Sunteți pe pagina 1din 30

MINISTERUL SNTII AL REPUBLICII MOLDOVA

IP UNIVERSITATEA DE STAT DE MEDICIN I FARMACIE


NICOLAE TESTEMIANU DIN REPUBLICA MOLDOVA

Cu titlu de manuscris
C.Z.U.: 615.281 : 616.095

LOZAN-TRU CAROLINA

EFECTE ANTIMICROBIENE ALE UNOR SUBSTANE CHIMICE


DIN PRODUSE AUTOHTONE

313.02 MICROBIOLOGIE, VIRUSOLOGIE MEDICAL

Autoreferatul tezei de doctor n tiine medicale

CHIINU, 2016
Teza a fost elaborat la Catedra de microbiologie, virusologie i imunologie a Universitii de
Stat de Medicin i Farmacie Nicolae Testemianu i n laboratorul microbiologic al Centrului de
Epidemiologie a Bolilor Extrem de Contagioase i Securitate Biologic a Centrului Naional de
Sntate Public.

Conductor tiinific:
Rudic Valeriu doctor habilitat n tiine biologice, profesor universitar, academician,
Om Emerit al R. Moldova
Consultant tiinific:
Gulea Aurelian doctor habilitat n tiine chimice, profesor universitar, academician, Om
Emerit al R. Moldova

Refereni oficiali:
Gudumac Valentin doctor habilitat n tiine medicale, profesor universitar
Burduniuc Olga doctor n tiine medicale, confereniar cercettor

Componena Consiliului tiinific specializat:


Spnu Constantin preedinte, doctor habilitat n tiine medicale, profesor universitar
Vorojbit Valentina secretar tiinific, doctor n tiine medicale, confereniar universitar
Tagadiuc Olga doctor habilitat n tiine medicale, profesor universitar
Ghind Serghei doctor habilitat n tiine medicale, profesor cercettor
Balan Greta doctor n tiine medicale, confereniar universitar
Cojocaru Radu doctor n tiine medicale, confereniar cercettor

Susinerea va avea loc la 19 ianuarie 2017, ora 14oo


n edina Consiliului tiinific specializat D 54. 313.02 - 01 din cadrul Institutului de
Ftiziopneumologie Chiril Draganiuc, or. Chiinu, str. C. Vrnav 13.

Teza de doctor i autoreferatul pot fi consultate la biblioteca IP Universitatea de Stat de


Medicin i Farmacie N. Testemianu i la pagina web a C.N.A.A. (www.cnaa.md).
Autoreferatul a fost expediat la 15 decembrie 2016.

Secretar tiinific al Consiliului tiinific specializat:


Valentina Vorojbit doctor n tiine medicale, confereniar universitar

Conductor tiinific:
Rudic Valeriu doctor habilitat n tiine biologice, profesor
universitar, academician, Om Emerit al R. Moldova

Consultant tiinific:
Gulea Aurelian doctor habilitat n tiine chimice, profesor universitar,
academician, Om Emerit al R. Moldova

Autor
LOZAN-TRU Carolina
Lozan-Tru Carolina, 2016

2
REPERELE CONCEPTUALE ALE CERCETRII
Actualitatea temei. n prezent antibioticele constituie elementele-cheie ale me-
dicinei moderne, fiind indispensabile n tratamentul maladiilor bacteriene. Efectuarea
chimioterapiei, transplantului de organe, interveniilor chirurgicale, tratarea i ngri-
jirea arilor i multe altele sunt imposibile fr administrarea adecvat de preparate
antibacteriene [6, 14]. n perioada dintre anii 2000 i 2010 consumul total mondial de
antibiotice a crescut cu 30% de la 50 la 70 bilioane Uniti Standard (US).
Penicilinele i cefalosporinele au constituit aproximativ 60 la sut din consumul total
de antibiotice n 2010. Utilizarea lor s-a majorat cu 41 la sut n anii 2000-2010. De
asemenea, a fost nregistrat o cretere a utilizrii antibioticelor n ultim instan:
cu 40% a crescut consumul carbapenemelor i cu 13% cel al polimixinelor. rile
cu cel mai mare consum de antibiotice n 2010 au fost: India, cu 13 miliarde US;
China, cu 10 miliarde US, i Statele Unite ale Americii, cu 7 miliarde US. Cel mai
mare consum de antibiotice pe cap de locuitor a fost nregistrat n SUA 22 US,
urmat de India, cu 11 US, i de China, cu 7 US [26]. O consecin direct a creterii
nivelului de utilizare a antibioticelor este rezistena microorganismelor patogene la
antibiotice. n Europa, aproximativ 25.000 de decese sunt atribuite infeciilor
rezistente la antibiotice, iar prejudiciul se estimeaz la 1,5 miliarde anual [10].
Printre cele mai periculoase pentru om microorganisme rezistente se numr MRSA
Staphylococcus aureus rezistent la meticilin i tulpinile multirezistente de
Escherichia coli. n 2013, n 17 din 22 de ri europene 85% dintre tulpinile izolate
de E. coli au fost de tip ESBL pozitive (productori de beta-lactamaze cu spectru
extins) [9]. n infeciile urinare, tulpinile de Enterobacteriaceae izolate manifest n
26-50% din cazuri rezisten fa de cefalosporinele de generaia a treia i a patra
[18]. Tulpinile rezistente de Klebsiella pneumoniae ating pn la 47% din numrul
total de tulpini izolate clinic. Numai n anul 2013, din cauza pneumoniei la nivel
mondial, au fost nregistrate 935 mii de decese n rndurile copiilor de pn la 5 ani
[13, 14]. n pofida numeroaselor strategii i activiti aplicate la nivel naional i
internaional, situaia privind rspndirea accelerat a microorganismelor patogene cu
rezisten multipl nu se amelioreaz. Rolul primordial n rezolvarea acestor
probleme majore aparine sectorului cercetare-dezvoltare. Identificarea ori elaborarea
de substane antimicrobiene noi este una dintre direciile prioritare n acest sens.
Situaia n domeniul de cercetare. ncepnd cu anul 2000 i pn la finele
anului 2012, Agenia European pentru Medicamente i Administraia American
pentru Alimente i Medicamente au aprobat mai multe antibiotice noi, dintre care
numai patru, i anume linezolidul, daptomicina, retapamulina i fidaxomicina, sunt
antibiotice principial noi, care sunt totui eficiente doar mpotriva bacteriilor Gram-
pozitive. Celelalte substane sunt modificri ale compuilor utilizai anterior. Cu
excepia carbapenemelor, care au fost lansate n 1985, toate celelalte antibiotice
aprobate pentru aplicaii clinice, ntre anii 1960 i 2000, au fost derivai sintetici ai
compuilor existeni, elaborai anterior [6]. Patru clase de substane cefalosporinele,
penicilinele, chinolonele i macrolidele, au fost folosite ca baz structural pentru
73% dintre antibioticele aprobate ntre anii 1981 i 2005. ntre anii 1987 i 2011 nu
au fost raportate descoperiri de succes ale unor clase noi de antibiotice. n 2010
numai dou substane principial noi au fost promovate pn la testele clinice, dar nici
3
una nu le-a trecut cu succes [12, 24]. Astfel, este necesar o resetare urgent a
arsenalului de ageni antimicrobieni activi [5, 25]. n prezent, att sinteza chimic, ct
i obinerea de substane naturale sunt principalele ci de a obine noi compui cu
proprieti antimicrobiene [7].
Compuii chimici cu efect antimicrobian sintetizai n centrele tiinifice posed
unele avantaje n vederea studiului efectelor lor biologice, cum ar fi posibilitatea
dozrii exacte, facilitatea n aprecierea proceselor de metabolizare, posibilitatea de
obinere a cantitilor necesare prin respectarea strict a unor operaiuni tehnologice
stabilite, posibilitatea dirijrii structurii acestora, i deci a proprietilor pe care aceste
substane le manifest i a efectelor biologice scontate [21]. Compuii chimici cu
efecte antimicrobiene se caracterizeaz prin structur i proprieti diverse, iar pre-
zena metalelor cu valen variabil n componena lor este una dintre condiiile
realizrii efectului antimicrobian n vitro i in vivo. Datorit capacitii nalte de
chelare i potenialului redox pozitiv, ionul de cupru (Cu2+ ) este biologic activ i
particip n multe procese din organism. Complecii de cupru sunt printre cele mai
puternice substane antimicrobiene [15 -17, 20, 22].
Problema de cercetare care reiese din analiza situaiei n domeniu const n
necesitatea evidenierii proprietilor antimicrobiene ale unor compui chimici noi,
precum i a mecanismelor prin care acestia acioneaz.
Scopul tezei de doctorat a constat n evaluarea proprietilor antimicrobiene ale
compuilor chimici noi i n elucidarea mecanismelor de aciune a acestora.
Obiectivele lucrrii au fost urmtoarele:
1. Evidenierea aciunii antimicrobiene a compuilor coordinativi ai cuprului (II) cu
diferii liganzi asupra tulpinilor de referin ale microorganismelor patogene.
2. Determinarea aciunii antimicrobiene ale propenonelor aromatice cu grupe
tioamidice sau cu izotiocian asupra tulpinilor de referin a microorganismelor
patogene.
3. Compararea aciunii compuilor chimici noi cu cea a antisepticului de referin.
4. Evaluarea particularitilor de aciune antimicrobian a compuilor chimici noi
asupra tulpinilor izolate din coproculturi.
5. Stabilirea mecanismelor de influen a compuilor chimici noi evideniai asupra
microorganismelor patogene.
Metodologia cercetrii tiinifice. Pentru realizarea lucrrii au fost utilizate dou
categorii de metode de cercetare: metode clasice ale microbiologiei medicale i metode
de determinare a statutului redox al culturii microbiene. La prima categorie se refer
determinarea concentraiei minime de inhibiie i concentraiei minime bactericide ale
compuilor coordinativi. La cea de-a doua categorie se refer metodele de determinare a
capacitii antioxidante totale, a activitii enzimelor antioxidante, a peroxidului de
hidrogen i a nivelului de peroxidare a lipidelor. Calculul statistic a fost realizat prin
aplicarea instrumentelor statisticii descriptive i infereniale [19], iar n cazul determi-
nrii activitii antimicrobiene a antibioticelor prin metoda difuziunii n agar am aplicat
instrumentul de calcul recomandat pentru acest tip de experiene [27]. Obiectele de
studiu i metodologia utilizat au permis de a evidenia corect i la nivel metodologic
adecvat activitatea antimicrobian a compuilor chimici noi.

