
nativ enzimatic se formeaz prin autoasamblarc.
Fiind un complex multienzimatic, actualmente se confinn c n centru (nucleu) se
afl componenta E2alctuit din a , monomeri aranjai la suprafaa lui; n anumite
proporii E, ( - tetramer), E3(,- homodimer), (oc2, - heterodimer) i F (a
-heterodimer). Proteina X ( -monomer) are o aranjare nestabil la moment posibil
ocup o poziie integral n autoasamblarea complexului sau se ataeaz periferic dup
asamblare. Dealtfel, recent s-a constatat, c la un complex structural stabil revin 60
componente E 20-30 molecule E,, 6 molecule Ev 12 molecule proteina X, 3-15
molecule i mai mult de 3 molecule de fosfataz (F). Proteina X un component
lipoil auxiliar, ce particip la transferul electronilor.
Complexul determin o cataliz coordonat, n care produsele intermediare sunt
fixate rigid de el, iar formarea produselor auxiliare fiind redus la minim. Ea accelereaz
viteza reaciei, exclude hazardul coleziunii substanelor cu enzimele respective potenial
existente n stare liber. Produsele intermediare se permut de pe un centrul activ (CA)
pe altul - de grupe prostetice E, (grupa lipoamidic). Acidul lipoic se ataeaz de grupa
aminic a restului de lizin din ,. n fiecare lan polipeptidic, la 2 resturi de acid lipoic se
ataeaz 2 resturi de lizin, ce realizeaz un bra flexibil de aproximativ 14 . Acest bra
efectueaz o micare tur-retur ntre grupele prostetice ale sistemului multienzimatic.
.C H , O NH
/ \ = I
H2C CH H2 (CH2)2 H2 C i- N CH2 (CH2)3 CH
oxidat !
t
Acidul lipoic Lizina
I
.C H , ! I NH
,/ \ II I I
H2C CHCH2(CH2)2C H ^ G r N CH2 (CH2)3 CH
\-i-S redus i 0
(H ): (H) .. V
Componenii lipoamidici interacioneaz. Sarcina lor n procesul de modificri n ciclu

se schimb de la 0-1 pn la 2, la o ionizare complet a grupelor sulfhidrilice. Anume
modificrile de sarcin reprezint fora motrice a micrii coordonate a gmpei lipoice.
Procesul decurge pe etape. n etapa I piruvatul adiioneaz la TPP, dup care are loc
decarboxilarea lui. Este catalizat reacia de E , rolul hotrtor revenind particularitilor
TPP exponentul acid al atomului aranjat, ionizeaz ntre atomii N i S ai inelului
tiazolic, el formnd un carbanion, uor adiionnd la grupa carbonil a piruvatului.
H
NH, I
c s
n ^ y ~ c h 2- n ' 0 ?
u r _U C=cCH2 CH2 O P O P 0
3 ^ N ^ ! II II
TPP CH, o o
Azotul cu sarcina pozitiv (+) adiioneaz electroni, stabiliznd constituirea sarcinii

negative necesar decarboxilrii. Protonarea fonneaz hidroxietiltiamino pirofosfatul.
ir
V
<V *
cn S N - c
H O -C -^-C
S -C I
CH3
4 S\
a CO-,
Ri Ri
Piruvat C arbanion - TPP Produs interm ediar
R CH3 R ch R CH3
U I 3
H N -C
N -C N -C
- c c
I

\
I
CH3
s-c 1
CH3
s-c ++ I
CH3
\ s_ c
I I I
Ri R, Ri
Form e rezonante Hidroxietil - TPP
In etapa unntoare grapa hidroxietilic legat de TPP se oxideaz o dat cu fonnarea

acetil radical i simultan se permut pe lipoamid. Ca oxidant servete grupa disulfidic,
care se transform n sulfhidrilic. Reacia e catalizat de E2(dihidrolipoiltransacetilaz)
cu formarea acetillipoamidei.
R CH3 CH3 R CH3

I U !
c H 2- s ?H N CH2 S ~ C = 0 N -C
/
H2C + -c-c ^ II H2C
+ C\
\
C H -S CH3
S-c C II SH S-c
r2 R, r2 R,
Lipoamid H idroxietil - TPP A cetillipoam id Carbanion - TPP
(forma ionizat)
La etapa a III-a grupa acetil se translocheaz pe CoA, formnd acetil-CoA. Procesul

Ie catalizat similar de E2, translocarea fiind nsoit de meninerea legturii macroergice
oesterice.
r2
Acetillipoamid Dihidrolipoarnid Acetil-CoA
n etapa a IV-a are loc regenerarea formei oxidate a lipoamidei. Reacia e catalizat
de E3 Oxidantul e NADf, i rolul prostetic i revine FAD.
C H .-S H /C H -S
/
H2C H2C
2 \ CH s
CH SH
I I
r2 r2
Dihidrolipoarnid Lipoatnid
Procesul e ireversibil, avnd =-8 kcal/mol. Etapa descris este cheia ireversibil
a metabolismului. Animalele nu sunt capabilc s transforme acetil-CoA n glucoz.
Acetil-CoA se ncadreaz n ciclul Krebs sau n sinteza lipidelor. Reaciile pot fi reproduse
schematic n felul unntor:
FA D H 2 FAD
NAD+ NADH+ H +
Complexul fermentativ descris mai sus se regleaz prin:

1. Inhibarea prin rezultantele reaciei (retroinhibiie) de acetil-CoA, NADHprimul
compus inhibnd E?, NADH-E.. Efectul este reversibil la aciunea NAD+i FISCoA.
Inhibiia alosteric este amplificat de acizii grai macromoleculari.
2. Reglarea nucleotidic, prin sarcina energetic. Este inhibat complexul de GTP i
activat de AMP. Activitatea complexului se reduce atunci cnd celula conine energic
accesibil i se amplific, n caz contrar.
3. Complexul piruvat dehidrogenazic (CPDH) i pierde din activism la fosforilarea
serinei de ATP (modulator pozitiv pentru kinaza piruvat dehidrogenazei) o dat cu
fonnarea fosfopiruvat dehidrogenazei (reglarea covalent). Dac ATP se micorea
z, are loc scindarea hidrolitic a fosfatului de CPDH. Reacia este catalizat de
fosfataza piruvat dehidrogenazei. Att kinaza, ct i fosfataza persist n complexul
piruvat dehidrogenazic.
c h 2- o - po 23
Complexul PDH Complexul PDH
activ inactiv
c h 2- o - po 23
Acetil-CoA, NADH
CoA, NAD, piruvat
Reglarea covalent a complexului piruvat dehidrogenazic
Fosforilarea se amplific la raportul nalt dc ATP/ADP; acetil-SCoA/HSCoA;

NADH/NAD+, iar defosforilareala concentraii nalte de piruvat i ioni de Ca2+.
CICLUL KREBS
Reprezint un ciclu primordial pentru funcionarea sistemelor vii. Sistemul enzimatic
acioneaz cu o finee deosebit. Ciclul ncepe cu retrocedarea de ctre acetil-CoA
oxaloacetatului grupei acetil, cu formarea compusului de 6 atomi de carbon - citrat.
Prima reacie este catalizat de citrat sintaz ferment reglator. Produsul interme
diar l constituie citril-CoA. Reacia sumar deviaz spre dreapta (AG = -7,7 kcal/
mol), rezultant a hidrolizei.
H2C C O O ' CH2 C O O '

I I
- C O O ' + H3C ~ SCoA + H20 - H O - C - C O O ' +H S-C 0 A +H +
II II I
O o CH2- C O O
Oxaloacetat Acetil-CoA Citrat
Enzima, aconitaza, catalizeaz transformarea reversibil a cifratului n izocitrat prin

formarea produsului intermediar cis-aconitat, ce nu deviaz de la centrul activ al enzimei.
Izomerizarea se realizeaz prin dehidratare, succedat de hidratare. Coninutul izocitratului
e mai mic de 10%,reacia evolueaz de la stnga spre dreapta, i produsul ei se ncadreaz
rapid, succesiv, n celelalte stadii ale ciclului. Aconitaza reprezint o enzim compus, ce
conine fier i sulf acidolabil, formnd centre fiero-sulf.
2- ' 20 CH COO* 2 0 00 C H -H
H O -C -C O O ' X " i 'O O C - C - H
I E2 I I
CH2C O O ' CH2CO O ' 2coo
Citrat cis-aconitat IzDcitrat
Decarboxilarea oxidativ a izocitratului, catalizat de izocitrat dehidrogenaz-

(ICDH), este prima reacie de oxido-reducere din ciclu, cu formarea ulterioar a a-
cetoglutaratului.
OH O
I + II
O O C -C H N A D +(P) NAyDH^ +H o o c - c
I . I
o o c CH " ------------------ o o c CH
I I
CH2CO O ' CH2COO CH2 c o o
Izocitrat O xalosuccinat a-ceto g lu tarat
ICDHeste o enzim de dou tipuri NAD+ i NADP+ dependent: NAD+d

localizat n mitocondrii;NADP+d localizat att n mitocondrii, ct i n citozol.
Modulator pozitiv al reaciei este ADP, enzim practic nu funcioneaz fr ADP;
reacia necesit ioni de Mg2+sau Mn2+.
A doua reacie de oxido-reducere (a patra n ciclu) este decarboxilarea oxidativ a
a-cetoglutaratului, catalizat de complexul a-cetoglutarat dehidrogenazic cu forma
rea succinil-CoA i a C 0 2, NADH+H+. Mecanismul acestei reacii e asemntor cu
transformarea piruvatului n acetil-CoA. Sunt utilizai aceiai cofactori ai trei enzime: a-
cetoglutarat dehidrogenaza, (A'), transsuccinilaza (B') i (C') dihidrolipoil
dehidrogenaza. Miezul complexului e subunitatea B', iar subunitatea este identic
pentru ambele complexe. Aceste dou complexe reprezint asociaii omoloage de enzime.
CH2- C H 2- C - C O O H HSCoA C02 CH2- C H 2- C ~ S C o A
I II V I II
COOH O ---- - COOH o
a-ceto g lu tarat NAD+ NADH+ H + Succinil-CoA
Hidroliza succinil-CoA d aproximativ 8 kcal/mol. Scindarea e cuplat cu fosforilarea

GDP, catalizat de succinil-CoA sintetaza i formarea GTP.
CH2- C H 2- C ~ SCoA + GDP + Pi CH2- C H 2 + GTP + HSCoA

I II I . I .
COOH o coo coo
Succinil-CoA Succinat
Enzima nucleozidfosfo kinaza transfer grupa fosfat de Ia GTP la ADP cu fonnarea
ATP. Ea este unica reacie a ciclului, fiind nsoit de formarea direct a compuilor
macrocrgici fosfai. E ofosforilare la nivel de substrat drept izvor de energie servete
oxidarea unei substane organice.
GTP + ADP ATP + GDP
Succinatul este dehidrogenat, cu fonnarea lumaratuluireacie catalizat de succinat
dehidrogenaza (SDH), avnd ca acceptor H,-FAD. n molecula de SDH inelul
izoaloxazinic a FAD-ului e legat covalent de partea proteic cu restul histidinei din centrul
activ (CA) al enzimei. Molecula conine 4 atomi de fier i 4 atomi de sulf, formnd proteine
ficro-sulf.
FAD FA D H 2 H
OOC CHo C O O ' 'oocc=cCOO'
Succinat
I
Fumarat H
SDH conine dou componente:

1. 70 FAD kDa i dou clastere de FSP (proteine fiero-sulf);
2.27 kDa claster proteic.
Enzima SDH este o protein integral a membranei interne din mitocondrii, iar
inhibitor concurent al SDH este malonatul. FADH, format nu se desprinde de enzim,
electronii sunt direct transferai pe Fe3+al enzimei. Acceptor fmal poate servi 0 2
molecular.
Urmtoarea reacie const n hidratarea fiimaratului cu formarea L-malatului catalizat
de enzima stereospecific fumaraza (are loc o transadiionare de H i OH). Enzima e
compus din 4 subuniti identice (4LPP).
H H 20
OH H
oocCCCOO. x. b. - 'ooccccoo
H H H
Fumarat
L m alat
L-malat dehidrogenaza, componenta matricei mitocondriale, catalizeaz dehidroge-

narea L-malatului (NAD+), cu fonnarea oxaloacetatului (OA). Echilibml e deplasat (la pH
=7,0, concentraie -1,0 M) spre stnga, ns n celulele intacte spre dreapta, oxaloacetatul
se asimileaz rapid i concentraia real e foarte mic n celule (10'6mol).
_+ +
HO NAD NADH +H
I \ E A O-C-CO O -
ooc - C H - CH2- C O O
(ti
: h 2- c o o
L-malat Oxaloacetat
n urma acestui ciclu de reacii are loc: 1) regenerarea oxaloacetatului, care
interacioneaz cu o nou molecul de acetil-CoA; 2) gruparea acetilic se asimileaz n
dou molecule de ,; 3) sunt captai ionii de hidrogen, bogai n energie.
Stoichiometria ciclului:
Acetil-CoA + 3NAD+ + FAD + GDP + P. + 2 H ,0 - - - 2 C 0 2+ 3NADH
+ FADH2+ GTP + 2 FT + HSCoA.
Reacia descris confirm c O, molecular la ciclul Krebs (CK) nu particip nemijlo
cit, ciclul fimcionnd numai n condiii aerobe, deoarece NAD+i FAD n mitocondrii pot
fi regenerate numai dup transferul electronilor pe 0 2 molecular. Ciclul manifest
caracter aerob, spre deosebire de glicoliz, ce decurge att n condiii aerobe, ct i
anaerobe. Cauza const n faptul c la transformarea piruvatului n lactat n cadrul glicolizei
are loc regenerarea de NAD+.
o

II
CHj ~ SCoA
A cetil- A i H,
Condensarea CoASH
>000 C il* -C O O "
Citrat simaza
I
HOc coo"
I
ch2coo
Dehidrogenarea Citrat
Aconitaza V
cis-A conitat
,
Hidratarea
OOC-CH-OiI
I
O O C -C -H
CH>QOO'

Decarboxilarea
oxidativ
a-cetoglutarat
GTR/ \
F osforilarea la
nivel de substrat ATP GDP
(A D P )
Decarboxilarca
oxidativ
+ Pi
F igu ra 3.2. Ciclul acizilor tricarboxilici (Ciclul Krebs)
Care-i esena biologic a prezenei ciclului acizilor tricarboxilici? Care-i cauza
c oxidarea grupei acetilice solicit un ciclu att de complex?
Molecula acidului acetic, cu dimensiuni mici i o structur relativ simpl, are o
particularitate deosebit: grupa sam etilice foarte rezistent la oxidarea chimic.
Pentru o oxidare direct pn la , sunt necesare condiii rigide, incomparabile cu
cele din celul. n timpul evoluiei celulele se conform cilor din cele mai adaptabile, ce
nu comport energie mare de activare. Celulele ataeaz acetatul la OA, cu formarea
cifratului care se dehidrogeneaz i se decarboxileaz cu mult mai uor dect acetatul.
La aparen, unele reacii sunt foarte complicate, dar studierea principiilor ce stau la
baza acestor mecanisme ale reaciilor organice atest descoperirea celei mai rezonabile
ci chimice ce asigur atare transformare.
Ciclul acizilor tricarbonici (CAT) e calea principal de scindare comun
a glucidelor, proteinelor, lipidelor ce asigur generarea ATP.
Reacii anaplerotice
Ciclul Krebs ndeplinete i alt rol furnizeaz produse intermediare pentru
procesele de biosintez. Utilizarea lor pentru biosintez trebuie s fie nsoit obligatoriu
de compensarea lor, n caz contrar funcia ciclului se va sista. Reaciile fermentative,
ce asigur completarea produselor intermediare ale ciclului, se numesc reacii
anaplerotice sau reacii de completare.
Reacia de carboxilarc a piruvatului cu , i formarea oxaloacetatului are o
nsemntate primordial. Ea este catalizat de piruvat carboxilaz i decurge intensiv
n ficat, rinichi. Ca modulator pozitiv servete CH3CO~SCoA
CH3 , CH2COO'
I I
C=0 + A T P - C 0 2 + H 20 C = 0 + Pj + ADP + 2H +
I I
COOH COO
Piruvat Oxaloacetat
Enzim catalizatoare de reacie este complex, conine 4 grupe prostetice (4

biotine). Vitamina H este covalent legat de aminogrupa restului de lizin din centrul
activ al enzimei. Reacia decurge n dou etape:
1. Oxidul de carbon n primul rnd se fixeaz de atomul azot din biotin, se activeaz
cu utilizarea ATP (covalent).
ATP + ,2 + E-biotin + HOH E-biotin-CO,2 + ADP + P.I + 2H+
2. Apoi are loc transferul de piruvat pe enzim cu formarea oxaloacetatului.
E-biotin-CO, + Piruvat E-biotin + Oxaloacetat
Piruvat carboxilaza reprezint o enzim reglatoare. CH3COSCoA asigur, cnd
e n surplus, cu combustibil ciclul Krebs (CK), stimulnd i reacia piruvat carboxilic.
n final, se formeaz surplus de oxaloacetat, deci rezult c i ciclul n ansamblu va
utiliza mai mult acctil-CoA n reacia de sintez a citratului. Diminuarea de vitez la
formarea oxaloacetatului e cauzat de mica convertire a acetil-CoA n ciclurile respective.
n miocard i muchii scheletali reacia anaplerotic principal e catalizat de
fosfoenolpiruvatcarboxi kinaz. Are loc scindarea fosfoenol piruvatului produs ma-
croergic format n procesul de glicoliz. Energia eliberat se utilizeaz pentru carboxila-
re cu formarea oxaloacetatului, restul de energie se depoziteaz n GTP.
COOH CH2- COO

-o P 0 23 + C 0 2 + G D P C=0 + GTP
Mn I
CH2 COO
F osfoenolpiruvat O xaloacetat
Produsele unui tur al ciclului citric sunt reprezentate n fig.3.3.

A cetil-C oA
NADH
F igura 3.3. Produsele unui tur al ciclului citric
R eglarea ciclului Krebs

Procesul e coordonat perfect cu necesitile de ATP n celul. Urmtoarele reacii
sunt reglate:
1. Sinteza cifratului:
a) e dependent de concentraia de substraturi oxaloacetat i acetil-CoA, ce
servesc ca modulatori pozitivi;
b) e dependent de activitatea citrat sintazei, ce e inhibat de succinil-CoA; acizii
grai; NADH; citratultimele 2 substane au efect numai n unele celule.
2. Reacia catalizat de izocitrat dehidrogenaz:
a) este activat de ADP se confirm efectul cooperativ ntre legarea izocitratului
cu Mg2+i ADP;
b) este inhibat de NADH i NADPH.
3. Reacia catalizat de complexul a-cetoglutarat dehidrogenazic. Complexul
enzimatic este inhibat de succinil-CoA i NADH, produsele reaciei. De altfel, este
inhibat i de sarcina energetic mare.
Patologiile medicale
Deficitul enzimelor implicate n ciclul Krebs (fumaraza, a-cetoglutarat dehidrogenaza)
este frecvent pe parcursul unor afeciuni ereditare, caracterizate prin:
a) acidoz lactic, produs n urma acumulrii piruvatului rezultat din glicoliz, care nu
poate fi metabolizat prin conversia n acetil-CoA i este transformat n acid lactic;
b) deficit energetic marcat, cu repercusiuni asupra dezvoltrii neuromotorii, manifestat
prin retard mental, hipotonie i apariia encefalopatiilor severe;
c) amplificarea excesiv a cetogenezei, pe baza moleculelor de acetil-CoA, care nu
pot fi degradate prin ciclul Krebs.
Formele cele mai severe se manifest nc n perioada perinatal, prin leziuni neurologice
i musculare. Aceste afeciuni sunt rare, deoarece funcionarea nonnal a enzimelor din
ciclul Krebs este esenial pentru dezvoltarea organismului i desfurarea nonnal a
activitilor celulare. Deficitul energetic marcat conduce la degenerarea i moartea rapid
a celulelor afectate.
Deficitul piruvat carboxilazei sau al uneia din subunitile piruvat dehidrogenazei se
manifest prin reducerea semnificativ a funcionrii ciclului Krebs, ca urmare a
imposibilitii fonnrii substanelor sale principale. Consecinele pe plan clinic sunt datorate
deficitului energetic i acumulrii de acid lactic, piruvat, a-cetoglutarat (n cazul deficitului
dihidrolipoil dehidrogenazei din structura CPDH, subunitate comun tuturor a-cetoacid
dehidrogenazelor). Alanina i acizii ramificai prezint niveluri plasmatice nalte, ca turnare
a blocrii catabolismului lor n condiiile reducerii fluxului intermediatorilor n ciclul Krebs.
Situaiile caracterizate prin scderea marcat a oxigenrii tisulare (hipoxie sau anoxie)
intervin n cazul insuficienei cardiorespiratorii acute, al strilor de oc .a. Aportul
insuficient de oxigen cauzeaz ncetinirea fluxului metabolic la nivelul lanului respirator
mitocondrial i, implicit, inactivarea ciclului Krebs. Rezult un deficit energetic important,
deoarece ATP nu poate fi regenerat dect n baza glicolizei anaerobe, a crei randament
energetic este sczut (2ATP). Acumularea piruvatului rezultat din glicoliz conduce la
apariia acidozei lactice.
OXI DAREA BIOLOGICA - RESPIRAIA TISULARA
Oxidarea biologic reprezint totalitatea proceselor de oxido-reducere ce decurg
n celule i esuturi. Cum se oxideaz moleculele cu rol de combustibil? Oxidarea
are loc prin dehidrogenare, adic prin donarea atomilor de hidrogen. Ei sunt
transferai n form de protoni (H+) i electroni (e), cu ajutorul coenzimelor specifice,
dar nu direct Ia O,. Forma redus transmite pe lanul respirator n membrana intern
a mitocondriilor electroni cu un mare potenial energetic. Acest transfer este
nsoit de formarea ATP din ADP i P.. Procesul e numit fosforilare oxidativ
sursa de baz a ATP la organismele aerobe. De altfel, electronii cu nalt potenial energetic
pot fi utilizai i n procesul de biosintez, ce necesit ATP i echivalente reduse.
Acceptorul principal de electroni este NAD+. Inelul nicotinamidic activ adiioneaz
ionul de hidrogen i doi electroni, constituind echivalentul hidridionului.
H H
I
-CONH,
CONH2 + H + 2'e
N r N
I I
R R
NAD4 NADH
NAD+servete ca acceptor n reacii de tipul:
RC H Rj + NAD+ NADH + R -C R, + H
OH &
Al doilea H+rmne n soluie.
Alt acceptor principal este FAD i particip n reacii de tipul:
FAD + R CH2 CH R , ^ = FADH2 + R C H = C H R

Poriunea activ e inelul izoaloxazinic, unde se adiioneaz protonii i electronii.
O
II
N
" ^ 'N H + r f + 2e -
(CHOH)3CH2OH (CHOH)3- C H 2OH

R ib o fla v in a ox id a t R ib o fla v in a redus
Compuii ce joac rol de precursori n biosintez sunt oxidai mai puternic dect
produsele reaciei. De aceea, pentru realizarea procesului sunt necesare, n afar
de ATP, i echivalente reductoare. Rolul dc donator l are forma redus a
N ADP+ NADPH. Difer de NAD+prin prezena fosfatului conjugat cu legtura
esteric prin 2'-OH a adenozinei, utilizndu-se numai n procesele dc biosintez, pe
cnd NADH preponderent la generarea ATP.
Culminarea respiraiei tisulare o reprezint transportul de electroni i fosforilarea
oxidativ. Omul cu o greutate medie de 70 kg utilizeaz pe zi circa 2800 kcal. Pentru a
recepiona aceast energie din ATP n condiii standard e nevoie de 2800 :7,3 = 384
mol ATP sau 190 kg dc ATP. Organismul uman conine 50g de ATP. Pentru satisfacerea
necesitilor de ATP, ea trebuie s fie scindat i sintetizat de mii de ori. n limite foarte
mari se modific viteza sintezei ATP n organism: minimumsomnul i maximumla
eforturi intensive, ceea ce denot c fosforilarea oxidativ (FO) este nu numai un
proces primordial i ncontinuu, dar i un autoreglator foarte fin.
Lanul respirator
Este un ansamblu de proteine aranjate ATP sintaza
ntr-o anumit succesiune cu grupe ( F F ,) M em b ran a extern
p e rm e a b il p e n tru
prostetice fixate rigid, care posed m o le c u lc le i io n ii
capacitatea de a adiiona i a dona electroni m ic i
i protoni saturai de energie. Electronii, M em b ran a intern
transferndu-se de la o protein la alta, i im p e r m e a b i l p e n tru
m a j o r i t a t e a m o le c u le lo r
pierd energia liber. O parte considerabil m ic i i io n i, i n c lu s iv i
a ei se acumuleaz n ATP, prin intenncdiul cei de H*
C o n in e :
mecanismelor moleculare. - L a n (u l r e s p i r a t o r ;
Fiecrei perechi de electroni, transferai A D P -A T P tra n s lo c a z a ;
de la NADH la O, pe lanul respirator, i - A T P sin taza;
A li tr a n s p o r to r i
se sintetizeaz 3 molecule de ATP. m e m b ra n a ri
Locusurile, unde energia se elimin n
M atricea
cadrul proceselor de oxido-reduccre, cu C o n in e:
formarea de ATP, se numesc puncte - C om plexul
p iru v a t
de fosforilure. La o rotaie a ciclului dehidrogenazic;
Krebs dehidrogenazele specifice scindea - E nzim ele
c ic lu lu i
z de la substraturi 4 perechi de atomi acid u lu i citric ;
de H, care ntr-un locus anumit i doneaz DNA, rib o zo m i;
- -o x id a re a
electronii lanului respirator i se acizilor grai;
transfonn n H+, cu deplasarea n mediul M u lte a lte
R ibozom i c n z iin c ;
apos. Electronii parcurg pe lanul respirator - ATP, ADP, Pi,
pn la 0 2 acccptorul final al electroni C an alele poroase C a !>, K*;
- A li in te r m e d ia r i
lor la organismele aerobe. m e ta b o lic i
Fosforilarea oxidativ e localizat n s o lu b ili
mitocondrii (fig.3.4). Aceste organite ovale

conin enzime ale ciclului Krebs i enzime F igura 3.4. structura m itocondrm
ale oxidrii acizilor grai. Mitocondriile posed dou sisteme de membrane: extern i
intern, ultima are o suprafa foarte mare i formeaz cristele. O parte indispensabil
a membranei interne reprezint ansambluri respiratorii i enzime ce catalizeaz
sinteza ATP.
Membrana intern are o structur complex i-i impermeabil pentru majoritatea
ionilor. Membrana extern, dimpotriv, are o permeabilitate major pentru ionii i
moleculele mici. Ea conine monoaminoxidaza.n spaiul intennembranar se afl
enzim adenilatkinaza, n matrice (compartiment determinat de membrana intern) sunt
localizate dehidrogenazele specifice ciclului Krebs, precum i enzimele oxidrii acizilor
grai.
n ce const esena reaciilor de transfer al electronilor?
Acestea sunt reacii de oxido-reducere. n calitate de donatori servesc reduc-
torii, drept acceptoroxidanii. n comun funcioneaz ca redox-pereche.
^ e+A
Fe2+ e' + Fe34
Fe24 i Fe:,+ sunt redox-pereche.
Distingem 4 modele de transfer al e' de la o molecul la alta:
1) Transfer direct al electronilor:
Fe2+ + Cu2+ Fe3+ + Cu+
2) Transferul n componena atomului de H (H+ i e'):
AH, A + 2H+ + 2e'
AH, + - A + BH,
3) n form de hidrid ion (:H+) n cazul transferului de NAD dehidrogenaze.
4) Transferul la interaciunea dircct a reductorului organic cu 0 ce conduce
la formarea unui produs care include O, legat covalent:
R - CH,3 + 1/20,2 ^ RCH,OH 2
Toate modelele de transfer al electronilor sunt proprii celulelor vii. Capacitatea de a
dona reversibil electroni se exprim cantitativ prin potenialul redox-standard. Eo -
mnme egal cu fora electromotoare exprimat n voli, ce apare n semiconductor,
n care donatorul de electroni i acceptorul cuplat cu el acioneaz n concentraii de 1,0
mol la T = 25 i pH = 7,0, formnd un echilibru cu electrodul ce adiioneaz ede
la donator i-i transfer la acceptor. n calitate de semielement standard se ia
electrodul de hidrogen. Fora electromotoare la concentraia ionilor de H+ 1,0 mol
(pH = 0) i T = 25Ce egal cu zero. Pentru pH = 7,0 potenialul standard eegal cu
0,41V. E acceptat formula potenial de reducere. Dac potenialul sistemului e negativ,
rezult o capacitate mai mare de a elibera electroni. Cu ct valoarea lui e mai pozitiv, cu
att e mai mare capacitatea de a adiiona electroni. tiind mrimea Eoa diferitor redox-
perechi, se poate pronostica direcia torentului de electroni de la o pereche la alta.
Torentul de electroni e orientat n direcia micorrii energiei libere a sistemului.
(tig.3.5.)Cu ct mai mare e diferena potenialului dintre dou redox-perechi, cu att
mai mare e diminuarea energiei libere la transferul electronilor. Trecnd prin lanul
respirator de la NADH(-0,32V) la O, (0,82V), electronii pierd o cantitate suficient
de energie liber.AG poate fi calculat dup formula:
AG = -n X FAE7, unde n este numrul de electroni;
F - indicele Faraday egal cu 23062 cal V '1 mol1;
AEo - diferena de potenial.
AG = -2 X 23062 [0,82-(-0,32)] = -52,6 kcal m ol'1 = -220 kJ m ol'1. Energia
respectiv este efcctiv suficient pentru sinteza a 3 mol de ATP (3 x (-7,3) = -21,9 kcal).
n lanul respirator se pot identifica uor trei segmente, n care transferul electronilor e
nsoit de scderea brusc a energiei libere: locusuri de sintetizare ATP. Fora motrice
a fosforilrii oxidative reprezint potenialul de transfer al electronilor inereni NADH
sau FADHr
Succinat Fumarat N A D H +H N A D +( - 0,32 V)
A m obarbital
P iericidina A
Complex III cit b5(p

I
Kb2
Coenzim Q H T
Citocrom C ltb 566
A ntim icina A
reductaza r
FeS
t
cit Ci
1
Citocrom ( + 0,25 V )
Complex IV
Citocrom c,t a
oxidaza \
cit a 3
jf ---------- A zida.C O
1/2 0 2 H , 0 ( + 0,82 V)
Figura 3.5. Lanul respirator mitocondrial
Caracteristica complexelor lanului respirator
Complexul I. NADH-Q-oxidoreductaza.
Torentul de electroni din lanul respirator n mare msur este detenninat de activitatea
dehidrogenazelor NAD* sau NADP+ dependente i doar foarte puine dintre ele
semnificativ (GDH) pot s interacioneze cu
ambele coenzime.(fig.3.6).
Unele dehidrogenaze sunt localizate n
mitocondrii, altele n citozol, dar semnificativ e
c dehidrogenazele din citozol ct i cele din
mitocondrii interacioneaz cu NAD+, respectiv
Membrana mitocondrial e impermeabil
pentru aceste coenzime. Coenzima NAD are
M atrice (N ) funcia de colector, adunnd H2 de la diferite
substraturi (NADPH, izocitrat, a-ceto-glutarat.
piruvat, lactat, malat, -oxibutirat, -hidroxiacil-
CoA) (fig.3.7.).
F ig u r a 3 .6 . N A D H : u b ic h in o n
oxidoreductaza (Complexul I)
Glicerol 3-fosfat biiccroi 3-tostat
Ulterior perechea de echivaleni redui S p a iu (citozolic) lehidrogcna/a
e transferat pe flavinproteide (FMN in term em b ra n a r
dependente), iar electronii sunt preluai de
complexele fiero-sulf cu rol de grupe
p rostetice. F lavinm ononucleotidul
formeaz cu aceti compui un complex
enzimatic NADH-Q-reductaz. Fierul nu f ETF:Qj^jp
NADH NAD Succinat oxidorcducta:
e de natur hemic i rezult c proteinele
poart denumirea fiero-proteine nehemice
sau centre fiero-sulf. Se atest trei tipuri A cil-C oA
de centre FeS:
1. A tom ul de Fe e tetraedric M a trice (N)
coordonat cu SH grupe a patru resturi de
cistein proteic, FeS 4 ( fig.3.8. (a)).
2. Fe 2 -S 2 conine 2 atomi de Fe i doi Figura 3.7. Transferul electronilor de la NADH,
disulfizi neorganici adiionai la 4 resturi de su ccin a t, a cil-C o A i glicerol-3-fosfat pe
ubichinon
cistein (fig.3.8 . (b)).
3. Fe4 -S 4 - 4 atomi de Fe i 4 disulfizi neorganici adiionai la 4 resturi de cistein
( fig.3.8. (c)).
S-a confirmat c NADH-Q-reductaza conine dou centre: Fe 2 -S 2 i Fe4 -S4.
De la Fe-S al enzimei electronii i H+sunt transferai la coenzima Q.
Reducerea de potenial constituie 0,42V, = - 19,4 kcal/mol i e suficient pentru
sinteza a 2 mol de ATP, dar se sintetizeaz un singur mol de ATP, restul energiei
risipindu-se sub form de cldur. Enzim NADH-Q-reductaza e compus din 16
subuniti polipeptidice.
F igura 3.8. Centrele ero -su lf
Coenzim Q sau ubichinona are o rspndire vast n sistemele biologice. Coada

izoprenic determin capacitile hidrofobe ale Q, ce permit o difuzie rapid n membrana
intern a mitocondriilor.
CH-, ? H
CH 3 + 2H + 2e v c' CH,
^ (fcH2 - C H = C - C H 2) 10H (CH 2 - C H = C - C H 2),H

CH 3 O Fonna oxidat CH 3 CH 3 OH Forma redus CH 3
Coenzim Q
Coenzim Q, unicul translator al electronilor fixat nerigid de protein, nu adiioneaz

covalent la ea. Ea ndeplinete funcia de colector, adiionnd echivalentele reduse de la
NADH i de la complexul succinat-Q-reductaz (dependent de FAD), electronii
fiind transferai spre proteinele Fe-S, apoi spre Q. Complexul enzimatic ( I I ) e
component integral al membranei interne a mitocondriilor.
Transferul electronilor de la QH 2 mai departe e realizat de proteinele Fe-S i de
citocromi (1925, David Keilin). Citocromii sunt proteine ce transfer electroni, molecula
lor coninnd hemul ca grup prostetic. n procesul de transfer al electronilor atomul de
Fe se afl fie n stare redus (Fe2+), fie oxidat (Fe3+).
Grupa hemului, asemntoare cu Fe-S centre, transfer numai un electron. Aadar,
molecula de QH 2 transmite 2 electroni ai si saturai de energie la 2 molecule de
:itocrom b. Citocromii br b, cl i proteina Fe-S reprezint complexul QH,
'.itocrom reductaza (III) (fig.3.9.). Valoarea de potenial n cadrul acestui transfer
este de 0,21V (AG = -7,75 kcal), ceea ce asigur sinteza unui mol de ATP.
Citocromul transfer electronii de la acest complex la complexul citocrom
dazic (IV), ce conine citocromii a i a v Citocromul joac acelai rol ca i coenzim
Q. adic asigur transferul electronilor din diferite complexe ale lanului respirator
8*3 .1 0 ).
Citocromii difer dup structur i proprieti. Grupa prostetic a citocromului b,
:romului c;, citocromului este protoporfirina IX, hemul constituind aceeai grup
S p a iu in te rm em b ra n a r
C ito c r o m .
C e n tr u l
2 F e -2 S C ito c r o m
P r o t e in a f ie r o - s u lf
C ito c r o m b C ito c r o m c, a lu i R ie s k c
M a trice (N)
Figura 3.9. Complexul QH 2 citocrom reductaza (III). Complexul este uit dimer compus din
monomeri identici, fiecare cu I I uniti diferite. Structura unui monomer (a). Unitatea funcional este
dimeric (b). Citocromul ( i proteina fiero -su lf a tui Rieske proiectat p e suprafaa P poate interactiona
cu citocromul n spaiul memhranar. Complexul are dou situsuri distincte pentru fixarea ubichinonei,
QKi Qf, ce corespund situsurilor de inhibiie a dou substane ce blocheaz fosforilarea oxidativ. Antimicina
A blocheaz flu x u l de electroni de la hem ft(/ la Q, se leag la Qv aproape de hem ul bu n locusul
N(matrice) al membranei. M yxothiazolul previne flu x u l electronilor de la QH2 la proteina fiero -su lf a lui
Rieske, se leag la Qp, lng centrul 2Fe-2S i hem bLp e partea P a membranei. Structura dimeric este
esenial pentru funcia complexului III
F igu ra 3 .10. Calea electronilor

p rin co m p lexu l IV. Cele trei S p a iu /4 C ite '
proteine implicate n transferul
in te rm em b ra n a r 1 46 *
electronilor su n t I, I I i III.
T ra n sfe ru l de electro n i p rin
complexul IV ncepe cnd dou
m olecule de citocrom redus
doneaz fiecare cte un electron
centrului binuclear CuA. De aici
electronii trec prin hem ul a ctre
centrul Fe- (citocromul a, i
). O xigenul legat la hem ul
a , este redus la derivatul lui
peroxid ( O f) de doi electroni de
la centrul Fe-. Primirea a nc
doi electroni de la citocromul
convertete O f n dou molecule
de ap, c o n s u m n d p a tru
substrat protoni din matrice.
In acelai timp, nc patru protoni
sunt pompai de la matrice printr- M a trice (N)
un mecanism nc puin elucidat
4H +
(substrat)
prostetic ca i la mioglobin i hemoglobin. n citocrom b hemul nu e legat covalent
de protein, n citocromii i c; covalent cu legturi tioestcrice (grupele sulfhidnlice
a 2 resturi de cistein la grupele vinii ale hemului).
Citocromii a i a ; au alt grup prostetic (ficroporfirinic), ce se deosebete dc
citocromii i cr avnd grupa fonnil ( n loc de metil) i un lan hidrocarbonat (n loc de
vinii). Complexul final mai este denumit i citocrom-oxidaza.
Citocrom oxidaza prezint dimer proteic asimetric, n care fiecare monomer e
compus din 13 subuniti diferite. Ca componeni ai subunitilor I sunt 2 heme A, trei
atomi, cu raportul Fe/Cu 2:3, un atom de Mg i Zn i cteva molecule de fosfolipide.
Se observ c partea intern a scheletului de oc-atomi de carbon a structurii
cristalice e compus dintr-o cantitate vdit de a spirale, ce sunt aranjate n 2 suprafee
paralele, la deprtarea de 50 . Acest sector a spiralat prezint partea proteic trans-
membranar situat n membrana intern mitocondnal.
E stabilit c primele trei
subuniti codificate de genele
mitocondriale formeaz nucleul
m onom erului, celelalte 1 0
subuniti codate de gene nu-
cleare form eaz spaiul
perinuclear (fig.3.11). Funciile
subunitilor i II constau n
fonnarea ccntrclor metalice de
oxido-reducere i a tenninaiilor
de transfer al protonilor, funciile
F ig u ra 3.11. Organizarea tridim ensional n m onom er
celorlalte subuniti sunt subunitilor codificate de genele nucleare din structura
[ discutabile. E confirmat c citocromului oxidazic. Subunitile codate de genele (a)
protonii antrenai n fonnarea mitocondriale, b hem ul a i aJ} n fiecare monomer
atomii de Cu**
gradientului transmembranar
i n sinteza apei sunt transportai pe ci diferite. Cile efective de transport al H+sunt
determinate dc caviti, n care sunt fixai aminoacizii capabili de formarea legturii de
hidrogen. Alte caviti, orientate haotic, pot conine molecule de ap mictoare. Cavitile
pot s-i ndeplineasc rolul la modificrile confonnaionale ale resturilor de aminoacizi,
la inducia lor sub influena proceselor de oxido-reducere sau a modificrilor fixrii leg-
tunlor n centrele metalofixatoare.
Controlul riguros la viteza de intrare a oxigenului joac rolul decisiv la funcionarea
enzimei, dac torentul de e' e suficient, apoi surplusul de oxigen n centrul de reducere al
su favorizeaz formarea particulelor de oxigen activ. Sunt depistate 2 canale pentru
oxigen n subunitatea III i n hemul A v Molecula de oxigen nu poate trece liber prin
cavitatea canalelor, ceea ce confmn controlul riguros al difuziei de oxigen prin ele.
Expulzarea moleculelor de ap sintetizat n centrul de reducere a oxigenului n
partea citoplasmic e, de altfel, strict controlat. Sunt depistai aminoacizii hidrofili,
aranjai liniar n jurul hemului A3,i pn la atingerea cu subunitile I i lis e
formeaz o cale hidrofilcanal posibil pentru ap. Aminoacizii sunt compact aranjai,
aa nct torentul invers al apei e practic imposibil. Analiza RS confirm lipsa unor alte
structuri, ce ar ndeplini aceast funcie. Modificrile confonnaionale ale acestor canale
sunt induse de modulatorii strilor de oxido-reducere i ligandofixatoare ale centrului de
reducere a oxigenului.
Transferul schematic al electronilor n lanul respirator este prezentat n felul unntor:
1 NADH- FMN v Fe 2- S 2(+2)
NAD FM N H 2 FC2_ S 2(+3) QH 2
Complexul enzimatic -NADH-Q reductaza

2.
QH2^ - Cit.b (+ 3 )4 ^ F e -S (+ 2 )^ cit.C] ( + 3 K y c l t c ( +2)
cit.b ( + i ) r Fe S(+3) cit.C ! (+ 2) c it.c (--3)
2 Complexul enzimatic QH 2 - citocrom reductaza

cit.c (+2 ) ^ x cit.a (+3) cit.a 3 (+2 K ^ Cu (+2 ) H 20
cit.c (+3)* cit.a (+2 ) - ^ 4'" cit.a 3 (+3 )>^/^ Cu (+ ) - ^ 4 ^ 0 2
Complexul enzimatic - citocrom oxidaza
Revenind la lanul respirator, ne-am referi la unele probe ce confirm faptul c

proteinele acestuia funcioneaz n secvena descris mai sus.
a) Valoarea potenialului redox devine pozitiv la deplasarea spre oxigen.
b) Fiecare protein din acest lan e specific numai pentru un anumit donator i un
anumit acceptor de hidrogen.
c) Din membrana mitocondrial s-au extras complexe structurale izolate funcional
legate ntre ele prin transferul de electroni (4 complexe i doi componeni de legtur).
Inhibitorii lanului respirator. Studiul transferului de electroni s-a facilitat datorit
utilizrii metodei de inhibiie specific, ce blocheaz etapa concret a procesului
(fig.3.5).
1 .Complexul I este inhibat de rotenon (insecticid de origine vegetal folosit de indienii
americani ca otrav pentru peti), Na amital - (barbiturat), pericidin (antibiotic), care
blocheaz transferul electronilor pe segmentul NADFP la coenzima Q.
2 .AntimicinaA (antibiotic foarte toxic) comport aciune de blocaj transportului de
electroni ntre QH 2 i citocromul c.

3.Cianida blocheaz funcia citocromului aa3 (aa3 este blocat i de ).
4. Complexul II este inhibat de ctre malonat, care acioneaz ca inhibitor competitiv.
Coenzima Q este inhibat de doxorubicina, preparat din clasa antraciclinelor.
5. ATP sintetaza este blocat i de compuii arsenicului, care n forma ionilor de
arseniat substitue ionii fosfai, blocnd formarea ATP
6 . Componentele lanului respirator pot fi inactivate n deficit de fier, deficit al vit.
B2, hipoxie sau prin atacul radicalilor liberi asupra coenzimei Q.
S-a constatat c pn la fiecare blocaj proteinele sunt mai reduse, iar dup blocaj
mai oxidate. Cnd echivalenii de reducere intr n lanul respirator prin complexul I, se
consider c lanul funcioneaz prin ramura lung, intrarea prin complexul II se asigur
prin ramura scurt (fig.3.5).
Fluxul de electroni de la NADH la O, e un proces exergonic i poate fi exprimat
prin:
NADH + H++ 2 0 , + 3P, + 3ADP ^ N AD++ 3ATP + 4H20 (-52,6kcal/mol)
Trei moli de ATP conin numai 21,9 kcal/mol. Rezult c randamentul utilizrii energiei
libere va fi de 42%. Procesul dc transfer al electronilor e cuplat de fosforilarea ADP i
sinteza ATP. Potenialul redox n punctele de fosforilare trebuie s fie mai mare dect
0,224V necesar pentru sinteza de ATP. Lanul respirator e o cascad, datorit creia
celula acumuleaz energia liber eliminat de combustibilul celular ntr-o form accesibil.
Generarea radicalilor liberi Procesul de transferare a patru electroni finalizeaz
cu formarea apei, ns se tie c hemul transfer numai un electron. Modul ncare
joncioneaz patru electroni pentru reducerea moleculei de oxigen nu este distinct:
0 2 + 4H+ + 4e- 2H20
La reducerea incomplet, cu adiia a 2e\ se fonneaz ap oxigenat (H 2 0 2). La
adiia unui electron se formeaz radicalul superoxid( :0 2). Ultimele dou substane
sunt toxice i, interacionnd cu restul acizilor grai din lipidele membranare, lezeaz
membranele celulare.
Celulele aerobe se protejeaz graie aciunii enzimelor:
1) Superoxiddismutaza enzim-metal ce transform superoxidul n H ,0,:
2 0 2- (:0 2 ) + 2H+ ^ H20 2 + 0 2
2) Catalaza transform H ,0 , n 1 1,0 i 0 2:

2H 2 0 2 ^ 2H20 + 02
3) Peroxidaza:
H 2 0 2 + RH 2 2 H ,0 + R
Interaciunea oxigenului poate evolua n felul urmtor:
O, :0 2- 1 . OH < L H ,0
-e H:U
Arsenalul mecanismelor de protejare nu dispune de enzime ce ar neutraliza OH',

dar benefice sunt sistemele de neutralizare a : O,' i 1I,0 sistnd fonnarea OH. Deosebit
de expuse efectelor nocive ale radicalilor liberi sunt mitocondriile compartimentul
celular unde se efectueaz reaciile de oxido-reducere n prezena oxigenului molecular.
Sunt afectate primordial fagocitele i eritrocitele. Deficitul unuia dintre sistemele dc protecie
celular are consecine severe i inposibilitatea de neutralizare a radicalilor liberi este
implicat n patogenia diferitelor afeciuni, ca: ateroscleroza, bolile mitocondriale, bronitele
cronice, emfizemul pulmonar, canceml, diabetul zaharat, distrofiile musculare, insuficiena
renal, maladiile degenerative neurologice, accidentele cerebrovasculare.
2 : 0 2'+ 21l+- ^ ~ 0 2 + H2 0 2 - - - - - - - - 1 /2 0 2 4- H20
2GSH Ghitation
2NADP 2NADPH +2H
M ecanismele fosforilrii oxidative (cuplarea oxidrii cu fosforilarea)

Se postuleaz mai multe ipoteze:
a) Una din ipoteze este c n cadrul procesului de transfer al electronilor are loc
fonnarea unui produs intennediar covalent, macroergic, precursor al ATP (n analogie cu
procesele similare).
b) O alt ipotez presupune c energia oxidrii este preluat de o protein ce se
gsete ntr-o confonnaie activ, care ulterior stimuleaz sinteza ATP. Investigaiile n-au
confinnat atare ipotez.
c) Piter Mitchell postuleaz, n 1961, mecanismul hemiosmotic.
Savantul a presupus c anume cuplarea transferului de electroni i sinteza ATP se
datoreaz gradientului de protoni, ce se stabilete ntre partea interioar i cea exterioar
a membranei interne mitocondriale. Anume transferul electronilor (energia eliberat la
transferul lor) pompeaz H+din interior spre exterior, sporind concentraia ionilor 1
n exterior - regenereaz potenialul membranar cu semnul (+).
F ig u ra 3 .1 2 . M oilelul hem io
sm otic. In aceast sim pl
prezentare a teoriei hemiosmotice
aplicat mitocondriei, electronii
din N A D H i alt su b stra t
oxidabil trec printr-un lan de
proteine aranjate sim etric n
m em brana in tern . F lu x u l
elec tro n ilo r este cu p la t de
transferul de protoni de-a lungul
membranei, producnd att un
gradient chimic (bpH), ct i un
gradient electric(Ayf). Membana
in te rn m itocondrial este
impermeabil pentru protoni;
protonii pot reintra n matrice
doar p rin ca n a lele p ro to n -
specifice (FJ. Fora motrice ce
co n d u ce p ro to n ii n a p o i n
matrice asigur energia pentru
sin teza ATP, catalizat de
complexul F t asociat cu Fo M atrice (N)
Energia electronilor se stocheaz, deci,
iniial n gradientul protonilor, apoi apare o
for proton-motrice ce condiioneaz
sinteza ATP n complexul enzimaticATP-
azic (fig.3.12.).
Esena general a mecanismului const
n faptul c actul primar de stocare a ener Pi
giei l constituie transferul protonilor prin
membrana intern, cu formarea gradientu-
lui proton.
Numeroasele date experimentale con
firm conceptul lui Mitchell:
1) S-a confinnat generarea gradientului
n cele trei puncte ale lanului respirator.
Gradientul protonic generat n ele se utili
zeaz la sinteza moleculelor de ATP.
2) S-a dem onstrat c pH matricei
mitocondriale crete, iar a mediului extern F igura 3.13a. Complexulmitocondrial ATP-sintaza
al mitocondriilor scade, mediul fiind mai
acid.
3) A fost argumentat teza c transferul IT din mitocondrii n timpul transferului elec
tronilor i revenirii lor prin moleculele de ATP-sintaza sunt comparabile cu viteza lor
din cadrul proceselor de fosforilare oxidativ n mitocondriile intacte.
Teoria hemiosmotic postuleaz c ionii de H+ translocai n exterior datorit energiei
de transfer a electronilor revin n mitocondrii prin canale speciale, ionice, localizate n
complexul ATP-azic. Acest flux de protoni este fora motrice care determin sinteza
cuplat a ATP din ADP i Pi.
Complexul enzimatic,denumit ATP-sintaza sau F Ft -ATP-aza,se compune din
factorii Fo iy F,.] Ultimul se afl n matricea mitocondrial. Savantul Efraim Racker
l-a izolat i n aceast stare izolat de Fo scindeaz ATP (F(- ATPaza). Masa
molecular e de 380 kDa i conine nou subuniti incluse n cinci tipuri diferite, fiind
joncionate i coninnd cteva locusuri de fixare pentru ADP i ATP. F, e fixat de Fo,
aceasta fiind parte component a membranei interne, o transverseaz complet. Zero (nu
e dect o liter) nseamn c aceast parte a complexului leag un antibiotic toxic
oligomicina ce simultan inhib fosforilarea oxidativ.
Structura complexului F F,, dedus prin studii biochimice i cristalografice de John
E.Walker, este redat n fig 3.13a. n Fj trei subuniti a si 3 sunt aranjate precum
feliile alternate ale unei portocale. n centru se afl subunitatea y. Cele dou subuniti
ale Fose asociaz fenn cu subunitile a i ale F ,, meninndu-le strns lng membran,
n Focilindrul membranar al subunitilor este ataat ia subunitile y, i e ale Iui F(. n
timp ce protonii curg prin membran din direcia P spre N - via Fo, complexul cilindric
se rotete i subunitile Fj i schimb conformaia; subunitatea se asociaz cu
fiecare n parte.
n fig. 3.13b este redat conformaia lui F,, vzut din direcia N membranar, cu
cele trei subuniti i 3 a la periferie i subunitatea n centru. Pe fiecare subunitate
, la interfaa ci cu a , este
a-ADP p re z en t un site de legare
nucleotidic. Subunitatea se
asociaz primar cu una din cele
trei perechi a, fornd trecerea
lor n diferite conformaii cu
generare de ATP.
n cursul evoluiei, s-au
d e zv o ltat ctev a tipuri de
tran sp o rtato ri activi ATP-
dependeni, difereniindu-se n
structur, mecanism, localizarea
n e su tu ri sp ec ific e i
compartimente intracelulare
(vezi tab.3.1)
ATP -azele de tip P sunt
transportatori ai ATP-ului ce
F igura 3.13b. Conformaia complexului Fr vzut conduc cationii fosforilai
din direcia N membranar reversibil de ctre ATP, ca parte
a ciclului de transport. Toate
ATP-azele de transport de tip P au asemnri n secvena aminoacidic, mai ales n
apropierea reziduului Asp ce sufer fosforilare, i toate sunt sensibile la inhibiie de ctre
analogul fosfat -vanadatul. Fiecare este o protein integral cu multiple regiuni de
deschideri membranarc ntr-un singur polipeptid, unii avnd i o a doua subunitate
(fig.3.14a).
Transportatorii de tip P sunt larg rspndii. n esuturile animale, Na+, K !- ATP-aza,
un anticonductor pentru Na+, K+; Ca2+- ATP-aza, un uniconductor pentru Ca2+. l ipul P
al ATP-azei menine dezechilibrul n compoziia ionic dintre citozol i mediul extracelular.
Celulele parietale ale stomacului mamiferelor au o ATP-az de tip P ce pompeaz H+i
KHde-a lungul membranei plasmatice, deci acidific i coninutul stomacal. La plantele
superioare, ATP-aza de tip P pompeaz protonii afar din celul, stabilind o diferen de
2 uniti pH i 250mV de-a lungul membranei plasmatice.
O ATP-az de tip P similar din mucegaiul pinii, Neurospora, pompeaz protonii din
celul pentru a stabili un potenial negativ pe partea intern a membranei, utilizat pentru a
conduce aportul de substraturi i ionii din mediul nconjurtor prin transport activ secundar.
Bacteria folosete ATP-aza de tip P pentru a pompa n afar ionii metalelor grele, precum
i Cd2+, Cu2+.
O r g a n is m T ip de R o lu l
sa u e s u t m em b ran
A TP-azele de tip P
Na esu tu ri Plasm M enine sczut N a , riclicind
anim ale K~ n interiorul celulei, creaz
potenial transm em branar
electrolitic
+ C elule acid-
secretorii Plasm A cidifiaz coninutul stom acal
(parietale)ale
m am iferelor
"1
Fungi Plasm C reaz gradientul FT pentru a
(N eurospora) dirija transportul secundar
+ Plante Plasm extracelular n interiorul celulei
superioare
2+ esuturi Plasm M en in e C a2+ sczut n

anim ale citozol
2+ M iocite R eticulul S cchestrcaz C a2+ in tra c c lu la r,
anim ale endoplasm atic m eninnd C a2k sc z u t n
citozol
C d 2+, H g2+, C u2+ B acterii Plasm P om peaz ionii m etalelor grele
din celule
A T P -a zele de tip V
H+ A nim ale V ezicule
secretorii,
lizozom ale, C reaz un pH mic n
endozom ale com partim ent, activnd
+ P lan te V acuolar proteazele i alte enzim e
superioare hidrolitice
+ Fungi V acuolar
A T P -a zele de tip F
H+ E ucariote Partea intern 1
a m itocondriei C atalizeaz form area de ATP
H+ Plante Tilacoid [ din ADP + Pi.
superioare
H+ Procariote Plasm
T ransportatori in u lti m edica m en to i
Celule Plasm ndeprteaz o m are varietate dc
anim ale produse naturale hidrofobe i
tum orale droguri sintetice din citozol,
inclusiv vinblastina, doxorubici-
na, actinom icina D, m itom icina,
taxolul, colchicina, purom icina
O clas diferit de ATP-aze responsabile de transportul ionilor este corelat cu
acidifierea compartimentelor intracelulare la multe organisme. Vacuolele lungilor i ale
unor plante superioare menin un pH ntre 3 i 6 , cu mult sub cel ce nconjoar citozolul
(pH=7,5), prin activitatea ATP-azei de tip V - pomp de protoni ATP-azele de tip V
(V de la vacuole) sunt responsabile i de acidifierea lizozomilor, endozomilor, complexului
Golgi i veziculelor secrctorii din celulele animale.
Structural, nu sunt nrudite cu ATP-azele de tip P, nu sufer fosforilarea ciclic i
defosforilarea, i nici nu sunt inhibate de vanadat. Toate ATP-azele de tip V au o structur
complex similar, cu un domeniu integral (transmembranar) (V0) ce servete drept canal
protonic, i un domeniu periferic (V() ce conine site-ul ATP de legare i activitatea ATP-
azic (fig.3.14.b). Mecanismul prin care ATP-aza de tip V cupleaz ATP - hidrolizarea
pn Ia transportul protonic, nu este nc pedeplin cunoscut. Pompele protonice de tip V
sunt asemntoare structural i, probabil, ca mecanism, cu o a treia familie de pompe
protonice, ATP-azele de tip F.
Figu r a .3 .14. Structura sitbuuitar a trei tipuri de A TP-uze transportatoare.

a) A TP-azele de tip P au, n general, dou tipuri de subuniti proteice integrale. Subunitatea a care este
esenial, are un reziduu Asp fosforilut n timpul transportului medicamentelor.
b) ATP-azele de tip Vau un domeniu periferic compus din 7 tipuri diferite de subuniti, incluznd
trei A i trei B, i un domeniu integral V(l, cu trei tipuri de subuniti ce includ multiple copii ale lui c.
c) ATP-azele de tip F au un domeniu periferic F t omolog cu V al ATP-azelor de tip V. Poriunea
integral a ATP-azelor de tip F, F0, de asemenea are trei tipuri de subuniti cu multiple copii ale lui c.
Pompele de tipul P, cum ar f i Na*, *, ATP-aza mic doi ioni n direcii opuse. Pompele de tip V i F
mic protonii ntr-o direcie.
ATP-azele de tip /'joac un rol central n reacia de conservare a energiei la bacterii,

mitocondrii i cloroplati. Ele catalizeaz trecerea transmembranar a protonilor, condus
prin hidrolizarea ATP, ca i reacia invers n care fluxul de protoni determin sinteza ATP
(fig.3.14c). n al doilea caz, ATP-azele de tip F sunt denumite ATPsintaze. Gradientul
protonic n fosforilarea oxidativ i fotofosforilare este stabilit de o alt categorie de
pompe protonice ce au ca surs substratul oxidativ sau lumina solar. ATP-azele de tip
F/ATP-sintazele sunt complexe multisubunitare ce asigur pori transmembranari (proteina
integral F0) pentru protoni i molecule (proteina periferic F^.ce fololsesc energiea
eliberat din protoni (F0) pentru a fomia
puni fosfoanhidridicede ATP. Sintetizarea
ATP i activitatea ATP-azic se afl n
proteina F, (fig.3.14c). jj
La mijlocul anilor 1980 a devenit
evident c unele tumori sunt rezistente la
un numr de compui antitumorali.
Investigaiile au artat c membranele
2,4 DNP transport
plasmatice ale acestor tumori conin un H prin MIM,
transportator - ATP-dependent ce poate neutraliznd
gradientul protonic
exporta muli compui medicamentoi
diferii, prevenind acumularea lor n
celulele tumorale i efectele lor de inhibiie
tumoral. Medicamentele transportate
difer chim ic, dar sunt hidrofobe.
Transportatorii de medicamente prezint Matricea
pH
o protein integral, cu masa molecular [H ]
de 170 kDa, 12 segmente membranare Difuzia Membrana
i dou site-uri de legare a ATP-ului. Ele mitocondrial
intern (MIM)
sunt re sp o n sa b ile de elim in area Partea
medicamentelor din citozolul celulei citozolic OH
a MIM
tumorale. Exportul de medicamente are pH
loc prin h id ro liz a re a A TP-ului. [H I
Transportatorii de medicamente sunt, de

asem enea, i can ale io n ice, care
favorizeaz n mod specific trecerea CI
la diminuarea gradientului de concentraie
independent de ATP n boala genetic H
fibroz cistic defectul detenninant este
n gena care decodeaz o protein H H
tra n sp o rta to a re de C l' (re g la to r
transmembranar CFTR), ce poate fi H H
n ru d it cu tra n sp o rta to ru l de
medicamente n celulele tumorale. no2
2,4 Dinitrofenol
F igu ra 3.15. Influena DNP la transportul
de 1 n mitocondrii
Decuplanii fosforilrii oxidative
La fosforilarea oxidativ contribuie:
a) integritatea membranei interne a mitocondriilor-orice leziune conduce la pierde
rea capacitii de fosforilare oxidativ, n timp cc transferul electronilor poate continua.
Fr integritatea membranei interne, gradientul de II * n-ar putea exista;
b) impermeabilitatea membranei interne pentru ionii H+, O H , K+, Cl'. Dac ar fi
permeabil, procesele de fosforilare oxidativ nu ar avea loc.
Procesele fosforilrii oxidative pot fi decuplate cu ajutorul unor substane chimice ce
inhib fosforilarea ADP, neafectnd transferul electronilor- ageni decuplani. Energia nu
se acumuleaz n ATP, ci doar trece n cldur. Decuplanii mresc permeabilitatea
lalV (protonofori). Ca substane lipofile, ei leag ionii de o parte a membranei i-i
transfer pe cealalt, unde concentraia lor e mai mic (fig.3.15).
Muli ageni decupleaz procesul fosforilrii oxidative - decuplantul clasic e 2,4-
dinitrofenol (decupleaz oxidarea de fosforilare). La fel, drept decuplani pot servi unele
hidrazone, izotiocianai etc.
Acest fenomen are drept scop i meninerea homeostazei termice - energia
neutilizat ce se disipeaz sub fonn de cldur. Procesele respective decurg intensiv n
esuturile adipoase brune, saturate n mitocondrii, cu un coninut mare de citocromi.
Asemenea esuturi caracterizeaz animalele care hiberneaz; de altfel, le posed i nou-
nscuii. In calitate de decuplani servesc acizii grai, eliminarea crora e reglat de
adrenalin.
Alt grup dc substane sunt ionoforele care leag i transfer ionii prin membran -
Valinomicina (K+), Gramicidina (Na, K, i ali ioni monovaleni).
S-a constatat c sub aciunea noradrenalinei eliberat la nivelul terminaiilor nervoase
simpatice, se sintetizeaz o protein decuplant - termogenina. Efectul ci are loc n
esutul adipos brun, dezvoltat la nou-nscut, ct i la mamiferele care hiberneaz. Frigul
sau o alimentare abundent elibereaz termogenina, care decupleaz fosforilarea oxidativ,
cu producerea de cldur. Efectul calorigen e caracteristic i hormonilor tiroidieni, care
n final modific penncabilitatea membranei mitocondriaie pentru protoni, mpiedicnd
generarea gradientului electrochimic.
Dar multe nuane ale mecanismelor fosforilrii oxidative nu sunt elucidate. De exemplu,
nu se tie:
1. Care anume este mecanismul ce faciliteaz lanul de transfer al electronilor-
pomparea H+din matrice n exterior?
2. De unde se iau aceti protoni? Fie c sunt cei care particip direct la reaciile
chimice catalizate de enzime, reprezentnd o cale nemijlocit de la NADH, alta-d in
soluie sau, indirect, la interaciunea conformaional ntre centrele catalitice i de fixare
n diferite poriuni ale complexului enzimatic.
n 1988, M.Hartmut a expus argumente incontestabile n favoarea teoriei lui Mit
chell, n urma studierii cristalelor proteinei membranare din complexul clorofil - protein
a unor bacterii. Cu ajutorul analizei roentgenostructurale, a demonstrat c sub aciu
nea luminii electronii se desprind de la substrat i se deplaseaz de la un complex la
altul. Golul rmas n proteina dat este compensat de transferul unntorului electron de
la proteina precedent (fig.3.16).
La scindarea ATP n citozol, se formeaz ADP3' i P2'. Care este mecanismul de
transfer al ADP n mitocondrii i cum ATP sintetizat va prsi mitocondriile?
Se tie c membrana mitocondrial e impermeabil pentru substane ionizate.
Membrana intern conine dou sisteme specifice dc transport: adeninnucleotid
translocaza, cu funcia de transfer al ADP3- din citozol n mitocondrii, n schimb de
ATP4', n direcie invers (1:1).
Transferul are loc datorit modificrilor conformaionale ale moleculei AN-
translocazei, ce reprezint o protein foarte specific. Se cunoate un inhibitor al
e i-antractilozidul, secretat de o plant (ciulin sau scaiete). Al doilea sistem specific
e fosfattranslocaza, cu funcia de transportator al fosfatului n mitocondrii, nsoit de
deplasarea ionilor de hidrogen.
F igura 3.16. Modelul tridimensional (a) i aranjarea spaial a cofactorilor n interiorul modelului
pentru proteinele centrului fotoreactant n bacteriile Rhodopsendomonas viridis (b)
Bolile mitocondriale
Mutaiile genelor care codific proteinele sau moleculele de RNA mitocondrial
cauzeaz bolile mitocondriale mult mai semnificative n patologia general, pe msura
evoluiei cunotinelor actuale despre funcionarea normal a mitocondriilor. Proteinele
mitocondriale pot fi codificate de gene nucleare (fiind importate n mitocondrii dup ce
au fost sintetizate n citoplasm) sau de gene din DNA mitocondrial. Bolile mitocondriale
pot fi cauzate de anomalii ale unuia din complexele din membrana intern (antrennd un
deficit energetic important), de anomalii aleribozomilor i ale biosintezei intramitocondriale
a proteinelor, de anomalii ale transporturilor din membranele mitocondriale etc.
Cele mai importante particulariti ale acestor afeciuni sunt:
a) transmiterea mendelian, dac mutaia afecteaz o gen nuclear;
b) transmiterea matriliniar (exclusiv pe linie matern), dac mutaia afecteaz o gen
a DNA mitocondrial, deoarece DNA mitocondrial este transmis pe linie matern;
c) segregarea replicativ, care const n repartiia aleatorie a mitocondrii lor afectate
i ale celor nonnale n unna diviziunii celulare, ceea ce antreneaz un mozaicism tisular
(exprimarea difereniat a simptomatologiei n funcie de esut sau chiar n cadrul aceluiai
esut);
d) acumularea progresiv a mutaiilor n DNA mitocondrial ca urmare a atacului
radicalilor liberi produi prin funcionarea lanului respirator. Dup atingerea unui anumit
nivel al anomaliilor induse de radicalii liberi, apare expresia clinic a afeciunii, n primul
rnd n organele dependente de un aport constant de energie (miocardul, muchiul scheletic,
sistemul nervos).
Citopatiile mitocondriale
Anomaliile sau deficitul total al proteinelor din lanul respirator sunt denumite genetic
citopatii mitocondriale. Acestea sunt cauzate de deficitul ereditar al unuia dintre
complexele enzimatice respiratorii. Simptomatologia debuteaz precoce, nc n perioada
neonatal n cazul deficienelor grave sau, ulterior, n cazul n care activitatea enzimatic
rezidual pennite sinteza unui numr mic de molecule de ATP. Tabloul clinic depinde de
gradul de afectare a mitocondriilor din diferite esuturi, deoarece nu toate celulele aerobe
sunt n egal msur purttoare ale anomaliilor mitocondriale. esuturile cele mai afectate
sunt cele cu necesiti energetice maximal, n primul rnd sistemul nervos, miocardul i
muchiul scheletic. Frecvent, pacienii prezint semne de encefalopatie metabolic,
cardiomiopatii, hipotonie sever, steatoz hepatic, insuficien renal, etc. Pe plan
bioumoral predomin acidoz lactic consecutiv inhibrii retroactive a ciclului Krebs i
conversiei piruvatului n lactat. O alt modificare caracteristic este accentuarea
cetogenezei cauzat de creterea nivelului cetonemiei i a raportului -hidroxibutirat/
acetoacetat (deoarece -hidroxibutirat dehidrogenaza este activat la creterea raportului
NADH/NAD+).
Cele mai frecvente afeciuni cauzate de disfuncii ale proteinelor sau ale RNA
mitocondrial sunt:
a) sindromul OXPHOS care reunete afeciunile cauzate de disfuncia unuia dintre
complexele lanului respirator;
b) sindromul MERRF, afeciune neurodegenerativ produs de prezena unei mutaii
n gena mitocondrial care codific tRNA-Lys, ceea ce condiioneaz perturbarea
biosintezei tuturor proteinelor mitocondriale;
c) sindromul MELAS, afeciune neurodegenerativ fatal, produs de prezena unei
mutaii n gena mitocondrial pentru un alt tip de RNA de transfer (tRNA leu)-UUR.
Anomaliile mitocondriale secundare
Anomaliile mitocondriale secundare sunt cauzate de diminuarea aportului tisular de
oxigen (anoxie sau hipoxie n insuficienele respiratorii ori cardiocirculatorii severe) sau
de intoxicaiile cu ageni care blocheaz complexele mitocondriale. Drept exemplu ar
servi monooxidul de carbon sau cianurile care blocheaz ireversibil complexul IV, prin
stabilizarea formei fierice a ionului de fier.
Sistemele - navet de transport al echivalenilor de reducere
Este evident c NADH++H +care se produce la nivelul mitocondriilor, se reoxideaz
prin ptrunderea n lanul respirator. Dar care este soarta celui ce genereaz n citoplas
m, doar mitocondriile intacte sunt impermeabile pentru NAD(P)? Reoxidarea va de
curge pe ci indirecte denumite sisteme navete, fiind indispensabile de funcionarea
cilor metabolice citozolice. Prin membran vor fi transferai nu NADH, dar numai
electronii lor. Primul mecanism e naveta glicerol-fosfat, ce opereaz n ansamblu
astfel: NADH i H+rezultat din di verse reacii de reducere din citoplasm se asociaz
cu apoenzima specific, fonund glicerol-3-P-dehidrogenaza (fig.3.17). Drept acceptor
servete DI 1AP (dihidroxiacetonfos-
fatul - intermediar glicolitic). Mem Glicoliz
brana extern mitocondrial este Glicerol I
permeabil pentru glicerol-3-fosfat NAD' 3-fosfat NADH + H*
care difuzeaz cu uurin n spaiu dehidrogenaza >
\^ c ito z o lic ).^ /
intermembranar. Pe suprafaa extern
a membranei interne mitocondriale
este lo c aliza t G -3-P -D H Glicerol 3-fosfat Dihidroxiacetonfosfat
mitocondrial, care - 1 reoxideaz
(glicerolfosfatul) nDHAP, iar cei
doi atomi de H sunt preluai de coen-
zima acestei enzime de tip flavinic
(FP). Hidrogenii sunt preluai la
aceast enzim prin intennediul CoQ
n lanul respirator. DHAP revine n
citoplasm i suita de reacii se reia.
Mecanismul menine n citoplasm F igu ra 3.17 Mecanismul-navet glicerol 3-fosfat
o concentraie necesar de NAD'.
Proccsul e deosebit de activ n muchii scheletali i creier.
E mai complicat mecanismul de transfer al H+la naveta malat- aspartat (fig.3.18).
In schema rcspectiv, 2,5 indic sisteme de transfer al aminoacizilor, dicarboxila-
ilor. Accst mecanism funcioneaz intens n inim, ficat, rinichi. Astfel, se asigur
reoxidarea NADH citozolic i reglarea cuplurilor NADH/NAD+ extra i intra
mitocondriale. Naveta dat cedeaz electroni n lanul respirator, formnd 3ATP.
Naveta malat-aspartat nclude urmtoarele sisteme enzimatice i de transport:
- malat dehidrogenaza (MDH) cu izoformele sale-citozolic i mitocondrial;
aspartatamino transferaza (AST), de asemenea citozolic i mitocondrial;
- transporttorii, care funcioneaz ca sisteme antiport - malat-cetoglutarat i
aspartat - glutamat.
Echivalenii reductori (NADI H H+) citozolici sunt preluai de MDH i utilizai pentru
reducerea oxaloacetatului n malat. Ultimul este transportat n mitocondrii i retransfonnat
n oxaloacetat graie aciunii MDH mitocondriale. NADH+H+mitocondrial este preluat
NAD*
NAD M alat
M a lat ^
NAD1 dchidrogcna NA DH
M alat
dehidrogenaza
Oxaloacetat O x a lo a c e ta t
Clutamat G utamat
oc-cetoglutarai a-cetoglutarat
A sp a rta t-
A sp a rta t-
am ino transferaza
arnino tran sferaza
S p a iu l
intermembranar M a trice (N)
F igu ra 3.18 Mecanismul-navet malat-aspartat
ca substrat al complexului I. Oxaloacetatul este transaminat sub aciunea AST, genernd

acidul aspartic, care ulterior este trasportat n citozol prin intermediul transportatorului
comun aspartat-glutamat. AST citozolic regenereaz oxaloacetatul prin transaminarea
aspartatului. Ciclul glutamat-aspartat furnizeaz oxaloacetatul necesar funcionrii nave
tei n cauz.
Reglarea fosforilrii oxidative
Intensitatea fosforilrii oxidative este riguros controlat. Un anumit control se
poate exercita prin compui i factori direct implicai n proces. Rolul major i revine lui
ADP ce se cupleaz cu P, formnd ATP. Controlul se exercit:
a) Prin acceptorfosfat exprimat prin mrimea P/O (denumit i ct de fosforilare). El
reprezint numrul de molecule de fosfor neorganic, transformat n form organic,
cu referire la atomul de oxigen utilizat, (respectiv, pentru cele trei puncte de fosfori
lare e egal cu 3 :2 : 1).
b) Electronii se deplaseaz prin lanul respirator, cu condiia fosforilrii simultane a
ADP n ATP. Coninutul de ADP determin viteza de fosforilare oxidativ. La sporirea
ei, viteza maxim de utilizarea 0 2 dureaz atta timp, ct ADP se transform n ATP.
apoi revine la valoarea iniial. Reglarea fosforilrii oxidative prin ADP se numete
control respirator, care depinde direct de necesitile energetice ale celulei.
c) Fosforilarea oxidativ e reglat i de sarcina energetic celular (vezi mai sus).
Oxigenazele. Citocromul P450 i reaciile de oxido-reducere. Aproape 90% din
O, este redus de complexul citocromoxidazic aar Unele esuturi conin enzime ce cata
lizeaz reacii de oxido-reducere n care atomii de oxigen se includ nemijlocit n molecule
i fonneaz grupa OH sau carboxilic - COOH. Enzimele ce catalizeaz tipul dat de
reacii se numesc oxigenaze.
Dioxigenazele sunt enzime ce catalizeaz reacii care includ n molecula substratului
organic ambii atomi de 0 2, exp: pirocatehaza. Monooxigenazele reprezint enzime ce
catalizeaz reacii de includere a unui atom de 0 2, cellalt fiind redus la H ,0. Acestc
enzime necesit dou substraturi-unul adiioneaz un atom, iar al doilea-cosubs-
tratul este donator de H pentru reducerea atomului de O, la H ,0:
AH + BH 2 + 0 2 ^ AOH + + H20
Primul substrat se hidroxileaz, de aceea enzimele sunt denumite i hidroxilaze;
monooxigenazele se divizeaz n subclase n dependen de natura cosubstratului
(FMN, FAD, NAD, NADP, a-cetoglutarat).
Numeroase i complexe sunt reaciile de oxido-reducere, cu participarea citocromu
lui P4 5 0 (prezent n reticulul endoplasmatic). Acest citocrom poate interaciona cu 0 2 i
cu , formnd cu ultimul un complex ce absoarbe lumina la 450 nm.
Citocromul P4 5 0 catalizeaz reaciile de hidroxilare a substratului (RH - ROH),

iar cellalt se reduce la H2 0 , adiionnd echivaleni redui ai NADH, NADPH sau proteine
fiero-sulf.
Particip la: 1) hidroxilarea steroizilor; 2) inactivarea substanelor strine, mai ales
puin solubile n ap; 3) hidroxilarea medicamentelor-hidroxilare ce amplific solubilitatea
lor, favoriznd procesele de dezintoxicare i eliminare din organism.
P.Mitchell J. E.Walkcr
c a p i t o l u l IV. GLUCIDELE I METABOLISMUL LOR
STRUCTURA. PROPRIETILE. FUNCIILE
Glucidele reprezint axa metabolic n regnul vegetal, pentru sinteza crora se utilizeaz
energia luminii. Ele reprezint forma de existen a majoritii organismelor,
deoarece glucidele de felul zahrului, amidonului sunt sursa principal de calorii necesare
omului adult, tuturor animalelor i multor bacterii.
Glucidelor le revine funcia fundamental de aprovizionare cu energie i carbon a
celulelor incapabile de fotosintez, iar unele, ca amidonul i glicogenul, reprezint rezerva
de glucoz.
Polimerii glucidici insolubili ndeplinesc funcii structurale n pereii celulari ai bacteriilor,
plantelor, n esutul conjunctiv i n membranele celulare animale.
Un alt tip de glucide servesc la interaciunea celulelor, determinnd specificitatea
biologic a suprafeelor celulelor animale. Glucidele sunt componente ale acizilor nucleici.
Majoritatea reprezentanilor acestei clase de substane organice sunt compui ai
carbonului interacionat cu apa (CFfO)n. Exist ns i glucide care nu respect acest
raport, iar unele dintre ele conin atomi de azot, fosfor sau sulf.
n funcie de comportarea lor la hidroliz, glucidele se clasific n:
1 ) oze - monozaharide, glucide nehidrolizabile, substane incolore, solide, cristalice,
uor solubile n ap, de regul, dulci. Baza lor reprezint un lan neramificat de atomi de
carbon legai ntre ei prin conexiuni ordinare. Unul dintre aceti atomi e fixat printr-o
legtur dubl cu 0 2, formnd grupa carbonil. La ceilali atomi dc carbon e adiionat
grupa hidroxilic. n funcie de natura grupei i carbonul pe care l conin, deosebim
aldoze (C =0 la captul terminal, ca grup aldehidic) i cetoze (C = 0 n orice alt
poziie). Dup numrul diferit de atomi de carbon n molecula lor distingem: trioze,
tetroze, pentoze, hexoze etc.( vezi pag. 215).
2 ) ozide - glucide care prin hidroliz pun n libertate una sau mai multe molecule de
oze (holozide); unele din ele elibereaz un compus n plus de natur neglucidic
(numit aglicon) i se numesc heterozide (glucozide).
Fiecare monozaharid exist n dou forme, alctuind n natur aldo- sau cetofor-
ma. Cele mai rspndite sunt hexozele (D-glucoza, D-fructoza). Aldopentozele (D-
riboza i 2-dezoxi-D-riboza) sunt componente ale acizilor nucleici.
Toate monozaharidele, cu excepia dihidroxiacetonei, posed unul sau mai muli
atomi chirali de carbon i se atest sub form de izomeri optici activi: gliceraldehida
conine un atom chiral i poate fiina n fonn de doi stereoizomeri; aldohexozele au 2 4,
adic 16 izomeri. Stereoizomerii se deosebesc prin modul n care rotesc planul luminii
polarizate, denotnd aceleai proprieti fizice i chimice. Stereoizomerii se numesc
enantiomeri i sunt situai unul fa de cellalt, la fel ca reflectarea oricrui obiect n
oglind. Prin convenie, ei au fost desemnai D i L. Configuraia absolut a celor patru
substitueni n jurul carbonului asimetric stabilit prin studii de difracie a razelor X
este redat prin formule de perspectiv i plane; ca compus de referin este luat
gliceraldehida (GA):
H 0 H 0 H 0
V1 V
1
V
H -C -O H H -C -O H H O -C -H
L 1.
H -C -O H H -C -O H
CH2OH 1
CH2OH CH20H
D-gliceraldehida D-eritroza D-treoza
Pe n t oze
D -a ld o z e
(a)
V I.
V V L
V
H O -C -H
H -C -O H H O -C -H H -C -O H
I. L I.
H -< p -O H H-Cf-OH H O -C -H H O -C -H
I. I.
H -C -O H H -C -O H -- H -C -O H
I I I I
CH2OH CH2OH CH20 H CH2OH
D -rib oza D-arabinoza D-xiloza D-lixoza

Hexoze
0
H
V1.
0 H
Y
0 H
V1
0 H
V1
0
V
H-C-OH
H
V1
HO-C-H
0 H
Y
0
H(: - oh
H
V1
HO-(3-H
- c - - HO-C-H H-C-OH HO-C-H
h - c'- oh H-C-OH HO-C-H HO-C-H H-C-OH H-C-OH H0-(: - h H 0-(3-H
H-i'-OH H-C-OH H-C-OH H-y-OH HO-C-H HO-C-H H0-(
rH HO-(H
H-O-OH H-C-OH
I H-C-OH H-C-OH H-C-OH
1
CH2OH
H-C-OH
CH2OH
1
H-<3-0H
<: 2
h oh
H-<p-OH
<20
CH2OH CH2OH CH20H CH20H
D-alloza D-altroza D-glucoza D-manoza D-guloza D-idoza D-galactoza D-taloza
Treoze Tetroze P en t o z e
CH2OH C H 2OH
CH2OH CH2OH !
A to m ii d e c a r b o n I I C=0 C=0
m ai accentuai p rezin t c= o c=o I
centre chiralice I ! H - C OH H O -C -H
CH2OH H- -C -O H I
I H - 9 -O H H -C -O H
CH2OH I
CH2OH CHaOH
Dihidroxiacetona D-eritruloza D-ribuloza D-xiluloza
Hexoze
CH2OH CH2OH CH2OH CH2OH
I I
C=0 C=0 L o A=o
I
- i H O -C -H H -C -O H H O -C - -H
I I
H -C -O H H -C -O H H O -i-H H O -C - -H
I I I
H - C OH H -C -O H H -C -O H H -C -O H
D -c c to z e I I ?- !
CH2OH CH20H CH20H CH20 H
(b) D-psicoza D -fru cto za D-sorboza D-tagatoza

I!
- -
-
2 2
D - GA L - GA
Multe aldoze posed civa centri chiralici. Astfel, s-a stabilit c seriile D i L vor
confirma configuraia atomului maximum asimetric, deplasat de la atomul de carbon
al grupei carbonilice, dar nu i sensul de rotaie + sau - al planului luminii polarizate de
ctre zahrul respectiv.
Monozaharidele, scheletul crora e compus din 5 i mai muli atomi de carbon, n
soluie capt forma de structuri ciclice nchise, n care grupa carbonil formeaz o
conexiune covalent cu una din grupele hidroxil legat cu atomul de carbon al lanului de
baz:
OH
O R 2
Gruparea hidroxil, aparut la fostul carbon carbonilic, este denumit hidroxil
semiacetalic sau glicozidic. Structurile monozaharidelor, coninnd cicluri de 5
atomi, se numesc furanozice (prin analogie cu heterociclul furri), pe cnd cele de 6
atomi se numesc piranozice (heterociclulpirari).
Pentru trecerea de la formulele liniare de proiecie la cele ciclice (de perspectiv) se
aplic urmtoarea regul: deasupra planului moleculei se indic grupele, ce se gsesc I
pe lng atomii de carbon n L-configuraie (cu excepia C-5 n piranoze i C-4 n fiiranoze);
mai jos - atomii de n D configuraie. Pentru lanul lateral, pe lng C-5 (piranoze) i
C-4 (furanoze), regula se inverseaz. Avantajul const n faptul c ele (grupele) pot fi
rotite n spaiu sub orice unghi, fr ca acestea s-i piard proprietile.
Ca urmare a reaciilor de ciclizare, fostul carbon carbonilic devine carbon asimetric, I
adoptnd dou configuraii sterice diferite - a i anomer. Stereoizomerul care are I
aceeai configuraie la -1 ca i ultimul atom asimetric ce detennin seria monozaharidului
(D sau L), este denumit a-anomer. Stereomerul de configuraie contrar al acestor
doi atomi e denumit -anomer. Reaciile de semiacetalizare sunt reversibile, forma
liniar carbonic se afl n echilibru cu diverse structuri ciclice posibile n soluiile apoase.
Cetohexozele fonneaz, n majoritatea cazurilor, inelul ftiranozic n poziia , cu legtura
semiacetalic. Aldohexozele, ns, pot forma atare inel care e mai puin constant dect
cel piranozic.
Proprietile chimice ale monozaharidelor sunt determinate att de gruprile
funcionale caracteristice, ct i de ansamblul catenei.
2 0 2
2
. 41 ---- r
2I
= 0
- D - fru c to fu ra n o z a
3I
Furan
2 Q
""C H 5 I N
W //
\4V /
2
H 62 f 1
D - fru c to z a
- D - fru c to fu ra n o z a
6,
2
} - \
/
I 4 \ 1
11

2I
P iran
/
- D -g lu c o p ira n o z a
2
---
6I \
2 4
.
1
D - g lu c o z a ^

- D -g lu c o p ira n o z a
Proprietile reductoare se manifest la introducerea lor n soluiile unor sruri

complexe de metale (cupru, argint, bismut), ai cror ioni sunt redui la valene
inferioare (Fehling, Benedict). La baza reaciei se afl ionii de Cu2+, complexai de ionii
tartrat (F) sau citrat (B), cu formarea oxidului cupros, - precipitat rou. n reaciile
Tollens i Nylander (Ag+i Bi3+) are loc depunerea metalelor respective n forma de
precipitat negru. n testele Fehling i Benedict, monozaharidele sufer oxidri
complexe, cu ruperea catenei de atomi de carbon, obinndu-se diferii produi de reacie.
Se produce o oxidare n mediu alcalin, ce decurge neuniform i complicat.
n cazul oxidrii ntr-un mediu acid, se obin acizi uronici (oxidarea la gruparea
alcool primar) sau zaharici (aldarici):
COOH

I
( ) 4 (CHOH ) 4
(CHOH ) 4 I
2 COOH
CH2OH
j Aldoza (glucoza) A c id aldu ron ic
A c id ald on ic
(gluconic) 1 (glucuronic)
COOH
I
(CHOH ) 5
COOH
A c id aldaric (glucozaharic)
Srurile acizilor gluconici sunt foarte solubile i pennit includerea n alimentaie a unor
elemente necesare ca fierul sau calciul. O form utilizat de calciu n medicin este
gluconatul de calciu, n care Ca44-previne hipocalcemiile i apariia tetaniilor, iar acidul
gluconic servete ca substrat energetic.
La tratarea monozaharidelor cu acizi minerali concentrai (HC1, H 2 S 0 4) i cuplarea
imediat cu diveri fenoli (reacia Selivanoff cu rezorcin), fructoza pierde trei
molecule de ap, transformndu-se n oximetilfurfurol
care, mpreun cu rezorcin, formeaz un compus rou- C H = N NHC 6 H 5
viiniu I
Condensarea unor monozaharide cu fenilhidrazina C = N NH Q H c
(C 6 H 5 -NH-NH2) formeaz ozazone, substane galbene, I
(CHOH ) 3
cristalizate. Monozaharidele identice dup C, i C 2
reprezint cristale identice (glucoz, fructoz). Galactoza CH2OH Ozazon
formeaz o ozazon distinct de glucoz.
Condensarea cu compui ce conin gruprile amino ale unor proteine este respon
sabil de formarea n organism a proteinelor glicozilate (hemoglobina, unele proteine la
diabet zaharat).
COH CH2OH CH2OH CH2OH

I I I I
H -C -O H H -C -O H c=o H O -C -H
I I I
H O -C -H H O -C -H H O -C -H H O -C -H
I I ) I
H -C -O H H -C -O H H -C -O H H OH
I
H -C -O H
I
H -C -O H
I
H -C -O H H -C -O H
I I !
CH2OH CH2OH CH2OH CH2OH
D - glucoza D - sorbitol D - fructoza D - manitol
Reducerea monozaharidelor genereaz polioli. CH 2 OH
n organism reaciile sunt catalizate de enzime NAD-
dependente. Glucoza i fructoza se reduc la D-sorbitol,
galactoza - galactitol.
Un important poliol este i ribitolul, derivat al - - O '
ribozei, un component al vit. B,. Compui rspndii n
regnul vegetal sunt sorbitolul, manitolul i galactitolul.
0-
D -g lu co zo -1-fosfat
n organizmele vii este prezent inozitolul att n stare
liber, ct i fosforilat sau ca un component al fosfolipidelor, esterul hexafosforic al su
(acidul fitic) fiind prezent n plante i servind drept o surs veritabil de fosfat. Srurile
sale de calciu i magneziu se
c h 2o h CH2OH numesc fitin.
O etap im p o rtan t n
meninerea ozelor n celul i n
metabolizarea lor este procesul de
esterificare cu acid fosforic.
La interaciunea gruprilor
se m ia c e ta lic e , ce fo rm eaz
glicozidele. n soluie, exist numai
o singur form ireversibil ( a sau
D -acetilglucozam in O ). Gruparea semiacetalic se blo
ch eaz. D eriv ai de n a tu r
glicozidic sunt oligozaharidele i polizaharidele. Reacia cu o component
neglucidic (aglicon) conduce la O-, S-, N- glucozide. Ultimele, componenta monoza-
haridic a crora constituind-o D-ribo- sau D-dezoxiribofuranoza i agliconul - baz
azotat, sunt nucleozidele. Mucopolizaharidele coninglucozamina i galactozamina,
N-acetil glucozamina. Glucozamina se afl n antibioticul streptomicina (n forma N-
metilat). O aminoglucid mai complex, format dintr-un rest de acid piruvic i alte
resturi de monozoamin este acidul neuraminic - o component esenial a glicolipidelor
i glicoproteinelor. n glicozidele cardiotonice, drept aglicon servete compusul steroidic.
R- ,
H -C -O H
I
H -C -O H
I
CH2OH
Acidul N-acctilneuraminic (acid sialic)

OLIGOZAH ARIDELE
Oligozaharidele reprezint compui glucidici obinui prin condensarea a dou sau a
mai multor monozaharide (maximum 10). Mai importante sunt dizaharidele. Prin con
densarea a dou molecule de
monozaharid rezult dizaharide
reductoare (ele pstreaz un
hidroxil semiacetalic - maltoza, ,
lactoza) i nereductoare (partici
p ambii hidroxili semiacetalici -
zaharoza: oc-glucopiranozid - - 2
fructofuranozid, glucid foarte rspndit
n regnul vegetal, mai ales n trestia
Zaharoza
de zahr i sfecl, cu o valoare
nutritiv deosebit). Zaharoza n- , 2
are anomer liber al carbonului i
nu posed proprieti reductoare.
Este un produs intermediar n foto-
sinteza plantelor i o form de
transport al glucidelor. OH M altoza
Maltoza (oc-glucopiranozid - 4-
glucopiranoza), glucid reductor, 2 2
rezult la hidroliza enzimatic a
amidonului i glicogenului.
Lactoza (-galactopiranozid-
4-glucopiranoza) este un glucid OH
reductor, sintetizat din glucoz, se Lactoza OH
conine n laptele mamiferelor.
POL1ZAHARIDELE
Glicanii (homo- i hetero-) sunt compui glucidici care formeaz, prin hidroliz, mo
nozaharide sau derivai ai acestora.
Homozide. Amidonul prezint un poliglucid deosebit de rspindit n regnul vegetal.
Se fonneaz n plantele verzi, n procesul de fotosintez. n continuare, este scindat
hidrolitic pn la glucoz, vehiculat n diverse esuturi, resintezat i depozitat sub fonn
de granule. Se conine n semine de gru - 63-67%, orez - 70-80%, porumb - 60-
6 6 %, fasole-40-43% . n starea pur, amidonul se prezint ca o pulbere alb, granular,
hidroscopic. Este insolubil n ap rece, iar in ap cald formeaz soluie coloidal.

Structural, amidonul este constituit din resturi de a-D- glucopiranoz legate 1-4 i 1-
6 . Cota amilozei este de 20-30% din totalul amidonului, iar circ 70-80% i revine
amilopectinei. n ultima structur apar legturi 1 -6 %, fapt care confer macromoleculei

o structur ramificat. Amiloza cu iodul d o coloraie albastr intens, iar amilopectina
-roie-violet.
Celuloza, ca i amidonul, este un homopolizaharid ce conine mai mult de 10000
resturi de D-glucoz racordate prin legturi glicozidice 1,4. Glucoza n celuloz rcpre-
zmt configuraia . O particularitate nensemnat n structura ei implic consecine
eseniale pentru proprietile glucidului. Avnd o configuraie , lanurile dc celuloz
sunt foarte ntinse, formnd o structur liniar, neramificat, fibre insolubile.
C eluloza-polizaharid predominant n regnul vegetal, este cel mai rspndit n
biosfer, constituind componentul primordial al pereilor celulari ai plantelor. Celobiozu
este unitatea structural a celulozei, reprezentnd un dizahand fonnat din dou molecule
de -glucoz. Celobiaza scindeaz enzimatic celobioza.
Celuloza este hidrolizat de o enzim specific - celulaza, sintetizat de unele
bacterii i ciuperci, fiind constiftientul
sucului
_ intestinal al animalelor inferioare. 1 'HU.7
La animalele rumegtoare, numeroasele
bacterii ce paraziteaz n tubul digestiv
sintetizeaz i elimin enzim ce scindeaz ~~(J
celuloza la D-glucoz, fermentnd-o pn t/n Celuloza
la acizii grai, cu o caten scurt, C 0 2,
metan (CH4), ultimul fiind eliminat prin recurgiti. Microorganismele, ulterior, sunt
scindate de enzimele intestinale. O simbioz dintre microorganisme i vac, unde
primele au posibilitate s se bucure de o via scurt, dar fericit, ntr-un mediu cald,
plcut. n stare pur, celuloza este o substana amorf de culoare alb, fr gust i miros.
Nu se dizolv n ap sau n alte soluii (cu excepia reactivului Schweitzer -
hidroxidtetraamoniacocupric - [Cu(NH3)J(OH)2). Acizii minerali tari o precipit, iar n
prezena NaOH (2N) fibrele de celuloz sufer o imbibare limitat - fenomen ce st la
baza procedeului tehnologic denumit mercerizare.
La om, celuloza este necesar penru mrirea peristaltismului intestinal. Organismul
uman nu dispune de enzim capabil s scindeze legtura -glicozidic i, deci, ea nu
poate fi utilizat ca surs de energie.
Chitina - polimer de glucozamin, cu o cantitate echimolecular de acid acetic, se
unete n lanuri lungi prin legturi de tip 1,4--glucozidic. Se conine n carapacea
crustaceelor i a insectelor, e rezistent la acizi i alcali, e insolubil n majoritatea
solvenilor. Carcasa este consolidat de carbonatul de calciu.
CH.,
0=0
CH,OH TI CH.OH H N11
j -4 !____ Q I_____
I .
'i / oh \ H/,
-y H \ r ~X/oH
, , OH H , vH
V H
A hX _ 0A _
NH .
I
c=o
CH, CH,
Segment de chitin - homopolimer compus din N-acetit-D-glucozamin l,4
O mucopolizaharid omogen este i acidul sialic, constituit din resturi de acid

neuraminic - N-acetilat legat prin legturi 2-4. Este constituent al glicoproteinelor
membranare i protejeaz celulele de atacul enzimatic i al toxinelor chimice. Neuraminidaza
virotic scindeaz acidul sialic i faciliteaz ptrunderea viruilor n organism.
Citozolul celulelor bacteriene e protejat de peretele celular. Aceast carcas
este transversat de legturi covalente formate de lanuri polizaharidice compuse din
N-acetil-D-glucozamin i N-acetilmuramic, acizi, racordai prin legturi 1,4.
Lanul lateral peptidic (,,,D) variaz de la specie la specie. Structura fortificat
de legturi covalente transversale ce contureaz celula e denumit m urein sau
peptidoglican.
,CH2OH CH2OH
N-acetilglucozamina 6 Acidul -N-acetilmuramic
o -O
5
4
OH o.
/I CH3
NH O N H C = 0
0= C - C H 3 H3c C H - C = 0
M ureina A -B -C -D
Antibioticele (penicilina) inhib sporirea nummlui de bacterii i frineaz ultima etap

de sintez fermentativ a peptidoglicanilor la microorganismele sensibile. In saliv se
ntlnesc i polizaharide extracelulare de origine bacterian: dextranii,- polimeri ai
glucozei ( a - 1-6; - 1-3 i 1-2), i levanii, - polimeri ai fructozei (1-2). Aceti polimeri
sunt adevrai liani ai plcii dentare, se formeaz pe contul zaharozei considerat, din
acest motiv, cea mai cariogen.
Heterozide. Componenta glucidic se leag cu atomul de oxigen, sulf sau azot al
agliconului prin hidroxilul semiacetalic. Sunt rspndite heterozidele ndeosebi n regnul
vegetal i au fost izolate din diverse organe ale plantelor. La animale s-au decelat n
unele esuturi i umori. n funcie de natura agliconului se disting:
1.0-heterozide - rezultante prin condensare cu un hidroxil alcoolic, fenolic, sterolic
sau heterociclic;
2. S-heterozide - formate prin condensare cu tioli;
3. N-heterozide - generate prin condensare cu grupri aminice ale unor compui
organici.
Aproape toate glicozidele naturale sunt -glicozide, dar pot exista sub ambele forme.
Preponderent, componenta glucidic este D-glucopiranoza i nu posed proprieti
reductoare. Glicozidazele, enzimele hidrolitice hidrolizeaz aceti compui dar sunt
prezente n alte celule unde glicozidele nu sunt constitueni fiziologici.
O-heterozide. Sunt glicozide n care agliconul este un compus cianhidric, din care
face parte i amigdalina. Ea prezint un diglucid -geniobioza i un aglicon - nitrilul
acidului mandelic. n natur, amigdalina se afl n migdale amare, n smburi de piersici,
caise, prune. La hidroliz formeaz 2 molecule de - D-glucoz, una de aldehid
benzoic i una de acid cianhidric:
C2H27N O n + 2H2 2C6H 120 6+ C 6H5C II0 + HCN
Enzimele florei intestinale sunt capabile s hidrolizeze amigdalina, cu eliberarea acidului
cianhidric. Absorbia lui genereaz efectul toxic.
Amigdalina i laetrele se consider ca ageni antitumorali - tumorile posednd activitate
-glucuronidazic sau -glucozidazic elibereaz HCN - cauza morii celulare.
o c C,H,
Amigdalina CN
Laetrele
Din aceast grup de heterozide fac parte i glicozidele cardiotonice - digitaloidele,

strofantozidele.
S-heterozide. Sunt compui care la hidroliz elibereaz oze i senevoli. Ultimii sunt
esteri ai acidului izotiocianic - R - N = C = S. Atare compui se afl n seminele unor
plante din familia crucifere, liliacee, leguminoase etc.
Sunt desemnate i 2 clase de compui chimici n componena crora intr o fraciune
glucidic i o fraciune protidic (glicoproteide) sau lipidic (glicolipide). Legturile sunt
covalente, iar cuantumurile compuilor sunt foarte diferite. Fraciunea glucidic este
reprezentat printr-un lan scurt denumit glican (proteoglicanii). La aceast clas de
glicoproteine se refer hormonii hipofizari, glicoproteinele sanguine, haptoglobulinele etc.
Glicolipidele - decelate n creier, n esutul nervos i iau parte n neurotransmitere la
nivelul receptorilor, sunt implicate n recunoaterea celular, n imunitatea tisular etc.
DIGESTIA I ABSO RBIA GLUCIDELOR
Glucidele stau la baza existenei majori
Dextrincle
tii organismelor. Ele ne parvin prin amidonului
alimentare sub form de polizaharide Cavitatea j Izomaltoza
Maltoza
bucal ') -amilaza
(amidon, glicogen), dizaharide (zaharoz, Lactoza
Zaharoza
maltoz, lactoz), monozaharide (glucoz, Celuloza
fructoza, galactoz, pentoz). Procentajul A m idon
Lactoza
lor variaz n dependen de vrst. In pro Zaharoza pH sc z u t
Celuloz stopeaz
cesul digestiei sunt hidrolizate pn la aciunea
monozaharide-singura form absorbabil. amilazei
salivare
Cota amidonului e de 50% din glucidele
utilizate de om. Componentele amidonului
sunt rapid hidrolizate de a-amilaz de
natur salivar i continu sub aciunea ot-am ilaza
p an cro atic
amilazei pancreatice. Enzima hidrolizeaz
legturile interne a - 1,4, formnd maltoz,
maltotrioz i a-dextrine.Ultimele sunt Iz o m a lto z a
Ficat
alctuite din cteva resturi de glucoz legate Maltoza
Lactoza
1,6 suplimentar la cele 1,4. Maltoza i Zaharoza
maltotriozele sunt hidrolizate pn la glucoz
de maltaz, pe cnd a-dextrinele sunt hi-
Circula,
d ro liz a te de a -d e x trin a z ( a - 1,6- portal E n zim ele
legate dc
glucozidaz). membrana
^ celulei
Dextrinele sunt substane lipicioase, mucoasei
constituind materia prim de baz a cleiu (izomaltaza
glucoamilaza
lui. Cartoful la fierbere elimin amiloza lactaza
zaharaza)
ce confer culoare apei. Din coninutul de J^ elu lo z jj
am idon al cartofului rm n 80% de
amilopectin.
D izaharidele sunt hidrolizate de F igu ra 4.1. Digestia glucidelor
dizaharidaze, reprezentate de enzime spe
cifice: lactaz (-galactozidaz), maltaz (a-glucozidaz), zaharaz (a-glucozidaza
sau -fructozidaz). Enzimele sunt sintetizate de ctre enterocite.
Substratul morfologic al digestiei i absorbiei intestinale este constituit din membrana
enterocitelor, care se profileaz luminai n fonn de perie i de textur de mucopolizaharide,
ce cptuesc suprafaa luminal (glicocalix). Hidrolazele nu sunt eliminate n cavitatea
intestinal. Ele se concentreaz i acioneaz pe marginea periei celulelor, iar
monozaharidele sunt eliberate n vecintatea imediat a sistemelor de transport (fig.4.1)
Pentru absorbie sunt necesari ionii de Na+, care formeaz cu monozaharidele compui
ce sunt transportai n celule. Na+activeaz ATP-aza ce amplific scindarea ATP i
eliberarea energiei necesare pentru absorbie. Na+eliberat este retransferat. Procesul
activ const n fosforilarea monozaharidei (exist investigaii experimentale care confirm
sporirea fosforului organic i reducerea celui neorganic, precum i micorarea glucozei).
Inhibitorii fosforilrii oxidative blocheaz absorbia monozaharidelor. Acidul fosforic este
pus n libertate de o fosfataz. Procesul de fosforilare a monozaharidelor este stimulat de
vitaminele Bj i C, metionin i hormonii suprarenali (sistem simport glucoz - sodiu).
Partea apical ( Partea bazal
3Na+
2Na+
N a+, K +- ATPaza
" \ Glucoza
GluT2 (difuzia facilitat)

Glucoza
Sim portorN a
LUM ENU L INTESTINAL SNGELE
F igu ra 4.2. Trasportul glucozei n celulele epiteliale intestinale
Se consider c transportatorul leag n locuri separate att glucoza, ct i Na+. Na+

mrete afinitatea transportatorului monozaharidelor.Glucoza iese uor din celul prin
difuzie facilitat, iar Na+este expulzat contra gradientului de concentraie prin intervenia
enzimei ATP-azei Na+, K+dependent (fig.4.2). Aceast enzim menine gradientul de
concentraie a Na+i, deci, rencrcarea transportului cu glucoz. Anabaina inhib pompa
de sodiu i, simultan, transportul glucozei. Schema structural i modelul conformational
al enzimei Na+, K+- ATPazei sunt redate n fig 4.2.a.
Figura 4.2a. Enzim N a *, K ' - ATP-aza

a) schema structural n care a i sunt subuniti polipeptidice;b) modelul conformaional
O alt surs de glucoz e glicogenul - forma rezerv a glucozei, uor mobil.
Glicogenul reprezint un polimer foarte ramificat, compus din resturi de glucoz,
unite n cea mai mare parte prin oc-1,4 legturi glucozidice. Ramificarea se datoreaz
legturii a - 1,6. La fiecare 10 resturi revine o legtur oc-1,6. Glicogenul se depoziteaz
n cantiti majore n ficat, revenindu-i pn la 7% din cota total. Degradarea glicogenului
i digestia glucidelor poate fi analizat n fig.4.1 i 4.3.
F igu ra 4.3. Degradarea glicogenului de a-amilaz (salivar i pancreatic)
Energia dependent de coninutul glucozei din umorile organismului atinge circa 40

kcal. Pentru glicogen valoarea numeric e de 600 kcal. Glicogenul se conine n
citozol sub form dc granule cu diametrul da la 100-400 , fiind dependent de mrimea
moleculelor.
Transferul intracelular al glucozei
Glucoza strbate membrana celular cu ajutorul unor transportatori pasivi. Acetia
permit circulaia glucozei n ambele sensuri, deoarece funcionarea lor nu necesit consum
de energie. Transportatorii glucozei, denumii genetic GluT, constituie o familie de
glicoproteine transmembranarc, codificate de gene diferite. Fixarea glucozei pe faa
extracelular a membranei antreneaz o modificare confonnaional a proteinei
transportatoare, care determin trecerea glucozei pe partea cealalt a membranei i
eliberarea ei n interiorul celulei.
Exist mai multe tipuri de transportatori GluT, a cror exprimare genetic este
dependent de tipul de esut i care difer ntre ei prin afinitatea pentru glucoz, exprimat
prin Km:
a) transportatorii GluT 1 sunt prepondereni la nivelul eritrocitelor, placentei; Km este
de aproximativ 1mM, concentraie mult inferioar celei de glicemie, ceea ce favorizeaz
intrarea glucozei n celule, chiar n condiii de hipoglicemie, n perioadele dintre mese;
b) transportatorii GluT 2 sunt prepondereni n ficat i pancreas; Km se cuprinde
ntre 15-20 mM, concentraie mult superioar celei de glicemie postprandial, ceea ce
determin intrarea rapid a glucozei provenite din absorbia intestinal n hepatocite, n
condiii de hiperglicemie; n caz contrar, n situaii de hipoglicemie ptrunderea glucozei
n hcpatocitc este minim;
c) transportatorii GluT 3 sunt prepondereni la nivelul encefalului, placentei i au aceleai
caracteristici ca i GiuTl;
d) transportatorii GluT 4 sunt prepondereni la nivelul esutului adipos i muscular;
Km este dc aproximativ 5 mM, valoare apropiat de cea a glicemiei; sinteza i afinitatea
lor pentru glucoz este reglat de ctre insulin;
e) transportatorii GluT 5 sunt prezeni n special la nivelul epiteliului intestinal, unde
intervin i n transportul fructozei.
Reglarea exprimrii i afinitii transportatorilor pentru glucoz
Reglarea este asigurat de insulin. Sensibilitatea la insulin este variabil n dependen
de esuturi:
- n ficat transportatorii GluT 2 sunt numeroi i aparent independeni fa de
concentraia insulinei plasmatice; randamentul funcionrii lor este ridicat, astfel nct
concentraiile extracelulare i intracelulare ale glucozei se echilibreaz aproape instantaneu;
intrarea glucozei n hepatocite nu este deci etapa limitat de viteza metabolismului su.
- n esutul adipos i muscular transportatorii GluT 4 sunt dependeni de insulin,
care stimuleaz sinteza i afinitatea lor pentru glucoz, acesta fiind unul din cele mai
importante mecanisme de reglare a metabolismului glucidic, deoarece transportul
intracelular al glucozei constituie etapa limitat de vitez a metabolizrii sale n aceste
esuturi.
Deficienele dizaharidazelor localizate la nivelul marginii de perie a enterocitelor
cauzeaz malabsorbia glucidelor. Cel mai frecvent este deficitul ereditar al lactazei,
care provoac intoleran la lactoz, manifestat la nou-nscui prin diaree n urma ingestiei
de lapte.
Malabsorbia congenital a glucozei i galactozei se manifest prin diaree sever
n perioada neonatal, care poate cauza moartea prin dehidratare. Afeciunea este
cauzat de deficitul cotransportatorului glucoz-Na+i impune suprimarea glucidelor din
alimentaie, cu excepia fructozei i a inulinei (polimer de - fructoz 1-2).
Insulinorezistena periferic a fost evideniat la nivelul celulelor musculare, unde
transportatorii GluT 4 rspund deficitar la secreia de insulin. Ca urmare, membranele
celulare devin relativ impermeabile pentru glucoz, a crci degradare intracelular este
mult mai diminuat. Aceast anomalie determin hipersecreia de insulin la nivelul
insulinorezistenei periferice. Acest sindrom biochimic a fost descoperit la pacienii cu
diabet zaharat, obezitate sau diverse afeciuni metabolice ereditare.
Glicogenoliza
A fost studiat de Cari i Gerty Cori. S-a demonstrat c glicogenul e scindat de
ortofosfat, formnd un tip nou de zahr, identificat glucozo-1-fosfat (ester Cori). Aceti
savani au cptat i au cristalizat enzim glicogen fosforilaza (GF), ce catalizeaz
aceast reacie.
E
a) Glicogen(n) + Pj Glucozo-l-P + Glicogen(nl)
Ortofosfatul scindeaz legtura glicozidic dintre atomul de carbon C -1 al restului
terminal i C-4 al restului nvecinat. Ruperea legturii este specific meninndu-se a-
conformaie la C -l. In vivo reacia este deplasat n direcia scindrii glicogenului,
cauzat de raportul P/G-l-P *- 100. Scindarea fosforilitic e econom, zahrul
eliberat efosforilat. n continuare, glucoza fosforilat nu di fundeaz din celul n raport
cu glucoza liber. Sub aciunea glicogen fosforilazei glicogenul se scindeaz ntr-un
grad mic. Legturile a - 1,6 n punctele de ramificare nu sunt sensibile la G-F (glicogen-
fosforilaz). Efectul ei se stopeaz la restul terminal situat de la ramificare cu 4 resturi
de glucoz. E necesar o nou enzim. O transferaza transfer blocul din trei resturi de
glucoz de pe o ramur extern pe alta. Enzim hidrolitic e atestat ca enzim de
deramifiere (debranching enzim). Mai departe, fosforilaza i continu nestingherit
aciunea pn n apropierea unui nou punct de ramificare. Ca urmare a aciunii acestor
enzime, se obin G-l -P i mici cantiti de glucoz.
b) G-l-Peste convertit la G-6-P sub aciunea fosfoglucomutazei. n centrul activ al
enzimei e prezent o serin fosforilat. n cadrul catalizei grupa fosforil posibil e transferat
la OH al C6din G -1-P cu formarea G -1,6-diP, dup care grupa fosforil a acestui produs
intermediar este transferat pe restul Ser n centrul activ i n final se formeaz G-6-P,
regenernd enzim fosforilat. Amestecul rezultant conine 95% G-6-fosfat. Enzim
necesit, drept cofactor, ionul de Mg2+;
E O
C H 20 - P = 0 E
O 6 CH2OH6 2-
C H 2O H C H 20
5X----- o
2-
Convertirea G -l-P n G-6-P I]O 2 O ~PO 3
OH OH
G-l-P E O G -l, 6-diP
E
6 2- I. 6 2
C H 20 C H 2O - P O 3
o
) n ficat G'6-P (ester Robinson) este hidrolizat sub aciunea enzimei glucozo-6-
fosfcitaz. Enzima se conine n rinichi i intestine.
G-6-P + H2.0 Glucoza + P I
Ficatul menine glucoza n snge la un nivel relativ constant. El elibereaz glucoza n

timpul activitii intensive (efort fizic) sau n intervalul dintre alimentri. Glucoza eliberat
e utilizat n primul rnd de muchi i creier (fig. 4.4). Glicogenoliza nu necesit aport
energetic suplimentar.
Legtura a - 1,6
C a p tu l
reductor
G lucoz
a-glucozidaza
lizozomal
T ip II: B oala P om pe
(dcficit dc a-1,4 -glucozidaza lizozomal)
- dcfect nnscut dc enzima lizozomal;
- generalizat (ficat, inim, muchi);
- concentraii excesive de glicogcn n
C a p e t e le vacuole anormale din citozol;
nereductoare - valori normale ale zahrului sanguin;
- cardiomegalie sever, de regul,
cu moarte timpurie;
- structura glicogenului este normal.
T ip V: S in drom u l M cA rdle
(deficiena glicogen fosforilazei din muchii sche
letici)
- muchiul schclctal este afectat, enzima
hepatic este normal;
- slbiciune temporar i crampe ale muchilor
scheletali dup efort;
- lactatul nu crete n snge n timpul unui efort
Glicogcn fosforilaza marc;
- dezvoltare mental normal;
- mioglobinuric la vrst naintat;
- pronostic bun;
G lucozo-1 -P - n muchi nivel crescut de glicogen cu structur
normal;
i
V V
Dextrine limite

* V*
:V
V* Debrancing enzim
Glicozil transferaza

20 ..
Ami lo( 1:6) ------- Debrancing
glucozidaza ^ enzima
Glucoza
Q . 1
fTfp I: Boal Von Gicrke

- este afectat ficatul, rinichii i intestinul;
- hipogliccmic sever n caz dc post; G liicozo-l-P + Glucoz
- ficat gras, hepatomegalie;
- hiperlactatacidemic i hiperuriccmie;
Fosfogluco mutaza
f- structura glicogcnului este normal,
\ rezerve crcscutc dc glicogcn. Muchi Glicoliz
E ste
^ e lib e ra t
Gluco:
n snge
F igura 4.4. Schem atic e redat degradarea glicogenului cu dereglrile respective
n afar de maladiile menionate, sunt cunoscute i alte glicogenoze ca:

a) afeciunea Cori defect e enzima a - 1,6 glucozidaza (enzima de deramifiere), este
implicat n proces ficatul, inima, muchii scheletali (maladia Forbes);
b) maladia Anderson este cauzat de deficiena enzimei de ramifiere ( a - 1,4-1,6
transglucozidaza), este afectat ficatul, splina, intestinul, unde se acumuleaz glicogen cu
catene neramificate. Progreseaz ciroza ficatului i evoluia este fatal pn la vrsta de 20
ani;
c) glicogenoza Hers se caracterizeaz prin diminuarea activitii fosforilazei hepatice,
avnd n consecin depuneri masive de glicogen normal n ficat. Manifestrile clinice sunt
asemntoare unei forme atenuate a maladiei Von Gierke;
d) insuficiena fosfofructo kinazei cauzeaz maladia Tarui - sunt afectai muchii
scheletali, eritrocitele ce determin o hemoliz intens, acumularea lactatului. Diagnosticul
i tratamentul este mult mai complicat la asocierea a mai multor tipuri de glicogenoze;
e) deficitul de glicogen sintelaz provoac o hipoglicemie, cu accentuarea cetogenezei
i se caracterizeaz prin retard de cretere, deces precoce;
f) sunt descrise i glicogenoze de tip IX i X, cu deficit respectiv defosforilaz kinaz
i proteinkinaz ce conduc la hipoglicemie i hepatomegalie.
Majoritate glicogenozelor sunt afeciuni ereditare ce duc la acumularea glicogenului n
esuturi i afectarea metabolismului glucidic, cu generarea simptomelor clinice ca:
hepatomegalie, hipoglicemie, hipotonie muscular, deficit energetic n caz de efort fizic.
GLICOGENOGENEZA
Practic, are loc n orice esut, procesul fiind deosebit de activ n ficat i muchii
I scheletali.
1. a-glucoza + ATP D-G-6-P + ADP
Reacia este catalizat de hexokinaz, ce necesit ioni de Mg+.
2. D-G-6-P G-l-P
Reacia e catalizat de enzim fosfogluco-mutaza.
3. G -l-P + UTP * Glucoz-UDP + PP,
Reacia-cheie a sintezei glicogenului e activarea glucozei catalizat de enzima-G-1-P
I uridil-transferaz.
O alt enzim, pirofosfataza, hidrolizeaz ;la 2P.:
PP i+ H2,0 2 Pi.
4. Transferul grupelor glucozil de la UDP pe captul nereductor al moleculei ramificate
I de glicogen e catalizat de glicogen sintaz (GS):
UDP-G + Glicogenn UDP + Glicogen n+]
n procesul acestei reacii se formeaz o legtur a - 1,4 ntre C-l al restului de
j glucoz i al C-4 restului terminal glucozid din lanul glicogenului.
Echilibrul e deplasat n dreapta spre sinteza glicogenului. Enzim, ca activator,
I necesit ramura (iniiator, primer) moleculei de glicogen, cu nu mai puin de 4 resturi
de glucoz, la care enzim, consecutiv, adiioneaz grupe glucozidice din captul
I nereductor. Rolul UDP-glucozei a fost evideniat de biochimistul argentinian Luis
I Leloir, decemndu-i-se Premiul Nobel n 1970.
Ramificarea se realizeaz sub aciunea 4-6 transglucozidazei (enzim de ramifie-
I re) i implic transferul fragmentului oligozaharidic, cel puin 6, la captul nereductor
al ramurii ce conine nu mai puin de 11 resturi de glucoz pe OH al C6al glucozei din
I aceeai ramur sau alta, dar orientat spre interiorul moleculei. Ca rezultat, se formeaz
o ramur nou. Glicogen sintaza poate ataa la ea resturi de glucoz. n situaia n care
nu exist un primer glicogenic se recurge la un primer de natur proteic-glicogenina.
I Ultima prezint o protein catalitic glucozil transferazic, care permite iniierea procesului
de sintez i adugarea succesiv a ctorva resturi glucozil. Procesul presupune transferul
unui rest glucozil din UDP-glucoz pe gruparea OH a tirozinei din molecula glicogeninei.
Sinteza glicogenului necesit un aport energetic echivalent cu 2 molecule de ATP.
Ramifierea amplific solubilitatea glicogenului i numrul de capete nereductoare
(fig. 4.5).
Reglarea proceselor de liz i sintez a glicogenului
Aadar, glicogenul se supune mai lesne aciunii glicogen fosforilazei i glicogen
j sintazei.
Enzimele respective se regleaz reciproc atunci cnd una e activ, cealalt e inhibat.
Glicogen fosforilaza i glicogen sintaza sunt prezente n dou forme: fosforilatc i
1
defosforilate. Controlul metabolic variat i complex este realizat att prin reglarea cova-
lent, ct i prin cea alosteric. S-a stabilit c: G-Fa e activ n forma fosforilat i G-Fb
e mai puin activ defosforilat, pe cnd G-Sa e activ n forma defosfori lat i G-Sb
mai puin activ - fosforilat.
G licozo - 6-fosfat
F osfogluco m utaza
UTP + G lucozo - 1-fosfat

Tirozina
y j i r o f o l f o rilaza UD P-glucoza
Glicogenira
(UDP# >
HO'
Glicogcn
PPi
in iiato r
UDP
HOH A tsin ta z a
Pirofosfataza
2Pi
UDP -
G licogen sintaza
L e g tu ra a - 1,6
UDP
, , ......... L eg tu rile a - 1,4 ^ S G lucozil (4:6)

4 m It | I (k j I 4 $ b i * tran sferaza
Elongarea ulterioar la capctc-

lc n c rc d u c to a rc cu aju to ru l
g lic o g c n s in ta z c i, r e z u ltn d
\ t formarea dc legturi a - 1,4.
Capetele R a m ific a re a u lte r io a r , cu

nereductoare form area dc legturi a - 1,6 dc
ctrc glucozil 4:6 transferaza
F igu ra 4.5. Metabolismul glicogenului Glicogen
Interconversia celor dou forme ale G-F se realizeaz graie aciunii antagoniste a
dou enzime: glicogenfosforilaz kinaza i glicogenfosforilazfosfataza. Kinaza fos-
forileaz restul de serin n centrul activ al G-Fb, cu ajutorul ATP. Fosfataza scindeaz
hidrolitic P de la G-Fa.
Glicogen fosforilaz kinaza (G-F-K) reprezint o enzim constituit din 4 tipuri de
subuniti, fiecrei fiindu-i proprii 4 copii. Subunitateay- subunitate catalitic; a - -G
au funcii reglatorii; e reprezentat de calmodulin - protein ce fixeaz Ca2+i care, n
funcie de concentraia citoplasmic a acestuia, i modific conformaia.
nsi enzima glicogen fosforilaz kinaza are dou forme interconvertibile: transforma
rea formei inactive n activ are loc prin fosforilarea realizat la a i , cu contribuia
ATP i a kinazei (Proteinkinaza dependent de AMPc). Se inactiveaz de ctre o
fosfoprotein fosfataza. AMPc e mesagerul secund format ca rspuns la aciunea
adrenalinei, glucagonului care stimuleaz activitatea kinazei (AMPc dependent), efectund
fosforilarea kinazei i activnd C-Fb, concomitent fosforilnd-o i accelernd scindarea
glicogenului. G-Fb n muchi e activat de AMPc (modulator pozitiv), iar ATP este
modulator negativ. Activitatea final e determinat de raportul AMP/ATP. Glicogen
fosforilaza a este AMP independent.
Studiul roentgencristalografic al ^ Cap. N terminal
form elor a i b ale glicogen *'" \ '"A Locusul de fostorilare
fosforilazei au favorizat perceperea Locusul de fixare 1 J *=/ _
mecanismelor catalitice i reglatorii ale . ^ , _ *
acestei enzime cardinale a metabolis
mului. S-a stabilit c 841 de resturi
de aminoacizi sunt aranjate compact n
3 domenii structurale: domeniul amino-
terminal (310); domeniul fixator de
glicogen (160) i carboxiterminal
(371). Centrul catalitic e localizat n
adncul subunitii formate din resturile
Centrul activ
aminoacide ale celor 3 domenii, fiind
aprat de mediul apos ce faciliteaz
predominarea fosforilrii fa de hidro- Figura 4.6. Imaginea schematic a carcasei
liz (fig.4.6). -carbonice din fosforilaza a
Vit.B 6 necesar pentru activitatea
enzimei se fixeaz n apropierea locului de fixare a G -1-P. Molecula enzimei nlesnete
un locus de fixare a glicogenului la o deprtare de 30de la centrul activ, ce favorizeaz
fosforilarea multor capete de glicogen, nedisociind i resociind dup fiecare ciclu
catalitic. Conine, de altfel, i dou locusuri alosterice de reglare la hotare ntre
subuniti (AMPc i locusul de fosforilare a serinei). Enzim se studiaz ncontinuu, dar
i n prezent se poate afirma c ea reprezint un integrator fin informativ al metabo
lismului energetic celular.
Proteinkinaza (PK) favorizeaz fosforilarea conform reaciei:
G-Sa + 2ATP G-Sb + 2ADP,
pe cnd fosfoprotein fosfataza (FPF) detaeaz fosforul, activnd sintaza:
G-Sb + 2H 2O - G-Sa + 2P I
Aceste dou enzime reglatoare ale glicogen sintazei sunt identice cu cele dou
ale glicogen fosforilaz kinazei. De aceea, enzimele se regleaz reciproc. O aciune
adiional ntreprins de celul pentru a evita desfurarea simultan a defosforilrii
i a fosforilrii const n inactivarea fosfoprotein fosfatazei de ctre o protein -
inhibitorul defosfataz, activ prin fosforilare AMPc dependent. Aceast fosforilare
este realizat, ns, cu reziduu de treonin, nu i de serin, ca n celelalte cazuri. Prin
ataarea inhibitorului de fosfataz la FPF este suprimat numai aciunea hidrolitic a
enzimei asupra reziduurilor de fosfoserin, nu i asupra celor de fosfotreonin. G-S se
regleaz de ctre modulatorii alosterici, G-Sb se activeaz de ctrc glucozo-6 -fosfat i
aceast form e denumit dependent.
Sporirea concentraiei de AMPc produs prin activarea adenilatciclazei (activat de
glucagon i adrenalin) activeaz proteinkinaza AMPc dependent ce efectueaz fos
forilarea simultan a G-F-K, G-F, G-S i a inhibitorului de FPF (ultimul inactiveaz
FPF), excluznd funcionarea simultan a celor dou enzime antagoniste (PK i FPF).
Procesul de glicogenoliz se va declana, suprimndu-se sinteza (fig. 4.7).
H ,0
G -Sa G-Sb
ATP ADP
FPF
O
Pi
G l(n ) _ A . G l( n - l) + G lu c o z o -l-P
F igura 4.7. Reglarea sintezei i lizei glicogenului
Reducerea concentraiei de AMPc (adic a concentraiei de glucagon i adrenalin)

sau, respectiv, creterea concentraiei de insulin (activeaz fosfodiesteraza) inactiveaz
proteinkinaza AMPc dependent i, deci, sisteaz fosforilarea G-F-K, G-F, G-S i a
inhibitorului FPF.
Inhibitorul devine inactiv, permite aciunea FPF, care defosforileaz cele trei
enzime implicate n glicogenoliz. Ca urmare, G-S se activeaz. Activarea glicogeno-
lizei coincide n timp cu inactivarea glicogen sintezei.
Glicoliz (calea Em bden-M ejerhof)
Glucoza ndeplinete roluri metabolice multiple n organism, fiind indispensabil
tru el, i servete drept combustibil excelent pentru esuturi. Utilizarea glucozei drept
s de energie necesit parcurgerea glicolizei - degradarea ci incomplet pn la piru-
it i, ncontinuu, pn la ,.
Calea central a catabolismului e universal, se deosebete prin caracterul reglrii
ntezei scindrii i prin evaluarea metabolic a piruvatului.
1. Reacia de fosforilare a glucozei
CH2OH 2 0 PO 3
-O
M jL
2
OH
1
OH
+ ATP
Hexokinaza
HO
OH

' OH
OH
1
+ ADP + H
a-D -glucoza a-D -g lu co za- 6-P

Enzima fosforilrii - hexokinaza - e prezent n toate celulele, are o structur
tridimensional, legarea se face dup tipul induciei coordinative. Molecula enzimei sufer
modificri conformaionale profunde (fig. 4.8).
E reprezentat de izoforme diferite - toate Glucoza
catalizeaz aceeai reacie, dar cu viteze diferi
te. Glucoza n muchi fosforileaz cu vitez ma
xim i enzima e inhibat de G-6 -P - produs i
inhibitor alosteric.
n ficat, glucokinaza se caracterizeaz prin:
a) e specific numai pentru D-glucoz;
b) G-6 -P n-o inhib;
c) confer Kmmare (1 OmM), comparativ cu
0,1 OmM pentru hexokinaz. E activ la
F ig u r a 4 .8 . Im a g in e a 's c h e m a tic a a-
concentraii mari de glucoz, ce favorizeaz de scheletului de carbon diit hexokinaza din
punerea ei n glicogen. La bolnavii de diabet drojdii. Dou subuniti identice interacio
zaharat cantitatea glucokinazei e redus, avnd neaz nesimetric
consecine grave: nivelul glucozei n snge e nalt, iar nivelul glicogenului n ficat e sczut;
d) Kmmare ofer posibilitate creierului i muchilor s utilizeze glucoza primordial la
o cantitate mic n snge.
2.Urmtoarea reacie reprezint conversia glucozo-6 -fosfatului la fructozo- 6 fosfat
(ester Neuberg).
2-
CH 2O - P O 3
2- 6
O jP -O zH C O CH2OH
5' '2
2 OH
Fosfogluco izomeraza
OH a-D-elucozo-6 -P
w
OH a-D-fhictozo-6 -P
Enzima fosfogluco izomeraza este o aldolaz, ce necesit prezena Mg2+ i
transform aldoza n cetoz. Grupa carbonil e transferat din poziia 1 n 2.
3. Fosforilarea fructozo-6 -fosfatului este reprezentat prin urmtoarea reacie:
a-D -F- 6 -P + ATP a -F -1,6 -diP + ADP + H+
Enzimafosfofructo kinaza catalizeaz reacia ireversibil care prezint un indice
important de control al glicolizei. Reprezint o enzim compus, inhibat de ATP, citrat,
acizi grai. Reacia decurge lent i determin viteza glicolizei, n ansamblu.
4. Scindarea fructozo-l,6 -bifosfatului n 2 trioze:
C H 20 C H = 0
C = 0 + Cc Hu
Oo H
I
Fructozodifosfat
aldolaza
C H 2O H C H 20
2-
OH
a -D -fru c to z o -l, 6-diP DHAP G A -3-P
Enzima e ofructozodifosfat aldolaz (aldolaz), ce nu necesit Mg2+, dar la unele

organisme necesit Zn2+. Produsele sunt momentan utilizate n alte reacii. Reacia e
dependent de temperatur, fapt ce grbete fonnarea rezultantelor.
5. Conversia triozelor fosforilate prezint urmtoarea reacie:
2 -
C H 2O - P O 3
c=o Triozofosfat
Hc -
izomeraza 2.
C H 1 OH C H 2O - P O 3
DHAP G A -3-P
Enzima e o triozofosfat izomeraz. Reacia e deplasat spre formarea cetoformei

- DHAP (95%), dar pe msura utilizrii gliceraldehid-3-P are loc formarea lui.
Aadar, n cele 5 etape ce reprezint prima faz a glicolizei, molecula de glucoz,
utiliznd dou molecule de ATP, s-a scindat n dou trioze.
A doua faz a glicolizei, n care se includ cele dou molecule de GA-3-P n
aceleai reacii chimice, sunt reacii de oxido-reducere cuplate cu fosforilarea la nivel
de substrat i sintez de ATP.
1) Oxidarea fosforilant a gliceraldehid-3-fosfatului prezint prima reacie a acestei
faze. Enzima e o gliceraldehidfosfat dehidrogenaz. Grupa aldehid se oxideaz i
nu se formeaz acidul carbonic, dar un amestec din anhidrid a acidului fosforic i a
acidului 3-fosfogliceric, adic 3-fosfoglicerolfosfat, care, de fapt, este un acilfosfat, ce
se caracterizeaz printr-o valoare de AG = 11, 8 kcal. O parte considerabil a energiei
libere, ce se elimin la oxidarea grupei aldehidice, se pstreaz n grupa fosfat a
acilfosfatului (la C-l).
H 2
0 = (/ c o o ~ '
- - + NAD+ + Pi <--------- - - + NADH +
2 G ceraldehid I 2-
2 0 " fosrat dehidrogenaza CH 2 O
PO 3
GA3 P 1,3-DPG 1
P i= H 0 -P -0
!_
Mecanismul de aciune a dehidrogenazei complex:
a) adiia unei grupe SH din centrul activ al enzimei la
gliceraldehid-3-fosfat, cu formarea unui semitioacetat (legtur covalent):
R -C f + E - S H ^ = ^ R -C H -S -E
XH I
OH
b) enzima transfer I de la substrat la NAD+, fixat rigid cu centrul activ. n urma
transferului apare complexul macroergic acilfosfat, care ulterior interacioneaz cu P
liber, genernd 3-P-G-P i regenernd enzima liber:
E SCHRE S ~ C R P ~ C R + E - S H
I ^ ^ - II II
OH NAD NADH + H o Pi
Enzima e compus din 4 subuniti identice. Fiecare lan polipeptidic conine 330
aminoacizi. Grupele SH pot fi legate de iodacetat (ICH,COOH) - inhibitor necompetitiv.
2) Fosforilarea la nivel de substrat (AG = -4,5kcal) este rezultatul transferului
restului fosforil pe ADP, reacie catalizat de fosfoglicerat kinaz:
COO 2' 2+ fO O '
H -C -O H + ADP < Fosfoglicerat

J L ,. > H- C~ 0 H + ATP
CH 2 O - P O 32' kinaZa CH 2 O 2'
1,3-DPG 3-PG
3) n continuare, are loc transfonnarea 3-fosfogliceratului n 2-fosfoglicerat, sub

aciunea unei mutaze specifice i n prezena obligatorie a ionilor Mg2+:
(AG = +i,06 kcal)
COO' COO'
2+ I,
C H -O H Mg C H -0 -P 0 3
2- Fosfoglicerat nutaza
CH 2 0 PO 3 CH2OH
4) Enzima enolaza catalizeaz reacia reversibil de dehidratare. n cadrul acestui
proces are loc repartiia energiei n molecul:
f 00' 2_ Mg 2 + fo o - 2_
H -C -O -P O 3 ^ 4 - 'O
Enoaza )|
CH 2 OH H2 O H20 CH2
2-PG 2-P-enolpiruvat
Modificrile energiei libere n aceast reacie sunt AG = 4,2 kcal - AG = -14,8

kcal. Enzima este inhibat de fluorid (F ) n prezena fosfatului. Realmente, fluorid
fosfatul ce leag ionii Mg44 este inhibitorul autentic.
5) Transformarea 2-fosfoglicerat n piruvat e catalizat de enzima piruvat kinaza.
Are loc o fosforilare la nivel de substrat. Forma enol rapid se transform n ceto
(nefermentativ), ce predomin la pH = 7,0 (AG = -7,5kcal/mol):
COO' COO
I 2 M g2+
C 0 ~ P 0 i '+ ADP-------- OH + ATP
I K+ I
CH 2 CH 2
2-P-enolpiruvat Enoilpiruvat
Reacia e deplasat n dreapta, fora motrice o constituie degajarea de energie. Reacia

e ireversibil.
In glicoliz se observ reacii chimice de 3 tipuri:
1) scindarea scheletului hidrocarburic al glucozei, cu fonnarea piruvatului (via C);
2) fosforilarea ADP de compui SME (via P);
3) via transferului de electroni (via H).
E de menionat c:
1. Enzimele ce catalizeaz reaciile glicolitice n citozol sunt solubile.
2. De la glucoz pna lapimvat sunt antrenai 9 metabolii intennediari fosforilai, care
ndeplinesc urmtoarele funcii:
a) la pH=7,0 fosfatul poart sarcin negativ, membranele celulare sunt impenneabilc
pentru moleculele cu sarcin i, deci, intermediarii glicolizei nu pot prsi celula. Glucoza,
lactatul, piruvatul au sisteme de transport specifice;
b) aceti metabolii reprezint componentele necesare n procesul fennentativ de
acumulare a energiei metabolice - transferul la ADP, cu sintez de ATP;
c) grupele fosfat ndeplinesc funcii de identificare, fapt ce atest c moleculele
corespunztoare. Aproape toate enzimele necesit ioni de M g'1, care fonneaz complexe
cu grupele fosfat n ADP, ATP, la fel ca i intennediarii glicolizei. O anumit specificitate
manifest fa dc complexele cu ioni de Mg^.
Soarta piruvatului. Piruvatul se afl la rscrucea drumurilor metabolice. Poate fi
utilizat n urmtoarele direcii:
1. La organismele aerobe e supus decarboxilrii oxidative - calea studiat mai sus.
Reacia sumar a degradrii este schematic redat n continuare:
G lucoza + 2P + 2A D P + 2NAD+
1
f Calea E m bden-M ejcrhof

2 piruvat + 2ATP + 2N A D H + 2H + + 2H 20
Teoretic, eliberarea energiei libere are un randament egal cu:

3 8 x 7 ,3 /6 8 6 X 100% = 40%
n celula intact eficacitatea transformrilor e i mai mare = 70%, cauzat de
concentraia intracelular a O,, concentraia P, ADP, ATP nu e egal, dar mai mic dect
1 .0 N1
2 . n condiii anaerobe are loc reducerea piruvatului n lactat - glicoliz anaerob
- surs principal a ATP la efort fizic:

Piruvat + NADH + H+ L actat+ N A D +
Necesarul de NADH este asigurat de oxidarea gliceraldehid -3-fosfatului. Reaciile
au loc n mod coordonat i permit generarea imediat a energiei.
Reacia este deplasat spre dreapta. NAD+regenerat poate fi utilizat n glicoliz.
Enzima reprezint lactat dehidrogenaza. Am mai menionat c ea este o izoenzim, ce
difer dup Kmpentru piruvat, Vmax i gradul de inhibiie alosteric de piruvat.
Izoenzim ce conine 4 subuniti identice (H4) este LDH,, care are o Kra mic pentru
piruvat i este inhibat puternic de acesta. Fonna compus din uniti identice - (M4)
- LDH5-a re K)timare, nu se inhib de piruvat i are o activitate catalitic mult mai
mare dect LDH r
Stoichiomeria glicolizei anaerobe:
Glucoza + 2ATP + 2P. + 2NAD++ 2NADH + 2H++ 4ADP
^ 2Lactat + 2H+ + 4ATP + 2H20 + 2NADH + 2H+ + 2NAD++ 2ADP
Sumar: Glucoza + 2P 1 + 2ADP - 2Lactat + 2ATP + 2H++ 2H0
-------- 2
Obinerea unei cantiti mici de ATP eliberat rapid este avantajoas pentru necesitile
imediate de energie sau activitatea unor esuturi cu necesiti energetice minime. In esuturile
anaerobe, inclusiv i n ficat, acidul lactic este transformat n acetil-CoA i utilizat ca
substrat n ciclul Krebs.
3 .0 alt cale de metabolizare este sinteza etanohtlui. Unele microorganisme, de
exemplu drojdiile, fermenteaz glucoza la fel pn la piruvat. Apoi:
a) Piruvat + HOH ^ CH 3 ~ C H = 0 + C 0 2
Enzima epiruvat decarboxilaz (Mg2+, TPP). Reacia n celul e ireversibil. Enzima
nu se conine n esuturile animale.
b )C H 3- C H = 0 + NADH + H+ = = CH 3 CH,OH + NAD+
Enzima reaciei este alcool dehidrogenaz. n 1856, Louis Pasteur a argumentat
fermentaia zahrului n alcool, prin aciunea microorganismelor. n condiii sterile,
fermentaia nu are loc. De pe bobiele de poam proaspete s-a izolat cultura de drojdie
i s-a determinat c ea e responsabil de fermentaia sucului. Transformarea vinului n
oet e cauzat de alte microorganisme.
Reglarea glicolizei. Viteza reaciilor catabolice principale ce asigur scindarea
glucozei i utilizarea energiei chimice sub fonna de ATP, n fiecare moment se regleaz
n corespundere cu necesitile celulei n ATP, indiferent de calea n continuare a
utilizrii ATP - biosinteza, transfer activ sau lucru mecanic. Enzimele reglatoare percep
diferite semnale ale cilor metabolice i sunt receptive la ele.
Prima reacie reglatoare (1) e catalizat de hexokinaza ce fosforileaz glucoza
liber cu ajutorul ATP n poziia 6 . E o enzim alosteric ce se inhib de G- 6 -P.
Glucokinaza ficatului nu se inhib, i surplusul de glucoz e transfonnat prin G -1-P n
glicogen. In condiii normale, insulina stimuleaz sinteza glucokinazei. n inaniie i diabet,
activitatea glucokinazic e redus.
Reglarea major (2) a glicolizei e determinat de activitatea fosfofructo kinazei, enzi
m alosteric conjugat, reglat dc un numr suficient de modulatori pozitivi i negativi.
Activitatea ei e dependent de concentraia substraturilor (ATP i F-6 -P), produselor
(ADP i F-l- 6 -diP). Sunt semnificativi AMP, citratul, Mg2+, fosfatul i ali metabolii.
Principalii modulatori negativi sunt ATP i citratul, pozitivi - AMP, F -1,6 -diP.
Ca rezultat al aciunii alosterice, viteza reaciilor crete de sute de ori la trecerea
muchiului din stare de repaus n stare activ. Cu alte cuvinte:
1 ) stimularea glicolizei are loc n condiiile unei sarcini energetice mici n celula ce
solicit energie;
2 ) coninutul mare de citrat, ca o consecin a surplusului de compui ce joac rolul
de precursori ai energiei. n final, scindarea glucozei nu e oportun;

3) un suficient efector alosteric pozitiv constituie F-2,6-difosfatul, integrator meta
bolic sintetizat de o enzim bifuncional: fosfofiructo-2 -kinaza/fmctozo-2 ,6 -difosfataza
(PF-2-K/F-2,6-diP-aza) (fig. 4.9). Enzima a fost izolat i secvenionat, include 470
aminoacizi care pot fi divizai n dou domenii: kinazic - aminoterminal (1 -249) i cel
fosfatazic - terminal (250-470).
Enzima se regleaz covalent prin interconversie fosforilare -defosforilare. La
fosforilare este acionat de proteinkinaza A (AMPc dependent).
Activitatea kinazei scade, n timp ce activitatea fosfatazei crete. Concentraia hepatic
a F-2,6-diP este controlat de doi factori majori: F-6 -P i AMPc.
F-6 -P mrete concentraia de F-2,6-diP, prin activarea alosteric a PF-2-kinazei i
inhibiia F-2,6-difosfatazei, conducnd la stimularea glicolizei i inhibiia gluconeogenezei.
AMPc scade concentraia de F-2,6-difosfat, inactivnd via PK-A (PF-2-K inactiv -
fosforilat) i activeaz simultan F-2 ,6 -difosfataza (activ - fosforilat).
Glucagonul, reducnd concentraia de F-2,6-difosfat, inhib glicoliz, lipogeneza i
activeaz gluconeogeneza. Insulina inhib gluconeogeneza, lipoliza i stimuleaz glicoliz
(fig.4.9).
Figura 4.9. Rolul reglator al fructozo-2,6-difosfatului
O alt reacie reglatoare e cea piruvat kinazic (3). Piruvat kinaza este o enzim
alosteric. Se afl n trei izoforme, ce difer dup repartiia lor n esuturi i receptivitatea
la diferii modulatori. L-forma predomin n esuturi capabile de gluconeogenez (ficat,
rinichi). Enzima e inhibat i de alanin. n condiii de aprovizionare suficient cu
energie i precursori de glucoz, glicoliza se inhib crend o situaie favorabil
gluconeogenezei. Este inhibat de ATP, acetil-CoA, acizi grai cu greutate molecular
mare. M-forma nu posed o atare reglare.
Glicoliza se regleaz subtil, foarte complicat i nu e de mirare, deoarece reprezint
cea mai veche cale metabolic, fiind una din poziiile principale. Glicoliza, ciclul
Krebs, fosforilarea oxidativ sunt coordonate ntre ele, funcionnd n regim de
autoreglare i economie maxim. n celulele cancerigene e dereglat coordonarea lor
i glicoliza e accelerat, formnd mult lactat.
Mutaiile la nivelul genei pentru glucokinaz cauzeaz apariia unei boli monogenetice,
cu debut precoce: diabetul zaharat de tip MODY-2. Diminuarea activitii glucokinazei
cauzeaz scderea fluxului glicolizei n ficat i pancreas, care determin creterea glicemiei
i hipersecreia reacionat de insulin. Cu toate acestea, nivelul insulinei sintetizate de
ctre pancreas este mult diminuat, ca urmare a deficitului energetic la nivelul celulelor
beta ale pancreasului.
n ficat are loc diminuarea glicogenogenezei i amplificarea gluconeogenezei, ca
rspuns la reducerea ratei glicolizei. Aceste perturbri explic hiperglicemia persistent
observat la pacieni.
Deficitul piruvat kinazei cauzeaz blocarea ntregului flux al intermediarilor la nivelul
glicolizei. Manifestrile clinice constau n apariia unei anemii hemolitice ereditare, datorit
imposibilitii desfurrii glicolizei n eritrocite.
Enolaza este inhibat sub aciunea fluorurii de sodiu, care acioneaz ca inhibitor
competitiv, blocnd glicoliza i producerea acidului lactic n hematii. Cu toate c structura
NaF nu seamn cu cea a 2-fosfogliceratului, se consider c efectul inhibitor se datoreaz
formrii unui complex ntre fosfat, Mg2+i NaF, care blocheaz accesul substratului la
centrul activ al enzimei. Acest inhibitor este utilizat frecvent n laboratoarele clinice,
deoarece permite dozarea corect a glicemiei, prin blocarea utilizrii glucozei plasmatice
de ctre eritrocitele prezente n proba recoltat. n caz contrar, consumul glucozei i
producerea acidului lactic n hematii conduc la rezultate incorecte n cursul dozrilor
efectuate.
Deficitul piruvat dehidrogenazei sau blocarea lanului respirator mitocondrial
antreneaz acumularea excesiv a acidului piruvic provenit din glicoliz. Acesta va fi
convertit n acid lactic sub aciunea lactatdehidrogenazei. Creterea nivelului de acid
lactic n circulaie determin apariia acidozei lactice, care poate fi primar sau secundar.
Deficitul ereditar al lactat dehidrogenazei cauzeaz apariia unei miopatii metabolice,
manifestat prin reducerea nivelului seric al lactatului i intoleran la efort fizic.
Distribuia izoenzimelor tisulare de LDH este variabil. LDH, i LDH2 sunt principalele
izoforme n inim, rinichi, creier i eritrocite. LDH 3 i LDH4 sunt predominante n glandele
endocrine (tiroida, suprarenale, pancreas), splin, timus, leucocite, trombocite. LDH^ i
LDII5 preponderent se afl n ficat i muchii scheletali. Distribuia normal a izoenzimelor
LDH n serul sanguin este urmtoarea:
L D H ,< L D H 2> L D H 3> LDH4 <=> LDH,
n infarctul miocardic crete att LD H ,, ct i LDH2, dar LDH, > LDH2. Se constat
creterea LDH 3 cu predominarea fa de LDH, n maladiile neoplastice, limfoproliferative
i ale trombocitelor. LDH, i LDH 3 se majoreaz n infarctul pulmonar. Valori majore
ale LDH, se depisteaz n afeciunele ficatului i muchilor scheletali.
Acidoza lactic constituie un sindrom metabolic caracterizat prin acumularea acidului
lactic n snge (valori care depesc 5 mmol/L), concomitent cu scderea pH-ului sanguin
sub 7,2. Cele mai frecvente cauze care duc la apariia acidozei lactice sunt:
a) deficitul ereditar al piruvat dehidrogenazei sau carena de vitamina B,;
b) imposibilitatea regenerrii formei oxidate a coenzimei NAD+la nivelul lanului
respirator mitocondrial, prin deficitul unuia din complexele lanului transportator de electroni
sau prin blocarea fosforilrii oxidative;
c) producerea exesiv de NADH, de exemplu n caz de intoxicaie cu alcool;
d) blocarea utilizrii acidului lactic pentru gluconeogenez n caz de deficit al enzimelor
gluconeogenezei, de exemplu deficitul piruvat carboxilazei, responsabil de iniierea
gluconeogenezei, deficitul glucozo-6 -fosfatazei;
e) accentuarea marcat a glucozei anaerobe, de exemplu n caz de efort fizic prelungit.
Acidoza lactic secundar se ntlnete n toate situaiile caracterizate prin hipoxie
sau anoxie prelungit, oc, hipoperfuzie, insuficien cardiovascular, precum i n carenele
de vitamin B,.
Tratamentul const n mrirea ratei de perfuzie tisular, respectiv administrarea vitaminei
B,. Se depisteaz o acidoz lactic i a altor acizi organici la pacienii cu afeciuni ale
intestinului subire (malabsorbia, bypass jejunial, rezecia intestinal). D-lactatul este
produsul bacteriilor anaerobe, care apoi, prin via portal, este vehiculat n circulaie. n
terapia acestor maladii se vor utiliza antibioticele, se va limita folosirea carbohidraiilor i
e necesar recolonizarea florei bacteriene.
Acidoza primar va aprea la deficitul uneia din subunitile piruvat dehidrogenazei
i se manifest nc n perioada neonatal prin creterea marcat a acidului lactic n
circulaie (mai mare dect 5mmol/L) i deficit energetic tisular, n special n organele cu
activitate metabolic intens (insuficien hepato-renal, encefalopatie metabolic, etc.).
Tratamentul vizeaz administrarea substanelor nutritive de natur lipidic, a cror oxidare
este independent de complexul piruvat dehidrogenazic.
Cile alternative de degradare a glucozei. Calea pentozo-fosfailor (untul
pentozo-fosfat - HMS)
Premisa biologic primordial, la care etapele oxidative sunt catalizate de dehidro- .
genazele NADP dependente, este producerea NADPH necesar biosintezelor reductive. I
Se desfoar n fracia citoplasmatic, consumatorul major fiind biosinteza acizilor *
grai, proces localizat de asemenea n citoplasm, ca i biosinteza colesterolului,
hormonilor steroizi, hidroxilarea unor compui strini organismului. Reducerea
glutationului, care are importan major pentru meninerea integritii enzimelor tiolice
i prevenirea peroxidrii lipidice, se realizeaz pe seama NADPH, cofactor al glutcition
reduc tazei (GR):
GR
GSSG + NADPH + H+ - -0 ^ 2GSH + NADP+
Calea HMS este accelerat la maximum n esuturi, unde lipogeneza, sinteza

hormonilor steroizi sunt deosebit de intense (esutul adipos, glanda mamar, ficat, supra
renale - poriunea cortical). HMS furnizeaz de asemenea pentoze necesare biosintezei
nucleotidelor i acizilor nucleici.
Desfurarea acestei ci implic 2 etape majore:
1 ) conversia hexozelor la pentoze (etapa oxidativ);
2 ) conversia pentozelor n hexoze (etapa nonoxidativ).
Etapa oxidativ. Conversia este iniiat de oxidarea:

a) G- 6 -P n 6 -fosfoglucolacton de G-6 -P DH NADP dependent;
b) o lactonaz (E2) hidrolizeaz produsul n acidul 6 -fosfogluconic, la etapa ulterioar;
c) o enzim NADP dependent realizeaz oxidarea decarboxilant a substratului, cu
formarea ribulozo-5-fosfat.
Cele trei reacii, cu cofactorii i enzimele respective, sunt redate mai jos (a, b, c).
a) H
1ll1
- o=c
2
Hc OH
I
H O -C -H o + NADPH + H
H -C -O H
5I
H -C
6 1 2-
CH 2 0 - P 0 3
Glucozo-6-fosfat (-anomer) 6-fosfogluconolacton
Activitatea ultimei enzime (E?) e inhibat de fructozo-l,6 -diP, substrat al glico-
lizei, iar 6 -fosfogluconatul, substratul ei, este inhibitor al 6 -fosfogluco izomerazei.
b)
o --------- 0 = C - 0H
I I
- - 2+
H - OH
E 2 Mg' I
H O -C -H + H 2O Lactonaza
H O -C -H + H
! I
H -C -O H H - C -O H
I
H - C -------- H - OH
2 - 2-
C H 2 0 -P 0 3 C H 2 0 -P 0 3
6-fosfogluconolacton Acid 6-fosfogluconic
c)
0 = c OH 0 = C - 0H
I I
H- OH H OH CH20H
H NADP+ NADPH + H+ o = c=o

\ M g 2y
f I
H - C -O H 6"-P-G-DH H - OH- - c
I I
H OH - - H OH
I 2- I 2- I 2-
CH20 - P 0 3 C H 2 0 -P 0 3 CH 2 O - P O 3
A cid 6-fosfogluconic A cid 3-ceto-6-fosfogluconic Ribulozo-5-fosfat
Reacia sumar prezint:

G-6-P + 2N A D P+ + H 20 R-5-P + 2NADPH + 2H+ + C 0 2 (1)
Ribulozo-5-fosfatul este convertit n epimerul suxilulozo-5-P (epimeraza), ca i
la aldoizomerul su (R-5-P-ceto-izomeraza) (d):
d) CHO CH20H CH2OH

H C OH c -= o c=o
I
H -C -O H ----------H - C - O H ------------> H O -C -H
C eto- izomeraza |Epimeraza
I
H C OH H OH H -C -O H
I 2- I 2-
C H 2 0 -P 0 3 CH20 PO 3 CH20 - P 0 3
R ibozo-5-fosfat Ribulozo-5-fosfat X ilulozo-5-fosfat
Pentozele rezultate sunt utilizate n sinteza acizilor nucleici, a coenzimelor compu
ilor macroergici sau metabolizate n continuare. La o necesitate echilibrat NADPH
i pentoze, pentozo-fosfaii parcurg exclusiv etapa transformrii hexozelor n pentoze.
Etapa nonoxidativ. Conversia pentozei n hexoze, la un exces fa de necesitate
a pentozelor, e catalizat de transcetolaz i transaldolaz. Aceste enzime leag re
versibil untul pentozo-fosfat i glicoliza:
1. R ibozo-5-P + X ilulozo-5-P ^ Sedoheptolozo-7-P + G A -3-P
Transcetolaza, n calitate de grup prostetic, conine TPP. Enzima posed acelai
mecanism catalitic ca i complexul PDH i const n transferul fragmentului activ aldehi-
dic (CH 2 0 H -C H = 0 ) pe acceptor, drept care servete aldoza (Ribozo-5-P). Insu
ficiena tiaminei n raia alimentar poate provoca dereglri neuro-psihice (sindromul
Wernicke-Korsakoff).
Sindromul n cauz apare numai la o anumit parte a alcoolicilor sau la persoane cu
dereglri grave de nutriie. S-a constatat c la sindromul Wemicke-Korsakoff insufi
ciena de vit.B, rezid n factorii genetici: capacitatea de fixare a tiaminei la aceti
bolnavi e de zeci de ori mai redus dect la sntoi, pe cnd celelalte enzime depen
dente de , nu sufer modificri. Dereglrile activitii enzimei se manifest clinic numai
dac concentraia tiaminei e foarte mic pentru saturarea enzimei.
O alt enzim - transaldolaza - transfer DHA (CH 2 OH-CO -CH OH ) de la
cetoz (donator) la aldoz - acceptor. Enzima nu conine grup prostetic. La interaci
unea grupei carbonil a cetozei, substrat cu E-aminogrupa lizinei din centrul activ al
transaldolazei, se formeaz baza Schiff. Acest tip de interaciune covalent ES (enzima-
substrat) a produsului intermediar este identic cu produsul reaciei fructozobifosfat
aldolazic n glicoliz:
2. S - 7 - P + G A - 3 - P = ^ E r t - 4 - P + G - 6 - P ( F - 6 - P )
La etapa urmtoare, transcetolaza transfer grupa aldehidic a Xil-5-P, cu forma
rea:
3. Ert - 4 - P + Xil - 5 - P ^ G - 6 - P + GA - 3 - P
S u m a r : 3 pentoze 2hex. + ltrio za sa u n 3 R -5 -P 2F-6-P + GA-3-P.
Deci, 6 pentoze 4 hexoze + 2 trioze.
Surplusul de R-5-P format n HMS poate fi cantitativ transformat i n produse
intermediare ale glicolizei. n caz de minim necesitate de NADPH, are loc doar con
versia hexozelor n pentoze (la creterea necesitii ultimelor).
2F-6-P + GA-3-P ^ 3R-5-P
4F-6-P + 2GA-3-P ^ 6R-5-P
5G-6-P + P ^ 6R-5-P + H O (2)

Apar situaii n care necesitile de NADPH sunt cu mult mai mari dect n pentoze. n
faa cazuri devin active urmtoarele reacii: pe calea untului pentozo-fosfat se fonneaz
2NADPH i ribozo-5-fosfat. Apoi, sub aciunea transcetolazei i transaldolazei, R-
5-P este convertit n F-6 -P i GA-3-P i, n final, are loc resinteza G-6 -P din compuii
fcremergtori, pe calea gluconeogenezei:
G - 6 - P + 2N A D P-fe Ribulozo - 5 - P + 2N A D PH + C 0 2
F - 6 -P R ibozo 5 -P
* l'
I II
F - 1 ,6 - diP- D H AP - GA - 3
i, n sumar, confonn reaciilor descrise mai sus ( 1 ) i (2), concluzionm:

6 G- 6 -P + 12NADP+ + 6H20 ^ 6R-5-P + 12NADPH +12H+ + 6 CCL
6 G-6 -P + 12NADP+ + 6H20 5G-6-P + 12NADPH + 12H+ + 6 CO, + P.
i, n final: G -6-P + 12NADP++ 7 H ,0 - 12NADPH + 12H++ 6 C 0 2+ P.
HM S i celulele roii ale sngelui. untul e foarte activ n eritrocitele omului.

