Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Sterilizarea si dezinfectia
1. GENERALITATI
1
Dezinfectia se refera n general la distrugerea tintita a potentialului infectios n scopul de a
mpiedica raspndirea microbilor dintr-un anumit focar de infectie, rezultatul nefiind ntotdeauna
omorrea tuturor formelor microbiene, mai ales a endosporilor. Dezinfectantele sunt substante
puternic bactericide, cel mai des toxice pentru organismul uman. Dezinfectia se aplica acolo
unde sterilizarea nu se poate efectua: mobilier, asternuturi de pat, bazine de not, ncaperi etc.
Metodele de dezinfectie sunt:
dezinfectia prin caldura umeda si consta in fierbere si pasteurizare
dezinfectia chimica.
Antisepsia consta n aplicarea unor substante bactericide sau bacteriostatice n scopul de a
omor sau inhiba dezvoltarea florei patogene la nivelul tegumentelor, mucoaselor, plagilor.
Asepsia cuprinde toate masurile care mpiedica contaminarea cu agenti infectiosi a unei
plagi, a uniu mediu.
Cinetica reactiei bactericide prin agenti fizici si chimici decurge ca o reactie de ordinul nti,
ceea ce nseamna ca bacteriile supuse oricirei actiuni bactericide nu vor muri toate n acelasi
timp.
Criteriul fundamental de apreciere a actiunii bactericide a unei substante este pierderea
capacitatii microorganismului de a se nmulti atunci cnd este nsamntat ntr-un mediu
favorabil. Testele de viabilitate sunt foarte importante n prepararea vaccinurilor, de pilda, a caror
sterilizare se face prin metode blnde pentru a nu modifica imunogenitatea microbilor. Astfel,
exista posibitatea supravietuirii unui numar mic de bacterii care dupa ncetarea noxei se vor
nmulti din nou.
Conservarea reprezinta prevenirea alterarii prin agenti microbieni ai unor produse
degradabile cum sunt alimentele sau medicamentele.
Microorganismele sunt distruse la temperaturi ridicate ntr-un timp care depinde de mai
multi factori:
temperatura, care este invers proprotionala cu timpul necesar expunerii bacteriilor,
numarul microorganismelor si al sporilor, elemente ce afecteaza rapiditatea sterilizarii,
specia si proprietatea de a sporula a microorganismelor. Sensiblitatea si supravietuirea la
caldura variaza la diferitele tulpini din cadrul aceleiasi specii,
materialul n care este cuprins microorgansimul. Un continut ridicat de substante proteice,
zaharuri, lipide, amidon, acizii nucleici sau uleiuri protejeaza sporii si formele vegetative
de actiunea caldurii. Prezenta dezinfectantilor are efect sinergic cu cel al temperaturii
ridicate,
pH-ul. Rezistenta maxima a sporilor la caldura se situeaza la un pH de 7 si scade o data cu
cresterea aciditatii sau alcalinitatii,
conditiile n care are loc sporularea. Se pare ca sporii formati n habitatul natural al
microbilor sunt mai rezistenti la caldura dect cei obtinuti pe mediile de cultura.
2
Sensibilitatea microorganismelor la caldura se poate exprima prin:
punctul termic letal, care se defineste ca cea mai joasa temperatura care distruge bacteriile
dintr-o cultura cu densitate data n 10 minute. Pentru E.coli valoarea se situeaza la 55C,
pentru bacilul tuberculos la 60C, iar pentru majoritatea sporilor la 120C;
timpul termic letal, care se defineste ca timpul minim n care are loc distrugerea bacteriilor
la o temperatura data.
Data fiind sensibilitatea diferita a tulpinilor din cadrul unei specii se prefera ca index pentru
timpul n care sunt distruse bacteriile timpul zecimal de reducere, sau valoarea D10, care este
timpul minim exprimat n minute care reduce viabilitatea culturii bacteriene cu 90% la o
temperatura data n conditii standard.
