VIZUALIZAREA COMPLEXELOR ANTIGENANTICORP PRIN ARTIFICII TEHNICE

Marirea sensibilitatii reactiei Ag-Ac se poate face prin legarea unui marker usor de identificat de complexul Ag-Ac format, marker care nu interfereaza cu proprietatile imunologice ale reactantilor.

TESTE CARE UTILIZEAZA VIZUALIZAREA COMPLEXELOR ANTIGENANTICORP PRIN ARTIFICII TEHNICE

Markeri pot fi: -o substanta fluorescenta ( izotiocianat de fluoresceina, rodamina) in tehnica de imunofluorescenta IF - un izotop radioactiv ( I125 ) in tehnica radioimunotestarii RIA -o enzima ( peroxidaza din hrean, betagalactozidaza, fosfataza alcalina) in testele imunoenzimatice ELISA. -teste imunochimice cu detectie prin chemiluminiscenta (CLIA

REACTIA DE IMUNOFLUORESCENTA

Prin cuplarea unei substante fluorescente cu anticorpii se obtin anticorpi fluorescenti, care se fixeaza pe antigenul omolog si formeaza complexe imune fluorescente, vizibile in ultraviolet la examinarea cu microscopul special.

REACTIA DE IMUNOFLUORESCENTA

Metoda indirecta Se realizeaza in doi timpi. Produsul patologic se incubeaza cu anticorpii specifici, nemarcati. Pentru vizualizarea complexului imun format se adauga ser antiimunglobulina marcat.( antiimunglobuline fata de imunglobulinele speciei animale pe care s-au obtinut anticorpii nemarcati. Un singur ser marcat poate fi utilizat la detectarea comlpexelor Ag-Ac, anticorpii fiind obtinuti pe aceeasi specie animala ca serul antiglobulinic marcat.

REACTIA DE IMUNOFLUORESCENTA

Metoda directa Anicorpi monospecifici sunt conjugati cu substanta fluorescenta. Produsul patologic care urmeaza a fi testat se etaleaza pe lama dupa care se incubeaza cu anticorpii fluorescenti. Examinarea se face in lumina UV, complexele formate fiind flurescente. Pentru aceasta metoda trebuie sa avem serurile fluorescente specifice fiecarui atigen cautat.

REACTIA DE IMUNOFLUORESCENTA

Aplicatii:- evid Antigenelor dintr-un produs patologic Detectarea Anicorpilor dint-un ser , folosind Ag cunoscut Diagnostic in bacteriologie : mycoplasama, sifilis, Haemophilus, Diagnostic in infectiile virale: in rabie este metoda de electie Diagnostic in infectiile parazitare: toxoplasma gondi, pneumocystis carini, Diagnostic in infectiile fungice

TESTE IMUNOENZIMATICE

Antigenul sau anticorpul se cupleaza cu enzime cu o mare activitate ( peroxidaza din hrean, fosfataza alcalina, ureaza). Complexul imun format este apreciat prin cuantificarea activitatii enzimatice fata de un substrat specific.

Tehnici ELISA (enzime-linkedimunosorben-assay)

1.Tehnica indirecta Antigenul cunoscut este adsorbit pe suport de polistiren Se pune serul cu anticorpii de identificat, se incubeaza, se spala, Se adauga serul antiimunglobulina marcat enzimatic, se incubeaza Se adauga substratul. Se masoara intensitatea reactiei de culoare prin spectrofotometrie.

Tehnici ELISA (enzime-linkedimunosorben-assay)

2. Tehnica sandwich Ac cunoscuti sunt fixati pe suport solid Se adauga proba cu antigen, se incubeaza, se spala Se adauga anticorpi specifici marcati enzimatic, incubare, spalare Se adauga substratul pentru enzima Se citeste intensitatea culorii prin spectrofotometrie

Elisa de tip sandwich

Elisa de tip competitiv

Tehnici ELISA (enzime-linkedimunosorben-assay)

Aplicatii; detectarea anticorpilor bacterieni, virali, parazitari, fungici detectarea Ag. Virale, parazitare, bacteriene, a toxinelor bacteriene.

RADIOIMUNOTESTAREA (RIA)
Se face prin marcare cu Iod 125, rar cu C14, H3, a unuia dintre reactanti Ac, Ag, sau a serului antiglobulinic care reactioneaza cu complexul imun format, masurandu-se radioactivitatea complexului imun format. Reactiile se pot lucra fie in faza solida fie in faza lichida.

RADIOIMUNOTESTAREA (RIA)
Aplicatii: Decelarea toxinei stafilococice, botulinice, det. polizaharidelor capsulare, dg. gripei, herpes, hepatitelor

TESTE IMUNOCHIMICE CU DETECTIE PRIN CHEMILUMINISCENTA (CLIA):

Utilizeaza pentru marcare molecule care genereaza chemiluminiscenta, cum ar fi derivati de luminol, esteri acridinici, derivati de oxalat de nitrofenil. O varianta a acestora o constituie testele imunochimice cu detectie prin electrochemiluminiscenta (ECLIA) care utilizeaza pentru marcare anumiti compusi organici (complexe de ruteniu, osmiu, etc.) care genereaza lumina electrochimic.