NADPH protejeaz acizii grai nesaturai de interaciunea anormal a 0 2 (n membra
n) i asigur gradul de oxidare a Fe2+n hemoglobin. La insufuciena de G-6 -P-DH
apare o hemoliz patologic (fig. 4.10), determinat de gradul mic de reducere a
glutationului. n consecin, eritrocitele sunt expuse la efectele nocive ale radicalilor liberi.
Glucoza Deficitul dc G-6-P DH diriimiicai

z capacitatea eritrocitului de a
fonna NADPH, ccea ce eonducc
ila hem oliz____________________ Stresul oxidant
Glucoza Uncic
m edicam ente
Glucozo-6-fosfat Infeciile
G lu co zo -6 -fo sfat G lutation G lu ta tio n '

dehidrogenaza reductaza peroxidaza
IGIicoliza
6-fosfogIu con at + H"
2 Lactat
F igu ra 4.10. Rolul glucoz.o-6-fosfatului n metabolismul eritrocitar
Deosebit de activ e HMS n celulele fagocitare, unde particip n liza bacteriilor i a

celulelor anormale. NADPH + 2 0 , *"202 + NADP++II+. Enzima ce catalizeaz
aceast reacie este o NADP-oxidaz. n fagolizozom anionul superoxid genereaz
spontan peroxidul de hidrogen, substrat pentru mieloperoxidaz, prezent n granulele
neutrofile primare. n prezena metalelor (surplus de fier) peroxidul de hidrogen i anionul
superoxid va genera radicalul hidroxil i oxigenul singlet (*0 2 ):
0 '2+ H 2 0 2 t v O H " + OH*
Radicalul hidroxil (OH) este foarte activ i va oxida diferite molecule biologice.
n glicogenoza de tip I (anomalie a degradrii glicogenului) are loc acumularea
excesiv a glucozo-6 -fosfatului, ca urmare a deficitului de glucozo-6 -fosfataz. Excesul
de glucozo-6 -fosfat determin activarea continu a cii pentozofosfat, rezultnd cantiti
excesive de ribozo-5-fosfat i, implicit, de nucleotide purinice. Degradarea acestora
provoac hiperuricemia (creterea concentraiei acidului uric n snge), precum i
precipitarea acidului uric n esuturi.
untul din eritrocite e singura surs de NADPH. Intrnd n componena glutation
reductazei, e' se transfer de la NADPH la FAD, apoi la punile disulfidice n subunitate
i apoi pe glutationul oxidat:
Cys46- G -
NADPH * FAD ^ I I - 2 GSH
Cys4,_ S G S
GR reprezint un dimer, subunitile cmia au o mas molecular de 50 kDa (fig.4.11).

Fiecare subunitate se constituie din trei domenii structurale: fixator de FAD, NADPH i
domeniul intermediar. Relaia GSH/G-S-S-G, n condiii normale, este egal cu 500.
S-a subliniat c GSH joac un rol de
osebit n procesele de detoxicaie, conform
reaciei: 2GSH + R-OOH -

GSH este u tiliz a t n inactivarea
potenialului de distrugere a peroxizilor
organici (peroxidarea acizilor grai
nesaturai) i a peroxidului de hidrogen,
rezultant al aciunii superoxiddismutazei:
2 0 3- + 2H+ H 2 0 2 + 0 2
Glutation peroxidaza, enzim seleno-
al GSH constituent, neutralizeaz peroxidul:
Figura 4.11. Imaginea schematic a structurii 2GSH + H 2 0 , G-S-S-G + 2H ,0
domenice n glutation reductaza Defectele genetice n activitatea y-glutamil
cistein sintazei i glutation sintazei sunt
cauzele anemiilor hemolitice. De asemenea, deficienele nutriionale n riboflavin sau
selenium determin anormaliti le din metabolismul glutationului. O ameliorare parial
se obin la folosirea viaminei i a antioxidanilor. Scderea nivelului glutationului redus
se depisteaz nfavism (deficit congenital de G-6-PDH) - leziune metabolic, unde
indivizii prezint o mare sensibilitate la sulfamide sau medicamente antimalaricele cu
declanarea unor manifestri hemolitice generalizate.
Sinteza acidului glucuronic. Calea acidului glucuronic este un proces ce implic
ivarea glucozo- 1 -fosfat, conform reaciei:
1)G-1-P + UTP - UDP-glucoza + PP.
Activitatea enzimei UDP-glucozopirofosforilaz necesit Mg2+. UDP-glucoza
jrvete ca donator de glucoz la sinteza di- i polizaharidelor sau poate fi oxidat n
)P-glucuronat.
2)UDP-glucoza + 2NAD++ H20 2NADH + 3H++ UDP-glucuronat
Enzima - dehidrogenaza NAD+dependent - catalizeaz reacia de formare a glu-
curonatului activ, care se utilizeaz la:
a) conjugarea a diveri compui endo- i exogeni din clasa aminelor, fenolilor, acizilor
carboxilici. Reaciile sunt catalizate de enzimele glucuronil transferaze din ficat i re
prezint o etap de detoxifiere a compuilor strini (xenobiotice) sau proprii organismului,
formnd glucuronidele - compui cu o polaritate evident, facilitnd transportul i excreia
acestora.
O
H 2OH
O O o
X 11
^ OH 2 / ~ O - P - O - P - 0 -C H 2
HO O- O'
OH
U D P-glucoza
H ,0 . , 2 NAD
N
. / -UDP-glucozo- 0
. 1dehidrogenaza
\ ^ 2 N A D H + 2z.H

r^ N H
/ 5 ------ \ 0 0 I
\? 2 0- - 0- - 0 - N ^ o
3 I I ' \
O' O'

UD P-glucuronat
HO
Glucuronil transferazele sunt enzime inductibile. Imaturitateasau deficienele genetice
ale acestor enzime duc la perturbarea proceselor de detoxifiere.
b) UDP glucuronatul este donator de glucuronil n sinteza polizaharidelor acide
(proteoglicani - glicozoaminglicani).
Forma activ a acidului glucuronic poate fi hidrolizat conform reaciei:
UDP-glucuronat + H20 ---- - Acidul D-glucuronic + UDP
c) acidul glucuronic activat se conjug cu hormonii tiroidieni n hipertiroidism, la un
nivel sczut de hormoni tiroidieni are loc hidroliza acestor compui, cu eliberarea
hormonilor activi.
= C O '
0 o= c
2I I
H O -C -H HO- H
H4 H 2o I o
HOCH HO -C-H 1/202 VH -,0
4-
H Aldonolactonaza
I
H - C ---
Z
Gulonolacton oxidaza
5I
HOC H H O -C -H
6 l I
CH2OH CH2OH
L-gulonat L -gulonolacton
o=c- o= c- o=c-
0 >= 4
I
HO- o=i
o o
HO- H
Spontan
- -H
o=i 0
I I +H
H-C-- H - C ------- H-i-
HO- H HO i - H O -C -H
I
CH2OH Ah 2o h CH2OH
2-ceto-L -gulonolacton L-acid ascorbic A cidul dihidroascorbic
Cnd necesitile organismului n acid glucuronic sunt satisfcute, metabolizarea lui

conduce la D-xiluloz, substrat al HMS. Maladia ereditar, pentozuria esenial, se
datoreaz imposibilitii conversiei L- n D-xiluloz, ca absen a enzimei L-xilitol-
dehidrogenazei NADPd, cu eliminarea n urin a L-xilulozei. Generarea L-xiluozei are
loc n modul urmtor:
Acidul glucuronic + NADPH + H+ ^ Acidul L-gulonic + NADP+
Acidul gulonic + NAD+ w Acidul 3-ceto-L-gulonic +N A D H + H+
Acidul 3-ceto-L-gulonic ---- L-xiluloz+C0 2
L-xiluloza - - D-xiluloza
La fiine animate, cu excepia maimuelor antropoide, cobaiului i omului, acidul
L-gulonic poate fi convertit n acid ascorbic. Incapacitatea de a sintetiza ascorbatul
se datoreaz lipsei ereditare a gulonolacton oxidazei.
M etabolismul fructozei
Fructoza (D-F) se conine n stare liber n multe fructe i parvine organismului sub
form de zaharoz, la hidroliza intestinal. Este fosforilat de hexokinaza, ce reacioneaz
la majoritatea hexozelor:
2+
D-F + ATP ^ D-F- 6 -P + ADP + H+
Enzima ce catalizeaz aceast reacie funcioneaz activ n rinichi i muchii scheletali.

Ulterior, F- 6 -P este convertit n G-6 -P (Glucozo-6-fosfat izomeraza) sau n F -1,6 -
diP(PFK).
2+
n ficat: a) D-F + ATP D -F-1-P + ADP + H+
Enzima specific e fructokinaza, apoi o aldolaz scindeaz produsul, conform

reaciei:
b) D-F-l-P ^ DHAP + D-gliceraldehid
DHAP e un produs intermediar al glicolizei, iar gliceraldehida (D-GA) poate suferi

urmtoarele modificri:
1. D-GA + ATP Tiokinaza ^ GA-3-P + ADP + H+
2. D-GA + NADH + H+ ^ Alcl olDH. - Glicerol + NAD+

Glicerol + ATP Glicerol kinaza ^ Glicerol-3-P + ADP + H+
Glicerol-3-P + N A D + ^ ehidroge,1aza- DHAP + N A D H + H +
3. D-GA + N A D + . AldehidPH - Glicerat + NADH + H +

Glicerat + ATP GUcc^kma ^ 2-fosfoglicerat + ADP + H+
a) Intoleran ereditar lafructoz numit i otrvire cu fructoz se caracterizeaz
prin absena aldolazei B, care conduce la acumularea intercelular a fructozo-1 -fosfat.
Ultima inhib G-6 -fosfataza i glicogen fosforilaza i, prin urmare, glucoza este depozitat
n ficat ca ester fosforic, ceea ce explic hipoglicemia sever, voma, icterul i hemoragia.
Poate provoca insuficien hepatic.
b) Fructozuria este provocat de deficiena ereditar a fructokinazei, ce conduce la
acumularea fructozei n snge. Metabolismul fructozei i dereglrile respective sunt
reproduse n fig. 4.12.
Triacilgliceroli
Figura 4.12. Metabolismul fructozei

M etabolismul galactozei
Galactoza (Gal) este component al lactozei, glicolipidelor, glicoproteinelor, proteoglica-
nilor. Este convertit n glucoz, cu precdere n ficat i rinichi, de ctre o hexokinaz:
2+
I) Gal + ATP D-Gal-l-P + ADP + H+
2a)G al-1-P + UDP-glucoza UDP-Gal + G -l-P

Enzima ce catalizeaz reacia este UDP-glucoza: -D-Gal-l-P uridil-transferaza.
UDP-galactoza se formeaz parial i n urma reaciei:
2b) G al-l-P + UTP UDP-Gal + PP.
Reacia e catalizat de enzima UDP-galactozo
pirofosforilaz, activitatea ei scade, cu naintarea n 6 CH2OH
vrst.
Apoi are loc interconversia celor 2 oze, conform: HO
3) UDP-Gal =?== UDP-glucoza
E nzim a U D P -g lu co zo -ep im era z (C u2+)
catalizeaz aceast reacie. Echilibrul este dominat de Gal-1-P OH
necesitile organismului n componentele ei. n
perioadele de lactaie, de formare a structurilor glicolipidice echilibrul e favorabil form
rii galactozei. Reacia precedent confirm c galactoza nu e obligatorie n raia alimen
tar. UDP-glucoza poate fi precursorul imediat al sintezei de glicogen.
4) UDP-glucoza + PP. = G -l-P + UTP
Enzima e UDP-glucozo-pirofosforilaza ce scindeaz UDP-glucozlaglucozo-1-
fosfat, care, graie unei mutaze (fosfogluco-mutaza), ulterior conduce la:
5) G -l-P G- 6 -P
Cile de utilizare a glucozei-6 -fosfat sunt variate (vezi fig.4.13). CH2OH
Patologiile medicale I
H- -C OH
a) La insuficiena enzimei UDP-a-glucoz-a-galacto-1 -P-
uridil-transferaz are loc acumularea n snge a Gal-l-P. HO H
Consecinele sunt nefavorabile pentru organism: mrirea ficatului I
H O -C -H
i a altor organe, afeciuni ale vzului (cataract), dereglri mentale.
Modificrile menionate sunt rezultatul acumulrii de Gal-l-P toxic HC OH
i a galactitolului - cauza direct a cataractei. Dereglrile au loc I
mai ales la copii, de aceea, reducnd sau eliminnd complet laptele CH2OH
Galactitolul
din raie, scad simptomele patologice.
b) Galactozemia i galactouria este provocat de deficiena galactokinazei ce
conduce la acumularea galactitolului, dac n diet este prezent galactoza:
c) Aldozreductaza - enzim prezent n ficat, esutul nervos, veziculele seminale, nu
este important din punct de vedere fiziologic n metabolismul galactozei, dac nivelul
galactozei nu este ridicat.
d) Intolerana la lactoz este de trei tipuri: copii prematuri (deficit congenital); dcficit
care apare n rezultatul ndeprtrii chirurgicale a unei pri din intestinul subire; deficit
G licoliz Calea uronic v ii r
G liccrol HM S
\ / '
A cid glucuronic
A cid lactic- A cid piruvic j \ Conjugare

Lipide 2NADH + 2H+
/
A cizi grai
\ D etoxifiere
Procese biosintetice
CPD A cid piruvic- Pentoze (C olesterol, acizi grai)
A cizi nucleici
C oenzim e
Ciclul Krebs
R ibonuclcotide
V \
^2C 02 A m inoacizi
3NADH + 3H+
FADHj Proteine
GTP
F igura 4.13. Diverse ci metabolice ale glucozo-6-fosfatului
Lanul respirator
H20
12 ATP
UDP-hexozo Fosfogluco-mu taza

4-epimeraza
G lu co zo -6 -P
G licolip id e U D P -g lu co za
Gluco/.o-6-fosfataza
G licoproteine
G licozam in glican i
Glicoliz G lu coza
Figura 4.14. Metabolismul galactozei

provocat de lezarea celulelor mucoasei intestinale. Deficitul enzimei n celulele mucoasei
intestinale necesit eliminarea din diet a sursei majore de galactoz. Organismul poate
sintetiza cantitatea suficient de UDP-Gal prin reacie de epimerizare.
Metabolismul galactozei este reprezentat n fig.4.14.
Manoza, un alt epimer al glucozei, provenit din alimentaie, se utilizeaz n felul
unntor:
1) Manoza + ATP Manozo-6 -P + ADP + H+

Enzima reprezint o hexokinaz, apoi o mutaz va transfera manozo- 6 -P n
fructozo-6 -fosfat, intermediar al glicolizei.
2)D-M-6-P D-F-6 -P (enzima fosfomanozo-izomeraza).
O alt cale de utilizare a manozei este expus mai jos i este necesar n sinteza
glicoproteinelor, fiind precursorul GDP - fiicozei:
3) D-M- 6 -P D -M -l-P
4)D-M -1-P + GTP - GDP-Manoza + PPi
GDP-Fucoza -------- Glicoproteine

Deficitul enzimelor responsabile de interconversiunea monozaharidelor i de biosinteza
glicoproteinelor se exprim prin sindromul deficienei carbohidrailor din structura
glicoproteinelor. Aceste afeciuni ereditare se manifest prin retard de cretere, anomalii
neurologice i afectare multienzimatic. Diagnosticul de laborator const n analiza profilului
electroforetic al transferinei serice, care migreaz mai lent n absena acidului sialic
din componena lanurilor oligozaharidice ale proteinei. O grup de glicoproteine ce
conin acid sialic sunt prezente n saliva oamenilor sntoi. La pierderea acidului sialic
din aceste proteine, graie unor enzime prezente n saliv, acestea precipit pe suprafaa
smalului, generndplac dentar, - cauza cariei i a maladiei paradontale. n condiii
normale, acidul sialic nu precipit i, prin urmare glicoproteinele salivare protejeaz dinii
de diferite afeciuni.
Gluconeogeneza
Aportul permanent al glucozei e necesar pentru funcionarea creierului, rinichilor,
eritrocitelor, esuturilor embrionului. n condiiile n carc aportul nu e suficient, ca urmare
a unui regim alimentar bogat n lipide, efort fizic prelungit, arc loc sinteza de novo a
glucozei din compui neglucidici (aminoacizi, piruvat, lactat, glicerol, produse interme-
diare ale ciclului Krebs). Rezervele directe de glucoz asigur funcionarea normal a
organismului timp de o zi (20g n snge i 190g n glicogen). Locul preponderent al
gluconeogenezei este ficatul i, mai puin intensiv, stratul cortical al rinichilor. Parial,
gluconeogeneza este solicitat i n perioadele interprandiale, ce depesc 8-9 ore i
chiar n condiiile unui aport normal de glucoz, dar intensitatea procesului este
extrem de redus. n acest caz, ea este determinat de necesitatea reutilizrii
lactatului format n muchi i eritrocite sau a glicerolului - rezultat al degradrii lipidelor
din esutul adipos.
Gluconeogenezanu este glicoliza inversat. Se tie c glicoliza parcurge 3 etape, practic
ireversibile, ce nu pot fi utilizate n gluconeogenez. Simpla reversiune a acestor reacii
este dezavantajoas din punct de vedere energetic, le corespunde un AG efectiv
pozitiv. n gluconeogenez au loc unele reacii proprii, ce evit acest impas energetic.
Procesul presupune conversia piruvatului n glucoz prin parcurgerea n sens opus
a etapelor glicolizei, cu condiia c trei dintre ele sunt catalizate de enzime unidirecionale.
Prima reacie este reprezentat de conversia piruvatului la fosfoenolpiruvat i implic
dou sisteme enzimatice: a) mitocondrial i b) citozolic.
a) Prima reacie e catalizat de piruvat carboxilaza mitocondrial (biotin dependent)
ce conduce la formarea oxaloacetatului (OA):
Piruvat + ,2 + ATP + H 2,0 Acetil-CoA

* 0 A +A D P + P.+
i
2H +
In lipsa acetil-CoA, enzima piruvat carboxilaza practic este inactiv. n continuare:

2. OA + NADH + H+ Malat + NAD+
Dehidrogenaza mitocondrial e dependent de raportul NADH/NAD+.
b) Malatul prsete mitocondriile, prin interaciunea unui sistem de transport al
dicarboxilailor ce se localizeaz n membrana intern a mitocondriilor i trece n citozol.
Aici se reoxideaz sub aciunea malat dehidrogenazei citozolice, cu formarea
oxaloacetatului:
3. M alat+ NAD+ ^ OA + NADH + H+
A poi, sub aciunea fosfoenolpiruvat carboxikinazei are loc form area
fosfoenolpiruvatului (FEP): 2+
4. OA + GTP FEP + C 0 2 + GDP
Aadar, conversia piruvat n FEP are loc prin utilizarea a 2 legaturi fosfat
macroergice.
Reacia e reversibil. In realitate ns AG, n condiiile celulare, e o mrime negativ
egal cu 6,0 kcal i, deci, reacia n celule practic e ireversibil. Creterea raportului
ATP/ADP favorizeaz reacia de formare a FEP, reprezentnd o condiie de desfurare
a gluconeogenezei vizavi de necesitatea unor concentraii mari de piruvat. Urmtoarele
etape ale gluconeogenezei presupun conversia (parcurgerea n sens opus) reaciilor
descrise n glicoliz.
5. FEP + H20 ^ 2-PG

6 . 2-PG ^ 3-PG
7. 3-PG + ATP ^ 1,3-diPG + ADP
8 . 1,3-diPG + NADH + H+ ^ G-3-P + NAD+ + P,
9. GA-3-P DHAP
10. GA-3-P + DHAP F -l, 6 -diP
Transformarea F-1,6 -diP la F- 6 -P nu se realizeaz prin reversiunea reaciei cataliza
te de PFK, ci necesit intervenia unei enzime proprii: fructozo-1,6-
difosfataza (F-l ,6-diP-aza):
11. F -l, 6 -diP + H20 F- 6 -P+P,
Enzima este inhibat de AMP, drept modulator pozitiv servind ATP.
12. F- 6 -P G-6 -P
13. G- 6 -P + H20 ^ G + P.
Enzima reaciei 13 glucozo- 6 -fosfataza e dependent de Mg2+i e localizat n
reticulul endoplasmatic al ficatului. Nu se conine n creier i muchi, de aceea aceste
esuturi nu furnizeaz glucoza liber n snge. Gluconeogeneza (GNG) necesit consumri
substaniale de energie.
Stoichiometria:
2Piruvat + 4ATP + 2GTP + 2NADH + 2H+ + 4 H p
Glucoza + 2NAD+ + 4ADP + 2GDP + 6PI.
La scindarea glucozei pn la piruvat, se formeaz 2 molecule de ATP, pe cnd sinteza
ei necesit 6 ATP + 2NADH. Aceste cantiti majore se utilizeaz pentru asigurarea
ireversibilitii gluconeogenezei.
Principalele substraturi ale gluconeogenezei. Combustibilul de baz e lactatul
(50%), ce se formeaz n muchii activi. Lactatul are impact asupra metabolismului i
servete pentru transformarea ulterioar pn la convertirea n piruvat:
CH 3
HCOH + N A P 4 Lactat dehidrogenaza^ + NADH + J-[
I - I
COO COO
Lactat Piruvat
Lactatul i piruvatul parcurg membranele plasmatice, difundeaz din muchi n

snge i sunt transferai n ficat, unde transformarea descris Lactat Piruvat e
favorizat de raportul mic NADH/NAD+n citozolul ficatului. Ciclul de interaciuni e
denumit ciclul Cori (fig.4.15).
Din totalitatea substraturilor gluconeogenezei 30-40% i revine alaninei, aminoacid
glucoformator. Alanina rezult din degradarea proteinelor musculare i este transformat
n piruvat sub aciunea alaninamino transferazei (ALT):
Alanina + a-cetoglutarat Piruvat + Glutamat
Un substrat al gluconeogenezei este i glicerolul, care apare la scindarea lipidelor din
adipocite:
Glicerol + ATP-----*Glicerol-3-fosfat + ADP + H+(enzima glicerol kinaza)
G lic e ro l-3 -fo s fa t + N A D + ===== D i h i d r o x i a c e t o n f o s f a t + N A D H + H*
La oxidarea acizilor grai cu numr impar dc atomi de carbon, ct i la catabolismul
inoacizilor ramificai se genereaz propionil - CoA. Fiind convertit n malat, devine
bstrat al gluconeogenezei.
R e g la r e a g lu c o n e o g e n e z e i.
Reglarea GNG (gluconeogenezei) i a
glicolizei are loc reciproc. Este modu
lat activitatea enzimelor-cheie (enzime
alosterice) de ctre anumii efectori me
tabolici.
a) n to td e a u n a cnd celu la
acumuleaz mai mult acetil-CoA
(mitocondrii) dect poate utiliza n cadrul
ciclului Krebs, se diminueaz oxidarea
piruvatului ce favorizeaz transformrile
lui biosintetice n glucoz. Enzima
reglatoare este piruvat carboxilaza.
b) Alt punct de reglare e reacia
catalizat de fructozo-difosfataz
(inhibat de AMP). ntotdeauna cnd
ciclul Krebs dispune de suficient com
bustibil (acetil-CoA, citrat), celula e
asigurat complet cu ATP, se creeaz GJicogeaÔiucoza -^ J
condiii ce favorizeaz biosinteza glu- -. ~ ,
cozei din piruvat i de stocare a F ig u r a 4 .1 5 .C iclu /C o ri
glucozei n glicogen.
c) Reglarea indirect a procesului prin piruvat kinaz, enzima glicolitic ce nu ia
parte la gluconeogenez. L-forma predomin n esuturile capabile de gluconeogenez
- alosteric, aceast izoform se inhib de ATP i alanin. n condiii de aprovizionare
suficient cu energie i prezena precursorilor de glucoz, L-forma e inhibat - glicoliza
nceteaz i se creeaz o situaie favorabil gluconeogenezei. M-izoforma piruvat kinazei
nu se regleaz n aa mod.
Produsele intermediare ale ciclului Krebs sunt precursori ai glucozei: citratul, izoci-
tratul, a-cetoglutaratul, succinatul, fumaratul i malatul, fiind oxidai, cu formarea oxa
loacetatului, care, la aciunea FEPCK, este transformat n fosfoenolpiruvat.
E important c n condiii normale acetil-CoA nu poate fi transformat n piruvat, fapt
ce confirm c n organismele animalelor, real, nu are loc convertirea acizilor grai cu un
numr par de atomi de carbon n glucoz, fiind posibil doar la oxidarea celor impari.
Majoritatea aminoacizilor sunt glucogeni, fiind respectiv transformai n substraturi
ale ciclului Krebs, care se pot converti direct n glucoz i glicogen. Dau piruvat: ala,
ser, gly, cys; a-cetoglutarat: glu, gin, pro, arg, his; succinil-CoA: val, thr, met; oxaloace
tat: asp, asn. O parte din atomii de ai phe, trp, ile, lys, tyr particip la sinteza glucozei,
alii - la sinteza corpilor cetonici. Realmente, numai leucin (leu) nu e capabil s dea
atomul de carbon pentru sinteza glucozei.
Foarte intensiv are loc gluconeogenez n perioada de restabilire dup efortul
fizic, ce solicit mult O, pentru sinteza ATP, necesar sintezei glucozei i a glicogcnului.
Un loc deosebit ca precursor l are alanina. S-a demonstrat c viteza sintezei glucozei
din alanin este mai mare dect a oricrui alt aminoacid. Sursa esenial a alaninei este
muchiul, unde ea rezult din sinteza piruvatului, consecina glicolizei i a convertirii
unor aminoacizi. S-a subliniat mai sus c ea intervine n reglarea activitii piruvat
kinazei hepatice, blocnd conversia fosfoenolpiruvatului la piruvat, favoriznd n
consecin utilizarea precursorilor glucozei n gluconeogenez.
Patologiile m edicale
Fluxul metabolic la nivelul gluconeogenezei este mult amplificat la pacienii cu diabet
zaharat, contribuind la apariia i meninerea hiperglicemiei.
Gluconeogenez poate deveni insuficient n caz de hiperproducie de acid lactic,
de exemplu n hipoxia prelungit sau n anomalii ale lanului respirator mitocondrial
(citopatii mitocondriale). Ca urmare, se instaleaz acidoza lactic manifestat prin
tulburri neurologice, digestive i musculare.
Diminuarea ratei gluconeogenezei se caracterizeaz prin hipoglicemie i acidoz lactic
(prin reducerea conversiei lactatului la piruvat).
Consumul de alcool produce cantiti mari de NADH + H+, prin oxidarea etanolului
la acetaldehid, sub aciunea alcool dehidrogenazei. n aceste condiii piruvatul este redus
la lactat, nemaifiind disponibil pentru iniierea gluconeogenezei. Acetaldehida inhib
fosforilarea oxidativ.
Deficitul ereditar al enzimelor gluconeogenezei se manifest prin apariia
hipoglicemiei n perioadele interalimentare. Deficiena ereditar a fructozo- 1,6-
difosfatazei, ce se trasmite autosomal recisiv, este cauza hipoglicemiei, cetozei i acidozei
lactice severe. Deficitul de glucozo-6-fosfataz, enzim comun gluconeogenezei i
glicogenolizei, este responsabil de glicogenoza de tip I (boala von Gierke). Acumularea
de glucozo-6 -fosfat determin, la rndul su, acumularea de glicogen n ficat i rinichi,
precum i activarea excesiv a cii pentozo-fosfat, cu producerea masiv de ribozo-5-
fosfat i, implicit, de nucleotide purinice. Amplificarea catabolismului purinelor se manifest
prin hiperuricemie.
Procesul de sintez i reglare a lactozei
Enzima catalizatoare este 1actozo-sintetaza constituit din subunitatea catalitic i
cea modificatoare.
Subunitatea catalitic (G), galactozil-transferaza, e activ n transferul enzimatic al
galactozei de la UDP-galactoz la N-acetilglucozamin, cu sinteza N-acetillactozamin.
UDP-Gal+N-acetilglucozamin U DP+ N-acetillactozamin.
Specificitatea se modific la asocierea cu subunitatea-M (a-lactalbumin).
Complexul e denumit lactozo-sintetaz (LS), ce transfer galactoza activ pe glucoz.
UDP-Gal + Glucoza UDP + Lactoza
Lactozo-sintetaza se profileaz n glanda mamar, iar galactozil-transferaza - n
majoritatea esuturilor, unde catalizeaz sinteza componentului glucidic al glicoproteine-
lor. In graviditate, galactozil transferaza se sintetizeaz i se acumuleaz n glanda mamar,
pe cnd subunitatea M se sintetizeaz n cantiti mici. Schimbrile spontane n coninutul
unor hormoni produc i sinteza subunitii M n cantiti mari. Complexul va sintetiza
mult lactoz. E un argument ce confirm c hormonii i au efectul lor prin modificri
rapide ale specificitii enzimelor.
Reglarea nivelului de glucoz n snge. Reglarea hormonal
Sunt identificate dou grupe de hormoni: una favorizeaz depozitarea i alta - utilizarea
de energie. Un rol unic i aparine insulinei, hormon ce faciliteaz depozitarea tuturor
tipurilor de baz ale substanelor energetice. Adrenalina, glucagonul, cortizonul,
tiroxina, somatotropina accelereaz utilizarea de energie, conform urmtoarelor
mecanisme:
1. Glucagonul amplific glicogenoliz i gluconeogeneza.
2. Catecolaminele favorizeaz glicogenoliz i blocheaz absorbia glucozei.
3. Cortizonul faciliteaz gluconeogeneza i blocheaz absorbia glucozei.
4. Somatotropina inhib absorbia glucozei.
Insulina este unicul hormon, secreia cruia e dependent de nivelul glucozei sanguine,
ce provoac micorarea concentraiei zahrului. Ceilali honnoni enumerai mai sus mresc
nivelul glucozei i necesit ca excitani o hipoglicemie vdit sau intercalarea semnalelor
de tipul stresului, raiei proteice, efortului fizic etc. Aceti hormoni sunt denumii anti-
reglatori, spre deosebire de insulin, denumit reglatorul esenial.
Insulina
n 1921, F.Banting i C.Best au publicat datele referitoare la injectarea extrasului
din pancreas, dup 6 - 8 sptmni de la ligamentul duetului respectiv. S-a constatat c
dispare hiperglicemia i glucozuria la animalele cu diabet. n 1926, substana n cauz
e cristalizat i numit insulin (Abel). Unele etape-cheie n studiul insulinei: n 1953,
F.Sanger determin secvena aminoacizilor n protein-insulina, i numai n 1965, P.
KatsoYannis a realizat sinteza chimic a insulinei. n 1967, D.Steiner a depistat proinsu-
lina, iar peste doi ani a fost stabilit i structura ei tridimensional.
Molecula acestui hormon e compus din 2 lanuri peptidice (a i ), unite prin dou
puni disulfidice. Elocvent e i puntea ntre al 6 -lea i al 11 -lea aminoacid din caten.
Insulina conine 51 aminoacizi i are o mas molecular egal cu 5800 Da. Punctul
izoelectric = 5,35. n clinic e utilizat hormonul bovinelor i al porcinelor (bovinele
conin alanin n loc de treonin, la captul terminal n lan; porcinele - alanina n locul
tirozinei 8 i valina n locul izoleucinei 1 0 ).
La oxidarea lanurilor polipeptidice sau reducerea punilor disulfidice, insulina i
pierde activitatea biologic. Insulina cristalic (porcin) e un hexamer (3 dimere n jurul
axei centrale cu 2 atomi de Z n - n preparate se conin 0,4-0,5% de Zn).
La pierderea asparaginei de la captul terminal a lan i alaninei din lan, activitatea
hormonal se reduce cu 95%. Se consider c fragmentul 22-26 al aminoacizlor n
lan particip la legarea insulinei cu receptorul i activitatea lui, n ansamblu.
Biosinteza. Primar, e sintetizat un polipeptid major numit preproinsulin i apare
peste cteva minute dup sintez. El este scindat de proteazele microzomiale la proin-
sulin (pierde 23 resturi de aminoacid de la captul N-terminal). Proinsulina reprezint
o molecul spiralizat, a i lanuri sunt unite prin fragment (26-30AA) (fig. 4.16).
Proinsulina posed o rat de 3-5% din activitatea biologic.Sinteza are loc n polizormi
reticului endoplasmatic. Proinsulina este transferat ntr-un proces cnergodependent n
complexul Golgi, unde e mpachetat i pstrat n granule secretorii, fiind aici scindat,
n cantiti echimolare, n insulin i C-peptid. Insulina i zincul se acumuleaz n zonele
centrale ale granulei. Mica
rea spre m em brana
plasmatic e determinat de
microfilamente (tubulin i
actin). Insulina i C-peptida
sunt expulzate n exterior,
contracia fiind dependent
de ionii de Ca2+.
Ce fa c to r i determ in
secreia insulinei?
Concentraia insulinei este
egal cu 5-20 |iU/mL sau
35-145 pmol/L. Factorul
primordial e glucoza. Teoria
metabolic confirm c: Figura 4.16. Structura primar a proinsutinei la om
a) glucidele metabolizate
sunt stimulatori mai efectivi dect cei nemetabolizai (manoza);
b) glucoza mrete concentraia intermediailor glicolizei n beta celule;
c) substanele inhibitoare ale metabolismului glucozei previn secreia insulinei.
O alt concepie este fondat pe interaciunea glucozei cu receptorul specific care
se modific, favoriznd secreia insulinei.
Succesiunea fenomenelor poate fi reflectat astfel: transferul glucozei n celule acti
veaz glicoliz, rezult sporirea nivelului de NADH i NADPH, coninutului de AMPc.
Aceste modificri favorizeaz creterea concentraiei de Ca44, care accelereaz elimi
narea insulinei.
Reacia de eliminare a insulinei de glucoz e fazic. n prima faz are loc creterea
rapid a secreiei la un minut dup administrarea glucozei, devenind maxim n urmtoa
rele 2 minute i revenind la nornial la 5 minute. n a doua faz se observ o crctcrc lent,
ncepnd cu a 5-10' dup infuzie, la continuarea acesteia timp de o or. Inhibitorii
sintezei proteice micoreaz intensitatea acestei faze. Prima e cauzat de eliminarea
insulinei depozitate, a doua - insulina e sintetizat cu cantiti mici de proinsulina. E cert
faptul c glucoza stimuleaz sinteza insulinei la nivelul posttranscripional.
Investigaiile efectuate au stabilit c reacia insulinei din plasm la testul perorai cu
glucoz e de dou ori mai mare dect reacia la testul intravenos. Aici este evideniat rolul
tractului gastrointestinal, prin interaciunea urmtoare: la absorbia i transportul lor n
sistemul circulant se produce eliberarea hormonilor locali ca: gastrina, secretina,
colecistokinina, polipeptida intestinal activ, polipeptida gastric de inhibiie. O
deosebit valoare o are i influena semnalelor neurogene determinate de nutriie.
S-a stabilit c aminoacizii administrai per os stimuleaz secreia mai intensiv a
insulinei, dect infuzia lor intravenos. Efectul e cauzat dc secreia gastrinei. Analogii ne
metabolizai ai argininei i leucinei menin capacitatea de stimulare a secreiei insulinei.
Posibil ca triger al secreiei insulinei poate servi identificarea membranar, dar nu
metabolismul intracelular al aminoacizilor.
Reglarea secreiei insulinei
Adrenalina inhib secreia insulinei dependente de glucoz (prima faz), modificnd
att nivelul intracelular al AMPc, ct i tolerana la glucoz, la fel ca i efectele insulinei, n
final.
Stimularea sistemului parasimpatic (SPS) mrete nivelul insulinei, iar stimularea nu
cleelor hipotalamice ventromediale inhib secreia insulinei. Serotonina stimuleaz secreia
insulinei, DOPA - inhib. Somatostatina inhib secreia hormonilor pancreatici, suprimnd,
posibil, i eliminarea honnonilorgastrointestinali.
Efectul insulinei. S-a constatat c e accelerat transferul glucozei n celul. n 1989,
s-a stabilit gena ce codific proteina - transportatoru^glucozei. Proteina e receptiv la
insulin, deplasndu-se din interiorul celulei (microzomi) spre membrana plasmatic.
Exist mai multe proteine de acest fel, fiind studiate i genele lor. Genele au secvene
nucleotidice identice ca i n
DNA a omului. Se crede c de
fectul nnscut al proteinei-
transportator determin predis
poziia spre diabet (fig. 4.17).
Nivelul glucozei sanguine
oscileaz nu mai mult dect cu
30-40mg/100mL sau 1,5-1,7
mmol/L. Reglarea fin e stabilit
de sensibilitatea ficatului la
insulin. Sporirea glucozei cu
(0,5 -0,6m m ol) 10-15 mg/
lOOmL cauzeaz, respectiv, i
sporirea insulinei la 60-100%.
Organul-int de baz e fi
catul. Dup trei ore de la
administrarea a 1 0 0 g glucoz, C ito p la s m a
Spaiul ertiacelular
60% sunt absorbite de ficat i
sunt utilizate la sinteza glicoge-
nului i a lipidelor. i numai 15%
din doz e utilizat la periferia
dependent de insulin, extra
fic a t. F igu ra 4.17. Structura transportatorului de glucoz o protein
Influena insulinei asupra unicatenar din 492 am inoacizi ce fo rm ea z 12 segmente
metabolismului ficatului se ca- organizate n m embran; am inoacizii hidrofili su n t situai
extramembranar
ractenzeaza pnn:
- activarea glucokinazei care crete n raport direct cu insulina i raia saturat de
glucide: la 180 (8 mmol) mg/1OOmL. Chiar i n asemenea condiii activitatea ei e satura
t numai la 1 / 2 ;
- accelerarea activitii fosfofructo kinazei;
- intensificarea activitii glicogen sintazei;
- inhibarea glicogen fosforilazei;
- suprim, de altfel, i gluconeogeneza, inhibnd fosfoenolpiruvat carboxikinaza;
" - diminueaz activitatea piruvat carboxilazei;
-micoreaz nivelul glucozei n snge, prin activarea transportatorului ei n esut.
Efectul insulinei la metabolismul esutului adipos e dependent de:
- intensificarea transportului glucozei prin membrana celular;
- produsele metabolismului final al glucozei sunt acizii grai, a-glicerolfosfatul -
ultimul servete la sinteza lipidelor n ficat.
Insulina amplific rezervele proteice ale organismului prin urmtoarele mecanisme:
- sporete absorbia aminoacizilor n esuturi;
- stimuleaz sinteza proteinelor;
- inhib catabolismul proteinelor;
- micoreaz viteza oxidrii aminoacizilor.
Metabolismul lipidic e dependent de insulina care:
- stimuleaza iniial activitatea acetil-CoA-carboxilazei, apoi grsimile sintetizate sunt
transportate n depou;
- micoreaz aportul acizilor grai liberi, reduce efectul lor inhibitor asupra acetil-
CoA-carboxilazei;
- amplific absorbia de esut adipos al lipidelor, prin stimularea activitii lipopro-
teidlipazei;
-este un inhibitor puternic al triglicerid lipazei - enzim hormonodependent;
- diminueaz capacitatea ficatului de a oxida acizii grai, indiferent de cantitatea lor -
efect anticetogenic, cauzat de diminuarea nivelului de camitin, cu mrirea indicelui
de malonil-CoA. Efectul se observ i n muchi - interacionnd, se amplific;
- stimuleaz sinteza acizilor grai n finalul efectului;
- majoreaz utilizarea glucozei pe calea pentozofosfatic, mrind cantitatea de
NADPH necesar pentru sinteza acizilor grai.
Realizarea efectului - mecanismul de aciune
Prima etap, la fel ca i la ceilali hormoni de natur peptidic, include fixarea ei de
receptorul specific pe membrana plasmatic a celulei.
Reccptorul insulinic este un tetramer fonnat din patru subuniti identice, dou cte
dou (a i ), unite ntre ele prin puni disulfidice(vezi fig.4.18). Subunitile a sunt
dispuse extracelular i conin situsul de legare al insulinei. Subunitile sunt dispuse
transmembranar i intracelular. Receptorul este n acelai timp o protein cu activitate
tirozinkinazic, domeniul intracelular al subunitilor fiind fosforilat la nivelul resturilor
de tirozin, ca urmare a legrii insulinei. Aceast autofosforilare conduce la activarea
receptorului, imediat dup legarea insulinei i n prezena ATP ca donator de energie i de
fosfat.
Receptorul fosforilat iniiaz o serie de reacii intracelulare, care constituie transducia
semnalului pn la nivelul efectorilor celulari specifici. El exercit o activitate kinazic la
IRS-1, primul substrat al receptorului pentru insulin, care este activat prin fosforilare i
transformat n IRS-1-P. Apoi, IRS-1-P fosforileaz o proteinkinaz, care declaneaz o
cascad de fosforilri i la alte proteinkinaze citoplasmatice. Aceast succesiune de
fo sfo ril ri are ca scop Situsul de fixare
am p lific a re a sem n alu lu i
horm onal, deoarece fiecare
molecul activat acioneaz
asupra mai multor molecule-
int, activndu-le, la rndul su.
Ultima fosforilare. activeaz Spaiul
proteinfosfatazele specifice, care e x tr a c c lu la r
hidrolizeaz formele inactive, """'Cj I 1Y4cQ(&
fosforilate ale unor enzime,
e lib e rn d fo rm ele activ e,
defosforilate: glicogen sintetaza,
piruvat kinaza, com plexul
multienzimatic al pimvat dehidro
genazei, acetil-CoA carboxi
laza,H M G -CoA reductaza.
S itu s u l de
Enzimele activate intervin ca autofosforilare
enzime-cheie n reglarea unor ci
metabolice majore. Efectele
insulinei n interiorul nucleului Protein-
constau n activarea unor factori int
de tra n scriere, care induc
exprimarea genelor ce codific Citozol Ef ect el e
transportatorii sau enzimele- insulinice
cheie n reglarea metabolismului. intracelulare
Genele, a cror exprimare este
Figura 4.18. R eceptorul insulinic
indus de ctre insulin, codific Receptorul insulinic const din 2 lanuri pe partea extern a
urmtoarele proteine: membranei plasmatice i 2 lanuri ce traverseaza membrana i
a) transportatorii pentru ies afar din faza citozolic. Legarea insulinei de lanurile a
d eterm in o sch im b a re co n fo rm a io n a l ce p e r m ite
glucoz, GluT,; autofosforilarea restului Tyr n domeniul carboxil-terminal al
b) glucokinaza care transfor subunitilor. Autofosforilarea activeaz m ai departe domeniul
tirozinkinazei, care mai apoi catalizeaz fosforilarea altor
m glucoza n glucozo-6 -fosfat, proteine-int
fonn activ din punct de vedere
metabolic;
c) pimvat kinaza i fosfofructo kinaza 1 , enzime alosterice eseniale n reglarea glicolizei;
d) lipoproteidlipaza, enzim-cheie n reglarea metabolismului lipidic.
Calea de semnalizare prin insulin regleaz expresia genei specifice, implic o cascad
de proteinkinaze, fiecare activnd-o pe cealalt. Receptorul insulinic este o kinaz Tyr-
specific; celelalte kinaze fosforileaz resturile Ser sau Thr. MEK este o kinaz bi-
specific, ce fosforileaz att Thr ca i Tyr n . este uneori denumit ERK
(kinaz reglat extracelular). MEK este mitogen-activat, ERK-kinaza activatoare, SRF
este factorul seric de rspuns. Semnalizarea prin receptorul insulinic este reprezentat n
figura 4.19.
Grb2 nu este singura protein
activat prin asocierea cu
IRS-1 fosforilat. PI-3 kinaza
(PI-3K) se asociaz cu IRS-
1 p rin dom eniul SH,
(fig.4.20). Activat, PI-3K
transform fosfatidilinozitolul
lip id ic m em branar 4,5-
bifosfatul, numit i PIP,, n
fosfatidil-inozitol 3,4,5-
trifosfat (PIP3 ), care indirect
activeaz o alt kfnaz,
proteinkinaza (PKB). La
legarea cu PIP3, PKB este
fosforilat i activat de o alt
proteinkinaz, PDK1.
PKB fosforileaz apoi
resturile Ser sau T hr la
proteinele-int, una dintre
care este glico g en
sintazkinaza 3 (GSK3). n
forma sa activ, nonfosfo-
rilat, GSK3 fosforileaz
glicogen sintaza, inactivnd-o
i, n consecin, ncetinind
sinteza de glicogen. Dup ce
este fosforilat de PKB,
GSK3 este inactivat. Astfel,
prevenindu-se inactivarea
glicogen sintazei, cascada F igu ra 4.19. R eglarea expresiei genei prin insulin
1. Receptorul insulinic leag insulina i determin autofosforilarea
protein-fosforilarii iniiat de la restul Tyr carboxil terminal.
insulin stimuleaza sinteza 2. Receptorul insulinic fosforileaza IRS-1 al Tyr.
3.Domeniul SH , al lui Grb2 se leag la -Tyr al IRS-1. Sos se
glicogenului (fig.4.20). leag la Grb2, apoi la Ras, cauznd eliberarea GDPsi legarea lui
Se crede c i PKB GTP !a Ras.
determin micarea trans 4. Ras activat se leag i activeaz Ruf-1.
5.Raf-l fosforileaz M EK la 2 Ser, activindu-L MEKfosforileaz
p o rta to rilo r de glucoz la Thr i Tyr, activindu-L
(G1uT4) din veziculele interne 6.MAPK se deplaseaz la nucleu i fosforileaz fa cto rii de
transcripie nucleari precum ELK-1, activndu-i.
la membrana plasmatic, 7.ELK-1 fosforilat se alatur la SRFpentru a stimula transcripia
stimulnd aportul glucozei n unui set de gene necesare pentru diviziunea celular
snge.
Prin ce se determin evoluia unui asemenea sistem complicat de reglare?
Sistemul permite unui singur receptor activat s activeze mai multe molecule IRS-1,
amplificnd semnalul insulinic, i permite integrarea mai multor semnale la mai muli
receptori, fiecare capabil s fosforileze IRS-1.
n continuare, IRS-1 poate activa oricare dintre proteinele ce conin domenii SH,.
Un singur receptor ce acioneaz prin IRS-1 poate semnaliza pe dou sau mai multe ci:
insulina regleaz expresia genelor prin calea Grb2-Sos-Ras-MAPK i activeaz
metabolismul glicogenului, prin calea PI-3K-PKB.
Receptorul insulinic este un prototip pentru un numr de enzime receptoare ce au
structur similar i activitate proteintirozin kinazic. Receptorii pentru factorul de
cretere epidermal i pentru factorul de cretere al plachetelor au, spre exemplu,
similitudini structurale i secvenionale cu receptorul insulinic i ambele au activitate
protein tirozin kinazic ce fosforileaz IRS-1. Muli dintre aceti receptori dimerizeaz
ligandul de legtur; receptorul insulinic este deja un dimer nainte de legarea insulinei.
n adiie la multitudinea de receptori ce se comport ca protein tirozin kinaze, un
numr de receptori precum proteinele membranare plasmatice au activitate de protein
tirozin fosfataz. Bazndu-
ne pe aceste structuri
p ro te ic e, putem
presupune c liganzii lor
sunt com ponente ale
matricei extracelulare a
suprafeelor celulare.
Dei rolul lor semnalizator
nu este n ca d ep lin
cunoscut, la fel ca cel al
re c e p to ru lu i tiro zin
k in azic, la sigur, au
posibilitatea s inverseze
aciunea semnalelor ce
stimuleaz aceste kinaze.
Efectul hormonal en
funcie de numrul de
receptori ce - 1 leag (dc
la 50 mii n adipocite i
pn la 250 mii n
F igu ra 4.20. A ctivarea glicogen sintazei de insulin h e p a to c ite ). E fectul
Transmiterea sem natului este mediat de PI-3 kinaza (PI-3K) si
proteinkinaza (PKB).
maxim se observ la
1. IRS-I, fosforilat de ctre insulin-receptorul, activeaz PI-3K prin fixarea a mai puin de
legarea ta domeniul SH 2, PI-3K transform PIP2 n PIPr 1 0 % din cantitatea total.
2. PKB se leag ta PIPj i e fosforilat de PSK-1 (nu e prezentat). Dei
activat, PKB fosforileaz GSK3 la Ser, inactivindu-l. S ensul fu n c io n a l al
3. GSK3, inactivat prin fosforilare, nu poate transforma glicogen rezervei const n condiiile
sintaza (GS) n form a sa inactiv prin fosforilare, aa c GS rmne
activat.
de micorare a numrului
4. Sinteza de glicogen din glucoz este accelerat. de receptori (de exemplu,
5. PKB stimuleaz micarea transportatorului glucozei GluT4 din obezitate). La o mrire
veziculele interne membranare la membrana plasmatic, sporind
aportul de glucoz adecvat a concentraiei
de insulin, numrul de complexe hormono-receptoare atinge mrimea critic necesar
pentru iniierea reaciei biologice. O proprietate a receptorilor const n faptul c
numrul lor e reglat de concentraiile insulinei. Aceast particularitate st la baza patogeniei
strilor insulino-rezistente, situaiilor cu sensibilitate mrit fa de insulin. Strile msulino-
rezistente, ns, pot fi cauzate i de mecanismele provocate de tulburri la nivelul
postreceptoric intracelular.
Evident, dup fixarea cu receptorii, complexul hormono-receptor este internat n
celul i metabolizat n lizozomi. Nu e clar dac acest proces ar avea o anumit
influen asupra metabolismului celular. O ipotez alternativ ar putea fi aciunea unui
mesager.secundar, omologul lui AMPc, determinat de efectul hormon-receptor. Natura
lui nu e stabilit.
Efectul biologic e n funcie de perioada de njumtire a insulinei, egal aproximativ
cu 4-5 minute i circa 40-50% de insulin e metabolizat n ficat. Activitatea insulino-
degradant o are glutation-transhidrogenaza (scindeaz punile S-S, elibernd catene
inactive). Insulina este metabolizat i de enzima proteaza ce scindeaz legturile
peptidice. n rinichi se inactiveaz 15-20% din insulina total.
Sinteza insulinei i secreia ei e reglat, probabil, i de sistemul nervos. S-a confir
mat c pe suprafaa membranelor celulelor este situat o protein (masa molecular
egal cu 64000 Da), int pentru celulele autoimune patologice. Proteina e o enzim-
glutamat decarboxilaz, ce elimin C 0 2 din glutamat, cu formarea acidului y-
aminobutiric (GABA) - situaie caracteristic pentru diabetul de natur autoimun, de
pendent de insulin.
Insulinorezistena periferic constituie un sindrom biochimic caracterizat prin
creterea marcat a sintezei de insulin n pofida unui nivel normal al glicemiei. Acest
fapt se datoreaz unor mutaii ale genei care codific receptorul de insulin, cauznd
imposibilitateatransmitem intracelulare a mesajului hormonal. n aceast categorie de
afeciuni se includ diverse boli ereditare, cum ar fi: diabetul lipoatrofic infantil, anumite
forme de obezitate, sindromul Donahue (dismorfism facial, caexie, retard mental,
hipotrofie statural) sau diverse tulburri endocrine.
Mutaiile descrise la nivelul genei pentru insulin se manifest prin insulinorezisten n
msura n care este afectat recunoaterea insulinei de ctre receptorul su specific. O
mutaie la nivelul situsului de scindare a precursorului insulinei genereaz creterea marcat
aproinsulinei n circulaie, n detrimentul insulinei active.
Diabetul zaharat constituie o afeciune metabolic i cndocrin manifestat prin
hiperglicemie persistent, asociat n timp cu complicaii acute (cetoacidoz diabetic,
com diabetic) sau cronice (angiopatia diabetic, retinopatia diabetic, nefropatia
diabetic).
Se descriu mai multe tipuri de diabet zaharat:
a) Diabetul insulinodependent (tip 1) este cauzat de deficitul insulinei, consecina
unor mecanisme autoimune (prezena anticorpilor anticclulei a insulelor Langerhans);
boala debuteaz timpuriu i se manifest prin deficitul total al insulinei, concomitent cu
degenerarea marcat a celulelor pancreatice.
b) Diabetul non-insulinodependent (tip 2) este o afeciune multifactorial, relativ
frecvent. Boala este cauzat de deficitul de insulin, asociat frecvent cu obezitatea,
insulinorezistena periferic i perturbarea metabolismului lipidic.
c) Diabetul de tip MODY-2 este o afeciune ereditar monogenic, provocat de
deficitul glucokinazei', ca urmare, se observ diminuarea glicolizei i a glicogenogenezei
n ficat, ceea ce determin activarea reacional a gluconeogenezei.
d) Diabetul zaharat secundar se desemneaz n pancreatitele cronice sau n alte
afeciuni care lezeaz integritatea funcional a pancreasului.
e) Diabetul secundar cu exces de hormoni hiperglicemiani se ntlnete n bolile
endocrine caracterizate prin hipersecreia de catecolamine (feocromocitom), cortizol
(sindromul Cushing) sau somatotropina (gigantism, acromegalie). Aceste sindroame sunt
nsoite de insulinorezisten periferic.
g) Diabetul gestational debuteaz pe parcursul sarcinii i poate evolua spre instalarea
diabetului zaharat, reducerea toleranei la glucoz sau spre restabilirea homeostaziei
glucidice anterioare.
Glucagonul
La toate speciile de mamifere acest hormon prezint un polipeptid unicatenar (29
aminoacizi). Captul N-terminal e necesar pentru fixare i activitate celular. Glucagonul
este sintetizat n a-celule.
Stimulatori ai secreiei hormonale sunt raia proteic, infuzia de aminoacizi, efortul
fizic. Inhib secreia lui glucoza, somatostatina.
Aciunea lui reprezentativ e stimularea glicogenolizei, gluconeogenezei i cetogenezei.
n ficat joac rolul de reglator al glicemiei n asimilarea proteinelor (preponderent,
produselor animale-carnea). Glucagonul se inactiveaz primordial n rinichi. E indiscutabil
faptul c homeostazia glucidelor e reglat de relaia insulin-glucagon (fig.4.21).
Studiul metabolismului glucidic
Un rol esenial l au metodele de dozare cantitativ a glucozei. Cea mai rspndit
e metoda cu aplicarea ortotoluidinei (reactiv cromogen), n care grupele aldo- i ceto
alt hexozelor formeaz, cu aminele aromatice, compui colorai.
n cazurile n care se suspecteaz diabetul, se provoac o hiperglicemie. Proba 1:
se recolteaz sngelepn la ncrcarea cu glucoz (dimineaa, dup 10-14 ore de foame).
Se ia glucoza - 100-50g (mai bine lg/kg greutate) i se dizolv n 250 mL de ap.
Observm evoluarea glicemiei la interval dfe 30 minute (probele II, III, IV). n mod
normal, proba II va indica valoarea major, ns nu mai mare dect 160mg/100mL.
Ulterior, descrete i proba IV - aproximativ se egaleaz cu prima. n diabet, probele III
i IV rmn n plafon (crescute) ca i proba II (cantitatea normal de glucoz este de
3,3-5,5 mmoI/L).
Factorul principal ce determin micorarea toleranei la glucoz n funcie de vrst
e diminuarea sensibilitii esuturilor la insulin. Afeciunile intercurente, preparatele
medicale pot influena asupra toleranei.
Testul glucotolerant intravenos. Se administreaz 50% glucoz intravenos timp
de 2-4 minute n doza de 0,5g/kg masa corpului (25g), apoi se determin n snge
valorile glicemiei, peste fiecare 10 minute, timp de o or. Se stabilete constanta vitezei
N ivel m ajor de glucoz
^Pancreas
N ivel m inor d e glucoz

Insulin;
ilucagqnul
Hcogen
rt
Glucoza' ^Glucoza
! \
Piruvai Piruvat
Muchii schiletali: insulina stimuleaz Ficatul: glucagonul stim uleaz

utilizarea i depozitarea glucozei sinteza i exportul glucozei
Figura 4.21. Reglarea glucozei sanguine de insulin i glucagon
micorrii nivelului de glucoz la TI / 2 (timpul necesar pentru diminuarea nivelului glucozci

n jumtate, normal e mai mare de 1 ,2 ). n patologie, aceast constant em ai mic
dect 1 .
O importan deosebit i revinefructozei, cu nivelul sanguin pn la 0,5mmol/L. Se
utilizeaz testul de toleran la fructoz; per os se administreaz 45-50 g fructoz n 200
mL de ap, recoltarea probei de nge dup 30 minute, timp de dou ore. n mod normal,
valorile fructozemiei rmn sub 0,83 mmol/L i revin la limitele normale dup 2 ore.
Prezint interes cantitatea de galactoza, cu valori normale pn la 239 pmol/L sau
0,24 mmol/L. Testul de ncrcare cu galactoz (oral) const n utilizarea soluiei de
10% de galactoz ce conine 1,7 g/kg corp la copii pn la 3 ani, i 0,75 g/kg corp dup
9 ani. Se efectueaz o recoltare obinuit de probe sanguine. De altfel, se depisteaz i
n urin, timp de 5 ore dup fiecare or. La copiii de pn la 3 ani galactozuria atinge
5,55 mmol (1 g); dup 3 ani se excreteaz 11,11 mmol (2g); la aduli valori le sunt egale
cu 16,65 (3g). Se calculeaz i indicele galactozei (suma celor 4 determinri ale galac-
tozemiei). Valori normale: 5,5 mmol/L - 8 , 8 8 mmol/L.
Este utilizat i testul intravenos cu galactoz (0,33g la kg/corp); se recolteaz sngele
dup 10 minute, timp de 80 minute. Se calculeaz timpul de njumtire (T 1/2) a
galactozei (normal este egal cu 9,4 - 11,6 minute).
c a p ito lu l V LIPIDELE I METABOLISMUL LOR
STRUCTURA. PROPRIETILE. FUNCIILE
Natura chimic e foarte variat. Dup structur i compoziie, lipidele se mpart n
dou subclase: simple i complexe. Lipidele simple sunt compui ce conin C, H i O
(aciiglicerolii, steridele, ceridele). Lipidele complexe sunt compui care, pe ling C,H,0,
mai pot s conin atomi de P, N sau S -glicerofosfolipidele, sfmgolipidele, sulfatidele.
Deosebim lipide saponifiabile, care prin hidroliz se descompun n substane
componente, i nesaponifiabile, care reunesc diverse categorii de compui, hidrocarburi
superioare, derivai oxigenai ai acestora, nescindai hidrolitic n compui simpli. La ultima
clas se refer i alcoolii, aldehidele, acizii care conin schelete alifatice sau ciclice, cu
structur poliizoprenic: terpenele, carotenoizii, steroizii.
Funciile lipidelor sunt:
1 ) depozitarea i transportul rezervelor energetice;
2 ) constitueni structurali ai membranelor celulare i intracelulare;
3) izolatori termici, mecanici, electrici;

4) joac un rol important n procesele de comunicare i identificare intercelular;
5) unele substane, fiind solubile n lipide, pot avea efecte biologice: vitamine, steroizi,
prostaglandine, derivai ai acizilor grai nesaturai.
Natura a creat o sumedenie de compui lipidici, ce difer dup structura lor chimic.
Studiile recente au confirmat c nu numai prostaglandinele, dar i multe altele prezint
factori valoroi ca reglatori i mediatori practic ai tuturor proceselor fiziologice i ai
reaciilor biochimice.
S-a stabilit c glicosfingolipidele particip n procesele de cretere, difereniere i
sesizare celular, Ia interaciunea intercelular, transmiterea semnalelor intemiembranare;
pot servi ca antigeni i imunomodulatori activi. Unele sfingolipide simple i metaboliii lor
(sfmgozina, sfingozin-1-fosfat, ceramidele), n calitate de mesageri secunzi particip
att la creterea i diferenierea celulelor, ct i la apoptoza lor. Particip, la transmiterea
infonnaiei reprezentanii ciclului fosfatidilinozitolului-diacilglicerolul, inozitolfosfatul,
inozitol-1,4,5-trifosfatul, acidulfosfatidic, care modific activitatea unor forme de
proteinkinaze C, modulnd cantitatea Ca2+n celule. Procesele biologice din snge sunt
reglate de l-O-alchil-2-acetilfosfatidilcholin (factorul de agregare a trombocitelor).
Dac lizolecitinelor (lizofosfatidilcholinei) li se atribuia numai rol de detergent
endogen, apoi la moment se constat c n concentraii mici (1-10 mkM) au i funcia de
reglare a PKC.
Efect neuromodulator posed amidele acizilor grai - etanolamida ac. arahidonic
(anandamida), care apare ca ligand endogen al receptorilor n creier. Oleamida posed
funcie de inductor endogen al somnului la mamifere.
Oxidarea radical liber a lipidelor de formele active ale O, e considerat azi o cale de
sintez a moleculelor, cu activitate biologic deosebit. Izoprostanele, produsele oxidrii
acidului arahidonic prezint activitate biologic deosebit i sunt un criteriu valoros al
intensitii oxidrii radical libere a lipidelor. mpreun cu izoleucotrienele i alte
izooxilipine prezint o clas de lipide, ce apar ca mediatori ai stresului oxidativ.
Celula poate fi expus aciunii simultane a mai m ultor factori lipidici, avnd n
consecin efecte biologice diferite. Unul i acelai agonist (y-interferonul,
interleukina-1, factorul necrotic tumoral) favorizeaz apariia n celul a mai
multor mesageri lipidici care determin procesele biochimice.Determinarea factorului
- cheie e dificil n patogeneza efectelor celulare.
Acizii grai. Dintre acizii grai cei mai rspndii i mai numeroi sunt acizii monocar-
boxilici alifatici cu caten normal, saturat sau nesaturat, ce includ un numr par de
atomi de carbon.
Lipidele izolate din esuturile mamiferelor mai des conin acid palmitic (C]6) i stearic
(C]g). Substana nervoas are cantiti substaniale de acid lignocenc (C,4). Acizii inferiori
(C4 -C.0) se atest n grsimile din laptele rumegtoarelor (tab.5.1).
Tabelul 5.1 Principalii acizi grai ai grsimilor naturale
A cizii grai saturai N um rul de atom i Form ula

de n m olecul structural
1. Acidul acetic C2 HC OOT T
2. Acidul butiric c4 CH 3-(C H 2)2-CO O H
3. Acidul caproic C6 CH 3 ~<CHJ4-COOH
4. Acidul caprilic Cs CH 3-(C I-0 6-CO O H
5. Acidul caprinic CH 3-(C H 2)_C O O H
C ,o
6 . Acidul lauric
C ,2 3;),-
7. Acidul miristic C,4 CH 3 -(C H 2)12-COOH
8 . Acidul palmitic
C ,6
CH 3-(C H 2) 14-CO O H
9. Acidul stearic CH 3 -(C H ,)16-CO O H
10. Acidul arahic ^20
3-( 2) |
11. Acidul behenic C 22 CH 3 -<CH2)20-CO O H
12. Acidul lignoceric C 24 CH 3 -(C H 2)2-CO O H
Acizii grai nesaturai conin una sau mai multe legturi duble etilenice care, ca
regul, ocup poziia ntre C9 i C| 0 -cis-A9.
Legturile multiple duble, se situeaz ntre atomul C9 i grupa CH3, nefiind cuplate,
dar cu interferena grupei metilenice:
CH 3 - ( C H 2)4- C H = C H -C H 2- CH = C H -(C H 2 ) 7 -C O O H .
Practic, toate legturile duble se afl n cis-conformaia ce modific poziia catenei

alifatice n spaiu. Cu ct mai multe legturi duble exist, cu att mai multe coturi posed
acizii grai. Acidul arahidonic are o rigiditate mai mare dect cei saturai: ultimii se
rotesc liber n jurul legturilor ordinare i se caracterizeaz printr-o flexibilitate mare.
Acizii grai nu se afl n stare liber n celule i esuturi, ci sunt legai covalent,
asemeni componentelor din diferite clase de lipide.
Dintre acizii grai nesaturai mai frecveni suni:
1) palmitoleatul (acidul palmitoleic) cis-9;
2 ) oleic C 1JMcis-A9;
3) nervonic cis-A9.
Cu 2 legturi duble n molecul:
Acidul linoleic C | 8 .,cis-A9, A1- ;
Cu 3 legturi duble:
Acidul linolenic C , g .3 cis-A9, A12, A15;
Cu 4 legturi duble:
Acidul arahidonic C2 0 4 cis-A5, As, A11, A14.
Proprietile. Proprietile acizilor grai i ale lipidelor, servind drept constitueni, n
mare msur depind de lungimea catenei acidului i de gradul de nesaturaie. Acizii
grai nesaturai au o TC de topire mai joas dect cei saturai cu lungime similar a
catenei (acidul stearic - 69,6C, oleic - 13,4C, acidul linoleic - 5,8C). Lungimea
catenei influeneaz asupra TC de topire. Acidul palmitic (C]6) arc o TC cu 6,5 mai
mic dect a celui stearic ( ). Cu alte cuvinte: lungimea mic a catenei i prezena
legturilor duble amplific fluiditatea acizilor grai i a derivailor lor. La T corpului
acizii grai saturai 12 -C 24 sunt n stare solid (ca ceara), cei nesaturai sunt lichizi.
Tot lichizi sunt i cei saturai pn la Cg.
Acizii grai sunt puin solubili n ap. Solubilitatea scade o dat cu creterea lungimii
catenei hidrocarbonate. Acizii grai saturai i nesaturai au proprietate de a forma:
1. Esteri (gliceride, fosfogliceride);
2. Sruri (spunuri cu proprieti tensioactive), cele de Na+i K+sunt solubile n
ap; cu ceilali ioni, n general, fonneaz sruri insolubile;
3. Amide (sfmgolipide).
Acizii grai nesaturai adiioneaz, la nivelul dublei legturi, halogeni (Br,,Cl,), tiocianatul
(SCN),, gruparea hidroxil. Ei se oxideaz uor cu permanganatul de potasiu, acidul
periodic, tetraacetatul de plumb, peroxiacizii. Reaciile de oxidare se utilizeaz n
scopul stabilirii structurii lor chimice.
Oxidarea acizilor grai nesaturai are loc i n prezena ozonului. Ei sunt supui
procesului de pcroxidare (autooxidare), la care se altereaz gustul i mirosul (rncezire).
Radicalii peroxidici atac alte catene nesaturate, iniiind reacia de peroxidare n lan.
CH = CH CH C H = C H +X*------- * -X C H = C H C H C H = C H ----------
Izomerizarea radicalului liber
------ *-----C H = C H CH C H - C H * ------- C H = C H C H = C H C H ----------------
C H = C H C H = C H C H
I
0 0
-
Radical hidroperoxid o OH*

R eacia de peroxidare n lan: X - radical iniiator
esutul adipos uman conine (n % din greutate) urmtorii acizi grai:

oleic = 45; palmitic = 25; linoleic = 8 ; palmitoleic = 7; stearic = 7 i alii = 7%.
Uleiurile vegetale sunt bogate n acizi grai nesaturai.
Autooxidarea lipidelor ce conin acizi grai nesaturai n celule este sistat de prezena
vitaminelor E, C, diferitelor enzime. Acest fenomen poate provoca anomalii lipidicen
esuturi.
Lipidele saponifabile. Gliceridele (grsimile neutre, acilglicerolii) reprezint esterii
glicerolului cu acizii grai, constituind grsimi de rezerv.
Acizii grai constitueni sunt rspndii destul de uniform n toate moleculele de triacilgliceroli
(TAG) mixte. Aceste lipide sunt mai uoare dect apa i nu se dizolv n ea. Fiind n stare
dehidratat i redus, TAG este o rezerv valoroas de energie metabolic. La oxidarea unui
gram se elimin 9 kcal, pe cnd la oxidarea glucidelor - 4 kcal; 1 g de glicogen uscat leag 2
g ap. Prin urmare, ntr-un gram de grsime se depoziteaz de 6 ori mai mult energie dect
ntr-un gram de glucide. Din greutatea total a omului (70 kg), TAG le revin 11. Dac
energia ar fi conservat numai n glicogen, greutatea corpului ar spori cu 55 kg.
Cerurile, esterii acizilor grai superiori cu caten liniar i
2-- 0 - C 0 - R ,
alcooli alifatici sau ciclici cu mas molecular mare. Ceridele I
sunt substane solide, amorfe, au caracter hidrofob, sunt - R?
secretate de epiderma animalelor i plantelor, formeaz un strat I
,- R,
protector mpiedicnd pierderea de ap. Sunt sintetizate i TAG
utilizate n cantiti mari de planctoane, ce se folosesc n hrana
unor peti de valoare.
Ceara de albine este un ester al acidului palmitic i al alcoolului miricilic (C30) -H 3C
(CH 2 ) 14- C 0 - 0 - C H 2 -(C H 2 )2 8 -C H 3. Spermacetul
reprezint un ester al acidului palmitic i al alcoolului CH3
CH3
c etilic (C 1 6 ) - H 3 C -(C H 2 ) 14 - C 0 - 0 - C H 2-
(CH 2 ), 4 -C H 3.
Lanolina, grasimea natural de pe ln de oaie,
este un ester al lanosterolului i agnosterolului cu
acizii grai. Lanosterolul este un compus tip dienic, OH
avnd i ali substitueni metilenici la C 4 i C 14. Lanosterol
Ceridele sunt constitueni ai unguentelor, cremelor,
de altfel utilizate n cosmetic, farmacie.
Fosfatidele, lipide structurale, nu se depoziteaz ca rezerv. La baza lor structural
se afl acidulfosfatidic. Organismele vii l conin n cantiti
mici n stare liber, fiind intermediar n metabolismul fosfatidelor. c h 2 - o - c o - r ,
Prin legarea grupei fosforil cu diveri alcooli rezult I
fosfatidele. Acizii grai nesaturai mai des formeaz esteri cu C 2 C H -O -C O -R ,
I /O '
din glicerol - acest atom devine asimetric cu L-configuraie. CH 2 - 0 - P - 0
II
2 OCOR,
Acid fosfatidic
CH C O R,
I /
2 2 N(CH 3 ) 3
I Lecitinele
Cele mai rspndite fosfatide sunt:
a) Fosfatidilcholinele (lecitine) conin cholina (OHCM, CH,N +(CH,)r
Aceste lipide au caracter amfipatic, proprieti tensioactive pronunate, fonneaz n
ap micelii, sunt neutre la electricitate ca i b)fosfalidiletanolamina (cefaiinele) ce se
conine din abunden n esutul nervos.
Cefaiinele, cu 2 resturi de palmitil, sunt componentele lipidice principale ale
surfactantului pulmonar, ce acoper alveolele i mpiedic colapsul la expirare.
Surfactantul include ntr-o proporie mare i fosfatidilglicerolul.
Fosfatidilglicerolul, fiind un lipid far azot, conine unul sau dou resturi de
fosfatidil legat de glicerol.
Difosfatidilglicerolul (cardiolipina) e unul din componenii membranei interne
mitocondirale.
CH2 O - C O - R ,
I
r 2- c o ~ o - c h o o
i li I!
CH2- O P - O -C H 2 R 4 c O CH 2
o" hoch Oh o - c o - r .
c h 2- o - p - o - ( ! : h 2
Difosfatidilglicerol (cardiolipina)
b) Fosfatidilserinele (acidul fosfatidic + serina) au o sarcin negativ.

c) Fosfatidilinozitolii, de asemenea, au o sarcin negativ, se gsesc n cantiti mari
n esutul nervos, existnd n dou fonne fosfatidilinozitol-4-fosfat (PIP,(4)) i
fosfatidilinozitol-4,5-difosfat (PIP,(4,5)), ce joac
roluri importante n procesul de emitere a mesajelor
extracelulare.
d) Plasmalogenele (alchenilfosfatide) sunt nu
meroase n muchi i nervi, de , este legat un enol
alifatic superior, iar mai frecvent, ca alcool azotat, este _
etanolamina.
Fosfolipazele sunt enzime ce scindeaz Fosfatidilinozitol
fosfolipidele. FosfolipazaA, - se conine n veninul
de arpe; catalizeaz specific hidroliza acizilor grai n poziia doi, formnd lizofosfa-
tide ce distrug membranele (n stare nonnal nu sunt toxice).
Fosfolipaza hidrolizeaz lipidele n po-
CH 2 - 0 C H = C H - (C H 2)15- CH 3 Zla 1 i 2 sau numai h poziia \, fosfolipaza
hidrolizeaz acidul fosforic cu glicerolu 1.
CH R n consecina aciunii fosfolipazei D, se
ru _ _ - _ _ _ Urmeaz acidul fosfatidic.
2 2 2 3 n membranele plasmatice ale diverselor
O Plasm alogena eucariote unicelulare, fosfatidele sunt
reprezentate de fosfonolipide. Aceste lipide sunt caracterizate printr-o legtur fosfor-
carbon (2 -aminoetil-fosfonolipid) analogic cu fosfatidiletanolamina.
La aceast grup de lipide se refer i endocanabinoidele care se deosebesc structural
de endorfme (natur peptidic). Endocanabinoidele sunt derivate ale acidului arahidonic.
Principalii compui sunt arahidonil-N-etanolamina (grupa COOH a acidului arahidonic
este legat de grupa aminic a etanolaminei) i 2-arahidonil-glicerol (grupa COOH a
acidului arahidonic formeaz legftira esteric cu grupa alcoolic secundar din glicerol).
Aceti compui sunt prezeni n esuturile (creier, inim, rinichi, ficat, piele) mamiferelor,
n aceste esuturi 2 receptori (CB 1 i CB2) fixeaz aceti compui. Derivaii etanol
aminei sunt recunoscui de CB 1, cei ai glicerolului - de CB 1 i CB2. Ambii receptori
sunt cuplai cu G-proteinele, activndu-le sau inhibndu-le. O parte din endocanabinoide
pot conine i acizi grai cu caten mai mic: acidul miristic (14:0) sau acidul lauric ( 1 2 :0 ).
Receptorii reacioneaz la aceti compui n concentraii mari. Se consider c n creierul
mamiferelor ei joac un rol protector antioxidant.
Sfingolipidele, constituenii structurali ai
membranelor, sunt derivai ai unui H3 C (CH2 )i2 CH = CHCHOH
am inoalcool superior - sfing o zin a _ _ '
(dihidrosfingozina - sfmgonina), legat prin 3 ^ 2n
grupa aminic cu acidul gras i formnd C e ra m id a CH2OH
ceramida.
Exist dou categorii de sfingolipide:
1) Sfingomielinele - componente ale substanei nervoase albe n nervii periferici;
conine o ceramid legat de un rest de fosforilcholin. Structura lor se difereniaz prin
natura ceramidei n care se pot amidifica diveri acizi (lignoceric, nervonic etc.)
CH 3 - ( C H 2 ) 1 2 - C H = C H - C H - O H (j>
R - C O - N H - C H - C H 2- O - P - 0 - C H 2 - - ^
Sfmgorrrielina
2) Glicosfingolipidele care includ ceramida legat glucozidic de monozaharide (C6)

sau oligozaharide.
a) Cerebrozidele se afl n cantiti mari n substana alb a creierului, n nervi. Cera
mida e legat cu -galactoza; n calitate de acid gras, se utilizeaz acidul lignoceric
(C,4). Cerebrozidele mixte conin 2,3,4 resturi de zahr.
CH2OH
Q
-O -C H 2 9
I II
OH H C NHC R
1/
HCC H = C H (CH 2 ) 1 2 CH 3
OH
Cerebrozida OH
b) Glucocerebrozidele conin constitueni ai membranelor celulelor (nu nervoase'
glucidul de baz este glucoza. Denot caracter amfipatic i nu au sarcini electrice.
CH2OH
O
HO -2 o
OH
H C -N H -C -R
I
H C - C H = C H - ( C H 2)i2CH3
I
Ghicocerebrozida OH
i
c) n creier, galactocerebrozidele mai conin i resturi sulfat legate esteric de
galactoz -sulfai dele, ionul - 0 S 0 3e legat cu atomul 3 din galactoz.
CH2OH
O -0 - C H 2 o
OSCh H t-N H -C -R
j /
H C - C H = C H - (CH2) 12CH 3
OH
Ah S u lfatid a
d) Gangliozidele sunt glicolipide ce conin unul sau mai multe resturi de acid sialic
(NANA), care la pH=7,0 comport sarcin negativ. Ele, la rndul lor, se clasific i
se identific dup numrul resturilor de acid sialic (GM,GD, GT).
CH2OH
( si -----O.
CH2OH
HCOH
I
HCOH
Natura oligozaharidului este desemnat printr-un indice numeric, 5-n (n-numml
de uniti hexozil). Se situeaz pe suprafaa exterioar a membranelor, fragmentelor
receptorice specifice, mai ales n locusul de fixare a moleculelor de neuromediator n
timpul procesului de transmitere chimic a mesajului de la o celul nervoas la alta.
Lipidele nesaponifiabile. Aceste lipide au o structur poliizoprenic, cu un grad
mai mic sau mai mare de nesaturare, manifest funcii oxigenate. Aceast grup include
terpenele, carotenoizii (a, , ) i steroizii.
Aldchida vit. A (rctinal)

i
..... 2 H
> W '
- - Acidul retinoic
Vitamina A (retinol)
HoC
CCH = CH 2
H3C
Izoprena
Scualena
(6 uniti izoprenice)
Terpenele (hidrocarburi poliizoprenice) intermediare, n cantiti mici, particip la

biosinteza colesterolului (scualenul), vit. , E, ubichinonei. Un numr major de compui
sunt prezeni att n lumea vegetal, ct i animal, n bacterii, sub forma polimerizrii
unitilor de izopren.
Carotenoizii din materia vie se afl: a) n stare liber solubilizai n lipide i sub form
de microcristale; b) n diverse combinaii cu protide, lipide sau cu glucide
(carotenoproteide; esteri carotenoidici i glicozide carotenoidice). Biosinteza
carotenoizilor nu are loc n organismul omului i animalelor. Aportul de carotenoizi este
asigurat de resursele alimentare. Fiind absorbite i metabolizate n organism se formeaz
,
CHj
,0'/ (,
2 == , -II

Ubichinona-cocnzima Q

: 2 = 2 )
Plastochinona
2 2 2^2 2 2 J
Filochinona (vitamina )
S tru c tu ra izo p ren u lu i i diverse h id ro ca rb u ri derivate
carotenoizii specifici proprii. Carotenoizii sunt considerai aparteneni ai clasei terpenoizilor.

Unitatea structural de baz este izoprenil pirofosfatul. n alta clas se includ i derivai:
fitolul, vitaminele A,E,K, chinonele .a.
Steroizii sunt compui ai ciclopentanperhidrofenantrenei i conin grupa OH la C,,
o caten alifatic din 8-10 atomi de la C 17. Colesterolul este cel mai important sterol
din regnul animal i component esenial al tuturor structurilor membranare. Exist n stare
liber sau esterificat cu acizi grai, fiind precursorul tuturor celorlali compui
steroidici, formnd steride, mai des n poziia 3 este esterificat cu acizi grai nesaturai.
La oxidarea colesterolului, se fonneaz 7-dihidrocolesterol (provitamina DJ. In aceast
gnip intr i acizii biliari - componeni ai bilei.
Structura diverilor steroizi
Una dintre cele mai active substane cancerigene extrase din bil e metilcolan-
trena. Proprieti analoage poate avea i produsul metabolizrii testosteronului.
Aceti intermediari se inactiveaz normal n ficat graie oxidrii microzomale.
Acizii biliari. Organismul uman nu dispune de enzime care degradeaz nucleul
sterolic. O modalitate de metabolizare a colesterolului este sinteza hepatic a acizilor
biliari. n mod normal, biosinteza i aportul alimentar de colesterol se afl n echilibru cu
pierderea zilnic a colesterolului sub form de acizi biliari i derivai ai acestora.
Sinteza acizilor biliari primari are loc n ficat i implic aciunea coordonat a mai
multor enzime diferite, localizate n diverse compartimente intracelulare. Are loc hidroxilarea
n poziiile 7a i , apoi izomerizarea funciei alcool (C3-a), cu saturarea n poziia 5-
6. Catena lateral este scurtat, conducnd la generarea de propionil-CoA i utilizat, n
consecin, n ciclul Krebs.
Srurile biliare au eficien mai mare n emulsionarea i digestia lipidelor, comparativ
cu acizii biliari. Aceasta se datoreaz faptului c srurile biliare au pK mai sczut dect
acizii biliari. Spre exemplu, pK pentru acizii biliari este de aproximativ 6, pentru derivaii
glicoconjugai - aproximativ 4 i pentru srurile conjugate cu taurina este de aproximativ
2. Scderea pK se explic prin creterea procentului de molecule prezente n form
ionizat la pH-ul intestinal de aproximativ 6, ceea ce permite o mai bun solubilizarc a
lipidelor. Srurile biliare nu sunt absorbite mpreun cu lipidele alimentare, ci dispun de
un transportator specializat care asigur absorbia lor la nivelul ileonului. Majoritatea
srurilor biliare sunt reabsorbite, transportate prin vena port i recaptate de ficat, care
le elimin din nou n fluxul biliar. Astfel se formeaz circuitul hepato-entero-hepatic al
srurilor biliare. Srurile biliare care nu au fost absorbite n ileon ajung n colon, unde
sunt deconjugate de ctre bacteriile intestinale. Printr-o reacie de dehidrogenare (n
poziia C7-oc) rezult acizii biliari secundari: acidul litocolic (hidroxilat n poziia C3) i
acidul dezoxicolic (hidroxilat n poziiile C. i ,). Acetia sunt parial absorbii la nivelul
colonului i reutilizai de ficat, dup captare i reconjugare.
C olesterol Duodenul
Ficatul
SABP-
T aurina
SABS SABP
Glv^/
'aurina
Vena port
C irculaia portal (15-30 g/zi)

/ Excreia
fecal (0,5 ;
Circuitul hepato-entero-hepatic al acizilor i srurilor biliare

Not: ABP - acizii biliari primari; ABS - acizii biliari secundari; SABP - srurile acizilor biliari
primari; SABS - srurile acizilor biliari secundari
Circuitul hepato-entero-hepatic are rolul de a economisi necesarul de colesterol

pentru sinteza acizilor biliari. Acizii biliari prezeni n organism totalizeaz aproximativ 2-
4g, dar reciclarea lor pennite deversarea n intestin a 12-32 g de sruri biliare/zi. Fraciunea
care se pierde prin eliminare fecal (aproximativ 0,5 g/zi) este compensat de sinteza
hepatic. Reglarea biosintezei acizilor biliari este corelat cu cea a colesterolului.
M EM BRANELE BIOLOGICE
Membranele biologice reprezint structuri superorganizate, posednd constituenii
de baz-proteinele i lipidele. Joac un rol decisiv la vitalitatea celulelor, separndu-
le de mediul extern i determinnd individualitatea lor. Membranele nu prezint un
obstacol rigid, ci o barier de permeabilitate selectiv de o sensibilitate aparte, coninnd
pompe moleculare specifice i canale. Aceste sisteme de transport regleaz
componena molecular i ionic a mediului intracelular.
Funciile de baz sunt multiple, complexe i dinamice:
1. Pentru celul, la fel ca i pentru compartimentele ei, membranele ndeplinesc funcia
de barier mecanic, dar nu inert, static. Membranele sunt flexibile, labile, pennanent
se nnoiesc, rmnnd elastice i dure la deformare. Celulele eucariote ntrunesc i
membrane interne, ce separ organitele-m itocondriile, lizozomii. Specializarea
funcional n procesul evolutiv e indispensabil de formarea segmentelor intracelulare
separate, numite compartimente ce asigur o individualitate specific.
2 .0 funcie central e permeabilitatea selectiv, cuplat cu meninerea homeosta-
zei intracelulare. Deplasarea ionilor i a substanelor prin membrane poate fi pasiv,
far utilizarea energiei, favorizat de difuzia dup gradientul de concentraie sau electric.
Transportul activ contra potenialului chimic sau electric are loc o dat cu folosirea
ATP. Aceste sisteme de transport asigur transferul n celul al moleculelor specifice de
substane nutritive organice-glucoza i ali ioni sau produse rezultante ale lor.
3. Generarea potenialului bioelectric, conducerea excitaiei. E stabilit c suprafaa
membranelor posed grupe electrice cu anumit sarcin, ce favorizeaz transmiterea
impulsului sub forma unor modificri n undele electrice, de-a lungul axonului sau celulei.
4. Membranele ndeplinesc i o funcie metabolic nsemnat, determinat de asociaii
multiple de enzime sau sisteme enzimatice situate pe suprafaa lor, ce difer pe ambele
pri. Procesele de transformare a energiei din cadrul sistemelor biologice se produc
n sistemele membranare, ce conin complexe de enzime integrale i proteine. Spre
exemplu: fotosinteza, proces de transformare a luminii n energia legturilor chimice, are
loc n membranele interne ale cloroplastelor sau fosforilarea oxidativ, ce nsoesc oxidarea
substanelor organice, cu formarea de ATP n membrana interna a mitocondriilor.
5. Membranele regleaz schimbul de informaie
ntre celule i mediul ambiant. Posed receptori
specifici, ce sesizeaz excitanii exteriori.
Interaciunea celular este efectuat de membrane.
Acest schimb de informaie are loc n timpul
contactelor intercelulare, structuri specializate
form ate din m em brane citoplasm atice i
com ponente ale straturilor prem em branare.
Contactelor intracelulare le este proprie o mic re
zisten electric, cu o permeabilitate mare, ceea
ce permite realizarea interaciunii prin difuzia
substanelor n mediul respectiv sau prin transfer Figura 5.1. Aranjarea moleculelor
direct. n micel
Actul primar const n identificarea semnalului receptorilor
specifici dc pe membran. Receptorii, dup structur, constituie
glicoproteide. Transfonnarea mesajelor chimice n forma
preluat de celul are loc cu participarea adenilat- sau
guanilatciclazelor, situate pe reversul membranei. Generarea
semnalului chimic sau electric este un argument care justific
rolul elocvent al membranelor n sistemul de comunicare
biologic.
6. Membranele dispun de locusuri de sesizare specific
nu numai la hormoni, dar posed i locusuri specifice
caracteristice pentru fiecare individ sau specie, denumite locusuri
ale compatibilitii tisulare.
Proprietile generale ale mem branelor biologice
Ele difer dup structur i funcie, dar atest i proprieti
comune:
F igura 5.2. Tipuri de
1. Reprezint o structur plat cu o grosime de cteva
micele molecule, formnd barier integr ntre compartimente, cu
lungimea aproximativ de 60 - 100 .
2. Componena lor de baz sunt lipidele i proteinele. Raportul dintre ele variaz
de la 1:4 pn la 4:1. Constitueni ai membranelor sunt i glucidele.
3. Lipidele sunt reprezentate de molcculc relativ mici, ce conin grupe hidrofile i
hidrofobe. n soluie apoas, spontan formeaz straturi bimoleculare nchise. Bistratul
lipidic e o barier pentru compuii polari. Un segment cu dimensiunile lx l mkm ntrunete
aproximativ 5-106 molecule de lipide.
4. Membranele i restabilesc automat integritatea la lezarea mecanic, imediat se
nchid, se autorestabilesc.
5. Funcia membranelor e determinat de proteine specifice, ce ndeplininesc rolul de
pompe, canale, receptori, enzime transformatoare de energie. Proteinele se intercaleaz
n stratul bilipidic- mediu, necesar pentru activitate.
6. Membranele reprezint structuri necovalente, supermoleculare; constituenii
membranei sunt asamblai datorit interaciunilor multiple necovalente, cooperatoare
dup caracter.
7. Membranele sunt asimetrice, suprafaa lor intern i extern difer radical.
8. Membranele prezint structuri fluide. Dac componentele bilipidice sau proteice
nu se fixeaz ntr-un loc anumit, prin intermediul forelor specifice de interaciune, apoi
ele uor difimdeaz n planul membranei.
9. Membranele sunt soluii bidimensionale, dirijate de ctre proteine i lipide ntr-un
mod anumit.
Structura
Lipidele. Proprietile lipidelor din membrane difer ntr-att net induc erori eseniale.
Viabil, ns, este principiul general al organizrii structurale: lipidele membranare sunt compui
amfipatici. Moleculele lor posed proprieti hidrofile i hidrofobe. Ele pot fi exprimate
n felul urmtor: partea hidrofil-capul p o lar-se reproduce n form de cercule,pe
cnd catena hidrocarburic- n linii ondulate. Se isc ntrebarea fireasc: cum se
comport glicolipidele sau fosfolipidele n soluie apoas? Capetele hidrofile sunt
compatibile cu apa, pe cnd cozile resping apa. n soluie apoas formeaz micele, n
care capetele se afl la suprafa, pe cnd cozile-nuntru (fig.5.1; 5.2). E posibil io
alt organizare, care ar satisface aceste cerine: formarea stratului bimolecular sau
bistratului lipidic. S-a constatat c n soluii apoase se formeaz anume stratul bilipidic
i nu micele. O atare preferin pentru bistrat are o nsemntate esenial n biologie.
Micela posed un diametru mai mic dect 200 , pe cnd straturile lipidice pot atinge
valori macroscopice - pn la 1 mm (107). Fosfo- i glicolipidele servesc drept
constitueni- cheie ai membranelor anume datorit capacitii de a forma straturi
bimoleculare, care, fiind n stare fluid, ndeplinesc funcia de barier a permeabilitii
( fig-5.3; 5.4).
Cum se formeaz i care sunt forele ce favorizeaz asamblarea lor?
Formarea bistratului lipidic se realizeaz prin autoasamblare. Cu alte cuvinte, capa
citatea de a forma bistratul e determinat de structura moleculelor lipidice i de
proprietile lor amfipatice. Formarea lor n ap se produce spontan. Fora princi
pal ce asigur autoasamblareae interaciunea hidrofob. Pe msur ce cozile hidro
carburilor lipidelor membranare nimeresc n partea intern, nepolar a bistratului, ele
pierd moleculele de ap ce le nconjurau. Eliminarea apei mrete entropia sistemului.
ntre cozile hidrocarbonate apar interaciunile Van
der Waals, ce favorizeaz mpachetarea lor mai com
pact n bistrat. Formarea e cauzat de apariia legtu
rilor electrostatice i de hidrogen ntre capetele polare
i moleculele de ap. n stabilizarea bistratului iau 5nm _ 15nm
parte aceleai fore care asigur interaciunile molecu
lare n sistemele biologice. ^
B istratu l m ai posed o p a rtic u la rita te -
cooperativitatea lui structural. Integritatea lui este
determinat de multiple interaciuni necovalente, ce se
amplific reciproc. F igu ra 5.3.
F igura 5.4. Aranjarea lipidelor n micel (a), bistrat (b) i lipozom (c)
Fosfo- i glicolipidele formeaz n ap clastere (conglomerai), n care contactul
lanurilor hidrocarbonate cu apa este redus Ia minimum. Aceti factori energetici au
n consecin trei efecte biologice de o valoare major: 1) tendina de a-i mri
suprafaa; 2) capacitatea de a se izola (nchide n sine) n aa mod, nct la capete s nu
rmn cozi ce ar putea interaciona cu apa. Datorit acestei proprieti apare un
spaiu izolat (compartiment); 3) straturile bilipidice sunt capabile s se autosudeze, s
se autosigileze, deoarece orice gaur din strat nu e convenabil energetic.
Studierea permeabilitii bistraturilor lipidice s-a efectuat n dou sisteme artificiale:
lipozom i membrane bimoleculare plate, numite membrane negre. Lipozomii reprezint
o faz apoas n stratul bilipidic, fiind formai la amestecul rapid al apei cu soluia de
lipide i etanol (la introducerea acului subire al seringii se formeaz bule aproape
stenice, cu un diametru de aproximativ 500 . Dac apa conine ioni sau molecule, se
va atesta n faza apoas a lizozomului). Exemplu: Dac lipozomii cu diametrul de 500
se formeaz n soluie de 0,1 mol glicin, apoi n interiorul fiecrui lipozom se vor afla
aproximativ 2000 molecule de glicin. Analiznd viteza de ieire a glicinei din
compartimentul intem al lizozomului n mediu, detenninm permeabilitatea membranei.
Lipozomii prezint interes nu numai pentru studiul permeabilitii. Ei sunt capabili
de o alipire cu membranele plasmatice ale diferitelor celule. Aceast proprietate ofer
mari posibiliti pentru introducerea n celule a diferitelor substane incapabile s traverseze
membranele. O alipire selectiv la celulele de anumit tip poate fi uor utilizat pentru
aportul controlat al medicamentelor n celuleie-int.
Investigaiile n aceast direcie au demonstrat c membrana lipidic bistrat are o
permeabilitate mic pentru ioni i pentru majoritatea moleculelor polare. Abatere
prezint numai apa ce trece uor prin membrane.
Strucrura canalului K~ la Streptomyces lividans. Transportul moleculelor II f i prin aquaporine

Cerculeele mari ionii de K*, mici moleculele de 11,0
Doar recent (2004) s-a stabilit c n membrane sunt prezente proteine (aquaporine),
care posed o permeabilitate selectiv pentru ap i sunt absolut impermeabile pentru
ali ioni, inclusiv protonii. Aquaporinele au o mas molecular de aproximativ 30 kDa i
se gsesc n form de tetrameri. Se ntlnesc n organismele vii i au un rol important.
Sunt descrise 5 tipuri de aquaporine (AQP-1,2,3,4,5) prezente n diferite esuturi. AQP-
1 i AQP-3 sunt necesare pentru funcionarea normal a rinichiului (reabsorbia apei n
tubii proximali, distali i colectori). In diabetul insipid nefrogenic sunt descrise AQP-2,
ce detennin permeabilitatea apei n duetul colector renal. AQP-4 regleaz reabsorbia
lichidului cerebro-spinal n sistemul nervos central i n edemul creierului. AQP-5 iau
parte la secreia lichidului glandelor salivare, lacrimale i epiteliului alveolar pulmonar.
Densitatea aquaporinelor n membranele plasmatice e de 2 x 105copii /celul. AQP-1
aranjat n membran prezint 6 segmente helicale transmembranare. Canalul tetrameric
transmembranar are un diametru de ~ 3, suficient pentru trecerea moleculelor de ap,
cu o capacitate de 5 x 108molecule /sec.
Dereglrile n activitatea acestor proteine, de altfel, ca i defectele genetice conduc la
patologii grave. Analiza RS a aquaporinelor a depistat prezena unei structuri deosebite
de cea a canalelor de K+. n membrane se formeaz un canal ngust, cu aranjarea central
a 2 ncrcturi pozitive tipice aquaporinelor. Trecerea att a catonilor, ct i a anionilor
prin acest canal este imposibil datorit dimensiunilor mici, iar prezena sarcinii pozitive
stopeaz i circulaie protonilor.
Coeficienii permeabilitii pentru compuii micromoleculari coreleaz cu raportul
solubilitii lor n solveni nepolari fa de solubilitatea n ap. Aceast dependen ne
permite s credem c compuii micromoleculari trec prin membrana bistrat n felul
unntor: pierd n prealabil pelicula apoas, apoi se dizolv n stratul intern hidrocarbonat
al membranei, cu difuzia ulterioar prin acest strat spre cealalt parte, unde din nou se
dizolv n ap.
Majoritatea proceselor membranare sunt determinate de proteine. i dac lipidele
membranare formeaz bariera permeabilitii i asigur crearea compartimentelor
unice, apoi proteinele specifice asigur funcii specifice membranelor ca: transportul,
transmiterea informaiei, transformrile de energie. Lipidele creeaz mediul necesar pentru
aciunea acestor proteine.
n structura membranelor, la o molecul de protein revin 50 molecule de lipide. La
proteine, de asemenea, se pot identifica fragmente hidrofobe i hidrofile. Grupele
polare formeaz legturi ntre ele n cadrul lanului polipeptidic, ce penetreaz bistratul.
Un numr redus de proteine sunt cufundate parial. Membranele difer dup coninutul de
proteine. Mielina, de exemplu, conine puine proteine -18%. Majoritatea membranelor
celulare ns manifest o activitate cu mult mai intens, iar cantitatea de proteine evolueaz
la 50%. Membranele interne ale mitocondriilor, adic locul de transfonnare a energiei,
conin 75% de proteine. Experimental s-a argumentat c membranele cu funcii diferite
difer dup cota de proteine.
Unele dintre proteinele membranare pot fi uor separate prin intermediul unei soluii
cu for ionic mare ( IM NaCl), altele sunt bine fixate cu membrana i pot fi separate
prin aplicarea diferiilor detergeni sau solveni organici. Dat fiind duritatea fixrii cu
membrana, proteinele corespunz
toare se claseaz n periferice i Modificri
integrale (fig.5.5). ageni
ureea, CO^-
U ltim ele form eaz legturi
multiple cu catenele hidrocarbonate proteina
Proteina periferic
ale lipidelor membranare i, deci,
pot fi separate cu ajutorul agenilor
ce concureaz nelimitat n aceste
interaciuni nepolare.
Proteinele periferice sunt legate
cu membranele de fore electro
statice i de hidrogen. Aceste inter
aciuni polare sunt uor afectate de
adaosul de sruri sau de modificrile
_t F igu ra 5.5. Proteinele integrale i Periferice, ultimele
' sunt ataate covalent la lipidele membranare
Conform ultimelor investigaii, giicoziifosfatidiiinozitoi
proteinele periferice, n majoritatea lor, sunt asociate la suprafaa proteinelor
integrale. Mai profund sunt studiate proteinele membranei eritrocitelor: spectrina
are o cot de 30% din masa proteinelor membranei eritrocitare i e compus din 2
lanuri polipeptidice, ce formeaz o reea de filamente pe suprafaa intern a
membranei eritrocitare. La generarea acestei reele particip activ i o alt protein mai
puin studiat. Reeaua contribuie la formarea i meninerea formei concave a eritro-
citului i, concomitent, admite unele deformri la trecerea lui prin capilarele nguste.
Figura 5.6. Secvena aminoacidic i localizarea transmembranar a glicoforinei A eritrocitare. Un domeniu

hidrofil, cu resturi de glucide, este aranjat n exteriorul membranei, iar celalalt - in partea interioar.
Hexagonele reprezint tetrazaharide (conin cte dou molecule de acid sialic). Segmentul hidrofob form at
din 19 resturi aminoacidice (75-93) se aranjeaz n form de a -spiral, traversnd stratul bilipidic
Glicoforina - proteina trans-
membranar compus dintr-un lan
polipeptidic, cu 131 resturi de
aminoacizi, localizat preponderent
n interiorul membranei, posed 16
uniti oligozaharidice i conine mai
mult de 90% de acid sialic.
Glucidelor le revine mai mult de
60% din masa acestei proteine.
Are trei domenii. Se consider c
un eritrocit conine 6x105molecule
de atare protein, funcia creia nu
e stabilit definitiv (fig.5.6).
Canalul anion pentru HCO,' si
Cl' reprezint un dimer de protein
oi 1 / A F igura 5.7. Canatul eritrocitar anion cluor-bicarbonat.
l ocupa 1/4 din toata proteina Pf oteinele membranare su n tflxa te covalent deproteineie
membranei. Are o mas de 95 kDa citoscheletului (spectrina i ankirina) limitnd mobilitatea
i e localizat pe ambele pri ale lateral. Ankirina covalent se leag de catenapalmitatului
. 1 1 membranar. Spectrina, protein filamentar,juncioneaz
membranei. Moleculele proteice cu complexulactinei. Graie legtureispectrinei membrana
sunt la fel orientate spre centrul este protejat de deformaie
membranei (fig.5.7).
Studiul roentgenostmctural a determinat structura tridimensional a proteinelor inte
grale membranare. Cercetrile membranei purpurii a bacteriilor localizate n mediul
salin i-au pennis lui R.Henderson i N.Unwin s reconstituie configuraia tridimensiona
l a acestei proteine membranare, care const n urmtoarele: membrana e specific,
coninnd bacteriorodopsin, o protein cu masa de 25 kDa, ce transfer energia
luminii n gradientul protonic transmembranar, utilizat pentru sinteza ATP (fig.5.8).
Extern Aminoterminal
Intern
Carboxiterminal
F igura 5.8. Bacteriorodopsin - aranjarea spaial n membran. Catena polipeptidic prezint 7 a-
spirale hidrofobe n care fiecare din ele traverseaz stratul bilipidic perpendicular, form nd clastere, cu
componenta aci! a lipidelor membranare. Pigmentul retinal este n contact cu unele segmente ale acestor
a-spirale
Proteinele acestei membrane conin 7 a-spirale fixate rigid, ce cad perpendicular pe
suprafaa membranei, ocupnd n lime 45. Spaiul dintre moleculele proteice este com
pletat cu bistrat lipidic. E posibil ca acest principiu de organizare s fie utilizat n organizarea
altor proteine integrale.
n membranele celulelor de eucariote se conin de la 2 pn la 10% de glucide n
formdeglicolipideiglicoproteine. Glicolipidele sunt compui ai sfingozinei, cu unul
sau mai multe resturi de zaharun. Glicoprotcinele, n membrane, sunt fixate prin una
sau mai multe catene glucidice cu catenele serinei, treoninei sau asparaginei, prin N-
acetilglucozamin sau N-acetilgalactozamin. Studiile efectuate au confirmat c n toate
celulele mamiferelor studiate resturile de zahr n membranele plasmatice se localizeaz pe
partea lor exterioar (fig.5.9). Termenul glicocalixul este utilizat pentru accentuarea
unei zone periferice de pe suprafaa majoritii celulelor eucariote saturate de glucide.
Mai frecvent se ntlnesc: galactoza, manoza, fucoza, galactozaniina, fucozamina, acidul
sialic. Glucidele sunt covalent legate de proteine, situate pe suprafaa celulei, i de unele
molecule lipidice din monostratul lipidic exterior.
Catena oligozaharidic n glicoprotein
Glicolipid
Extern
Fosfolipid polar
Colesterol Intern
Proteine^
periferice
Proteine Proteine
integrale Proteine periferice integrale
covalent fixate de lipide
F igura 5.9. Modelul memhranar fluido-mozaic Singer-Nicolson
Grupele glucidice servesc probabil pentru orientarea glicoproteinelor n mem

brane. Posednd proprieti hidrofile pronunate, resturile de glucide din glicoproteine
i glicolipide trebuie s fie situate pe suprafaa membranei, dar nu n faza hidrocarbona-
t. Cota valorii energetice pentru nglobarea lanului ologozaharidic n mediul hidrofob
e destul de nalt. De aceea funcioneaz o anumit barier n calea liber a
glicoproteinelor membranei.
Componentele glucidice ale glicoproteinelor membranare favorizeaz meninerea
asimetriei membranelor biologice. Glucidele joac un rol important n stabilizarea
spaial a structurii glicoproteinelor. Lanurile glucidice permit proteinelor transmembranare
s se ancoreze i s se deplaseze ntr-un mod anumit n membrane, fapt ce exclude
detaarea proteinelor de membrane.
Glucidele de pe exteriorul celulei au funcia de identificare intercelular. de formare a
esuturilor, de detectare a celulelor strine sistemului imun. Anume glucidele ofer
posibiliti poteniale pentru crearea multiplelor structuri difereniate. Numrul impuntor
de variante poate fi explicat prin:
1) asocierea ntre ele a monozaharidelor prin oricare hidroxil al lor;
2) racordarea la C, poate fi ot-sau - configuraie;
3) ramificaia multipl (din 3 monozaharuri se pot obine 1000 i mai bine de
trizaharide-structuri mult mai numeroase dect sunt posibile din 3 aminoacizi).
Glucidele dirijeaz i interaciunea intercelular. Transportul proteinelor membranare
n locusurile necesare este de asemenea determinat de glucide.
Fluiditatea
Membranele biologice nu sunt structuri statice, ci dimpotriv. Att lipidele, ct i
multe proteine membranare se rotesc permanent n jurul osiei sale, perpendicular planului
bistratului (difuzia de rotaie). Ambele structuri circul n direcie lateral. Experimental
s-a demonstrat c molecula de lipid se deplaseaz de la un capt al celulei la cellalt
(celula bacterian) timp de 1 sec. Proteina din membran poate difunda la o deprtare
de civa microni ntr-un minut. O astfel de micare e denumit difuzie lateral. Spre
deosebire de lipide, proteinele sunt foarte neomogene n raport cu aceast difuzie.
Unele sunt mobile la fel ca i lipidele, altele, practic, staioneaz. Mobilitatea nensemnat
a unor proteine e cauzat de fixarea lor n structurile citoplasmatice submembranare.
Viscozitatea membranelor e de 100 de ori mai mare dect a apei i e aproape de
viscozitatea uleiului de msline. Migrarea spontan a lipidelor de pe o suprafa pe alta
are loc foarte ncet, comparativ cu circularca lor n planul membranei. Aceast migrare e
denumit difuzie transversal. O molecul Hpidic poate difuza odatladousptmni
i mai rar. Difuzia moleculelor n planul membranei, denumit difuzie lateral, e mult
mai frecvent (IO7ori ntr-o secund). Recent, aplicnd metoda rezonanei electronice
paramagnetice, s-a observat c circularea unei molecule de fosfolipid de pe o parte a
bistratului pe cea opus are loc o dat la cteva ore. Ea necesit o durat de timp de 109
ori mai mare dect difuzia la distan similar n direcia lateral.
Bariera energetic la difuzia transversal a moleculelor proteice e mai durabil dect
a lipidelor, deoarece proteinele conin cu mult mai multe fragmente polare. Practic,
difuzia aproape c nu se manifest, ceea ce determin o duritate mai mare a asimetriei
membranei.
Majoritatea membranelor sunt asimetrice, adic suprafeele lor posed valori diferite.
Aceast asimetrie se manifest prin urmtoarele trsturi caracteristice:
1) Suprafeele intern i extern ale membranelor plasmatice din celulele bacteriene
sau animale difer dup componena lipidelor polare. De exemplu, partea intern a
stratului lipidic din membranele eritrocitelor omului conine fosfatidiletanolamin i
fosfatidilserin, pe cnd cea extern-fosfatidilcholin i sfingomielin. Sensul biologic
const n asimetria lipidic ce asigur orientarea precis a proteinelor membranare n
bistrat.
2) Unele sisteme de transport n membrane funcioneaz numai ntr-o singur direcie
- transferul Na+din celul n mediu, iar K+- n celul, utiliznd energia hidrolizei ATP.
Pompa dat nu funcioneaz n direcie opus.
3) Pe suprafaa extern a membranelor plasmatice sunt situate multiple grupe
oligozaharidice, ce reprezint capul glicolipidelor i catenele laterale ale glicoproteine-
lor. Pe partea intern a acestor membrane ele, practic, lipsesc. Asimetria glicolipidic
este absolut. Rolul asimetriei nu este stabilit definitiv, ns comunicarea intercelular
este determinat de aceste structuri.
Ce factori regleaz fluiditatea membranelor?
Evident c n bistratul membranar catenele acizilor grai din moleculele lipidelor
se afl ori n stare rigid, sistematizat i relativ haotic, sau n stare fluid. In stare
reglementat toate legturile C-C sunt n trans - conformaie, n cea fluid - cis. La
creterea temperaturii, mai nalt dect cea de topire, are loc transformarea strii din
solid n lichid.
Reglatorul principal la procariote este lungimea catenei i gradul de nesaturare a
restului acil. La celulele eucariote reglatoml-cheie al fluiditii e colesterolul: fiecrei
molecule de fosfolipid i revine o molecul de colesterol. Situndu-se ntre catenele acil,
colesterolul, pe de o parte, evit cristalizarea i fuziunea lor, iar pe de alta - blocheaz
mobilitatea excesiv a catenelor acil, micornd fluiditatea membranelor. Datorit acestui
efect contrar, colesterolul menine fluiditatea membranelor la un nivel mediu.
Molecula colesterolului e orientat astfel: grupa -OH se situeaz n apropierea
capului polar al fosfolipidului, pe cnd inelul steroid plat parial imobilizeaz fragmentele
catcnelor hidrocarbonate, ce au contact nelimitat cu grupele polare.
Colesterolul inhib circulaia fazic n gel sau cristale legat de modificrile de
temperatur din lichid. Colesterolul mrete duritatea mecanic a membranelor. Lipsa
lui din lichidul de cultivare al celulelor conduce la liza celulelor, iar surplusul de colesterol
contribuie la supravieuirea lor.
Ce model, n linii generale, ar elucida organizarea membranelor biologice? E
utilizat modelulfluido-mozaic, propus n 1972 de savanii J.Singer i G.Nicolson.
Confonn acestui model, membranele reprezint soluii bidimensionale, n anumit mod
orientate, ale proteinelor globulare i ale lipidelor (fig.5.9).
Tezele principale sunt:
1) majoritatea fosfo- i glicolipidelor formeaz bistrat, avnd un rol dublu: constituie
solveni simultani pentru proteinele integrale din membran i barier a penneabilitii;
2) o mic parte din lipidele membranare se leag specific cu anumite proteine
membranare i, incontestabil, este necesar pentru funcionarea acestora;
3) proteinele membranei difundeaz liber n matricea lipidic n direcie lateral, dar
nu pot transversa, deplasndu-se de pe suprafee;
4) la temperatura normal a celulei, matricea se afl n stare fluid, fiind asigurat
de un anumit raport dintre acizii grai saturai i cei nesaturai n cozile hidrofobe ale
lipidelor polare, precum i dc prezena colesterolului;
5) suprafaa proteinelor integrale incluse n membran conine R-grupe hidrofobe
ale resturilor de aminoacizi, datorit crora proteinele devin solvente n partea central
hidrofoba bistratului. Pe suprafaa periferic a celulelor se posteaz grupe hidrofile,
care adiioneaz la capurile polare hidrofile, ce conduc sarcina electric n baza
foielor electrostatice;
6) proteinele integrale (enzimele, proteinele transportatoare) manifest aciune numai
n cazul n care sunt situate n partea hidrofob a bistratului, unde capt o anumit
configuraie spaial, necesar pentru activitate. De menionat c nici ntre moleculele
lipidice, nici ntre cele proteice i lipidice nu se fonneaz legturi covalente. Proteinele
periferice plutesc la suprafaa bistratului, pe cnd cele integrale, aidoma unor gheari,
se scufund n stratul hidrocarbonat mediu;
7) capacitatea proteinelor membranei de a se deplasa lateral poate fi redus n
funcie de atracia ntre proteinele legate funcional, cu formarea unor clastere, ce,
n final, conduc la o repartiie mozaic a proteinelor n bistratul lipidic fluid.
Acest fenomen poate sta la baza aa-numitului efect caping-deplasarea anumite
lor proteine membranare n zone specifice ale membranei, atestat la unele tipuri de
celule n decursul ciclului vital.
Modelul dat se consider cel mai adccvat. E descris, n general, membrana plasmatic
- plasmalema, ce contribuie la meninerea homeostazei celulare.
Din membranele Golgi deviaz lizozomii, adic organitele ce conin membran
ordinar unic i un ansamblu complet de enzime pentru scindarea, practic, a tuturor
compuilor celulei. Acetia constituie organite de necesitate vital. Absena unor
enzime lizozomale specifice, n consecin, se soldeaz cu afeciuni grave. Minimumul
necesar pentru descompunere este transferat n lizozomi, unde este scindat pn la
componentele indispensabile transferate n citoplasm. La lezarea integritii membranelor
lizozomale, enzimele ptrund n celul i sunt capabile s-o distrug, provocnd
autoliz.
Produsele rezultante prsesc uor lizozomul sau sunt utilizate chiar de el. n membrana
lizozomal e prezent o protein de transport specializat, care utilizeaz energia de
hidroliz a ATP pentru pomparea ionilor H+n cavitatea organitelor i meninerea
pH=5. Membrana mai conine proteine acceptori pentru substane specifice sau bule
de transport (granule). n lizozom substana ptrunde mai uor dect o prsete, devenind
mai hidrofil (adiionnd H+) i mai puin capabil s prseasc bistratul.
Membranele mitocondriale examinate mai sus, posednd membrane duble, fonneaz
spaiu intennembranar i spaiu intennatriceal mitocondrial.
Dac membrana plasmatic este relativ impenneabil, apoi cum ptrund n celul
majoritatea moleculelor? De ce este asigurat selectivitatea transportului transmembranar,
schimbul perpetuu ntre mediile intra- i extracelular? Se cere un rspuns complet pentru
a contientiza cum membrana celular controleaz homeostazia biochimic a mediului
intracelular, asigurnd adaptarea celulelor la condiiile extrem de variate ale mediului extern.
SISTEMELE TRANSPORT
Transportul prin membranele celulare se realizeaz prin dou tipuri de sisteme: sisteme
de microtransport i sisteme de macrotransport. Ultimele sisteme sunt proprii substanelor
cu masa molecular mare i se realizeaz, prin mecanisme specifice, endo i exocitoza,
descrise n cursul de histologie.
Sistemele de transport antreneaz transportul transmembranar al substanelor cu masa
molecular mic prin dou mecanisme:
- transportul pasiv care se realizeaz prin difuziune, osmoz, echillibrul Donnan;
- transportul activ asigurat de pompe active ce se realizeaz n contragradient de
concentraie i prin translocare de grup.
Transportul pasiv
Unele substane, de exemplu gazele, ptrund n celul prin difuzie transmembranar
dup gradientul electrochimic, fr utilizare de energie. Viteza acestei difuzii a solvenilor
este determinat de temperatura moleculelor, gradientul de concentraie transmembranar
al substanelor i solubilitatea lor n stratul hidrofob membranar. Solubilitatea este invers
proporional cu numrul legturilor de hidrogen ce trebuie distruse ca substana solubil
n mediul apos s fie inclus n stratul hidrofob. Electroliii insuficient solubili n lipide nu
fonneaz cu apa legturi de hidrogen, dar posed membran apoas, format ca rezultat
a l in te r a c iu n ii e l e c tr o s ta t ic e . D im e n s iu n il e ei sunt direct proporionale cu densitatea
sarcinii electrolitului. Cu ct densitatea sarcinii electrolitului este mai mare, cu att lui i
aparine o membran apoas mai major i, n final, se caracterizeaz cu o vitez a
difuziei mai mic. De exemplu: ionul de Na+posed o densitate a sarcinii mai mare dect
ionul de K+i, deci, Na' hidratat are dimensiuni mai mari dect K+ i, n consecin viteza
lui de difuzie pasiv va fi mai mic.
In membranele biologice, spre deosebire de bistraturile sintetice, sunt amplasate canale
transmembranare ionice de natur proteic. Viteza de transport prin ele este dependent
de diferena de concentraie - de la o concentraie mai mare spre o concentraie mai
mic. Canalele permeabile pentru cationi au diametrul egal aproximativ cu 5-8 nm i
conin gmpe ncrcate negativ. Conductibilitatea lor e dependent de mrimea, gradientul
de hidratare i densitatea sarcinii ionului respectiv.
Activitatea acestor canale ionice este reglat n membranele celulelor nervoase de j
neuromediatori. Unii ioni regleaz activitatea canalului permeabil pentru alt ion. La A
micorarea concentraiei de Cat+, n lichidul extracelular se majoreaz penneabilitatea i
difuzia Na+, ce conduce la depolarizarea membranei i generarea impulsului nervos. I
Canalele sunt deschise numai pentru o anumit durat de timp, ce este determinat de
fixarea unui ligand specific de receptor. n alte cazuri, canalele se deschid la modificrile j
potenialului membranar. Unele microorganisme pot sintetiza molecule organice mici I
ionofori, care realizeaz transferul navet al ionilor prin membrane. Aceti ionofori j
conin centre hidrofile, ce fixeaz anumii ioni. Periferia acestor centre prezint o membran I
hidrofob, ce permite acestor molecule uor s se dizolve n membran i s difundeze |
prin ca. Ali ionofori, ca polipeptidagramicidina, formeaz canale proteice. U nelM
toxine microbicne (toxina difteric) i componentele complementului seric activ
forma pori n membranele celulare, prin care se pot deplasa i macromolecuele.
Mecanismele schematice de transfer transmembranar sunt redate n fig. 5.10.
Molecula transportat
I

( anale proteice
Proteina
transportatoare
M t
w

Gr adi ent ul
electrochimic
O
Energia
Difuzia simpl Difuzia facilitat
I____________I
Transportul pasiv Transportul activ

J
Figura 5.10. Mecanismele schematice ale transferului transmembranar
Constatm c difuzia substanelor e cauzat de:

1. Gradientul de concentraie transmembranar. Solvenii se deplaseaz spre micorarea
concentraiei lor.
2. Diferena transmembranar a potenialului electric. Substanele dizolvate se
deplaseaz spre soluia cu sarcina antipod.
3. Coeficientul penneabilitii membranei pentru substana n cauz.
4. Gradientul de presiune hidrostatic pe membran. La crcterea presiunii se
accelereaz viteza de contact ntre molecule i membran.
5. Temperatur. Temperatura ridicat amplific viteza particulelor i posibilitatea de
interaciune ntre ele i membran crete.
Difuzia m ediat (facilitat) i transportul activ. Sistemele de transport pot fi
caracterizate dup numrul i direcia moleculelor transferate (fig.5.1 1 ). In sistemul uniport
are loc transferul moleculelor de un tip anumit n ambele direcii. n sistemul cotransport
transferul unei substane solubile este nsoit de transferul, mpreun sau n succesiune, a
unei cantiti echivalente ale altei substane. n caz desimport, ambele substane se
deplaseaz n aceeai direcie (H+-zaharuri, Na4- zaharuri, Na4 - aminoacizi). n antiport
substanele se transfer n direcii opuse (Na4-
n celul, Ca2* -d in celul). Moleculele care
nu pot singure traversa bistratul lipidic sunt
transferate de proteine specifice. Un aa
transfer se realizeaz pe dou ci: prin difuzie
mediat sau transport activ, cu utilizarea unor
ci specifice de transport. Ambele sisteme sunt Uniport Simnort Aattasa t
Cotransport
asemntoare cu reaciile dintre enzim i
Figura 5.11. Redarea schematic a tipurilor
substrat, ns se realizeaz fr formarea sistemelor de transport
legturilor covalente. Se deosebesc prin faptul c: 1) difuzia mediat se realizeaz n
ambele direcii, pe cnd transportul activ, de obicei, numai ntr-o direcie;
2) transportul activ are loc contra
gradientului electric sau chimic i necesit
utilizare de energie.
Difuzia mediat
S-a constatat c unele substane
difundeaz prin membran dup gradientul
electrochimic mult mai rapid dect se poate
considera, reieind din dimensiunile,
densitatea i coeficientul de solubilitate ale
acestor particule (fig.5.12). Sistemele
respective sunt stereospecifice i nu
necesit energie. Se cunoate c proteinele Figura 5.12 Cinetica difuziei pasive i mediate. n
difuzia pasiv viteza transportului e proporional
membranare sunt localizate asimetric, au cu concentraia substanelor respective. n difuzia
anumit grad de stabilitate i deplasarea lor mediat se observ fenom enul de saturaie.
transversal prin membran are loc n
exclusivitate i nu poate determina acest mecanism de difuzie. Acest proces se datoreaz
unor modificri conformationale ale proteinelor (permeaze) de tipul ping-pong
(fig.5.13).
o o
F igu ra 5.13. Mecanismul ping-pong
Procesul este reversibil i rezultanta este cauzat de gradientul de concentraie. Viteza

cu care substana solubil se va deplasa n celul e dependent de:
1 . gradientul de concentraie transmembranar;
2 . numrul de transportatori;
3. viteza de fixare a substanei cu transportatorul;