Caldura umeda este mai eficienta dect caldura uscata, distrugnd bacteriile la o
temperatura mai scazuta si timp mai scurt. Formele vegetative a majoritatii bacteriilor, fungilor si
virusurilor animale sunt omorte de caldura umeda n 10 minute la temperaturi cuprinse ntre
3
50oC (Neisseria gonorrhoeae) si 65oC (Staphylococcus aureus). O susceptibilitate deosebita fata
de caldura o prezinta Treponema pallidum, care este distrusa n 10 minute la 43 oC. Rezistenta
maxima la caldura umeda o are, nsa, Bacillus stearothermophylus, a carui forma vegetativa se
poate multiplica la 80oC. O parte din virusurile animale au o rezistenta crescuta fata de caldura
umeda, ca, de pilda, virusul poliomielitic care este inactivat la 60 oC dupa 30 de minute, si
virusul hepatitei B care daca se afla n ser rezista 10 ore la 60 o. Multi bacteriofagi au o rezistenta
mai mare la caldura umeda dect bacteria gazda, aceasta fiind distrusa la 60 oC n 15-30 minute
iar bacteriofagul la temperaturi cuprinse ntre 65-80oC.
Formele sporulate ale actinomicetelor, ciupercilor si a fungilor sunt mai rezistente dect
formele vegetative, dar nu att de rezistente ca si sporii bacterieni.
Rezistenta sporilor bacterieni variaza la diferitele specii, dar chiar si ntre tulpinile aceleiasi
specii. Astfel, majoritatea sporilor de Cl.tetani sunt distrusi prin fierbere la 100 oC n 10 minute,
dar s-au semnalat tulpini a caror spori rezista la fierbere 1-3 ore, fiind cei mai rezistenti patogeni
ce pot infecta o plaga. Rezistenta lor determina standardele minime pentru sterilizarea
chirurgicala: 10 minute la 121oC sau 30 de minute la 115oC fara a socoti timpul de ncalzire.
Unii spori de Cl.botulinum rezista la fierbere la un pH=7 pna la 8 ore iar la autoclavare 10-40 de
minute la 115oC.
Omorrea microorganismelor prin caldura umeda se produce prin coagularea
proteinelor structurale si inactivarea enzimelor, cu participarea apei. Cei mai rezistenti
spori sunt distrusi prin expunere la caldura umeda la 121o timp de 30 de minute.
fierberea este de fapt o metoda de dezinfectie deoarece ea nu distruge toate formele
sporulate. Se efectueaza la 100oC timp de 1/2 de ora si se aplica siringilor si
instrumentelor de mica chirurgie atunci cnd nu este posibila alta metoda. Fierberea se mai
foloseste n epidemii la sterilizarea apei.
pasteurizarea a fost introdusa de Pasteur pentru conservarea vinului, fiind utilizata si acum
pentru sterilizarea unor alimente lichide care nu suporta temperaturi prea ridicate (lapte,
bere, sucuri de fructe). Metoda consta n ncalzirea lichidului la 62C pentru 30 de minute
(pasterurizare joasa), 71oC 15 minute (pasteurizare medie), 80-85o 3-5 minute
(pasteurizare nalta) sau introducerea unor vapori filanti la o temperatura de 130 -150 oC
sub presiune pentru cteva secunde (ultrapasteurizare). Pasteurizarea este o metoda
eficienta deoarece bacteriile patogene care se pot dezvolta n lapte (Mycobacterium
tuberculosis, Salmonella, Streptococcus si Brucella) nu sunt bacterii sporulate, numarul lor
reducndu-se dupa pasteurizare cu 97-99%. Coxiella burnetii nu este distrusa prin
pasteurizare joasa.
tyndalizarea consta n ncalzirea produsului de sterilizat 3 zile la rnd, n baie de apa la 56-
100oC cte o ora. Temperatura se alege n functie de produsul de sterilizat. Metoda se
aplica lichidelor care nu suporta temperaturile ridicate, ca de exemplu: vaccinuri, medii de
cultura ce contin zaharuri n concentratie mare, proteine, gelatina etc. Formele vegetative
sunt distruse n prima zi, iar sporii se transforma n forme vegetative ce vor fi distruse
zilele urmatoare.
