Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Bacteriologie Medicala (Sacarea) Targu-Mures, 2006
Bacteriologie Medicala (Sacarea) Targu-Mures, 2006
ef de lucrri
Disciplina de Microbiologie-Virusologie-Parazitologie
Universitatea de Medicin i Farmacie Trgu-Mure
Medic primar medicin de laborator
Doctor n tiine medicale
BACTERIOLOGIE
MEDICAL
- 2006 -
Am scris aceast carte cu dragoste, pentru toi cei dornici
de cunoatere.
Le mulumesc n mod special acelora care m-au sprijinit,
de aproape sau de departe: prinilor mei, ntreaga
gratitudine, fiicei mele i soului sincere mulumiri pentru
rbdare i nelegere.
Dasclilor mei de peste ani, Omagiu. Studenilor mei de
azi, ndemn.
Cuprins ..............................................................................................................................3
Coci gram pozitivi, aerobi..................................................................................................5
GENUL STAPHYLOCOCCUS .....................................................................................5
Staphylococcus aureus............................................................................................5
Genul Streptococcus ....................................................................................................12
Streptococcus pneumoniae ...........................................................................................22
GENUL enterococcus ..................................................................................................26
Coci gram pozitivi, anaerobi ............................................................................................31
GENUL Peptostreptococcus i genul peptococcus........................................................31
Coci gram negativi, aerobi ...............................................................................................36
Genul Neisseria............................................................................................................36
Coci gram negativi, anaerobi............................................................................................44
GENUL veillonella ......................................................................................................44
Cocobacili gram negativi, aerobi......................................................................................45
GENUL acinetobacter..................................................................................................45
Genul Bordetella ..........................................................................................................49
Genul Brucella .............................................................................................................57
Genul Francisella .........................................................................................................64
Genul Pasteurella .........................................................................................................69
Genul Haemophilus......................................................................................................72
genul gardnerella..........................................................................................................80
GENUL legionella .......................................................................................................83
GENUL moraxella .......................................................................................................87
Bacili gram pozitivi, aerobi, nesporulai ...........................................................................90
Genul Corynebacterium ...............................................................................................90
Genul arcanobacterium ................................................................................................94
Genul erysipelothrix.....................................................................................................96
Genul listeria................................................................................................................98
Genul nocardia...........................................................................................................102
Bacili gram pozitivi, aerobi, sporulai.............................................................................104
Genul Bacillus ...........................................................................................................104
Bacili gram pozitivi, anaerobi, nesporulai .....................................................................111
Genul lactobacillus.....................................................................................................111
Genul actinomyces.....................................................................................................113
Genul mobiluncus ......................................................................................................114
genul BIFIDOBACTERIUM .....................................................................................115
genul EUBACTERIUM .............................................................................................115
genul PROPIONIBACTERIUM.................................................................................115
Bacili gram pozitivi, anaerobi, sporulai .........................................................................116
Genul Clostridium......................................................................................................116
Clostridium tetani.......................................................................................................117
Clostridium botulinum ...............................................................................................120
Clostridiile gangrenei gazoase....................................................................................123
alte boli cauzate de specii din genul clostridium .........................................................126
Bacili gram negativi.......................................................................................................127
Familia Enterobacteriaceae ............................................................................................127
Genul escherichia-shigella..........................................................................................131
genul Escherichia .......................................................................................................132
Genul Shigella ...........................................................................................................139
Genul Salmonella.......................................................................................................143
Genul Yersinia ...........................................................................................................150
Genul Citrobacter.......................................................................................................157
Genul Klebsiella ........................................................................................................160
Genul Enterobacter ....................................................................................................164
Genul Hafnia..............................................................................................................166
Genul Serratia ............................................................................................................168
Genul Proteus.............................................................................................................170
Genul Providencia......................................................................................................173
Genul Morganella ......................................................................................................174
Genul pseudomonas ...................................................................................................175
pseudomonas aeruginosa............................................................................................176
Bacili Gram negativi anaerobi........................................................................................181
Genul bacteroides.......................................................................................................181
Genul porphyromonas ................................................................................................182
Genul prevotella.........................................................................................................183
Genul fusobacterium ..................................................................................................184
Bacili Gram negativi ncurbai .......................................................................................185
genul vibrio................................................................................................................185
vibrio cholerae ...........................................................................................................186
genul Helicobacter .....................................................................................................191
genul campylobacter ..................................................................................................196
Spirochete......................................................................................................................201
genul treponema.........................................................................................................201
genul borrelia.............................................................................................................206
genul leptospira..........................................................................................................210
Bacterii neclasificabile prin coloraia Gram....................................................................215
Genul mycobacterium ................................................................................................215
Bacterii fr perete celular .............................................................................................221
Genul mycoplasma i genul ureaplasma .....................................................................221
Bacterii intracelulare......................................................................................................224
Genul chlamydia ........................................................................................................224
Coci gram pozitivi, aerobi
G E N U L S T AP H Y LO CO C C U S
DEFINIIE. NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Staphylococcus aureus
Colonizeaz nrile i colonul de unde poate contamina tegumentul. Exist
starea de purttori sntoi de Staphylococcus aureus fiind ntlnit mai ales
portajul nazal, n proporie de 10-40% n colectiviti i pn la 40-70% n spital.
