Sunteți pe pagina 1din 108

UNIVERSITATEA DE MEDICIN I FARMACIE DIN CRAIOVA

FIZIOLOGIA
APARATULUI
DIGESTIV
LUCRRI PRACTICE
EDITAT DE COLECTIVUL DISCIPLINEI
SUB REDACIA PROF.UNIV.DR. MARIA IANCU

2009
Autori:

Iancu Maria

Badea Daniela

Sfredel Veronica

Iancu Ionela

Romanescu Florin

Mitran Smaranda Ioana

Bleanu Tudor-Adrian
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

CUPRINS

Introducere............................................................ 9

1. Fiziologia glandelor salivare ........................... 11


1.1. Noiuni introductive ........................................ 11
1.1.1. Caracteristici fizice i chimice ale salivei .. 13
1.1.2. Rolurile fiziologice ale salivei .................... 16
1.1.3. Tehnici de recoltare i transport ale
salivei................................................................. 17
1.2. Lucrri practice de efectuat ........................... 18
1.2.1. Evidenierea activitii enzimatice a amilazei
salivare .............................................................. 18
Reacia Trommer ......................................... 20
1.2.2. Evidenierea substanelor anorganice prezente n
mod normal n saliv .......................................... 21
Evidenierea calciului prezent n saliv ......... 21
1.2.3. Evidenierea substanelor anorganice
prezente n mod anormal n saliv ..................... 23
Evidenierea mercurului excretat n saliv .... 23
Evidenierea plumbului excretat n saliv ..... 24
Reacia cu sulfit de sodiu (reacia Ivanov) 24
Reacia cu cromat de potasiu ................. 24
Evidenierea bismutului excretat n saliv ..... 25
1.3. Modificri ale secreiei salivare ..................... 28
1.4. ntrebri ........................................................... 31

2. Fiziologia stomacului ...................................... 33


2.1. Noiuni introductive ........................................ 33

5
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

2.1.1. Caracteristici fizice i chimice ale sucului


gastric ............................................................... 34
2.1.2. Recoltarea sucului gastric ........................ 36
2.2. Lucrri practice de efectuat ........................... 39
2.2.1. Dozarea acidului clorhidric din sucul
gastric ............................................................... 39
2.2.2. Evidenierea acidului clorhidric liber n
sucul gastric ...................................................... 42
2.2.3. Evidenierea acidului lactic n sucul
gastric ............................................................... 43
2.2.4. Evidenierea aciunii proteolitice a
pepsinei ............................................................. 44
2.2.5. Coagularea laptelui sub aciunea
labfermentului .................................................... 46
2.3. Modificri ale secreiei gastrice .................... 47
2.4. ntrebri........................................................... 49

3. Fiziologia pancreasului .................................... 51


3.1. Noiuni introductive ....................................... 51
3.1.1. Caracteristici fizice i chimice ale sucului
pancreatic.......................................................... 52
3.1.2. Recoltarea sucului pancreatic .................. 54
3.2. Lucrri practice de efectuat ........................... 55
3.2.1. Dozarea activitii enzimatice a tripsinei prin
metoda Gross-Michaelis .................................... 55
3.2.2. Dozarea produilor de digestie triptic prin
metoda Srensen .............................................. 57
3.2.3. Dozarea activitii lipolitice prin metoda
Carnot-Mauben ................................................. 59
3.2.4. Dozarea activitii amilolitice prin metoda
Wolgemuth ........................................................ 61
3.3. Modificri ale secreiei pancreatice .............. 63
3.4. ntrebri........................................................... 66

4. Fiziologia ficatului ............................................ 69


4.1. Noiuni introductive ....................................... 69
4.1.1. Caracteristici fizice i chimice ale bilei ..... 71

6
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

4.1.2. Recoltarea bilei ........................................ 77


4.2. Lucrri practice de efectuat ........................... 78
4.2.1. Reacii calitative de punere n eviden a
rolurilor srurilor biliare....................................... 78
Evidenierea aciunii de emulsionare a
grsimilor de ctre srurilor biliare ............... 78
Evidenierea aciunii de scdere a tensiunii
superficiale a lichidelor n care se afl srurile
biliare prin reacia Hay.................................. 79
Evidenierea aciunii hidrotrope a srurilor
biliare. Solubilizarea acizilor grai ................ 80
4.2.2. Reacii calitative de punere n eviden a
srurilor biliare ................................................... 81
Reacia Pettenkofer...................................... 81
Reacia Udranszky ....................................... 82
4.2.3. Evidenierea pigmenilor biliari n urin prin
determinri calitative .......................................... 83
Reacia Trousseau-Rosin ............................. 83
Reacia Gmelin ............................................ 83
Reacia Rosenbach ...................................... 84
Reacia Franke ............................................. 85
Reacia Ionescu-Matiu.................................. 86
4.3. Modificri ale secreiei biliare ........................ 88
4.4. ntrebri ........................................................... 89

5. Fiziologia muchiului neted ............................ 91


5.1. Noiuni introductive ........................................ 91
5.2. Lucrri practice de efectuat ........................... 96
5.2.1. nscrierea grafic a secusei muchiului
circular al stomacului de broasc ....................... 96
5.2.2. nregistrarea in vitro a contraciilor
fragmentelor de intestin de la animale cu snge
cald .................................................................... 99
5.3. ntrebri ........................................................... 104

Bibliografie............................................................ 107

7
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

INTRODUCERE

Actualul "Caiet de Lucrri Practice" se constituie ntr-un


ndrumtor necesar pentru studenii facultilor de medicin
din primii ani, n acumularea cunotiinelor de fiziologie a
tractului digestiv.
Ideea c el faciliteaz acest proces, se desprinde din
modul n care a fost conceput. Fiecare tem furnizeaz
studentului minime cunotiine morfo-fiziologice despre
organul explorat, permindu-i coroborarea testelor n
contextul integritii funcionale a segmentului digestiv
respectiv.
S-au pstrat, din ediiile anterioare, testele simple,
relativ uor de efectuat practic de ctre student, deoarece ele
contribuie la fixarea cunotiinelor elementare de fiziologie a
digestiei. La fiecare capitol, au fost menionate i testele
moderne, complexe, care pot completa evaluarea minim de
laborator i facilita diagnosticarea unor afeciuni digestive,
precum i urmrirea evoluiei acestora, a eficienei terapiei
instituite.
Testele practice, de efectuat n laborator, sunt
prezentate sistematizat, cu tehnici de lucru detaliat expuse,
menionndu-se valorile normale pentru fiecare test.
Sunt comentate succint i variaile fiziologice i
patologice ale valorilor testelor prezentate, fcnd astfel
legtura cu aspectele clinice. Pentru a uura acumularea i a
unor astfel de cunotiine, afeciunile menionate sunt descrise
9
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

pe scurt sau se recomand cutarea lor n dicionarele


medicale (exist o rubric a termenilor ce se impun a fi
clarificai).
Adugarea, n finalul fiecrui capitol, a unei serii de
ntrebri ajut, de asemenea, la fixarea de ctre studeni a
noiunilor referitoare la segmentul digestiv respectiv.
n susinerea celor prezentate anterior, se pot meniona
cele 16 figuri, care ilustreaz sintetic noiunile expuse n text,
un numr de 14 tabele, care sistematizeaz elementele
inserate, precum i bibliografia parcurs.
Fiind contieni c orice astfel de materiale nu pot
cuprinde toate aspectele necesare, suntem deschii i
acceptm observaii pertinente pe marginea celor inserate n
actualul "Caiet de Lucrri practice", pentru a aduce
mbuntiri ediiilor viitoare.
Mulumesc colabolatorilor pentru eforturile depuse n
ntocmirea materialelor, tinerilor colegi pentru ajutorul dat n
tehnoredactare, ce denot preocuparea colectivului disciplinei
pentru ghidarea i facilitarea procesului de nsuire a
cunotiinelor de fiziologie, de ctre studenii mediciniti.

Prof. univ. dr. Maria Iancu

10
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

FIZIOLOGIA GLANDELOR
SALIVARE

1.1. NOIUNI INTRODUCTIVE

Saliva este un
amestec al produselor de
secreie ale celor trei perechi
de glande salivare mari
(parotide, submaxilare i
sublinguale) reprezentnd
aproximativ 99% din totalul
secreiei i ale numeroase
glande mici diseminate n
mucoasa oral, aproximativ
1%.
Glanda parotid
(gland seroas) produce o
saliv fluid, bogat n
Figura 1.1. Localizrile glandelor fermeni (amilaza salivar),
salivare mari saliva de masticaie i de
digestie, reprezentnd circa 25% din totalul secreiei salivare,
n repaus.
Glanda submaxilar (gland mixt, sero-mucoas)
produce o saliv sero-mucoas, ce umezete limba, nlesnind
simul sapid - saliva de gustare (cca. 70% din secreia
salivar).

11
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

Glanda sublingual (gland mucoas) produce o


saliv filant, vscoas, cu mult mucus, ce aglutineaz
particulele alimentare, formnd bolul alimentar i ajut
deglutiia saliva de deglutiie (4% din totalul secreiei
salivare).
Proprietile fizice i compoziia chimic a salivei totale
variaz foarte mult, ele depinznd de trei factori:
participarea predominant a unei glande sau a
alteia la producerea salivei totale, n funcie de felul
i caracterele excitantului adecvat (alimentar-
gustativ) sau neadecvat (corp strin n gur - nisip,
pietricele; iritaie dureroas a mucoasei, extracie
dentar, amigdalectomie, stomatit, gingivit etc.).
Astfel, compoziia final se adapteaz la stimulii ce
determin secreia;
intensitatea excitaiei, respectiv a secreiei,
deoarece numeroi ioni din saliv variaz mult n
concentraie, paralel cu intensitatea secreiei i cu
efortul fizic depus (s-a observat creterea
concentraiei ionilor de Na+ n efort intens, prin
stimularea SNV simpatic, putnd fi un eventual
indicator al activitii n anaerobioz; de asemenea,
crete n efort i concentraia ionilor de K+, prin
vasoconstricia produs i, implicit, prin efluxul de K+
din celulele salivare);
starea glandei, dac a mai secretat sau nu intens,
de curnd.
De aceea, nu este posibil redarea unor valori exacte,
referitoare la compoziia salivei umane, ci doar a unor valori
medii, orientative.

12
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

1.1.1. Caracteristici fizice i chimice ale salivei

Aspectul: saliva total, de repaus, este un lichid


incolor, transparent sau translucid (datorit unor mici
aglomerri opalescente), puin filant (uneori intens filant,
cnd se inger alimente cum ar fi laptele, acesta excitnd
puternic glandele salivare mucoase i sero-mucoase). Uneori
saliva este spumoas, datorit bulelor de gaze i a mucinei
mai abundente. Formaiunile opalescente de aspectul unor
flocoane (noriori), examinate la microscop (dup o
prealabil colorare cu albastru de metilen), pot fi:
celule epiteliale descuamate
leucocite ntregi sau alterate
microorganisme
mucus
mici resturi alimentare
Saliva are un gust fad i este aproape inodor.
Cantitatea n 24h: n medie 1 litru/zi (600-2000 ml/zi),
depinde mult de cantitatea i calitatea alimentelor ingerate.
Cea mai mare parte se secret cu prilejul alimentaiei; ntre
perioadele de alimentaie i n linite (fr excitani conditionai
alimentari), adultul secret ~15 ml/h, iar nou-nscutul ~ 4 ml/h.
pH-ul = 6-7 la aduli, la copii este mai alcalin; saliva
parotidian este mai acid, cea submaxilar mai puin acid.
pH-ul salivei este paralel cu cel sanghin, dar, n acelai timp,
prin sistemele tampon proprii salivei, aceasta se adapteaz
necesitilor de tamponare, respectiv pH-ului soluiilor sau
alimentelor ingerate.
pH > 7 (alcalin), ionii de calciu precipit, cu apariia
sialoliilor;
pH< 7 (acid), favorizeaz apariia cariilor dentare,
prin afectarea smalului dentar.
Densitatea (greutatea specific): 1,002 - 1,008 g/cm3
este mai mic dect a plasmei sanghine (1,026).

13
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

Punctul crioscopic (temperatura la care nghea


saliva): de la - 0,2 la - 0,4C.
Vscozitatea: difer n funcie de glanda a crei
secreie predomin i de felul alimentelor.
Saliva conine: 99,4% ap i 0,6% reziduu uscat (0,4%
substane organice i 0,2% substane anorganice).
Substanele organice (0,4%):
azotate proteice (proteine 262 mg/100ml saliv) :
mucin, albumine, globuline, enzime (amilaza
salivar, lipaza, proteinaze, peptidaze),
aglutinogene din sistemul OAB i sistemul Lewis
(cei care secret astfel de aglutinogene n saliv
poart numele de secretori), sialogastrona,
substane vasoactive (bradikinina, kallicreina);
azotate neproteice: aminoacizi (glicocol, alanin,
valin, metionin, lizin, leucin etc.), uree, acid
uric, creatinin, amoniac;
neproteice: acid citric, acid lactic, vitamine
(C,B1,B2,B6), alcool (cnd este n snge n
concentraii crescute);
sulfocianat sau rodanat de K.
Substanele anorganice (0,2%): cloruri, fosfai, sulfai,
bicarbonai de calciu, magneziu, sruri ale unor metale grele
(ajunse accidental n organism).
Cl- este secretat proporional cu intensitatea
secretiei, la fel i secreia de Na+, Ca2+;
K+ (este secretat independent de debit, n
concentratie mai mare dect n plasm), Mg, Br, Cu,
I, F, Co;
carbonatul i fosfatul de calciu pot precipita sub
form de calculi salivari, n interiorul canalelor
salivare sau, n combinaii cu substanele organice,
pot s se depun ca tartru.
Enzimele importante ale salivei:

14
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

-amilaza (ptialina, glicozid hidrolaza) se gsete n


cantiti cuprinse ntre 0-300 mg/100 ml saliv; ca
izoenzim, se mai gsete i n muchi, snge,
urin, aici fiind de origine pancreatic;
enzime lipolitice i proteolitice (n cantiti infime)
care, de fapt, nu sunt secretate de glandele salivare,
ci provin din degradarea leucocitelor, celulelor
epiteliale sau a bacteriilor;
lizozimul (enzima bactericid din grupul
mucoproteinelor, descoperit de A. Fleming,
naintea penicilinei), lizeaz streptococi, stafilococi,
proteus, brucella.
S-a observat prezena unor cantiti de hormoni de
cretere la nivelul glandei submandibulare : NGF (nerve
growth factor) i EGF (epidermal growth factor), secretai
independent de reglarea rspunsurilor generale de cretere.
NGF, EGF, TGF- (transforming growth factor-),
kallicreina au un rol important n reglarea rspunsului
imun/inflamator al mucoasei, n regenerare i vindecare.
Substanele, ajunse n circulaia sanghin, se comport ca
imunomodulatori sistemici, avnd rol n reglarea sistemului
neuroendocrin central. mpreun cu proteinele antibacteriene
i cu Ig A, secretate tot la acest nivel, se asigur aprarea
local, la nivelul mucoasei orale.

15
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

1.1.2. Rolurile fiziologice ale salivei

Roluri fizice:
mbib, nmoaie alimentele, ajut masticaia,
aglutineaz alimentele triturate, formnd bolul
alimentar;
lubrefiaz bolul alimentar i ajut astfel deglutiia;
prin solubilizarea alimentelor, permite funcionarea
simului gustului (sapid) - numai substanele
dizolvate n ap pot ajunge la receptorii gustativi,
pentru a-i excita;
ajut vorbirea;
cur gura;
asigur senzaia de confort, prin umezirea
permanent a gurii; n cazul febrei, n deshidratri,
la administrarea de atropin, apare o senzaie
dezagreabil, de uscciune a gurii.

Roluri chimico-digestive: cu ajutorul amilazei salivare


diger amidonul preparat (fiert sau copt) pn la maltoz,
trecnd prin stadii intermediare de dextrine; enzima i
continu activitatea i n stomac, pn la acidifierea complet
a bolului alimentar.

Rol de eliminare:
metale grele (Pb, Hg, Bi) sau I, As, KSCN
(sulfocianat de potasiu - cale de detoxifiere a
organismului);
alcaloizi (morfina), antibiotice, alcool etilic;
uree, acid uric (la persoanele cu gut sau cu
afeciuni renale), glucoz ( n cazul n care glicemia
200-300 mg/ml);
virusuri (poliomielit, hepatit, rabie, parotidit
epidemic).

16
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

1.1.3. Tehnici de recoltare i transport ale salivei

Experimental: la animal, prin procedeul fistulelor


salivare (6 sau 3 fistule salivare), n experiment acut sau
cronic, utilizate pentru cercetri, bazate pe reflexele
condiionate, pentru aflarea compoziiei salivei n funcie de
diversele alimente ingerate.
La om:
prin cateterizarea canalelor glandelor salivare mari
(mai ales al parotidei);
prin capsul salivar;
cu ajutorul gumei de mestecat, a bolului de parafin,
a perlelor de sticl, prin cltirea gurii cu ap.
n toate cazurile de recoltare la om, saliva se obine mai
ales prin excitaie negustativ, peste care se suprapune i o
oarecare cantitate de saliv produs prin excitaie gustativ.
Recoltarea salivei, n mod fiziologic, s-ar realiza n
timpul masticaiei alimentelor, pe un fond de senzaie de
foame, dar, n majoritatea cazurilor, saliva mbib alimentele i
nu mai poate fi recoltat pur i nici toat cantitatea secretat
de ctre glande; deci, la om, nicio metod de recoltare nu este
perfect.
Colectarea, transportul i procesarea mostrelor salivare
se poate face n tuburi speciale (colectoare salivare), sterile,
ce indic volumul salivei i asigur condiii optime pentru
pstrarea coninutului timp de 24 ore, la temperatura camerei.