4. viteza modificrilor conformaionale n ambele stri ale transportatorului. Transportul
moleculelor prin intermediul transportatorului necesit un nivel de energie liber mult mai
mic.
In difuzia simpl moleculele hidrofile pierd nveliul apos. Acest proces este nalt
endergonic, avnd un AG (energie liber) foarte nalt (fig. 5.14a). Proteina transporttoare
reduce energia liber pentru difuzia transmembranar (fig. 5.14b). Procesul este mediat
prin interaciuni necovalente, cu pierderea nveliului apos, ca rezultat al ruperii legturilor
de hidrogen, promovnd transportul moleculelor hidrofile.
Hormonii regleaz difuzia
mediat prin reglarea nummlui de Compus hidrofil
transportatori posibili (insulina- \
glucoza, glucocorticoizii - amino
acizii etc.)
T r a n sp o r tu l a c tiv se
realizeaz cu consum de energie,
ca rezultat al modificrilor n D ifuzia sim pl
echilibru termodinamic. Sursa de fr transportator
energie este hidroliza ATP,
procesul de transfer al electronilor,
D ifuzia prin AG*
lumina. Meninerea gradientului transportator .Difuzia simpl
electrochimic joac un rol decisiv
n sistemele biologice i este
cuplat cu utilizarea a 30-40% din transport
energia captat de celule.
Cile de transport activ sunt:
a) transportul n contragradient de 1
concentraie i b) transportul prin
i O i
translocare de grup. 'O '
n cazul transportului n
contragradient de concentraie o Transportator
substan poate trece de la o F igu ra 5.14. Energia liber la transportul moleculelor
hidrofile prin membranele biologice: a) difuzie simpl si
concentraie sczut (Na+) a unui
b) difuzie prin transportator
com partim ent (celul) la o
concentraie mai crescut a altui
compartiment - contrar concentraiei de K+. Pompa care menine acest gradient este
ATP-aza activat de ionii de Na 4 i K+.
ATP-aza este o protein integral
O constituit din dou subuniti de tip a,
0 cu masa molecular de 94kDa i dou
1 de tip , cu masa 50kDa, unde a
CH, subunitate are rol catalitic. Activitatea
V ei necesit fosfblipide. Centrele catalitice
pentru ATP i Na+sunt aranjate pe partea
citoplasmatic a membranei, centrul
catalitic pentru K+ - n exteriorul
membranei (fig.5.15). Uabaina inhib
activitatea enzim ei, fixndu-se de
fragmentul extracelular. Aceast inhibiie
poate fi anihilat parial prin K+
Uabaina extracelular.
Transportatorul proteic situat n membran
fixeaz 3Na'
Fosforilarea P-EnzII
3Na* sunt transportai n partea

exterioar, i 2K sunt fixai n
membran
3 N a+
Defosforilarca Enzl
Sunt transportai n partea

intern 2K 1
Partea intern Partea extern
F igura 5.15. Mecanismul de transport al ionilor de Na* i K ',de Na*-K*-ATPaza. 1) Pe suprafaa intern
a transportatorului proteic, aranjat in membran, sunt legai 3Na*. Na' are o afinitate major fa de
subunitatea mare a transportorului A ceast subunitate posed i site-ul de fixare a A TP-ului.2) Fosforilarea
modific conformaia moleculei proteice i micoreaz ufinitateafa de Na*, care este expulzat n exteriorul
membranei. 4) K* exterior are o afinitate major fa de poriunea extracelular a subunitii mari.5)
Enzima este defosforilat, reducnd afinitatea fa de ionii de K'.6)K* este transferat n interiorul celulei.
Proteina transportatoare particip la un nou ciclu de transport al Na* i K*
Transportul prin translocare de grup implic fonnarea unui derivat al substanei

iniiale. Derivatul format prin utilizarea ATP traverseaz membrana n contragradient de
concentraie. Se consider c astfel de transfer se realizeaz n cazul compuilor glucidici
(hexoze), cu participarea unei fosfotransferaze, ce transfer gruparea fosfat pe molecula
de hexoz (fig.5.16a).
Sistemele de transport discutate sunt sumar redate in fig.5.16b.
Figura 5.16a. Dou tipuri de transport activ: a) n transportul activ primar, energia realizat prin hidroliza
ATP-ului este utilizat n transportul contra gradientului electrochimic. h)n transportul activ secundar
ionulX este transportat activ. Energia necesar pentru deplasarea cotransportatorului, ionul S este asigurat
de micrile ionului X
Difuzia facilitat
Difuzia simpl
S
Transport
activ
Partea extern
Transport mediat de ioni
Transport secundar activ
Q) Canal ionic
Ion
Figura 5.16b. Tipurile de transport
DIGESTIA I ABSORBIA LIPID ELO R
Funcionarea normal a organismului necesit un consum obligatoriu minim de
vitamine liposolubile (A, D, E, K) i al unor acizi grai nesaturai, nesintetizai de celule.
Digestia e un proces complex, care, pe lng necesitatea degradrii hidrolitice a
componentelor lipidice din raia alimentar (trigliccride, fosfolipide, glicolipide, colesterol),
mai solicit i solubilizarea, meninerea n mediul apos a unor substane hidrofobe.n
cavitatea bucal lipidele nu se supun modificrilor, deoarece n saliv nu exist enzime
capabile s scindeze grsimi. Fr modificri deosebite, la maturi lipidele vor trece i
prin stomac. La copiii mici, al cror pH al sucului stomacale circa 5.0, lipaza gastric
favorizeaz digestia lipidelor emulgate din lapte. La o utilizare mai ndelungat a laptelui
se produce o sintez adaptiv a acestei lipaze. n stomacul oamenilor maturi are loc
o scindare parial a complexelor lipoproteice membranare din celulele alimentelor, ce
favorizeaz efectul ulterior al lipazei pancreatice.
Locul principal de digestie e intestinul subire, unde se creeaz condiii favorabile
pentru emulgarea lipidelor. Chimusul acid stomacal este neutralizat de componentele
bilei - acizi biliari conjugai i srurile lor, ce stimuleaz emulgarea lipidelor n asociere
cu aciunea peristaltismului. La emulgare particip i enzimele.
Acizii biliari reprezint produsul final al metabolismului colesterolului i, dup
structur, constituie derivai ai acidului colanic (C24). Enzima-cheie n sinteza acizilor
biliari o reprezint colesterol-7-a- hidroxilaza; activitatea ei necesit prezena NADPH
i a citocromului P45Q. Hidroxilarea la C ] 2 i izomerizarea la C, urmat i de saturarea
legturii duble din poziia 5-6 i eliminarea a trei grupe CH 3 la nivelul catenei laterale, se
va finaliza cu generarea acizilor biliari primari. Activitatea colesterol-26-hidroxilazei
conduce la formareapropionil-CoA, care va fi utilizat prin intermediul succinil - CoA.
Activitatea enzimei-cheie este inhibat de majorarea nivelului de acizi biliari, reabsorbii
din intestin.
Bila conine acid colic (3,7,12 - trihidroxicolanic), chenodezoxicolic (3,7) - acizi
primari, i dezoxicolic(3,12), litocolic (3) - acizi secundari. Ultimii sunt generai n
colon, ca rezultat al deconjugrii srurilor biliare de ctre bacteriile intestinale: circuitul
hepato-entero-hepatic va economisi necesarul de colesterol pentru sinteza acizilor biliari.
Ei sunt conjugai cu glicocolul (H2 N-CH 2 -COOH) sau cu taurina (H2N -C H 2-C H 2-
SO,H), - respectiv, genernd a c i d u l g l i c o c o l i c sau t a u r o c o l i c .
H SC oA
H SC oA
NHCH 2 COOH
Acidul glicocolic
-NH(CH 2 )2 SO 3 H
Acidul colic
Acidul taurocolic
Raportul dintre aceti compui conjugai e dependent de caracterul raiei alimentare.
O raie bogat n glucide mrete coninutul conjugatelor glicinei; n proteine - ale tauri
nei.
Acizii biliari liberi, precum i srurile lor, cei conjugai coninnd grupri hidroxilice
polare i grupe cu sarcin negativ (COO\ S 0 '3), confer moleculelor caracter hidro-
fil, dizolvndu-le n ap i formnd soluii micelare, prin agregarea unui numr relativ mic
de molecule.
Fosfatidele formeaz uor agregate micelare mixte cu alte lipide care, la rndul lor,
au capacitatea de a solubiliza alte categorii de lipide pronunat polare (monogliceride)
sau mai puin polare (trigliceride, colesterol, acilcolesterol).
Asupra grsimilor emulsionate acioneaz hidrolazele pancreatice specifice. Lipaza
neactiv devine activ n lumenul intestinal, formnd un complex cu colipaza (masa
molecular egal cu 1OOOODa) n raport molar 2:1, ce nlesnete modificarea pH de la
9 la 6 i previne denaturarea enzimei. Viteza catalizei nu este influenat substanial de
gradul nesaturrii acizilor grai i lungimea catenei; mrete viteza Ca44, formnd cu
acizii grai eliberai spunuri insolubile, fapt ce prentmpin efectul lor inhibitoriu i
deplasnd reacia spre hidroliz.
Fofosfolipidele sunt scindate de fosfolipazele pancreatice de o specificitate
carboxiesterazic, cu formarea Iizofosfatidelor ce au proprieti detergente foarte
pronunate, contribuind la solubilizarea lipidelor n intestin. Lipaza pancreatic
hidrolizeazatriacilglicerolii n poziiile 1,3, cu formarea 2-monogliceridelor asupra crora
va aciona lipaza intestinal.
Acidul fosforic se absoarbe n stare de sare de Na" sau K+, baze azotate sub formele
sale active. Glicerolul solubil, de rnd cu acizii grai cu o caten mic, prsete intestinul
prin intermediul circulaiei portale. Acizii grai cu o caten mare i monogliceridele
fonneazcu srurile acizilor biliari o soluie micelar -nucleu hidrofob - membran
hidrofil compus din acizi biliari i fosfolipide. Micelele sunt de 100 ori mai mici
dect cele mai mici bule de grsime emulgat. Graie difuziei micelare i pinocitozei,
micelele ptrund n spaiile intervilozitare de la nivelul jejunului proximal i se absorb.
Srurile biliare rmn n lumen, participnd la solubilizarea i transportul altor
molecule lipidice. Abia n poriunea distal a ileonului srurile sunt absorbite printr-un
mecanism activ. Prin sistemul portal ajung n ficat i, dup unele remanieri, revin din
nou n bil i intestin.
Alt factor primordial n procesul absorbiei lipidelor constituie activitatea metabo
lic a enterocitelor. Ele reprezint sisteme enzimatice de sintez specific a lipidelor
pentru specia dat, care difer radical de lipidele alimentare. Procesul e asigurat i de
prezena acizilor grai endogeni. Lipidele strine, ca excepie, pot fi depozitate n
esutul adipos.
Resinteza lipidelor. Cile de sintez ale lipidelor n enterocite decurg fr formarea
fazelor intermediare. n sinteza TAG se formeaz forma activ a acizilor grai - acil-
CoA, apoi are loc procesul de aciiare a monoglicerolului, cu fonnarea digliceridelor
i apoi a TAG.
Resinteza fosfolipidelor decurge, cu formarea acidului fosfatidic: din glicerol-3-fos-
fat, apoi acilarea lui. Moleculele lipidice reconstituite (TAG, FL), mpreun cu coles
terolul i cantitile mici de protein, formeaz particule relativ stabile, numite chilomi-
croni (fig.5.17).Chilomicronii secretai, deplasndu-se prin vasele chilifere i sistemul
limfatic, ajung n circulaia sanguin. Dup o or-dou, la asigurarea suficient cu lipide,
se observ hiperlipidemia alimentar, cu un apex la 4-6 ore; peste 12 ore chilomicronii
dispar din circulaia sanguin. Care este soarta lor?
C e lu la m u c o a s e i
in te s tin a le
R -g ru p e
&
A c iz ii g r a i
A ciltransfeiy.a
C o le s te rid
C o le s te ro l -
F igura 5.17. Asamblarea i secreia chilomicronilor SistemuKyfitnfatic
Chilomicronii exceleaz liber din snge n spaiul intercelular al ficatului, unde

sunt supui hidrolizei att n interiorul, ct i pe suprafaa hepatocitelor. Chilomicronii nu
ptrund n esutul adipos i n celule. Ca atare, TAG se hidrolizeaz pe suprafaa
endoteliului capilarelor esutului adipos sub aciunea lipoproteinlipazei (LPL), cu
fonnarea acizilor grai i a glicerolului. O parte de acizi grai ptrunde n interiorul
adipocitelor, alta se fixeaz de albumina sngelui i se transport prin snge, glicerolul
la fel prsete esutul adipos. Colesterolul, fosfolipidele, apolipoprotcinele sunt trans
ferate pe 11DL (lipoproteine cu o densitate mare).
LPL este activat de apolipoproteina C -//prim it n prealabil de la HDL, veritabile
rezervoare de apo C. Acizii grai eliberai sub aciunea LPL pot fi catabolizai pe calea
-oxidrii, cu generarea de energie, sau pot fi depozitai sub form de TAG n esutul
adipos. Alternativ, acizii grai pot fi legai de albumina seric i transportai spre alte
esuturi.
LPL este sintetizat de celulele endoteliale capilare i fixat pe suprafaa lumenal a
acestora prin intennediul heparan sulfatului. Sngele nu conine cantiti mari de LPL.
ns prin adminisrarea de heparin, se observ desprinderea LPL de pe suprafaa
endoteliului i clarifierea serului lactescent. Cantiti mari de LPL se evideniaz n esutul
adipos, inim, glanda marnar n lactaie, plmni, splin, rinichi, cu excepia ficatului i a
creierului. Afinitatea LPL pentru TAG chilomicronilor difer de la esut la esut.
Astfel, LPL din inim are constanta Michaelis IC, dc 10 ori mai mic dect enzima din
esutul adipos. Aceast diferen explic de ce n condiii dc inaniie, cnd are loc
diminuarea concentraiei TAG, enzima miocardic rmne saturat vizavi de substratul
su, iar activitatea enzimei din adipocite scade, ceea ce va determina redistribuia TAG
din esutul adipos spre inim, unde vor fi hidrolizai de LPL. Acizii grai rezultai vor fi
utilizai n celulele miocardice ca material energetic.
S-a observat c LPL este produs i de macrtofagele din intima arterelor. Datele
experimentale obinute de unii autori demonstreaz c LPL din maertofage poate juca un
rol important n procesul aterosclerozei. Cantitatea de LPL sintetizat de maertofage
este influenat de stresul oxidativ. Cercetrile au artat c mutaiile la nivelul genei ce
codific LPL pot afecta activitatea enzimei, detenninnd o dezvoltare mai rapid a leziunilor
aterosclerotice.
Dup aciunca LPL asupra chilomicronilor, acetia sunt transformai n particule
reziduale numite chilomicroni remaneni, avnd n compoziia lor mai ales apolipoproteinele
- 48 i E. La nivelul ficatului, chilomicronii remaneni sunt captai prin intermediul unor
receptori hepatocelulari specifici i componentele lor lipidice sunteatabolizate sub influena
enzimelor lizozomale (fig.5.17a)
Apo-C-II,E
(de la Fl DL)
Intestinul
subire
A po-B -48
Sunt incorporate
n CM
esuturile
(adipos)
Chilomicron
"hilomicroru
- J CM) _ j LPL cxtracelu-
Sinteza CM I Iar activat de
I A.po-C-11
a degradeaz TAG
Ficatul
Acizii
grai
(HDL)
A p oC -lJ
FiXsiiu de receptorii
sp e c ific i C M p rin Re incorporarea n HDL
CVI r e m a n e n i
e n d o c ito z su n t
metabolizati
F igura 5.17a. Metabolismul chilomicronilor (CM-chilomicron; TAG-triacilglicerol; C-colesterol; EC

- esterii colesterolului; LPL - lipoproteinlipaza)
LIPIDELE SNGELUI
Metabolismul chilomicronilor este perturbat de deficiene n lipoproteinlipaz. Ca
rezultat, se nregistreaz sporiri evidente i persistente ale TAG, depunerea lor n esuturi
(boala ereditar - hiperlipoproteinemie de tip /). Anomalia sintezei apolipoproteinei
la nivel intestinal frneaz formarea chilomicronilor i transportul lipidelor exogene. TAG
se acumuleaz n celulele intestinale i, consecutiv, se perturb absorbia altor lipide din
intestin -steatoree, evideniindu-se i o caren de vitamine liposolubile (fig.5.18).
Lipoproteinele sunt sintetizate la nivelul
ficatului i intestinului din lipide endogene i
In testin u l su b ire
exogene.
Anabolism ul lipoproteinelor cuprinde
urmtoarele etape principale:
- sin teza c o m p o n en telo r lip id ice
(triacilgliccroli, fosfolipide, colesterol liber,
colesteride);
- sinteza apolipoproteinelor;
- asamblarea lipoproteinelor sintetizate n
torentul circulator.
Lipoproteidele sngelui sunt legate necova-
lent, dar durabil. Aceste structuri sunt solubile
n ap i bine adaptate la transportul lipidelor
n diferite esuturi i organe. Cu ct coninutul
lipidic e mai mare, cu att densitatea lor e mai Cclu,ele
*3 mucoasei
mic. Chilomicronii au o densitate mai mic de / intestinale
0,85 g/mL.
n concordan CU densitatea lor crescnd F igura 5.I 8. Cauzele posibile ale steatoreei
la ultracentrifugare (flotaie), lipoproteinele se
clasific n: chilomicroni, lioproteine cu densitate foarte mic (VLDL), lipoproteine cu
densitate mic (LPL), lipoproteine cu densitate intermediar (IDL) i lipoproteine cu
densitate mare (HDL).
Principalele caracteristicifizice i compoziia chimic ale lipoproteinelor sngelui e
redat n tab.5.2 .
VLDL (pre--lipoproteide) sunt sintetizate n ficat; funcia principal const n trans
portul TAG sintetizate n ficat, mai ales dup o raie alimentar bogat n glucide: la
inaniie, diabet zaharat, graie sintezei lor din acizi grai liberi circulani. Amplificarea
cilor de sintez a TAG hepatice i/sau perturbarea cilor de sintez i export finalizeaz
cu acumularea grsimilor n ficat -infiltraie adipoas aficatului. Agenii cu aciune
protectoare sau care nlesnesc exportul TAG hepatice sunt denumii factori lipotropi
(metionina, grsimile nesaturate, vit. E etc.)
Procesul dc asamblare a VLDL are loc n rcticulul endoplasmatic. Pentru acest proces
sunt utilizai n principal TAG din citozol. Acizii grai din plasm sunt iniial esterificai pe
suprafaa citozolic a reticulului endoplasmatic n TAG, carc intr ntr-o proporie redus
n VLDL i trec preponderent n citozol. TAG citozolici sunt hidrolizai dc o lipaz
C la sa de D e n s ita te a M a sa D ia m e tr u M o b ilita te a
lip o p r o te in e ( g / ni L ) M o lecu la r ( D a ) ( n m ) electroforetic
C h i l o m i croni i < 0,95 5, 0 . IO9 I O2 - 1 0 3 Nu m ig rea z

VLDL 0,95 - 1,006 7 , 5 . I O6 30 - 70 Pre-
LDL 15-25
L D L 1 (IDL) 1,006 - 1,019 2 , 5 . IO6 nt r e
LDL2 1,019-1,063 i p r e -
HDL
HDL, < 1,063
2
h d l 1,063 - 1,125 3,9.105 6 - 1 4
HDL, 1,125 - 1,210 1,9.105 6 - 10
Clasa de TAG Colesterol Colesterol Fosfolipide Apolipopro

lipoproteine (% ) liber ( % ) esterificat (% ) ( % ) teine (/<>)
Chilomicronii 86-94 0,5 - 1 1,0-3 3.0-8 1,0-2
VLD L 55 - 65 6,0 - 8 12-22 12 - 18 5,0- 10
LD L 8 - 12 5.0-10 43-50 20 - 25 20-24
HDL 3-6 3.0-5 14 - 18 20-30 45-50
specific, iar acizii grai rezultai ptrund n reticulul endoplasmatic, unde sunt esterificai
sub form de TAG care servesc ca precursori n sinteza VLDL. Prin unirea componentelor
lipidice cu apolipopreteinele B-100 i E n reticulul endoplasmatic, rezult particulele
prelipoproteice. Acestea trec n aparatul Golgi, unde are loc formarea veziculelor
secretoare din care VLDL sunt eliberate n circulaie. n snge, VLDL primesc
apolipoproteinele de la HDL, ntre care apolipoproteina C-II, cofactor al LPL. S-a
constatat c diminuarea cantitii de apolipoprotcin C-II este asociat, cu scderea
activitii LPL i acumularea de chilomicroni i VLDL.
La nivelul esuturilor extrahepatice, TAG din componena VLDL sunt hidrolizai de
LPL n acizi grai i glicerol (fig.5.18a).
Endoteliile vasculare ale muchiului scheletic, inimii, esutului adipos i creierului conin
un receptor care recunoate VLDL prin intermediul apolipoproteinei E. Acest receptor
poate juca un rol important n catabolizarea VLDL de ctre esuturile periferice.
n plasm, VLDL cedeaz colcsterol liber, triacilgliceroli i fosfolipide particulelor de
HDL. Totodat, are loc deplasarea apolipoproteinelor i E din VLDL napoi spre
HDL. Ca rezultat al acestui schimb i al aciunii LPL, VLDL se transfonn n lipoproteinc
intermediare (IDL), coninnd aproape numai apolipoproteine -100 i E.
Metabolizarea IDL se poate realiza pe dou ci. Una const n fixarea IDL de receptorii
hepatici specifici. A lta-n ptrunderea IDL n spaiile Disse hepatice, unde suport un
atac lipolitic al lipazei hepatice i pierd apolipoproteina E. n felul acesta, IDL devin
LDL.
LDL ( -lipoproteide) se formeaz n plasm din cele pre , sub aciunea LPL
(lipoproteidlipazei) i nnobilate cu colesterol (din a-LP i cu participarea enzimei
LCAT (lecitin-colesterol-acil-transferaz)-enzim plasmatic ce catalizeaz reacia:
Apo-CII,
E FI DL
Apo-C'II i E sunt
transferate la
esu tu ri
VLDL
C a p ila r e
LPL extra-
celu la r
activat
de A po-C II
degradeaz
1AG
e su tu ri R ecep tori specifici n ficat
extra- extra hepatice
hepatice
Apo C-II, E
A cizii
pentru IIDL
G lic er o l
(LDL)
Ficat
F ig u r a 5 .1 8 a . Metabolizarea VLDL i LDL: TAG triacilglicerol, CJEC colesterol i esterii colesterolului;

LPLlipoproteidlipaza
lecitin + colesterol 2-lizolecitm + acilcolesterol). Rolul LDL const n capaci

tatea de a furniza colesterol diverselor esuturi. Concentraia mrit de LDL, ca i a
apolipoproteinei B, are semnificaia de predicie a factorului de risc la ateroscleroz.
Structurarea lor e reprezentat n fig. 5.19.
Particulele de LDL se fixeaz pe suprafaa celulelor prin intermediul unor receptori
specifici localizai n caveolele membranei plasmatice. Receptorul LDL n membranele
plasmatice este o glicoprotein de 115 kDa, cu 839 aminoacizi i 5 domenii. Domeniul 1
(292 resturi de aminoacizi) este situsul de
legare a lip o p ro te in e lo r care conin
apolipoproteinele B-100 i E. Domeniul 2
(350-400 resturi de aminoacizi) este un
segment coninnd oligoglucide N-legate.
Domeniul 3 (58 resturi de aminoacizi) este
fragmentul care strbate membrana. Domeniul
5, un segment de 50 resturi de aminoacizi, este
necesar pentru agregarea receptorilor LDL n
timpul endocitozei. Complecii receptori -LDL
- sunt endocitai n celul sub fonn de
vezicule care fuzioneaz cu lizozomii.
Particulele de LDL sunt degradate de
proteazele i lipazele acide lizozomale. F igura 5.19. Structura -lipoproteidelor
Colesterolul liber rezultat astfel difuzeaz din lizozomi n citozol, unde poate fi implicat n:
- biosinteza membranelor;
- inhibiia -hidroxi-- metilglutaril-CoA reductazei, enzim limitant n sinteza
colesterolului;
- activarea acil-CoA: colesterol-acil-transferazei care catalizeaz esterificarea
colesterolului intracelular cu acil-CoA; colesterolul reesterificat conine mai ales acid
oleic i acid palmitoleic, care sunt acizi grai mononesaturai, n timp ce esterii de colesterol
n I .Dl, sunt bogai n acid linoleic;
- modularea sintezei receptorilor LDL i, prin unnare, limitarea captrii LDL.
Gena pentru receptorul LDL, asemntoare cu cea pentru reductaz, conine un
element reglator sterolic care controleaz rata de sintez a RNAm.
Deci, LDL intervine n transportul colesterolului spre organele periferice i n reglarea
sintezei colesterolului de novo n situsurile respective.
Unele LDL nu sunt captate de receptorii pentru apolipoproteinele B/E, deoarece ele
au suferit modificri prin peroxidare sau acetilare. Se atest c oxidarea LDL de ctre
celule n pereii arterelor joac un rol determinant n patogenia aterosclerozei i n
dezvoltarea simptomelor clinice. Oxidarea LDL este un fenomen complex care ncepe
cu extracia unui atom de hidrogen de la un acid gras polinesaturat din particula de LDL.
Radicalii peroxil i alcoxil formai pot iniia oxidarea acizilor grai vecini. LDL oxidate
sunt catabolizate pe calea receptorilor scavenger ai macrofagelor. Aceti receptori nu
sunt inhibai de coninutul intracelular de colesterol i macrofagele pot absorbi un exces
de LDL, ncrcndu-se astfel cu lipide i transformndu-se n celule spumoase. Acest
mecanism poate constitui una din cauzele de instalare a leziunilor aterosclerotice.
HDL (a-lipoproteide) sunt sintetizate i secretate de hepatocite, avnd o configura
ie discoidal. n particulele mature sunt transformate de LCAT. Ele preiau colesterolul
din esuturi i din alte proteine plasmatice, pentru ca n final s se catabolizeze n
ficat. Subiecii, care reprezint niveluri nalte ale acestor parametri, sunt protejai,
posed factori redui de risc ai aterosclerozei i viceversa - la nivele sczute de a-LR
Exist patru subclase de HDL: HDLr HDL2, HDL 3 i lipoproteine cu densitate
foarte mare (VHDL). HDL 2 i HDL 3 sunt cele mai importante i rezult n unna
principalelor transfonnri metabolice. Primele HDL secretate n circulaia sanguin de
hepatocitele numite HDL nsende nu conin esteri de colesterol i au un procent sczut
de colesterol. Particulele acestor lipoproteine prezint o form discoidal. Treptat, ele
se mbogesc de colesterol i fosfolipide. Pe msura captrii colesterolului celular, intervine
enzima lecitin: colesterol-acil-transferaza (LCAT) care catalizeaz reacia dintre colesterol
i fosfatidilcholin, conducnd la colesteride. LCAT este o glicoprotein cu masa
molecular = 59 OOODa. Aceast enzim este asociat cu HDL n plasma sanguin i
este activat de apolipoproteina A -1 i inhibat de apolipoproteina A-2 care intr n
structura acestor lipoproteine.Cercetrile recente au artat c n organismul persoanelor
cu risc nalt de ateroscleroz este prezent o LCAT care sintetizeaz esteri de colesterol
preferenial cu acizi grai saturai, spre deosebire de enzima de la persoanele normale,
cu specificitate pentru acizii grai nesaturai. De complexul LCAT -HDL este asociat o
protein ce transfer esterii de colesterol (CETP = cholestcryl ester transfer protein) din
HDL la VLDL sau LDL. CETP reprezint o glicoprotein hidro tob care se sintetizeaz
n special n ficat i esutul adipos.
Hipercolesterolemia i hipertriacilglilcerolemia stimuleaz funcia CETP, iar
hipotiroidismul diminueaz aciunea acestei proteine. De asemenea, la subiecii cu afeciuni
cardiovasculare i la cei cu diabet insulino-dependent se observ o cretere a transferului
realizat de CETP. Esterii de colesterol formai datorit LCAT, fiind mai hidrofobi,
prsesc suprafaa HDL i trec n mijlocul particulelor. Ca rezultat, fonna lor discoidal
devine sferic, astfel apare HDLy Ele reprezint HDL de talie mic i de densitate
mare, fiind capabile de a primi colesterol i de a-1 esterifica cu ajutorul LCAT. Aceste
lipoproteine se transform n HDL de talie mare, HDL,, cu densitate mai mic, dar mai
bogate n triacligliceroli, avnd rolul de a transporta steridele spre ficat sau alte lipopreteine
(VLDL i LDL). Deci, HDL, sunt adevratele lipoproteine antiaterogene, ntruct ele
epuizeaz excesul de colesterol.
La nivelul ficatului, colesterolul liber poate fi eliminat n bil sau poate servi pentru
sinteza acizilor biliari. Lipaza hepatic hidrolizeaz triacilglicerolii i fosfolipidele HDL,,
pennind conversia reversibil a acestora n HDL3 care intr n circulaie.
Componenii apoproteinici, de rnd cu rolul structural la meninerea stabilitii,
posed i proprieti de activatori ai enzimelor (LCAT) (tab.5.3).
Tabelul 5.3 Apolipoproteinele din componena lipoproteinelor
A polipo M asa C oncentraia L o c u l de F uncia D istribuia ( %>)

proteina m olecular plasm atic sintez din totalul apo-
(A p o ) kD a (m g /1 0 0 m Lj lipoproteinelor
A po A-1 28,3 110-200 Ficat, intestin A ctivator al LCAT H D L (67% )
Apo A-2 17,0 3 0 -5 0 Ficat, intestin HDL (22 %)
Apo A-4 45,0 15 Intestin Permite efluxul
de colesterol
A po B-48 240,0 3 -5 Intestin Secreia Chilom icroni
chilom icronilor
Apo B-100 513,0 60 - 140 Intestin Secreia VLDL, VLDL (9 0 % )
ligand pentru LDL LD L (35% )
Apo C-I 7,0 4 -6 Ficat A ctivator al LCAT Chilomicroni,
V LDL, HDL
Apo C-II 8,9 3 -5 Ficat A ctivator al LPL Chilomicroni,
VLDL, HDL
Apo C-III 8,7 1 2 - 14 Ficat Inhibitor al LPL Chilom icroni,
V LDL, HDL
Apo D 33,0 6 -7 Rinichi, ficat, M etabolism ul
placent, intestin esterilor de HDL
colesterol
Apo E 34,1 3 -5 M acrofage, Ligand pentru Chilom icroni,
suprarenale, receptorii LDL V LDL (15%),
ficat, intestin i IDL IDL, HDL.
Apolipoproteina A -l este apoproteina major a lipoproteinelor protectoare de
aterom, HDL. Apolipoproteina A-1, ca i apolipoproteina -I, activeaz lecitin - colesterol
acil-transferaza (LCAT), deci joac un important rol n conversia colesterolului n colesteril
esteri, care sunt transferai din HDL spre alte lipoproteine. Acest transport se face cu
ajutorul proteinei de transfer a colesteril esterilor.
Apolipoproteina B-100 intr n constituia lipoproteinelor aterogene, LDL i VLDL.
Ea este implicat n transportul triacilglicerolilor i VLDL din ficat care are o importan
vital n calitate de ligand, prin intermediul cruia receptorii celulari recunosc, capteaz i
intemalizeaz LDL i IDL pentru catabolizare.
Apolipoproteina B-100 este o protein mare, de circa 549 000 Da, alctuit din
domenii hidrofile i hidrofobe. Ea nvelete suprafaa particulei lipoproteice. n organismul
uman apo B-100 se sintetizeaz n ficat. n schimb, apo B-48 este sintetizat exclusiv n
mucoasa intestinal i se gsete n chilomicroni. Sunt lipoproteine care transport lipidele
din intestin n ficat. Ambele apolipoproteine - B -100 i B-48 - sunt sintetizate pe o
singur gen.
Asemntor sintezei altor proteine secretoare, translaia apolipoproteinelor se
descoper n ribozomii ataai la reticulul endoplasmatic. Din cauza domeniilor proteinice
hidrofobe ale apo B, ultima rmne ataat la membrana reticulului endoplasmatic pn
cnd se vor lega suficiente lipide penru a se forma o particul mic de lipoprotein nscnd.
O protein, numit protein microzomal de transferai triacilglicerolilor (microsomal
: triacilglicerol transfer protein = MTP), favorizeaz transferul colesteril esterilor,
fosfolipidelor i triacilglicerolilor din reticulul endoplasmatic la apo B, conferindu-i
acesteia din urm capacitatea de a se detaa de membrana reticulului endoplasmatic.
Aceast faz este unul din situsurile majore ale reglrii sintezei i secreiei apo B. RNAm
al apo este exprimat constitutiv i producia de apo este reglat n schimb prin
abilitatea apo de a lega lipide i a forma o particul lipoproteic care este gata pentru
secreie. Dac nu exist suficiente lipide disponibile i apo nu poate forma o particul
lipoproteic, atunci apo este supus degradrii intracelulare sub aciunea proteazelor.
n aceast situaie disponibilul de lipide alimentare sau sintetizate endogen controleaz
viteza produciei de apo B. Particula lipoproteic nscnd o dat format se mrete
prin fuziune cu picturile de lipide care iau natere n reticulul endoplasmatic neted, unde
se descoper biosinteza majoritii lipidelor. Particula lipoproteic mrit este apoi
transportat la aparatul Golgi unde sunt adugate lipidele adiionale. Apo este n final
modificat prin glicozilare, dup care particula lipoproteic maturizat este secretat n
sistemul limfatic.
Iniial, se consider c abetalipoproteinemia este cauzat de o mutaie a genei pentru
I apo B, avnd ca rezultat scderea vitezei de transcriere. Ins, unele studii au detectat
H cantiti crescute de RNAm pentru apo n celulele pacienilor cu abetalipoproteinemie.
Cercetrile ulterioare au artat c gena defectat nu este legat cu apo B. De asemenea,
s-a constatat c proteina apo este sintetizat n abetalipoproteinemie, dar nu este
secretat din celul, ceea ce sugereaz un defect n asamblarea lipoproteinei. Recent s-
B a stabilit c activitatea MTP este insuficient la subiecii cu abetalipoproteinemie. De aici
B p-a dedus c MTP este defectul primar rezultat n urma mutaiei punctiforme a genei.
In absena MTP, apo nu se poate agrega cu lipide i ca urmare nu poate fi eliberat
din membrana reticulului endoplasmatic. Calea degradativ intracelular nonnal care
controleaz secreia post-transcripional a apo se pare a fi responsabil de apo
descompus. n cazul acestui defect, apo nu se sintetizeaz n intestin i ficat, ceea ce
mpiedic secreia chilomicronilor, VLDL i LDL. Lipsa acestor lipoproteine din snge
justific hipercolesterolemia n abetalipoproteinemie.
De notat c n dezvoltarea afeciunilor aterosclerotice, apolipoproteina -100 se
acumuleaz la nivelul acestora cu o vitez mai mare, dect colesterolul. Se consider c
nivelul plasmatic ridicat al apo -100 constituie un factor de risc pentru ateroscleroz,
mai important dect creterea colesterolului sau a triacilglicerolilor. Sinteza hepatic a
apo -100 se intensific la alimentaia nbogit de zaharoz, ct i de lipide saturate i
colesterol.
Apolipoproteina C-II activeaz lipoproteinlipaza care hidrolizeaz TAG din
VLDL i chilomicroni.
Apolipoproteina C-III poate inhiba legarea unor lipoproteine la receptorii hepatici.
Apolipoproteina E este un important determinant al afinitii lipoproteinelor,
coninnd apoproteina E, incluznd IDL i chilomicronii remaneni pentru receptorii
lor hepatici.
Lipidele organismului uman. Ele sunt sursa principal endogen a acizilor
grai, ce determin energia. Aceste lipide se depoziteaz n esutul adipos. Lipogeneza
const n sinteza trigliceridelor de depozit, la nivelul adipocitelor. Substraturile biosintezei
trigliceridelor sunt acizii grai i glicerolul. Acizii grai liberi provin din degradarea
triglicerolilor transportai de VLDL i chilomicroni. Acizii grai sunt activai prin
transformarea lor n acil-CoA, sub aciunea acil-CoA-sintetazei. Adipocitele pot utiliza
doar glicerolul endogen rezultat din catabolismul glucozei. Glucoza ptrunde n adipocite
prin intennediul transportatorului su GluT 4 i este oxidat prin reaciile glicolizei, formnd
dihidroxiacetonfosfat. Fonna activ a glicerolului rezult din reducerea acestui intermediar
la glicerol-3-fosfat, cauzat de dihidroxiacetonfosfat dehidrogenaza, n prezena
coenzimei NADH + H+.
Leptina este o protein reglatoare sintetizat la nivelul esutului adipos, e compus
din 167 resturi de aminoacizi. Unul din efectele sale metabolice este suprimarea aportului
alimentar, prin interaciunea cu receptorul su hipotalamic specific, stimulnd sinteza
neuropeptidelor (POMC, CRH, CART - apetit supresoare). La interaciunea leptinei
cu eliberarea neuropeptidei Y se stabilete un rspuns contrar: cu activarea sistemului
parasimpatic, micorarea temperaturii i a fertilitii.
Leptina altereaz transmisia sinaptic n neuronii nucleului arcuat, stimulnd
hiperpolarizarea neuronilor simpatici hipotalamici, cu eliberarea norepinefnnei n sinapsele
adipocitelor. Prin intermediul , - adrenoreceptorilor i eliberarea AMPc are loc activarea
proteinkinazei A, care faciliteaz transcrierea genei UCP. Proteina decuplant
mitocondrial (UCP-1) sintetizat determin efectul termogen drept consecin a
modificrilor funciei complexului ATP-sintazic (vezi schema de mai jos).
Reglarea lipogenezei adipocitare are loc sub controlul factorilor endocrini, din
care cel mai important este insulina. Creterea secreiei de insulin n perioadele
Nucleul Nucleul
ventromedial paraventricular
Nucleul Hipotalam us
arcuat
Semnalele
neuronale Leptina
H ipofiza (via sanguina)
(via neuronul
simpatic)
Poriunea Poriunea
posterioar anterioar
Norepinefrina
- rec ep to r
adrenergic
A dipocit
Cldur
Adenilatciclaza
G Pr0teinacAMP
\ v' i I //,
oxidare
Proteinkinaza A
' > I II I V 4'
Proteina / Nucleul \
decuplantiUCP)
/ Expresia genei UC P I
Reglarea hipotalamic a stocrii i mobilizrii de energie
-prandiale activeaz lipogeneza la nivelul esutului adipos prin urmtoarele mecanisme:

a) inducerea transcrierii genei pentru LPL;
b) activarea transportatorilor GluT 4 la nivelul adipocitelor;
c) amplificarea glicolizei prin activarea fosfofructokinazei I (prin creterea concentraiei
de fructozo-2 ,6 -difosfat).
n perioadele interalimentare aceste efecte sunt suspendate prin scderea secreiei de
insulin. Acest fapt duce la activarea procesului invers, lipoliza. Lipoliza const n
degradarea trigliceridelor de depozit, la nivelul adipocitelor. Drept surs de energie pot
servi numai acizii grai liberi, neesterificai. TAG sunt scindate de enzimele tisulare
specifice - lipaze-pn la glicerol i acizi grai. Ultimii se fixeaz de albumine n plasm,
apoi sunt transportai la destinaie i utilizai dup scindarea legturii cu proteinele. Celulele
glicodcpendente (n principal, eritrocitele) i creierul nu pot utiliza acizii grai ca surs de
energie.
A drenalina Glucagon
N oradrenalina A CTH , TSH
/A d e n ila tc ic la z a /A d e n ila tc ic la z a " \

4 inactiv ' activ / Insulina
FDE. H20
ATP A M Pc AM P
ATP ADP
Proteinkinaza \___ V Proteinkinaza
inactiv activ "
M AG
H ,0
Scindarea TAG RCO OH

.1
G liccrol
Glicerolul rezultat nu poate fi reutilizat n eritrocite, deoarece acestea nu
dispun de glicerol kinaz. Ca unnare, glicerolul este eliberat n circulaie i captat
de ficat, care- 1 utilizeaz pentru sinteza dc glucoz, prin gluconeogenez.
n lipoliz, o nsemntate cardinal o are trigliceridlipaza - enzim
hormonodependent; activitatea di- i mono- gliceridlipazelor este de 1 0 - 1 0 0 de ori
mai intens dect a TG-lipazei.
Aceasta din urm e activat de adrenalin, noradrenalin, glucagon, deci reprezint
o enzim reglatoare. Honnonul primar interacioneaz cu receptorii celulari, modificnd
structura lor, ca rezultat e activat adenilatciclaza ce favorizeaz sinteza AMPc din
ATP. AMPc activeaz o proteinkinaz care, fosforilnd TG-lipaza, o activeaz.
Produsele, glicerolul i acizii grai sunt scindai sau utilizai la sintez. Acizii grai
pot fi obinui i din fosfolipidele membranare ca rezultant al rennoirii lor
metabolice permanente, cu formarea acizilor grai liberi (vezi schema de mai sus).
DEG RADAREA OXTDATIV A ACIZILOR GRAI
(SPIRALA LUI LYNEN)
La studierea mecanismului de oxidare a acizilor grai un merit aparte l are savantul
Franz Knoop. n 1904, alimentnd cinii cu acizi grai cu numr par de atomi C, n
molecula crora un atom H din grupa CH 3 era substituit cu radicalul fenil -C 6 H5, a
depistat n urina animalelor derivatul acidului fenilacetic; la alimentarea cu acizi grai cu
numr impar de - derivatul acidului benzoic.
O. ch2 , ch2 c=o

Fenilbutirat
Y>-
12 - c h 2- c = o
F enilpropionat
)"
n urma analizei respective, savantul a ajuns la concluzia c acizii grai se scindeaz

la oxidare la atomul . n aceste investigaii pentru prima dat s-a utilizat un compus
sintetic marcat pentru descifrarea mecanismelor biochimice.
n anul 1949, E. Kennedy i A. Lehninger au determinat c oxidarea acizilor grai
se produce n mitocondrii. Maitrziu, s-a demonstrat c transferul acizilor grai n
matricea mitocondrial e anticipat de activarea lor: acizii grai liberi din citozol nu pot
penetra membrana mitocondrial.
Activarea acizilor grai. Acizii grai conlucreaz la toate procesele metabolice
numai n stare activ. Paul Berg a demonstrat c procesul include 2 etape:
1. Se formeaz aciladenilat, anhidrid mixt, grupa carboxilic a acizilor grai
fiind ataat de fosfatul AMP, cu eliminarea pirofosfatului:
E
R = 0 + ATP ^ R = 0 + PPi
\ _ \
O O AMP
2. Grupa SH a CoA atac aciladenilatul fixat de enzim, finaliznd cu formarea

acilCoAi AMP.
H SCoA + E A - A R C ~ S C o A + E + AMP
I
O
Ambele reacii sunt uor reversibile. Pirofosfatul se hidrolizeaz rapid sub aciunea
pirofosfatazei. Reacia final devine ireversibil - sunt utilizate dou legturi macroergice,
dar se fonneaz una singur.
Reacia sumar:
RCOOH +HSCoA + ATP + H 2 0 R - C ~ S C o A + AMP + 2Pj+ 2H

II
O
Reacia de activare are loc la suprafaa extern a membranei mitocondriale i a
reticulului endoplasmatic. Enzima e denumit tiokinaza acizilor grai sau acil CoA -
sintetaz. Distingem enzimele acetil-CoA sintetaza (C 2 -C3), octanoil-CoA sintetaza (C4-
C 12) i dodecanoil-CoA sintetaza (C!0 -C1X). n rol de activatori enzimatici apar ionii K+
iM g2+, ca inhibitori - N a +i Li+.
Transportul acizilor grai n m itocondrii Carnitina (Viamina Bt). Fiind o
molecul cu o caten lung, acil-CoA nu poate penetra liber membrana intern
mitocondrial. E necesar un mecanism-navet, cu participarea carnitinei (-
hidroxi-Y-trimetilaminobutirat), fonnat n organismul omului i al mamiferelor (ficat,
rinichi) din lizina i metionina activ, cu participarea vitaminei C, B6, N A D \ Carnitina
este un compus azotat neproteic, provenit i din alimentaie.
Enzimele (carnitin - acetil-transferaze) sunt localizate pe ambele pri ale
membranei mitocondriale, cuplate cu o protein transportatoare (translocaza), care
deplaseaz acilcamitina n matrice i carnitina n sens opus. Mecanismul transportului
acizilor grai const n urmtoarele:
+ E,
1. R ~ SCoA + (CH 3 ) 3 N - C H 2 - C H - C H 2 - C 0 0 ' ^
o Camtm! OH
^ H SCoA + (CH 3 ) 3 N CH 2 - C H - C H 2 - C O O '
Acilcafhitina i n __
W v_/ W
I
R
E,
2. Acilcamitina + H SCoA R C~ SCoA + Carnitina
O
I
Sinteza carnitinei are loc n modul urmtor. Sunt implicai n proces cofactori
respectivi i are loc n anumite compartmente celulare:
// < h /
T M L = CH3 -N -(C H 2 )4 - C H - C T M A B A = CH 3 - +N - ( 2 ) -
1 [tu 1 1 1
CH3 N H 3 OH CH3 H
CH3
1
B B = C H 3-+N - ( C H 2)3 COOH
I
CH3
N ot:
TML = N6- trimetillizina;
P L P =piridoxalfosfat;
TMLD i BBD = dioxigenaze;
TM ABAD H - dehidrogenaza;
H TM LA = aldotaza specific;
TMABA = 4 - N - trimetilaminobutirilaldehid;
BB-Butirilbetaina (4 - N-trimetilaminobutirat);
H TM L = 3-hidroxi - N6- trimetillizina;
Schema transferului acizilor grai cu catena lung n mitocondrii i reglarea ratei

mitocondriale de acetil - CoACoA e redat n continuare:
C oA SH
Acetilcarnitina
A cetilcarn itin a
\A c e til-C o A
C a r n itin a
C a r n itin a
p-oxida
A c il-C o A
C oA S H
C oA SH A c il-C o A
A cilcarn itin a A cilcarn itin a
M atricea
C ito z o l M SM m itocon d rial
Not : M SM - membrana extern mitocondrial; M IM - membrana intern mitocondrial; CPT / -

carnitinpalmitoil transferaza I i C P T I I - carnitinpalmitoil transferaza II; CACT-carnitin-acilcarnitin
translocaza; C A T - carnitin acetil transferaza
HSCoA esterii acizilor grai transferai n mitocondrii sunt gata pentru oxidare.
Procesul descris permite diferenierea a dou cantiti de CoA - cea citozolic i cea
mitocondrial, ce ndeplinesc funcii diferite, examinate anterior (vezi studiul mitocondriilor
-oxidarea piruvatului, acizilor grai, aminoacizilor); CoA-citozolic participnd la
procesele biosintetice. Clinic, a fost stabilit c dereglrile transferrii metabolitului
dintr-un compartiment n altul poate cauza maladii la unii gemeni, care din fraged
copilrie sufer de convulsii dureroase n muchii scheletali. Cercetrile efectuate au
confirmat c lor le lipsete carnitina - transportatorul acizilor grai cu caten lung.
Cantitai majore de camitin n condiii fiziologice se gsesc n inim i muchii scheletali.
Oxidarea acizilor grai n mitocondrii. Oxidarea se produce pe etape:
a) Acil-CoA saturai n mitocondrii sunt supui procesului de dehidrogenare fermen-
tativ la atomii a i de (poziia 2 i 3) i, n rezultat, se formeaz legturi duble.
FAD FADH H
SCoA^ J^
Produsul reaciei catalizate de acil-CoA-dehidrogenaz (E ) e trans-A2 -enoil-CoA.

Grupa prostetic a E, e FAD. FADH 2 a enzimei i va transmite perechea de e' unui
transportator specific, unui flavoproteid care, la rndul su, o va transmite ubichinonei din
compusul integral al lanului respirator mitocondrial, formnd dou molecule ATP prin
fosforilarea a dou molecule ADP.
b) La etapa a doua a ciclului de -oxidare a acizilor grai are loc hidratarea legturii
duble a trans-A2 -enoil-CoA, cu formarea a L-stereoizomerului--hidroxiacil-CoA.
Reacia e catalizat de enoil-CoA hidrataz, cptat n form cristalic (este un
hexamer).
H OH H
R f p C H 2 ~ S C o A
HI H Io 11
c) La etapa a treia L-3-hidroxiacil-CoA se dehidrogeneaz fermentativ cu forma

rea 3-cetoacil-CoA. Reacia e catalizat de L-3-hidroxiacil-CoA DH cu acceptorul
su specific de electroni-N A D +. Enzima posed specificitate absolut fa de L-
stereoizomer. Echivalenii redui sunt transmii n lanul respirator, cu fonnarea respec
tiv a 3 molecule de ATP.
OH H o
I I E3 II
R f r C H 2 ~ SCoA
I I
H H O NA D NADH +
d) Ultima reacie de oxidare din acest ciclu e catalizat dc acil-CoA acetil

transferaz (tiolaz).
Reacionnd cu HS-CoA liber, substratul se scindeaz, formnd un fragment de 2
atomi de (acetil CoA) i ester al acidului gras cu 2 atomi de mai puin. O reacie de
tioliz, scindare favorizat de interaciunea cu grupa tiolic din CoA.
Acil-CoA scurtat e supus oxidrii continue n acelai ciclu, cu formarea n final
a unui nou acetil-CoA, reducnd lanul cu 2 atomi de C.
Stoichiometria unui ciclu de -oxidare:
Oxidarea acidului palmitic, C|6~SCoA (palmitoilul-CoA), necesit 7 cicluri. n ultimul
ciclu, C4 -oxoacil-CoA, prin tioliz, formeaz 2 molecule de acetil-CoA.
Cn-acil~CoA + FAD + H20 +N A D + + HSCoA -------- *-
------- Cn.acil~CoA + NADH + FADH2 + H+ + Acetil-CoA
Stoichiometria oxidrii C | 6 ~CoA:
a) Palmitoil~CoA + 7CoA + 7 0 2 + 35Pj + 35ADP -
-------- *- 8 acetil~CoA + 35ATP + 42H20
C ]6~CoA + 7FAD + 7H20 + 7NAD" + 7CoA -------- --

-------- - 8 ,C~SCoA + 7FADH 2 + 7NADH + 7H~
I
O
Acetil-CoA, format la oxidarea acizilor grai, nu se deosebete cu nimic de
acetil-CoA care se formeaz din piruvat. Grupa acetilic se oxideaz n final pn la
C 0 2 i H ,0, prin ciclul Krebs.
b) 8 acetil~CoA + 160, + 96Pi + 96ADP -------- -
8 HSC 0 A + 96ATP + 16C0, + 104R O
Numrul de molecule ATP eliberate n final la oxidarea palmitoil-CoA este: 1 4 - din
7FADH2; 21 - d in 7 NADH; 8x12 = 9 6 - d in 8 molecule de acetil-CoA, i n total:
96+ 21 + 14=131. Aici trebuie s avem n vedere c 2 legturi fosfat macroergice au
fost consumate pentru activarea palmitatului la scindarea ATP n AMP i 2(.
Aadar, beneficiul net n ATP este de 129 molecule la oxidarea acidului palmitic. Suma
reaciilor a i b este, respectiv:
c) Palmitoil~CoA + 2302+ 131P.+l 31 ADP ------- _
-------- ^ 8 HSC 0 A +131 ATP + 16 C 0 2+ 146H20
Arderea acidului palmitic d un efect energetic major egalat cu:
CH 3 (CH 2 ) 14 C 0 0 H + 2 3 0 2 -------- 16C
16CC02 + 146H20 - AG = - 2340kcal.
Coeficientul respirator pentru palmitat este d e :
CR = 16mol. , rezult / 23 mol. 0 2 consumat = 0,7
Comparativ cu arderea glucozei:
CR = 6 mol. C 0 2 / 6 mol.O, = 1,0
Randamentul de conservare a energiei libere n ATP este aproximativ egal cu 40%.
-oxidarea acizilor grai nesaturai decurge normal pn n vecintatea legturii
duble originale, avnd configuraia cis. Sunt necesare trei cicluri de scindare. Prezena
legturii duble ntre C 3 i C4 mpiedic formarea legturii similare ntre C2 i C3. Sub
aciunea izomerazei, legtura dubl frece n trans- A2 -legtur dubl:
H3C - ( C H 2)5- C = C - C H 2- C ~ S C o A
3 II Izomeraza
cis - -enoil-CoA O
H
I
H3C - ( C H 2)5- C H 2- C = C - C ~ S C o A
2
trans - -enoil-CoA H
I O
I
Reaciile ulterioare se aseamn cu cele ale oxidrii acizilor grai saturai. Pentru
oxidarea acizilor grai polienici e necesar i o alt enzim rezultat din hidratarea legturii
duble D-izomer-3-hidroxiacil-CoA, care nu poate fi substrat al enzimei de tipul L-DH.
Enzim - epimeraza modific configuraia grupei OH la C3.
H H H H
Epimeraza
H3C - (CH2)4 C = C - CH2- C = C - C H 2- C - C H 2- ~ SCoA
5
D - 3 - hidroxi - cis - -e n oil-C oA QH
I I
O
H H H H OH
I I I I I
H3C - (CH2)4- C - - C H 2- C = CH2- C CH2- C ~ SCoA
5
L - 3 -hidroxi - cis - -en oil-C oA H O
Oxidarea acizilor grai cu numr impar de atomi

n celul acizi de acest fel se conin n cantiti mici. Se oxideaz n acelai mod, ns
la ultima etap de scindare se fonneaz o molecul de propionil-CoA i doar o molecu
l de acetil-CoA.
Propionatul n surplus de ATP se carboxileaz, cu fonnarea D-izomerului metilmalo-
nil-CoA. Reacia e catalizat de propionil-CoA-carboxilaza, enzim ce conine
vitamina H (biotin dependent).
H 3 CCH2 C~SCoA
C-SCoA H 3 C CHC~SCoA
U S C u o i^ I,
O ATP ~ A M P+2P; O
D -rretilm alonil-C oA
Graie unei racemaze E,, D-izomerul este modificat n L, ultimul servind drept
substrat pentru o mutaz E2, ce l transform n succinil-CoA.
COO' COO' COO'
I I I
CH 3 H 3 C CH r ^ H 2
I I
0 = C ~ S C oA 0 = C ~ S C oA
CH 2
I
D L 0 = C ~ S C oA
Reaciile descrise au modificatori intramoleculari - grupa = O, ce migreaz de

la C, la C3, substituind atomul de H. Izomerizarea neordinar e catalizat de metilmalonil
mutaz - o enzim ce conine drept cofactor un compus al vitaminei ,r
Metilmalonil-CoA servete drept produs intermediar i la procesul oxidrii unor
aminoacizi: metionin, valin, izoleucin. La om s-au nregistrat un ir de tulburri ale
metabolismului acestui produs, manifestat nc n fraged copilrie. Diminuarea sau
lipsa complet a enzimei date este un defect genetic, adic netransformarea n succinil-
CoA. n snge i n urin apare acidul metilmalonic, micornd pH sngelui, ce provoa
c acidemie metilmalonic. Situaia poate fi ameliorat numai dac copiilor li se
administreaz cantiti mari de vitamin B 12, la o diminuare a vitezei acestei reacii.
Dac defectul genetic afecteaz molecula proteic a mutazei, vitamina B p n u e n
stare s redreseze situaia i maladia devine incurabil.
cc- i (o-oxidarea. Exist ci alternative de oxidare a acizilor grai, i anume: a- i
(D-oxidarea. Numai o mic parte din acizii grai pot fi oxidai prin astfel de mecanisme.
Ctroxidarea predomin n esutul nervos i necesit NAD+,vit.C, ATP, 0 2 ,Fe2+.
Prin acest proces se fonneaz hidroxiacizii grai superiori, proprii lipidelor SNC.
Este o cale particular de degradare a acizilor grai, iar semnificaie cantitativ. Au
loc concomitent dou procese:
- eliminarea carboxilului sub form de C 0 2 i
- oxidarea Cala aldehid.
Procesul de a-oxidare are loc n prezena enzimei acid gras peroxidaz (AGP),
care necesit prezena apei oxigenate.
r - c h 2 - c h 2- o h
Alcool l ^ NADH+ H+
~ 2H20 4AD*
H2 0 2 > 2
R C H 2 C H 2 C O OH R C H 2CH O
Acid gras Aldehid >â D
l . JN
NADH+H+
R -C H 2 -C O O H
Acid gras cu un carbon mai puin
n concluzie, cteva precizri legate de procesul a-oxidare:
- nu intervine coenzim A;
- nu se fonneaz ATP;
- H ,0 , necesar rezult prin autooxidarea flavinenzimelor;
- aldehida rezultat poate fi redus Ia alcool sau oxidat la acidul corespunztor, care
reiaiml de reacii;
- reaciile nu pot duce la degradarea total a acizilor grai, deoarece enzima este
activ numai la acizii grai C ]3 -C]8.
- a-oxidarea acizilor grai a fost evideniat n creier.
(o-oxidarea catalizat de monooxigenaze hepatice, ce are loc n microzom, necesi
t 0 2, NADPH, cit P-450. n final, acidul gras este degradat prin -oxidare.
O xidarea acizilor grai (C 2 0 - C 26)n peroxizom i. Oxidarea n cauz conduce
la acetil-CoA, dar nu este asociat cu sinteza de ATP. Acetil-CoA difuzeaz din
peroxizomi n mitocondrii, unde este oxidat la , i H 2 0 , cu sinteza cuplat de
ATP sau este convertit n corpi cetonici. - oxidarea peroxizomal difer de
cea mitocondrial prin reacia de oxidare a acil-CoA la enoil-CoA i e catalizat
de o oxidaz:
O2 H2 O2
R(CH2) C~SCoA R(CH2 )C H = C H -C ~ S C o A
O O
Catalaza n continuare scindeaza H ,0 ,: 2 H ,0 , ------- 2 H ,0 + O,

Fie c H ,0, servete ca oxidant n reaciile catalizate depemxidaze:
RH, + 2 H 2 0 2 -------- RO, + 2H ,0
Amploarea -oxidrii n peroxizomi variaz n dependen de factorii nutriionali,
honnonali, medicamentoi. Numrul peroxizomilor i coninutul lor crete la diabet,
inaniie, la administrarea unor medicamente (aspirin, ageni hipolipemiani), la indigestia
n urma reaciilor cu exces de lipide, la ingerarea acizilor grai superiori.
Absena peroxizomilor cauzeaz sindromul Zellweger manifestat prin creterea
marcat a acizilor grai cu caten foarte lung (C,4 -C26) i deces n primele luni de via.
La blocarea -oxidrii sau a deficitului de camitin cota acestor ci este major - n
urin se depisteaz derivai ai a-hidroxilailor i ai acizilor dicarboxilici, precum i esteri
ai glicerolului i camitinei cu radicalii acil.
Deficitul acil CoA dehidrogenazelor (afeciuni cu transmitere autosomal recesiv) se
manifest dup vrsta de 1 an, o dat cu apariia unor perioade mai ndelungate ntre
mese - 1 2 ore, cu com, hipoglicemie sever. n absena diagnosticului i a tratamentului
corect imposibilitatea producerii de energie conduce la deces.
Anomaliile enzimelor de transport sau de oxidarea acizilor grai, ct i deficitul
riboflavinei se evideniaz n special n organele cu necesiti metabolice majore
(miocardul, muchiul sceletic). Steatoza hepatic se asociaz cu insuficiene pluriorganice
i neuropatii severe.
n plasm se evideniaz prezena unei hipoglicemii, absena corpilor cetonici i
acumularea acidului lactic-acidoza lactic.
CETOGENEZA
Acetil-CoA, format la oxidarea acizilor grai, se include n ciclul Krebs n condiiile n
care scindarea lipidelor i a glucidelor e echilibrat. Cu certitudine este justificat fraza
precum c lipidele ard n flacra glucidelor- fraz utilizat frecvent de savani.
Cooperarea acetil-CoA e dependent de accesibilitatea oxaloacetatului pentru sinteza
cifratului.
In condiiile surplusului de grsimi, soarta acetilului se modific. n lipsa glucidelor
sau la dereglrile utilizrii lor, concentraia oxaloacetatului se micoreaz. La inaniie,
diabet oxaloacetatul se utilizeaz pentru generarea glucozei i nu poate fi condensat
cu acetil-CoA. n astfel de condiii cile de metabolizare recurg la fonnarea
corpilor cetonici: acetoacetatul, -hidroxibutirat i aceton.
a) Acetoacetatul se formeaz n trei etape:
1) Enzima -Ej e acetil-CoA-acetil transferaz, ce catalizeaz o reacie invers celei
de tioliz n etapa de oxidare a acizilor grai.
2CH3 C~SCo A CH 3 CCH 2 C~SCoA

II II II
O HSCoA o o
2) E2 e o hidroximetilglutaril sintaz, ce conduce la formarea 3-hidroxi-3-
metilglutaril-CoA.
H20 OH
C H 3- C C H 2 C~SCoA OO CCH,i - -CH 2 C~SCoA

I
o o CH3 o
A cctil-CoA
3-hidroxi-3-m etilglutaril-C oA
3) Graie liazei (E3) corespunztoare, are loc scindarea produsului cu formarea:

CH 3 - C - C H 2- C O O H + CH 3 C~SCoA
O O
A cetoacetat Acetil-CoA
4) Reacia sumar a procesului:
2CH 3 C~SCoA - H20 , - , COOH + 2 HSC 0 A + H+

I
O o
b)n matricea mitocondrial acetoacetatul se reduce la 3-hidmxibutirat. Raportul

dintre aceti produi e dependent de relaia NADH/NAD+ n mitocondrii. Enzima
ce catalizeaz aceast reacie reversibil e hidroxibutirat dehidrogenaza:

3 2 - + NADH + + 3 i 2 COO' + NAD+

D -3-hidroxibutirat
) Acetoacetatul se modific spontan prin decarboxilare n aceton. Persoanele

cu exces de acetoacetat n snge la expirare eman miros de aceton.
CH 3 CH-, COO' ------ I * - CH 3 CH 3

II > II
o co2 o
A c e to n a
Corpii cetonici genereaz n ficat, difuzionnd din mitocondrii n snge i n esuturile

periferice.
Schematic, sinteza corpilor cetonici n ficat i utilizarea lor n esuturile periferice este
redat tnai jos.
', / PERIFERIC
f
O xidarea 2 A cetil
C a ta b o lism u l AG Iii! ItA
G lic o liz
a m in o a c iz ilo r
A cetoacetil
F I C A T 2A cetilC oA S u ccinat- -Jf
- ' kw
C oA A c e t ilCoA^
ilC o A j T CoA
3 -H -3 M G C o A -----X Tioforazi
A cetoacetil C oA
k ^ . A c etilC o A
lUCCll
A cetoacetat .cetoacetat
NADH+H*
1 NAD'
3-HBI 3-H B
3-Hidroxibutirat
Sinteza corpilor cetonici n fic a t i utilizarea lor n esuturile perifirice
Pn acum civa ani se considera c corpii cetonici sunt doar produse ale scindrii,
far vreun rol fiziologic. G. Cahill a demonstrat rolul lor n metabolismul energetic: muchiul
cardiac, stratul cortical al rinichilor preponderent utilizeaz nu glucoz, ci acetoacetat.
Glucoza este o surs de combustibil pentru creierul oamenilor cu o raie bine balanat.
In caz de inaniieori diabet, creierul se adapteaz la utilizarea acetoacetatului. n
condiiile inaniiei de lung durat, pn la 75% din necesitile creierului sunt satisfcute
de acetoacetat.
Cetoliza. Acetoacetatul este activat prin transferul HSCoA de la succinil-CoA.
Reacia catalizat de o transferaz - CoA specific (E,).
CH3 cCH2 COO' 7 =^4 ^ CH3CH 2 C~SCoA

II ' \ II II
Q Succinil-SCoA Succinatul O O
Acetoacetil-CoA este scindat de o tiolaz (E2), cu formarea a 2 molecule de

CH 3 CO~SCoA, utilizate ulterior n ciclul Krebs.
C H 3 , C ~ SC o A + HSCoA 2CH3 C~SCoA
I
o
II
o o
I
Cetoliza genereaz ATP prin intennediul ciclului Krebs i al lanului respirator
mitocondrial. Bilanul energetic net la oxidarea acetoacetatului este de 23 ATP, pe cnd
oxidarea unui mol de -hidroxibutirat genereaz 26 mol de ATP.
Ficatul asigur celelalte organe cu acetoacetat. El nu posed enzima trans-CoA -
specific. Aadar, acetoacetatul e o form solubil de transport al componentelor acetil.
Acetoacetatului i se confer i rol reglator-cantitile mari n snge asigur un surplus
de acetil ce micoreaz lipoliza n esutul lipos.
Amintim: CH.CO~SCoA nu poate fi reutilizat pentru sinteza glucozei, fiindc nu
poate fi convertit n piruvat sau oxaloacetat. Doar atomii de carbon, datorit
decarboxilrii n ciclul Krebs, sunt eliminai - 2COr
Acetona poate fi utilizat pe dou ci pn la propandiol (CH 3-CHOH-CH 2 OH) i
apoi scindat, cu formarea fragmentelor acetil i formil sau graie unei duble hidroxilri
(acetol, metilglioxal) este transformat n acidul piruvic.
Mrirea concentraiei de corpi cetonici e denumit cetonemie, iar apariia lor n uri
n - cetonurie. Situaia metabolic asociat cu mirosul acetonei la respiraie este
considerat drept cetoz.
La inaniie, dereglri gastrointestinale la copii sau gravide, ori la glucozurie renal
sau la modificri eseniale ale dietei de la obinuit la cea srac n glucide i bogat n
lipide, - n toate aceste situaii se observ amplificarea metabolismului lipidic i
diminuarea celui glucidic(incluznd i diabetul zaharat n care nu are loc utilizarea glucozei),
cu apariia cetozei. E inhibat resinteza acizilor grai, cu reducerea capacitii esuturilor
extrahepatici de a utiliza acetoacetatul, cauzat de amplificarea sintezei lui.
n cetoacidoza diabetic cantitatea corpilor cetonici depete 20 mmol/L, valorile
nonnale fiind de 3-5 mmol/L.
Consecinele cetozei sunt determinate de caracterul eliminrii hidroxibutiratului i
acetoacetatului din organism. Fiind anioni la excreie, se pierd i cationii-primordial
Na+. Va rezulta cetoacidoza. Concomitent cu srurile acestor acizi i glucoza la diabetul
zaharat, se elimin prin urin i cantiti mari de ap, provocnd dehidratarea organismului.
Cetogcneza este diminuat sau absent n deficiena activitii enzimelor implicate n
-oxidarea acizilor grai, ct i micorarea activitii (sau exprimrii) HMC - CoA-
sintetazei. n ambele situaii prelungirea perioadelor interalimentare poate avea consecine
metabolice severe, ce se manifest prin tulburri neurologice.
BIOSINTEZA LIPIDELO R
Calea de sintez a acizilor grai nu reprezint reversibilitatea celei de scindare. E ]
nou secven de reacii ce atest faptul c cile dc degradare i sintez n sistemele
biologice nu sunt identice. Ce le este n comun i care este diferena ntre ele?
1. Sinteza acizilor grai are loc n citozol, scindarea lor - n matricea mitocondrial.
2. Produsele intermediare n sintez sunt legate covalent de grupele SH a proteinei
transportatoare de acil (ACP), pe cnd n procesul scindrii acizilor grai acetia sunt
fixai de CoA.
3. Enzimele sintezei acizilor grai la organismele superioare sunt structurate n
complex multienzimatic denumit acid gras - sintetaz (AGS). Enzimele, cataliznd reaciile
de scindare, nu predispun la asociere.
4. Elongarea catenei acizilor grai e determinat de adiia consecutiv a
componentului bicarbonic din acetil-CoA. Donator activ al acestor componente e
malonil-ACP. Declanator n reacia de elongaree detaarea ,.
5. Rolul reductor n sinteza acizilor grai l joac NADPH.
6 . Elongarea, sub aciunea AGS, se stopeaz la etapa formrii palmitatului (C 16).
Elongarea ulterioar i formarea legturilor duble e catalizat de alte sisteme fermentative.

Transferul grupelor acil. Acizii grai sunt sintetizai n citozol, pe cnd acetil-CoA
se fonneaz n mitocondrii din piruvat. E necesar transferul lui din mitocondrii n citozol.
E vdit c mitocondriile sunt impermeabile pentru acetil-CoA; carnitina transfer acizii
grai cu caten lung. Ocolirea acestei bariere se realizeaz cu implicarea citratului
ce va deplasa grupele acil prin membrana intern mitocondrial (MIM) - vezi
schema de mai jos.
Aadar, la transferul fiecrei molecule de acetil-CoA din mitocondrii n citozol, se
formeaz o molecul de NADPH, efectiv necesar pentru sinteza acizilor grai.
Etapele sintezei acizilor grai. Un moment decisiv n sinteza acizilor grai e
formarea malonil-CoA. A fost demonstrat perfect c pentru sintez e nevoie de
bicarbonat. Sinteza nccesit carboxilarea acetil-CoA n malonil, reacie catalizat de
acetil-CoA-carboxilaz, posednd drept coenzim biotina.
Grupa carboxilic a biotinei se fixeaz covalent de aininogrupa lizinei n
carboxilaz. Procesul de carboxilare are loc n anumite etape.
E-biotina + HCO 3 + A T P ----- *- E-biotina-C0 2 + ADP + Pj

La aceast etap se formeaz carboxibiotina care transfer n etapa urmtoare C 0 2
la acetil-CoA.
E-biotina-CO 9 + C H ^-C ~ S C o A ----- E-biotina + 'O O C CH 2 C~SCoA

3 II I
o o
Reacia enzimatic dat e de tipul ping-pong i const n faptul c eliberarea unui
sau a mai multor produse ale reaciei are loc pn la legarea tuturor substraturilor. Enzima
e compus din mai multe subuniti ce catalizeaz anumitele reacii:
a) Biotina este fixat covalent de o protein mic (22 kDa), denumit proteina
transportatoare de biotin.
b) Carboxilarea componentului biotinic n complex e catalizat de a doua
subunitate - biotin carboxilaz.
c) Catalizeaz transferul , activat de la carboxibiotin pe acetil-CoA o transcar-
boxilaz- treia subunitate. Trecerea enzimei (complexului) n form activ de poli
mer fibrilare reglat alosteric. Reglator principal e citratul care deplaseaz echilibrul
reaciei spre forma fibrilar, unde se creeaz condiii optime de orientare a biotinei
spre substrat. Palmitoil-CoA deplaseaz reacia spre forma protomer neactiv.
S-a stabilit c produsele intermediare ale sintezei AG sunt fixate de proteina
transportatoare de acil prin captul HS al acidului fosfopantoteinic. Acest component,
la scindarea AG, se include n structura CoA, iar la sintez e legat cu serina n ACP.
H H ' H OII C H 3 0
1 1' 1, 1 1 J II 1'
11
C H 2 C H 2 N + C - -CH2- C H 2-- N -"-C C H - C H , - 0 -p-o:
1 II 1 II 1 1 1
,'.0 0 C H3 o; ;
Tioetanolam ina
"V
p-alanina A cidul pantoic
A cidul fosfopantoteinic
n sinteza acizilor grai elongarea e precedat de formarea acetil-ACP i malo-

nil-ACP, reacii catalizate de acetil transacilaz (E}) i malonil transacilaz (E J
C~SCoA + - C - S A C P + HSCoA
il I
0 0
'O O C CH 2 C~SCoA + A C P 'J ^ 'O O C CH 2 C-SACP + HSCoA
II I
O O
Ultima enzim e foarte specific, pe cnd acetil-TA poate transfera i alte grupe
acil, fie chiar i cu o vitez mai mic. Sinteza AG, cu numr impar de atomi C, ncepe
de la propionil-ACP, sintetizat din propionil-CoA, sub aciunea acetil-transferazei.
Ciclul de sintez este urmat de:
Acetil-ACP interacioneaz cu malonil-ACP i formeaz acetoacetil-. Reacia
de condensare este catalizat de acil-malonil-ACP enzim de condensare (sau -
cetoacil-A CP-sintaza).
O _ C0 2 O
II 'E, "jf I
CH 3 C-SACP +'OOCCH C~SACPW=^f >-CH3 - C H 2- C ~ SACP
2
ii 11
O HS-ACP O Acetoaeetil-ACP
Care este cauza c fragmentul 4 carbonic nu se formeaz din dou secvene a cte
doi atomi de carbon fiecare? La sinteza din dou molecule de acetil-ACP nu e convenabil
echilibrul acestei reacii, ci e acceptabil pentru participarea malonil-ACP, catalizat
de decarboxilarea lui, ceea ce micoreaz cu mult nivelul energiei libere. Energia liber
condensat n malonil-CoA, ca rezultat al carboxilrii, se degaj la decarboxilare i
e nsoit de sinteza acetoacetil-ACP.
Lund n considerare faptul c , e necesar pentru sinteza AG, atomul su de
nu apare n produsul format. Toi atomii de din AG cu numr par sunt de origine
acetil-CoA.
Urmtoarele trei etape constau n reducerea grupei de pe lng atomul C 3 n
grupa metilen.
E, este D-3-hidroxibutiril-ACP-reductaz. Aceast reacie se deosebete de reac
ia corespunztoare n oxidare prin: a) se formeaz D, dar nu L-epimerul si b) drept
reagent reductor servete NADPH, pe cnd la oxidare este utilizat NAD+.
O N A D P H +_ NADP+ H O
CH 3 - C CH 2 C-SA CP CH 3 - C - C H 2 - C ~ S A C P
O OH
Reacia ilustreaz principiul determinant - n reaciile de biosintez este utilizat

NADPH, pe cnd n reaciile de catabolism este generat NADH.
Enzima E 3 - D-3-hidroxiacd-ACP-dehidrataza catalizeaz formarea trans-enoil-
ACP (crotonil-ACP)
H H
I II I II
c h 3 - c - c h 2- c ~ s a c p CH 3 C = C C-SA CP
I I
OH H-,0
Enzima E4-tra n s tf-enoil-ACP-reductaza reduce produsul la butiril-ACP.
H 9 N A D PH +H + N A D P+
CH 3 C = C C-SA CP CH 3 CH 2 - C H 2 -C - S A C P
I 3 2 2 I
H o
n reacia respectiv a -oxidrii este utilizat FAD.
Aadar, primul ciclu de elongare a luat sfrit. Cele descrise mai sus schematic pot fi
reprezentate n felul urmtor
A cetil-CoA
H CO 3+ ATP C itrat, insulin
Acetil-CoA '
carboxilaza
' A D P T p i+ H+ Palm itoil-CoA , glucagon
M alonil-CoA A cetil-CoA
A cetoacetil-A C P
N A D PH +H +
3-cetoacil-ieductaza , 1
NADP+
3-hidroxibutiril-A CP
3-hidroxibutiril-ACP '
dehidrataza
H ,0
C ro .o a ; A C )A D p H + H t
Enoil-ACP-reductaza ' M
,r N A D P+
Butiril-ACP
Schema unui ciclu n sinteza acizilor grai
n ciclul urmtor de sintez a AG, butiril-ACP se condenseaz cu malonil-ACP, for-
mnd n final C6 -acil-ACP, care i continu ciclul de sintez pn la formarea C]6 -acil-
ACP, ce este hidrolizat, crend acidul palmitic i HS-ACP.
Stoichiometria procesului de sintez a palmitatului:
Acetil-ACP + 7Malonil-ACP + 14NADPH + 14H+ ------
------ ^ Palmitat + 7C O ,+ 14NADP + 8 ACP + 6H ,0
Sinteza malonil-CoA necesit:
7Acetil-CoA + 7CO,2 + 7ATP ------ _ 7MalonilCoA + 7ADP + 7P 1 + 7 H +
n final: (ACP = CoA)
8 Acetil-CoA + 7ATP + 14NADPH + 7H+ ------^
----- Palmitat + 14NADP++8C oA + 7ADP + 7P.) + 6 HX> 2
Ce reprezint acid gras sintaza? Este un complex multienzimatic cu masa mai
mare de 400 kDa, formnd dou subuniti, fiecare fiind codificat de o anumit gen.
Subunitatea A conine -oxiacil-sintaz, -oxiacil-reductaz i tioesteraz; protei
na transportatoare de acil este ataat tot Ia aceast subunitate.
Subunitatea B\ acetil transacilaz,
maloniltransacilaz, -hidroxiacil-ACP Domeniul I Domeniul II Domeniul III
-dehidrataz, enoil-ACP-reductaz. Fixarea
E liberarea
substratului
p alm itatului
AGS funcioneaz sub forma unui dimer A cetil-C oA
, M alonil-C oA
-gruparea ACP-SH a unui mono Reducerea
mer conlucreaz cu gruparea cis-SH
a celuilalt monomer (HS-cistein din
-cetoacil sintaz) (fig.5.20).
Lanul de
Avantajele acestor complexe mul elongare
tienzimatice sunt evidente, dar e cazul
Lanul de .
s le mai nominalizm o dat: elongare
1. Contact perfect far transformri
structurale eseniale.
2. Transfer direct al intermediatori-
lor de la un centru activ la altul. E liberarea
A cetil-C oA
3. Compuii nu disemineaz n cito palm itatului M alonil-C oA
zol i n-au nevoie s se caute.

4. Compuii sunt izolai i protejai
Domeniul III Domeniul II Domeniul I
de reacii concurente.
Evident c transferul a 8 molecule
de acetil-CoA din mitocondrii n cito- F ig u ra 5 .2 0 . Com plexul enzim atic A G S din
zoi e nsoit i de fonnarea a 8 NADPH. f ,catul animai
Cele 6 N ADPH necesare pentru ATa - acetil transacilaza; KS - 3-cetoacil-sintaza;
. . . , _ , TEa - tioesteraza; KR -3-cetoacil-reductaza;
Sinteza palmitatului genereaz in calea MTa - maloitil transacilaza; ERa - enoil-A CP-reductaza.
pentozo-fosfailor. DHa -3-hidroxi-butiril - A C P - dehidrataza;
Biosinteza acizilor grai cu catena mai lung i a celor nesaturai. La eucariote
acizii grai cu catena mai lung se obin prin elongarea acidului palmitic sau a altor acizi
exogeni. Au loc, graie sistemelor enzimatice fixate de membranele reticulului
endoplasmatic, sisteme microzomale care ataeaz la acidul preexistent uniti C2,
furnizate de malonil-CoA i ataate la captul carboxilic al acizilor saturai i nesaturai.
Sistemele microzomale catalizeaz i fonnarea legturii duble n compuii CoA a
acizilor grai cu caten lung. Capacitatea de a sintetiza acizi grai nesaturai e limitat.
Pot fi sintetizai acizii grai monoetilenici. Introducerea unei legturi duble are loc
graie unei monooxigenaze, care coopteaz gruparea OH, urmat de dehidratare.
Cjg-CoA + O2+2H cit.b 5
2 cit.b 5 reductaza 2NADPH +2H
'( F e ^ X / (FAD)
A cilgras
CoA desaturaza
2 cit b<it.b 5 reductaza,

1 8; 1 (- Acis ) + 2 H 2 O \ Fj +) (FADH2) 2NADP
Acest sistem favorabil combinrii reaciilor de elongare i desaturaie confer
introducerea legturii duble ntre cea precedent i gruparea COO\ Mamiferele nu
posed sisteme enzimatice, ce ar cataliza formarea legturii duble dincolo de C9. De
aceea nu pot fi sintetizai acizii linoleic (18:2 cis-9 ,A12) i linolenic (18:3)- cis-9, A12,
A15). Ei sunt acizi grai indispensabili la sinteza fosfolipidelor, esterilor colestorului,
prostaglandinelor. Pot fi obinui numai pe cale exogen, deoarece reprezint AG nutritivi
eseniali.
Acidul linoleic se transform n acid arahidonic conform reaciilor:
CH 3 (CH2)4 C H = C H CH 2 C H = C H (CH 2 ) 7 C~SCoA

9,12 f
'1 8 :- A 2N A D PH +2H + 0 2 O
Desamrare
'2 N A D P ++ 2 H 20
CH 3 (CH2)4 C H = C H - C H 2 C H = C H - C H 2 C H = C H - (C H 2 ) 4
C~SCoA
Elongare I
o
' H SCoA + C O 2
CH3 (CH2)4- C H = C H CH 2 - C H = C H CH 2 C H = C t- (CH 2 ) 6

8,11,14
'2 0 :- 2 N A D P H + 2 H ~ -0 2 C~SCoA
Desamrare
O
2N A DP + 2 H 20
r 5,8,11,14
WO: - A Arahidonil-CoA
Viteza de sintez e determinat de viteza reaciei catalizate de acetil-CoA-carboxilaza,
cu reglatorul su alosteric - citratul. Sinteza AG atinge apogeul n condiiile surplusului
de glucide i coninutului redus de AG. Concentraia citratului e mare cnd avem n
surplus acetil-CoA i ATP. Antagonistul citratului, cu efect asupra acetil-CoA carboxila-
zei, este palmitoil-CoA, care se acumuleaz n surplusul de AG. El poate s inhibe
funcia proteinei transportatoare de citrat din mitocondrii n citozol i e n stare s diminueze
generarea NADPH, inhibnd G-6 -P-dehidrogenaza n ciclul pentozo-fosfailor. Controlul
adaptiv de durat tardiv e determinat de viteza sintezei i a degradrii enzimelor
participante la sinteza acizilor grai.
Un aport exagerat alimentar care depete necesitile energetice ale organismului
stimuleaz excesiv biosinteza acizilor grai. Excesul de glucide, alcool, proteine conduce
la steatoza hepatic (degenerescena gras a ficatului), obezitate, hipertrigliceridemia
familial endogen (IV). Deficitul ereditar al acetil CoA carboxilazei, ct i al biotinei
deregleaz biosinteza acizilor grai, viznd un tablou clinic sever.
Biosinteza triacilglicerolilor
Acizii grai, att endogeni c i exogeni sunt activai n prezena HSCoA n acil CoA
sub aciunea acil CoA-sintetazei. Exist trei izoforme ale enzimei (vezi mai sus). Celulele
hepatice, spre deosebire de adipocite, pot utiliza glicerolul de diferit provenien (endo-
sau exogen). Glicerol kinaza prezent numai n ficat, fosforileaz glicerolul, rezultant al
dijestiei TAG alimentare, absorbiei i captrii lui.
Biosinteza necesit prezena unor precursori comuni: glicerol-3-fosfat, CoA acil.
Sursele acestor rezultante pot fi:
1) Glicerol-3-fosfatul, ca rezultat al glicolizei sau sintetizat din glicerol i ATP,
reacie catalizat de glicerol kinaz.
AG + A T P + HSCoA Acil-CoA + AMP + PPi
PPi + H 20 V 2 P j+ 2 H +
2)CoAesterii AG, prin intermediul acil-CoA-sintetazei.

Sinteza triacilglicerolilor este redat mai jos. Enzimele E, ,E2 i E3 sunt glicerol-fosfat-
acil transferaze. Enzimele respective sunt asociate ntr-un complex fixat de membrana -
TAG-sintaz. Pentru sintez, TAG - fosfatidatul este hidrolizat de ofosfataz
specific, cu formarea diacilglicerolului care este acilat, formnd TAG n urma reaciei
catalizate de diacilglicerolacil transferaz E3.
2- CH2 R
A cil-C oA HSCoA
I
- o' '
V
I I
2 - 0 - = 0
Acil transferaza 2 = 0
Acil transferaza /
O- A cil-C oA
G licerol-3-fosfat M onoacilglicerolfosfat
SCoA (lizofosfatidat)
- O - C - R

r 2
I / -
CH2 = 0
A cidul fosfatidic \ H
220^

Fosfataza
V P II
X 2 c ~ r ,
Acil transferaza
TAG r 2
T
H SCoA
T ,
A cil-C oA
II I
Sinteza TAG 2 DAG
Biosinteza lipidelor membranare. Sinteza de novo (din precursori) a fosfatidelor

utilizeaz ca intermediar acidul fosfatidic, care interacioneaz cu CTP, formnd CDP-
DAC; la condensarea cu serina rezult fosfolipidul fosfalidilserina, care, fiind decarboxilat,
finalizeaz cu fosfalidiletanolamina.
Aminogrupa fosfatidiletanolaminei se metileaza de trei ori, n calitate de donator
servind S-adenozilmetionina (SAM), formnd fosfatidilcholina.
nh2
J
CH2 co R, p CH2 o CO R, N ^ ^ ^CcH
I CTP I
H C -O -C O -R 2 - y y ^HC r 2 ^
Fosfatidat: I Z ' ^ 'N
c h 2- o - p - - CTP-citidii CH2 O PO P - 0 - C H 2
transferaza ^ I I -U .
' O'
Fosfatidatul CDP - diacilglicerol
Serina
OH OH
Fosfatidilserin
sintaza
ch2- o - c o - r ,
I CM P
HC- 0 -C 0 -R 2
I ô
CH 2 - 0 - j > O - C H 2 - C H - COO'
Sinteza fosfatidilcholinei de novo
O' N 3
Fosfatidilserina
Fosfatidilserin '^3
decarboxilaza (B6)
<2o COR,
- r 2
I
3 S-adenozil metionina / C H 2 2 C H 2 N H 3
T r a n sm e tila z jj']/^
3 s-adenozil homocisteina^ P -c ' 4 F o sfatid iletan o lam in a
( ) 0 - C H 2- C H 2- N ( C H 3)3
F o sfa tid ilch o lin a
O alt cale de sintez a fosfolipidelor utilizeaz cholina {calea de rezerv), consti

tuind o sintez din produse formate. Cholina este fosforilat de kinaz prin ATP, formnd
fosforilcholina, apoi utiliznd CTP i DAG se sintetizeaz fosfatidilcholina.
H O -C H 2 - CH 2 - N(CH 3 ) 3
Cholina ,
ATP
' Cholin kinaza
" Â D P
0 = P - O - C H 2 - C H 2 - N ( C H 3 )3
Fosforilcholina
^C T P
'C T P: Fosforilcholina citidil transferaza
PPi
O O
CDP - cholina
o- o-
DAG
0 CD P-cholin: DAG fosfocholin transferaza
-C M P
Fosfatidilcholina
Sinteza fosfatidilcliolinei
Schema sintezei fosfolipidelor membranare este redat mai jos.
Lizo fosfat idat

SA N -S-adenozil homocisteina
SAM-S-adenozil metionina Acil-CoA
4 CoA
Fosfatidat
h , ol C TP
\^ p p i
diacilglicerol CD P-diacilglicerol
C D P -etanolam ina , ^ - C D P - c h o lin a G -3-P. / \ / Inozitol
CMP' ^ V -C M P CM CMP
Fosfatidil 3SAM 3^H JV .... Fosfat idil- Fosfat idil-

I S Fosfatidil-
etanolam ina glicerol inozitol
cholina
^ Serina CM P
Cardiolipina
E tanolam ina
Fosfatidilserina
Cantitatea sumar afosfolipidelor ce conin inozitol n membranele celulare difer

de la 2 la 8 %, majoritatea i revine fosfatidilinozitolului. Ea e situat n membranele
interne, pe cnd cele ce posed cteva grupe de fosfor sunt n membrana plasmatic; n
componena lor intr acidul stearic i arahidonic (poziia 2 ).
Apreciind rolul acestui fosfolipid ca mesager secundar hormonal, vom reda cile princi
pale de metabolism.
CMP.
CDP-DAG
PPi
L i
TP
PA
AD,
L ATP
DAG
ATP ADP ADP

ATP
P1P(4) PIP2 (4,5)
Inozito
IP(4) IP2 (1,4) 1( ,4,5)

Metabolismul fosfatidilinozitolului
n cejule transformrile IP3( 1,4,5) sunt cauzate de 2 enzime: 5-fosfataz<Ej}i 3-

naza! E,; ce catalizeaz fosforilarea ATPd a inozitoltrifosfatului n poziia 3.
Schema de mai jos ilustreaz metabolizarea inozitoltrifosfailor n celul.
O'
0 -P = 0 PIP2(4,5) DAG
IP(4) - ^ Inozitol
IP 3 (1,4,5) O'
5-fosfataza posed mai multe izoforme att fixate de membran, ct i solubile n

citozol. 3-kinaza este specific pentru IP 3 (1,4,5), avnd o afinitate mare la acest
substrat. Ea se activeaz sub influena Ca2+i este modelat de calmodulin.
Formarea IP4 (1,3,4,5) i a metabolitului IP3( 1,3,4) se nregistreaz n celule la aci
unea hormonilor, ce mresc concentraia Ca 2 +plasmatic. Pe aceast cale are loc nu
numai anihilarea semnalului hormonal ce mrete coninutul Ca2+, dar i formarea com
puilor inozitolului care determin anumite funcii biologice, reglnd astfel torentul Ca^ n
celul i depozitarea sa.
Sinteza sfingolipidelor. Procesul parcurge cteva etape: condensarea serinei cu
palmitoil-CoA, cu fonnarea rezultantelor. Recent, s-a stabilit c sfingozina liber se
formeaz din ceramid, ca rezultat al hidrolizei de ctre ceramidaz, dar nu n consecina
oxidrii sfingoninei de flavoproteid. Actualmente, schema metabolismului sfingolipidelor
arfi urmtoarea (fig.5.21).
Sfingofosfatidele (sfingomielinele), dei se gsesc n toate membranele celulelor
eucariote, apar n cantiti mari n teaca de mielin a axonilor esutului nervos, n cantiti
mai mici n ficat, muchi, splin etc. Sfingomielinele se deosebesc ntre ele dup acidul
gras din compoziia lor. Predominani n ele sunt radicalii acil, ce aparin acidului palmitic
i stearic. Acidul nervonic (C,4,) i behenic (C2 0 0) se deceleaz cu o frecven mai mic
n aceti compui. Toate etapele de sintez a ceramidei se desfoar pe suprafaa
citozolic a membranelor reticulului endoplasmatic.
O cale alternativ de sintez a sfmgomielinei cuprinde donarea radicalului de
fosfocholin de la fosfatidilcholin. Reacia dintre ceramid i CDP-etanolamin poate
s conduc la ceramid-fosfoetanolamin.
t ' \ Palmitoil transferaza, localizat pe
' suprafaa citozolic a RE
HSCoA> C0 2
3-cetosfmganina
NA DPH + H+
Cetosfinganin reductaza
NADP*>-
Sfmganina
R-CO-SCoA^^
N-acil transferaza
HSCoA--
Dihidroceramida
FAD-
D ihidroceram id DH
FAD H f
Ceramida
F o sfo rilc h o lin a ^
CD P-cholina 'N
1 SM -sintaza
A
CM P"
Sfingomielina
H-,0 - ^
Fosforilcholini
. Cerafm dkinaza
Ceramida Ceramida-1-P
ATP
H ,0 -
Ceramidaza
Acid gras"
2S-adenozil m etionina
ATP
Sfingozina
Metiltransferaza, '
2S-adcnozil homocisteina
1 ./S fin g o zin kinaza
ADP
Sfingozina- 1-P Dimetilsfingozina
F igura 5.21. Metabolismul sfingolipidelor
FL D
AA' AP
PIP 2
V _ ^ ip ^ C D P - D A G -
PC hobt-^ DAG
Sfingomie
FNT
RFNT
1. A A - acidul arahidonic; Ceramidaza

2. AP- acidul fosfatidic;
3. Chol -cholina; Sfingozina
4. DAG - diacilglicerol; Inhibiia
5. IPj- inozitol-1,4,5-trifosfat;
Ieirea Ca proteinkinazelor
6 . PIP, - fosfatidilinozitol-4,5-P. Interaciunea j
7. LPL - lizofosfolipid; Activarea nucleazelor cu DNA Inhibiia expresiei
8. PChol - fosfocholina; I
Cascada de semnale
9. PtChol - fosfatidilcholina;
10. PL - fosfolipid.
Nucleu
Factori transcripionali
Figura 5.22. Unele mecanisme n evoluia Y
apoptozei Apoptoza
Sfingozina influeneaz activitatea multiplelor sisteme fermentative n celule. Un rol
deosebit este determinat de capacitatea de inducie a apoptozei - moartea programat
a celulelor. Acest proces st la baza aprrii organismului de infeciile virale, imunodefi-
citului n SIDA-infecii, morii celulelor la radiaie i sub influena glucocorticoizilor.
Apoptoza indus prin receptorii FNT (factorul necrotic tumoral) se studiaz intensiv,
fiind determinat de rolul biologic vdit. E stabilit c componena lipidic a membranei
plasmatice n care sunt situai aceti receptori joac un rol esenial n transmiterea sem
nalului apoptozei n nucleu. Fosfolipidele sunt sursa mesagerilor secunzi, ce regleaz
activitatea enzimelor apoptozei: proteinkinazele, fosfatazele i proteazele. Interaciunea
moleculelor-semnal cu receptorii induc activitatea enzimelor lipolitice (fosfolipazele A,C,D
i a sfmgomielinazei), cu acumularea ulterioar a compuilor hidrolizei (a. arahidonic,
DAG, ceramidei etc.), care iau parte la transmiterea semnalului indus de FNT. Dar
numai produsele ciclului sfingomielinei (ceramida i sfingozina) posed aciune proapop-
totic la contact cu celula. Acidul arahidonic, acidul fosfatidic, DAG activeaz enzima -
sfingomielinaza i n final induc acumularea produselor toxice ale ciclului sfingomielinei.
Acest mecanism e ilustrat n fig. 5.22.
Glicosfingolipidele acoper 5-10% din lipidele membranei plasmatice, n care
ndeplinesc roluri majore. n procesele de sintez se utilizeaz formele active ale glucozei
(UDP-- D-glucoza) sau galactozei (UDP--D-galactoza). Glucozil sau galactozil
transferazele respective au o activitate intens n perioada de mielinizare a sistemului
nervos.
Sulfatidele (galactocerebrozid-3-sulfatul) se sintetizeaz, utiliznd PAPS (3'-
fosfoadenozin - 5'-fosfosulfat) care nsui este format prin urmtoarea secven de reacii.
ATP PPj ATP ADP

H2 S 0 4 ^ ^-7 Adenozin-5-fosfosuUat (APS) PAPS
P irofosforilaza F osfokinaza
Reacia de sintez a sulfatidelor este catalizat de galactocerebrozid sulfokinaz.

Sulfatidele alctuiesc 15% din lipidele substanei albe a creierului.
Cele mai complexe glicosfingolipide sunt gangliozidele. Componeni ubicuitari ai
membranelor celulare, ele se gsesc n cantiti variabile i au o repartiie divers n toate
esuturile organismului uman i animal, cu o concentraie avansat n esuturile nervoase.
Fiecare tip de celul are un profil al su gangliozidic, care se modific n timpul
embriogenezei. Fiind localizate pe partea extern a membranei plasmatice, ele sunt
ancorate prin intermediul componenei ceramidice, iar poriunea lor oligoglucidic este
orientat spre mediul extracelular.
Biosinteza gangliozidelor se realizeaz n aparatul Golgi prin adiia secvenial a
monoglucidelor activate la lactozilceramid. Adiia ultimilor, ct i a acizilor sialici (NANA)
este controlat de enzime specifice: galactozil transferaze, sialil transferaze, N-
acetilgalactozaminil-, N-acetilglucozoaminil transferaze. Enzimele date posed o
specificitate relativ fa de substraturi.
Ceramida este sursa de sintez a cerebrozidelor, sulfatidelor i a gangliozidelor,
conform schemei de mai jos.
Ceramida
Sulfat
METABOLISMUL COLESTEROLULUI
Colesterolul este nu doar un component primordial al membranelor celulare i al
lipoproteinelor plasmei sngelui, dar i un precursor al multiplilor steroizi biologici-
acizilor biliari, al diferitor hormoni steroizi. Colesterolul se conine numai n alimente de
origine animal (glbenuul de ou, carnea, ficatul, lactatele i derivai ai acestora). Esterii
lui sunt hidrolizai de colesterol esteraz pancreatic, apoi e absorbit n faza micelar,
capacitatea de absorbie a colesterolului fiind limitat (300 mg). Aportul normal (800 mg
- sinteza endogen) compenseaz pierderea
inevitabil prin eliminarea intestinal a acizilor qu
biliari.
Se sintetizeaz colesterolul din acetil-CoA COO-CH 2 CH 2 CH2OH
care spre deosebire de sinteza AG, se unesc I
n molecul n alt mod. Aceast concluzie este . ., . .
_ , , , , Acidul m evalonic
confirmata de expenmentele asupra animalelor
hrnite cu acetat marcat - carbonul e radioactiv n grupa CH 3 i n grupa COOH.
Colesterolul marcat a fost extras din esuturile animalelor. Scindarea lui n etape
secvenionale, cu determinarea radioactivitii produselor, a permis stabilirea locului
atomilor de marcai de provenien metilic sau carboxilic. Informaia a contribuit la
elucidarea secvenei reaciilor fermentative n procesul de sintez a colesterolului, ce are
loc n cteva etape. Principalul organ de metabolizare a colesterolului este ficatul, dar are
loc i n intestin, suprarenale, tegumente, etc.
n etapa I se sintetizeaz acidul mevalonic - fondul citoplasmatic de 3 -hidroximetil-
glutaril produce mevalonatul utilizat n sinteza colesterolului.
n etapa II mevalonatul adiioneaz 3 grupe fosfat, ulterior pierde gr. COOH, un rest
fosfat i 2 atomi de H+, formnd A3-izopentenil pirofosfat - forma activ a unitii
izoprenice.
CoA
Acetoacetil-CoA
s - Acetil-CoA
UMG-CoA / r N
sintaza 1.
,, CoA
HMG-CoA
2NADPH + 2H+
HMG-CoA <- fs
reductaza ' ^ C oA + 2N A D P+
Mevalonat
2ATP
Mevalonat
kinaza
< c 2 ADP + 2Pi
5-pirofosfomevalonat
ATP
Fosfomevalonat
kinaza
ADP + Pi + C 0 2
Izopentenil pirofosfat 3,3-Dimetilalil pirofosfat
, (- 4 Geranil pirofosfat
/ sintaza
Geranil pirofosfat
\ s Izopentenil pirofosfat
Famezil pirofosfat
sintaza ^ .
4 PPi
Famezil pirofosfat
* Famezil pirofosfat
Scualen V + NADPH+H+
sintaza
4 . 2 P P i + NADP+
Scualen
0 2+N A D PH +H +
Scualen /
epoxidaza l
2PPi +NADP4-
]
Scualen 2,3-epoxid
2,3-oxidoscualen
ciclaza
4 l;
Cielizare
i
Lanosterol
2NADPH + 2H+
' A 2NADP+ + 3 C 0 2
Colesterol
F igura 5.23. Sinteza colesterolului

In etapa 1 are loc condensarea i izomerizarea a 6 molecule dc izopentenil pirofosfat,
cu fonnarea unei hidrocarburi denumit scualen. Apoi el se supune ciclizrii i fonneaz
lanosterolul, primul compus steroidic (IV). Aceast etap necesit O, molecular. n
final, lanosterolul se transform n colesterol (etapa V) (fig.5.23).
Sinteza colesterolului este un proces anabolic, ce necesit un aport energetic deosebit:
18 moli de acetil-CoA i 18 moli de ATP. Concentraia NADP+, H f este furnizat de
ciclulu pentozo-fosfat i de naveta citrat-piruvat.
Pentru descifrarea acestei ci originale de biosintez, cea mai complicat dintre cele
cunoscute, americanul K. Bloch, neamul F. Lynen i englezul J. Comforth, n 1961, se
nvrednicesc de premiul Nobel. Colesterolul ca substan apare numai dup ce atmosfera
pmntului a devenit aerob. Colesterolul e propriu eucariotelor, dar nu i procariotelor.
Numai colil-CoA (activat - grupa COOH) poate fi conjugat cu glicin sau taurin.
Reglarea biosintezei colesterolului
Reacia - limit a biosintezei e formarea acidului mevalonic, catalizat de o enzim
compus reglatoare - hidroximetil-glutaril-CoA reductaz. Enzima este inhibat de
mevalonat i de colesterol, se localizeaz n reticulul endoplasmatic i n form activ
are stare nefosforilat - n stare fosforilat e inactiv (fig.5.24).
SRF.BP
P ro te o liz
SREBl
N u cle u Transcripia
CITOZOL
R e ticu lu l
en d op lasm atic
V
V \ A A / W 4 mRNA
HMG CoA |T ra n sla ia
reductaza (i) H20
\ FPF rt
.- HMG CoA
4~..... ""* rpHlir^79 (a'
t S Pk\
ADP ^ A ir / Ac.mev;
AMP HMG CoA I

C o le ste r o l
F igura 5.24. Reglarea HMG CoA reductazei. S R E - segment reglator al sterolului, SRE B P - proteina
fixatoare de SRE, FPFfosfoprotein fosfataza
Reglarea e dependent i de concentraia proteinei specifice ce transport colesterolul.

Sunt caracterizate 8 tipuri de apoproteine, care solubilizeaz intens lipidele hidrofobe,
posed semnale care regleaz transferul lipidelor n esuturile specifice - int i ieirea
lor din ele.
La fixarea lipoproteinelor plasmei, ce conin colesterol cu receptori corespunztori
pe suprafaa celulelor, biosinteza colesterolului se inhib.
Viteza de sintez e dependent i de coninutul
H3c f ^ - altor steroizi n esuturi. Hormonii de tipul insulinei
k^C O O '
i honnonii tireoidieni activeaz enzima HMG-CoA
HMG reductaza, iar glucagonul la animale are efect
antagonist. U nele statine ca: sim vastatina,
lo v a sta tin a i m eva sta tin a au o stru c tu r
asemntoare cu HMG-CoA i sunt inhibitori
reversibili ai HMG-CoA reductazei. Aceti compui
3<' micoreaz nivelul plasmatic al colesterolului.
Coninutul colesterolului depinde de regimul
alimentar. Acest colesterol alimentar frneaz sinteza
reductazei n ficat i inactiveaz moleculele de enzim
Structuri similare Sim vastatina
din esut.
Celulele extrahepatice i ale intestinului recepioneaz colesterolul din serul sanguin.
Sursa principal sunt lipoproteinele de densitate mic - celulele nu-1 sintetizeaz de novo.
nglobarea colesterolului n celulele din lipoproteinele de densitate mic (LPDM -
LDL) include urmtoarele etape (fig. 5.25):
o le s te r o l
A p o -B -1 0 0
R ecicla rea
receptorilor
SINTEZA
LDL S IN T E Z A L izozom
RECEPTOR CO LESTERO LU LU I
A m in o a c izi
DNA
6
A cizii grai
-/ v w / t f V \
mR7 S U R P L U S U L D * ____ UTILIZAREA
,r proteic
R eceptor J . CO LESTER O L V .j T
^ ^ J |^ .b o z o m
D E PO Z IT A R E A
R eticu lu l e n d o p la sm a tic N E S T E R IL O R
R ecep tor proteic
F igura 5.25. Transformrile LDL n cultura fibroblatilor omului

a) LP sunt fixate de receptorii specifici pe membranele celulelor. Receptorii se
posteaz n anumite locusuri, numite adncituri cu chenar; interacioneaz prin interme
diul apo-- proteinelor i necesit Ca2+. Numrul de receptori pe un anumit tip de celul
variaz i este reglat printr-un mecanism de retroinhibiie de concentraia LP n spaiul
extracelular.
Gropiele specifice conin o protein, numit clatrin (180 kDa), care, mpreun cu
o alt protein (65kDa) formeaz o structur cu o conformaie foarte caracteristic -
elementul structural de baz e complexul proteic trivalent, denumit trischelion (3 clatrine
i 3 proteine mai mici).
b) Complexul receptor - LP - este translocat n celule prin endocitoza absorbiona-
l, formnd o bul endocitar.
c) Fuzionarea cu lizozomi, unde proteinele sunt hidrolizate pn la aminoacizi; esterii
colesterolului sunt hidrolizai de lipaza acid.
d) Colesterolul liber poate fi utilizat n biosinteza membranelor, reesterificat
pentru depunerea n celul - reacie catalizat de o acil-CoA-colesterol- acil-transfe-
raz (ACAT), rezultnd esterii lui cu diveri acizi celulari, n principal acid palmitic,
palmitoleic, oleic (preponderent, cu o singur legtur dubl). Esterii colesterolului
reprezint forma de stocare a excesului su.
n aceste celule care utilizeaz activ colesterolul din -LP, coninutul lui se regleaz
pe dou ci:
1) Colesterolul eliberat reine sinteza reductazei, frnnd i sinteza lui de novo. nsui
receptorul la LP se regleaz prin retroinhibiie (2). n fibroblati perioada de njumt-
ire dureaz 24 ore. Receptorii noi la un surplus de colesterol nu se sintetizeaz i, n aa
mod, se blocheaz transferul colesterolului din LP plasmei. Colesterolul n organism e
excretat prin celulele ficatului, fiind secretat de bil; n ficat se formeaz i acizii biliari. O
parte din acizii biliari sunt eliminai prin masele fecale, alta este absorbit. n 24 ore
organismul pierde aproximativ 0,6 -1 ,0 g colesterol. Un rol esenial la formarea
colesterolului esterificat n plasm l joac lecitin-colesterol-acil-transferaza (LCAT).
Substratul principal este fosfatidilcholina i colesterolul liber.
Fosfatidilcholina + Colesterol ---- Lizolecitina + Linoleil - colesterol
Un rol aparte l are i lipoproteinlipaza - enzim tisular ce purific plasma de
chilomicroni i pre--lipoproteine. Perioada lor de njumtire dureaz 6-12 ore; la
- 3 - 4 zile ultimele se sintetizeaz din primele i sunt saturate de colesterol.
a-lipoproteinele (HDL), sintetizate i secretate de ficat, se pot forma n parte ca
rezultat al metabolizrii chilomicronilor intestinali (fig.5.26).
Sub influena LCAT, ei capt o form specific nnobilat de esteri ai colesterolului.
Perioada de njumtire a lor e de 4-6 zile. Acidul nicotinic sporete nivelul lor i
timpul de njumtire. Este stabilit o relaie reciproc ntre p re ^ ia -L P . O funcie
auxiliar, dar important, e transportul colesterolului din esuturi n ficat, efectuat de
aceste HDL. Nivelul nalt de a-LP favorizeaz eliminarea colesterolului din esuturi,
artere i, n final, confer un efect de protejare n evoluia aterosclerozei.
n condiii fiziologice, mari cantiti de esteri ai colesterolului se acumuleaz n
unele glande endocrine, unde servesc ca precursori ai hormonilor steroizi.
Figu ra 5.26. M etabolism ul i transportul lipoproteinelor
Colesterolul liber se acumuleaz i n calculii biliari - cota lui e de pn la 60-80% din

ntreaga mas. Procesul depinde de staza bilei i de procesele inflamatorii din vezica
biliar, ce duc la micorarea solubilitii lui. Solubilitatea colesterolului n bila care conine
micele e dependent de srurile acizilorbiliariiaifosfolipidelor.
Deficitul ereditar al colesterol- 7 a-hidroxilazei impedic sinteza acizilor biliari i
determin creterea concentraiei de colesterol liber n componena bilei, ce va avea n
consecin apariia precoce a litiazei biliare.
A teroscleroza e o afeciune de acumulare a steroizilor n arterele mari, a
colesterolului, mai ales a esterilor colesterolului n celul, dup care i extracelular;
depozitarea cauzeaz proliferarea celulelor (muchiului neted) i a colagenului care, de-
reglnd integritatea suprafeei endoteliului, formeaz plci ce provoac tromboza i
agregarea trombocitelor (fig.5.27).
Colesterolul din plci e de natur plasmatic din -LP (i peretele vascular, ns e
puin capabil s sintetizeze colesterolul). n condiii de hipercolesterolemie i ale -
LP, ultimele sunt nglobate n peretele arterial cu o vitez ce depete viteza de
eliminare a lui n plasm i fixarea de HDL pentru transportul n ficat. Sistemul de eliminare
a surplusului de colesterol este suprasolicitat. Acumularea colesterolului e secundat i
de concentraia patologic mic a a-LP. E argumentat fptui c n peretele arterial
apare o insuficien relativ a hidrolazei esterilor colesterolului, ce contribuie la
acumularea lor. Alte fracii de lipoproteine-geneza lornaterosclero/ variaz. Surplusul
de pre- comport riscul de provocare a bolii ischemice a inimii.
Un aport alimentai" crescut al colesterolului, ct i dezechilibrul ntre sintez i eliminarea
(sau captarea intracelular) duce la excesul sanguin. Colesterolul se poate depune n
esuturi, formnd depozite xantomatoase, localizate primordial periorbital sau tendonal.
Deficitul de 7-dehidrocolesterol reductaz cauzeaz imposibilitatea sintezei
colesterolului (sindromul Smith-Lemli-Opitz). Nivelul seric este sczut i maladia se
caracterizeaz printr-un sindrom plurimalformativ, afectnd primordial sistemul nervos.
Deficitul ereditar al colesterol-26-hidroxilazei cauzeaz xantomatoza cerebro-
tendinoas, afeciune genetic, cauzat de blocarea etapei finale n biosinteza acizilor
biliari i acumularea excesului de colesterol n esuturi (xantoame tendinoase). Clinic, se
depisteaz dereglri neuromotorice, cu apariia precoce a neuropatiei periferice.
Tratamentul const n utilizarea inhibitorilor HMG-CoA-reductazei. Administrarea srurilor
biliare inhib biosinteza colesterolului i completeaz lipsa acestora la nivelul intestinului.
Superoxid Vitamina E
Oxidul nitric A cidul ascorbic
Peroxizii de carotenele
hidrogen Jfc lti antioxidanti
Receptorii spccifici
cu afinitate major
Alti oxidani la LDL devin ncactivi
la prezenta colestero
lului n celul
oxim
Celule
spumoase
M acrofage
Rcccptorii ncspccifici Celulele
cu afinitate joas leag
musculaturii
LPL m odificate
netede
Monocitclc ader la celulele
a endoteliale i sc strecoar
prin ele, devenind
macrofagi tisulari, miendu
sc spri endotelium
Matnceea extracelular Celule
Celule
Celulele spumoase elibereaz

Macrofagelc, consumnd
n exces LP oxidate, devin
celule spumoase
factorii dc crctcre
cretere carc
stimuleaz proliferarea
musculaturii netede i calcifi
carca plcii
Monocite
.....................
Figura 5.27. Rolul oxidrii lipoproteinei n plcile arteriale
PATOLOGIA LIPIDELOR
E concludent o maladie rar, afeciunea Tangier, cauzat de insuficiena sau lipsa
total de -LP (HDL) n snge i acumularea n esuturi a esterilor colesterolului. Sunt
descrise peste 30 de cazuri, n care predomin absorbia intensiv a chilomicronilor sa
turai de esterii colesterolului, de macrofagele reticulului endotelial. Afeciunea este
incurabil.
Deficitul de sintez sau anomaliile apo A l cauzeaz reducerea captrii colesterolului
i deficitul esterificrii lui sub aciunea LCAT. n afeciunile respective se observ un risc
crescut pentru ateroscleroza coronarian.
Mai frecvent se ntlnete hipo-sau a -lipoproteinemia, adic nu are loc sinteza
LDL i a chilomicronilor de la natere i, n consecin, este statornic steatoreea,
adic nu se absorb lipidele i vitaminele corespunztoare. Plasma conine puin colesterol,
TAG, ceea ce, n consecin, provoac dereglri n sistemul nervos, aparatul vizual.
Insuficiena enzimei LCAT cauzeaz creterea nivelului de colesterol, ateroscle
roza infantil. Deficitul ereditar are, n consecin, imposibilitatea esterificrii colesteroluli.
Lipoproteinele au o structur modificat i transportul colesterolului prin intermediul HPL
este diminuat. Afeciunile se manifest prin opacieri corneene i dezvoltarea precoce a
aterosclerozei coronariene, iar insuficiena hidrolazei acide a esterilor colesterolului
(maladia Wolman) duce la o afeciune grav, cu dereglri frecvente ale glandelor
suprarenale, provocnd exitus.
Hipercolesterinemiafamilial tip Ha e cauzat de insuficiena sau lipsa receptori
lor activi la -LP. Mutaiile au loc la nivelul genei pentru receptorul LDL. Homozigoii
nu le posed absolut, i copiii mor de afeciuni ale vaselor coronariene din primul an de
via. La heterozigoi sunt de 2 ori mai puini dect normal, ceea ce se soldeaz cu
diferite forme de dereglri ale transferului -LP n celule. Tratamentul const n reducerea
colesterolului seric, prin administrarea dc inhibitori ai I IMG-CoA reductazei, diminuarea
aportului alimentar de colesterol i eliminarea altor factori de risc. Hipercolesterolemia
familial tip Ilb e caracterizat prin majorarea colesterolului seric (peste 6,3 mmol/L) i
cu creterea coninutului TAG i VLDL. Serul, spre deosebire de tip Ila, este opalescent.
Deficitul genetic nu e definit. Tratamentul e cam acelai ca i la tip Ila.
In condiii normale, exist un echilibru dinamic ntre procesele de sintez i scindare
a lipidelor membranare, gangliozidelor. Scindarea e specific i are loc n lizozomi.
Predomin urmtoarele afeciuni (fig.5.28);
a) insuficiena sfingomielinazei (enzima ce scindeaz fosfocholina sfingomielinei)
duce la acumularea sfmgomielinelor n creier, ficat, splin - insuficien mintal - boala
Niemann-Pick, afeciune genetic la care bolnavii decedeaz n vrst fraged;
b) lipsa -N-acetilhexozoaminidazei (nu are loc scindarea restului terminal al
gangliozidului - N-acetilgalactozamin) provoac afeciunea Tay-Sachs. Sufer mai
ales evreii americani (1:30), cealalt populaie mai rar (1:300). Se caracterizeaz prin
tumefierea celulelor ganglionare ale scoarei creierului i ale altor poriuni nervoase. Pe
retina ochiului apar pete de culoare roie-viinie - gangliozid GM,. Poate fi diagnosticat
chiar la starea embrionar - se colecteaz lichid amniotic i se determin activitatea
enzimei corespunztoare;
c) boala Krabbe const n deficitul de galactocerebrozidaz i se manifest prin
demielinizri rspndite la nivelul creierului;
) afeciunea Gaucher- deficit de hidrolaz, ce detaeaz glucoza din glicocere-
brozide. Sunt deteriorate splina, ficatul, rinichii, intestinul, atestndu-se afeciuni
hematologice evidente;
e) leucodistrofia metacromatic e provocat de deficitul de sulfatidaz; se acu
muleaz sulfatidele n substana alb nervoas, ficat. n consecin, apar dereglri
G al-G alN A c
llc-Cer
GM g a n giozid oze
NANA * Retard mintal
* Hepatomegalie
M alad ia * Deformarea scheletului
TAY-SACHSl P G alactozidaza * Acumularea
* Retard mintal mucopolizaharidelor i
* Cecitate eangliozidelor
* Slbiciune mus * Tataia
G alNAi
Iar
* Autosom recisi'
* Fatal
(Globozide)
NANA G alN A c-G al-G al-G lc-C er
P Hexozoaminidaza
PHexozoaminidaza
G alN A c G alN A c M a la d ia
SA N D H O F F
M aladia MANA Gal-GIcCcr ( C M ^ ) * Acclcai simptomc ca
GAUCHER Tay-Sachs, dar boala
progreseaz mai rapid
*Osteoporoz NANA
Ncuroammt-\~'*' a Galactozidaza
*Retard mintal V daza \ G a l
*Deces frecvent
M a la d ia FABRY
* Exces de globozide
(Lactozil Cer) I* Erupii cutanate
LEU C O D ISTR O FIA P Galactozidaza * Insuficien renal i
M ETACROM ATIC cardiac
* Dureri n extremitile
* Demielinizare informare
* Paralizia progresiv
* Demen M a la d ia
NIEM ANN-PICK
* Metacromazie
* Exccs de sfingomieline
* D eces n prima decad P Glucozidaza I* Splcno-hcpalo mcgalic
! * Retard mintal
p Galactozidaza
Cholina-P
/sforilcholina-
S O .H G a l- C e r " :eramida<- (Sfingomielina)
Arilsulfataza A Sfmgomielinaza
Ceraminidaz# *
M aladia K RA BBE M aladia F R BER
* Paralizie * Deformarea
* C onvulsii Acizii grai progresiv
* Cecitate a articulaiilor
Sfingozina j * Granulome tisulare
* Surditate
* Dcccs la vrsta fraged
* D eces la vrsta fraged
F igura 5.28. Patologia lipidelor conjugate

hematologice, psihice;
f) boala Frber- deficit de ceramidaz, ce conduce la neuropatie, cataracte, tromboz
vascular.
Cum poate fi substituit enzima defectat? Exist dou ci:
a) n cromozomii defectai urmeaz s fie nglobat gena activ a enzimei;
b) se cere de modificat enzima defectat i introdus n organismul bolnavului.
Studiile ntreprinse n ultimii ani au stabilit modificri ale concentraiei lipidelor totale
plasmatice sau unele fraciuni, dezechilibrarea raportului dintre diversele componente
lipidice.
Hiperlipidemiile primare sunt de natur genetic, iar cele secundare sunt
determinate de diferite afeciuni renale, diabet, hipotireoz, intoxicaii de alcool.
Hiperlipidemia alcoolic: se observ o lipidemie alimentar o dat cu consumul
de alcool; e nsoit i de o secreie intens a pre--LP, de o hiperchilomicronemie i
de un clirens lent al ambelor particule.
Alcoolul amplific sinteza i secreia pre--lipoproteinelor determinate de valorile
majorate ale NADH. Se formeaz la metabolizarea alcoolului sub aciunea alcool
dehidrogenazei. NADH inhib oxidarea acizilor grai i amplific sinteza TAG i
a pre--lipoproteinelor (VLDL). Alcoolul favorizeaz inducia enzimelor microzomale
n ficat.
Diabetul zaharat se manifest prin diminuarea lipoproteinlipazei celulare, iar nivelul
mare de acizi grai amplific producerea de pre--LP. Raia tipic care provoac
coninutul excesiv de grsimi, colesterol i cantiti mici de glucide provoac apariia
hiperlipidemiei.
Reglarea m etabolismului lipidic
Stresul emoional negativ, inaniia, hipotermia, efortul muscular cauzeaz pierderea
din greutate a organismului. Catecolaminele stimuleaz lipoliza prin mesagerul secund,
activeaz lipaza hormono-dependent. Glucagonul are o aciune asemntoare. La fel
i hormonul de cretere, dar cu o faz mai tardiv (stimuleaz sinteza adenilatciclazei de
novo). Insulina posed efect contrar, activeaz fosfodiesteraza. Steroizii,tiroxinaau
efecte benefice - insuficiena lor favorizeaz depozitarea de grsime.
Un ir de substane, medicamente poart denumirea de substane lipotrope. Fica
tul este un organ specific de sintez a fosfolipidelor plasmei. n lipsa cholinei sau a
grupelor CH3, necesare pentru sinteza lor, diminueaz viteza de sintez a fosfolipidelor
i, respectiv, viteza cu care acizii grai sunt eliminai din ficat. n consecin, are loc
depozitarea lipidelor n ficat. Orice substan donatoare de CH3pentru sinteza cholinei
este denumit lipotrop. Substanele ce achiziioneaz grupele CH3 din sinteza cholinei
sunt capabile n anumite condiii s provoace distrofia gras a ficatului.
Una din problemele cardinale ale medicinii, indiferent din ce prism este privit, e
cea a obezitii. n sens biochimic, e vorba de majorarea cantitii lipidelor neutre n
organism. Cantitatea optim e determinat de mai muli factori - d e la cei genetici, pn
la cei estetici. Surplusul de grsimi e caracteristic n special sexului frumos.
Obezitatea poate fi hipercelular (pn la 20 ani) i hipertrofic - adipocitele
constante la numr se mresc n volum. Obezitatea este cauzat de dereglrile echilibrului
energetic, de surplusul fa de necesitile organismului. Mecanismul biochimic const
n insuficiena lipolizei, inactivarea trigliceridlipazei.E redus i reacia determoreglare:
la utilizarea alimentelor, energia chimic nu se transform n cldur (normal, circa
10%).
Un rol important l are alimentarea corect a copilului. O abunden de alimente, n
primii 1-2 ani de via, potrivit studiilor numeroase are o influen nefast asupra dezvoltrii
ulterioare a organismului.Dintre factorii etiologici la acest proces contribuie:
hiperinsulinismul, endorfmele, dereglrile hipotalamusului. Sufer ndeosebi femeile de
vrst mijlocie. S-a observat corelaia ntre nivelul intelectual i greutatea corpului,
nivelul general de cultur al populaiei. Oamenii obezi, mai frecvent sufer de afeciunile
inimii - 40%, ale rinichilor - 30%, diabet - de 4 ori mai des dect ntreaga populaie.
Un tip particular de obezitate a fost descris la pacienii cu defecte n structura
receptorilor -adrenergici, care diminueaz transmiterea intracelular a efectelor
hormonilor lipolitici.
EICOSANOIZII -PROSTAGLANDINELE (PG)
Sunt substane biologice active descoperite n 1930. Ele au produs o revoluie n
tiina medical. Timp de 30 ani (1963) nu au suscitat nici un interes lumii tiinifice i
dac n 1960-1961 au fost publicate numai 5
studii, apoi n 1970 au vzut lumina tiparului
peste 1280 de lucrri tiinifice. Acest an se
caracterizeaz prin faptul c savanii au reuit
s izoleze, s purifice i s analizeze, n aspect
chimic, cteva dintre prostaglandine. n pre- 13 15, 17 . 19
.~ , ,, ~ , Acid prostanoic
zent in lume se publica aproximativ 9-10 ^
lucrri pe zi. S-a demonstrat c PG rea
lizeaz efecte biologice de o diversitate extraordinar. n mod virtual ele se afl n toate
esuturile de mamifere i fac parte din cele mai active substane biologice, avnd efecte
semnificative la concentraii extrem de mici (10 g/mL). Rolul lor nu este elucidat
complet.
Termenul prostaglandin a fost sugerat de savantul U.Von Euler, n 1935, la
descoperirea lor n extractele de prostat i n coninutul veziculelor seminale de berbec.
Datorit concentraiilor extrem de mici, a instabilitii lor chimice, deficienei de
izolare din esuturi i tumori, a dificultii de sistematizare a efectelor lor biologice, ele au
fost ignorate mai bine de trei decenii. Numai n 1960, S.Bergsfrm a reuit s izoleze
din extractul de prostat de berbec PG E i F. Aceast posibilitate se datoreaz
diferenelor de solvabilitate n eter i tampon fosfat. Prostaglandinele E - (PGE) sunt
solubile n eter, iar cele F - n tampon fosfat. Au fost identificai drept acizi grai
analogi ai unui acid gras cu 20 atomi de carbon, cruia, prin analogie cu denumirea
de prostaglandine, i s-a dat denumirea de acid prostanoic.
Structura chimic a PG
Toate deriv din acidul prostanoic i sunt AG nesaturai cu 20 atomi de carbon,
dispui ntr-un inel ciclopentanic cu dou lanuri laterale: unul carboxilic i cellalt
alchilic. Diversele molecule de PG se deosebesc ntre ele prin numrul i tipul funciilor
oxigen i prin numrul de duble legturi att n lanurile laterale, ct i n inelul ciclopentanic
i n izomeria a/.
Au fost izolate cel puin 15 PG, care au fost repartizate n serii, subserii i desemnate
cu literele E,A,B,F,C i D. La cele primare s-au adugat i cele PG, produse din sintez
chimic (fig.5.29).
acid prostanoic
PG E,
HO H
COOH
HO
H
,
H OH
pge2
!COOH
HO
Figura 5.29. Cele mai rspnditeprostaglandine i (romboxane
Toate PG sunt hidroxilate n poziia C15 i conin o dubl legtur trans la C]3-C|4.
De la acizii grai C,() deriv i alte lipide active ca: endoperoxizii prostaglandinici,
prostacichna, tromboxanii (TX), leucotrienele (LT) - toate denumite eicosanoizi,
de la C20 H42 - eicosan.
Biosinteza eicosanoizilor (EIC)
Are loc la nivelul tuturor esuturilor, unde fiecare tip de celul este apt s sintetizeze
una sau mai multe substane. E1C nu sunt depozitai n celul, dup sintez sunt eliberai
i acioneaz imediat. Ca factori declanatori, exist o mare diversitate de stimuleni
ce ajung la nivelul membranelor celulare, unde are loc o modificare a strii fosfolipide
lor membranare prin activarea FLA 2, care atac hidrolitic legtura esteric din poziia
2 a glicerolfosfolipidelor, elibernd, dc regul, acidul arahidonic. De la el pornesc dou
ci biosintetice - sub aciunea ciclooxigenazei (PG - sintaz) sau a lipooxigenazei.
Cantitatea, seria i subseria de PG sintizate de diverse celule, depind de: 1) natura
substratului disponibil (acid eicosa-tri, tetra sau pentaenoic); 2) echipamentul enzi-
matic celular, balana dintre ciclo- i lipooxigenaz, prezena altor enzime specifice,
unor ramificaii; 3) prezena de inhibitori specifici ai uneia dintre ci; 4) natura semnalului
- stimulentului (traum, ischemie, catecolamie).
Ciclooxigenaza este o hemoprotein, cu o activitate dubl, dioxigenazic (ncor
poreaz O, n substrat) i peroxidazic (descompune peroxidul). Sub aciunea ei se
obin endoperoxizii ciclici (PGG2 i PGH2)-com pui labili cu o T I/2 = 5', substane
vasoactive puternice. Ei genereaz trei ci de sintez spre PG clasice, prostaciclin (PS)
i tromboxani (TS) (fig 5.30).
A cid arahidonic Radical peroxidic
OH G SSG 2G SH b -O H
PGR, PGG.
Conversia acidului arahidonic n endoperoxizi
OH
T x A 2 (in s ta b il)
PGl^'nstabila)
OH OH
6oxo-PGFnx.
F igu ra 5.30. Transformarea PGH2n prostacicline i tromboxani
Profilul enzimatic specific fiecrui esut determin proveniena uneia sau alteia
dintre aceste ci. TS se acumuleaz n creier, inim, splin, fibroblati de
pulmon, leucocite, plachete. Prostaciclinele predomin n endoteliul vascular, inim i n
alte esuturi, iar prostaglandinele clasice sau sintetizate, n numeroase esuturi.
Lipooxigenaza introduce o grupare peroxi n acidul arahidonic, rezultnd 5-
hidroxiperoxi-eicozatetraenoat (5-HPETE), compus instabil cu formarea leucotri-
enelor (trei legturi duble conjugate, cu configuraia cis) (fig. 5.31).
COOH
S-CI b -C H -C -N H -C H -,-C O O H
I ? T 2
N H _ C -C H 2 - C H 2- C H _ C 0 0 H
LTC
? - Cilutimil-tiansferazg.1-
k^----
CH2 -COOH
H jN CH 2-C O O H
F igura 5.31. Conversia 5-HPETE n leucotriene
Cascada de sintez poate fi ntrerupt la diverse niveluri, prin aciunea unor inhibitori:
corticosteroizii inhib fosfolipaza A2- ntrerupe cascada de reacii la etapa iniial,
prin inducia sintezei de proteine (nu are loc generarea ac.arahidonic din fosfolipidele
membranare); plachetele sanguine nu sunt influenate de corticosteroizi (n-au echipa-
ment de sintez proteic).
Aspirina reine ciclooxigenaza, prin acetilarea ireversibil a proteinei; plachetele
devin mai sensibile. Agenii antiinflamatori nesteroidici - indometacina, ibuprofenul i
alii, acioneaz fie prin inhibiie competitiv cu acidul arahidonic, fie prin modificri
confonnaionale ale ciclooxigenazei (COG):
Salicilat
Catabolismul- T 1/2 pentru tromboxani dureaz pn la 30 minute, prostaciclina -

3 minute.
Prostaglandinele primare sunt eliminate rapid la nivelul pul-
monului (la o singur trecere plmnul reine 95%).
Principalul metabolit al PG sunt derivaii 15-ceto rezultai din CH3 / CH3
aciunea PG-15-hidrooxi-dehidrogenaz, precedat de activita CH
I
tea unei reductaze-9-ceto PG reductaz. Prostaciclina e meta- CH2
bolizat la 6-ceto. Enzimele biosintezei necesit glutation redus i
acid tetrahidrofolic.
Efectul biologic e multiplu i depinde nu numai de natura
compusului, dar i de tipul celular, de specie. PG sunt mesageri
chimici locali, modificnd concentraia nucleotidelor ciclice, ni
velul intracelular al ionilor Ca++sau transcrierea genetic. CH3 COO"
PG primare se formeaz n cantiti considerabile la nivelul Ibuprofenul
tractului gastrointestinal, influennd asupra motilitii, secreiei
i absorbiei la nivelul diferitelor segmente. Prostaglandinele seriei A stimuleaz expresia
unor gene n stres, blocheaz ciclul celular la G2/M, induc apoptoza n celulele tumorale,
inhib replicarea viruilor. Cele din seria (,) primar sunt depistate n osteoblati i
induc hipertensia pulmonar. Seria E are efect antiulcerogen. Prostaglandinele E i F se
implic n mod deosebit n fiziologia pulmonului, regleaz fluxul renal sanguin, excreia
de sodiu, homeostazia apei, transmisia sinaptic n SNC, determin modificrile la nive
lul nucleotidelor ciclice, n cadrul sistemului reproductor declaneaz travaliul, avor
tul, controleaz ciclul ovarian, spermatogeneza i fertilitatea la brbai.
Prostaciclina i tromboxanul constituie un sistem de control al homeostazei
tonusului vaselor sanguine i al agregrii plachetare. TX posed proprieti de
contractibilitate, acionnd asupra musculaturii netede din vasele periferice i arterele
coronariene, favorizeaz agregarea i formarea trombusului. PC are o aciune opus
celei exercitate de TXA,, relaxeaz musculatura vaselor i este un factor antitrombinic.
Aciunea leucotrienelor se manifest ca ageni chemotactici i chemocinetici, de-
tcrminnd acumularea de neutrofile n focarul inflamator, instigatori ai producerii ocului
anafilactic i astmului bronic.
METABOLISMUL PROTEINELOR
c a p it o l u l vi
I AL AMINOACIZILOR. METABOLISMUL
NUCLEOTIDELOR, CROMOPROTEIDELOR
Proteinele din esuturile i fluidele organismului sunt utilizate ntr-o msur foarte
mic pentru producerea de energie. n inaniie, dup epuizarea rezervelor de glucide i
lipide, are loc degradarea lor cu utilizarea catenelor hidrocarbonate ale aminoacizi lor,
ce asigur durata supravieuirii.
Excesul de proteine alimentare servete direct sau indirect (biosinteza lipidelor,
glucidelor) n scop energetic. Organismele vii nu sunt capabile s depoziteze proteine
pentru cerine strict energetice.
Proteinele reprezint substane nutritive deosebit de importante, ca singura surs de
azot asimilabil de ctre organism i fumizatoare de aminoacizi eseniali. Numai o alimentaie
diversificat asigur aportul n aminoacizii necesari. Alimentele de origine animala sunt
bogate n proteine: n preparatele din came procentul este ridicat (20%). Oule conin
aproximativ 13% proteine, dar sunt bogate n colesterol (glbenuul). Este mult mai
redus procentul de protein n alimentele de origine vegetal: leguminoase, pine, cereale.
Legtura proteinelor cu constituenii loraminoaciziieste indisolubil n toate
procesele vitale. Proteinele din organismele vii permanent regenereaz. Pentru meninerea
constant a proporiei lor, viteza de sintez i de degradare a proteinelor trebuie egalat,
ceea ce constituie o stare dinamic stabil. Viteza de rennoire se exprim prin perioada
de njumtire. La obolani, s zicem, proteinele musculare au o perioad de njumtire
egal cu 30 zile, cele hepatice 5-6 zile, enzimele ore sau minute.
Raportul dintre cantitatea de azot asimilat sub form de compui de azot (i proteine)
i cea de azot excretat prin urin, n fonn de amoniac i uree, reprezint bilanul azotat
al organismului. Bilanul este echilibrat, dac aportul exogen compenseaz pierderile;
negativ (Ning < Nex) survine la inaniie, boli infecioase, hemoragii, traumatisme;
pozitiv (Ning > Nex) la organismele n cretere, convalescen. Aceste date sunt
indispensabile pentru stabilirea exigenelor diume de proteine n raia alimentar.
Digestia proteinelor alimentare
Absorbia aminoacizilor are loc numai dup degradarea hidrolitic a proteidelor,
datorit aciunii combinate a enzimelor proteolitice din sucurile gastric, pancreatic i
intestinal. Cantitatea aminoacizilor liberi n alimentele naturale e minor. Dei toate enzimele
catalizeaz hidroliza legturilor peptidice, ele difer specific. Se disting exopeptidaze i
endopeptidaze (ce scindeaz legturile peptidice, formate de aminoacizi la extremitile
i n interiorul lanului).
Majoritatea enzimelor sunt secretate n forme inactive (proenzime, zimogeni) i sunt
active doar ntr-un anumit segment. Anume astfel se produce protejarea celulelor
reproductive i a canalelor prin care acestea sunt secretate. Activarea lor are loc prin
detaarea unor oligopeptide, cu fonnarea centrului activ.
Digestia n stomac. Enzimele proteolitice digestive principale secretate de celulele
stomacului sunt: pepsina, gastrixina, renina.
Pepsina este sintetizat i secretat de ctre cclulele principale ale mucoasei gastrice
n forma sa inactivpepsinogenul. n mediul acid al sucului gastric, pepsinogenul
este activat att prin proteoliz limitat, ct i autocatalitic, de ctre pepsin.
Autoactivarea const n detaarea de la captul N-tenninal a 42 resturi de aminoacizi
sub forma unei combinaii de peptide, ce acioneaz ca inhibitori. 12 dintre ei (acizi
bazici), eliberndu-se, micoreaz pH-ul de la 3,7 (pentru pepsinogen) la 1,0 (pentru
pepsin). n centrul activ al pepsinei se afl cele 2 grupe COOH ale resturilor de acid
aspartic. Mecanismul de reglare a activitii pepsinei e redat n fig. 6.1.
F igu ra 6.1. Mecanismul de activare a pepsinei
n calitate de substrat pentru pepsin servesc proteinele native alimentare sau denaturate
la fierbere. Endopeptidaza-pepsina atac specific legturile peptidice la care particip,
prin grupele aminice, aminoacizii aromatici. n msur mai mic sunt disponibile pentru
atare proces metionina, leucina i acizii dicarboxilici. Se consider c pepsin produce
un efect mai pronunat asupra proteinelor denaturate, ce conin SH grupe libere. Durata
limitat de stare a bolului alimentar n stomac duce la formarea amestecului de polipeptide.
Gastrixina (pepsin C) i renina (chimozina) sunt enzime aflate n sucul gastric al
sugacilor. Secvena aminoacidic le confer o omologie perfect i activeaz la un pH
egal cu 3. Renina, n prezena Ca2+, transform cazeina laptelui n paracazein, hidro-
lizat apoi de pepsin.
Celulele secundare secreteaz soluiile 0,16 M HC1 i 0,007M KC1 cu resturi de ali
electrolii. Totodat, se mai secreteaz i factorul intern. Concentraia H+ n stomac e de
106 mai mare dect n plasm. Micorarea aciditii gastrice influeneaz considerabil
degradarea proteinelor (se observ la achilie, anemia pernicioas). Sngele venos care
circul din stomac, conine mult H C 0 3' i puin Cl' n raport cu cel arterial. n celule are
loc urmtorul proces:
NaCl + H2C 0 3 ----- NaHCOj + HCl

/ '
t *
n plasm se secreteaz
Cea mai simpl ipotez presupune c mecanismul de secreie e analog cu transpor
tul protonilor, dependent de ATP n cadrul funcionrii ATP-azei din membrana intern
mitocondrial.
n ultimii ani s-a conturat rolul H+, K+-ATP-azei n reglarea secreiei HC1 n mucoasa
gastric. E component din familia enzimelor, ATP-aza membranelor plasmatice, de rnd
cu Na+, K+-ATP-aza, Ca^-ATP-aza (fig. 6.2).
Enzima este intercalat n membrana apical a celulelor epiteliale din mucoas. n
componena ei deosebim 2 subuniti a cu masa molecular =110 kDa (1103 aminoacizi),
ce au funcie catalitic, i -subunitate un glicoproteid, partea proteic avnd o mas
molecular = 35 kDa (291 aminoacizi). Dup glicozilare, masa molecular devine egal
cu 55 kDa. Subunitile sunt fixate rigid una de alta. Glicoproteidul determin localizarea
n membran a enzimei, regleaz i funcia de transport a enzimei.
Se observ o omologie vdit (60-70%) ntre subunitile Na+, K+i H+, K+, ATP-
azelor. Sunt foarte asemntoare i structurile secundare; n -subunitate sunt 3 puni
disulfurice ce stabilizeaz structura sa i a complexului integru.
IT, K+-ATP-aza catalizeaz hidroliza ATP la ADP i P(, cuplat cu sistemul de
schimb al H+intracelular pe K+extracelular. Procesul de transport al cationilor e cuplat
cu procesul ciclic de fosforilare-defosforilare a Asp-385 n ocsubunitate i transformrile
ciclice n conformaia moleculei E, E,. Confonnaiile au o afinitate diferit fa de
cationi i ATP n proces este implicat i subunitatea .
n confonnaie E, enzima are o afinitate
mare pentru ATP i H+ n centrul de
protonofixare situat pe partea citoplasmic
a membranei E, P E2~ P. n con-
aza formaie E2 centrul cationofixator e ac
ceptabil din partea spaiului extracelular cu
' Pl o afinitate mic la H+i mare la K+are
Ioc schimbul protonului pe K+n centrul
respectiv. Fixarea K+activeaz hidroliza
P. Modificrile E2 - E, micoreaz
afinitatea la K+, ducnd la schimbul
K+ - H+, cu repetarea ciclului. E sta
bilit c n regiunea ce fixeaz ATP ia parte
i Lys-517,496. Regiunea respectiv e
foarte conservativ i n alte ATP-aze de
tipul P. Azi se consider c H+,K +-ATP-
aza de tipul P funcioneaz n mucoasa
stomacului, intestin, rinichi.
Din celul, K h iese (simultan i C I),
prin canale specifice dup gradientul de
concentraie. C f ptrunde n celul graie
funcionrii sistemului anionic H C03/CT.
F igu ra 6.2. Sistemele de transport in celula
parietal, ce determin secreia HCI H C O , e rez u ltatu l fu n cio n rii
carbanhidrazei, H+sunt secreti de H+, K ' - ATP-aza. Poate fi implicat n mecanismul
de schimb al H+extracelular pe Na+ intracelular.
M ecanism ul ce determ in activarea secreiei HCl
n celulele nesecretoare parietale H+, K+-ATP-aza este neactiv i-i concentrat n
vezicule, n citozol, n apropierea suprafeei apicale membranare. Activarea secreiei e
nsoit de trecerea acestor vezicule spre suprafaa apical i contopirea cu membrana.
Un rol activ i aparine citoscheletului acestor celule. Proteinele i schimb poziia. n
celula activ, F-actina se depisteaz n apropierea suprafeei apicale membranare i n
canalele intracelulare, iar miozina i proteinele filamentoase prsesc aceste locuri.
n proces particip i proteinele fixatoare de GTP, ce sunt depistate n celulele parietale.
Una din aceste proteine (masa molecular 23 kDa), numit Rab-2, i modific localiza
rea la activarea secreiei, n acelai mod ca i H+, K+-ATP-aza, ce confirm participarea
ei n procesul contopirii veziculelor.
Secreia HCl de celule este activat de histamin, gastrin, acetilcholin. Toate
au receptori respectiviH2(histamina) i M cu toate subtipurile (3) pentru acetilcholin.
Receptorul pentru gastrin se refer la tipul ca i la colecistokinin.
Consecutivitatea proceselor e puin studiat. Gastrinele sintetizate i secretate de
partea piloric a stomacului, sunt perfect studiate, deosebit de active fiind formele sulfat
ale gastrinelor.
Gastrinele poteniaz efectul histaminei. Ultima e fixat de H2 receptori, mrind
nivelul AMPc celular; n consecin, se majoreaz Ca4" intracelular, trecnd n celul prin
membrana plasmatic.
Celulele-int pentru proteinkinazele AMPc dependente conin proteine membrana
re i citozolice. Una din ele este Cl-canalul, ce n final limiteaz secreia HCl. La activa
rea cu histamin are loc translocarea unor proteine din citozol n membran, care
interacioneaz cu H+,K+, -ATP-aza, trasmind informaia la proteinele-int.
Incontestabil c inhibitorii carbanhidrazei (E), de altfel ca i cianidele, iodacetatul,
dinitrofenolul, anihileaz secreia. ntre pereii mucoasei membranare exist o disproporie
de potenial. Hormonii sunt reglatori intracelulari cu efect receptoric. Gastrinele amplific
concentraia Ca44' intracelular, pe cnd acetilcholina induce eliberarea Ca'4' i din exteriorul
celulei (fig. 6.3).
Se atest drept efectiv metoda de investigare vizavi de eventuala secreie a acidului
clorhidric prin aplicarea probei cu histamin, care acioneaz conform mecanismului redat
anterior.
Digestia n intestin. Proteoliz n intestin este asigurat de sucul pancreatic ce
conine endo- i exopeptidaze n forme inactive. Tnpsinogenul este convertit n tripsina
prin detaarea de la captul N-terminal al unui hexapeptid. Procesul e influenat de
enterokinaza intestinal, ct i de autocataliz (efectul enterokinazei de 2000 de ori
mai pronunat). Tripsina hidrolizeaz legturile peptidice, cu participarea grupelor
carboxil ale aminoacizilor-arginina i lizina.
Chimotripsina se secreteaz n fonna neactiv chimotripsinogenul, drept
activatori servind tripsina i autocataliticul, ce detaeaz dou dipeptide de la lanul
compus din 245 aminoacizi, cu instituirea unei conformaii active ce posed legturi
G astrina (inducie)
. . . . decarboxilaza
H istidin (in) I
H istidin decarboxilaza (a)
_ L .
His ^ H is ta m in a
A denilatciclaza (a)- A denilatciclaza (in)
FD E
jf
A T P AM Pc AM P
T
Proteinkinaza (in) * - Proteinkinaza (a)
1
C arbanhidraza ( in ) - 1- - C arbanhidraza ( a , fosforilat)
F igu ra 6.3. Schema influenei gastrinei la sinteza HCl Sinteza HC1
disulfidice ncruciate. Enzima are o specificitate mai ampl, hidrolizeaz legturile

peptidice formate de grupa COOH, a Phe, Tyr, Trp. De altfel, scindeaz i amidele,
esterii, derivaii acil.
Elastaza se obine din proelastaz, catalizeaz ruperea legturilor formate de
aminoacizi hidrofobi relativ miciglicina, alanina, serina, e activat de tripsin.
Carboxipeptidaza - A este o enzim ce conine Zn, scindeaz aminoacizii aromatici
mai intensiv, ncepnd de la captul -terminal, dect cei alifatici. Atunci cnd ionul de Zn
se modific la Ca, se declaneaz activitatea esterazic. Carboxipeplidaza-B acio
neaz asupra peptidelor, avnd la captul -terminal resturi de Arg i Lys.
Definitivarea hidrolizei se soldeaz prin implicarea enzimelor intestinale (din intestinul
subire). Prioritar, funcioneaz intracelular dup deplasarea n enterocite sau n procesul
traversrii celulelor epiteliale.
Aminopeptidazele leucin aminopeptidaza conine Zn, pe care o poate activa
Mn; posed o specificitate N-terminal a peptidelor. Alanin aminopeptidaza e specifi
c la captul N-tenninal al alaninei. Dipeptidazele - glicil-glicin dipeptidaz. Prolinaza
scindeaz legturile peptidice, cu participarea grupei COOH a pralinei. Prolidaza
cu participarea grupei NH a pralinei.
Se observ c o hidroliz efectiv poate avea loc i la rezecia stomacului, pe cnd
insuficiena pancreasului are consecine mai grave pentru organismul uman. pH-ul al
sucului pancreatic (7,4-8,3) e izotonic cu plasma: concentraia de H C 03 depete de
3 ori concentraia similar din plasm. Secretina stimuleaz eliminarea unui suc pancreatic
srac n enzime, prin intermediul AMPc. Colecistokinina, un suc bogat n enzime,
stimuleaz contracia vezicii biliare.
Sccreia colecistokininei duodenale e stimulat de lipidele i polipeptidclc din intestin.
Polipeptidele Celulele
Oligopeptidele paracrine
A m inoacizii intestinale
' C olecistokinaza
. ' Pancreozimina
Celulele
pancreatice
A m inopeptidaze
Tripsinogenul D ipeptidaze
f
Chim otripsinogenul 'i Chimotripsina Scindeaz proteinele
r T-'I_.__ pn la aminoacizi
Proelaslaza > < E la s ta z a -------------------
Procarbox ipeptidaza J L C arboxipeptidaza - liberi
F igura 6. 4. Mecanismele de reglare aleproteazelor
Gastrinele sunt stimulatori ai secreiei de insulin (fig. 6.4).