Rezervorul principal de este reprezentat de mamifere i psri care contamineaz
mediul. Suportul material al transmiterii este reprezentat de sol, nisip marin, apa
de mare i apa dulce, plante, fructe, alimente, mbrcminte, mobilier, covoare,
praful i aerul din ncperi.
Stafilococii coagulazo-negativi
Colonizeaz nrile i tegumentul, componeni ai florei cutanate normale
care se constituie n barier de aprare antimicrobian. Stafilococii coagulazo-
negativi sunt un rezervor de plasmide de rezisten (plasmide R) transferabile la
S. aureus i la ali coci Gram pozitivi.
S.epidermidis este ominiprezent pe tegumente n timp ce ceilali SCN au
tropism pentru anumite biotopuri:
- S.capitis pentru scalp i conductul auditiv extern;
- S.auricularis pentru conductul auditiv extern;
- S.hominis pentru zona axilar, inghinal, membre, tlpi.
Caractere morfotintoriale
Stafilococii sunt coci Gram-pozitivi, nesporulai, necapsulai. Pe frotiu
efectuat din cultur pe mediu solid stafilococii apar dispui n grmezi neregulate
asemntoare cu ciorchinii de strugure. Pe frotiul efectuat din cultur n mediu
lichid sau din produs patologic stafilococii sunt dispui extracelular, n lanuri
scurte, perechi sau coci izolai.
Caractere de cultur
Sunt germeni nepretenioi care pot fi cultivai pe medii nutritive simple, pe
medii complexe ca i pe medii hiperclorurate (Chapman). Mediile se incubeaz
timp de 18-24 ore, la temperatura de 35-37C, n aerobioz.
Crete sub form de colonii S pe medii solide; n medii lichide produce
tulburare uniform cu depozit moderat la fundul tubului.
Stafilococii produc pigment nedifuzibil, care coloreaz doar colonia
bacterian nu i mediul de cultur, de culoare galben-auriu (S.aureus), alb
(S.epidermidis) sau galben-citrin (S.saprophyticus). Pigmentogeneza (caracter
variabil) este mai intens la temperatura camerei i n prezena oxigenului.
Pe mediile cu snge apare hemoliz beta (datorat hemolizinei alfa) sau
cald-rece (datorat hemolizinei beta).
Caractere biochimice i de metabolism
Sunt germeni catalazo-pozitivi, oxidazo-negativi. Fermenteaz glucoza,
manitolul, lactoza, zaharoza etc. cu producere de acid. Hidrolizeaz proteinele
animale native: hemoglobina, fibrina, cazeina, gelatina etc., descompun
fosfolipoproteinele.
Rezistena fa de factorii fizici, chimici, biologici
Stafilococii sunt rezisteni fa de condiiile din mediul extern. Rezist n
culturi, la frigider cteva luni; n puroi uscat2-3 luni. Sunt relativ rezisteni la
antiseptice i dezinfectante (30 la alcool 70; 10 la fenol 2%), la radiaii gamma, la
aciunea coloranilor (violet de genian, fuxina acid, verde malachit etc.). Pot fi
distrui n 60 minute la temperatura de 60C, sunt sensibili la bacteriofagi, la
radiaiile UV.
Urmtoarele produse au efect bacteriostatic asupra tulpinilor de stafilococ:
suc de lmie, mr, ananas, caise, piersici, ciocolat, cacao.
Stafilococii sunt DEOSEBIT DE REZISTENI LA ANTIBIOTICE !!! Peste
95% din stafilococi sunt rezisteni la penicilin. Tulpinile de stafilococi rezistente la
meticilin (oxacilin) sunt tulpini polirezistente exterioriznd rezisten
concomitent fa de cefalosporine, eritromicin, clindamicin. Sunt nc sensibili
la vancomicin dei n unele ri (Frana) au fost semnalate deja tulpini rezistente
i fa de acest antibiotic de rezerv.