17
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

1.2. LUCRRI PRACTICE DE EFECTUAT

1.2.1. Evidenierea activitii enzimatice a amilazei


salivare

Amilaza salivar (-amilaza, ptialina sau glicozid


hidrolaza) are nevoie, pentru a putea aciona, de urmtoarele
condiii optime:
temperatur de ~ 37C;
pH = 6-7 (pH-ul salivei);
s existe electrolii n soluie;
s existe halogeni n mediul de reacie (Cl-, Br-, I-);
s fie prezeni ionii de calciu, care o activeaz.
Prezena srurilor metalelor grele n saliv, inhib
amilaza!
Ea hidrolizeaz legturile 1-4 glicozidice ale
poliglucosanilor (amidon, amilopectin, glicogen, dextrin), cu
eliberarea dizaharidului maltoz n proporie de 80%, restul
rmnnd sub form de dextrin stabil, rezistent la aciunea
enzimei. Hidroliza presupune scindare (liz), prin legarea unei
molecule de ap la locul rupturii moleculei mari, n dou
molecule mai mici.

Principiul metodei:
Se evideniaz activitatea amilazei salivare, de scindare
a amidonului preparat pn la stadiul de maltoz, trecnd prin
stadii intermediare de dextrine, prin adugare de soluie Lugol
(iod iodurat 1).
n prezena soluiei Lugol, amidonul d culoarea
albastr; pe msur ce se diger, culoarea vireaz spre violet
(amilodextrina), roz-rou (eritrodextrina) i apoi incolor
(acrodextrina i maltoza).

18
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

amilaz
amidon preparat amilodextrin + maltoz
(fiert sau copt) + H2O
amilaz
+H2O

eritrodextrin + maltoz

amilaz
+H2O

acrodextrin + maltoz

amilaz
+H2O

maltoz
Schema aciunii de scindare a amidonului
de ctre amilaz

Materiale necesare:
6 eprubete, pipete, stativ
saliv nativ
soluie 1% de amidon fiert, solubil
soluie Lugol
soluie NaOH 20%
soluie sulfat de cupru
bec de gaz.
Tehnica de lucru:
Se ia un stativ cu 6 eprubete (vezi tabelul nr.1.1.). n
fiecare eprubet se pun 2-3 ml soluie 1% de amidon fiert,
solubil, peste care se adaug cte o pictur de soluie Lugol.
Astfel, coninutul fiecrei eprubete capt culoarea albastr.

19
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

Prima eprubet se las nemodificat, fiind eprubeta


martor, avnd culoarea albastr. n a doua eprubet se pune 1
ml de saliv, fiart n prealabil i apoi rcit (saliva se fierbe
pentru a distruge amilaza salivar, care este o enzim
termolabil), deci i aceast eprubet va rmne albastr. n
urmtoarele 4 eprubete se pune cte 1 ml de saliv nefiart i
se agit. Cnd o eprubet capt culoarea violet (amidonul a
fost scindat la amilodextrin), se fierbe eprubeta pentru a opri
reacia n acest stadiu. Prin fierbere, aceasta devine incolor;
se rcete un minut sub jet de ap i se adaug o pictur de
soluie Lugol, pentru a reapare culoarea violet.
La fel se procedeaz i cu eprubeta 4 (se oprete
reacia la stadiul de eritrodextrin - roz) i 5 (acrodextrin -
incolor). Ultima eprubet, dup ce a devenit incolor, se mai
las nc 5-10 minute la 37C, pentru a se obine scindarea
complet a acrodextrinei la maltoz. n aceast ultim
eprubet se face reacia Trommer.

Epr. 1 Epr. 2 Epr. 3 Epr. 4 Epr. 5 Epr. 6

Amidon
2-3 ml 2-3 ml 2-3 ml 2-3 ml 2-3 ml 2-3 ml
fiert
Soluie 1 1 1 1 1 1
Lugol pictur pictur pictur pictur pictur pictur
fiart i
Saliv - nativ nativ nativ nativ
rcit
Incolor
+
Culoare albastru albastru violet roz-rou incolor
Reacia
Trommer

Tabelul nr. 1.1. Substanele introduse n eprubetele de reacie


Reacia Trommer evideniaz proprietatea reductoare
a maltozei, prin gruparea aldehidic pe care o conine. Peste
soluia de maltoz din ultima eprubet, se adaug o cantitate
egal de soluie de hidroxid de sodiu 20%. Apoi, pictur cu

20
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

pictur, se adaug soluie de sulfat de cupru, pn la apariia


unui precipitat albastru. Prin fierberea coninutului eprubetei,
maltoza reduce hidroxidul de cupru la oxid cupros, un
precipitat rou-crmiziu.

Atenie!!! Coninutul eprubetei este puternic alcalin, prin


soluia de NaOH, deci caustic, putnd produce leziuni ale
tegumentelor sau ale vestimentaiei, n caz de manipulare incorect!

Rezultate:
eprubeta 1: culoare albastr (martor)
eprubeta 2: culoare albastr (enzim inactiv)
eprubeta 3: culoare violet (amilodextrin)
eprubeta 4: culoare roz-rou (eritrodextrin)
eprubeta 5: incolor (acrodextrin)
eprubeta 6: incolor, efectuarea reaciei Trommer
determinnd apariia unui precipitat rou crmiziu
(oxid cupros).

1.2.2. Evidenierea substanelor anorganice


prezente n mod normal n saliv.

Evidenierea calciului prezent n saliv

Principiul metodei:
Calciul, coninut n saliv, sau n alte lichide biologice
sub form de sruri, formeaz, la pH = 12, cu indicatorul
complexonometric murexid (sare de amoniu a acidului
purpuric sau indicator complexonometric I), un compus solubil,
de culoare roie.
Prin tratarea cu o soluie diluat de EDTA (Ac.
Etilendiaminotetraacetic sau complexon III ), ca urmare a
distrugerii compusului murexid - Ca2+ (rou), se formeaz

21
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

sarea de calciu a compexonului III i murexidul rmne liber,


dnd culoarea violet ntregii soluii.

Ca2+ + murexid = Ca2+- murexid (rou)


Ca2+- murexid + EDTA = Ca2+- EDTA + murexid (violet)

Aplicaiile complexonilor n domeniul aa numitelor dozri


volumetrice (titrri complexonometrice sau chelatometrice) au
o mare importan n chimia analitic i biologic.
Principiul acestei metode st la baza unui numr extraordinar
de mare de metode de dozare a calciului din ap, sol, snge,
urin sau alte medii biologice. Aceste titrri s-au extins ca
aplicaie i la dozarea unor medicamente. Indicatorii utilizai n
aceste titrri se numesc indicatori complexonometrici.
Titrarea poate fi calitativ (aa cum se va desfura lucrarea
noastr de fa) sau cantitativ, cnd se determin exact
volumul i, deci, cantitatea molar de complexon adugat
pn la virarea culorii i apoi, prin calcul, se afl cantitatea
exact de cation din soluie.

Materiale necesare:
saliv (sau alt lichid biologic)
cristale de murexid
soluie de EDTA
soluie de NaOH 2N
ap bidistilat
eprubete, pipete, stativ.

Tehnica de lucru:
Se recolteaz ntr-un vas 1-2 ml de saliv, se dilueaz
cu 5 ml ap bidistilat (care nu mai conine calciu), se adaug
5 ml de NaOH 2N i 3 - 4 cristale de murexid. Se agit soluia
i se obine o coloraie roz-roie (n cazul n care soluia
conine calciu). Se adaug progresiv, picurnd, soluie de
EDTA pn ce se obine o coloraie violet, dat de murexidul
rmas liber n soluie.

22
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

Rezultate:
La finalul reaciei, coninutul eprubetei se coloreaz
violet.

1.2.3. Evidenierea substanelor anorganice


prezente anormal n saliv.

Evidenierea mercurului excretat n saliv

Principiul metodei:
Ditizona, n soluie de tetraclorur de carbon sau
cloroform, are o culoare verde; n contact cu saliva
impurificat cu o sare mercuric, va cpta o culoare
portocalie, prin formarea ditizonatului mercuric.
Reactivul este foarte sensibil, dar d reacii pozitive cu
mai muli ioni: Pb, Ag, Zn, Cu.
Limita de recunoatere pentru Hg este de 0,25 g
cantitate total n soluia cercetat.

Materiale necesare:
soluie cloroformic (sau n tetraclorur de carbon)
de ditizon
soluie de azotat mercuric
saliv nativ
eprubete, pipete, stativ.

Tehnica de lucru:
Se recolteaz ntr-o eprubet 1-2 ml saliv, peste care
se adaug 1ml soluie azotat mercuric, pentru a se realiza
situaia n care saliva recoltat ar conine mercur (ar fi
recoltat de la persoane ce lucreaz n mediu toxic cu
mercur). Se pipeteaz apoi 2 ml soluie cloroformic de
ditizon (verde) i se agit.

23
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

Rezultate:
Prin formarea ditizonatului mercuric, apare culoarea
portocalie n partea inferioar a eprubetei.

Evidenierea plumbului excretat n saliv

Reacia cu sulfit de sodiu (reacia Ivanov)


Principiul metodei :
Srurile de plumb din saliv formeaz cu soluia de
sulfit de sodiu un precipitat alb de sulfit de plumb.
Aceast reacie de decelare a Pb este foarte sensibil, avnd
o limit de recunoatere de 0,05 g Pb, cantitate total n
soluia cercetat.

Materiale necesare:
soluie de sulfit de sodiu
soluie de azotat sau acetat de Pb
saliv nativ
pipete, stativ, eprubete.

Tehnica de lucru:
ntr-o eprubet se recolteaz 1-2 ml de saliv normal,
ce se impurific prin adugarea a 1-2 ml de soluie de sare de
plumb (ca i cnd ar fi recoltat de la o persoan ce lucreaz
n mediu toxic cu Pb). Se adaug apoi 2 ml de sulfit de sodiu.

Rezultate:
Apariia unui precipitat alb, de sulfit de Pb, indic
prezena plumbului n saliv.

Reacia cu cromat de potasiu

Principiul metodei:
Soluiile apoase de cromat de potasiu formeaz cu
srurile de plumb din saliv un precipitat galben ca lmia, de
24
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

cromat de Pb, solubil n acid azotic i NaOH, insolubil n acid


acetic. Limita de recunoatere a soluiei este de 20 g Pb,
cantitate total n soluia de cercetat, fiind o metod mai puin
sensibil dect cea anterioar.

Materiale necesare:
saliv nativ
soluie de cromat de potasiu (K2CrO4)
soluie de azotat sau acetat de Pb
pipete, stativ, eprubete.

Tehnica de lucru:
ntr-o eprubet, peste 2 ml de saliv normal, se
adaug 1-2 ml soluie de sare de Pb; pentru evidenierea
plumbului, se adaug apoi 2 ml de cromat de potasiu i se
agit coninutul.

Rezultate:
Apariia unui precipitat galben de cromat de Pb, indic
reacia pozitiv.

Evidenierea bismutului excretat n saliv

Principiul metodei:
Srurile stanoase (clorura stanoas), n mediu puternic
alcalin (KOH), se oxideaz i trec n sruri stanice. Sarea
stanic astfel obinut tetrahidroxistanitul dipotasic
K2Sn(OH)4 , n mediu alcalin, reduce ionul de Bi3+ din saliv,
aducndu-l n forma metalic pur, ce apare ca un precipitat
negru, n partea inferioar a eprubetei.
Limita de evideniere a bismutului este de 1 g.
Arseniul, stibiul i plumbul nu dau aceast reacie, deci se
poate decela bismutul i n prezena plumbului.

25
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

Materiale necesare:
saliv
soluie proaspt de clorur stanoas (SnCl2)
soluie de KOH
soluie de Bi clorurat sau azotat
pipete, stativ, eprubete.

Tehnica de lucru:
ntr-o eprubet cu 0,5 ml clorur stanoas proaspt se
adaug ncet i se agit, o soluie de KOH, numai pn la
dizolvarea complet a precipitatului format iniial
(tetrahidroxistanitul dipotasic). Se adaug apoi 1-2 ml de
saliv, impurificat n prealabil cu 2 ml sare de bismut
(mimnd saliva recoltat de la o persoan care lucreaz n
mediu cu Bi sau face tratament pe baz de Bi).

Rezultate:
Se observ apariia de particule negre, ce se depun
ncet n partea inferioar a eprubetei (precipitat negru).
2-
Punerea n eviden a altor anioni prezeni n saliv (SO 4 i
-
HCO3 )
Materiale necesare:
eprubete, pipete, stativ
soluie acid clorhidric 10%
soluie clorur de bariu 5%
acid acetic.
Tehnica de lucru:
2-
Anionii de SO4
Se pun ntr-o eprubet 2-3 ml saliv fiart i filtrat. Se adaug 2-3
picturi HCl 10% i cteva picturi clorur de bariu. Apare un precipitat alb
de sulfat de bariu.
3-
Anionii de HCO
Peste 2-3 ml saliv nativ se adaug ntr-o eprubet 1-2 picturi
acid acetic. Apar bule gazoase de CO2.

26
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

Examenul microscopic al salivei


Materiale necesare:
lam de sticl
albastru de metilen 1%
microscop
saliv.
Tehnica de lucru:
Se pune o pictur de saliv pe lam, se adaug o pictur de
albastru de metilen i se observ la microscop: filamente de mucin, celule
epiteliale descuamate, leucocite, diferite bacterii, resturi alimentare.

Reacia salivei
Materiale necesare:
- hrtie indicatoare
- penset.
Tehnica de lucru:
O fie de hrtie indicatoare este nmuiat n saliv. Se compar
culoarea obinut cu scala de culori a hrtiei indicatoare.

Detectarea anticorpilor anti-HIV


Este o metod modern, foarte uor de realizat (datorit strip-urilor
HIV) i de acceptat de ctre pacient, dar utilizat numai de ctre personal
specializat. Nu necesit prepararea unor reactivi speciali, probele se
pstreaz la temperatura camerei, rezultatul este obinut n cteva minute
i are o senzitivitate i o specificitate de 99,4%.

Dozri hormonale salivare


Dozarea cortizolului salivar
Este o metod neinvaziv de evaluare a activitii
corticosuprarenale, aplicabil n cercetarea stresului, cortizolul fiind
recunoscut ca indicator obiectiv al activrii axului hipotalamo-hipofizo-
corticosuprarenalian, n situaii de stres acut.
Lipsa legrii de proteinele din saliv permite determinarea
hormonului, la un pH de 7,4.
Importana determinrii hormonului n saliv:
recoltarea salivei este neinvaziv, nestresant i acceptat cu
uurin de subieci
permite prelevri multiple n cursul zilei de activitate
reflect fidel concentraia de cortizol liber (activ biologic) din
plasm

27
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

metoda poate fi folosit pentru evaluarea reactivitii axului


hipotalamo-hipofizo-corticosuprarenalian la stres.
Valori normale ale cortizolului salivar:
brbai 12,9 +/- 5 nmol/l
femei 13,7 +/- 6,3 nmol/l
copii 12,3+/- 6 nmol/l.
Modificri ale valorilor normale, n sensul creterii nivelurilor
sanghine i salivare se ntlnesc n sindromul Cushing, cnd nu mai exist
variaii circadiene ale cortizolului plasmatic, nivelul acestuia nu se modific
la administrarea de doze mici de dexametazon (2 mg/zi 2 zile) i cresc
eliminrile urinare de cortizon. Scderi ale valorilor se ntlnesc n boala
Addison.
Alte dozri hormonale
Din saliv se mai pot doza:
aldosteronul (valori normale ale aldosteronului salivar 30-210
pmol/l),
testosteronul salivar (val. normale: la 16 ani 370+/- 155
pmol/l, la 17 ani 390+/-100 pmol/l, 22-55ani 1025+/- 155
pmol/l, pentru brbai i 677+/- 87 pmol/l pentru femei), ale
crui dozri sunt folosite n cazul infertilitii masculine;
progesteronul sau estrogenul salivar.
Dozrile hormonale din mostre salivare sunt mult mai uor
acceptate de ctre pacieni, datorit facilitii recoltrii lor, fiind n acelai
timp i n concordan cu nivelul sanghin al hormonilor.

1.3. MODIFICRI ALE SECREIEI SALIVARE

Secreia salivar poate fi crescut, diminuat sau


abolit n:
diverse condiii fiziologice;
dup administrarea unor medicamente;
n cursul unor boli.

Accentuarea secreiei salivare


Fiziologic, secreia salivar se accentueaz cnd sunt
vzute sau mirosite alimentele apetisante i cnd ne este
foame; apoi, la ceva timp dup alimentaie, se mai produce
saliv n cantiti mari ca reacie la condimente, dup fumat, la

28
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

mestecarea tutunului sau a altor produse vegetale excitante


(coca, betel), n cazul unor corpi strini n gur, precum i n
timpul graviditii.
n patologie, hipersalivaia de intensitate medie se mai
numete i ptialism (termenul deriv din limba greac veche:
ptyalon= saliv, ptyalismos= secreie salivar crescut).
Substanele medicamentoase parasimpaticomimetice
(muscarina, colina, acetilcolina) pot declana o secreie
abundent.
O secreie n cantitate mare se mai poate ntlni i n
toate cazurile de:
grea (inclusiv n cazul rului de mare, de
altitudine);
n iritaii meningiene (meningit);
n cazuri de excitaie local sau pe traseul nervului
trigemen (nevralgia de trigemen, abces amigdalian,
angin, dinte cariat dureros, erupie dentar la copil,
dup extracii dentare, tumori ale limbii, glosit,
gingivite, metale grele eliminate prin saliv);
maladii ale SNC (maladia Parkinson, encefalit,
turbare, criza de epilepsie);
afeciuni ale urechii medii, prin iritarea nervului
coarda timpanului.
n cazul hipersalivaiei din afeciunile neurologice, ca i
la unele gravide sau la copiii mici, salivaia este att de
abundent nct o parte din saliv se scurge din gur
sialoree (din limba greac veche = curgere salivar).