Absorbia aminoacizilor are loc la nivelul intestinului subire, fiind un proces
activ cu solicitri de energie, analog cu transportul glucozei i dependent de Na+. Sngele
portal i transport n ficat, unde ia parte la sinteza proteinelor proprii i serice. Restul
aminoacizilor din fond este distribuit cu sngele celorlalte esuturi.
Absorbia aminoacizilor prin difuzie e limitat. Transportul este mediat de proteine
specializate, translocaze. Exist cteva translocaze de grup ce transport aminoacizii
cu o structur analoag:
1. Aminoacizi neutri cu molecule mici;
2. Aminoacizi neutri cu molecule mari;
3. Aminoacizi bazici;
4. Aminoacizi cu caracter acid;
5. Prolina.
Translocazelen multe privine seamn cu enzimele: posed fenomenul de
saturare cu substrat, sunt sesnsibile la aciunea unor inhibitori. Aminoacizii din grupe
concureaz pentru locusurile de fixare n translocaze absorbia leucinei diminueaz
absorbia izoleucinei i valinei. Lizina inhib absorbia argininei.
Dup alimentare, concentraia maxim de aminoacizi n snge ajunge la 60 min.
crete intensiv abundena azotului peptid n snge. Deseori, proteinele native, prin mu
coasa intestinal, trec n snge. Nou-nscuii conin n snge anticorpii colastrei laptelui,
fapt cauzat de o protein inhibitor puternic al tripsinei, favorizat de concentraia mic
a enzimelor proteolitice n intestinul copiilor, ce n final determin absorbia unor
cantiti mici de proteine. i, deci, sunt suficiente pentru sensibilizarea organismului
cauza idiosincraziei la proteinele alimentare (ou, lapte). Vag rmne transportul peptidelor
n snge la holer, botulism, difterie etc.
Transportul aminoacizilor n celule este asigurat de funcionarea ciclului y-
glutamilic activ n intestin, creier, rinichi, glandele salivare. n ciclu particip tripeptidul
glutation (Y-glutamilcisteinilglicina) propriu tuturor celulelor.
Rolul-cheie l joac enzima membranar y-glutainiltransferaza care iniiaz cataliza,
n calitate de donator al grupei y-glutamil poate servi oricare alt y-glutamil peptid. Toi
aminoacizii pot servi ca acceptori, cu excepia pralinei.
La transportul aminoacizilor, din exterior n interiorul celulei se utilizeaz energia
R CHCOOH
I
nh2
4 Y-glutamil transferaza
M em brana
R
I c h 2s h
C O N H -C H COOH
I CONH CHCONHCH2
(CH2)2
ch- nh2
CH2SH (CH2)2 HOOC
h 2n - c h c o n h CH2 c h - n h 2 A D P + Pi
COOH
y-glutam il am inoacid Cistinilglicina Glutation
HOOC COOH sintetaza
Peptidaza G lutation
ATP
. y-glutamilciclo-
' transferaza
RCHCOOH NH2CH2COO
I CH2SH
Glicina <pH2SH
nh2
A m inoacid intracelular C O N H -C H -C H 2
(^H n h 2
I
COOH
( C H 2) 2 COOH
Cistein CHNH2
I
COOH
Y-glutamilcistcina
ADP + Pi
ADP + Pi
ATP
COOH
Acid glutam ic
Mecanismul de transfer al aminoacizilor n celul
hidrolizei legturilor peptidice ale glutationului, care apoi regenereaz ntr-o secven
de reacii consecutive. Aadar, pentru transportul aminoacizilor n celul e utilizat
energia a trei legturi macroergice de ATP. Transportul intracelular al aminoacizilor este
asigurat i de transportatori membranari specifici, funcia crora este reglat de insulin.
Majoritatea sunt sisteme de cotransport cu ioni de sodiu, utiliznd energia ATP. Sistemul
A este specific pentru aminoacizii aromatici i Ala, Ser i Gly. Sistemul ASC intervine n
transportul Ala, Ser i Cys. Aminoacizii bazici sunt transportai de sistemul B+, iar cei cu
caracter acid de sistemul X. Sistemul N, prezent la nivelul hepatocitelor, asigur
transportul Gin, Asn i His. Independent de pompa de Na+ funcioneaz sistemul L,
care intervine n transportul aminoacizilor ramificai. Concentraia aminoacizi lor n plasm
e de 0,35-0,65 g/L. Aminoacizii sngelui sunt momentan asimilai de esuturi i organe
(ficat, rinichi). Alte organe le absorb mai selectiv.
Sunt descrise unele afeciuni ereditare, caracterizate prin malabsorbia aminoacizilor.
Transportatorii intestinali sunt similari celor localizai la nivelul tubilor renali i deci
anomaliile metabolice afecteaz i reabsorbia tubular a aminoacizilor. Afeciunile se
manifest prin prezena n exces n urin a anumitor aminoacizi. n maladia Fanconi
cauzat de anomaliile reabsorbiei renale a aminoacizilor, fosfatului i glucozei se depisteaz
acidoz, semne de rahitizm i aminoacidurie generalizat. Un sindrom de malnutriie
proteic, manifestat prin retard de cretere, hipotonie muscular, organomegalie i
osteoporoz se instaleaz la eliminarea marcat a lizinei aminoacid esenial. Cauza
este afeciunea genetic, cu deficitul transportatorului i pentru ali 3 aminoacizi arginina,
omitina i cisteina.
Fondul metabolic comun al aminoacizilor. Valoarea biologic a proteinelor.
Rolul primordial al aminoacizilor const n participarea lor la sinteza proteinelor, fiind
furnizori primari ai atomului de N i fragmentelor de hidrocarburi la formarea multiplilor
compui de azot. Capacitatea celulelor de a efectua procesele sintetice depinde defondul
comun de aminoacizi balansat n necesitile celulelor la fiecare din cei 20 de aminoacizi.
Celulele nu au forme-rezerv de aminoacizi i, deci, sinteza va fi dereglat, dac va
lipsi mcar unul din ei. La microorganisme i plante echilibrul necesar de aminoacizi e
determinat de sistemele proprii de sintez, strict reglate n concordan cu solicitarea lor.
Animalele, avnd alt mod de existen dect oamenii, i satisfac necesitile de
aminoacizi din alte surse. Celulele animale nu sunt apte s sintetizeze aproape 1/2 din
aminoacizi, precum i scheletul hidrocarburic al acestor aminoacizi. Necesitatea impe
rioas de aceti aminoacizi este o consecin a condiiilor de existen. Folosind alimente
ce conin toate vitaminele, aminoacizi, n final, celulele i pierd capacitatea de a
sintetiza. Aceti aminoacizi eseniali sunt: valina, leucina, izoleucina, lizina, metionina.
treonina, fenilalanina, triptofanul. Doi dintre ei sunt semiesenialiarginina i histidin.
n anumite perioade, organismul solicit cantiti mai mari de ei, dect poate sintetiza. Cu
toate c aceste fenomene asigur viaa n condiii destul de dificile ale mediului, organismele
i-au format o rezisten mare. Pierderea capacitii de sintez implic i unele carene
ce cauzeaz anumite afeciuni. Utiliznd n condiiile de via cantiti diferite de ami
noacizi, organismul i pstreaz echilibrul metabolic graie mecanismului carc, conco
mitent cu utilizarea aminoacizilor, nu-i elimin i nici nu-i depoziteaz.
Fondul metabolic comun al aminoacizilor sanguini e de origine proteic alimentar,
susinut de hidroliza proteinelor tisulare, precum i de sinteza lor endogen din
compui de natur neproteic. n acest fond nu exist distincie dup origine. Fiecare
esut i extrage tipul i cantitatea de aminoacizi necesari momentului potrivit (fig. 6.5).
Proteine A bsorbia Sintcza
alim entare endocrin
Echilibrul
C atab olism u l A A
proteic e n d ogen
\ Energie
Sinteza Fond am inoacid ic U r e e + C 0 2+ H 20

proteinelor m etab olic com un C am ozin a
sanguin
N eurotranslatorii Riosi, teza m oleculelor ,specifice

yiosin P oliam in e
G lu coza, lip id e / N u cleo tid e

Creatina ^ A nserina
H orm onii Porfirine
Figura 6. 5. Originea i utilizarea fondului sanguin al aminoacizilor
S-a mai constatat c n procesul evolutiv organismele animalelor pierd capacitatea de

a sintetiza catene hidrocarburice pentru unii a-cetoacizi, corespondeni ai anumitor
aminoacizi i componente eseniale ale majoritii proteinelor. S-a demonstrat
experimental pe obolani c este indicat un anumit raport ntre coninutul acestor
aminoacizi indispensabili pentru creterea optim. Dac se ia cantitatea de
triptofan ca msur relativ de referin egal cu 1, apoi pentru urmtorii aminoacizi ea
se egaleaz cu: Lys = 5; Leu=4;V al i Phe = 3,5;Met = 3;Ile,T hr=2,5;H is = 2; Arg
= 1. Aproximativ acelai raport dintre aminoacizii eseniali e caracteristic i organismului
uman. S-a stabilit c insuficiena unui aminoacid deregleaz i absorbia celorlali. n
cazurile date e valabil legitatea de minimum a lui Liebig: evoluia organismelor vii
e determinat de acea substan esenial, ce e absorbit din alimente n cantiti
mai mici. n natur aproape c nu dinuie proteine de valori incomplete. Iat de ce
trebuie s difereniem proteinele mai valoroase de cele mai puin valoroase, adic de
calitate inferioar. n general, valoarea biologic a proteinelor e apreciat dup
gradul lor de asimilare i compatibilitate n organism, de relaia dintre componena
aminoacidic a proteinelor utilizate i gama aminoacizilor din proteinele organismului.
Zeinaproteina din porumb, de exemplu, nu conine lizin i triptofan.
Surplusul de aminoacizi, comparativ cu suficientul necesar pentru organism (spre
deosebire de acizii grai, glucoz), nu poate fi depozitat i nici eliminat din organism;
acest surplus este consumat n calitate de combustibil metabolic. Procesul se iniiaz n
urmtoarele cazuri:
1) dac aminoacizii eliminai la o regenerare normal a proteinelor nu se utilizeaz la
sinteza moleculelor noi;
2) dac organismul ar asimila din alimente mai muli aminoacizi dect necesit;
3) n inaniie sau diabet zaharat, cnd lipsesc glucidele sau e dereglat asimilarea lor.
Asimilarea aminoacizilor
O parte din aminoacizii alimentelor este scindat de enzimele microflorei intestinale,
ce catalizeaz reacii deosebite de cele din esuturile umane.
n intestin apar, n anumite condiii, procese de putrefacie. La scindarea profund
a cisternei, cistinei, metioninei (conin sulf), n intestin se fonneaz H,S, metilmercaptanul
(CH3SH). Omitina i lizina (diaminoacizi) se decarboxileaz, cu formarea aminelor
putrescina i cadaverina.
CH2 CH2 CH C H -C O O H ,
I
,
-
,
2
,
(
I
N H, Omitina NH, 2 NH2 Putrescina NH2
2- (2)2 2- - 2- (2)2 2 2
NH, Lizina NH, 2 NH2 Cadaverina NH,
Laodecarboxilarebacterian a Phe, Thr, se formeaz aminele corespunztoare

- feniletilamina, tiramina, triptamina. Degradarea catenelor laterale ale aminoacizilor
ciclici duc la formarea produselor toxice - tirozina (crezol, fenol); triptofan (scatol,
indol). n malabsorbia triptofanului, la anomaliile transportatorului respectiv intestinal
indolul urinei, la contact cu aerul, i va da o coloraie albastr.
COOH
OH
F en ol
COOH
Aceste substane toxice se neutralizeaz n ficat, legndu-se cu acidul sulfuric

sau glucuronic i formnd compui conjugai netoxici eliminai prin urin.
a) PAPS + Scatoxil suifo^maza ^ Scatoxilsuflat + PAP (acid 3'-fosfoadenilic)
b)UDP-glucuronat + Scatoxil Transferaza^ Scatoxilglucuronat + UDP
Mecanismul const n urmtoarele: ficatul conine enzime specificearilsulfo-
COOH
n h 2 o O
!
N -N \O H OP=
O o 'N ' 'N
J

'N H
'N
- P-
2

W
PAPS ( 3-fosfoadenozin-5-fosfosulfat) U ridildifosfoglucuronat
transferaza i UDP-glucuronil transferaza,ce transfer resturile de acid corespun
ztor in formele active la substanele toxice adiacente, fiind oxidate n prealabil n indoxil,
scatoxil.
Cantitatea de indican din urin indic gradul de putrefacie n intestin i starea
funcional a ficatului.
Prezena n esuturile animale a adenozil-metionin decarboxilazei duce la formarea
S-m etiladenozil hom ocisteam inei. E stabilit c putrescina i com ponena
aminopropionica S-metiladenozil homocisteaminei se utilizeaz n sinteza poliaminelor
spermidinei i sperminei:
C H 2 C H 2 C H ? C H 2
I I S CH2 (A
NH2 Putrescina NH2
S-mctiladcnozina O
V CH2
P
Spermidin
T~ sintaza------- C H 2~ C H 2 C H 2 ................
CH2
N H 2 Propilam ina I
N H 3- C H 2
OH OH
S -metiladenozil homo-
C H 2 - ( C H 2) 2- N H cisteamina
N II2 Sperm idina C H 2 CH2 CH2 CH2 NH2
Spermin
sintaza CH2 CH2 CH2
S -m etiladenozina
N H 2 Propilam ina
C H ( C H , ) 2- N H C H 2~ C H 2 C H 2 C H 2 N H - 2- C H 2- CH2
I I
NH2 Spennina
Fondul comun de aminoacizii echilibrat dup necesitile orgamismului este utilizat n
biosinteza proteinelor. Sinteza are loc la nivelul ribozomilor prin traducerea informaiei
genetice, vehiculate de m RNA (vezi capit.2). Sunt descrise afeciuni generalizate ale
sintezei proteinelor cauzate de malnutriie proteic {sindromul Kwashiorkor) sau de
malnutriie protein-caloric. Aceste maladii sunt caracterizate prin: reducerea marcat a
masei musculare, diminuarea concentraiei proteinelor plasmatice (cauznd edeme),
hipotonie, astenie etc.
Consecine clinice majore se depisteaz i n dereglrile atarii lanurilor oligozaharidice
{sindromul de hipoglicozilare) n procesul de maturizare a glicoproteinelor. Se manifest
prin retard psihomotor i neurologic, anomalii osoase i hipotonie muscular, cu deces n
primii ani de viaa.
Anomaliile sintezei unei anumite proteine constituie un numr major de boli
monogenetice (peste 600). La mutaiile sintezei unei proteine enzimatice, receptorului
sau unui transportator, afeciunea se ncadreaz n gmpul erorilor nnscute de metabolism
(peste 500 descrise la moment).
O surs de aminoacizi ai fondului metabolic comun este proteoliz citoplasmatic sau
lizozomal. Prima predomin n muchi, celalaltn ficat i sistemul macrofagal. Strile
caracterizate prin amplificarea proteolizei (hipercatabolice) sunt declanate de aciunea
hormonilor respectivi (catecolamine, cortizol, citokine), ca rspuns la situaii extremale
(traume, oc, intervenii chirurgicale, arsuri, infecii etc.). Catabolismul are drept scop
furnizarea energiei i a unor componente structurale celulelor imuncompetente i altor
compui, ce au ca rol susinerea funciilor vitale n condiiile unui aport caloric limitat i
regenerarea esuturilor lezate. n faza acut a inflamaiei crete nivelul plasmatic al
complementului, fibrinogenului, proteinei i se diminueaz concentraia plasmatic a
albuminei.
Dernd cu biosinteza proteinelor, exist i alte ci metabolice n care sunt implicai
aminoacizii. De asemenea, funcioneaz ci comune ale unor grupe de aminoacizi. Prin
implicaiile lor multiple, o deosebit importan au procesele de dezaminare, transaminare,
decarboxilare. Decarboxilarea asigur formarea unei game largi de amine biogene.
Transaminarea constituie o etap-cheie n catabolismul i anabolismul aminoacizilor.
Grupele - SH i - OH ofer aminoacizilor respectivi o serie de particulariti metabolice.
M etabolizarea NH2-grupelor. Dezaminarea

Se nregistreaz cteva tipuri de dezaminare. S-au izolat enzimele ce catalizeaz
aceste reacii i s-au identificat produsele reaciilor.
Deosebim dezaminare:
a) reductiv R -C H 2~COOH + NH3

+ HOH
R - C H - COOH b) hidrolitic R -C H O H - COOH + NH3
c) intramolecular R -C H = C H COOH +NH3
NH2 d) oxidativ R - C O ~ COOH +NH3
Ultima dezaminare decurge n etape: n prima etap fermentativ are loc formarea
unui compus nestabil iminoacidul, care la etapa urmtoare spontan, fr enzime, dar
n prezena apei, degradeaz n NH3 i a-cetoacid.
Oxidazele L-ammoacmlov posed n calitate de coenzim FMN i FAD, pe cnd
D-aminoacid oxidazele numai FAD. Coenzimele reduse sunt oxidate de O, direct,
formnd ap oxigenat.
R R
H -,0 I
C = NH C = 0 +NH 3
I I
R
COOH COOH
C H -N H 2 + F A D Aminoacid'. Im in oacid a -c e to a c id
oxidaza
COOH FADH2
FAD
A m in o a c id
H20 + 1/2 0 2
h 2o 2 Catalaza
n esuturi, la pH fiziologic e activ numai oxidaza D-aminoacizilor, pe cnd toi

aminoacizii alimentelor sau cei din esuturile organismului constituie L-aminoacizi. E
stabilit c pH optim pentru L-oxidaze e njur de pH = 10,0. n condiii fiziologicee
activ numai L-enzima, ce catalizeaz dezaminarea oxidativ a L-acidului glutamic
(glutamat dehidrogenaza), enzim anaerob i rspndit pe larg n esuturile vii.
La mamifere, aminoacizii degradeaz primordial n ficat, unde grupa NH2 este
transferat pe a-cetoglutarat, cu formarea glutamatului, care, la rndul su, e supus
dezaminrii oxidative, cu formarea amoniacului. Sediul acestor modificri poate fi: inima,
rinichii, creierul, muchii.
Amoniacul se formeaz datorit reaciei de dezaminare oxidativ a acidului
glutamic, reacie catalizat de glutamat dehidrogenaza care utilizeaz att NAD+, ct
i NADP+.
Produsul intermediar este iminoglutaratul:
COOH COOH
L-glutamat dehidrogenaza
I
(CH2)2 - (CH2)2
I i
H O O C - C H -N H 2 H N C COOH
NAD+ N A D H + H+
A c id L -glu tam ic (N A D P + ) (N A D P I I + H+) A c id a -im in o g lu ta r ic
H ,0
NH,
O
HOOC - C - ( C H 2)2 - COOH
Acid a-cetoglutaric
Activitatea enzimei se regleaz alosteric. Enzima e compus din 6 subuniti
identice, capabile de polimerizare continu. Drept inhibitori alosterici servesc GTP i
ATP, iar activatori ADP i GDP. Micorarea sarcinii energetice amplific oxidarea
aminoacizilor.
Doi aminoacizi (serinai treonina) pot fi dezaminai direct grupa NH, este
transfonnatn NH4+, fenomen cauzat de prezena grupei OH(fig.6.6). Reaciile sunt
catalizate de hidrataze (posednd B6drept coenzim).
CH2 -O H
!
C H -C O O H Serin dehidrataza
I H ,0
N
H ,0
HC coenzim
L-serina Ccoenzim
NH3 H20
Tautomerizare
C H r-C -C O O H CH3- -C O O H c h 2= c - c o o h
I I
o NH nh2
Acid piruvic
CH2- S H c h 2
C H -C O O H Cistein desulfhidrataza
C- -COOH
I I
N
H ,S
N
- coenzim
HC-coenzim HCcoenzim
L-cisteina
F igura 6.6. Reaciile de dezaminare ale serinei i cisteinei
Enzimele sunt denumite dehidrataze, deoarece n cadrul reaciilor catalizate de

ele, anterior dezaminrii, are loc dehidratarea. Cea mai explorat enzim e treonin
dehidratazaenzim alosteric, inductibil, inhibat de puromicin i glucoz. Enzima
e responsabil de gluconeogenez, favorizat de a-cetobutiratul liber transformat n
piruvat, apoi glucoz.
Transferul grupelor NH2e catalizat de aminotransferaze denumite i transaminaze.
Cea mai semnificativ e glutamat aminotransferaza, ce deplaseaz NH, pe a-
cetoglutarat:
COO' COO'
I
R C=0 R H C NH3
I + ! I I
H CNH3 + (CH2)-> C= o + (CH2)2
I I I I
COO' COO COO COO'
Dintre oc-cetoacizi, acidul piruvic i acidul oxaloacetic mai particip activ la
transaminare.
Alanin aminotransferaza (G PTglutamic-pinivic transaminaza) transfer NH2
la piruvat, cu formarea alaninei. Ultima va ceda grupa NH2a-cetoglutaratului. Aceste
dou alanin- i aspartat am inotransferaze ( GO T glutam ic-oxalilacetic
tranaminaza transferul N H , la oxaloacetat) enzime, orienteaz aidoma unor plnii
grupa NH, de la aminoacizi spre glutamat, pentru transformri ulterioare. E concludent
reacia depereaminare (trans), n primul rnd, pentru acidul aspartic, alanin i acidul
glutamic. Reacia pentru ceilali aminoacizi este nesemnificativ. Specificitatea transa-
minazelor e determinat de compartimentul proteic. Detemiinarea activitii serice a
acestor dou transaminaze este frecvent ntlnit n clinic i are importan deosebit n
diagnosticul fenomenelor de citoliz hepatic i extrahepatic (vezi cap.Sngele).
Piridoxalfosfatul
A
(PLP) servete drept grup prostetic a tuturor aminotransfera-
zelor. In transaminare, PLP temporar se modific n PAP (piridoxaminofosfat), derivat
al vitaminei B,:6
CH2OH
HOH2C
CH3
CH3
H
Vitamina O PAP
PLP e fixat de enzim prin NH2a restului de lizin din centrul activ, formnd compui
Schiff-baze:
(CH2)N H =C H NH
4 O
O P o CH2
I
O'
La adiia aminoacidului, se formeaz o nou baz Schiff:
R
H ^ = N H -(C H 2)4- E hc= nh C H - C o o '
H2C OH COO' H2C E
O CH3 HCNH3 : O' 4 N^ CH3
V -
"OP O' H R -Q -P -0 H
II I
O o
Aminoacizii sunt racordai la enzime prin legturi rigide necovalente. n procesul
catalizei se modific poziia legturii duble (aldimina cetimina). Ultimele
hidrolizeaz n PAP i a-cetoacid.
COO
R C H COO
1+
Lizina centrului activ favorizeaz transfonnrile aldiminei n cetimin, fimcionnd ca

acceptor de electroni. In consecin, urmtorul a-cetoacid reacioneaz cu complexul
E-PAP E-PLP + AA0, regenernd complexul E-PLP.
Dezaminarea indirect prin reaciile de transaminare, cuplat cu dezaminarea oxidativ
a acidului glutamic, se numete transdezaminare. Schematic poate fi redat n aa mod:
^ .N A D H + H + NH 4
N A D P H + H+ V

II
A ;
D H ' N A D P+ H 2N - NH;
U ree
Acid glutamic N A D 1" + H 2O
Att transaminarea, ct i dezaminarea acidului glutamic sunt reacii reversibile. Aadar,

n organism se creeaz practic condiii pentru sinteza aminoacizilor, dac conlucreaz
a-cetoacizii corespunztori. Acest mecanism e denumit transreaminare.
Decarboxilarea aminoacizilor. Decarboxilarea este un proces foarte rspndit.

Enzimele, decarboxilazele (cu excepia decarboxilazei histidinei) utilizeaz n calitate de
coferment piridoxalfosfatul.
Se atest cteva tipuri de decarboxilare:
I. a-decarboxilare la decarboxilarea glutamatului n creier se produce acidul
y-aminobutiric. El se include n reacia de pereaminare cu a-cetoglutaratul, formnd
semialdehida acidului succinic, ulterior oxidat n succinat, component al ciclului Krebs.
Acidul y-aminobutiric confer efect inhibitor n substana cenuie a creierului. Se
utilizeaz n clinic pentru tratarea unor afeciuni ale sistemului nervos provocate de
excitaii excesive.
HOOCCH(CH2)2 COOH CH2(CH2)2-C O O H + C 0 2
NH2 NH2
Glutamat Y-aminobutirat
Enzimele piridoxaldependente labilizeaz mia din
cele 3 legturi pe lng C a a substratului aminoacidic.
Aceste enzime sunt capabile s catalizeze i alte re
Scindare
acii pe lng atomii de carbon i y. Dar toate au a ld o lic
aceleai particulariti:
a) formeaz compui Schiff;
b) PLP funcioneaz ca acceptor de electroni,
stabiliznd produsele intermediare ncrcate negativ;
azotul n inelul PLP atrage electronii din substratul
aminic;
c) bazele Schiff formate sunt hidrolizate rapid.
La decarboxilarea acidului aspartic i degradarea
pirimidinei se formeaz alanin produs ce intr n componena camozinei,
anserinei, coenzimei A, reprezint un fragment al acidului pantotenic. Exist liber n
esuturi i plasm;
Enzimele decarboxilrii acizilor aromatici nu posed
specifitate nalt de substrat. Decarboxilarea histidinei CH- CH2CH 2 - N H 2
d histamina ce reprezint un vasodilatator puternic. NH
Histamina este implicat n hipersensibilitate alergic, Histamina
NP d k
inflamaii. O diaminoxidaz l transform n aldehid, o
parte nedegradat n forma de derivai N-acetil sau N-
CH3este excretat prin urin.
Tirozina supus aciunii tirozinazei (hidroxilaz) formeaz DOPA, care, fiind
decarboxilat, formeaz dopamina substan intermediar pentru sinteza melaninei,
adrenalinei, noradrenalinei. Tirozin monooxidaza conine drept coenzim
tetrahidrobiopterina (THBP).
O
NH H
HO CH2 CH2- n h 2 NH ' 5 g f-C H O H CH
-CI
H O -^ JI -H ^H 3
H2N ^ n - NH H
D op am in a T H B P (5 ,6 ,7 ,8 ) D H B P (7 ,8 )
Triptofanul este hidroxilat de ctre o monooxigenaz. Drept coenzim servete

THBP care, decarboxilndu-se n creier i rinichi, formeaz serotonina.
H O -/4 : -c h 2- c h 2- n h 2
pj Serotonina
Se afl n esuturile intestinului, trombocitelor. Serotonina e mediator chimic,

vasoconstrictor arterial, factor hemostatic de altfel, i component al veninului viespi
lor i al broatelor buboase. O inonoatninooxidaz o scindeaz, formnd acidul 5-
oxiindolilacetic.
La mecanismele de neutralizare a aminelor biogene, care prezint un proces
fermentativ, particip mono- sau diaminooxidazele. Procesul este ireversibil, are loc o
dezaminare oxidativ ce decurge n 2 etape:
a) RCH NH2 + E - F A D + H20 R -C O H + NH3 + E - FADH,
b )E -F A D H , + O, E -F A D + H20 2
H20 2 H20 + 0 2
II. Pentru microorganisme e caracteristic (O-decarboxilarea (din aspartat se pro
duce a-alanina):
H O O C CH2CHCOOH CH3CH COOH
I 4 I
nh2 co 2 nh2
III. Decarboxilare dependent de condensare a dou molecule:

R CH COOH + R2 SCoA ^ R, C H R2+ HSCoA
I II 4 I II
nh2 o co 2 nh2 o
IV. Decarboxilare dependent de transaminare:
R , C H COOH + R 2 C O O H r 2 c h C O O H + R,
I II 4 1
NH2 o C02 NH2
Soarta amoniacului
Format prin intermediul multiplelor ci metabolice, este un compus deosebit de toxic.
Evolutiv, amoniacul se utilizeaz:
1 .0 parte din NH4+ format la degradarea aminoacizilor este reutilizat la biosinteza
compui lor azotai.
2. Surplusul de NH4+ la majoritatea vertebratelor este transformat n uree i
excretat din organisme.
3. Psrile i reptilele terestre transform NH4+ n acid uric pe care l elimin.
4. Animalele acvatice l secret sub form de NH,+.
NH4+ se formeaz n organismele animalelor, n majoritatea cazurilor, pe calea
transdezaminrii. Amoniacul produs n intestin (sub aciunea florei microbiene la
degradarea proteinelor) este absorbit i transportat prin sistemul-port spre ficat.
Numai o cantitate foarte mic de NH4+este dislocat n snge n form liber, fapt
reflectat de concentraia plasmatic redus: 10-20 mg la 100 mL. Cea mai mare parte
este sub fonn de glutaminreacie catalizat de glutamin sintetaza, o enzim localizat
n toate celulele:
COO" COO'
I - I +
HC NH3 + / ' ' NH3
I +NH4 -*- I
(CH,)2 / ,* ,
I ATP ADP + P|
C00 h 2n - c = o
Acid gl ut ami c Glutamina
Transportul NH4+n aceast fonn justific concentraia plasmatic majorat de3-
5 ori a glutaminei fa de ceilali aminoacizi. Glutamina, substana neutr, netoxic
penetreaz uor membranele celulare. n ficat i rinichi, sub influena glutaminazei, are
loc hidroliza ireversibil a glutaminei n glutamat i NH.+, din care se sintetizeaz ureea;
80-90% din coninutul total de amoniac sunt transformate n compusul vizat i eliminat
prin urin.
1. Ureea se fonneaz n cadrul unei secvene ciclice de reacii tradiionale, denumite
ciclul ureogenetic sau Krebs -Henseleit (fig. 6.7).
H - C COO
ooccH
Fum arat
(2)
H C -N H 3
COO'
HC NH3 L - omitina
I . Dir-::
COO
A rgininosuccinat
AM P + PPi
" O O C - C H - C H 2 -C O O H C NH3
I 4- , + N H , + 2A T P' <
NH3 L - aspartat COO' '-
L - citrulina
2ADP + Pj + 3H
F igura 6.7. Ciclul Krebs-Henseleit
Debutul n interiorul mitocondriilor rezid din condensarea NH4+ iC 0 2,cu formarea
carbamoil fosfatului.
Enzima carbamoil fosfat sintetaza (E ^ este alosteric, modulat de mai
muli efectori, stabiliznd forma sa activ -N-acetilglutamatul. Reacia necesit i iom
de Mg2+. In prezena acestor factori, au loc modificri conformaionale majore n
carbamoil fosfat sintetaz i amplificarea afinitii la ATP. Utilizarea a 2 molecule
ATP determin ireversibilitatea sintezei carbamoil fosfatului. Enzima conine biotin.
Apoi, tot n mitocondrii, are loc sinteza citrulinei, reacie catalizat de L-ornitin-
carbamoil transferaza (E,).
CH3 ~ SCoA + COO-CH CH2 CH2-COO

&
I
nh2
'N -acetilglutam at sintaza
14
H SC oA
CH3- C - N H - (ch2)2 coo

I I .
O COO N -acetilglutam at
2A D P + Pi
o
2ATP
HCO 3 + NH4 H2N c o- p o
Carbamol fosfat sintetaza I
o o
Sinteza M-acetilglutamatului i rolul lui de activator n sinteza carbamoil fosfatului
Citrulina difuzeaz n citozol i reaciile continu n acest compartiment, conform schemei

de mai sus (fig. 6.7).
Reacia catalizat de argininsuccinat-liaz posed stereospecificitate.
Arginaza e dependent de coninutul Mn2+ i Co2+i este inhibat competitiv de
omitini lizin.
Stoichiometria procesului:
C 0 2+N H 4++ 3ATP+ Aspartat+ 2H20 -
* reea + 2ADP + 2P.1+ AMP + PP.I + Fumarat
Formarea unei molecule de uree necesit scindarea a 4 legturi macroergice
(ceea ce constituie aproximativ 15% din energia aminoacizilor care servesc drept
surs de NH4+).
Ureea este netoxic, foarte solubil. Ea nu are prag de eliminare renal i tot ce se j
sintetizeaz, se elimin prin urin.
Acidul fumrie este convertit n acid oxaloacetic (sub aciunea fumarazei i M DH 1
care va regenera acidul aspartic prin transaminare. Oxaloacetatul este utilizat ir
gluconeogenez sau convertit n citrat. Interconversia metaboliilor e reflectat i
figura 6.8.
Arginina
Fumarat
I
Malat N A D
C iclu l
NADH+H
ureo g en etic
Oxaloacetat
u n tu l 'itru lin a Ornitina
aspartat-
Aspartat
arginitto- C ito z o l
su ccin a t
n ciclul Aspartat Ci
K rebs a-cetoglutarat Carbamoil
lacetat Glutamat fosfat
* N A D H +H
NAD*
C iclul M ito c o n d ria

Fumarat a c id u lu i
citric

F igura 6. 8. Interconversia metaboliilor
Amoniacul e foarte toxic pentru organismul uman. Insuficiena unor enzime din ciclu,
ndeosebi a primelor dou (carbamoil-fosfat-sintetaza i transcarbamoillaza),
provoac com i exitus dup natere (hiperamoniemie tip I i tip II). Un simptom
concludent este hiperamoniemia. Insuficiena parial provoac defecte n dezvoltarea
mintal, letargie, vom, iar o raie cu insuficien de proteine micoreaz NH4+ n snge.
Formele uoare ale afeciunii se supun redresrii simptomaticii clinice. Lipsa
argininosuccinat sintetazei conduce la citrulinemie, concomitent cu eliminarea masiv
prin urin a acestui compus. Absena arginazei se caracterizeaz prin creterea nivelului
argininei n snge i lichidul cerebrospinal.
N A D H +I- H NA
A DD++++ H
H 22 0 N H4
WlJ4 . sintetaza
V ^ - V* G lutam ip s
a -cctoglutarat - / - *-
Glutamatul
frliita m a tiil ^ \ Glutamina

NH4 + N A D P H + H GDH NADP+ ATP M g A D P + Pj
Efectul toxic al amoniacului se explic prin concentraia mare de ioni de amoniu, ce

dezechilibreaz reacia catalizat de glutamat dehidrogenaz, cu fonnarea glutamatului.
Acesta epuizeaz concentraia de a-cetoglutarat produs intermediar al ciclului Krebs,
cu reducerea reaciilor de generare a ATP, ce deregleaz, n primul rnd, funcia creierului.
Ultima reacie e nsoit de crearea unui produs intennediar macroergic fixat de enzim
(glutamil-5-fosfat). Centrul activ al glutamin sintetazei, adiionnd.NH4+, formeaz
glutamina, cu eliberarea fosfatului.
II. n esuturile mamiferelor are loc i sinteza asparaginei n complcx cu glutamina
sauNH+.. 4
Reacia e catalizat de asparagin-sintetaza glutamin dependent sau amoniac depen
dent.
COOH COOH
COOH I I
I C H -N H 2 C H -N tI2
ch- nh2 I _ I
CH2)2 A VH2
CH2 + I + ATP + H20 - r ^ -*> 1 _ + AM P-PP, +G1U
I c=0 9=
C O O H
Acidul aspartic
IN H 2 JlH2
. Asparagina
Glutamina
III. NH3poate fi utilizat pentru sinteza argininei i a pirimidinelor prin intennediul

carbamoil fosfatului.
IV. Un rol deosebit n transportul NH4+l are alanina. NH3se formeaz n muchi la
felea i n alte esuturi, la scindarea aminoacizilor. La un efort fizic n muchii scheletali
are loc dezaminarea AMP, cu formarea inozinmonofosfatului (IMP). NH3eliberat
este transportat prin ciclul glucozo-alaninic (fig. 6.9).

U tilizarea sch eletu lui de carbon al am in oacizilor

Strategia degradrii aminoacizilor const n formarea principalelor produse
intennediare ale metabolismului, care pot fi transfonnate n glucoz sau oxidate n ciclul
Krebs.
Scheletul de carbon al celor 20 aminoacizi se modific n numai 7 molecule: piruvat,
acetil-CoA, acetoacetil-CoA, a-cetoglutarat, succinil-CoA, fumarat, oxaloacetat. E un
exemplu de economie judicioas i maxim a modificrilor metabolice (vezi fig.6.10).
Aminoacizii, ce produc acetil-CoA sau acetoacetil-CoA, sunt denumii ceto-
geni, la degradarea lor se majoreaz concentraia corpilor cetonici. Ceilali glucogenici
produc glucoza, prin transformrile prealabile n fosfoenolpiruvat. Numai un singur
aminoacid leucin-este exclusiv cetogen. Ile, Lys, Phe, Tyr i Trp constituie
aminoacizi, la care unii atomi de apar n acetil-CoA sau acetoacetil-CoA, pe cnd
ali atomi de carbon n precursorii poteniali ai glucozei. Ceilali 14 aminoacizi sunt
pur glucoformatori.
L e u c in A rg in in a
L iz i n a G lu ta m in a
F e n ila la n in a liis tid in a
T r ip to f a n P ro lin a
T ir o z in a
C o r p i c e to n ic i
I/ocitrat Iz o le u c in a
M e t io n i n a
T re o n in a
V a lin a
Ciclul
acidului
citric
F e n ila la n in a
T ir o z in a
P iru v a t
A la n in a
C is te in
G lic in a
I z o le u c in a S e rin a
L e u c in T r ip to f a n A s p a ra g in a
T r ip to f a n A s p a rta t
F igu ra 6.10. Utilizarea scheletului de carbon a! aminoacizilor
Metabolismul glicinei (1)

Glicina favorizeaz eliminarea unor compui toxici din organism, de exemplu, acidul
benzoic; ultimul este activat, apoi fixat de grupa aminic a glicinei, cu fonnarea acidului
hipuric (depistat n urina de cal).
ATP PPi
C6H5COOH W . c 6h 5- c o - a m p C6H5C O -S C o A
Acid benzoic E2
Glicina
HS-CoA
A cid hipuric (benzoil glicinaX iyH ^ CO NH CH2 COOH

Printr-un mecanism similar sunt activai i acizii colic i dezoxicolic, apoi conjugai cu
glicin pentru formarea acizilor glicocolic i glicodezoxicolic.
Glicina ia parte n sinteza glutationului, creatinei, acidului 8-aminolevulinic (precursorul
hemului).
Glicina particip i n ciclul lui Shemin, care reprezint o derivaie a ciclului Krebs la
etapa succinil-CoA. Cele trei etape ale ciclului sunt redate mai jos.
glutam ic
Ciclul Shemin
F o rm il-F H 4
- Prima etap const n condensarea succinil-CoA i glicinei, cu formarea acidului

8-aminolevulinic, reacie catalizat de sintaza respectiv, avnd ca coenzim
piridoxalfosfatul.
- n continuare, rapid este transaminat cu acidul a-cetoglutaric, formnd o funcie J
aldehidic.
- L-a-cetoglutaraldehida obinut se rentoarce n ciclul Krebs, la o simpl oxidare
(calea I) sau, cednd o structur umcarbomc, se transform n acid succinic.
Reaciile cu implicarea glicinei i a serinei sunt redate n fig. 6.11, unde se reproduce
metabolismul, n ansamblu, cu participarea acestor aminoacizi.
A c id hipuric
o
A c id g lic o c o lic
Glucide A ' A c id __.
A c id g lio x ili benzoic
A cid /
/
L ipide G lu tation
colic / Cys
NH
v y c iu V
/ N u c le o tid e pu rin ice
B c ta in D irn etilg licin M etilg lic in Glicin t'Ârginina

A c id gu a n id in o a cetic
O m itin a S-ad
S-adenozil
meti
m etionina
C h o lin a
T.
Creat
eatin;
ina
G lucide , ATP
Succinil-C oA
ADP
3 xC , A c id 3 -fo s fo g lic e r ic co2 C reat in fo sfa t
CO, A c id 8 -a m in o
- P o rfirin a
E ta n o la m in a . Vw. S erina lev u lin ic
H om ocistcina
N H,
Ciclul
a
C istein &tion in a \* r
tsta
Cl> t a t i 0 n i n a A cid a -c e to -
glutarald eh id a-
.A c i a -c e to g lu ta r ic
p iru vic .A c i su ccin ic
A c id
c eto b u tiric- (H o m o se r in a ) Krebs
~ T A c e til-C o A -
NH,
F igura 6.11. Schema, n ansamblu, a metabolismului glicinei i serinei
Catabolismul glicinei are loc primordial n celulele ficatului. Complexele enzimatice

rezint agregate macromoleculare i sunt localizate n mitocondrii. Glicinuria ce se
bserv n unele cazuri e dependent de sex (X-cromozom) i e n corelaie cu tulburrile
de absorbie n tubii renali; fenomenul are loc la coninut normal de glicin n snge.
O alt afeciune se caracterizeaz cu o excreie major de oxalat, independent de
imentarea cu oxalai. La progresarea maladiei are loc fonnarea calculilor n cile urinare,
u apariia nefrocalcinozei i o infecie recidiv a cilor urinare. Insuficiena renal i
ipertonia sunt cauzele decesului n fraged vrst. Surplusul de oxalat e de natur
ndogen, probabil se formeaz din glicin (dezaminarea glicinei duce la formarea
lioxilatidui precursorul oxalatului). Defectul metabolic const n dereglarea
tabolizrii glioxilatului, transfonnrii lui n formiat sau glicin i, n consecin, glioxilatul
se transform n oxalat (vezi metabolismul serinei). E verosibil c dereglarea ereditar_
hiperoxaluriaprimareste consecina insuficienei glicintransaminazei i a dereglrilor
oxidrii glioxilatului n formiat.
Catabolismul aminoacizilor poate fi clasat n cteva grupe:
I. Familia aminoacizilor cu Cf
Include urmtorii aminoacizi: alanina, serina, cistein, cistina, metionina.
Metabolismul alaninei (2) Alanina este un aminoacid cardinal glucoformator. Prin
transaminare formeaz direct acidul piruvic.
a) Alanina + a-cetoglutarat Piruvat + Glutamat
b) Glu + NAD+ + H20 a-cetoglutarat + NH4+ + NADH + H+
Piruvatul format n citoplazma este transportat n mitocondrii. Catabolismul Ala are
loc preponderent n ficat i muchii scheletali, unde formeaz un ciclu de transformri, ce
constituie ciclul alaninei. Catabolismul proteinelor musculare genereaz cantiti majore
de alanin. Ea rezult i din catabolismul aminoacizilor ramificai prin 2 reacii de
transaminare:
1. AA ramificai + a-cetoglutarat = ^= a-cetoacizi ramificai + Glutamatul
2. Glutamat + Piruvat a-cetoglutarat + Alanina
Alanina este convertit n piruvat, permind formarea glucozei. i triptofanul, printr-
o succesiune de reacii genereaz alanina, dar concomitent este i un aminoacid
cetofonnator.
Metabolismul serinei (3)
Serina poate fi supus urmtoarelor modificri (vezi i transfonnrile treoninei):
Piruvat + N H 4
CH2 NH2 Transaminaza G licoaldehida

Etanolam ina jt
COOH _ ,N A D H + H +
Serina r
' Dehidrogenaza
A cid a-cetoglutaric ^ N A D ++ H20
Transaminaza 1 N A D H +H + NAD+
A cid glutam ic
Dehidrogenaza
Decarboxilaza i
COf
5 10
A cid fonnic \ N sau N Formil- FH 4
Etanolamina, produsul decarboxilrii, poate fi utilizat n sinteza cholinei prin intermediul
aciduluifosfatidic i al S-adenozil metioninei. Cholina este oxidat apoi la betain,
dup care pierderea celor trei grupe CH3va finaliza cu generarea glicinei (fig.6.12)
H 3C + /C H 3
\+
H 3CN CH 2 CH2OH H 3CN CH2- COO- N CH 2 COOH
V ' xj D im etilglicin a
Betaina
H3C Cholina
F osfatidilcholina
F osfatidild im etiletanolam ina
F osfatidilm etiletanolam ina
F osfatidiletanolam ina
h 2n c h 2 CH2OH H 2N CII2COOH
Etanolam ina G licina
CH2OH
Serina
F ig . 6 .1 2 . F orm area g lic in e i din eta n o la m in a p rin g en era rea ch o lin ei
Prin dezaminarea oxidativ (sub influena unei glicinoxidaze specifice) sau prin
transaminarea reversibil, glicina este transformat n acidglioxilic, care poate fi
momentan decarboxilat oxidativ n C 0 2plus acidulform ic care nu este eliberat, dar
captat de FH4pentru formarea N5-formil-FH4sau N'-formil-FH4.
Acidul glioxilic format i din izocitrat, reacie catalizat de o izocitrataz, este condensat
cu acetil-CoA n acidul malic.
CH2 COOH
CH2- C O O H
I CH2COOH
H- - COOH Izacitraaza
I
Acid succinic
H -C -C O O H O
C COOH
OH H A cid glioxilic
Acid izocitric
c h 2- c o o h
3 c s CoA
H -C -C O O H
I O
OH
Acid malic CoA SH
S-a constatat c acidul glioxilic este un metabolit de contact ntre metabolismul
glucidic i lipidic (fig.6.13).
Acid g ras^"^ Acid

Acetil-CoA
oxaloacetic
/^NADH+H+
/ NAD*
A cid citric
A cid m alic
\ Glucoza
*
Acetil-CoA \ A cid fosfoenol

A cid glioxilic piruvic
A c id izo citric
GDP C02
4I
E
GTP'4
Acid succinic A cid malic A cid oxaloacctic
NAD+
FA D H 2 N A D H +H +
F igu ra 6.13. Transformrile acelil-coenzimei A n glucoz n ciclul acidului glioxilic
Serina poate fi convertit n glicin graie unei enzime specificeserin-hidroximetil

transferaza care transfer grupa formil. Enzima necesit dou coenzime: la prima etap
are loc formarea unei baze Schiff intermediar ntre serin i PAP. n faza a doua enzima
elibereaz glicina i transfer formaldehida pe tetrahidrofolat (FH4) prin eliberarea unei
molecule de ap i formarea de N 5~ N )0metilenFH4. Ultimul compus poate fi
transformat de alte enzime n N5 metil FH4sau n N5~ (N,0) formil FH4
PAP
H 2N C H C O O H H 2N CH 2COOH Nj CH 2 \
I Glicina x |
C H 2OH H CHO CHCH 2 N 10
Serina / \ j
FH< 2 1
N5 N,o m etilen FH4
M etabolism ul am inoacizilor ce conin s u l f (m etio n in a , cisteina(4) i

cistina(S))
Ultimii doi sunt interconvertibili prin oxidare-reducere. Metionina, pentru obolani i
om, este indispensabil, dar nu atunci cnd se furnizeaz suficient cistein. S-a stabilit c
atunci cnd se administreaz cistein, necesitile de metionin se diminueaz, ceea ce
sugereaz c o parte din cistein este utilizat pentru sinteza metioninei, fapt confirmat
prin studiile realizate, cu utilizarea izotopilor radioactivi.
Calea de degradare a metioninei este redat n fig. 6.26. Metionina activ este
principalul donator de grupe metilice CH3, S-adenozil metionina (SAM) graie enzimei
specifice metiltransferazei doneaz grupa CH3 unor substraturi cu formarea S-adenozil
homocisteinei (SAHC):
SAM nh2 sa h c nh2
Adenozin S (CH2)2 ' CH Adenozin S (CH2)2 CH

I I
CH3 COOH COOH
I Metiltransferaza A
I
Acidul guanidinacetic C reatina
N icotinam ida N -m etilnicotinam ida
N orepinefrina Epinefrina
Fosfatidiletanolam ina Fosfatidilcholina
N -acetilserotonina M elatonina
Metionina poate fi restabilit prin transferul grupelor metil ai betainei pe homocistein,

reacie catalizat de o metiltransferaz sau donator al acestor grupe poate fi N5
metiitetrahidrofolatul (N5CH3~ FH4) ce conine i vitamina B12:
nh2
SH - (CH2)2 - C H -C O O H (CH3)3- N - C H 2COOH
H 3 C - S - ( C H 2)2- C H -C O O (CH3)2- N - C H 2COOH

M etion in a Dimetilglicina
Betaina (acid) se obine la oxidarea cholinei n cteva etape:

fa d fadh2
(CH3)3- N - CH2- CH2OH -* (CH3)3- N - 2- COH

Cholina Cholin o xidaza B etainaldehida
NAD+ N A DH+ H+
(CH3)3- N - C H 2COOH
BADH Betaina
Sulful, ca i azotul i carbonul, i are n biosfer ciclul su, care se realizeaz graie
activitii metabolice a organismelor pro- i eucariote. Vertebratele nu posed mecanisme
de a forma sulf organic, ele particip n catabolismul compuilor organici n neorganici.
Organismul uman excret aproximativ 20-30 mmol de sulf n 24 ore, cota sulfatului
neorganic e de 80%.
O cale cardinal de metabolizare este transformarea cisteinei n reacia catalizat de
cisteinreductaz:
CH2 S S CH2 NADH+H' NAD"-

I + I + 'V / ~ SH NH3
C H N H 3 C H N H 3 / > I I
CH2- C H -C O O
COO" L-cistina coo' 2 L-cisteina
Cisteina poate fi metabolizat pe dou ci principale: oxidarea direct (a) i prin

pereaminare (b):
a) Transformrile cisteinei n cistein-sulfinat sunt catabolizate de cistein dioxigenaza -
enzim ce necesit Fe2+ i NADPH. Catabolizarea n continuare include reacia de
pereaminare, cu formarea -sulfinil-piruvatului. Se consider c transaminaza
respectiv e identic cu glutam at: aspartat transaminaza. Intermediarul sus redat nu a
a) SH NH3 b) SH NH3
I I .
CH2 C H -C O O CH2 CH COO'
L-cisteina L-cisteina
O NADP+ a-cetoglutarat
N rr
NADPH+H+
Transaminare
G lutam at
S02 NH3 H S -C H 2 c-coo

CH2C H -C O O ' o
L - cistein-sulfinat Tiolpiruvat N A D H +H +
^ a-cetoglutarat
LDH
' Transaminare NAD+
Sulfotransferaza
- a-glutam at
H,S
c-coo
c h 2
I II
so2 o Jl Piruvat CH2 CHOH COOH
3-m ercapto-lactat
-sulfmil-piruvat Desulfinaza
fost identificat, dar transformrile de mai departe se realizeaz pe cale nefermentativ.
b) Transaminarea reversibil n tiolpiruvat e catalizat de transaminaze specifice. 3-
mercaptopiruvatul este redus n reacia catalizat de L-lactat dehidrogenaz. Produsul
format e component normal al urinei la om, n form de amestec de disulfid cu cistein.
Modificrile alternative vor conduce la fonnarea piruvatului i H2S.
Dup unele date tiinifice, cistein este transformat n acid piruvic, ce prezint o
dezaminare catalizat de cistein desulfhidraza. Cistein este oxidat n acidul cistein-
sulfinic, care prin transaminare pierde grupa aminic, genernd acidul sulfinil-piruvic.
Ultimul, cednd sulful sub form de sulfit, apoi sulfat, va da acidul piruvic. Sulfatul e
activat n fonn de 3'-fosfat-5'-fosfo-sulfat, care va neutraliza compuii toxici i se va
elimina ca sulfoconjugai prin urin.
O caledemetabolizare const n decarboxilarea acidului cistein-sulfinic n hipotaurina
oxidat n taurin. Ultima poate fi format i prin formarea acidului cisteic i decarboxilarea
lui. Taurina, ca i glicina, poate fi conjugat cu acizii biliari (fig. 6.14).
Cistein desulfhidraza
H ,0 -C H 3- - COOH
4 Acid piruvic
SH HS N H 3 S 0 2H NH
SO ,H
Oxidare 2-
CH, H7 S 0 4> ' ' V ' A T P
Transaminare
C H -C O O H CH CO O H Op ATP
- CO O H PPi ^ suifurilaza
NH2 nh2 Acid sulfinil-piruvic T
APS
C istein Acid cistein-sulfinic I ATP
Decarboxilai U ADP
O cr
C H 20 - p-o-s=o
0~
12 - N H 2
Hipotaurina nh2
o
Acid cisteic
^ .Oxidare Fenoli
Decarboxilarc
SO3H: A \ ^ co2 Steroizi
Conjugaii sulfului
2 n h 2- Acid taurocolic
Taurina C7
Acid colic
Figura 6.14. Metabolismul cisteinei (APS -adenozin 5 '-fosfosulfat, PAPS - fosfoadenozin 51-fosfosulfat)
O schem de asamblare a reaciilor de metabolizare a aminoacizilor ce conin sulf e

at n figura 6.15.
M etionina- H om ocisteina
G lutation
ATP ^ -* Serina
CH3 M ercaptoetanolam ina
Glu _ C02 \
PPi+Pi
G ly. Coenzim A
S-adenozilm etionina C istationina Cisteina C istina

52
\
A cid
E tanolam ina H om oserina ^^<cisteic V
A cid guanidinoacetic Acid cistem
^ . N oradrenalina sulfinic Taurina
/ / tR N A nem etilat -N H 3
NH3-
tR N A m etilat T reonina A cid sulfinil C02
H ipotaurina
A drenalina piruvic
Creatina
Cholina Izoleucina
S -adenozilhom ocisteina A cid A cid piruvic

A cid
a-ceto b u tiric taurocolic
C oA S H ,
-C 0 2 A cetil-C oA
A denozin 3-fosfo-
Propionil-C oA 5 -fosfosulfat
Ciclul Krebs
1.
G lucide C onjugaii
sulfului
F igura 6.15. Schema de asamblare a metabolsmului aminoacizilor ce conin s u lf
n sumar, scindarea cisteinei pe diferite ci metabolice poate da:

Cisteina Piruvat + SO 3 2- + N H / + SCN' + H2S
Dereglrile metabolismului aminoiacizilor ce conin su lf
A. Cistinuria (cistin-lizinuria) afeciune metabolic ereditar n care excreia
cistinei e majorat de 20-30 de ori. Se elimin, de obicei, lizina, arginina i omitina. Se
presupune prezena dereglrilor n reabsorbia acestor patru aminoacizi n tubii renali,
ce se realizeaz n acelai fragment renal. Solubilitatea mic a cistinei favorizeaz formarea
calculilor n tubii renali. n urina bolnavilor se depisteaz i L-homocistein. n cazul
respectiv se micoreaz tendina de formare a calculilor (L-homocisteina are o solubilitate
mai mare).
B. Cistinoza afeciune ereditar, cu formarea cristalelor de cistin n esuturi i
organe (predominant, n sistemul reticulo-endotelial). Se depisteaz i o aminoacidurie
total. Dereglri evidente n rinichi, cu fenomene de insuficien renal n copilrie. Se
consider c dereglrile cardinale sunt localizate n lizozomi (deficit al transportatorului
lizozomal pentru cistin).
C. Homocisteinuria se excret mpreun cu S-adenozil-metionina (pn la 30 mg n
24 de ore). Sunt caracterizate patru tipuri de homocisteinurie:
7/este defectat enzima cistationin--sintaza (n deficit al transportului lizozomal
pentru cistein), se ntlnete osteoporoza, tromboza, retard mintal, dereglri ale
cristalinului. Sunt dou forme sensibil i nesensibil la vit. B6.
Dieta cu coninut mic de metionin i mare de cistin prentmpin dereglrile din
fraged copilrie.
Tip I I este defectat N5, N'-metilen-FH4-reductaza.
Tip III o activitate mic o are N5-metilen-FH4: homocistein transmetilaza determinat
de tulburrile n sinteza metilcobalaminei.
Tip IV o activitate minim a N5-metilen-FH4- homocistein transmetilazei, cauzat
de dereglrile absorbiei cobalaminei n intestin. Adausul vitaminelor |2, B6 i a acidului
folie reduc nivelul ridicat n ser de homocistein, micoreaz morbiditatea i mortalitatea
de afeciunile vasculare aterosclerotice cauzate de hiperhomocisteinemie.
II. Familia aminoacizilor cu ,
Include urmtorii aminoacizi: treonina, acidul aspartic, asparagina.
Metabolismul treoninei (6) poate fi redat n felul urmtor:
NAD++ H20 N A D H + H+
9 - / . ?
CH=0 Aidehid- COOH
Ace,aldehida
H S C o A ^ x ATP
Acetotiokinaza ^
H20 AMP + PPj
0 = C ~ SCoA
I
CH3
CH2~ C O O H f h 4+ n a d + n a d h + h +
nh2 -------------- N - C H 2- F H 4 + C O 2 + N k
Glicin sintetaza
Glicina
Y n 5 n ,0- c h 2- f h 4+ h 2o
( ' Hidroximetil transferaza
\ (PLP)
FH,4
H ,0
CH2OH .
<Jh - n h 2 (PLP), J . Pinlvat
cooH Serindehidra,za
Serina n 1h[4
Metabolismul acidului aspartic(7) i al asparaginei(8)

Acidul aspartic este format prin transaminare din acidul oxaloacetic i singur poate
ceda grupa aminic prin transaminare pentru fonnarea altor aminoacizi. Oxaloacetatul
ocup un loc-cheie n ciclul Krebscapteaz moleculele de acetil-CoA provenite din
glucide i lipide i, de alfel, e punctul de plecare pentru gluconeogenez. Acidul aspartic
se poate ncadra n ciclul Krebs prin acidul fumrie, dup dezaminarea sa.
De asemenea, este un precursor n sinteza nucleotidelor purinice i pirimidinice, are
un rol important n ureogenez. Fiind decarboxilat, se fonneaz -alaninaun constituent
al coenzimei A. n prezena ATP, acidul aspartic adiioneaz amoniac, formnd asparagina
o fonn-rezerv de amoniac la vegetale.
De altfel, asparagina poate fi transaminat:
. Asparaginaza T Transaminare
Asn V 4 . > L-aspartat- - Oxaloacetat
H20
+ Alanina
NH, Piruvat
Asparagina + a-cetoglutarat Glutamat + Acid a-cetosuccinic

Ultimul acid e scindat de o co-amidaz, cu eliberarea OA + NH3+ H ,0.
La unele organisme (bacterii, vegetale, levuri), acidul aspartic este precursorul n
sinteza treoninei, izoleucinei, metioninei i lizinei. La om, ns, aceti patru aminoacizi
sunt indispensabili. Schematic, mai jos, sunt demonstrate implicaiile n metabolism ale
acizilor glutamic, aspartic i amidelor lor (fig.6.16).
Acid a - c e to g lu ta r ic ^ a-a m in o acid ^ f0 jjc G lutation
^ a -c e to a c id
A cidY -am inobutiric Purine(N 3 N6)
Succinil-CoA
O zam ine
TSlH
3 A cid g lu ta m ic G lu t a m in a C T P
Ciclul
\
Acid succinic
' \ V GTP
Fenilacetil
Q u tam in a
Krebs t Y -semialdehidglutamat
A cid
O rn itin a . Prolina
A cid o x a lo a c e tic - A cid a sp a rtic - A sp aragin a

Lipide *
Acetil-Co < Q ucide
.....
.. N
NH, ; : ^ 02
i s a - sau -alanina
Acid citric
Piruvat t \ 4 %
A s p a rta t..... * Lizina * Pirim idine
-N H , -semialdehida \ AM P I C 4 C 5 Cg)
Serina Cistein
P u rin e(N j)
H om o cistein a-* Cistat ionin a-^F= :H om oserina
j*~C H 3
M etionina T re o n in a...... Izoleucina
F igura 6.16. Schema de asamblare a metabolismului acizilor glutamic i aspartic i ale amidelor lor
III. Familia aminoacizilor cu Cs
Include unntorii aminoacizi: arginina, glutamatul, glutamina, prolina, histidin.
Metabolismul acidului glutamic(9) i al glutaminei (10)
Acidul glutamic, ca i acidul aspartic, precum i aminele respective ocup un loc
important n metabolismul compuilor azotai. S-a constatat deja c acidul glutamic este
calea cardinal de utilizare a amoniacului n compuii biologici i este situat n calea
celorlali aminoacizi. mpreun cu amida sa, glutamina joac un rol principal n stocarea
i eliminarea amoniacului. Contribuie, de asemenea, n biosinteza nucleotidelor purinice.
Se constat c unii aminoacizi deriv din acidul aspartic i, de altfel, el particip i la
sinteza nucleotidelor purinice i pirimidinice i e necesar pentru formarea ureei. Aceti
doi aminoacizi sunt egal importani n metabolismul intennediar general: a-cetoacizii lor
sunt intennediaele ciclului Krebs i constituie punctele de contact ntre metabolismul
glucidic i proteic.
Acidul glutamic se formeaz din acidul a-cetoglutaric prin aminarea reductiv sau
prin transaminare. El particip n procesele de transaminare, cednd grupa aminic pentru
formarea altor aminoacizi. La decarboxilare, se genereaz acidul y-aminobutiric un
mediator de inhibiie n sinapse, ce sunt localizate la nivelul creierului. Este necesar pentru
sinteza glutationului, e constituent al acizilor pteroilglutamic i folie, cu rol decisiv n
transportul unitilor monocarbonice.
Corelaia ntre acidul glutamic, omitin, prolin, arginin (cu un rol deosebit n sinteza
ureei) este ilustrat n figura.6.16. Reaciile respective sunt reversibile.
Glutamina permite stocarea amoniacului, care-i toxic pentru esuturile animale i
este, deci, un intermediat n eliminarea amoniacului pe cile urinare. La mamifere provine
prin hidroliza glutaminei sanguine la nivelul rinichilor. Regleaz homeostazia acido-bazic
prin reaciaglutaminazei (elimin NH3). Ultimul este eliminat sub forma ionului de
amoniu, impreun cu protonii prezeni n filtratul primar. S-a elucidat fonnarea glutaminei
din acidul glutamic i vom vedea n continuare utilizarea azotului amidic n sinteza
nucleotidelor purinice, formarea carbamoil fosfatului i aminarea UTP la CTP. Glutamina
ia parte la formarea ozaminelor. Ca i glicina, particip n procesele de dezintoxicaie,
de exemplu, a acidului fenilacetic, care este excretat sub forma combinat cu a-aminogrupa
glutaminei (vezi metabolismul fenilalaninei). Glutamina este i un substrat energetic, prin
conversia sa n intermediarii ciclului Krebs, n esuturile cu ritm rapid de diviziune celular
(1 molecul de glutamin elibereaz 24 moli de ATP). Glutamina reprezint 60% din
fondul aminoacidic prezent n muchi, unde are loc o sintez activ a ei. Glutamin
sintetaza muscular necesit un aport de NH3, obinut prin dezaminarea AMP generat
la un efort fizic ntens sau prelungit.
Metabolismulprolinei (11)
Conform schemei redate n fig. 6.17, toi cei cinci atomi de carbon ai prolinei se vor
afla n a-cetoglutarat. Prolina primar se oxideaz n dihidroprolin, care, adiionnd apa,
se transform n y-semialdehida acidului glutamic. Ultimul compus se oxideaz n
glutamat care prin pereaminare va fonna a-cetoglutaratul.
Sunt descrise dou afeciuni genetice ce sunt nsoite de hiperprolinemie (se motenesc
dup tipul autozomal reccsiv i 50% din ele sunt nsoite de retard mintal):
2 2
L /
NH, I
-
P r o lin a
NADP 1/2 o 2
COO COO' N
I + + I + I Prolin oxidaza
C H -N H , H 3N - C H H 3N - C H
I H 20
a -ceto- N A D P H +H A
2 CH 2
,0 Ureea I glutarat G 'utam at |
H 20 CH
(2)2 7 , CH 2 V /;./, CH2 J .
CH 2
I
NH Arginaza CH2 Transaminaza c?=o
h 2o
L N ^ CH
I
I+
C=NH NH3 H coo-
1+ Y-glutamatseinialdehida
NH3 O m itina -pirolin-
A rginina NAD+ 5 - carboxilat
Dehidrogenaza v
COO
r ><NADH+H+
[NH3
P*
CH, COO
COO
+ I H 3N - CH
H 3N CH + I
H( "N H NH4 H 20 CH-,
\ / CH 2 k I
N=CH
CH2
H istidina CH2 Glutaminaza
C=0
COO- I
N 5- NH = C H - F H 4
G lu ta m a t NH2
N A D P+ G lu ta m in a
Glutamatformin-
imino transferaza
C H = C H -C O O ' Glutamat
dehidrogenaza
CO O H FH,
N A D P H + H+
H C ^^N H
\ / (CH2)2
I NH4
N=CH
A cid urocanic CH N H C H NH
COO'
Urocanat -H,0 CO O H I
hidralaza ' o
Acid forininim ino- I
glutam ic CH 2
C H 2- C H 2- C O O y I
CH2
y f / Imidazolon- I
(Y x nh / / propionaza coo-
N=CH a -cetoglutarat
h 2o
A cid 4 -im idazolon -
- 5 -propionic
F igu ra 6.17. Catabolismul argininei, pralinei, histidinei, glutantinei i acidului glutamic

a) Hiperprolinemie tip I n acest caz are loc un bloc metabolic la nivelul prolin
dehidrogenazei. Nu sunt observate tulburri n catabolismul hidroxiprolinei. Afeciunea
decurge ntr-o form uoar, fr consecine grave pentru sntatea individului.
b) Hiperprolinemia tip 11. Se constat un grad mai major de hiperprolinemie dect
n tip I. Urina conine A-prolin-3-hidroxi-5-carboxilat. n acest caz e blocat
dehidrogenaza ce catalizeaz oxidarea y-semialdehidei acidului glutamic n glutamat
Deoarece aceeai dehidrogenaz funcioneaz i n catabolismul hidroxiprolinei (vezi
fig.6.17a), cataliznd oxidarea y-hidroxi-y-semialdehid-L-glutamat n eritro-y-hidroxi-
L-glutamat, se deregleaz nu numai catabolismul prolinei, dar i a oxiprolinei. La
heterozigoi de tipul II, comparativ cu heterozigoii tip I, nu se depisteaz hiperprolinemia.
H H H ,0 OH COO
J/
. Midroxiprolin
COO dehidrogenaza
NH3
L -A -p iro lin -3 -h id ro x i-
Y- hidroxi - L - glutam at-
5 - carboxilat
Y - polialdchid
NAD+ H,0
O
C H -C O O Dehidrogenaza 'J L \ 2
G lioxilat H3 C - C - C 0 0
V Piruvat N ADH+H+4
1
?
OO'
O O C - C H - C H 2- C - C O O 'a ' aminvacid a-ceto acid O C - C H - C H 2- C H

I II - ___ V v ____
OH o Transaminaza OH NH3
a -ceto -y -hidroxiglutarat Eritro - Y - hidroxi- L- glutam at
F igu ra 6.17a. Intermediatele catabolismului a-hidroxipro/inei n esuturile mamiferelor. Cifrele I

i 2 indic locul patologiilor metabolice: I - hiperhidroxiprolinemie tip I i 2 - hiperprolinemie tip II
Metabolismul histidinei (12)

Prin dezaminare, va forma urocanatul. Transformarea urocanatului n 4-imidazolon-
5-propionat, catalizat de urocanaz, include adiia apei i modificri intramoleculare
de oxido-reducere. n calea formrii a-cetoglutaratului are loc hidroliza, cu generarea
N-formimin-glutamatului. n continuare, grupa fonniminic este transferat pe a-C al
FH4, c u formarea glutamatului i hP-formimin-tetrahidrofolatului. La pacienii cu deficit
de acid folie ultima reacie parial se blocheaz i N-formimin-glutamatul se excret cu
urina. Aceasta st la baza testului de depistare a insuficienei de acid folie (la ncrcarea
cu histidin n urin se depisteaz N-fonnimin-glutamatul).
O afeciune autozomal recesiv e determinat de diminuarea activitii enzimei
histidazei. Bolnavii sufer de defecte ale vorbirii, au retard mintal pronunat. n snge i
urin se depisteaz concomitent cu nivelul nalt de histidin i imidazol piruvat, (reacia
pozitiv cu clorura de fier poate da i fenilpiruvatul, greit considerat ca fenilcetonurie).
Insufiiciena histidazei n ficat diminueaz transfonnarea histidinei n urocanat i stimuleaz
calea alternativ de metabolizarehistidina este transformat n imidazol-piruvat, sur
plusul acestui produs este excretat n urin. n urin se depisteaz i derivaii imidazol -
piruvatului imidazol-acetat i imidazol-lactat.
n condiii fiziologice, nivelul histidinei n unn e uor apreciabil la valori majore.
Majorarea acestui aminoacid e un test la o graviditate normal sau cnd este asociat cu
hipertonie (valori i mai mari). Testul nu depisteaz patologie n graviditate, dar confirm
unele modificri funcionale renale. n graviditate crete excreia i altor aminoacizi.
Metabolismul aminoacizilor ramificai Metabolismul leucinei(13), valinei(J4),
izoleucinei(l 5)
Avnd o structur asemntoare, catabolismul aminoacizilor respectivi sufer aceleai
modificri: transaminare, decarboxilare oxidativ i dehidrogenare. Apoi cile se rami
fic cu particularitile sale i formarea intermediatelor amfibolice de natur glicogenic
(valina) sau cetogenic (leucin), fie de ambele tipuri (izoleucina) (fig.6.18).
zoleucina Leucin
Acidul a-ceto- Acidul a-ceto- Acidul a-ceto-

izovalerianic -metilvalerianic izocapronic
i I
D e c a r b o x i l a r e oxidativ
Metionina Succinil-CoA
Figura 6.18. Catabolismul valinei, leucinei i izoleucinei
Leucin, printr-o secven mult mai complicat de reacii, se va scinda n acetil-CoA

i acetoacetat. n procesul de degradare se includ: vit. B6, B p B2, PP, acidul lipoic i
biotina.
Sunt cunoscute unele tulburri metabolice n catabolismul acestor aminoacizi:
A. Mai bine studiat este leucinoza afeciunea urinei cu miros de sirop de arar.
n snge i urin se majoreaz cantitatea acestor aminoacizi, ct i a a-cetoacizilor respectivi
(urina capt un miros specific). Pot fi depistai n urin i a-hidroxiacizii corespunztori.
Simptomele specifice apar la sfiritul primei sptmni dup natere: vom, dificulti
n alimentarea copilului, letargie, manifestri neurologice acute sau cronice. Diagnoza se
confirm la o analiz enzimatic. Fr tratamentcazi letalis n primul an de via.
Baza biochimic const n absena sau insuficiena activitii decarboxilazei a -
cetoacizilor ce catalizeaz transformrile lor n tioesterii acil-CoA, cu eliminarea COr
Copiii sunt alimentai cu amestec de aminoacizi ce nu conin leucin, valin i izoleucin.
Dup normalizarea nivelului respectiv n snge, se poate de inclus n diet n cantiti
minime pentru asigurarea necesitii stricte.
B. Hipervalinemia afeciune metabolic ce se caracterizeaz prin majorarea
coninutului valinei n snge, determinat de dereglrile transaminrii valinei, cu formarea
acidului a-ceto-izovalerianic. Dereglri n transaminarea leucinei i izoleucinei nu se
depisteaz.
C. Cetonuria intermitent e o variant a maladiei urinei cu miros de arar i e
cauzat de tulburri mai minore n funcia decarboxilazei a-cetoacizilor respectivi. Bolnavii
posed o capacitate minim de catabolizare a valinei, leucinei i izoleucinei. Simptome
clinice caracteristice afeciunii respective se manifest mai trziu i, de obicei, episodic.
Pronosticul e favorabil la o diet corijat.
D. Acidemia izovalerianic. Simptomele maladiei sunt mirosul de brnz (cacaval)
n aerul expirat i n lichidele organismului, vom, acidoz i com. Ultima e consecina
utilizrii proteinelor n cantiti majore sau a prezenei unei maladii infecioase. Se observ
episodic i fenomene de retard mintal. Cauza maladiei e insuficiena izovaleril-CoA
dehidrogenazei. Izovaleril-CoA acumulat se hidrolizeaz i izovaleriatul format se elimin
prin urin i sudoare.
Metabolizarea fenilalaninei(J7) i tirozinei(18)
Fenilalanina, fiind un aminoacid indispensabil pentru om, i nu tirozina, care se
sintetizeaz din primul, are o implicare metabolic n pigmeni i hormoni, i mai ales n
originea unor maladii congenitale, cauzate de tulburrile de catabolism.
Catabolismul normal al fenilalaninei i tirozinei dccurge n modul cum e artat n
fig.6.19.
Fenilalanina se hidroxileaz n tirozin, reacie ce decurge ireversibil i care explic
necesitile fenilalaninei, care pot fi atenuate prin administrare de tirozin. n reacie
particip o molecul de oxigen: un atom se ncorporeaz n substrat, altul este redus la
ap, cu participarea tetrahidrobiopterina (THBP), care se oxigeneaz la DHBP
(dihidrobiopterina, redus la iniial prin intermediul lui NADPH). Tirozina pierde, n
continuare, grupa sa aminic prin transaminare i formeaz acidul p-hidroxifenil piruvic,
care este oxidat n guinol. Dup transpoziie, o decarboxilare oxidativ va conduce la
alcapton (acidul homogentizinic), care normal este catabolizat (prin intermediul a mai
COOH F enilcetonurie
I 02 CH2 CH COOH
-CH2CH V
NH 2 / FenilalaniP
nh2
ulalaml-\ HO
tvwiloTO '
T H B P hidroxilaza Tirozina
Fenilalanina
DHBP
, Reductaza
I - a-ceto g lu tarat
J p Amin - ...... Tirozinem ie
" V transferaza . .
N ADP+ N A DPH +H +
4 (tv
G lutam at
HOOC COOH
Oxidaz
Guinol
(Cub HCM \ / C
H_i:
A cid hidroxifenil piruvic
2
o
Transpoziie
guinolic
Dioxigenaza
(izomeraie specific)
Vit.C, Cu (II)
O , OH

CH2 COOH f CH2COOH
A cid 2,5-dihidroxifenil I Tirozinem ie A cid hom ogentizinic
piruvic O neonatal (tip III) 0 2 (oxidare, hidroxilare)
A lcaptonurie fcL Dioxigenaza (Fe (II))
4 (Glutation)
1 X H+
HOOC - CH = CH CH2 CH2COOH

I I
o o
A cid fum arilacetoacetic
T iro zin em ie......- %Fumarilaceto acetaza
(tipl)
C H 3 C H COOH HOOC c h = c h - c o o h
II A cid fumrie
Q A cetoacetat
Succinil-CoA
' 13-cetoacetii-CoA transferaza
4 Succinat
A cetoacetil-C oA
F igura 6.19. Degradarea fenilalaninei i tirozinei

multor reacii) parial n acid fumrie, care, ncorporndu-se n ciclul Krebs, va favoriza
sinteza glucozei prin gluconeogenez (de aceea ambii aminoacizi posed caracter gluco-
formator), i parial n acid acetoacetic (ce le confer caracter ceto-formator).
Tulburrile de catabolism ale fenilalaninei i tirozinei
Tulburrile grave n catabolismul tirozinei pot duce la tirozinemie, tirozinurie i
fenolacidurie.
A. Tirozinemia tip I (tirozinoza) enzimele defectate sunt fumarilaceto acetaza i
maleilaceto acetaza, avnd n consecin acumularea metaboliilor respectivi. Forma acut
e caracteristic pentru vrsta fraged i este nsoit de vom, diaree, deficiene de cretere.
Fr tratament, duce la exitus n vrst de 6-8 luni, cauzat de insuficiena ficatului.
Forma cronic se caracterizeaz prin aceleai simptome, dar mai puin pronunate i
va induce moartea la vrsta de 10 ani. Se constat cantiti majore de tirozin n snge (6-
12 mg/l OOmL). Sunt depistate i majorri ale cantitii de ali aminoacizi, ndeosebi a
metioninei. Dieta cu cantiti minore de tirozin, fenilalanin i metionin amelioreaz
evoluia maladiei.
NFb o
/^ N H 3 o O'
o o
Tirozin decarboxilaza Tirozin transaminaza
Ll*---
)H
Tiram ina
,
Y
L -tirozin a
NADt A c e til-C o A
'S / 02+ H 20 NADtl
/
Dehidrogenaza . \ Tiramin oxidaza Dehidrogenaza
/ 4 +
N H ^ f H 20 2
C oA SH
NA DH +H +
NA DH +H + "
0
O
CH,
o' HN
O
OH H
p -h id ro x ifc n il acctat p -h id ro x ifc n il lactat
H
N -a c etil-L -tir o zin a
F igura 6.20. Cataboliii alternativi ai tirozinei
B. Tirozinemia tip II (sindromul Rihnera-Hanharta) enzima defectat e tirozin
transaminaza ficatului. Se depisteaz cantiti majore de tirozin n snge (4-5 mg/l OOmL),
afeciuni caracteristice ochiului i pielei, retard mintal moderat, dereglarea coordonrii
micrilor fine. Filtrarea i reabsorbia tirozinei nu sunt dereglate. Printre metaboliii excretai
se depisteaz p-hidroxifenil piruvat-lactat, -acetat, N-acetil tirozina i tiramina.(fig.6.20).
C. Tirozinemia neonatal e cauzat de insuficiena enzimei p-hidroxifenil piruvat
hidroxilazei. Sunt depistate n snge valori mari ale tirozinei i fenilalaninei, n urin -
tirozina, tiramina, N-acetil tirozina, p-hidroxifenil acetat. n tratamentdiet cu reducere
de proteine.
Deficiena sistemului enzimatic de hidroxilare a Phe determin apariia unei maladii
metabolice, fenilcetonuria clasic (tip I). Sunt descrise i alte patologii ca: insuficiena
dihidrobiopterin reductazei (tip II i III) i dereglri ale biosintezei dihidrobiopterinei
(tip IV i V) toate au n consecin blocarea transformrii fenilalaninei n tirozin.
Aproximativ 1,5% din totalul deficienelor mintale revin acestei tulburri. Blocarea
cii de transformare a Phe n tirozin conduce Ia acumularea Phe, care, prin transaminare,
genereaz acid fenil piruvic. Acest acid, la rndul su, prin decarboxilarea oxidativ
formeaz acidul fenil acetic, iar prin dehidrogenarefenil lactic, care se elimin prin
urin.
N
NH3
F enilalanina
a-cetoglu tarat
G lutam at
. . 0
F enil piruvat
NAD F N A D H + H+
Fenil acetat F enil lactat
F enil acetil glutam ina

Fenil acetatul n ficat este conjugat cu glutamina i se elimin prin urin n form de
fenilacetil glutamin.
Prezena fenil piruvatului va fi determinat cu FeCl3, rezultnd o culoare galben-
verzuie, dar pentru confirmarea diagnosticului e necesar depistarea fenilalaninei n plasma
sanguin. Copiii sunt alimentai prin utilizarea unei diete cu coninut minim de fenilalanin.
Dup vrsta de 6 ani, dieta poate fi modificat, fiindc la acest moment concentraia
fenilalaninei i a derivailor ei nu mai posed efect negativ asupra creierului. Pielea devine
pal, prul - nlbit, se deregleaz formarea melaninei, de fa fiind demielinizarea
nervilor. E inhibal i hidroxilarea triptofanului, cu sinteza serotoninei. Urmeaz etapa
important de despicare a nucleului aromatic, catalizat de dioxigenaza acidului
homogentizic. n lipsa procesului, acidul dat se acumuleaz n esuturi. Urina eliminat
se nnegrete la aer, dat fiind oxidarea acidului homogentizinic. Tulburarea metabolic
descris nc n secolul XVIII e denumit alcaptonuriede la alcapton denumire
atribuit substanei ce cauzeaz nnegrirea urinei. Cu toate acestea, bolnavii supravieu
iesc cu bine. Dup 40 de ani, acumularea acidului homogentizinic n esuturile conjunctive
provoac dureri artritice.
a C H 2 C H - C O O H C H 2 C H - C O O H
I
NH2 nh 2
I
C H 2 C H - C O O H
nh 2
0 H 2N
F enilalanin-3,4-guinona 3,4-dihidroxifenilalanina
(dopaguinona) (D O P A )
O 1
-C H 2
I
.C H -C O O H
Indol-5,6-guinona
2 C arboxi-2,3-dihidroindol-
La oameni i animale seorbutice se nregistreaz o eliminare de acid p-hidroxifenil
piruvic i de acid p-hidroxifenil lactic. Administrarea de vit.C restabilete catabolismul
normal. Are loc, n acest caz, o inactivare a oxidazei i e verosimil c acidul ascorbic
exercit un efect de protecie graie proprietilor sale reductoare i evit inactivarea
enzimei prin oxidare.
O alt maladie metabolic e albinismul, cauzat de deficiena echipamentului en
zimatic n organism necesar transformrii tirozinei n melanin. Urmrile prul i
pielea se decoloreaz.
Blocajul poate avea loc n melanocite, unde se efectueaz melanogenezadeficiena
enzimei ce catalizeaz hidroxilarea tirozinei n DOPA sau o deficien la nivelurile
posterioare dup formarea Dopei, mai ales la nivelul polimerizrii (fig.6.21).
Fenilalanina i tirozina, n aceeai msur, sunt precursorii noradrenalinei i
adrenalinei. Tirozina este utilizat n sinteza hormonilor tiroidieni. Suita de reacii va fi
redat n capitolele respective.
M etabolismul triptofanului (19)
Triptofanul e unul din primii aminoacizi considerat esenial. Izotopul radioactiv al
triptofanului se depisteaz numai n proteine, dar o cantitate anumit se nregistreaz i n
urin, n componena diferitor metabolii.
Triptofanul are un catabolism compus n esuturile animale. Calea major de degra
dare conduce la acetoacetil-CoA i acetil-CoA. Triptofan pirolaza catalizeaz deschiderea
inelului indol i ncadrarea a doi atomi de oxigen n fonnarea N-formil-kinureninei, fiind o
metalo-protein ce conine fiero-porfirin. Sinteza enzimei are Ioc n ficat i e indus de
triptofan i adrenocorticosteroizi. O cot major de enzim sintetizat se afl n form
latent i necesit o activare. Triptofanul stabilizeaz oxigenaza fa de enzimele proteolitice.
Enzima este inhibat i de derivaii acidului nicotinic, ct i de NADPH (fig.6.22).
Eliminarea hidrolitic a grupei formil e catalizat de kinurenin formilaza, cu formarea
L-kinureninei. Hidroxilarea ulterioar are loc cu participarea oxigenului molecular i-i
asigurat de un sistem de reacii NADPH dependente. Att kinurenina, ct i hidroxi
kinurenina este transformat n hidroxi antranilat, cu participarea kinureninazei, drept
cocnzim servind vit.B(. Insuficiena vitaminei deregleaz catabolismul acestor compui,
formnd n esuturile cxtrahepatice xanturenatul, ce va aprea n urin. Surplusul de
triptofan favorizeaz excreia lui cu urina, de altfel, i a compuilor acidului nicotinic (N-
metilnicotinamida). Vit.B6deregleaz sinteza nucleotidelor pirimidinice (NAD+i NADP).
OH OH
3-hidroxi kinurenina Xanturenat
-CH2-CH-COOH
N H 2 / Triptofan
0 2 pirolaza NH-CHO

Triptofan
Formil kinurenina
T H B P -V NADP+
O,2X / \
/ A Hidroxilaz /
\ L' specific
I Rcductaz f\H ,0
NA DPH + H+ ^HCOOH
H ,O ^ V .
D H BP
5-hidroxi triptofan COOH

Decarboxilaza
( Vit.B6 ) C-CH2 CH
c , nh2
NH2
K inurenina
Serotonina
(creier, intestin,
0 2+ N A D P H + H
plcuele sanguine) Hidroxilaza 'V it.B 6
n a d p ++ h 2o
h 2c l
FAD
02^
o COOH
'F A D H ,
I I
NH, C-CH2-CH
NH2
CH2COOH
OH
H idroxi kinurenina
A cid 5-hidroxi indol-acetic ,s H2

Kinureninaza f ' Vit.B^
(conjugat cu su lf i glucoronil, (Glutation) - V
este excretat prin urin) A lanina
COOII
C 0 2 + 2PPi + G lutam ina + PRPP
+ A D P + G lutam at + 2ATP NH2
N A D + (vit. PP) II
A cetoacetil-CoA
OH
A cid hidroxi antranilic
Triptofan - pirolaza e o dioxigenaz compus din 4 subuniti cu aceeai mas
molecular. Funcionarea adecvat necesit Fe'14', Cu++. Corticosteroizii amplific
activitatea, stimulnd sinteza mRNA specific. Insuficien enzimei TDOG provoac
maladia Hartnup, ce se caracterizeaz prin prezena unui retard mintal, ataxie cerebral,
n urin, se depisteaz cantiti majore de triptofan i indol-acetat. Foarte puin Trp se
transform n formil kinurenin. Se amplific excreia excesiv a compuilor indolici. n
colon, triptofanul neabsorbit, sub influena enzimelor bacteriene, d natere acidului indol-
acetic, fiind absorbit i excretat. E posibil substituirea parial n raia alimentar a vit.
PP prin triptofan (60 mg.Trp 1 mg NAD+). Acidul hidroxi antranilic fiind oxidat,
dezaminat, apoi redus i decarboxilat, este transformat n acetoacetil-CoA ( fig. 6.22).
M etabolismul lizinei (20)
Lizina prezint unele particulariti n catabolismul aminoacizilor: n prima faz nu are
loc eliminarea a-aminogrupei prin transaminare.
NH3 COO COO

I I I
(CH2)4 + c=0 (CH2)2
I
CHNH3 (CH2)2 C -C O O '
11+
COO COO NH NH3
Lizina a - cetoglutarat
CH2- ( C H 2)3- C H - COO'
LNADH+H
^<NAD+
COO'
I COO'
(C H 2)2
(CH2)2
C H -C O O ' (2 )
C H -C O O '
1+ + 1+
NH NH3 NADH +H + n .^ + NH3
-( 2) - C H - C O O - C H j- (CH2)3- C H - C O O -
l_j20 Saccharopina
L-glutamat
NAD+ N A D H + -
O H C -(C H 2)3- C H - C O O ' OOC (CH2)3CHCOO'
I+ 1+
L -a - aminoadipat- NH3 H 20 NH3
- 5 -scmiaklchida L -a - aminoadipatContinuarepagJ97
a - cetoglutarat
t-B60
VitDy N A D H + H+
Glutamat
H,0 n a d _ C H 3-C -C H 2-C -S C 0A
COO' COO" , U SH C oA
Y
(2) (2) T
I I 2 C H 3 -C O ^ S C o A
c=o
H SCoA C 0 2
COO' SCoA
a - cetoadipat Glutaril-CoA
Figura 6.23. Catabolismul Uzinei
n esuturile vertebratelor nici a-, nici -aminogrupe ale L-lizinei nu particip n aa

tip de modificri. S-a constatat c lizina se condenseaz cu a-cetoglutaratul, cu eliberarea
unei molecule de ap, formnd un compus Schiff. Apoi, o dehidrogenaz l reduce la
saccharopin, iar altal oxideaz. Compusul format este hidrolitic scindat n L-glutamat
i a-aminoadipat-y-semialdehid. Efectul sumar e echivalent cu eliminarea e-aminogrupei
lizinei prin transaminare.
n continuare, oc-aminoadipatul este supus transaminrii cu a-cetoglutarat,
transformndu-se n a-cetoadipat, apoi are loc o decarboxilare oxidativ, cu generarea
glutaril-CoA (vezi fig.6.23).
Sunt descrise dou dereglri metabolice n catabolismul lizinei i ambele sunt consecine
ale defectelor enzimelor ce realizeaz catabolismul pn la acetoacetil-CoA. n ambele
cazuri este blocat transfonnarea L-lizinei i a-cetoglutaratului n saccharopin.
n hiperlizinemia periodic cu hiperamoniemie (1) folosirea unei cantiti normale
de protein duce la majorarea lizinei n esuturi. Concomitent, apare i hiperamoniemia n
consecina inhibrii competitive a arginazei ficatului de lizin. Micorarea coninutului de
lizin n alimente i majorarea utilizrii de lichid anihileaz manifestrile clinice. ncrcarea
cu lizin are consecine imprevizibile.
Hiperlizinemia persistent fr hiperamoniemie (2) e cauzat de dereglrile
catabolizrii saccharopinei n L-glutamat i a-aminoadipat-Y-semialdehid. Tabloul clinic
i biochimic variaz mult.
Aminoacizii sunt utilizai i pentru sinteza compuilor ce ndeplinesc diferite
funcii metabolice: aminele, oligopeptidele (glutation, carnozina -alanil histidina,
anserina -alanil-N-metil-histidina, carnitina), sintezapurinelor, pirimidinelor,
porfirinelor.
Sinteza creatinei
Acest proces se caracterizeaz prin fenomenul de pereamidinare i peremetilare
(fig. 6.24).
Enzima transamidinaza transfer gruparea guanidinic. Transferul grupelor metil e
catalizat de metiltransferaze. Cea mai mare parte de creatin se afl n muchii
scheletali. n condiiile surplusului de ATP este fosforilat lafosfocreatin. Fosfocreati-
h 2n - c = nh
I
NH
CH2 C H 2 C O O H
2 I
NH2
I
2 Glicina
I
h 2n C H -C O O H > Amidinotransfcraza
Arginina
Omitina
H2N - -N H - CH9-COOH
I
NH Acidul guanidinacetic
S-adenozil metionina
S-adenozil homocisteina
CH3
I
h 2n - c - n - c h 2- c o o h
I
NH Creatina
C = NH
I
N -C H 3 H N = C N H P = 0
NH i I I
CH2 H 3 C -N OH
I
CO
Pi 2-
Creatinina Creatinfosfat
na cedeaz cu uurin ADP-ului restul de fosforil, rezultnd ATP, singur transfonnn-
du-se n creatin.
n cazul solicitrii prin conversia fosfocreatinei n creatin, se obine momentan o
anumit cantitate de ATP, pn la intrarea n funcie a glicolizei, cu fosforilarea oxidativ.
Din creatin, prin anhidrizare, se obine creatinina, form de excreie a acestui compus.
Cantitatea de creatinin depinde de masa muscular total. E un component azotat al
sngelui, cel mai puin variabil (0,7-1,2 mg/l OOmL). Cantitatea de creatinin excretat n
24 ore pentru 1kg greutate corporal este constant la acelai individ i se numete
coeficient de creatinin (20-26 mg brbai i 14-22 mg femei).
Deficitul genetic al creatinei este cauzat de mutaii la nivelul genelor implicate n
biosinteza sau transportul creatinei. Afeciunile se caracterizeaz prin retard neuromotor
i leziuni neurologice, cauzate de acumularea guanidino-acetatului. Administrarea de
creatin amelioreaz tabloul clinic.
Biosinteza aminoacizilor
Cile de biosintez sunt foarte diverse i toate posed o proprietate comun
primordial scheletul carbonic al aminoacizilor i are originea din produsele
intermediare ale glicolizei, ciclului pentozo-fosfailor i ciclului Krebs. Situaia se
simplific i prin faptul c aminoacizii sunt devizai n ase familii biosintetice. Se tie
c organismul uman nu poate sintetiza opt aminoacizi (nutriional indispensabili), iar ali
doi i produce n cantiti insuficiente (semieseniali). Aspectele generale se refer la:
a) sursele atomilor de carbon; b) forma i modul de interncorporare a azotului.
Aminoacizii neeseniali se sintetizeaz prin reacii foarte simple. Sursa sigur de
azot pentru biosinteza aminoacizilor o reprezint amoniacul, la care gruprile amino
se realizeaz prin intermediul reaciilor catalizate de glutamat dehidrogenaz i
aminotransferaze. Deplasarea echilibrului reaciilor catalizate de aceste enzime n sens
catabolic sau anabolic se face att prin concentraiile compuilor, ct i prin aciunea
unor mecanisme de reglaj extrem de eficiente. Exemplu: NAD+ este utilizat prioritar la
eliberarea NH3, n timp ce NADPH la fixarea acestuia.
Din acidul glutamic, prin sistemul de reacii de transaminare, gruparea NH, se transfer
pe alte numeroase schelete de carbon.
Acidul glutamic + NAD' (NADPf) + H ,0 Acidul a-cetoglutaric + NH3+NADH
(NADPH) + H-
Enzima e glutamat dehidrogenaza.
1. Alanina ct i ali aminoacizi sunt sintetizai la o etap:
Piruvat + Glutamat Alanina + a-cetoglutarat
2. Oxaloacetat + Glutamat Aspartat + a-cetoglutarat
3. Aspartat + NH4+ + ATP H.?i^ Asparagina + AMP + PPi + H+
La mamifere donator de NH4+este glutamina.
4. Fenilalanina + O, + THBP Tirozina + H20 + DHBP
Enzima este fenilalanin hidroxilaza, e o monooxigenaz.
5.6. Glutamat i glutamina se sintetizeaz prin a-cetoglutarat i glutamin sintetaz
(GS):
a-cetoglutarat +NH3+NADPH (NADH) + H+ ^ Glutamat+ NADP"(NAD+) + H20
Glutamat + NH3 + ATP Glutamina + H 2O + ADP + P 1
7. Glutamatul e precursor al prolinei o cale, n sens invers, a celei degradative,
cu foarte mici devieri: acionnd cu ATP, formeaz n acil-fosfat, o anhidrid mixt, ce se
reduce la aldehid - -semialdehida acidului glutamic, care se ciclizeaz, cu formarea
acidului pirolin-A'-S-carboxilic i ap, care ulterior trece n pralin.
COO' COO'
I + NADH+ H+ NAD*
NH3 HCNH3
I J- I - + /
(CH2)2 (CH2)2 N I
ATP ADP + Pi H2 H COO
coo ' - p irolin -
G lutam at r 5 - c arb oxilat
H
Y-semialdehida NADPH+
acidului glutam ic
: e3
NADP+> ^
Prolina
N
H COOH
8. Serina se sintetizeaz din 3-fosfoglicerat, produs intermediar al glicolizei.
OH O
N AD H + H +
II
O O C-CH -CH 2 O O C -C -C H 2 -
I 2-
OPO3 Fosfogliccrat 3 - fosfohidroxi-piruvat
3-fosfogliccrat dehidrogenaza
^ Glutamat
\ Fosfoscrin-
.' transaminaza
Pi ^ a-cetoglutarat
NH2 OH H 70 nh2
I I
HO O C-CHCH2 Fosfataza
HOOC -C H -C H 2-
Serina 3 - fosfoserina
9-10. Serina este un precursor al glicinei, cisteinei (fig. 6.26)
Serina + FH4(tetrahidrofolat) Glicina + CH,2 - FH4
4
+ H 2,0
Enzima - serin-hidrooximetil transferaz cu grupa prostetic vit.B6
Glicina poate fi sintetizat i n urma reaciei:
C O2,+ NH4+
4
+ -C H ,2 -F H 44 + NADH ^ Glicina + FH.4 + NAD+
Reacia este catalizat de glicin sintetaza.
Fragmentele monocarbonice. Un rol deosebit n metabolism l are tetrahidrofolatul
(FH4).
H
N N
h 2n - t ^ COO'
5 1 10 / \
CH2- f N H V c t N - C - CH2- C H 2-C O O '
H 'N I \ ---------/ I
H tl H
O
Pteridina p-am inobenzoat G lutamat
FH 4 (Tetrahidrofolat)
Molecula e compus din trei uniti structurale: pteridina, p-aminobenzoatul i

glutamatul. Mamiferele nu sunt apte s sintetizeze inelul pteridinei. l acumuleaz din
raia alimentar sau din activitatea microorganismelor florei intestinale. Coenzim e
transferator al fragmentelor monocarbonice (formimino, metil). Fragmentele sunt
interdependente din punct de vedere metabolic, deoarece se modific pe cale
enzimatic, fiind catalizate de ctre o hidroximetil dehidrogenaz n prezena NADP+
( C H 3, = C H 2> C H = , - C H O , - C H = N H )
Formimin-glutamatul se formeaz n catabolismul histidinei, apoi grupa CHNH
este transferat pe FH4. Metabolismul fragmentelor monocarbonice i utilizarea lor este
redat mai jos (fig. 6.25).
Potenialul de transfer al CH3la FH4nu e semnificativ. De aceea, n biosintez,
donator al grupelor CH3 servete S-adenozil metionina, ce se sintetizeaz din
metionin i ATP. Gruparea CH3al metioninei se activeaz sub influena atomului de S
cu sarcina pozitiv, ce i confer o capacitate de reactivitate mai pronunat.
Transferul CH3 pe acceptor induce formarea S-adenozil homocisteinei, care se
hidrolizeaz n homocistein i adenozin (fig.6.26).
Sinteza cisteinei (10) necesit homocistein ca produs intermediar. Aceasta,
condensndu-se cu serina, formeaz cistationina. Cistationin sintetaza este o liaz, avnd
drept coenzim piridoxalfosfatul (fig. 6.26).
Metionina poate fi regenerat prin transferul grupei CH3de la CH3FH,. Reacia
e catalizat de homocisteinmetil transferaz (HCT), intermediar fiind metil-cobalamida,
coenzim a HCT. Constituie a 2-a enzim la mamifere, ce necesit vit. B |2.
Tetrahidrofolat (FH4)
s ATP
Formiat
N 10 - form il-F m sintetaza
NH V adp + Pi
io
, ^ - c h 2- n - Purina -C2
I L
H O H
N - formil-FH4
Ciclohidrolaza
Histidina
+FH4 h 2o
10 NH
N, N - metenil-
-FH sintetaza NHj
4
Purina - Ca
10 Ciclodeaminaza
I N
. CH
N, N - metenil-FH4
NADPH+H
( N5, n '- metenil-FH reductaza
G licin a V NADP+
Serina
F orm aldehida N-formimino-FH4
+ FH4
NH
Hidroximetil-
transferaza
5
'N 10
T im id in a
I / N-
5 ,0 C H 2
N , N - m e tilen -F H 4
/ N A D H + H+
u # m etilen -F H . red u ctaza

4
NAD+
M etio n in a
5 CH 3
N -m e til-F H 4
Mg;
-^ L - m e t i o n i n a
J
/ ''U S-adenozil metionin sintetaza

2 (Metionin adenozil transferaza)
CH NH3
S-adenozil m etionina
COO'
nh2 - A cceptorii de C H 3
Metiltransferaza
N
N Produse m etilate
\N
7
-N
o. CH2 s
!
2
2
OH OH !
S-adenozil hom ocisteina
C H --N H 3
COO'
2
Hidrolaza '
N ^ C H 3 A denozina
M etionin \
sintaza ) H S - C H 2- C H 2- C H - C O O
L -hom ocisteina
1+
NH3
fh 4 4
M etionina L-serina
Cistationin sintaza
PLP
NH3 H 20 NH,
'o o c CHCH2c h 2 s 2- - '

C istationina
H 20
NAD+ NADH+H+
PLP
HS
a-ceto b u tirat P ro p io n il-S C o A
CH2 CH COO' H SC oA ,
L - cistein
a -eetobutirat
dehidrogenaza
COO' COO"
I + I +
HCNH3 N-metil-FH 4- HCNH3
(2)2 Vit.B 12 (CH2)2
SH SCH3
H om ocistein M etionina
Enzimele cobalamidice catalizeaz reacii de 2 tipuri: de regrupare a atomilor i
de metilare. In mutaz, drept coenzim servete 5'-dezoxiadenozil cobalamina. Atomul
de carbon ce doneaz hidrogenul su temporar e racordat la n ;2 atomul de
are 6 legturi (4 cu sistemul corinic). In poziia 5cu un derivat al dimetilbenzimidazolului.
n poziia 6 - cu grupele OH, dezoxiadenozil, C N ~ , CH3etc.
ATPr- P i-i-PP i
B 12(Co3+) B p(Co2+) B p (Co+) v 5 -dezoxiadenozil cobalam ina
E flavoprotein reductaza; E2 reductaza - NADP dependent; E3 transferaza.
Reglarea sintezei aminoacizilor. Viteza de sintez a aminoacizilor e dependent,
n primul rnd de necesitile de biosintez, de cantitatea enzimelor i de activitatea lor
fermentativ. Etapa reglatoare decisiv e prima reacie ireversibil. Produsul final de
regul inhib enzima ce catalizeaz aceast reacie. Reglator-cheie al mecanismului ce
dirijeaz torentul de azot e glutamin sintetaza (GS). Grupa amidic a glutaminei ofer
o surs de azot n biosinteza unor compui de vaz (carbamoil fosfatul, triptofanul,
histidin, GTP, AMP).
GS cumulativ este stopat de produse rezultante i de alanin, glicin reglare
alosteric.(fig.6.27)
Glucozamina- 6-fosfat
I
Histidin
A lanina
Glicina i CTP
1 i I
1 I I
ADP+P \
1r +' VI
Glutamin
sintetaza <8> <8>
Carbam oil fosfat-
F igura 6.27. Reglarea alosteric a glutamin sintetazei
Ei i este proprie reglarea prin modificri covalente, adiionnd AMP la -OH a tirozinei
din fiecare subunitate (n total 12).
Componentul adenilat este mai sensibil Ia inhibare dect cel neadenilat. Restul AMP
este detaat prin intermediul unei fosforilaze reacie catalizat de aceeai enzim
adenilat transferaza. n ce const fenomenul de adiionare sau cedare a AMP? Aceast
specificitate e controlat de o protein reglatoare (P) ce exist n dou forme Pa i
Pd.P acu AT (adenilat transferaza) acest complex adiioneaz AMP Ia GS, deter-
minnd activitatea ei, pe cnd complexul Pd-AT detaeaz AMP. Pa, la rndul ei, este
transformat n Pd prin adiionarea UMP, reacie catalizat de uridilat transferaz,
stimulat de ATP i a-cetoglutarat i frinat de glutamin. Restul UMP, adiionat la Pd,
este ndeprtat prin hidroliza fermentativ (fig. 6.28).
GSmtetaza deademlat Adenilat-GS

(-AMP) activ (+AMP)puih activ
AT-Pd
2PPi
ridilat transfera
a- cetoglutarat P d ( 2U M P )
Glutamina
Hidroliza
2H20
F igu ra 6.28. Reglarea covalent a activitii glutamin sinteiazei
Reglarea acestei enzime-cheie e supus mecanismului de cascad: pentru amplifica

rea semnalului i majorarea esenial a capacitii de control alosteric ce permite de a
regla auxiliar torentul de azot n celul. Chiar i o astfel de molecul ca glutamin
sintetaza, cu sensibilitatea i posibilitatea ei nu poate recepta i prelucra surplusul de
semnale.
Metabolismul nucleotidelor
Digestia i absorbia nucleotidelor
Acizii nucleici, RNA i DNA nutriionali sunt
supui modificrilor n tractul gastro-intestinal.
Ribonucleazele i dezoxiribo-nucleazele DNA
Cavitatea '^ R N A
se c re ta te de p an creas v or scin d a bucal
polinucleotidele pn la oligonucleotide. D e n a tu r a r e a
Fosfodiesterazele pancreatice vor conduce la D N A i RNA
form area 3'- i 5 '-m o n o n u cleo tid e. n I

D e n a tu ra r ea
continuare, nucleotidazele vor hidroliza acizilor ijuclcici
fosfatul, genernd nucleozide. Ultimele pot fi Nucjcazc
absorbite n celulele intestinale sau scindate de an c re a s 4-
nucleozidaze la bazele respective. Purinele i * w Oligonucleotide
pirimidinele alimentare nu sunt utilizate n sinteza 1
Fosfodiestcraze
acizilor nucleici tisulari. Purinele n celulele
mucoasei intestinale sunt transformate n acid Circulaia
M ononucleotide
sanguin
uric, eliminat apoi din circulaie prin urin. n I
N uclcotidazc
metabolizarea bazelor purinice e implicat i
flo ra in te stin a l . P irim id in e le , riboza Nucleozide
(dezoxiriboza) i o parte din purine ptrund n
NuclJozidazc
circulaia sanguin (fig.6.29).
Metabolismul general al organismului ezoxOriboza'*' |
Pirimidine
trebuie s asigure existena unui fond, elucidnd Purine
cantitatea i varietatea de nucleotide necesare
pentru participarea la procesele eseniale. Acest
fond se realizeaz prin: sinteza de novo,
interconversia nucleotidelor, conversia parial
F ig u r a 6 .2 9 . D igestia i absorbia
a ribonucleotidelor n dezoxiribonucleotide.
nucleotidelor
B io sin teza de novo a n u cleo tid elo r
purinice
Inelul purinic are ca precursori mai multe substane (fig 6.30).
Utilizarea de precursori, marcai cu 15N i 14C a stabilit originea fiecrui atom din
acest nucleu. Prima reacie const
Glicina n activarea ribozil-5-fosfatului cu
ATP catalizat de PRPP sinletaz.
Produsul format 5-PR - a - 1-PPi
Aspartat este un compus-cheie n metabolis
_ N5-N10-
/ metenil-FH4 mul nucleotidelor, fiind precursor i
N la sinteza triptofanului i histidinei
(fig. 6.31).
/
Etapa-cheie n sintez decurge n
Glutamina
stadiul urm tor, finaliznd cu
formarea 5-fosforibozil-aminei.

II
II - - 2
- 2
I

( ) 5 -fo sfo rib o zil-l -p iro fo sfat (P R P P )
R ibozo-5-fosfat Nucleozide purinice
F igura 6.31. Sinteza PRPP i reglarea enzimei
Enzima, amidofosforibozil-transferaza este al 2-lea punct de control al secvenei. Fora

motrice a procesului este hidroliza pirofosfatului. Glutamin amidotransferaza poate fi
inhibat de analogii structurali ai glutaminei ca: azaserina i acivicina, ultima este un
agent chemoterapeutic n tratamentul cancerului (fig.6.32).
Urmeaz condensarea glicinei (ATP), metenil-FH4, glutaminei (ATP), ATP, C 0 2,
aspartatul (ATP), fonnil-FH4, cu sinteza acidului inozinic sau inozinmonofosfat.
Sinteza necesit 6P, ioni de Mg2+, K+, secvena este exergonic i ireversibil (fig.6.32).

OCH2o NH,
AMP
ATP >
OH sC / o -
PRPP sintetaza
OH OH OH OH ^ OH OH
O
R ibozo-5-fosfat PRPP am idotransferaza 5 -fosfo--
S D -riboxilam ina
AM P z' ATp'P I / G ' y
< G M P G licinam id ribonucleotid
tldr r r T )
I IM P sintetaza i/f ' ^'
G in ADP+Pl ^
(^H2 N H CHO c h 2 n h 2
0 = C NH 0 = c NH
- O C H 2o FH4 5 10
V N N-m etenil- FH 4
______
^ Glicinam
g i* id ribonucleotid
H Q transform ilaza
I OH OH
OH OH
F orm ilglicinam id G licinam id
ribonucleotid r ib o n u c le o tid
ATP Gin
/'F o rm ilg licin am id
0 L ribonucleotid
am idotranferaza
ADP+Pi Glu continuare in pag. urmtoare
OOC\
c h 2- n h 4 HC-N, C-N<
4
I 4 CH >H
H N = C -N H CH 0 h 2n - c - i/ H 2N - C - N '
-(X O . (?) O C H t.0 .

ATP -ADP+Pi
4 'JL 5-amiclimidazol j
5-amidoimidazol st r at t ribonucleotid
OH OH ribonucleotid OH OH OH OH
Formilglicinarnidin sinteta2a 5-amidoimidazol 5-arruno-4-carboxiamino-
ribonucleotid ribonucleotid imidazol ribonucleotid
Asp-
P N-succinil-5-aminoimidazDl-4- ,
carboxiamid ribonucleotid
^8
ATP
A C -N
sintetaza " X ADP+Pi
H 2N
%
JZH H O O C -C H 2
h 2n - c - n -o
/
H O O C -C H -N H C -N .
- 0
CH
/
N-succinil-5-aminoimidazol-4- H 2N - C - N
wOH OH
5-arninoimidazol-4-
carboxiamid jibonucleotid
liaza , -4
Fumarat
T
carboxiarrrid ribonucleotid
10 V-r
N- formil-FHi OH OH
N-succinil-5-ammoirnidazol-4-
r / 5-aminoirnidazol-4-
l \ catboxiamid ribonucleotid
transform ita
carboxiamid ribonucleotid
FH,
? P
C -N /C \
H ?N
I ) ch HN C - -N .
OHC^ C -N CH
NH Inozin-5- monofosfat
sintaza HV C N/
o
H20
A zaserina
OH OH
NH,
N-forrnilaminoimidazol- 4- OH OH --<>
carboxiamid ribonucleotid Inozin'5' -monofosfat f " l H
(IMP) / CH>
A ctivina
Procesul de sintez este modificat de aciunea unor preparate medicamentoase cum sunt
analogii aciduluip-aminobenzoic (APAB) i aciduluifolie. Sulfonamidele, analogi dup
structur cu APAB, competitiv inhib sinteza de acid folie la bacterii. ntruct sinteza
purinelor necesit FH4 n calitate de coenzim, preparatele date reduc aceast cale n
bacterii. n corpul omenesc acidul folie nu se sintetizeaz i, deci, este nevoie de surs
extern. De aceea, sulfonamidele, nu mpiedic sinteza purinelor la om.
Metotrexatul i compuii analogi inhib reacia de reducere a dihidrofolatului n
tetrafolat (vezi fig.6.32, etapele I). Ele limiteaz cantitatea de FH4necesar sintezei purinelor
i, astfel, diminueaz replicarea DNA n celulele mamiferelor. Aceti compui sunt utilizai
n terapia cancerului care se dezvolt rapid, ns sunt toxici pentru toate celulele care
divizeaz. Analogii structurali ai purinelor (acicloguanozina-aciclovir) sunt folosii n
tratamentul infeciilor herpetice. Aceti antimetabolii sunt fosforilai de enzimele celulare
sau virale, rezultnd derivai activi, care blocheaz specific DNA-polimerazele virale.
IMP este, mai departe, convertit n AMP i GMP conform schemei din figura 6.33.
Consumarea diferitor surse de energie ofer posibilitatea controlului reciproc al sintezei
nucleotidelor cu adenin i guanin.
HOOCCHCH-,CO OH
Acid adenilo I Riboza-5'(P)

AM P (acid adenilic)
succinic ^Riboza-5'(P)
Riboza-5'(P) Riboza-5'(P)
1P (xantozin-5'-m onofosfat) GM P (acid guanilic)
Reutilizarea purinelor
La hidroliza acizilor nucleici, nucleozidelor se formeaz baze purinice libere, care
pot fi utilizate pentru sintez. mpreun cu cele sintetizate de novo, alctuiesc un fond
metabolic comun accesibil tuturor celulelor. Sinteza din produse finite (rencorporarea,
reutilizarea) este mai eficace, mai ieftin pentru celule, mai ales n celulele cu o mare
vitez de cretere, de regenerare (embrionul, tumorile, reproducerea). La prima etap
are loc condensarea bazei purinice cu PRPP i crearea direct a ribonucleotidului,
reacie catalizat dtfosforibozil transferaze. Exist o enzim specific pentru adenin
(APRT)-adenin-fosforibozil transferaza i alta pentru guanin i hipoxantin (HGPRT-
hipoxantin-guanin-fosforibozil transferaza).
Adenin + PRPP > Adenilat + PPi
Hipoxantin + PRPP Inozinat + PP.
Guanin+ PRPP - Guanilat+PP.
O transformare la care sunt supuse purinele libere sau derivaii lor este dezamina-
rea, prin care o funcie NH2este nlocuit cu una oxigenat. Reacia poate avea loc la
nivel de nucleotid, nucleozid sau baz purinic. Dezaminarea AMP la IMP, sub aciu
nea AMP dezaminazei, este calea cea mai probabil de metabolizare a AMP.
Guanin dezaminaza (guanaza) transform guanma - xantin, i inozina --
hipoxantin. La mamifere lipsete enzima care transform adenina n hipoxantin.
Reglarea biosintezei R ibozo-5-fosfat

Un mecanism asigur cantitatea de IMP i
PRPP *A M P-
altul repartizarea lui ntre AMP i GMP. sm tctaza ~
<8> * I M P -
Transformarea lor n trifosfai este depen
dent de sarcina energetic celular (fig.6.34). PR
AM P
Nucleotidele acioneaz ca efectori negativi G lu tam in -P R P P "GM P"
asupraPRPP sintetazei, amidofosfo-ribozil am idotransferaza "IMP
transferazei, forma monomeric fiind activ, iar 5-fosforiHpzilamina
dimeric inactiv. Creterea concentraiei
PRPP provoac depolimerizarea asociat, cu
activarea enzimei. Nucleozidele acioneaz n
mod invers, drept activator servete glutami
na. Aici se mai nregistreaz un control pozitiv
reciproc din partea ATP i GTP. , , IMP
A d enilosuccina i M P ^ b l d r o g c n a 'z a
sintetaza
Catabolismul purinelor , -A M P * 0 p MP
Bazele purinice endogene sau exogene,
glutam in
care n-au fost ncorporate n nucleotide, sunt , amidotransferaza
;Adenilosu< inal
transformate n acid uric i eliminate pe cale A dcnilosuccinat GMP
renal. liaza
' -----------'A M P-
Nucleotidele pot fi transformate n
nucleozidc prin hidroliz, catalizat de 5'-
F ig u r a 6 .3 4 . R eg la rea b io sin tezei
nucleotidaze. nucleotidelor purinice
- 0 ~ ^ ) 2 _ Pi

Nucleozidele sunt scindate la baze printr-o reacie fosforolitic, catalizat de o
nucleozid fosforilaz (E,), cu formarea R -l-P care poate fi izomerizat sub aciunea
fosforibozil mutazei (E2) n R-5-P, substrat pentru sinteza PRPP
Pi
( B A ) + R' 1_P R-5-P
Degradarea nucleotidelor pn la produsele finale este redat n figura 6.35.

Acidul uric se formeaz din hipoxantin i din xantin prin oxidare, cu participarea
xantin oxidazei. Enzima e o flavoproteid dimer, ce conine molibden i Fe^.
Psrile i reptilele elimin acid uric, pstrnd apa n organism, deoarece cristalele
lui se elimin cu o minim cantitate de ap. Ureea leag cantiti mari de ap. Aceste
specii ce elimin acidul uric sunt numite uricotelice fa de ureotelice (elimin uree).
Degradarea ulterioar a acidului uric este redat n fig.6.36.
Acidul uric este un compus greu solubil n ap, pe cnd monouratul de sodiu este
ceva mai solubil. Pe msur ce procesul de acidifiere a urinei progreseaz, uratul trece n
acid uric. La un pH = 5,75 uratul i acidul uric coexist n cantiti egale, iar la pH < 5
predomin acidul uric mai puin solubil. n 24 ore excreia constituie 400-600 mg.
Acidul uric este o substan uor oxidabil i, prin capacitatea sa de a capta radicali
liberi, este un factor protector contra agresiunii oxidante continuie la care sunt expuse
majoritatea esuturilor organismului.
Patologia metabolismului purinelor
Sunt depistate unele patologii n catabolismul nucleotidelor.
Deficitul adenozil deaminazei cauzeaz imunodeficien sever i combinat, ce
conduce la disfuncia T i B-celulelor, creterea enorm de dATP n eritrocite, ce este
inhibitorul ribonucleozid reductazei i, respectiv, inhib sinteza DNA. Copiii cu acest
deficit, de obicei, decedeaz pn la doi ani.
O alt patologie este deficitul depurin nucleozidfosforilaz ce duce la disfuncia
celulelor T fr efect vdit asupra funciei celulelor B. Scade sinteza dc acid uric combinat
cu creterea nucleozidelor i nucleotidelor purinice. dGTP este nucleotidul major care se
acumuleaz n eritrocite. El stimuleaz reducerea ADP la dADP care este convertit n
dATP inhibitor al ribonucleotid reductazei. De asemenea, dGTP inhib reducerea
UDP i CDP.
Guta este patologie ce se caracterizeaz prin hiperuricemie. Guta primar este o
fonn a bolii care apare n rezultatul unei erori nnscute a metabolismului. Hiperuricemia
secundar poate fi cauzat de alte maladii, cum ar fi cancerul, insuficien renal cronic,
stri hipercatabolice, traumatisme, radio-sau chimioterapie, infecii cronice, acidoza
metabolic.
2
,, . . . , / H20 ^ - AM P dezaminaza
5 -nucleotidaza / ' v
NH,
GMP / ^
H20 A dcnozina IMP
5'-nucleotidaza
Adenozin
V j 0 V
Pi
dcaminaza1
G uanozina S'-nucleotidaza
Pi
Inozina
4 Hz0
Nucleozidaza
h 2o
' Riboza
1 Nucleozidaza
Riboza
H ,N
N
4> 1N
NH2 41' H
Guanina
H ipoxantina (ceto forma)

Guanin H 20 + 0 2
NH 3 X antin ,
dcaminaza oxidaza'
, ' A
X c
H
X a n tin a (c e to form a)
Figura 6.35. Degradarea nucleotidelor purinice. Defectele genetice i asociate cu aceast cale
2C02 >Ureaza
2 H20
U reea
h 2n h o o c n h
\= ,
2
> 0
co 2
f h 4 c o h
Form il-F H 4
> A lantoicaza
HOOC
A cid g lio x a lic A cid alantoic
F igu ra 6.36. Catabolismul nucleotidelor purinice: formarea acidului uric i degradarea ulterioar
Hiperuricemia cauza gutei, maladie manifestat clinic prin dureri artritice

episodice sau cronice, ncfrolitiaz i depozite de acid uric n esuturile moi. Creterea
concentraiei uratului n snge i n lichidele interstiiale, depirea pragului de solubilitate
determin precipitarea uratului monosodic, apoi declanarea reaciei inflamatorii de
cristale de urat, cu formarea calculilor la nivel renal. Sufer mai des brbaii. Mecanis
mele sunt complexe este remarcat o diminuare a activitii hipoxantin - guanin -
fosforibozil transferazei enzima ce catalizeaz sinteza IMP i GMP din produse
de rezerv. n consecin, are loc sporirea cantitii de PRJPP La bolnavi se observ i
o activizare susinut a PRPP-sintetazei, dat fiind dereglarea ei alosteric. Se mrete
coninutul PRPP. Se instaleaz i o deficien de G-6-fosfataz, ce mpiedic
eliberarea glucozei i G-6-P, pompat pe calea pentozo-fosfailor cu producerea, n
exces, a ribozo-5-P, materie prim pentru sinteza PRPP.
Hiperuricemiile sunt corectate prin administrarea de alopurinolanalog al
hipoxantinei. Alopurinolul, fiind substrat pentru xantin oxidaz, conduce la formarea
aloxantinei care devine inhibitorul enzimei, fixat rigid n centrul ei activ, unde molibdenul
rmne +4 i nu se reoxideaz pna la +6, ca n ciclul catalitic normal. Hipoxantina i
xantina sunt secretate drept catabolii finali ai purinelor i, fiind mai solubile, nu se
depun mesuiuri.
Efectul inhibitor al alopurinolului e dependent i de reacia cu
PRPP. O dat cu sinteza ribonucleotidelor, se micoreaz J
concentraia PRPP ce limiteaz sinteza purinelor de novo.
Alopurinolribonucleotidul format stopeaz transformarea PRPP L >
n fosforibozilamin, sub aciunea amido-PR-transferazei. nfmal, N NH
A lo p u rin o l
concentraia acidului uric scade completformarea calculilor se
stopeaz.
Lipsa complet a hipoxantin-guanin-fosforibozil transferazei (HGPRT) are
consecine nefaste pentru funcionarea organismuluise pierde capacitatea de reuti-
lizare a bazelor purinice. Ca urmare, crete concentraia PRPP i ritmul sintezei de novo
(fig 6.37).
O O
_N PRPP PPi N
HN HN
%
> Hipoxantin- guanin- 'N '
'N ' NH -fosforibozil transferaza
'N '
H ip oxantina IM P Riboza-51
O
.N .N
HN PRPP PPi HN
%

'N 'N H N -N
H2N Hipoxantin- guanin- H2N
-fosforibozil transferaza
G uanina GMP Riboza-5'(g)
NH NH2
PRPP /P i ,N
N
%
Adenin-
fosforibozil transferaza 'N 'N
I
AM P Riboza-5
F igura 6.37. Cile de sintez a nucleotidelor purinice
Gena defect e situat pe cromozomul X i deficitul se manifest numai la brbai.

Creterea concentraiei de acid uric iniial conduce Ia formarea calculilorsindromul
Lesch-Nyhan, la care copiii au tendina de a-i distruge corpul, sufer de insufucien
mintal, convulsii. Creierul, posibil, e foarte dependent de sinteza purinelor din pro
dusele finite. n condiii normale, activitatea HGPRT n creier este mai intens, pe cnd
activitatea amidotransferazei e mai redus. n organismul acestor bolnavi alopurinolul nu
se transform n ribonucleotid i nu micoreaz concentraia de PRPP. Sinteza de novo
nu e inhibat. Concentraia acidului uric efectiv scade dup alopurinol. Toate acestea
confirm: calea de sintez a nucleotidelor din produse finite nu e un lux pentru orga
nism, dar o necesitate deocamdat puin identificat.
Metabolismul nucleotidelor pirimidinice
Bazele pirimidinice sunt sintetizate din precursori simpli, aminoacizi i C 0 2. Aici
primordial se formeaz inelul, apoi adiia fosforibozilului, cu crearea pirimidin-nucleotidei.
Donator e acelai compus PRPP. Biosinteza de novo este inhibat att de nucleotide
pirimidinice, ct i de cele purinice. La pirimidine funcioneaz mecanisme eficiente de
reutilizare a nucleozidelor, dar nu a bazelor.
Biosinteza de novo
Primul metabolit carbamoil-fosfatul este comun i pentru ureogeneza ce se
sintetizeaz n mitocondrii, n cazul pirimidinelorn citozol. Enzimele utilizeaz surse
diferite de azot - NH3ureogeneza i glutaminan pirimidinogenez. Enzimele sunt
distincte (2-carbamoil-fosfatsintetaze). Consecutivitatea reaciilor e reprodus n fig.
6.38.
Reacia-cheie e catalizat de aspartat transcarbamoilaz cu sinteza N-carbamoil-
aspartat, apoi are loc ciclizarea lui, cu eliminarea H20 . Enzima dihidroorotaza catalizeaz
formarea acidului dihidroorotic, dup care dehidrogenaza NADd formeaz acidul
orotic. Transferul restului P-ribozil de la PRPP, graie unei transferaze succedat de
decarboxilarea acidului orotidilic, finalizeaz ciclul de reacii, formndu-se UMP.
Enzimele 1-3 i 5-6 au o localizare citozolic i numai E4mitocondrial. Enzimele
citozolice formeaz 2 complexe multienzimatice. Primul complex duce la sinteza (1-3)
acidului dihidroorotic, care difuzeaz n mitocondrii, unde este dehidrogenat de E4
(pe membrana intern), apoi produsul trece m citozol, unde este supus aciunii complexului
multienzimatic urmtor (5-6). Enzimele n complexe se sintetizeaz n cantiti echimolare.
La deficien de OMP-decarboxilaz i orotat-fosfo-ribozil transferaza, care prezint
domenii separate ale aceluiai polipeptid, apare orotataciduria. Boala debuteaz timpuriu
i se caracterizeaz prin creterea anormal, anemie megaloblastic i excreie excesiv
de orotat n urin. Dieta bogat n uridin amelioreaz anemia i diminueaz eliminarea
orotatului. Administrarea uridinei, a citidinei care sunt convertite n derivaii respectivi
reia diviziunea celular i amelioreaz situaia. UTP sintetizat stopeaz sinteza acidului
orotic (efect inhibitor asupra carbomoil-fosfat sintetazei).
De la UMP, prin fosforilare, se obin celelalte nucleotide pirimidinice graie enzime
lor E^nucleozidmonofosfo kinaza i E2-nucleoziddifosfo kinaza:
ATP ADP ATP ADP
UMP UDP
CTP se obine din UTP conform reaciei:

U TP+ Glutamina + ATP + H.O 2 CTP + Glutamat + ADP + P.+ I 2IP
Enzima ce catalizeaz aceast reacie e CTP-sintetaz.
Sinteza dezoxiribonucleotidelor are loc prin reducerea ribonucleotidelor la 2' a
difosfailor. Electronii sunt transferai pe substrat prin SH grupe. Tioredoxina reprezint
o protein mic. Enzima- tioredoxin reductaza - o flavoprotein ce reduce tioredoxina.
Enzima ribonucleotid reductaza, pentru activitate, necesit vit. , vit. B,, Mg'-4
(fig.6.39).
? co2
-(2)2-
I I
nh2 nh2
Glutamina Acid carbamic
Glutamin / Carbamoil fosfal
sintetazav sintetaza .A T P
; ' Carbamoil kinaza
H O O C -C H -(C H 2)2- C
NH,
nh2
Acid glutamic
o o(pj
Carbamoil foslat
+
o
? p
HN-
.C Dihidroorotaza .c Aspartat .c
CH2
CH2 HO" 'CH 2 transcarbamoilaza
HO
I V 4 3) H2N- (
/ iH
N ^|
H COOH
Acid dihidroorotic
H ,0
o
<!:h
H COOH
Acid carbamoil aspartic
2)
Pi H2N ^ |
COOH
Acid aspartic
NAD+
Dihidroorotat '
dehidrogenaza'.
N A D H + H 4-

? H N ^ ^C H
c
HN^ ^C H A . .C H

OCHÔ,
A cid orotic
OH OH
Uridin-5'-monofosfat
(UMP)
C 02
OMP-decarboxilaza
PRPP
Orotat- fosfo-ribo:
transferaza
OH OH
Orotidin -5'-monofosfat (OMP)
rig u i a w. . ) pinmidinelor i untie ucjttie mciaouitce
NDP
R ib on u cleotid R ib on u cleotid
red uctaza reductaza
G lutaredoxiria lutaredoxin: T io r e d o x in a ) Y T ioredoxin;
reducta:
NADP*
F igu ra 6.39. Reducerea ribonucleotidelor n dezoxiribonucleotide
Ea const din dou subuniti R [ i R,: R, are locusuri de fixare a substraturilor

ribonucleice, efectorilor alosterici, conine grupe SH, donatori de electroni la reduce
rea restului ribozil; R2e o protein ce conine Fe i S, participnd la formarea unui radical
liber al restului de tirozin, funcioneaz n ansamblu. Reglarea enzimei e redat n fig.
6.40.
In structura DNA e prezent i
timina, analog metilat aluracilului. Efectorii alosterici
Cum se sin te tiz e a z acest L ocusul pentru
ATP, dATP,
dezoxiribonucleotid? specifice
dGTP, T TP
Se metileaz dezoxiribonucleozid Locusul dc ATP,
mono fosfatul (dUMP). Enzima e reglare dA T P
timidilat sintaz. Donator de CH3

servete tetrahidrofolatul i nu S- Subsraturi
adenozil metionina. -N5, N 10- meti- a c tiv /, HS
len-FH4, cednd grupa CH3, se oxi ' s
deaz la dihidrofolat - FH2,

pierznd H, necesari pentru fonnarea
I V
/^ ' iS u b u n i t a t e a R ,
4 /%
grupei CH3.
Regenerarea FH2 are loc sub V s e *
aciunea enzimei dihidrofolat reduc Figu ra 6.40. Structura i reglarea ribonucleotid reductazei
tazei, utiliznd NADPH (fig. 6.41).
(p y O Q M
0 ^ 0 \
coo
coo 9
I I
C -N H -C H -C H 2
esuturile n diviziune, unde are loc o sintez rapid de TMP, sunt foarte sensibile la
inhibiia dihidrofolat reductazei. De aceea, n chimioterapia cancerului ca factor de
inhibiie poate fi folosit i timidilat sintaza. Fluoruracilul (analog al uracilului) ireversibil
inhib timidilat sintaza, formnd legturi covalente ntre componenii reactivi i enzi
m.
Aminopterina, ametopterina (metotrexatul) sunt analogi ai acidului folie,
inhibitori competitivi ai dihidrofolat reductazei. mpiedic diviziunea celular i 6-
mercaptopurina, 6-tioguanina. Un analog structural al nucleotidelor pirimidice este
azidotimidina (AZT), utilizat n tratamentul infeciilor cu virusul imunodeficienei
umane.
Reglarea metabolismului pirimidinic
Reglarea este fin, alosteric. dATP inhib reducerea sa i stimuleaz reducerea
pirimidinelor dUDP, dCDP. TTP frneaz reducerea pirimidinelor i stimuleaz
reducerea purinelor.
Reglarea biosintezei poate fi redat n felul urmtor:
CO 2 +- 2ATP + Gin Carbamoil fosfat -i-Carbam oil aspartat *- UMP~UTP
0U M P GTP
G lu ta m in a ATP CTP
PRPP A sp a rta t
Aspartat transcarbamoilaza (ATS-EJ reprezint o enzim compus din dou
subuniticatalitic i reglatoare. Activarea ATS de ctre ATP are n consecin: 1)
echilibrarea vitezei de sintez a nucleotidelor purinice i pirimidinice; 2) semnaleaz
prezena ATP-Iui n concentraii suficiente ca substrat pentru sinteza pirimidin
nucleotidelor (UMP i carbamoil fosfatului). Sistemul de reglare e destul de complicat,
dar asigur sinteza unor cantiti echilibrate ale tuturor celor 4 dezoxiribonucleotide.
Evident c ribonucleotid reductaza posed stri confonnaionale cu diferite proprieti
catalitice.
Reutilizarea i catabolismul nucleotidelor pirimidinice
Fondul metabolic al acestor compui include compui sintetizai de novo i cei
eliberai din acizii nucleici celulari. Ca i n cazul purinelor, acizii nucleici exogeni nu
contribuie la formarea acestui fond. n metabolismul pirimidinelor au loc reacii
similare cu cele descrise la purine.
Pi- ' R"1_p
Nucleotid \ - y Nucleozid >- Baz pirimidinic
Nucleozidele pirimidinice sunt reciclate dup fosforilare
ATp _ ADP
N u cle o zid VKmazb
. x N u cle o tid
O kinaz accept ca substrat uridina i citidina, iar altatimidina. La purinc aceast

cale metabolic este de mic importan, nsi adenozina fiind fosforilat n ATP.
Bazele pirimidinice nu sunt reutilizate, ci degradate n compui cu molecul mic (fig
6.42). -alanina i acidul -amino-izobutiric sunt excretai sau catabolizai n cile
respective.

I
' - (-)
t h
/ Tim ina (Uracil)
NADPH+ +
Dihidrouracil /
dehidrogenaza '
NADP

H N ^ C^ C ^-C
H 3 (-H)
D ihidrotim ina (Dihidrouracil)

H20
Dihidropirimidinaza ' k'
h 2n - - n h - c h 2- c h - c o o
(-H)
-urcid-izobutirat (-ureid-propionat)
H20
-ureidpropionaza
nh 4+ hcoj
h 3n - c h 2- c h - c o o _
(-H)
-arnino-izobutirat(-alanina)
a-cetoglutarat
Aminotransferaza
G lutamat
<4
C -C H -C O O
H7 I
CH3
M etilm alonil sem ialdehid
Metabolismul cromoproteidelor
S tructura hemoglobinei. Reprezint proteine complexe, avnd ca constitueni o
protein simpl i un component neproteic ionii metalici ai unor heterocicluri
diverse, dintre care cei mai importani sunt hemul hemoproteidele cu derivaii si:
hemoglobina (Hb), mioglobina, sistemul citocromic, catalaza, peroxidaza i
eritrocruorinele proteine situate n sngele i esuturile unor nevertebrate. O protein
fieroporfirinic este i triptofan pirolaza.
O etap semnificativ a evoluiei a fost trecerea de la existena anaerob la cea
aerob, cu surse bogate de energie. n prezena 0 2, la scindarea glucozei, se formeaz
de 18 ori mai mult energie dect n lipsa acesteia. Evolutiv, s-au format dou mecanisme
ce asigur aprovizionarea permanent a celulelor cu cantiti suficiente de Or Un
mecanism primordial care asigur celulele cu 0 2, este circulaia sanguin. Dac n-ar
exista acest sistem, organismele aerobe n-ar depi 1 mm, fiindc difuzia 0 2la distane
mari s-ar produce foarte ncet i n-ar satisface cerinele celulelor. Un alt mecanism
adaptiv este apariia, n timpul evoluiei, a unor molecule transmitoare de oxigen,
care permit ocolirea limitei cauzate de solubilitatea mic a 0 2 n ap. Drept transportator
servete hemo- i mioglobina. Datorit Hb, crete capacitatea sngelui de a transporta
0 2de la 5 mL la 250 mL 0 2la un litru de snge.
Hemoglobina particip a transportul C 0 2 i a H +, totodat meninnd echilibrul
acido-bazic. Mioglobina muchilor are funcie de depozitare a 0 2i faciliteaz trans
portul lui n acest esut. Capacitatea dat este determinat de prezena unei grupe
prostetice numit hem, care explic culoarea roie a acestor proteine. Hemul e compus
dintr-o parte organic i atomul de fier. Complexul organic conine protoporfina format
din patru grupe pirol legate prin puni metinice (CH=), formnd un inel tetrapirolic.
Acest inel ataeaz patru grupe CH3, dou grupe vinii (CH=CH2) i dou catene
propionice (CH2~C H 2~COOH). Eventual, sunt posibile 15 variante de aranjare
n spaiu a acestor substitueni. Sistemele biologice conin numai un izomerproto-
porfirina IX (fig. 6.43). n centrul acestui inel atomul de Fe e ataat cu patru atomi de
azot. Fierul formeaz nc dou legturi coordonatoare (V i VI) cu azotul din histidina
V (direct), cu un rest de histidin proximal i VI (indirect) histidin distal.
Atomul de Fe n hem poate exista n fi form (F2+) i fieri form (F3+) sau
methemoglobin. De menionat c numai fieroforma poate adiiona Or
M- V
HC=4 J CH HC CH
M- __ I
^
N
NH
N
//
I__ -M M- I
I -
N Fe N
-M
-V
NH ^l ! \
H C -r" V -C I
-CH H c= f N =ch
M P = M
Protoporfirina IX Hemul (Fe-protoporfirina IX)
F igura 6.43. Structura protoporfirinei i a hemului (M-metil, P-prapionil, V-vinil)
E stabilit structura tridimensi
onal a mioglobinei (J.Kendrew),
precum i a h e m o g lo b in ei
(M.Perutz). Molecula mioglobinei
are o structur foarte compact. n
interiorul ei de fapt nu exist caviti,
n schimb conine un singur lan po
lipeptidic, 75% al cruia include
a-spirala cu 8 segmente de baz
rsucite spre dreapta.
ntre segmentele spiralate se
intercaleaz 5 segmente nespiralate
i cte unul se posteaz la capetele
terminale. Se observ foarte bine
partea exterioar i cea interioa
r a moleculei. Ultima e format
aproape complet din resturi de
aminoacizi nepolari; exist numai 2
resturi de aminoacizi polari2 his
tidine, ce se localizeaz n centrul activ i ndeplinesc un rol primordial n activitatea
funcional. Grupa hemului e localizat n adncitura moleculei demioglobin. Locusul
de fixare a oxigenului n mioglobine indicat n fig. 6.44.
n legtura ase coordona
toare din fierihemoglobin se
afl apa, n dezoxihemoglo-
bine liber, n oxihemo-
globin e ocupat de oxigen,
n procesul oxigenrii atomul
de fier se apropie de planul
hemului la 0,2. Hemul nu
e o structur rigid. Aceast
deplasare joac rolul-cheie n
activitatea hemoglobinei. Lo
cusul de fixare a hemului are
o structur tridimensional
(fig. 6.45).
Dac oxigenul se leag de
hem, atunci care-i rolul
com ponentei proteice n
fix area i tra n sp o rtu l
oxigenului? Experienele au
demonstrat c n mioglobin
se creeaz un microspaiu al
grupei prostetice, datorit creia hemul capt proprieti deosebite. E o legitate
general ca funcia grupei prostetice s fie dependent de anturajul peptidic. Acelai
hem e caracteristic i citocromului C, dar el ndeplinete alt funciecea a transferului
de electroni, pe cnd n enzimacatalaza, i revine o alt funcie.
Care este rolul acestei histidine distale?
Hemul are o afinitate mare la oxidul de carbon, fixarea lui e de 25000 ori mai mare
dect a oxigenului, pe cnd n molecula hemoglobinei afinitatea e numai de 200 ori.
Proteinele inhib acest proces. Cum anume? (fig 6.46).
O
III

HC^
w //
N
I
F igu ra 6.46. Baza structural a afinitii Hb i Mb la
Analiza RS i spectroscopia infraroie a complexului i O, au confirmat c

fieroporfirinele au o afinitate mare la CO. n acest complex atomii de Fe-Csunt situai
pe un plan drept (A). n complex cu mioglobina osia se gsete sub un unghi ctre
legtura Fe-C, cauzat de prezena histidinei distale (). Osia 0 2se plaseaz sub unghi
ctre Fe-0 i n oxiHb (C). De aceea, sub influena proteinei, se i situeaz sub un
unghi, dar nu pe plan drept. O astfel de geometrie, determinat de globin, slbete
interaciunea hemului cu i, simultan, creeaz condiii optime pentru fixarea Or
Micorarea afinitii la CO are o nsemntate primordial pentru decurgerea diver
selor procese biologice, deoarece e o primejdie potenial. , la scindarea
hemului, formeaz o cantitate ce blocheaz aproximativ 1% de locusuri de fixare a O, n
mio- i hemoglobin. E un nivel nensemnat, dar dac afinitatea va fi att de mare la
fel ca n fieroporfirinele libere, format endogen ar provoca o intoxicaie serioas.
Natura a soluionat problema n aa mod, nct n procesul evoluiei au aprut proteinele
hemocomponente, care, datorit unor factori sterici, slbesc fixarea , nu i a 0 2.
nsui hemul are un efect decisiv asupra structurii mioglobinei, mioglobina fiind
mult mai compact dect apomioglobina protein farhem.
Hemoglobina e compus din patru lanuri polipeptidice unite ntr-o conformaie prin
legturi necovalente, are patru locusuri de fixare a oxigenului (fig. 6.47).
Se disting mai multe tipuri de Hb:
Hb A hemoglobina de baz a omului
matur compus din 2 lanuri a si 2 - <.
Hb A2 aproximativ 2% (poriunea
minor) cu subunitile sale oc,S2.
Hb P particip la diferite etape ale
dezvoltrii embrionarea 262.
Hb F a ,y 2 reprezint hemoglobina
fetal.
Prin unnare, pentru toate tipurile a cate
na e identic i conine 141 resturi de ami
noacizi, pe cnd catenele , S, , E 146,
F igura 6.47. M odelul hemoglobinei: cu o secven aproape similar.
catene a i , H - hem ul
Molecula hemoglobinei e aproape sfe Val-l cc Val-l
ric, cu diametrul 55. Catenele fonnea Arg-141 a.
Arg-141 a
z un tetraedru, unde fiecare a contac
teaz cu ambele , pe cnd contactul dintre
a sau este relativ redus (fig. 6.48).
Structurile spaiale ale mioglobinei, ale
a i catene de hemoglobin au mari
afiniti, posednd acelai rol biologic.
Sensul configuraiei const n crearea unui
microspaiu n jurul hemului, careva
detennina reversibilitatea fixrii oxigenu
lui. Figura 6.48. Contactele ntre catenele a i
La d e sc ifra re a sec v e n ei de n molecula hemoglobinei, H - hemul
aminoacizi, la mai mult de 20 de specii de
animale s-au constatat deosebiri semnificative. n 9 poziii aceste secvene conin aceiai
aminoacizi la toate speciile aminoacizi mvanan/i-conservativi, care au o impor
tan major pentru funcionarea hemoglobinei locusurile de fixare a 0 2, stabilizarea
moleculei etc.
E caracteristic i pstrarea intact a caracterului nepolar al prii interioare a
moleculei ( cu modificri n aminoacizii nepolari). Aceast structur nepolar stabilizea
z structura spaial. Pe suprafaa moleculei aminoacizii sunt extrem de variai.
Hemoglobina. Funciile.
1. E o protein alosteric, pe care oxigenul se fixeaz cooperativ, adic adiionarea
oxigenului la hemoglobin mrete gradul de fixare a celorlalte molecule de oxigen.
2. Afinitatea hemoglobinei la oxigen e dependent de valorile pH i ,.
3. Afinitatea la oxigen este reglat de compui fosfai organici2,3-difosfoglicerat.
Saturaia hemoglobinei cu oxigen e dependent de presiunea parial a oxigenului
i se exprim prin curba disociaiei oxigenului. Curbele pentru mioglobin i hemoglobin
sunt prezentate n figura 6.49.
Saturaia ()
1
F ig u r a 6 .4 9 . C urbele de disociaie a
oxigenului n hemoglobina i mioglobina 20 40 60 80 tori
Mioglobina are o afinitate mai mare. Afinitatea se F igu ra 6.50. Influena p H asupra
afinitii hemoglobinei la oxigen
caracterizeaz prin mrimea P50- egal cu presiunea
parial a 0 2 la saturarea a 50% din locusurile de Hb02+ H + C02
fixare (Y = 0,5). Pentru Mb P50= Itor, pentru Hb =
26tori (1 tor = lmmHg).
Curba disociaiei are pentru Mb form hiperbo n esuturi cu
n a lv e o le le
m e ta b o lis m
lic, pentru Hb sigmoidal i corespunde rolului pulm onului
ac tiv
fiziologic al celor dou globine. La nivel molecular H
forma sigmoidal demonstreaz c fixarea 0 2de Hb Hb; + o 2
este cooperativ. Acest efect de fixare permite ac 2
celerarea eliberrii 0 2n esut. F igura 6.51. Efectul Haldane John
Deplasarea mediului interior spre acid depla
seaz, la rndul ei, curba disociaiei spre dreapta, adic Saturaia (Y)
afinitatea la 0 2 scade, eliberndu-se mai uor 0 2.
Sporirea concentraiei de C 0 2 are acelai efect,
adic majorarea C 0 2 i a H+ n capilarele esu
turilor cu un nivel metabolic activ favorizeaz elimi
narea O, din oxihemoglobin (efectul lui Bohr) (fig.
6.50).
n capilarele pulmonare, ns, concentraia ma
jor a O, favorizeaz eliberarea C 0 2 i FT din hc-
moglobin (efectul Haldane John) (fig.6.51).
Afinitatea 0 2la hemoglobina din eritrocite e mult
mai mic dect la hemoglobina din soluie. In 1967 s- F igu ra 6.52. Influena BPG asupra
a stabilit influena asupra afinitii 0 2la Hb a 2,3- afinitii Hb la oxigen
I difosfo-gliceratului (BPG). n eritrocite se afl n ace-
: eai concentraie molar ca i n hemoglobin. n lipsa BPG P50pentru Hb e de 1 tor, ca
i la mioglobin, n prezena BPG P50 = 26 tori. BPG reduce afinitatea la O., de 26
(ori (fig. 6.52).
Care-i mecanismul?
Adiioneaz la dezoxihemoglobin, dar nu la oxihemoglobin, fiindc fixarea 0 2i a
BPG simultan, sunt procese contrare. Care-i rolul BPG?