Structura antigenic:
Structuri antigenice legate de corpul celular:
1. Capsula, alctuit din acid glucozaminuronic, prezent la S. aureus, mai
ales in vivo; este un caracter genotipic fapt susinut de faptul c tulpina
ncapsulat d natere spontan la variante necapsulate. Confer o mai mare
rezisten tulpinilor productoare prin asigurarea proteciei fa de fagocitoz.
2. Polizaharidul A care este acid teichoic, prezent la Staphylococcus
aureus, induce formarea de anticorpi iar dup infecii repetate este responsabil de
reaciile de sensibilizare. Este de asemenea receptor pentru bacteriofagi.
3. Polizaharidul B, tot acid teichoic, a fost identificat la S. epidermidis;
4. Proteina A (proteina Cowan), prezent la toate tulpinile de
Staphylococcus aureus, este imunogen inducnd producerea de anticorpi
specifici. Interacioneaz nespecific cu poriunea Fc a Ig G cauznd:
anafilaxie local i sistemic la animale;
reacii urticariene la om;
activarea complementului urmat de generarea de factori
chemotactici;
inhibarea activitii opsonizante a anticorpilor;
proliferarea limfocitelor B umane etc.
5. Factor de agregare (clumping factor): este coagulaza legat pe suprafaa
celulei bacteriene (receptor pentru fibrinogen). Este prezent la tulpinile de
Staphylococcus aureus necapsulate i fixeaz fibrinogenul determinnd
aglutinarea cocilor.
6. Adezinele: proteine de suprafa specifice: receptori pentru laminin,
fibronectin, colagen cu rol n :
fixarea pe proteinele matriciale ale celulei-gazd;
invazia esuturilor
rezistena la fagocitoz
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
TRATAMENT
G E N U L S TR E PTO C O C CU S
3.Streptococi grupele C, G.
Streptococcus equi (cai, mgari), Streptococcus dysgalactiae (porci,
bovine, om), Streptococcus canis (variate animale), produc hemoliz beta pe
mediul cu snge, pot cauza angine, infecii grave ale pielii i esuturilor moi,
pneumonii, bacteriemii, meningite, endocardite, artrite septice dei implicarea lor
etiologic n afeciuni umane este nc neclar.
Streptococcus porcinus (porc), specie cu testul CAMP pozitiv, beta-
hemolitic, a fost izolat rar n infecii umane din sfera genital.
Sunt identificai prin reacii cu antiser specific pentru grupele C sau G.
II. Grupul anginosus
Cuprinde specii care au ca habitat organismul uman: Streptococcus
anginosus (grup G, C, A), Streptococcus constellatus (grup C), Streptococcus
intermedius (grup G). Coloniile sunt mici, pulverulente, nconjurate de zon
ngust de hemoliz sau . Fac parte din microbiota oral, intestinal, genital.
Determin infecii purulente ale cavitii bucale, tractului digestiv i genito-urinar,
ale cilor respiratorii superioare, tegumentului, esuturilor moi i osului.
Streptococcus anginosus de grup C a fost izolat ca agent etiologic al faringitelor.
III. Grupul mitis
Reunete specii rezidente ale cavitii bucale i oro-faringiene ale omului,
cunoscute i sub numele generic de streptococi viridans pentru c sunt
hemolitice: Streptococcus mitis, Streptococcus oralis, Streptococcus gordonii,
Streptococcus sanguis etc. Prin leziuni ale mucoasei bucale (ex: extracii dentare)
ptrund n snge cauznd endocardit subacut la pacieni cu leziuni ale
endocardului valvular sau cu disfuncii ale dinamicii sanguine cardiace. Rareori pot
cauza meningit, pneumonie, septicemie.
Tot n grupul mitis este ncadrat i Streptococcus pneumoniae.
Pneumococii sunt alfa-hemolitici, creterea lor este inhibat de optochin i
coloniile sunt distruse de bil i sruri biliare. Pentru a-i marca semnificaia clinic
vom trata separat aceast specie de streptococ.
CARACTERE GENERALE
Habitat
Sunt larg rspndii n natur, gzduii de om i diverse animale. Unii fac
parte din microbiota indigen a tractului respirator, digestiv i genital; alii sunt
asociai cu afeciuni umane importante datorate parial infeciei streptococice i
parial rspunsului imun al gazdei.
Caractere morfotinctoriale
Streptococii sunt coci gram-pozitivi, sferici sau ovoidali, cu diametrul de
circa 1m. Se divid ntr-un plan perpendicular pe axa lor lung i sunt aranjai n
lanuri a cror lungime variaz i este condiionat de factori de mediu.
Unii streptococi elaboreaz o capsul polizaharidic comparabil cu cea
pneumococic. Cele mai multe tulpini din speciile de grup A, B i C produc
capsule din acid hialuronic. Capsulele sunt mai evidente n culturile tinere i
mpiedic fagocitoza. Pilii streptococici sunt acoperii de acid lipoteichoic i au rol
n aderen.