Reducerea secreiei salivare


Hiposecreia salivar (aptialism, achilie bucal, asilie)
i chiar sistarea complet a acesteia (xerostomie- xerox=
uscat, stoma=gur) pot apare:
n strile emotive, anxietate, fric

29
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

la administrarea de medicamente
parasimpaticolitice (atropina, scopolamina)
n stri de deshidratare a ntregului organism (febr,
transpiraii abundente, hemoragii, vrsturi, diarei
profuze, diabet insipid).
Suprimri totale i permanente ale secreiei pot apare
la menopauz, n caz de paralizie facial periferic, n boala
Mikulicz (hipertrofia bilateral a glandelor salivare), boala
Gugerot-Sjgren (scleroza glandelor salivare i lacrimale),
lipsa congenital a glandelor salivare sau a canalelor lor.
Alte modificri pot fi ntlnite la nivelul mucoasei bucale
sub form de inflamaii ale gingiilor, limbii (gingivite, glosite,
stomatite). Acestea apar mai ales la muncitorii ce lucreaz n
medii toxice cu Hg, Pb, Cd (fabrici de oglinzi, de termometre,
acumulatori cu Pb, evi i alte piese de plumb, la vopsitori ce
vopsesc cu miniu de Pb, tipografi, mineri, muncitori din
combinate chimice), sau la cei ce iau tratament cronic pe baz
de Bi sau unele antibiotice. La aceste persoane, pe lng
simptomatologia specific fiecrei intoxicaii, pot apare iritaii
gingivale i orale, datorit eliminrii acestor substane n
saliv.
Gingivita mercuric se caracterizeaz printr-o dung
cenuie pe marginea gingiilor, la baza dinilor (lizereu
gingival), o puternic iritaie i salivaie abundent; gingivita
bismutic produce un lizereu albastru-cenuiu, iar cea
saturnin (intoxicaie cu Pb) o dung albastru-cenuie.
Mai apar gingivite i stomatite n avitaminoze ale
complexului B, prin lipsa de fier din organism, n infecii orale
microbiene, virotice, fungice, mai ales la cei cu maladii
hematologice (agranulocitoz, leucemii), tratamente
ndelungate cu antibiotice, defecte imunologice. Aceste leziuni
nu sunt datorate salivaiei modificate sau glandelor salivare, ci
unor cauze generale extrasalivare.

30
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

Calculii salivari
Calculii salivari (sialoliii: sialon=saliv, litos=piatr)
apar rareori i aproape exclusiv n canalul Wharton. Calculii
sunt formai din sruri anorganice (carbonai i fosfai acizi de
calciu).

Cutai ntr-un dicionar explicativ medical semnificaia


urmtorilor termeni: seros, ferment, aglutinogen, tartru,
dextrine, gut, ptialin, HIV, boala Cushing, dexametazon,
boala Addison, coca, betel, parasimpaticomimetice, glosit,
gingivit, stomatit, boala Parkinson, ptialism, sialoree,
aptialism, xerostomie, sialolit, precum i a altor termeni
ntlnii n acest capitol, pe care nu i cunoatei.

1.4. NTREBRI

1. Care sunt glandele salivare mari, cum se numesc


canalele lor i ce tip de secreie prezint?
2. Ct este pH-ul salivei i ce cantitate de saliv se
secret n 24 de ore?
3. Cum se numete enzima din saliv cu rol digestiv?
4. Amilaza salivar - asupra cui acioneaz i ce rezult?
5. Cum se numete creterea secreiei salivare?
6. Cum se numete scderea secreiei salivare?
7. Dai exemple de minimum cinci substane organice
prezente n saliv.
8. Lyzozimul - ce este, unde se gsete, ce rol are?
9. Care sunt rolurile fizice ale salivei?
10. Ce substane se pot elimina prin saliv?
11. Care sunt condiiile optime necesare amilazei pentru a-
i desfura activitatea?
12. Ce este ptialismul? Dai minimum trei exemple de
situaii n care poate apare.
13. Ce este aptialismul sau achilia oral? Exemple.

31
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

14. Ce sunt calculii salivari i unde apar cel mai frecvent?


15. Ce tip de gland salivar secret saliva de deglutiie;
de ce se numete aa produsul de secreie?
16. Ce tip de gland salivar secret saliva de masticaie
i de digestie; de ce se numete aa produsul de
secreie?
17. Ce tip de gland salivar secret saliva de gustare?
Explicai denumirea produsului de secreie.
18. Ce se ntmpl n cazul n care se modific pH-ul
salivei?
19. Dai exemple de cinci substane anorganice prezente n
saliv.
20. Ce se evideniaz prin reacia Trommer?
21. Dai cte trei exemple de meserii expuse intoxicaiei cu
Hg, Pb sau Bi.
22. Care sunt centrii nervoi salivatori?
23. Parasimpaticul intermediar chimic, pe ce receptori
acioneaz?
24. Efectele parasimpaticului asupra glandelor salivare.
25. Simpaticul intermediar chimic, pe ce receptori
acioneaz?
26. Efectele simpaticului asupra glandelor salivare.
27. Fazele salivaiei enumerare.

32
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

FIZIOLOGIA STOMACULUI

2.1. NOIUNI INTRODUCTIVE

Stomacul este un
organ cavitar, plasat ntre
esofag i duoden.
Prezint o poriune
vertical, format din
fundul i corpul
stomacului, care este
considerat stomacul
acid, deoarece glandele
de aici secret HCl i
pepsinogen n cantitate
mare. Funcia motorie a
Figura 2.1. Localizarea regiunilor acestei poriuni este
gastrice diminuat, avnd mai ales
rol de depozitare. Poriunea
orizontal (antrul piloric i canalul piloric) este considerat
stomacul alcalin, glandele de aici secretnd mucus i
gastrin n cantitate mare. Activitatea motorie del la acest
nivel se caracterizeaz prin micri de amestecare i
propulsie a alimentelor.
Stomacul are trei funcii majore:
Secretorie, mucoasa gastric conine celule
glandulare care sintetizeaz i secret substane

33
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

organice (enzime, mucus, factor intrinsec Castle) i


anorganice (acid clorhidric, ap, electrolii). Sucul
gastric este un amestec format din produsul de
secreie al glandelor gastrice i al celulelor epiteliale
din mucoasa gastric.
Motorie, care const n amestecarea alimentelor
solide cu sucul gastric i eliminarea intermitent n
duoden a chimului gastric format
Endocrin, glandele din mucoasa antro-pilorica, ca
i glandele din mucoasa duodenal, sintetizeaz
peptide reglatorii, cu rol de hormoni locali: gastrina,
somatostatin, VIP, bombesina.

2.1.1. Caracteristici fizice i chimice ale sucului


gastric

Aspect, culoare: este un lichid incolor, uor


opalescent, rar avnd aspect gri perlat.
Miros: este inodor sau are un miros acru, neptor.
Gust: acru, datorit aciditii.
pH: 1 - 2,5 la adult, la sugar fiind mai puin acid (4,5).
Densitate: 1,002-1,009 g/cm3.
Punct crioscopic: ncepnd de la -1,55 0C pn la -
0,60 0C.
Volumul secreiei/24 h: 2-2,5 litri.
Sucul gastric conine:
ap 99%
reziduu uscat 1%, din care:
0,6% sunt substane anorganice
0,4% sunt substane organice.
Cele mai importante substane care se gsesc n sucul
gastric sunt prezentate n tabelul 2.1.

34
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

LOCUL UNDE SE
SUBSTANA ROLUL
SECRET
-solubilizeaz proteinele, formnd -celulele oxintice sau
acidalbuminele, pregtindu-le pentru parietale, marginale
Acidul Clorhidric digestie ale glandelor gastrice,
(HCl) -confer pH-ul optim pentru aciunea situate mai ales n
enzimelor gastrice; stomacul acid.
-aciune bactericid
-favorizeaz transformarea Fe3+ n Fe2+
absorbabil
-enzim proteolitic -celulele peptice,
-hidrolizeaz proteinele, solubilizate n principale, ale
prealabil de acidul clorhidric, glandelor gastrice, sub
Pepsina
transformndu-le n peptide mai mici form inactiv, de
-la adult, n absena labfermentului, pepsinogen.
realizeaz digestia proteinelor din
lapte.
-enzim proteolitic -celulele peptice,
-prezent numai n secretia gastric a principale (chief cells)
Labfermentul sugarului ale glandelor gastrice.
-n prezena ionilor de Ca transform
cazeina n paracazeinat de Ca
-enzim proteolitic -celulele principale ale
-aciune lichefiant asupra ctorva glandelor gastrice.
Gelatinaza
proteoglicani, n special asupra
gelatinei.
-enzim lipolitic -celulele principale ale
Lipaza -hidrolizeaz lipidele fin emulsionate glandelor gastrice.
din lapte, fric, maionez.
-amestecul unei glicoproteine numit -celulele mucoase de
mucin cu apa suprafa, mai ales de
-protecie mecanic i chimic a la nivelul glandelor
mucoasei gastrice. pilorice.
-formeaz un gel alcalin, care se
dispune pe suprafaa epiteliului gastric,
Mucus
realiznd protecia mpotriva digestiei
mucoasei de ctre pepsin i HCl.
-alturi de HCO3- formeaz bariera
alcalin, protectoare a mucoasei
gastrice
-lubrefiaz alimentele.
-favorizeaz absorbia vitaminei B12 -n celulele oxintice,
(ciancobalamina) parietale ale mucoasei
-formeaz un complex cu aceast gastrice, alturi de
vitamin, care este absorbit n HCl.
intestinul subire
Factor intrinsec -cnd factorul intrinsec este absent sau
n cantitate mic, apare deficitul de vit.
B12, care determin anemia
megaloblastic Biermer, numit i
anemia pernicioas.

35
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

LOCUL UNDE SE
SUBSTANA ROLUL
SECRET

-hormon, cu principal aciune -celulele G din:


fiziologic de stimulare a secreiei de mucoasa antro-
HCl i pepsinogen (faza gastric a piloric
secreiei gastrice) mucoasa
-alte aciuni: duodenal
rol trofic: stimuleaz creterea insulele pancreatice
mucoasei gastrice i a intestinului (n viaa fetal)
subire anumite segmente
Gastrina
stimuleaz motilitatea gastric ale sistemului nervos
stimuleaz secreia de histamin (hipotalamus)
din celulele enterocromafine-like n patologie, la
stimuleaz secreia de insulin, nivelul tumorilor
dar numai dup un prnz cu pancreatice, gastrice,
proteine. sau duodenale
secretoare de gastrin
(gastrinoame).
-hormon care inhib eliberarea -hipotalamus;
gastrinei din celulele G, dar i a altor -celulele endocrine ale
hormoni implicai n reglarea digestiei, stomacului i
ca secretina, colecistochinina, VIP, duodenului.
Somatostatinul
GIP, enteroglucagonul
-inhib direct celulele secretoare de
enzime i HCl
-deprim motilitatea digestiv.
ELECTROLII:
H+, Na+, K+, Mg2+, Ca2+ (cationi)
Cl-, HPO4 2-, SO42- (anioni)
anionul bicarbonic (HCO3-)
este secretat de ctre celulele mucoase
particip, alturi de mucus, la formarea barierei protectoare gastrice
APA:
2 2,5 litri/24h

Tabelul nr. 2.1.

2.1.2. Recoltarea sucului gastric

Tehnica tubajului gastric


Const n extragerea sucului gastric, dimineaa, pe
nemncate ( jeun) cu ajutorul unei sonde Einhorn (tub
flexibil), introdus pn n stomac. Se recolteaz mai nti
sucul gastric acumulat n timpul noptii (secreia bazal) i apoi
sucul gastric produs dup stimularea secreiei cu substane
36
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

secretagoge administrate injectabil (parenteral) sau pe sond.


Ca substane secretagoge se utilizeaz:
injectabil, histamina, care stimuleaz secreia gastric
prin stimularea receptorilor H2;
pentagastrina, care are efect stimulator al secreiei
gastrice, prin creterea eliberrii de gastrin;
insulina, induce hipoglicemie, care prin centrii
hipotalamici i gastrosecretor, pe cale vagal,
stimuleaz eliberarea de gastrin;
administrate pe sond: alcoolul, cafeina, acioneaz
direct asupra mucoasei.
Actualmente acest tehnic este mai puin folosit, fiind
nlocuit cu tehnica de explorare prin endoscopie gastric.
Aceasta, pe lng vizualizarea mucoasei esofagiene, gastrice
i a poriunii incipiente a duodenului permite i recoltarea prin
aspiraie a sucului gastric, precum i recoltarea de esut
gastric n scopul efecturii unui examen histopatologic.
Se realizeaz cu un gastrofibroscop, dotat cu un tub
subire i flexibil, prevzut cu sistem optic, sistem de insuflaie
i aspiraie. Imaginile sunt preluate de o camer video, care le
transmite la un ecran TV.
Din sucul gastric astfel recoltat sau din lichidul obinut
dup lavaj gastric, n laborator, se pot face investigaii
biochimice, citologice sau bacteriologice. Se pot pune n
eviden celule tumorale, bacterii (helicobacter pylori), celule
epiteliale sau parazii.
Se mai poate obine secreie gastric i cu ocazia unei
splturi gastrice, efectuat pentru aspirarea coninutului
stomacului n cazul ingerrii voluntare sau accidentale de
substane toxice: otrvuri, medicamente, alcool n cantiti
mari la copii. Printr-o sond Fauchet se aspir coninutul
gastric, dup care, tot pe sond, se introduce ap, care apoi
se aspir.

37
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

Recoltarea experimental de suc gastric


Modul de funcionare a stomacului i a altor segmente
ale tubului digestiv a fost lmurit prin folosirea animalelor, n
special a cinilor, imaginndu-se diferite modele
experimentale, care au ajutat la descrierea fazelor secreiei
gastrice.
Cel mai cunoscut model este micul stomac al lui I. P.
Pavlov, prin care s-a obinut secreie gastric att pe cale
nervoas, vagal, ct i pe cale umoral.
Tot Pavlov a realizat i experimentul numit prnzul
fictiv, evideniind faza cefalic (mecanismul nervos) a
secreiei gastrice, rolul nervilor vagi, precum i de condiionare
a secreiei gastrice.

Figura 2.2.
Experimentul Prnzul fictiv al lui I.P. Pavlov. Fistula gastric, combinat cu
esofagostomie.
Oe esofagul secionat i deschis la exterior (esofagotomie i esofagostomie)
pentru recoltarea alimentelor nghiite (alimentele nu ajung n stomac).
S stomac cu fistul gastric cronic Basov;
C canul gastric, prin care se scurge sucul gastric secretat n timpul prnzului
fictiv.
Alte modele presupun separarea, izolarea unor poriuni
din stomac, cu realizarea unor pungi, la care se poate pstra
inervaia vagal pentru evidenierea ambelor mecanisme ale
secreiei gastice (nervos i umoral) sau pot fi denervate, n
acest caz putndu-se studia doar mecanismul umoral.

38
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

Figura 2.3.
Modelul de "mic stomac" imaginat de I.P. Pavlov, numit i "punga lui Pavlov", sau
"punga inervat vagal". Permite obinerea sucului gastric produs att prin mecanism nervos
(vagal), ct i umoral.

S-a demonstrat existena fazei cefalice a secreiei


gastrice, declanat de contactul alimentelor cu receptorii din
cavitatea oral (reflex necondiionat), dar i la vzul i mirosul
alimentelor (reflex condiionat).

2.2. LUCRRI PRACTICE DE EFECTUAT

2.2.1. Dozarea acidului clorhidric din sucul gastric

Principiul metodei:
Aciditatea sucului gastric se neutralizeaz cu o soluie
de hidroxid de sodiu 0,1N, n prezena reactivului Tpffer-
Linossier (un amestec de indicator Tpffer i fenolftalein,
care are culoarea galben - portocalie).
HCl liber coloreaz reactivul n rou, cnd pH-ul soluiei
este cel mult 2,9; la pH 3, reactivul capt culoarea portocalie,
iar la pH 4 culoarea devine galben, indicnd neutralizarea
HCl liber. n prezena fenolftaleinei, pn la o valoare a pH-
ului de 7, soluia este incolor i devine rou-violet la un pH
de 9 -10 (ceea ce indic momentul neutralizrii HCl
combinat).

39
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

Materiale necesare:
pipete
balon Erlenmeyer
biuret
suc gastric
soluie NaOH 0,1 N
reactiv Tpffer-Linossier.

Tehnic:
ntr-un balon Erlenmeyer se introduc 10 cm3 suc
gastric i 3-4 picturi din reactivul Tpffer-Linossier.
n prezena reactivului Tpffer-Linossier, sucul gastric se
coloreaz n rou, datorit prezenei HCL, ceea ce indic un
pH mai mic de 2,9.
Se titreaz apoi cu soluie de NaOH 0,1 N, pn cnd
culoarea vireaz spre portocaliu i apoi spre galben. n acest
moment se oprete titrarea i se noteaz cu N1 numrul de
mililitri de NaOH utilizai la titrarea aciditii libere.
Se continu titrarea pn la apariia culorii rou-violet
(la pH 9-10), cnd s-a neutralizat cantitatea total de acid,
inclusiv a celui legat (se trece mai nti prin coloraia galben
deschis). Se noteaz cu N2 numrul de mililitri din soluia
de NaOH 0,1N, utilizai la titrarea acidittii totale.
Numr mililitri NaOH folosii pentru neutralizarea HCl
combinat = N2 N1.

Rezultate:
Rezultatele se exprim n grame acid clorhidric la 1000
3
cm suc gastric sau n mEq/l.
Pentru exprimarea n grame HCl la 1000 cm3 de suc
gastric se nmulesc: cm3 NaOH 0,1N consumai cu
echivalentul gram al unui cm3 dintr-o soluie de HCl 0,1N
(0,00365g) i cu 100.
Pentru exprimarea n mEq/L:

40
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

Concentraia soluiei de NaOH utilizat la titrare este de


0,1N. tiind c o soluie de NaOH 1N are o concentraie de 1
Eq gram/L, rezult c soluia de NaOH utilizat (0,1N) are o
concentraie de 0,1 Eq gram/L adic 100 mEq gram/L.