4
Noutatea i originalitatea tiinific. A fost testat activitatea antimicrobian a
unor noi compui coordinativi ai cuprului cu diferii liganzi i comparat cu
activitatea antisepticului de referin, ceea ce face posibil aprecierea activitii
compuilor testai fa de cea a remediilor utilizate. Au fost estimai parametrii
statutului antioxidant al culturilor de microorganisme patogene la aciunea compuilor
noi testai, ceea ce permite aprecierea nivelului stresului oxidativ.
Problema tiinific important soluionat n lucrare const n elucidarea
efectelor unor noi compui chimici din produse autohtone asupra tulpinilor de
microorganisme patogene, ceea ce a contribuit la evidenierea proprietilor antimic-
robiene ale substanelor noi, fapt ce a permis stabilirea mecanismelor de aciune a lor.
Semnificaia teoretic. Au fost acumulate date noi despre aciunea unor
compui noi fa de tulpinile de referin i tulpinile clinice i despre modificrile
statutului antioxidant al microorganismelor patogene sub aciunea compuilor chimici
noi. Au fost evideniate corelaiile negative stabile dintre capacitatea antioxidant
total i coninutul dialdehidei malonice, ceea ce permite aplicarea acestor parametri
n calitate de indicatori de monitorizare a activitii antibacteriene.
Valoarea aplicativ a lucrrii. Au fost evideniai compui noi cu activitate
antibacterian nalt fa de Staphylococcus aureus i Bacillus cereus de perspectiv
pentru testri in vivo. A fost propus o metod original de determinare a biomasei
culturilor de microorganisme.
Rezultatele tiinifice principale naintate spre susinere.
1. Compuii coordinativi ai Cu(II) cu diferii liganzi manifest activitate
antibacterian mai nalt fa de microorganismele Gram-pozitive (Staphylo-
coccus aureus ATCC 25923, Bacillus cereus 8035) dect fa de cele
Gram-negative.
2. Compuii coordinativi ai Cu(II) cu 4-(dimetilfenil)tiosemicarbazona 2-formilpi-
ridinei au activitate antibacterian nalt fa de microorganismele Gram-
pozitive Staphylococcus aureus ATCC 25923, Bacillus cereus 8035, dar
i fa de tulpina de referin Gram-negativ Shigella sonnei ATCC 25931.
3. Compuii di(-S)-bis{cloro-[1-(piridin-2-il) etanon-4-metiltiosemicarbazonato
(1-)]cupru} i di(-S)-bis{cloro-[1-piridin-2-il-4-etiltiosemicarbazono-(1-)] cupru} po-
sed activitate antibacterian nalt fa de tulpinile de Staphylococcus aureus i
Escherichia coli izolate clinic.
4. Compuii cu activitate antibacterian nalt cauzeaz n celulele microorgani-
smelor patogene un stres oxidativ pronunat.
5. Activitatea antibacterian a compuilor noi testai este asociat cu o scdere
semnificativ a activitii superoxiddismutazei i catalazei.
Implementarea rezultatelor tiinifice. Rezultatele studiului au fost imple-
mentate la Catedra de microbiologie, virusologie i imunologie USMF Nicolae
Testemianuca material didactic pentru instruirea universitar. Metoda de deter-
minare a biomasei bacteriene propus n tez a fost implementat n cadrul Coleciei
Naionale de Microorganisme nepatogene a Institutului de Microbiologie i
Biotehnologie (Act nr.74 din 28 mai 2015).
Aprobarea rezultatelor tiinifice. Materialele expuse n teza de doctorat au fost
comunicate la: Cea de-a XXXI-a Conferin romn de chimie, 2010, Rmnicu
5
Vlcea, Romnia; Primul colocviu franco-romn de chimie medicinal, 2010, Iasi,
Romnia; Conferina tiinifico-practic Substane bioactive: probleme funda-
mentale i aplicative de obinere i aplicare, 2011, Novii Svet, Ucraina; Conferina
internaional Ciugaev Metode fizico-chimice n chimia compuilor coordinativi,
2011, Suzdali, Rusia; Conferina tiinific internaional Biotehnologia microbio-
logic - domeniu scientointensiv al tiinei contemporane, 2011, Chiinu, Moldova;
Cea de-a XVII-a Conferin Internaional Metode fizice n chimia coordinativ i
supramolecular, 2012, Chiinu, Moldova; Conferina Internaional dedicat celei
de-a 55-a aniversri de la fondarea Institutului de Chimie al Academiei de tiine a
Moldovei, 2014, Chiinu, Moldova; Cea de-a doua Conferin internaional n
domeniul Biotehnologiei microbiene 2014, Chiinu, Moldova.
Rezultatele tezei au fost discutate i aprobate n cadrul edinei Catedrei de
microbiologie, virusologie i imunologie USMF Nicolae Testemianu din 15 iunie,
2016 i Seminarului tiinific de profil 313.02 Microbiologie medical din cadrul
Institutului de Ftiziopneumologie Chiril Draganiuc din 06 iulie 2016.
Publicaiile la tema tezei. Rezultatele tiinifice expuse n aceast lucrare au fost
reflectate n 26 de publicaii tiinifice: 8 articole n reviste recenzate (3 n reviste
cu factor de impact; 3 n monoautorat), 14 rezumate ale comunicrilor tiinifice,
4 brevete de invenie.
Volumul i structura tezei. Teza const din 4 capitole; are un volum de baz de
127 de pagini, conine 26 de tabele i 21 de figuri. Lista surselor bibliografice citate
include 240 de titluri.
Cuvinte-cheie: activitate antimicrobian, compui coordinativi, cupru, Staphy-
lococcus aureus, Escherichia coli, Bacillus cereus, Shigella sonnei, Salmonella
enterica.

6
CONINUTUL TEZEI
1. COMPUI ANTIMICROBIENI
Capitolul conine o analiz ampl a situaiei n domeniu n baza unui studiu biblio-
grafic profund al publicaiilor relevante pentru tema dat n ntreaga lume. Capitolul este
structurat n 3 subcapitole. Primul subcapitol este consacrat elucidrii mecanismelor de
aciune a antibioticelor clasice din aspectul nivelului actual al cunoaterii n acest
domeniu. Sunt scoase n eviden att mecanismele particulare ale diferitor tipuri de
substane cu efect antimicrobian, ct i mecanismele generalizate, care sunt nregistrate
n toate tipurile de celule bacteriene indiferent de tipul de compus antimicrobian aplicat.
Sunt aduse explicaii cu referire la diferite tipuri de clasificare a substanelor cu efect
antimicrobian. Astfel, sunt delimitate noiunea de compui bacteriostatici i bactericizi i
importana aplicrii acestui tip de clasificare n terapiile combinate cu scopul evitrii
antagonismelor puternice care pot surveni ntre agenii terapeutici utilizai. n acelai
timp, se atrage atenia asupra caracterului relativ al acestui mod de clasificare n funcie
de natura microorganismului patogen i dozele administrate. Este adus drept exemplu i
sistemul de clasificare a antibioticelor n antibiotice cu spectru larg de aciune i cu
spectru ngust de aciune i explicat necesitatea dezvoltrii cercetrilor pentru ambele
tipuri. Cea mai mare atenie a fost atras asupra sistemului de clasificare a antibioticelor
n funcie de mecanismul lor de aciune. n aceast parte a capitolului sunt sistematizate
modificrile produse de fiecare tip de antibiotic n celulele bacteriene, de asemenea, fiind
generalizate datele de ultim or de biologie molecular i genetic microbian cu
referire la complexele de gene, sistemele de operare specifice, care sunt implicate n
realizarea fiecrui tip de aciune, precum i n corelarea acestora cu genele i sistemele
de operare responsabile de rezistena microorganismelor la acest tip de influen.
n subcapitolul al doilea sunt analizate principalele grupuri de antibiotice de origine
natural. Este analizat gama bogat de componente cu efect antimicrobian care au fost
depistate n celulele microbiene. Se atrage atenia asupra diversitii structurale i
funcionale a antibioticelor produse de microorganisme i se prezint listele de specii de
microorganisme patogene asupra crora substanele efectuate au influen pronunat.
Este subliniat diversitatea enorm a compuilor microbieni de origine vegetal i sunt
reflectate rezultatele cercetrilor, care elucideaz mecanismele de aciune antimicrobian
a fenolilor, alcaloizilor, compuilor organici sulfurai, terpenoidelor. Se pune accent i pe
efectele pe care le au combinaiile de preparate vegetale i antibiotice clasice asupra
diferitor culturi de microorganisme patogene. Dintre antibioticele de origine animal
sunt descrise i analizate mai detaliat peptidele antimicrobiene.
Cel de-al treilea subcapitol este dedicat compuilor antimicrobieni sintetici. Sunt
artate avantajele i dezavantajele lor comparativ cu antibioticele naturale. n vizorul
acestei analize au fost dou grupuri principale polimerii antimicrobieni i compuii
coordinativi. Este prezentat o sintez a multiplelor rezultate obinute la testarea
diferitor tipuri de compui coordinativi noi i o ncercare de a prezenta principalele
cerine fa de un compus coordinativ nou ca acesta s poat fi considerat de
perspectiv pentru utilizare n calitate de produs antimicrobian. Sunt aduse argumente
n favoarea selectrii cuprului n calitate de metal component al compuilor noi cu
efect antibacterian. Capitolul se finalizeaz cu formularea problemei de cercetare,
direcilor de rezolvare a ei, scopului i sarcinilor prezentei lucrri.
7
2. CARACTERISTICA OBIECTELOR DE STUDIU I METODELOR
APLICATE N CERCETARE
n calitate de obiecte de studiu ,,in vitro n capitolul 2 au fost incluse 5 tulpini
de referin, care provin din dou colecii de culturi recunoscute n calitate de furni-
zori de material biologic de calitate pentru cercetri de performan: American Type
Culture Collection (ATCC, USA) i Colecia de Stat a Microorganismelor Patogene
a Institutului de Stat de cercetri tiinifice n domeniul standardizrii i controlului
preparatelor medicale biologice L. A. Tarasevici (, Federaia Rus).
n calitate de substane cu efecte antimicrobiene au fost testai compuii
coordinativi ai Cu (II); Co(II), Zn(II) i propenonele aromatice sintetizate la Catedra
de chimie anorganic (Universitatea de Stat din Moldova). Pentru a facilita analiza
rezultatelor obinute, compuii chimici noi au fost grupai n 4 clase, pentru fiecare
fiind prezentat informaia despre compoziia i geometria compuilor respectivi.
Deoarece la etapa de planificare a cercetrii doctorale miza a fost pus pe particu-
laritile cuprului ca metal cu proprieti antibacteriene, pentru compuii ce conin
cupru este prezentat i masa relativ a acestui metal n componena compusului
final.
Capitolul include, de asemenea, descrierea a dou categorii de metode de
cercetare: metode clasice ale microbiologiei medicale i metode de determinare a
statutului redox al culturii microbiene. La prima categorie se refer determinarea
concentraiei minime de inhibiie i concentraiei minime bactericide ale compuilor
chimici noi. La cea de-a doua categorie se refer metodele de determinare a
capacitii antioxidante totale, a activitii enzimelor antioxidante, a peroxidului de
hidrogen i a nivelului de peroxidare a lipidelor.
n acest capitol merit a fi evideniate dou abordri metodologice originale.
Astfel, pentru a compara activitatea compuilor noi cu cea a antisepticului de
referin am utilizat metodologia de determinare a activitii antimicrobiene a
antibioticelor prin metoda difuziunii n agar, n care n calitate de antiseptic standard
a fost aplicat furacilina, iar n calitate de antibiotic compuii chimici noi. De
asemenea, a fost implementat o metod de determinare a biomasei microbiene n
baza parametrilor dimensionali ai celulelor. Parametrii biochimici au fost cuantificai
prin aplicarea metodelor cunoscute. Calculul statistic a fost realizat prin aplicarea
instrumentelor statisticii descriptive i infereniale, iar n cazul determinrii activitii
antimicrobiene a antibioticelor prin metoda difuziunii n agar am aplicat instrumentul
de calcul recomandat pentru acest tip de experiene. Obiectele de studiu i
metodologia utilizat au permis de a evidenia corect i la nivel metodologic adecvat
activitatea antimicrobian a compuilor chimici noi.
Designul studiului realizat este prezentat n Figura 1.