Caractere de cultur
Cei mai muli streptococi cresc pe medii solide i formeaz colonii mici, cu
diametrul de 1-2 mm. Streptococul piogen beta-hemolitic de grup A, formeaz
colonii punctiforme.
Tulpinile necapsulate formeaz colonii S (glossy), mici, rotunde, opace,
strlucitoare.
Speciile care produc material capsular deseori dau natere coloniilor
mucoide (de tip M), rotunde, strlucitoare, cu tendin la confluare. Acestea devin
colonii matt adic turtite, cu suprafaa mamelonat, contur neregulat (colonii R)
datorit lizrii acidului hialuronic capsular.
Cei mai muli streptococi sunt aerobi, facultativ anaerobi. Necesitile
nutritive variaz mult n funcie de specie. Streptococii implicai n patologia uman
sunt n general germeni pretenioi, necesitnd o varietate de factori de cretere,
motiv pentru care se cultiv pe geloz-snge cu snge de berbec sau de cal.
Pe acest mediu streptococii se pot diferenia n funcie de capacitatea de a
produce hemoliz:
- beta-hemoliz:
o distrugerea complet a eritrocitelor cu eliberarea de hemoglobin;
o reprezint un caracter util n identificarea streptococilor piogeni -
colonii mici, de tip S, nconjurate de o zon clar de hemoliz, cu un diametru mult
mai mare dect diametrul coloniei;
- alfa-hemoliz (sau hemoliz viridans):
o liza incomplet a eritrocitelor cu formarea de pigment verde;
- hemoliz :
o hemoliza incomplet fr nuan verzuie.
n cazul n care streptococii nu produc hemoliz sunt clasificai drept
streptococi gamma.
Caractere biochimice
Unul dintre caracterele biochimice importante este reprezentat chiar de
producerea hemolizei. Alte caractere biochimice utile i n identificarea
streptococilor sunt: sensibilitatea la vancomicin, la bil, hidroliza esculinei,
tolerana la sare, hidroliza L-pyrolidonyl--naphtylamid (PYR), sensibilitatea la
bacitracin, la optochin i la sulfametoxazol-trimetoprim, producerea unei
proteine difuzibile care acioneaz sinergic cu beta-hemolizina stafilococic
determinnd liza complet a hematiilor din mediul de cultur (testul CAMP) etc.
Rezistena fa de factori fizici i chimici
Pot supravieui n secreii faringiene uscate, la temperatura camerei i
ntuneric timp de cteva sptmni. Streptococul piogen este distrus n 30 de
minute la 56C c ldur umed. Deoarece nu sunt sensibili la aciunea coloranilor
de tipul trifenil-metan, cristalul violet poate fi utilizat n mediile selective. Este
sensibil la antisepticele i dezinfectantele uzuale.
Structur antigenic i caracterele de patogenitate
Streptococii hemolitici pot fi divizai n grupe serologice (peste 18 grupe
serologice notate cu literele mari ale alfabetului, A-U), anumite grupe putnd fi
subdivizate n tipuri pe baza urmtoarelor structuri antigenice:
- polizaharidul C, prezent n structura peretelui multor streptococi, st la
baza gruprilor serologice (grupele Lancefield A-U). Specificitatea serologic a
carbohidratului specific de grup este determinat de un aminozahar, care pentru
streptococii de grup A este rhamnos-N-acetylglucozamin, pentru grupul B
rhamnos-glucozamin polizaharid etc. Induce apariia anticorpilor implicai n
reacii imunologice ncruciate fa de esut conjunctiv i glicoproteine cardiace.
- proteina M, care reprezint cel mai important factor antigenic i de
patogenitate pentru streptococul beta-hemolitic din grupul A. Are specificitate de
tip. Deoarece sunt aproximativ 100 tipuri de protein M, o persoan poate face
infecii repetate cu S. pyogen de grup A de diferite tipuri. Proteina M a fost
identificat i la streptococi din grupul G.
Are structur asemntoare miozinei. Proteina M apare ca o excrescen la
nivelul peretelui celular. Are punct de plecare membrana citoplasmatic, strbate
peretele bacterian, se proiecteaz la suprafaa celulei. Filamentele ce protein M
mpreun cu acizii lipoteichoici alctuiesc o formaiune asemntoare cu pilii.
Acidul lipoteichoic interacioneaz cu gruprile hidrofobe ale celulei gazd iar
proteina M se ataeaz de receptorii specifici celulari, ambele elemente
contribuind la aderena bacteriei de celula gazd (factori de colonizare).