Exemplu calcul:
CNaOH x VNaOH = CHCl x VHCl
CNaOH = 100 mEq gram/L (concentraia soluiei de NaOH
utilizat la titrare)
VNaOH = N (nr. de ml NaOH utilizai n titrare)
CHCl = concentraia de HCl din sucul gastric necunoscuta
noastr
VHCl = 10 mL (numrul de mL de suc gastric utilizai)
nlocuind cu valorile din exemplu, obinem urmtoarea relaie:

CHCl = N x 10 mEq gram/L

HCl g/1000 ml suc gastric mEq/L


HCl liber N1 x 0,00365 x 100 N1 x 10 mEq gram/L.
HCl total N2 x 0,00365 x 100 N2 x 10 mEq gram/L.
HCl legat (N2 - N1) x 0,00365 x 100 (N2 - N1) x 10 mEq gram/L.

Tabelul nr. 2.2. Formule pentru calculul valorilor aciditilor gastrice

Valori normale:
Corect este s exprimm aciditatea sucului gastric prin
debitul orar bazal de HCl (DOB), care reprezint cantitatea
de acid clorhidric secretat de stomac, ntr-o or, n condiii
bazale (fr stimularea secreiei), avnd o valoare de 1,5- 2,5
mEq/L.

41
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

Valorile normale ale aciditii nestimulate:

u.m. g /1000 mL mEq/L

HCl liber 0,3 - 1,5 10 - 40

HCl total 0,7 - 3 20 - 60


Tabelul nr. 2.3.

Valorile normale ale aciditii dup stimularea cu


histamin:

u.m. g /1000 mL mEq/L

HCl liber 1,7-3 50-130

HCl total 2-4 60-150

Tabelul nr. 2.4.

2.2.2. Evidenierea acidului clorhidric liber n sucul


gastric

Principiul metodei:
Reactivul Gnsburg, n prezena acidului clorhidric liber,
prin nclzire i evaporare, d o coloraie rou-carmin. Scopul
lucrrii este de a evidenia acidul clorhidric liber din sucul
gastric, atunci cnd nu poate fi dozat, deoarece se afl n
cantiti foarte mici. Prezena lui ne dovedete c funcia
secretorie a mucoasei gastrice nu este complet compromis.

42
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

Materiale necesare:
suc gastric proaspt (prin pstrare, HCl se
volatilizeaz)
reactiv Gnsburg (soluie de vanilin i fluoroglucin
n alcool)
capsul de porelan
surs de foc.

Mod de lucru:
ntr-o capsul de porelan se pun cte 2-3 picturi din
soluiile alcoolice de vanilin i fluoroglucin. Se adaug 2-3
picturi din sucul gastric de examinat. Se nclzete lent
coninutul pn la evaporare.

Rezultate:
Apariia culorii rou-carmin ne indic prezena acidului
clorhidric liber i faptul c mucoasa gastric mai are potenial
secretor.
Lipsa culorii ne arat compromiterea total a capacitii
secretorii a mucoasei gastrice.

2.2.3. Evidenierea acidului lactic n sucul gastric

n condiii normale, acidul lactic nu se gsete n sucul


gastric.
Acesta rezult din fermentaia glucidelor sub influena bacilului
Boas-Oppler, n condiii de hipo/anaciditate, precum i n cazul
unei staze gastrice prelungite.

Principiul metodei:
Evidenierea acidului lactic se bazeaz pe proprietatea
oxiacizilor de a da reacii de culoare cu srurile ferice.

43
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

Materiale necesare:
suc gastric
reactiv Uffelman (conine clorur feric i are o
culoare albastru-violet)
pipete
stativ.

Tehnica de lucru:
Se efectueaz folosind 2 eprubete: martor i prob.

Eprubeta 1-martor Eprubeta 2-prob


Reactiv Uffelman 5 - 6 ml 5 - 6 ml
Suc gastric - 1 ml
Ser fiziologic 1 ml -
Tabelul nr. 2.5. Substanele introduse n eprubetele de reacie

Rezultate:
n eprubeta 1, martor (fr acid lactic), nu se modific
culoarea
n eprubeta 2, prob, apare culoarea galben-verzuie,
datorit formrii lactatului feric.

2.2.4. Evidenierea aciunii proteolitice a pepsinei

Principiul metodei:
Se realizeaz hidrolizarea unui substrat, respectiv a
unei cantiti de cazein n soluie, de ctre pepsina din sucul
gastric, ntr-un interval de timp i la o temperatur standard

Materiale necesare:
suc gastric
ser fiziologic
soluie acid de cazein 1, nclzit la 37C

44
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

soluie de acetat de sodiu 20%


eprubete, stativ
termostat (reglat la 38C).

Tehnica de lucru:

Se efectueaz folosind 2 eprubete: martor (fr


enzim) i prob.

Eprubeta 1 Eprubeta 2
martor prob
Soluie acid de 10 ml 10 ml
cazein 1
Suc gastric - 1ml
Ser fiziologic 1ml -
Termostat 38C 15 min 15 min
Soluie de acetat de 1ml 1ml
sodiu 20%
Tabelul nr. 2.6. Substanele introduse n eprubetele de reacie

Rezultate:
se tie c, n prezena acetatului de sodiu, cazeina
precipit;
apariia precipitatului, n eprubeta martor, dovedete
fapul c, n aceast eprubet, cazeina nu a fost
hidrolizat, prin lipsa enzimei;
n eprubeta prob, soluia este clar, deoarece
pepsina a acionat i a hidrolizat cazeina.

45
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

2.2.5. Coagularea laptelui sub aciunea


labfermentului

Principiul metodei:
Laptele coaguleaz, n prezena labfermentului i a
ionilor de calciu, rezultnd paracazeinatul de calciu, insolubil.
Aceast reacie are loc n dou etape:
prima etap (enzimatic): sub aciunea
labfermentului, la un pH 4,5-5,5 i la o temperatur
de 37C, cazeinogenul din lapte se transform n
paracazein (cazeogen), solubil.
a doua etap (chimic): sub aciunea ionilor de
Ca2+, paracazeina se transform n paracazeinat de
calciu (cazeum), insolubil.

Materiale necesare:
soluie labferment 1%
lapte proaspt
5 eprubete, stativ
termostat setat la 37C
soluie de oxalat de K 10%
soluie de clorur de Ca 10%.

Mod de lucru:
Eprubeta Eprubeta Eprubeta Eprubeta Eprubeta
1 2 3 4 5
Lapte proaspt 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml
Sol. oxalat de K - - 1 ml 1 ml 1 ml
Labferment 1 ml - 1 ml 1 ml 1 ml
Labferment inactivat - 1 ml - - -
(fierbere)
Sol. clorur de Ca - - - 1 ml -
Termostatare 37C 30 min 30 min 30 min 30 min 30 min
Fierbere - - - - 1 minut
Sol. clorur de Ca - - - - 1 ml

Tabelul nr. 2.7. Substanele introduse n eprubetele de reacie

46
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

Rezultate:

Eprubeta 1: laptele coaguleaz sub aciunea


labfermentului activ.
Eprubeta 2: laptele nu coaguleaz, deoarece
labfermentul a fost inactivat prin fierbere.
Eprubeta 3: laptele nu coaguleaz, deoarece oxalatul
de K+ leag ionii de Ca2+, n lipsa crora
coagularea nu poate avea loc.
Eprubeta 4: laptele coaguleaz, datorit prezenei
ionilor de Ca2+ adugai n surplus fa de
capacitatea de legare a oxalatului de K+.
Eprubeta 5: laptele nu coaguleaz dup termostatare,
lipsind ionii de Ca2+, care au fost legai de
oxalatul de K+; totui, prima faz a coagulrii a
avut loc n termostat. Prin fierberea ulterioar, se
inactiveaz labfermentul, iar prin adugarea
soluiei de CaCl2, laptele va coagula, n faza a
doua a coagulrii. n aceast eprubet se
demonstreaz existena celor dou faze ale
coagulrii laptelui.

2.3. MODIFICRI ALE SECREIEI GASTRICE

Secreia gastric poate fi crescut, diminuat sau


abolit.
Creterea valorilor acidului clorhidric, peste limitele
superioare ale intervalului fiziologic, reprezint
hiperclorhidria.

47
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

Pentru depirea valorilor normale ale aciditii totale


se folosete termenul de hiperaciditate.
ntruct majoritatea aciditii gastrice este datorat
acidului clorhidric, uneori cei doi termeni se suprapun.
Scderea valorilor acidului clorhidric, sub limitele
inferioare ale intervalului fiziologic, reprezint hipoclorhidria.
Pentru scderea valorilor aciditii totale se folosete
termenul de hipoaciditate.
Lipsa aciditii este definit prin anaciditate.
Asocierea anaciditii cu lipsa secreiei peptice
reprezint achilia gastric.
Boala ulceroas reprezint un dezechilibru ntre
factorii protectori ai mucoasei (mucus i bicarbonat) i cei care
pot agresa mucoasa (HCl i pepsin). Creterea aciditii
sucului gastric i diminuarea capacitii protectoare a
mucoasei sunt cele dou mecanisme majore implicate n
apariia ulcerului gastric i duodenal.
Bariera de protecie a mucoasei gastrice, format din
mucus i bicarbonat, poate fi degradat, sub aciunea:
pepsinogenului i acidului clorhidric n exces.
Secreia de HCl n exces, va fi deprimat, prin
administrarea de inhibitori ai pompei de protoni sau
blocani ai receptorilor H2;
infeciei cu Helicobacter pylori. Implicarea acestei
bacterii n producerea ulcerului gastric explic
tratamentul cu antibiotice, alturi de inhibitori ai
sintezei de HCl;
prin alterarea secreiei de mucus, cantitativ ct i
calitativ
prin administrarea de aspirin i a altor
medicamente antiinflamatorii nesteroidiene, indicate
pentru tratarea durerii i a inflamaiei.

48
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

Consultnd un dicionar medical sau materialele


didactice, v rugm s definii urmtorii termeni:
esofagotomie, esofagostomie, substan secretagog, jeun,
megaloblastic, antiinflamatoare nesteroidiene, celule oxintice,
achilie gastric, parenteral, endopeptidaz, precum i ali
termeni ntlnii n acest capitol pe care nu i cunoatei.

2.4. NTREBRI

1. Enumerati prile stomacului.


2. Cum se recolteaz sucul gastric n clinic?
3. Care sunt substanele secretagoge utilizate n tubajul
gastric i prin ce mecanisme acioneaz?
4. Care este pH-ul sucului gastric?
5. Valorile normale ale acidului clorhidric din sucul
gastric.
6. Enumerai enzimele din sucul gastric i precizai tipul
acestora, dup substratul asupra cruia acioneaz.
7. Pepsina: ce este, unde se gsete, asupra cui
acioneaz i ce rezult?
8. Sub ce form se secret pepsina i cum se activeaz?
9. Labfermentul: unde se gsete, asupra cui i cum
acioneaz?
10. Fazele secreiei gastrice enumerare.
11. Mecanismul nervos de secreie al sucului gastric: prin
cine este reprezentat?
12. Mecanismul umoral de secreie a sucului gastric: prin
cine se realizeaz?
13. Ce mecanism de secreie predomin n faza cefalic a
secreiei de suc gastric?
14. Ce mecanism de secreie predomin n faza gastric a
secreiei de suc gastric?
15. Ce mecanism de secreie predomin n faza intestinal
a secreiei de suc gastric?

49
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

16. Ce este enterogastronul i ce aciune are?


17. Gastrina: ce este, loc de secreie, aciune.
18. Cum se numete creterea aciditii din sucul gastric?
19. Cum se numete scderea aciditii din sucul gastric?
20. Ce este achilia ?
21. Care sunt enzimele secretate de mucoasa gastric i
ce rol au?
22. Ce substane secret mucoasa gastric pentru a se
apra de agresiunea HCl i a pepsinei?
23. Ce efect poate avea administrarea aspirinei asupra
mucoasei gastrice?
24. Care este bacteria ce poate fi implicat n producerea
ulcerului gastric i duodenal i cum o distrugem?
25. Ce consecinele apar n digestia alimentelor n cazul
unei anaciditi gastrice.
26. Anemia Biermer se trateaz prin administrare de
vitamin B12. n cazul n care anemia megaloblastic
Biermer se datoreaz absenei sau deficitului de factor
intrinsec, cum vom administra vitamina pe cale oral
(tablete) sau parenteral (injectabil) ?
27. Care este rolul HCl n digestia gastric?
28. Ce roluri are mucusul gastric?

50
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

FIZIOLOGIA PANCREASULUI

3.1. NOIUNI INTRODUCTIVE

Pancreasul este o
gland anex a tractului
digestiv, fiind situat
retroperitoneal, la nivelul
vertebrelor L1 - L2. La
mamifere, pancreasul are
o dubl secreie: exocrin
i endocrin. Sucul
pancreatic este produsul
de secreie al pancreasului
exocrin. Secreia
Figura 3.1. Localizarea pancreatic n endocrin este produs de
raport cu duodenul insulele Langerhans i
este reprezentat de hormonii: insulin, glucagon,
somatostatin, polipeptid pancreatic, gastrin, etc. Structura
histologic a pancreasului este asemntoare cu cea a
glandelor salivare, fiind reprezentat de celule acinoase i de
un sistem canalicular, care se termin ntr-un canal principal
Wirsung i, uneori, ntr-un canal accesoriu Santorini. Canalul
Wirsung se vars n duoden la nivelul ampulei Vater, n
vecintatea canalului coledoc. Secreia exocrin a
pancreasului are dou componente:
Secreie hidrelatic (hidrolatic), bogat n ap i
bicarbonat de sodiu, cu o cantitate redus de
51
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

enzime. Este produs predominant n epiteliile


canaliculare i este dependent de secretin.
Secreia ecbolic este o secreie cantitativ redus,
bogat n enzime i este produs predominant de
celulele acinilor glandulari. Este dependent de
colecistochinin, serotonin i stimulare vagal.
Sucul pancreatic ndeplinete funcii importante n
digestia alimentelor. Prin coninutul bogat n bicarbonat
contribuie la neutralizarea aciditii chimului gastric i creeaz
condiii optime pentru activarea i aciunea enzimelor
digestive. Conine i enzime care au activitate intens
proteolitic, lipolitic i glicolitic, putnd hidroliza parial sau
total majoritatea alimentelor ingerate.
Deficienele ntlnite n patologia secreiei pancreasului
exocrin au efecte importante asupra digestiei, consecinele
fiind maldigestie, malabsorbie i malnutriie progresiv.

3.1.1. Caracteristici fizice i chimice ale sucului


pancreatic

Aspect: lichid limpede sau uor opalescent, inodor, cu


vscozitate redus.
Cantitate: la adult, n medie 700 1500 ml/24 de ore;
cantitate maxim 4000 ml/24 de ore. Secreia este
discontinu, debitul secretor fiind mai abundent postprandial,
cu durat de aproximativ 3 ore.
Densitate: 1,008 1,014 g/ cm3.
Punctul crioscopic: -0,55 pn la -0,63oC, sucul
pancreatic fiind uor hiperton fa de plasm.
pH: 7,5 8. Creterea ratei secreiei de suc pancreatic
duce la creterea pH-ului, pn la valoarea 9. Este lichidul cel
mai alcalin din organism. Alcalinitatea este produs de
bicarbonatul de sodiu coninut n cantitate mare.

52
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

Compoziia sucului pancreatic: este variabil, n


funcie de tipul alimentului sau al excitantului care a
determinat secreia:
ap 98,5 %
reziduu uscat 1,5%, din care 5060% sunt
substane anorganice, iar 4050% substane
organice.
Substane anorganice:
bicarbonat de sodiu: 25 150 mEq/l
cloruri: 4 129 mEq/l
fosfai, potasiu, sodiu, calciu, magneziu, sulf, cupru,
zinc.
Concentraia cationilor este constant, indiferent de
rata secreiei. Concentraia anionilor, n perioada secretorie,
este ns variabil. Coninutul n bicarbonai crete n funcie
de debitul secretor dup o curb hiperbolic, iar coninutul n
cloruri scade dup o curb hiperbolic, n sens invers,
simetric fa de cea a bicarbonatului. Din aceast cauz,
suma concetraiilor celor dou componente rmne aproape
constant, indiferent de debitul secretor (154 mEq/l).
Substane organice: Componenii organici principali
sunt proteine, n cantitate variabil, de la 1g/l pn la 30g/l, n
funcie de stimulare i de tipul secreiei.
Principalele proteine sunt enzimele, sintetizate n
celulele acinoase i depozitate intracelular, n granule
zimogene.
Enzime proteolitice:
Endopeptidaze: tripsina, chimotripsina, elastaza,
colagenaza. Hidrolizeaz legturile peptidice din
interiorul lanurilor peptidice.
Exopeptidaze: carboxipeptidazele. Acioneaz la
capetele lanurilor polipeptidice.

53
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

Nucleaze: ribonucleaze i dezoxiribonucleaze.


Desfac legturile interne ale nucleoproteinelor,
elibernd oligonucleotide.
Enzimele proteolitice sunt sintetizate sub form de
proenzime, activarea acestora efectundu-se n lumenul
duodenal. Tripsinogenul este activat de enterokinaz, enzim
secretat de mucoasa duodenal, rezultnd tripsin activ,
care acioneaz att autocatalitic, ct i asupra celorlalte
proenzime proteolitice, activndu-le.
Enzime lipolitice:
Lipaza: Acioneaz asupra lipidelor emulsionate,
n prezena srurilor biliare i Ca2+
Fosfolipaze
Colesterolesteraza.
Sunt secretate sub form activ n sucul
pancreatic.
Enzime glicolitice:
Amilaza pancreatic: este secretat sub form
activ n sucul pancreatic i acioneaz asupra
amidonului, producnd hidroliza acestuia n
dextrine i maltoz.

3.1.2. Recoltarea sucului pancreatic

Recoltarea experimental:
Se realizeaz fistule pancreatice permanente, pentru a
recolta sucul pancreatic direct din canalul Wirsung.
Recoltarea sucului pancreatic la om:
n mod curent, sucul pancreatic este recoltat prin tubaj
duodenal cu sonda Einhorn, introdus 60 70 cm, pn n
duoden. Prin aceast metod se recolteaz suc duodenal,
care este un amestec de suc gastric, pancreatic, intestinal i
bil. Pentru a obine un suc pancreatic cu o compoziie ct mai
pur se ntrebuineaz sonde cu dublu sau triplu lumen (n

54
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

care componentele au lungimi inegale), permind aspiraia


separat a sucului gastric i a celui duodenal. Tehnicile
moderne realizeaz recoltarea de suc pancreatic prin
cateterizarea endoscopic a canalului Wirsung. Se pot folosi
metode de stimulare a secreiei pancreatice cu alimente,
secretin, colecistokinin etc.