8
Fig. 1. Designul studiului.

3. ACTIVITATEA ANTIBACTERIAN A UNOR COMPUI CHIMICI NOI


La prima etap au fost determinate concentraiile minim inhibitoare (CMI) i
minim bactericid (CMB) ale fiecrui dintre cei 220 de compui chimici noi. n lucrare
sunt incluse rezultatele pentru 37 dintre acetia, care au manifestat activitate
antibacterian mai pronunat sau la nivelul activitii furacilinei. Rezultate promitoare
au fost obinute pentru compuii din primele 3 grupuri. Activitate antibacterian nalt au
manifestat compuii coordinativi ai Cu(II) cu 4-feniltiosemicarbazona 2-formilpiridinei
i sulfanilamidele i compuii coordinativi ai Cu(II) cu 4-(dimetilfenil) tiosemicarba-
zonele 2-formilpiridinei. Propenonele aromatice au demonstrat activitate antibacterian
redus comparativ cu furacilina. Ca rezultat al primei etape de lucru a fost efectuat
selectarea compuilor care s-au afirmat ca substane cu efect antimicrobian pronunat.
Activitatea antibacterian a compuilor selectai a fost determinat prin aplicarea
metodei de difuziune n agar n cadrul experienei randomizate n trei concentraii i a
celei n cinci concentraii cu calculul ulterior n conformitate cu metodologia
recomandat. Tulpinile de referin Gram pozitive au fost mai vulnerabile fa de
aciunea noilor compui. Astfel, fa de Staphylococcus aureus ATCC 25923 au
manifestat activitate antimicrobian nalt 12 compui, care au fost de 3-3500 ori mai
activi ca furacilina. Rezultatele pot fi urmrite n Tabelul 1.
Pentru Bacillus cereus 8035 au fost identificai 13 compui chimici noi cu
activitate care o depete pe cea a furacilinei de 5,3-495 ori (Tabelul 2). Dintre culturile
de referin Gram-negativ cele mai bune rezultate au fost obinute pentru Shigella sonnei
ATCC 25931. 11 compui au manifestat activitate antibacterian de 2,5-216 ori mai nalt
ca cea a furacilinei. Fa de Escherichia coli ATCC 25922 au manifestat activitate antibac-
terian 6 compui, iar fa de Salmonella enterica (Salmonella Abony 03/03y)

9
doar 2 compui. Fa de ambele culturi compuii selectai au avut o activitate antibac-
terian de 2,1-6,1 ori mai mare ca cea a furacilinei n condiii identice (Tabelul 3).

Tabelul 1. Activitatea biologic a compuilor chimici noi selectai fa de tulpina de


referin Staphylococcus aureus ATCC 25923 calculat n baza rezultatelor metodei
de difuziune n agar*
Activitatea bio- Echivalent de furacilin egal cu activitatea 1 g compus/ml
Compusul logic observat, Conform curbei
Experien randomizat
CMI, g/ml standard
C38H38Cu 2N14O10S4 0,29 6,24-9,13 7,55-8,9
C42H42Cu2N14O12S4 0,07 28,15-42,46 30,57-36,29
C46H46Cu2N18O10S6 0,14 10,02-19,21 15,50-17,93
C46H42Cu2N18O10S4 0,018 92,58-152,80 133,33-146,67
C15H19ClCuN4O2S 0,009 220,45-283,30 250,12-270,34
C15H19CuN5O5S 0,58 3,03-5,12 3,86-4,21
C15H17ClCuN4OS 0,018 118,40-141,12 122,22-137,78
C15H19CuN5O5S 0,018 124,20-152,34 120,55-139,44
C15H19CuN5O5S 0,009 235,35-290,67 241,11-278,89
C15H19CuN5O5S 0,009 226,56-302,34 239,48-286,64
C18H22Cl2Cu2N8S2 0,00056 3502,20-4836,52 3803,45-4553,57
C9H11ClCuN4S 0,03 62,47-94,85 75,00-81,00
*Not: n cazul calculului efectuat pentru experiena randomizat n tabel au fost trecute rezultatele,
pentru care deviaia a fost apreciat ca semnificativ (respectarea condiiilor: valoarea Fcalculat pentru
regresie>7,13 (Fcrt la P=99 %); valorile Fcalculat pentru paralelism, caracter ptratic i diferena
ptraticitii <4,02 (Fcrt la P=95%).

Tabelul 2. Activitatea biologic a compuilor chimici noi selectai fa de tulpina de


referin Bacillus cereus 8035 calculat n baza rezultatelor testului
de difuziune n agar*
Activitatea Echivalent de furacilin egal cu activitatea
Compusul biologic, CMI, 1 g compus/ml
g/ml Experien randomizat Conform curbei standard
C38H38Cu 2N14O10S4 0,009 395,5-602,15 467,78-572,22
C42H42Cu2N14O12S4 0,29 11,76-19,24 14,38-17,90
C46H46Cu2N18O10S6 0,58 5,58-10,05 7,43-8,31
C46H42Cu2N18O10S4 0,009 480,33-539,47 478,89-561,11
C15H19ClCuN4O2S 0,009 495,48-526,39 440,00-600,00
C15H19CuN5O5S 0,58 5,33-9,48 6,82-9,31
C15H17ClCuN4OS 0,009 420,59-649,30 479,77-590,22
C15H19CuN5O5S 0,03 112,47-185,32 138,00-174,00
C15H19CuN5O5S 0,009 398,15-686,12 430,00-610,00
C15H19CuN5O5S 0,018 220,40-305,82 235,00-285,00
C18H22Cl2Cu2N8S2 0,14 21,45-44,24 29,28-37,57
C9H11ClCuN4S 0,14 22,30-41,52 28,43-38,43
C10H13CuN5O4S2 0,03 120,58-201,43 138,33-173,67
*Not: Vezi nota la Tabelul 1.

10
Tabelul 3. Activitatea biologic a compuilor chimici noi selectai fa de tulpinile de
referin Gram-negative calculat n baza rezultatelor obinute la aplicarea metodei
de difuziune n agar
Activitatea Echivalent de furacilin egal cu activitatea
Compusul biologic, CMI, 1 g compus/ml
g/ml Experien randomizat Conform curbei standard
Shigella sonnei ATCC 25931
C38H38Cu 2N14O10S4 0,58 2,45-5,11 3,86-4,21
C42H42Cu2N14O12S4 0,29 5,87-11,35 7,59-8,55
C44H40Cl2Cu2N14O4S6 0,29 6,22-9,76 7,66-8,38
C15H19ClCuN4O2S 0,07 24,43-41,38 30,57-36,29
C15H19CuN5O5S 0,58 2,44-6,02 3,81-4,26
C15H17ClCuN4OS 0,018 101,20-155,32 117,78-142,22
C15H19CuN5O5S 0,07 24,16-38,19 29,40-35,12
C15H19CuN5O5S 0,009 216,76-304, 87 235,56-284,44
C15H19CuN5O5S 0,009 205,65-290,56 241,11-278,89
C18H22Cl2Cu2N8S2 0,58 1,94-5,78 3,76-4,04
C9H11ClCuN4S 1,17 1,22-4,18 1,97-2,07
Escherichia coli ATCC 25922
C38H38Cu 2N14O10S4 1,17 1,91- 2,10 2,05- 2,38
C44H40Cl2Cu2N14O4S6 0,29 6,05-12,10 7,10-9,03
C46H46Cu2N18O10S6 0,58 2,99-6,44 3,72-4,21
C46H42Cu2N18O10S4 0,58 2,64-6,34 3,61-4,19
C18H22Cl2Cu2N8S2 0,58 3,01-6,58 3,64-4,43
C9H11ClCuN4S 1,17 1,84-2,26 2,10-2,42
Salmonella enterica (S. Abony 03/03y)
C38H38Cu 2N14O10S4 1, 17 2,22-6,05 3,72-4,27
C44H40Cl2Cu2N14O4S6 0,58 4,24-12,34 6,95-9,19

Trei dintre compuii selectai la primele etape, activi fa de tulpinile de


referin au fost testai pe tulpinile de Staphylococcus aureus izolate din coprocultur.
n lucru au fost luate 30 de tulpini izolate de la pacieni, iar pentru fiecare din ele a
fost determinat CMI i CMB pentru compusul cercetat i pentru furacilin. n Figura
2 este reprezentat repartizarea tulpinilor pe grupuri n funcie de valoarea CMI a
fiecrui compus n parte. Primul grup include tulpinile izolate, pentru care CMI este
pn la 1,17 g/ml, cel de-al doilea grup ntre 2,34-4,69 g/ml, iar cel de-al treilea
mai mare sau egal cu 9,37 g/ml. Fa de 80-93% dintre tulpinile de stafilococ
izolate clinic, toi trei compui testai au demonstrat un nivel al CMI de pn la 1,17
g/ml i fa de 7-17% dintre tulpinile izolate CMI ntre 2,34-4,69 g/ml. Com-
pusul di(-S)-bis{cloro-[1-(piridin-2-il) etanon-4-metiltiosemicarbazonato(1-)]cupru}
nu a nregistrat valori ale CMI mai mari sau egale cu 9,37 g/ml, iar ceilali doi
compui au manifestat o astfel de activitate antibacterian fa de 3% dintre tulpinile
de stafilococ izolate clinic.