4
autoclavarea este metoda folosita pentru instrumentarul de chirurgie iar n laboratoarele de
microbiologie pentru sterilizarea mediilor de cultura si a materialului infectios.
Sterilizarea are loc ntr-o atmosfera saturata de vapori de apa la 121 oC, la o presiune
de 1 atm, timp de 20-30 de minute, n aparate speciale numite autoclave sau la 134
oC, la o presiune de 2 atm. 10-15 minute.
4. ANTISEPTICE SI DEZINFECTANTE
5
Antisepticele sunt substante cu actiune bacteriostatica, uneori bactericida, putnd fi aplicate
pe tegumente sau ca spalaturi ale unor mucoase (vaginala, uretrala, otica etc.). Aceeasi substanta
poate fi antiseptic sau dezinfectant n functie de concentratie.
6
mobilier, n bucatarii, bai si WC-uri favoriznd aparitia infectiilor nosocomiale. n general este
suficienta curatirea podelelor, a peretilor si a mobilierului cu apa calda si detergent,
dezinfectantele fiind necesare numai ariilor care se contamineaza cu produse infectate. Se
dezinfecteaza, de asemenea, ncaperile n care au fost spitalizati pacienti cu boli contagioase
(variola, TBC etc.),
dezinfectia (antisepsia) pielii minilor chirurgului nainte de efectuarea unei interventii
chirurgicale si a pielii pacientului n regiunea In care va fi operat. Microorganismele florei
flotante sunt usor ndepartate de pe piele prin spalare cu apa si sapun urmata de aplicarea unui
antiseptic. Unii microbi, nsa, ca, de pilda, Staphylococcus aureus si Staphylococcus epidermidis,
care se gasesc profund n foliculii pilosi, sunt greu de ndepartat si pot produce infectii
postoperatorii,
antiseptizarea plagilor si a mucoaselor (colire, inhalatii, instilatii nazale, otice, spalaturi
vaginale, uretrale etc.).
4.3 Sarurile
Dintre saruri, cele ale metalelor grele au efectul bactericid cel mai puternic. Astfel, ionii de
Hg si Ag sunt activi ntr-o proportie de 1/un milion. Actiunea lor bactericida se datoreaza
combinarii lor cu grupari active al enzimelor pe care le inactiveaza. Eficienta lor depinde, nsa,
mai degraba de densitatea culturii bacteriene dect de concentratia lor, deoarece ei sunt absorbiti
7
repede si preferential de bacterii, atingnd n bacterii concentratii mari n defavoarea
concentratiei din mediu.
clorura de mercur (sublimatul) 1%o se foloseste n laboratoare ca dezinfectant pentru
pipete si lame;
merthiolatul, care este un compus organic al mercurului, este folosit drept conservant
pentru seruri si vaccinuri n concentratie de 1/10.000 si ca dezinfectant n concentratie de
1/1000;
nitratul de argint n concentratie de 1% se folosea n profilaxia oftalmiei gonococice la
nou-nascut nainte de introducerea penicilinei n terapie;
colargolul, protargolul si argirolul sunt compusi de argint care se folosesc sub forma de
colire si unguente n concentratie de 1-1,5%;
compusii organici ai arsenului, bismutului, antimoniului au fost utilizati n trecut n
tratamentul sifilisului si a unor infectii produse de unele protozoare.
sulfatul de cupru este folosit cu succes ca fungicid, dar nu n medicina, ci n agricultura;
oxidul de zinc se foloseste ca antiseptic, astringent si caustic n dermatologie.
4.4. Halogenii
Halogenii cei mai utilizati ca antiseptice si dezinfectante sunt clorul si iodul, ambele cu
actiune puternic bactericida si sporicida. Mecanismul de actiune al halogenilor se bazeaza pe
proprietatile lor oxidante.