3.2. LUCRRI PRACTICE DE EFECTUAT

3.2.1. Dozarea activitii enzimatice a tripsinei prin


metoda Gross-Michaelis

Principiul metodei:
Cazeina (substrat proteic) este hidrolizat pn la
aminoacizi, sub influena tripsinei, la temperatur de 37oC.
Cazeina nehidrolizat va cpta un aspect tulbure, prin
adugare de soluie alcool - acid.

Materiale necesare:
stativ cu eprubete
pipete
soluie NaCl 9
produs biologic: suc pancreatic
soluie de cazein 1
soluie alcool - acid (acid acetic glacial i alcool)
soluie tampon
termostat reglat la 37oC
ceas de laborator

Tehnica de lucru:
n 10 eprubete se fac diluii crescnde din lichidul de
cercetat (suc pancreatic). Se procedeaz astfel: n prima
eprubet se pun 2 cm3 de suc pancreatic, n celelalte cte 1
cm3 de soluie de NaCl 9. Din prima eprubet se ia 1 cm 3 i
55
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

se trece n eprubeta a 2-a, se amestec, se ia 1 cm3, care se


pune n eprubeta a 3-a i aa mai departe. Astfel, se obin
diluii de suc pancreatic, n raport de: 1/1; 1/2; 1/4; 1/8; 1/16;
1/32; 1/64; 1/128; 1/256; 1/512. n fiecare eprubet se adaug
2 cm3 de soluie de cazein 1 (cte 2 mg de cazein) i cte
1 cm3 de soluie tampon (pH = 7,8 - 8). Eprubetele se in o or
la 37 oC, pentru a crea enzimei condiii optime de lucru. Dup
ce se scot eprubetele de la termostat, se adaug n fiecare
cte 2-3 picturi de alcool - acid. Se urmrete aspectul
coninutului eprubetelor, ncepnd de la prima eprubet. Se
noteaz ultima eprubet, al crei coninut rmne nc
limpede (n care cantitatea de tripsin a fost suficient pentru
a hidroliza toat cazeina din eprubet, respectiv cele 2 mg de
cazein).

Eprubeta 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

suc 2
- - - - - - - - -
pancreatic cm3
Soluie
NaCl 9 1 1 1 1 1 1 1 1 1
-
(ser cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3
fiziologic)
Din prima eprubet se ia 1 cm3 suc pancreatic i se pune n eprubeta a 2-a, se amestec i
din acest amestec se ia 1 cm 3 i se trece n eprubeta a 3-a, .a.m.d.
soluie de
2 2 2 2 2 2 2 2 2 2
cazein
cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3
1
Soluie
tampon 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
(pH = 7,8 - cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3
8)
Se agit toate eprubetele i se las la termostat, la 37oC, timp de o or.
alcool 23 23 23 23 23 23 23 23 23 23
acid pic pic pic pic pic pic pic pic pic pic

Tabelul nr. 3.1. Substanele introduse n eprubetele de reacie

56
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

Rezultate:
Rezultatul se exprim n uniti triptice. Unitatea
triptic este cantitatea de enzim capabil s hidrolizeze 1
mg de cazein, ntr-o or, la 37 oC.
Exemplu: n eprubeta nr. 4, cantitatea iniial de 1 cm3
suc pancreatic sau duodenal, a fost diluat la 1/8, hidroliznd
2 mg de cazein. Tripsina coninut ntr-un cm3 de suc
pancreatic nediluat va fi 8 x 2 = 16 uniti triptice.

3.2.2. Dozarea produilor de digestie triptic prin


metoda Srensen

Principiul metodei:
Dozarea activitii proteolitice a tripsinei se poate face
i prin dozarea produilor rezultai prin hidroliza proteinelor,
pn la aminoacizi, realizat prin activitatea enzimei, n
condiii standard de temperatur (37 oC) i timp de aciune.
Aminoacizii sunt substane amfotere, deoarece posed
att funcie bazic (amino), ct i funcie acid (carboxil).
Substanele amfotere, la punctul izoelectric, disociaz n mod
egal funciile acide, respectiv bazice. n mediu mai acid dect
punctul izoelectric, disociaz funcia bazic, iar n mediul mai
alcalin dect punctul izoelectric, disociaz funcia acid.
Metoda de dozare Srensen se bazeaz pe
proprietatea general a aldehidelor de a reaciona cu -NH2
(radicalul amino, radical bazic) din molecula aminoacizilor,
dnd astfel natere la compui numii baze Schiff. n acest fel,
aminoacidul rmne numai cu funcia carboxil liber,
comportndu-se ca un acid obinuit, care disociaz doar H+,
aciditatea putnd fi titrat volumetric, cu soluie NaOH 0,1N.
Tripsina acioneaz n mediu alcalin (pH = 8 - 8,8), deci
aminoacizii rezultai din aciunea ei se afl ntr-un astfel de
mediu. naintea blocrii funciei amino cu o formaldehid,
trebuie procedat la neutralizarea mediului; n caz contrar, o
parte din funciile carboxil ale bazelor Schiff vor reaciona cu
57
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

mediul alcalin i, la titrare, vom gsi o cantitate de acid mai


mic dect cea real.

Materiale necesare:
lichid de digestie triptic
fenolftalein sol 1 %
formol neutralizat
NaOH 0,1N
HCl 1%
balon Erlenmeyer, biuret, pipete

Tehnica de lucru:
Exist 3 faze:
Faza 1: neutralizarea mediului alcalin. n balonul
Erlenmeyer se pun 5 cm3 lichid de digestie triptic,
se adaug 2 3 picturi din soluia de fenolftalein.
Lichidul avnd o reacie alcalin, fenolftaleina se
coloreaz n rou-violet (pH peste 8). Cu o pipet se
adaug pictur cu pictur HCl 1%, agitnd de
fiecare dat, pn cnd culoarea roie a devenit roz
palid.
Faza 2: legarea funciilor amino. Se adaug
acelai volum (5 cm3) de aldehid formic
neutralizat 40%, formndu-se baze Schiff,
aminoacizii transformndu-se n acizi. Culoarea roz
dispare imediat, fenolftaleina n mediul acid fiind
incolor.
Faza 3: titrarea acizilor rezultai (baze Schiff). Se
titreaz cu soluie NaOH 0,1N pictur cu pictur,
pn cnd lichidul din balon i recapt culoarea
slab roz.

58
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

Rezultate:
Se exprim fie n uniti triptice n sucul pancreatic, fie
n grame de glicocol sau de alanin % sau (n funcie de
greutatea molecular a acestor aminoacizi).
Unitatea triptic reprezint (n acest caz) numrul de
cm3 de NaOH 0,1N, necesar pentru neutralizarea
aminoacizilor (ca baze Schiff), rezultai dintr-o substan
proteic, digerat timp de o or la 37oC i la pH=8, sub
influena unei cantiti determinate de suc pancreatic (1 cm 3).
Exemplu: s-au utilizat pentru titrare 4 cm3 NaOH 0,1N.
Greutatea molecular a glicocolului este 75 grame.
Greutatea molecular a alaninei este 89 grame.
Dac la 1 cm3 NaOH 0,1N corespund 0,0075 grame
glicocol, respectiv 0,0089 grame alanin, la 4 cm 3
NaOH 0,1N vor corespunde:

0,0075 4
x1 0,0300
1 grame glicocol sau
0,0089 4
x2 0,0356
1 grame alanin.

Cunoscnd cantitatea de glicocol sau alanin din cei 5


cm3 lichid de digestie triptic, se poate calcula cantitatea %
sau , nmulindu-se cu 20 sau cu 200.

3.2.3. Dozarea activitii lipolitice prin metoda


Carnot - Mauben

Principiul metodei:
Se titreaz acizii grai liberi, rezultai prin aciunea
lipazei n condiii standard, cu soluie NaOH 0,1N, n prezena
fenolftaleinei.
Materiale necesare:
suc pancreatic (duodenal)

59
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

ulei de msline
alcool 96o
fenolftalein soluie 1%
soluie NaOH 0,1N
balon Erlenmeyer, biuret, pipete
termostat reglat la 37oC
ceas de laborator

Tehnica de lucru:
Se efectueaz, folosind 2 baloane Erlenmeyer:
Martor: ntr-un balon Erlenmeyer se pun 10 cm 3 ulei
de msline i 2 cm3 suc pancreatic. Peste acest
amestec se adaug 10 cm3 alcool 96o, pentru a
inactiva enzima i cteva picturi de fenolftalein.
Coninutul balonului nu se va colora. Amestecul este
titrat cu NaOH 0,1N pn la apariia culorii roz.
Prob: ntr-un balon Erlenmeyer se pun 10 cm 3 ulei
de msline i 2 cm3 suc pancreatic. Nu se adaug
alcool. Se pune amestecul timp de o or, la 37oC la
termostat. Dup scoaterea de la termostat, se
adaug 10 cm3 de alcool 96, pentru a inactiva
enzima i a opri reacia. Acizii grai liberi, rezultai
prin activitatea lipazei pancreatice, sunt titrai cu
soluie NaOH 0,1N, n prezena fenolftaleinei, pn
la apariia culorii roz.

Rezultate:
Diferena dintre numrul de cm3 de NaOH 0,1N, utilizai
la titrarea probei i a martorului, reprezint activitatea lipazic
din cei 2 cm3 de suc pancreatic.
Valori normale: 50 60 cm3 NaOH 0,1N la 100 cm3
suc pancreatic.

60
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

3.2.4. Dozarea activitii amilolitice prin metoda


Wohlgemuth

Principiul metodei:
Activitatea amilazei pancreatice se apreciaz prin
capacitatea ei de a hidroliza amidonul, n condiii standard, n
produi intermediari (dextrine) i finali (maltoz), evideniai cu
ajutorul soluiei Lugol.

Materiale necesare:
ser sanguin sau urin
soluie NaCl 9
soluie amidon 1
soluie Lugol (iod iodurat 1%)
stativ cu 10 eprubete
pipete
termostat reglat la 37oC

Tehnica de lucru:

Se ia un stativ cu 10 eprubete, n care se realizeaz


diluii crescnde de ser sau urin. n prima eprubet se pun 2
cm3 de urin (sau ser sanguin), iar n celelalte 9 eprubete se
pune cte 1 cm3 de soluie NaCl 9 (ser fiziologic). Din prima
eprubet se ia 1 cm3 de urin i se adaug n eprubeta a
doua, se amestec i se ia 1 cm3, i se trece n eprubeta a 3-
a, .a.m.d. Se obin urmtoarele diluii: 1/2; 1/4; 1/8; 1/16;
1/32; 1/64; 1/128; 1/256; 1/512. n fiecare eprubet se adaug
cte 2 cm3 din soluia de amidon 1 (care conin 2 mg de
amidon). Se agit toate eprubetele i se las la termostat, la
37oC, timp de 30 de minute, interval n care amilaza din urin
(sau ser sanguin) acioneaz asupra amidonului. Dup
scoaterea de la termostat, eprubetele se rcesc sub jet de ap
rece, apoi se adaug n fiecare cte 1 2 picturi de soluie
Lugol. Eprubetele care conin amidon nehidrolizat se vor
61
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

colora albastru, eprubetele cu amidon hidrolizat parial pn la


amilo sau eritrodextrin se vor colora violet sau rou, iar
eprubetele cu amidon complet hidrolizat vor fi incolore. Se
noteaz numrul eprubetei, naintea celei cu coninut albastru.
n aceast eprubet, cantitatea de amilaz a fost suficient
pentru a hidroliza 2 mg de amidon.

Eprubeta 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Urin sau
2
ser - - - - - - - - -
cm3
sanguin
Soluie
NaCl 9 1 1 1 1 1 1 1 1 1
-
(ser cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3
fiziologic)
Din prima eprubet se ia 1 cm3 de urin i se pune n eprubeta a 2-a, se amestec i din
acest amestec se ia 1 cm3 i se trece n eprubeta a 3-a, .a.m.d.
Soluie de 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2
amidon cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3 cm3
o
Se agit toate eprubetele i se las la termostat, la 37 C timp de 30 de minute.
Dupa termostatare, eprubetele se rcesc.
soluie
Lugol. 12 12 12 12 12 12 12 12 12 12
(picturi)

Tabelul nr. 3.2. Substanele introduse n eprubetele de reacie


Rezultate:
Rezultatul se exprim n uniti Wohlgemuth. O unitate
Wolgemuth este cantitatea de amilaz care poate hidroliza 1
mg de amidon, pn la dextrine, n 30 de minute la 37oC.
Deoarece n fiecare eprubet se gsesc 2 mg de amidon,
rezult c, n eprubeta notat exist 2 uniti Wohlgemuth.
Exemplu: S-a notat eprubeta nr.6, n care diluia urinei
(sau a serului sanguin) este 1/32. Dac ntr-un cm3 din
aceast soluie se gsesc 2 uniti Wohlgemuth, rezult c
ntr-un cm3 de urin (sau ser sanguin) nediluat exist

2 u.W. x 32 = 64 u.W.

62
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

Determinarea amilazei se face din urina total, recoltat


n 24 de ore i conservat la rece (deoarece valorile
amilazuriei difer n diverse momente ale perioadei de 24 de
ore, n special n raport cu momentul alimentaiei).

Valori Normale:
Amilazemie 16 32 u.W./cm3 ser sanguin
Amilazurie 16 64 u.W./cm3 urin

Metoda amiloclastic Somogy: este o metod mai precis dect


metoda Wohlgemuth, pentru c folosete soluii de amidon cu concentraii
precis determinate.
Conversia unitilor specifice metodelor de dozare a activitii
amilolitice este urmtoarea:
1 u Wohlgemuth = 0,0775 u.Somogy = 0,01425 u.Internaionale

3.3. MODIFICRI ALE SECREIEI PANCREATICE

Obstrucia canalelor pancreatice (datorat unor cauze


interne sau externe), determin creterea cantitii
enzimelor pancreatice n snge i urin, n paralel cu
scderea acestora n sucul duodenal.
Pancreatitele acute sunt inflamaii ale pancreasului, n
care are loc activarea enzimelor proteolitice n
interstiiul pancreatic i trecerea enzimelor pancreatice
n circulaia sanguin. Dozarea enzimelor pancreatice
n snge, urin, suc duodenal, lichid de ascit, lichid
pleural etc. indic valori foarte mari, n concordan cu
tabloul clinic dramatic al acestor afeciuni.
Pancreatitele cronice sunt afeciuni cu evoluie lent,
ireversibil, de tipul insuficienei secretorii a
pancreasului exocrin. Dozarea enzimelor n lichidul
duodenal, snge i urin indic valori sczute, iar
testele de stimulare a secreiei pancreatice arat
scderea volumului sucului pancreatic, rspuns tardiv i

63
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

de scurt durat, cu valori reduse ale enzimelor


pancreatice. Scderea concentraiei enzimelor
pancreatice are ca rezultat o digestie insuficient a
proteinelor, lipidelor i glucidelor. Astfel, proteinele
rmase nedigerate se elimin n cantitate crescut n
materiile fecale (creatoree), la fel i grsimile rmase
nedigerate, determinnd steatoree.

Metode folosite n explorarea modern a funciei pancreasului exocrin:


Stimularea direct a secreiei pancreatice prin administrare de
secretin. Se administreaz intravenos secretin n doz de 1
unitate clinic/kg corp i se recolteaz lichid duodenal prin
tubaj duodenal. Rspunsul secretor al pancreasului este
proporional cu masa funcional a esutului pancreatic.
Reducerea rspunsului secretor corespunde pancreatitei
cronice. Valori normale:
Volum de suc duodenal > 2ml/kg corp/h
Concentraia bicarbonatului > 80 mmol/l
Debitul bicarbonatului > 10 mmol/h
Stimularea direct a secreiei pancreatice cu secretin i
colecistokinin permite msurarea cantitativ a secreiei de
suc pancreatic i dozarea enzimelor pancreatice. Valori
sczute indic o distrugere avansat a celulelor acinoase.
Stimularea indirect a secreiei pancreasului prin administrare
de alimente sub forma prnzului Lundh. Prnzul de prob
Lundh conine grsimi, hidrai de carbon i proteine, n
cantitile necesare pentru eliberarea de colecistokinin.
Dozarea enzimelor n sucul duodenal arat valori sczute n
insuficiena secretorie pancreatic.
Testul benzoil-tirozil-p-aminobenzoic (BzTiPABA,
bentiromid). Acest peptid sintetic este scindat de
chimotripsin, se elibereaz PABA, care este absorbit n
snge i un metabolit PABA este excretat n urin, de unde se
dozeaz.
Testul cu pancreolauril. Dilauratul de fluorescein este
hidrolizat de chimotripsina pancreatic, iar fluoresceina se
determin n urin. Testul d informaii despre sinteza
enzimelor pancreatice.

64
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

Determinarea produilor de digestie intraluminal, prin


examinarea microscopic a materiilor fecale. Se observ la
microscop existena fibrelor musculare nedigerate, a grsimilor
i amidonului nehidrolizate. Prezena acestora indic un deficit
de secreie a enzimelor pancreatice.
Determinarea azotului n materiile fecale. Reducerea secreiei
enzimelor proteolitice afecteaz digestia proteinelor i crete
azotul fecal.
Determinarea enzimelor pancreatice chimotripsin i elastaz
n materiile fecale. Aceste enzime se elimin nemodificate n
materiile fecale i constituie un indicator al secreiei
pancreatice de enzime proteolitice.
Testul Schilling dublu marcat. Cobalamina marcat este
eliberat din legtura cu substanele substrat, de ctre
enzimele proteolitice i este excretat n urin. Este un
indicator al insuficienei secreiei pancreasului exocrin.
Raportul Clearance amilaz/creatinin.
Determinarea izoamilazelor P, sintetizate n pancreas, este un
test sensibil pentru diagnosticul pancreatitei acute
Determinarea lipazei serice arat valori crescute n pancreatita
acut.
Imunoreactivitatea seric tripsin-like este crescut n
pancreatita acut i sczut n pancreatita cronic cu
steatoree.
Polipeptidul pancreatic este sczut n pancreatita cronic.
Aceste teste au sensibilitate variabil i o semnificaie
interpretabil numai n contextul clinic i n corelaie cu alte teste, deoarece
pancreasul exocrin se caracterizeaz printr-o rezerv funcional
important. Testele de stimulare a funciei pancreatice exocrine dau
rezultate sigure n cazul distrugerii a peste 60% din pancreasul exocrin, iar
pentru apariia maldigestiei grsimilor i proteinelor, esutul pancreatic
trebuie s fie nefuncional n proporie de 80-90%.