HN N
COO' O'
I I
'N ' - o p=o
I - I
H O - 2HC o, 2HC 9 O-
IC
In ozin a OH OH
i - U
BPG
S aturaia (V) Entro citele ftului
Acum civa ani, nu era clar din ce cauz n sngele 1
conservat n mediu citrat-dextroz afinitatea la 0 2 crete
i P50 devine 16 (n loc de 26). S-a stabilit c acest
fenomen e indispensabil de micorarea concentraiei
de BPG de la 4,4 la 0,5 mmol - timp de 10 zile.
Fenomenul are un rol decisiv: n patul sanguin eritroci
tele far BPG i restabilesc pe jumtate coninutul timp
de 24 oretermen defavorabil pentru bolnavii aflai n
stare grav. Adaosul BPG nu mrete concentraia lui
n eritrocite, cauza fiind sarcina electric mare. Astfel,
SO t o r i
compusul nu penetreaz membrana celular. n ase
F ig u r a 6 .5 3 . C u rb ele a fin it ii
menea cazuri se poate evita scderea BPG, adu eritrocitelor mamei i f tu lu i la O,
gind inozina. Moleculele ei, far sarcin, ptrund n
eritrocite i, printr-o serie de reacii, se transform n -N
4c
BPG. n hipoxii (emfizem sau adaptare la nlimi CH H is f 8
II
mari) crete mult nivelul BPG, care constituie un meca IIC /
nism de adaptare. 'N
Hemoglobina F are o afinitate mare la O,, ceea ce Planul
creeaz condiii optime pentru transportul 0 2din sngele F e ) porfirinei
mamei n sngele ftului (fig. 6.53). Aceast Hb fixeaz

slab BPG. Analiza RSaoxi-i dezoxiHb a demonstrat
diferenierea semnificativ dup structura lor cuater
nar. Ca rezultat atarii 0 2, perechea de subuniti
a- i schimb poziia fa de alt pereche cu 15. Exist
dou tipuri de contacte o^-, i oc,-2- Modificri
structurale serioase sunt proprii celui de-al doilea tip,
care se gsete n genele nrudite i e constituit din ami
noacizi similari la toate vertebratele. Interaciunea hem-
hem e sczut la mutaiile ce intr n acest contact.
n dezoxihemoglobin atomul de Fe iese din planul
hemului cu 0,6 ca rezultat al respingerii sterice ce apa
Figura 6.54. Modificrile poziiei Fe
re ntre histidin proximal i atomii de N ai inelului n dezoxihemoglobin
porfirinic (fig. 6.54).
H elix F
T-forma R-forma
F igu ra 6.55. Transformrile conformaionale ale hemului la oxigenare
La oxigenare, Fe se deplaseaz n planul porfirinei, formnd legturi cu 0 2, i are loc

transformarea structurii cuatemare din forma T n R (fig. 6.55). Rolul primordial l
joac catena lateral a histidinei proximale, pe care o atrage dup ea deplasarea
atomului de Fe (fig. 1.12). Hemul i histidin proximal contacteaz cu catenele laterale
ale 15 aminoacizi i dc aceea la oxigenare structura se modific spre forma R. Modifi
crile structurale din interiorul unei subuniti conduce, ns, la schimbri structurale n
regiunea contactelor celorlalte subuniti i ale ntregii moleculc (fig 6.56).
Dezoxihemoglobina are o structur rigid amplificat de 8 legturi saline ntre cele
4 subuniti (fig. 6.57). Fixarea 0 2poate avea loc numai atunci cnd ruperea unor
legturi va permite atomului de Fe s se deplaseze n planul hemului. Cte legturi
trebuie s se rup pentru a adiiona o molecul de 0 2? Depinde de clasare1-4.
Pentru fixarea primei molecule de 0 2e necesar desfacerea mai multor legturi, com
parativ cu fixarea celorlalte. Adiionarea a dou - trei molecule ocup o poziie interme
diar ntre 1 i 4.
Asp- H is'
NH, Jk. coo ,
FGl H C 3 ...
A rg1 A sp'__ Lys/-'"
coo. iiH itiiiiiY lfH iuijiiiiiiiiiiM rn ititjiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiin iiiiiiiH iiliiiii NH, a .
H C3 H9 C5
L y s+ a , ' ............A sp ' " " -A r g + j
NH
1111111 i / i 111111111111111111111111 111111111111 i i i 11 >111 111111 I 1111111111111 111111111
co o a .
3 C5 H9 HC3
H is* A sp'
COO- JL NH3 |
HC3 FGl
F ig u ra 6 .5 6 . Schem atic sunt
redate modificrile n structura F ig u r a 6 .5 7 . L eg tu rile tra n sversa le n tre su b u n it i n
cuaternar a Hb la oxigenare dezoxihemoglobin
O molecul dc BPG se fixeaz cu un
tetramer de globulin. Locusul de fixare
e format din resturile cu sarcin pozitiv
ale catenelor (lizin, histidin) (fig.6.58,
fig. 6.59). El e conglomeratul alctuit din 6
grupe cu sarcina (+) ale catenei. O fixa
re mai slab a BPG cu hemoglobina ftu
lui se datoreaz prezenei serinei n loc de
histidin.
La oxigenare, BPG se detaeaz din ca
uza cavitii centrale prea mici pentru el.
BPG micoreaz afinitatea la 0 fonnnd Locul de fixare a BPG
legturi ncruciate cu -caten, astfel sta Figura 6.58. Fixarea PC n molecula dezoxillb
bilized structura cuaternar a Hb (T). Cu

alte cuvinte, se creeaz legturi auxiliare
saline ce trebuie rupte i, n final, afini
tatea Hb la 0 2, n procesul adiiei BPG, se
reduce.
La organismele aerobe, la o molecul de
0 2 utilizat se formeaz 0,8 mol COr
Majoritatea lui este transportat prin snge
sub form de bicarbonai, ce se fonneaz
n eritrocite sub aciunea carbanhidrazei.
C 0 2 + H20 HCO 3 + H+
O parte din C 0 2 este transportat de
hemoglobin n form de carbonat, adiio- F igura 6.59. Interaciunea BPG cu trei grupe
nndu-se la grupa NH 2 ale celor patru ncrcate pozitiv n catene
catene.
R -N H 2 + C 0 2 ^ R -N H C O O + H +
Aceste legturi saline stabilizeaz forma T, de aceea adiia C 0 2 micoreaz afinitatea
hemoglobinei la oxigen.
Hemoglobina fixeaz la o molecul eliberat de C 0 2 aproximativ 0,5 molecule de
H+. Unde anume se fixeaz H+? La moleculele de histidin care au o afinitate mare
la H+ n ambele catene. Hidrogenul, la fel ca BPG, micoreaz afinitatea l a 0 2,
stabiliznd T forma de hemoglobin.
Patologia molecular a hemoglobinei
Spre deosebire de Hb-A (Hb omului adult), exist i Hb patologice. La anemia
falciform se nregistreaz Hb-Sprimul exemplu de boal molecular descris. Hb-
S sc caracterizeaz prin prezena n caten (n poziia 6, la captul N terminal), n locul
acidului glutamic, a valinei, la care se diminueaz solubilitatea hemoglobinei dezoxige-
nate. Solubilitatea Hb S oxigenate nu se modific. Aceast schimbare conduce la apa
riia unui fragment capabil de agregare. Dup eliberarea 0 2, are loc o transformare
conformaional, cu apariia la suprafa a acestor zone ce conduc la agregarea mole
culelor de Hb, la care se formeaz agregate mari, lungi, simultan deformnd eritrocitul,
care capt o form drepanocitar. Cinetica formrii fibrelor de dezoxihemoglobin
are o importan primordiala, cci de ea depinde configuraia adevrat a eritrocitului
care trece prin capilare (timp de 1 secund). Procesul depinde de concentraia Hb-
S. Scderea concentraiei de 2 ori (la heterozigote) micoreaz viteza dc formare a
fibrelor de 1000 ori. Organismele hetero- sunt rezistente la malarie, nu atest anemie
drepanocitarcaz tipic de polimorfism balansat adaptabil.
Sunt remarcate mai mult de 100 de Hb defectate, fr influen sau cu efect nociv.
Se difereniaz cteva tipuri de anomalii ale Hb :
a) substituirile n partea exterioar a moleculei de Hb, practic, sunt benigne, cu
excepia Hb S;
b) se modific centrul activ. n Hb M histidin proximal sau distal e substituit cu
tirozina ce conduce la stabilizarea formei oxidate (fieri) complex al tirozinei cu Fe.
Substituirea se poate produce n a i catene. Au fost depistate toate cele 4 variante
mutante. Hb cu 2 hemuri n fieriformHb M (methemoglobin) se atest la hetero
zigote; la homozigote conduce la un sfrit letal;
c) modificri n structura teriar. n cazul dat formarea conformaiei normale a
moleculelor nu are loc i astfel de tipuri de hemoglobin nu sunt stabile (glicina e substi
tuit cu arginina). Sunt nregistrate Hb incapabile s rein hemul datorit modifi
crilor conformaionale;
d) modificri n structura
OOCC H 2 2- -c C o A
cuaternar. Aceste mutaii ating CH2-
-C O O '
1+ G licin a II
regiunea contactelor, ceea ce N H 3 S u c c in il-C o A o
cauzeaz pierderea propri Hemina
-amino levulinat ^
etilor alosterice nsoit de sintaza
C oA
tulburri ale afinitii fa de O,. NH3
Modificrile n regiunea I
o o c CH2CH2- -c- - c o o
contactului a ,, 2 conduc la II
cooperativitate joas, concomi o
tent sporind afinitatea la O r
Contactele ntre subunitile de ,
+
acelai tip sunt polare, iar ntre NH:
subunitile de tip diferitmai
intense i nepolare. Se atest O O C H 2 H 2 H 2
cteva cazuri: 5 - am in o lev u lin a t q
1) substituirea aspartatului Condensarea moleculelor 2
n caten cu asparagina 8 -amino levulinat - 0 Plumb
dehidrataza
micoreaz P50 de la 26 la 15
-2II20
tori (Hb-Kempsey);
2) substituirea n a caten O O C C I 1 2- - , CH? COO"
a aspartatului cu treonin
h 2n c i i 2-
mrete afinitatea la P 50cga\
cu 70 tori (Hb-Kansas).
PoTfob\\\nog,en
F igura 6.60. Sinteza porfobilinogenului

Sinteza hemului o o c - c h 2- -CH2- C H 2-C O C f
Experimentele cu adminis
trarea atomilor marcai, efec Porfobilinogen
tuate de David Shemin cu h 2n - h 2C j7 (condensare a 4 m olecule)
colaboratorii, au demonstrat c Cosintetaza '

(uroporfirinogen sintaza)
p recu rso ru l h em u lu i se 4 NHj
formeaz prin condensarea A- P
glicinei cu succinatul activ la
sinteza amino-levulinatului. h 2c - CH2
'N "
Reacia este catalizat de 5 - H
amino-levulinat sintaz (E,) h
NH HN
dependent de vit.B6.
Amino levulinat sintaza este H
H2C .N .
o enzim mitocondrial regla CH2
toare. Viteza de reacie crete
n lipsa hemului. Apoi 2 mole uroporfirinogen III
U roporfirinogen
- cosintaza
cule de 8-amino-levulinat se
condenseaz, cu formarea por-
fobilinogenului. E o reacie ca
- decarboxilaza
9
talizat de o dehidrataz (E2).
Enzima este localizat n citozol,
conine Zn i este inhibat de
ionii de plumb.
In consecin, 4 molecule
de porfobilinogen se conden
seaz, formnd un tetrapirol,
care, dezaminndu-se, seci- Protoporfirina IX
clizeazproducnd uroporfiri- ^ F e (II)
nogenul. Prin decarboxilare Ficrochelataza ,
i oxidri succesive, se produ 2H +

ce protoporfirina IX. O hemo-
sintetaz, enzim mitocondri
al, introduce fierul; enzima
conine grupa SH. Pentru sin
teza hemului sunt necesari i
urmtorii compui: acidul tetra-
hidrofolic, vit. B,2, Cu++ (fig.
6.60 i fig. 6.61).
Fierul este transferat de o
transferin Fe3+, ce reprezin
t o protein. O alt protein l
F igu ra 6.61. Formarea hemului.
depoziteaz n esut sub form V - vinii, M - metil, P - propionil
deferitin. Cavitatea interioar
a acestei proteine poate fixa pn la 4500 fierioni. n organism se conin aproximativ
4,5-5,0 g de Fe; pe contul Hb = 60-70%; mioglobinei = 3,5-5,0%; feritinei = 20%;
transferinei = 0,18%, fierului funcional din esuturi i revine 5%.
Firete, fierul cromoproteidelor alimentare nu se utilizeaz pentru sinteza fieropro-
teidelor din organism, deoarece hemul se oxideaz n hematina care nu se absoarbe
n intestin. Acest pigment se elimin prin masele fecale.
Drept surs de fier pentru scopuri sintetice servesc alimentele i, de asemenea, fierul
ce se elibereaz la degradarea eritrocitelor. n procesul sintezei cele trei enzime enume
rate se regleaz prin retroinhibiie de hem.
Degradarea hemului
Eritrocitele vieuiesc aproape 120 de zile. Zilnic se degradeaz i se sintetizeaz n
organism 6-7 grame hemoglobin. Celulele vechi sunt eliminate din sistemul circulant i
scindate n splin de celulele sistemului macrofagal. La prima etap hemoglobina eliberat
prin liza hematiilor mbatrnite formeaz cu haptoglobina un complex Hb- haptoglobin
(ultima e o a 2-glicoprotein seric).
Complexul este supus oxidrii enzimatice microzomale, cu formarea unor compui
intermediari ca coleglobina, verdoglobina, care apoi pierd globina, transformndu-se n
hem. Globina se hidrolizeaz pn la aminoacizi, iar fierul din hem este fixat de transferina
plasmei, apoi poate fi depozitat n ficat sau reciclat.
Reacia de degradare a hemului const n scindarea punii metenilice a, cu deschiderea
ciclului tetrapirolic(fig.6.62). Reacia e catalizat de hemooxigenaza numit i a -
metinil-oxigenaza, care are dou particulariti:
a) se prezint drept o monooxigenaz solicitant a 0 2 i NADPH;
b) carbonul punii metenilice se elimin sub form de CO. Particip, n calitate de
cofactori, vitamina C, Fe2+. Asta e unica reacie n organism unde se elibereaz CO.
Ulterior, puntea metenilic central n biliverdin se reduce sub aciunea biliverdin
reductazei, utiliznd NADPH, cu formarea bilirubinei. Biliverdin reductaza este prezent
n numeroase esuturi, dar prioritar n ficat. n mod normal, bila conine numai urme de
biliverdin, dar graie culorii sale intense, ea imprim bilei o culoare verzuie. Bilirubina
liber n exces este un decuplant al fosforilrii oxidative, ce duce la inhibarea sintezei de
ATP.
Bilirubina, n complex cu albumina seric, e denumit bilirubina liber indirect, cu
o cot de 75% din toat cantitatea (2,5 - 12mg/L, 8,7-20,5 pm/mol), fiind transferat
apoi n ficat. Bilirubina indirect este toxic, nu trece prin filtrul renal i nu se elimin prin
bil. Bilirubina liber este solubil n solveni organici i numai apoi d reacie cu
diazoreactivul (reacie indirect). Aici, n ficat, se modific n form mai solubil, con
jugat cu acidul glucuronic, ce adiioneaz la catenele propionice. Sub form de
diglucuronid este excretat prin bilbilirubina direct (fig. 6.62).
Un rol important n procesul de eliminare a bilirubinei la nivelul celulei hepatice i
revine proteinei transportatoareligandina (masa molecular aproximativ 44000 Da),
ce reprezint aproximativ 6% din totalul proteinelor hepatice.
In intestine, sub aciunea enzimelor bacteriene, ce scindeaz acidul glucuronic, fiind
redus (bilirubina) prin mezobilirubin la mezobilirubinogen. Aproximativ 4 mg e cantita-
tea diurn de urobilinogen i aproximativ 300 mg V erdoglobina
e cea de stercobilinogen. I M acrofage

Bilirubina fiind redus (2 vinii 2 etil i 2 Globina
H em
metin 2 metilen), va fi transformat n . 0 w 2\\
1-NADPH+
urobilinogen care, prin reducerea legturilor duble H e n i o x i g e n a z a 'S* '
N A D P + H ,0
din nucleele terminale, se va transforma n CD
stercobilinogen. n continuare, dehidrogenarea

acestor compui la nivelul punii y-metinice rezult
urobilina i stercobilina principalii pigmeni ai Biliverdina
materialelor fecale. B iliv erd in ^ NADPH + H+
O mic parte din bilirubin, urobilinogen i red uctaza
stercobilinogen se reabsoarbe din intestin n

circulaia portal, ajungnd la ficat, de unde sunt
reexcretai prin bil ciclul entero-hepatic al
pigmenilor biliari. Cantitai mici se elimin prin
urin, excreia urinara a acestor compui
urobilinogen, stercobilinogen crete n
insuficiena hepatic.
C om p lexul
Sunt atestate cteva tulburri genetice ale me b ilir u b in -p r o tein e Snge
tabolismului porfirinelor, ce se caracterizeaz
prin excreia crescut de porfirine i precursori ai
acestora.
1. Porfiria intermitent acut. Sunt afectate
celulele ficatului, reducndu-se activitatea
uroporfirinogen sintazei i, com pensator,
amplificat de y-amino levulinat sintaza, crete
concentraia amino levulinatului i aporfobilino-
genului n ficat, eliminndu-se prin urin, ceea ce
cauzeaz dereglri neurologice, dereglri
intermitente n abdomen. V
B il
2. Porfiria eritropoetic congenital. E
diminuat de activitatea enzimelor (cosintaz,
izomeraza), provocnd acumularea uroporfirinei, F igura 6.62. Formarea bilirubinei
coproporfirinci. Eritrocitele se distrug prematur.

Urina e de culoare roie, diniiroz, pieleasensibil la lumin.
3. Sunt studiate i porfirinele hepatice primare porfiria cutanea tarda ce
se caracterizeaz prin hipersintez i eliminare urinar de uro- i coproporfmna I. Pacienii
sunt fotosensibili cauza e deficiena de uropofirinogen decarboxilaza.
4. La deficiena coproporfirinogen oxidazei (coproporfiria ereditar), se acumuleaz
i se elimin prin urin coproporfirinogen III i alte intennediateporfobilinogen, ac. 5-
amino levulinic. Manifestrile clinice sunt asemantoare cu cele din porfiria acut
intermitent.
5. La insuficiena ALA dehidratazei i afierochelatazei, se acumuleaz n urin
coproporfirina 1 i acidul 8-amino levulinic. Deficitul fierochelatazei n esuturi duce la
protoporfirieeritrocitele, plasma, fecalele conin cantitii mari de protoporfirina IX.
Bolnavii sunt fotosensibili, au ciroza i urticrie prin expunere la soare.
Creterea activitii amino levulinat sintazei duce la porfirie toxic prin urin se
elimina ac. amino levulinic i porfobilinogen, coproporfirina . Organismul reacioneaz
vdit la droguri, nclusiv la alcool.
6. Hepatitele i cirozele se caracterizeaz prin coproporfirinii secundare cu izomeri
de tip I; intoxicaiile alcoolice i ciroza etilicprin izomeri de tip .
Rolul ficatului n metabolism
Ficatul are un rol metabolic multiplu. In condiii normale i n situaii patologice, el
constituie laboratorul central al organismului. n ficat, spre deosebire de orice alt
organ, interdependena metabolismelor hidrailor de carbon, ale grsimilor, proteinelor
constituie o condiie indispensabil a diversitii sale funcionale. Fondul metabolic
intracelular este extrem de larg implicat n activitatea specific a celulei hepatice, care are
o mare capacitate anabolic i o caracteristic energetic deosebit.
Hepatocitele sunt detaliat studiate datorit disponibilitii lor mari (chiar i la om),
precum i simplitii de obinere a elementelor ultrastructurale (nuclee, mitocondrii etc.).
Prin cele 2 tipuri de celule parenchimatoase i ale sistemului reticulo-histocitar
(macrofagal), ficatul exercit funcii complexe ce pot fi grupate n trei categorii mari:
participarea la procesele metabolice, secreia bilei i dezintoxicarea.
Materia obinut prin vena port, intrnd n contact cu celulele hepatice (n funcie
de natura celulelor hepatice), este supus unor prelucrri adecvate. Substanele inerte
i particulele cu dimensiuni mai mari se fixeaz n celulele Kupffer. Componentele chimice
sunt metabolizate la nivelul celulelor parenchimatoase.
Metabolismul glucidic (fig. 6.63).
Echilibrul dinamic la asigurarea Glicogcn
glucozei sanguine e realizat att prin

depozitarea acesteia n form de
glicogen (fosforilare determinat de
glucokinaz, enzim adaptiv), ct i G lucoza
de mobilizarea ei din aceste rezerve. untul

Exist glicogen liber uor extractibil pentozo-fosfa
S>0ADPI
i desmoglicogen greu extractibil. G licoliz
Depunerea lui ca rezerv i depleiunea
rezervelor din ficat par a fi n raport cu Trigliceride,
Nucleotide
creterea sau micorarea greutii fosfolipide p J vat

R ibozo-,^
ib o z o
5-fosfat
moleculare a polizaharidului, dect cu
modificrile numrului de molecule. A cizi *
grai Colesterol
Colesteri
I
I
|
Moleculele de dimensiuni diferite ale
glicogenului nu particip la metabolism t J w .A cetil - CoA
n mod identic.
S-a stabilit c ncorporarea glucozei
se realizeaz ndeosebi n moleculele
de glicogen cu greutate molecular
mic. Ficatul este:
singurul organ ce utilizeaz pentru
sinteza glicogenului, n afar de glu
coz, i alte hexoze, fructoza, manoza, F igura 6.63. Metabolizarea glucozo -6- fo sfa t n ficat
galactoza;
unicul organ ce asigur sinteza glicogenlui pornit de la acidul lactic, glicerol sau
de la ali metabolii intermediari provenii din lipide sau proteine (gluconeogenez);
n el degradarea glucozei, preponderent de la 50% la 75%, are loc pe calea
untrii hexozo-monofosfailor, cu sinteza simultan a NADPH i pentozelor;
n ficat se sintetizeaz heparina. La metabolismul glicoproteinelor sunt implicate
enzimele N-acetil-glucozoamin i N-acetil-galactozoamin kinaza.
Metabolismullipidic (fig.6.64)
Are loc realizarea urmtoarelor procese:
preluarea lipidelor alimentare, n
special a TAG (chilomicronii), a acizilor Lipoproteinele
grai, cu un numr mediu de atomi de carbon plasmei
n caten; Acizi grai

captarea acizilor grai provenii din sanguini
lipidele esutului adipos i transportai prin

intermediul albuminei serice spre ficat; Hormonii A cizii _
steroizi biliari V * NAPH
sinteza acizilor grai, cu formarea de t
t
TAG, pe care hepatocitul i ncorporeaz n Colesterol
pre- lipoproteine; t _ A ,cctil - Corpii
cetonici
remanierea metabolic a acizilor grai,
elo n g area lanului de carbon (C 24),
desaturarea acidului linolenic n acid
arahidonic; acidului oleicn eicosatrienoic;
1
^toulk V t
peroxidarea acizilor polinesaturai formai; 4^-*-
catabolismul acizilor grai prin - 02 HjO
C0 2 Fosforilarea oxidativ
oxidare, proces ce solicit prezena cami-
tinei,aCoA sintetizat din acidul pantotenic F igura 6.64. Metabolismul acizilor grai n ficat
i aminoacizi cu sulf;
formarea corpilor cetonici la -oxidare, reprezentnd substraturi cu valori energetice
mari utilizai extrahepatic (rinichi, miocard);
implicarea n ciclul glucozei a acizilor grai; importana biologic const n faptul
c excesul de glucoz favorizeaz sinteza TAG i inhib eliberarea acizilor grai, iar n
lipsa glucozei fenomenul se declaneaz invers;
toate organele sunt apte de a sintetiza fosfatidele proprii, ns numai ficatul le
poate remite plasmei. Aadar, fosfatidele plasmatice sunt de origine hepatic. Biosinteza
lor presupune etape anterioare la care se produc componentele structurale ale acestor
molecule complexe, n final cu participarea derivailor citidinfosfatului;
la utilizarea metabolic a glicerolului rolul principal const n posedarea unei glicerol
kinaze active;
n biosinteza, esterificarea i transformarea colestrerolului n acizi biliari 2/3 din
colesterol este de natur endogen i 1/3 e esterificat sub aciunea lecitin-colesterol-
aciltransferazei.
Metabolismul proteic
Contribuia ficatului la acest metabolism este de cea mai mare importan i se
exercit n dou direcii decisive pentru organism.
Metabolismul aminoacizilor (fig. 6.65).
Se produce degradarea acestora,
Nucleotide, I * . Proteinele
concomitent cu reutilizarea i integrarea h o r m o n i,
J singelul tisularcA
amoniacului n uree i glutamin (prin
Amino-
glutamin sintetaza, care constituie i acizi
mecanismul principal de neutralizare a
NH3la nivelul creierului). Etapa hepatic
specific const n transformarea omitinei
n citrulin, pe cnd modificarea n omitin Glucoza
potenial se realizeaz i la nivelul "P iruvat,'
rinichilor. intermediate CK
U nii am inoacizi au o u tilizare

metabolic specific: ncorporarea glico-
colului, transm etilarea m etioninei,
desulfurarea cisteinei, transaminarea A cizi grai
tirozinei, oxidarea acidului homogentizic,
formarea acidului urocanic, degradarea Glicogen
k in u re n in e i. A cidul c iste ic este
transformat n taurin (sub influena 4luoaza/ S i
L ..I iK r c b
aminoacid decarboxilazei). Aminoacizii
04 HjO
glucoform atori sunt utilizai, dup
Fosforilarea oxidativ
dezaminare, n gluconeogenez. F igura 6.65. Metabolismul aminoacizilor n ficat
Metabolismul proteinelor
Ficatul sintetizeaz, pe lng proteinele structurale proprii, o bun parte din proteinele
plasmatice, o parte din factorii proteici ai coagulrii, imunoglobulinele. Aici e i sediul
principal al catabolismului pirimidinelor, degradarea nucleoproteinelor pn la acidul uric,
sub aciunea xantin oxidazei (de altfel, are loc i metabolismul porfirinelor, cu sinteza i
degradarea lor pn la producerea bilirubinei). Nivelul bilimbinei totale e de 17 pmol/L,
85% din care fiind de origine eritrocitar (hemoglobina).
Funcia de dezintoxicare
Se exercit n dou moduri ce se pot asocia i completa reciproc: reducerea
toxicitii i mrirea capacitii de eliminare a produsului prin urin sau bil. n esena
sa, mecanismele mresc polaritatea substanelor, transformndu-le din compui liposolubili
n componente cu un grad mai nalt de hidrosolubilitate. Aceste procese au cteva
proprieti: nu sunt selective sau dirijate de o finalitate prestabilit i exclusiv (nu sunt
n mod obligatoriu detoxifiante). O bun parte din enzimele implicate activ la neutralizarea
substanelor strine au o specificitate nensemnat fa de substrat (enzimele normale).
Majoritatea medicamentelor i substanelor strine (xenobioticele), ns, sunt metabolizate
de enzime microzomale, mai puin numeroase i nespecifice. Sistemul este unic i universal,
cu implicarea oxidazelor ce posed funcii mixte. Normal, ele sunt n stare inactiv i
pot fi induse sub aciunea substanelor strine. O substan devine inactiv prin implicarea
mai multor mecanisme concurente, cu preponderena unuia sau altuia.
Dezintoxicarea se realizeaz prin 4 tipuri de reacii chimice: oxidare, reducere,
hidroliz, condensare (sintez). Ele se desfoar n 2 faze:
I) faza proceselor de oxido-reducere i hidroliz, finalizat prin hidroxilarea
substratului;
) faza de conjugare (sintez).
Faza I. E determinat de activitatea sistemului monooxidazic microzomal. Enzimele
la aceast faz utilizeaz lanul de transport electronic microzomal, alctuiesc un
sistem monooxidazic cunoscut sub denumirea de oxigenaze cu funcii mixte microzomale;
se mai numesc i hidroxilaze microzomale, datorit hidroxilrii finale a substratului.
Sistemul are urmatoarele componente:
a) Citocromul P450acioneaz n form oxidat i se cupleaz la substratul pe care
l va oxida, parcurgnd etape de evoluii confonnaionale ale hemoproteinei oxidate;
NADPH citocrom reductaza, flavin-enzim, participant la oxidarea NADPH;
NADPH citocrom P450 reductaz, donator de electroni, care asigur reducerea
citocromului P4j U
oxidat;
citocromul B5i NADH (donator al doilea de electroni).
b) Fosfatidil-cholina din componena membranei microzomale este esenial pentru
transferul de electroni de la NADPH citocrom reductaza la citocromul P450(necesar
pentru fixarea substratului i a induciei citocromului P450), elementul principal
constituindu-1 citocromul P...
450
Ciclul de reacii la care particip citocromul P450este urmtorul (fig.6.66):
1) legarea substratului la citocromul P450 , cu substituirea conformaiei hemopro-
teinei i transformarea ei din starea de spin sczut n cea de spin nalt;
2) reducerea Fe citocromic prin transferul de e' de la NADPH- reductaz;
3) activarea 0 2, cu formarea unui complex oxigen activ pn la anion Superoxid;
4) transferul atomului de oxigen, cu hidroxilarea substratului i eliberarea citocromului
P450la spin sczut.
Principalele reacii enzimatice ale fazei I sunt:
a) oxidarea: 1) hidroxilarea alifatic, aromatic, hidroxilarea mixt; 2) O- i N-
dezalchilarea; 3) N-oxidarea; 4) dezaminarea oxidativ; 5) alte forme de oxidare;
b) reducerea;
c) hidroliza.
Faza II. Mecanismul general al conjugrii const din reacii endergonice (cu utilizarea
ATP drept surs de energie). Spre deosebire de reaciile fazei I legate de specie,
cele din faza II sunt filogenetic diferite: la om are loc conjugarea cu acid glucuronic,
glicocol, glutamin.
Ambele faze sunt proprii membranei microzomale, iar n partea interioar e localizat
glucuronil transferaza.
1) Calea principal e glucurono-conjugarea. Sistemul care catalizeaz conjugarea
implic formarea acidului undindifosfoglucuronic. Enzima E, e UDPGA transferaza.
1. G -l-P + UTP UDPG + PP,
2. UDPG + 2NAD+ ^ UDPGA + 2NADH + 2H+
3. UDPGA+ 3XH ^ X-GA + UDP
(X poate fi: O, CO, NH, S). n cursul acestor reacii se efectueaz inversiunea
legturii glucuronozidice (tipul a trece n ) a conjugatului care este hidrolizabil pentru
-glucuronidaz. n ficat glucurono-conjugarea se diminueaz prin efectul pirofosfatazei
microzomale care hidrolizeaz UDPGA la ac. 1-P-glucuronic i prin -glucuronidaza
lizozomal care hidrolizeaz O-glucuronaii.
2) Conjugarea cu su lf (3-P-adenosina-5'-P-sulfat - PAPS):
ATP + SO 2_ AT- sliLfura7A ps (adenosina-5-fosfosulfat) + PP
M g2t 1
APS + ADP APinaza 8 +
PAPS + Fenol ^ F e n i ls u l f a t + PAP (acid 3-fosfoadenilic)

3) Conjugarea cu aminoacizi: glicin i glutamin
a) glicina e utilizat pentru acizii aromatici, heterociclici etc:
ATP + CoASH *- AMP + CoA-S-pirofosfat
CoA-S-pirofosfat + Acid benzoic Benzoil-S-CoA + PP.
Benzoil-S-CoA + Glicocol Acid hipuric + SH-CoA
(Glicocolul este de origine, preponderent, hepatic, iar rcacia decurge n rinichi i
parial n ficat).
b) Grupa NH2 a glutaminei formeaz o grupare amidic cu grapa COOH a
drogului.
4) Acilareaprin transacilare normal s t produce n ficat. n aa mod se detoxific
sulfamidele.
Nivelul de metabolizare a medicamentelor poate fi sczut sau inhibat. Activitatea
poate fi i prelungit. Foarte important este inducia enzimatic microzomal. Cel mai
profund este studiat fenobarbitalul, inductor al glucuronil transferazei, al nivelului
citocromului P450(enzime implicate n metabolizarea medicamentelor).
Patologia biochimic a fica tu lu i poate fi congenital i dobndit. Prima se
exprim prin variate deficiene enzimatice, pe cnd a douaprin sindromul icter, care
apare la mrirea concentraiei biiirubinei serice peste 1,2-2mg%, la care pigmentul
ptrunde n esuturi. Icterul este expresia unui exces de substane ce depete capacitatea
de excreie sau a unei leziuni hepato-celulare, precum i a unui obstacol n calea
scurgerii bilei.
Colestaza reprezint schimbri biochimice care se aseamn cu cele ale icterului
posthepatic, fosfataza alcalin seric fiind puin ridicat.
Icterulprehepatic e determinat de stri hemolitice (bilirubina indirect, neconjugat).
Icterul neonatal este, parial, de origine hepatic i e provocat de capacitatea
redus a ficatutui de a excreta bilirubina n bil incapacitatea de a sinteza UDP-GA,
dar i o activitate redus a glucuronil-transferazei.
Icterul hepatocelular este cauzat de infecia viral sau toxine. Patogenia icterilor
este redat n figura de mai jos (6.67).
Hemolitic O bstru ctiv H epatocelular N eonatal

Liza eriôcitelor Eritrocite, hepatocite Eritrocite .^hepatocite E ritrocite^hepatocite
Hb Hb, citocromi Hb, citocrom i Hb, citocromi
-* A A - A A AA |^->-AA
Hem Hem Hem Hem
i 1 i
B iliverdin^ CO, Fe2+ Biliverdina, , Fe2t Biliverdina, , Fe+ Biliverdina, , Fe2+
i
i i
Bilirubina Bilirubina ]
fi Bilirubina ! Bilimbina
i i T
Bilirubin glucuroni' Q Q Bil.glucuronid 1
t
Bil.glucuronid Bil.glucuronid
Biliijibina Bilinibina Bilirybina -S
B iliru ^n a
U robilinogen X 1
Urobilinogen Urobi Imogen Urobilinogen e
Stercobilina , , ,
..1
Urobilin: Stercobilina U robilina Stercobilina Urobilina Stercobilina Urobilina
Figura 6.67. Patogenia icterilor. reprezint localizarea blocului respectiv
Icteruljuvenil (hiperbilirubinemia familial, sindromul Gilbert) e cauzat de un deficit

al proteinei transportatoare de bilirubin, care implicit cauzeaz deficitul de prelucrare
a biiirubinei de ctre hepatocit. E un icter hepatic premicrozomal, la fel ca i sindromul
Crigler-Najjar, provocat de absena congenital a UDP-glucuronil tTansferazei.
n unele boli genetice (s.Dubin-Johnson) se constat defect al secreiei bilirubinei
conjugate din celulele hepatice n canaliculele biliare cu sau far formarea unui pigment
brun (s.Rotor).
Sindromul Arias (icter de lung durat neonatal) este corelat cu prezena n laptele
matern a unui steroid, inhibitor al conjugrii bilirubinei. Bilirubina neconjugat poate
conduce la icterul nuclear.
Dintre tulburrile metabolice nnscute se evideniaz boala Wilson (degenerarea
hepato-lenticular), provocat de deficitul sintezei ceruloplasminei (cupru oxidaza),
producnd n consecin afeciuni cerebrale (lenticulare), corneene, renale, aminoacidurie,
fosfaturie, depozitri de cupru n esuturi.
Explorrile hepatice se bazeaz pe cele 4 sindroame proprii patologiei hepatice:
excreto-biliar, hepato-priv (insuficiena celular), citoliz i inflamator. Cele mai utilizate
probe n diagnosticul i pronosticul lor sunt:
X) Excreto-biliar. bilirubina i raportul ei; fosfataza alcalin cu izoenzimele sale;
LAP-leucin aminopeptidaza; 5'-nucleotidaza i y-glutamil transpeptidaza.
2) Hepato-priv. proteinemia total, albumina seric, factorii de coagulare, colesterolul
liber, total i esterificat, proba QuicK.
3) Citoliza: sideremia, cupremia, enzimele plasmatice SDH, OCT, arginaza,
F-l-P aldolaza, guanaza, LDH5 indicator de severitate al afeciunilor i GLDH
(le z iu n i m ito c o n d ria le ) GPT, G O T i ra p o rtu l lui S chm idt: G O T+
GPT/GDH (glutamat dehidrogenaza) egal cu 5-15 (icter obstructiv), 30-50 (hepatita
cronic), 50 (hepatita acut).
4) Inflamator: disproteinemia, cu scderea fraciei albuminice i creterea i y-
globulinelor: imunoelectroforetic (crete IgM n procese acute i IgAn cronice).
Se determin i coeficientul de Rittis (GOT/ GPT), normal egal cu 1,3 3.
CAPITOLUL VII. SISTEMUL HORMONAL
VITAMINELE
NOIUNI GENERALE
Existena omului, ca specie uman, e dependent de posibilitatea lui de a-i pstra
funciile vitale i capacitatea de reproducere. Aceste procese necesit o reglare
judicioas a homeostazei, la care particip diferite sisteme fiziologice - cardiovascular,
pulmonar etc. Remiterea informaiei, coordonarea diferitelor procese necesit sisteme
de comunicare intercelulare. Acest rol revine sistemelor nervos i hormonal, care, fiecare
rin mijloacele proprii, dar interdependente, coordoneaz mesajele diverselor celule. i
dac sistemul nervos utilizeaz transmitori chimici eliberai de-extremitile nervoase
din vecintatea celulelor-int, apoi glandele endocrine elimin hormonii n snge, n
sistemul circulator. Aceste semnale reglatoare sunt transmise la alte esuturi-int, potenial
programate pentru interceptarea lor.
Reglarea proceselor intracelulare poate fi att simpl, ct i complex. Reglarea
! simpl, examinat deja, este determinat de substanele chimice ce particip la
j aceast reacie - retroinhibiia enzimelor.
Reglarea mai sensibil e i mai complex, presupunnd participarea unor liganzi
reglatori celulari, care nu rezult din proces i nici din substanele direct reglate. Legtura
lor vizibil cu substanele chimice participante la reacie e probabil. Pentru ca acest
j ligand s se impun efectiv n reglarea complex e nevoie de modificarea concentraiei
lui n anumite condiii ale mediului extern care ar crea prioriti vdite pentru organism.
i dac exist mecanism de reglare a nivelului ligandului de stimuleni adecvai, devine
oportun i mecanismul efectiv de stimulare a reaciei respective, ce const n interaciunea
ligandului cu diverse molecule din celul.
Evoluia ofer un reglator-cheie al metabolismului -AM Pc, un mediator al efectului
hormonal i al semnalelor nervoase ale omului.
Intre sistemul endocrin i cel nervos exist multiple interdependene, complicn-
du-seodatcu evoluia organismelor. La etapele anterioare exista o legtur direct
ntre sistemul nervos central, celulele periferice i neuromediatorii, ce se secretau n
vecintatea celulei-int. Asemenea mecanism persist ca sistem nervos autonom i la
organismele mai superioare. O dat cu evoluia speciilor, ns, el devine insuficient pentru
asigurarea supravieuirii speciei. Substana produs de ctre corpul neuronilor printr-
un curent axoplasmic ajunge n extremitatea axonal, eliminndu-se n snge i acioneaz
asupra unei celule situate la distan. Semnalul neurocrin, neurohormon, ce transform
activitatea nervoas n descrcare hormonal, constituie vasopresina, oxitocina
(neurohipofiza) sau catecolaminele stratului medular al suprarenalei. Unele celule cu
capacitate de neurosecreie se deplaseaz n alte regiuni, pstrndu-i capacitatea de
neurosecreie sau de secreie a peptidelor - mai frecvent n intestinul subire. Astfel se
explic prezena somatostatinei, peptidei intestinale vasoactive, neurotenzinei,
substaneiP n intestin i pancreas; a granulelor neurosecretoare n bronhii: celulele
paracrine (hormoni locali) regleaz activitatea celulelor nvecinate. Hiperactivitatea lor
cauzeaz apariia tumorilor hormono-active ale pulmonului, intestinului i pancreasului.
Complexitatea organismelor necesit crearea unei concentraii substaniale de hor
moni n anumite regiuni, fapt ce detemiin localizarea glandelor corespunztoare deta
at de sistemul nervos central. Aparmijloace auxiliare de reglare a acestor glande, ce
formeaz organe productoare de hormoni intennediari, localizate n preajma sistemului
nervos centra] i supravegheate de acesta. Astfel, adenohipofiza se posteaz lng
sistemul nervos central, ce permite secreiei sale hormonale s se afle sub controlul
rilizing-factorilor sintetizai de creier.
Procesul evolutiv a condus la formarea i a altor mecanisme, care au favorizat
integrarea sistemului endocrin:
a) au aprut sistemele venoase port (ficat i hipofizar), ce au permis localizarea
efectului hormonal n corespundere cu concentraia i specificitatea receptorilor tisulari;
b) a fost asigurat gradul diferit de sensibilitate a hormonilor la neutralizare n plas
m, fapt ce joac un rol primordial n determinarea duratei efectului hormonal. Hormo
nii secretai n sistemele port au o perioad mic de njumtire. Rezult o eliminare
rapid i efectiv a hormonului, n condiii de un surplus al lui n sistemul circulant,
contribuind la neutilizarea lui n organe sau celulele-int.
Termenul hormon a fost utilizat pentru prima dat, n 1904, de ctre W.Bayliss i
E.Starling pentru a descrie
secretina, substan secre
tat de duoden i stimu H ip ofiza
Hipotalamus
latoare de secreie exocri-
n a pancreasului. Aceast
lucrare a conturat concep
ia vital, conform creia
Tiroida
hormonii:
1) sunt molecule sinte
tizate de esuturi speciali
zate (glande);
2) sunt secretai direct
n snge;
3) m odific specific Suprarenalele
activitatea unor organe sau Pancreasul
celule-int. Rinichii
Hormonii, ca mesageri
chimici, coordoneaz acti
vitatea celulelor ntr-un or
ganism multicelular. Ovarele
n 1855, KJod Bernard
utilizeaz termenul glan
d cu secreie intern, ce Testiculele
elimin secreii direct n sn

ge, fr a dispune de Glandele majore cu secreie intern
Sem nale de origine v ariat
|16&
Sistem ul nervos central
4 4 4
H*
R elizing factori
' '

-V 'K*
^ .
/
/
Adenohipofiza

* i \ \
Corticotropina T iro tro p in a H .lu tein izan t S o m a to tro p in a
(A C T H ) (T S H ) (FSH) (L H ) (GH)
M 4/m M, 28,000 Mr 24,000 Mr 20,500 Mt 21,500
P aratiro id cle C ortico Ovarele

Testiculele
esticulele

suprarenala
i l l *
, Cortizol Tiroxina(T) Estradiolul Testosteronul
Parathormonul Aldosteronul . ,- r , D , testosteronul
_____ . Trnodtironina (T.) Progesterona
(PTH) Corticosterona 1
i l l I, 4
0.... t u - M uchii, O rganele reproductive Fie
R inichi, esuturile flcatu, ) I <esutun
Sistem ul endocrin major i esuturile-int

n .' ;."- ,
Neurohipofza Celulele paracrine - celule
P ro la c tin a O x ito cin a V asoprcsina P cp tid clc C a lcito n in a

(P R L ) (A D H ) activc
M, 22,000 .M, 1,007 M t 1.040
Glucoza Sanguin
m *
Insulina
Glucagonul E p m c frin a
S o m ato statin a
G landele M uscu atura A rtcriolele

m am are neted, S -
X-
ficatul1
canale corespunztoare adecvate.
Centrul coordonator al sistemului endocrin este o regiune specific a creierului -
hipotalamusul care recepioneaz i integreaz semnalele din SNC. El elimin hormoni
reglatori, care n adenohipofiz (localizat sub hipotalamus) stimuleaz sau inhib sinteza
unui anumit hormon. La stimulare, hormonii hipofizari, prin snge, ajung la destinaie - la
un ir de glande endocrine de alt rang (suprarenale, tiroid, sexuale, pancreas), care, la
rndul lor, elimin hormoni specifici.
Circulndprin snge, sunt captai de receptori specifici, localizai att n exteriorul, ct
i n interiorul celulelor-int, care conin mesageri secunzi, ce transmit semnalul de la
receptor la o structur intracelular specific, cu funcia de inta final n efectul hormonal.
Activitatea sistemului endocrin se regleaz dup legiti similare principiului retroinhibiiei.
Somatostatina secretat de hipotalamus sau pancreas inhib secreia tiroliberinei
(legtura invers intern). Activarea diferit a acestor sisteme endocrine e dependent
de o reea com plicat de
interlegturi reglatoare.
Proprietile comune ale
hormonilor
"O
O
c 1. Hormonii dup structur
se mpart n trei clase:
c a) hormoni peptidici sau
2
polipeptizi, conin pn la cteva
6* sute de resturi aminoacidice;

resturile terminale sau alte
resturi ale aminoacizilor sunt
modificate prin prelucrri
postraducionale - hormonii
hipotalamusului,hipofizei i, de
asemenea, insulina, glucagonul,
hormonul paratireotrop;
b) hormoni de structur
ste ro id ic - an d ro g e n ii,
estrogenii, hormonii cortexului
suprarenalelor, uor solubili n
lipide;
Reglarea feedback a secreiei hormonale c) h o rm o n i co m p u i
hidrosolubili, cu o mas
molecular mic, ce conin aminogrupe - catecolaminele i hormonii tireoidieni.
2. Hormonii acioneaz n concentraii mici, posednd funcii fiziologice majore. Nivelul
bazai n snge e foarte m ic -n limitele 10'6M - IO'12M. Hormonii se identific i se
determin cantitativ foarte problematic. Glandele reacioneaz la stimuleni printr-o
anumit sporire a concentraiei - la cota de mii de ori, dar de o durat mic - dup
finalizarea efectului excitant. Hormonii, imediat ce i-au ncheiat funcia, sunt rapid
inactivai de enzime.
Catecolaminele i hormonii peptidici au o perioad de njumtire de durat m ic-
cteva minute, pe cnd cei de natur steroidic i tireoizii - de la 30 minute la cteva zile.
Acionnd lent, particip, mai ales, la asigurarea reglrii tardive a metabolismului.
Hormonii polipeptidici i catecolaminele au un efect imediat i determin induc
ia reaciilor momentan. Adrenalina dilat rapid bronhii, pe cnd glucocorticoizii vor
efectua aceeai reacie abia dup cteva ore. De aceea, pentru a asigura modificri urgente
i spontane n cantitatea hormonilor peptidici i a catecolaminelor, e oportun i binevenit
expulzarea lor rapid din snge.
3. Mecanismele de sintez i secreie:
a) Precursorii hormonilor peptidici sunt molecule mult mai mari sintetizate n
glandele corespunztoare, denumiteprohormonr, uneori, ca rezultat al sintezei ribozo-
male, se produc proteine i mai mari - preprohormoni. La formarea hormonilor, o
importan mare o au modificrile posttranslaionale ale produsului primar, care
const din proteoliz i glicozilare. De obicei, este detaat captul Nhidrofob al moleculei
necesar pentru ptrunderea lui n reticulul endoplasmatic. Drept exemplu servesc
modificrile preproinsulinei sau preprolactinei, preproparathormonului (fig.7.1).
Este valabil i proteoliz de alt tip-A C T H , ce conine 39 aminoacizi, formndu-
se dintr-un precursor preproopiomelanocortina ce include 285 aminoacizi. n proteoliz
Figura 7.1. Precursorii unor hormoni peptidici

dat se mai formeaz -lipotropina, -endorfina, encefalinele, A i - hormoni
melanostimulatori i cteva proteine mai mici. Aadar, o singur molecul de mRNA
asigur formarea mai multor hormoni.
Unii hormoni, precum sunt ACTH, TSH, FSH, LH etc., se supun glicozilrii.
Componentul glucidic micoreaz viteza degradrii hormonului n snge, mrind durata
efectului biologic.
Tema Enzimele a elucidat transformrile zimogenelor neactive n forme active,
unde depozitarea hidrolazelor, n fonne neactive, constituie un mecanism de prentmpi-
nare a efectului distructiv al enzimelor asupra celulelor care le sintetizeaz. Atare pruden
fa de hormoni este inutil. Prohormonii reprezint o form de rezerv potenial a
hormonilor i, posibil, o mrturie a evoluiei, dac inem cont n acest context c unii
hormoni de natur peptidic manifest o activitate biologic intensiv, iar n unele
cazuri, drept rezultat al proteolizei specifice, produc un ir de substane cu diverse
efecte biologice.
Aceast form e reprezentativ i din motiv c unor hormoni (proinsulina, proparat-
hormonul) le este proprie o activitate slab i, n condiii de proliferare a structurii
endocrine (adenom), crete cantitatea lor. Chiar i prin metode modeme de investigaii
e problematic i dificil de -i diferenia unul de altul (prohormon-hormon), cu consecin
ele respective.
Referitor la steroizi. Modificrile metabolice iniiale de colesterol creeaz posibiliti
pentru fonnarea androgenilor, exstrogenilor etc. Modificrile rezid n scindri catenare,
hidroxilare, reducere, aromatizare. Caracterul hormonului final i specializarea esutului
capabil de sintez e determinat de concentraia enzimelor, diferit n esuturile corespun
ztoare. De exemplu, spre finalul sintezei de cortizol se formeaz i se elimin n snge
progesterona, dezoxicorticosterona, corticosterona etc. De aceea, secreia de esut
specific al ctorva steroizi este o regul. Dac se resimte deficitul de enzim participant
la sinteza hormonal, n snge sporete cantitatea precursorilor ce conduc la modificri
nefaste.
Hormonii tiroizi, tiroxina i triiodtironina se sintetizeaz din tiroglobulin - protein
ce conine aproximativ 5000 aminoacizi cu 120 resturi de tirozin. Grupele fenol sunt
iodatc diferit, condensate i dup o proteoliz se elibereaz T4 i T3. Molecula tirozinei.
fiind hidroxilat i decarboxilat, formeaz noradrenalina, ultima fiind metilat - adrenalina,
n general, glandele endocrine secret hormonul ntr-o form activ n celulele-int.
Numai n unele cazuri ea se formeaz la metabolizarea hormonului n esut: testosteronul
n esutul periferic se modific la dihidrotestosteron, care determin majoritatea
efectelor hormonale. Vitamina D, forma activ, este 1,25-dihidroxicolecalciferol. Hormon
activ tiroid e T3, care se formeaz la monodeiodarea T4n esuturile periferice.
Mecanismele de secreie nu sunt suficient studiate. Hormonii se acumuleaz n acele
esuturi, unde se sintetizeaz. Se concentreaz n granule formate din reticulul
endoplasmatic.
Alipirea hormonilor la membrana celular provoac eliminarea lor n snge (fig.7.2).
m RN A
Proteinaza Membrana
specific plasmatic
Citozol
Ribozomul
twww* * * y tf9 * 9 r n tiifi j rrtTIVTrtfWtftur

'
^ > < 'V
Peptidul Peptidaza b ixO & tf
semnal
Prtlllonnon
.....
Reticulul endoplasmatic
Aparatul
Golgi
F igu ra 7.2. Schema biosintezei hormonilor peptidici
4. Majoritatea hormonilor ce circul prin snge se fixeaz de proteinele plasmei.

Procesul de fixare nu e decisiv pentru efectul hormonal. Mai activ este hormonul liber,
dar nu cel legat de proteine. Procesul de coaptare la proteinele plasmei diminueaz
efectul hormonal, dar nicidecum nu-1 intensific.
Proteinele cu o afinitate mare fa de hormon separ o parte considerabil din
cantitatea acestuia n plasm. Fixarea nu e rigid. Cnd solicitarea de hormon crete,
are loc disocierea hormonului din acest complex. Hormonii tiroizi se fixeaz de prealbu-
min i de o globulin specific, o alt globulin - transcortina - fixeaz cortizolul.
5. Specificitatea hormonilor fa de celulele-int e determinat de prezena n celule
a unor proteine specifice - receptorii, componeni ai membranei celulare. Dup structur
sunt glicoproteide (GP). Specificitatea e asigurat de componentul glucidic al GP. Un rol
deosebit l au i fragmentele glucidice ale gangliozidelor, ce se localizeaz n bistratul
lipidic.
Fiecare hormon are o afinitate mare la receptorul su specific. Unii din hormoni
(hidrosolubili) i au receptori n membrana celular, alii - intracelular. Receptivitatea
major creeaz posibiliti pentru fixarea hormonului la concentraii foarte mici.
Interaciunea hormon-receptor este asigurat de fore slabe, necovalente, iar
specificitatea - de complementaritatea steric a hormonului i a situsului de legare de pe
receptor (legarea e reversibil). Interaciunea reprezint un fenomen de saturaie.
Receptorii se afl n stare dinamic, numrul lor e variabil n raport cu diveri factori.
Nivelul hormonului regleaz numrul de receptori. Hormonii ce au un precursor
comun evolutiv (omologi) regleaz sensibilitatea celulelor la el- negativ, determinat
de micorarea numrului de receptori (insulina, somatomedina, glucagonul). Aceti homioni
le pot reduce sensibilitatea, influennd asupra componentelor din reaciile distanate de
receptori. Reacia de acest tip servete drept mijloc de adaptare la un surplus de hormoni,
la stimularea glandelor respective. Un exemplu elocvent este rezistena mare a sistemului
cardiovascular la surplusul de catecolamine i angiotenzin sau diminuarea sensibilitii
esuturilor periferice la insulin (ca rezultat al micorrii numrului de receptori). Dar i
viceversa -prolactina provoac o cretere a numrului de receptori n glanda mama
r; angiotenzina mrete sensibilitatea suprarenalelor.
S-a observat i s-a demonstrat c multe esuturi hormonosensibile se caracterizeaz
printr-un surplus de receptori - rezerv, ce asigur posibilitatea sporirii sensibilitii
celulelor-int la aciunea concentraiilor minime de hormoni. n aa caz factorii-limit se
localizeaz distanat de receptori. ns cnd fixarea hormonului i reaciile biologice sunt
corelate perfect, anume atunci receptorii limiteaz activitatea celulelor.
Complexul hormon-receptor poate fi intemalizat n interiorul celulei. De regul,
procesul nu e fenomen obligatoriu pentru efectul hormonal, n special pentru hormonii ce
activeaz prin adenilatciclaz, dar joac un anumit rol pentru transferul hormonului n
locusul intracelular de aciune. Asemenea proces contribuie la degradarea hormonilor
i receptorilor.
Protein Celula-int N u c le u
Complexul
hormon - protein,
plasmatic
F igura 7.3. Mecanismul de aciune al hormonilor steroizi (posibil i al tiroizilor)

Hormonii liposolubili ptrund n citoplasma celulei-int i se fixeaz de proteinele
citoplasmatice, fiind deosebit de compatibili cu acestea. Interaciunea hormonului cu
receptorii rezult cu modificri confonnaionale ale ultimilor, fapt ce permite legarea cu
receptorii nucleici. Aceste complexe sunt transportate n nucleul celulei, unde manifest
compatibilitate deosebit fa de cromatin. Locusurile de fixare pe cromatin sunt
determinate de fragmentele DNA, ns procesul de fixare e dependent de unele proteine
cromozomiale nehistonice. Schimbnd accesibilitatea DNA pentru transcripie, hormonii
influeneaz asupra sintezei mRNA, adic acioneaz efectiv la nivelul genomului. Steroizii
determin inducia sintezei unei proteine noi sau amplific sinteza celor existente
(fig.7.3).
Ce soart anume are steroidul sau ali hormoni dup ncheierea funciei nu e
limpede.Unii hormoni, cu excepia receptorilor membranari, atest i locusuri specifice
n nucleul celulei - insulina, tiroxina, acetia posednd cte dou mecanisme de
aciune.Receptorii la tiroxin se manifest n cromatin, indiferent de prezena sau lipsa
hormonului. Reacia la aceti hormoni evolueaz lent i ei particip la modularea
metabolismului, pe o durat lung.
M ecanismul molecular al aciunii hormonilor. M esagerii secunzi.
Sunt atestate trei ci de efecte specifice hormonale:
1. modificri n penneabilitatea membranelor celulare;
2. modificri n viteza reaciilor fermentative;
3. accelerarea sintezei noilor molecule de enzime.
n studiul mecanismelor de aciune a hormonilor un rol important i revine lui
E.Sutherland. n anii 50, el studia mecanismul de aciune a adrenalinei i glucagonului la
scindarea glicogenului i fonnarea glucozei n ficat. Anume lucrrile sale au stabilit c
fosforilaza se activeaz la fosforilare i se inactiveaz la defosforilare (primul exemplu de
activare covalent a enzimelor). S-a demonstrat c efectul hormonal are loc i n
homogenatul incelular, anterior se considera c honnonii sunt capabili s acioneze numai
asupra celulei-int intacte. S-a mai elucidat c nu toate componentele sistemului celular
sunt solubile. Dup centrifugarea homogenatului celular hepatic, reacia de rspuns la
hormon dispare, ceea ce denot c ingredientul esenial al sistemului hormonal este
localizat n fracia membranar. ntr-adevr, efectul hormonal se restabilea prin adaosul
fraciei particulelor subcelulare la supernatant. Acest factor mai e i un activator termo-
stabil. Analiza chimic a demonstrat c este, de fapt, un adeninribonucleotid cu proprieti
neordinare.
Alt savant, David Lipkin, capat un nou nucleotid din aciunea hidroxidului de
bariu asupra ATR Acest compus - AMPc sau adenozin-3,5'- monofosfat- se formeaz
n celul din ATP, sub aciunea enzimei membranare adenilatciclazei (E,).
Ei +
ATP AMP c + PPi + H
Mg
Drept surs pentru sintez servete hidroliza pirofosfatului.
Ofosfodiesteraz (E2) specific scindeaz AMPc, hidroliznd-o la AMP.
E, +
AMPc AMP + H
H20
Este o reacie cu nivel de energie liber evoaluat la 12 kcal/mol. n absena
fosfodiesterazei, AMPc este un compus foarte stabil.
Investigaiile lui E.Sutherland au permis acceptarea concepiei despre rolul AMPc ca
mesager secundar al mecanismului de aciune a unor hormoni, unde drept prim
mesager e considerat nsui hormonul. Sensul concepiei lui Sutherland const n urm-
toarele:
1) membranele plasmatice celulare conin receptori la hormoni;
2) interaciunea hormonului cu receptorul specific stimuleaz adenilatciclaza la fel
fixat pe membran;
3) ca rezultat al activrii ei n celul, sporete concentraia de AMPc;
4) efectul AMPc se produce n interiorul celulei i rezid n modificrile de vitez a
unui sau a mai multor procese.
Particularitatea esenial a acestei ipoteze const n faptul c nu presupune transferul
hormonului n celul. Efectul se limiteaz la membrana celular. Concepia a fost
experimental argumentat de mai muli savani. AMPc e mesager secundar nu numai la
aciunea adrenalinei i glucagonului, dar i a altor hormoni ca: ACTH, FSH TSH,
LH, noradrenalina (NA), parathormonul, calcitonina etc. De altfel, AMPc se implic
efectiv n multiple procese biologice.
Cum anume are loc procesul de interaciune dintre hormon i receptor, n
urma cruia se produce o activare a moleculei adenilatciclazei? Locusurile de fixare
a hormonilor sunt situate pe partea exterioar a membranei, pe cnd locusurile catalitice
ale adenilatciclazei sunt orientate spre citozol. Acestea constituie proteine diferite ce
se pot separa prin centrifugare. Fixarea e determinat de interaciuni hidrofobe i elec
trostatice. Hormonul capt nainte de fixare o anumit conformaie tridimensional
pentm insulin i spiralat - pentru glucagon etc.
Complexul hormon-receptor influeneaz considerabil asupra adenilatciclazei (AC),
dei nu direct, ci printr-un intermediar, mai bine zis prin diferite proteine intermediare,
denumite G-proteine ce fixeaz guanin nucleotidele. Aceste proteine reglatoare pot fi
active i inactive i n ultimii ani li se acord o atenie sporit. G-proteinele sunt situate
n partea intern a membranei plasmatice. Molecula e compus din trei subuniti -
catene polipeptidice cu valoare (mrime) descrescnd a , , . n toate G-proteinele
separate a subunitile sunt diferite, i - n u neaprat specifice. La diverse a
subuniti pot fi aceleai sau diferite i perechi. Sunt descrise 5 tipuri structurale i
mai mult de 10 tipuri y, ce pot conferi mai bine de 1000 de combinaii.
Cum G-proteina i realizeaz funcia? n stare de relaxare, subunitile formeaz
un complex, unde GDP e fixat de a-subunitate. La fixarea unui mesager primar dc
receptor, conformaia ultimului se modific, legndu-se cu G-proteina. Ca rezultat al
accstci interaciuni, a-subunitatea elibereaz GDP. GTP, fiind n concentraie mai mare,
ocup locusul de legtur eliberat i GTP
modific forma subunitii oc, activnd-
o. Deja activat i fixat cu GTP, a
subunitatea se desprinde de complex
i, prin difuzie, se deplaseaz pe
partea intern a membranei plasma
tice pn la fixarea cu efectorul, de
exemplu, cu adenilatciclaza. In mod
normal, peste cteva secunde a-
subunitea hidrolizeaz GTP la GDP
i se inactiveaz, apoi succesiv se des
prinde de la efector i se asociaz cu
subunitile i libere (fig.7.4).
Aadar, G-proteinele servesc
drept comutatori, precum i ca timeri
F igu ra7.4. Ciclul de activare i inactivare a proteinei Gs
ce stabilesc momentul i timpul
activitii cilor de semnalizare. Durata de timp e determinat de viteza de hidroliz a
GTP.
G-proteinele posed capacitatea de a amplifica semnalele. Hidroliza GTP e reglat
i de proteinele ce nu particip la transmiterea semnalelor. Aceste proteine, mpreun
cutransmitorii de semnale, formeaz superfamilia GTP-azelor care particip la sinteza
proteinelor i la reglarea vitezei mitozei celulare. Rolul-cheie l joac subunitatea a.
Apare ntrebarea: oare perechile i particip n reglarea efectorilor? Se profileaz
ideea c i complexul -y funcioneaz ca un tot ntreg n procesul de transmitere a
semnalelor: pe unele le activeaz, pe altele le inhib, datorit interacionrii cu
diferite G-proteine. Precum se constat, are loc un schimb de subuniti (fig.7.5).
Metoda cristalografiei cu raze X ofer posibilitatea studierii locusurilor de interac
iune molecular. S-a stabilit c n molecula receptorilor ce interacioneaz cu G-
proteinele, se conin 7 locusuri bogate n aminoacizi hidrofobi, care formeaz o pung
de captare a mesagerilor primari. Unele poriuni ale receptorilor, ce ies la citozol i
racordeaz locusurile hidrofobe, reprezint nite inele, ce se unesc cu G-proteinele
specifice. Ultimele n-au locusuri hidrofobe puternice. S-a constatat c y-subunitatea
se asociaz cu o molecul lipid-izoprenoid, pc cnda-subunitatea se fixeaz n
membrane cu ajutorul acidului miristinic. Aceste lipide acioneaz ca nite ancore,
fixndu-le (G-proteine) n membran. Sunt atestai i indicii referitori la conformaia i
structura adenilatciclazei: are 12 locusuri transmembranare ce formeaz un canal pentru
transferul ionilor, posed 2 domenii hidrofile orientate spre citozol, necesare pentru sin
teza AMPc. Capacitatea receptorilor, G-proteinelor, efectorilor de a interaciona cu
diferite molecule intracelulare confcr celulei, la diferite etape, proprietatea dc a alege
efectul respectiv din multiplele ci poteniale de transmitere a semnalului. Posibil c
membrana celular reprezint un sistem de comutare a variatelor semnale din mediu,
ceea ce determin diferii mesageri s se ralieze la recepionarea specific de ctre
celule a modificrilor din mediul extern (fig.7.6).
Inhibiia cii
de activare
musculare
Amplificarea
F igura7.5. Amplificarea cii de transmitere a semnalului n m uchiul cardiac (a) poate f i parial inhibat
de schimbul de subuniti (b). Contraciile se majoreaz la activarea proteinei Gs de -subunitate. Contraciile
diminueaz cnd -subunitatea din proteina C. deschide canalul de K', ultimul prsind celula. Schimbul
de subuniti conduce la diminuarea contraciilor, dac i subunitile proteinei G( suntasociate cu a-
subunitate din Gs, se blocheaz efectul asupra adenilatciclazei.
Studierea mecanismelor de transfer al semnalelor transmembranare are o importan

practic evident.
Vibrionul de holer, ptrunznd n celulele intestinului, blocheaz a-subunitatea a
Gs-proteinei ( ADP-ribozilare), astfel GTP nu se hidrolizeaz n GDP. n celule se acu
muleaz AMPc, ce cauzeaz o eliminare n lumenul intestinal a unei mari cantiti de ap
i electrolii (Na), favoriznd dehidratarea i deionizarea organismului.
F igura 7.6. Membrana celular. Reprezint un sistem de comutare compus, conform necesitilor celula
re. Semnalele transmise prin diferii receptori (1,2, 3) au acelai efect, dac activeaz aceeai G-proteini
a; sem nalul transmis prin receptorul 3 produce diferite efecte, dac activeaz diferite G-proteine (b.c),
sau G-proteina activeaz diferii efectori (4, 5).
O toxin asemntoare elimin i bacilul tusei convulsive. Toxinele atac celulele,
provocnd imunodeficitul nsoit de o tuse caracteristic. La maladiile cancerigene un
rol decisiv l au formele mutante de G-proteine (tumori ale hipofizei); n gena ce codific
a subunitatea sunt depistate mutaii i, ca rezultat, interaciunea ei cu efectorii are loc
timp de minute, dar nu de secunde, ceea ce provoac o nmulire intensiv. Se studiaz
rolul G-proteinelor la depresia psihic, insuficiena cardiac, diabet.
Interaciunea hormon-receptor pn n prezent nu e studiat definitiv. Dup eluie,
hormonul i pstreaz proprietile sale biologice active. O parte din acest complex
poate fi intemalizat i supus degradrii sub aciunea enzimelor lizozomale. La o eventual
disociere incomplet, parvine o ocupare a receptorilor, cauznd potenial o pierdere
funcional a receptorilor, adic o micorare a locusurilor de fixare a hormonilor.
Desemnarea AMPc ca substan reglatoare are o istorie evolutiv evident. La
bacterii ea servete ca un semnal al foamei i al lipsei de glucoz, conducnd la sinteza
altor enzime, cu utilizarea altor surse de energie. La mamifere i pstreaz funcia
tradiional, dar mai stimuleaz i proteinkinazele. La organismele superioare e
mesager n procesele intracelulare.
Care-i cauza transformrilor: de la comunicaia extracelular la mesager
intracelular? Presupunem c un rol deosebit aici l-au avut urmtorii factori:
1. AMPc n totalitate se formeaz din ATP, ca rezultat al unei reacii simple n baza
hidrolizei de pirofosfat.
2. Fiind un derivat i ocupnd un rol central n transformrile metabolice, ea nsi se
posteaz departe de cile principale ale metabolismului. E un integrator al metabolismului,
dar nu particip nici la biosintez, nici nu e produs intermediar n metabolismul energetic.
De aceea concentraia ei se regleaz univoc.
3. Posed destule grupe funcionale ce permit fixarea rigid i specific cu pro
teinele receptorice, rezultnd efecte corespunztoare alosterice.
Utilizarea AMPc ca mesager secundar amplific semnalul hormonal. O molecul
activ de adenilatciclaz (AC) sintetizeaz mai multe molecule de AMPc.
Proteinkinaza activat de AMPc fosforileaz multe molecule proteice. De aceea,
cantiti minime de hormoni (IO-10) pot modifica esenial metabolismul celulei. n figura
ce urmeaz este ilustrat mai clar controlul dublu al activitii adenilatciclazei de G-proteine.
n sistemul transductor al semnalelor hormonale un rol deosebit l au proteinkinazele
- enzime ce fosforiliaz proteinele la resturile de serin, treonin sau tirozina.
Defosforilarea proteinelor e catalizat de fosfataze. Deosebim fosfataze receptorice i
intracelulare. Cele receptorice posed un domen extracelular. Toate proteinazele formeaz
un kinom. n proteoma omului sunt depistate peste 518 proteinkinaze, ce prezint
aproximativ 2% din proteinele codificate de genom. 92% din ele aparin unei superfamilii
compuse din 7 clase. Proteinkinazele sunt considerate cele ce fosforileaz resturile de
serin i treonin (82%), iar cele ce fosforileaz tirozina sunt denumite tirozinkinaze
(18%).
Ca substrat pentru porteinkinazc servesc enzimele, canalele ionice, factorii de translaie,
transcriere, proteinele structurale i altele.
activ Receptor inactiv
Hormon (a) Hormon (i) f
Gs- proteina Membrana

__cclular__
GDP
ADP-ribozilate
(toxina tusei
convulsive)
(toxina holeric) cA M P+ PPi
Proteinkinaza A
Controlul dublu al activitii adenilatciclazei de proteinele G. Subscriptul a i i denot activarea sau
inhibiia proceselor
Procesul fosforilare-defosforilare este un mecanism universal de reglare a

metabolismului. n esuturi a fost identificat un numr mic de forme de baz ale
proteinkinazelor ce nu explic efectele multiple ale AMPc. De aceea, specificitatea
reaciilor de fosforilare este determinat de localizarea i caracterul substratului proteic.
Subunitile catalitice n toate proteinkinazele sunt identice, pe cnd cele reglatoare au
particulariti individuale. n lipsa AMPc, se formeaz holoenzima neactiv. S-a con
statat c reaciile de fosforilare au o specificitate mare cu referin la serina depistat n
anumite fragmente ale secvenelor aminoacidice din proteine. Substratul ce solicit o
fosforilare conine doi aminoacizi bazici situai n apropiere - unul earginina localizat
la 2-5 resturi de aminoacizi de la serina fosforilat Ia captul N-terminal.
Specificitatea altor proteine, ca substrat de fosforilare, poate fi determinat de
conformaia secundar sau teriar, care reduce din fragmentele potenial fosforilate pentru
subunitatea catalitic a enzimei.
Un alt sistem transductor al semnalelor externe n mesageri intracelulari este compus
dinfosfolipaza ce acioneaz asupra lipidelor membranare, genernd diacilglicerol
i inozitol-1,4,5- trifosfai. Simultan, se mai formeaz o cantitate minor de form ciclic
IP3c(4,5),cnd n reacie ia parte grupa OH din poziia 2 a inozitci. n condiii fiziologice,
cota acestui izomer ce se acumuleaz la aciunea hormonului poate atinge 30% din nivelul
IP3( 1,4,5). Sunt caracterizate mai multe izoforme de fosfolipaze C, unde fiecare n parte
poate hidroliza toate fosfoinozitidelc (3), cu formarea urmtorilor compui: ncciclici 1P.
IP2(1,4), IP?( 1,4,5) i trei ciclici - IPc( 1:2), I P J 1:2,4), IP3c(l :2,4,5).
n condiii fiziologice, fosfolipaza C(PLC) scindeaz preponderent PIP(4) i
PIP,(4,5), utiliznd pentru hidroliza lor concentraii submoleculare(107M )dcC a2+-
nivelul normal ce se afl n citozol. Masa molecular a izoformelor PLC se afl n
diapazonul de la 60 la 150 kDa, unde unele forme sunt libere n citoplasm, altele sunt
fixate rigid de membrana plasmatic. Toate izoformele se deosebesc vdit dup
structura primar i au n aceeai poziie un domen analogic, cu aproximaie de 250
aminoacizi. Fiind foarte conservativ, acest domen presupune prezena sa n formarea
centrului catalitic. Interaciunea formelor PLC cu membranele se realizeaz prin
intermediul G-proteinelor sau a receptorilor membranari.
Prezena izoformelor multiple e cauzat de faptul c enzima conduce efectul
multor agoniti. forma este activat de hormoni, receptori care sunt cuplai cu G-
proteinele. Este stabilit c mai mult de 30 de receptori i au efectul prin activarea
izoformei PLC (fig.7.7).
Spaiul cxtracclular
T , j
Membrana
celular
Proteinele fosforilate
W f PLC activ scin d eaz
(5? fosfatidil-inozitol 4,5- Efect intracelular
fSubunitatea
g:
Gq \\
bifosfat n IPj i DAG
Calciu i DAG
' activeaz PKC
activcaz PLC \
H - Hormon /".QDP &>
1P3 fixat dc
D receptorul specific
Recepton n RCP,elibereaz Ca"
Citozol
Reticulul enaw5Iasmatic
Fixarea hormonu ui
de receptori specifici i activarea lor
F igura 7.7. Rolul inozitol trifosfailor n semnalizarea intracelular
Aceti receptori se refer la proteinele membranare cu 7 domeni transmembranari:

a-l-adrenergice; M -l, M-3, -5-muscarin colinergice; P2j i P y - purinergicc; 5H T-
: serotoninergice; Viai Vib-vasopresinice; 11,-histaminice .a.
Receptorii la factorii de cretere difer dup structur de cei hormonali. Ei transfer
o singur dat membrana i duc un domen n partea citozolic, ce posed funcie
I tirozinkinazic.
Fosfolipaza este o protein fixatoare de Ca2' care posed ca i alte proteine
similare EF-domen, ce determin o afinitate major de legare a Ca2+.
Micorarea Ca2+n citoplasm, ct i dofamina (activeaz canalele K), AMPc, GMPc,
care micoreaz nivelul Ca2+ n citozol blocheaz metabolismul inozitolfosfailor. i
dimpotriv, majorarea Ca2* n citozol pn la 10'6- 10-5 M, l activeaz. Aa mecanism e
posibil la stimularea oxidrii peroxidice a lipidelor, distrugerea membranelor, aciunea
Ca-inoforilor, ct i altele.
Trigherul cardinal n oscilaiile calciului estt IP/1,4,5), ca rezultat al activrii PLC.
IP3( 1,4,5) difuzeaz de la membrana plasmatic, unde se formeaz la membranele
reticulului endoplasmatic n zecimi de secunde. Cantitatea i concentraia IP3( 1,4,5) este
suficient ca s ocupe toate moleculele receptorilor specifici, ns iese Ca2* numai din
unele poriuni (focare active).
Receptorul la IP /1,4,5) prezint un tetramer compus din aceleai subuniti, ce
formeaz o pir nespecific pentru cation. Fixarea inozitfosfatului este cooperativ cu
receptorul i se finalizeaz cu desensibilizarea - micorarea sensibilitii receptorului la
agonistul su. Acest canal poate fixa ATP-ul i poate fi fosforilat de proteinkinaza
AMPt dependent. Focarele active apar n corelaie cu concentraiile locale mari de
Ca2+, inozitoltrifosfai sau ale receptorului respectiv. Ca2+, n continuare, difundeaz pe
RE i majoreaz sensibilitatea receptorului la IP3(1,4,5), favoriznd transmiterea undei
de Ca2+. Majorarea Ca2" local inactiveaz canalul respectiv, ca rezultat poriunea activ
se strnge, Ca2* difimdnd, genereaz alte poriuni de eliminare a Ca2+din reticulul.
Regleaz nivelul de Ca2+i IP4( 1,3,4,5), care activeaz torentul din exterior n celul
i depozitele intracelulare. Se presupune rolul de bufer al acestui compus, din care se
restabilesc rezervele de IP3( 1,4,5), mesager secund, mobilizator al Ca2+.
Un component esenial al sistemelor de comunicare e i Calciul-mesager intracelular,
ce regleaz contracia tuturor formelor de muchi, secreia produselor exo-endo-
neurocrine, proliferarea celular, cu transcripia genelor.
n membranele celulare funcioneaz structuri ce asigur intrarea Ca2+n citozol dup
gradientul de concentraie, utiliznd energia ATP (pompa de Ca2+) sau gradientul altor
ioni (Na/Ca). Funcionarea concordat a ambelor sisteme de transport al Ca2+prin
membranele citoplasmatice i intracelulare determin majorarea tranzitorie a concentra
iei de Ca2+. Intensitatea oscilaiei concentraiei citoplasmatice de Ca2+e dependen
t de produsele hidrolizei fosfatidilinozitolilor i crete sub influena stimulatorilor
extracclulari (hormoni, factori de cretere, excitani mecanici celulari).
Unda oscilaiilor de Ca2" se rspndete de la nucleu i poate avea form de sfer
sau spirale compuse. n unele esuturi (miocard, creier, endoteliu) oscilaiile apmte ntr-
o celul provoac asemenea oscilaii i n vecintatea sa, cu aceeai intensitate. Unda e
transmis prin contactele intercelulare, care posed o conductibilitate deosebit de mare
pentru ioni.
Efectul reglator asupra sistemelor enzimatice e asigurat de fixarea lui de o protein
mic (M) denumit calmodulin i are o funcie intermediar de control al Ca2+ n
activitatea enzimelor din esuturi (fig.7.8).
Calmodulina are aceeai secven aminoacidic la toate speciile de animale, fiind
o protein foarte conservativ, cu o sensibilitate mare la Ca2+. Posed 4 locusuri de
Figura 7.8 Calmodulina. Protein mediatoare a multor reacii enzimatice stimulate de Ca2", calmodulina
are 4 locusuri de legare, cu nalt afinitate pentru C a ( K d aproximativ 0,1 pn !a lflM). a) Un model
schematic al structurii cristalice a calmodulinei; toate locusurile de legare cu Ca2' sunt ocupate (bilele);
domeniul aminoterminal este la stnga, domeniul terminal carboxil este la dreapta; b) Calmodulina asociat
cu un domen helical (spirala) al uneia din multele enzime pe care le regleaz - proteinkinaza I I calmodulin-
dependent. E de notat c lielixul a central lung vizibil it a) s-a legat din urma lui, la domeniul substratului
helical
fixare a Ca2+, saturaia crora modific conformaia proteinei, conferindu-i o configuraie

de a-spiral, ce regleaz sisteme enzimatice dependente de el. In creier, conform
investigaiilor din ultimul timp, a fost separat o alt protein, ce fixeaz calmodulina
i inhib fosfodiesteraza, fiind un reglator nou n homeostazia Ca2+.
Un act primar n aceste reacii celulare este transferul calciului n citozol din mito
condrii, microzomi sau din lichidul extracelular, unde concentraia lui este mare.
Calmodulina elibereaz uor ionii de Ca2+, cptnd conformaia inactiv i disociindu-
se de protein.
Concentraia calciului, ca i a AMPc, reflect echilibrul dinamic dintre apariia i
dispariia semnalului. Diferii mesageri intracelulari pot interaciona reciproc. Studiile
din ultimii ani atest complicarea vdit a modelului de relaii reciproce dintre mesageri.
Acelai hormon, acionnd asupra unor receptori de tip similar, poate provoca
intensificarea torentului de Ca2+ n celul, precum i a concentraiei AMPc. Multiplele
efecte ale calciului i AMPc sunt realizate prin acelai mecanism-reglarea i activarea
proteinkinazelor. Schema clasic nu poate reproduce mecanismul reaciilor de lung
durat ale celulelor, nsoite permanent de semnale extracelulare. i dac pentru AMPc
atare mecanism e efectiv, apoi concentraia Ca2+, la interaciunea acestor semnale, se
amplific la intervale mici de timp (1 min.), apoi revine la iniial, dac reacia celular
dureaz cteva ore.
Evident c rolul de mesager n reaciile de durat lung l joac circularca Ca2',
blocajul acestuia determin o reacie de scurt durat. Proccsul circulant al Ca2+ n
membran sau n apropierea ei devine un mesager important (fig.7.9).
S-a confirmat c fixarea semnalului Ca2+i preschimbarea lui n forma ce modific
procesele celulare necesit un mesager-protein sensibil la Ca2*, asociat cu membrana.
S-au depistat mai muli de acest fel, dar incit un interes deosebit - proteinkinaza -
enzim ce regleaz funcia pompei de Ca2+.
Cele dou scheme alturate ilustreaz clar modul de transmitere intracelular a
semnalelor. Particularitatea esenial a schemei de transmitere intracelular a semnalului
F igu ra 7.9. Autoreglarea circuitului de Ca2*. Torentul de Ca2* n celul prin canalele membranare se
majoreaz la interaciunea hormonului cu receptorul su. Creterea Ca1* n regiunea premembranar
(Ca2*sJ activeaz calmodulina ce fixeaz Ca2*i PKC. Ultimele, it ansamblu, activeaz translatorul de
Ca2*i n consecina se echilibreaz torentul de Ca2* intra i extra celul. Circulaia Ca2*mrete concentraia
sa n zona premembranar, ce prezint semnal de Ca2*pentru DA G.
const n prezena indispensabil a dou ci separate n timp, unde Ca2+ndeplinete

funcia de mesager secundar. n reacia primar se activeaz calea prin calmodulin,
unde majorarea de scurt durat a Ca2+n citozol, determinat de IP3, acioneaz asupra
proteinkinazei activate de calmodulin, la care se activeaz o grup de proteine celulare,
ce determin reacii celulare, cu secreia aldosteronului (fig.7.10).
A doua cale, cu participarea proteinkinazei C, se realizeaz n faz prolongat,
unde majorarea concentraiei de calciu n regiunea premembranar activeaz, asociat
Prima cale de aciune a Ca2* n calitate de mesager secund n reacia celular

F igura 7.11. n faza prolongat a reaciei celulare, angiotenzina IIprovoac o amplificare a circulaiei
Ca2*prirt membrana plasmatic
cu membrana, proteinkinaza C, ulterior fosforileaz proteinele, ce determin durata

reaciilor celulare. Avalana kinazelor determin efectul proteinkinazei C, care nu p
rsete membrana plasmatic. Alte kinaze active sunt capabile s fosforilcze sub
straturile, s intensifice activitatea diferitelor enzime, influentnd asupra proteinelor-int
(fig.7.11; 7.12).
E valabil o astfel de schem i pentru stimularea secreiei insulinei de celule,
contracia musculaturii netede, la care aciunea de mesager a C a^ se interfereaz cu
activitatea AMPc.
La eliberarea receptorilor & *
de hormoni, adenilatciclaza Honn5j 4 Rcccntnr
devine inactiv, iar formarea
de A M Pc se n treru p e.
AMPc deja creat este degra
dat de o enzim fosfodieste-
raz ce hidrolizeaz 3' leg
tura fosfat, cu formarea 5'- Ca2tsm
adenozinmonofosfatului liber. Fosforilarea
Consecutiv, are loc elibera kinazelor
rea AMPc din subunitile
regi atoare ale proteinki nazei,
fapt ce duce la asocierea lor | *Jgjjg|
cu asamblarea n holoenzim.
Activitatea fosfodiestera- -w
zei este uor stopat de * 0.
v Fosforilarea protemlor
cofein i teofilm-alcaloizi , , . . , , . . ..
j . . . . iM gura 7 .1 2 . A valana kin a zelo r determ ina e fe c tu l a c tiv a m
de catea l ceai. Aceti al- proteinkinazei ce nu prsete membrana plasmatic
caloizi prolongheaz i amplific efectul adrenalinei, micornd viteza de scindare a
AMPc. n esuturi fosfodiesteraza (FDE) este dinamizat de ionii de Ca4-1". Comple
xul Ca++- calmodulin - se ataeaz de FDE i o stimuleaz. Fosfodiesteraza este
inhibat de ciclomilast,piclamilast-antimf\amatoareuti\izatc n tratamentul artritelor,
astmului bronic. Este un inhibitor al FDE i viagra (sildenafil) ce provoac acumularea
GMPc cu efectele respective (se utilizeaz n disfimeia ereciei). Aptocina, un modem
inhibitor al FDE, majoreaz concentraia GMPc, activnd proteinkinaza G i provocnd
apoptoza celulelor cancerigene.
Un reglator deosebit este i NO, acionnd nu numai intracelular, dar i extracelular.

Ultimul efect e determinat de faptul cNO este un gaz lipofil ce uor prsete membrana
celular. El se deosebete de reglatorii obinuii att prin incapacitatea de a se depozita n
celul, ct i de a realiza un efect direcional. NO acioneaz asupra tuturor celulelor,
reprezentnd un reglator de volum. NO cauzeaz ADP-ribozilarea G ADPH (gliceraldehid-
tri-fosfat dehidrogenaza), determinnd n consecina diminuarea glicolizei.Concentraii
majore de NO nhib fiero-i metaloproteinele, inclusiv enzimele ciclului Krebs i lanului
respirator, provocnd apoptoza i necroza celulelor macroorganismului i a agenilor invazivi
(bacterii, fungii etc).
NO endogen e factor primordial n reglarea diferitelor procese biochimice i fiziologice.
Multe dintre ele sunt determinate de activarea formei solubile a GMPc. Ambele forme,
solubil i fixat de membran, reprezint nu doar diferite proteine, dar i enzime cu
diverse mecanisme de reglare.
Guanilatciclaza solubil este un heterodimer compus din 2 subuniti imunologice
diferite. O caracteristic esenial a enzimei e prezena la suprafaa ei a grupelor labile
sulfhidrice, uor oxidate de oxidani de diferit origine ce activeaz enzima. O aciune
mai ndelungat a oxidanilor inhib enzima. O alt particularitate a ei este prezena n
structur a hemului.
Rolul hemului n funcionarea guanilatciclazei const n activarea coerent a enzimei
de NO i NO - sisteme generatoare. Activatorul real al enzimei e complexul nitrozil-
hem, ce se formeaz la interaciunea grupei NO cu hemul enzimei. S-a stabilit c GMP-
ciclaza, n lipsa hemului, pierde capacitatea de a fi activat dc NO.
n ultimii ani s-au studiat mai minuios domeniile funcionale ale GMP-ciclazei solubile
i rolul resturilor cisteinil n funcionarea enzimei. S-a
constatat c centrele reglatoare i catalitice sunt
decuplate i se afl n diferite poriuni ale subunitilor.
Centrul catalitic e situat la captul -terminal al a i
Ir**
Relaxeaz
subunitilor. El e responsabil de formarea GMPc
i nu e sensibil la NO.
musculatura
contractat Captul N-terminal al -subunittii rspunde de
stimularea GMP-ciclazei de NO. Locul de fixare a
.4 hemului n enzim nu e stabilit, ns mutaia
r> punctiform a histidinei 105 n -subunitate cu
// * fenilalanina distruge legtura hemului cu proteina, astfel
GMP-ciclaza pierde capacitatea de a fi activat de
Previne NO, dar se pstreaz activitatea catalitic bazal. De
agregaia
plachetelor* altfel, i mutaia Cys-78 i Cys-214, situate n -
subunitate n apropierea histidinei 105, produce o
protein recombinat, nesensibil la NO. Mutaiile
punctiforme ale 15 resturi de cisteinil n a i
V subuniti cu serin produc o enzim recombinat,
Servete ca ce i pstreaz capacitatea de sintez a GMPc. Un
neuro-mediator
rol adecvat al grupelor SH nu se nregistreaz.
Sistemul NO - GMPc e localizat completament
n citozol i activeaz proteinele-receptori specifici
Mediaz aciunea bactcricid I ca proteinkinaza G. GMPc particip n protejarea
i antitumoralamacrofagelor vaselor arteriale n ateroscleroz, hipertonii,
hipertrofia miocardiac. Sistemul respectiv regleaz
expresia genelor la diferite nivele - transcripional i posttranscripional.
Care ar fi mecanismul aciunii anti-hipertensive a NO? Prin activarea GMP-ciclazei
solubile, intermediate de mecanismul dependent de hem i acumularea GMPc. Apoi,
activarea proteinkinazei GMPc dependente i a Ca2+-ATPazei, ce particip la
defosforilarea catenelor uoare ale miozinei, contribuic la ieirea Ca24 din celulele
muchiului i, n final, la vasodilatare. Efectul
curativ al nitrovasodilatoarelor (nitroglicerina NADPH
NADP+
etc.) e determinat de biotransformrile lor, cu NH, + H+
eliberarea i interaciunea NO cu hemul C-NHa-*
guanilatciclazei, activarea enzim ei i NH
acumularea GMPc. Sinteza simplist i rolul CHo
I
NO este redat n schemele respective. CH ?

CH 2
HCNH3+
COO' COO
L-Arginina L-Citrulina
SISTEM UL NEUROENDOCRIN
Homeostazia, dup W.Cannon, este o axiom n fiziologie, o constant relativ, cu
unele devieri eseniale. Asigurarea homeostaziei n organism necesit o interaciune a
multiplelor procese, cu prezena unor complexuri de mecanisme de control. Nucleul
acestor mecanisme constituie sistemul neuroendocrin, unde funcioneaz bucle externe
i interne de retroinhibiie. n reglare particip i diferii metabolii tisulari, ce determin o
autoreglare fin a produsului de genez hormonal.
Sistemul nervos nu-i permeabil pentru peptide, posed o proprietate advers pentru
steroizi i hormoni tireoizi. Adeno- i neurohipofiza se afl n afara barierei hematoence-
falice, unde circulaia sanguin e cea mai intensiv din ntregul organism. Funcia adeno-
hipofizei e reglat dc sistemul nervos, factorii hipotalamici. Hormonii relizing ajung, n
mod fiziologic, la hipofiz prin sistemul portal.
Se consider c n sistemul nervos central (SNC) nu exist regiuni anatomice i
histologice limitate, care ar regla eliminarea unui anumit hormon hipofizotrop (relizing
factor). Referitor la fiecare hormon n parte, exist o codificare neurotransmitoare n
celulele neurosecretoare, ce fixeaz eliminarea produselor specifice. Deci, la eliminarea
unui factor relizing conlucreaz semnalele din diferitele celule ale unei regiuni anatomice
relativ mari, dac se efectueaz cu ajutorul unui tip de neurotransmitor. innd cont c
SNC favorizeaz secreia factorilor n diferite condiii, e posibil ca reglarea secreiei
acestui factor n fiecare caz s fie stimulat de diferite neurosemnale, ceea ce nseamn
c celula neurosecretoare posed receptori la diferite semnale, fiecare dintre ele fiind
eliminat de fibre speciale activate de stimulente bine determinate.
Neurosemnalele pot provoca excitarea sau inhibiia celulei neurosecretoare. Reacia
definitiv va reflecta efectele concentraiei locale a neurosemnalelor modificate de
concentraia diferitor ioni, pH, hormonii glandelor periferice i a hipofizei. n hipotala-
mus, mai precis n podiumul mediu, s-au stabilit toi neuroemitorii existeni-cateco
laminele, indolaminele, acetilcholina, histamina. S-au depistat i enzimele ce iau parte la
sinteza i metabolismul lor.
Hormonii secretai de hipotalamus (tab.7.1), fiind peptide relativ mici, conin 3-15
resturi de aminoacizi. S-a stabilit structura multor hormoni, dar pentru izolarea i
identificarea lor s-a depus o munc enorm. Pentru a cpta 1 mg de tiroliberin,
s-au utilizat 4 tone de hipotalamus extras din creierul animalelor. Studiile realizate de
R.Gullemini A.Schally, n 1977, sunt apreciate cu premiul Nobel.
Tiroliberin (TL), primul hormon identificat, constituie un tripeptid (piroglutamil-
histidil-prolinamid). Aproximativ 80% revine TL extrahipotalamice. Perioada de
njumtire este de 4 minute. Hormonul determin sinteza TSH i accelereaz realizarea
efectului prolactinei (PRL).Efectele sunt mediate de receptorii membranari cuplai cu
Ga- fosfolipaza - calcium - proteinkinaza , ca mesageri secunzi. Efectul TL e
blocat dc hormonii tiroizi ce sintetizeaz o protein inhibitoare i blocheaz aciunea TL.
Corticoizii au efecte similare, blocnd atit secreia TL, ct i a TSH, de asemenea ei nu
micoreaz reacia prolactinei la TL.
Som atoliberina (GHRH) - tetradecapeptid, produs de sistemul dopaminergic
(TIDA) al hipotalamusului. Stimuleaz sinteza GH mediat de AMPciclic.
j H orm onul j Structura
Tiroliberina (piro) Gu-His-Pro-NH2
1
S ----------------- S j
Somatostatina
A]a-Gy-Cys-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-NH2
Gonadoliberina (piro) Qu-His-Trp-Ser-Tyr-Qy-Leu-Arg-Pro-Gly- NH2
HCK
Prolactostatina HO-H^ CH2CH2NH2; GnRH-pepdid ligand (GAP)
Corticoliberina Ser-Gln-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thp-Phe-His-Leu-
ovinelor Leu-Arg-Gu-Val-Leu-Gu-Met-Thr-Lys-Ala-Asp-Gln-Leu-Ala-
Gln-Gn-Ala-His-Ser-Asn-Arg-Lys-Lcu-Lcu-Asp-Ilc-Ala- NH2
Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gy-Gn-
Somatoliberina Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gn-Asp-Ile-Mct-Ser-Arg-Gn-Gn-Gy-
Gu-Ser-As n-Gln-Gu-Arg-Gy-A la-Arg-Ala-Arg-Leu- NH 2
Somatostatina e compus din 14 aminoacizi. T 1/2 e foarte mic, efectul e determinat

de micorarea producerii de AMPc. Poate fi produs i extrahipotalamus n celulele
pancreasului i tractului gastrointestinal. Inhib sinteza GH i neutralizeaz efectul GHRH
mediat de G,Ia inhibiia adenilatciclazei. Efectul inhibitor e blocat de ionii de Ca**. Posed
un spectru biologic larg de aciune.
Corticoliberina (CRH) conine 41 aminoacizi. Stimuleaz sinteza ACTH i a -
endorfmelor n adenohipofiz, accelereaz modificrile posttranslaionale ale POMC.
efectul este blocat de cortizol, determinat dc sinteza unei proteine inhibitoare.
S-a studiat i sistemul gonadoliberinelor care-i mediat de AMPc. Oscilaiile n
activitatea acestor neuroni hipotalamici coreleaz cu modificrile n secreia gonadotro-
pinelor i reprezint decapeptide (GnRH i LI IRH).
Prolactostatina este produs n TIDA i se realizeaz n eminena median. Este
inhibitoml prolactinei i al mamosomatotropilor n adenohipofiz. Efectul este mediat de
D2 receptori cuplai cu G,a inhibiie a adenilatciclazei. Indirect, este inhibat i realizarea
efectului LH i FSH.
Sunt atestai mai bine de 12 factori ce regleaz secreia hormonilor adenohipofizari.
NEUROHIPOFIZA
Hormonii ei - vasopresina i oxitocina - sunt sintetizai n corpul neuronilor,
nucleelor supraopticulare i paraventriculare, se acumuleaz n granule cu proteine
transportatoare, denumite neurofizine, i se deplasez prin axoni la terminaiile lor, unde
i se conserveaz. Sinteza trece printr-un precursor, cu scindarea i formarea
nonapeptidelor.
Vasopresina difer de oxitocin prin posedarea fenilalaninei n loc de izoleucin,
n inel, i a argininei n loc de leucin, n catena lateral. Sinteza honnonului e asociat
cu sinteza neurofizinei corespunztoare. Secreia hormonului i a neurofizinei are loc
prin exocitoza dependent de Ca++.
Cys TyrPheGinAsnCysProArgGly N H ,
I I
S ................................................S Vasopresina
Reglarea secreiei: factorul primordial este creterea osmolaritii plasmei (hemo-

concentraie), sesizat de osmoreceptorii hipotalamusului i de baroreceptorii din sistemul
circulator. Secreia e strict dependent i de modificrile volumului fluidului extracelular,
de starea funcional a sistemului i receptivitatea lui. Ca stimulatori servesc diferii
factori: voma, hipoglicemia, stresul nespecific (emoiile, durerile, efortul fizic). Stimuleaz
secreia i zaharoza, manitolul, iar ureea i glucoza, practic, nu o modific. Perioada de
njumtire (T 1/2) e de cteva minute. Degradarea are loc n ficat i rinichi. Dintre
ioni, Na determin 95% din presiunea sanguin.
Mecanismul de aciune a vasopresinei, denumit i hormonul antidiuretic, particip
la homeostazia osmolaritii i a volumului fluidului extracelular prin reglarea eliminrii
renale de ap (mrete permeabilitatea membranei Iuminale a epiteliului tubular din tubii
contori distali i colectori). Anume de hormoni depinde absorbia aproximativ a 19 L de
lichid n 24 ore. Vasopresina (VP) se leag de receptori, activnd adenilatciclaza. Se
consider c VP moduleaz efectul prostaglandinelor, pe cnd inhibitorii sintezei lor
(indometacina) poteneaz efectul vasopresinei.
Oxitocina stimuleaz secreia, contracia celulelor mioepiteliale, ce nconjoar
alveolele mamare, ejectarea laptelui. Oxitocina exercit i o aciune contractil asupra
musculaturii netede din uter. Joac un anumit rol la iniierea travaliului la femeia gestant
la termen, i expulzarea ftului. Receptivitatea uterului pentru oxitocin este stimulat de
estrogeni i inhibat de progesteron.
CysTyrIleGluAsn CysPro Leu Gly NH-
S ............... -............................. S Oxitocina

ADENOHIPOFIZA
Hormonii ei au o structur perfect stabilit i o funcie destul de clar. Sunt de natur
polipeptidic i se clasific n 3 categorii, fiecare cu particularitile sale :
1) familia corticotropinei (ACTH, MSH, lipotropina i peptidele afiliate);
2) familia hormonilor glicoproteici (TSH, FSH, LH i gonadotropina corionic -
placentar);
3) familia hormonilor somatomamotropi (GH, prolactina - PRL - i lactogenul
placentar).
Corticotropina (ACTH)
Structura ei conine un peptid unicatenar compus din 39 de aminoacizi (fig.7.13).
La toate animalele examinate, cei
24 aminoacizi de la captul N ! 2 3 4 5 6 7 8 9 10 II
terminal erau la fel. Captul 13
terminal posed anumite deosebiri Regiunea c o n s e rv a to a re ,
de specie, dar nu eseniale.
25 \ 24 23 2 2 21 2 0 19 18 17 16 Lyv;5. y '
)i 4
Activitatea biologic e determinat
15
de cei 24 aminoacizi la captul N'.
O parte a moleculei ACTH intr n 27{6tyf v jy
D . . ....
Regiunea variabila
componena peptidelor nrudite: n
- a MSH atestm secvena 1-13, 28
n p ep tid a a se m n to are cu 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39
corticotropina-secvena 18-39, n
-LP secvena 47-53, identic cu F ig u ra 7.13. Structura A C T H um ane
cea din ACTH 4-10. Fragment de
aceast natur posed i alte
peptide: -LPH, -MSH.
Biosinteza. Molecula reprezint o parte a unui precursor cu o mas molecular mare
denumit proopiomelanocortin (POMC) (fig.7.14). La prelucrarea primar i secun
dar rezult mai multe peptide. ns, deocamdat, nu este totul clar despre modul de
formare a lor, multe semnificaii rmn ipotetice.
ACTH (1-39) -LPH (42-134)
] [
a-MSH PePtid -LPH (42-101) Y -cndorfina (104-134)
. ,, asem ntoare
^ ' cu c o rtic o tro p in a |-------------------------- 1 [-------------------------- 1
(18-39)
-MSH -endorfina (104-118)
(84-101)
CZZZZ3
Reglarea secreiei decurge ntr-un ritm maxim intensiv dimineaa i minim la
miezul nopii. Sensibilitatea sistemului la stimulent e mai redus dimineaa. ACTHeste
secretat impulsiv, ce determin influena SNC. Diferii stimuleni - stres fizic, emoional
etc., favorizeaz eliminarea liberinei corespunztoare. n stres dispar oscilaiile diurne i
nivelul cortizolului din snge puin e n stare s stabilizeze evoluia acestor reacii. Ciclul
nchis de reglare e determinat de efectul inhibitor al cortizolului.
Efectul biologic. Hormonul fixat de receptorii specifici ai membranei celulelor
cortexului suprarenal stimuleaz:
a) steroidogeneza, adic transformarea colesterolului n pregnenolon, prin
intermediul AMPc, stimulnd secreia gluco-mineralocorticoizilor, androgenilor. Efectul
e determinat de amplificarea activitii fosforilazei i 11--hidroxilazei;
b) sinteza proteinei ce cauzeaz hipertrofia i hiperplazia celulelor suprarenale;
c) glicoliza i activitatea enzimelor ce formeaz NADPH, contribuind efectiv la
hidroxilarea steroizilor.
Aciunca este mediat de cortexul suprarenal: are loc amplificarea gluconeogene
zei, diminuarea sintezei dc proteine, mobilizarea lipidelor, stimularea reabsorbiei apei
i a srurilor n rinichi. ACTH e un remediu efectiv la diferite stri clinice, cu aciuni
pozitive ale corticosteroizilor. Administrarea lor ndelungat duce la hiperfuncia
suprarenalelor, concomitent cu secreia androgenilor (masculinizare), se soldeaz cu
rezultate promitoare.
ACTH, de altfel, stimuleaz eliminarea insulinei, GH; Perioada de njumtire este
de 3-9 min, iar coninutul n snge constituie 25 picogram/mL.
Ca rspuns la diferite semnale, o dat cu ACTH se produce secreia lipotropi-
nelor n cantiti echimolare, fiind sintetizate din acelai precursor.
n 1680, T.Sydenham scria: Din toate medicamentele, pe care Cel de Sus le-a
druit omului pentru a potoli suferinele, nu-i nimic mai efectiv i mai universal dect
opiul. Care-i cauza c creierul omului posed receptori la alcaloizii proprii seminelor
de mac? Se presupune c aceti receptori sunt capabili s sesizeze reglatorii interni
ai senzaiei de durere. Morfina are un efect farmacologic datorit faptului c imite
substane pe care le conine organismul. n 1973, J. Hughes a extras din creierul porcinelor
2 peptide cu o capacitate opioidic - pentapeptidele metionil-encefalin i leucil-
encefalin, situate n cantiti mari n terminaiunile nervoase.
n 1976, R.Guillcmin extrage endorfmele cu un efect similar din lobul mediu al
hipofizei, care produce o analgezie profund, cu scderea temperaturii corporale.
Secvena aminoacidic din endorfm e similar cu secvena de la capul terminal la
-hpotropm. fn vivo se formeaz la proteoliza ultimului, fiind un fragment alPOMC.
Acest prohormon conine 4 regiuni omoloage, generate n rezultatul dublrii genei.
Fragmentele din ulteriorii hormoni conin perechi de aminoacizi bazici (Arg-Arg, Lys-
Lys, Arg-Lys). Fragmente similare conin i ali prohormoni. Aceste perechi de aminoacizi
bazici sunt nu altceva dect acele semnale care indic locul favorabil proteolizei. Opiul
exogen inhib eliminarea opiului endogen, ce st la baza fenomenului de sindrom reabund.
H orm onii glicoproteici
Hormonii glicoproteici posed o structur dimer compus din a i subuniti.
La una i acccai specie, inclusiv la om, a-subunitatea e aproape la fel, pe cnd -
difer, anume ea determinnd activitatea biologic. De asemenea se atest o analogie i
n uniti (pn la 50% aminoacizi).
Acelai proces conservativ se constat ntre specii - a-subunitile TSH ale omului
i ale bovinelor sunt identice la 70%, - 90%. Hormonii glicoproteici nu denot
particulariti de specie. Capacitatea de legare cu receptorii celulari o posed numai
dimeml a.
Dintre componentele glucide se conin fructoz, galactoz, galactoz-amin, manoz,
i numai acidul sialic este necesar pentru conservarea activitii biologice, micorarea
vitezei de metabolizare. El nu particip la identificarea hormonilor de receptorii celulelor-
int.
Tireotropina (TSH). Glucidele se ataeaz n urma sintezei lanurilor peptidice.
Hormonul conine sulf (11 legturi disulfidice), formnd puni intercatenare. Efectul e
determinat de AMPc; n final, amplific transportul iodului, fixarea lui de protein,
majoreaza sinteza tireoglobulinei, accelereaz proteoliza ei, cu eliberarea hormonilor
tiroidieni. Tireotropina (TSH) stimuleaz sinteza RNA i a proteinei, rezultnd
hipertrofia glandei i activarea circulaiei sanguine. n glanda tiroid se amplific untul
pentozo-fosfat de scindare a glucozei, glicoliza, activitatea ciclului Krebs, sinteza
fosfogliceridelor i a sfingolipidelor, prostaglandinelor i utilizarea de Or NADPH format
e necesar pentru asimilarea iodului, proces autonom de AMPc.
TSH stimuleaz lipoliza i necesit ioni de calciu pentru aplicarea efectului menionat.
Perioada denjumtire a hormonului este egal cu aproximativ 80 minute.
Reglarea: prin retroinhibiie feedback tipic, determinat de hormonii tiroizi i, de
altfel, de semnale mediate de SNC, somatostatina i liberina corespunztoare.
Temperatura joas stimuleaz secreia TSH. Hormonii tiroizi amplific calorige-
neza, fenomen caracteristic copiilor nou-nscuii. Cu vrsta, necesitatea adaptrii
metabolice la frig scade, aceast funcic o reia SNC. TSH inhib secreia glucocor-
ticoizilor, somatostatinci. Estrogenii sensibilizeaz reacia la hormonul tireotrop n perioada
abundent de estradiol, precum i la administrarea estrogenilor. Fenomenul asemntor
poate fi atribuit i brbailor.
Gonadotropinele. Hormonulfoliculostimulator (FSH) stimuleaz dezvoltarea
foliculilorovarieni, prepar foliculul pentru ovulaie i mediaz eliberarea de estrogeni
indui de LH (hormonul luteinizant).
La brbai, hormonul acioneaz asupra celulelor Sertoli, unde, mpreun cu
testosteronul, stimuleaz sinteza proteinei transportatoare de androgeni (ABP), secretat
n lumenul canaliculelor. Proteinele concentreaz hormonii n vecintatea spennatocitclor,
favoriznd geneza lor.
Hormonul luteinizant (LH) promoveaz maturizarea foliculilor, iniiaz ovulaia,
luteinizarea, sinteza de progesteron i estrogeni, amplific transformrile colesterolului
n pregnenolon. La brbai, hormonul stimuleaz funcia celulelor interstiiale (Leidig) -
producia testosteronului, amplific sinteza steroizilor n testicule i ovare.
Perioada de njumtire (T 1/2) la LH e aproximativ de 30 min, la F S H -o o r ,la
gpnadotroDina canonici-
sialic, deoarece desializarea micoreaz vdit perioada de njumtire. Efectul hormonal
e determinat de participarea nucleotidelor ciclice. Pentru LH e vdit i amplificarea
sintezei unei prostaglandine din grupa E, ce intensific activitatea n corpul galben al
colesterol esterazei i al colesterol-acil-transferazei - enzime implicate n sinteza acidului
arahidonic, precursor al prostaglandinelor.
Reglarea secreiei e un mecanism complex, multicomponent, unde:
a) secreia progresiv de estrogeni, efectuat de ctre folicul, se afl sub aciunea
FSH i LH, cu efect stimulant asupra hipotalamusului, amplificnd secreia gonadorelizing
factorilor - efect pozitiv al retrolegturii;
b) secreia estrogenilor e determinat de nsui ciclul propriu al ovarelor;
c) progesterona regleaz secreia, acioneaz prin mecanismul de retroinhibiie. Un
efect asemntor l au i estrogeni i dup menopauz sau castraie chirurgical.
La brbai, att testosteronul, ct i estrogenii se regleaz prin retroinhibiia
gonadotropinelor. Testiculele sintetizeaz un polipeptid hormonal (inhibina), ce
retroinhib sinteza FSH. Efect inhibitor la nivelul hipotalamic i hipofizarii au prolactina
i glucocorticoizii (ultimul determinat de LH).
Grupa hormonilor somatomamotropi
Aceti hormoni sunt compui dintr-un lan polipeptidic cu legturi disulfidice
interne. Manifest analogie structural pronunat n cadrul structurii primare (GH i
CS - somatomamotropina corionic - 83% , iar cu prolactin (PRL) - 16 si 13%,
respectiv). Analogie se atest i la diferite specii - PRL la om i la oaie = 73%; GH-
64%. Aceti indici confirm c n procesul de evoluie nu s-au produs modificri
semnificative n genom. Cu toate afinitile, hormonii animalelor inferioare-primate, pe
scar evolutiv n-au efect biologic la oameni.
Somatomamotropina (GH). Se sintetizeaz ca prohormon, apoi i pierde captul
N-terminal. Are efecte metabolice diferite. Unele dintre ele sunt determinate de
interaciunea lui GH cu receptorii membranelor diferitelor celule. n lipsa corelaiei dintre
fixare i efect, concluzionm c unele efecte sunt mediate de anumii factori de cretere,
somatomedinele, multe dintre ele reprezentnd polipeptide cu diverse puncte izoelectrice
ce difer dup secvena aminoacidic. Somatomedinele se fixeaz pe celulele-int,
unde blocheaz eliberarea AMPc i, n consecin, efectul va fi determinat de ionii de
Ca~.
GH faciliteaz procesele anabolice prin asigurarea cu materii prime i surse
energetice, accelereaz sinteza proteinelor, facilitnd transportul intracelular al
aminoacizilor, amplific sinteza RNAm; reduce catabolismul proteinelor, favoriznd
bilanul azotat pozitiv.
Asupra metabolismului glucidic are efecte antagoniste cu ale insulinei, micornd
asimilarea glucozei, inhib glicoliza i stimuleaz gluconeogenez hepatic. Efectele
descrise apar cu ntrziere ca i cele ale metabolismului lipidic - accelerarea lipolizei,
creterea sensibilitii la catecolamine (efecte diabetogene); influeneaz metabolismul
mineral prin creterea reteniei ionilor de calciu, fosfat, magneziu.
Structura somatomamotropinei la om
Efectele acute determinate de GH sunt contrare n metabolismul glucidic i lipidic.

Reglarea secreiei:
1) secreia GH este episodic i pulsativ, controlat de factori hipotalamici eliberatori
i inhibitori;
2) e dependent de concentraia intracelular a glucozei i de viteza ei de modificare.
Sporirea glucozei frineaz secreia, indiferent de metoda administrrii;
3) administrarea per os a aminoacizilor stimuleaz eliminarea GH;
4) infuzia de emulsie lipidic cu heparin inhib secreia;
5) factorii stresani fizici, psihici, mai ales la copii, episodic stimuleaz secreia.
Predomin secreia nocturn egalat aproximativ cu 70%;
6) stimuleaz secreia i eliminarea estrogenilor, prolactinei, gonadotropinei, TSH,
ACTH, MSH, vazopresinei, pe cnd astfel de hormoni ca glucocorticoizii endo- i
exogeni sunt inhibitori. Gigantismul, acromegalia, splanhomegalia, piticismul
hipofizar sunt patologii determinate de excesul sau lipsa acestui hormon.
Prolactina (PRL). Prolactina uman conine 199 resturi de aminoacizi unii ntre ei
prin 3 legturi disulfidice. Celulele-int pentru acest hormon se afl n glanda mamar.
Aciunea lui se manifest dup natere, cnd scade nivelul estrogenilor i al
progesteronei. Hormonul stimuleaz sinteza lactalbuminei, grsimilor, glucidelor din
lapte. Pe suprafaa celulelor alveolare se situeaz receptorii la PRL, care-i sporesc
numrul n raport cu cantitatea hormonului.
Estrogenii sunt sinergici la stimularea creterii glandei mamare, dar se utilizeaz
i la inhibarea lactaiei dup natere.
Reglarea secreiei are un caracter de suprimare i deteriorarea integritii
sistemelor neuroendocrine de reglare amplific secreia PRL. Inhibitorul hipotalamic se
afl sub influena DOPA, efectul stimulator depinde de serotonin. Secreia prolactinei
e stimulat i de stres, efort fizic, somn, coitus, excitarea mamelonului. Glucocorticoizii
i tiroxina o frineaz.
GLANDELE PARATIROIDE
Aceste glande genereaz i secret hormonul paratiroidian - PTH, un polipeptid
unicatenar compus din 84 resturi de aminoacizi. Segmentul 1-34 activ e asemntor cu cel al
porcinelor i bovinelor. Detaarea de la N-capt a serinei i valinei conduce la pierderea
activitii biologice i la pstrarea specificitii imune. Captul -terminal joac un anumit rol
la fixare, micornd viteza de degradare n sistemul circulant.
PTH se sintetizeaz sub forma de pre-pro-PTH cu 115 aminoacizi. Detand de la captul
N-7 i de la captul C-25 resturi de aminoacizi, el se stocheaz n granule sau degradeaz.
Hormonul este sintetizat ncontinuu i ntr-un ritm constant, independent de fluctuaiile calciului
extracelular. Cantitatea lui din glande depinde de viteza degradrii sale, dependent de calcemie.
Degradarea are loc n esuturile periferice, n special n ficat Diferite fragmente posed i
diferite perioade de njumtire, pn la 40 de minute. n efectul hormonal e implicat AMPc
- receptori specifici, situai n celulele-int. La nivelul renal provoac:
1) sporirea reabsorbiei Ca++, Mg4- aproape la 100% i inhib reabsorbia ionilor K+, P,
HCO~3;
2) micorarea excreiei H+, NH4+, cu o hipercalcemie i o fosfaturie.
La nivelul oaselor, PTH suprim sinteza colagenului n osteoblati i amplific osteoliza
sub aciunea osteoclatiloriosteocitelor. Dealtfel, PTH contribuie la maturizarea precursorilor,
cu eliberarea ionilor de C a" i fosfat n fluidul extracelular. C a" nu este fixat n oase i
poate avea loc resorbia osoas. n intestin, PTH stimuleaz absorbia C a" printr-un
mecanism indirect. Activeaz a-hidroxilaza renala, ce transform vitamina D3(25-hidroxi)
inactiv n metabolitul activ al vitaminei D3- 1,25-dihidroxicolecalciferol ce favorizeaz
absorbia Ca" n intestia PTH stimuleaz gluconeogeneza din aminoacizi, amplific asimilarea
oxigenului. La o hipersecreie de PTH, matricea osoas va suferi de insuficien de
colagen, se va elibera mult Ca++, n celule se vor acumula izocitratul i lactatul.
Reglarea. Viteza de secreie a PTH e invers proporional cu concentraia ionilor de
Ca++. La fixarea calciului de diferii factori, secreia PTH va crete. C a", printr-un
component membranar, stimuleaz formarea AMPc i poate provoca direct o degradare
lent a prohormonului.
Hiperfuncia cauzeaz hipercalcemia n consecin, crete cantitatea de calciu n urin,
cu formarea calculilor, simultan se declaneaz decalcinarea oaselor. n snge se mrete
fosfataza alcalin.
La insuficiena renal cronic se acumuleaz fosforul, cu reducerea Ca2+n ser, ceea ce
stimuleaz formarea PTH. Hipofuncia provoac o hipocalcemie, cu convulsii tetanice.
Corticosteroizii provoac hipcrcalcemia.
Calcitonina este produs de celulele adiacente celulelor foliculare ale tiroidei. E un
polipeptid compus din 32 resturi de aminoacizi necesari pentru efectul biologic. Coninutul
acestui hormon n snge crete o dat cu mrirea concentraiei de Ca" i se micoreaz la
scderea Ca". Gastrinele i glucagonul stimuleaz secreia calcitoninei.
Efectul e determinat de inhibiia eliminrii Ca2+din oase la absorbia lui intensiv n organism
prentmpin hipercalcemia i micoreaz eliminarea Ca" i a oxiprolinei prin urin. Tulburrile
de secreie a calcitoninei provoac dereglri ale metabolismului mineral, dar nu sunt la fel de
periculoase ca n cazul dereglrilor echilibrului PTH.
HO RM ONII TIROIDIENI
Azi se cunosc mecanismele de biosintez, acumulare i secreie a acestor
hormoni -tiroxina (TJ sau tetraiodotironina i triiodotironina (Tj , crora le revine
aproximativ 99% din cantitatea iodului organic secretat.
Tiroxina (T )
4
Distingem cteva etape de sintez i secreie (fig.7.17):
Na+/I simportorul inhibat de CIO, BF, SCN")

Lichid Celula
extracelular tiroidian
M embrana apical
NADPH (NADH) + , ^
|HA- generarea f
NADP+(NAD+) ~ ^
Na+. K+ - ATP
Tireoperoxidaza
TSH - _
receptor i Iodarea
H,0 + '4 0 ,-^ T 4-
Or; anific;
Tireoperoxidaza
[CuplareJ'
H;0 +'^0.-'^V-
Endocitoza
F igu ra 7.17. Sinteza hormonilor tiroidieni n tirocite. Tg - tireoglohulina
\) Biosinteza tireoglobulinei. Ea reprezint o glicoprotein cu o mas molecular

aproximativ de 670 kDa. E compus din minimum 4 subuniti (2 pcrechi asemn
toare ale diferitelor subuniti), meninute att prin legturi covalente (disulfidice), ct
i necovalente.
Subunitile sunt codificate dc diverse RNArn. Conin 8-10% glucide i aproximativ
110 din cele 5900 resturi de aminoacizi sunt ale tirozinei. Catenele sintetizate sunt
transferate n aparatul Golgi, mpachetate, apoi stocate lng membran i secretate n
coloid.Complexul final -1 9 S - e o tiroglobulinmatur.
Glicozilarea are loc la toate etapele de sintez, nainte de a fi secretat, cu ataarea la
resturile acidului aspartic prin legtura N-glucozidic. Acest procese necesar pentru
fonnarea conformaiei tridimensionale a structurii cuatemare a tiroglobulinei.
Sinteza dureaz 4-6 ore. Pe suprafaa membranei, din partea coloidal, tireoglo-
bulina este iodurat. i dac tirozina se conine n cantiti suficiente (ca surs servesc
produsele alimentare i proteinele endogene scindate), apoi iodul este n cantitai limitate
i sursa lui principal o constituie produsele alimentare.
2) Captarea ionilor de iodur din plasm. O cantitate considerabil a iodului
ptrunde n organism n form dc ioni de iodur, prin absorbie n tractul gastrointes
tinal din ap, alimente (sare de buctrie). O mic parte a iodului organic n ficat se
transform n iodur. Absorbia i concentraia iodurii n glanda tiroid e asigurat
de dou mecanisme energodependente de captare, reglate de enzime. Unul din ele e
situat pe membrana capilar i capteaz iodul din plasm, l transport n citozolul
celulei tiroidiene; altul se localizeaz n membrana apical, transferndu-1 n spaiul
coloidal. Simportorul NaTT prezint o protein integral membranar, compus din 13
segmente transmembranare. Funcia proteinei este reglat de TSH. Concentraia ionilor
de Na+ este echilibrat de funcionarea pompei Na", K~-ATPazei. Aceste pompe
funcioneaz foarte intens. La deficiena iodului, concentraia lui n gland poate fi de
500 de ori mai mare dect n plasm. Pentru a menine o secreie normal de hormoni,
glanda trebuie s extrag toat iodura (30% dinsngele ce circul prin ea timp de 24 de
ore). Organismul e capabil s compenseze deficitul dc iodur, amplificnd reabsorb
ia n rinichi i absorbia n intestine. Procesul de concentrare a iodurii e dependent
de energia celular i ionii de Ca^. Captarea iodului n tiroid este inhibat deperclorat
(C104 ), tiocianat (SCN ), substane care se depun mai repede n gland i provoac
o eliminare rapid a iodului (competitori de inhibiie).
3) Organifcarea iodului. Are loc pe membrana apical a celulelor tiroidiene sau
n preajm, unde iodura este oxidat de tireoperoxidaze (TP), la care iodul se ataeaz
la inelul fenol al resturilor de tirozin din tireoglobulin. Peroxidul de hidrogen este
generat de NADPH/NADH sistem oxidazic, care funcioneaz ca cea din leucocite.
Tireoperoxidaza este o enzim ce conine hem glicozilat fixat dc membrana apical a
tirocitului. Are o mas molecular de 110-105 kDa i un domen catalitic aranjat spre
spaiul coloidal. Forma oxidat a iodului nu este eliberat din ccntrul activ al enzimei i
este utilizat direct la iodurare. Sunt supuse iodurrii numai unele resturi dc tirozine din
secvena aminoacidic a tireoglobulinei. Propiltiouracilul, metimazolul, tiouracilul,
tioureea reprezint inhibitori energici ai organificrii iodului, cu efect asupra
tireoidperoxidazei.
4) Condensarea, cu formarea iodtironinelor, se efectueaz printr-un mecanism
ncdescifrat definitiv. Se produce cuplarea monoiodtirozinei (MIT) cu diiodtirozina
(DIT), formnd T3 i dou molecule de DIT, cu generarea T,. La deficitul de iod se
sintetizeaz mai mult T3(mecanism de compensare). T3iT4rmn ancorate n lanul
polipeptidic al tireoglobulinei. Ea este pstrat n coloid i reprezint o rezerv
mobil, uor manevrat de hormoni.
5) Secreia are loc prin endocitoza picturilor de coloid n membrana apical (inter-
nalizarea tireoglobulinei-TG), apoi urmeaz fuziunea picturilor cu lizozomii i hidro
liza TG. De rnd cu diverii aminoacizi din fondul metabolic celular, sunt eliberai T3,
T4, MIT, DIT. Hormonii T3i T4 sunt eliminai n snge, iar iodtirozinele sunt supuse unui
proces de deiodurare, catalizat de dehalogenaze (deioduraze) NADP - dependent.
Iodul este recuperat ca iodur, transferat n spaiul comun iodurat i reutilizat pentru
s in te z a u n e i n o i m o le c u le d e T G .
6) Transportul hormonilor e asigurat de trei proteine. Principalul rol n transferul
specific (70%) i revine unei glicoproteide compuse din 4 subuniti cu aceeai mas
- globulin transportatoare de tiroxin (inter a-globulin, dup mobilitatea
electroforetic se afl ntre a , i oc2). Are un locus de fixare a hormonului. O alt protein
-prealbum ina - fixeaz de patru ori mai muli hormoni, dar la un pH egal cu 8,6.0
c a n t i t a t e m i c p o a t e tr a n s p o r ta i p r o t e i n a s e r ic - a l b u m i n a ( 2 0 % ) .
Afinitatea T , cu proteinele e de 10 ori mai mic, ceea ce creeaz condiii favorabile
pentru coaptarea lui de ctre esuturi. Acest fapt are o influen asupra T 1/2, care
dureaz pentru T4 6-7 zile, iar pentru T3- 2 zile. E stabilit c 85-90% de iod plasmatic
i revine T4i numai 4-5% - T3, iar aproximativ 5 % se afl n iodur (iodul anorganic).
Reglarea secreiei. Stimulator efectiv n sinteza tireoizilor e TSH, proces stimulat
de catecolamine, prostaglandine, estrogeni. Glucocorticoizii, somatostatina, ct i
concentraiile de T3i T4au efecte inhibitoare asupra sintezei e eliberrii de TSH. TSH,
dup 5 min., activeaz adenilatciclaza, se amplific iodurarea TG i formarea T3i T4.
Peste 5-10 min. se secreteaz pe contul rezervelor foliculare de hormoni tiroidieni.
La cteva ore dup administrarea TSH, se modific unii parametri ai metabolismului
celular, ai glucozei, fosfolipidelor, proteinelor, RNA. Peste 48 de ore crete sinteza DNA,
mitoza celulelor. Majoritatea efectelor sunt determinate de AMPc.
n afar de funcia de control hipotalamo-hipofizar, glanda posed mecanisme de
autoreglare. La deficiena de iod, crete captarea iodului din plasm. Glanda secreteaz
mai mult T3dect n mod normal, mai activ biologic. Iniierea acestor modificri e
determinat de scderea nivelului plasmatic al hormonilor tiroidieni, ce stimuleaz
secreia TSH. Simultan, se intensific circulaia sanguin n gland, apare hipertrofia ei
i crete fora de captare a iodului.
Concentraia iodului este reglata de un mecanism intratiroidic: surplusul dc iodur
inhib sinteza i secreia hormonilor tiroidieni, care const n diminuarea vitezei etapelor
de organificare a iodului (efectul Wolff-Chaikoff); se micoreaz captarea iodurii i se
inhib secreia hormonilor. Dozele masive de iodur satureaz capacitatea mecanismelor
situate pe membrana bazal (n stare normal, ea reine anionul n gland). Ca urmare,
iodura format n gland o prsete, iar surplusul mrete secreia iodujui eliberat la
deiodurarea iodului aminoacidic. O atare inhibare e argumentat fiziologic. n caz contrar,
produsul surplus va solda fenomene de hipertiroidism.
Metabolismul. Aminogrupele n ficat, sub aciunea aminotransferazelor, sunt
deportate, cu fonnarea cetoderivailor. Urmeaz o deiodurare, apoi o scindare a nucleului.
Hormonii, la fel ca i derivaii, pot fi conjugai cu formele active ale acidului glucuro
nic, sulfuric sau pot fi metilai dc S-adenozil metionin (20%). Conjugatele formate sunt
excretate prin bil (20%) i pot fi hidrolizate de bacteriile intestinale (decarboxilate);
80% din T3i T4sunt supui 5 - deiodrii, transformai n formele inactive. Rezultatul
dezaminrii i decarboxilrii este formarea unor compui ca 3,3 5,5 - tetraiodtiroacetat
i 3,3 , 5 - triiodtiroacetat - compui cu activitate biologic minor. Iodida inorganic
este eliminat prin urin (3/4 -488 |ig/d), iar restul (-108 |ig/d) este utilizat n sintez
hormonilor tiroidieni.
Efectele biologice ale tiroizilor sunt determinate de interaciunea lor cu receptorii
nucleici. Probabil, aceti hormoni nu necesit o interaciune cu receptorii citozolici
pentru a fi translocai n nucleu. Locusurile din nucleu au o afinitate mare i o capacitate
mic la T3i sunt asociate cu proteinele nehistonice nucleice ce exist n toate celulele
sensibile ale acestor hormoni. Procesul de fixare coreleaz cu activitatea biologic i,
o dat cu saturarea receptorilor, crete activitatea polimerazelor, cu formarea RNA.
Procesele stimulate din nucleu includ i creterea vitezei de sintez a RNAm. Efectul
stimulatoriu asupra activitii diferitelor proteine (a-glicerofosfat dehidrogenazei, malic
enzimei, carbamoil-fosfat sintetazei, arginazei, G-6-PDH, AGS) este mediat de
amplificarea sintezei RNAm specifice.
Diferitele modulaii ale efectelor acestor hormoni din esuturile aflate n diverse
stri fiziologice pot fi cauzate de modificrile la nivelul postreceptoric, realizndu-se
prin schimbrile vitezei de sintez, a procesingului RNAm n nucleu i, posterior, cu
translare la diverse proteine specifice. Aceti hormoni au o importan deosebit pentru
dezvoltarea fetal i postnatal (formarea, evoluia i funciile, practic, ale tuturor celu
lelor din organe i esuturi), n special, pentru sistemul nervos i scheletic.
Hormonii tiroidieni posed efect anabolic la nivel mitocondrial, se intensific i
sinteza enzimei Na+,K +-A TP-azei- consumatorul principal al ATP (pn la 45% din
toata energia). Funcionarea acestui mecanism regleaz metabolismul oxidativ, oferind
un efect calorigen, n ficat, rinichi, muchii scheletali, muchiul cardiac, esutul adipos.
Disfuncii tiroidiene pot fi ntlnite la orice nivel al axei: hipotalamus-hipofiza-glanda
tiroid-esut periferic.
Hipertiroidismul, mai rspndit la femei, se ntlnete sub form de: hipertiroidismul
Gravis, gua multinodular toxic i adenoma toxic. Clinic se caracterizeaz prin:
hipcrkinczii, pierderea greutii corporale, anomalii cardiace (fibrilaie arterial), oboseal,
slbiciune, transpiraie, palpitaii i anxietate. Parametrii biochimici tipici sunt creterea
nivelului T, liber i micorarea TSH sanguin.
Hipotiroidismul, cauzat de patologia autoimun (tiroidita Hashimoto) sau ca
consecin a terapiei utilizate n hipertiroidism, la aduli are un debut insidios cu o gam
larg de simptoame. In snge sunt depistai T4 liber la valori mici i un nivel sporit de
TSH. n diagnostic se utilizeat i aprecierea anticorpilor antitireoglobulinici i
antitireoperoxidazici.
HORM ONII CORTICOSUPRARENALIENI
Dereglrile funciei endocrine a cortexului suprarenal la om are consecine dramatice
- maladia Adison. Interesul deosebit fa de aceast afeciune a favorizat studiile
respective. Biosinteza hormonilor steroizi e o secven complet de etape controlate
de ctre enzime. Precursorul chimic asociat e colesterolul, care nu numai c e absorbit
de celulele respective din snge, dar este i sintetizat de ele. Doar n celula sistemului
nervos concentraia lui e mai mare, dar aici colesterolul e esterificat. Aceti esteri conin
o mare concentraie de acizi grai polienici. Suprarenalele posed i cele mai nsemnate
cantiti de acid ascorbic, spre deosebire de toate celelalte organe ale omului.
Colesterolul captat din lipoproteinele plasmatice sau prin sinteza de novo se
acumuleaz n granulele lipidice citozolice. n mitocondrii colesterolul se transform n
pregnenolon prin intermediul unei enzime ce conine citocromul P450. Se hidroxileaz
i elibereaz fragmentul C6 (aldehid izocaproic). Este reacia ce limiteaz viteza
biosintezei hormonilor steroizi. Anume aceast etap e controlat de stimulatorii
suprarenalelor: A CTH, K+, angiotenzinal. n lipsa lor, suprarenalele genereaz foarte
puin pregnenolon i steroizi. Pregnenolon este transformat n gluco-
mineralocorticoizi i hormoni sexuali prin trei reacii fermentative diferite.
1. Calea principal e situat n zona reticular (intern) i const n dehidrogenarea i
izomerizarea ei n progesteron. O hidroxilaz ce e prezent numai n zona intern o
hidroxileaz la C,7, dup care nc 2 hidroxilaze la C21 si Cu formeaz cortizolul. La
obolani, principalul glucocorticoid e corticosterona. La om se produce puin. Calea
de sintez e aceeai, cu excepia etapei de hidroxilare n poziia 17.
2. n celulele zonei glomerulare (stratul exterior) din pregnenolon, apoi
corticosterona, prin hidroxilare i dehidrogenare, gruparea metil la Clg este transformat
n gruparea aldehidic. Enzima se afl numai n zona dat. Se consider c sinteza
aldosteronului e limitat anume de aceast zon.
3. Sinteza de steroizi C 19 n cortexul suprarenal este localizat la nivelul zonei
interne (zona fascicular plus zona reticular) i n condiii fiziologice este redus cantitativ,
nu comport semnificaii. Dup o hidroxilare la Cl7, are loc detaarea catenei laterale
(de o liaz) i se formeaz dehidroepiandrosterona (din pregnenolon) sau
androstendiona (din progesteron).
n condiii fiziologice, transformrile pregnenolonei n produse finale (cortizol,
aldosteronul, corticosterona, dehidroepiandrosteron) au loc destul de rapid. Ele sunt
unicele ce se acumuleaz n cantiti suficiente pentru asigurarea unei secreii fiziologice
necesare.
Hidmxilazele (1, II, III) reprezint cteva proteine i sunt atestate ca: FAD dependent
protein; fieroprotein nehemic; hemoprotein - citocrom P450. Enzimele necesit 0 2
i NADPH - surs de energie reductiv pentru hidroxilare. E posibil ca hidroxilazele
s funcioneze drept complexe multienzimatice. n literatura de specialitate sunt descrise
stri clinice nnscute cauzate de deficitul unei sau mai multor enzime, participante la
biosintez. Ca rezultat, se depoziteaz i se secret un surplus de antecesori ai reaciei
limitate. Blocurile fermentative la nivelul 21-,11-,17-hidroxilaze produc insuficien de
secreie a cortizolului - reglatorul cardinal al ACTH prin retroinhibiie. Nivelul ACTH
NOTA:
1. 20: Hidroxi laza 9. 17,20: Liaza
2. Desmolaza 10. 17-a-Hidroxilaza
3. 3--Dehidrogenaza 11. 21-Hidroxilaza
4. Izomaraza 12. 17-a-Hidroxilaza
5.21:Hidrolaza 13. 17,20:Liaza
6.1 i--Hidroxilaza 14. 17,20:Llaza
7. Aldosteron sintaza 15. 17-a-Hidroxilaza
8. 17-a-Hidroxilaza 16. 3--Dehidrogenaza
n snge va spori, i suprarenalele vor deveni obicctul unei stimulaii intensive, cu dezvoltarea
hiperplaziei. Nivelul precursorilor blocului va crete de cteva ori pn la un nivel patologic.
Alte afeciuni sunt redate n fg.7.15.
Insuficiena 21 -hidroxilazei confer, la deficit de cortizol, aldosteron - o hipoglice
mie cu pierderi de sruri (NaCl), i, n consecin, apare surplusul de androgeni - virilizare.
Tratamentul cu cortizol micoreaz secreia ACTH i cantitatea de androgeni.
Metapirona inhib 11--hidroxilaza i, respectiv, creterea adecvat a nivelului de
17-oxisteroizi derivai n urin i a 11-dezoxicortizol n snge, fapt argumentat conving
tor vizavi de meninerea funciei suprarenalei i ahipofizei.
Retenia transformrii colesterolului n biosintez se datoreaz aminogluletimidei.
Acest preparat se utilizeaz la tratamentul carcinomei suprarenale.
Secreia i transportarea. Aproximativ 85-90% din coninutul glucocorticoizilor
este legat de proteine - transcortin (75%) i albumina seric ( 15%). Aldosteronul se
fixeaz aproximativ la 40%. Proteinele sunt sintetizate n ficat i, la patologia lui,
cantitatea lor se reduce, cu mrirea respectiv a fraciei hormonului biologic activ.
Tiroizii i estrogenii amplific sinteza transcortinei. Corticosteroizii nu sunt depozitai n
celul, ci secretai imediat dup sintez.
Fixarea cu proteinele plasmatice creeaz o rezerv de hormoni, un sistem de tampon
ce supravegheaz accesibilitatea hormonului pentru receptorii din celulele-int,
influeneaz asupra clirensului sngelui. Experimental, s-a stabilit c nivelul hormonului
liber coreleaz cu efectul su biologic. Fiind fixai de albumin, corticosteroizii pot fi
transferai n esutul nervos. innd cont de gradul de fixare (90% cortizol i 40%
aldosteronul), de permeabilitatea filtrului renal, aldosteronul poate satura receptorii
si, cu efectul respectiv asupra homeostaziei Na. Analogii sintctici nu se fixeaz de
proteine, ci numai de receptori, care-s asimetrici, hidrofobi, puin stabili.
Metabolismul reprezint o varietate mare dc reacii, care inactiveaz hormonii i-i
transform n compui hidrosolubili. Calea fundamental const n hidrogenare i
conjugare cu acid glucuronic la Cr SteroiziiC,,, sunt eliminai prin urin ca 17-cetosteroizi
(10%), iar cei C e c a l i -dezoxi-17-cetosteroizi.
Reglarea secreiei e complet i include urmtoarele mecanisme:
1) Nivelul plasmatic al cortizolului, produs al stimulrii prin corticoliberin i ACTH,
sisteaz rapid secreia de CRH i mai lent - de ACTH.
2) Nivelul plasmatic al cortizolului sufer o variaie dium (ritm circadian), rezultat al
alternanei perioadelor de veghe-somn, maximum la trezire i minimum spre sear.
3) Strile de stres, solicitrile emoionale, durerea, pe ci nervoase mediaz eliberarea
de CRH i ACTH, cu sporirea nivelului de cortizol. Efectele metabolice ale cortizolului
furnizeaz organismului mij loace de a suprima stresul, fiind o reacie mai temperat dect
a catecolaminelor, dar de o durat mai lung i cu ecouri mai profunde pentru metabolism.
Reglarea sintezei i secreiei aldosteronului e supus unor mecanisme mai distincte
fa dc cele care opereaz n cazul glucocorticoizilor.
X) Sistemulrenin-angiotenzin. Renina, o enzim proteolitic produs de celu
lele aparatului juxtaglomerular, este eliminat n snge sub influena presiunii acestuia,
a concentraiei clorurii de sodiu. Renina acioneaz asupra angiotenzinogenului (protein
Hiperplazii adrenale congenitale Sinteza hormonilor steroizi
Colesterol (C2|)
D eficit de 3 - -H id roxisteroid -
d eh id ro g en a z
* Sunt abseni glucocorticoizii,
mineralocorticoizii, androgenii sau D e sm o la za
estrogenii.
* Excreie crescut de sare cu
urin.
* Deces prematur.
P regn en olon a (C 21)
H idroxi-
D eficit de 1 7-a-H id roxiIaz steroid
* Nu se sintetizeaz cortizolul i d eh id rogen aza
hormonii sexuali.
* Sinteza mrit de mineraiocorticoid
provoac retenia sodiului i apei i, P rogesteron a (C 21)
deci, conduce l hipertenzie.
* Pacientul este fenotipic - femeie- ns
nu e n stare s devin matur. 17-a
H id roxilaza
17-a -H id ro x ip ro g estero n a (C 21)
D eficit de 2 1 -a -H id ro x ila z
* Cea mai rspndit form a HAC. A n d rosten d ion a (C )
* De obicei, deficitul e parial.
1 1-D ezo x ico rtizo l ( )
* Nivel sporit de ACTH, care
conduce la un flux mrit de
hormoni sexuali i deci la virilizare.
T estosteron (C )
D eficit de 11-- H idroxilaza