Clorul a fost introdus ca dezinfectant de O.W.Holmes la Boston n anul 1835 si de
Semmelweis la Viena n 1847 pentru a preveni transmiterea febrei puerperale prin minile
medicilor.
clorul gazos n concentratie de 2-3mg%o este folosit pentru potabilizarea apei, dar
concentratia trebuie sa fie mai mare daca apele au continut crescut de substante organice,
deoarece acestea fixeaza si inactiveaza clorul;
hipocloritul de sodiu se foloseste tot pentru dezinfectia apei, a veselei si a WC-urilor, la
curatirea suprafetelor n industria alimentara, n unitati de alimentatie publica etc;
cloramina este folosita ca dezinfectant pentru vesela, lenjerie, n concentratie de 2-3% si
ca antiseptic n concentratie de 1%;
Iodul este un oxidant puternic si se combina ireversibil cu proteinele bacteriene. Se
foloseste sub forma de:
solutie alcoolica 1-2% ca antiseptic cutanat
tinctura de iod care contine 4-5% iod si 2-5% iodura de potasiu se utilizeaza tot ca
antispetic cutanat pentru antiseptizarea pielii nainte de interventii chirurgicale. Att
solutia alcoolica ct si tinctura nu pot fi aplicate direct pe plagi deoarece au efect
distructiv asupra tesuturilor;
iodoforii contin iod complexat cu un detergent anionic au o serie de avantaje. Au o
penetrabilitate foarte buna a pielii, nu sunt iritanti deoarece iodul este eliberat treptat din
combinatie si nu pateza lenjeria. Un exemplu este betadina, un complex hidrosolubil al
iodului cu polivinilpirolidona. Preparatul poate fi folosit pentru antiseptizarea plagilor
superficiale.
8
Dezavantajul antisepticelor cu iod este alergizarea pe care o produc la unele persoane.
9
Detergentii sunt substante tensioactive sintetice. Din punct de vedere chimic, ei se mpart n
detergenti anionici ce includ alcooli sulfatati, alkilaril sulfonati etc., detergenti cationici care sunt
compusii cuaternari de amoniu n care cei 4 atomii de hidrogen sunt nlocuiti prin radicali
organici, detergenti neionici care sunt poliesteri si eteri formati din condensarea unor acizi grasi,
alcooli si fenoli si, n sfrsit, detergentii amfoteri care contin att grupari anionice ct si
cationice. Dintre detergenti importanti ca antiseptice si dezinfectante sunt:
detergentii anionici (Perlan, Dero, Alba etc.) se folosesc ca agenti de spalare a lenjeriei,
veselei, instalatiilor industriale etc., actiunea lor antibacteriana fiind moderata fata de
bacteriile gram pozitive si neglijabila fata de cele gram-negative,
detergentii cationici sunt frecvent utilizati n dezinfectie datorita combinarii proprietatilor
tensioactive cu cele antimicrobiene, fiind lipisiti n acelasi timp de toxicitate. Ei au actiune
antibacteriana, antifungica, antivirala, sunt ineficienti fata de spori si sunt inactivati de
sapunuri si substante organice. La noi se foloseste bromocetul (bromura de cetrimoniu) ca
antiseptic pentru tegumente n concentratie de 1-2%o si ca dezinfecant n concentratie de
1%. Pseudomonas aeruginosa este foarte rezistent fata de bromocet, fiind des izolat chiar de
pe dopurile sticlelor n care este pastrat acesta. Un alt compus cuaternar de amoniu este
zefirolul (clorura de benzalconiu) care se foloseste ca antiseptic n concentratie de 1/10.000-
1/40.000 si drept conservant pentru colire n proprortie de 0,01%. n concentratie de 12
poate fi pulverizat pentru dezinfectia peretilor sau a altor suprafete, nefiind toxic pentru
conjunctiva si caile respiratorii,
detergentii cationici sau compusii de tip Tego sunt derivati de dodecil-(diamino)-etilglicina.