Consultnd un dicionar medical sau materialele


didactice, v rugm s definii urmtorii termeni: pancreatit,
obstrucie, enterokinaza, fistul precum i ali termeni ntlnii
n acest capitol pe care nu i cunoatei.

65
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

3.4. NTREBRI

1. Care sunt componentele structurii pancreasului care


produc secreie ecbolic?
2. Care sunt componentele structurii pancreasului care
produc secreie hidrolatic?
3. Care este compoziia sucului pancreatic?
4. Ce valoare normal are pH-ul sucului pancreatic?
5. Enumerai enzimele proteolitice prezente n sucul
pancreatic.
6. Enumerai enzimele lipolitice prezente n sucul
pancreatic.
7. Enumerai enzimele glicolitice prezente n sucul
pancreatic.
8. Ce este tripsina?
9. Ce este lipaza?
10. Ce este amilaza?
11. Ce este enterokinaza?
12. Care este mecanismul de activare a tripsinei?
13. Ce este secretina?
14. Ce este colecistokinina?
15. Ce efect are stimularea vagal asupra secreiei
pancreatice?
16. Ce este polipeptidul pancreatic?
17. Ce este glucagonul?
18. Care sunt hormonii implicai n reglarea umoral a
secreiei pancreasului exocrin?
19. Enumerai alimente care constituie substratul de
aciune al tripsinei.
20. Enumerai alimente care constituie substratul de
aciune al lipazei.
21. Enumerai alimente care constituie substratul de
aciune al amilazei.
22. Enumerai metode de explorare a funciei pancreasului
exocrin.

66
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

23. Ce nseamn creatoree?


24. Ce nseamn steatoree?
25. Ce semnificaie are eliminarea fibrelor musculare,
amidonului i grsimilor nedigerate n materiile fecale?
26. Mecanismul nervos de reglare a secreiei pancreatice.
27. Mecanismul umoral de reglare a secreiei pancreatice.

67
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

FIZIOLOGIA FICATULUI

4.1. NOIUNI INTRODUCTIVE

Ficatul este un organ


situat predominant n partea
dreapt a etajului abdominal
superior, sub diafragm,
avnd greutate de
aproximativ 1 1,5 kg; are 4
lobi: stng, drept, caudat i
ptrat. Structura sa este
lobular, un lobul fiind
format din: hepatocite, vase
arteriale, venoase, limfatice
i poriunea incipient a
canaliculelor biliare.
Figura 4.1. Cile biliare Canaliculele biliare
extrahepatice intrahepatice converg,
alctuind canalele biliare perilobulare, care vor forma canalele
hepatice drept i stng; la nivelul hilului, cele dou se unesc i
formeaz canalul hepatic comun. Canalul hepatic se continu
prin canalul coledoc, cu o derivaie, canalul cistic, la
extremitatea cruia se gsete vezicula biliar.(fig. 4.1.)
Principalele funcii hepatice sunt:
funcia de gland exocrin (secreia bilei), cu rol n
digestia i absorbia intestinal.

69
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

funcia excretoare, prin secreia biliar se elimin


din organism pigmeni biliari, colesterol,
medicamente, fenolftalein, sruri iodate
(proprietate ce st la baza opacifierii cilor biliare
extrahepatice i a colecistului la examenul
radiologic) i ali produi rezultai din metabolism;
funcia de rezervor de snge, ficatul avnd un debit
sanguin foarte mare, 20% din debitul cardiac;
rol important n termoreglare, sngele din venele
suprahepatice avnd cea mai ridicat temperatur
din organism, aproximativ 400C;
funcia de veritabil laborator central al organismului,
prin intervenia n metabolismul intermediar al
carbohiodrailor, lipidelor i proteinelor;
funcia de meninere a homeostaziei
hidroelectrolitice;
funcia hematopoietic, doar n viaa antepartum;
funcia de depozit de vitamine: A, B12, D, E, K i ioni:
Fe i Cu;
funcia antitoxic, detoxifierea substanelor toxice
endogene sau exogene;
funcia de aprare, n imunitate, prin activitatea
celulelor Kupffer.
Bila reprezint produsul de secreie exocrin, continu,
elaborat de celulele parenchimatoase hepatice, avnd rol n
digestia i absorbia intestinal. Secreia biliar (aproximativ
800-1000 ml/zi) drenat n canaliculele biliare intrahepatice,
este colectat n final n canalul hepatic i apoi n canalul
coledoc, prin care se vars n duoden. Prin canalul cistic, bila
este transportat i depozitat n vezicula biliar, unde se
concentreaz, prin absorbia apei; apoi se elimin intermitent
n duoden, n perioadele digestive, prin contracia veziculei
biliare i relaxarea sfincterului Oddi.

70
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

Bila reprezint, n acelai timp, o cale de eliminare


pentru anumii produi endogeni (pigmeni biliari rezultai din
catabolismul hemoglobinei, colesterol, lecitine, etc.), pentru
unele substane exogene (sruri ale metalelor grele, colorani,
diverse droguri, etc.), precum i pentru srurile acizilor biliari,
sintetizai din colesterol de ctre hepatocite. Prin srurile
biliare, bila, dei nu conine nici o enzim, deine rol n digestia
i absorbia lipidelor.

4.1.1. Caracteristici fizice i chimice ale bilei.

Aspect: culoare galben-auriu, limpede (bila hepatic


C), brun nchis sau verde, tulbure (datorit resturilor epiteliale
i srurilor de calciu) i filant (prin mucus), bila vezicular B.
Cantitate: 250-1100 ml/zi.
pH-ul este n funcie de bil, avnd valori ntre 5,6-8,6,
cu variaii dependente de alimentaie (mai alcalin n
alimentaia vegetarian i mai acid n cea n care predomin
produse de natur animal).
Bila B (vezicular) are un pH mai acid (5,6-7), iar
atunci cnd nu se acidific suficient, srurile de
calciu vor precipita i vor forma calculi.
Bila C (hepatic) are un pH uor alcalin (7,8-8,6).
Densitate:
1,010-1,012 g/cm3, pentru bila hepatic C
1012-1040 g/cm3 pentru bila vezicular B.
Punctul crioscopic: -0,54 pn la -0,630C (bila
vezicular B), fiind aproape izoton cu sngele (310 mOsm/l).
Dei suma electroliilor biliari este mult mai mare fa de
plasm, probabil c srurile biliare, la pH alcalin,
comportndu-se ca anioni, formeaz agregate osmotice
inactive cu unii cationi.
Compoziia bilei este complex, fiind foarte diferit,
(tabel nr. 4.1.1.), deoarece bila din colecist se concentreaz

71
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

pn la de 10 ori, prin reabsorbia de ap i electrolii.


Electroliii principali ai bilei sunt cationii de Na+ i K+ i anionii
Cl- i HCO3-. Din studiul constituiei chimice, reiese c bila nu
este un suc digestiv propriu-zis, deoarece nu conine enzime.
Cu toate acestea, deine rol important n digestia lipidelor, prin
acizii biliari.

Constituieni Bila hepatic (C) Bila vezicular (B)

Ap 97%-98% 84%

Reziduu uscat din care: 3% 16%

Acizi biliari (mM) 24-42 290-340


Bilirubin (g/l) 0,2-0,7 0,5-1
Colesterol (g/l) 0,8-1,8 1-9
Lecitine (g/l) 2,5 3,5
Proteine (g/l) 1,8 4,5
+
Na (mEq/l) 145 140
+
K (mEq/l) 5 12
2+
Ca (mEq/l) 5 23
-
Cl (mEq/l) 100 25
-
HCO3 (mEq/l) 28 10

Tabelul nr. 4.1. Compoziia chimic a bilei hepatice i veziculare

Principalii constituieni chimici ai bilei sunt:


acizii biliari i srurile biliare
pigmenii biliari
colesterolul.

Acizii biliari i srurile biliare


Reprezint factorii principali prin care bila intervine n
digestie. S-au izolat 4 acizi biliari, care intr i n constituia
colesterolului, vitaminei D i a hormonilor steroizi, acetia fiind:
72
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

acidul colic, acidul chenodeoxicolic, acidul deoxicolic i


acidul litocolic. Primii doi acizi se sintetizeaz n hepatocite,
plecnd de la colesterol i se numesc acizi biliari primari. Ei se
transform, sub aciunea florei bacteriene intestinale, n acizi
biliari secundari: acidul deoxicolic (din acidul colic) i acidul
litocolic (din acidul chenodeoxicolic). Acidul deoxicolic este
uor resorbabil din intestin, de aceea se gsete n cantiti
ridicate n bil, n timp ce acidul litocolic, foarte puin solubil,
se absoarbe n cantiti minime, fiind eliminat n cea mai mare
parte prin scaun.
Acizii biliari sunt conjugai n celula hepatic cu
glicocolul i taurina (derivai ai cistinei) formnd acidul
glicocolic i, respectiv, acidul taurocolic care, la rndul lor, n
mediul alcalin biliar, formeaz sruri de Na i K (sruri
biliare), forme sub care se elimin n duoden. Srurile biliare
reprezint pn la 2/3 din reziduul uscat al bilei.
Cea mai mare parte a srurilor biliare (9/10) sunt
resorbite prin mucoasa intestinal, mpreun cu grsimile,
ns, dup trecerea prin mucoas, se separ de grsimi i
ajung n snge. Ajunse n ficat pe cale sanguin, sunt
reabsorbite la polul sanguin al celulei hepatice i secretate la
polul biliar, realiznd circuitul hepato-entero-hepatic al
srurilor biliare, prin mecanisme ce presupun existena unor
transportori, receptori i consum energetic. Restul de sruri
biliare (1/10) ajunge n colon, unde sub aciunea florei
microbiene sufer procese de dehidroxilare i deconjugare,
transformndu-se n acizi biliari secundari:
acidul deoxicolic, reabsorbit n proporie mic (200
mg/zi), ajunge la ficat, unde este conjugat cu
glicocolul i taurina i reexcretat n bil;
acidul litocolic, puin solubil, se absoarbe n cantiti
minime, ajunge la ficat, unde este sulfoconjugat i
eliminat prin bil, marea majoritate a acestui acid
parcurgnd colonul, este eliminat prin fecale (300
mg/zi).
73
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

Srurile biliare au importante roluri n digestia i


absorbia lipidelor.
Prin aciunea tensioactiv emulsioneaz lipidele
(trigliceridele), oferind o suprafa mai mare pentru
aciunea lipazei pancreatice i intestinale.
Rolul cel mai important al srurilor biliare se exercit
n absorbia lipidelor i a vitaminelor
liposolubile. Lipsa bilei i a srurilor biliare duce la
pierderea prin fecale a 2/3 din lipidele ingerate i a
vitaminelor liposolubile (A, D, E, K), precum i
instalarea unor hipovitaminoze complexe.
Reprezint cel mai puternic coleretic natural
Au o aciune laxativ.
Rol antiputrid - n lipsa srurilor biliare nu se
realizeaz digestia proteic, deoarece grsimile
nedigerate se dispun la suprafaa proteinelor,
impiedicndu-le digestia. Datorit acestor
fenomene, ar putea intensifica putrefacia la nivelul
colonului distal.
De asemenea, srurile biliare formeaz cu
colesterolul complexe hidrosolubile (micelii sau
compleci coleinici), proprietate ce explic
meninerea acestuia solubilizat n bil. Cnd raportul
sruri biliare/colesterol (normal 20/1) scade n
favoarea colesterolului, acesta are tendina de a
precipita sub form de calculi biliari (bila devine
litogen). Litogeneza este favorizat de scderea
concentraiei substanelor care menin compuii
dizolvai n soluie, sau/i de excesul de substane
dizolvate. Scderea raportului sruri biliare /
colesterol poate fi determinat de reducerea
concentraiei srurilor biliare i a lecitinei sau/i de
creterea absolut a concentraiei de colesterol, ce
depete capacitatea solubilizatoare a srurilor

74
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

biliare i a lecitinei. Scderea concentraiei srurilor


biliare n bila vezicular poate fi determinat de:
rezorbia crescut a acestora prin mucoasa
vezicular inflamat;
prezena unor ageni infecioi ce deconjug
srurile biliare;
perturbarea circuitului entero-hepatic al acizilor
biliari, condiionat de stenoze coledociene,
fistule biliare, sindroame de malabsorbie;
tratamente prelungite cu medicamente ce
mpiedic absorbia acizilor biliari (neomicina,
difenilhidantoina, etc.).

Pigmenii biliari
Sunt cei care dau coloraia galben-verzuie,
caracteristic bilei i sunt reprezentai predominant de
bilirubin i urobilinogen. Ei reprezint produii de degradare
ai hemoglobinei, provenit din hematiile distruse n procesul
de hemoliz fiziologic.
Odat ce eritrocitele mbtrnite sunt sechestrate i
lizate, hemoglobina este catabolizat rapid. Aminoacizii sunt
eliberai prin proteoliz i apoi neutralizai sau metabolizai.
Grupul hem este catabolizat de un sistem oxidativ microzomal,
inelul porfirinic fiind convertit n pigmeni biliari, care sunt
eliminai prin ficat. Fierul, eliberat n cursul catabolismului
hemului, este iniial ncorporat n feritin (proteina de depozit),
n final fiind transportat la precursorii eritrocitari medulari de
ctre transferin, o protein plasmatic ce leag fierul.
Bilirubina este produs n macrofage, prin
catabolismul enzimatic al fraciunii hem din diverse
hemoproteine. 80% din bilirubina circulant deriv din
eritrocitele mbtrnite, care la sfritul vieii lor normale, de
aproximativ 120 de zile, sunt distruse de celulele
reticuloendoteliale. Oxidarea hemului genereaz biliverdin,
care este metabolizat n bilirubin. Restul de 15-20% din
75
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

bilirubina circulant provine din alte surse (distrugerea


eritrocitelor mature din mduva osoas hematogen sau
metabolismul altor proteine ce conin hem: citocromii hepatici,
mioglobina, enzime).
Bilirubina astfel format, circul n snge, fiind
transportat la ficat sub forma unui complex solubil bilirubin-
albumin. Dei ea este destul de puternic legat de albumin,
poate fi extras din snge de ctre ficat. La nivel hepatic,
bilirubina se conjug cu acidul glucuronic, sub aciunea
glucuronil transferazelor. Bilirubina conjugat include bilirubin-
monoglucuronid, ce predomin n ficat i bilirubin-diglucuronid,
ce predomin n lichidul biliar.
Bilirubina conjugat este transportat n canaliculele
biliare, de unde este deversat, mpreun cu bila, n cile
biliare i apoi n intestin, unde sufer reduceri succesive, cu
formare de urobilinogen i stercobilinogen. Stercobilinogenul
i o mic parte din urobilinogen sunt eliminate prin fecale; cea
mai mare parte a urobilinogenului este reabsorbit intestinal,
ajungnd prin circulaia portal la ficat (circuitul entero-
hepatic), de unde este reexcretat prin bil.
Bilirubina indirect (BI), neconjugat are o
concentraie plasmatic, determinat de rata cu care bilirubina
nou sintetizat intr n plasm (turnover-ul bilirubinei) i de
rata eliminrii bilirubinei de ctre ficat (clearance-ul hepatic al
bilirubinei).
Bilirubina direct (BD), conjugat este hidrosolubil,
cu reactivitate crescut i d o reacie direct de culoare cu
reactivul diazo. Creterea BD n ser se asociaz cu excreia
redus de pigment conjugat din ficat i bil i cu apariia
acestui pigment n urin.

Bilirubina total = Bilirubina neconjugat (indirect) +


Bilirubina conjugat (direct)

76
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

Colesterolul
Se gsete n bila hepatic n concentraie de 80-180
mg%, iar n cea colecistic n cantiti de 10 ori mai mari.
Colesterolul biliar este n cea mai mare parte produsul de
sintez al celulelor hepatice i doar ntr-o mic proporie este
de provenien sanguin.
Colesterolul, ajuns n intestin mpreun cu bila, este n
parte transformat n coprosterol sub aciunea florei bacteriene
i eliminat prin fecale, iar n parte, este reabsorbit n
segmentele proximale ale colonului i ajunge din nou la ficat.
Bila mai conine fosfolipide, dintre care menionm
lecitina, care n combinaie cu srurile biliare i colesterolul,
mpiedic formarea de calculi de colesterol.

Mecanismul reglrii secreiei biliare este nervos i


umoral:
mecanismul nervos, reprezentat de influene
nervoase vegetative: parasimpaticul crete secreia
de bil, prin mediatorul su acetilcolina, iar
simpaticul o inhib, prin mediatorii si, adrenalina i
noradrenalina;
mecanismul umoral, reprezentat de hormonii
eliberai n primele poriuni ale duodenului i
jejunului, la contactul cu chimul gastric (secretina i
hepatocrinina), hormoni care, prin snge, ajung la
hepatocit i i stimuleaz activitatea, crescnd astfel
secreia biliar.

4.1.2. Recoltarea bilei

Experimental, se poate recolta bil prin suturarea la


piele a sfincterului Oddi, decupat cu o bucat de mucoas
duodenal din jurul lui. De asemenea putem obine bil
vezicular, prin intermediul unei fistule colecistice.