S-a dovedit experimental c atunci cnd proteina M este prezent,
streptococii sunt viruleni. Proteina M mpiedic interaciunea bacteriei cu celulele
fagocitare prin repulsie electrostatic i prin blocarea cii alternative a
complementului ceea ce-i face pe streptococi capabili s reziste fagocitrii de
ctre leucocitele polimorfonucleare.
Streptococii de grup A lipsii de proteina M sunt aviruleni.
Se pare c proteina M i probabil i alte antigene streptococice au un rol
important n patogeneza febrei reumatice (reumatismului articular acut). Domeniile
antigenice conservate din proteinele de clas M (n special clasa I) reacioneaz
ncruciat cu muchiul cardiac uman.
PATOGENIE. BOALA LA OM
Infeciile adultului:
Sunt afectate persoane tarate (diabetici, vrstnici) care pot prezenta
meningite, endocardite, infecii urinare.
n timpul naterii, la femeia colonizat vaginal cu Streptococcus agalactiae
se poate instala o endometrit febril cu diseminare sanguin i localizare
secundar endocardic sau meningean.
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR
Streptococcus pyogenes
Diagnosticul de laborator este n mod uzual bacteriologic (direct) i include
n mod necesar recoltarea i transportul (n maxim 2 ore) produsului patologic, cu
examinarea microscopic a acestuia, cultivarea de obicei pe geloz-snge i
identificarea pe baza caracterelor morfologice, de cultur, biochimice i antigenice
a microorganismelor din coloniile izolate. Antibiograma nu este necesar deoarece
streptococii piogeni i menin sensibilitatea la penicilin.
Microscopia este util n cazul prelevatelor normal sterile.
Izolarea se face pe agar-snge, incubat apoi aerob 24 ore. Pentru
prelevatele cu flor de asociaie se folosesc medii selective prin azid de sodiu,
cristal violet, trimetoprim-sulfametoxazol etc.
Identificarea pe baza caracterelor microscopice, culturale i biochimice
trebuie completat cu cea serologic prin reacii de precipitare, latex-aglutinare,
coaglutinare.
Diagnosticul serologic este util atunci cnd se presupune apariia unei stri
de hipersensibilitate i pentru diagnosticul pozitiv al RAA sau al GNA. n ambele
cazuri criteriile de diagnostic sunt mult mai complexe, dar includ i dovedirea prin
metode de laborator a unei infecii streptococice n antecedente.
Metoda cea mai bine standardizat este dozarea anticorpilor anti
streptolizin O (ASLO), pentru zona noastr geografic acceptndu-se ca normal
un titru de 200 (maxim 250) uniti ASLO. Exist teste serologice i pentru
evidenierea prezenei i titrului anticorpilor fa de alte structuri antigenice (de
exemplu streptodornaz, hialuronidaz, streptokinaz).
TRATAMENT
Aa cum am prezentat mai sus, muli streptococi fac parte din flora
microbian uman normal i pot fi implicai patologic atunci cnd se stabilesc n
zone ale corpului unde nu se gsesc n mod normal (de exemplu la nivelul valvelor
cardiace).
Sursa de infecie n cazul streptococilor beta-hemolitici de grup A este de
regul o persoan purttoare sau o persoan care are o infecie clinic ori
subclinic. Transmiterea se realizeaz prin picturi de secreie naso-faringian,
saliv, contact cu leziuni cutanate.
Pentru a preveni accidentele legate n special de contaminri i infecii
streptococice n urma interveniilor chirurgicale pe tractul respirator,
gastrointestinal i urinar care conduc la apariia unei bacteriemii, la persoanele
care prezint probleme valvulare cardiace cunoscute se administreaz antibiotice
n scop profilactic.
Procedurile de control n ceea ce privete infeciile streptococice sunt
dirijate n principal spre sursa uman, constnd n identificarea i terapia
antimicrobian precoce a infeciilor respiratorii i cutanate cu streptococi de grup A
i n profilaxia cu antibiotice antistreptococice la persoanele care au suferit un atac
de RAA.
Pentru Streptococcus agalactiae sursa de infecie este uman transmiterea
fiind realizat de la mam la copil fie vertical fie orizontal iar la aduli prin contact
apropiat, chiar i prin contact sexual. Profilaxia const n depistarea colonizrii
vaginale cu Streptococcus agalactiae a gravidei urmat de vaccinarea acesteia cu
vaccin polizaharidic capsular, administrare de ampicilin n perfuzie n timpul
naterii i de ampicilin nou-nscutului n primele ore de via.