La o concentratie de 1% sunt activi fata de o gama larga de bacterii gram-pozitive, gram-
negative si unele virusuri. Activitatea lor este nsa diminuata de prezenta substantelor
organice sau chiar de apa cu continut mare de calciu. Se poate utiliza ca antiseptic cutanat si
sub forma de sprayuri, dar este nlocuit n general prin dezinfectanti mai activi si mai ieftini.
Fenolii. Fenolul (C6H5OH) sau acidul carbolic este un bun denaturant al proteinelor
precum si un detergent. Actiunea sa bactericida presupune liza celulelor bacteriene. El se poate
folosi ca dezinfectant n concentratie de 2,5% la decontaminarea bailor, a podelelor de spital, a
plostilor etc., fiind nsa iritant. Este activ fata de majoritatea bacteriilor, inclusiv fata de bacilul
tuberculozei si spori. n cocentratie de 1%o se foloseste pentru conservarea vaccinurilor.
Activitatea antibacteriana a fenolului creste prin halogenarea sau alkilarea inelului, ceea ce
intensifica polaritatea gruparii fenolice (-OH), restul moleculei devenind mai hidrofoba.
Compusul halogenat este mai tensioactiv si puterea bactericida creste de 100 de ori. Spre
deosebire de detergentii cationici, actiunea fenolilor este intensificata de sapunuri care le
faciliteaza patrunderea. Lungimea catenei fenolului creste pna la un punct activitatea
antibacteriana, pentru a o scadea la o lungime ce depaseste o anumita limita.
mixtura de tricresol (ortho, meta, para-metilfenol) si sapun este larg utlizata pentru
dezinfectia materialelor rezultate din laboratorul de bacteriologie, actiunea nefiind diminuata de
prezenta materiilor organice. Are un miros neplacut si patrunzator.
lizolul este un amestec de tricrezol si un sapun de K. Se utilizeaza ca dezinfectant n
medicina veterinara, fiind activ asupra bacilului lui Koch n concentratie de 3.
difenolii halogenati, ca, de pilda, hexaclorofenul este bacteriostatic n dilutii foarte mari
(1/2.500.000) si este mai putin inactivat de sapunuri dect detergentii anionici. Hexoclorofenul
10
nu are mirosul patrunzator al celorlalti fenoli si nu este prea volatil. Este larg utilizat pentru
dezinfectia pielii n combinatie cu un detergent, sau n sapunurile deodorante care mpiedica
descompunerea sudorii sub actiunea bacteriilor. n cazurile n care este posibila absorbtia lui pe
cale cutanata din pudre (de exemplu prin pielea sugarilor imaturi), pot apare semne toxice
sistemice.
esterii alkil ai acidului p-hidroxibenzoic sunt folositi n conservarea alimentelor si a
medicamentelor. Ei actioneaza pe bacterii ca si fenolii alkilati, dar sunt netoxici cnd patrund pe
cale orala deoarece sunt rapid hidrolizati n p-hidroxibenzoat, netoxic.
uleiurile esentiale care au fost utilizate nca din antichitate ca antiseptice si conservante
contin o mare varietate de compusi fenolici cum sunt tymolul (5-metil-2-isopropilfenol) si
eugenolul (4-alil-2-methoxifenol). Ultimul este folosit n stomatologie.
11
4.10. Colorantii
Colorantii trifenilmetanici, cum sunt cristal-violetul, metil-violetul si verdele briliant, sunt
substante puternic bacteriostatice, slab bactericide active mai ales pe bacteriile gram-pozitive.
Violetul de gentiana se poate folosi ca antiseptic n concentratie de 0,2%.
Colorantii tiaznici, cum este albastrul de metilen, se folosesc ca antiseptici externi n
concentrnatii de 0,2%-0,5%. Albastrul de metilen poate fi administrat ca antiseptic intern in
infectiile urinare (urodezinfectante).
Dintre colorantii acridinici, cel mai utilizat este rivanolul (lactat de metacridina) n concentratii
de 1-2%, la antiseptizarea plagilor chirurgicale si traumatice.
12