77
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

n clinic, recoltarea se poate face cu sonda Einhorn,


introducnd-o pe o distan mai mare (60-70 cm). Se obine
iniial bila A coledocian, apoi, dup administrarea unei
substane colagoge, se obine bila B vezicular i, n final,
bila C hepatic, de culoare galben aurie. Informaii mai
detaliate se pot obine prin tubajul duodenal minutat.

4.2. LUCRRI PRACTICE DE EFECTUAT

4.2.1 Reacii calitative de punere n eviden a


rolurilor srurilor biliare

Evidenierea aciunii de emulsionare a


grsimilor de ctre srurile biliare

Principiul metodei:
Srurile biliare produc scderea tensiunii superficiale a
picturilor de grsime, la nivelul contactului lor cu apa,
fracionndu-le n picturi mai mici i determinnd astfel
emulsionarea.

Materiale necesare:
bil sau soluie de sruri biliare
ulei de msline
ap distilat
pipete
eprubete
stativ.

Tehnica de lucru:
Se efectueaz folosind 2 eprubete: martor i prob.

78
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

Eprubeta 1 Eprubeta 2
martor prob
Soluie sruri biliare - 3-4 ml
Ap distilat 3-4 ml -
Ulei de msline 1 ml 1 ml
se amestec, prin se amestec prin
agitare, coninutul agitare coninutul
eprubetei eprubetei

Tabelul nr. 4.2. Substanele introduse n eprubetele de reacie

Rezultate:
Eprubeta 1, martor: se evideniaz dou straturi
nemiscibile.
Eprubeta 2, prob: se formeaz o emulsie stabil.

Evidenierea aciunii de scdere a tensiunii


superficiale a lichidelor n care se afl srurile
biliare, prin reacia Hay.

Principiul metodei:
Floarea de sulf n pulbere fin, presrat la suprafaa
apei sau urinei normale, se menine la suprafa. n cazul n
care apa sau urina conin sruri biliare, ea cade n poriunea
inferioar a vasului, n 2-3 minute, prin scderea tensiunii
superficiale.

Materiale necesare:
soluie sruri biliare sau urin (care conine sruri
biliare)
floare de sulf n pulbere fin
pahare Berzelius.

Tehnica de lucru:
Se efectueaz folosind dou pahare Berzelius: martor
i prob.

79
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

Paharul 1-martor Paharul 2-prob


Soluie sruri - 5 -6 ml
biliare
Ap distilat 5-6 ml -
Floare de sulf presrat uor, de presrat uor, de
la mic nlime, pe la mic nlime, pe
suprafaa lichidului suprafaa lichidului

Tabelul nr. 4.3.

Rezultate:
Paharul 1-martor: floarea de sulf se menine la
suprafaa lichidului
Paharul 2-prob: floarea de sulf nu se menine la
suprafaa lichidului i cade n poriunea inferioar a paharului,
datorit aciunii de scdere a tensiunii superficiale a srurilor
biliare.

Evidenierea aciunii hidrotrope a srurilor


biliare. Solubilizarea acizilor grai.

Principiul metodei:
Srurile biliare au proprietatea de a solubiliza acizii
grai, rezultai din hidroliza lipidelor sub influena lipazei, la
nivelul duodenului i de a forma mpreun cu acetia
compleci coleinici, care reprezint una dintre formele de
absorbie a lipidelor, la nivelul intestinului. n laborator, vom
utiliza ca lipid, spunul, iar n locul lipazei, vom folosi acidul
sulfuric.

Materiale necesare:
soluie sruri biliare sau bil diluat
acid sulfuric diluat
80
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

soluie spun
eprubete
pipete
stativ.

Tehnica de lucru:
ntr-o eprubet se introduc 5-6 ml soluie diluat de
spun, peste care se adaug cteva picturi de acid sulfuric
diluat, care hidrolizeaz grsimile, desfcndu-le n acizi grai
i glicerol. Se observ apariia unui precipitat, datorit faptului
c acizii grai nu sunt hidrosolubili i precipit n poriunea
inferioar a eprubetei. Se adaug apoi 3-4 ml soluie de sruri
biliare.

Rezultate:
Dup agitare, se remarc solubilizarea precipitatului de
acizi grai format anterior, ceea ce ne indic aciunea
hidrotrop a srurilor biliare.

4.2.2. Reacii calitative de punere n eviden a


srurilor biliare

Reacia Pettenkofer
Principiul metodei:
Reacia se bazeaz pe proprietatea srurilor biliare ca,
n prezena acidului sulfuric concentrat, s dea cu oximetil-
furfurolul un compus colorat n rou. Sub influena acidului
sulfuric, zaharoza se desface n levuloz i glucoz. Din
levuloz, prin eliminarea a trei molecule de ap, va rezulta
oximetil - furfurolul, care, mpreun cu acidul colic din srurile
biliare i, n prezena acidului sulfuric concentrat, va forma un
produs colorat n rou.

81
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

Materiale necesare:
soluie acizi biliari (bil diluat de 3-4 ori)
soluie zaharoz 10 %
acid sulfuric concentrat
eprubete
stativ.

Tehnic de lucru:
ntr-o eprubet cu 4-5 ml soluie de acizi biliari sau bil
diluat, se adaug 0,5-1 ml soluie de zaharoz 10% i se
amestec bine. nclinnd uor eprubeta, se adaug cu
precauie 3-4 ml acid sulfuric concentrat, astfel nct s nu se
amestece cu soluia din eprubet, ci s formeze un strat
compact n poriunea inferioar a eprubetei. n tot acest timp,
eprubeta se ine sub un jet de ap rece, evitnd astfel
nclzirea ei.

Rezultate:
Agitnd foarte uor eprubeta, fr a omogeniza
coninutul, la limita de separare dintre acidul sulfuric, situat n
partea de jos i amestecul de bil i zaharoz, apare un inel
rou - violaceu.

Reacia Udranszky

Reacia Udranszky este similar reaciei Pettenkofer,


cu diferena c utilizeaz, n locul zaharozei, o soluie de
furfurol 0,1%.

Deoarece anumite substane din urin dau, n condiiile


de mai sus, o culoare asemntoare cu cea dat de srurile
biliare, utilizarea acestor metode d rezultate sigure numai
cnd concentraia srurilor biliare este de cel puin 4,5g.

82
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

4.2.3 Evidenierea pigmenilor biliari n urin prin


determinri calitative

Reacia Trousseau Rosin

Principiul metodei:
Se evideniaz prezena pigmenilor biliari n urin,
utiliznd tinctura de iod. Urina care conine bilirubin, se
coloreaz n verde, n prezena iodului din tinctura de iod.

Materiale necesare:
bil diluat sau urin icteric
tinctur de iod
pipete
eprubete
stativ.

Tehnica de lucru:
ntr-o eprubet se introduc 10 ml bil diluat sau urin
icteric. Cu o pipet efilat se las s curg, n poriunea
inferioar a eprubetei, 2 ml tinctur de iod.

Rezultate:
Se observ apariia unui inel verde, la nivelul suprafeei
de contact dintre urin si tinctura de iod, ceea ce ne indic
prezena bilirubinei n lichidul de cercetat. Proba este extrem
de simpl, fiind folosit uzual n practica medical, ns nu
este strict specific, acest inel apare i dup administrarea de
antitripsin.

Reacia Gmelin

Principiul metodei:
Evideniem prezena pigmenilor biliari n urin,
cunoscnd faptul c bilirubina se coloreaz n verde, prin
83
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

oxidarea la biliverdin, n prezena acidului azotic i a nitritului


de Na.

Materiale necesare:
bil diluat sau urin icteric
amestec format din acid azotic concentrat i nitrit de
sodiu
pipete
eprubete
stativ.

Tehnica de lucru:
ntr-o eprubet se introduc 10 ml bil diluat sau urin
icteric. Cu o pipet efilat se las s curg ncet, n poriunea
inferioar a paharului, 1-2 ml amestec format din acid azotic
concentrat i nitrit de sodiu.

Rezultate:
La limita de separare dintre cele dou lichide apar mai
multe inele colorate n verde, albastru, violet, galben, rou,
datorit oxidrii inegale a pigmenilor biliari. Prezena inelului
verde la limita de separare dintre cele dou lichide ne indic
existena n lichidul de cercetat a bilirubinei, care se oxideaz
la biliverdin.

Reacia Rosenbach

Principiul metodei:
Se evideniaz prezena pigmenilor biliari n urin,
cunoscnd faptul c bilirubina se coloreaz n verde, prin
oxidarea la biliverdin, n prezena acidului azotic.

Materiale necesare:
bil diluat sau urin icteric

84
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

amestec format din acid azotic concentrat i nitrit de


sodiu
hrtie de filtru
pipete
plac de porelan.

Tehnica de lucru:
Pe o hrtie de filtru, aezat pe o plac de porelan, se
las s cad 2-3 picturi din soluia de cercetat. n mijlocul
petei formate pe hrtie se adaug o pictur din amestecul
format din acid azotic concentrat i nitrit de sodiu.

Rezultate:
n mijlocul picturii de acid, respectiv la limita de
separaie dintre cele dou lichide de pe hrtie, apar cercuri
concentice colorate n galben, rou, albastru, violet i la
exterior verde. Prezena inelului verde, la limita de separare
dintre cele dou lichide de pe hrtie, ne indic existena n
lichidul de cercetat, a bilirubinei, care se oxideaz la
biliverdin.

Reacia Franke

Principiul metodei:
Se evideniaz prezena pigmenilor biliari n urin,
cunoscnd faptul c bilirubina se coloreaz n verde intens, n
prezena albastrului de metilen.

Materiale necesare:
bil diluat sau urin icteric
soluie de albastru de metilen 2
pipete
eprubete
stativ.

85
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

Tehnica de lucru:
ntr-o eprubet se introduc 5 ml bil diluat sau urin
icteric, apoi se adaug pictur cu pictur soluie de
albastru de metilen.

Rezultate:
Soluia se va colora n verde intens, indicnd prezena
bilirubinei, care prin oxidare s-a transformat n biliverdin. n
absena bilirubinei, soluia rmne albastr.

Reacia Ionescu Matiu

Principiul metodei:
Se evideniaz prezena pigmenilor biliari n urin,
cunoscnd faptul c bilirubina precipit, n prezena clorurii de
bariu, sub form de bilirubinat de bariu. Acesta este apoi
oxidat de amestecul dintre acid sulfuric i bicromat de potasiu,
la biliverdinat de bariu, de culoare verde.

Materiale necesare:
bil diluat sau urin icteric
soluie de clorur de bariu 10%
soluie de bicromat de potasiu 4%
soluie de acid sulfuric 20%
pipete
eprubete
plnie
hrtie de filtru
stativ.

Tehnica de lucru:
ntr-o eprubet se introduc 5 ml bil diluat sau urin
icteric, apoi 10 ml soluie clorur de bariu 10%. Dup agitare,
apare un precipitat de bilirubinat de bariu, de culoare galben,

86
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

care va rmne pe hrtia de filtru, dup filtrare. Se adaug


apoi, peste precipitatul format, direct pe hrtia de filtru, din loc
n loc, cte o pictur de reactiv preparat extemporaneu (din
soluie de bicromat de potasiu i soluie de acid sulfuric, n
raport 4:1).

Rezultate:
Se observ, pe hrtia de filtru, apariia unor zone
concentrice de culoare verde, de biliverdinat de bariu, n
punctele unde a fost picurat reactivul oxidant.

n practica medical, se folosesc, pentru dozarea


bilirubinei, metode spectrofotometrice, ce furnizeaz valori
precise ale concentraiei acesteia (reacia Jendrasik).

Valori (mg/dl)

Bilirubina total:
Prematuri: 1 zi 6
Prematuri 2 zile 8
Prematuri 3-5 zile 15
La termen: 1 zi 6
La termen: 2 zile 7
La termen 3-5 zile 12
Copii i aduli 0,8-1

Bilirubina direct 0,2-0,4

Bilirubina indirect 0,6-0,8

Tabelul nr. 4.4.Valori de referin pentru concentraiile biliare plasmatice

87
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

4.3. MODIFICRI ALE SECREIEI BILIARE

Nivelurile bilirubinei serice cresc, cnd producia


depete potenialul hepatic de metabolizare i excreie a
acesteia. Clinic, hiperbilirubinemia determin apariia
icterului (pigmentarea galben a tegumentelor i
mucoaselor), care se instaleaz la valori ale bilirubinei mai
mari de 2-2,5 mg/dl.
Tulburrile metabolismului bilirubinei pot fi mprite n 4
categorii:
producie crescut de pigment (prehepatic)
preluare hepatic sczut (hepatic)
conjugare hepatic inadecvat (hepatic)
excreie redus de pigment conjugat (posthepatic).
Primele 3 tulburri ale metabolismului bilirubinei se
asociaz cu bilirubinemie predominant neconjugat i a patra
categorie, cu bilirubinemie predominant conjugat i
bilirubinurie.

Bilirubina seric total are valori crescute n:


hemoliz
obstrucie biliar extrahepatic
hepatit viral
hepatit alcoolic.

Creteri ale valorilor BI n ser pot avea urmtoarele


cauze:
turnover-ul crescut, datorat distrugerii crescute a
eritrocitelor circulante (n afeciuni asociate cu
hemoliz): anemii hemolitice.
icter datorat produciei crescute de pigment ca
urmare a unor: infarcte pulmonare, colecii sanguine
n esuturi, dup cateterisme.

88
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

preluare hepatic alterat, produs de unele


medicamente;
conjugare alterat a bilirubinei, datorit activitii
sczute a bilirubin-glucuronil-transferazei: icter
neonatal; deficit ereditar de glucuroniltransferaz;
sindromul Gilbert; sindromul Crigler Najjar tipul I cu
absena glucuroniltransferazei i tipul II cu deficit
parial de glucuroniltransferaz; inhibiie
medicamentoas; deficit dobndit de
glucuroniltransferaz.

Creteri ale valorilor BD n ser apar n:


obstrucie intrahepatic: defecte familiale sau
dobndite ale funciei excretorii hepatice; colestaz
indus de medicamente, icter postoperator,
hepatit, ciroz;
obstrucie extrahepatic: obstrucia mecanic a
ductelor biliare, datorat n mare parte calculilor,
tumorilor sau stricturilor.

Consultnd un dicionar medical sau materialele


didactice, v rugm s definii urmtorii termeni: homeostazie,
antepartum, hematopoiez, hemoliz, exocrin, feritin,
transferin, icter, precum i ali termeni ntlnii n acest
capitol pe care nu i cunoatei.

4.4. NTREBRI

1. Ce sunt substanele coleretice?


2. Ce sunt substanele colagoge?
3. Unde se secret colecistokinina i n ce condiii?
4. Cile biliare extrahepatice.
5. Compoziia sucului biliar. Enumerarea componentelor
principale.

89
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

6. pH-ul bilei hepatice i al bilei veziculare.


7. Acizii biliari enumerare.
8. Srurile biliare care sunt?
9. Principalele roluri ale srurilor biliare n digestie.
10. Pigmenii biliari care sunt?
11. Valori normale ale bilirubinei indirecte, directe i totale
n snge.
12. Bilirubina indirect, din ce provine?
13. Bilirubina direct, unde se sintetizeaz?

90
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

FIZIOLOGIA MUCHIULUI NETED

5.1. NOIUNI INTRODUCTIVE

Tunica muscular
a tubului digestiv
(exceptnd poriunea
iniial i terminal a lui)
este reprezentat de
musculatur neted.
Muchiul neted, denumit
astfel datorit lipsei
striaiilor transversale,
este alctuit din fibre mici,
n mod obinuit de 1-5 m
diametru i 20-500 m
lungime.
esutul muscular
neted din componena
unui anumit organ difer,
n general, de cel din alte
organe prin: dimensiuni,
Figura 5.1. organizare (de exemplu,
dispunere n tunici,
straturi, etc.), rspunsul la
diferii stimuli, inervaie, funcii i este mprit n dou tipuri
majore, n funcie de tipul excitaiei:

91
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

tip unitar, care intr n alctuirea viscerelor


(stomac, intestine, vezic urinar, uretere, uter,
etc.). n acest tip de muchi neted, fibrele musculare
sunt interconectate prin jonciuni gap, cu o mare
conductan pentru ioni (cuplare electric). Acest tip
de muchi mai este numit sinciial sau visceral.
Anumite fibre prezint depolarizare spontan (sunt
capabile de automatism) i excitaia se rspndete
prin jonciunile gap, n ntreaga musculatur neted
a organului respectiv. Contracia acestui tip de
muchi neted este, n mare msur, independent
de impulsurile nervoase externe i poate persista
perioade mari de timp (tonus miogen).
tip multiunitar, este compus din fibre musculare
netede izolate, adesea inervate de o singur
terminaie nervoas. Se comport ca uniti motorii
separate, ce se contract independent, iar
contracia este dat mai ales de impulsuri nervoase
vegetative (externe) - tonus neurogen. Jonciunile
gap sunt foarte rare. Acest tip de muchi se
ntlnete n muchii ciliari, iris, muchii piloerectori,
vase de snge.
Mecanismul contraciei muchiului neted este diferit de
cel al muchiului striat scheletic. Muchiul neted, ca si cel
striat, conine actin i miozin. Nu conine ns troponin.
Filamentele de actin i miozin nu sunt organizate n
sarcomere, de unde lipsa striaiilor transversale.
n muchiul neted, filamentele de actin sunt ataate de
anumite structuri numite corpi deni. Unele dintre aceste
structuri sunt ataate de membrana celular, altele dispersate
n sarcoplasm. Printre filamentele de actin se gsesc
filamente de miozin.
Reticulul sarcoplasmic este mai puin dezvoltat dect la
muchiul scheletic. Anumii tubuli sunt situai n apropierea
sarcolemei, pe care, n dreptul lor, exist nite depresiuni
92
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

numite caveole, sugernd un analog rudimentar al sistemului


tubular transvers de la muchiul scheletic.
Cnd un potenial de aciune ajunge la nivelul
caveolelor, determin eliberarea ionilor de Ca2+ din reticulul
sarcoplasmic i trecerea lor n sarcoplasm.
Potenialul de repaus, la muchiul neted, este de
aproximativ -50 pn la -60 mV. Potenialul de aciune este,
fie potenial de durat mic (spike), aproximativ 10-50 ms, fie
n platou, cu durat mare, de cteva sute pn la 1000 ms (o
secund).
n sarcolema fibrelor musculare netede exist mai
puine canale de sodiu cu poart dependent de voltaj
(voltage-gated) i mult mai multe canale de calciu voltage-
gated. De aceea, sodiul particip mai puin la potenialul de
aciune al muchiului neted, care este n schimb dat, mai ales,
de influxul de ioni de Ca2+. Astfel, calciul necesar contraciei
provine, n special, din exteriorul fibrei musculare i mai puin
din reticulul sarcoplasmic.
Anumite fibre musculare netede sunt capabile de
autodepolarizare, fr un stimul extern. Potenialul de repaus
nu se poate menine constant, ci variaz lent, putndu-se
declana spontan poteniale de aciune.
Se pot declana, de asemenea, poteniale de aciune,
atunci cnd un muchi neted visceral este tracionat, tensionat
suficient de mult.
Un potenial de aciune, pe membran, determin
deschiderea canalelor de calciu voltage-gated i intrarea Ca2+
n celul, n virtutea gradientului electrochimic. Acest flux de
Ca2+ poate determina adiional eliberarea de ioni de calciu din
reticulul sarcoplasmic, prin canale de calciu Ca2+- gated (cu
poart dependent de Ca2+).
Hormonii i unii neurotransmitori pot i ei elibera Ca 2+
din reticulul sarcoplasmic, prin intermediul inozitol 1,4,5-
trifosfat (IP3), prin canale de calciu cu poart dependent de
IP3 (IP3-gated).
93
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

La creterea concentraiei intracelulare de Ca2+, acesta


se leag de calmodulin (protein reglatoare). Complexul
Ca2+-calmodulin activeaz apoi miozin light-chain kinaza, o
enzim care fosforileaz lanurile uoare de miozin (capetele
de miozin) n prezena ATP-ului, permind legarea miozinei
de actin i nceperea contraciei.
Scderea concentraiei intracelulare de Ca2+ determin
relaxarea.
Spre deosebire de muchiul striat scheletic, muchiul
neted rspunde cu o perioad de laten foarte mare, durata
contraciei este mult mai mare, muchiul neted putnd
menine o contracie tonic timp ndelungat, cu un consum
minim de energie. Un muchi neted tipic ncepe contracia
dup o perioad de laten de cca. 50-100 ms de la stimul,
maximum de contracie survenind la cca. 0,5 s i relaxarea la
cca. 1-2 secunde. Durata perioadei de contracie la muchii
netezi variaz ntre 0,2 i 30 de secunde.