S TR E P TO C O CC U S P NE U MO NI AE
DEFINIIE. NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Fac parte din flora normal a tractului respirator superior (n special bucal,
nazal i faringian), frecvena portajului oro-faringian fiind estimat la 30-70%.
Poate coloniza i mucoasa genito-urinar sau intestinul.
Caractere morfotinctoriale
Sunt coci gram-pozitivi, alungii, lanceolai, dispui n general n diplo sau n
lanuri scurte. Tulpinile patogene prezint capsul ce nconjoar o pereche sau un
lan de pneumococi. Sunt imobili, nesporulai.
Caractere de cultur
Pneumococii sunt germeni pretenioi, care nu se dezvolt pe medii simple.
Necesit medii mbogite cu snge, ser, lichid de ascit, glucoz. Sunt aerobi i
facultativ anaerobi, multiplicarea lor fiind favorizat de o atmosfer de 5% CO2 la o
temperatur de 37C.
Pe geloz-snge formeaz colonii de tip R pentru tulpinile necapsulate sau
de tip M pentru tulpinile ncapsulate, nconjurate de o zon de -hemoliz
asemntoare cu cea a tulpinilor de Streptococcus viridans. Dup 18-24 de ore
coloniile mucoide vor prezenta n centru o deprimare ceea ce confer aspect
crateriform coloniei, datorit fenomenului de autoliz. n mediile de cultur lichide
tulbur omogen mediul.
Caractere biochimice
Pneumococii elaboreaz enzime zaharolitice, proteolitice i lipolitice.
Descompun zaharurile, glucoza fiind principala surs de energie pentru
pneumococ. Fermentarea inulinei reprezint un caracter biochimic important, util
n diferenierea pneumococilor de Streptococcus viridans care produce pe geloz-
snge acelai tip de hemoliz alfa dar nu fermenteaz acest zahar.
Produce enzime autolitice fenomen indus i accelerat de bil, sruri biliare,
acizi biliari. Testul numit i testul bilolizei este util n diferenierea pneumococilor
de ali streptococi alfa-hemolitici care nu sunt lizai n prezena bilei.
Sunt sensibili la optochin (etil-hidrocuprein), sensibilitatea la aceast
substan fiind de asemenea util n identificarea i n diferenierea
pneumococului de ali streptococi alfa-hemolitici.
Rezistena fa de factori fizici i chimici
Sunt germeni puin rezisteni n condiii de uscciune, la temperatura
camerei, expui razelor solare. La ntuneric, n sput uscat pot supravieui cteva
luni.
Una dintre marile probleme terapeutice decurgnd din dezvoltarea
rezistenei la antibiotice o reprezint apariia pneumococilor rezisteni la penicilin.
Deseori se pot evidenia tulpini cu multirezisten la antibiotice. Acest tip de
rezisten a fost descoperit cu aproximativ 30 ani n urm; ulterior s-a nregistrat o
rspndire a acestor tulpini, care sunt actualmente implicate ntr-o proporie
important n cazurile de otit medie, afeciune foarte frecvent la copii.
Structur antigenic
La nivelul peretelui exist polizaharidul C care conine acid teichoic,
polizaharid analog cu cel al grupului Lancefield dar antigenic distinct. Are
specificitate de specie fiind comun tuturor pneumococilor.
S-a identificat i prezena unei proteine M, de suprafa, distinct de
proteina M a tulpinilor de Streptococcus pyogenes, caracteristic pentru fiecare
tip. Aceste tipuri de pneumococ sunt distincte fa de cele corespunztoare
polizaharidului C.
Cel mai important determinant antigenic i n i acelai timp caracter de
patogenitate este capsula polizaharidic (antigenul K). Antigenul capsular
polizaharidic are i el specificitate de tip, mprind pneumococii n aproximativ 90
de serotipuri capsulare diferite care pot fi identificate prin reacia de umflare a
capsulei cu seruri specifice anticapsulare polivalente i monovalente, (Neufeld).
Rspuns imun
Imunitatea fa de infecia pneumococic are specificitate de tip i depinde
att de anticorpii opsonizani anticapsulari, ct i de funcia fagocitelor. Vaccinarea
induce producerea de anticorpi fa de polizaharidul capsular.
Caractere de patogenitate
Streptococcus pneumoniae este un germen condiionat patogen care poate
deveni patogen prin virulen (multiplicare i invazivitate).
Virulena pneumococilor depinde de prezena capsulei polizaharidice
care confer rezistena la fagocitoz i permite invazivitatea.
Alt factor de patogenitate este o lizin asemntoare streptolizinei O,
numit pneumolizin, eliberat prin autoliza celulei bacteriene. Are efecte
hemolitice, leucolitice, dermonecrotice. i pierde activitatea prin oxidare, este
inactivat ireversibil de colesterol i este imunogen pe durata infeciei.