11
7% 3%
17%

93% 80%

1,17 2,34-4,69 1,17 2,34-4,69 9,37


A B

3% Fig. 2. Repartizarea tulpinilor de


14% Staphylococcus aureus izolate n
grupuri n funcie de valorile CMI
(g/ml) ale compuiilor testai:
83% A - di(-S)-bis{cloro-[1-(piridin-2-il) etanon-
4- metiltiosemicarbazonato (1-)]cupru};
B-cloro-[N-etil-2-(piridin-2-ilmetilen)hidrazin-
carbotioamido]cupru; C - di (-S)-bis{[2-(4-
1,17 2,34-4,69 9,37 aminobenzensulfamido)-pirimidin]-nitrato-[2-
C picoliden-4-feniltiosemicarbazido-(1-)] cupru}.

Rezultatele analizei dispersionale monofactoriale cu aplicarea testului t au artat


c diferenele nregistrate pentru activitatea antibacterian a celor trei compui fa de
tulpinile de stafilococ izolate se deosebesc veridic de activitatea antibacterian a
furacilinei n aceleai condiii (P<0,001 pentru CMI i CMB n toate perechile de
iruri de date).
n Figura 3 este reprezentat repartizarea tulpinilor de Escherichia coli izolate
pe grupuri n funcie de valoarea CMI a fiecrui compus n parte. Primul grup include
tulpinilele izolate, pentru care CMI este pn la 4,69 g/ml, cel de-al doilea grup -
ntre 9,37 37,5 g/ml, iar n cel de-al treilea mai mare sau egal cu 75 g/ml.
Compusul di(-S)-bis{cloro-[1-(piridin-2-il)etanon- 4-metiltiosemicarbazonato
(1-)]cupru} a manifestat o activitate antibacterian exprimat n valori CMI ntre
9,37-37,5 g/ml. Fa de compusul cloro-[N-etil-2-(piridin-2-ilmetilen) hidrazincar-
botioamido]cupru la 90% dintre tulpinile izolate clinic au fost nregistrate valori
similare cu cele ale compusului precedent i doar pentru 3 tulpini izolate CMI a com-
pusului a fost 4,69 g/ml. n cazul compusului di (-S)- bis {[2 - (4-aminobenzen-
sulfamido)-pirimidin]-nitrato - [2-picoliden-4-fenil-tiosemicarbazido-(1-)] cupru} la
56% dintre tulpinile izolate CMI a compusului a fost mai mare de 75 g/ml.
Rezultatele analizei dispersionale monofactoriale cu aplicarea testului t au artat
c diferenele nregistrate pentru activitatea antibacterian a primilor doi compui fa
de tulpinile de stafilococ izolate se deosebesc veridic de activitatea antibacterian a
furacilinei n aceleai condiii (P<0,001 pentru CMI i CMB n toate perechile de
iruri de date).

12
10%

100% 90%

9,37-37,5 4,69 9,37-37,5


A B
Fig. 3. Repartizarea tulpinilor de
17%
Escherichia coli izolate n grupuri n
funcie de valorile CMI (g/ml) a
56% 27% compuii testai:
A - di(-S)-bis{cloro- [1-(piridin-2-il)etanon-
4-metiltiosemicarbazona-to(1-)] cupru}; B - cloro-
[N-etil-2-(piridin-2-il-metilen)
hidrazincarbotioamido]cupru; C - di (-S)-bis
{[2-(4-aminobenzensulfamido) pirimidin]-
4,69 9,37-37,5 75 nitrato- [2-picoliden-4 feniltiosemicarbazido-
C (1-)] cupru}.

Astfel, compuii di(-S)-bis{cloro-[1-(piridin-2-il) etanon- 4- metiltiosemicar-


bazonato (1-)] cupru} i cloro-[N-etil-2-(piridin-2-ilmetilen) hidrazincarbotioamido]
cupru au fost recomandai n calitate de preparate cu efecte antibacteriene pronunate
fa de tulpinile clinice de Staphylococcus aureus i preparate cu activitate
antibacterian nalt fa de tulpinile clinice de Escherichia coli.

4. MODIFICAREA INDICILOR BIOCHIMICI AI CULTURILOR DE


MICROORGANISME PATOGENE SUB INFLUENA COMPUILOR
CHIMICI NOI CU PROPRIETI ANTIMICROBIENE
Capitolul dat relev rezultatele obinute la cuantificarea parametrilor statutului
antioxidant al celulelor n culturile de microorganisme patogene expuse aciunii
noilor compui chimici i n culturile meninute n condiii standard. Pentru determi-
narea activitii antioxidante s-a aplicat testul ABTS (2,2 azinobis 3-etilbenzo-
tiazolina-6 a acidului sulfonic). Testul de determinare a capacitii antioxidante totale
cu utilizarea radicalului cation ABTS+ este indicat n cazul dat, deoarece permite
evaluarea extractelor multicomponente, aa cum este lizatul celular analizat.
A fost stabilit, c tratarea tuturor celor cinci culturi bacteriene de referin cu com-
puii chimici noi selectai conduce la reducerea pronunat a capacitii antioxidante
totale cu 25-94% fa de capacitatea antioxidant normal a biomasei netratate.
Rezultatele care arat capacitatea antioxidant total n cultura de Staphyloco-
ccus aureus ATCC 25923 la aciunea compuilor selectai sunt prezentate n Figura 4.

13
35
% inhibiie radical ABTS
30
25
20
15
10
5
0

Compusul chimic utilizat

Fig. 4. Modificarea capacitii antioxidante totale n tulpina Staphylococcus


aureus ATCC 25923 sub influena compuilor chimici noi selectai:
1 - C38H38Cu 2N14O10S4; 2 - C42H42Cu2N14O12S4; 3 - C46H46Cu2N18O10S6; 4 - C46H42Cu2N18O10S4 ;
5 - C15H19ClCuN4O2S; 6 -C15H19CuN5O5S; 7 - C15H17ClCuN4OS; 8 - C15H19CuN5O5S (2,5);
9 - C15H19CuN5O5S (3,4); 10 - C15H19CuN5O5S (2,4); 11 - C18H22Cl2Cu2N8S2; 12 - C9H11ClCuN4S;
M - cultura netratat.

n cazul furacilinei procentul de inhibiie a radicalului cation ABTS constituie


59,1% din capacitatea extractului celular de stafilococ neprelucrat cu substane
antibacteriene. Activitatea antioxidant total a extractelor celulare obinute din
biomasa de stafilococ tratat cu cei 12 compui chimici noi selectai a constituit de la
6,1 la 30,5% din capacitatea antioxidant a martorului.
Pentru cultura de referin Bacillus cereus 8035 au fost selectai 13
compui chimici noi cu efect antibacterian nalt. Rezultatele obinute pentru
capacitatea antioxidant total a lizatelor celulare sunt prezentate n Figura 5.
45
% inhibiie radical ABTS

40
35
30
25
20
15
10
5
0

Compusul chimic utilizat

Fig. 5. Modificarea capacitii antioxidante totale n cultura standard Bacillus


cereus 8035 sub influena compuilor chimici noi selectai:
1 - C38H38Cu 2N14O10S4; 2 - C42H42Cu2N14O12S4; 3 - C46H46Cu2N18O10S6; 4 - C46H42Cu2N18O10S4;
5 - C15H19ClCuN4O2S; 6 - C15H19CuN5O5S; 7 - C15H17ClCuN4OS; 8 - C15H19CuN5O5S (2,5);
9 - C15H19CuN5O5S (3,4); 10 - C15H19CuN5O5S(2,4); 11 - C18H22Cl2Cu2N8S2; 12 - C9H11ClCuN4S;
13 - C10H13CuN5O4S2; M - cultura netratat.

Capacitatea antioxidant total n lizatul celular din cultura de Bacilus cereus


netratat constituie 43,8% din inhibiia radicalului cationului ABTS. Acest indicator
este destul de nalt chiar i pentru extractele din plante, care sunt considerate cele mai
14
active. Tratarea culturii de Bacillus cereus cu furacilin provoac o diminuare de
dou ori a capacitii antioxidante totale a extractului celular. i mai puternic scade
capacitatea antioxidant sub influena compuilor chimici noi. Astfel, n funcie de
compusul aplicat, capacitatea antioxidant a lizatelor constituie 14,5-40,4% din
capacitatea total a martorului.
i n culturile bacteriene Gram- compuii testai au provocat aceleai efecte de
scdere a capacitii antioxidante totale. Astfel, tulpina de referin Shigella sonnei
ATCC 25931 n condiii normale posed o capacitate de reducere a radicalului cation
ABTS de aproape 40%, ceea ce este un indicator foarte bun. Nivelul de activitate
antioxidant n biomasa tratat cu furacilin este de peste dou ori mai mic i
constituie 47,8% din nivelul martorului. Pentru biomasa tratat cu dozele CMI ale
compuilor chimici noi valorile obinute variaz ntre 3,9 i 14,3% inhibiie, ceea ce
constituie 9,9-36,4% din valorile caracteristice probei martor.
n cazul tuturor celor cinci culturi de referin incluse n studiu a fost constatat
creterea semnificativ a produselor peroxidrii lipidice, ceea ce semnaleaz condiii
de stres oxidativ intens. Astfel, n cazul culturii de Staphylococcus aureus ATCC
25923 cantitatea de dialdehid malonic (DAM) la tratarea cu CMI ale celor 12 com-
pui chimici noi selectai a crescut cu 50,4-106,1%, comparativ cu cultura netratat.
n cazul culturii de referin Bacillus cereus 8035 n funcie de compusul
aplicat creterea cantitii de DAM a fost de 45,0-95,5%. Coninutul dialdehidei
malonice n lizatul culturii Shigella sonnei ATCC 25931 a fost de 1,5-2,1 ori mai
mare n cazul tratrii cu CMI a compuilor chimici noi selectai, comparativ cu cul-
tura martor. La tulpina de referin Escherichia coli ATCC 25922 sub influena
compuilor selectai cantitatea de DAM a crescut pn la 81%, iar la tulpina
Salmonella enterica (S. Abony 03/03y) pn la 76,4% fa de martor.
Capacitatea antioxidant total a lizatelor din Shigella sonnei ATCC 25931
supuse tratrii cu dozele egale cu CMI de compui chimici noi este prezentat n
Figura 6.