De reinut:
Muchiul neted are filamente groase i subiri, care nu sunt
aranjate n sarcomere; de aceea nu apare striat ci neted.
Tipurile de muchi neted:
muchiul neted multiunitar:
se gsete n iris, muchii ciliari ai cristalinului i vase
deferente;
se comport ca uniti motorii separate;
nu are sau are foarte puine sinapse electrice (jonciuni
gap) ntre celule;
este bogat inervat, contracia este controlat n principal
de ctre sistemul nervos vegetativ
m. neted unitar:
este cel mai frecvent i este prezent n uter, tract gastro-
intestinal, ureter, vezic urinar
are activitate spontan (unde de contracie lente) i
prezint de asemenea o activitate ritmic (pacemaker)
modulat de hormoni i neurotransmitori; se poate, de
asemenea, contracta n urma unor stimuli mecanici
(traciune, lovire).

94
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

are un grad nalt de cuplare electric ntre celule (multe


jonciuni gap), ceea ce permite contracii coordonate ale
unor organe (e.g vezica urinar)
m. neted vascular:
are proprieti att de muchi neted multiunitar ct i
unitar.
Cuplarea excitaiei cu contracia
mecanismul de cuplare a excitaiei cu contracia este diferit de
cel al muchiului scheletic.
m. neted nu are troponin, n schimb Ca regleaz activitatea
2+

miozinei.
depolarizarea membranei celulare deschide canalele de Ca2+
voltage-gated n faza ascendent (upstroke) a potenialului de
2+
aciune i Ca ptrunde n celul, ca urmare a gradientului
2+
electrochimic, crescnd concentraia intracelular de Ca
2+
([Ca ]).
Ca , care intr n celul poate determina eliberarea
2+
2+
suplimentar de Ca n sarcoplasm din reticulul
2+ 2+
sarcoplasmic, prin canale de Ca Ca -gated. Hormonii i
2+
neurotransmitorii pot, de asemenea, elibera direct Ca n
2+
sarcoplasm prin intermediul canalelor de Ca IP3 (inozitol
1,4,5-trifosfat)-gated.
crete concentraia intracelular a calciului.
Ca se leag de calmodulin. Complexul Ca -calmodulin
2+ 2+

activeaz miozin light-chain kinaza, care odat activat


fosforileaz miozina i i permite s se lege de actin,
producnd contracia.
scderea [Ca ] intracelulare produce relaxarea.
2+

Energia necesar contraciei este furnizat de ATP. Contracia m.


neted are o durat mare, cu consum energetic mic i fr oboseal.
Aciunea sistemului nervos vegetativ asupra m. neted:
Simpaticul (adrenalina, noradrenalina):
pe m neted vascular:
contract vasele din piele (receptori 1)
dilat vasele din muchii scheletici (receptori 2)
tract gastro-intestinal:
scade motilitatea (2, 2)
contract sfincterele (1)
Parasimpaticul (acetilcolina):
la nivelul tractului gastro-intestinal:
crete motilitatea (M3)

95
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

relaxeaz sfincterele (M3)


Atropina blocheaz efectul parasimpatic.

5.2. LUCRRI PRACTICE DE EFECTUAT

5.2.1. nscrierea grafic a secusei muchiului


circular al stomacului de broasc.

Principiul metodei:
Un muchi neted de broasc (stomac), preparat cu
atenie, se fixeaz la o peni ce nscrie pe un kimograf o
secus, obinut prin stimulare electric.

Materiale necesare:
broasc
ace de sering, pentru spinalizarea broatei
ace cu gmlie, necesare montajului
planet, pentru fixarea broatei
kimograf Marey
cheie Morse, pentru stabilirea circuitului electric
srme subiri (li), pentru legturi electrice
surs de curent alternativ, pentru stimulare
vat
a
capsul de porelan
ser fiziologic pentru broasc (soluie NaCl 6)
foarfec
pense
cronograf.

Tehnic de lucru:
Se spinalizeaz broasca, prin introducerea unui ac de
sering, vertical, prin articulaia atlas - axis, la intersecia liniei
ce unete poriunea posterioar a petelor auditive (timpan) cu
96
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

linia median, apoi, dup ce a ptruns n canalul medular, acul


se orienteaz paralel cu axul longitudinal al broatei, pentru a
ptrunde n lungul canalului medular, n vederea distrugerii
mecanice, n totalitate, a mduvei spinrii. Apoi, acul se
retrage din canalul medular, revine vertical i este ndreptat
iari orizontal, dar nspre cutia cranian, unde se introduce
pentru a distruge i creierul.
Se fixeaz broasca pe planet, cu partea ventral n
sus. Folosind pensa i foarfeca se taie peretele abdomenului
i se evideniaz stomacul. Acesta se fixeaz cu pensa i, prin
dou seciuni, una la extremitatea cranial i cealalt la
extremitatea caudal, se detaeaz din organism i se
introduce n ser fiziologic. Stomacul este apoi secionat n lung
cu o foarfec (vezi figura 5.2.)

Figura 5.2.

Prin fiecare margine, de-a lungul tieturii longitudinale,


se introduce cte un ac cu gmlie (vezi reprezentarea
montajului), care astfel este paralel cu pliurile longitudinale ale
mucoasei stomacale. Se va lega la capetele lui, cte o srm
subire de li, n bolt sau n bucl. Una dintre buclele de
97
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

srm se conecteaz cu a la penia kimografului, cealalt


bolt de srm se fixeaz la planet, cu ajutorul unui ac cu
gmlie introdus n planet. La fiecare ac cu gmlie, fixat n
peretele stomacului de broasc, se conectez un conductor
electric subire, care aduce excitantul electric. Pe traiectul
conductorului se introduce o cheie de contact electric, care,
prin acionare, nchide circuitul, lsnd s intre curentul de
excitaie n muchi (fig. 5.3).

Figura 5.3. Montajul preparatului pentru nregistrarea contraciei

Se pune n micare cilindrul kimografului cu vitez mic


(o turaie n 15 minute) i se verific nscrierea peniei. Se
excit apoi muchiul, prin nchiderea prelungit (5-7 secunde)
a circuitului, cu ajutorul cheii de contact.

Rezultate:
Dup cteva secunde de la oprirea excitaiei, muchiul
circular al stomacului ncepe s se contracte, astfel nscriind
pe cilindrul kimografului o curb, cu o faz ascendent, de

98
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

contracie i alta descendent, de relaxare, reprezentnd


secusa acestui muchi (fig. 5.4).

Figura 5.4. Perioadele contraciei unice (secusa)

5.2.1. nregistrarea in vitro a contraciilor


fragmentelor de intestin de la animale cu snge cald

Principiul metodei:
Preparatul obinut chirurgical (fragment de intestin),
este montat ntr-o baie de organ izolat i legat de o peni, ce
nscrie pe cilindrul unui kimograf variaiile de lungime.

Materi ale necesare:


baie pentru organ izolat, legat la un ultratermostat
prin tuburi de cauciuc i conectat la o pomp, ce
barboteaz aer sau oxigen, n soluia din baie
pense
foarfece
soluie Tyrode
pipete
eprubete

99
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

seringi
a
ace cu gmlie
kimograf Marey sau sisteme de nregistrare cu
transductori specializai
substane active (acetilcolin, atropin, adrenalin)

Baia de organ izolat este format dintr-o cuv de sticl,


cu o capacitate de 10 - 40 ml, care are un perete exterior
dublu, de sticl. n spaiul determinat de peretele dublu, circul
un curent de ap nclzit la 37C, de ctre un ultratermostat.
La partea superioar a cuvei se afl un orificiu, prin care se
poate introduce soluia Tyrode, nclzit i ea, n prealabil, la
37C.
n partea de jos a cuvei se afl un tub, prin care va fi
barbotat aerul necesar oxigenrii soluiei din baia de organ i
un mic crlig, de care se prinde, cu un fir, un capt al
fragmentului muscular (fig. 5.5).

Tehnic de lucru:
Un fragment de intestin de 2-4 cm (ileon terminal de
cobai sau de iepure, duoden de obolan), meninut de la
recoltare ntr-o cutie Petri cu ser fiziologic, este legat de cele

Figura 5.5. Montajul instalaiei necesare nregistrrii contraciilor fragmentului


intestinal izolat

100
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

dou extremiti cu cte un fir de a. Unul dintre fire este


scurt i, la captul liber, are un mic ochi, ce va fi prins de
crligul din partea inferioar a cuvei. Al doilea fir este legat de
o peni inscriptoare, ce va nscrie, pe kimograf, contraciile i
relaxrile fragmentului de intestin. Acest capt poate fi
conectat i la un transductor pentru contracii izotone, care va
transforma variaiile de lungime n variaii de potenial electric,
ce vor fi amplificate i nregistrate cu ajutorul unui computer.
Substanele, al cror efect se va urmri, se introduc n
cantiti astfel alese, nct, n soluia din baia de organ, s se
obin concentraiile cerute de experiment.
Dup obinerea unui efect, soluia din baie se schimb,
fiind evacuat printr-un robinet aflat n partea de jos a cuvei.
Se spal apoi cuva i preparatul de mai multe ori, folosind
soluie Tyrode, introducndu-se un nou volum de soluie
Tyrode, nclzit n prealabil. Pentru evidenierea unui alt
efect, cu alt concentraie a aceleai substane sau cu alt
substan activ, se va pstra un interval de cteva minute
ntre experimente.

Rezultate:
Pe muchiul neted intestinal, introdus n baia de organ
izolat, se observ:

activitate spontan ritmic (fig. 5.6)

101
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

Figura 5.6.
efect contractil, determinat de acetilcolin; tot un
efect contractil poate fi dat i de: histamin,
bradichinin, pilocarpin, ionii de potasiu etc. Aceste
substane intensific i activitatea spontan a ansei
intestinale (fig. 5.7).

Figura 5.7.

102
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

aciunea contractil a acetilcolinei este antagonizat


de atropin, prin blocarea receptorilor muscarinici
(fig. 5.8).

Figura 5.8.

efectul inhibitor asupra contraciilor spontane i


aciunea relaxant este produs de adrenalin,
papaverin, magneziu etc.(fig. 5.9).

Figura 5.9.

103
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

Toate efectele evideniate n experiment sunt ilustrate


pe acelai graphic (fig. 5.10):

Consultnd un dicionar medical sau materialele


didactice v rugm s definii urmtorii termeni:receptori
colinergici i adrenergici, tonus, secus, tetanos, contracie
izometric i izoton, precum i ali termeni ntlnii n acest
capitol pe care nu i cunoatei.

4.3. NTREBRI

Figura 5.10.

1. Care sunt efectele stimulrii parasimpatice asupra


motilitii tractului digestiv i asupra sfincterelor
digestive?
2. Care sunt efectele stimulrii simpatice asupra motilitii
tractului digestiv i asupra sfincterelor digestive?
3. Enumerai tipurile de micri la nivelul tractului digestiv.
4. n ce faz a potenialului de aciune, la fibra muscular
neted, are loc intrarea Ca2+ n interiorul celulei?
104
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

5. Ce anume este diferit n rspunsul contractil al


muchiului neted fa de cel striat scheletic?
6. Ce tip de muchi neted se gsete n tractul gastro-
intestinal, ureter, vezica urinar i care prezint
numeroase jonciuni gap?
7. Care dintre proteinele contractile i modulatoare nu
este prezent, n cuplarea excitaiei cu contracia, la
muchiul neted?
8. Cum se definete secusa i care sunt fazele ei?

105
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

BIBLIOGRAFIE

1. Atanasiu Valeriu, Maria Mohora. Compui azotai


neproteici, Biochimie Medical, Ed. Niculescu, 2004, p.
237.
2. Boyce HW, Bakheet MR. Sialorrhea: a review of a vexing,
often unrecognized sign of oropharyngeal and esophageal
disease, Journal of clinical gastroenterology, 39(2), 2005,
p. 89-97.
3. Braunwald Eugene, Anthony S. Fauci, Dennis L. Kasper et
al., Harrisons Principles of Internal Medicine, Teora,
Second Edition, 2003, p. 251-257, 1610-1615.
4. Despopoulos Agamemnon, Stefan Silbernagl, Color Atlas
of Physiology, 5th edition, Georg Thieme Verlag, 2003,
pag. 226 -250
5. Fischbach Frances. Chemistry Studies, A Manual of
Laboratory and Diagnostic Tests. Lippincott
Williams&Wilkins, USA, 7 Ed., 2004, 1188-1238.
6. Fischbach Frances, Effects of the Most Commonly Used
Drugs on Frequently Ordered Laboratory Tests, A Manual
of Laboratory and Diagnostic Tests. Lippincott
Williams&Wilkins, USA, 7th Edition, 2004, p. 1188-1238.
7. Ganong F. William, Review of medical physiology ,21th
edition, Lange Medical Books/McGraw-Hill Medical
Publishing Division, 2003, p. 453 - 479.

106
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

8. Greger R, Winhorst U, Comprehensive Human Physiology,


Ed. Springer-Verlag Berlin-Heilderberg-New York, 1996,
vol. 2, p. 1309-1325.
9. Gusti S, Iancu M, Gusti A, Fiziologia Aparatului Digestiv,
Ed. Sitech, 2000, p. 23-61.
10. Guyton AC, Hall JE, Textbook of Medical Physiology, Ed.
Elsevier Saunders, 2006, p. 791-795.
11. Guyton Arthur C., John E. Hall, Textbook of medical
physiology, 11th edition, Elsevier Saunders, 2006, pag.
770-780.
12. Harrison, Principiile medicinei interne, ediia a XV-a,
Editura tiinelor Medicale, Bucureti, 2004.
13. Hulic Ioan, Fiziologie uman, ediia a III-a, Editura
Medical, 2007.
14. Iancu M, Fiziologia tractului digestiv - Note de curs, Ed.
Medical Universitar, Craiova, 2006, p. 15-32.
15. Laborator Synevo. Referine specifice tehnologiei de lucru
utilizate. Ref Type: Catalog. 2006.
16. Levy M, Koeppen BM, Stanton BA, Berne & Levy-
Principles of physiology, Ed. Elsevier Mosby, 2006, p. 451-
454.
17. Lynch R, Melloy S Inwood, Medical Laboratory Technology
and Clinical Pathology, 1999, p. 181-194.
18. Netianu V, Gusti S, Balica Gh, Ilinescu I, Fiziologia
digestiei, lucrri practice, Reprografia Universitii, 1989, p.
1-26.
19. Pocock Gillian, Richards Christopher, Human Physiology:
The Basis of Medicine, 3th edition, Oxford University
Press, 2006.
20. Siminoski K, Bernanke J, Murphy RA, Nerve growth factor
and epidermal growth factor in mouse submandibular
glands :identical diurnal changes and rates of
secretagogue-induced synthesis, Endocrinology, vol. 132,
1993, p. 2031- 2037.

107
Lucrri practice Fiziologia aparatului digestiv

21. Sltineanu SM, Costuleanu A, Ghid pentru lucrri practice


Fiziologie, UMF Gh.T. Popa, Iai, 1998, p. 75-86.
22. Wallach Jacques, Afeciuni hepatobiliare i pancreatice.
Interpretarea testelor de diagnostic. Editura tiinelor
Medicale, Romnia, a VII-a ediie, 2001, p. 273-274.
23. Wallach Jacques, Analizele de snge. Interpretarea
testelor de diagnostic, a VII-a ediie, Editura tiinelor
Medicale, Romnia, 2001, p. 58-60.

108

S-ar putea să vă placă și