PATOGENIE. BOALA LA OM
TRATAMENT
G E N U L E N TE R O C O C C US
DEFINIIE. NCADRARE
Germenii din genul Enterococcus sunt coci Gram-pozitivi, ovali sau coco-
bacili, dispui izolat, n perechi sau lanuri scurte. Sunt aerobi facultativ anaerobi,
imobili, nesporulai, catalazo-negativi, oxidazo-negativi.
Enterococii au fost iniial inclui n grupa D Lancefield a genului
Streptococcus. n 1984, pe baza diferenelor genetice, prin hibridarea ADN-ADN,
genul Enterococcus s-a separat din genul Streptococcus. n prezent genul
Enterococcus cuprinde 19 de specii dintre care 3 sunt mai frecvent implicate n
patologia uman: E.faecalis, E.faecium i E.durans (tabel).
CARACTERE GENERALE
Habitat
Sunt componeni ai florei comensale a tractului digestiv i genito-urinar, al
omului i animalelor de unde ajung n mediul extern. Pot fi prezeni de asemenea
n tractul biliar ceea ce atest capacitatea lor de a supravieui la concentraii mari
de bil. Supravieuiesc n ap, sol, alimente, insecte.
Caractere morfotinctoriale
Sunt coci sferici, ovalari sau coco-bacilari, Gram pozitivi, dispui n diplo,
lanuri scurte sau izolat. Sunt imobili, necapsulai, nesporulai.
Caractere de cultur
Cresc pe medii suplimentate cu 5% snge de berbec, incubate aerob la
37C, cu limite ale temperaturii de cretere ntre 10C i 45C.
Pentru izolarea enterococilor din produse patologice contaminate se
folosesc medii de cultur selective: agar bil-esculin-azid sau agar Columbia cu
supliment de colistin i acid nalidixic.
Pe mediile solide formeaz colonii de tip S -, - sau nehemolitice.
Pe agar cu bil-esculin-azid formeaz colonii alb-cenuii cu halou negru
iar pe mediile selective cu antibiotic coloniile sunt mai mici.
Caractere biochimice
Sunt bacterii catalaz i oxidaz negative. Cresc n bulion mbogit cu
6,5% NaCl, hidrolizeaz esculina n prezena a 40% bil sau sruri biliare, produc
pyrolidonyl-arylamidaz, leucinaminopeptidaz.
Pe baza fermentrii manitolului, sorbozei, sorbitolului i a capacitii de
hidroliz a argininei, enterococii sunt clasificai n 5 grupe n cadrul crora speciile
se difereniaz n funcie de fermentarea arabinozei, rafinozei i zaharozei (tabel
I).
Grupa I, cuprinde 5 specii difereniate pe baza fermentrii arabinozei,
rafinozeo i a utilizrii piruvatului;
Grupa II cu 5 specii identificate pe baza producerii de pigment, a mobilitii
i a capacitii de a tolera teluritul;
Grupa III cu 3 i 2 variante specii recunoscute pe baza utilizrii piruvatului i
a fermentrii arabinozei, rafinozei i zaharozei;
Grupa IV cuprinde 2 specii difereniate pe baza producerii de pigment i a
fermentrii sorbitolului;
Grupa V cu 1 specie i 3 variante cuprinde tulpini care nu descompun
arginina.
Structur antigenic
Toate speciile din genul Enterococcus posed un antigen de suprafa care
corespunde serogrupului D n clasificarea Lancefield a streptococilor.
Caractere de patogenitate
Patogeneza infeciilor cauzate de enterococi este puin cunoscut. n
patogenitatea tulpinilor de enterococ sunt implicai urmtorii factori de virulen:
- Hemolizina / bacteriocina
Este o protein codificat plasmidic cu aciune litic pe hematiile umane.
Acioneaz ca bacteriocin asupra altor coci Gram pozitivi.
- Factorul de agregare
Este o protein de suprafa, codificat plasmidic, care determin
agregarea enterococilor. Poate media aderena enterococilor la celulele epiteliului
urinar conferind tulpinilor capacitatea de a cauza infecii urinare. Poate iniia
aderena la esutul endocardic tulpinile care posed acest factor fiind cauzatoare
de endicardit.
- Gelatinaza
Este o peptidaz extracelular similar elastazei produs de Pseudomonas
aeruginosa. A fost identificat la un numr mare de tulpini de enterococ izolate de
la pacieni cu endocardit i de la pacieni spitalizai.
- Acidul lipoteichoic
Tulpinile de enterococ ce posed acidul lipoteichoic determin un rspuns
inflamator exagerat din partea gazdei.