40
% inhibiie radical ABTS

35
30
25
20
15
10
5
0

Compusul chimic utilizat

Fig. 6. Capacitatea antioxidant total n cultura standard Shigella sonnei ATCC


25931 sub influena compuilor chimici noi selectai:
1- C38H38Cu2N14O10S4; 2 - C42H42Cu2N14O12S4; 3 - C44H40Cl2Cu2N14O4S6; 4 - C15H19ClCuN4O2S;
5 - C15H19CuN5O5S; 6 - C15H17ClCuN4OS; 7- C15H19CuN5O5S(2,5); 8 - C15H19CuN5O5S(3,4);
9 - C15H19CuN5O5S(2,4); 10 - C18H22Cl2Cu2N8S2; 11 - C9H11ClCuN4S; M - cultura netratat.

15
Pentru a confirma existena unei stri de stres oxidativ n culturile tratate cu con-
centraiile minime inhibitorii ale compuilor chimici noi a fost realizat analiza core-
laional dintre rezultatele testului ABTS i cele ale dozrii DAM. Corelarea negativ
nalt dintre aceti doi parametri ar confirma cu certitudine prezena stresului oxidativ
generat de prezena compuilor chimici noi testai n culturile de referin studiate.
Rezultatele analizei corelaionale dintre valorile testului de reducere a radicalului cati-
on ABTS i valorile testului DAM pentru culturile de referin sunt prezentate n Figura 7.
Datele din Figura 7A atest c ntre aceti doi parametri exist o corelare nega-
tiv strns. Ecuaia de regresie obinut i valoarea coeficientului de determinare R
= 0,8198 ce provine din coeficientul de corelare r = 0,9054 denot modificarea n
tandem a celor doi indicatori. Astfel, putem afirma cu siguran, c n prezena com-
puilor chimici noi testai n cultura de Staphylococcus aureus ATCC 25923 se atest
o stare de stres oxidativ pronunat. Stresul oxidativ generat de prezena compuilor cu
efecte antibacteriene cauzeaz deteriorri majore ale integritii celulare, att la nivel
de defecte mecanice, ct i la nivel metabolic. Ca urmare, cultura de stafilococ pierde
capacitatea de a contracara procesul de acumulare exacerbat a radicalilor liberi, iar
deteriorarea ireversibil a structurilor membranare ia amploare i genereaz distruge-
rea culturii de microorganism patogen.
A B
220
210
210
DAM, % Martor

200 y = -2.4873x + 184.13 y = -2.8173x + 211.06


DAM, % Martor

R = 0.8198 200
190 R = 0.7714
190
180 180
170 170
160 160
150 150
140 140
5 10 15 20 25
0 5 10 15 20
% Inhibiie ABTS % Inhibiie ABTS

C D
220 190
210 185
y = -8.4931x + 279.86
DAM, % Martor

y = -2.6776x + 194.54 180


DAM, % Martor

200 R = 0.8209
R = 0.7935 175
190 170
180 165
170 160
155
160
150
150 145
140 140
2 7 12 17 22 10 12 14 16
% Inhibiie ABTS % Inhibiie ABTS

Fig. 7. Corelarea dintre valoarea capacitii antioxidante totale i nivelul dialdehidei


malonice n cultur la:
A - Staphylococcus aureus ATCC 25923; B - Bacillus cereus 8035;
C - Shigella sonnei ATCC 25931; D - Escherichia coli ATCC 25922.

16
Ecuaia de regresie obinut n cazul culturii Bacillus cereus 8035 i
valoarea coeficientului de determinare R = 0,7714 (r = 0,8782) denot o stare de
stres oxidativ pronunat. Ca i n cazul stafilococului, compuii chimici noi testai
provoac modificri oxidative serioase n cultura de bacili.
Din Figura 7C se vede c n cazul culturii de referin Shigella sonnei ATCC
25931 ntre capacitatea antioxidant total i cantitatea dialdehidei malonice exist o
corelare negativ strns. Ecuaia de regresie obinut i valoarea coeficientului de
determinare R = 0,7935 (r = 0,8908) denot o stare de stres oxidativ pronunat.
Rezultatele analizei corelaionale dintre valorile testului de reducere a radicalului
cation ABTS i valorile testului DAM pentru cultura de Escherichia coli ATCC 25922
sunt prezentate n Figura 7D. ntre aceti doi parametri exist o corelare negativ strns.
Coeficientul de determinare R = 0,8209 (r = 0,9060) este destul de nalt. Astfel, putem
afirma cu siguran, c n prezena compuilor chimici noi testai n cultura de
Escherichia coli ATCC 25922 se atest o stare de stres oxidativ pronunat.
Sub aciunea compuilor chimici noi testai n toate culturile de referin se
atest o diminuare pronunat a capacitii antioxidante totale i o cretere semnifica-
tiv a nivelului de acumulare a produselor peroxidrii lipidice. Corelarea invers
strns cu valori nalte ale coeficientului de determinare dintre aceti doi parametri
confirm starea de stres oxidativ de intensitate nalt, cauzat de aciunea antibac-
terian a compuilor noi testai.
Pentru a aprecia modificrile statutului antioxidant al culturilor de microor-
gansme patogene sub influena compuilor noi testai a fost determinat activitatea
enzimelor superoxiddismutaza (SOD) i catalaza (CT).
n cazul tulpinii de referin Staphylococcus aureus ATCC 25923 nivelul de
activitate a SOD n cultur la aciunea compuilor chimici noi constituie 51,5-63,5%
din activitatea normal caracteristic stafilococului, iar cel al CT 21,7-44,6% din
nivelul tipic de activitate n cultura intact. Modificrile valorice ale activitii
superoxiddismutazei i catalazei sunt o confirmare a unui stres oxidativ de intensitate
nalt pentru cultura de Staphylococcus aureus ATCC 25923 n condiiile influenei
compuilor chimici noi cu activitate antibacterian.
i n cazul culturii de referin Bacillus cereus 8035 nivelul de activitate
al SOD la aciunea compuilor chimici noi constituie 52,6-72,4% din activitatea
normal caracteristic culturii de Bacillus, iar nivelul de activitate al catalazei n
biomasa microorganismului patogen tratat cu concentraiile MI ale celor 13 compui
selectai constituie 16,3-37,2% din nivelul tipic de activitate n cultura intact.
Nivelul de activitate al SOD n cultura de referin Shigella sonnei ATCC 25931 la
aciunea compuilor chimici noi constituie 17,9-48,7% din activitatea normal
caracteristic microorganismului patogen; iar cel al CT 19,5-44,8% (Figura 8). n
special se evideniaz doi compui di(-S)-bis{nitrato-[2-picoliden-4-(3,4-dimetilfenil)
tiosemicarbazido-(1-)]cupru}tetrahidrat i di(-S)-bis{nitrato-[2-picoliden-4-(2,4-dime-
tilfenil) tiosemicarbazido-(1-)]cupru} tetrahidrat, la aciunea crora are loc cea mai
semnificativ reducere att a activitii SOD, ct i a activitii CT. Valorile obinute la
tratarea culturii de microorganisme patogene cu aceti doi compui sunt de 5 ori mai
joase dect activitatea enzimelor antioxidante n lizatul culturii martor.

17
120
SOD CT
100
% Martor

80
60
40
20
0

Compuii chimici utilizai

Fig. 8. Modificarea activitii enzimelor antioxidante n cultura standard Shigella


sonnei ATCC 25931 sub influena compuilor chimici noi selectai:
1 - C38H38Cu 2N14O10S4; 2 - C42H42Cu2N14O12S4; 3 - C44H40Cl2Cu2N14O4S6; 4 - C15H19ClCuN4O2S;
5 - C15H19CuN5O5S; 6 - C15H17ClCuN4OS; 7 - C15H19CuN5O5S(2,5); 8 - C15H19CuN5O5S(3,4);
9 - C15H19CuN5O5S(2,4); 10 - C18H22Cl2Cu2N8S2; 11 - C9H11ClCuN4S; M - cultura netratat.

n cultura de referin Escherichia coli ATCC 25922 activitatea SOD la aciunea


compuilor selectai constituie 41,7-56,3% din activitatea normal, iar cea a CT
30,4-44,8%. i la Salmonella enterica se nregistreaz scderea activitii enzimelor:
SOD 51,3-62,5%M, iar CT 36,4-43,0%M.
Astfel, rezultatele obinute arat, c sub aciunea compuilor chimici noi testai
n toate culturile de referin se atest o cretere semnificativ a nivelului de acumu-
lare a produselor peroxidrii lipidelor, ceea ce indic asupra modificrilor oxidative
ireversibile i confirm starea de stres oxidativ profund n culturile de referin.
Corelarea negativ strns cu valori nalte ale coeficientului de determinare dintre
capacitatea antioxidant total i coninutul dialdehidei malonice n celule confirm
starea de stres oxidativ de intensitate nalt, cauzat de aciunea antibacterian a
compuilor noi testai.
Sub influena compuilor chimici noi n toate culturile de referin testate are loc
o reducere semnificativ a nivelului de activitate a enzimelor antioxidante superoxiddis-
mutaza i catalaza, ceea ce indic diminuarea capacitii de protecie antioxidant la
administrarea compuilor studiai. Aciunea specific a compuilor chimici noi asupra
enzimelor antioxidante primare, care constituie unul dintre factorii de patogenitate a
agenilor infecioi, permite s presupunem un efect benefic in vivo al noilor
substane autohtone i s recomandm compuii selectai pentru teste biomedicale.