* Scderea cortizolului,
aldosteronului i corticosteronei
n ser.
* Producie crescut de
deoxicorticosteron provoac
retenia apei i hipertenzie.
* Virilizare ca i n deficit de
C ortizol (C 2|) E stradiol (C ..)
21-a-Hidroxilaz.
A n g io te n z in o g e n plasmatic), detaeaz un deca-
Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe-Leu - Leu (~ 400) peptid, formnd angiotenzina I,
Renina A care, sub aciunea unei enzime de
' conversie, este transformat ntr-un
A n g io te n z in a I octapeptid - angiotenzina II
Asp-Arg-Val-Tyr-Ilc-His-Pro-Phe-Leu substan vasoactiv energic, prin
Enzime dc i constricia arteriolelor. Ea asigur
conversic^ i el ib e r a r e a a l d o s t e r o n u l u i .
Angiotenzina I I *
Asp -Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe Creterea nivelului plasmatic al
A I Aminopeptidaze aldosteronului cauzeaz retenie
jf de sodiu i, secundar, mrirea
A n g io te n z in a I I I volumului i a presiunii sngelui.
A rg-V al-T yr-Ile-H is-Pro-Phe P erio ad a de n ju m t ire a
Ansiotcnzmaze angiotenzinei II este foarte redus,
Produsele degrad M i fiin d deg rad at sub aciunea
F igu ra 7.16 Formarea i metabolismul angiotenzinelor angiotenzinazei (fig.7.16).
2)Acest mecanism opereaz prin
concentraia ionilor de K+. O uoar cretere a kalemiei stimuleaz secreia de aldosteron,
care prin aciunea kaliuric va restabili valoarea K+. Scderea kalemiei inhib secreia
de aldosteron.
Efectul biologic.
innd seama c corticoizii au o structur asemntoare, particularitile lor biologice
sunt determinate de mici modificri structurale i nu-i de mirare c efectele acestor
molecule interfereaz, nregistrndu-se la concentraii mari de hormoni.
Receptorii glucocorticoizilor se localizeaz n majoritatea esuturilor, n concor
dan cu influena reglatoare benefic a cortizolului i a substanelor nrudite. n lipsa
hormonilor, receptorii devin instabili i demonstreaz o afinitate mrit i
stereospecificitate vdit la analogii sintetici -dexametazol.
Receptorii aldosteronului se situeaz n esuturile rinichilor, vezicii urinare, intestinelor,
glandei parotide. Comparnd afinitatea acestor 2 clase de receptori la steroizii corespun
ztori, s-a constatat c aldosteronul, n concentraii mici, fiziologice, primordial se fixea
z de receptorii si, dar n concentraii mari - de receptorii glucocorticoizilor.
Glucocorticoizii n cantiti fiziologice nu posed nsuiri mineralocorticoide,darn
concentraii enonne se leag i cu receptorii aldosteronului, provocnd retenia sruri
lor. Complexul hormon-receptor activ se fixeaz de un DNA-segment, conine o pori
une de molecul receptorie, cu resturi de Lys, Arg, His, i se modific sub influena
agenilor ce acioneaz asupra grupelor sulfhidrilice.
Rezult efectul direct asupra activitii RNA-polimerazei. Arc loc amplificarea tran
scripiei genelor specifice, ce codific enzimele respective: triptofan-2,3-dioxigena-
za, tirozin aminotransferaza etc.
Cortizolul exercit multiple aciuni asupra metabolismului intermediar: anabolice,
catabolice, n raport cu natura esutului, starea organismului, n funcie de concentraia
altor hormoni.
Metabolismul glucidic:
1) amplific gluconeogeneza din aminoacizi n ficat, cu depozitarea glucozei n glico
gen, activnd enzimele responsabile respective. Aminoacizii utilizai sunt rezultani ai
degradrii proteinelor musculare i ai inhibrii coaptrii lor pentru sinteza proteinelor
extrahepatice;
2) reine transferul glucozei din snge n esuturi (adipos, muchi), ce cauzeaz
hiperglicemie, glucozurie i hiperinsulinemie. La o perioad ndelungat de administrare,
se soldeaz cu degenerarea i istovirea celulelor Langerhans i, implicit, la diabet zaharat;
3) evident c adrenalectomia mrete sensibilitatea la insulin i, deci, decade pro
blema utilizrii insulinei. Gravitatea diabetului zaharat se atenueaz.
La hipofuncia cortexului suprarenal, inaniia nendelungat poate fi fatal pentru
organismul uman, fapt cauzat de lipsa corticoizilor, coninutul mic de glicogen n muchi,
reducnd capacitatea de lucru a individului.
Metabolismul proteinelor i al acizilor nucleici:
Glucocorticoizii n ficat stimuleaz sinteza proteinelor specifice i, simultan, sunt
inhibitori puternici ai sintezei lor n muchi i limfocite, ceea ce provoac o degradare
esenial a lor pn la atrofia muscular i osteoporoz. n plasm apar cantiti
enorme de aminoacizi i degradarea lor mrete cantitatea de uree, cauzeaz apariia
unui bilan azotat negativ.
Metabolismul lipidelor:
Glucocorticoizii n organele centrale (fa, trunchi, ficat) favorizeaz depunerea
de grsimi, pe cnd la nivelul esutului adipos, mai ales la extremiti, exercit o aciune
lipolitic.
Cortizolul exercit i aciuni permisive (de intensificare a efectelor unor hormoni)
asupra adrenalinei, glucagonului, hormonului de cretere. n concentraii mari, acioneaz
imunosupresiv, ceea ce e condiionat de inhibarea transportului diferitor metabolii:
glucoz, aminoacizi, K+, micorarea sintezei de ATP, proteine, acizi nucleici i, de
asemenea, ca efect primar-stopeaz activitatea RNA polimerazei DNA dependente.
Are capacitatea de a suprima procesul inflamator-reine migrarea leucocitelor i eliminarea
de substane ce determin reacia inflamatorie.
Patologii medicale. Consecinele unor maladii infecioase sau reacii autoimune este
atrofia cortexului adrenal - insufuciena adrenocortical primar - maladia Addison. n
afeciune discrete nivelul de cortizol i aldosteron cu reinerea de potasiu i pierderea
de sodiu, ce duce la o hiperkalemie, hipovolemie i hipotensiune. Lipsa cortizolului
mrete sensibilitatea esuturilor la insulin, provocnd o hipoglicemie. De asemenea se
diminuiaz receptivitatea esuturilor la catecolamine, mai ales n vasele musculaturii, care
nu vor rspunde la o stimulare a -adrenergic, provocnd uor un colaps circulant.
Deficiena steroid sulfatazei (S T S )- o eroare metabolic ereditar x-dependent
determin apariia ictiozei (patologia pielii) la brbai, iar la femei are loc diminuarea
sintezei estrogenilor n perioadele cele mai trzii ale graviditii, avnd n consecin un
travaliu prelungit. Deficiena enzimei cauzeaz creterea nivelului de colesterol sulfat n
snge i piele. Colesterol sulfatul n keratocite deregleaz sinteza colesterolului ce ar fi
cauza afectrii pielii.
Hipercortizolismul primar (sindromul Cushing), ca regul este cauzat de o tumoare
adrenocortical autonom i se evalueaz prin nivel plasmatic sczut de ACTH. Pentru
acest sindrom sunt caracteristice toate efectele descrise pentru excesul de glucocorticoizi
cu dezvoltarea intoleranei la glucoz. Adrenalectomia corijaz aceste modificri, dar
impune necesitatea tratamentului cu glucocorticoizi. n cazul tumorii unilaterale cellalt
gland se atrofiaz din cauza suprimrii secreiei de ACTH. Supraproducerea de cortizol
de cortexul suprarenal hipertrofiat poate avea loc din cauza hipersecreiei de ACTH
(hipercortizolism secundar). Afeciunea poate fi determinat de defect la nivelul
hipofizar-hipotalamus sau de produceri eetopice de ACTH. Primul caz este cunoscut ca
maladia Cushing, iar cellalt ca sindromul ACTH-ectopic. n ambele cazuri cortexul
suprarenal funcioneaz normal i secret cortizol n dependen de nivelulu plasmatic de
ACTH. n diagnosticul diferencial un rol deosebit l are rspunsul la administrarea timp
de 3 zile a dexametazonului: n boala Cushing are loc supresia secreiei de ACTH, ce nu
se observ n transformrile maligne n sindromul ACTH-ectopic.
Aldosteronul menine homeostazia hidric i electrolitic, determinnd retenia ionilor
de Na+ i, n mod secundar, promoveaz eliminarea renal de H+, K+ i NH4+.
Retenia de sodiu antreneaz i retenia osmotic de ap. O dat cu sodiul, sunt reinui
Cl' i H C 03' nu numai n tubii renali distali, colectori, dar i n celulele epiteliale la
nivelul glandelor salivare, sudoripare i al intestinului.
Transportul se produce prin permeabilitatea pasiv a membranei apicale, apoi ionii
de Na+sunt expulzai din celul printr-un mecanism activ, consumator de ATP (pompa
de sodiu acionat ca Na7IC+- ATP-aza).
Hiperconcentraia la o hiperfuncie majoreaz volumul lichidului extracelular al
ionilor de Na+ i H C O v Concomitent, crete presiunea sanguin, sufer schimbri
caracteristice ECG, se micoreaz excitabilitatea sistemului nervos, diminueaz sinteza
proteic n oase, cu pierderea Ca++, osteoporoza, C a '' se elimin cu urina. Sngele
atest un nivel sczut de K+.
Ca regul hiperaldosteronismul primar (sindromul Conn) este determinat de adenoma
cortexului suprarenal cu producerea aldosteronului, care nu se supune reglrii prin K+
sau sistemului renin-angiotenzin. Hipernatriemia i hipervolemia reprim sinteza
reninei. n procesele cronice volumul sngelui mrit favorizeaz filtrarea glomerular,
cauznd pierderea urinar de Na+i ap nondependente de aldosteron. Acest fenomen
evadare, nereglat honnonal, pledeaz n favoarea absenei hipertensiunii severe n acest
sindrom. n hiperaldosteronismul secundar se constat nivel nalt al reninei plasmatice,
cu creterea coninutului de angiotenzina II i a aldosteronului. n consecin - nivelul
mare de Na+, hipervolemie, vasoconstricie, hipertensiune. In caz dc hipoabuminemie,
hipervolemiea nu mrete presiunea arterial dar cauzeaz untarea lichidului n spaicle
interstiiale cu apariia edemului nonnotensiv.
Hipofuncia provoac pierderi de Na+, Cl' i ap, cu majorarea K 'n ser i n
esuturi. Bicarbonaii sunt transportai n celule i H+- n lichidul extracelular,
provocnd acidoza; nu e excretatIT i nici N II+4, hipcrhemoconccntraie; crete
excitabilitatea esutului nervos; apare pericolul bradicardiei pn la stop cardiac. Pierderea
lichidului din rinichi cauzeaz insuficiena renal. Apa consumat excesiv poate provoca
intoxicaii. O diet cu un coninut mare de Na+i mic de * arpreveni multe fenomene
nedorite la insuficiena cortexului suprarenal, ar compensa disbalana mineral i ar
prentmpina consecina letal.
HORM ONII M EDULOSUPRARENALIENI

Produse de poriunea de origine nervoas - catecolaminele - sunt o parte a
sistemului nervos simpatic. Adrenalina se mai secret n terminaiile nervoase ale
hipotalamusului. Noradrenalina se elibereaz n neuronii simpatici ai sistemului nervos
central i periferic, este neuromediator i acioneaz local n celulele efectorii ale muchilor
netezi, vaselor creierului, inimii, ficatului. DOPAmina este neurotransmitor la nivelul
unor terminaii nervoase n anumite regiuni ale creierului; n snge e absent i servete ca
precursor biosintctic pentru adrenalin i noradrenalin.
Biosinteza. Substratul primare tirozina liber ce rezult din hidroliza proteinelor
endo-sau exogene, prin hidroxilarea fenilalaninei. Ultima este o reacie - limit catali
zat de o monooxigenaz - tirozin hidroxilaza (E,).
H OH
02 H2 O

Tetrahidrobiopterina Dihidrobiopterina
Ho (T H B P )^ (DHBP)
h 2n - c h - c o o h HOOCCHn h 2
Tirozina NADP NADPH + H + DOPA
Enzima e reglat de: 1) coninutul de substrat (tirozin) n celulele cromafine; 2) de

cofactorul pteridinic redus (Fe++); 3) prin retroinhibiie o regleaz i noradrenalina; 4)
activitatea enzimei poate fi reinut i de Phe, inhibitor necompetitiv, ce joac un anumit
rol n condiii de acumulare excesiv n celule, ca n fenilcetonurie.
Urmtoarea etap const n decarboxilarea DOPA n dopamin de DOPA
decarboxilaz, mai bine zis, o dccarboxilaz a L-aminoacizilor aromatici, avnd drept
cofactor piridoxalfosfatul.
OH
: h 2c h 2 n h 2
DOP Amina
Enzima are o afinitate mare la substrat i, ca urmare, viteza reaciei nu este influenat
de inhibitorii viguroi ai enzimei. Ambele reacii au loc n matricea celular, sub
aciunea enzimelor citozolice.
Apoi, DOPAmina este activ transferat de un mecanism dependent de ATP n gra
nulele cromafine, ce conin enzima DOPAmin- -hidroxilaz, transformed substratul
n noradrenalin (NA).
CH 2 - N H 2
Noradrenalina (NA)
Enzima e o oxidaz. NA se elimin n citozol, unde confer efect rezervat tirozin

hidroxilazei.
Etapa final const n metilarea NA de ctre S-adcnozil metionin, reacie catali
zat de o enzim citozolicfeniletanolamin-N-metil transferaz.
OH OH
+ S-AM S-A denozil-
hom ocisteina
OH -
I
c h 2- n h 2 c h 2- n h - c h 3
NA
Adrenalina
Enzima conlucreaz numai n compartimentul medular. Dac toate celulele posed

capacitatea de a sintetiza NA, apoi cea de metilare o dein numai celulele specifice.
Adrenalina este transferat n alt grup de granule, unde se conserveaz pn la elibe
rare.
Depozitarea. Catecolaminele sunt depozitate n granule, n complexul, ce include
catecolaminele,.o protein denumit cromogranina A, ioni de Mg44", Ca4f i o cantitate
mare de ATP. n concentraii majore ATP favorizeaz efectiv depozitarea catecolaminelor
(neutraliznd aminele bazice).
Eliberarea (secreia) se efectueaz prin exocitoz total att a coninutului granulei,
ct i al membranei. De aceea, n celul are loc o sintez de novo a enzimei (DOPAmin-
-hidroxilaza) i a componentelor membranare. Inhibitorii sintezei proteice stagneaz
sinteza i secreia noradrenalinei. n condiii neordinare, acetaldehida care se acumuleaz
n urma metabolizrii alcoolului stimuleaz secreia catecolaminelor, fr exocitoz.
Reglarea. Drept semnal pentru eliberarea catecolaminelor servete acetilcholina
din fibrele preganghonare. Interaciunea ei cu receptorii celulelor cromafine conduc la
o depolarizare local, cu fluxul dc Ca"4-, promotor al expulzrii coninutului granular.
S-a constatat o legtur dintre aceste procese i starea proceselor oxidative i glico-
litice. Substanele ce inhib funcia microfilamentelor (colhicina, vinblastina) inhib i
eliberarea catecolaminelor.
ACTH i glucocorticoizii amplific activitatea enzimelor ce particip la sinteza
catecolaminelor. Glucocorticoizii moduleaz nivelul feniletanolamin-N-metil transferazei
i, n final, cantitatea adrenalinei produs de substana medular.
Nivelul tirozin hidroxilazei i DOPAmin--hidroxilazei, n mare parte, e dependent
de coninutul din snge al ACTH. Stresul, majornd secreia ACTH i a glucocorticoizi
lor, sporete i producia de catecolamine. Doar sngele venos din poriunea cortical
trece prin cea medular i creeaz posibiliti de concentraii mari de glucocorticoizi,
nainte de a fi diluai n circuitul sanguin. Anume aceste intercorelaii motiveaz reaciile
comune ale acestor glande endocrine la stres.
Savanii au determinat i o specificitate anume la eliberarea catecolaminelor:
hipoglicemia sau nicotin favorizeaz eliberarea adrenalinei; obturarea arterei carotide
elibereaz preponderent noradrenalina.
Catecolaminele posed diverse efecte biologice: noradrenalina provoac constricia
vaselor, adrenalina-dilatarea lor n muchii scheletali, cu un pronunat caracter metabolic.
Adrenalina creeaz o situaie pasiv de tensionare, pe cnd noradrenalina genereaz
agresie i alte reacii periculoase.
Metabolismul si inactivarea catecolaminelor. Catecolaminele se metabolizeaz i
se inactiveaz n una din trei structuri anatomice:
1) n interiorul neuronului ce secret catecolamine, dup ncorporarea ulterioari n
citozol, n procesul numit retrocaptare. n neuronii creiemlui funcioneaz perfect un
mecanism de inactivare a lor, ca neurotransmitori. Amina nglobat ptrunde n granule
i-ireutilizatde neuron ntr-un nou ciclu.
2) n celulele efectoare, dup efectul biologic, sunt reutilizate.
3) n ficat i rinichi, sunt metabolizai, unde T I/2 e pn la 30 de secunde.
Metabolizarca decurge cu participarea MAO-monoaminooxidazei i a catecol-O-
metil transferazei - ambele enzime reprezcnlnd o combinaie dc izoenzime. Aciunea
combinat a acestor enzime rezult, n final, catabolitul denumit acid vanilmandelic, ce se
elimin prin urin. Exist i catabolii intermediari (metanefrin i normetanefrin).
MAO-flavoproteidul, ce solicit pentru funcionarea sa Cu^, este enzima constituen
t a membranei interne a mitocondriilor.
C H -C H 2 + o 2
HC
NA 3,4-Dihidroxifenil glicoaldehida
Efectul biologic. Catecolaminele acioneaz asupra unui numr mare de esuturi,

care cuprind receptori adrenergici ( a - a l i a2; - l i 2), fiind cuplai cu
diferite sisteme mesageriale secundare, deci i rspunsul esuturilor la catecolamine va
fi diferit. Receptorii l i 2 sunt cuplai cu adenilatciclaza, prin intermediul Gs-
proteinei, i va favoriza majorarea concentraiei AMPc. Receptorii a 2 sunt cuplai cu
o alt G protein, care va favoriza scderea AMPc, pe cnd a l determin creterea de
Ca++ intracelular, prin intermediul inozitoltrifosfatului.
c h 2- n h - c h 3 CH2NH2 COOH
Metanefrin Norme tanefrin Acidul Acidul
vanilmandelic vanilie
Catecolaminele, prin efectul lor asupra sistemului circulator, metabolismului, reglrii

secreiei unor hormoni, au un rol important la adaptarea organismului ctre diverse
afeciuni. Medulosuprarenala nu are importan cardinal pentru via, ns absena
secreiei medulare absolv organismul dc capacitatea de protejare, devenind vulnerabil
la diveri factori stresani, cu impact ncontinuu. Lipsa medulosuprarcnlelor ar putea fi
tolerat atta timp ct SN autonom rmne fucional intact.
Excesul de catecolamine ntlnit la pacienii cu tumori ale celulelor cromafme
(feocromocitome) se caracterizeaz prin hipertensiune arterial intermitent sau
permanent cu poteniale consecine amenitoare pentru via. Diagnosticul const n
aprecierea nivelului plasmatic de adrenalin, noradrenalin sau i a m etaboliilor-
metanefrina, normetanefrina, acidul vanilmandelic n urina dium. O sensibilitate major
o are determinarea coninutului plasmatic al metanefrinei. Feocromocitomele sunt nlturate
chirurgical.
H O RM O N II SEXUALI
Hormonii testiculari sunt androgenii, ovarieni - estrogenii i progestinele. Androgenii
sunt sintetizai n celulele interstiiale din testicul-testosteronul i dihidrotestosteronul,
n cantiti mai mici.
Biosinteza. Primele etape de sintez sunt aceleai ca i la toi steroizii; transform
rile colesterolului sunt catalizate de complexul enzimatic mitocondrial colesterol-
desmolaz, ce solicit NADPH, Mg++, C a^, citocrom P450, la care se formeaz
pregnenolona. Enzimele ce se includ ulterior sunt localizate n reticulul endoplasmatic
i formeaz progesterona - calea major de sintez. Modificrile de mai departe
constau n scindarea catenei de la C,,, cu fonnarea compuilor 19.
Din testosteron, n testicule sau n esuturile periferice se form eaz
dihidrotestosteronul, prin aciunea unei 5a-reductaze NADPH dependente.
Hormonul (T) este eliminat n snge pe msur ce se formeaz. Forme de

depozitare nu se atest. Transportul este efectuat de o protein plasmatic cu o
afinitate mai mare la testosteronul ce leag att T, ct i estrogenii.
Honnonul este catabolizat primordial n ficat prin oxidare, reducere de dehidroge-
naze NAD+i NADP+dependente, cu crearea derivailor mai puin activi, care apoi
sunt conjugai cu acidul glucuronic sau sulfuric. Derivaii finali reprezint 17-cetosteroizi
neutri, excretai prin urin - 1/3 sunt de origine gonadian i 2/3 - suprarenal.
Efectul biologic: controleaz procesele fundamentale necesare dezvoltrii i
funcionrii organelor sexuale, apariia i meninerea particularitilor sexuale secundare,
spermatogeneza; rol anabolizant n dezvoltarea scheletului i a muchilor.
Androgenii comport un efect substanial n metabolismul azotului i Ca44, amplific
dezvoltarea esuturilor la animalele tinere. Efectele sunt determinate de:
1) amplificarea sintezei DNA n esuturile-int;
2) translocarea RNA n citozol i stimularea sintezei proteinelor specifice cito
plasmatice;
3) intensificarea activitii DNApolimerazelor i a timidin-kinazelor;
4) stimularea sintezei proteinelor, cu afinitate major la DNA;
5) reglarea funciilor crcicrului i a reaciilor de comportament.
Rolul fundamental al accstor hormoni s-a demonstrat n baza experimentrilor de
castrare n perioada prepubertar. La administrarea simultan a androgenilor, reacia dc
rspuns a estrogenilor se tempereaz.
Dirijarea secreiei are loc prin retroinhibiie, la care particip gonadotropinele (LH,
F.SH), gonadoliberinele i testosteronul circulant.
Hormonii ovarieni (estrogenii), de rnd cu sinteza ovarian, se mai formeaz, n
cantiti mici, n adrenale, testicul i alte esuturi (ficat, piele). n timpul gestaiei,
unitatea feto-placentar sintetizeaz cantiti mari de progesteron.
Estrogenii sunt steroizi C lg, dintre care principalul e 17-estradiolul de origine
ovarian. Estrona i estriolul se creeaz la metabolizareaestradiolului.
Biosinteza. Precursor este testosteronul. Transformarea are loc sub aciunea unei
aromataze- sistem enzimatic ce include 3 etape de hidroxilare fermentativ, cu parti
ciparea a 3 molecule 0 2i 3 molecule NADPH. Ultima hidroxilare la C, e reacia -
limit, cu aromatizarea nucleului A.
Secreia. Dup sintez, hormonii se elimin n snge, nu se depoziteaz. Sunt trans
portai de ctre o protein (globulin). Progesteron se leag de aceeai protein, care
fixeaz cortizolul. Afinitatea e aproape egal pentru ambii hormoni.
Catabolismul are loc n ficat. Catabolitul principal e estriolul eliminat dup
conjugare cu acidul glucuronic i sulfuric, prin bil i fecale. Procesul e dependent
de starea funcional a glandei tiroide. La o hiperactivitate tiroidic, se reduce formarea
estriolului. Controlul de secreie s-a redat la gonadotropine.
Efectul biologic. Acioneaz n esuturile-
int (uter, glanda mamar, adenohipofiz,
hipotalamus, vagin), unde sunt situai ' H
receptorii specifici, cu o afinitate mare la es
tradiol. Complexul hormon-receptor este
translocat n nucleu, interacioneaz cu
proteinele nehistonice ale cromatinei, sti-
mulnd sinteza de noi molecule ale mRNA, ce
codific proteine specifice, am plific
activitatea RNA polimerazelor. 17 -estradiol
E stro g e n ii a c c e le re a z ren o v area
fosfogliceridelor i majoreaz nivelul Ca++
i al P n ser, fapt ce implic diferite modificri
n oase - de la cretere intensiv - la
porozitate.
Administrnd estrogeni brbailor, scade
nivelul circulant al lipidelor n snge, mai ales Estrona

la bolnavii cu hiperlipidemii. Aceti hormoni
controleaz dezvoltarea aparatului reprodu
ctor feminin, apariia i meninerea caracte
risticilor sexuale secundare, regleaz ciclul
ovarian, fecundarea, gestaia, naterea i
lactaia. Estradiolul are rol anabolizant asupra
oaselor i cartilajelor, precum i efect
vasodilatator puternic.
Hormoniiprogestageni (luteali).
Corpul galben i placenta n ultima perioad a sarcinii secretprogesterona. Precursor
n sintez estepregnenolona - se sintetizeaz i n corticosuprarenal i testicule. n
plasm circul legat de proteinele respective. n efectul lor necesit aciunea anterioar
sau concomitent a estrogenilor. Aceti hormoni reduc:
- aciunea estrogenilor n proliferarea epiteliului vaginal i uterin;
- motilitatea uterului;
- fluxul sanguin periferic;
- disiparea cldurii.
De asemenea, progestagenii mresc funcia secretorie a epiteliului uterin (favorizeaz
implantarea ovulului fecundat) i stimuleaz dezvoltarea glandelor rnamare (faciliteaz
lactaia).
Controlul endocrin al foliculogenezei

Foliculul ovarian conine 2 tipuri de celule endocrine. Primul tip sunt celulele granuloase
care se gsesc n folicul i sunt npachetate lng membrana bazal. Asemenea celulelor
Sertoli din testicul, celulele granuloase sunt perfiizate de transudatul plasmatic, nu de
snge, i posed activitate aromatazic FSH-sensibil; n acest mod FSH stimuleaz
formarea estrogenilor. Spre deosebire de celulele Sertoli ele prolifereaz ca rspuns la
estrogeni, pe cnd androgenii inhib aceast proliferare. Funcia neendocrin const n
promovarea creterei oocitelor prin producerea lichidului folicular. Celelalte celule foliculare
cu funcie endocrin sunt celulele tecii interne, care se afl nemijlocit lng peretele exterior
al membranei bazale; n aa m od, ele sunt localizate n afar folicului i sunt perfuzate de
snge. Aceste celule, asemntor celulelor Leydig ale testiculului, rspund la stimularea
cu LH printr-o producere de androgeni. Spre deosebire de celulele Leydig, ele produc
prioritar androstendiona i o cantitatea mic de testosteron. Celulele tecii interne
aprovizioneaz celulele granuloase cu androgeni pentru sinteza estrogenelor.
Controlului hormonal al dezvoltriifolicului. Pe parcursul fazei foliculare, foliculul
ovarian (foliculul preantral) crete pe baza proliferrii pronunate a celulelor granuloase.
n perioada a II a fazei n folicul se acumuleaz lichid ce determin formarea foliculului
antral. n foliculul preantral LH stimuleaz celulele interne cu producerea de
androstendion, care difuzeaz prin membrana bazal n interiorul compartmentului
celulelor granuloase. FSH provoac aromatizatea androgenilor (estradiol), care
acioneaz direct asupra celulelor granuloase genernd proliferarea. Aceast determin
creterea foliculului i acumularea dc lichid conducnd la fonnarea unui atrum. Cu toate
c, concentraia intrafolicular a estradiolului este suficient pentru stimularea proliferrii,
el nu trece n circulaia sanguin - eliberarea LH i FSH nu este inchibat i ramne la un
nivel constant, adecvat n etap antral a dezvoltrii foliculului. Producerea de estradiol
de ctre celulele granuloase crete din cauza apariiei receptorilor specifici pentm LH.
Inducia LH-receptorilor este dctcnninat de efectul combinat al FSI I-lui i estradiolului.
carc permite celulelor granuloase se iniieze producerea de estradiol din pregnenolon.
n aa mod este argumentat fonnarea estradiolului prin aromatizarea androgenilor ce
provin din tcaca intern. Pulul crescut al estradiolului determin o accelerare marcat a
Modificrile hormonale i fiziologice n ciclul menstrual (BBT - temperatura bazal)
creterii foliculului i o revarsare hormonal n circulaie sanguin. Consecvent, o astfel

de creterea este observat pe parcursul ultimelor 5-6 zile a fazei foliculare, ce exercit
un nou feed-back negativ asupra eliberrii FSH-ului, semnal ce indic pregtirea folicului
pentru ovulaie. Acest mesaj n forma unii creteri triple a nivelului estradiolului stimuleaz
peste 2-3 zile eliberarea unii cantiti majore de LH i FSI I - efect feed-back pozitiv.
Estradiolul sensibilizeaz hipofiza la GnRH i intensific eliberarea GnRH n hipotalamus.
Se crede c ultimul mecanism, implic fonnarea catecolestrogenului (2-hidroxiestradiol)
dup asimilarea de ctre eminena median, din care cauz cantiti mari, concureaz
cu noradrenalina hipotalamusului pentru inactivarea de ctre COMT (catecol-orto-
metil-transferaza). Aceast inactivare determin un coninut nalt al noradrenalinei n
eminena median ceea ce favorizeaz eliberarea GnRH. Nivelul nalt de LH eliberat
(valul preovulator al LH) ca rspuns la feed-back-ul pozitiv provocat de estradiol nduce
ovulaia n aproximativ 1 zi, probabil prin producerea de ctre celulele granuloase a
activatorului plasminogenului. Aceasta conduce la formarea plasminei, enzim ce ar fi
responsabil de digestia, scindarea, dispariia membranei bazale i de ruperea foliculului
(ovulaia).
Controlulu hormonal al funciei luteale. Dup ovulaie celulele granuloase
prolifereaz ca rspuns la valul preovular al LH. Celulele tecii interne i vasele sanguine
penfoliculare nvadeaz cavitatea foliculului colapsat. Sub influena LH celulele granuloase
i ale tecii nteme se diferenciaz n celulele luteale, caracterizate printr-un coninut nalt
de lipide. Aceste celule luteale snt sferoidogene i produc o cantitate nalt de
progesteron i moderat de estradiol. n aa mod, foliculul rupt de vine corp galben.
Morfogeneza corpului galben nu este complet studiat. Producerea Iueal de
progesteron i estradiol treptat certe la maximum la 6-7 zi dup ovulaie. n aa mod,
exist un interval de aproximativ 3 zile dup ovulaie, pe parcursul cruia nivelul estradiolului
circulant este redus i acest interval este necesar pentru transportul corespunztor al
ovulului prin trompele lui Fallope n interiorul uterului. Expunerea la un nivel nalt de
estrogeni pe parcursul acestui interval ar putea conduce la expulzarea sau la blocarea
transportului ovulului. Creterea nivelului de progesteron i estradiol pe parcursul primei
sptmni a fazei luteale este necesar pentru ca endometriul s devin secretar cu scopul
de a pregti implantaia i graviditatea.
Corpul galben are o durat de viaa de aproximativ 12 zile, i poate sintetiza autonom
hormoni fr stimulare extraovarian. Cu toate c corpul galben are receptori pentru
LH, eliberarea de LH (i FSH) pe parcursul fazei luteale este inchibat puternic de feed-
back-ul negativ, provocat de progesteron i estradiol. n aa mod, dac implantarea i
fecundarea nu au loc, corpul galben degenereaz (luteoliza) i producerea de ctre el a
progesteronei i estradiolului scade. Refractarea progesteronei i estradiolului pe
parcursul luteolizei are ca urmare deteriorarea endometriului i descvamarea lui
(menstruaia). Dac fecundarea i implantarea au loc, secreia de gonadotropin corionic
(hCG) de ctre blastocitul implantat stimuleaz corpul galben s continuie producerea
progesteronei. Astfel luteoliza este prevenit.
Regularitatea ciclului menstrual la femei de vrst reproductiv poate fi afectat de
dcfcctcle anatomice ale uterului i vaginului sau de cele structurale i funcionale ale
axului hipotalamus-hipofiz-ovare, ce afecteaz secreia hormonilor. ncetarea complet
a menstruaiei (peste 6 luni) se numete amenoree, iar reducerea frecvenei -
oligomenoree. Strile fiziologice de amenoree nclud prepubertarea, graviditatea, lactaia
i postmenopauza. O cauza patologic rspndit a amenoreei poate fi determinart de
reducerea secreiei de GnRH de ctre neuron ii hipotalamici n sistemul portal hipotalamo-
hipofizar, urmat de micorarea secreia FS11i LH de ctre hipofiz. Scaderea nivelului
de GnRI I poate avea loc din cauza pierdem n greutate, anorexii nervoase, exerciii fizice
excesive, maladii istovitoare, traume psihologice.
VITAMINELE
Generaliti. Progresul biochimiei ca tiin de prim rang a favorizat fonnarea
conceptului tiinific contemporan despre raia alimentar a omului, ceea ce a i
salvat nenumrate viei omeneti. Pn nu demult astfel de boli ca pelagra, beri-beri,
rahitismul erau foarte rspndite n multe ri, pe cnd azi aproape c au disprut. Sunt
studiate suficient cauzele apariiei lor. 1/8 din populaia Terrei nu se alimenteaz satisfctor,
din care cauz n fiecare minut mor de subnutriie aproape 30 de copii. Paradoxal, dar
muli oameni din rile civilizate sufer de pe urmele unei alimentri incorecte, determinate
nu de lipsa de alimente, dar de surplusul lor, de o nutriie neechilibrat.
Una din sarcinile actuale ale biochimiei moderne este informarea tiinific a
oamenilor despre problemele alimentrii raionale, fapt ce ar proteja omenirea de diferite
maladii, de escrocherii i controversri n domeniul respectiv.
E stabilit c o raie alimentar complet trebuie s includ urmtoarele substane
nutritive, cu funcii distinctive: surse de energie, aminoacizi eseniali, acizi grai eseniali,
elemente neorganice i vitamine. Apa, dei nu e substan nutritiv, totui e absolut
necesar omului pentru supravieuire.
Interdependena dintre caracterul raiei alimentare i unele stri morbide a fost obser
vat demult. Hipocrate meniona aciunea pozitiv a ficatului la boala orbul ginii,
n evul mediu, navigatorii erau afectai ndeosebi de scorbut, boal care a cosit mai
multe viei omeneti dect naufragiile maritime sau luptele. Din timpul expediiei lui
Vasco-de-Gamma (1469-1524), din 168 de participani s-au ntors numai 55. Cu
toate c erau cunoscute perfect metodele de profilaxie ale acestei boli, numai peste 200
de ani ele au fost formulate concis i aplicate de medicul englez Ling James (1753): Nu
o dat ne-am convins c legumele proaspete, fructele coapte i zarzavaturile sunt cel
mai benefic remediu i cel mai efectiv mijloc pentru profilaxia scorbutului.
O dat cu apariia cartofului n Europa, s-a micorat brusc morbiditatea de scorbut
(n ultimele luni ale iemii). n secolele XVI i XVII, nomenclatoarele farmaciilor mseti
includeau prepararea tincturii din pin i mciei ca remediu contra scorbutului.
n secolul al XIX-lea s-a constatat corelaia dintre alimentaie i evoluia unor boli:
n Italia (1804), G.Marzani a observat dependena pelagrei de consumul de porumb,
stabilind c maladia este rezultatul unei raii alimentare necomplete (lipsa unor vitamine
i proteine). Peste 12 ani, Magendi, experimental, folosete metoda de alimentare
a animalelor tinere cu raioane compuse din substane pure n scopul determinrii
influenei lor asupra procesului de dezvoltare. Savantul a ajuns la concluzia c:
animalele nu pot rmne sntoase, dac consum doar substane de baz ce determin
viaa - zahr, uleiuri i albuminoase.
O etap nou n tiin e legat de numele savantului rusN.Lunin (1881), care a
procedat la urmtoarele: oriceii experimentali, dac erau hrnii cu lapte proaspt, se
comportau nonnal, iar cei hrnii artificial, cu componeni ai laptelui plus ap, sufereau
de tulburri grave i piereau n primele luni de experiment. Savantul a ajuns la concluzia
c dac nu poate fi asigurat viaa doar cu proteine, lipide, glucide, sruri i ap, apoi
reiese c laptele mai conine substane nutritive care reprezint un interes deosebit pentm
studiere. Datele experimentale ale savantului amintit au fost confirmate peste 10 ani de
C.Sosin, care a recurs la o variant de diet artificial.
Din notiele medicului danezJ.de Bonitus (1630), reiese c beri-beri era cunoscut
bine de localnicii de pe insula Java, ns numai peste 250deanijaponezulT.Takakia
stabilit c boala ar putea fi prevenit, dac marinarii japonezi ar fi micorat cantitatea
orezului curat din raia alimentar i ar fi mrit cantitatea de came, legume, lapte. n
1890 medicul G.Eijkman a observat c polinevrita nu afecteaz psrile hrnite cu orez
necurat i c extractul din trele de orez trateaz polinevrita att la psri, ct i la
subiecii bolnavi. Conform altor date, extractul curativ din aceleai tre a fost cptat
de Kazimierz Funk, savant polonez, care-1 obine n form cristalic - un amestec de
vitamine. Dup proprieti, constituie o substan organic ce conine o grup aminic,
propunnd i denumirea acestor substane - vitamine (amin vital). Mai trziu s-a
constatat c multe substane din aceast clas nu conin grupa NH2, dar i pentru acestea
s-a meninut denumirea de v i t a m i n e.
Vitaminele reprezint o grup de substane organice integrate n cantiti minime n
celule i asigur activitatea lor normal. Majoritatea lor provin din mediul extern, adic
nu pot fi sintetizate de organism. n studiul vitaminelor, tractul digestiv este considerat un
factor de mediu exterior, deoarece numeroase vitamine sunt produse, prelucrate sau
consumate de ctre flora microbian din intestin, modificnd aportul real al vitaminelor
n organism.
Solicitrile diurne de vitamine de ctre om sunt extrem de mici (micrograme) i,
deci, vitaminele sunt nite microcomponente ale hranei, ndeplinind rolul catalitic n
diferite modificri chimice. Aminele nu reprezint surs de energie, dar regleaz indirect
metabolismul prin diferite sisteme fermentative, fiind componente propriu-zise ale
acestora. Acest fapt a fost sugerat, n 1922, de N. Zelinski.
Actualmente, cunoatem toate vitaminele necesare pentru funcionarea normal a
organismului uman. Necesitile individuale de anumite vitamine variaz n limita
dependenei de raia alimentar, activitatea micro florei intestinale, factorii genetici. O
diet neadecvat poate provoca insuficiena unor astfel de vitamine ca: biotina, B 12,
acidul pantotenic, vitamine sintetizate de flora bacterian intestinal. Vitaminele
atestate se conin n celulele animale, ale majoritii plantelor i ale microorganismelor,
exercitnd unele i aceleai funcii biologice cardinale.
La momentul actual, n dependen de impactul insuficienei unei sau altei vitamine
asupra sntii omului, ele pot fi mprite n dou clase. O problem destul de frecvent
n multe ri este insuficiena de tiamin, niacin, riboflavin, acid ascorbic i folie,
care afecteaz vdit populaia. De insuficien similar a acestor vitamine sufer i
cetenii rilor dezvoltate. Ct privete insuficiena acidului pantotenic, biotinei,
n, B6, vitaminelor A, D, E, K, practic, se nregistreaz foarte rar.
Carena vitaminelor n organismul uman poate fi cauzat de:
a) o alimentaie insuficient sau incomplet (alimentaie deficitar), cu deficiene ale
aportului primar de vitamine sau ca urmare a distrugerii vitaminelor din alimente ( la
prelucrarea termic);
b) un catabolism intens al vitaminelor cauzat de alterarea florei microbiene, ce
constituie o surs important de vitamine pentru necesitile organismului;
c) tulburrile de absorbie determinate de lezarea funciilor motrice i secretoare ale
intestinului;
d) afeciunile ficatului i ale pancreasului, ce deregleaz absorbia vitaminelor
liposolubile;
e) imposibilitatea transformrii provitaminelor n vitamine;
f) administrarea anumitor medicamente;
g) anumite stri fiziologice speciale sau patologice (perioada de evoluie, graviditate,
lactaie, efort fizic, boli infecioase, alcoolism cronic);
h) aciunea antivitaminelor din mediu, ce se integreaz n sistemele fermentative la fel
ca i vitaminele.
Studierea funciei biochimice a vitaminelor a contribuit la stabilirea antivitaminelor
- substane ce inhib efectul vitaminelor n celulele vii i reflect carena de vitamine.
Distingem 2 grupe de antivitamine:
1) cu o structur asemntoare vitaminei native. Efectul lor este bazat pe
interaciunea competitiv cu vitamina - concurena pentru centrul activ al enzimei,
determinnd o inhibiie competitiv;
2) antivitamine ce provoac modificri de natur chimic ale vitaminelor i, n
consecin, diminueaz sau suprim complet efectul biologic.
Aadar, prin termenul antivitamin se subnelege orice substan ce provoac,
indiferent de mecanismul de aciune, reducerea sau suprimarea complet a efectului
biologic al vitaminelor. Antivitaminele cu o structur analogic reprezint antimetabolii i
la interaciunea cu apoenzima formeaz complexe fermentative neactive, cu repercusiuni
respective. Majoritatea antivitaminelor sunt preparate medicamentoase cu un efect
distinctiv asupra unor procese fiziologice i biochimice. Sc utilizeaz pe larg ca preparate
anticancerigene sau anlibacteriene, stopnd sinteza proteinelor i a acizilor nucleici n
celule.
Sunt specificate i antivitamine de provenien biologic, inclusiv enzime, proteine,
ce provoac scindarea sau fixarea moleculelor vitaminice, dcposedndu-le de efectul
fiziologic: tiaminaza, ascorbatoxidaza, avidina (protein ce fixeaz biotina ntr-un
complex neactiv).
Sunt frecvente strile de laten clinic, la care nsemnele carenei apar n momentul
slbirii organismului, din diferite motive. O insuficien global scoate n evidena stri
precareniale diferite, n dependen de antecedente, adic de individualitatea biochimic
a persoanelor n cauz. Posibil c nsemnele de caren a unei vitamine, cu evoluie
mai rapid, mascheaz insuficiena altor vitamine i de aceea n clinic se nregistreaz
mai des manifestri policareniale.
Unele vitamine pot fi sintetizate parial de ctre om i alte mamifere (vitPP, avnd ca
precursor triptofanul). Flora intestinal sintetizeaz cantiti substaniale de vitamine (K,
PAB, biotin, acid folie, acid pantotenic), care pot acoperi parial necesitile normale
ale omului, pe cnd oferta celorlalte vitamine este insuficient i implic un surplus
alimentar susinut.
M etodele de dozare a vitam inelor
Scopul studiului este determinarea metodelor i tehnologiilor variate utilizate n clinici,
farmaceutic i n nutriie. Predomin metodele fizico-chimice i biologice.
Metodelefizico-chimice: vitaminele dau coloraie la interaciunea cu diferii compui
chimici, i intensitatea culorii proporional cu concentraia vitaminelor. Unele vitamine
au spectre de absorbie caracteristice n UV sau vizibil, ce fac posibil stabilirea
cantitii lor n alimente, umorile i esuturile organismului uman i al animalelor. Sunt
utilizate cu succes i metodele fluorimetrice (vit.B, i titrimetrice (vit.Q .
polarografice. cromatografice i altele, folosite pe larg n chimia analitic.
Testele biologice sunt menite s determine cantitatea minim de vitamine
necesar pentru profilaxie sau tratamentul simptomelorcareniale respective. Aceast
cantitate e stabilit ca unitate de msur. Testele microbiologice au scopul de a determina
viteza dezvoltrii unor microorganisme n medii sintetice corelate cu concentraia
vitaminei. Cantitatea vitaminei e exprimat n uniti internaionale sau micrograme.
Vitaminelese clasific n baza unui criteriu predominant:
a) solubilitatea n lipide i solveni organici;
b) solubilitatea n ap i solveni polari.
Vitaminele hidrosolubile necesit un aflux permanent din alimentaie, deoarece sunt
uor eliminate din organism sau scindate n urma unor ordinare reacii fermentative.
In urma consumrii unor alimente bogate n vitamine sau a unei terapii intensive,
saturate cu vitamine hidrosolubile, ele vor fi eliminate din organism evitnd consecinele
cauzate de incapacitatea de a fi depozitate n organe. Excesul vitaminelor liposolubile
(alimente sau preparate) n organism cauzeaz hipervitaminoze, cu manifestri chimice
diferite: de la forme uoare pn la veritabile intoxicaii cu vitamine.
nc de prin anii 30 s-au depistat funciile biochimice distinctive ale unor vitamine. n
1935, biochimistul german Otto Warburg a stabilit structura coenzimei necesare pentru
cataliza unor reacii de oxidoreducere n celul (NADP). Savantul a constatat c una
din componentele acestui complex e o substan organic simpl -nicotinam ida -
extras din tutun. Fiind molecul de structur simpl, majoritatea animalelor nu o
sintetizeaz n cantiti suficiente i e nevoie dc un aport exterior. Ulterior, s-a consolidat
conceptul c i alte vitamine funcioneaz ca pri active ale coenzimelor i ale grupelor
prostetice enzimatice. Vitaminelor li se atribuie un rol deosebit n procesele biochimice
dinamice, n interaciunile dintre metabolii i antimetabolii, ce stau la baza dezvoltrii
chimioterapiei modeme.
n prezent se acord o importan deosebit interaciunilor dintre vitamine-vitamine,
vitamine-hormoni, vitamine-medicamente, care se realizeaz prin efecte de sinergie,
potenare sau diminuare a aciunii vitaminelor i, respectiv, a hormonilor i medicamentelor.
VITAM INELE HIDROSOLU BILE
Vitamina !
Se mai numete i tiamin datorit structurii sale chimice (conine un nucleu tiazolic).
Sub fonn de sare, este o substan solid, cristalizat, incolor i solubil n ap. Este
relativ stabil n soluii acide, dar se inactiveaz rapid prin nclzire n soluii neutre sau
alcaline. Sub aciunea diferitor oxidani, tiamina este transformat n tiocrom; fluorescena
albastr a acestui compus servete la dozarea tiaminei.
Rspndirea i sursele. Este prezent n cantiti mari n drojdia de bere, dar i n
cortexul boabelor de cereale, cum ar fi griul, secara i orezul. Pinea de gru integral este
o excelent surs de tiamin. Este de asemenea prezent n unele legume ca mazrea,
fasolea, spanacul, precum i n unele fructe ca nucile, strugurii i n came. Majoritatea
esuturilor animale, mai ales produsele din came de porc, sunt importante surse de tiamin.
Dei concentraia de , n lapte este relativ sczut, i el e o important surs de tiamin,
mai ales consumat n cantitate mare.
Rolul biochimic. Tiamina indus alimentar este absorbit uor la nivelul intestinului
subire i dus mai ales n ficat, rinichi i inim. Aici are loc transferul direct al pirofosfatului
din ATP pe tiamin n prezena ionilor Mn2+, fonnndu-se tiaminpirofosfatul (fig.7.18).
CHj
CHOH
ATP
AMP
COO
Carbonul I
reactiv CH2
CH2
I
CHOH
O P =0
w
I ' -
O
~ o -p = o Tiaminpirofosfat
O"
Figu 7.18. Structura tiaminei i a tiaminpirofosfatului. Structuri intermediate form ate n reaciile
catalizate de: A - piruvat dehidrogenaza i - a-cetoglutarat dehidrogenaza
Tiaminpirofosfatul mai este cunoscut i
sub numele de cocarboxilaz, deoarece
are rol de coenzim n reaciile de
^ X ilu lo zo -5 -P
decarboxilare oxidativ a a-cetoacizilor Trans-
(piruvic, a-ceto-glutaric etc.) i n reacia -c eto la za <H TPP i
de transcetolare, ambele deosebit de im S e d o h ep tu lo zo -7 -P
portante n m etabolism ul glucidic
(fig.7.19). G A-3-P
S-a demonstrat c dup administrarea

de tiamin animalelor de experien, o parte b) Piruvat
din ca poate fi regsit n urina neschimbat TPP ~y^> PDH

i, o alt parte, ca piramin (4-amino-5- A cetil-C oA
hidroximetil-2-metilpirimidina). Aceasta
O xaloacetat C itrat
din urm se presupune c ar deriva din *
tiamin sub aciunea tiaminazei, prezent /
M alat Tzocitrat
mai degrab n m icroorgan ism ele rco,
a -c eto r g u ta r a t
intestinale, dect n esuturi. Creterea F um arat 1 Tpp H>/
activitii tiaminazei poate modifica
necesarul de vitamin. Xv
S u c c in a t ot-G DH ,
La indivizii normali, care ingereaz 0,5- _ S u c c in il- C o A
1,5 mg tiamin zilnic, s-a constatat o
eliminare urinar de 50-250 ig vitamin Figura 7.19. Reaciile cu participarea TPP
drept coenzim: a) - transcetolaza i b )-piruvat-
n 24 ore. i a-cetoglutarat dehidrogenaza
N e c e sa ru l z iln ic i caren a de
vitamin r Necesarul zilnic de vitamin s-a aoveait a n ae i ,u- 1 p mg care vanaza cu
alimentaia. Astfel, att lipidele, ct i proteinele exercit o aciune de economisire a
tiaminei. Deoarece tiaminpirofosfatul coninut n esuturile animalelor cu o diet bogat n
lipide este n cantitate considerabil mai mare dect n cazul animalelor cu o diet bogat n
glucide, s-ar putea presupune c lipidele ar crua, ntr-un anumit fel, tiamina.
Consumul de tiamin poate fi uor mrit prin folosirea n alimentaie a mazrii, fasolei,
a pinii intergale, precum i a practicilor de gtit. Se tie c fierberea excesiv duce la
scderea coninutului de tiamin a multor preparate.
Necesarul de tiamin crete la persoanele care depun o activitate fizic intens sau la
un consum mrit de glucide. n sarcin, alptare, ca i n diverse stri patologice ca
febr, diaree, stres, se impune un consum mrit de tiamin.
Carena de tiamin duce la beri-beri, boal ce a fost rspndit pe larg n zonele
unde orezul decorticat a constituit hrana de baz a oamenilor. Maladia dat este cunoscut
sub dou forme: uscat i umed. Forma uscat este caracterizat prin pierderea
rapid n greutate, atrofie muscular i tulburri nervoase. n cea umed, edemele
generalizate pot masca slbirea organismului. Apar afeciuni cardiace care evolueaz
rapid. Beri-beri umed rspunde bine la administrarea de tiamin, constatndu-se
normalizarea funciilor cardiace i diurez masiv. Deficitul de tiamin este mai frecvent
la alcoolicii cronici.
Cel mai eficient test de deficien a tiaminei la om prezint determinarea nivelului
transcetolazei eritrocitare.
Vitamina B2.
Este cunoscut i sub numele de riboflavin sau lactoflavin. Aceste denumiri sunt
datorate, pe de o parte, structurii sale de flavin, iar pe de alt parte faptului c a fost
izolat din lapte.
Riboflavina este o substan solid, cristalizat, de culoare galben, puin solubil n
ap. La aciunea razelor violete sau ultraviolete prezint o fluorescen galben-verzuie,
pe care ns o pierde n soluii puternic acide sau puternic bazice. Aceast proprietate
servete drept baz la dozarea riboflavinei n diverse medii biologice.
Prin iradierea cu raze ultraviolete n soluie alcalin, riboflavina formeaz lumiflavina,
iar dac aceast iradiere are loc n mediu acid, se formeaz lumicromul caracterizat
printr-o intens fluorescen albastr.
Rspndirea i sursele. Cantiti nsemnate de B, se conin n ficat, drojdia de bere,
boabele de gru, precum i n legumele cu frunze verzi cum ar fi varza, spanacul etc. In
mare msur, la asigurarea necesarului de riboflavin n dieta uman constituie laptele,
oule i carnea. Comercial, este obinut din culturile de mucegai, care produc vitamina,
cu un randament mare.
Rolul biochimic. Riboflavina este sintetizat de plantele verzi, bacterii i ciuperci, dar
nu i de animale. Cercetrile au demonstrat c toi atomii de carbon i azot ai guaninei,
cu excepia Cgal nucleului purinic, sunt folosii pentru sinteza riboflavinei.
Vitamina B2, produs din aport alimentar este absorbit uor la nivelul intestinului
subire, iar sngele o distribuie n tot organismul, cantiti mici fiind depozitate n ficat i
rinichi.
Prin reacia cu ATP riboflavina formeaz n organism dou substane deosebit de
importante:flavinmononucleotid (FMN) i flavinadenindinucleotid (FAD) (fig.7.20).
Riboflavina Flavinmononucleotid Flavinadenindinucleotid
Figura 7.20 Structura i biosinteza FM N i FAD
FAD se sintetizeaz din riboflavin i dou molecule de ATP. n prima etap se

fonneaz riboflavin-5-fosfatul (FMN), care prin reacie cu o a doua molecul de ATP
genereaz FAD.
Riboflavin + ATP > Riboflavin-5-fosfat + ADP
Riboflavin-5-fosfat + ATP Flavinadenindinucleotid + PPi
Necesarul zilnic i carena de vitamin ,. Pentru un adult sntos necesarul zilnic
de riboflavin este de 1,2-1,7 mg. Crete n perioada sarcinii i a alptrii.
Riboflavina nu este cunoscut ca factor etiologic primordial n nici una din maladiile
umane grave, dei pacienii cu pelagr, beri-beri i altele sufer de o insuficien de B2.
Deficienele de vitamin se caracterizeaz printr-o coloraie violet a limbii, fisuri ale
colului gurii i buzelor, oboseal ocular, dilatarea pupilei i sensibilitatea ochiului la
lumin, modificri de vascularizaie la nivelul comeii, tremurturi, tulburri digestive etc.
Toate aceste manifestri apar ns i n alte deficiene, cum ar fi cele provocate de lipsa
de niacin i fier, de aceea este greu de precizat care din aceste tulburri sunt cauzate de
carena de riboflavin i cnd deficienele de riboflavin apar la subiecii normali.
Carena riboflavinei n eritrocite este cel mai sensibil indiciu al carenei acestuia n
organismul uman; normal, sngele conine aproximativ 20 pg/dL riboflavin.
Vitamina B5, vitamina PP.
Ca vitamin, acidul nicotinic este cunoscut sub numele de niacin; denumirea de PP
deriv de la pelagra-preventiv, adic factor de prevenire a pelagrei. Aceeai aciune
antipelagroas o are i nicotinamida.
Niacina este o substan solid, cristalin, incolor, solubil n ap i soluii alcaline.
Nicotinamida sau niacinamida este o substan solid, cristalin, incolor, solubil n
ap.
Rspndirea i sursele de niacin. Este prezent n cantiti considerabile n produsele
de came, mai ales n ficat, n drojdia de bere, fain integral i n unele legume ca fasolea,
soia, mazrea, cartofii etc.
Rolul biochimic. Biosinteza niacinei are loc aproape n toate organismele, de la plante
pn la oameni. Reacia de transformare a triptofanului n nucleotidul acidului nicotinic
este caracteristica organismelor animale. Plantele verzi i numeroasele microorganisme
prezint o alt alternativ de sintez, despre care se tie doar c folosesc ca substan
de pornire aspartatul i un derivat al triozelor.
Triptofan NAD+ NADP+

Vitamina PP alimentar - este absorbit la nivelul intestinului subire i depozitat
pentru scurt timp n ficat. De aici, se rspndete n tot organismul, participnd la procesele
de oxido-rcducerc sub forma celor dou coenzime: NAD+i NADP+(fig.7.21).
Necesarul zilnic i carena. Hiperviaminoza. Necesarul zilnic este de 13-19 mg,
fiind mai crescut la brbai dect la femei, iar la copii - n perioada de cretere. Nevoile
de vitamin sunt mai mari n perioada de sarcin, de alptare i n efort fizic crescut.
Deoarece sinteza vitaminei PP se datoreaz triptofanului, necesarul de niacin al omului
i animalelor poate fi completat n baza acestui aminoacid. ntr-o alimentaie echilibrat
de came care conine triptofan, carena de vitamin este mai rar ntlnit, pe cnd ntr-o
alimentaie bogat n fin de porumb care este foarte srac n triptofan, apar deficiene
de niacin, cauzndpelagra.
Pelagra reflect, probabil, nu numai deficiene de niacin, dar i ale altor componente
din complexul B, precum i deficiena de proteine n diet. Boala se caracterizeaz prin
dermatite ale zonelor expuse la soare, stomatite, limba plin de rni, digestie dificil i
diaree. n cazuri severe, ntregul tract intestinal poate prezenta hemoragii; sunt frecvente
dereglrile sistemului nervos central, ajungndu-se la demen. Boala este cunoscut sub
numele de boala celor trei D-uri (Dermatit, Diaree, Demen).
Excesul de NAD+este ndeprtat prin ruperea legturii glicozidice de la nucleul piridinic,
sub aciunea unei enzime numite NAD+-glicohidrolaz, generndu-se nicotinamida i ADP-
riboza. n continuare, nicotinamida este hidrolizat de o nicotinamidaz, formndu-se
acidul nicotinic reutilizat la sinteza NAD'-ului. Cantiti mari de nicotinamid se formeaz
la creterile concentraiei NAD+-ului hepatic. n aceste situaii, revenirea la normal este
realizat cu ajutorul tranchilizanilor de tipul rezerpinei sau promazinei, sau prin
hipofizectomie; mecanismele prin care intervine ultimul proces sunt necunoscute.
n ficat, nicotinamida sufer o reacie ireversibil de metilare, cu formarea de N-
metilnicotinamid, principalul produs de catabolizare a niacinei, prezent n urin. Acest
produs a fost folosit pentru diagnosticarea carenei de nicotinamid. N-metilnicotinamida
este oxidat de o aldehidoxidaz n ficatul numeroaselor mamifere, precum i al omului,
cu formarea 6-piridonei corespunztoare, carc apoi este eliminat prin urin.
Vitamina Bc. o
Se mai numetepiridoxin sau adermin. Denumirea de piridoxin se datoreaz
structurii sale (conine un alcool cu nucleu piridinic), iar cea de adermin este legat
de capacitatea sa de a vindeca o dermatit specific dezvoltat la obolanii tineri hrnii
cu alimente lipsite de vitamine.
Vitamina Bft face parte din complexul B. Piridoxalul, piridoxolipiridoxamina -
toate au aceleai efecte asupra organismului i alctuiesc mpreun vitamina Bft.
Piridoxin este o substan solid, cristalin, incolor, solubil n ap i n unii solveni
organici; clorhidratul piridoxalului se prezint sub forma unor cristale rombicc solubile n
ap i mai puin solubile n alcool, n timp ce clorhidratul piridoxaminei cristalizeaz n
plcue higroscopice uor solubile n ap i greu solubile n alcool.
Surse de vitamina B6 sunt boabele ccrcalelor, glbenuul de ou, drojdia de bere,
legumele i carnea (mai ales ficatul i rinichii).
Rolul biochimic. Vitamina B6 cr C H 2O H
este absorbit uor la nivelul I H \
OP = 0 I / V
intestinului i trece n snge, care 0 = C NH
o duce n tot organismul; cantiti
mici de vitamin sunt depozitate )H CH3
Piridoxal
n muchii scheletali.
n citoplasm a majoritii
celulelor, dar mai ales a celulelor
h e p atice , co m p o n en tele Piridoxal fosfat
vitaminei B6sunt fosforilate sub C H 2O H
aciunea unei kinaze specifice,
/ V
graie ATP-ului, formndu-se H 2N H 2C f NH NH
esterii fosforici corespunztori.
OH CH3 CH3
Dintre acetia, piridoxalfosfatul
Piridoxamina Piridoxamino fosfat
i piridoxaminfosfatul au rol de
C H 2 H
c o en zim e, p a rtic ip n d la
numeroase reacii din organism H O H 2C
(fig.7.22).
Piridoxina q jj CH3
Omul i obolanul i comple
teaz necesarul de vitamin B6 F igu ra 7.22. Structura vit i a form elor sale active
pe seama piridoxinei sintetizate
de flora microbian intestinal, sintez stimulat de alimentaia bogat n amidon i dextrine
i inhibat de glucoz. Dup absorbia la nivelul intestinului, piridoxina este oxidat la
piridoxal i fosforilat la PLP, sub aciunea piridoxalkinazei. n afeciuni renale,
piridoxalkinaza este inhibat. Dei aportul de vitamin B6este corespunztor, se poate
ajunge la o caren de PLP.
n organism, vitamina B6 i esterii si particip la numeroase procese de importan
excepional. Amintim degradarea glicogenului, sinteza hemului, formarea anticorpilor,
sinteza acizilor nucleici, procesele de transaminare, meninerea echilibrului ionic Na'/K+,
funcionarea normal a sistemului nervos i muscular, sinteza histaminei, serotoninei,
vitaminei PP din triptofan etc.
Necesarul zilnic i carena de vitamin B6. Se estimeaz c necesarul zilnic de
vitamin normal este de 1,4-2,0 mg pentru un adult. La diet bogat n proteine,
precum i cu vrsta (n anumite stri fiziologice, afeciuni hepatice i cardiace, n expuneri
la radiaie) cerinele cresc.
Dei o avitaminoz pur este rar ntlnit la om, insuficiena vitaminei B6 e determinat
de apariia unor simptome caracteristice: stare de nervozitate, dureri la nivelul membrelor,
reinerea apei n organism, tulburri de mers, dureri abdominale, dermatite, cderea
prului, tulburri de vedere, artrite, anemie, afeciuni cardiace etc.
ntr-o alimentaie cu deficit de vitamina Bfi,dezoxipiridoxinadetemiin leziuni cutanate,
mai ales n jurul nasului, ochilor i gurii, precum i alterri ale limbii.
La sugarii hrnii cu lapte sau alimente fierte timp ndelungat la temperaturi ridicate, se
constat convulsii epileptiforme i hiperexcitabilitate, atribuite n special deficitului de
glutamat decarboxilaz i, implicit, de acid y-aminobutiric. Deoarece PLP particip la
biosinteza hemului, se presupune c o caren de PLP ar determina o anemie trectoare,
care ar diminua administrarea de vitamin.
Simptome ale carenei de vitamin B6 apar la administrarea izoniazidului, un
medicament folosit n tratamentul tuberculozei. Se pare c izoniazidul formeaz cu
piridoxalul i esterul su fosforic o hidrazon care se elimin prin urin, facndu-le astfel
indisponibile pentru reaciile enzimatice.
La obolani, carena de vitamin se manifest prin ncetinirea creterii i apariia unei
dermatite caracteristice denumit acrodinie, caracterizat prin inflamaia i descuamarea
pielii extremitilor. La tineretul porcin, cini i obolani duce la o cretere a coninutului
de fier n plasm i hemosideroz. obolanii cu deficit de vitamin sunt sensibili la zgomot
i manifest accese epileptice.
Excesul de vitamin B6este rar ntlnit. Cnd se produce scade absorbia intestinal a
vitaminei. De asemenea, supradozarea piridoxinei inhib fosfokinazele implicate la
transformarea tiaminei n TPP.
Acidul pantotenic (B3) .
Compus larg rspndit n majoritatea esuturilor vegetale i animale, fiind vitamin
pentru om i animale i factor de cretere pentru microorganisme.
Din punct de vedere structural, acidul
pantotenic este format din acidpantoic i - A cidul pantotenic
alanin, unite prin legtur peptidic (fig.7.23).
Este un ulei galben, vscos, solubil n ap i
H H CH3
acid acetic, puin solubil n alcool, benzen,
cloroform. Este stabil la pH uor acid i neutru,
9
- CH2-CH2-N-c-<j: - 2
NH O OH CH3 I
dar instabil la nclzire. Sarea sa, pantotenatul
de calciu, este o substan solid, cristalin,
solubil n ap, glicerin i acid acetic, greu
solubil n alcool i insolubil n cloroform,
eter, benzen.
Sursele. Este prezent n alimentele care
conin celelalte componente ale complexului B;
deosebit de bogate sunt drojdia de bere, ficatul
i oule. C arnea i laptele sunt surse
importante, pe de o parte, datorit coninutului O"
F igu ra 7.23. Structura coenzimei A
de vitamin, iar pe de alt parte, datorit
cantitii consumate. Majoritatea legumelor i
fructelor sunt surse srace de acid pantotenic.
Rolul biochimic. Acidul pantotenic alimentar este absorbit uor la nivelul intestinului
i dus de ctre snge la toate organele, unde este fosforilat n baza ATP-ului. Apoi,
printr-o serie de reacii succesive, se obine coenzim A.
Rolul coenzimei A este multiplu, participnd n procesele de biosintez i degradare.
In toate aceste procese, ea particip prin gruparea -SH a tioetilaminei, care este capabil
s fonneze legturi macroergice, tioesterice. Coenzim A degradeaz n acid pantotenic
i cisteamin, ultima transformndu-se n hipotaurina. Unele microorganisme (E.coli)
au capacitatea de a realiza integral biosinteza acidului pantotenic. Omul i animalele
superioare nu pot sintetiza acidul pantoteinic, prin urmare, sunt incapabile s realizeze
sinteza coenzimei A. Acidul pantotenic produs de aportul alimentar va servi ca surs
pentru sinteza coenzimei A.
In creier, lipsete kinaza specific care catalizeaz transformarea pantotenatului n 4-
fosfopantotenat. Ca urmare, n acest organ concentraia pantotenatului rmne constant,
iar sinteza coenzimei A nu are loc.
Necesarul zilnic i hipervitaminoza. Potrivit unor autori, necesarul zilnic de acid
pantotenic este de 5-10 mg, conform altora - de 10-15 mg sau chiar de 30-50 mg.
Necesarul de acid pantotenic crete mult n stres. Deficiena de acid pantotenic la om nu
a fost evideniat, dar s-a constatat c prezena acidului pantotenic n alimente este esenial
pentru toate speciile investigate.
La obolani, deficiena de acid pantotenic se caracterizeaz prin ncetinirea creterii,
slbirea funciei de reproducere, colorarea n gri a prului obolanilor albi etc.
In anumite stri patologice la om, carena de acid pantotenic se caracterizeaz prin
vrsturi, dureri abdominale, crampe musculare, infecii ale cilor respiratorii superioare,
sensibilitatea organismului la infecii, n general etc. De asemenea, pot aprea modificri
cutanate i scderea funciei suprarenale, ceea ce induce hipoglicemie, reducerea
capacitii fizice, afeciuni ale sistemului nervos etc. Unele concluzii indic o strns
dependen ntre scderea concentraiei acidului pantotenic i predispoziia la artrite
reumatice.
Biotina (Vitamina H).
Este vitamin pentru om i animale i factor de cretere pentru drojdie, ciuperci i
bacterii. Structura sa include un ciclu imidazolic condensat cu unul tiofenic, la acesta din
urm fiind ataat radicalul acidului valerianic.
Prezint o substan cristalin, incolor, solubil n ap. n mediu acid sau bazic se
descompune, dar este stabil la nclzire.
Sursele. Biotina este foarte rspndit n hran. Ficatul rumegtoarelor i drojdia sunt
cele mai bogate surse. Arahidele, ciocolata, glbenuul de ou, laptele, tomatele etc. sunt
de asemenea surse bogate de biotin.
n condiii normale, biotina este furnizat mamiferelor n cantiti suficiente prin sinteza
de ctre flora microbian intestinal. Aa se explic faptul c eliminarea de biotin prin
urin i fecale depete aportul alimentar.
Rolul biochimic. Sinteza biotinei a fost studiat n baza unei varieti de mucegaiuri i
bacterii. Reaciile ce par a explica cel mai bine sinteza biotinei la E. coli i la alte organisme
pornesc de la acidul pimelic activat, format pe seama acidului oleic. Originea atomului de
sulf nu e cunoscut. ntregul ir de reacii este suprimat de prezena biotinil-5-adenilatului.
Biotina aportat alimentar este absorbit uor la nivelul intestinului subire. n organism,
ndeplinete roluri foarte importante, participnd la metabolismul lipidic, glucidic, precum
i la alte reacii n care are rol de fixare , pe diferii intermediari.
n enzimele ce conin biotin, aceasta este legat covalent, sub forma unei legturi
amidice, la gruparea e-amino a unui rest de lizin din apoenzim, ceea ce implic activarea
biotinei n prezena ATP, urmat de
cuplarea cu proteina pentru a forma
holoenzima (fig.7.24).
a)
Prin proteoliz enzimelor ce conin
biotin, se elibereaz -biotinil-lizina sau H R
biocitina. n ficat i snge s-a evideniat
o enzim numit biocitinaz, care _ . S \
B iotin a
elibereaz biotina i lizina La mamifere
catena lateral a biotinei sufer o -
oxidare obinuit, genernd doi moli de
acetil-CoA. b)
Enzim ele ce necesit biotina:
N ecesarul zilnic i carena de acetil carboxilaza
propionil carboxilaza
biotin. n baza rezultatelor obinute piruvat carboxilaza
prin studiul obolanilor, se estimeaz
c cerinele umane de biotin ar fi 10
jJLg/zi. In alte literaturi se dau valori mult v w v w \ /w w v
mai mari (150-300 Hg/zi), dei nu exist
cerine reale de biotin. Aceasta se
explic prin faptul c n condiii normale >Restul lizil
biotina este sintetizat suficient de

bacteriile intestinale. Saitul de fixarea
n albuul de ou crud exist o O
protein num it avidin care are
capacitatea de a forma o combinaie
stabil, ireversibil cu biotina. Ca unnare > Biotina
biotina devine ineficient pentru
organism i pot aprea simptomele
carenei. Prin nclzire, avidina se F igu ra 7.24. Fixarea biotinei n enzime.
inactiveaz, iar efectele asupra biotinei aj-structura biotinei, b)- fixarea biotinei n enzime
dispar.
Carena de biotin la obolani se manifest prin dermatite, paralizii, cderea prului
n jurul ochilor etc. La om, carena de biotin se manifest prin dermatite, oboseal,
dureri musculare, insomnii, depresii nervoase. Administrarea unor cantiti mici de biotin
nltur n scurt timp efectele carenei.
Acidul folie.
Molecula acidului folie conine acid glutamic, acid p-aminobenzoic i o pteridin.
Denumirea sa se explic prin faptul c aceast substan se gsete n cantiti mari n
frunzele de spanac i are un caracter acid. Acidul folie produs de E.coli i cel prezent n
esuturile numeroaselor mamifere conine preponderent 5 resturi de acid glutamic unite
prin legturi y-glutamil. Se mai cunosc ns i ali acizi foliei: pteroil-triglutamic (cu trei
resturi de acid glutamic) i pteroil-heptaglutamic (cu 7 resturi de acid glutamic).
Acidul folie (pteroil-monoglutamic) este o substan cristalin, de culoare galben,
puin solubil n ap, solubil n soluii alcoolice diluate.
Sursele. Este larg rspndit n flor i faun. Surse bogate de acid folie sunt: drojdia,
ficatul, rinichii, petele i plantele cu fiunze verzi.
Rolul biochimic. Privind biosinteza acidului folie, s-a constatat c pteridina se obine
pe seama GTP-ului, iar gruparea amino a acidului p-aminobenzoic provine din Gin.
Biosinteza are loc la unele microorganisme, inclusiv din flora intestinal i, n cantiti
mult mai reduse, din esuturile unor animale. Transformarea acidului folie n compui
activi, ca i la coenzime, are loc n organismul omului i al animalelor i necesit prezena
acidului ascorbic.
Acizii pteroil-poliglutamici datorai aportului alimentar sunt hidrolizai n intestin,
sub aciunea unor enzime specifice numite folilpoliglutamat hidrolaze, pn la acid folie.
Urmeaz absorbia care este un proces complex: o parte a acidului folie se absoarbe ca
atare n circulaie, dar cea mai mare parte este hidrogenat, n celulele peretelui intestinal,
la acid tetrahidrofolie, urmat de o metilare la N5, formndu-se N5-CH^-FH4. Sngele l
duce la ficat, de unde este repartizat la esuturi prin circulaia sistemic. In plasm, CH3-
FH4circul legat de o protein specific. Nivelul plasmatic al folailor scade n carena
de acid folie, anemie pernicioas, ciroz hepatic, leucemii.
Acizii tetrahidrofolici, n special N5- formil-FH4, reprezint coenzimele unor sisteme
implicate n procese deosebit de importante pentru organism ca: biosinteza bazelor
purinice, a timinei, conversia glicinei la serin, homocisteinei la metionin, transformarea
colaminei n cholin, biosinteza proteinelor etc. n aceste procese acizii tetrahidrofolici
particip la transferul unor grupri ,-active ca: metil, hidroximetil, formil, formimino de
la un compus la altul. Rolul metabolic al acidului folie (i al vitaminei BQ) n metabolismul
fragmentelor poate fi redat n felul urmtor: Unitile C,-active transportate de
tetrahidrofolat sunt interconvertibile. n acest proces intervin serina, formiatul, ATP,
NADH,H+, NADP etc.( fig.7.25)
Necesarul zilnic i carena de acidfolie. Cerinele normale de acid folie n diet
sunt de 50 p.g/zi, dar din cauza slabei absorbii, doza zilnic recomandat este de
aproximativ 400 (ig/zi. O cretere a cantitii pn la 600-800 (ig/zi este recomandat n
graviditate, alptare, stri de stres i anumite stri patologice.
Acidul folie reprezint un factor de cretere pentru numeroase organisme, participnd
la sinteza acizilor nucleici i, implicit, la diviziunea celular.
io NH H2C---- N - CH3 N H-
\ I
NH XH, N . .C H 2 .N ,CH2
8 7
v tu ^ N A D H ^P X /
n h " Ser NH n ad + NH
Gly
5 10
Tetrahidrofolat N , N -metilen N -metil
tetrahidrofolat tetrahidrofolat
, Formiat + A T P
^ ADP NH
I
HC- N CH NH-
II
I I
NH ,N - N CH2 N. CH2
+
NH
I
NH
J NH
io H 20
5 10 NHj 5
N -formil N , N -m etenil N -formimino
tetrahidrofolat tetrahidrofolat tetrahidrofolat
NH
5
N -formil
tetrahidrofolat
F igura 7.25. Interconversiagrupelor monocarbonice
Deci, carena acidului folie este caracterizat prin ntreruperea creterii, leucopenie,
anemie, pierdere n greutate etc. Deficiena la animale nu apare numai n cazul unei diete
lipsite de acid folie; la obolani, spre exemplu, carena de acid folie poate aprea mai
degrab prin introducerea de sulfonamide n diet, probabil ca rezultat al inhibrii sintezei
acidului folie n flora microbian intestinal.
Utilizarea acidului folie n anemiile umane a condus la cretcrea numrului de globule
roii i sinteza hemoglobinei. Un rol important pentru reinerea folailor n organism o are
vitamina B]2, de aceea, carena acesteia determin un deficit secundar de acid folie.
Vitamina B]2condiioneaz formarea formil-FH4.
Vitamina 12 *
Numit i cobalamin este vitamin pentru om i animale, precum i factor de cretere

pentru microorganisme. Structura vitaminei este complex (fig.7.26).
Ciano-cobalamina, forma cea mai stabil a vitaminei B |2, este o substan solid,
cristalizat sub forma unor ace de culoare roie-nchis, solubil n ap, stabil la
temperaturi ridicate.
Inelul corinii Dimetil benzimidazol
F igu ra 7.26. Structura vit. B12 i a altor form e coenzimatice
Sursele. Vitamina p este larg rspndit

n produsele de came, mai ales n ficat, rinichi,
muchi, n produsele de pete, precum i n
cele lactate.
Rolul biochimic. Vitamina B ]2 alimentar
este eliberat n intestin, dup care se unete
cu un factor secretat de celulele mucoasei
gastrice i este absorbit. Dup absorbie,
acest factor este eliberat i vitamina 12este
preluat de o protein transportatoare specific
din plasm n um it tra n sco b a la m in
(fig.7.27). n aceast form este dus la
diverse esuturi, mai ales la ficat, unde este
depozitat. Aici complexul cu transcobalamin
se desface, i vitamina este eliberat sub
form de hidroxocobalamin B12a(Co3+). n
citozol, acest compus reacioneaz cu ATP i
formeaz coenzim . ill
Proteinei
Aciunea vitaminei p se releveaz n dou fixatoare de
sngele
direcii:
1. Are rol de coenzim pentru unele
transferaze, cum ar fi transmetilaza care
catalizeaz transformarea homocisteinei n
metionin.
2. Unele izomeraze sau mutaze conin coenzim H o m o cistein
a)
B12(fig.7.28). N 5-M etiI-F H 4
Caracteristica comun a acestor reacii este
Homocistein-
transferul unui atom de hidrogen de la carbonul C( (m etilcob alam in a)
m etil
la carbonul Cr Acest transfer este nsoit de transferaza
transferul invers, de laC ? la C ( a unei alte grupri FH.
M etionina
ca: hidroxil, amino, alchil, carboxil etc., conform A cizii grai im pari
reaciei:
b)
- H C , - + C 2X - - - X C , - + C2H -
1Necesarul zilnic i deficiena vitaminei n .
Plantele i animalele nu pot sintetiza vitamina |2,
numai cteva microorganisme au aceast capacitate. COO'
Necesarul zilnic de vitamin B12este de 3 |xg pentru H 3C -C -H
aduli i copii mici i de 1 |ig pentru copiii mai mari.
t-C -S C oA
Crete n stri fiziologice, ajungnd pn la 4 jig/zi. I!
Aceast vitamin reprezint una din cele mai o

M etilm a io n il-C o A
active substane: administrarea de numai 1 jig de
M etilm alon il -C oA V it.B 12
vitamin B12unui bolnav de anemie pernicioas m u taza (d ezoxiad en ozil
conduce la activarea puternic i imediat a cob alam in a)
hematopoiezei.
V itam ina B |2 este consid erat factorul
antipemicios, deoarece carena ei cauzeaz anemia cocr
pernicioas denumit i boala Biermer. Aceast H2C -C H 2
I
maladie este o anemie macrocitar, hipercrom,
C-SCoA
nsoit de tulburri nervoase, cu scderea reaciilor It
reflexe, tulburri de vorbire, mers, digestive. o S u ccin il CoA
Anemia pernicioas se datoreaz incapacitii
mduvei de .a produce
, , , ,
globule .roii
7 .
normale.. n 1<igura 7.28.
Reacii
reglate cu
aceste cazuri, globulele sunt primitive i au viaa participarea vit. b I2 drept cofactor
scurt. Pentru producerea globulelor roii normale
e nevoie de un factor antipemicios care se fonneaz
n urma interaciunii dintre un factor extrinsec cum este vitamina p din alimente i un
factor intrinsec produs de mucoasa gastric. Drept factor intrinsec servete o
glicoprotein cu specificitate absolut, aflat n mod normal n sucul gastric. La unii
bolnavi de anemie pernicioas, mucoasa gastric nu produce factorul intrinsec. Acest
fenomen poate fi suplimentat prin aport alimentar de ficat.
Menionm faptul c exist patru tulburri metabolice ereditare caracterizate prin
incapacitatea organismului de a folosi vitamina B 12 cu rol de coenzim. n dou din
aceste maladii este afectat numai sinteza dezoxiadenozil cobalaminei, iar n celelalte
dou s-a pus n eviden incapacitatea de formare a dezoxiadenozil cobalaminei, fie a
metilcobalaminei.
Vitamina (acidul ascorbic). o = c ___
Acidul ascorbic a fost izolat n stare cristalin din sucul de
HOC
lmie de ctre biochimitii americani C.King i N. Waugh n 1932. 11
Denumirea provine de la faptul c este o substan cu caracter HOC

acid i vindec boala numit scorbut. Aceast boal provocat H<- -----
de carena vitaminei se ntlnete la om, precum i la unele HOCH
maimue, cobai, lilieci, deoarece acestor organisme nu le este C H 2O H
caracteristic capacitatea de a sintetiza acidul ascorbic.
Acidul ascorbic este o substan cristalin, uor solubil n
ap, cu caracter acid. Dintre vitaminele hidrosolubile, vitamina este cea mai puin
stabil. Ea este sensibil mai ales la nclzire, fiind ns stabil la temperaturi sczute,
chiar la cele de ngheare a produselor care o conin.
Rspndirea i sursele. Scorbutul se datoreaz lipsei de legume i fructe proaspete
din hran, care sunt surse bogate de viatmina C, mai ales cele cu frunze verzi ca: tomate,
spanac, varz, ardei, cartofi noi. Concentraii mari de vitamin sunt n citrice, pepene
galben, mcie i, n cantiti mici, n lapte i came, mai ales n urma prelucrrii termice.
Rolul biochimic. Vitamina se absoarbe rapid la nivelul intestinului. Diferii factori
au ns capacitatea de a scdea sau chiar de a mpiedica absorbia vitaminei C. Printre
acetia sunt: antibioticele, cortizonul, aspirina, medicamentele calmante, fumul, n special
cel de igar, stresul i temperaturile ridicate.
Acidul ascorbic eliberat n lumenul intestinal sub form de acid dehidroascorbic sufer
o reducere n peretele intestinal, fiind absorbit n circulaie sub form de acid ascorbic.
Organismul reine din aportul alimentar numai cantitatea strict necesar, restul fiind
eliminat prin urin.
Eliminarea de oxalat urinar, ca i formarea oxalatului de calciu insolubil, poate fi
atribuit n parte acidului ascorbic, deoarece n organism o cantitate din acesta se
transform n acid oxalic.
Majoritatea reaciilor n care particip acidul ascorbic sunt hidroxilrile la care particip
oxigenul molecular.
R-H + Acid ascorbic + 0 2 R-OH + Acid dehidroascorbic + H20
Dar acidul ascorbic intervine n numeroase procese - prin reacii de reducere, iar
acidul dehidroascorbic - prin reacii de oxidare.
Iat cteva exemple:
1/2 0 2 O"
C ita (c) Fe3+ - j g S g - C ita (c) Fe2+
Methemoglobina -^ ^ - Hemoglobina
Acid folie A^d ascorbic Acid tetrahidrofolic

Hidroxilare
Prolina . ..----- *~ Hidroxiprolina
Acid ascorbic r
. . Hidroxilare
Lizina -------*- Hidroxilizina
A cid ascorbic
Triptofan
r

A cid dehidroascorbic
5-hidroxitriptofan
r
O importan deosebit la fonnarea hidroxiprolinei i hidroxilizinei (aminoacizi specifici

colagenului) o are acidul ascorbic. Dac acest proces nu are loc, se obine un colagen
srac n cei doi aminoacizi, imatur, solubil, cu consecine ce rezult de aici.
Pe lng reaciile menionate, acidul ascorbic intervine i n alte reacii de oxido-reducere
n care funcioneaz cuplat cu glutationul sau coenzimele nicotinamidice i flavinice. Acidul
ascorbic are un rol important la degradarea oxidativ a tirozinei, precum i la formarea
hormonului medulosuprarenal-adrenalina. n ambele procese, vitamina are rol de
activator al anumitelor enzime.
Necesandzilnic i carena. Necesarul zilnic de vitamin al omului sntos este de
1 mg acid ascorbic/kg/corp, care variaz la efortul fizic, starea de sntate i strile
fiziologice speciale ale organismului. n cazul unor boli cum ar fi cele virale, printre care
i gripa, perioadele de stres, tulburrile cardiovasculare, aportul de vitamin trebuie
majorat considerabil.
Excesul de vitamin poate duce la efecte toxice ca: erupii pe diverse regiuni cutanate,
usturime la urinare, formarea calculilor de oxalat de calciu, iar la nivelul tubului digestiv
poate determina ncetinirea absorbiei altor vitamine, n special, a vitaminei |2.
Carena de vitamin are numeroase manifestri semnificative. Scorbutul la aduli se
manifest prin rni, pierderea dinilor, scderea integritii capilare cu hemoragii
subcutanate i edeme, dureri articulare, anorexie i anemie. La copii, scorbutul duce la
dureri, umflarea articulaiilor, dificulti n micare, hemoragii, dezvoltarea insuficient a
dinilor, ncetarea dezvoltrii scheletului i apariia de boli osoase caracteristice, cicatrizarea
ncetinit a rnilor i anemie. La fel, carena de vitamin poate avea loc n organismul
fumtorilor, indiferent de faptul c aportul alimentar este suficient. Cauza acestui fenomen
este, pe de o parte, fumul de igar care mpiedic absorbia vitaminei C, iar, pe de alt
parte, nicotin care scade considerabil concentraia vitaminei n snge.
VITAM INELE LIPO SO LU BILE CH3
Aceast gmp de vitamine se formeaz n sistemele I
biologice prin adiia izoprenei-2 (metilbutadiena), ce joa- (CH CH CH)
c rolul unui bloc de construcie n sinteza diferitelor Izoprenil
substane lipo- i cauciuco-asemntoare de natur
vegetal.
Nu sunt determinate funciile biochimice ale tuturor vitaminelor (A,D,E,K,F). Una
din proprietile de baz const ns n capacitatea lor de a se depune n cantiti
nsemnate ca rezerv n organism, iar carena lor n raia alimentar poate s nu se
manifeste timp ndelungat.
Vitamina A (retinol, vitamina antixeroftalmic).
Rolul vitaminei A ca factor esenial al
nutriiei a fost elucidat de E.McCollum CH2OH
(1915), mai trziu savantul a izolat reti R e tin o l
nolul din extractele lipidice ale ficatului
de pete. Exist dou forme de vitamina
A: A , (retinolul) depistat n ficatul petilor
maritimi i A2(are n plus o legtur dubl
n inel) izolat din ficatul petilor de ru.
Ambele forme reprezint polialcooli (20
atomi de C), compui din ciclul ionic, 2
resturi de izopren i o grup primar c=o
alcoolic (fig.7.29).
Omul i unele specii de animale nu pot
sintetiza vitamina A, dar pot transforma
unii caroteni provitaminici n form activ,
astfel i necesitile organismului sunt sa
tisfcute de acest aport de vitamine
oferite de natur. U -c is-retin a l
Substanele de natur izoprenic F igu ra 7.29. Structura retinoizilor
denumite carotenoizi -provitamine, pot
fi transformate n vitamina A, pe cale fermentativ, n organismul majoritii animalelor.
Din -caroten care, avnd o molecul simetric n condiii fiziologice, se formeaz
dou molecule de vitamina A, ceilali caroteni (a i y) produc o singur molecul cu o
eficien de 2 ori mai redus. Sistemul legturilor duble ale carotenilor este oxidat
uor de ctre 0 2, cu subminarea activitii vitaminice. Oxidarea n produsele naturale
este inhibat de prezena antioxidanilor (vit.E).
Locul preferenial de transfonnare a -carotenului n retinol este mucoasa intestinului,
ns enzima carotenaza e situat i n ficatul unor animale. Enzima e o dioxigenaz ce
conine Fe, inhibat de reagenii ce fixeaz fierul i interacioneaz cu grupele SH.
Absorbia carotenilor are loc prin mecanisme similare cu cele ale lipidelor, dar se
produc destul de lent i incomplet, reprezentnd doar 10% din aportul alimentar. Resorbia
vit. A are loc la acelai nivel la care este n prealabil esterificat de acizi grai cu caten
lung, apoi transferat n vasele limfatice, dup care, asociat cu chilomicronii, ptrund
n snge. Retinolul este transportat n sngele omului de ctre o protein specific de
legare a retinolului (RBP), fiind o a-globulin (fig.7.30).
Figura 7.30. Absorbia , transportul i depozitarea vit.A i a derivailor e i. RBP - protein fixatoare
de retinol
Depozitarea n ficat se efectueaz n form de esteri ai retinolului, cu implicarea

enzimei vitamin A esteraza. Activitatea acestei enzime e inhibat de NaF, compui ai
arseniului. Ficatul unor peti oceanici, al ursului polar conine foarte mult vitamin A.
Complexul protein-retinol se fixeaz pe suprafaa horioidal a celulelor pigmentate
epiteliale ale retinei care, posibil, asigur cu retinol receptorii specifici.
Studiul fundamental biochimic i biofizic asupra funciei vitaminei A, elaborat de
ctre George Wald de la Universitatea Harvard, a determinat complet rolul acesteia n
procesele fotochimice ale vederii. Ciclul de modificri chimice ale pigmentului vizual,
rodopsina n bastonaele retinei, ar putea fi urmtorul: celulele percep semnalele
luminii de o intensitate mic, nu sunt sensibile la culori. Rolul componentului activ n
acest proces l joac forma oxidat a retinolului - retinalul, aldehida vit. A, fixat de
proteina opsin. Acest complex numit rodopsin este prezent i absolut identic n toi
pigmenii vizuali, inclusiv n conuri; n bastonaee aranjat n form de stive n membranele
intracelulare. 11-cis-retinolul (o singur legtur dubl n poziia 11 are conformaie
cis, celelalte sunt n trans) absoarbe lumina i, n urma unei modificri intramoleculare
foarte complicate, dar rapide, este izomerizat complet n trans-retinal. Are loc o alterare
marcant a geometriei moleculei rodopsinei, modificri conformaionale. Rodopsina
natural are aproximativ 60% din structura sa n form helical i, sub influena luminii,
aproximativ 1/5 din ea se pierde. La un moment anumit al transformrilor date se
produce desfacerea complexului, cu eliberarea trans-retinalului de pe molecula opsinei,
deoarece aceasta nu poate lega dect izomerul 11 -cis-retinal (fig.7.31).
A c i u n e a luminii
-
Rodopsina
7,9,11,13
(4 leg tu ri d u b le n -trans)
A ll-tra n s-re tin o N

i esterii si
Snge : esuturi
Figura 7.31. Modificrile n ciclul rodopsinei
n procesul de transformare 11-cis- n all-trans-retinal se nltur impedimentul steric

impus de legtura 11 -cis i, astfel, electronii suplimentari ai dublelor legturi se pot
deplasa n aceeai direcie n izomerul trans, la o anumit distan. Aceste modificri
servesc ca mecanism molecular declanator, la care aceast cuant de lumin
genereaz un impuls n extremitile nervului optic. n procesul fotosintezei se fonneaz
mai multe produse intermediare, ce au diferit conformaie i se deosebesc dup pro
prietile speciale (rodopsina, batorodopsina, lumirodopsina, metarodopsina I i II, op-
sina). Cuanta de lumin provoac o hiperpolanzare-impuls a membranei plasmatice pe
segmentele externe. Cinetica acestui proces e dependent de intensitatea luminii i de
nivelul stabilitii ei de fon. Lumina, printr-un mecanism, blocheaz coloanele de Na n
membrana plasmatic. Semnalul se transmite prin intermediul mediatorilor defundabili.
Experimentele ne conving c acetia pot fi C a^ i GMPc. Mecanismele de reglare a
coninutului de GMPc n bastonae au obinut progres. Lumina nu acioneaz asupra
guanilatciclazei (GC), dar are un efect neobinuit asupra FDE, amplificnd activitatea
acetia de sute de ori.
Stimulaia GC de ctre rodopsina fotoexcitat e determinat de proteina reglatoa-
re-transducina (T). La ntuneric, transducina conine o molecul de GDP fixat rigid de
subunitatea a sub forma trimerului inactiv (). Rodopsina activat se leag de T i
determin schimbarea GDP la GTP (T -GTP), i rodopsina e apt s se implice ntr-un
nou tur de reacii conform schemei (fig.7.32).
R * - R * ~ *- T -GFTP FDE -G M P c Canale deschise
lumin activ activ 1
GMP Canale nchise
Forma activ a T interacioneaz cu FDE, care, la ntuneric, este sub forma unui
heterotrimer inactiv.
Mediatorul GMPc are un rol primordial n funcionarea canalelor de Na+- la majora
rea concentraiei de GMPc canalele se deschid i invers. Fotoliza unui molecule de R
provoac imediat hidroliza a 105molecule de GMPc, prin activarea FDE.
GC FDE
GTP GMPc + PP, GMPc + H20 ^ GMP + 1
Rodopsina este inactivat printr-o fosforilare efectuat de o kinaz specific (RK)
urmat de legarea formei fosforilate de arestin, un inhibitor puternic ce mpiedic legarea
rodopsinei de transducin. n absena luminii, nivelul
RBP - ^ ^ 2
GMPc se reface sub aciunea guanilatciclazei.
Mecanismele de amplificare a semnalelor nu Celula) P lasm a retinol-R B P
sunt elucidate complet, dar e cert c proprietile ----------- 1 1------- *\
membranei plasmatice se hiperderegleaz (hiper-
polarizare) atunci cnd doar o singur molecul
dintr-un milion este excitat de un foton. La
ntuneric, au loc reacii fermentative reversibile de A. r tinoic
formare a pigmentului vizual. Acidul retinoic ce se
fonneaz la oxidarea retinolului (CH2OH -
COOH) poate nlocui parial retinolul din raia :
alimentar la obolani. Stimuleaz creterea oaselor,
. retinoic
esuturilor moi, formarea spermei, dar nu poate
funciona n procesul vederii, nu-i utilizat la
dezvoltarea embrionului (fig.7.33). Surplusul de acid /\//
A cid u l retinoic
retinoic nu se depoziteaz n organism i este se fixeaz de
eliminat ca compui glucoziduronidici, prin bil. recep toru l
in tr a n u c lea r
Legturile duble ale vitaminei presupun un rol
deosebit n diferite reacii de oxido-reducere, de
altfel sunt reglatori ai permeabilitii membranare; CR a
manifest efect antagonist cu tiroxina (extirparea C R a activeaz

glandei tiroide favorizeaz depozitarea vitaminei transcrip ia
COOH
g e n e lo r
A n organism), cortizolul inhib transformrile specifice ----
carotenoizilor n vitamina A. Carena vitaminei A
blocheaz cile de transformare a pregnenolonei,
i n consecin se majoreaz cantitatea ei.
XVena
De menionat rolul vitaminei A la oxidarea
acizilor grai, biosinteza gliceridelor, fosfolipidelor,
colesterolului i, respectiv, a hormonilor steroizi.
La insuficiena ei, apare hiperlipemia i hiper-
colesterolemia (la obolani). Un coninut susinut
de glucide din raia alimentar micoreaz coninutul
hepatic al vitaminei A. Referitor la metabolismul mRNA
proteic, vitamina A favorizeaz asimilarea purinelor
i sinteza acizilor nucleici, participnd la P ro tein ele sp ecifice
regenerarea nucleelor, la biosinteza proteinelor n a

procesul dezvoltrii i cicatrizrii. Incontestabil D iferen ierea celu lar
c vit. A sau un metabolit al ei reduce sinteza F igura 7.33 Mecanismul de aciune al

keratinei prin inhibarea formrii legturilor di retinoizilor (RBP-proteina fixtoare de
retinol)
sulfidice, conferind scleroproteidelor o rezisten
specific. Sumar aciunea retinoizilor este redat n fig.7.34. Vitaminele A i E sunt
sinergice. La om i animale se nregistreaz o echivalen de nivel a vitaminelor A i C.
Posibil c vitamina A are i alte funcii, dar metabolismul ei nu e cunoscut.
E fect terap eu tic
Leucemie
Psoriazis p rom ielocitar A cn ee sever
{E sterii r etin ij R etinol] Z Z Z R etin a l

t t
All-trans-acid
t
13-cis- acid retinoic
retinoic (Tretinoina! (Izotretinoina)
A cu in ea
co m p on en telor
<5Q A#w% d ie tetice
T _ E xpresia genelor;
R eproducerea V zu l C r eter e a n d iferen ierea esu-
g reu ta te tu rilo r ep itelia le
F igura 7.34. Efectul sumar al retinoizilor (preparate farmacologice sau componente dietetice)
Carena de vitamina A. Semnele precoce semnificative ale carenei de vitamina A

se manifest:
1) la nivelul ochilor, cu apariia gradat i progresiv a unor tulburri funcionale i
morfologice. Se reduce gradul de adaptare de la lumin la ntuneric (nictalopia), scade
capacitatea vizual i are loc ngustarea spectrului vizibil (hemeralopia)\
2) se nregistreaz stagnarea diviziunii celulare i atrofia celulelor deja formate din
esutul conjunctiv-se deregleaz sinteza condroitin sulfatului, consecin a amplificrii
activitii sulfatazice n lizozomi. Deteriorarea amplasrii i dereglarea activitii
osteoblatilor i osteoclatilor se manifest prin stagnarea creterii oaselor i a esuturilor
(nervos), ceea ce implic comprimarea creierului, mduvei osoase, majorarea tensiunii
lichidului cefalorahidian;
3) se observ metaplazia keratinizant a celulelor epiteliale, indiferent de originea
lor, cu dereglri ale funciei glandelor exocrine (lacrimale - xeroftalmia, keratomalacia);
din piele, tractul digestiv, respirator i urogenital. Acumularea celulelor keratinizate n
canalele glandulare cauzeaz apariia chisturilor, ocluziilor, abceselor, calculilor, iar la
m asculi-a sterilitii. Un simptom caracteristic la om este fonnarea pcpiclcapapulelor
hiperkeratozante, cu obturarea canalelor glandelor, reducerea excreiei sudoripare i
sebacee, pn la cazuri grave - frenodermie" (piele de broasc rioas), extins pe tot
corpul, cu excepia fetei, palmelor i a tlpilor (la o insuficient a complexului de vitamina
B);
4) carena este nsoit i de reducerea vdit a rezistenei i proteciei active fa de
microorganismele patogene-apar diferite stri febrile i dereglri ale aparatului respirator.
Simptomele carenei vitaminei A sunt mai evidente la organismele tinere (om, animal):
modificrile n schelet i n sistemul nervos se observ numai la organismele n cretere,
fapt cauzat de lipsa vitaminei A, depozitat
n ficatul nou-nscuilor; pe cnd la maturi
rezervele de vitamin n ficat pot satisface
cerinele organismului timp de civa ani.
Pentru exemplificare: administrarea a 30
mkg de vitamina A i satisface copilului
cerinele pe o perioad de 6 luni. Doza
minim diurn, ce menine concentraia
adecvat a vitaminei n snge i
prentmpin simptomele carenei, este
de 600-700 mkg (2000-2500 UE) retinol
sau cantiti duble de -caroten.
Cantitile excesive de retinol provoac C olecalciferol (vitam ina D 3 )
fenomene toxice. Muli exploratori ai
Arcticii au decedat dup ce au consumat
ficatul ursului polar. Fenomene toxice se
nregistreaz i la utilizarea excesiv a pre
paratelor vitaminice, ce se caracterizeaz
prin:
a) la copii: hiperostoz dolor,
nepenirea muchilor, erupii cutanate,
c efale e ; b) la a d u li: d e p re sie ,
somnolen, grea, dermatit, calcinoza
structurilor pericapsulare ale ligamentelor;
c) n timpul graviditii - modificri
native, cauzate de efectul enzimelor
hidrolitice ce se elibereaz din lizozomii
celulelor condroitale-o repercusiune a E rgocalciferol (vitam ina D 2 )
surplusuliu de vitamina A.
Vitamina D (antirahitic).
Necesitile umane sunt asigurate
de provitamineledin stratul bazai al pielii
din precursorul neactiv 7-dihidro-
colesterol, printr-o serie de reacii declan
ate cu ajutorul razelor UV, formnd, ca
rezultat, vitamina Df-colecalciferolul.
Cantiti impuntoare de vitamina D se
conin n ficatul petilor, dei problema V ^ X H 2
genezei nu e soluionat definitiv. n
ficatul petilor vitamina D se depoziteaz
dup transformarea ei din provitaminele 1,25-D ihidroxicolecalciferol
planctonului, dei ultimul, situat la supra- (1,25-dihidroxivitam ina D 3 )
faa apei i utilizat de ctre peti ca hran, nu conine vitamina D.
O alt form rspndit este vitamina D - ergocalciferolul, care se prepar n
cantiti industriale din ergocalciferolul drojdiei de bere prelucrat cu raze UV. Atta timp
ct omul beneficiaz firesc de aciunea razelor solare, el nu are nevoie de adaosuri
de vitamina D.
Se vehiculeaz conceptul precum c strmoii notri provin din regiunile tropicale i
erau negroizi. O dat cu deplasarea lor spre Nord, culoarea neagr a pielii, ce
protejeaz organismul de razele UV, devine defavorabil sintezei de vitamina D. n urma
seleciei genetice, pielea alb a btinailor nordului faciliteaz absorbia razelor UV. La
eschimoi, ns, n-a avut loc o selecie similar, deoarece ei asimileaz vitamina D din
petele consumat.
Majoritatea de manifestri ale carenei de vit.D, dar posibil i a tuturor, sunt procesele
de osificare. Coninutul majorat de calciu din raia alimentar l reprezint calciul
fosfat. Ca++se absoarbe preponderent n intestinul proximal, n poriunea distal proce
sul diminueaz. Maturii absorb mai puin de 1/2 din cantitatea calciului alimentar. Cota
se mrete n timpul graviditii i a lactaiei, la copii - n procesul creterii fiziologice.
Procesul de absorbie al calciului este inhibat de acizii grai i acidulfitinic (ester al
acidului fosforic i inozitei), ce se conin n graminee, formnd sruri de calciu insolubile,
n mucoasa ileonului s-a depistat o activitate minor a fitazei, ce catalizeaz hidrolitic
fitatul. La inflamaia ileonului, calciul se elimin prin masele fecale. Absorbia se reduce
la insuficiena vitaminei D. Studiile efectuate au relevat c vitamina D amplific absorbia,
nu imediat, ci peste cteva ore, determinat fiind de generarea formei active a vitaminei.
Utiliznd colecalciferolul marcat, s-a stabilit natura acestor modificri i organele unde
au loc aceste procese (fig.7.35).
Transportul activ al Ca++la nivelul bordurii n perie al intestinului implic sinteza
unor proteine transportatoare de calciu, stimulat de hormonii steroizi. Transportul
are loc mpotriva gradientului de concentraie, este cuplat cu al ionilor de Na+i e
energodependent.
Colecalciferolul (D3) este transportat n ficat, unde se modific n 25-oxicolecalci-
ferol sub aciunea unui sistem fermentativ mitocondrial, ce funcioneaz n dependen
de NADH i O, molecular. Transformrile sunt reglate de produsul final i, ca rezultat,
se utilizeaz mai puin vitamin i, simultan, concentraia nu atinge valori toxice. n
continuare, 25-oxicolecalciferol, la rndul su, este hidroxilat n rinichi, cu formarea 1,25-
dioxicolecalciferol. Aceast faz poate fi blocat prin intermediul actinomicinei D, cc
presupune c 25-oxicalciferolul induce formarea unui factor (enzim) necesar pentru
transformare. 1,25-dioxicolicalciferol amplific transportul Ca~* n intestine, favoriznd
transformarea proteinei celulare din mucoasa intestinal n proteina fixatoare de calciu,
ce funcioneaz la suprafa n perie. Probabil, aceast protein n ansamblu cu ATP-
aza Ca^-dependent ia parte la transportul calciului. Vitamina D activ particip i la
mobilizarea Ca++din oase.
S-a demonstrat pe cale experimental c vitamina D intervine n metabolismul citratului.
Activarea citrat sintazei, n corelare cu fosforilarea oxidativ, este implicat n osi
ficare, particip Ia convertirea fosforului organic n cel anorganic, excluzndu-1 din esu-
F igu ra 7.35. Metabolismul i aciunea vitaminei D
turi. La reglarea proceselor implicate n economia fosfailor, vitamina D manifest efecte

bimodale la concentraii fiziologice i n doze terapeutice, sporete resorbia din tubii
renali i reduce excreia lor. n caren i hipervitaminoz D, reabsorbia este sczut i
apare fosfaturia.
Vitamina D activ stimuleaz activitateafosfatazelor alcaline din oase, hidroliznd
esterii fosforici ai glucidelor provenii din snge i aprovizioneaz matricea osoas cu ioni
fosfai. De aceea, activitatea majorat a fosfatazelor alcaline indic intensificarea me
tabolismului osos attnosificare, ct i n demineralizarea osului, indiferent deetiologie.
n literatura de specialitate este descris un tip special de rahitism, cauzat de
afectarea mecanismelor hepatice i renale de activare a vitaminei D - rahitism, vitamina
D-rezistent, ceea ce dicteaz necesitatea imperioas a vitaminei D activat.
O dovad convingtoare este funcionarea rinichiului artificial n care se nregistreaz
micorarea vdit a absorbiei Ca'f+, pe cnd administrarea n doze 2,5-5,0 mg/24 ore
readuce absorbia la normal. Datorit particularitii sale, vitamina D poate fi considera
t mesager hormonal.
Nou-nscuii, practic, nu au rezerve de vitamina D i deci necesit cu siguran fie un
aport de aceast vitamin, fie de raze UV. Mamiferele nu sunt apte s depoziteze
vitamina D n cantiti mari, ns numai o singur administrare poate asigura necesitile
organismului pentru cteva luni.
Soarta vitaminei administrate i a rezultatelor metabolizrii ei nu e clarificat pe
deplin. O parte din metabolii sunt excretai cu bila, alta - cu urina i fecalele.
Consumul exagerat, n perioade lungi, poate cauza att la copii, ct i la maturi hiper-
vitaminoza D , cu blocarea secreiei hormonilor paratiroidieni i nefrocalcinoza, poate
provoca fonnarea calculilor n cile urinare, atrofia testiculelor, hidronefroza etc. Are loc
decalcifierea oaselor i hipercalcemia, cu calcifierile metastatice ale vaselor sanguine,
esuturilor moi, corneei. Consumul abuziv de preparate cu vitamina D (untur de pete)
pot produce fenomene toxice: anorexie, vrsturi, diaree, astenie, mialgii, poliurie, som
nolen, astenie intens etc.
La interaciunea cu alte vitamine, se constat un sinergism la concentraii optime de
vitamina A; la doze mari, vitamina A antagonizeaz vitamina D,producnddemineralizri
i friabilitatea oaselor, iar n cazul hipervitaminozei D confer efecte de normalizare.
Vitamina D accelereaz apariia scorbutului. Ca antivitamine pot servi compuii cu struc
tur steroid din unele plante, ct i cortizonul, care posed o structur aproape identic
cu provitaminele D.
Vitamina E (tocoferolul, vitam ina antisterilic).

Vitamina E constituie o grup de substane compus din cel puin trei reprezentani -
a , i tocoferoli, unde cel mai activ este derivatul cu trei grupe metil - a-
tocoferol. Se obine din surse naturale, de exemplu, din gennenii de gru.
CH-.
I
2(CH2 CH2 CH CH2)3 H
Vitamina E
Termenul tocoferol (din grecescul /om ?- sarcin i p h e r o a purta)

elucideaz rolul vitaminei la procreare, gestaie la femei, fonnarea spennatozoizilor (vi
tamina antisterilic) la brbai. Vitamina E se absoarbe din alimente la nivelul intestinu
lui subire n condiiile integritii mecanismelor implicate n resorbia lipidelor i
vitaminelor liposolubile.
Concentraii enorme de vitamin se gsesc n lipidele din testicul i uter, n esutul
adipos. Datorit capacitii mari de a fixa O,, tocoferolii manifest efecte antioxidative,
de protejare a diferitor compui fa de leziunile produse prin oxidare. Aceast vitamin
reine procesul de rncezire i distrucie oxidativ a vitaminei A n lipidele naturale.
Imediat dup nceputul procesului, ns, produsele oxidrii acizilor grai nesaturai
distrug vitamina E. Manifestrile carenei de vitamina E sunt dependente, posibil, de
stoparea efectului de protejare asupra autooxidrii acizilor grai nesaturai. Majoritatea
compuilor care au o structur asemntoare cu a tocoferolului (chinonele, ubichinonele)
posed i o aciune similar cu cea a vitaminei E (unii nu mai puin activi dect a -
tocoferolul).
Efectul antioxidativ al tocoferolilor poate fi prelungit prin adugarea unor anti-
oxidani sinergici: acid ascorbic, acid citric, care, ca surs de H, contribuie la
regenerarea antioxidantului de baz (a-tocoferolul). In vivo aceste substane au pro
prietatea de a proteja animalele de unele manifestri ale carenei de vitamina E.
Se consider c tocoferolii sunt implicai n sistemul enzimelor respiratorii (NADH-
citocrom reductaza), favoriznd cuplarea fosforilrii oxidative. n lipsa lor, se
amplific oxidarea mitocondrial, far generare de energie.
esuturile animale cu caren de vitamina E ,n special muchii miocardului i
scheletali, utilizeaz oxigen cu o vitez mai mare fa de esuturile normale. Fenomenul
este determinat de oxidarea peroxidic a acizilor grai polienici. Vitamina E e indicat n
metabolismul i fosforilarea creatinei. La insuficiena vitaminei E, au loc dereglri nsoite
de creterea creatinuriei. Acest indicator biochimic este un semn precoce distinctiv al
carenei vitaminice, antecedent al manifestrilor clinice.
n reticulul endoplasmatic al celulelor esutului muscular se elimin hidrolazele
lizozomale, ce genereaz distrofia muscular. n ficat, se deregleaz structura mitocondriilor,
cu afectarea respiraiei. Se nregistreaz i leziuni ale esutului conjunctiv i substanei
fundamentale, odat cu creterea permeabilitii vaselor sanguine. Astfel, vitamina
potenial poate servi la profilaxia bolilor cardiovasculare. Vitamina E este implicat n
reaciile de acetilare (sinteza acetilcholinei).
Manifestrile clinice ale carenei vitaminei E se amplific, dac raia alimentar a
obolanilor i a animalelor erbivore (iepurele, cobaiul) va conine cantiti nsemnate de
lipide nesaturate.
Un tablou clinic asemntor se profileaz i la afeciunea muchilor albi ai vieilor,
micilor: apare, simultan, o paralizie progresiv a membrelor posterioare, cu simptomele
respective. La fel, sunt evidente i fenomenele de insuficien a vitaminei A, iar la om
i maimue se constat i o anemie hemolitic, cauzat de influena peroxizilor. Se
consider c sub aciunea oxidant a hemoglobinei, acizii grai polienici din stroma
lipoproteic a hematiilor se trans fonn n peroxizi, micornd astfel rezistena eritrocitelor.
Rezistena hematiilor la hemoliz e dependent i de activitatea catalazei, de altfel, i a
enzimelor implicate n sinteza hemoglobinei.
Cazurile unice ce confmn necesitile de vitamina E pentru om sunt manifestrile
determinate de dereglrile absorbiei lipidelor. Necesitile n aceast vitamin sunt
corelate cu prezena acizilor grai nesaturai n alimente.
n organism, se oxideaz att inelul aromatic, ct i lanul izoprenic: are loc conjugarea
ambelor grupe hidroxil cu 2 molecule ale acidului glucuronic, formnd diglucoziluronatul.
Administrarea unor cantiti excesive de vitamina A reduce rezervele de vit. E din
esuturi i provoac hipovitaminozaE. Din contra, vitamina E manifest efecte de
protejare a vitaminei A att in vitro, ct i n organism.
Cantitile exagerate de tocoferoli scad rapid nivelul vit.B n ficat; consumul sau
administrarea terapeutic abuziv a vitaminei E provoac tulburri ale ciclului, involuia
ovarelor, afeciuni nervoase ale membrelor inferioare, fenomene toxice de acumulare
(azoospermia).
Vitamina manifest aciune protectoare vizavi de apariia simptomelor carenei
vitaminei E, iar ultima are un efect de cruare a vit.C. Regenerarea hemoglobinei n ane
mie atinge cote maxime la administrarea simultan a vitaminelor E, i F.
Vitamina (antihemoragica).
Se disting dou forme de baz - K, (fitochinona) i K2 (fariochinona) - ce
reprezint, dup structur, un nucleu de baz comun (naftochinona) i diferite
lanuri laterale la poziia 3. Se
consider c gruparea -C H 3 din
p o z iia 2 este in d isp e n sa b il CH , CH,
activitii. Eliminarea sau nlocuirea ei
(C H 2 C H = C CH 2)4 H
cu alte resturi anihileaz aciunea,
nsuiri similare posed compuii Vitamina K, (fitochinona)
analogi dup structur.
Vitamina j este rspndit n plantele verzi, la care frunzele expuse luminii sunt mai
abundente, dect cele din umbr, iar florile i fructele aproape nu conin vitamina K ,.
Sursa perfect a vitaminei sunt microorganismele. Flora intestinal, spre exemplu,
produce cantiti apreciabile de vitamin K, suficiente pentru a asigura necesitile orga
nismului uman. Absorbia vitaminei are loc n jejun, apoi ea este transferat mpreun cu
lipidele spre vasele limfatice, n snge i depozitat n ficat.
Vitamina este obligatorie pentru sinteza normal a proteinei plasmatice - pro-
trombina, un precursor neactiv al trombinei. Activarea protrombinei i transformarea
ei n trombin are loc dup fixarea ionilor de Ca++. ntr-o molecul normal de protrom-
bin se conin cteva resturi de acid y-carboxiglutamic, care leag ionii de Ca44. La
carena de vit.K, n molecula protrombinei se acumuleaz resturile acidului glutamic.
Concepiile contemporane opteaz pentru participarea vit.K la biosinteza protrom
binei la etapa posttranslaional, sub influena unui sistem fermentativ cantonat n
membrana reticulului endoplasmatic dependent de vitamina (NADI 1reductaz). n
prezena , si O, are loc carboxilarea selectiv a unor resturi de acid glutamic din
preprotrombin, cu fonnarea acidului y-carboxiglutamic (fig.7.36). Este frecvent ideea
c i alte proteine ce fixeaz Ca++conin resturi de acid y-carboxiglutamic. Se consider
c vit.K particip la sintetizarea a minimum 4 proteine n ficat: proconvertina, factorii
Christmas, Stuart i a protrombinei. Se susine c vit.K particip la procesele de
fosforilare oxidativ din esuturile animale.
n steatoree cauzat de obturarea cilor biliare, afectarea pancreasului sau altor or-
M e m b r a n a fosfolipidic
a trom bocitelor W
\ / \ /
\ < <
F igura 7.36. /to // vitaminei n coagularea sngelui
gane interne, se ngreuiaz absorbia lipidelor, ceea ce duce la carena vitaminei K,

soldat cu hemoragii. Insuficiena vitaminei se observ la nou-nscui i se manifest
sub forma sindromului hemoragie infantil, care persist n dependen de prezena
florei bacteriene, capabile s produc vit.K. Deoarece capacitatea de depozitare a
vitaminei este mic, iar metabolizarea ei este foarte rapid, simptomele caracteristice
carenei apar dup 28-48 ore. Administrarea vitaminei gravidelor micoreaz
pericolul sindromului hemoragie la nou-nascui. n medicina practic se utilizeaz i formele
solubile n ap - vicasolul. n natur, exist i antagonitii vit.K - dicumarolul, acidul
salicilic ce inhib n ficat biosinteza factorilor de coagulare proteici i se utilizeaz n
tratamentul bolilor cu o coagulabilitate mrit.
. Vitaminele naturale, practic, nu sunt toxice, cu excepia eventualei hipercoagulabi-
liti, pe cnd cele sintetice provoac anemie, vrsturi, cianoz, convulsii, deprimarea
respiraiei.
Ubichinona (coenzim Q).
E cea mai rspndit chinon n toate celulele vii. Se localizeaz preponderent n
membranele mitocondriale i conine 6-10 resturi de izopren. Coenzim liposolubil cu
rol de transportator al hidrogenului n membrana hidrofob mitocondrial, de altfel e
component obligatoriu al lanului respirator, ce transfer electronii i protonii de la
dehidrogenazele mitocondriale lacitocromi.
Vitamina F (acizii grai eseniali).
E un component al lipidelor structurale membranare, al particulelor subcelulare cu
multiple implicaii metabolice, participnd la reglarea efectului hormonal. Vitamina F
amplific aciunea lipotrop a cholinei i favorizeaz eliminarea colesterolului din organism.
Ea contribuie la transformrile strilor insolubile n solubile, micoreaz concentraia
lipidelor plasmatice. Vitamina F servete ca precursor la sinteza prostaglandmelor, am
plific efectul biologic al vitaminelor hidrosolubile. Cantiti considerabile de acizi grai
eseniali se conin n uleiurile vegetale, mai ales n uleiul dc porumb. Ei se utilizeaz cu
succes ca componente chimice, n cosmetologie.
c a p i t o l u l v in . BIOCHIMIA SNGELUI I A
UNOR TESUTURI
Sn gele
Sngele este unicul esut lichid din organismul uman care se compune din faza lichid
-plasm, i faza solid - elemente figurate. Plasma prezint o soluie apoas de compui
minerali i proteide. Elementele figurate includ eritrocitele, leucocitele i trombocitele
(schema 8.1).
S c h e m a 8.1 R epartiia com p o n en telo r sa n g u in e
Sngele circul continuu prin sistemul vascular, fora motrice a micrii fiind pompa
cardiac. El asigur conexiunea umoral a esuturilor i organelor.
Compoziia sngelui reflect metabolismul esuturilor i organelor i, astfel, constituie
substratul optim pentru efectuarea investigaiilor de laborator.
Funciile. n esen, funciile sngelui pot fi rezumate la funcia de transport i cea
de reglare homeostatic. Sngele periferic asigur conexiunea dintre esuturi i organe,
ce se realizeaz prin racordarea proceselor metabolice, schimbul de substane i
informaie. Efectund transportul diverilor compui, sngele menine homeostazia
organismului. Sngele vehiculeaz oxigenul indispensabil oxidrii biologice i C 0 2 rezultat
din oxidri: substanele nutritive i produii finali ai catabolismului, compuii ce intervin n
reaciile specifice i nespecifice de aprare. Astfel, funciile de transport au trei aspecte
principale: respirator, nutritiv i de aprare.
Reglarea homeostaziei presupune meninerea echilibrelor fizico-chimice ale mediului
intern (izoionia, izotonia, izotermia i echilibrul acido-bazic) i celui fluido-coagulant
sanguin. Izoionia reprezint meninerea constant a concentraiilor i raporturilor ionilor
(Na+, K+, Ca2+, Mg2+, Mn2+, , H C 0 3, H2P 0 4~etc.); izotonia - a presiunii osmotice
a sngelui, ce este n 85% dependent de Na+, Cl', H C 03" ; izotermia - a temperaturii
corpului. pH normal sanguin este de 7,35 -7,45 i reflect echilibrul acido-bazic, meninut
de sistemele tampon n complex cu organele de eliminare (pulmonii, rinichii, ficatul etc.).
Sistemele coagulant, anticoagulant i fibrinolitic regleaz fluiditatea sanguin.
Proprietile fizico-chim ice. Volumul sanguin. Cantitatea total a sngelui din
organism ce ocup integral aparatul cardiovascular (capilare, artere, vene, cavitile
cardiace) constituie volumul sanguin total. El constituie 5-7,5% din masa corpului sau
65-76,7 mL/kg/corp. La un adult cu greutatea de 70 kg volumul sanguin total este de
4,5-5,0 L, din care 2/3 circul prin patul vascular, iar 1/3 este depozitat n splin, ficat i
alte organe. Sngele depozitat este o rezerv dinamic, ce poate fi mobilizat n caz de
necesitate. n condiii fiziologice, la rezerve se apeleaz pentru acoperirea necesitilor
crescute n 0 2(efort fizic semnificativ, graviditate etc). Rezerva este solicitat n caz de
hemoragii masive i alte condiii patologice.
Sngele este constituit din dou faze. Faza solid - elementele figurate reprezint 3%
din masa corpului i cca 40-45% din volumul total al sngelui; la brbai variind ntre 42-
52%, iar la femei ntre 37-47%. Faza lichid - plasma - reprezint aproximativ 4,5%
din masa corporal i 55-60% din volumul total savguin. Raportul procentual valoric al
acestor dou componente e numit hematocrit. El crete n deshidratri, policitemii i
scade n anemii. Volumul plasmatic scade (hipovolemie) n sindromul nefrotic, ocul
traumatic i posthemoragic, arsuri extinse, deshidratri profunde (diaree, vome) etc.
Creteri ale volemiei plasmatice (hipervolemie) se atest n retenii hidrosaline, inclusiv
n graviditate; oc posttransfuzional etc.
Viscozitatea. Sngele este un lichid vscos, viscozitatea lui total fiind de 4-6 poises
la 38C. Ea cuprinde viscozitatea hematiilor, determinat de eritrocite! i plasma
dependent de proteinele respective, cu masa molecular mare (globuline, fibrinogen).
Viscozitatea plasmei este de 1,6-2,1 poises la 38C.
Viscozitatea este puin influenabil de aportul alimentar de lichide. Viscozitatea total
a sngeluicreten policitemii i leucemii, datorit creterii numrului elementelor figurate,
iar n sferocitoz i anemia falciform - graie sporirii rezistenei eritrocitelor. Viscozitatea
plasmei se majoreaz n hiperproteinemii, n special n hipergamaglobulinemii, i este
sczut n diverse forme de anemii.
Valori semnificativ mari ale vscozitii sanguine se nregistreaz la nou-nscui, care
scad treptat n primul an al vieii pn la valorile caracteristice adultului. Deosebirea este
condiionat de numrul mai mare de eritrocite n sngele nou-nscuilor i al copiilor n
primul an de viaa (cca 6 mln).
Presiunea coloid-osmotic. Presiunea coloid-osmotic este cauzat de.proteinele
plasmei, ce reprezint substane macromoleculare coloidale. 80% din presiunea coloid-
osmotic este determinat de albumine i doar 20% de globuline. Fibrinogenul nu
influeneaz aceast presiune. Valoarea normal este de 21 -3 5 mm Hg datorit creia
este meninut faza lichid a sngelui n patul vascular. Ea scade n cazul hipoalbuminemiilor
renale sau hepatice i, n consecin, lichidul prsete patul vascular, condiionnd apariia
edemelor.
Presiunea osmotic. Sngele are o presiune osmotic (P0) de 4,92-5,11 mm Hg
(7,5-8,1 atm la 37) i un punct crioscopic ntre-0 ,5 5C i -0,60C. Mai frecvent P0
este exprimat n miliosmoli (mosm). Osmolul este presiunea osmotic dezvoltat de un
mol dizolvat ntr-un litru de ap (22,4 atm la 0C). Miliosmolii reprezint raportul
concentraiei n mg/L la masa atomic a elementului ( de exemplu, 23 pentru Na) sau a
compusului respectiv ( de exemplu, 61 pentru H C 0 3' sau 63 pentru uree).
Plasma sanguin conine 290 mosm, ce sunt repartizai n modul urmtor:
Cation i (mosm/L) Anioni (mosm/L)

Na 141,0 CI" 104,0
K+ 4,5 HCO3 27,0
Ca 22+
+
2,5 p o i' 1,0
M g' 1,5 Proteine 2,0
Acizi organici 6,5
149,5 mosm/L 150,5 mosm/L
Presiunea osmotic a sngelui este dependent de numrul particulelor. Dat fiind faptul
c elementele figurate nu influeneaz presiunea osmotic, cea a sngelui este practic
egal cu a plasmei. Ionii Na+, H C 03i intervin n proporie de 85% n determinarea
presiunii osmotice totale. Compuii organici, nedisociabili (ureea, glucoza etc.) au o
contribuie relativ redus n raport cu componenii ionizabili, la realizarea presiunii
osmotice a plasm ei. Aceast presiune osmotic acioneaz asupra fiecrei celule din
plasma sanguin. Ea este echilibrat cu o presiune egal din interiorul celulei, ce previne
deformarea ei. Dac acest echilibru este perturbat prin modificri ale presiunii osmotice
sanguine, are loc o alterare a structurii i funciilor celulare. Micorarea presiunii osmotice
sanguine duce la ptrunderea apei n interiorul eritrocitului i tumefierea acestuia pn la
hemoliz. Orice cretere a presiunii osmotice plasmatice duce la ieirea apei din celul i
ratatinarea celulei. Izotonia sanguin apare astfel ca o reacie de aprare a organismului
pentru meninerea funciilor celulare.
Densitatea sngelui. Densitatea sngelui total este cuprins ntre 1,050 i 1,060 la
15C. Ea este mai mare la nou-nscui i variaz n limite mai mari. Densitatea eritrocitelor
constituie 1,080-1,093, iar a plasmei - 1,024-1,029.
pH-ul sngelui. pH-ul sngelui este n medie cuprins ntre valorile de 7,35-7,40. Sngele
venos este puin mai acid - 7,35-7,45, deoarece vehiculeaz acizii provenii din procesele
metabolice (lactic, acetoacetic, -hidroxi-butiric) i respiraia tisular (H2C 0 3). pH-ul
sngelui arterial este relativ mai alcalin - 7,38-7,46. Mici variaii ale pH-ului se atest n
dependen de vrst. La copii pH-ul este 7,36-7,45 ( la nou-nscui - pH= 7,27), pe
cnd la vrstnici devine mai acid. Limitele pH-ului compatibile cu viaa sunt ntre 7,8 i
6 , 8.
Proteinele plasmatice. Prezint un amestec heterogen de componente proteice cu
funcii i proprieti diferite. Greutile moleculare variaz ntre 60-130 kDa. Unele dintre
ele sunt holoproteine, altele sunt complexe cu glucide, lipide, metale. ntr-un volum de
snge de 5,0 L i un hematorit de 40%, cei 3,0 L de plasm conin 180-240g de proteine,
corespunznd la 60-80g per litru.
Proteinele plasmatice permanent se rennoiesc i prezint o serie de particulariti
referitor la metabolismul lor. Ele se afl n schimb metabolic continuu cu proteinele tisulare.
Sunt sintetizate preponderent n ficat i n esutul macrofagal, i procesul este supus unei
reglri riguroase.
Funciile. Sunt multiple i constau n urmtoarele:
- menin volumul i presiunea coloid-osmotic a sngelui, de altfel i schimburile dintre
capilare i esuturi. Preponderent, sunt rspunztoare de aceast funcie albuminele;
- transport vitamine, metale, hormoni, pigmeni, lipide, medicamente;
- particip la meninerea echilibrului acido-bazic al sngelui;
- particip la sistemul de aprare nespecific i specific a organismului prin:
properdin, lizozim, complement, proteina reactiv, transferin, imunoglobuline;
- menin echilibrul fluido-coagulant;
- determin microcirculaia i vscozitatea;
- reprezint o rezerv proteic important n situaii deficitare de aport proteic alimentar.
Principalele proteine. Imunoglobulinele i proteinele coagulrii vor fi redate n
capitolele respective. O importan biologic deosebit au proteinele reglatoare -
citokinele, mediatori endogeni care asigur o comunicarea ntre celule (interleukinele,
interferoni i, factorul de necroz tumoral - TNFa).
n continuare, vom prezenta proteinele plasmatice de importan clinic.
Albumina. Este o protein major, reprezentnd 55-60% din totalul proteic plasmatic
cu un nivel de 35-45 g/L. Are o greutate molecular de 69 kDa i un T l/2 egal cu 17-
27 zile. Serumalbumina este sintetizat n ficat, are un lan polipeptidic compus din 580
aminoacizi. Are o construcie spaial deosebit ce-i permite o flexibilitate remarcabil.
Proteina menine presiunea coloid-osmotic a plasmei, intervenind n reglarea schimburilor
ntre plasm i lichidul interstitial. Albumina transport o varietate de componente (acizi
grai, pigmeni biliari, vitamine, hormoni, medicamente, ioni metalici). Simultan, albumina
constituie o important surs de aminoacizi eseniali utilizai n procesele de sintez.
Scderea presiunii coloid-osmotice prezint un puternic stimul n sinteza hepatic de
albumin. Hormonii glucocorticoizi i tiroidieni stimuleaz att sinteza, ct i catabolismul
proteinei. Hipoalbuminemia survine n strile patologice virale, n afeciuni ale
parenchimului hepatic n condiiile unei reduceri semnificative a nummlui de hepatocite.
n afeciuni renale i intestinale, n malnutriie i malabsorbie. Analbuminemia este o maladie
genetic transmis autosomal recesiv, manifestat la homozigoi, cu simptome destul de
pronunate: edeme maleolare, hipotensiune arterial.
Glicoproteinele. Ele conin proporii variate de glucide (3-30%) - hexoze,
hexozamine, acid sialic, legate covalent cu lanul polipeptidic. Aproximativ 10% din totalul
proteinelor plasmatice revin inhibitorilor proteazelor cu rol de protecie. Dup fixarea
inhibitorului de proteaz, complexul este recunoscut de receptorii celulari specifici, apoi
captat i nlturat din circulaie.
Cei mai importai inhibitori de proteaze fac parte din grupa serpinelor (serine proteaze
inhibitors). Specificitatea lor este relativ: o anumit proteaz poate fi blocat de mai
muli inhibitori, afinitate determinat de anumite secvene aminoacidice.
Alfa-1 antitripsina (a f-AT). Sinteza ei n ficat este stimulat de citokinele macrofagelor.
Este o glicoprotein cu greutatea molecular de 53 kDa i o concentraie n ser de 2-6
g/L. Posed mai multe forme moleculare. Proteina este inhibitor natural al proteazelor,
inhibnd i chimotripsina, kalicreina, plasininele. o^-AT destul de uor trece n interstiiu
i poate proteja esuturile de activitatea distructiv a proteazelor. Se consider c fumatul
i radicalul superoxid generat de neutrofile pot inactiva proteina prin oxidarea situsului
reactiv. In procesele inflamatorii ale cilor respiratorii se elibereaz elastaza dinneutrofilele
focarului inflamator. n mod normal proteaza este inhibat de a,-AT exudat n esutul
inflamat. n cazurile cu deficit de a (-AT elastaza va degrada proteolitic septele
interalveolare i va duce implicit la apariia unui enfizem panlobular. Administrarea de
c^-AT purificat din plasm sau obinut prin inginerie genetic poate preveni sau stopa
apariia bolii la subiecii cu deficit genetic. Deficitul ereditar (Laurell-Eriksson) de a,-
antitripsin se transmite recesiv autosomal.
n aceast grup de serpine se includ i: a -antichimotripsina, a 2-antiplasmina,
antitrombina III, inhibitorii activrii plasminogenului (PAI-1, PAI-2, PAI-3) . a.
Macroglobulina a2(a 2-MG) sintetizat de ficat, macrofage i endotelii are o greutate
molecular de 73 5 kDa i o concentraie plasmatic de 200-300 mg/dL. Este un inhibitor
cu un spectru larg de activitate, inhibnd enzimele coagulrii, plasmina, elastaza, colagenaza,
catepsina 6. Proteina nu face parte din clasa serpinelor. ot;-MG posed i funcia de a
lega majoritatea citokinelor, modulnd activitatea lor proinfiamatorie. Posed oc2-MG i
efecte imunoreglatoare, intervenind n sinteza imunoglobulinelor. Efectueaz i funcia de
transport al insulinei, zincului i altor microelemente.
Deficitul este nsoit de sngerri pasagere determinate de accelerarea fibrinolizei.
Creteri importante se constat n sindromul nefrotic, diabet zaharat, unde nivelurile cc,-
MG coreleaz cu prezena nefro- i retinopatiei.
a fglicoproteina acid (a,-GA) are o component glucidic de 42%. Este sintetizat
n ficat i se afl n plasm n concentraie de 44-140 mg/dL. Proteina (orosomucoid) nu
are specificitate, dar este un indicator important al procesului inflamator, revenind Ia
normal dupa 2 sptmni de la vindecare.
Componenta glucidic se fixeaz nespecific la suprafaa unor bacterii, virusuri. De
asemenea leag o serie de medicamente - miorelaxantele, psihotropele. I se atribue i un
rol de modulare a rspunsului imun, tempernd activarea neutrofilelor. Scderi ale a -
GA s-au semnalat n malnutriie, ciroza hepatic i sindromul nefrotic.
a-fetoproteina se sintetizeaz n ficat i tractul intestinal. n hepatom concentraia
plasmatic crete pn la 2 mg/L (normal este de 10 ng/mL).
Proteina reactiv (CPR) alctuit din cinci subuniti identice, asociate prin legturi
necovalente. Se sintetizeaz preponderent n ficat, unde este indus de IL-6. n condiii
nonnale are o concentraie seric sub 0,5 mg/dL, dar pe parcursul unui proces inflamator
poate crete de sute de ori. Poart denumirea de la afinitatea mare fa de polizaharidul
al pneumococului. Poate lega i alte glicoproteide aflate n peretele numeroaselor
bacterii, fungilor. CPR reprezint un indicator important ntru detectarea infeciilor,
inflamaiilor acute i cronice. Proteina crete i n inflamaii nespecifice.
Haptoglobinele. Sunt o familie de glicoproteine sintetizate n ficat i capabile s lege
hemoglobina (1 mol leag 2 moli de Hb). Complexul este captat din circulaie de ctre
macrofage, prevenind o eventual pierdere de fier pe calea urinar. Compuse din 4
lanuri polipeptidice (2a i 2), ultimele comune tuturor tipurilor de haptoglobine, au o
concentraie seric de 300 mg/dL. Fenotipurile (10) de haptoglobine sunt folosite n
studii de genetic a populaiei. Haptoglobinele sunt reactani de faz acut, crescnd n
infecii microbiene, arsuri, reacii alergice, leucemii, cancer. Scderile se evideniaz n
insuficien hepatic, anemii hemolitice. T I/2 al haptoglobinelor este de 5 zile, dar sub
forma de complex cu hemoglobina acest timp se reduce la 9-30 minute. Se depisteaz
prin imunodifuzie radial.
Ceruloplasmina reprezint o metalglicoprotein cu o mobilitate a^-globulimc.
Conine molecula 0,30-0,32% Cu i are o greutate molecular de 130-160 kDa. Cei
opt atomi de Cu sunt transferai ctre citocromoxidaz n decursul sintezei acesteia.
Ceruloplasmina e implicat n metabolismul aminelor biogene, intervine n oxidarea Fe2+
la Fe3+. Sunt descrise mai multe fenotipuri de aceast protein. Creteri reactive
nespecifice s-au depistat n procesele inflamatorii i maligne (limfogranulomatoza
malign). n boala Wilson (degenerescena hepatolenticular) ficatul i nucleul
lenticular din creier conin cantiti anormal de mari de Cu. Se excret excesiv cu urina,
n timp ce plasma conine o cantitate mic de Cu i de ceruloplasmin. Se observ i o
absorbie intensiv de Cu n intestin. Depozitarea excesiv de cupru n ficat duce la
ciroz, cu deteriorarea sintezei de ceruloplasmin sau a unui defect de ncorporare a Cu
n globulin i, n consecin, o cantitate mare de Cu liber se combin anormal cu proteinele
din creier i ficat. Cuprul acumulat provoac distrugerea celulelor (inelele Kaiser-
Fleischer pe comee). Depunerea poate fi redus, i sporit eliminarea, prin urin cu
ajutorul administrrii unor substane chelatoare ca D-penicilamina. Poate fi dereglat i
reabsorbia cuprului n duoden (boala Menkes-tricopolidistrofia), patologie legat de
cromozomul X. Valoarea normal a ceruloplasminei n plasm e de 2,0-3,4 |amol/L
(0,25-0,45 g/L).
Transferina prezint o -glicoprotein format dintr-un lan polipeptidic cu o mas
molecular de 86 kDa. Se cunosc mai multe forme moleculare aletransferinei genetic
determinate. Cele mai cunoscute sunt tipurile B, D, C. Transferina poate fixa 2 atomi de
Fe/molecul (n mediul neutru). Sunt sintetizate preponderent n ficat, dar n cantiti
reduse i n splin, ganglioni limfatici i celulele epiteliale ale mucoasei intestinale (ileon).
Transferina fixeaz Fe ionizat de provenien intestinal sau n organele de depozitare a
metalului. n condiii fiziologice numai 1/3 din transferin este saturat cu Fe.
Nivelul sideremiei variaz ntre 70-170 % pentru brbai. Capacitatea de fixare a
Fe de ctre transferin (IBC-iron Binding Capacity) corespunde cantitii de Fe necesar
pentru saturaia ei (180-280 ng% pentru brbai i 150-250 pg% pentru femei sau,
respectiv, 32-50 fimol/L i 27-45 imol/L). Capacitatea total de fixare a fierului (TIBC)
se obine din suma valorii sideremiei i a IBC (300-400 i 250-350 [ig% sau 54-72 i
45-63 pmol/L la brbai i femei). Se mai calculeaz i coeficientul de sturaie din
raportul sideremiei i a TIBC, egal cu 40% i 35% la brbai i femei, respectiv (16-45).
Transferina este fixat de receptorii celulari specifici, care preiau Fe. n inflamaii,
macrofagele activate nglobeaz cantiti majore de Fe cu transferin ce duce la o scdere
a lor n ser. n anemiile feriprive, concomitent cu scderea sideremiei se semnaleaz
creterea marcant a transferinei.Valori normale: 50-70 )a.mol/L (0,3-0,4 g/L).
Imunoglobulinele plasmatice, fiind glicoproteine, sunt sintetizate n plasmocite,
reprezentnd aproximativ 20% din totalul proteinelor plasmatice. Mai detaliat sunt redate
n biochimia rspunsului imun.
ELEM EN TELE FIGURATE - PARTICULARITILE

C O M PO Z I IE I I M ETABOLISM ULUI
Celulele sanguine au fost studiate foarte intens din trei considerente:
a) Realizeaz funcie extrem de importante pentru ntregul organism.
b) Sunt implicate n variate stri patologice i afeciuni.
c) Pot fi uor obinute n scopul cercetrii i diagnosticului de laborator.
Eritrocitele exercit transportul gazelor i contribuie la meninerea echilibrului acido-
bazic; leucocitele asigur protecia de organisme i corpi strini; trombocitele sunt eseniale
n procesele hemostazei. Contientizarea rolului celulelor sanguine pentru sntate i n
afeciuni necesit cunoaterea proceselor biochimice fundamentale ce le caracterizeaz.
Particularitile compoziiei chim ice i ale m etabolism ului eritrocitului.
Eritrocitele (hematiile) sau globulele roii sanguine constituie cca 25 mlrd n volumul total
de snge sau 4-6 mln ntr-un mililitru (4,0-6,0 x 10 /L). Durata vieii lor este cuprins
ntre 110-130 zile, fiind produse cu un debit de 2,4 mln/sec. Eritrocitele mature au forma
unui disc biconcav cu diametrul de 7,2-7,9 | i grosimea de 1,0-2,2 |om.
Mecanismele biochimice ale maturaiei eritrocitelor. Eritrocitele sunt produse
prin eritropoiez medular din celula-stem. Procesul este reglat de eritropoietin.
Eritropoietina uman este o glicoprotein format din 166 resturi de aminoacizi cu masa
molecular de 34 kDa. Ea este produs preponderent de rinichi, ce o elimin n circuitul
sanguin sub influena hipoxiei. n medula osoas eritropoietina interacioneaz cu receptorii
specifici de pe membrana precursorilor imaturi ai eritrocitelor- BFU-E (burst-forming
unit-erythroid) i CFU-E (colony-forming unit-erythroid), stimulnd proliferarea i
diferenierea lor. Aceste efecte sunt exercitate doar n complex cu interleukina-3, factorul
de cretere insulinic, G-CSF i GM-CSF (granulocyte- and granulocyte-macrophage
colony-stimulating factors, respectiv), conform schemei 8.2.
Interleukine
Celula stern GM-CSF
pluripotent CFU-GEMM- BFU-E
Interleukine
GM-CSF
Epo
Eritrocit^ Precursorii
matur eritrocitari
Schem a 8.2 Precursorii eritrocitari i mecanismele de reglare (Epo - eritropoietina)
Precursorii eritrocitelor mature sunt celule nucleate i metabolic active. n aproximativ

24 ore dup intrarea n circuitul sanguin celulele pierd majoritatea structurilor intracelulare
(nucleul, ribozomii, mitocondriile etc.) i numeroase procese metabolice asociate cu ele.
Primar, un inhibitor proteic specific reduce procesele de respiraie tisular prin inhibarea
succinat dehidrogenazei, NADH-citocrom reductazei i citocromoxidazei. Paralel, se
diminueaz activitatea glicolizei, redirecionat spre calea anaerob. Procesele respiratorii
sunt reduse la 1/50 din valoarea corespunztoare formelor imature. Cantitatea ATP-ului
se njum tete, ceea ce dim inueaz sem nificativ procesele biosintetice
energodependente. Dispare sinteza proteinelor i a diferitelor tipuri de RNA.
Compoziia chimic a eritrocitelor (schema de mai jos)
Entrocit
65% Reziduu uscat 35%
Liber - 7 0 % Hemoglobin - 9 2 %
Legat - 3 0 % Strom 3,3%
Alte substante ~ 4,7%
Compoziia mineral a eritrocitelor este dependent de specie. La om ele conin:

potasiu (K+) -125 mEq/L sau 4,8 g/L
sodiu (Na+) - 20 mEq/L sau 0,46 g/L
calciu (Ca2+) - 1,2 mEq/L sau 0,025 g/L
clor (Cl') - 60 mEq/L sau 1,8-2,4 g/L
bicarbonat (H C 03) - 15 mEq/L
fosfai anorganici (H ,P04, H P04:~) -1 ,1 mEq/L sau 0,035 g/L
Cu excepia potasiului, cantitatea celorlali compui este mai mic dect nivelul
plasmatic. Deosebit de mari sunt diferenele ntre concentraiile eritrocitare i plasmatice
ale Na+/ K+, meninute prin activitatea Na+/ K+ -ATPazei.
Substanele organice sunt reprezentate n majoritate prin hemoglobin, concentraia
ei fiziologic constituind n medie 32 pg, cu variaii extreme de 27-34 pg (1 pg = 1012g)
per eritrocit, ce corespunde a circa 28 milioane molecule Hb (120-150 g/L).
n eritrocitele adulilor predomin cantitativ HbA, (a , i ,), HbA( (a ), constituind
cca 2,5 % din concentraia total, iar HBF (a 2y2) se conine n cantiti infime. n eritrocitele
senescente apare HbA3care este o form mbtrnit a hemoglobinei.
Proteinele nehemogobinice de referin sunt localizate n citozol, strom sau membrana
celulei. Din membran pot fi separate cca 10 proteine inedite, majoritatea fiind
glicoproteine. Principalele proteine integrale membranare sunt AEP (Anion Exchange
Protein) i glicoforinele. AEP strbate membrana de cca 10 ori, formnd un tunel ce
asigur schimbul ionilor de clor i bicarbonat. Bioxidul de carbon ce rezult din procesele
oxidative celulare ptrunde n eritrocit n form de ion carbonat, iar n pulmoni este
eliberat n schimbul clorului. Captul N-terminal al AEP fixeaz alte proteine, cum ar fi
hemoglobina, ankirina, unele enzime glicolitice etc. Glicoforinele (, i C) strbat
membrana doar o singur dat. Glicoforina A, forma major, conine 131 resturi de
aminoacizi i este extrem de glicozilat. Captul N-terminal, ce conine 16 catene
oligozaharidice, se afl pe suprafaa extern a membranei i, datorit polimorfismului
determin tipul MN al grupelor sanguine. Captul -terminal se extinde n citoplasm i
fixeaz proteina 4.1, ataat la spectrin.
Spectrina (a s i ), ankirina, adducina, actina, tropomiozina i celelalte proteine
periferice contribuie la meninerea formei i flexibilitii eritrocitelor. Ele formeaz
citoscheletul celulei. Principala protein a citoscheletului este spectrina. Ea este format
din dou lanuri polipeptidice - a i . n catene alterneaz segmente a-helicoidale i
secvene nespiralate. Lanurile sunt aranjate antiparalel n dimeri care, larndul lor, formeaz
tetrameri. Spectrina posed catene pentru legarea altor molecule de spectrin, a ankirinei,
actinei, proteinei 4.1. Ankirina n asociaie cu proteina 4.1 securizeaz legarea spectrinei
la membrana eritrocitar, realiznd o conexiune strns ntre membran i citoschelet.
Conexiunea este fortificat de
S p e c tr in a -a n k ir in a -3 S p ectrin a-actin a-4.1
in te r a c iu n e in tera ctiu n p legturile proteinei 4.1 cu anu
mite fosfolipide ale bistratului
lipidic membranar (fig.8.1).
Carenele proteinelor cito
scheletului i ale membranei
eritrocitare sau dereglrile struc
turii lor sunt cauzele unor afec
iuni ereditare, ca sferocitoza
(spectrin) i elipsocitoza (pro
teina 4.1 sau glicoforina C).
S p ectrin -S E L F asociaie
F igura 8.1. Interaciunea proteinelor citoscheletului
cu proteinele membranare eritrocitare
O clas aparte de proteine reprezentate masiv n eritrocit sunt proteinele-enzime. O
activitate mare au enzimele glicolitice ce asigura buna decurgere a glicolizei - principalul
furnizor de energie n form de ATP. Enzimele ce catalizeaz reaciile de fosforilare la
nivel de substrat: 1,3-bifosfoglicerat kinaza i piruvat kinaza sunt deosebit de active,
n eritrocit exist o deviere de la glicoliz - specific doar acestui tip de celule. Aceast
ramificare, numit ciclul Rappoport - Luebering, produce 2,3-difosfo-gliceratul ce
regleaz afinitatea hemoglobinei fa de oxigen. Enzima-cheie a ciclului este 1,3-
difosfoglicerat mutaza.
De asemenea, o activitate mare denota glucozo-6-fosfat dehidrogenaza, ct i
enzimele ciclului glutationului (glutation peroxidaza, glutation-S-transferaza i glutation
reductaza)', enzimele complexului care asigur reducerea la hemoglobin a cantitilor
insignifiante de methemoglobin ce se formeaz n condiii normale (NADH-
dehidrogenazele I i II; NADPH-dehidrogenazele A i B); carboanhidrazele , i
ce contribuie la transportul C 0 2n form de carbonai.
Compuii organici neproteici eseniali difer prin compoziie i cantitate att de plasm,
ct i de alte celule. n cantiti reduse, comparativ cu cele plasmatice, sunt glucoza i
ureea. Colesterolul este reprezentat predominant de forma liber, pe cnd n plasm el
este preponderent esterificat (2/3). n concentraii relativ mari sunt prezeni compuii
fosforilai - ADP, ATP, NAD, NADP, fosfolipidele, hexozo-fosfaii, 2,3-difosfo-gliceratul
etc. Glutationul sanguin este esenial redus i totalmente localizat n eritrocit. Cea mai
mare parte a acidului nicotinic i a nicotinamidei sanguine este concentrat n eritrocit.
Particularitile metabolismului eritrocitului
Eritrocitul este o celul ce consum puin oxigen (5 L/h/mL) n raport cu cantitatea lui
intracelular i consumul altor esuturi. Oxigenul este utilizat n principal pentru autooxidarea
flavoproteinelor, aNADH-ului produs n glicoliz anaerob, a glutationului prin intermediul
methemoglobinei. Consumul redus de oxigen este consecin absenei lanului respirator
i a majoritii enzimelor ciclului Krebs.
Utilizarea glucozei are loc n glicoliz anaerob (cca 90 %) i ciclul pentozo-fosfailor
(cca 5-10 %), lipsind calea glicogenogenezei. Glicoliz anaerob eritrocitar se afl n
echilibru cu calea 2,3-difosfo-gliceratului (figura 8.2).
Activitatea predominant a unei sau altei ci metabolice este dictat de cantitatea
ADP-ului. La valori sczute ale raportului [ATP] / [ADP] este facilitat calea glicolitic i
inhibat producerea 2,3-difosfo-gliceratului. Astfel, se produce prin fosforilare la nivel
de substrat ATP. Cnd concentraia ATP-ului este mare, predomin acumularea 2,3-
difosfo-gliceratului.
Glicoliz anarob este calea major de generare a ATP-ului n eritrocit, chiar i la un
randament foarte redus (30%). A doua cale, cu aciune limitat, este reacia
adenilatkinazic.
Adenilatkinaza
2 ADP ------ ATP + AMP
Cantitatea de ATP generat sumar este suficient pentru ntreinerea funciei respiratorii
a hemoglobinei, a formei discoidale a celulei, a homeostazei ionice etc.
I
2 Gliceraldchid-3-fosfat
Pi NAD
I etap
1Gliceraldehid-3-fosfat DH
\ NADH + H C a le a 2 ,3 -d ifo s fo -g lic e r a tu I u i
I
Fosfoenol piruvat
ADP'
ATP
Piruvat
NADH + H
NAD j /
Lactat
Figura 8.2. Glicoliza anaerob cu ciclul Rappoport-Luebering
n decursul glicolizei anaerobe, n eritrocit se acumuleaz, n concentraie sporit,

glucozo-1,6-difosfatul. Se consider c producerea i acumularea lui ar fi datorat
fosforilrii G-6-P pe seama 1,3-DPG printr-o reacie de transfosforilare:
G -6 -P + 1,3 - DPG -> G -l,6-dP+3-PG ..
Rolul metabolic al G-1,6-dP este ns neelucidat complet. Ciclul Rappoport-Luebering
are menirea de a produce 2,3-difosfo-glicerat. Compusul este un potenial modulator
alosteric al afinitii hemoglobinei fa de oxigen, ce favorizeaz cedarea lui esuturilor.
Secundar, 2,3-difosfo-gliceratul:
a) constituie o rezerv energetic utilizat n condiiile reducerii activitii glicolitice;
b) contribuic indirect la reducerea methemoglobinei;
c) faciliteaz energetic exportul K+din eritrocit.
Ciclul pentozo-fosfailor consum cca 5-10% din glucoza eritrocitar cu scopul
formrii NADPH+H+n reacia catalizat de glucozo-6-fosfat dehidrogenaz. Rata
producerii pentozo-fosfailor n eritrocit este neglijabil, iar calea n sine nu are semnificaie
n acest tip de celule. untul pentozo-fosfailor are o intensitate suficient pentru a menine
valoarea optim a raportului N A D PH /N A D P+, de care depinde reducerea
methemoglobinei i a glutationului.
Contactul hemoglobinei cu oxigenul, n concentraii mari, decurge spontan, neenzimatic
oxidat la methemoglobin (Fe3+), incapabil s transporte oxigen. n condiii fiziologice,
mai puin de 3% din hemoglobina eritrocitar este oxidat. Meninerea Hb n stare redus
(Fe2+) este realizat de methemoglobin reductazele NADH dependente (I i II) i
NADPH dependente (A i B). Furnizorii NADH-ului i NADPH-ului sunt glicoliz i
ciclul pentozo-fosfailor, respectiv (fig.8.3).
Methemoglobin reductazele NADH-dependente I i funcioneaz n complex cu

citocromul b5:
m e t-H b (F e 3+) + c itb s(F e ++) ---------- H b (F e 2*) + c it b s (F e3+)
c it b 5 (F e 3+) + N A D H cit b s (F e 2*) + N A D +
Autooxidarea Hb la methemoglobin este nsoit de generarea superoxidanion
radicalului:
H b (F e 2+) + 0 2 --------- * m e t H b (F e 3*) + 0 2'
Ultimul declaneaz producerea altor specii agresive ale oxigenului, ce induc oxidarea
peroxidic a lipidelor membranare, inactivarea enzimelor i altor procese nocive n celul.
Protecia antioxidant a eritrocitului este deosebit de puternic i eficient. Ea include
superoxiddismutaza, catalaza, glutationul i sistemul su enzimatic. Superoxiddismutaza
(SOD) neutralizeaz superoxidanion radicalul conform ecuaiei:
2 0 2-- + 2 H -------------------------------- H 20 2 + 0 2
Peroxidul de hidrogen rezultat este, de asemenea, o specie reactogen a oxigenului,
ce poate interaciona cu superoxidanion sau Fe2+pentru a genera cel mai toxic compus
- radicalul hidroxil (OH'):
H 20 2 + Fe2+ -------- * + " + Fe3+ (reacia Fenton)
20 2 + 0 2* -------- * + ' + 0 2 (reacia Haber-W eiss)
Aceste reacii sunt limitate prin intervenia catalazei i a glutation peroxidazei.
Catalaza
m 2o 2 -------- 2H20 + 0 ?
Glutationperoxidaza neutralizeaz i ali peroxizi, n special, ai acizilor grai polienici
din membrana eritrocitar. Enzima necesit glutation redus (GSH), cantitatea cruia este
meninut de glutation reductaza (NADPH). Astfel, acionnd n tandem, enzimele menin
raportul optim GSH/GSSG, de care depinde supravieuirea celulei (fig.8.4).
F ig u r a 8 .4 . untul pentozo-fosfat i metabolismul glutationului
Eritrocitele sunt lipsite de sistemele enzimatice necesare biosintezei acizilor nucleici,

proteinelor i acizilor grai. Unele lipide, spre exemplu colesterolul, pot fi acumulate prin
schimb din plasma sanguin. Eritrocitele posed unele enzime ale degradrii nucleotidelor
(AMP-dezaminaza, pirimidin nucleotidaza), dar procesul catabolic respectiv nu este
intens. Generarea coninutului de AMP favorizeaz refacerea rezervei de ATP.
Afeciunile majore ale eritrocitului
Cele mai frecvente afeciuni ale eritrocitelor se manifest prin anemii (micorarea
nimrului celulelor), apariia unor celule cu fonne anomale i rezisten sczut la aciunea
factorilor hemolizani. Ele pot fi ereditare sau dobndite. Tabelul 8.1 nsumeaz aceste
afeciuni.
Particularitile compoziiei i ale metabolismului leucocitelor
Seria mielocitar include leucocite: neutrofile, eozinofile i bazofile; limfocite i
monocite. Numrul leucocitelor din sngele circulant variaz ntre 3,200-9,800/mm3
(3,2-9,8 X 10 /L) i n mod normal cota granulocitelor neutrofile este de 56-69%, a
eozinofilelor de 1-4% i bazofilelor pn la 1%. Limfocitele reprezint 20-40% i
monocitele, respectiv, 4-8%.
Granulocitele neutrofile sunt produse n mduva osoas, n interval de 12 zile. Ele au
diametrul de 10-15 prn i se pot deplasa cu o vitez de 2-3 mm/or, prin emitere de
pseudopode. Numrul de neutrofile variaz ntre 2500-5700/mm3.
Granulocitele eozinofile au un diametru de 10-16 |U,m i o durat de viaa de 5-8
ore. Ca i neutrofilele, au proprietatea de a migra i a fagocita sub aciunea factorilor
chemotactici. Valoarea normal a eozinofilelor este cuprins ntre 100-200/mm3.
Limfocitele sunt localizate n modul urmtor: 4% n sngele periferic, 70% n organele
limfatice, 10% n mduva oaselor, i restul n alte esuturi. EXip durata vieii se difereniaz
Afeciunea Cauza Manifestrile
-Cbdonul 6 din gena lanului Hb se - Eritrocitele au fonn de secer,

1. Anemia
faleiform transform din GAG (sau GAA) n datorit agregrii moleculelor HbS.
(drepanocitar) GTG (sau GTA), ce detemin - Anenie severa.
nlocuirea n protein a Val cu Qu.
2 Talaseniile: -Mutaii variate n gena lanului a sau - ncetinirea biosintezei lanurilor

Aa-talasemia; al Hb (deleii extinse, nonsens nutaii, asau ale Hb-ei.
B.-talasenia crossing-over defcctuos etc). - Hiperproducerea celuilalt tip de lan.
- Producerea de lanuri atipice - g, d etc.
- Incapacitatea de oxigenare a esuturilor.
- Deces precoce la homazigoi.
3. Sferocitaza -Dereglri structurale sau cantitative - Mcrosferocitaz.

ereditar ale a- sau -spcctrinei, ankirinei, - Scade elasticitatea lor i ele sunt
proteinelor 3 sau 4.1. deteriorate n patul mcrocireulator.
- Celulele deteriorate sunt distruse
accelerat n splin, condurind la anemie
4. Deficiena ereditar -Mitaii punctifontE n gaia - Scade sinteza NADPHului i
a glucazD-6-fosfk gJucazo-6-fosft dehidrpgsnazei (X). reducerile glutationului i ale rctHb.
dehidrogenazei - Se modific stnxtura i penreabilitatea
rrmtranei.
- Apar anomalii ale ATP-ului.
- Aneirie hemolitic
5. Deficiena ereditar -Mitaii n gena izoenzim - Scade viteza glicolizei i cantitatea

apiruvatkinazd eritrocitare a piruvatkinazei. ATP-ului.
- Scade cantitatea 2,3-difosfogJiceratului.
- Crete cantitatea NADH-ului.
- Anenie i reticulocitoz.
Methemoglobinemia - f o rtu l excesiv de oxidani - Fierul este trivalent (Fe ).