18
CONCLUZII GENERALE I RECOMANDRI
1. Compuii coordinativi ai Cu(II) care conin 4-feniltiosemicarbazona 2-
formilpiridinei i sulfanilamide manifest activitate antibacterian competitiv fa de
tulpinile de referin testate. Concentraiile minime inhibitorii fa de tulpina de re-
ferin Staphylococcus aureus ATCC 25923 s-au ncadrat ntre 0,018 i 18,75 g/ml
(7 compui fiind mai activi ca furacilina; p<0,001); fa de Bacillus cereus
8035 ntre 0,009 i 18,75 g/ml (8 compui mai activi ca furacilina); fa de tulpina
Escherichia coli ATCC 25922 ntre 0,58 i 38,5 g/ml (4 compui mai activi ca
furacilina; p<0,001); fa de Shigella sonnei ATCC 25931 i Salmonella enterica (S.
abony 03/03) ntre 0,58 i 18,75 g/ml (8 compui mai activi fa de antisep-
ticul de referin; p<0,001) [4, 23]. Doi dintre cei mai activi compui cu activitate
foarte nalt fa de toate tulpinile de referin luate n studiu di(-S)-bis{(4-amino-
benzensulfamid)-nitrato-[2-picoliden-4-feniltiosemicarbazido-(1-)]-cupru} i di(-S)-
bis{[2-(4-aminobenzensulfa-mido)-pirimidin]-nitrato-[2-picoliden-4-feniltiosemicarba-
zido-(1-)]cupru}, au fost sintetizai cu utilizarea precursorului Cu(NO3)2*3H2O.
2. Compuii coordinativi ai Cu(II) cu 4-(dimetilfenil)tiosemicarbazona 2-formil-
piridinei au demonstrat activitate antibacterian nalt fa de trei dintre tulpinile de
referin. Astfel, concentraiile minime inhibitorii fa de tulpinile de referin
Staphylococcus aureus ATCC 25923, Bacillus cereus 8035 i Shigella sonnei
ATCC 25931 s-au ncadrat ntre 0,009 i 0,58 g/ml, comparativ cu valorile de 2,34 i
4,68 g/ml nregistrate pentru antisepticul de referin (p<0,001) [3, 8, 16, 17].
3. Compuii coordinativi ai Cu(II) cu n-piridin-2-iltiosemicarbazona 2 piridin-
carboxialdehid i derivaii se caracterizeaz prin aciune antibacterian performant
fa de tulpinile de referin Staphylococcus aureus ATCC 25923 i Bacillus cereus
8035. Fa de tulpina de referin Staphylococcus aureus ATCC 25923 s-au
manifestat compuii di(-S)-bis{cloro-[1-(piridin-2-il)etanon-4-metiltiosemicarbazo-
nato(1-)]cupru} i cloro-[N-etil-2-(piridin-2-ilmetilen) hidrazincarbotioamido] cupru
cu CMI de 0,56 ng/ml, iar CMB de 1,8 ng/ml (comparativ cu valoarea de 2,34
inregistrat pentru furacilin; p<0,005). Aceiai compui au nregistrat valoarea CMI
de 0,14 g/ml fa de Bacillus cereus 8035 (fa de 4,68 n cazul antisepticului
de referin; p<0,001) [1, 2, 15].
4. Compuii chimici noi selectai au manifestat activitate antimicrobian fa de
tulpinile de referin care depete de 2-3500 ori activitatea furacilinei [1-4, 8, 15,
16, 23]; iar fa de tulpinile de Staphylococcus aureus i Escherichia coli izolate au
avut o activitate ce o depete pe cea a furacilinei de 1,5-240 de ori.
5. Compuii cu activitatea antibacterian nalt cauzeaz n celulele microorga-
nismelor patogene un stres oxidativ pronunat, exprimat prin scderea semnificativ a
capacitii antioxidante totale i prin mrirea esenial a coninutului produsului pero-
xidrii lipidelor dialdehidei malonice. Prezena stresului oxidativ este confirmat
prin gradul nalt de corelare negativ dintre aceti doi parametri (coeficientul de de-
terminare variaz n funcie de tulpin ntre 0,77 i 0,82). Cele mai vulnerabile din
punctul de vedere al instalrii stresului oxidativ de nalt intensitate sunt culturile de
referin Staphylococcus aureus ATCC 2592 i Bacillus cereus 8035, iar cea
mai rezistent fiind cultura de referin Salmonella enterica (S. abony 03/03y).

19
6. Unul dintre mecanismele de aciune a compuilor noi testai se bazeaz pe
scderea semnificativ a activitii enzimelor antioxidante de prim linie superoxid-
dismutaza i catalaza. Astfel, sub aciunea compuilor chimici noi activitatea acestor
dou enzime scade pn la nivelul de mai jos de 20% din activitatea lor n biomasa
netratat. Acest lucru permite s presupunem pstrarea efectului antibacterian obser-
vat in vivo, enzimele menionate fiind elementele-cheie n protecia microorganisme-
lor patogene fa de activitatea sistemului imun al gazdei.
Problema tiinific important soluionat n lucrare const n elucidarea
efectelor unor noi compui chimici din produse autohtone asupra tulpinilor de micro-
organisme patogene, ceea ce a contribuit la evidenierea proprietilor antimicrobiene
ale substanelor noi, fapt ce a permis stabilirea mecanismelor de aciune a lor.
Aportul personal: n materialele care reflect coninutul brevetelor de invenie
autoarei i revine cota-parte n corespundere cu lista autorilor. Toate celelalte
rezultatele obinute, analiza lor, generalizrile i concluziile aparin autoarei.
Recomandri practice
1. Se recomand compuii coordinativi ai Cu(II) cu 4-feniltiosemicarbazona
2-formilpiridinei i sulfanilamide n calitate de substane cu activitate antibacte-
rian fa de microorganismele Gram(+) Staphylococcus aureus i Bacillus
cereus.
2. Se recomand compuii coordinativi ai Cu(II) cu 4-(dimetilfenil)tiosemicar-
bazone 2-formilpiridinei n calitate de substane cu efecte antibacteriene fa de
microorganismele Gram(+) Staphylococcus aureus i Bacillus cereus i fa de
microorganismul Gram(-) Shigella sonnei.
3. Se recomand compuii di(-S)-bis{cloro-[1-(piridin-2-il)etanon-4-metiltiose-
micarbazonato(1-)]cupru} i di(-S)-bis{cloro-[1-piridin-2-il-4-etiltiosemicarba-
zono - (1-)] cupru} n calitate de substane cu efecte antibacteriene pronunate
fa de tulpinile de Staphylococcus aureus izolate i substane cu activitate
antibacterian nalt fa de tulpinile de Escherichia coli izolate.
Sugestii privind cercetri de perspectiv
1. Sunt necesare testri biomedicale ale substanelor chimice noi selectate pentru
a verifica eficiena lor in vivo.
2. Sunt necesare cercetri suplimentare pentru confirmarea mecanismului de aciune
a compuilor chimici noi, care posed activitate antibacterian pronunat.

20
Bibliografie selectiv
1. Brevet de invenie MD 4127 C1. Utilizare a di( -S)-bis {cloro -[1-(piridin-2-
il)etanon-4-metiltiosemicarbazonato(1-)]cupru} n calitate de substan cu
activitate antimicrobian fa de Staphylococcus aureus/ Gulea Aurelian,
Lozan-Tru Carolina, apcov Victor. Data publicrii 2011.09.30, BOPI nr.
9/2011.
2. Brevet de invenie MD 4133 C1. [(2-Carbamotioilhidrazon)propionato(2-)]-(4-
aminobenzensulfamid) cupru, care manifest activitate antimicrobian fa de
bacteriile din genul Bacillus cereus / Gulea A., apcov V., Lozan-Tru C.,
Rudic V. Data publicrii 2011.10.31, BOPI nr. 10/2011.
3. Brevet de invenie MD 4112 Compui coordinativi ai cuprului cu 4-
(dimetilfenil)-tiosemicarbazonele 2-formilpiridinei/Lozan-Tru Carolina; Gulea
Aurelian, apcov Victor, Rudic Valeriu, Data publicrii 31.05.2011, BOPI
nr.5/2011.
4. Brevet de invenie MD 4179 C1. Compui coordinativi ai cuprului(II), care
conin 4-feniltiosemicarbazona 2-formilpiridinei i sulfanilamide, care
manifest activetate antimicrobian fa de bacteriile din specia Bacillus cereus
/ Gulea Aurelian, Lozan-Tru Carolina, apcov Victor, Cotovaia Aliona,
Ghicavi Victor. Data publicrii 2012.07.31, BOPI nr. 7/2012.
5. Bonifcio B. et al. Antimicrobial activity of natural products against
Helicobacter pylori: a review. In: Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2014, v.13(1),
p.1-10. doi: 10.1186/s12941-014-0054-0.
6. Center for Disease Dynamics, Economics & Policy(CDDEP). 2015. Resistance
Map.2015. www.cddep.org/projects/resistance-map. Accesat la 25 noiembrie
2015.
7. Cogo L.L. et al Anti-Helicobacter pylori activity of plant extracts traditionally
used for the treatment of gastrointestinal disorders. In: Braz J Microbiol, 2010,
v.41, p.304-309.
8. Gulya A. P., Lozan-Tyrshu K.S., Korzha I. D., Rudik V. F. Coordination com-
pounds of Copper with 2-Formiylpyridine 4- (Dymethylphenyl) thiosemicar-
bazones. In: Russian Journal of General Chemistry. 2012, vol. 82, no.11, p.1869-
1872.
9. European Antimicrobial Resistance Surveillance Network (EARS-Net). 2014.
EARS-Net Report, Quarters 1-4. Dublin.
10.European Medicines Agency (EMA) and European Centre for Disease
Prevention and Control (ECDC). The Bacterial Challenge: Time to React a
Call to Narrow the Gap Between Multidrug-Resistant Bacteria in the EU and
Development of New Antibacterial Agents. Stockholm. 2009.
11.Fischbach M.A., Walsh C.T: Antibiotics for emerging pathogens. In: Science.
2009, v.325, p.1089-1093.
12. Hamad B. The antibiotics market. In: Nature Rev Drug Discov. 2010. v. 9, p.675-
676.
13.Leopold S. J. et al. Antimicrobial Drug Resistance Among Clinically Relevant
Bacterial Isolates in Sub-Saharan Africa: A Systematic Review. In: The
Journal of Antimicrobial Chemotherapy, 2014. v.69 (9), p.2337-53.
21
14.Liu L. et al. Global, Regional, and National Causes of Child Mortality in 2000-
13, with Projections to Inform Post- 2015 Priorities: An Updated Systematic
Analysis. In: The Lancet. 2015, v.385(9966), p.430-440.
15.Lozan-Tru C. Efectul antimicrobian al compuilor coordinativi ai cuprului,
zincului, cobaltului i nichelului cu n-piridin-2-iltiosemicarbazon 2
piridincarboxi-aldehid i derivaii ei. n: Curierul Medical. 2012, v.3(327), p.
408-410.
16.Lozan-Tru C. Efectul antimicrobian al compuilor coordinativi ai cuprului cu
4- (dimetilfenil)-tiosemicarbazonele 2-formilpiridinei. n: Curierul Medical.
2014, v.57(4), p. 14-17.
17. Lozan-Tru C. Utilizarea a di(-s)-bis{cloro-[1-piridin-2-iletanon-4-metiltio-
semicarbazonato (1-)] cupru}, n calitate de substan cu activitate antimicrobian
fa de Staphylococcus aureus. n: Curierul Medical. 2014, v. 57(3), p. 9-11.
18.Lu P. L. et.al. Epidemiology and Antimicrobial Susceptibility Profiles of
Gram-Negative Bacteria Causing Urinary Tract Infections in the Asia-Pacific
region: 2009-2010 Results from the Study for Monitoring Antimicrobial
Resistance Trends (SMART). In: International Journal of Antimicrobial
Agents, 2012, v.40 (Suppl), p.37-43.
19.Maruteri . M. Noiuni fundamentale de biostatistic: note de curs. Trgu
Mure: University Press. 2006, p.220.
20.Pahonu E. et al. Characterization, Crystal Structure and Antimicrobial
Activity of Copper(II) Complexes with the Schiff Base Derived from 2-
Hydroxy-4-Methoxyben-zaldehyde. In: Molecules. 2015, v.20(4), p.5771-
5792.
21.Rizzotto M. Metal Complexes as Antimicrobial Agents. In: A search for
antibacterial agents. Ed. Varaprasad Bobbarala, 355 pages, 2012, Publisher. In:
Tech, p. 73-88.
22.Rosu T. et al. Some new Cu(II) complexes containing an ON donor Schiff
base: Synthesis, characterization and antibacterial activity. In: Polyhedron.
2011, v.30, p.154-162.
23. Rudic V., Lozan-Tru C., Zariciuc E., Gulea A., apcov V. Inhibitorii proliferrii
bacteriei Bacillus cereus n baza compuilor coordinativi ai cuprului (II) care
conin 4-feniltiosemicarbazona 2-formilpiridinei i sulfanilamide. n: Buletinul
Academiei de tiine a Moldovei, seria tiinele Vieii. 2014, v.1(322), p.139-146.
24.Silver L.L. Challenges of Antibacterial Discovery. In: Clinical Microbiology
Reviews. 2011. v. 24(1), p.71-109.
25.Tim Cushnie T.P, Lamb A.J: Recent advances in understanding the
antibacterial properties of flavonoids. In: Int J Antimicrob Ag. 2011, v.38,
p.99-107.
26.Van Boeckel T. P. et al. Global Antibiotic Consumption 2000 to 2010: An
Analysis of National Pharmaceutical Sales Data. In:The Lancet Infectious
Diseases, 2014, v.3099 (14), p.1-9.
27. . XIII ,
1. , 2015, . 992-1049.