(xenobiotici sau iredi cairente). -Reducerea afinitii fa de O^.
- Caren getKtic a net Hb redixtaze- - Polidtenie (creterea numrului
lorNADHdependentelilI. aclulelor roii).
- Hemoglobinaza Hb M
- His (8) este substituit prin Tyr.
7. Anenie - Carena vitaminei B, 2datorat absorbiei - Mtcrocitoza (12 jjini mai rrult).
regaloblastic sczute n stomac. - Poichilocitaz.
- Carena acidului folie din cauza aportului - Creterea concentraiei hemoglobinei
sczut, dereglrii absorbiei sau a eritrocitare cu hipercrorrie.
necesitilor crescute (de exerrplu, - Leucopenie.
la gravide). - Tronixxntopcnie.
dou grupe de limfocite: a) cu durat scurt - 7-12 zile ce constituie 10% din total; b) cu
durat lung - 500-800 zile (90%). n sngele periferic 65-80% sunt T-limfocitele, 10-
30% - B-limfocitele i 2-10% - NK-limfocitele (Natural Killer). Valoarea normal a
limfocitelor este de 1000-4500/mm3(l,0-4,5 x 10 /L).
Monocitele sunt produse n mduva osoas i organele limfopoetice. Ele (300-800/
mm3) rmn n circulaie cca 24 ore, dup care migreaz n esuturi i se transform n
macrofage.
Mecanismele biochimice ale granulocitopoiezei
Medula osoas conine cca de 24 ori mai multe granulocite dect sunt prezente n
circulaia periferic. Sinteza celulelor mielocitare este reglat de granulopoietin i de
factorul stimulator al coloniilor celulare (FSC). Trecerea celulelor imature din vasele
i sinusoidele medulare n circuitul periferic este condiionat de aciunea inductorului
leucocitozei. n snge proliferarea granulocitar este reglat de doi factori antagoniti:
chalona - inhibitoml proliferrii granulocitare, i antichalona - stimulatorul ei. Evolutiv,
metabolismul celular (de la promieloblast la granulocit) parcurge dou faze. n celul
iniial (I faz) predomin procesele energetice n raport cu cele hidrolitice: lipsesc
peroxidazele specifice mielocitelor, enzimele metabolismului glicogenului i substana n
sine. n faza a doua (delimitat de apariia granulaiilor) ncepe producerea
mieloperoxidazelor, enzimelor glicogenogenezei i glicogenolizei. Semnificativ se activeaz
hidrolazele, enzimele ciclului pentozo-fosfailor i glicolizei anaerobe. Concomitent, se
reduce aproape pn la dispariie aparatul mitocondrial energogenerator.
Particularitile compoziiei granulocitelor
Celulele precursoare (promielocitul, mielocitul) conin granulaii primare azurofile.
Celulele mature se devizeaz n dependen de natura i coloraia granulaiei n neutrofile,
eozinofile i bazofile. Aceste granulaii secundare sunt n conexiune cu aparatul Golgi.
Granulaiile neutrofile conin proteine bazice i numeroase enzime hidrolitice: fosfataza
alcalin, -glucuronidaze, lizozimul, nucleotidaze, ribonucleaza, peroxidaza, colagenaza
i alte peptidaze. De asemenea, ele conin urme de fosfataz acid, un eter al acidului
hialuronic, o cantitate important de glicogen i fagocitin. Ultima este o substan
intens bactericid. Granulaiile eozinofile sunt compuse dintr-un nucleu dens de
fosfolipide i enzime nconjurat de o membran. Bagajul enzimatic este bogat n oxidaze,
peroxidaze, catalaz, fosfataz alcalin, lipaz, amilaz, dar nu conin lizozim i fagocitin.
Granulaiile bazofile sunt depozite de histamin, heparin, bradikinin, serotonin i
enzime lizozomale.
n granulocite sunt prezente numeroase substane implicate n protecia organismului
de bacterii, virusuri i compui strini. Neutrofilele conin (cu excepia fagocitinei
menionate anterior) defensine i lactoferina. Defensinele sunt peptide bazice (20-33
resturi de aminoacizi), cu proprieti antibiotice. Ele distrug bacteriile, deteriorndu-le
membranele celulare. Lactoferina este o protein fixatoare de fier, ce inhib creterea
anumitelor bacterii sensibile la fier, acionnd ca agent prooxidant. De asemenea, ea
poate fi un reglator al proliferrii celulelor seriei mielocitare.
Eozinofilele conin o protein bazic bogat n arginin cu rol de protecie contra
paraziilor, o peroxidaz eozinofilic ce produce peroxidul de hidrogen, care distruge
microorganismele, i o protein de tip neurotoxic cu efect marcat.
Bazofilele i mastocitele nu conin substane bactericide specifice, dar sunt sursa
unor cantiti semnificative de mediatori, n principal, histamina.
Mediatorii sunt prezeni i n celulele celorlalte serii granulocitare. Astfel, n neutrofile
au fost identificate prostaglandinele, leucotrienele i factorul activator al plachetelor
(Platelet Activating Factor - PAF), iar n eozinofile-leucotriene (C4).
Membranele granulocitelor conin o clas de proteine specifice - integrinele. Ele
asigur aderarea granulocitelor, n special a neutrofilelor, la celulele endoteliale vasculare
ce posed receptori specifici sau liganzi. Integrinele sunt dimeri formai din subuniti a
i de diferite tipuri. Ele posed 3 domenii distincte - extracelular, transmembranar i
intracelular. Integrinele realizeaz conexiunea dintre mediul ambiant celulei i cel interior
i contribuie la rspunsul ei la schimbrile mediului. Rspunsul celular include migrarea
chemotactic, penetrarea n esut i fagocitoza.
Membranele neutrofilelor sunt nzestrate cu receptori specifici domeniilor 9. ale
IgG. Receptorii fixeaz complexele antigen-anticorp, facilitnd fagocitoza.
Bazofilele i mastocitele posed receptori fa de IgE. Ataarea complexelor antigen-
anticorp la ele induc eliberarea mediatorilor i declaneaz reaciile vasculare i tisulare
locale, care reprezint cauza manifestrilor alergice.
Particularitile metabolismului granulocitelor
Metabolismul energetic este asigurat prin catabolismul glucidelor. Glicogenul (1 -2%
din greutatea celulei) scade rapid n timpul fagocitozei. Concomitent sunt activate glicoliza
i consumul de oxigen.
Granulocitele se caracterizeaz printr-o intensitate deosebit de mare a glicolizei. n
fonnele imature procesul este preponderent aerob, urmat de cile mitocondriale de
generare a ATP-ului. n celula matur predomin glicoliza anaerob, activitatea enzimelor
ciclului Krebs i a fosforilrii oxidative, cu intensitate moderat. Generarea ATP-ului prin
glicoliza anaerob atinge cote nalte n fagocitoz, pentru ntreinerea energetic a
procesului.
n granulocit o activitate mare are i ciclul pentozo-fosfailor, care produce NADPH
utilizat ulterior la formarea H20 , necesara bactericidiei. Catabolismul lipidelor reprezint
o surs energetic secundar ce complementeaz degradarea glucidelor. Sinteza
proteinelor n granulocite este intens i este asigurat de coninutul nalt de aminoacizi
liberi. Procesele metabolice menionate anterior susin funciile fundamentale ale
granulocitelor.
Neutrofilul exercit dou funcii. Funcia major: fagocitoza - o parte a mecanismelor
de protecie. Funcia secundar este cea secretorie. Granulocitele neutrofile secret
transcobalamina / - o a 2-globulin care leag i transport vitamina B12(cobaiamina).
Fagocitoza se desfoar n 3 etape:
a) activarea neutrofilului i chemotaxia;
b) fagocitoza propriu-zis;
c) bactericidia.
Activarea neutrofilelor este indus de ataarea la receptorii specifici de pe membrana
celular a bacteriilor, complexelor antigen-anticorp sau a unor factori chemotactici, ca
proteine ale sistemului complementului (ndeosebi C3), produse ale degradrii colagenului
i fibrinei, mediatori ai inflamaiei (kalicreina) etc. Creterea rezultant a concentraiei
Ca2+citoplasmatic influeneaz asamblarea sistemului de tubuli i a sistemului actin-miozin.
Aceste dou sisteme sunt implicate n secreia coninutului granulaiilor i n motilitatea
celular. Granulocitul emite pseudopode ce capteaz i nglobeaz n celul compusul
strin. Se formeazfagosomul - vacuola de fagocitoz ce fuzioneaz cu granulaiile
neutrofilelor. Se elimin enzimele hidrolitice ce distrug peretele bacterian-primar i ulterior
celelalte elemente celulare.
Fagocitoza i bactericidia sunt nsoite de o amplificare extrem a consumului
oxigenului ce poart denumirea de explozie respiratorie ( respiratory burst). Oxigenul
este utilizat pentru a produce cantiti mari de derivai activi ca: peroxidul de hidrogen
(H20 2), radicalii superoxid i hidroxil ( 0 2*- i OH*), ionul hipoclorid ( ). Aceti
compui sunt ageni microbicizi. 0 2*~ este sintetizat de NADPH-oxidaza. Enzima este
organizat i funcioneaz ca un lan de transport al electronilor, similar cu lanul respirator.
Lanul include NADPH-ul, cit.b558 i dou proteine citoplasmatice, ce se ataeaz la
membran pentru a cataliza urmtoarea reacie:
2 0 2+ NADPH + H + -------- 2 0 2*' + NADP*
Din superoxidanion radical spontan se produce peroxid de hidrogen, conform ecuaiei:
0 2* + 0 2* + 2 H ---------- -- H 20 2+ 0 2
Peroxidul de hidrogen este substratul mieloperoxidazei ce produce hipocloridul:
H20 2+ C r + H +--------*- +OH*
Cel mai frecvent este , datorit concentraiei intracelulare considerabile a ionului,
dar pot fi i anionii de Br , I ' , SCN .
Enzimele i substanele active ce particip la bactericidi sunt izolate primar n granulaiile
neutrofilelor i ulterior n fagosom. Astfel, celula i mediul ambiant sunt protejate de
aciunea lor distructiv. Linia a doua de protecie este realizat de: a) superoxiddismutaza,
catalaza, sistemul glutationului ce inactiveaz formele agresive ale oxigenului; b)
antiproteinazele ce neutralizeaz aciunea enzimelor proteolitice lizozomale.
Fagocitoza poate fi stopat prin utilizarea acidului monoiodacetic (inhibitor al glicolizei
anaerobe). Consumul de oxigen crescut i producerea de ap oxigenat ar proveni i din
oxidarea NADH prin aciunea NADH-oxidazei. Legtura ntre cele dou sisteme
NADPH-oxidaz i NADH-oxidaz se stabilete prin reacii auxiliare de tipul
transhidrogenazei (vezi reaciile):
a) NADH + H++ 0 2 ^ ADHl 0^ ,da^ NAD++ H ,0 2;
b) NADPH + H++ 0 2 HADrH-oxida-.a NADp+ +
c)N A D ++NADPH Tr^ U- r.ogl ne^ a NADH + NADP+.
Implicarea glutationului n sistemul de aprare poate fi ilustrat n modul urmtor:
H20 2 + 2GSH 2H20 + GSSG;

GSSG + NADPH + H % __ GR ^ 2GSH+NADP+.
Vacuolafagocilar (fagosoma) nu poate fi eliminat din celul i coninutul ei se
revars n celul, distrugnd-o.
Eozinofilele funcional sunt implicate n procesele alergice. Ele limiteaz afectrile
produse prin complexele imune. Funcia lor principal este fagocitarea complexelor
antigen-anticorp i eliminarea histaminei secretate de bazofile n timpul reaciei alergice.
Migrarea chemotaxic a eozinofilelor spre elementul fagocitat este stimulat de complexele
antigen-anticorp, proteinele sistemului complementului (C5; C6; C7), fibrin, serotonin,
histamin, imunoglobulinele G. Mecanismele fagocitrii i dezintegrrii corpului strin nu
sunt cunoscute n detalii.
Bazofilele sunt celule implicate n reaciile inflamatorii i alergice, prin producerea i
depozitarea mediatorilor. Prin dcgranularea lor se elimin histamin, bradikinin, serotonin
i numeroase enzime lizozomale. Aceste celule joac rol important n reaciile alergice
determinate dc IgE, deoarece ele au tendina de a se ataa de celul. Bazofilele sunt
corelate i cu echilibrul fluido-coagulant, prin producerea i eliberarea heparinei.
Afeciunile majore ale leucocitelor
Se cunosc mai multe afeciuni ereditare ale leucocitului ce deregleaz principala funcie
a celulei.
Deficiena aderrii leucocitelor de tip / (type I- leukocyte adhesion deficiency)
este cauzat de deficiena subunitilor de tip 2n integrinele LFA-1 ale neutrofilelor i
macrofagelor. n aceast afeciune este diminuat aderarea leucocitelor la celulele
endoteliale i un numr mai sczut de neutrofile pot ptrunde n esuturi pentru a combate
infecia. Astfel, persoanele afectate sufer de infecii bacteriene i micoze recurente.
Mutaiile n genele ce codific componentele sistemului NADPH-oxidazic sunt cauza
granulomatozei cronice. Afeciunea este relativ rar i se manifest prin infecii recurente
i granuloame ntinse pe piele, n pulmoni i ganglionii limfatici. Granuloamele se formeaz
n tentativa de a izola i elimina bacteriile ce nu au fost distruse din cauza activitii
insuficiente a sistemului NADPH-oxidazic. Defectul genetic afecteaz producerea a patru
proteine-enzime ale sistemului i diminueaz sever producerea substanelor bactericide
(H2o 2, O f , OH),
Caracteristica biochimic a m onocitului
Monocitele se produc n mduva osoas i organele limfopoietice. Dup o circulare
de 24 ore n snge, ele migreaz n esuturi i se difereniaz n macrofage. Fenomenul
este concordat cu modificarea metabolismului celulei respective.
Monocitele-macrofage sunt localizate n ganglionii limfatici, splin, mduva osoas, la
nivelul tuturor seroaselor (pleur, pericard, peritoneu), piele, pulmoni, ficat, sistem nervos
central.
Macrofagele pulmonare se caracterizeaz prin metabolism energetic aerob, cu
activitate semnificativ a enzimelor ciclului Krebs i a lanului respirator. n celelalte
esuturi ele sunt energetic dependente de glicoliz anaerob. Toate macrofagele au coninut
bogat i variat de esteraze. Att monocitele, ct i macrofagele secret substane cu activitate
bactericid (lizozim), antiviral (interferonul) i stimulatori ai activrii i diferenierii
limfocitelor n plasmocite (interleukina-1).
Monocitele-macrofage n esuturi fagociteaz intens bacterii, resturi celulare mari i
celule sanguine mbtrnite.
Caracteristica biochimic a limfocitelor
Limfocitele se formeaz n sistemul limforeticular (timus, mduv osoas, ganglioni
limfatici, splin, esut limfatic al tractului digestiv, amigdale) i ajung n circulaie pe cale
limfatic. Limfocitele circul continuu pe traseul: organe limfatice - limf - snge - esut -
limfa. Limfocitele se divizeaz n tipurile T i B, n dependen de origine - timus (T) i
medula osoas (B).
Limfocitele T fixeaz la suprafaa lor cantiti minime de imunoglobuline. Ele
ndeplinesc multiple funcii - mediaz protecia organismului fa de microorganisme,
virusuri i fungi; controleaz funciile limfocitelor i coopereaz cu ele n producerea
anticorpilor; resping grefele de organe incompatibile; intervin n reaciile de
hipersensibilitate.
Limfocitele T realizeaz imunitatea celular. Ele posed n membrana celular
receptori specifici pentru diverse antigene, ce determin existena a numeroase clone
individualizate prin capacitatea de a interaciona specific cu un anumit antigen. Imunitatea
celular se realizeaz prin dou mecanisme: producerea limfokinelor i activitatea
citotoxic. Limfokinele sunt mediatori cu structur variat care au anumit efect asupra
celulelor-int. Prin aciunea citotoxic se asigur distrugerea citolitic a celulei-int.
Ambele efecte condiioneaz eliberarea organismului de microorganisme, virusuri, celule
tumorale etc.
Limfocitele exercit imunitatea umoral mediat de anticorpi (imunoglobuline).
Limfocitele se divid n numeroase familii, fiecare avnd propria specificitate de
interaciune cu un anumit antigen. n urma acestei interaciuni, ele se transform n
plasmocite ce produc imunoglobuline specifice.
Limfocitele NK (Natural Killer) nu posed receptori specifici membranari fa de
anumii antigeni. Ele distrug celulele tumorale i cele infectate de virusuri. Din majoritatea
studiilor se confirm concluzia c profilul energetic al limfocitului, celul funcional
multipotent, este de tip oxidativ, aerob.
Particularitile compoziiei chimice i ale metabolismului trombocitelor
Trombocitele sunt cele mai mici elemente figurate sanguine. Diametrul lor constituie
2,5-5 |u.m. Trombocitele sunt produse de mduv osoas, cu o vitez medie de 3300/
minut. Au o duratde via medie de 8-10 zile. Sngele periferic conine 1300-400 000/
jam (130-400 X 10 /L), din care 2/3 n circulaie i 1/3 rezervate n splin.
Particularitile compoziiei chimice a trombocitului
Proteinele constituie o parte important din trombocite (cca 52% din masa uscat).
Importan deosebit o au integrinele membranare ce asigur aderarea trombocitelor
la suprafaa lezat a vasului. n acest proces intervin GP Ia - Ila i GP lb - V - IX ce
asigur fixarea plachetelor direct la colagen sau prin intermediul factorului von
Willebrand. Principalele integrine membranare sunt prezentate n tabelul 8.2.
De asemenea, membrana trombocitelor conine receptori la ADP, serotonin i
adrenalin - substane ce particip la hemostaz.
N G lic o p r o t e in a R o lu l f u n c io n a l
1 GP I a (s) A derenta trom bocitelor

2 GP 1b R eceptori pentru factorul von W illebrand i trombin
3 GP II b Rcceptori pentru fibrinogen i factorul von W illebrand
4 GP V Reccptori pentru trombin
5 GP IX Se leag cu GP Ib.
Tabela 8.2 Principalele integrine trombocitare
n citoplasm se gsesc plecstrina, calmodulina i kinaza lanurilor uoare ale

miozinei ce intervin n activarea plachetelor, n coagularea sngelui. Lanurile uoare ale
miozinei sunt parte integral a actomiozinei - protein contractil ce modific forma
trombocitului din discoidal n sferic, n cadrul metamorfozei vscoase a celulei.
Setul enzimatic al trombocitelor este adaptat la realizarea funciei hemostatice. El
conine adenilatciclaza, Na7K+- ATPaza, fosfolipaza A2, ciclooxigenaza, tromboxan
sintetaza ce genereaz mediatorii intracelulari ai hemostazei. Necesitile energetice sunt
acoperite prin glicoliz, ciclul pentozo-fosfailor, ciclul Krebs i lanul respirator, enzimele
crora sunt extrem de active. Cantitatea de ATP produs este de cca 150 ori mai mare
dect n eritrocit, iar coninutul de ADP depete concentraiile medii din alte celule.
ADP-ul trombocitar este nu att compus macroergic, ct mediator al hemostazei. Hidrolazele
acide (proteazele, esterazele etc.) sunt concentrate n lizozomi. Ei mai conin un ir de
factori proprii i depozitai, responsabili de buna decurgere a coagulrii sanguine-
fibrinogenul, fibronectina, -trombomodulina, adezinele, factorii chemotactici leucocitari
etc.
n granulele dense ale trombocitelor sunt concentrai ionii de Ca2+sub form legat
de calsechestrin. Ca2+este eliberat n timpul activrii plachetelor i acioneaz ca
mesager secund intracelular.
Factorii plachetari ai coagulrii sunt depozitai n plachete, dar provin att din celul,
ct i din plasm (descrii mai jos).
Particularitile metabolismului trombocitelor
Metabolismul trombocitelor este analogic, n multe aspecte, cu metabolismul
muchiului striat de salt (ce funcioneaz periodic cu lungi intervale de repaus) pn n
momentul activrii hemostazei. Activarea hemostazei i a trombocitului este nsoit de
intensificarea maxim posibil a proceselor energogeneratoare i a consumului ATP-ului.
ATP-ul este generat att n faz de repaus, ct i n timpul activrii prin glicogenoliz,
glicoliz, ciclul Krebs i fosforilare oxidativ. Consumul ATP-ului n procesul
metamorfozei vscoase i a refraciei cheagului este catalizat de ATP-aza. n trombocit
ATP-ul nu poate fi refcut din contul creatin fosfatului din lipsa enzimei creatinfosfat
kinaza. ATP-ul este necesar pentru fosforilarea lanurilor miozinei i asamblarea
actomiozinei. Proteina contractil particip la modificarea formei celulei n cadrul
metamorfozei vscoase. Fosfatul ATP-ului este utilizat i pentru fosforilarea plecstrinei
ce realizeaz agregarea granulelor trombocitului i eliberarea coninutului lor.
Metabolismul proteinelor este intens n trombocit. Sinteza lor este n principal localizat
n ribozomi. Cantiti mici de proteine se sintetizeaz n mitocondrii ce posed DNA i
RNA. De exemplu, n mitocondrii este sintetizatfactorul X III-factorul destabilizare
afibrinei. O cantitate considerabil de aminoacizi sunt deturnai din sinteza proteic
spre producerea mediatorilor necesari hemostazei - serotoninei, adrenalinei,
noradrenalmei.
Un ir de mediatori interni i externi sunt produi din lipidele trombocitare. Activarea
plachetar este nsoit de scindarea fosfolipidelor i eliberarea acidului arahidonic. Ultimul
este precursorul tromboxanului A2sintetizat pe calea ciclooxigenazic. Fosfatidilinozitol-
4,5-bisfosfatul este substratul din care se produc concomitent doi mediatori ai activrii
plachetelor - diacilglicerolul i inozitol-1,4,5-trifosfatul.
Mecanismele biochimice ale funciilor trombocitelor
Hemostaza este funcia fundamental a trombocitelor. Ele particip n toi cei patru
timpi ai procesului. Secundar, plachetele sanguine intervin n protecia imun, prin
fagocitoza complexelor imune i a particulelor virale, i n protecia peretului vascular,
prin infiltrarea lor n stratul endotelial.
n condiii normale, trombocitele circul n snge n form neactiv, discoidal. n
hemostaz sau tromboz, ele se activeaz i contribuie la formarea cheagului. Procesul
activrii are 3 etape: 1) aderarea lor la colagenul vascular; 2) eliberarea coninutului
granulelor; 3) agregarea celulelor.
Trombocitele ader la colagenul vascular expus prin receptorii specifici de pe
membrana celular- GP Ia-IIa ( -integrina) ntr-o reacie ce implic factorul von
Willebrand. Ultimul se leag concomitent la trombocite prin GP Ib-V-IX i colagen sau
subendoteliul vascular. Plachetele ce au aderat la colagen, i modific forma i ptrund
n subendoteliu, unde elibereaz coninutul granulelor dense i alfa (a).
Secreia granular este, de asemenea, stimulat de trombin. Ea se formeaz n
cascadele coagulrii, este cel mai puternic activator al trombocitelor i iniiaz procesul,
interacionnd cu un receptor membranar. Evenimentele ce urmeaz sunt similare
transmiterii mesajului hormonal n interiorul celulei. Complexul trombin-receptor, prin
intermediul proteinei G, activeaz fosfolipaza care, la rndul su, hidrolizeaz
fosfatidilinozitol-4,5-bisfosfatul membranar la dou molecule mesagere intracelulare-
diacilglicerolul i inozitol-1,4,5-trifosfatul.
Diacilglicerolul activeaz proteinkinaza ce fosforileaz plecstrina. Ca rezultat,
are loc agregarea granulelor i eliberarea coninutului lor. Serotonina i adrenalina eliminate
determin constricia vasului lezat, iar ADP-ul activeaz alte trombocite, amplificnd
agregarea lor.
Inozitol-1,4,5-trifosfatul induce eliberarea Ca2+ din sistemul tubular. Ca2+
interacioneaz cu calmodulina i kinaza lanurilor uoare ale miozinei. Activarea lor
induce fosforilarea miozinei, interaciunea ei cu actina i modificarea fonnei trombocitului
din discoidal n sferic.
Interaciunea receptorilor plachetari cu colagenul vascular denudat activeaz o alt
cale mesagerial. Complexul colagen-receptor activeazfosfolipaza A 1 ce hidrolizeaz
acidul arahidonic din fosfolipidele bistratului membranar. Arahidonatul servete drept
substrat n biosinteza tromboxanului A2care, ntr-o manier receptor-mediat, activeaz
fosfolipaza C, promovnd agregarea trombocitelor.
Trombocitele active sunt necesare nu numai pentru formarea cheagului alb instabil
plachetar, dar i pentru activarea unor factori plasmatici ai coagulrii. Fosfolipidele anionice
membranare accelereaz reaciile activrii factorilor Stuart-Prower (X) i a
protrombinei (II), ce constituie etapele-cheie ale cascadelor coagulrii sanguine.
Toi agreganii trombocitelor (colagenul, trombin, ADP, factorul activator al
plachetelor etc.) modific suprafaa celulei n aa mod nct s fie favorizat ataarea
fibrinogenului la complexul GP IIb- (a nb3integrina) de pe membrana trombocitului
activat. Astfel, se formeaz o reea de fibrinogen divalent i trombocite agregate. Sinergitii
acestui proces sunt adrenalina, serotonina i vasopresina.
Dereglrile metabolismului trombocitelor
Tulburrile metabolismului trombocitar implic faza vasoplachetar a coagulrii i
pot fi ereditare i dobndite. Dereglrile ereditare ale funciilor plachetelor afecteaz
adeziunea la peretele vascular, eliberarea factorilor plachetari ai coagulrii sau agregarea
celulelor la poriunea lezat a vasului.
Sindromul plachetelor gigante sau Bemard-Soulier este determinat de absena
glicoproteinelor GP Ia (s) i GP lb ce afecteaz agregarea celulelor. Afeciunea se transmite
autozomal recesiv. Ea se manifest prin mrirea semnificativ a dimensiunilor trombocitelor
(sunt similare celor ale limfocitelor); prelungirea marcant a timpului de sngerare-coagulare
(ccal5min); hemoragii intracutanate n mucoase, pulmoni, tractele digestiv i urogenital.
Sindromul Willebrand-Jurgens reprezint o afeciune cu transmitere autozomal
dominant. Este dereglat biosintezafactorului von Willebrand (F-vW) ce este parte
integral a complexului VIII. Carena F-vW diminueaz capacitatea de adezuine a
plachetelor i, ca unnare, se mrete timpul de sngerare-coagulare.
Sindromul Glanzmann sau trombostenia ereditar are transmisie autozomal
recesiv. Pacienii denot lipsa glicoproteinelor membranare GP Ilb i GP lila ce
asigur interaciunea cu fibrinogenul i F-vW. Trombocitele sunt mici i rotunde i nu se
supun metamorfozei vscoase. Este modificat eliberarea F-3 i nu se retracta cheagul.
Storage pool disease (boala rezervorului de depozitare) este o tulburare a eliberrii
factorilor plachetari. Cauza ei este dereglarea sintezei ciclooxigenazei i scderea
considerabil sau lipsa Ca2+din plachete.
C O N STITU E N TII M IN E R A L I A I PLASM E I
Principalul constituent mineral al plasmei este apa care ndeplinete funcia de solvent
pentru toate componentele ei. Gazele sanguine, oxigenul i bioxidul de carbon sunt parial
dizolvate n plasm, proporional cu presiunea parial a fiecrei componente.
Preponderent, gazele sunt legate chimic de hemoglobin. C 0 2din snge se gsete i n
plasm, sub form de combinaii multiple cu ionii bicarbonici - H C 03.
Substanele minerale dizolvate n plasm sunt n stare ionic, determinnd echilibml
ntre anioni i cationi.
Cationii Sodiul (Na+) este principalul factor al reglrii presiunii osmotice i echilibrului
acido-bazic. Na+prezint cationul umorilor, atingnd n plasm concentraia de 152
mEq/L. ntre concentraia ionilor de Na+(extracelular) i ionului de K+(intracelular)
exist un echilibru ce se realizeaz printr-un mecanism activ la nivelul membranelor celulare
- N a +/K+-ATP-aza. Dereglrile concentraiei ionului de Na+depind de repartiia apei n
diferite compartimente. Valori normale: 133 -147 mmol/L.
Potasiul(K+) este cationul spaiilor intracelulare, reprezentnd 90% din totalul de
al organismului (150 g ce corespund la 3500 mEq la omul de 70 kg); concentraia n
plasm este de 4,7 mEq 02, mEq/L plasma. Valori normale: 3,4 - 4,5 mmol/L.
Se cunosc variaii patologice - hiper- i hipokalemii. Hipokalemia este insoit de
tulburri neuromusculare i cardiace asociate cu alcaloza metabolic. Mult mai rare sunt
hiperkalemiile, dar ele pot duce la consecine grave, adesea ireversibile, cu paralizie i
oprirea inimii n diastol.
Calciul are un coninut plasmatic de 2,3 - 2,75 mmol/L. La omul adult coninutul
total constituie 1100-1500g. Cationul este reprezentat prin trei fraciuni: a) ultrafiltrabil
ionizat, ce prezint 60% din total, fiind forma activ implicat n osificare, coagulare,
excitabilitate neuromuscular; b) ultrafiltrabil neionizat, reprezentnd 4% din total -
fixat n combinaii saline sau complexe nedisociabile; c) neutr filtrabil, cu o cot de
36% din calciul total sub form de proteinat de calciu.
Ionii de Ca++sunt necesari pentru activitatea unor enzime, cum ar fi cele implicate n
procesele de coagulare i pentru agregarea plcuelor sanguine. Ei reduc excitabilitatea
neuromuscular n musculatura scheletic, producnd ns o cretere a contractilitii
miocardului - intervenii realizate prin modificri n permeabilitatea membranelor celulare.
Graie ncrcturii pozitive (2+) i volumului lor mic, ionii de calciu formeaz legturi cu
radicalii electronegativi ai moleculelor proteice i fosfolipidelor membranare. Aceste
modificri influeneaz repartiia ionilor i potenialului electric al celulelor, respectiv
excitabilitatea lor. In lipsa unor stimuleni, calciul se gsete n celul sub form inactiv,
neionizat, stocat n forme de depozit. Stimulenii (inozitolfosfaii) produc un flux de
calciu ionic spre citoplasm, activnd sistemele enzimatice i modificnd funcia celulelor.
Se descriu variaii sub form de hipo- i hipercalcemii. In patologia uman, mai ales a
copilului, hipocalcemia este asociat cu sindromul de tetanie. Insuficiena paratiroidian,
rahitismul, lipsa vit.D, osteodistrofia renal sau valorile majore de tireocalcitonin -
toate pot duce la hipocalcemii severe. Hipercalcemiile se intlnesc n distrugerile osoase,
mielomul multiplu, osteoliza malign, hiperparatiroidism .a.
Magneziul - coninutul variaz ntre 0,7-1,2 mmol/L. Magneziul plasmatic este 70%
ultrafiltrabil, restul fiind legat de albumine, a , i , globuline. n organism este distribuit
inegal, avnd o concentraie mai mare n esuturile cu activitate metabolic major -
creierul, inima, ficatul, tiroida, rinichii.
Principalele organe implicate n metabolismul Mg sunt intestinul i rinichii. Provine
magneziul, n special, din verdeuri, pete, came. 30-50% din Mg ingerat este asimilat la
nivelul intestinului prin absorbie facilitat i pasiv. Majoreaz absorbia vit.D i forma
sa activ. Alcoolul sporete eliminrile urinare de magneziu.
Veriga important n reglarea metabolismului Mg este situat la nivel renal, filtrnd
circa 2,5g Mg, din care reabsoarbe 95%, excretnd 100 mg/zi. Controlul eliminrii renale
e influenat de multipli factori - PTH, T4, glucocorticoizii, aldosteronul. Magneziul este
implicat ntr-o gam larg de reacii biochimice, avnd un impact activator direct asupra
unor enzime, ca: fosfofructo-kinaza, creatin kinaza, adenilatciclaza. Intervine n sinteza,
transportul i utilizarea compuilor macroergici - ATP; asigur n mitocondrii cuplarea
oxidrii cu fosforilarea. Particip la sinteza acizilor nucleici i a proteinelor, intervenind n
activarea aminoacizilor. Are importan major n reglarea contraciei musculare i
conducerca impulsului nervos. Mg intervine n transferul ionic (K+) i moduleaz activitatea
canalelor de calciu. Magneziul are misiunea de stabilizator al membranelor celulare, precum
i al ribozomilor i lizozomilor, n deficitul de Mg se intensific degranularea mastocitelor
i bazofilelor.
Deficitul de magneziu este ntlnit frecvent. Aportul deficitar n alimentaia parenteral,
creterea eliminrilor urinare la administrarea soluiilor glucozate, curele de slbire sunt
nsoite de instalarea unei hipomagneziemii. n maladiile ce evolueaz cu malabsorbie, n
alcoolismul cronic deficitul de Mg poate agrava manifestrile clinice ale carenei unor
vitamine (B p B6, B [2). n hiperaldosteronismul primar sau secundar, n exces de
catecolamine se accentueaz deficitul de Mg, asociat cu hipokalemii n insuficiena
cardiac.
Anionii Clorul e anionul cel mai important al compartimentului extracelular, avnd o
concentraie plasmatic de 94-111 mmol/L. Concentraia clorului urmeaz pasiv
modificrile de concentraie ale ionilor de Na+. Excepie prezint: n alcaloza metabolic
se ntlnete hipocloremia, iar n acidoza metabolic-hipercloremia.
Concentraiile plasmatice de CI i de Na depind mult de modificrile volumului de
ap extracelular i, implicit, de gradul de diluie a electroliilor.
Sulful se gsete n plasm sub mai multe forme care, nsumate, alctuiesc sulful total,
corespunztor unei concentraii de 1,40 g/L. Partea major este reprezentat de aminoacizi,
proteine sanguine. Sulful neproteic conine dou fracii: sulful neutru (aminoacizii i
derivaii tiol) i sulful oxidat (sulfatul, esterii), cu un nivel cuprins ntre 0,01 -0,03 g/L.
Fosforul este un element abundent n organismul uman. Circa 80% din toat cantitatea
(700g la omul adult) este depozitat n schelet sub form de hidroxiapatit. Restul se
gsete n lichidul extracelular i n esuturile moi. Majoritatea fosforului este combinat
cu lipide, proteine i hidrai de carbon, participnd la fonnarea fosfolipidelor, nucleotidelor,
compuilor macroergici. De asemenea, fosfaii constituie unul din sistemele - tampon ale
organismului.
Concentraia fosforului variaz n limitele 0,8-1,51 mmol/L. Copiii n cretere au
niveluri mai nalte, ntre 1,3-2,25 mmol/L. O diet bogat de glucide poate scdea nivelul
fosforului. Fosforul practic este prezent n toate alimentele i o caren alimentar poate
fi exclus. Majoritatea fosforului provine din lapte i produse lactate. Crete necesarul
de fosfai n timpul sarcinii i lactaiei.
Se consider c 2/3 din fosforul ingerat este absorbit n jejun printr-un proces activ
energodependent. n malabsorbie, n boli hepatice, intoxicaii cu metale grele i aport
alimentar crescut de fitai este diminuat absorbia lui intestinal. n cazul unei diete srace
n calciu, absorbia fosforului sporete.
Fosfatul este o substan cu prag renal: la o concentraie plasmatic sub 1 mmol/L,
acest nu se elimin pnn urin. La nivelul glomerulilor sunt absorbite 80-95% din fosfatul
filtrat. Parathormonul stimuleaz eliminarea renal a fosfailor, reducnd reabsorbia lor.
O cretere a fosfailor plasmatici are drept consecin o scdere imediat a calcemiei.
Hipofosfatemia poate surveni n hiperparatiroidism, rahitism, sindrom Fanconi,
precum i n cazul administrrii parenterale de lichide lipsite de fosfai i, n special, n
urma perfuziei intravenoase de glucoz, n cantiti mari.
Deficitul sever de fosfai duce la astenie muscular, parastezii, hiporeflexie, tremor,
ataxie. n unele cazuri, celulele musculare srcite de compui macroergici pot ajunge la
liza miofibrilelor, cu creterea consecutiv n ser a CPK.
Deficitul de fosfai perturbeaz funcia elementelor figurate sanguine: scade capacitatea
fagocitar a leucocitelor, ce predispune la apariia infeciilor, este deficitar retracia
cheagului i plachetele au o durat de via sczut; prezint fragilitate crescut i hematiile.
Scderea fosfailor din eritrocite diminueaz generarea de 2,3 difbsfo-glicerat, ce modific
curba de disociere a hemoglobinei, i se ajunge la o hipoxie tisular n prezena unei
saturaii cu oxigen relativ normal a sngelui. Este evident c se nruttete, n aa caz,
starea pacienilor cu patologii cardiace, pulmonare, anemii.
Hiperfosfatemia se constat n hipoparatiroidism, insuficien renal, hipervitaminoza
D, sarcoidoza.
Oligoelemente. Fierul. Cea mai mare parte a celor 4,5-5,0g fier din organismul
unui adult se gsete sub form de hem. Se afl n combinaie cu diverse proteine, genernd
hemoproteiiiele (hemoglobina, mioglobina i heminele celulare-citocromii, peroxidazele,
catalazele, xantin oxidaza, fenilalanin i tirozin hidroxilaza). Aproximativ 25 % din totalul
de fier se gsete sub form de feritin i hemosiderin, i numai cca 1% se afl n
plasm i n lichidul interstitial, n form de transferin.
Feritin prezint un grup de proteine hidrosolubile, relativ termostabile, cu o greutate
molecular njur de 460 kDa. Moleculele de feritin alctuite din subuniti au o form
de sfer goal, miezul fiind ocupat cu incluziuni de fier. Un astfel de complex poate fixa
pna la 4500 atomi de Fe, dar de regul numai 20% din capacitatea de fixare a fierului
este ocupat. n lipsa ncluziunilor de fier se constat prezena apoferitinei. Dac
procentul de fier depete 37 (n unele cazuri chiar i 50%) i complexele Fe - protein
sunt incomplet invelite de subunitile proteice, se condenseaz i devin insolubile, se
ajunge la hemosiderin. Preponderent, 70% din fierul depozitat se gsete sub form
de feritin, i restul de 30% e reprezentat de hemosiderin. Creterea concentraiei de
hemosiderin denot o suprasturare cu fier a feritinei.
Coninutul de feritin este reglabil - sinteza de apoferitin crete n condiiile unei
ncrcri cu fier i scade n caz de carena lui. Dozarea feritinei serice, glicozilat i
lipsit de fier, poate stabili modificrile n rezervele de fier. S-a constatat c 8-10 mg fier
depozitat corespunde I p.g feritin seric pe litru. Este concludent c n cazul unui
deficit de fier, nivelul feritinei serice scade i la o suprancrcare cu fier concentraia
seric a ei va crete evident. n condiiile unei absorbii optime cantitatea fierului absorbit
din alimente nu depete 4 mg/zi. Durata vieii unei molecule de feritin cu fier este de
cteva zile i deci procesul de degradare i sintez contribuie ca rezervorul intracelular de
fier s fie uor supus mobilizrii.
Gradul de absorbie a fierului depinde de forma n care se administreaz fierul din
alimente. Se absoarbe mai greu fierul trivalent. n prezena vit. i n mediul acid fierul se
reduce la forma fieroas (bivalent) care este mai uor absorbabil. Se consider c
compuii care formeaz complexe insolubile cu fierul, ca de exemplu fosfaii din lactate
precum i oxalaii, acidul fitic din cereale i reduc gradul de absorbie.
Cuprul - un constituent esenial n activitatea unor enzime ca: citocromoxidaza,
peroxidaza, monoaminoxidaza, superoxiddismutaza.
S-a demonstrat ca cuprul din raia alimentar este absorbit rapid, dar procesul poate
fi dereglat (inhibat) de prezena n lumenul intestinal a srurilor de molibden. n plasm,
cuprul se fixeaz labil de albuminele serice, fiind vehiculat la esuturi. Dup 24 ore toat
cantitatea n plasm se regsete la nivelul a 2globinelor - ceruloplasmina. Atomii de
Cu, fixai iniial de albuminele serice labil, sunt captai n ficat, ncorporai n
ceruloplasmina sintetizat n acest organ, apoi rentori n plasm. Se consider c
ceruloplasmina nu este un adevrat transportator de Cu, i metalul incorporat nu particip
la schimburi cu esuturile, fiind scos din circuitul metabolic. Complexul Cu - ceruloplasmina
este degradat n ficat, iar cupml eliberat se elimin pe cale biliar.
Concentraia cuprului seric oscileaz ntre 90-140 jag/dL sau 14-22 jomol/L. Valori
ridicate ale cuprului seric i ale ceruloplasminei se ntlnesc n infecii acute i cronice,
infarct miocardic, leucemii acute i diverse procese neoplazice. Ceruloplasmina se
comport ca o protein de faz acut, creterea ei corelnd cu ali indicatori de faz
acut ca: fibrinogenul, proteina C. n strile menionate, nivelul transferinei serice scade.
Scderi patologice ale cupremiei i ceruloplasminei s-au descris n sindromul nefrotic
sever, n enteropatii cu pierderi de proteine i perturbarea grav a sintezei hepatice de
proteine.
Sugarii hrnii exclusiv cu lapte de vac, un aliment deosebit de sarac n cupru, pot
face o hipocupremie, anemie hipocrom microcitar, bipoproteinemie i edeme. O situaie
mai grav are loc la un deficit de cupru n maladia Menkes - defect genetic cu dereglarea
proceselor de absorbie i utilizare a cuprului. Sufer copiii de sex masculin, boala e
transmis printr-un mecanism recesiv legat de cromozomul X. Se observ perturbri n
dezvoltarea fizic i intelectual, crize convulsive i un pr aspru, fr luciu, epos, friabil
i rsucit, care la palpare d senzaia de srm de oel (steely-hair sau kinky hair
syndrome). Copilul este susceptibil la infecii, hipotermie i decesul survine pn la vrsta
de 3 ani. Defectul de transport al cuprului prin celulele mucoasei intestinale survine i la
nivelul transportului transplacentar. Blocarea cuprului n mucoasa intestinal iar n cazul
administrrilor intravenoase n ficat, se datoreaz unei proteine cu structur anormal
care imobilizeaz metalul, fcndu-1 inaccesibil esuturilor. n consecin, se instaleaz
deficite ale sistemelor enzimatice dependente de cupru, ce sunt responsabile de anomaliile
somatice i neurologice.
Zincul - element structural al carboxi-peptidazelor, alcool dehidrozenazei,
carbanhidrazei. Conine zinc i insulina, leucocitele. Concentraia plasmatic variaz ntre
11-17,6 umol/L. Aproximativ 30-40% din zincul seric este fixat de a 2macroglobulin,
iar restul este fixat labil de albumine.
Deficitul de zinc survine la un aport insuficient sau la pierderi exagerate urinare. n
cazul unei depleii acute apar: diareea, stri depresive, dermatita perinazal i perioral,
alopecia. Manifestrile clinice dispar dup cteva zile de la nceputul tratamentului cu
zinc. Este descris o maladie cu caracter genetic, caracterizat prin dereglri severe ale
absorbiei zincului denumit aerodermatita enteropatic. Are un mecanism de transmitere
autosomal recesiv i se exprim prin diaree, alopeie i leziuni erozive n jurul orificiilor,
precum i cruste localizate pe coate, genunchi i glezne. Se consider ca subiecii afectai
de aceast maladie prezint o anomalie n structura unei proteine secretate de pancreas,
cu rol de fixare a zincului, facilitnd absorbia. Laptele de mam conine o astfel de
protein, similar cu cea din pancreasul subiecilor sntoi. Fenomenele respective apar
dup nrcare i trecerea la o alimentaie cu lapte de vac.
Manganul. In vitro activeaz fosfatazele, arginaza, carboxilazele i cholinesteraza.
Experimental a confirmat c locul cardinal unde este concentrat elementul este mitocondria,
ceea ce evident presupune rolul manganului drept coenzim n activitatea enzimelor
lanului respirator.
Cobaltul - element structural al vit. ,2- este implicat n activitatea enzimelor ce
conin 2ca cofactor. Deficitul de cobalt afecteaz formarea sngelui.
j
CO M PON EN TE ORGANICE
Substane azotate neproteice. Azotul neproteic. Se consider c produii finali sau
intermediari ai metabolismului reprezint substanele azotate neproteice. n ansamblu,
aceti compui alctuiesc azotul neproteic ce cuprinde: uree (50%), aminoacizi (25%),
acid uric (4%), creatin (5%), creatinin (2,5%), indican (0,5%), purine, bilirubin,
polipeptide. Evaluarea azotului neproteic se face n filtratul obinut dup sedimentarea
proteinelor.
Diferena ntre azotul neproteic i azotul ureic constituie azotul rezidual (restant). La
un adult sntos variaiile n concentraiile azotului neproteic sunt minime, dar dependente
de cantitatea proteinelor ingerate. n unele procese patologice nivelul azotului neproteic
crete, ducnd la azotemie. Deosebim azotemie de retenie, cauzat de micorarea
eliminrii prin urin a produselor azotate, care poate fi de natur renal sau extrarenal.
n azotemie de retenie de origine renal majorarea azotului neproteic e cauzat primordial
de creterea coninutului de uree (90%). Azotemia retenional extrarenal apare n
insuficiena cardiovascular, micorarea tensiunii arteriale i scderea fluxului sanguin
renal. Azotemia extrarenal poate fi cauzat i de dereglri n eliminri de urina, dup
formarea ei. Azotemia de producie se depisteaz la un flux majorat de compui azotai
n snge, ca consecin a lizei proteinelor tisulare n inflamaii, arsuri, traume.
Ureea - produsul final al metabolismului proteic la speciile ureotelice. Se produce n
ficat i reprezint unul din mecanismele principale de detoxifiere a amoniacului. Se atest
creteri de uree n insuficiena renal, tumori, iradieri, degradri excesive de proteine,
sindroame cu dezechilibru hidroelectric, aport excesiv de proteine alimentare.
Acidul uric - produs final al catabolismului purinic, poate fi de provenien endo- i
exogen. Fixat de proteine, are un maxim de solubilitate plasmatic la o concentraie de
380 |i.mol/L. 99% de acid uric se gsete sub form de urai de sodiu. Se ntlnesc
hiperuricemii primare i secundare. Cele secundare se produc prin hiperproducie dc
acid uric n leucoze, policitemie, cur de slbire, plasmocitom. n insuficiena renal sau
catabolism purinic crescut, la utilizarea unor medicamente, de asemenea se depisteaz
nivel majorat de acid uric. Hipouricemiile sunt mai rare.
Creatina are o concentraie de 25-35 |imol/L, deintorul principal este eritrocitul.
Cel mai fix constituent azotat al sngelui, neinfluenat de alimentaie i corelat cu
metabolismul muscular este creatinin.
Creatinina. Nivelul creatininei serice este un indicator sensibil al funciei renale i
variaz ntre 62-97 (imol/L la brbai i 44-88 |imol/L la femei.
Aminoacizii. Nivelul de concentraie plasmatic exprim echilibrul dintre aportul
alimentar, utilizarea lor n biosinteza i degradarea lor. Variaii patologice apar n erori
nnscute ale metabolismului, preponderent cu dereglri n transportul tubular. Deseori
apar sindroame de mare severitate, asociate cu debilitate mintal i des incompatibile cu
viaa.
n suprimarea funciei detoxifiante a ficatului i creterea putrefaciei intestinale va
crete concentraia amoniacului plasmatic, care normal se gsete n concentraii foarte
mici (25 |i.mol/L). n cantitate mic, n plasm, se gsesc i polipeptidele care provin
de la degradarea incomplet a proteinelor. Va crete cantitatea lor dup arsuri extinse. n
concentraie mic, n plasm se depisteaz i bilirubina (17 prnol/L), alctuit din 80%
bilirubina neconjugat, legat de proteine i fosfatide i cea direct, conjugat cu
glucoronizii.
SUBSTANE ORGAN ICE NEAZOTATE

Glucoza. Valorile normale variaz ntre 3,3-5,5 mmol/L i este rezultanta intervenirii
unui complex de factori endocrino-enzimatici. Glucoza plasmatic provine din alimentaie,
glicogenoliz (ficat) i gluconeogenez (ficat, rinichi). Variaiile patologice se manifest
preponderent n diabetul zaharat (valori mari), iar hipoglicemiile se pot ntlni n
hiperinsulinism, tulburri de resorbie renal, afeciuni ale ficatului, insuficien suprarenal
i altele. Sunt descrise mai multe metode de depistare, dar cea cu ortoluidin este
internaional standardizat. n ultimul timp intr n practica de laborator i metodele
enzimatice.
Dintre principalele componente lipidice ne referim la urmtorii constitueni: colesterol,
trigliceride, acizii grai liberi, fosfatidele, acizii biliari. Ultimii se gsesc n ser la indivizii
sntoi, n concentraii mici. Creterea concentraiei acizilor biliari se produce n icterele
obstructive i n cele hepatocelulare.
Dintre acizii organici este prezent n ser un important produs al glicolizei anaerobe -
acidul lactic. E de origine eritrocitar sau muscular, organe unde este intens glicoliza
anaerob. Sunt descrise valori mari n ser dup efort fizic, n insuficien cardiac, n
hepatopatii.
O concentraie mic o are i acidul piruvic - produs intermediar (0,14-2 |rmol/L) al
metabolismului. Crete vdit concentraia lui n deficiena de vit.B , n alcoolism i n
efort fizic intensiv. n insuficiena renal apare n concentraii majori acidulguanidino-
succinic.
Sunt prezeni n snge, n concentraie mic, i corpii cetonici (100-600 (imol/L).
Creteri deosebite sunt depistate n diabet, inaniie i alte patologii.
ENZIM ELE PLASMATICE
Din cele 2000 enzime atestate pn n prezent, numai o mic parte se localizeaz n
plasm (sau ser) i sunt depistate n mod clinic prin intermediul diagnosticului,
pronosticului, stabilirii evoluiei proceselor cronice i, n consecin, orientarea terapeutic.
Din cele 6 clase deocamdat sunt mai puin interesante pentru practica medical
curent izomerazele i ligazele, dar i acestea valoreaz pentru investigaiile de patogeme
la nivel molecular.
Enzimele plasmatice sunt de provenien celular, fiind difuzate din esuturi n
snge. Mecanismul disenzimiei plasmatice, mecanism de traversare a enzimelor i
izoenzimelor tisulare n ser, este foarte complex, posibil fiind o rezultant a
interaciunii mai multor factori, dintre care principalii sunt:
- amplificarea biosintezei enzimei determinat la nivelul controlului genetic, n
transcripie sau translaie;
- majorarea numrului de celule capabile de sintez intensiv;
- gradul de alterare a proceselor energetice i, consecutiv, al permeabilitii selective
a membranelor;
- vascularizarea organului lezat;
- schimbarea profilului enzimatic al organului n dependen de boal.
Dac demareaz eliberarea enzimelor, apoi viteza de producere a lor n lichi
dul extracelular va depinde de :
- localizarea ultrastructural diferit a enzimelor: cele citoplasmice fiind mai uor
antrenate n circulaie dect desmoenzimele legate de membranele organitelor, ele se
vor afirma la progresarea procesului patologic, la lezarea celulei;
- greutatea molecular a enzimelor, dimensiunile moleculelor: cele mici difun-
deazcu vitez mai mare dect celelalte i se elibereaz la etapele timpurii ale alterrii:
viteza lor de eliberare e invers proporional cu masa molecular;
-gradientul de concentraie n membrana celular ce determin fora motrice a
eliberrii de enzime. De exemplu, n celulele ficatului concentraia LDH e de 3000 on
mai mare dect nivelul enzimei extracelular; n eritrocite - numai de 200 ori; sorbitol DH
= 50.000:1; alcool DH = 20.000:1; AS AT i ALAT = 10.000:1; enzimele cu un gradient
de concentraie mare abandoneaz mai uor celulele dect cele cu coeficient mai mic;
- timpul de njumtire diferit a! enzimelor plasmatice: LDH =113 ore; ASAT = 17
ore i ALAT = 47 ore;
- inactivarea neproporional;
- eliminarea diferit destul de redus prin bil (fosfataza alcalin, 5'-nucleotida-
za, ceruloplasmina) i urin (cu masa molecular mai mic dect 60.000 Da);
- suprapunerea modelelor enzimatice caracteristice diferitelor organe.
Clasificarea funcional a enzim elor plasm atice
Enzimele din plasm se claseaz, din punct de vedere al provenienei i funciei,
n urmtoarele categorii:
1) enzime secretorii cu rol activ n plasm, produse n ficat. Aici se includ
enzimele coagulrii, lecitin-colesteraza, renina, ceruloplasmina, pseudocholinesteraza:
nivelul lor scade o dat cu lezarea celulelor productoare.
2) enzime excreto-secrelorii provenite din glandele exocrine i pancreas. Ele sunt
excretate i acioneaz la nivelul tubului digestiv (amilaza, lipaza, tripsina), se elimin
prin bil - leucin aminopeptidaza, fosfataza alcalin - la lezarea celulelor de origine sau
la prezena unui obstacol la nivelul cilor excretorii. De asemenea, vor fi prezente n
snge i la sporirea permeabilitii membranei celulelor secretarii.
3) enzimele indicatorii celulare predomin n plasm, la lezarea celulei de origine.
Ele au valoare de indicatori plasmatici ai sediului organului lezat intrastructural.
Localizarea leziunii nu e ntmpltoare i poate fi stabilit prin urmatoarele modaliti:
a) dozarea unei enzime specifice de organ;
b) determinarea i caracterizarea izoenzimelor cu valoare organospecific;
c) stabilizarea activitii unor grupri (constelaii) de enzime.
Lezarea principalelor organe ar trebui s se reflecte n plasm. Reflectarea
plasmatic a profilului de organ nu se observ totui n mod constant, deoarece
se produce fenomenul de dispersie a profilului datorat complexitii i disproporiei
de contribuie a factorilor menionai. Dispersia enzimatic este mult mai puin
pronunat dup o afeciune unic i grav (infarct miocardic vast), fapt care
justific utilitatea testelor, n special, n cazul acutizrii maladiei. Agresiunile slabe
i repetate favorizeaz fenomenul de dispersie, i indicii activitii enzimatice nu mai
corespund celor din celulele de origine.
Principalele enzime plasm atice cu valoare diagnostic
Ficat Enzimele organospecifice sunt: histidaza, urocanaza, ceto-1-a-fosfat-aldolaza,
sorbitol dehidrogenaza, omitincarbamil-transferaza, arginaza.
Glutamat dehidrogenaza - enzim mai puin specific - este caracteristic mito-
condriilor hepatice, manifestat printr-un grad de activitate mai redus n miocard i
rinichi. Eun indicator al afeciunii mitocondriilor celulelor.
GOT-ASAT(aspartat aminotransferaza) reprezint o enzim bilocular (citozol i
mitocondrii), prezent n toate celulele organelor i, n special, n miocard, ficat,
muchi, rinichi.
GPT-ALAT(alanin aminotransferaza) se conine n cantiti mari n citoplasma
hepatocitelor, se utilizeaz n diagnosticul precoce al fonnelor anicterice i n depistarea
perioadelor de evoluie a hepatitelor cronice.
Lactat DH e prezent n toate celulele organismului, constituind un tetramer alctuit
din dou subuniti peptidice - H i M - asociate n cele 5 izoenzime proprii tuturor
esuturilor.
Sporirea esenial de LDH, i LDH,, cu prevalarea lui LDH,, este caracteristic
infarctului miocardic, iar respectiv a L D H ,- anemiei megaloblastice. LDH 5 se depis
teaz preponderent n necroza hepatic.
Testiculul postpubertin conine o enzim organospecific LDHz, cu o mobilitate
electroforetic ntre LDH 3 i LDH4.
Valorile raportului Schmidt (ASAT + ALAT/GDH) ofer date importante
referitoare la pronosticul unei hepatopatii evolutive.
Leucin aminopeptidaza provine, preponderent, din celulele parenchimului hepa
tic, fiind caracteristic i altor organe-pancreasului, rinichilor, intestinului, mucoasei.
Devierile patologice semnificative pentru diagnosticul difereniat sunt extensiunile
semnalate n icterele obstructive cauzate de obstacolul biliar.
hocitrat dehidrogenaza total sporete n cazul sindromului de citoliz hepatic.
Icterul obstructiv se caracterizeaz prin creterea b'-nucleotidazei, la fel prin
intensificareafosfatazei alcaline, care, la rndul ei, sporete selectiv n afeciunile osoase,
cu orientare osteoblastic.
Miocard. Caracteristicile specifice n cazul afeciunilor acestui esut sunt: -
hidroxibutiratdehidrogenaza, LDH total i, mai esenial, LDH, i LDH,, cu predomi
narea primei izoenzime; A SA T-ca izoenzim mitocondrial.
Creatinkinaza - CPK. Se afl n trei forme izoenzimatice, localizat n citoplasm i
mitocondriile din miocard, muchi i creier. Enzimele catalizeaz formarea de ATP din
creatinfosfat i ADP n esuturile menionate n urmatoarele forme: MM - n musculatura
scheletic i miocard; B B -n creier, musculatura scheletic; M B -n miocard. Enzima
seric se inactiveaz rapid prin oxidarea gruprilor SH ale situsului su catalitic.
La infarctul miocardic, o dat cu extinderea necrozei, proporional crete valoarea
CPK/MB. La miopatii se semnaleaz creterea CPK, fr modificri ale activitii
izoenzimei MB.
Pentru infarctul miocardic acut sunt caracteristice valorile majorate ale 3-
gliceraldehidfosfat dehidrogenazei, fosforilazei b.
Creier. n afeciunile lui se nregistreaz valori semnificative ale activitii CPK
totale i izoenzimei BB, acetilcholin esterazei, monoaminooxidazei, valori majore
ale AS A T, cu mult superioare celor din cadrul afeciunilor altor organe.
Rinichi. Patologia lor este precedat de valori semnificative n activitatea
glicinamidino transferazei, pe cnd n patologia pancreasului-n cantiti mai mici.
Pentru diagnostic se utilizeaz frecvent i izoenzimele alanin aminopeptidazei cu
urmtoarea caracteristic: AAP, (n ficat), AAP, (npancreas) i AAP 3 (nrinichi).
O semnificaie aparte pentru diagnosticul afeciunilor renale areglutaminaza.
M uchii scheletici. Patologia lor e caracteristic prin sporirea CPK total, a
izoenzimei MM; de asemenea, prin activizarea F-l,6-difosfat-aldolazei i devierea
modelului izo-LDHs ctre LDHr
Fosfataza alcalin este o enzim compus din trei forme izoenzimatice:
hepatobiliar, osoas i intestinal. n decursul sarcinii se mai adaug o form
tranzitorie-placentar. Mobilitatea electroforetic difer de forma molecular. Ordi
nea descrescnd a acestei valori de la anod ctre catod este urmtoarea: hepatic,
osoas, intestinal. Aceste izoforme se regleaz diferit: fosfataza intestinal este
inhibat de L-fenilalanin, L-tirozin, L-triptofan; cea placentar- numai de L-Phe.
Un interes deosebit prezint fosfataza acid, care se afl n organe conform
ordinii descreterii valorii: prostat, oase, ficat etc. Amplificarea activitii fosfatazei acide
i, mai ales, a izoenzimei sale tartrico-sensibile, e nregistrat la carcinomul metastazat al
prostatei.
Dintre izoenzime se mai utilizeaz frecvent i cele ale -amilazei, avnd dou
izoenzime: forma salivar i pancreatic; ele se majoreaz respectiv la parotidite i la
pancreatite acute. La cea din urm patologie crete i lipaza pancreatic.
Poate fi explorat i pseudocholin esteraza, care sporete la afeciunile hepatice cronice
evolutive, n special n ciroz, i scade n intoxicaii cu fosfor organic.
SISTEM ELE TAMPON SANGUINE

n organismul uman reacia mediului intem abia depete cadrul neutru: pH=7,35-
7,45. Pstrarea acestei constante este hotrtoare pentru desfurarea normal a
tuturor proceselor vitale. Meninerea pH-ului n limitele date o realizeaz urmtoarele
mecanisme funcionale:
1 ) eliminarea renal a acizilor i bazelor;
2 ) eliminarea pulmonar a dioxidului de carbon;
3) neutralizarea acizilor i bazelor de ctre sistemele tampon.

Un sistem tampon const din amestecul a dou substane tampon cu aciuni
complementare: una din ele se opune scderii pH-ului determinat de aciunea unui acid
(la adaosul lui), iar cealalt se opune creterii lui determinat de adaosul unei baze.
Aceste dou substane din constituia unui sistem tampon pot fi: un acid slab i sarea sa
alcalin sau o baz slab i sarea sa acid. Indiferent de natura chimic, componena
sistemului tampon care neutralizeaz acizii se numete component bazic, iar cea care
neutralizeaz bazele este component acid.
Cele mai importante sisteme tampon care funcioneaz permanent n organismul
uman sunt cele ale acidului carbonic - bicarbonat; al fosfailor, al proteinelor i
hemoglobinei.
I. Sistem ul tampon acid carbonic-bicarbonat Cota lui e de 10% din total,
constituind unul din sistemele ce se regleaz fin. H2 C 0 3 joac rolul de donator de protoni,
iar ionul bicarbonat H C 0 3' - de acceptor al protonului:
h 2c o 3 h + + h c o 3-
Bicarbonaii din lichidul extracelular se prezint sub forma de sare de Na -
N aH C 03', iar n celul - K H C 03', avnd anionul comun H C 0 3'.
Ecuaia Henderson - Hasselbach:
[H C 03] pK. - constanta disociaiei egal cu 6 ,1
pH = ^ + * [ 2 0 3] [HCO 3 "] - concentraia ionilor
[H 2 C 0 3] - concentraia moleculelor nedisociate
inactivitatea metabolic majoritatea acizilor formai sunt mai tari dect acidul
carbonic. Pentru neutralizarea lor intervine componenta bazic a sistemului N aH C0 3
i are loc reacia de tipul:
HC1 + N aH C 0 3 NaCl + , 0 3
Anhidraza carbonic scindeaz acidul n H ,0 + C 0 2, la care dioxidul de carbon se
elimin prin plmni.
O baz tare generat, neutralizat fiind de componenta acid a sistemului H ,C 03, se
va transforma n bicarbonat:
NaOH + H ,C 0 3 NaHCOj + H20
C 0 2 sub form de H 2 C 0 3 este permanent disponibil pentru tamponarea bazelor i
, reprezint un produs ncontinuu, constituind ultimul metabolit al majoritii
substanelor transformate n organism.
n mod normal, la pH = 7,4 n plasm i n lichidul extracelular raportul bicarbonat
acid este de 20/1. Funcionarea acestui sistem tampon se combin cu cea a sistemului
hemoglobinei.
La o hipoventilaie pulmonar are loc scderea difuziei C 0 2 din snge spre alveolele
pulmonare, deci o mrire parial a tensiunii acestui gaz n plasma sanguin. n ultima
instan, sporete aciditatea sngelui. La o hiperventilaie fenomenele decurg invers.
II. Sistem ul tampon al fosfailor
___v [HPO 4 ] [HPO 4 ] - concentraia ionilor N a 2 HP 0 4

P P H2P04- ' 8 [H2PO4"] [H2PO4'] - concentraia ionilor NaH2P04
pK - constanta disociaiei egal cu 6,87
La valoarea pH = 7,4, valoarea raportului dintre ingredieni constituie 5:1, ceea ce

nseamn c concentraia formei acide e de 5 ori mai mic, fapt ce denot o bun
capacitate de tamponare pentru cantiti suplimentare de acid.
Procesul tamponrii are loc potrivit reaciilor:
HC1 + N a,H P0 4 ^ NaCl + N aH ,P 0 4

NaOH + NaH^PO,
2 4
>Na,HPO,
2 4
+ H 2,0
Acest sistem este operant, n special, n hematii i n celulele tubulilor renali. Atare
sistem de tampon are un rol deosebit n esuturi, cota fiind de 1 % din ntregul sistem.
Capacitatea sistemului n snge e maxim - la pH = 7,2.
III. Sistem ul tampon al proteinelor predomin n celulele esuturilor, dar

opereaz i n plasm. n constituia lui intr proteinele care funcioneaz ca anioni la
pH-ul slab alcalin al mediului intern (+). n combinaie cu ionii H+anionii proteici constituie
componenta acid a sistemului (H-proteina) i tamponeaz bazele:
NaOH + H-protein H20 + Na-protein

Anionii proteici, n combinaie cu cationii metalelor alcaline (Na, K), formeaz
componenta bazic i tamponeaz acizii:
HC1 + Na-protein NaCl + H - protein.

i n acest caz, datorit tamponrii, acizii i bazele se transform n produi neutri
(NaCl i H ,0), iar componentele sistemului se transform una n cealalt, manifestnd
aciditate sau bazicitate moderat, la care pH-ul mediului nu se afecteaz.
I V Sistem ul tampon al hemoglobinei la fel conine component proteic cu o
capacitate mare - cota de 75% din total.
Participarea hemoglobinei n reglarea pH e nsoit de transportul 0 2i COr Constanta
disociaiei grupelor acide ale Hb este n dependen de saturarea cu 0 2.
Hb intr n componena a 2 sisteme tampon:
a) HHb (hemoglobin acid) - KHb (hemoglobinat de potasiu);
b) H H b02(oxihem. acid) - K H b02 (oxihemoglobinat de potasiu).
Oxihemoglobina este un acid mai puternic (pK = 7,16) dect dezoxihemoglobin
(pK = 7,71) i cedeaz 0 2, conform ecuaiei:
H H b02 + nH+ HHb + O,
Ambele sisteme i pot exercita aciunea tampon datorit hemoglobinei care
include n partea sa proteic multe resturi de histidin.
Inelul imidazolic posed capacitatea de a accepta i totodat de a ceda H+
unuia dintre atomii de azot ai heterociclului.
N H+ HN , N j +
1
1
X
+
0
H - li H90
I +
1
NH, NH NH
ca baza ca
Reaciile respective ale acestui sistem tampon sunt:
1. KOH + HHb ^ KHb + H20 2. NaOH + H H b02 ^ N aH b02 + H20

HCl + KHb HHb + KCl HCl + N aH b02 ^ H H b02 + NaCl
Acidul i baza se transform n produi neutri, pstrnd aciditatea sau bazicitatea lor
moderat, far a afecta pH-ul mediului.
Anomaliile echilibrului acido-bazic sunt asoite de apariia acidozelor i alcalozelor
(metabolice i respiratorii). Deoarece, n evoluia proceselor metabolice se genereaz
ioni de hidrogen (H+) i nu ioni de hidroxil (OH ), tendina spre acidoz se ntlnete mult
mai frecvent dect tendina la alcaloz. Mecanismele homeostatice sunt adaptate, n special,
pentru contracararea unui exces de H+i din acest motiv, relativ mai rar, alcalozele
(metabolice) se compenseaz cu dificultate. E concludent, c Ia procesele complexe de
meninere a echilibrului acido-bazic contribuie toate celulele organismului, un rol premordial
revenind hematiilor, plmnilor i rinichilor.
HEMOSTAZA I FIBRINOLIZA
Echilibrul fluido-coagulant constituie un sistem de mecanisme antagoniste i
interdependente, factor hotrtor al conservrii potenialului hemostatic al sngelui, precum
i al fluiditii acestuia. Sunt procese reglate enzimatic, tulburarea i dezechilibrul crora
cauzeaz formarea de trombe (cheaguri) sau sngerarea.
C oagularea
Particularitile caracteristice acestui proces sunt:
1) numrul mare de activatori i inhibitori care intervin;
2) existena majoritii factorilor coagulani, ca precursori;
3) preponderent, drept factori coagulani servesc proteazele ce se produc la proteoliza
limitat din formele lor inactive;
4) transformarea lor din forme inactive n active are loc prin autocataliza
determinat de propriile lor produse;
5) unii factori, ca de exemplu Ca**, au aciune multipl, intervenind pe parcursul
timpului de coagulare;
6) procesul complex decurge n cascad; faza latent este format de avalana
transformrilor accelerate ale factorilor coagulrii prin forme inactive i active.
n desfurarea procesului coagulrii se disting faze care, n ordinea manifestrii
lor succesive, se ealoneaza n doi timpi, i anume:
a) timpul parietal este determinat de vasoconstricia vaselor mici, capilarelor din
esutul afectat de serotonin, catecolamine i obturarea lor prin agregate trombocitare.
La interaciunea fibrelor de colagen ale vasului lezat cu trombocite, prin fore
electrostatice, are loc agregarea lor. Trombocitele agregate sufer metamorfoz vscoas
i, n consecin, elimin astfel de compui ca: serotonin, catecolaminele, fosfolipidele
i ndeosebi ATP, ADP, ultimul amplificnd agregarea trombocitelor i accelernd
obturarea vaselor lezate. Aceast agregare are un caracter reversibil.
b) timpul plasmatic reprezint o agregare ireversibil a trombocitelor asigurat
de aciunea trombinei, ce duce la formarea cheagului rezistent.
Procesul autocatalitic, la etapele iniiale, necesit cantiti minime de factori i
decurge n patru etape succesive: producerea protrombinazei, generarea trombinei,
transformarea fibrinogenului n fibrin, cu stabilizarea acestuia, sinereza i retracia
cheagului.
Ultimul timp al procesului, care se produce n homeostazia hemostazei, e fibri-
noliza.
n anul 1863, Djozef Lister a observat c n vena jugular izolat sngele boului rmne
lichid, pe cnd separat n vasul de sticl-se coaguleaz. S-a constatat c acest contact
cu obiect artificial duce la formarea unor componente proprii sngelui. Acest mecanism
de coagulare a fost numit intrinsec.
La adugarea n plasma sanguin a unor componente, coagularea de asemenea
are Ioc. Acest mecanism a fost numit extrinsec. La coagulare, ambele mecanisme
activeaz concomitent. Ele se deosebesc numai la etapele iniiale.
Caracteristicile principalilor factori ai coagulrii
Factorul I-fibrinogenul - prezint o glicoprotein care se sintetizeaz n ficat,
are aproximativ o mas molecular egala cu 340 kDa i o form molecular alungit.
Fibrinogenul e alctuit din 6 lanuri polipeptidice, grupate cte 2 (a, , ), cu o
mobilitate electroforetic -y. Jonciunea lanurilor glucidice cu cele peptidice se
realizeaz printr-o legtur glucozil-aminil-arginin. Oxidarea glucidelor din fibrinogen i
confer inconsisten fa de fenomenul coagulrii. Transformarea n fibrin se poate
realiza att artificial, ct i fiziologic.
Artificial, fenomenul e provocat de aciunea unor factori chimici ca: ninhidrin,
aloxanul, cloramina; factori biologici: veninul de arpe, stafilocoagulaza, enzimele
proteolitice.
Fiziologic, n 2-3 secunde, sub aciunea trombinei - o proteaz de tipul tripsinei, ce
scindeaz 4 legturi peptidice ntre arginin i glicin, cu eliberarea a 4 peptide-2 A
din a lanuri constituite din cte 18 resturi aminoacidice i 2B din - cte 20 fiecare,
denumite fibrinopeptide. Lanurile cu tirozina terminal nu sunt antrenate n
fenomenul de conversiune a fibrinogenului n fibrin.
Cu pierderea fibrinopeptidelor, se creeaz condiii favorabile pentru asocierea
spontan a monomerilor sub form de polimeri intermediari, cu legturi de tip
necovalent, realizate prin interaciuni hidrofobe i puni de H. Complexul este solubil,
dar puin stabil. Polimerizarea monomerilor se realizeaz longitudinal i transversal i
duce la o gelificare, cu trasformarea din stare de sol n cea de gel, rezultndun cheag
amorf, slab.
La aciunea unui factor stabilizant (F.XIII) - o fibrinaz activat prin trombin, se
formeaz o fibrin insolubil, care confer cheagului rigiditate; se stabilesc legturi
covalente peptidice ntre gruprile a-amino din resturile de lizin i carboxil ale glutami
nei (enzima e o transamidaz). Factorul de stabilizare a fibrinei (FSF, F.XIII) este o
glicoprotein tetramer cu masa molecular de 340 kDa, format din cte o pereche de
peptide identice, a (75 kDa) i b (80 kDa). Centrul activ e localizat n lanurile a. F.XIII,
se formeaz n hepatocite; n plasm se gsete sub form inactiv, ntr-o concentraie
de 0,02 g/L. FSF inactiv se fixeaz pe suprafaa coloanelor de fibrin i se activeaz pe
loc prin proteoliz de ctre trombin, n prezena ionilor de Ca2+, prin scindarea unei
legturi ntre arginin i glicin n lanurile a, n urma creia se elibereaz de la poriunea
N-terminal un peptid blocant, cu masa molecular de 4 kDa. F.XITT activat se consum
rapid astfel nct n unele cazuri de tromboze venoase extinse cantitatea lui poate s
scad considerabil. FSF acioneaz n dou faze, n prezena ionilor de calciu. La deficiena
enzimei, la bolnavi apare o hemofilie (sngerare). Care-i cauza diferitelor solubiliti ale
fibrinogenului i monomerului de fibrin?
E stabilit c toate fibrino-peptidele detaate au sarcin electric negativ (acid glutamic
i aspartic, tirozin-O-sulfat), care provoac COO
respingerea reciproc a moleculelor de | / \
fibrinogen. Monomerii de fibrin eliberai au o O SO ^ f 7 CH2 CH
suprafaa cu proprieti electrice deosebite i I! \ __/ !+

capacitate de agregare. 0 Tirozin-O-sulfat NHs

11 N H 2 + H 2N 2 2 2~ 2~ Fibrina
F ib rin 2 2
Glutaminil n _ ., Lizil
V Transamidaza
Fibrin CH2 CH2 C N CH2 CH2 CH2 CH2 Fibrin
H
Microscopia electronic i difracia ra- ^ ___________ 4 6 0
zelor X au demonstrat c fibrin posed o
structur periodic, cu lungimea segmentului
F ig u r a 8 .6 . R ep rezen ta rea sc h em a tic a
repetat de 230 , pe cnd lungimea fibri- moleculei de fibrinogen
nogenului e de 460. Monomerul fibrinei
formeaz fascicule paralele, striate transver
sal, cu o periodicitate medie de 230 (fig.8.6, 1^30^ Monomerul de fibrin
8.7). Concentraia fibrinogenului plasmatic e

ntre 200-400 mg% (2-4 g/L).
Factorul I I - protrombina - proendo-
peptidaz, o glicoprotein cu mobilitatea a 2-
globin, CU O mas molecular aproximativ F igu ra 8.7. Asamblarea monomerilor defibrin
egal cu 63 kDa i punct izoelectric aproape
de 5. Se sintetizeaz n ficat i procesul necesit vitamina K, favoriznd realizarea carb-
oxilrii de ctre un sistem de enzime dependente de vitamina K. Procesului de carb-
oxilare i sunt supuse primele 10 resturi de
acid glutamic de la captul N-terminal al
P olip ep tid
protrom binei. Fiind transform ai n y- P recu rsori
\ H ai factorilor
carboxiglutamat, aceste resturi de aminoacizi N C H U, VII, IX, X
sunt capabile s fixeze ionii de Ca++(fig.8.8). 9 & R estu ri
Antagonitii vitaminei -dicumarolul i g lu ta m il
derivaii lui, la fel ca i varfarina (otrav So-
pentru obolani), provoac hemoragii i sunt
substane anticoagulante.
Legnd Ca2+, protrombina se ancoreaz ,
cu fosfolipidele membranare ale trombocite " \
lor acumulate n regiunea afectat. Acest V itam in a
fragment se detaeaz, eliminnd trombin, Varfarina

ca rezultat al scindrii proteolitice a legturii
arginin-treonin de la capatul N-terminal,
H
apoi a legturii argimn-leucin. Masa mole NCH II, VII, IX, X
cular a trombinei e de 33,7 kDa. Trombin C H , 6 )
" *
liber e capabil s activeze fibrinogenul plas / \ \ C arboxiglutam il
COO- C O O ") (G la) resturi
mei (fig.8.9).
Etapa de activare a F.X (Stuart-Prower)
reprezint contopirea mecanismelor de
coagulare a sngelui. Ambele mecanisme,
n consecin, provoac apariia factori
lor proteolitici, ce activeaza F.X, cu for
marea trombinei.
Factorul F.V, F.VI - proaccelerina, OH OH
Dicumarol
accelerina este o protein macro-
m olecular (350 kD a) produs de
macrofage, prezent n cantiti mici
(0,01 g/L) n form inactiv n plasm. Din
cauza labilitii se degradeaz rapid i nu
mai poate fi pus n eviden nici n ser, nici
n plasma veche. Ea se consum n decursul
coagulrii. Nu are proprieti enzimatice,
dar este un component al sistemului de ac
tivare a protrombinei. Lipsa congenital
- Carboxiglutamil
rar a F.V se transmite autozomal recesiv. localizat in aceasta
Factorul VII - proconvertina - e o Segmentul regiune
globulin cu masa molecular 15-25 kDa, sandat
are o concentraie de 10-15 mg/L, se sin
tetizeaz n ficat, cu participarea vitaminei 274
\ Locusunle unde
K. 323 / are loc sdncfarea
Factorul VIII - globulin antihemo- Trombin
litic, GAH - este o -macroglobulin, cu
masa molecular de 2 milioane Da, pre 582
zent n plasm n concentraie de 0,005 g/
L i avnd timpul de njumtire de o ju F igura 8.9. Structura protrombinei a i catene
mtate de zi. Se formeaz n hepatocite. n trombin, unite prin legtur disulfidic
Este un factor labil i se consum n decur
sul coagulrii. Este alctuit din trei componente distincte: F.VIIIcoa reprezint cofactorul
activrii F.X n prezena accelerinei (F.VI); F.VIIIagn, purttorul determinanilor antige-
nici proprii; F.VIIIvW (von Willebrand), cofactorul manifestrii funciilor hemostatice
plachetare. Lipsa ereditar a acestui component duce la manifestarea angiohemofiliei
(maladia von Willebrand).
F actorulX(Stuart-Prower) este o protein cu mas molecular relativ redus (56
kDa) produs n ficat i prezent n plasm ntr-o concentraie de 1,003 g/L. Este o
substan stabil care nu se consum n cursul coagulrii, format din dou lanuri peptidice
(unul greu i cellalt uor) cuplate disulfidic ntre ele. F.IXa elibereaz, prin proteoliz,
din lanul greu al moleculei F.X un fragment peptidic mic. Prin aceasta se descoper
centrul activ situat n partea C-terminal a moleculei, prin care enzima devine i ea activ
(F.Xa). Este de remarcat c factorul Stuart-Prower poate fi activat nu numai prin
mecanismul fiziologic sus - nominalizat ci, n condiii patologice, i de ctre alte
serinproteaze eliberate i activate n cursul diferitelor reacii inflamatorii.
Proprietile structurale i funcionale ale factorilor sistemului de contact
n plasma sanguin sunt prezeni doi kininogeni: macro (HMWK) - i microkininogeni
(LMWK). Sinteza lor este codificat de gena localizat n cromozomul 3. Gena respectiv
conine 11 exoni i 9 din ei formeaz trei exoni triplei, fiecare din ei avnd originea n
paternul genei cistationinei. Exonul 10 conine o secven comun pentru ambii kininogeni
(1 Oa) i o secven unic C-terminal pentru HMWK (1 Ob). Exonul 11 codific secvena
unic C-terminal a kininogenului micromolecular (LMWK).
Splaisingul alternativ al transcripiei primare a genei kininogenului formeaz dou mRNA
diferite, specifice pentru fiecare form. Kininogenii sunt glicoproteine polifimcionale,
moleculele crora sunt prezentate printr-un lan polipeptidic, sintetizate n hepatocite,
apoi glicozilate nainte de a fi secretate.
Kininogenul macromolecular (factorul Fitzgerald, HMWK). Molecula de HMWK
conine 626 resturi aminoacidice cu masa molecular de 120 kDa i pi egal cu 4,3.
Concentraia plasmatic este de 65-130 pg/mL.
HMWK poate reversibil s se fixeze de trombocite, neutrofile, celule endoteliale,
procesul necesitnd ioni de Zn2+. Fixarea se realizeaz prin glicoproteine identice cu
receptorii ce fixeaz componenta 1q a complementului. La fixarea cu celulele endoteliale
se majoreaz viteza de eliminare a bradikininei, care stimuleaz generarea de NO i a
prostaciclinei, n consecin, cu efect antitrombotic i vasodilatator. Domeniul terminal al
HMWK posed centre de fixare a prekalicreinei i a factorului XI al coagulrii.
HMWK inhib activitatea proteinazelor cisteinice, prentmpin degradarea proteinelor
plasmatice la lezarea esuturilor.
Kininogenul cu mas molecular redus de 80 kDa (LMWK, factorul Flaujeac)
reprezint restul rmas n urma scindrii proteolitice a HMWK. Are o concentraie
de 0,05 g/L n plasm i timpul de njumtire de 30 zile. Secvena aminoacidic a
bradikininei este prezent i n molecula de LMWK, ca urmare, acest peptid purttor de
semnale poate fi eliberat i din aceast protein prin proteoliz.
Prekalicreina (PKAL, factorul Fletcher) i kalicreina (KAL) plasmei sanguine.
Prekalicreina este o glicoprotein ce conine 619 aminoacizi, avnd o concentraie
plasmatic de 295-580nmol (35-50 pg/mL). Se sintetizeaz n hepatocite i gena
respectiv e compus din 15 exoni i 14 introni, localizat n partea distal a
cromozomului 4. Se activeaz PKAL la liza legturii peptidice Arg 371 de formele
active (a i ) ale factorului XII, cu formarea lanurilor uor i greu ale kalicreinei.
Lanul polipeptidic greu (4 domenii repetate, omoloage F.XI) particip la fixarea HMWK,
F.XII i a neutrofilelor. Kalicreina format posed un spectru larg de funcii biologice;
hidroliznd dou legturi peptidice n HMWK duce la generarea bradikininei.
Factorul XII {factorul Hageman) este sintetizat de hepatocite ca o glicoprotein cu
masa molecular de 78 kDa, ce conine 596 resturi de aminoacizi i 7% glucide. mRNA
respectiv are o lungime de 2,8 kilobaze. Activarea are loc sub aciunea kalicreinei
amplificat de prezena HMWK. Consecutiv, se formeaz dou forme active a i
legate prin legtur disulfidic. Lanul greu e responsabil de fixarea proteinei de suprafaa
anionic, la activarea prin contact. Forma uoar () este un activator efectiv al PKAL,
iar a F.XIIa - al F.XI.
FactorulXI (, factorul Rosenthal) este sintetizat n ficat, conine 5% glucide,
are o mas molecular de 143 kDa i este secretat n plasm n form de zimogen n
concentraie de 30 nmol. Circul acest factor n complex cu HMWK. Factorul PTA este
o proteinaz serinic deosebit - molecula conine lanuri polipeptidice identice fixate
prin legturi disulfidice i dou centre active la un mol de enzim. Activarea factorului
XI are loc sub influena factorului Xlla, n prezena HMWK.
Proteinele sistemului de contact nu sunt elemente fundamentale ale procesului de
hemostaz, dar joac un rol auxiliar n generarea trombinei.
M ecanism ul coagulrii. Calea extrinsec e de durat scurt - de secunde. Fac
torul de declanare l constituie sucul celular eliminat la lezarea esutului - factor tisular
de natur lipoproteic - fosfolipid (tromboplastin tisular). Calea intrinsec e de
durat ceva mai lung - de minute, intervenind mai muli factori sanguini.
Cile extrinsec i intrinsec sunt determinate de sursa de fosfolipide. Ambele ci se
finalizeaz cu formarea tromboplastinei active (f. Xa), ca rezultat al metamorfozei vscoase
a plachetelor i eliberarea factorilor plachetari. Procesul se realizeaz n 2 faze - prima
reversibil, iar cea de-a 11-a este ireversibil.
n decursul primeifaze a acivrii plachetare se elibereaz coninutul granulelor dense.
Procesul este reversibil n sensul c n lipsa unei amplificri poate s se sting. n
mecanismul intrinsec cei mai puternici activatori ai metamorfozei vscoase sunt tromboxanii,
graie activrii primare a fosfolipazei A. n cel extrinsec are loc activarea receptorilor
membranari fie printr-un contact cu fibrele de colagen, fie cu mediatorii de tipul:
catecolaminelor, endotoxinelor, ADP, proteazelor. Transmiterea intracelular a semnalului
recepionat are loc prin intermediul mesagerilor secunzi, ca AMPc, DAG, IP3, NO sau
prin intermediul proteinkinazelor (fig.8.10).
Faza a doua a activrii este caracterizat prin eliminarea coninutului de Ca"" al
granulelor i n prezena adezinelor (fibrinogen, fibrinonectin) plachetele prezentnd
metamorfoza vscoas, ader ntre ele cu formarea cheagului alb - o stopare a leziunii
microvasculare. Serotonina eliberat din plachetele agregate, prin efectele ei
vasoconstrictoare, reduce fluxul sanguin spre zona lezat.
Mecanismul complex al hemostazei funcioneaz n organism ca un tot unitar, dar din
punct de vedere sistemic coagularea sngelui se mparte n 5 faze succesive:
prefaza: formarea tromboplastinei plasmatice prin orice cale;
faza I: transformarea protrombinei n trombin activ;
faza II: transformarea fibrinogenului solubil n fibrin insolubil - coagularea;
faza : fibrinoliza (uneori i fibrinogenoliza);
faza IV: retracia cheagului.
Interaciunea dintre factorii sistemului de coagulare a sngelui se prezint n fonn de
trei complexe fermento-cofactoriale ce asigur coagularea n condiii fiziologice (fig.8.11).
Primul co m p lex-W Ha + FT (factor tisular) - iniiaz activarea factorilor IX i X.
Complexul nativ VII-FT este fiziologic inert i devine activ la aciunea factorilor IXa i
Xa, n cantiti minime ce scindeaz o legtur peptidic n molecula factorului VII. Fixa
rea factorului VII de cofactorul (FT) favorizeaz activarea efectiv a substraturilor
respective.
semnalizatoare
A ctom ^ zin a
Modificri confonnaionale
Figura 8.10. Activarea plachetelor (schematic). Mediul extern, membrana plasmatic i partea intern
a unei plachete sunt reprezentate de sus n jos. Trombin i colagenul sunt cei mai importani activatori ai
plachetelor. ADP este considerat un agonist slab; el cauzeaz agregarea, dar nu eliberarea granulelor (GP
glicoprotein, R '-R '- diveri receptori, AC-adenilatciclaza, PL - fosfolipide, P L A - fosfolipaza A2; PLC
- fosfolipaza C, PIP2 - fosfatidilinozitol-4,5-bifosfat, cAM P - AMPciclic, PKC - proteinkinaza C, TxA}
- tromboxan, IP3 - inozitol-1,4,5 - trifosfat, DAG -1,2 diacilglicerol, proteinele G implicate nu sunt
artate).
Complexul colaboreaz la calea extrinsec, findu-i caracteristic posibilitatea de a

se inhiba numai dup iniierea procesului coagulrii.
A l doilea complex fermento-cofactorial ( IXa - V illa - FL membranare) activeaz
factorul X. Activarea factorului IXa (calea intrinsec) este cauzat de factorul Xla -
rezultat al interaciunii factorilor participani la activarea prin contact (, prekalicreina,
kalicreina, kininogenul cu mas molecular mare).
A l treilea complex fermento-cofactorial (Xa -Va - fosfolipidele membranare) trans
form infinit protrombina n trombin.
Ambele ci sunt convertite la aceast etap. Antitrombina i proteina sunt inhibi
tori efectivi ai complexelor 2 i 3, pn la formarea lor. Inhibitori sunt absolut necesari n
procesul reglrii sistemului de coagulare a sngelui, pe cnd deficitul lor are consecine
letale. Antitrombina inhib factorii Xa i IXa. Proteina activ, cu participarea protei
nei S (cofactor), inhib factorii Va i Villa activai de trombin.
F igu ra 8.11. Schematic, e redat procesul de coagulare a sngelui
Ce reprezint factorul IX (Christmas-Eve factor)?

O caten glicoproteic cu masa molecular egal cu 58,7 kDa i coninnd 17% de
glucide. E vdit omologia dintre consecutivitatea aminoacidic la capetele N ale facto
rilor IX, II, X la om. Concentraia n plasm constituie 3 mg/L. Azi e bine cunoscut i
structura domenic a F.IX. El, ca i factorii , VII, X, proteinele i S, formeaz grupa
proteinelor dependente de vitamina K. Captul N terminal, numit Gla-domen, conine
resturi de y-carboxiglutamat. Proteina se sintetizeaz n ficat i pn la secreie este
modificat posttranslaional - are loc -hidroxilarea Asp, de rnd cu cele 12-y-carboxi-
lri ale acidului glutamic, glicozilarea n ambele domenii (N i terminale).
Ataarea ionilor de Ca2+la domenul Gla modific conformaia factorului, devenind
biologic activ. Alte locusuri sunt necesare pentru interaciunea cu suprafeele celulare.
Domenul terminal conine o triad de aminoacizi ai centrului activ, interacionnd cu
F.VIII.
Sunt studiate mecanismele de activare a F.IX de ctre F.XIa la nivel molecular: primar,
se scindeaz legtura peptidic Arg-Ala interioar, cu formarea unui produs intermediar
neactiv cu aceeai mas molecular. La faza urmtoare are loc scindarea legturii Arg-
Val, cu eliminarea unui peptid compus din 35 aminoacizi, cu masa molecular egal cu
9000 Da de la catena grea, acesta coninnd 50% de glucide ale moleculei primare, cu
formarea factorului IXa. El conine o caten uoar (1 -145 aminoacizi cu masa molecular
del 6600 Da), legat prin leg. disulfidic cu catena grea (145-415 aminoacizi i o mas
molecular egal cu 27000 Da). Caracteristic este necesitatea de ioni de Ca2+, care
sunt fixai numai de ctre F.XI. Factorul IXa rmne fixat de centrul activ al F.XIa, ce
prentmpin activarea ulterioar. Fosfolipidele (FL) concureaz cu F.XIa pentru F.IXa,
ambele psednd capacitatea de a lega fosfolipide. Astfel de mecanism previne fonnarea
i eliberarea cantitilor considerabile de F.IXa, pn Ia aplicarea necesitii de activare
continu a sistemului coagulant.
Capacitatea ferment-cofactorului complexului VII-FT de a activa F.IX s-a constatat
recent, ceea ce explic att deficitul F.XIa, ct i al celor ce l activeaz (activarea prin
contact), de a nu deregla procesul de coagulare. Mecanismul activrii exercitat de ctre
complexul fermentativ este similar cu al F.XIa i necesit ioni de Ca2+.
Investigaiile au confirmat c FT (al lipidelor) n diverse concentraii regleaz activitatea
F.IX i X n mod diferit. Preponderent, acest complex (Vlla-FT) activeaz substratul
IX, dar nu i X. n calea extrinsec a coagulrii, la formarea formei intermediare a F.IX,
activarea e realizat de componena Xa-FT-Ca2+, care se produce accelerat i numai
faza final de formare a IXa determinat de complexul VIla-FT-Ca2+.
Procesul este cooperativ. Apoi IXa, n complex cu Villa, FL, Ca2+, activeaz factorul
X - reacia de baz n activarea F.X. Are loc scindarea legturii Arg-Ile (45-51) la
captul N-terminal n catena grea, eliminndu-se un peptid cu masa molecular de
10500 Da. Procesul se produce n prezena ionilor de Ca2++ FL + V illa (cofactor).
Antitrombina i heparina favorizeaz inactivarea (inhibiia) F.IXa. Insuficiena ereditar
a F.IX provoac maladia Cristmas (hemofdia ), care apare la concentraia de 25%
din norm. Exist i molecule defecte, aprute la insuficiena ficatului, unde se sintezeaz
acest factor. Procesul de activare a F.X necesit i factorul plachetar3-un fosfolipid.
Sunt atestai 9 factori plachetari:
Fpl - particip la conversia protrombinei n trombin;
Fp2 - conversia fibrinogenului n fibrin;
Fp3 - fosfolipid implicat n formarea F.X;
Fp4 - antiheparin;
Fp5 - serotonin;
Fp6 - fibrinogen plachetar;
Fp7 - trombostenin;
Fp8 - antifibrinolizin;
Fp9 - factor stabilizant al fibrinei.
Factorul X IV -factorul de antisngerare, anti-Wilebrand sau Nilsson, se remarc
prin funcie, i nu prin natura sa chimic.
Dup formarea fibrinei insolubile, urmeaz sinereza cheagului prin eliminarea apei
din ochiurile gelului, cu micorarea spaiului dintre fibrile. Retract ia se produce cu
conlucrarea trombocitelor funcional normale, ce acioneaz prin trombostenin (Fp7).
ATP trombocitelor asigur contracia Fp7, care antreneaz micorarea n sens
longitudinal al fibrelor de fibrin, nregistrnd pasiv atare rezultat.
Fibrinoliza este un proces ncontinuu, la fel ca i coagularea, n cadrul creia
permanent se formeaz cantiti nensemnate de fibrin. S-a stabilit c una din globulinele
plasmei-plasminogenul (profibrinolizina), la aciunea unor factori tisulari sau sanguini,
de altfel ca i la influena urokinazei urinei sau a streptokinazei microorganismelor, se
reproducem forma sa activ-plasm ina (fibrinolizina). Se include m ecanism ul-
cascad analog cu cile intrin- i extrinsec ale sistemului de coagulare.
Plasminogenul este o serinproteaz format n hepatocite, prezent sub form inactiv
n plasm. Este alctuit dintr-un singur lan polipeptidic cu masa molecular de 91 kDa.
Spre captul N-terminal format de lizin, lanul peptidic formeaz cinci bucle, fiecare cu
o afinitate deosebit de a fixa aminoacizi - lizina i arginina. Centrul activ e situat n
captul C-terminal. Plasminogenul se activeaz prin proteoliz-ruperea unei singure
legturi amidice ntre arginin i valin. n condiii fiziologice, activarea se desfoar
prin mecanismul intrinsec. Urokinaza este o serinproteaz, sintetizat n rinichi, cu masa
molecular ntre 33 i 54 kDa. Cel mai puternic activator al plasminogenului este factorul
tisular (ATPG). Ultimul este o serinproteaz, cu masa molecular 50 kDa, care se
formeaz n celulele endoteliale i SMM. Pot transforma plasminogenul n plasmn activ
i o serie de serinproteaze nespecifice de origine celular ca: F.XIa, F.Xa, tripsina, elastaza
etc.
Activarea plasminei prin mecanismul extrinsec se datoreaz factorilor exogeni ca
streptokinaza A. Ea se fixeaz de plasminogen, formnd un complex echimolar. n form
fixat, la o modificare conformaional, plasminogenul se activeaz parial. Acest complex
cu activitate proteolitic redus transform iniial cteva molecule de plasminogen, care
prin autocataliz activeaz progresiv restul moleculelor. Deoarece se obine uor,
streptokinaza A se administreaz cu succes n tratamentul fibrinolitic al trombozelor
coronariene i ale altor vase. Dezavantajul metodei const n imunogenocitatea puternic
a substanei, cu consecine negative n cazul administrrii repetate.
Mecanismul de aciune al plasminei este determinat de caracterul ei endoproteazic cu
spectru larg, preferenial scindnd legturile peptidice ale argininei. n aa mod, plasmina
activeaz prin proteoliz i o serie de alte preproteaze (F.XII, F.XI, protrombina), in
vitro descompune cazeina i gelatina. Ca substrat al plasminei servete fibrin. n cazul
n care este n exces, plasmina descompune att fibrinogenul nativ, ct i o serie de factori
i cofactori din plasm. n urma activrii sale, plasmina se fixeaz pe suprafaa fibrelor de
fibrin din cheag, din care elibereaz prin proteoliz o serie de produi de degradare a
fibrinei. Aceti produi sunt totdeauna dimeri, fiindc provin din peptidele nvecinate (a,
i y). Plasmina atac i fibrinogenul. La nceputul activrii sale, plasmina elibereaz
prin proteoliz cte un fragment (A, B, C) din toate cele trei peptide (a , i y).
Fibrinogenul rmas are o mas molecular de 240 kDa i se numete fragmentul X.
Acesta, mai departe, se scindeaz n dou fragmente noi: fragmentul D (100 kDa) i
fragmentul Y (100 kDa). Ultimul scindeaz rapid n nc dou fragmente: fragmentul D i
fragmentul E. n decursul fazei terminale a fibrinogenolizei se produc numai fragmentele
D i E. FDP (fibrinogen degradation products) sunt totdeauna monomeri care, n urma
activitii transglutamidazice a factorului de stabilizare a fibrinei, fonneaz exclusiv dimeri.
Faza I:
coaguleaz cu FIBRINOGEN Fragmentul X
trombin 340 kD a
340 \ \ < 240-265 kDa
Peptide
Faza 11:
Nu coaguleaz Fragmentul X Fragmentul Y Fragmentul D
cu trombin 240 kDa 1 550 kDa 83 kDa
Peptide Fragmentul D
Fragmentul E
83 kDa
50 kDa
Peptide * produsul E
53 kD a
Faza III:
Rezistente Produsul D Produsul D
la plasmin 83 kDa 83 kDa
i alte peptide, inclusiv , i
M ecanismul de aciune a plasmiiiei
Plasmina transform pro-metaloproteinazele matriciale n forma activ ce va favoriza

degradarea matrixului extracelular.
Efectul proteolitic al plasm inei este stopat de a-antitripsina, a 2-macroglobulina
i de antiplasmin - album ina plasmei cu efect antiproteolitic. C a preparate medicinale
ce rein fibrinoliza se utilizeaz inhibitori ai proteazei de tipul acidului aminocaproic,
trasilolului (acidulp-aminometilbenzoic), AMCHA (acidul aminometilciclohexanic).
R eglarea hemostazei
Se produce foarte fin, exact, deoarece formarea cheagului se realizeaz rapid i numai
n regiunea esutului lezat. M ulte problem e nu sunt soluionate, s zicem : de ce
reglarea hem ostazei se efectueaz n mai m ulte etape, cu participarea a 2 m ecanism e?
Cum sunt legate ntre ele? De ce are loc num ai n regiunea afectat?
U n rol prim ordial l jo ac labilitatea factorilor activi ai coagulrii, perioada lor de
njumtire mic, diluia n snge, neutralizarea n ficat, scindarea de proteaze, inactivarea
lor de ctre inhibitori etc.
Viteza procesului de coagulare e mai lent la:
1) temperaturi joase, la utilizarea ustensilelor cu suprafee de silicon;
2) utilizarea substanelor ce fixeaz C a4+- oxalaiilor de N a, K, N H 4, citrailor;
com puilor chelai -trilo n (EDTA).
Protrombina, n urm a activitii sale, poate declana coagularea ntregului volum
plasmatic circulant. O asem enea coagulare intravascular diseminat sau difuz, chiar i
n um ia unor leziuni vasculare serioase se m anifest deosebit de rar datorit existenei i
funcionrii unor m ecanism e de reglare com plexe care, prin interaciunile lor, asigur
m eninerea echilibrului efectelor pro- i anticoagulante. Datorit faptului c trom bin
este enzim a-cheie a coagulrii plasm atice, m ajoritatea efectelor anticoagulante sunt
ndreptate m potriva ei i manifestate de ctre diferite antitrombme (AT).
Trombomodulina (TM.) prezint un glicoproteid ce se expreseaz pe suprafaa
celulelor endoteliale, formnd complex cu trombin (1:1). n acest complex trombin i
modific specificitatea fa de unele substraturi proteice - crete de 1000 de ori afinitatea
fa de proteina i, activnd-o, o transform ntr-un anticoagulant natural.
Antitrombina 1 reprezint cheagul de fibrin. Trombin activ, fixat pe suprafaa
monomerilor de fibrin, este situat n interiorul cheagului, astfel blocndu-i activitatea.
Ins, n urma unei fibrinolize rapide pot fi eliberate cantiti nsemnate de trombin activ.
Antitrombina II nseamn activitatea global a antiproteazelor din plasm, nespecifice
trombinei, aa precum sunt a,-antitripsina, a 2-macroglobilina etc. Activitatea lor
antitrombinic este, ns, limitat.
Antitrombina III este unicul inhibitor specific al trombinei. Reprezint o
glicoprotein format dintr-un singur peptid, cu masa molecular de 58 kDa i cantiti
normale n plasma sanguin de 0,1-0,12 g/L (2,5 |imol/L). Ea formeaz cantiti
echimolare cu trombin, blocndu-i activitatea. Dar pentru aceasta mai are nevoie de
prezena unui cofactor numit heparin. n prezena heparinei, molecula de AT III este
supus unor modificri conformaionale, astfel mrindu-i afinitatea fa de trombin.
Respectiv, activitatea ei crete aproximativ de o mie de ori. AT III este activ i n raport
cu alte serinproteaze FVIIa, nu numai cu F.Xa. Domeniul funcional C-terminal
interacioneaz cu proteinazele, iar cel N-terminal - cu dou site-uri de fixare a heparinei
i a heparan sulfatului proteoglicanilor de pe suprafaa celulelor endoteliale. n decursul
coagulrii, AT III se consum. De aceea, din cauza lipsei AT III administrarea heparinei
n scop terapeutic poate s nu aib efectul dorit. n asemenea cazuri, paralel cu heparina
este recomandabil i administrarea plasmei.
Heparin Cofactor II (HP II) este o glicoprotein cu masa molecular de 65 kDa.
Concetraia nonnal n plasma sanguin este de 90 mg/L (1,2 p,mol/L). La fel ca AT III,
HP II inhib trombin, dar nu i F.Xa. n cazurile rare ale lipsei congenitale a HP II apare
o predispoziie uoar spre tromboze, ceea ce ar indica rolul secundar al acestui factor
n reglarea hemostazei.
Hirudina din saliva lipitoarelor este un peptid cu mas molecular de 6 kDa, care
inhib direct trombin, fr prezena unui cofactor.
Antitrombina IV este reprezentat de cele dou peptide (pretrombinele I i II)
eliberate n cursul activitii protrombinei. Aceste peptide, fixndu-se pe suprafaa
trombinei, i blocheaz centrul activ. Pretrombina II are un efect inhibitor i asupra
polimerizrii monomerilor de fibrin.
Antitrombina V reprezint suma efectelor complexe antitrombice ale unor
imunoglobuline libere sau cuprinse n particulele complexelor imune circulante care, fixndu-
se de trombin, pot bloca, parial sau total, miezul ei activ.
Antitrombina VI cuprinde produii de degradare (FDP: fragmentele D, X, Y, E) i
combinaiile acestora, eliberate n cursul degradrii fibrinogenului din plasm. Accste
fragmente blocheaz, pe de o parte, centrul activ al trombinei, pe de alt parte, inhib
formarea i polimerizarea monomerilor de fibrin. Fragmentele X i pstreaz
coagulabilitatea, care poate fi declanat prin adugarea in vitro, la plasm, a ctanolului
sau a sulfatului de protamin. Fenomenul se numeteparacoagidare i este folosit ca
test de laborator n explorarea strilor de coagulare intravascular diseminat.
Proteina este o serinproteaz globulinic de origine hepatic, dependent de
vit.K, care n prezena cofactorului proteina S i a fosfolipidelor descompune proteolitic
cofactorii activi V, VI, i VIII. Este activat de excesul de trombin i inactivat de o alt
proteaz glicoproteic numit inhibitor APC. Cele redate sunt ilustrate n schema de
mai jos.
Proteina S, dependent de vit.K, fiind un complex cu APC majoreaz de 10 ori

afinitatea ultimei la fosfolipidele celulelor endoteliale i ale trombocitelor. Interaciunea
accelereaz peste 20 ori capacitatea complexului PC-PS de a inactiva F.Va.
n serul sanguin, aproximativ 40% de protein S este n stare liber, cealalt c o t -
n complex cu reglatorul proteic al cii clasice a complementului C4b-BP. Numai fracia
liber posed funcie de cofactor. Ca i proteina C, este un cofactor stabil care se consum
n decursul coagulrii.
Efectele analogice sunt caracteristice:
3) derivailor cumarolului - inhibitori competitivi ai vitaminei K;
4) veninul erpilor posed efect antitromboplastinic;
5)tabaninei- substan antitrombinic, coninut n saliva unor insecte ce sug snge.
Concentraia proteinelor hemostaziei in vivo oscileaz n limite mari: de la nanomoli
( FVIIa, VIII) lam icrom oli( F I , II)(vezitabelul.8.3),conformDiaSysDiagnostic
Systems, 2005.
Proteina Concentraia medie n plasm Masa molecular
n Da
1. Fibrinogen - 1,8 -3,6 g/L 340,000

2. Protrombina (II) 1,4 pmol/L 100-150 mg/L 72,000
3. Factorul tisular(III) - 110-180 ng/L 44,000
4. Factorul V 30 nmol/L 0,01 g/L 330,000
5. Factorul VII 10 nmol/L 0,5 mg/L 50,000
6. Factorul Vila - 0,005 jag/L 50,000
7. Factorul VIII 0,3 nmol/L 100 pg/L 285,000
8. Factorul IX 90 nmol/L 5,1 mg/L 57,000
9. Factorul X 180 nmol/L 10 mg/L 58,500
10 Factorul XI 30 nmol/L 4,8 mg/L 160,000
11 Factorul XIII 30 nmol/L 10 mg/L 320,000
12 Proteina 65 nmol/L 3,7 mg/L 62,000
13 Proteina S 140 nmol/L 10 mg/L 69,000
14. Trombomodulina - 2,7-5,4 pg/L 100,000
15 Antitrombina III 2,5 pmol/L 200 mg/L 58,000
16. IFT (inhibitorul - 75-120 pg/L 40,000
factorului tisular)
Majoritatea factorilor de coagulare sunt serinproteaze, Ia fel ca i cele eliberate din

micro- i macrofage n procesul inflamaii lor. Aceste serinproteaze se pun n libertate
sau se gsesc n lichidele biologice, inclusiv plasm, sub forma proenzimelor inactive,
care se activeaz tot prin proteoliz de ctre alte serinproteaze deja active. Ca urmare,
activarea prin proteoliz sau prin contact a unui fel de serinproteaz, poate s duc
practic la activarea tuturor proenzimelor de acest gen. Ansamblul acestor enzime (proteine
scindatoare de proteine) formeaz n organism un sistem proteolitic autoamplificator,
cuprinznd numeroi reprezentani ai enzimelor lizozomale, leucocitare i plachetare, ai
factorilor de coagulare, de properdin i de complement. Activarea individual i
global a acestora este ns controlat n spaiu i timp de ctre antiproteazele din plasm
i din lichidul interstiial. Ca urmare, gradul de manifestare a unei coagulopatii, respectiv
gravitatea i extinderea unei inflamaii, sunt determinate de raportul momentan ntre
activitatea serinproteazelor i a antiproteazelor.
BIOCHIM IA ESUTULUI CONJUNCTIV
esutul conjunctiv este format din matricea extracelular i anumite tipuri de celule.
Matricea extracelular (ME) ndeplinete funcii structurale i de suport. Este cel mai
rspndit esut al organismelor vii. Dintre cele mai cunoscute sunt: ligamentele, fasciile,
tendoanele, matricea organic a oaselor, dinilor, pielii. Este caracteristic i organelor
moi (ficat, rinichi etc). nconjoar vasele sanguine, leag ntre ele celulele esuturilor.
Umple cavitatea ntre celule cu substana de baz cu rol organizatoric n esuturile ce
se dezvolt. Exist numeroase legturi structurale i funcionale permanente ntre matrice
i celulele respective. O matrice extracelular ordonat influeneaz organizarea i func
ionarea celulelor pe care le conine.
Matricea extracelular este constituit din proteine fibrilare incluse ntr-un gel
polizaharidic hidratat, care interacioneaz i se asambleaz n structuri tridimensionale.
Cele mai importante proteine sunt colagenul i elastina. Avnd o cot de
1/3 din toate proteinele vertebratelor, colagenul, cantitativ, predomin fa de celelalte
proteine.
Colagenul. Se prezint prin fibre cu structur transversal haurat, acestea fiind
dispuse diferit n dependen de funcia biologic a esutului respectiv.
n tendoane exist fascicule paralele legate transversal; n piele formeaz o reea de
densitate neregulat; n corneea ochiului fibrele sunt dispuse n cruce.
Fibrele de colagen rezist la o traciune de 10000 ori mai mare dect greutatea lor;
sunt cu mult mai rezistente dect o srm de oel cu seciune transversal similar. Dar
cum n-ar fi dispuse fibrele de colagen n esutul conjunctiv, la microscopia electronic
ntotdeauna se profileaz principiul comun - haurarea transversal-repetat.
Dintre proprietile deosebite se evideniaz capacitatea de a forma fibrile insolubile,
cu o elasticitate mare. Structura fibrelor de colagen este n dependen de tipul esu
tului i corespunde destinaiei sale. Totodat, colagenul e unicul constituent al oiganismelor
superioare, care manifest rezisten la traciune.
Colagen din grecete nseamn a forma clei. Insolubilitatea colagenului pe parcur
sul multor ani a fost o piedic n studiul proprietilor chimice. S-a observat c colagenul
din esuturile animalelor tinere poate fi extras n form solubil, cauza fiind prezena n el
a unui numr relativ mic de legturi transversale. Unitatea structural de baz este
tropocolagenul constituit din trei lanuri polipeptidice de aceeai lungime (fig. 8.12).
Componena catenelor e dependent de tipul
de colagen (probabil, exist nu mai puin de 10
forme moleculare de colagen).
Cele mai rspndite sunt 4 tipuri de colagen n
funcie de tipul lanului a constituent:
Colagen tip 1 - se afl n cantiti mai mari. n
organism e constituit din 2 lanuri de aceeai
structur [oc (I)]2 i al treilea lan [a 2(I)]. Este blgura 82, TriPlu-a-e l l c e colagen
localizat n piele, tendoane, oase, comee, organele
interne. Celelalte tipuri au trei lanuri identice:
Colagen tip I I - [,()]3, localizat n cartilaj, discuri
intervertebrale, corpul vitros al ochiului;
HN- 2
Colagen tip I I I - [a, (III)]3- distribuit n pielea fetal, .
sistemul cardiovascular;
I
CH
J Pralina
Colagen tip IV - [ot1(IV)]3- n membrana bazal.

Se numesc a, deoarece au conformaia elicei a. De
- , a-Cctoglutarat
vreme ce secvenele de aminoacizi i hidroxilrile la
nivelul resturilor de prolil i lizil nu sunt identice n
toate lanurile polipeptidice, se constituie dou feluri de
V Vit.C
lanuri a, numite, respectiv, a , cu variantele I, II, III, /
IV i lanuri a,. Acestea sunt totui omoloage, formate 2 Succinat + 2
din circa 105 resturi de aminoacizi i avnd n multe
poziii secvene identice. HN CH2
Aadar, colagenul constituie o grup de proteine
nrudite, avnd o structur caracteristic. Dintre I J CH
aminoacizi predomin glicina (33%), alanina (11%). I
Mult mai mult dect n alte proteine se conine prolina OH Hidro xiprolina
(23%). Se mai nregistrez doi aminoacizi atipicihidr-
oxiprolina i hidroxilizina.
Succesiunea resturilor de aminoacizi se caracterizeaz printr-un grad mare de pe
riodicitate: aproape fiecare al treilea rest aminoacidic este glicin, se succed frecvent
resturile Gly-Pro-Hyp. Aceast partricularitate o deosebete de proteinele globulare,
lipsite de astfel de periodicitate. Proprieti identice posed i fibrin mtasei i elastina.
Multe resturi de prolin i lizin n colagen se hidroxileaz. Formele hidroxilate nu
se includ n componena lanurilor polipeptidice ale colagenului n procesul de sintez
proteic. Hidroxiprolina marcat nu se fixeaz n colagenul nou - sintetizat experimental
la obolani. Prolina radioactiv poate fi depistat n colagen ca i oxiprolina, ceea ce
confirm c prolina, dar nu hidroxiprolina exogen, e precursoarea resturilor de hidr-
oxiprolin n colagen.
Procesul de hidroxilare a unor
nh2
resturi de prolin este catalizat de en
I zima prolil hidroxilaz ce posed
n centrul activ atomul de Fe n
CH2OH CH2
HO
I fieroform (Fe2+). Donator al atomi
CH lor de oxigen, ce se ataeaz la C4
Gal o5H I al pralinei, este 0 2. Procesul e cuplat
CHo
cu oxidarea oc-cetoglutaratului la
CHi succinat. Prolilhidroxilaza e o dioxi-
CH2OH /
,0 genaz. Reacia necesit i vitamina
-o
\
.NH ~ graie conservrii Fe n fieroform.
OH Hidroxilizina Hidroxilarea e o reacie foarte
HO Glu specific. Sunt hidroxilate unele frag
OH mente ale lanului polipeptidic nespi-
ralizat i sunt hidrozilate numai resturile de prolin situate la captul aminic al restului de
glicin.
Lizil hidroxilaza acioneaz conform aceluiai mecanism - hidroxilarea la C5i un
numr suficient de resturi de lizin.
Structura colagenului conine i unele uniti glucidice, covalent ataate la hidroxi-
lizin. Mai frecvente sunt dizaharidele, glucoza i galactoza(glicozilgalactoza). Ataa
rea zaharidelor are loc prin activitatea consecutiv a galactozil transferazei i glucozil
transferazei. Enzimele sunt specifice fa de hidroxilizil nespiralizat. Numrul unitilor
de glucide depinde de tipul colagenului (tipul I are 6, iar IV -110).
Lanurile a din constituia oricrui tip de colagen se deosebete de lanurile a din
alte proteine, fiindc au un pas mult mai mare(9,3E). Distana dintre 2 aminoacizi
msurat de-a lungul elicei este de3,3E fa de 1,4 e n lanurile a obinuite. Aceast
dispunere spaial este determinat de numeroasele resturi de prolin aflate n lan.
Asocierea a trei lanuri a i mpletirea lor n form helicoidal rezult din formarea unei
elice triple, cu pasul de 28e. Aceast structur de baz (ca unitate) e numit tropoco-
lagen (TC) (fig.8.13).
Acesta are diametrul de 15 e i
lungimea de 3000e . n fibrele de
colagen moleculele de TC sunt aso
ciate att n lungime, ct i n lime.
Fiecare molecul este deplasat
fa de cea alturat cu un sfert din
lungimea ei i, ca rezultat, fibra ca
00 A 3000 A
pt un aspect striat, cu zone mai
F igura 8.13. Schema organizrii fibrei de colagen
clare, separate de zonele mai
ntunecate.
n lan lipsesc legturile de hidrogen. Stabilitatea elicei e determinat de forele sterice
de respingere a inelelor pirolice din resturile de prolin. Legtura de hidrogen e situat
n elicea tripl ntre grupele NH ale glicinei i a resturilor de acid din alt lan. Forele
de hidrogen acioneaz perpendicular pe lungimea osiei de tropocolagen; particip i
forele de hidrogen ntre grupele OH ale hidroxiprolinei i ale moleculelor de ap. Tro-
pocolagenul n spaiu se prezint sub form de bastona.
Care-i cauza c n poziia a III-a secvenei aminoacidice din tropocolagen e situat
glicina? Spaiul intern al triplei elice e foarte mic, ceea ce permite localizarea doar a
unui rest de glicin. Fiecrui pas al spiralei i revin 3 resturi de aminoacizi, fiecare al
treilea aparinnd glicinei. Celelalte dou resturi se posteaz pe partea extern a triplului,
unde uor se stabilizeaz inelele mari ale prolinei i hidroxiprolinei. Rolul glicinei e
determinat de spaiul mic, care nu pericliteaz asocierea lanurilor polipeptidice, fapt
datorat simplitii glicinei.
La nclzirea soluiei de tropocolagen, el i pierde calitile fizice-structura tripl
spiralizat se distruge, apare gelatina.
Pierderea acestei structuri nalt organizate are loc la limite nensemnate de
temperatur. Stabilizarea structurii e determinat de interaciuni cooperative. Tcmpera-
t | | Genele lanuriloil
mRNA este tradus n ^
DNA
P eptidele N -
e rro in a le
F ib re le legate n tre ele
prin legturi covalentc
transversale
tura de topire eacea la care structura spiralizat se pierde pe jumtate.
Acest indice e un criteriu al stabilitii acestei triple elice i a colagenului. Colagenul
diferitelor organisme difer n conformitate cu Tt. Diferenele de termostabilitate core
leaz cu coninutul prolinei i al hidroxiprolinei n colagen. Cu ct mai muli iminoacizi
exist, cu att e mai stabil spirala de colagen. Stabilitatea crete n procesul evolutiv
de la animalele homeotermice la poichilotermice. Pro- i hyp- funcioneaz n calitate
de lact, stabiliznd elicea; hidroxilarea amplific duritatea spiralei:
Exemplu: poly(Pro-Pro-Gly) (-Tt= 24C)
poly(Pro-Hyp-Gly) (-Tt = 58 C)
Dereglrile n hidroxilare este defect biochimic la scorbut. Vitamina asigur func
ionarea prolil hidroxilazei. Colagenul sintetizat fr vit.C are o temperatur de topire
mic, nu e capabil s formeze fibre normale, duce la afeciuni ale pielii, vaselor sanguine,
ce denot scorbutul.
Biosinteza colagenului
Sunt atestate 10 etape n cadrul sintezei ordonate pe secvene bine reglate: asambla
rea aminoacizilor (1), hidroxilarea (2), formarea helixului (3), glicozilarea (4), expulzarea
din celul (5), transportul la fibre n evoluie (6), transfonnarea procolagenului n colagen
(7), formarea aldehidelor (8), formarea fibrei (9), stabilirea legturilor ncruciate (10)
(fig.8.14).
Lanul polipeptidic al colagenului se sintetizeaz sub forma unui precursor -
procolagen, posednd peptide la ambele capete. Aceste peptide, fa de secvena
aminoacizilor, difer fundamental de poriunea de baz. Ele conin puin glicin, prolin
i hidroxiprolin.
Peptidele N-terminale conin puni disulfidice intracatenar, cele de la C-terminal
sunt legate prin legturi disulfidice absente n colagen. Procolagenul este sintetizat de
fibroblati, apoi secretat n spaiul intercelular al esutului conjunctiv, unde este scindat
de procolagen peptidaze (peptide terminale). Dereglrile n aceste transformri cauzea
z o afeciune generalizat a esutului conjunctiv. Bolnavii de sindromul Elers-Danlos
sunt de statur mic, pielea lor e extrem de elastic, au o superflexibilitate a articulaiilor.
Sufer i animalele mari comute - dermatosparacsis.
Formarea fibrei de colagen are loc spontan n spaiul extracelular, ca rezultat al
atarii specifice a fibrelor de tropocolagen. Microscopia electronic i analiza
roentgenostmetural indic c fibrele de colagen sunt striate la interval de 680. Mole
culele de tropocolagen (TC) nu sunt legate capt de capt, au un interval dc 400, ceea
ce comport un rol important la organizarea oaselor-locusul pentru fixarea cristale
lor de fosfat Ca2+(adic locusul de depunere a compuilor minerali ai oaselor). Primele
cristale se depun la un interval egal cu 680.
Procesul de constituire a colagenului e analog cu formarea fibrinei, unde procolagenul
e similar cu fibrinogenul, iar procolagen peptidazele au afinitate analoag trombinei.
Peptidele terminale mpiedic organizarea inoportun a fibrelor participante posibi
le la transportul procolagenului prin membrana fibroblatilor. La etapa intracelular
aceste peptide favorizeaz orientarea reciproc i fuziunea celor trei lanuri. Un rol
deosebit l au legturile disulfidice intercatenare.
Colagenul se formeaz n
lichidul extracelular, n apropierea

fibroblatilor. Ca i fibrin, este + I
stabilizat de legturi covalente NH3- - 2 -( 2)- -
ncruciate. nregistrm 2 tipuri I
de legturi: intramolecular, n NH
aceeai unitate tropocolagenic i 1 L m lo x id asa
intermolecular - ntre uniti.
+ 2
Asemenea legturi persist n co
lagen i elastin.
C onstituirea lor necesit I I
parcurgerea urmtoarelor cate - -(C H ^ -C ' ^ - ( 2)- -
I <2 I
gorii de procese extracelulare: NH NH
1) Oxidarea unor resturi de Compui aldehidici
Lys i His la aldehidele res
pective. Condensarea

2) Condensarea aldehidelor I
formate cu resturi de lizin, con- -( 2) - = -( 2)2~
ducnd la bazele Schiff corespun
ztoare.
3) Condensri (aldonic i
crotonic) ale dou resturi de
NH
NH
aldehid. NHCHCO'
4) Condensarea aldehidei de c h 2 c - -N
tip crotonic, cu resturi de histidin.
E posibil legtur covalent CO i U N
i cu resturile de lizin. Numrul I I I
i tipul de legturi ncruciate CH (CH2) 2 2 (CH2)2- -
sunt dependente de funcia i vr I
NH NH
sta esutului - tendonul Ahile, de \
exemplu, are foarte multe legturi, /
pe cnd n coad sunt foarte puine.
Biosinteza colagenului decurge la fel n toate esuturile, ns microfibrilele rezultate se
depun n mod specific n diverse organe (mnunchiuri paralele asociate n acelai plan cu
proteoglicanii, nct nu se mai pot identifica microfibrilele individuale).
Colagenul diferitelor organe i esuturi se deosebete prin diametrul microfibrilelor
(delal50 la-1200 n tendoane). Cu vrsta, diametrul colagenului n cartilaje crete
cu mult, ajungnd la valoarea maxim de 2000.
Rolul acestor legturi ncruciate, ce determin gradul mare de elasticitate a fibrelor
de colagen, e vdit n latirism - o maladie a animalelor cauzat de utilizarea mazrii
dulci (Latyris odoratus). Agentul toxic--aminopropioniInitril (N = C-CH2-C H ,-
NH3) inhib conversia restului de lizin n form de aldehid. Sub influena toxinei,
colagenul pierde duritatea mecanic.
C o la g e n u l d in d iv e r s e e s u
turi se rennoiete n perioade CO
variabile de timp. Investigaiile
cu izotopii radioactivi aplicate C H - (CH2)3- CH2- N H - C H 2- (2) ~ CH
pe obolani au demonstrat c L izilnorlcucina ][
timpul de njumtire a colage .NilCH
nului din piele e de 200 zile, al
celui din muchi - 60 de zile, iar
a celui din ficat - 30 de zile.

Exist situaii n care regene I
rarea e mult mai rapid. ntre 22-
perioada de degradare i ren
noire (biosinteza) exist, n NH
condiii fiziologice, un echilibru.
Degradarea colagenului
are loc sub aciunea enzimei
ce scindeaz legturile peptidi ( 2)3
ce n anumite fragmente ale co C O -C H -N H -
lagenului spiralizat. Enzimele, D esm o z in a
numite colagenaze, sunt se
cretate n form neactiv -procolagenaze. Colagenazele tisulare se depisteaz la repti
le i mamifere, n esuturile supuse metamorfozei sau creterii rapide: n cteva zile
esutul dispare complet (la mormoloci); la mamifere - n esuturile supuse reorgani
zrii (uter, dup natere), la cicatrizarea rnilor. Timpul i efectul acestor colagenaze
se afl sub un control foarte riguros. Colagenaza la mormoloci are o specificitate
deosebit-enzim a scindnd iniial tropocolagenul ntr-un loc anumit, - cele 3 lanuri
polipeptidice. Cele 2 fragmente rezultate, la temperatura corpului, se desfac spontan i
devin accesibile aciunii altor enzime proteolitice.
Exist i o alt grup de colagenaze sintetizate de unele microorganisme (Clostri
dium hystoliticum) - bacterie ce provoac gangrena gazoas. Secret o enzim ce
scindeaz lanul polipeptidic n mai mult de 200 de locuri. Ea distruge bariera esutului
conjunctiv, favoriznd ptrunderea bacteriei patogene n organism. Bacteria propriu-
zis nu conine colagen i nu este supus efectului colagenazei. n urma interveniei
colagenazelor, din colagen rezult peptide, incluznd hidroxiprolina sau chiar hidroxipro-
lina liber, care nu poate fi utilizat pentru sinteza colagenului. Devenind un component
al plasmei, este transferat n ficat i degradat. O parte se elimin prin urin. Dozarea
ei n plasm i urin este un indicator pcrfect pentru aprecierea diverselor stri patologice.
Elastina - proteina fibrelor elastice, se afl n esutul conjunctiv i se asociaz cu
colagenul, polizaharidele. Are capacitatea de a se lungi de cteva ori, cu restabilirea
ulterioar complet a formei i lungimii. n cantiti apreciabile se afl n peretele
vaselor sanguine (aort), n tendoane. Se caracterizeaz printr-o compoziie am ino-
acidic specific: ca i n colagen, 1/3 e reprezentat de glicin, prolin, puin hidro-
xiprolin, precum i aminoacizi polari, nu are hidroxilizin. Elastina posed aminoacizi
nepolari alifatici - ala, val, leu, ile. n elastina matur exist multe legturi ncruciate i
de aceea este practic insolubil.
Din esutul porcinelor cu deficit de Cu2+ s-a extras un precursor solubil denumit
proelastin. Deficitul de Cu2+ blocheaz fonnarea aldehidelor necesare pentru crearea
legturilor ncmciate n elastin.
Studiulproelastinei confirm prezena multor segmente bogate n lizin i alanin.
Anume n aceste fragmente are loc fonnarea legturilor covalente ncmciate. Att n
elastin, ct i n colagen remarcm o structur ce particip la fonnarea legturilor
ncruciate - lizil norleucina. Numai elastina conine desmozin fonnat din resturile a 4
lizine.
Se sintetizeaz n fibroblati, ca proelastin, devine elastin dup secreia n
mediul extracelular. Legturile transversale asigur elasticitatea n diferite direcii.
Pancreasul secret proelastaza activat de tripsin, cu transformarea n elastaz ce
hidrolizeaz legturile peptidice constituite de grupa COOH a aminoacizilor alifatici.
Enzima posed o lag-faz i, n final, se formeaz peptide, aminoacizi.
Proteoglicanii (PG )-principalul component al substanei fundamentale din
matricea extracelular. Se caracterizeaz printr-o mare diversitate tisular, precum i
a glucidelor (85-90%). Sunt constituentele glicozoaminglicanilor covalent legai cu
proteinele (5-15%).
Glicozoaminglicanii (GAG) sunt catene mari neramificate, compuse din elemente
dizaharidice repetabile. Aceti compui se mai numeau mucopolizaharide. Denumirea
actual e determinat de faptul c n componena dizaharidic se conine un aminoza-
hr (N-acetil-glucozoamin sau N-acetil-galactozoamin). Prezena grupelor carboxil
sau sulfat (a ambelor grupri) la majoritatea resturilor de zahr le aprovizioneaz cu o
sarcin electric negativ mare. Dup tipul resturilor de zahr, tipul legturii ntre ele,
numml i poziia grupelor sulfat deosebim 7 grupe de glicozoaminglicani (fig.8.15).
Biosinteza are loc n fibroblati, cu participarea a trei categorii de compui: aminoacizi,
glucoz i radicali sulfurici (PAPS). Se consider c activarea sulfului se efectueaz n
baza ATP, sub aciunea ATP-sulfurilazei i APS (adenozil monofosfosulfat) - kinazei.
Prima enzim i intensific activitatea n prezena retinolului, fapt ce explic rolul favo-
rizant al vit.A la anabolismul esutului conjunctiv (fig.8.16).
La fel ca i colagenul, PG, anterior secretai sunt modificri n aparatul Golgi
(sulfatarea i epimerizarea) i covalent se fixeaz de resturile de serin sau treoninn
proteina cor. Moleculele proteoglicanilor se asociaz cu fibrele de colagen, formnd o
barier pentru molecule - o sit molecular.
Proteoglicanii se deosebesc de glicoproteine, al cror component glucidic e de circa
1 -60% din masa total i e reprezentat prin catene mici ramificate de oligozaharide,
care deseori conin acid sialic.
Proteoglicanii au molecule mult mai mari, componentul glucidic e reprezentat
printr-o mulime de lanuri neramificate de GAG, nonnal nu conin acid sialic i constituie
pn la 90-95% din masa total.

Condrotin-4 i 6-sulfai
* Unitatea dizaharidic: N-acetil-
galactozamina i acidul glucuronic cu
sulfat sau la C-4 sau la C-6.
* Cel mai abundent GAG din
organism. (*
* Se gsete n cartilaje, tendoane,
ligamente, aort.
* Formeaz agregate dc proteo-
glicani.
* n cartilaje se leag cu colagenul i
menin fibrele ntr-o reea compact i Dermatan sulfatul
ai& idi_________________ * Unitatea dizaharidic: N-
acetil-galactozamina i acidul L-
iduronic (cu cantiti variabile

de acid glucuronic).
* Se gsete n piele, vasele
sanguine i valvulele inimii.
COOH
.OH ti
Keratan sulfatul
* Unitatea dizaharidic:
N-acetil-glucozamina i galac M t-NCOOH.
toza (acidul uronic este absent).
Coninutul de sulfat este variabil kJUA ai<3 G jMNAC Heparina
i se afl la C-6 al oricrui zahr. * Unitatea dizaharidic:
* Cel mai heterogen glicozamin- Glucozamina i acidul glucu
glican. ronic sau acidul iduronic.
*Se gsete n agregatele de
Aproape toate resturile de
proteoglicani din cartilaje
glucozamina sunt sulfatate la
mpreun cu condroitm sulfa-tul.
atomul de N.
* De asemenea, se gsete n
comee. Sulfatul se gsete dc
asemenea la C-3 sau C-6 al
glucozaminci i la C-2 al
acidului uronic (media: 2,5 S
la o unitate dizaharidic).
* Servete ca anticoagulant.
Acidul hialuronic
* Unitatea dizaharidic: N-
acetil-glucozamina i acidul
glucuronic.
* Difer de ali GAG: nu este
sulfatat, nu se leag covalent cu Heparan sulfatul
proteina i este unicul GAG care * Unitatea dizaharidic: se
se gsete nu numai n esuturile aseamn cu unitatea heparinei,
animale, ci i n bacterii. cu excepia unor glucozamine
* Servete ca lubrifiant. acetilate, conin mai puine
* Se gsete n lichidul grupri sulfat.
sinovial al articulaiilor, * Este un GAG extracelular care
lichidul vitros, cordul ombilical se gsete n membrana bazal i
i esutul conjunctiv spongios. prezint un component foarte
rspndit al suprafeelor celulei.
F ig u ra 8. IS. Form ulele structurale ale glicozoam inglicanilor i rolul lor fiziologic. Not: S - poziiile
sulfatului, GlcUA - acidul glucuronic, ldU A - acidul iduronic, GalNAC-N-acetilgalactozamina, GlcNAC-
N - acetilglucozamina, GlcN - glucozam ina, Gal - galactoza
In principiu, structura PG are o varietate extrem de mare. Lanurile ocup un spaiu

vast, nu sunt att de flexibile ca proteinele ce alctuiesc structuri globulare. PG
formeaz o confonnaie amorf i ocup un spaiu mare pentru masa sa. Sunt hidrofile,
fixeaz cantiti mari de ap i, fiind n cantiti foarte mici, prezint un gel hidratat.
Tendina dat e amplificat de densitatea mare a sarcinii negative, care atrage cationi
activi. Aceast capacitate de a fixa apa creeaz n matricea extracelular un anumit
Glucoza min G ucozam in
6-fosfat 1-fosfat
I.
Am inotransferaza
Acetil-CoA
Gicozaininglicani
N-Acctil- N-Acetil-
glucozamin - glucozamin
6 -fo s fa t l-fosfat
- UTP
' PP i
N-Acetil- UDP-N-acetil
manozamin glucozamin
A cidul sialic,
gangliozide,
6-fosfat NAD+
Fosfoenolpiruvat Epimeraza Qicozam inglicani
glicoprotcine
glicoproteine
UDP-N-acetil, /
PPi CTP Pi
galactoza min
CMP -- . . N A NA -
NA N A 9-fosfat
F igura 8.16. Sinteza aminozaharidelor: NANA - acidul N-acetil-neuraminic
turgor ce se opune compresiei, pe cnd fibrele de colagen se opun forelor de

extindere.
Datorit dispunerii amorfe i a gradului mare de hidrataie, lanurile PG nu
mpiedic difuzia rapid a moleculelor hidrosolubile, ca de altfel i transferul celulelor.
PG ocup un spaiu intercelular, cu toate c reprezint mai puin de 10% din numml
proteinelor fibrilare.
E de menionat rolul deosebit al acidului hialuronic n migrarea celulelor la
tratarea rnilor n plin proces de dezvoltare. Cantiti mari se formeaz n esuturi.
Scindarea lui de enzima hialuronidaza este nsoit de inhibiia migraiei celulelor. E
evident c amplificarea local a sintezei acidului hialuronic cu absorbia apei, ce
duce la tumefierea matricei, poate servi drept strategie general de faciliti pentru
migraia celulelor n procesele de regeneraie i morfogenez. Nu e exclus c PG for
meaz un spaiu hidratat intercelular, dar i geluri cu pori de mrime diferit, ct i cu o
densitate a sarcinii diferit, ce poate servi n calitate de filtre de reglarea micrii
moleculelor i celulelor, n concordan cu mrimea i sarcina lor. Aceasta necesit un
grad susinut de regularitatea lanurilor de PG n matrice.
Forma concret de organizare nu e identificat definitiv. Moleculele interacioneaz
nu numai ntre ele, dar i cu moleculele de colagen, glicoproteine, formnd, n fine, o
varietate ampl de structuri tridimensionale. Lanurile de proteoglicani pot forma
spontan structuri de un nalt nivel de organizare spiralizat i n fonn dc band. PG se
asambleaz n agregate, formnd structuri de tipul periei, avnd n centru acid hialuronic,
Acidul
K eratan sulfat
C ondroitin sulfat
de legtur
Figura 8.17. Agregate deproteoglicaiti Cor proteina
iar la ramificri - PG (keratan sulfat scurte i lungi - condroitin sulfat) (fig.8.17,17a).

Agregarea este amplificat de cationii polivaleni de tipul Ca**.
Acidului hialuronic i este proprie o vscozitate, ce-i permite s serveasc n calitate
de lubrifiant n articulaii. Modificrile nvscozitatea lichidului, n afeciunile reumatoide
sunt o consecin a dereglrilor ce au loc n structura proteoglicanilor.
Actina
Fibronectina Proteoglicani Integri na

Funcionnd ca nite site moleculare, PG regleaz ptrunderea prin ei a molecule
lor mari (proteine etc.). n organism exist un echilibm dinamic permanent ntre
biosintez i degradare. Degradarea PG se produce cu mult mai rapid dect a colage
nului, n majoritatea esuturilor, n rinichi-3 -8 zile. Produsele scindrii se excret prin
urin - cantitatea diurn 250 mg. Proteoglicanaza (o metalenzim cu un pH cuprins
ntr-un domeniu larg-5-9) are proprieti diverse i scindeaz hidrolitic legturile ntre
condroitin sulfat i proteina central n multe regiuni i n numeroi PG.
Enzima are i capacitatea de a proteja peptidele de extensie, precum i de a degrada
glicoprotein matriceal. Ulterior, intr n funciune endo- i exoglicozidazele, sulfataze-
le; dintre glicozidaze - -glucuronidaza, a-iduronidaza, -acetil-hexozaminaza, -
galactozidaza, aril-sulfatazele (fig.8.18).
S in d r o m u l H u n te r ( M P S I I )
* Deficit de iduronat sulfataza.
* Deficitul este X-lincat.
* Limitele severitii sunt mari.
Opacitatea corneei lipsete. ns
exist o deformare a corpului,
retardul mintal variaz de la moderat
pn la sever.
* Este afectat degradarea dermatan
-Sulfatului-Si hegaran sulfatului.
S in d r o m u l S che^T V P S 1 S ) '
Deficit de a-L-iduronidaza
(MPS I H i MPS I S sunt dereglri
alele).
Opacitatea corneei, articulaii
rigide, boala valvulei aortei,
intelect normal i durata obinuit
a vieii.
* Este afectat degradarea dermatan
sulfatului si heparan sulfatului.
S in d r o m u l S a n tllip p o (M P S III)
* nlturarea resturilor de glucozamin.
N-sulfatate sau N-acetilate din heparan
sulfat necesit 4 etape enzimatice:
deficitul dc heparan sulfamidaza (Tip A),
N-acetil glucozaminidaza (Tip B), GlcNAc GlcUA GlcNAc-ClcUA....
N-acctil transferaza (Tip C), .- N -a c e til g lu co z a ni in id a z a
N-acetil glucozamin 6-sulfataza (Tip D).
* Dereglri severe ale sistemului nervos,
retard mintal. 4 GlcNAc
GteUA GlcNAc-GlcUA 7 S in d r o m u l S ly (M P S V II)

* Deficit de -glucuronidaza.
* Hepato-splcnomcgalie.
deformitate fizic.
[ - g lu c n ro n id a /.a * Este afectat degradarea dermatan
sulfatului i heparan sulfatului.
'< G,CA
G icN A c-G lcU A
N - a c e tilg lu c o z a m in 6 -su lfa ta z a
G lcN A c KJCUA
F igu ra 8.18. Degradarea glicozaminglicanilor de enzimele lizozomale.

Mucopolisaharidozele n deficiena enzimatic
Modificrile constituenilor PG
Distingem modificri fiziologice asociate, cu naintarea n vrst, i patologice cau
zate de funcionarea anormal a unor enzime participante la ana-sau catabolismul lor.
n funcie de vrst, e stabilit majorarea cantitii de colagen, ca, de altfel, i a keratan
sulfatului n esuturi, unde se localizeaz.
Coninutul condroitin sulfatului n cartilaje, discuri intervertebrale i al acidului
hialuronic n piele se micoreaz. Aceste schimbri au efecte importante pentru gradul
de hidratare, precum i pentru posibilitatea eventualei calcifieri (n cartilaje, oase).
Hormonul de cretere (GH) stimuleaz adiionarea pralinei n lanul tropocolagenu-
lui. Administrarea lui la orice vrst apropie caracterul sintezei PG de procesele ce
au loc la animalele tinere-am plific proliferaia celulelor i stimuleaz ataarea
grupelor sulfat n PG.
Testosteronul amplific viteza sintezei acidului hialuronic, la fel ca i insulina (plus
condroitin sulfaii). La diabet sunt vdite consecinele inhibiiei sintezei PG, amplificarea
degeneraiei vaselor, vindecarea tardiv a rnilor, cnd pacienii sunt mai sensibili la
infecie. Stimuleaz sinteza PG i mineralocorticoizii, amplificnd proliferarea fibro-
blatilor.
Glucocorticoizii administrai conduc la repolimerizarea acidului hialuronic i a altor
PG, inhib sinteza, reducnd aciunea defavorizant a acestor hormoni n procesul de
tratare a rnilor.
Mucopolizaharidozele sunt o categorie de boli genetice, ce se caracterizeaz prin
depozitarea n esuturi i excreia urinar a GAG, ca rezultat al insufucienei unei sau
mai multor enzime lizozomale implicate n degradarea lor. Au loc modificri n structura
scheletului, n dezvoltarea olanelor, afeciuni mintale, tulburri cardiopulmonare de
diverse genuri i intensiti (fig.8.18).
Defectul enzimatic specific se stabilete prin fixarea activitii unor enzime n
lichidul amniotic.
B IO CHIM IA RSPUNSULUI IMUN
Simplele observaii asupra faptului c oamenii care au suferit de unele maladii
infecioase devin apoi nereceptivi la ele, au condus la apariia tiinei despre siste
mul im u n - imunologia. Rspunsul imun este foarte specific, i anume aceast
specificitate reprezint o particularitate fundamental a reaciilor imune.
Mesajul imun este o elaborare recent a evoluiei biologice. El se manifest numai la
vertebratele superioare. Graie activitii sistemului imun, substanele nocive, moleculele
toxice se afecteaz i se elimin din organism. Chintesena sistemului imun const n
distrugerea moleculelor strine, dar nicidecum a celor proprii.
Capacitatea de a distinge ce e propriu i ce-i impropriu e o alt proprietate funda
mental a sistemului imun (SI). Rar cnd SI confund celulele proprii cu cele strine. n
circumstanele date acioneaz prompt, declannd reacii autoimune, cu eventual leta-
litate.
Corpul strin care stimuleaz producerea de anticorpi (provoac rspunsul imun) e
denumit antigen. SI e capabil s disting antigeni analogi, de exemplu: 2 proteine ce
difer doar printr-un aminoacid sau doi izomeri optici.
Ansamblul de reacii specifice ale unui organism sau sistem celular, declanate
prin contactul cu substana strin, poate fi de dou tipuri:
1) Umoral. Contribuie la elaborarea anticorpilor care circul prin snge i specific
leag substanele strine ce le-au provocat sinteza. Fiind nglobai n fagocite, stimulea
z un sistem de proteine sanguine (complementul), ce provoac afectarea antigenului.
2) Celular. Const n generarea celulelor specializate ce reacioneaz cu antigenul
strin pe suprafaa celulelor proprii ale organismului (pot fi afectatc de vimi sau la dis
trugerea antigenului de ctre macrofage).
Aadar, sunt fireti 3 ntrebri cardinale aprate:
1) Cum SI identific specific milioanele de molecule strine i reacioneaz la ele?
2) Cum se disting moleculele proprii de cele improprii?
3) Cum se difereniaz grupele de microorganisme i n ce const mecanismul de
reglare a rspunsului, ca s protejeze ct mai efectiv organismul de numeroi factori
patogeni?
Sistemul imun este un organ difuz rspndit n majoritatea esuturilor. Coordonatori
ai ambelor tipuri de imunitate sunt limfocitele, aproximativ 2x1012celule, 99% dintre ele
fiind situate n organele productive, ganglioni limfatici, mduv, timus, splin (fig.8.19).
Exist 2 populaii de limfocite: T- timodependente i B- bursodependente.
Denumirile provin de la organele limfoide centrale respective - timus i mduva osoas.
Se consider c diferenierea limfocitelorT i B din celulele de origine e realizat
de hormonii specifici: timopectina i ubicuitina - hormon polipeptidic izolat din toate
esuturile. n mecanismul de reglare este implicat AMPc. Morfologic, T limfocitele
reprezint sfere cu suprafee netede i au foarte puine viloziti, pe cnd B limfocitele
au numeroase viloziti. Durata supravieuirii T celulei e de luni, ani, iar a B de zile,
sptmni. Locul dc formare pentru ambele tipuri e mduva osoas, pe cnd locul de
difereniere timusul i organele limfoide periferice. Limfocitele B intr n aciune
spontan, pe cnd limfocitele T se includ mai tardiv.
Celulele plasmatice constituie B limfocite mai mature, cu un reticul endoplasmatic
granular foarte dezvoltat, ce posed o morfologie caracteristic. T i B celulele
difer morfologic pronunat numai dup stimularea lor de ctre antigen.
Majoritatea limfocitelorT i B circul permanent din snge spre limfa i viceversa.
Circulaia pennanent determin contactul majoritii limfocitelor cu antigenul iseivete
la distribuirea celulelor T i B activate n esuturile limfoide ale corpului. Evident c n
ganglionii limfatici celulele T i Bspaial sunt separate n diferite zone: n ganglionii
limfatici - B celule, n stratul paracortical - T celule.
esutul limfoid periferie
esutul hcmopoiczic Timusul Splina
Bursa Fabricius
F igura 8.19. Evoluia T- i B-limfocitelor
Cea mai impresionant proprietate a sistemului imun e capacitatea lui de a reaciona

perfect selectiv la milioane de antigeni strini.
La ora actual e acceptat teoria seleciei clonale, care presupune c informaia de
structur pentm orice fel de anticorpi preexist n genomul celulelor formatoare sau
numai pentru unele dintre acestea (clone). Antigenul acioneaz ca depresor al mesajului
genetic preexistent. Acest deziderat este confirmat prin investigaii convingtoare. Dac
limfocitele animalului neimunizat se incubeaz n epmbet cu unul din antigenii marcai
A,B,C,G, apoi un procent foarte mic (<0,01%) de limfocite va fixa acest antigen.
Aceasta nseamn c foarte puine celule conduc receptori specifici spre A,B,C,G. O
astfel de interpretare este argumentat prin unntorul experiment: antigenul A este
foarte radioactiv i orice celul care l fixeaz capteaz o doz letal. Celulele rmase
nu sunt capabile s reacioneze la A antigen, ns reacioneaz normal la ceilali anti
geni.
Experimentele efectuate confinn:
1) Limfocitele sunt predestinate reaciei cu un anumit antigen, pn la declanarea
aciunii acestuia.
2) Limfocitele sunt posesoare ale receptorilor de la suprafa, legnd, de regul, un
antigen sau altul.
Majoritatea macromoleculelor polizaharidelor, practic toate proteinele, pot servi ca
antigeni. Secvenele de grupri chimice, interacionnd cu receptoriilimfocitelor sau cu
locusul specific al moleculei de anticorpi, care propriu-zis realizeaz efectul imun, se
numesc determinant antigenic sau epitop. Moleculele care se fixeaz n ambele cazuri,
dar nu induc rspunsul imun, sunt denumite haptene. Ele devin antigeni perfeci, dac se
vor fixa de un suport m acrom olecular- proteina. Sunt determinate mai imunogene-
imunodominante. Ele posed un complet de determinante antigenice.
O determinant poate activa mai multe clone cu receptori la suprafa, ce posed o
sensibilitate diferit. Rezult un rspuns policlonal sau poate fi i oligoclonal (cteva). SI,
la fel ca i sistemul nervos, posed ca
pacitatea de memorare. Imunitatea or
100 'Intensitatea formrii AC
ganismului e viabil pe toat durata vieii
la multe boli virotice.
De la primul contact cu antigenul
Antigenul A repetat j
rezult un rspuns imun primar dup o
faz - lag de cteva zile i continu con Rspuns primar
form schemei alturate (fig.8.20).
Rspunsul imun secundar are o
perioad-lag mult mai scurt, o reacie
mai pronunat i de o durat mai lung. 0 10 20 30 40
Rspunsul secundar confirm pstrarea

Antigenul A
.
Injectarea antigenului A
memoriei despre antigenul A, fiindc la injectat repetat i antigenului primar
contactul cu un alt antigen-B reacia ani F igura 8.20. Rspunsul umoral primar i secundar
malului va avea un caracter primar. indus de infuzia antigenului A i
n esuturile limfoide periferice ale
animalului adult, populaia T i B limfocite, conine concomitent celule la trei stadii de
difereniere: celule-precursoare, celule de memorare, celule-efectoare.Unele dintre
celulele -precursoare, la contactul primar cu antigenul, se reproduc i se prefac n celule-
efectoare (T sau B). Alte (T sau B) celule, celulele-precursoare sunt stimulate,
difereniindu-se n celule de memorare. Acestea nefiind mesagere, uor se transfonn n
celule-efectoare Ia o contactare repetat cu acelai antigen. Ultimele celule circul per
manent i pot supravieui ani de zile, fr a se reproduce.
Cum anume SI distinge celulele improprii ? Una din posibiliti const n faptul c
genele motenite codific receptorii anume pentru antigenii strini, dar nu pentru cei
proprii. Aadar, sistemul imumtare programat genetic s reacioneze la antigenii strini.
Posibil c SI nva n perioada postnatal s nu reacioneze la antigenii si.
Experimentele au confirmat concluzia c prezena permanent a antigenilor strini,
ncepnd cu perioada n care sistemul imun nc nu e capabil de mesaj (este imatur),
implic blocarea continu a reaciilor imune la antigenii strini. O atare stare dc incapacitate
indus antigenospecific precar la rspunsul imun se numete toleran imunologic
dobndit.
Cercetrile efectuate n 1962 au confirmat c i tolerana natural imunologic
la propriile esuturi nu e nnscut. Experimentele fine asupra hipofizei mormolocului au
demonstrat c SI potenial e capabil J^ ^ za 'ransPj_a/nlat sub ni1(.?^?',,splanlata sub
s reacioneze la antigenii propriului
organism, dar n procesul de dezvol
tare nva a nu o face. Se elucideaz
c pentru meninerea toleranei na
turale se reclam prezena proprii
lor antigeni. Dac antigenii proprii
sunt nlturai, apoi i peste sptmni,
luni organismul va reaciona prin fe
nomene imunologice exprimate. De
reglarea toleranei la antigenii proprii
Hipofiza recuperat iniiaz 1/2 din liipofiza rccupcrat nu
conduce la o reacie a T i rcacii autoimune declaneaz reacii autoimune
limfocite, succedat de reacii auto
F igura 8.21. Schema experienei ce ilustreaz c S I e
imune responsabile pentru diferite ma capabil s interacioneze cu esuturile organismului, dar
ladii (fig.8.21). n procesul dezvoltriinva s nu procedeze aa
Tolerana imunologic poate fi
indus i organismelor animale mature far antigeni strini, ns ecu mult mai dificil
dect n perioada postnatal. E oportun administrarea antigenului n: 1) doze mici,
repetate; 2) mpreun cu imunodepresani; 3) intravenos, dup ultracentrifugarea an
tigenului. Animalul va reaciona normal la ali antigeni, ceea ce denot c tolerana imu
nologic i memorarea imun sunt antigenospecifice.
Mecanismul funcioneaz perfect datorit faptului c n unele cazuri clonele de
limfocite, ce ar reaciona cu acest antigen, sunt eliminate, n altele - ele supravieuiesc,
dar reacia la antigen este specific supresat de T-limfocitele corespunztoare denumite
T cehde-supresoare.
Pentru ca substana strin s reprezinte un antigen specific, ar trebui s posede
unele proprieti (condiii de antigenitate):
a) s aib o structur chimic diferit a substanelor similare din organismul receptor;
b)s posede un grad ridicat de complexitate structural i dimensiune molecular
mare;
c) s conlucreze cu unele grupri chimice ce confer moleculei un grad major de
stabilitate structural, o configuraie fix (o anumit rigiditate);
d) substana s fie improprie organismului receptor;
e) s provin dintr-o surs taxonomic distanat de animalul receptor.
Polizaharidele atest capaciti imunologice mai slabe dect proteinele, ns pot
asigura reacii de specificitate determinate de:
a) structura chimic a moleculei de antigen;
b) natura chimic i orientarea spaial, cu poziii relativ libere ale gruprilor active n
molecula antigenic;
c) secvena elementelor componente ale moleculei polimerului (aminoacizi);
d) gradul i modul de torsionare a polimerului;
e) specificitatea asigurat de rolul izomeriei optice;
f) izomeria de poziie, n special a poziiei relativ libere a gruprilor funcionale, mai
ales ale aminoacidului C-terminal;
g) structurile specifice ale antigenilor, reprezentate prin zaharide, una din molecule
fiind imunodominant, situat de obicei la extremitatea lanului poliozidic.
Antigenii au anumit valen, exprimat prin numml de molecule de anticorpi,
ce reacioneaz la o singur molecul de antigen. Sunt dependeni de numrul
determinanilor antigenici ai unei molecule (ntre 5-15).
Unica funcie bine cunoscut a B-limfocitelor este producerea anticorpilor, cu o
particularitate unic de a exista n milioane de tipuri, fiecare cu un situs deosebit pentru
fixarea antigenului. Aceste proteine sunt denumite imunoglobuline (Ig) - o clas funda
mental a proteinelor sanguine, reprezentnd aproximativ 20% din proteina plasmatic
sumar.
Toate moleculele de anticorpi sintetizate de o celul-B au situs identic pentru
fixarea antigenului. Primii anticorpi nu sunt secretai, dar se acumuleaz n membrana
plasmatic, servind drept receptori pentru antigen. Fiecare B-celul are aproximativ
105 asemenea molecule.
Antigenul fixat iniiaz un lan de fenomene, care implic proliferarea celular i
diferenierea celulelor, cu secretarea anticorpilor. Aceste celule au situs identic de fixare
a antigenului. Celulele activate
S ectoare fixatoare de antigeni secreteaz anticoipi, finaliznd di
ferenieri n celula plasmatic, care,
la rindul ei, i secreteaz cu o vitez
de 2000 molecule pe secund.
Utiliznd capacitatea de sintez, nu
mai sunt capabile de evoluare i
difereniere, lichidndu-se la cteva
zile dup secretarea anticorpilor.
Fal
Proprietatea de protejare
susinut de anticorpi const nu
i r >< numai n fixarea antigenului, dar i
n alte funcii, cu ajutorul propriei
codie, ceea ce deter-min soarta
antigenului fixat.
n stu d iu l stru c tu ra l al
anticorpilor, un rol deosebit l
joac scindarea moleculei cu
enzimele proteolitice (papaina i
pepsina), formnd fragmente
(fig.8.22).
"OOC COO' Unitatea structural de baz
- domen constant
V - domen variabil
a moleculei anticorpului o
H .L - catene grele i uoare formeaz 4 lanuri polipeptidice
F igura 8.22. Structura imutwglobulinei G. Fragmentele la
identice - 2 L lanuri uoare i
scindarea imunoglobulinei cu enzime proteolitice dou grele H, fiind asociate
ntre ele prin interaciuni necovalente i legturi covalente (puni
disulfidice). Examinrile scindrii moleculelor respective cu
enzime proteolitice (papaina i pepsina) au elucidat structura
lor.
Lanul greu H stabilete caracterul clasei dc imunoglobuli-
Catene ne, are masa molecular ~ 50.000-70.000Da, e de natur
glicopeptidic. Exist 5 tipuri de lanuri (de Ig) desemnate prin
litere greceti (y=Ig G ;a = Ig ; =Ig M; 5 = lg D; 8 = lg E).
Diferenierea de natur a lanului H este exprimat
prin antigenitatea proprie fiecruia, derivat de secvena
aminoacidic n catenele respective (fig.8.23). Diferena de
Catene secvene i dimensiuni ale lanul H din fiecare clas determin
subclasele (4 lg G; 2 pentru Ig A i 2 - Ig M). Lanurile
uoare L exist n dou forme: de tipul K-(Kapa) i X-
(Lambda). ntr-o molecul de Ig, lanurile uoare aparin unui
singur tip. Niciodat ambele tipuri nu se ntlnesc n aceeai
molecul.
Ambele categorii de lanuri (H i L) posed n structura
Catene
lor dou genuri de regiuni - unele variabile (V) i altele con
stante (C), din punct de vedere al secvenei aminoacizilor ce
intr n compoziia lor.
Modificrile de secven n regiunea constant a lanurilor
uoare determin apariia de subtipuri. Regiunile variabile ale
ambelor lanuri, posibil, difer de secvena aminoacidic ce
Catene H5
fixeaz subgrupele de imunoglobuline.
IgG, clasa de baz a imunoglobulinelor sanguine, aprox.
12 g/L, asigur rspunsul imun secundar. Regiunea Fc (crista-
lizabil) se fixeaz de receptorul specific al celulei fagocitare,
care n final nglobeaz i distruge microorganismele aco
perite cu Ig G - anticorpi. Regiunea Fc se fixeaz de prima
Catene component a complementului, activndu-1 (fig.8.24). Aceas
Figura 8.23. A nticorpii t clas de imunoglobuline e unic i posed o capacitate
tuturor claselor posed H- transplacentar. Domeniile imunoglobulinelor ndeplinesc func
caten tipic, ce confer
regiunii Fc o anum it ii distincte - V,, i V, situsul de mbinare cu antigenul; cele
conformaie mediaz fixarea complementului i, posibil, controleaz
catabolizarea lor (Ig); posed i situsuri de mbinare cu recep
torii celulari. Are o form molecular T n absena antigenului
i Y - n prezena acestuia (fig.8.25).
In fazele timpurii ale rspunsului imun primar n snge predomin anticorpii IgM, care
reprezint o structur circular pentameric compus din 5 uniti cu 4 lanuri fiecare,
avnd 10 situsuri de fixare a antigenului (fig.8.26). Aceti pentameri efectiv activizeaz
sistemul complementului. IgM e prima clas de anticorpi produi de celulele n
evoluie. Aceti anticorpi se ncadreaz n membrana plasmatic i devin receptori
pentru antigen; pre-B-celul devine limfocit i poate reaciona la antigen.
Ig G F c receptor
F igu ra 8.24. Fagocitoza complexului aticorp-viral de macrofage. Fc - receptorul ce fixeaz anticorpi
Foarte puine B-celule sunt activate pentru secreia IgD, care susin rolul de receptori
pentru antigeni. Concentraia lor crete considerabil la gravide, n timpul travaliului. Se
creeaz impresia c aceti receptori de pe limfocite ar putea servi drept stimulatori pen
tru divizarea i diferenierea celulelor indicate.
A nticorp
IgA - clasa de baz a anticorpilor /* c a te n e
n secreii (lapte, saliv, lacrimi,
secreiile tractului respirator i intes
tinal), poate exista n forma de un
monomer compus din 4 lanuri, ca la
IgG, sau reprezint form dimeric
(93%) (fig.8.27). Dimerizarea se rea
lizeaz prin intermediul unui polipep
tid - J i al unei glicoproteine
denumite component secretorie, pe
care dimerii o capt pe suprafaa ce-
lu le lo r e p ite lia le , unde se i
sintetizeaz. Ulterior, sunt transferate
pe suprafaa bazal, servind ca re
ceptori pentru fixarea Ig A din snge.
Aceast protein faciliteaz transpor
Figura 8.26. Pentamerul de IgM
tul imun al globulinei i, posibil, prote
jeaz molecula IgA de digestia enzi
melor proteolitice din secreii.
IgE sunt sintetezate de ctre plasmocite n ntregul esut limfoidal, dar mai ales n cel
din mucoas intestinal i cea a tractului respirator. Fixndu-se rapid pe membranele
m asto citelo r i bazofilelor, determ in
Catenele a
degradarea lor i eliberarea de kinine,
prostaglandine, histamin cu rol de mediatori
n hipersensibilitatea imediat. Se consider c
astmul bronic are o asemenea patogenie. In
molecula de IgE Fc-regiunea se leag de re
ceptorii specifici proteici de pe suprafaa ce
lulelor (labrocite) n esuturi i de leucocitele
bazofile din snge, cu o compatibilitate mare
(fig.8.28). IgE fixate devin receptori pentru an
tigeni, la legarea ultimilor aceste celule secre
teaz substane biologice active (histamina, se
rotonina), responsabile de hipersensibilitatea
imediat de tip anafilactic.
Concentraiile imunoglobulinelor din plas
ma uman pot fi reprezentate relativ: G =
1250 mg%; A = 210 mg%; M = 150mg%; D
= 3mg%; E = 0,03mg%. Anticorpii iniiaz
procesul de liz a microorganismelor prin fa-
gocitoz, complement. S-a stabilit c celulele
acoperite cu anticorpi pot fi distruse i de
nite celule cu receptori ce identific regiunea
Antigenul multivalent coase
Labrocit Granul cu moleculele 1 E vecine
IgE receptor
specific pentru Fc Ig E se fixeaz cu receptorul pentru Fc Histamina se
elibereaz prin exocitoz
F igu ra 8.28. Labrocitelepasiv devin posesoare de receptori, ce leag antigenul. IgE secretate de B-
limfocite se fixeaz de receptori pe suprafaa labrocitelor care recunosc regiunea Fc a anticorpilor
Fc a anticorpilor. Cele mai active dintre ele sunt denumite NK-celule-Natural Killer,
se aseamn cu limfocitele, dar nu sunt T sau B-celule. Mecanismul nu e elucidat com
plet.
Structura anticorpilor
S-a stabilit c fiecare (L i H) lan al imunoglobulinelor const din regiunea variabil
cu o lungime de aproximativ 110 resturi de aminoacizi la captul N-terminal, urmat
de o regiune constant, cu aceeai lungime n L-lan i de 3-4 ori mai mare n lanul H.
Fiecare lan include domenii repetabile compacte n acelai mod: lanul L posed un
domeniu n partea variabil i unul n cea constant; lanul H -unul n V-regiune i 3-
4 n constant. Variabilitatea secvenei de aminoacizi n V-regiuni ale lanurilor L i H e
constrns de cteva regiuni hipervariabile, care sunt foarte apropiate spaial de unul
din capetele moleculei i formeaz si
Regiunea
tusul de fixare a antigenului. Un astfel V-scgmente H Regiunea hiper-V
hipervariabil acat.H Locusul de
de situs are dimensiuni adecvate pen fixare a
tru contactarea cu antigenul determi antigenului
nat de mrimea valorii a 5-6 resturi \ *

de zahr (fig.8.29).
V-segmcnte L
Analiza roentgenostructural a
Regiunea
confirmat structura spaial a Ig. Toate hiper-V
a cat.L
au aproape structur tridimensional
similar. Fiecare domeniu reprezint un F igura 8.29. Schema ilustreaz form area locusului
cilindru cu dimensiunile 4x2,5x2,5 nm, de fixare a antigenului n molecula de anticorpi
aidoma unui sandvi compus din
dou straturi proteice - unul format din trei, altul din 4 segmente de lan polipeptidic.
Catenele fiecrui strat sunt antiparalele i astfel formeaz -structura; 2 straturi sunt
aproape paralele, joncionate printr-o legtur disulfidic. Regiunile hipervariabile sunt
situate n trei anse hipervariabile i formeaz situsul de fixare a antigenului. S-a stabilit
c regiunea variabil are o structura rigid conservativ, la unul din capete sunt fixate
ansele hipervariabile. Numeroase site-uri de fixare se formeaz datorit modificrilor
aminoacide n regiunile hipervariabile, fr modificri n conformaia structural necesar
pentru funcionarea anticorpilor (fig. 8.30).
Care sunt mecanismele de sintez a anticorpilor? Investigaiile din ultimii ani au
I------ ---------------------- i i -----------------------------(
Domenul variabil Domenul constant
F igura 8.30. Structura spaial a moleculei IgG
A - fiecare rest de aminoacid e reprezentat prin bila mic;
- aranjarea spaial a lanului uor (L). Ambele domenii sunt prezente n structur.
demonstrat c fiecare tip de lan al Ig - uor (k i X) i greu este codificat de o grup

mare (pul) de gene utilizate la sinteza fiecrui lan. Fiecare pul conine un numr diferit
de V-gene localizate la sute de mii de nucleotide spre captul 5'-terminal al DNA
codificat. n procesul de dezvoltare a B-celulelor, fiecare dintre V-gene poate fi translo-
cat n aa mod nct s se localizeze lng C-gena. Numai dup o astfel de restructu
rare e posibil sintetizarea lanului imunoglobulinei.
Pulul de gene ce codific , Lambda i H- lanul sc situeaz n diferii cromo
zomi i este foarte compus. Codificarea V-regiunii a L-lanului comport un mecanism
foarte complicat, cu fonnarea unei mRNA, inclusiv o secven de gene V, J, C.
Regiunea variabil a H-lan e codificat i mai dificil. Gena are un segment n plus D
(diversity gene segment), numrul lor nu se tie precis (mai mult de zcce la oareci). Ca
rezultat al unei serii de site-uri - recombinaii specifice, D-segmentcle contribuie la for
marea unei VHgene funcionale. Numrul de variaii ale V(I e de 10 ori mai mare.
Variaia anticorpilor crete datorit recombinaiilor somatice de coeziune a lanurilor L i
H, precum i a mutaiilor somatice, care nu numai c mresc variabilitatea anticorpilor,
dar servesc i la restructurarea lor fin la rspunsul imun.
Comutarea sintezei de la forma imunoglobulinelor legate (sesile) la cele secretate
(sanguine) e unica modificare ce poate avea loc n regiunea a lanurilor grele n
evoluia B-celulelor. Toate B-celulele i iniiaz activitatea, cu sinteza anticorpilor-Ig
M. Ulterior, multe dintre ele se comuteaz la elaborarea anticorpilor de alt clas -
G sau A, cu proprieti biologice noi.
Sistemul complement
Acest sistem completeaz aciunea anticorpilor specifici asupra celulelor strine. E
principalul sistem efector, cu ajutorul cruia anticorpii protejeaz organismul verte
bratelor de majoritatea infeciilor bacteriene. Complementul, cu participarea anticorpilor,
contribuie nu numai la distrugerea celulelor, dar i atrage focarul de infecie- fagocitele
mresc capacitatea lor de a ngloba i a liza microorganismele.
Complementul e un sistem compus din proteine, ce include circa 20 de compo
nente. Toate reprezint proteine solubile, ce circul n snge sau n lichidul celular.
Majoritatea lor manifest stare inactiv.
Participantele la sistemul complement conlucreaz prin intermediul unui lan de reacii
de activare n cascad. Se disting trei uniti funcionale macromoleculare: unitatea
de identificare i alarm e macromolecula C, constituit din C, , C ]r, C,s. C, - protei
n major compus din 6 fascicule n form
de lalea. Fiecare are cte un cap de protein
globular i o coad colagenoas (fig.8.31).
Fiecare cap se fixeaz de regiunea C a
anticorpilor G sau M numai n cazul n care
cellalt capt al moleculei de anticorpi cores
punztoare a fixat antigenul. Rezult activarea
lui Clq i declanarea fazei timpurii a cascadei
proteolitice a cii clasice. Activarea comport
o aglomeraie de antigeni i determinante stri
ne pe suprafaa microorganismelor.
Ulterior, C.lq C.Ir C,Is - C.4
se activeaz i se fixeaz de membran, adiio-
nnd C2. Complexul C42 e num it C,
convertaz, cave scindeaz C3cu formarea a 2 fragmente C3a i C3b. Ultimul se leag
rapid cu membrana - int lng C42, cu formarea complexului C423b sau Cs convertaz
clasic, care, la rndul su, scindeaz C5la C5a i C5b. Complexul format adiioneaz la
C6. Ca rezultat, se iniiaz asamblarea componentelor, cu formarea complexului de
citoliz C7+Cg+C9 C56789(fig.8.32).
Unitatea de activare include componentele C4, 3i ionii de M g^. n acelai timp,
este activat i calea alternativ - un lan de reacii cu legtura invers pozitiv, ce
amplific elaborarea iniial de CJb. Aceast cale poate fi activat i n lipsa anticorpilor
de polizaharide situate n fragmentele celulare ale bacteriilor, drojdiilor. Se consider
c acest mecanism determin linia nti de aprare contra infeciilor, pn la formarea
rspunsului imun. Componentele principale sunt C3b, factorul i D.
Iniierea comport adiionarea factorului la C3b fixat de membran. Circulnd n
snge, factorul activ D scindeaz factorul fixat B, cu formarea unui fragment activ B6. n
consecin, se formeaz C3convertaza cii alternative - C3bBb. C3- convertaza for
meaz suplimentar C3b. Cteva molecule C3bse fixeaz de membranele-int n apropie-
> C5b +C6+C7+C8+G9-------> -C 5 6 7 8 9 C om plexul litic
F ig u r a 8 .3 2 . S c h e m a fo r m r ii C} i Cf
convertazei n cile clasice i alternative.
C o m p le xu l a lte rn a tiv se activeaz de
subcomponenta 3b, fra ciu n i polizaharidice
membranare
rea C3bBb, cu formarea eonvertaz a cii alternative, ce scindeaz C-5, astfel

iniiind asamblarea complexului citolitic. Pentru aceast cale sunt obligatorii ionii Mg4*,
pentru calea clasic- ionii de Ca**. C3bdin calea clasic automat activeaz cea alterna
tiv. Polizaharidele membranare ale unor tipuri de microorganisme protejeaz moleculele
C3b fixate de membranele de degradare i, n consecin, pot activa calea alternativ.
Cibposed unele proprieti deosebite'.
1) Favorizeaz formarea proprie (C3b) i, adiionnd la C3- convertaza, formeaz
C5- convertaza.
2) C3bse fixeaz de receptorii proteici specifici pemacrofage i leucocite neutrofile,
amplificnd capacitatea acestor celule de a fagocita celula Ia care a adiionat C3b.
Adic, exercit un rol primordial de protecie n lipsa complexului citolitic. In cascada
proteolitic a activrii complementului se formeaz cteva fragmente proteice biologic
active (CJa, C4a, C5a), care stimuleaz secreia histaminei de ctre bazofile i labrocite;
servesc ca substane hemotaxice pentru leucocitele neutre. Aceste substane sunt
responsabile pentru reacia inflamatorie, nsoit de activarea complementului.
S-a stabilit c 2 complexe C567g9 (b) (legate de membran la locul de iniiere a
activaiei complementului) formeaz un complex major citolitic de o mas egal
cu 2 milioane Da. Complexul confer membranei permeabilitate, destabiliznd stratul
bilipidic i formnd canale integrale, ce permit ptrunderea apei, cu tumefierea i liza
celulei. Procesul e foarte intensiv. Un canal e capabil s distrug celula, dezorganiza
rea membranelor plasmatice constituind factorul primordial (fig.8.33).
Cascada complementului se regleaz astfel nct componentele active principale s
fie rapid inactivate prin 2 metode:
1) Sngele conine proteine specifice inhibitoare ce stvilesc cascada, legnd sau
scindnd unele componente ndat dup activare (C,);
2) Mecanismul e bazat pe instabilitatea unor componente active- dac ele nu se
leag imediat cu un anumit component al lanului sau cu membrana, rapid se inactiveaz
(C4 i C3b). Perioada de njumtire e mai mic dect 0,1 ms. De aceea, atacul
complementului e limitat de suprafaa membranei microorganismului i nu serspnde-
te asupra celulelor normale ale organismului.
F ig u r a 8 .3 3 . Schem a C 5-convcrtaza Canal R.O
asamblrii componentelor transmembranar
tardive ale com plem en
tului cu form area cana
lu lu i transm em branar,
compus din 12 molecule Cf
ale complexului citolitic
T-limfociteLe i imunitatea celular

Conin la suprafa receptori antigenici specifici, natura biochimic a lor nefiind
elucidat complet
La activarea cu antigen, aceste celule se nmulesc i se difereniaz n celule-
efectoare responsabile de reaciile imune celulare. Se atest cel puin trei reacii
diferite:
1) afecteaz specific celulele strine sau proprii, infectate de vimi;
2) favorizeaz rspunsul limfocitelor T i la antigen i pot activa macrofage;
3) confer un efect supresor asupra T i limfocitelor. Aceste funcii sunt determi
nate de diferite subpopulaii deT-celule: T-celule citotoxice (Tc),T-celule helpere
(Th-inductori) i T-celule supresoare (Ts).
Unele T-helpere reacioneaz la antigen, eliminnd anumite substane care activea
z diferite leucocite i limfocite, denumite limfokine sau interleukine (mesager ntre
leucocite). Acestea nu accept i nu interacioneaz cu antigenul.
Factorul perfect studiat i de o importan major, ce inhib migrarea macrofagelor,
e MIF (microphage inflamatoryfactor) care stopeaz migraia lor i-i depoziteaz n
regiunea unde-s activate T-celulele. i
activeaz favoriznd fagocitoza i liza -
mecanism ce servete la protejarea de
bacilul Koch. Acest efect st la baza
probei cu tuberculina intracutanat -
limfokininele provoac aglomerarea
macrofagilor ce formeaz o tumefiere
caracteristic - o reacie pozitiv. O
alt limfokinin, ce elimin numai un tip
anumit de T-helpere, e interleukina-2
-facto ru l de cretere aT-celulelor.
El se fixeaz de receptori pe suprafaa
T-celulei activate de antigen i stimu
leaz proliferaia lor. Receptorul e
compus din dou lanuri polipeptidi
ce - cel mare cu o mas molecular de
75 kJDaicelmic-55kDa(fig.8.34).
Fiecare lan se fixeaz de molecula
interleukinei-2. Interaciunea cu
catcna semnaleaz divizarea ce ^ M a c ro fa g e lc n g lo b e a z
lulei . Proliferarea T -limfocitelor poate a n tig e n ii
A A
fi redat astfel: macrofage, nglobnd an
tigenul, l prezint pe suprafaa sa, unde
antigenul va contacta cu T-celulele
specifice, activndu-le. Stimulate de
antigen, T -lim focitele secreteaz A n tig en u l a c tiv e a z
interleukina-2. Astfel, pe suprafaa lor T -lim fo citu l
se formeaz receptori specifici. Fixa

rea interleukinei-2 devine semnal pen
tru divizarea celulei. n final, apar T-
celule - fiice, ce reacioneaz la acelai
antigen (fig.8.35). T -lim fo-
citul inactiv
Clona celulelor antigenospecifice
identice va evolua atta timp ct, graie
activitii sistemului imun, va dispare
antigenul din organism.
Proliferarea clonei specifice se
stopeaz, ns T-celulele antigenospe C e l u l e l e
cifice rmase formeaz populaia de fiic e
memorare a sistemului imun. In te rle u k in a -2
& A n tig e n
T-limfocitele reprezint un tip unic de
F igu ra 8.35. Schema proliferrii T-limfocitelor
celule stimulate dc mterleukina-2. S-a
constatat c celulele cu NK activitate
(natural Killer) sunt stimulate de
interleukina-2. Aceste celule reprezint pn la 10% din numrul total de limfocite
circulante. Se consider c ele particip la protecia imun contra celulelor cancerige
ne. De altfel, ele determin i reacia primar a organismului la virus. Spre deosebire de
T-limfocite, NK-celulele nu posed receptori antigenici i, posibil, exist permanent n
stare activ. S-a constatat c n NK-celule poriunea mare a receptorului se sintetizeaz
ncontinuu la intervenia interleukinei-2. Dac cultura n permanen va conine antigen
i interleukina-2, T-celulele se vor reproduce ncontinuu. Anume astfel se elaboreaz
linii pure de T-celule de toate tipurile.
T-supresoarele funcioneaz numai n cazul n carc sunt permanent stimulate de T-
helpere, care, la rndul lor, sunt inhibate de supresor-autoreglarea prin retroinhibiie.
T-supresoarele provoac toleran la diferii antigeni (insensibilitate).
Unul din mecanismele ce determin interaciunea T-celulelor reglatoare cu B-celule
sau alte T const n identificarea antigenului impropriu fixat pe suprafaa celulei-int.
Limfocitele transmit semnalele prin secreia unor molecule specifice ce acioneaz
la distane relativ mari. Din T-limfocite au fost izolate proteine reglatoare solubile
-factorii Helper ifactorii supresori,factori cu proprieti specifice antigenice, la
fel ca i celulele ce le secreteaz. E posibil c ei reprezint receptori membrano-fixatori,
desprini de la celula T, care ar reaciona specific cu celulele B, inducnd n descendena
acestora sinteza de anticorpi specifici.
Reaciile la transplant reflect o ripost dat variantelor de antigeni strini de pe
suprafaa celular, fiind denumite antigeni ai histocompatibilitii. Dintre acetia, o
importan primordial o are familia de antigeni codificat de un complex de gene,
denumit complexul de histocompatibilitate major (MHC).
Antigenii acestui complex posed unele particulariti:
1) Ocup un loc prioritar printre antigenii-int dup rolul acestora n reaciile T-
celulare ale transplantului.
2) Aceti -antigeni strini accept un procent mare de T-limfocite (5-10%
de T-celule), pe cnd la un antigen obinuit reacioneaz mai puin de 0,1 % de T-celule.
Se evideniaz dou clase de MHC antigeni: la oameni - numite i HLA (Human-
leukocyte-antigen) - au fost descoperite primar n leucocite. Ambele clase (1 i 2)
denot un complex de glicoproteine ale suprafeei celulare (fig.8.36 a,b,c). La clasa I
reacioneaz celulele T-citotoxice, pe cnd T-helperele - la glicoproteinele strine de
clasa II. S-a stabilit c aceti antigeni, care stimuleaz dou subpopulaii diferite de T-
celule, au funcii diferite.
a -c a ten

Spaiul extracelular
2
OOC
, M em b ran a .
p lasm atic
Citozol
Figura 8.36. M H C glicoproteine. Molecula M H C -I e necovalent fixat cu 2- microglobulin, care-i

omoloag cu domeniul imunoglobulinelor i nu e codificat n MHC. D omeniul A de asemenea e
omolog cu cel din imunoglobuline.
Glicoproteinele MHC ale clasei I au proprieti anumite:

Y) Antigenii sunt situai pe suprafaa majoritii celulelor somatice, care posed
nucleu i reprezint pn la 1% din proteinele membranei plasmatice (5x105molecule
la celul).
2) Sunt asociai necovalent cu o protein mic - -microglobulin codificat de
o gen, localizat n alt cromozom - protein omoloag cu un domeniu de imunoglobu
line, ce indic asupra legturii evoluioniste ntre aceste proteine.
3) Locusurile ce codific aceste glicoproteine sunt cele mai polimorfe dintre toate
cele cunoscute pn azi, la animalele vertebrate superioare. n fiecare locus al fiecrei
specii exist un numr mare de alelee (forme alternative ale uneia i aceleiai gene).
Varietatea MHC difer de varietatea anticorpilor prin natura lor. Specia conine
sute de glicoproteine, ns individul mo
tenete ereditar cte o alel a fiecrui locus A n tig e n
de la fiecare din prini i de aceea acest
individ are maximum 2 forme de glicopro
teine respective, pe cnd anticorpii -
a c a te n
milioane.
Antigenii -Il nu se propag pe
larg, fiind caracteristici numai unor celule:
majoritatea B-limfocitelor, unele T-limfoci- N15
te, macrofage sau analogii lor. Se compun Legturi
din dou lanuri polipeptidice fixate neco disulfidice
valent ( a -33000 Da i - 28000 Da),

integrate n membran i glicozilate. Ma
joritatea T-limfocitelor identific antigenii
de la suprafaa celulelor doar atunci cnd
acetia sunt asociai cu MHC glicoprotei
ne proprii. Astfel de proprietate a T-limfo
citelor e denumit recunoaterea asocia
tiv a MHC. caten
Eventualul fenomen incit atenia T-
limfocitelor i o canalizeaz spre suprafe Spaiu extracelular
ele celulare, la care fiecare categorie de
antigeni emite rspuns imun specific.
Antigenii virali se asociaz numai cu
MHC-I i activeaz T-limfocitele citotoxi- M e m b r a m a
ce (viruii, practic, atac toate celulelc so plasm atic
matice cu nucleu). Antigenii bacterieni se
fixeaz de -II, stumulnd T-helperele
ce activeaz B-celulele i macrofage, apoi
am plific fagocitoza, cu implicarea
complementului. Citozol
Deocamdat, mecanismele moleculare -OOC
de identificare nu sunt descoperite. Sunt (a)
nregistrate doar date indirecte, care
confirm c unele T-helpere identific
F igu ra 8.36c. Structura M H C I proteinei
fragmente de macromolecule strine dcge- umane.
nerate, fixate de glicoproteinele -II i, ca rezultat, se activeaz T-helperele. T-
celula activ identific un complex analog de determinare antigenic cu -II pe
suprafaa B-celulei i o activeaz.
Nici mecanismul dc identificare a T-celulei i, simultan, a antigenului strin, precum i
a glicoproteinelor MHC, nu e limpede. Au T-celulele un receptor sau doi, diferii?
O sensibilitate deosebit a T-celulelor la moleculele strine de MHC n trans
plant elucideaz faptul c ele pot identifica antigenii strini numai n asociaie cu glico
proteinele MHC proprii. Posibil c multe T-celule reacioneaz cu glicoproteinele
MHC strine din cauza asemnrii complexelor moleculelor MHC proprii, cu fragmen
tele de antigeni strini. Ipoteza precum c glicoproteinele MHC se asociaz cu
antigenii strini i i prezint pe acetia T-celulelor explic polimorfismul deosebit al
moleculelor de MHC. n procesul evolutiv s-a creat varietatea mare de molecule
MHC n populaii capabile s fixeze modificrile antigenilor n microorganisme.
Rspuns im un la infecia viral
Un nou antigen este des vestitorul unui proces infecios - un semnal pentru sistemul
imun - c un virus sau alt parazit ar putea s se dezvolte rapid n organism. Puinele T i
celule care posed receptori sau anticorpi i pot lega antigenul trebuie s fie rapid i
selectiv propagate ca s nlture infecia. O infecie viral ipotetic este ilustrat n figura
8.37.
Cnd un virus infecteaz o celul, el profit de funciile i structurile ei, ca s replice
acidul nucleic propriu i s produc proteinele virale. Aflndu-se n interiorul celulei,
macromoleculele virale sunt relativ inaccesibile pentru anticorpii sistemului imun umoral.
Totui, unele proteine din clasa MHC -I sc vor deplasa spre suprafaa celulei infectate,
vor prezenta fragmente peptidice din proteinele virale, care apoi pot fi recunoscute de
ctre Tc limfocite. Viruii maturi devin vulnerabili fa de sistemul inum umoral cnd sunt
eliberai de celulele infectate i sunt prezeni pentru un timp n mediul extracelular. Unii
sunt apoi ingerai de macrofage, care ingereaz doar acei antigeni care sunt recunoscui
de ctre anticorpii produi de anumite B-celule. Fragmentele de peptide virale vor fi
prezentate pe suprafaa macrofagelor i a B-celulelor, fixate de proteinele MHC-II.
Antigenele peptidece vor declana un rspuns multicomponent ce antreneaz celule B,Tc
iT H.
Complexele protein-peptid MHC-I de pe celulele infectate sunt recunoscute ca
strine i sunt fixate de receptorii T-celulelor ce au specifitate respectiv. Receptorii T-
cclulelor rspund doar la antigenii peptidici legai cu proteinele MHC-I. Celulele Tc
posed un receptor adiional CD8, numit coreceptor, care intensific interaciunea
receptorilor T celulelor cu proteinele MHC. Celulele Tc activeaz cu celule T-killer i
lizeaz celulele infectate cu virui. Moartea celulei este cauzat de mai multe mecanisme,
unele nenelese. Un mecanism implic eliberarea perforinei - protein ce se leag i
agregheaz la membranele plasmatice a celulei-int, fonnnd pori care distrug capacitatea
celulei de a regla mediul intem. Celulele Tc de asemenea induc apoptoza, n care celulele
complexate la Tc sufer modificri metabolice ce conduc la emisia celulei.
Celulele Tc cu specificitate adecvat trebuie s prolifereze selectiv, dac e prezent un
numr marc de celule infectate cu virui. n acest scop, celulele Tc se fixeaz la celula
- I proteina prezint I II i CD* I CDS
Celula - gazd Patogeni virali
peptide celulare R e c e p to r ^ Interleukina 2,4
Tc Interleukina *_______
Celula lezat elibereaz particule virale i

C elula este infectati jantigeni, uncie sunt fixate de anticorpi
posed peptide - gazd a
virale
Anticorpi solubili
Celula infectat
i Tc
interacioneaz B-celul
prin MHC-I i IgG Fc rcccptor
peptide virale
via Tc rcccptor B-celula produce
i coreccptor anticorpi virali
CD8
Tc rcccptop-' Tc-cclul
V irusul fixat dc
CD8 , anticorpi este ingerat
Interleukina rcccptor dc macrofage. 4
Tc receptor
P cptidclc v irale sunt
pozentate de MHC II
,-cclulj
Interleukina 2
Interleukina 4
C elula cu -II i
proteinele virale fixate la
T H, prin interm ediul Tc
rcccptor i CD4. cclulelc
Celula infectat M acrofage cu
p rolifereaz i produc
lezat dc Tc-celul -II fixat la
/anticorpi solubili, stimula-
TH cclule via Tc
Tc i TH - eclulc fixate la / tc dc intcrlcukinc
rcccptor i CD4.
cclulclc infcctatc mature i
proliferate, stimulate dc
intcrlcukinc Cclulclc - memorie - Tc,TH,B
Figura 8.37. Rspuns imun posibil la infecia viral
infectat care genereaz receptori celulari la suprafa pentru proteinele dc semnalare

numite interleukine. Interleukinele secretate de ctre o varietate de celule stimuleaz
proliferarea doar a celulelor i T purttoare de receptori respectivi. Cclule ale sistemului
imun ce prolifereaz i rspund la antigeni sunt puine. Procesul de generare a unei populaii
de celule prin reproducere special este numit selecie clonal.
Peptidele fixate Ia proteinele -II i prezentate pe suprefeele macrofagelor i B-
limfocitelor sunt legate similar de receptorii specifici ai Tff -celulelor. Ultimele, de asemenea
posed un coreccptor numit CD4, care stimuleaz interaciunile cu receptorii T-celulclor.
Aceast interaciune n asociere cu semnalele moleculare secundare, care sunt
identificate curent, activeaz TH- celulele. O subpopuiaie de T - celule activate
secreteaz o protein de semnalare mic - interleukina 2, care stimuleaz proliferarea
celulelor. Tc i TH-celulele au receptori corespunztori. n fmal, sporete esenial numrul
celulelor sistemului imun, capabile s recunoasc i s rspund la antigeni.
O alt subpopulaie de TH-celule activate fixate la macrofage i B- limfocite
secreteaz interleukina 4 care intensific proliferarea celulelor ce recunosc antigenul.
Proliferarea celulelor B, Tc i THcontinu atta timp ct antigenul respectiv este
prezent. Celulele proliferative promoveaz distrugerea viruilor i/sau a celulelor
bacteriene. n primul rnd, ele secreteaz o cantitate mare de anticorpi solubili care se
leag cu antigenul. Aceti anticorpi fixai activeaz un sistem celular complex compus
din 20 proteine, numit complement. Acest sistem completeaz i stimuleaz aciunea
anticorpilor. Proteinele sistemului distrug nveliul multor virui sau infecii bacteriene,
produc guri n pereii celulari, cauznd tumefierea i liza prin oc osmotic.
Spre deosebire de T-celule, B-celulele nu sufer selecie n timus ca s elimine anticorpi
ce recunosc proteinele proprii. Oricum, B-celulele nu contribuie semnificativ la rspunsul
imun, dac nu sunt stimulate de ctre TH-celule. Celulele TH particip doar indirect n
liza celulelor infectate i agenilor patogeni, rolul lor este critic n rspunsul imun. Aceasta
devine evident la pandemiile provocate de HIV-virui. nta infeciei HIV sunt TH-
celulele. Eliminarea acestor celule degenereaz ntregul sistem imunitar. O dat ce
antigenul este epuizat, celelule imune activate mor prin apoptoz. Oricum, puine celule
i T stimulate se maturizeaz n celulele memoriei. Acestea sunt celule cu o durat
lung a vieii, care nu particip direct la rspunsul imun primar. n schimb, ele devin
rezideni permaneni ai sngelui capabil s respund la reapariia antigenilor corespunztori.
Celulele memoriei cnd sunt ulterior provocate de ctre antigen pot intensifica rspunsul
imun secundar din cauza expansiunii donate anterioare. Prin acest mecanism, vertebratele
o dat expuse la virus sau alt agent patogen pot rspunde rapid la o intervenie nou.
Asta este temelia imunitii de lung durat, oferit de ctre vaccine, i a imunitii
naturale la infeciile repetate de ctre aceeai specie de virui.
Superantigenii sunt proteine care confer sistemului imun istovire, autodistrugere.
Aceste proteine sunt capabile s activeze fiecare a cinceaT-limfocit (normal 1 din
10000), majoritatea crora sunt inutile N-terminal C-terminal
n lupta cu infeciile obinuite. De
asemenea, sunt n stare s provoace un
atac autoimun, cu un efect contrar.
Reprezentant a impactului e grupa de
proteine -enterotoxinele stafilococe,
provocatoare ale sindromului de oc
toxic.
Numeroi indici pledeaz pentru
concepia c la baza efectului patoge-
nic al enterotoxinelor st capacitatea lor F ig u r a 8 .3 8 . Form a cilindric e caracteristic
de a stimula formarea interleukinei-2 superantigenilor S.aureus. Sunt prezentatefragmentele
de -struclur. Predominarea -structurii exponeaz
n cantiti enorme. molecula proteic n mediu pentru o interaciune major
cu alte molecule
Stadiile recente confirm c enterotoxinele reprezint proteine cu dimensiuni mijlocii
i coninut mare de aminoacizi hidrofili. Majoritatea moleculelor au -structar. Exist
ns i segmente de a-spiral-m olecul relativ necompact (fig.8.38).
Enterotoxinele se comport ca antigeni obinuii, dar au i unele particulariti
distinctive. Pentru ca T-limfocitul helper s accepte un antigen proteic obinuit, trebuie
s fie supus procesingului n macrofage sau n alte celule ce i reprezint. Aceste celule,
nglobnd molecula de antigen, o scindeaz n peptide mici, ce sunt expuse pe suprafaa
celular, n complex cu proteinele din -Il. Peptida e plasat n molecula MHC
conform structurii sale. Apoi antigenul expus se leag cu un numr mic de T-helpere ce
posed receptori specifici pentru peptide concrete.
Enterotoxinele, spre deosebire de T-helpere, se fixeaz de moleculele MHC
direct, fr perioada de nglobare i transformare: T-limfocitele sunt capabile s inter-
acioneze cu toxinele intacte. Molecula T-receptor celular, compus din oc i catene
polipeptidice, are fragmente constante i variabile dup componenta aminoacidic
(fig.8.39).
Se consider c enterotoxinele se fixeaz de V-fragmente n -lan{ n acea poriune
care nu particip la legarea antigenului obinuit. Fiecare endotoxin manifest afinitate
20% de T-limfocite
fixeaz regiunea Vb
T-limfocit
-lim focitele secreteaz

Simptome determinate cantiti enorme dc
dc interleukina -2 n interleukina -2
surplus: stare febril,
N'vom, diaree, oc
se rcplic, cu
formarea unei cantiti
Reacii majore
Inhibarea sistemului imun.

T-limfocitele pot, dup activare, s moar i, ca rezultat, rezistena la
infecie devine imposibil. Ca excepie, poate inhiba reaciilc autoimune
fa de un tip anumit V-fragment. S-a constatat c organismul omului conine mai mult
de 30 tipuri de V-segmente, ceea ce ofer posibilitate enterotoxinelor s interacione-
ze cu o cantitate marc de celule.
Savanii consider c superantigenii au un rol deosebit la imunodeficien pe fun
dalul cancerului i SIDA. Deocamdat, nu poate fi ignorat i efectul negativ al superan
tigenilor asupra B-limfocitelor.
Investigaiile la obiect au permis concluzionarea c, utiliznd diferite fragmente pepti
dice cu proprieti diferite, e posibil elaborarea unor preparate medicinale, n baza
superantigenilor, pentru corecia sistemului imun.
Sistemul imun protejeaz organismul uman de tumori de natur virotic. Imunitatea
contra tumorilor induse de virui nu se deosebete cu nimic de imunitatea contra altor
infecii virale. Tumorile pot fi lichidate de macrofage sau de celulele-Killer naturale,
celule nu prea mari, similare cu limfocitele. Spontan i relativ nespecific, ele distrug
efectiv celulele tumorale. Celulele date nu necesit ca propria lor celul-int s fie
acoperit cu anticorpi.
Cele reflectate se refer, n special, la considerentul de apreciere a sistemului imun
drept unic printre alte sisteme.
LITERATURA
]. Biochimie clinic (Patochimie). Eugen Mody, Ileana Funduc, RuxandraAlexandrescu,
Minodora Dobreanu - Bucureti: ALL EDUCATIONAL, 2000.
2. Biochimie clinic. Fundamentare fiziopatologic/ sub redacia M.Cucuianu, I.Crsnic,
Luminia Pleca-Manea, Dacia, 1998.
3. Biochimia (probleme actuale, teste)/ Leonid Lsi; Univ. de Stat de Medicin i
FarmacieNicolae Testem ianu.-Ch.: Centrul Ed.-Poligr. Al USMF,2003.
4. BhagavanN.V.Medical Biochemistry. Fourth edition, Academic Press, 2002.
5. Champe, Pamela C.Biochemistry/ Pamela . Champe, Richard A. Harvey, p.cm. -
(Lippincotf s Illustrated Reviews). Includes index.
6. Campbell Peter N., Smith Anthony D.Biochemistry illustrated. International edition.
2000 .
7. Dati Francesco, Metzman Erwin. Proteins. Laboratory testing and clinical use.
Includes index, 2005, Holzheim, Germany.
8. Diaconescu Luminia. Biochimie metabolic. Luminia Diaconescu, Cristina Drugan,
Gheorghe Jebeleanu. Cluj-Napoca, SRIMA, 2001.
9. Garban Zeno. Biochimie: Tratat comprehensiv/Zeno Garban. Editura Didactic i
Pedagogic, R.A. Bucureti. Ediia 2-a, 1999.
10. Halkerston, Ian D.K. Biochemistry. (The national medical series for independent
study). Includes index. 2nd edition, 1988.
11. Lsi 1., Ivasi Gh., Mucua A. Biochimia n teste. G.E.P. USMF Medicina, Chiinu
- 1997.
12. Lsi L. Biochimie. Chiinu, 1999.
13. Marshall William J. Clinical Chemistry. Fourth Edition, 2000.
14. Metzler David E. Biochemistry. The chemical reactions of living cells. Second edition.
Volume 1. Academic Press, 2003.
15. Metzler David E. Biochemistry. The chemical reactions of living cells. Second edition.
Volume 2. Academic Press, 2003.
16. Murray Robert K., Granner Daryl K., Mayes Peter A., Rodwell Victor W. Harper's
Illustrated Biochemistry, Twenty-Sixth Edition. International Edition, 2003.
17. David L. Nelson, Michael M. Cox. Lehninger principles o f biochemistry/-3rd
ed.p.cm. Includes index. 2000.
18. Olteanu Ileana. Biochimie descreptiv. Editura Medical Universitar Iuliu
Haieganu.Cluj-Napoca, 2001.
19. Olteanu Ileana, Gheorghe Jebeleanu. Biochimie metabolic. Editura Medical
Universitar Iuliu Haieganu.Cluj-Napoca, 2002.
20. Oxford dictionary of Biochemistry and molecular biology. Revised edition. Library
of Congress Cataloging in Publication Data. 2000.
21. Quantities, symbols, units, and abbreviations in the life sciences: a guide for authors
and editors/compiled by Amost Kotyk. Includes bibliographical references. 1999.
22. Weil Jacques-Henry. Biochimie generale. 9e edition. Dunod, Paris, 2001.
23. .., A.A.
.-.: , 2000.
INDEX
A Acid benzoic 373
A betalipoproteinem ie fam ilial 343 Acid 2,3-bifosfogliceric v. 2,3-bifosfoglicerat 452
Ac v. anticorp 500 Acid butiric 271
ACAT v. acil-CoA-colcstcrol acil-transfcraz 338 Acid capric 271
Acetalfosfatid v. plasmalogene 273 Acid caprilic 271
Acetat tiokinaz 383 Acid caproic 271
Acetil-C oA 174,181,184,185,383,503 Acid carbamilfosforic v. carbamilfosfat 416,369
Acetil-CoA carboxilaz v. acetil-CoA carboxiligaza 323 Acid carbam ilaspartic v. carbamilaspartat 416
Acetil-CoA carboxiligaza 86,503 Acid y-carboxiglutam ic 14,17,92.521,522,559,564
A cetilcholin 354,452 Acid a-cetoglutaric v. a-cetoglutarat 494
A cetilcholincsteraz 75,553 Acid colanic 299
N -A cetil-galactozam in 259,370 Acid colic 299
N -A cctil-glucozam in 219,221,259,370 Acid dehidroascorbic v. dehidroascorbat 91,249
N -A cetilglutam at 370 Acid dezoxicolic 280,299
N -A cetilglutam at sintaza 370 Acid a,e-diam inocaproic v. lizin 14,16,19,28,30
A cetoacetat 319 Acid a,S-diaminovalerianic v. omitin 14
A cetoacetil-CoA 319 Acid dihidrofolic v. dihidrofolat 418
Aceton 319 Acid dihidroorotic v. dihidroorotat 416
Acid acetil-lipoic 184 Acid 3,7-dihidroxicolanic v. acid chenodezoxicolic 299
Acid aconitic v. aconitat 185 Acid 3,12-dihidroxicolanic v. acid dezoxicolic 299
Acid adenilic v. AMP 409 Acid eicosatetraenoic v. acid arahidonic 327,346
Acid adenilosuccinic v.adenilosuccinat 409 Acid fenilacetic v. fenilacetat 392
Acid adenozinm onofosforic v. AMP 409, 441, 449 Acid fenillactic v. fenillactat 392
Acid aminoacetic v. glicina 14,16,19,41 Acid fenilpiruvic v. fenilpiruvat 392
Acid ct-amino-y-amidoglutaric v. glutam in 14,16,19 Acid fitic 219,517
Acid a-am ino--am idosuccinic v. asparagina Acid folie v. folat 79,91,401,409,503
14.16.19.28 Acid form im inoglutam ic 400
Acid a-amino-S-amindinovalerianic v. citrulin 14,17 Acid fosfatidic 273
Acid p-am inobenzoic 17,91,401,503,504 Acid glicochenodezoxicolic 299
Acid a-am inobutiric v. am inobutirat 276,366 Acid gluconic 218
Acid y-am inobutiric 18,366,500 Acid glucuronic 218,249,477,521
Acid a-am ino-p-fenil-propionic v. fenilalanin Acid glutam ic 14,15,19,28.30,91,92,384
14.15.19 Acid gras polinesaturat 272,520
Acid a-am inoglutaric v. glutamic 14,15,19,28,30 Acid gras sintaza 83,327
Acid a-am ino-S-guanidin-valerianic v.arginina Acid guanilic 409
14.16.19.28 Acid guanozindifosforic v. GDP 409
Acid a-am ino--hidroxibutiric v. treonin Acid hialuronic v. hialuronat 579
14.16.19.28 Acid p-hidroxifenilpiruvic v. p-hidroxifenilpiruvat 391
Acid a-am ino-Y -hidroxibutiric v. hom oserin 17 Acid hidroxinervonic 273
Acid a-am ino--hidroxipropionic v. serina Acid hipuric 373
14.16.19.28.30 Acid hom ogentizic v. hom ogentizat 389,390,393
Acid a-am ino--im idazolilpropionic v. histidin Acid inozinic v. IMP 407,408,409
14.16.19 Acid lactic v. lactat 239,318
Acid a-am ino--indolil-propionic v. triptofan Acid lauric 271
14.16.19 Acid lignoceric 271,275
Acid -am inoizobutiric v. -am inoizobutirat 420 Acid linoleic 272
Acid a-am inoizocaproic v. leucin 14,15,19 Acid linolenic 272
Acid a-am inoizovalcrianic v. valin 14,15,19,28,30 Acid lipoic 181,182
Acid -am inolevulinic 18,374,430 Acid litocolic 280
Acid a-am ino-S-m ctiltiobutiric v. m etionina 14, Acid mevalonic v. m evalonat 336,337
15.19,30,92 Acid m iristic 271
Acid a-am ino--m etil-valcrianic v. izolcucin Acid nalidixic 135,162
14.15.28.30 Acid nervonic 272,275
Acid a-am inopropionic v. alanina 14,15,19 Acid neuram inic 219,221
Acid -aminopropionic v. -alanin 14,17 Acid oleic 272
Acid a-am inosuccinic v. acid aspartic 14,15.19,30 Acid orotic v. orotat 416
Acid a-am ino--tiobuturic v. hom ocistcin 18 Acid orotidilic v. OMP 416
Acid a-am ino--tiopropionic v. cisteina 14,16,19, Acid oxalic v. oxalat 375,377
Acid arahic 272 Acid palm itic 271
Acid a-argininosuccinic vezi argininosuccinat 369 Acid palm itoleic 272
Acid ascorbic 91,250,494,508,509,521 Acid pantoic 90,501,502
Acid behenic 271 Acid pantotenic 90.323,492,493,501,502
Acid paraclorom ercuribenzoic 75,80 Alcool dehidrogenaz 73,83,94,240,251
Acid a-pirolidincarboxilic v.prolina 14,15,28,30,41 Aldchid dehidrogenaz 251
Acid piruvic v. piruvat 230,406 Aldimin v. baz Schiff 367
Acid prostanoic 347 Aldolaz 86,236,251,553
Acid retinoic 93,277.510,511,514,515 A ldopentoz 214
Acid sialic 219,222,225,467,468 A ldosteron 443,475-479,481
Acid taurochem odezoxicoiic 299 Aldoz 214
Acid taurocolic v. taurocolat 299 Aldorcductaz 253
Acid tetrahidrofolic v. telrahidrofolat 91,401,402 Alopurinol 413
Acid timidilic v. TMP 418 Aloz 215,218
Acid tim idinm onofosforic v. TM P 418 A ltroz 215
Acid 3a,7a,12a-trihidroxicolanic v. acid colic 299 a-A m anitin 162,135
Acid uric 368,411-413,549 Am idofosforibozil transferaz 407
Acid uridilic v. UMP 416 Am idon 214,220
Acid uridinm onofosforic v. UMP 416 Am ilaz 67,85,224,225,226,552,553
Acid urocanic 387 A m ilopectin 220,224
Acid uronic v. acid alduronic 217 Am iloz 220,224
Acid zaharic v. acid aldaric 217 Amine biogene 368
Acidoz 243 A m inoacid 139,141,152,155,549,550
A ciclovir 161 Am inoacid cetogen 373
Acil-CoA 196,312,313 L-Aminoacid dccarboxilaz 366
A cil-C oA -colcstcrol aciltransteraz 338 Aminoacid esenial 358
Acil-CoA dehidrogenaz 196,314,318 Am inoacid glucoform ator 373
Acil-CoA dcsaturaz 327 D-Aminoacid oxidaz 363
Acil-CoA oxidaz 327 dAM P 97,99
Acil-CoA sintetaze 312 L-Aminoacid oxidaz 363
Acil-colesterol 343 Aminoacid neesenial 358
A cilgliceroli 372 Aminoacil adenilat 152
Acizi biliari 278 Am inoacil-RN A 162,109,152,154,162
Acizi biliari conjugaji 298 Am inoacil-RNA sintetaz 109,152,153
Acizi biliari primari 298 y-A m inobutirat 367
Acizi biliari secundari 298 -A m inoizobutirat 419
Acizi grai 271 8-A m inolevulinat 430
Acizi grai eseniali 271 8-AminoIevulinat dehidrataza 430
Acizi nucleici 95-110,171 S-A m inolcvulinat sintaz 374,430
A conitat 185 A m inopcptidaz 85,355
A conitaz 86,185 A m inotransferaza 90,364
Acridin 143 AMP 97, 98, 177, 179, 240, 409, 460, 462, 463
ACTH v. corticotropin 446 AMP ciclic 232,441,449,450,453,454,457,459
A ctin 12,531,542,543 3,5 -AMP v. AMPc 232
A ctinom icin D 143,162,135,205 AMP dezaminaz 535
A ciune antirahitic 516,518,520 AM Pc 98,163,164,310
Adducina 531 Am oniac 368,550
Adenilare 405 Anabolism 174,175
A denilat ciclaz 82,449,450,453,463,464,488,563 Analbuminemia 527
A dcnilatkinaz 85,179,194,532,542 Androgen 444,446,486
Adenilosuccinat 409 A ndrostendion 476,488
A denin 95-97,99,101,107,139,141,144 Angiotensin I 473,475
Adenin fosforibozil transferaz 410 A ngiotensin II 41,471,473,475
S-A denozilhom ocistein 378,403 Angiotensinaz 473,475
S-A dcnozilm ctionin 18,133,378,403.484 Angiotensinogen 473,475
A dcnozin 97 A. Angstrom 28
Adenozin monofosfat v. AMP 409 Anhidraza carbonic 49,66,68,94,554
ADP 97,98,176.-179,192,530 Anioni 523,546,547
A drenalin 41,443-445,449,450,482,485,542 Anchirina 531
A erodcrm atita cntcropatic 548 Anomerie 216
Aglicon 214 Antagonist 559
Agregate moleculare 542 A nticodon 108,109,139-141,144,154,155
A lanin 14,257.368.372,376,399 Anticorp v. imunoglobulin 589
-A lanin 367,419.501,553 Antigen 146,585
S-ALAS v. 8-aminolevulinat sintetaz 430 Antimicin A 195,200
A lantoin 413, A ntioxidant 93,509,510,520,534,535
A lbum ina 29,45.526,528 ocj-A ntichim olripsina 527
Alcaplon v. hom ogentizat 390 a^-A ntiplasm ina 527
A lcaptonurie 393 a j-A n tip ro tc a z 527
Ctj-A ntitripsina 527 B ifosfoglicerat mutaz 532,533
A ntitrom bin 527,567-569 Boala Andersen 230
Am inoacid scm icscnial 359 Boala Frber 344
A ntivitam in 493 Boala Fanconi 358
Ap 52,523,530,544 Boala Forbes 230
Ap legat 52,530 Boala Gaucher 344
Ap. oxigenat 481,534,535,539,540 Boala Gilbert 439
A pocnzim 60 Boala von Gierke 230
A polipoproteina A 306 Boala Hartnup 396
A polipoproteina 306 Boala Hers 230
A polipoproteina B4S 306 Boala Krabbe 344
A polipoproteina B 100 306 Boala Mc Ardle 229
A polipoproteina 306 Boala Niem an-Pick 344
A polipoproteina D 306 Boala Sandhoff 344
A polipoproteina E 306 Boala Tay-Sachs 344
A poprotcin 306 Boala W ilson S28.439
APRT v. adcninfosforibozil transferaz 410 Boala urinei cu miros do arar 389
Arabinoz 215 Bohr, efect 425
A rahidonat 543,563 2,3 BPG v. 2,3-bifosfoglicerat 425
A rginaz 369,370,552 Bradikinin 41,561
A rginin 369,370
A rginin-succinat 369,370 C a2+ 456-459, 462-464, 468, 470, 517, 521
A rgininosuccinat liaz 370 CAAT, caseta 131,136
A ril-sulfataz 582 Cadavcrin 360
A scorbatoxidaza 49 Calcitonin 443,450,470
A sparagina 14,372,384,399 Calciu extracelular 456,457,458,470,477
A sparaginaz 384 Calciu plasm atic 524,525,530,545
A sparagin sintetaz 372 Calciu intracelular 456-458
A spartat 368,383,399,498 Calciu ionizat 545
A spartat am inotransferaz v. GOT 84,211,365 Calea Einbden-M ejerhof 235
A spartat carbam il transferaz 415 Calea glucuronatului 249
A spartattranscarbam ilaz v. Calea LDL 343
A spartatcarbam iltransfcraz 415 C alea pentozofosfailor 244,534,535
A spirina 341 Calm odulin 457,458,540,543
A purinizare 116,143 Calcechestrina 542
Atac nucleofil 113,130 C apacitate tampon 554,555,556
A teroscleroza 341 Carbam ilaspartat 415
ATP 98.111,112,130,152,153,175-179, 192, 193 Carbam ilfosfat 369,370
ATP-az v. ATP fosfohidrolaz 84,193 Carbam ilfosfat sintetaz 370,484
ATP-az Na/K dependent 204,205.225 Carbam ilfosfat sintetaz (glutam in) 415,416
ATP fosfohidrolaz 85,193,202,203,205,206 Carbamilfosfat sintetaz mitocondrial 370
A zidotim idin 129,151,419 C arbanhidroza 354,355.428
Carboxilare 157
B alan azotat 351 Carboxikinaza 157
Bayliss, W. 442 Carboxipcptidaz 66,94,355
Baz minor 95,96 Cardiolipin v. difosfatidil glicerol 273
Baz major 95,96 C aren vitam inic 493,496,498-504,507,508
Baz Schiff 246,365,367 C am itin 17, 312
Bctain 377,379 Carnitin aciltransferaz 312
Bilirubin 431,550 a-C aroten 276,510
Bilirubin conjugat 432,458 -Caroten 276,510,511,516
Bilirubin direct 432,458 Y-Caroten 276,510
Bilirubin indircct 432 Carotcnoizi 276,510,511,514
Bilirubina liber 432 Catabolism 174,175
Bilirubin neconjugat 432 Catalaz 66,68,84,93,201,247,535,539
Bilirubin seric total 436 Cataliz 69
Bilirubindiglucuronid 432 C atecolam ine 444,445,448,482-485
Bilirubinm onoglucuronid 432 Caten lider 112,114,117
Biliverdin 431 Caten succesor 112,114
B iocncrgctic 171 Caten sens 130
B iotin 91,504-502, Caten antisens 130
1.3-B ifosfoglicerat 237,531 Cationi 542-546
2.3-B ifosfoglicerat 532,533,536 Cazcin 48,352
Bifosfoglicerat fosfataz 533 (cortisol-binding protein) 473
B ifosfogliccrat kinaz 532,533 CDP 97
C D P-cholin 330 Citocrom oxidaz v. complexul respirator IV
CDP-diacilglicerol 329 93,94.195,199
CDP-diglicerid v. CDP-diacilglicerol 329 C itocrom P450 213,436
C D P-clanolam in 331 Citozin 95. *>7, 99, 101, 107, 116, 118, 139, 141
Ccfalin v. fosfalidilctanolam in 273 C itrat 44,185,240,515
Celobioz 221 C itrat sintaza 86,185,517
Celule 470 Citrulin 14,17,370
Cclule Leydig 467,488 Clatrina 340
Celule Sertoli 467,488 Clonarea genelor 148
Celuloz 220.221 Clon 146
Centrul activ enzim atic 63 Cloram fenicol 162
Centrul catalitic 63 CMP 97
Ceramida 270 d-CM P 97,99
Cerebrozid 274 CoA v. coenzima A 181
Ccride v. ceruri 273 Cobalt 547
Ceruri 273 Cod genetic 139,140
C eruloplasm in 49,256,528,548.551 Codoni 139-141,154,155
Cctimin v. baz Schiff 366 Codoni dc iniiere 140,153,161
C etogcncz 319 Codoni nonsens 139-141,144-156
a -C etoglutarat 44,87,186,363 Codoni sinonimi 139,141
a-C ctoglutarat dehidrogenaz 186.188,196 Coenzima 60, 87, 493, 498, 495-501, 504-505
C ech.T 138 Coenzima A 90,501-502
C etonem ie 267,321 Coenzima Q 195,196,197
C etonurie 267,321 C ofactor 60,93
Cctonurie interm itent 389 Colagen 12.30,94,571,575
Cetoz 214 Colagcnaz 577
Chargaff, E. 99 C olecalciferol 446,470,516-519
Chelai 11,42 Colccistokinin 355
Chilom icroni 301 Colesterol 339
C him otripsin 28,65,69,354,527 Colesterol esteraz 468
C him otripsinogen 72, 354 Colesterol seric 466,467,471.474,478
C him ozina 352 C olesterolaciltransferaza 468
Chiralic, centru 8,14,216 Cholin 375
C iancobalam in 92,94,505-507,536,538 Com plex enzim a-substrat 63,64,66,67,69,79
Ciaperonine 35, 159 Complex m ajor de histocom patibilitate v.MNC 600
Ciclodexim ida 162 Com plex m ultienzim atic 70,82,111,113,181,193
C iclooxigenaz 348,542 Comlexul piruvatdehidrogenazic 181
C iclopentanoperhidrofcnantren 277 Complex respirator I (v. NADH CoQ
Ciclul acidului citric 185 oxidorcductaz) 195,196,200
Ciclul acizilor tricarboxilici 83,185 Complex respirator II (v. succinat CoQ
Ciclul alanin-glucoz 256,372 oxidorcductaz) 195,197
Ciclul Cori v. ciclul lactat-glucoz 256 Complex respirator III (v. CoQ citocrom
Ciclul Fclig-M alctte v, c, alanin-glucoz 256,372 rcductaz) 195,197,198,200
Ciclul Y~glutamil 357 Complex respirator IV (v. citocromoxidaz)
Ciclul lactat-glucoz 256 93,94,195,198,200
Ciclul rodopsinei 512-514 Complex de iniiere 153
Ciclul ATP 176 Compui macroergici 177
Ciclul Shemin 374 Constanta de sedim entare 109
Ciclul Krebs-Henseleit v. ciclul ureogenctic 369 C ondroitin-6-sulfat 515,579
Ciclul Rapoport 532,533 C ondroitin-4-sulfat 579
Ciclul ureogenctic 369 C oproporfirie ereditar 432
C istein 196,364,378-383 Coproporfirii secundare 433
Cistein dioxigenaza 380 C oproporftrin 432
Cistin 378 C oproporfirin III 432
Cistin reductaz 380,459 C oproporfirinogen 432
Cistinuria 382 Coproporfirinogen I 432
Cistenoza 382 C oproporfirinogen III 432
Citidin 97 Coproporfirinogen III oxidaz 432
Citidin trifosfat v. CTP 415 C orepresor 163
Citocrom i 80.195,197 Corey, R. 26,27
Citocrom a 195 Corpi cctonici 550
Citocrom a- 195 C orticosteroid 446,448,444,462,475-480
Citocrom b j 436,534, C orticostcron 278,443,446,475,476
Citocrom 32.38,195,197,198,209 Corticotropin 443, 446, 450, 463, 465, 466, 469
C itocrom I 195,197,198 C ortizol 443,446,466,475-480
CP v. creatinfosfat 398 Dihidrouridin 108
CPK v. crcatinfosfokinaz 398 D ihidroxiaceton 214,215,246
C reatin 398,549,550 D ihidroxiaceton fosfatul 211,236
C reatinfosfat 177, 398 la.25-D ihidroxicolecalciferol 446, 470, 516-518,
C reatinfosfokinaz 74,82, 398,553 24,25-D ihidrohicolecalciferol 516,517
C reatinkinaza v. creatin fosfokinaz 398 D iiodotironin 473,474
C reatinin 398,520,549,550 D iiodotirozin 471,472,473
Crick, F 100,106,111,139,152 D iizopropilfluorfosfatul 75
C rom atin 105,117,135 Dim er de pirimedina 115,116
C rom atografie 54,55,56 2,4-D initrofenol 207
C rom oproteine 421 Dioxid de carbon 181,186
C rom ozom i 105,117,119,123,124,145,146 D ipeptidaz 355
CTP 97,130,153, 415 Dizaharid dicarbonilic v. maltoza lactoza 220
d-C T P 97 Dizaharid monocarbonilic v. zaharoza 220
CTP sintetaz 415 Dizaharid nereductor v. zaharoza 220
Cu2+ 200,486,528,548 Dizaharid reductor v. maltoza lactoza 220
Cuplare chim ic 202 Domenii structurale 33,35,45
D DOPA 262,367.469,482,483
D, seric optic 19 DOPA dccarboxilaz 367,485
D ecarboxilare 90,181,362,366,368 DOPAm in 367,482,483
D ecarboxilare oxidativ a piruvatului 181,498 DOPAmin hidroxilaz 367,483,484
D ccarboxilaz 366 Dubla elice de DNA 100,102,104,105,111,130.137
Decuplarea fosforilrii oxidative 208 Dublu helix RNA 107,
D ehidroascorbat 91,250,508,509 E
7-D ehidrocolesterol 343,516,518 Echilibru acido-bazic 554-556
11-D ehidrocorticosteron 478, Edman P. 24
D ehidrocpiandrosteron 475,476 Efect Bohr 425
Defcnsine 537 Efect Wolf-C.haikoff 473
Dcioduraz 473 Efect Wobble 140
D enaturare proteine 53 Eicosanoizii 346
Denaturare DNA 104 Elastaz 65, 355,578
D erm atorparacsis 575 E lastin 12,94,571,577
D esm ozin 14,18,577,578 Elem ente figurale 523-529
D eterm inant antigenic 586 E lipsocitoza 531
D cxtrin 224 Elongarea DNA 113,114
D ezam inare 362 Elongarea RNA 131
Dezam inare indirect 366 Elongarea lanului polipeplidic 154
D ezam inare oxidativ 363 Enantiom eri 8, 214
5-D czoxiadenozilcobalam in 92, 404,506,507 Encefalin 446
D ezoxiadenozin 97 Endonuclcaz 115,116,147
D ezoxicitidin 97,151 Endopcptidaz 351,354
11-D czoxicorticosteron 478 Endoteline 40
11-D ezoxicortizol 477,478 Endorfm 446,466
D ezoxiguanozin 97 a-E ndorfin 465
D ezoxiribonucleotide 97,415 -E ndorfin 446,465
D ezoxiribonucleaze 406 y-E ndorfin 465
D czoxiribonucleozide 97 Energic intern 172
D ezoxiriboz 97,214 Energie 98,171,194
Dezoxitim idin 97 F.nergic liber 172,177,180
Diacilglicerol 454,455,543,563 Enhanccr (sccvcn) 136,164,165
Dializa 50,54 Energie liber de rcacie standard 172,177,193
Diam inoxidaza 367,368 Enoil-CoA 314
D ideoxitim idina 129 Enoil-CoA hidrataz 314
D ideoxiinozina 129 Enolaz 238,242
D ideoxiguanozina 129 E ntropie 171
1.3-D ifosfoglicerat v, bifosfoglicerat 237 Enzim dc ramifierc 228
2.3-D ifosfoglicerat 425 E ntcrokinaz v. enteropeptidaz 354
Difuzia 50, Enzim dc ramifierc 230,231
Digestia lipidelor 224 Enzime alosterice 70
Dihidrobioptcrin 389,482 Enzime constructive 163
Dihidrofolat 418 Enzime inductibile 66, 163
D ihidrofolat rcductaz 417 Enzime proteolitice 351
D ihidroorotat 416 Enzime represibile 163
D ihidroorotat dchidrogenaz 416 Enzime de restricie 147
D ihidrotestostcron 446 Epim eraza 62
Epimeri 62 Flavinm ononucleotid v. FMN 88, 196,497,498
Epim erizare 62 Flavoproteine 88
E pitop 584 5'-Florouracil 419
E rgocalciferol 279,516,517 FMN 88, 196,497,498
Ergosterol 279 FMNH2 88, 196
E ritrocite 523,529,530,531,532,535 H4-Folat v. tetrahidrofolat 401
Eritrom icin 162 Folat 79,91,409,401,493,503-505,508
E ritro p o ctin 529,530 Folding 35,39
E ritroz 215 Foldon 38
E ritroz-4-fosfat 246 Foldaze 39
Estran 487 Folding 159,160
E stradiol 279,443,467,487-491 N -Form il-m etionin 153,155,161,
E striol 487 N -Form il-m etionil-R N A t, 153,154,
Estrogen 169, 444, 446, 464, 487-491 N -F orm il-tetrahidrofolat 153,504,505
E tanolam in 376 N -Form il-FH 4 374-378,
E xcizia intronilor 134 N -F orm im ino-tetrahidrofolat 387,504,505
Exon 133,134,141,144 Fosfataz 71,225,453
E xopeptidaz 351,354 Fosfataz alcalin 518,552,553
F Fosfataz acid 553
Factor antihem ofilic 560-563,564 Fosfatid v. glicerofosfolipid 272,329
Factor C hristm as 521,522,563-565 Fostatidil-cholin 272,330
Factor de coagulare 558-569 Fosfatidil-etanolam in 272,330
Factor dc elongare a lanului polipeptidic 154 Fosfatidil-gliceroli 273
Factor Hagem an 561-565 Fosfatidil-inozitol 273,455,543,563
Factor dc iniiere al sintezei proteice 153,154 Fosfatidil-inozitol-4-fosfat 273,456,457
Factor necrozant al tum orilor 271 Fosfatidil-inozitol-4-5 trifosfat 454, 455, 456, 458
Factor Nilsson 563 Fosfatidil-inozitol-1,4,5 trifosfatul 331,543,562.563
Factor sigma 130,131,132 Fosfalidil-inozitol-4,5-bifosfat 273,455,553,563
Factor stabilizator al fibrinei 558-564 Fosfatidil-serin 273,329,331
Factor Stuart Prow er 521,522,559,560,564,569 3-Fosfoadenozil-5-fosfosulfat, PAPS 335,360,438
Factor von W illebrand 541-544,560 Fosfocrcatin v. creatinfosfat 398
FAD 98 Fosfodiesteraz 234,450,459,462
FAD/FADH2 88,181,192,195,211,497,498 Fosfoenolpiruvat 177,190,238
Fag 112 Fosfoenolpiruvat carboxikinaz 190,262
Fagocitoza 537,538,539 F osfo fru cto -1-kinaz 230,236,240,264
Faza S a ciclului celular 117,118,125 2-Fosfoglicerat 238
Fariochinona 521 3-Fosfoglicerat 237
Fam ezil pirofosfat 337 Fosfogliccrat mutaz 86
Fe2+194,421 6-Fosfogluconat 245
Fe3+ 194,421 6-Fosfogluconat dehidrogenaz 245
Feed-back 71 6-Fosfogluconolactona 244,245
Fenilacetat 311,392 Fosfolipaz 273
Fenilacctilglutam in 392 Fosfolipaza A2 40,542,543,563
Fcnilalanin 389-394,482 Fosfolipaz 40,454,455,456,462,543
Fenilalanin hidroxilaza 390 Fosfoproteine 157
Fenilcetonurie 390,392 Fosfoprotein fosfataz v. protein fosfataz 233
Fenillactat 392 5-Fosforibozil-am m 407
Fenilpiruvat 392 5-Fosforibozil-pirofosfat v. PRPP 407
Ferihem 421 Fosforibozil-pirofosfat sintetaza 406,413
Feritin 431,547 Fosforibozil transferaze 410
Ferm oar de leucin 166,167 Fosforilare 192,193,197
Ferochclataz 431 Fosforilare la nivel de substrat 187
Ferohem 421 Fosforilare oxidativa 92,192,193,281
al-F cto p ro tein 528 Fosforoliz 82
Fibrin 28,42,558,562,564,565,566 Fotosintcz 280
Fibrinogen 12,542,557,558,562,564,565,566,569 Fragmente Okazaki 114,117,118
Fibrinoliz 557,562,566 Fructokinaz 251
Fibrinopeptide 558 Fructofuranoz 216,217
Fibroblast 116,123,148 Fructoz 214, 215, 216, 218, 252
Fibroin 12,29 F ru cto zo -l,6 -b ifo sfat 236,240
Fibroncctin 542,562 Fructozo-2,6-bifosfat 240,241
Filochinon 92,278,559 Fructozo-l,6-bifosfataz 257,258,259
Fischer, H. 21 Fructozo-2,6-bifosfataz 240
Fitochinone 521,522 Fructozo-l,6-bifosfat liaz v. aldolaz 236
Flavinadenindinucleotid v. FAD 88,497,498 Fructozo-1-fosfat 252
F ructozo-6-fosfat 177,252 Glicozaminoglicani 578
Fum arat 44, 187 Glicozidaze 222
Furan 216,217 Glicozilare 157,160
Furanoz 216 Glicozil transferaz 571
Furca de replicare 112,117 Glioxilat v.a.glioxilic 375-378
G Globuline 29,45
GAH 560 o^-Globuline sericc 538
G, proteine 451-454 Glucagon 241,268,444,443,449,450,470
Gg, faz a ciclului cclular 118,125 Glucide 214
G] faz a ciclului celular 117,118,125 Glucocerebrozid 275
G 2, faz a ciclului celular 117,125 Glucocorticoizi 165,466-469,479,473
GABA v. acid y-aminobutiric 267,366 Gluconeogeneza 255,256,466,468,470,480
G alactitol 219,253 Glucokinaz 325,240,242,262,264
Galactocerebrozid 275 Glucopiranoz 217
G alactokinaz 253,254 Glucoz 214,215,231,235,464.469,480,550
D-G alactoz 215,254 Glucozamin 219
G alactoz-I-fosfat 254 G lucozo-I-fosfat 173,177,228,231
G alactoz-l-fosfat-uridil transferaz 253,254 G lucozo-6-fosfat 173,177,228,
-G alactozidaz 582 231,235,244,533,534,
G alactozurie 253 G lucozo-6-fosfataz 229,257
Gangliozid 275 Glucozo-6-fosfat dchidrogcnaz 244,532.534,536
Gastricsin 351 1,6-Glucozidaz 224
G astrin 351 -Glucuronid v. -glucuronozid 438
GC, caset 131 Glucuronidare 249
GD P 97,451,453,454,455 3-Glucuronidaz 438
G en 136,139,141,145-151,105-170 Glucuronil transferaz v. glucuronoz.il
Gen reglatoare 163 transferaz 249, 438
Gen structural 163 Glucuronoconjugare v. glucuronidare 438
Genom 142,145,149,163 Glucuronoconjugai v. glucuronozizi 438
Gentam icina 161 Glutam at v. a.glutam ic 384,385,400
Geranil pirofosfat 337 Glutam at dccarboxilaz 267,365,500
G liceraldehid 214,215 Glutam at dchidrogcnaz 83,363,552
G liccraldchid-3-fosfat 236 G lutam at-oxaloacctat transam inaz 84,552
Gliccraldchid 3 fosfat dchidrogcnaz 83,236 G lutam at-piruvat transam inaz 552
Glicerat kinaz 251 Y-G lutam il-cistein-sintctaz 248,357
Glicerid v. acilglicerol 272 Y-Glutamil-cistciiiil-glicin v. glutation 357
Glicerol 257 Glutam inaz 85,369,385,553
Glicerol fosfat 196,211 Glutam in 368,384,385,400
Glicerol foslat dchidrogenaz 196,211 G lutam insintctaz 368,385,404
Glicerol kinaz 251 G lutation 202,244,357, 509,532,534,539,540
Glicin 373-375 Glutation oxidat 247,535,540
Glicinurie 375 Glutation redus 247,535,540
Glicocalixul 287 Glutation-insulin transhidrogenaz 267,
Glicocol v. glicin 373-375,401 G lutation peroxidaz 94,247,248,532,535,540
Glicoforin 285,531 G lutation rcductaz 84,244,247,248,532,535,540
Glicogen 214,226,232 G lutation sintetaz 86,202,248,359
Glicogcn fosforilaz 90 Glutelinc 45
Glicogcn fosforilaz A 228,231 GMP 97.409,412
Glicogen fosforilaz 228,231,262 dGMP 97
Glicogcn fosforilazofosfataz 232 GM Pc 511,456,460,461
Glicogcn fosforilazokinaz 232 G onadotropine 468,469,467
Glicogenin 231 G onadotropin corionic (placcntar) 465,468
Glicogcnogenez 231,535 GOT v. glulam at-oxaloacctat transam inaz 365
Glicogenoliz 228,537 GPT v. glutam at-piruvat transam inaz 365
Glicogenoze 230,248 Granulomatoza cronic 540
Glicogen sintetaz 230,231,266 Grupare prostetic 60,93
Glicogcn sintetaz A 262 GTP 97,111,130,153-156,451,453,454,455,513
Glicogcn sintetaz 262 Guanaz v. guanin dezaminaz 410.412
Glicogen sintetazofosfataz 232 Guanilal v. GMP 409,412
Glicogcn sintazokinaz 232, Guanilatciclaz 460,461
Glicoliz 235,239,240,241,466,467,468,532,533 Guanin 95-97, 99, 101, 107, 139, 141, 143, 144
G licoliz anacroba 239,532,533,537 Guanin dezaminaz 410,412
G licoproteine 157,255,447,471,527 Guanozin 97,134
a j-G licoprotcin 527 Guanozin monofosfat v. GMP 409
Glicosfingolipide 274 L-Gulonat 250
L-G ulonolactona 250 Histidaza 552
Gulonolaclon oxidaz 250 H istone 45, 105,169,117,118,169,170
Guloz 215 Histona H, 105
Guta 411 Histona H 2A 105-169
H Histona H2B 105,169
H aptoglobin 431,528,529 Histona H 3 105
Hapteina 586 Histona H 4 105,169
Hb v. hemoglobin 421-428 Hogncss secvena (cascta) 131,136
Hem 31,209,421,430,498,499 Holocnzim 60
Hem oglobin 12,28,34,70,141,165, 421- H om ocistcin 92,379,504,506,507
42 8,512,528,530,531,556 H om ocistcin-m cliltransferaz 404,507
Hemoglobina A 2 424 H om ocisteinurie 382
Hemoglobina F 424,426 H om ogentizat 390,393
Hemoglobina M 429 Hom ogcntizat oxidaz 84
Hemoglobina S 428 Hom oscrin 382,403
Hem oproteine 547 Horm on 442,444.443-490
Hem oxigcnaz 431 Hormon foliculostim ulant 443, 446, 450, 463, 465
Hem sintetaz 430 Hormon luteinizant 443, 446, 450, 463, 465, 467
H eparainsulfat 579 Hormoni tiroideni 208,471
H eparin 579,568 I
Hem osiderin 547 Ibuprofenul 350
H ertone 105 Icter fiziologic 438
H exokinaz 66,68,70,231,235,240,250 Icter hem olilic 438
H cxokinaz-D v. glucokinaz 231 Icter hepatocelular 439
H exoz 214 Icter idiopatic cronic 439
H ialuronat 579 Icter neonatal 439
Hialuronidaz 580 Icter obstrucliv 439
Hidrolaz 156, 208 Icter toxic 439
H idroperoxid 534,535,539,540 Idoz 215
Hidroperoxid lipidic 534,535,539 a-L-iduronidaz 582
-Hidroxi-acil-CoA 314 IgE 538,540
-Hidroxi-acil-CoA dehidrogenaz 314,553 Im idazol 556
-H idroxibutirat 319 IM P 372,407
-Hidroxibutirat dehidrogenaz 319 Im unitate celular 584,596
H idroxicobalam in 506 Im unitate um oral 584
25-H idroxicolecalcilerol 516,517 Im unitate natural 602
H idroxilare 213,436,509 Im unoglobulin 146,147,588,529
17a-H idroxilaz 341,476-478 Imunoglobulin A 589
21-H idroxilaz 476,478 Imimoglobulin D 589
H idroxilizin 14,17,30, 158,509 Imunoglobulin F 589
3-Hidroxi-3-m etil-glutaril-CoA v. HMG-CoA Im unoglobulin G 146,589,538,540
3 19,336 Imunoglobulin M 589
5-H idroxim etileitozina 95 Inhibitor com pctitiv 76
H idroxiprolina 14,17,30,158,470,509 Inductor 163,164
3-H idroxisteroid dehidrogenaz 472-474,476,478 Inhibiie alostcric 81
18-Hidroxisteroid dehidrogenaz 472-474,476,478 Inhibiie com petitiv 76
17a-H idroxipregnenolon 476,478 Inhibiie ireversibil 75
17a-H idroxiprogesteron 476,478 Inhibiie nccom pctitiv 76,79
H idroxitriptofan 509 Inhibiie reversibil 75,76
H iperam oniem ie 371 Inhibiie incom pctitiv 76,80
Hiperbilirubinemie 438 Iniierea replicrii DNA 113
Hiperlipidem ie 345 Inicrca transcrierii DNA 131
H iperlizinem ie 397 Inozin 108,140,141
H iperprolinem ie 387 Inozin m onofosfat v. IM P 372.407
H ipervalinem ie 389 Inozitol 219.273
H iperurieem ie 411,413 l-Inozitol fosfat 273
H iperoxalurie 376 1,4,5-lnozitoItrifosfat 543,562,563
Hiperlipoproteinem ie de tip 11 343 Insulin 72, 227, 241, 260, 444, 443, 448, 449, 450
H ipolipoprotcincm ic fam ilial 343 Iodacctam id 75
H ipervitam inoze 492,516-519 Iodurare 157
H ipoxantin 144,108,410-413 Indoinetacina 350
H ipoxantin-guanin fosforibozil transferaz 410,414 Integrine 538-544
Histam in 41, 354,367,498,540 Inteferon 148,526,541
Histidin 367,387,388 Interferon 270
Histidin amonioliaz, histiolaza 387 Interleukina 149,270, 526,529.530,596
Intcrlcukin I 541 Lipoproteine cu densitate foarte mica 302
Intcrlcukin 3 529 Lipoproteine cu densitate interm ediar 303
Intron 133,134,141,144 Lipoproteine cu densitate mare 303
Izocitrat 44,186 Lipoproteine cu densitate mic 303
Izocitrat dehidrogenaza 186,196,553 L ipoprotein lipaz 264,300
Izoenzim e 81 L ipotropin 446,465,466
Izoleucina 71,388 Lipooxigcnaz 84,349
Izom eraz 86 Lizil hidroxilaza 571
Iz o pentenil-pirofosfat 336 L izin 14,16,396,397,503,509
Izopren 276,510 Lizilnorlcucin 577,578
Izopren biologic activ v. izopentenil-pirofosfat 336 Lizogenie 146
Izotiocianat 208 L izofosfatide 273
J Lizolecitine 273
Jacob, F. 107,163 Lizozim 32,33,47,64,72,537,539
Lizozom i 542
Kalecreina 561 L im focit 584
K anam icin 161 Lim focit 584,590
K eratan sulfat 579 L im focit T 584
K cratin 12,28,29,30 L im focit T helper 596
Kinaze 71 Lim focit T supresor 596
Koshland, D.E.Jr. 65,66,73,74 Lim focit T citotoxic 596
Krebs,H 180,185 Lim fokine v. interleukine 596
Kininogeni 561 Lk num r 103
L -LPH 447
L, seric optic 19 Lynen, F. 311
L actat 550 M
Lactat dehidrogenaz 47,81,196,239,242,257,551 Maladia Addison 480
Lactaz 224 Maladia Biermer 505
Lactoza 163,164,220,224,259 Maladia Cristmas 565
L actoferin 537 Maladia Cushing 481
Lanosterol 339 M aladia Fabry 344
L an respirator m itocondrial 193,195 Maladia Frber 344
Lanuri H (din imunoglobuline) 588 Maladia Gaucher 344
Lanuri L (din imunoglobuline) 588 Maladia Krabbe 344
L atirism 576 M aladia Menkes 548
Lecitine v. fosfatidilcholine 272 Maladia Neimann-Pick 344
Iccitin-colcsterol aciltransfcraz 305 Maladia Sandhoff 344
Legtur de hidrogen 8,31,100,101,109 Maladia Tay-Sachs 344
Legtur diglicozidic 158, McLeod C., 99
Legtur fosfat diestcric v.(fosfodicstcric) M aerofage 596
98,99,100,107,112,114,134 (X2-M acroglobulin 527
Lcglura glicozidic (leglura N-glicozidic) 97,147 M acrom incralc eseniale 544,545,548,549
Legtur m acrocrgic 156,502 M alat 44,78,187,211
Legtur peptidic 20,155,156 M alat dchidrogcnaz 82,211,256
Legtur tiolestcric 502 M alabsorbie 358
L eptina 308 M alnutriie 358,362
Lcucin 388 M alonat 78,200
Leucinam inopeptidaza 552,553 Malonil-CoA 323
L cucotrienele 349,350 M altaz 224
Leucodistrofia m etacrom atic 344 M altoz 220,224,226
Ligandin 432 M anitol 218
Ligaze 86 M anoz 255
Lincwcavcr-Burk,ecuaie 77 MAO v. m onoam inoxidaz 367
Lipaza 85,239,310 MAP kinaz 124,
Lipide 270 Matrice extracelular 571
Lipide ncsaponifiabile 270,276 McCarty M. 99
Lipide plasm atice 270,550, Melanina 393
Lipide saponifiabile 270,273 M elanotropina 465,469
Lipoat dchidrogcnaz 325 M embran intern m itocondrial 193,194,207
Lipoil reductaztransacctilaz 325 M enachinon 521
Lipofuscina 43 Menten M. 66
Lipoliz 309 6-M crcaptopurin 419
a-Lipoproteine v. lipoproteine cu densitate mare 302 M esager prim 450,451
-Lipoproteine v. lipoproteine cu densitate mic M esager secund 98,450,453-458,460
302 M etabolism 173,174,180
M etabolon 82 Nicotinamid-adenin dinucleotid fosfat v. NADP
M etaloenzim e 40,94 88,494
M etilare 157,145 NK v. natural killer 597,592
M cthem oglobin 421,429,508,532,534,536 NO sintetaz 461
M etilcolantrena 278 N oradrcnalin 41,454,482-485
5-M ctil-citozin 95,118 Norcpincfrin v. noradrcnalin 41
M ctil-cpbalam in 506,507 N ucleaz 105,107,116,157,406
N5 ,N 10-M etilen-FH 4 402,504,505 N ucleoproteine 95
N5 -M etil-FH 4 379,402,504,505 N ucleotid 97-98,406
7-M etiI-guanozintrifosfat 133,161 N ucicotidaz 406,410,553
Metilmalonic acidurie 317 Nucleozid 96,97,219
M etilm alonil-CoA 92,316,507 Nucleozidaz 97, 406
M etilm alonil-CoA m utaz 317,507 Nucleozid difosfat 97
M etiluridin 95 Nucleozid difosfat kinaz 187,415
2-M etil adenina 96 Nucleozid fosforilaz 412
1-Metil guanina 96 Nucleozid kinaz 419
Meti (transferaza 133 Nucleozid m onofosfat 97
M etionina 92,153,161,378-382, 388,403,506,509 Nucleozid m onofosfat kinaz 415
M ezobilirubinogen v. urobilinogen 432 Nucleozid trifosfat 97
M g2+ 119,121,130,134,152,545,546 Nucleozomi 105,106
M ieloperoxidaz 248,537,539 Numr de turnover 60,68,79
Michaelis L. 66 O
M inerale 544-549 O bezitate 345
M ineralocorlicoizi 466,475-482 O ctam er 105
M ioglobin 12,28,31,70, 421-424 Okazaki, . 114
M iozin 12,28.542,543 Oleil-CoA 272
M itchell, I 202,203 O ligoclem entc eseniale 547-550
M onoam inoxidaz ( ) 194,367,368,488.553 O ligozaharide 219,220
Monod, J. 73,107,163 Olovnicov A. 118
M onoiodotironin 471,472,473 OM P 417
M onoiodotirozin 471,472,473 OMP dccarboxilaz v. orotidilat dccarboxilaz 416
M onooxigenaz 327,436,485 O ncogcn 137
Monozaharide 214, 219 O perator 163
M ucopolizaharide 218,578 O peron 163
M ucopolizaharidoze 582 Opsin 93
Mutaie prin dclcic 143 Origin e de replicare 113,117
Mutaie prin inserie 143 O rnitin 14,17,360.369
Mulaie prin substituie 142 O rnitincarbam il transferaz (OCT) 370,552
Mutaie prin transversie 143 O rotatciadurie 415
M utaie prin tranziie 142 O rotat 416
M utaie punctiform 142 O rotidin 416
Mutaie benign 143 Orotidin m onofosfat v. OMP 416
M utaie spontan 143 O xalat 78,512
Mutaie indus 143 O xaloacetat 44,187,211
M utaie neutr 143 -Oxidare 193, 314
M utaie nociv 143 Oxidoreductaze 83
M utaie nonsens 143 Oxid dc azot 460,461,561
N O xitocin 464
Na 524,525.530,544.545 Oxi Hb 556
NAD 98, 181 Oze 214
NAD+ Ozide 214
112.181.192.211.243.500.498.532.533.534.539 P
NADH 192,211.243,506,533,534,536 Palade, G. 158
NADH-CoQ reductaz 196 Palindrom 147
NADP 532 Palmitil-CoA 311
NADP+ 193, 213, 247, 466, 467, 471-486, 498,499 Parathorm on 443,44,450,470
NADPH Pauling L. 26.27
1 9 3 .1 9 6 .2 1 3 .244.247.471.486.534.536.539.540 PCL v. piruvat carboxiligaz 189
NADPH oxidaz 539,540 Penicilin 222
N eom icin 161 Pcntoz 97
N eutrofile 538,539 Pcntozurie esenial 250
N iacin 88,498,499,500 Pcpsin 72,85,351,352
Nicotinamid 88, 98, Pcpsin v. gastricsin 352
Nicotinamid-adenin dinucleotid v. NAD 88 Pepsinogen 72, 352
Peptide 40
Peptidii transferaz 155,162 P roconvcrtin 521,522.559,560,563,564,568
Perforin 600 Proclastaz 72,355,578
Peroxid 93,520 Proclastin 578
Peroxidare 520 Proenzim v. zimogen 72,351
Peroxidaz 84,93,251 P rogesteron 278,443,446.464.467-469,475-489
Peroxid de hidrogen 534,535,538-540 Progestine 488
PG v. prostaglandin 347 Prohorm on 445,446,447,466,468,470
PGE2 347 Proinsulina 445,446
PGE2c 347 Prolactin 443.462,465,468,469
PGG2 v. endoperoxid prostaglandinic 347 Prolil hidroxilaz 572
PGH2 v. endoperoxid prostaglandinic 347 Prolin 385 387,400,509
pH 527,526,524 P rom otor 131,163,164,166
Piran 216 Proopiom elanocortin 463,465,466
Piranoz 216 Propionil CoA 277
Piridoxal 499 PropionilCoA carboxilaz 503
Piridoxal fosfat 90, 365,366,500,501 Prostaciclin 351
Piridoxam in 499 Prostaglandin E2 347
Piridoxam in fosfat 90,365,500 Prostaglandin F2 a 347
P iridoxin 90,499,500,501 Prostaglandin sintaza v. ciclooxigenaz 348
Pirofosfat 98,112,114.130,152,450 Prolam ine 45
Pirofosfataz 152, 231 Prolam ite 45
Pirol 421 Protein G 561
Piruvat 4 4,81,87.189.181.196,239,496,533,534 Protein Gj 451,452,453,454,463
Piruvat carboxilaz v. piruvat carboxiligaza Protein G s 451,453,454,462
189,191,256,258 Protein 568,564,569
Piruvat carboxiligaz 86. 263,503 Protein reactiv 528,364
Pirim idin 95 Protein S 568,569.564,
Piruvat dchidrogenaz 83,181,191,242,243 Proteine 44,49,171,352
Piruvat kinaz 85,238,241,242,258,264,532,536 Proteine biliare 571
Piruvat kinaz L 242 Proteine plasm atice 284,523,526,527
Piruvat kinaz M 242 Protein kinaz (PK.C) 230.233,270,453,454
Plasm alogeni 273 Protein kinaz A 241,454
Plasm ide 147 Protein kinaz 455,458.459,462
Plasm ina 566,567 Proteina T R F 122-125,454
Plasm inogen 566,567 Proteina g 132
Plastochinona 277 Proteina activatoare a genei catabolice 163
Poli A 133,137,168 Porteina Dna A 113
Poli A polimeraza 133 Porteina Dna 112,113,114
P oliadenilare 133,137,141 Porteina Dna 113
Poliam in 361 Porteina Dna G 113
P oliizopren 336 Proteine PDS 111,114
Polinucleotid 98 Protein tirozin kinaz 265,266
Polinucleozom i 105,106 Protcoglicani 578
Poliribozom i 156,161,158 Proteoglicanaza 582
Porfiria acut interm itent 432 Proteiliza lim itat 352
Porfiria cutanea tarda 432 Protooncogcn 168
Porfiria eritropoictic congenital 432 Protoporfirin 421
Porfirii 432 Protoporfirin IX 421,430
Porfirii prim are 432 Protrom bin 92,521,522,557-564,566,569
Porfirii secundare 433 Provitam ine 491,510
P orfirin 432 Pseudocolinesteraza 554
Porfobilinogen 430 Pseudouridina 95,108,133
Porfobilinogcn dezam inaz 430 Psicoza 215
Potasiul 524,525,530,545 Ptcroilhcptaglutam at 503
Potenial fosforilrii 179 Pteroilm onoglutam at 503
Potenial redox standard 194 Pteroilpentaglutam at 503
Prcalbum in 447 Ptcrdin 503
Pregnenolon 466,467,475-480 Punct izoelectric 51
Preproinsulin 157,445 Purina 96,406
Pribnow, caset 131 Purinice, baze 95,96
Prim az 113,120 Purom icina 162,205
Processing 132,133 Putrescein 360
Proaccclerin 560,563,564,569 Putrefacia am inoacizilor 360,361
Procolagen 575
Procolagcnaz 72,575,577
R S erin-hidroxim etil-transfcraz 84,378
Radical Superoxid v. Superoxid 248 Serotonin 262,367,395,500,540,542
Rahitism 519 Serum albumin 526
Rspuns imun primar 586 Serpine 527
Rspuns imun secundar 586 Sfcrocitoza 531
Reacie anaplerotic 189 Sfingoglicolipide 274
Reacie Fenton 537 Sfingolipide 274
Rcacie Habcr-Wciss 535 Sfingolipidoze 344
R eceptor 40,447,448,444,447 Sfingom ieline 274,332
Receptor adrenergic 485 Sfingomielinaz 245
Receptor a-adrencrgic 485 Sfingozin 270,335
Receptor -adncnergic 485 Silencer (secven) 136,164,165
Receptor nuclear 449,474 Sindrom ACTH-ectopic 481
Receptorul horm onilor tiroidieni 448,449,471 Sindrom Arias 440
Rcceptorul horm onilor steroidieni 448,449,475,476 Sindrom Bernard-Soulicr 544
R eceptorul insulinei 264,265,447,449 Sindrom inflam ator 440
Recom binare genetic 112,145 Sindrom Gilbert 439
Reglare alosteric a enzimelor 70 Sindrom citolitic 440
Renaturarea DNA 105 Sindrom Conn 481
Renina 351,352 Sindrom Crigler Najjar tip I 439
Repararea DNA 111,115,116 Sindrom Cushing 481
Replicare (a DNA) 111-115, Sindrom Dubin Johnson v. icter idiopatic cronic 439
Rcplicaie sem iconscrvativa 111,117 Sindrom Ehlers Danlos 575
Replizom 117 Sindrom excreto-biliar 440
R epresor 163,164 Sindrom Glauzmann 544
Represia genelor 163 Sindrom Hatcinson-Gilford 127
R etinal 276,510-512 Sindrom hemoragie infantil 522
Retinal izom eraz 93 Sindrom hepato-priv 440
R etinol 93,276,510,511,514,515,516,520 Sindrom Hunter 582
R etroinhibiie 71,444 Sindrom Hurler 582
R etrovirus 137,149 Sindrom Zellweger 318
Revers transcriptaz 119,137,147,151 Sindrom Kwashiorkor 362
Ribitol 219 Sindrom Lesch-Nyhan 414
R iboflavina 88,192,495,500 Sindrom Menkes 548
R ibonucleaz 30,32,38,167,169,406 Sindrom Rotor 440
Ribonucleotid 97 Sindrom Sunfilippo 582
Ribonucleozid 97 Sindrom Scheic 582
Ribonucleozid reductaza 411-415 Sindrom Sly 582
Ribotim idin 97,133 Sindrom Smith Lemil Opitz 342
Riboz 97,107,108,214,215 Sindrom Vcrner 127
R iboz-5-fosfat 245,247,407 Sindrom W ernicke-Korsakoff 246
R iboz-5-fosfat cetoizom eraz 245 Sindrom W illebrand-Jurgens 544
Ribozim 134,135 Sistem imunitar 584
Ribozom i 103,109,110,153-160,169 Sistem com plem ent 594
Ribuloz 215 Sistem tam pon 554-556
R ibuloz-5-fosfat 245,247 Sistem termodinamic deschis 171
Ribuloz-5-fosfat epim eraz 245 Sistem term odinam ic izolat 171
R ifam picin 135,162 Sistem termodinamic nchis 171
Rodopsina 13,93,511-513 Situs A (aminoacil) 110,154,155,162
R otenona 295,200 Situs P (peptidic) 110,154,155,156,162
S Solenoid 105,106
Saccharopina 397 Som atom edine 468
Salmin 45 Som atostatin 262,444,463,467
Sarcina cncrgctic 179 Som atotropin 443,462,463.465.466,468,469
SAM v. S-adcnozil-m ctionin 378 Sorbitol 218,219
Sanger. F. 21,22 Sorbitol dehidrogenaz 551,552
Schiff, baze 365,367 Sorboz 215
Scualen 337 Spelising 112,134,136,137,141,144
Secrctin 355,442 a-spirala 159
S cdohcpluloz-7-fosfat 246 Specificitate dc rcacic 61
Seleniu 93,94 Specificitate de substrat 61
Semiacetal 216 Specificitatc stercochim ic 62
Seric stcric D 19 Spcctrin 285,531
Scrie stcric L 19 Spermidin 361
Scrin 364,375,376,400,504 Spcrmin 361
Starling, E. 443 T iam in 87,492-498
Stcrcobilin 432 T iam in pirofosfat v. TPP 87,493,498,499
Stercobilinogen 432 Tim idilat v. TM P 97,418
Steroizi 278,446,448,475 Tim idilat sintaz 417
Steroli 278 Tim idin 97, 417
Streptom icin 161,219 T im in 95-97,116,99,101,144
Structur cuaternar a proteinelor 34 T iokinaz 251,312
Structur prim ar a proteinelor 20,21,26 T oiredoxina 415
Structur sccundar a a proteinelor 27 T irozin 14,16,389-394,399,446,509,474
Structur sccundar a proteinelor 29 Tirozinem ie 391,392
Structur teriar a proteinelor 31,33 T irozinaz 390
Structur n foaie plisat v. structur secundar 29 T iroxin v. tetraiodotironin 446
Substan amfipatic 51 T ireo tro p in
Substane tam pon 51,554,555,556 443,444,446,450,463,465,467,472,473
Subunitatea sigma (a RNA poliimerazei) 130-132 T ircopcroxidaz 481,482
Succinat 44,186,196 Tircoglobulin 446,467,471,472
Succinat dehidrogenaza 187,530 Tiouridin 95
Succinil-CoA 92,186,507 T iolaz 314
Succinil-CoA sintetaz 186 TM P (sau dTMP) 97,99
Sulfamid 79 TNF (tumor necrosis factor) 526
Sulfatid 275,335 TNF a 524
Superantigen 602 Tocoferol 93, 277,492,492,514,519,520,521
Superelice de DNA 102 Tolerana imunologic dobndit 586
Superspiralizare 104 Tolerana imunologic natural 586
Supcrspiralizarc negativ 104,132 Topoizom eraz 111,113
Superspiralizare pozitiv 104,132 Toxina diftcric 162
Superhelix 105 T PP 181,182
Superoxid (anion sau radical) 201,508,534,539 T ransacctilaz 325
Superoxid dism utaz 47,201,248,534,539 T ransacilaz 325
Surfactant pulm onar 273 Transaldolaz 84,246
T T ransam inare 90,362,500
T j v. triiodotironin 446,471 T ransam inaz v. am inotransferaz 364
T 4 v. tetraiodotironin v. tiroxina 446,471 T ranscctolaz 84,246,500,495
T agatoz 215 T ranscobalam in 506,538
T aloz 215 T ranscriere 130
T am ponare 554-556 T ranscortin 447
T ankiraza 124 Transcriere invers 137
TATA, casct 131,136,169,170 Transdezam inare v.dczaminarc indirect 366
Taurin 381 Transream inare 366
T aurocolat 382 Transferaz 84,228
Tautom erie lactim -lactam 96 T ransfcrin 12,49,255,430,528,529.547
TBPA (thyroxine-binding prealbum in) 473 T ranslocaz 155,162,312,356
TBG (thyroxine-binding globulin) 473 Transducic 146
TDP (sau dTDP) 97 T ranslaie 152-158
T elom eraza 118-122,125,128 T ranspozone 146
Telom ere 119-128 Transform ilaza 153
T elozom a 125 Translocare 155
Temperatur de topire a DNA 104,130 T reonin 71,383,388
Teoria cuplrii chcm iosm oticc 202 Trconin aldolaz 383
Teoria polipeptidic Fisher 21 T reonindchidrataz 71,364
Terapie gcnic 149 T rcoz 215
Term inal transferaz 147 Triacilglicerol 272
Term inarea transcrierii DNA 132 T riiodotironin 443,446,471-474
Terminarea sintezei lanului polipeptidic 156 T rioz 215
T erm odinam ic 171 T riozofosfat izom eraz 47,86,236
Tcrm ogcncz 208 Tripsin 354
Tcrm ogcnin 208 Tripsinogen 354
T erpene 276 T riptofan 367,394-396,509
T estosteron 278,443,446,467,468,486 Triptofan hidroxilaz 367,385
Tetraciclin 162 Trom bin 12,42,521,522,543,557-559,562-
T ctrahidrobiopterin 367,389.485 564,567-569
T etrahidrofolat 91,153, 401,504,505 T rom bom odulin 567,568
T etraiodotironin 443,446,471-474,449,469 Tromboxan A-? 348,350
T ctroz 215 T ropocolagen 30,571,583
TH F v. tetrahidrofolat 401 T ropom iozin 28
TSH v. tireotropina 446
T T P (san dTTP) 97,111 X antin 410-413
esut conjuctiv 571 Xantin oxidaz 94,411-413
U Xantom atoza ccrebrotendinoase 342
U biehinon v. coenzim a Q 277,522 Xilitol dehidrogenaz 250
UDP 97 Xiloz 215
U D P-galactoz pirofosforilaz 253 Xiluloz 215
U D P-glucozo-4-epim craz 253 D-Xiluloz 215
U D P-glucoz-pirofosforilaz 249 X iluloz-5-fosfat 245,500
UD P-glucuronat 249,360 Xeroderma pigmentosa 116
U D P-glucuronil transferaz 361,438 Z
UMP 97,416 Z aharaz 224
Uracil 95-97,107,108,116,139,141-144 Z aharoz 220,224
Uracil DNA-glucozidaza 116 Zim ogen 72,74,446
U rat m onosodic 411,413 Zinc 130,548,549
U reaz 61,68,85,94 Zona fasciculat 475
Uree 368,369,550 Zona glomeruloza 475
Ureotelic, organism 411 Zona rcticular 475
U ricaz 413 Zw itterion 19
Uricotelic, organism 411 DNA 98-106,
Uridin 97
DNA A 102
Uridin difosfat v. UDP 97
DNA 102
Uridin m onofosfat v UMP 97, 415
Uridin trifosfat v. UTP 97,130 DNA Z 102
U robilina 432 DNAc 101
Urobilinogen 432 DNA com plem entar v. DNAc 101
U rocanat hidrataz 387 DNA circular 102,103
U rokinaza 566 DNA giraz 103,162,111-114,162
U roporfirinogen 430 DNA ligaz 112,114.116,118
U roporfirinogen III 430 DNA lincer 105,106,135
U roporfirinogen III cosintaza 430 DNA fotoliaza 116
U roporfirinogen decarboxilaz 430 DNA glucozidaze 116
UTP 97,130,415 DNA m itocondrial 140
V DNA polim eraz 111,113,115-118,120
Vaccin 602 DNA polim eraz I 147,112,114,115,147
Valin 14,388 DNA polim eraz II 112
Valoarea biologic a proteinelor 358
DNA polim eraz III 112,114
Vector 147
DNA polimeraz a_117
Vector retroviral 150
Verdoglobin 431 DNA polim eraz _ U 7
Vitam ine 87,491,492 DNA polim eraz y_117
Vitamina A v retinol 93,510 DNA polimeraz 5 117
Vitamina antipcrnicioas v. cianocobalam in 92,94 DNA polimeraz RNA dependent 111-115
Vitamina Bj v. tiamin 87, 225,243,246,495,500 DNA primaza 111-114
Vitamina B 2 v. riboflavina 88, 497,500 RNA 107-110
Vitamina B 3 501 RNA iniiator 111,112,114,118,119
Vitamina B^ v. piridoxin 90.233,499 RNAm 107,130-137,167
Vitamina B ,2 v. cianocobalam in 92,94,379,404,505 RNA m onocistronic 161
Vitamina v acid ascorbic 91,225,508 RNA nuclear de dimensiuni mici (RNA) 134
Vitamina D 516 RNA policistronic 161
Vitamina F 522 RNA polim eraz DNA dependent 121,130-133,164
Vitamina E v. tocoferol 93,519
RNA polimeraza RNA dependent 121,138
Vitamina H 502
RNA polimeraza I 130
Vitamina K., v. fitochinon 92,521
RNA polim eraza II 121,130,131,136,141
Vitainina v. fariochinona 92,521
V itam ina PP v. niacin 88.396,498 RNA polim eraza III 121,130,131,136
Vitamine hidrosolubile 87,492,493 RNA polim eraz holoenzim 130
Vitamine liposolubile 92,492,513 RNA polimeraz m itocondrial 136
RNAr 5 S 109,110.130.131
W RNAr 5,8 S 110
Watson, J 100,106,111 RNAr 16 S 109,154,155
Watson i Crick, model 100,102 RNAr 18 S 110,130
W ilson maladie 528 RNAr 23 S 109
RNAr 28 S 110,130
RNAt 108,109,130,131,141,152
Editura Universul
Chiinu, str. Vlaicu Prclab, 45.
Formatul 70X100 7 1,6.
Comanda nr. 5193.

Biochimie Medicala

Încărcat de

Informații document

Titlu original

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Biochimie Medicala

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

U n iv e r s ita te a d e S ta t d e M e d ic in

Cap.IV. Glucidele i metabolismul lor

Cap. VI. M etabolismul proteinelor i al aminoacizilor.

Cap. VII. Sistem ul horm onal Vitaminele

Prezentarea manual de biochimie este o ncercare deosebit de dificil la momentul

C h a rles D arw in E m il F ish er

Ierarhia structural n organizaia molecular a celulelor

Atomii participani la formarea acestor legturi covalente pretind s-i asigure

lai Molecul chiral <> Molecul achiral

n sistemele biologice e foarte rspndit i un alt tip de legtur - cea de hidrogen,

Datorit forelor de atracie electrostatice la substanele cu molecule polare tempera

Similar, n cazul interaciunii dintre o amin (RNH,) i un acid oarecare (AH):

sau, n redare curent:

n astfel de compui ntlnii i ca biomolecule exist: legturi covalente (n radicalul

Dintre acetia, ultimii doi compui sunt combinaii complexe,

lui- homeostazia (albuminele determin presiunea oncotic-cantitatea, volumul lichidului

A lanina (A la) A V alina (Val) V Lcucina (Leu) L

H3 N - C H - C O O ' H 3 N CHCOO' H3 N - C H - C O O '

H 3 N CHCOO' H 3 N CH COO' H2N -C H -C O O '

Fcnilalanina (Phe) F Triptofan (Trp) W

2 .Grupa acizilor cu sarcin negativ.

Acid aspartic (A sp) D A cid glutam ic (Glu)

3. Grupa acizilor hidro fiii

A sparagina (Asn) N G lutam ina (G in) Q T reonina (Thr) T

H3N CH COO' H3N CH COO' H 3 N C H -C O O '

4.Grupa acizilor cu sarcin pozitiv.

Lizina (Lys) A rginina (A rg) R H istidina (His) H

H 3 N~ -C H -C O O ' H3N -C H -C O O ' H3N CH- COO'

h2n-ch-cooh h2n-ch-cooh h2n-ch-cooh

H2N CH-COOH H2N - CH-COOH H2N-CH-COOH

Acid Y - am inobutiric, GABA

CH2 CH2 CH2 COOH

Alanina 22,50 Leucina 3,60

Arginina f solubil Lizina f solubil

Asparagina 2,40 Metionina 3,00

Fenilalanina 2,70 Treonina 1,60

Glicina 4,00 Trip to fon 1, 10

Glutamina 3,60 Tirozina 0,04

Acid glutamic 3,70 Valina 6,80

zentate n sistemul D-L, n care substana de referin este aldehidaglicericdextrogir,

Literele se refer numai la configuraia absolut: n cazul D-izomerului gruparea NH,

n soluii bazice situaia e contrar, ionizat e grupa carboxilic (COO').

In arhitectonica moleculei proteice deosebim patru niveluri structurale.

Succesiunea aminoacizilor determin structura primar a proteinelor, fiind baza

Purpura Ruhcm ann'

Metoda aplicat este deosebit de efectiv. Cantitatea de aminoacizi e proporional

N- -SO9CI + h2n CH-C^

Determinarea captului N-termina!prin marcarea cu clorura de dabsil

Legturile disulfidice se rup la oxidarea n acid performic, cu formarea resturilor de

Analiza structural a proteinei poate fi accelerat prin utilizarea secveniatorului

F igura 1.1. Grupa peptidic cu lungimea legturilor

Legtura dintre carbonul

Figura 1.2. Determinarea unghiurilor iff i

F igu ra 1.3. Modelul a -elice orientat spre dreapta

F igura 1.4. - structur

Majoritatea proteinelor oligomere studiate, de regul, au un numr pereche de pro-

FOLDINGUL. PROBLEM A MPACHETRII SPECIFICE

oldingul proteinei are loc n

(a) 7 ATP-uri i GroES

F igura 1.13. C iaperoninele n foldingu l proteinelor:

Carnozina - dipeptida -alanil-L-histidina, extras n anul 1900 din muchiul

R COOH R COOH RCOOH R ~ COONa

Acid L-aspartic 2 , 7 7 L-Valina 5,96