22
Publicaiile la tema tezei:

Articole n diferite reviste tiinifice

n reviste din strintate recunoscute


1. Gulya A. P., Chumakov Yu. M., Tsapkov V. I., Graur V.O., Lozan-Tyrshu K.S.,
Janno E., Antosyak B. Ya., Rudik V. F. Synthesis, Structure, and properties of
coordination compounds of copper (II) acetate with substituded 2-{[2-(2-hydro-
xyethylamino) etylamino]metyl}phenol. In: Russian Journal of General Chemistry.
2011, vol. 81, no. 9, p.1859-1866, ISSN: 1070-3632 (IF:0,42).
2. Gulya A. P., Lozan-Tyrshu K.S., Korzha I. D., Rudik V. F. Coordination com-
pounds of Copper with 2-Formiylpyridine 4-(Dymethylphenyl) thiosemicar-
bazones. In: Russian Journal of General Chemistry. 2012, vol. 82, no.11, p.1869-
1872, ISSN: 1070-3632 (IF:0,432).
3. Gulya A. P., Lozan-Tyrshu K.S., Tsapkov V. I., Chumakov Yu. M., Zhanno E.,
Rudik V. F. Synthesis, structure, and microbial activity of copper(II) chelates con-
taing imidazole and condensation products of -amino acids with salicylaldehyde
and its derivates. In: Russian Journal of General Chemistry. 2013, vol.83, no.3,
p.530-537, ISSN: 1070-3632 (IF:0,418).

n reviste din Registrul Naional al revistelor de profil, cu indicarea


categoriei
Reviste de categoria B:
1. Lozan-Tru C. Efectul antimicrobian al compuilor coordinativi ai cuprului,
zincului, cobaltului i nichelului cu n-piridin-2-iltiosemicarbazon 2 piridincar-
boxialdehid i derivaii ei. n: Curierul Medical. 2012, nr.3(327), p. 408-410.
ISSN 1875-0666.
2. Lozan-Tru C. Utilizare a di(-s)-bis{cloro-[1-piridin-2-iletanon-4-metiltiosemi-
carbazonato (1-)] cupru}, n calitate de substan cu activitate antimicrobian fa
de Staphylococcus aureus. n: Curierul Medical. 2014, vol. 57, nr.3, p. 9-11. ISSN
1875-0666.
3. Lozan-Tru C. Efectul antimicrobian al compuilor coordinativi ai cuprului cu 4-
(dimetilfenil)-tiosemicarbazonele 2-formilpiridinei. n: Curierul Medical. 2014,
vol. 57, nr.4, p. 14-17. ISSN 1875-0666.
4. Rudic V., Lozan-Tru C., Zariciuc E., Gulea A., apcov V. Inhibitorii proliferrii
bacteriei Bacillus cereus n baza compuilor coordinativi ai cuprului care conin 4-
feniltiosemicarbazona 2-formilpiridinei i sulfanilamide. n: Buletinul Academiei de
tiine a Moldovei. tiinele vieii. 2014, nr. 1(322), p. 139-146. ISSN 1857-064X.
5. Barba N., Gulea A., Popuoi A., Lozan-Tru C., Poirier D. Aromatic isothio-
cyanato-propenones and thiourea derivates. Synthesis and biological properties. n:
Buletinul Academiei de tiine a Moldovei. tiinele vieii. 2014, nr. 1(322),
p. 146-160. ISSN 1857-064X.

23
Materiale/teze la forurile tiinifice

Conferine internaionale (peste hotare)


1. Gulea A., Tsapkov V., Graur V., Lozan-Tirsu C., Rudic V. Copper (II) coordi-
nation compounds with substituded 2 {[2-(2- hydroxiethylamino] methyl}phenols.
The XXXI-st Romanian Chemistry Conference. Book of Abstracts, 6-8 october
2010, Rmnicu Vlcea, Romnia, p. 112.
2. Gulea A., Lozan-Tirsu C., Tapcov V., Rudic V. Antimicrobial effects of copper
coordination compounds containing sulphanilamides and 4- phenylthiosemicar-
bazone pyridine-2-carboxyaldehyde. 1-er Colloque Franco-Roumain de Chimie
mdicinale, 07-08 octobre, 2010, Universit Alexandru Ioan Cuza, Iasi, Roumanie,
p.48.
3. Barba N., Popusoi A., Lozan-Tirsu C., Roi J. Aromatic isothiocyanatopropenones
and thiourea derivates. Synthesis and biological properties. 1-er Colloque Franco-
Roumain de Chimie mdicinale, 07-08 octobre, 2010, Universit Alexandru Ioan
Cuza, Iasi, Roumanie, p.52.
4. .., - .., . ., . . -
(II)

. - -
: -
. , 23-28 2011, , , , .43.
5. Gulea A., Capatina T., Lozan-Tirsu C., Paholnitcaia A., Graur V., Tsapkov V.,
Rudic V. Antimicrobial effect of copper coordination compunds with 4-phenyl-
thiosemicarbazone pyridine-2-carboxyaldehyde derivates. XXV
- - -
. . 2011. 6-11 , ,
, . 540-541.

Conferine internaionale n republic


1. Cpin T., Lozan-Tru C., Gulea A., apcov V., Rudic V. Efectul antimic-
robian al compuilor coordinativi ai cuprului, zincului, cobaltului i nichelului cu
N-piridin-2-iltiosemicarbazona 2-piridincarboxialdehidei. Conferina tiinific
internaional Biotehnologia microbiologic domeniu scientointensiv al tiinei
contemporane. Chiinu, 6-8 iulie 2011, p.14-15.
2. Gulea A., Lozan-Tirsu C., Capatina T., Paholnitcaia A., Graur V., Tsapkov V.,
Rudic V. Antimicrobial effect of copper coordination compunds with 4-phenyl-
thiosemicarbazone pyridine-2-carboxyaldehyde derivates. Conferina tiinific
internaional Biotehnologia microbiologic domeniu scientointensiv al tiinei
contemporane. Chiinu, 6-8 iulie 2011, p. 65.
3. Lozan-Tru C., apcov V., Rudic V., Gulea A. Activitatea antimicrobian a com-
puilor coordinativi ai cuprului (II) care conin sulfanilamide i tiosemicarbazona
sau 4-feniltiosemicarbazona acidului piruvic i benzoilformic. Conferina tiinific
internaional Biotehnologia microbiologic domeniu scientointensiv al tiinei
contemporane. Chiinu, 6-8 iulie 2011, p. 70-72.
24
4. Popa V., Gulea A., Andronache L., Parii A., Batr L., Lozan-Tru C. Studiul ac-
iunii compusului coordinativ al cuprului CMT-28 i a combinaiei lui cu remediul
medicamentos BioR asupra indicilor enzimatici ai esutului muscular n stresul
oxidativ. Conferina tiinific internaional Biotehnologia microbiologic
domeniu scientointensiv al tiinei contemporane. Chiinu, 6-8 iulie 2011,
p. 89-90.
5. Sargun A., Jalba A., Lozan-Tirsu C., Gulea A., Sofroni L., Van Staden R., Birca
M. Synthesis and biological activity of copper(II) complexes of 2-formylpiridine 4-
(dimethylphenil) thiosemicarbazones. The XVII-th International Conference
Physical Methods in Coordination and Supramolecular Chemistry. Book of
Abstracts, Chiinu, October 24-26, 2012, p.181-182.
6. Gulea A., Codita T., Lozan-Tru C., Tsapkov V., Pahontu E., Rosu T. Cobalt,
Nickel, Copper, And Zinc Coordination Compounds Of Salicylaldehyde And 2-
Hydroxynaphthalene-1-Carbaldehyde 4-(Pyrid-2-yl)Thiosemicarbazones. The In-
ternational Conference dedicated to the 55th anniversary from the foundation of
the Institute of Chemistry of the Academy of Sciences of Moldova May 28 - 30,
2014 Chisinau, p.130.
7. Batir L., Zosim L., Elenciuc D., Lozan-Tirsu C., Rudic V., Gulea A., Tsapkov V.
New technologies for antimicrobial preparations obtaining. New tehnologies for
antimicrobial preparations obaining. International Scientific Conference on Mic-
robial Biotechnology (2nd edition), Chiinu, Moldova, October 9-10, 2014, p.100.
8. Gulea A., Rudic V., Lozan-Tirsu C., Zariciuc E., Tsapkov V. Antimicrobial effect
coordinative compounds of copper with 4(dimethylphenyl)-thiosemicarbazones of
2-phomylpyridine. International Scientific Conference on Microbial Biotechnology
(2nd edition), Chiinu, Moldova, October 9-10, 2014, p.135.
9. Rudic V., Gulea A., Lozan-Tru C., Zariciuc E., Tsapkov V. Use di(-s)-bis
{chloro-[1-pyridine-2-ylethanone-4-methylthiosemicarbazonato(1-)] copper}, as
substances with antimicrobial activity against Staphylococcus aureus. International
Scientific Conference on Microbial Biotechnology (2nd edition), Chiinu,
Moldova, October 9-10, 2014, p. 165.

Brevete de invenii, patente, certificate de nregistrare, materiale la


saloanele de invenii

Brevete de invenie
1. Brevet de invenie MD 4112 C1, MD, C07F11/08. Compui coordinativi ai cuprului
cu 4-(dimetilfenil)-tiosemicarbazonele 2-formilpiridinei. / Lozan-Tru C., Gulea
A., apcov V., Rudic V. (MD). Cererea depus 17.05.2010, BOPI nr.5/2011.
2. Brevet de invenie MD 4127 C1, MD, C07D 213/50. Utilizare a di(-S)-bis{cloro-
[1-(piridin-2-il)etanon-4-metiltiosemicarbazonato(1-)]cupru} n calitate de sub-
stan cu activitate antimicrobian fa de Staphylococcus aureus. / Gulea A.,
Lozan-Tru C., apcov V. (MD). Cererea depus 10.06.2010, BOPI nr.9/2011.
3. Brevet de invenie MD 4133 C1, MD, C07F 1/08. [ (Carbamotiolhidrazon)
propionato (2-)]-(4-aminobenzensulfamid) cupru, care manifest activitate anti-

25
microbian fa de bacteriile din genul Bacillus cereus. / Gulea A., apcov V.,
Lozan-Tru C., Rudic V. (MD). Cererea depus 19.07.2010, BOPI nr.10/2011.
4. Brevet de invenie MD 4179 C1, MD, C07F 1/08. Compui coordinativi ai
cuprului (II), care conin 4 feniltiosemicarbazona 2-formilpiridinei i sulfanilami-
de, care manifest activitate antimicrobian fa de bacteriile din specia Bacillus
cereus./ Gulea A., Lozan-Tru C., apcov V., Cotovaia A., Ghicavi V.(MD).
Cererea depus 23.05.2011, BOPI nr.7/2012.
5. Brevet de invenie MD 4194 C1, C07C 47/55. Compus coordinativ trinuclear al
cuprului: tris {-[3,5-dibromo-2-hidroxibenziliden-4-(piridin-2-il)-tiosemicarbazido(2)]
cupru}hidrat, care manifest activitate antimicotic fa de Candida albicans./
Gulea A., Cpin T., Ciumacov T., Lozan-Tru C., Petrenko P., Codi G.,
apcov V., Rudic V. (MD). Cererea depus 23.01.2012, BOPI nr.1/2013.

26
ADNOTARE
Lozan-Tru Carolina Efecte antimicrobiene ale unor substane chimice din
produse autohtone. Tez de doctor n tiine medicale, Chiinu, 2016.
Teza conine: introducere, patru capitole, concluzii i recomandri, bibliografie cu 240
de titluri, 3 anexe, 127 de pagini text de baz, 21 de figuri, 26 de tabele. Rezultatele sunt
publicate n 26 de lucrri.
Cuvinte-cheie: activitate antimicrobian, compui coordinativi, cupru, Staphylococcus
aureus, Escherichia coli, Bacillus cereus, Shigella sonnei, Salmonella enterica.
Domeniul de studiu: 313.02 Microbiologie, virusologie medical.
Scopul lucrrii: evaluarea proprietilor antimicrobiene ale compuilor chimici noi i
elucidarea mecanismelor de aciune ale acestora.
Obiectivele lucrrii: evidenierea aciunii antimicrobiene a compuilor coordinativi ai
cuprului (II) cu diferii liganzi asupra tulpinilor de referin ale microorganismelor pato-
gene; determinarea aciunii antimicrobiene a propenonelor aromatice cu grupe tioamidice
sau izotiocian asupra tulpinilor de referin ale microorganismelor patogene; compararea
aciunii compuilor chimici noi cu cea a antisepticului de referin; evaluarea particula-
ritilor de aciune antimicrobian a compuilor chimici noi asupra tulpinilor izolate din
coproculturi; stabilirea mecanismelor de influen a compuilor chimici noi evideniai
asupra microorganismelor patogene.
Noutatea i originalitatea tiinific. A fost testat activitatea antimicrobian a unor
noi compui coordinativi ai cuprului cu diferii liganzi i comparat cu activitatea antisep-
ticului de referin, ceea ce face posibil aprecierea activitii compuilor testai fa de cea
a remediilor utilizate. Au fost estimai parametrii statutului antioxidant al culturilor de
microorganisme patogene la aciunea compuilor noi testai, ceea ce permite aprecierea
nivelului stresului oxidativ.
Problema tiinific important soluionat n lucrare const n elucidarea efectelor
unor noi compui chimici din produse autohtone asupra tulpinilor de microorganisme
patogene, ceea ce a contribuit la evidenierea proprietilor antimicrobiene ale substanelor
noi, fapt ce a permis stabilirea mecanismelor de aciune a lor.
Semnificaia teoretic. Au fost acumulate date noi despre aciunea unor compui noi
fa de tulpinile de referin i tulpinile clinice i despre modificrile statutului antioxidant
al microorganismelor patogene sub aciunea compuilor chimici noi. Au fost evideniate
corelri negative stabile dintre capacitatea antioxidant total i coninutul dialdehidei malo-
nice, ceea ce permite aplicarea acestor parametri n calitate de indicatori de monitorizare a
activitii antibacteriene.
Valoarea aplicativ a lucrrii. Au fost evideniai compui noi cu activitate anti-
microbian nalt fa de Staphylococcus aureus i Bacillus cereus de perspectiv pentru
testri in vivo. A fost propus o metod original de determinare a biomasei culturilor de
microorganisme patogene.
Implementarea rezultatelor tiinifice. Rezultatele studiului au fost implementate la
Catedra de microbiologie, virusologie i imunologie ca material didactic pentru instruirea
universitar. Metoda de determinare a biomasei bacteriene propus n tez a fost imple-
mentat n cadrul Coleciei Naionale de Microorganisme nepatogene a IMB (Act nr.74 din
28 mai 2015).

27

- ay
. , , 2016.
, , ,
240 , 3 , 127
, 21 , 26 . 26 .
: , , ,
Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Bacillus cereus, Shigella sonnei, Salmonella enterica.
: 313.02 .
:
.
:
(II)
;

;
, ,
;
; -
.
. -
;
-
,
, . -
-
,
.
: -
, ,
.
.
;

.
,
-
.
. ,
Staphylococcus
aureus Bacillus cereus, in vivo.
.
.
, .

( 74 28 2015).

28
ANNOTATION
Lozan-Tirsu Carolina Antimicrobial effects of some chemical compounds from
local sources. PhD thesis in medical sciences, Chisinau, 2016
The thesis contains an introduction, 4 chapters, conclusions and recommendations,
bibliography list with 240 references, consisting of 127 pages of the main text, 21 figures,
26 tables and 3 annexes. The results of work were published in 26 scientific papers.
Keywords: Antimicrobial activity, coordinative compounds, copper, Staphylococcus
aureus, Escherichia coli, Bacillus cereus, Shigella sonnei, Salmonella enterica
Field of study: 313.02 Medical microbiology and virology.
Aim: Evaluation of antimicrobial properties of new chemical compounds and their
mechanisms of action on pathogens.
Objectives: To identify the antimicrobial action of the copper (II) coordination com-
pounds with various ligands on the reference strains of pathogens; to determine the anti-
microbial activity of aromatic propenone with thioamide/isothiocyanate on the reference
strains of pathogens; to compare the antimicrobial activity of new chemical compounds with
standard antiseptic activity; to define the specificity of new compounds antimicrobial acti-
vity on coproculture isolates; to establish the mode of action of new compounds on
pathogenic microorganisms.
Scientific novelty of research: For the first time new chemical compounds with
different structures were tested for antimicrobial activity and was compared their activity
with antibacterial activity of standard antiseptics. The influence of new compounds on the
antioxidant status of pathogen culture was estimated.
Important scientific problem, solved in this research work, is identification of
antimicrobial properties of new local chemical compounds and determination of the
peculiarities of their actions.
Theoretical signification: New scientific data regarding the effects of some new
compounds on the reference strains and clinical pathogen isolates have been accumulated.
New data regarding the changes in the antioxidant status of pathogens under the influence of
new chemical compounds have been collected. The stable correlation between the para-
meters of the antioxidant activity and the level of lipid peroxidation have been found, which
proves the feasibility of this parameters as indicators in the process of testing of new
compounds.
Practical value: New chemical compounds with antimicrobial activity against
Staphylococcus aureus and Bacillus cereus, have been identified and proposed for
continuous testing in vivo. The original method to determine the biomass of pathogens has
been proposed.
Scientific results implementation. The study results are implemented as didactic
material at the Department of Microbiology, Virology and Immunology. The method for
bacterial biomass determination was implemented in the National Collection of
Nonpathogenic Microorganisms of IMB (Act no.74, 28 May 2015).

29
LOZAN-TRU CAROLINA

EFECTE ANTIMICROBIENE ALE UNOR SUBSTANE CHIMICE


DIN PRODUSE AUTOHTONE

313.02 MICROBIOLOGIE, VIRUSOLOGIE MEDICAL

Autoreferatul tezei de doctor n tiine medicale

Aprobat spre tipar: 12.12. 2016 Formatul hrtiei 60x84 1/16

Hrtie ofset. Tipar digital Tiraj 100 ex.

Coli de tipar: 2,0 Comanda nr. 78

SRL PRINT-CARO
Chiinu, str. Astronom N. Donici, 14
tel. 0-22-85-33-86

30