E.faecium poate avea un nveli subire de carbohidrat care confer tulpinii
rezisten la fagocitoz.
Rezistena fa de factori fizici i chimici
Germenii din genul Enterococcus au o capacitate deosebit de a
supravieui n variate condiii adverse.
Sunt foarte rezisteni la antibiotice ceea ce pune probleme deosebite n
mediul de spital transformndu-i n importani ageni etiologici ai infeciilor
nosocomiale.
Prezint dou feluri de rezisten:
1. rezisten intrinsec, de nivel sczut, mediat de gene cromozomale,
netransferabil altor bacterii;
2. rezisten dobndit, de nivel nalt, mediat de plasmide i
transpozoni, transferabil altor bacterii.
Enterococii sunt n mod natural rezisteni la cefalosporine, sulfamide,
lincosamide, aztreonam, clindamicin, trimetoprim-sulfametoxazol i fa de
dozele uzuale de aminoglicozide.
Au o mare capacitate de a dobndi rezisten fa de unele antibiotice:
rezisten de nivel nalt fa de aminoglicozide, penicilin i vancomicin.
Au toleran fa de antibioticele cu aciune pe peretele celular (penicilin,
vancomicin) care doar le inhib nu le distrug.
Fa de penicilin au dezvoltat 2 mecanisme de rezisten: prin beta-
lactamaz i prin modificarea afinitii proteinei de legare a penicilinei (PLP5).
Penicilinele de semisintez au efect bacteriostatic asupra enterococilor.
snge berbec
Hemoliz pe
mobilitate
arabinoz
zaharoz
arginin
rafinoz
pigment
sorboz
manitol
sorbitol
piruvat
telurit
Grup / Specii
Grupa I
E.avium + + + - + - - - - + +
E.malodoratus + + + - - + - - - + +
E.raffinosus + + + - + + - - - + +
E.pseudoavium + + + - - - - - - + +
E.saccharolyticus + + + - - + - - - + -
Grupa II
E.faecalis + - + + - - + - - + + NH
E.faecium + - V + + V - - - + -
E.casseliflavus + - V + + + - + + + V
E.mundtii + - V + + + - - + + -
E.gallinarum + - - + + + - + - + -
Grupa III
E.durans - - - + - - - - - - -
E.hirae - - - + - V - - - + -
E.dispar - - - + - + - - - + +
E.faecalis - - - + - - + - - - +
E.faecium - - - + + V - - - + -
Grupa IV
E.sulfureus - - - - - + - - + + -
E.cecorum - - + - - + - - - + +
Grupa V
E.casseliflavus + - V - + + V + + + V
E.gallinarum + - - - + + - + - + -
E.faecalis + - + - - - + - - + +
E.columbae + - + - + + - - - + +
PATOGENIE. BOALA LA OM
TRATAMENT
G E N U L P E P TO S TR E P TOC OC C U S I G E N U L
P E P TO CO C CU S
DEFINIIE. NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Peptostreptococcus spp. face parte din flora normal a organismului uman
fiind prezent n cavitatea bucal, tractul intestinal, vagin, uretr i pe tegument.
Este izolat cu frecven mare din toate produsele patologice prelucrate i
poate fi implicat n infecii ale diferitelor situsuri ale macroorganismului alturi de
alte microorganisme aerobe sau anaerobe.
Peptococcus niger este gzduit n aria ombilical i vaginal.
Caractere morfotinctoriale
Peptostreptococcus spp. i Peptococcus se prezint sub form de coci
Gram pozitivi de diferite dimensiuni. Peptostreptococcus magnus are diametrul
cel mai mare n timp ce Peptostreptococcus micros este cel mai mic, prezentnd
tendina de a se dispune n lanuri scurte. Peptostreptococcus anaerobius,
Peptostreptococcus productus au form ovalar i sunt dispui n diplo sau n
lanuri.
Peptococcus niger cuprinde coci Gram pozitivi aezai n grmezi.
Caractere de cultur
Pentru a putea cultiva germenii din genul Peptostreptococcus i
Peptococcus pasul cel mai important este recoltarea i transportul rapid i corect
al produsului patologic la laborator. Produsele patologice trebuie obinute
obligatoriu necontaminate avnd n vedere prezena cocilor anaerobi n flora
normal a organismului uman. Important este de asemenea tehnica de cultivare
i mediile de cultur utilizate. Nerespectarea acestor condiii duce la obinerea
unor rezultate false i la concluzia greit conform creia infecia ar fi cauzat
doar de bacterii aerobe.
Cresc lent pe toate mediile neselective incubate 48 de ore la 37C, n
anaerobioz. Sunt inhibate pe mediile selective care conin vancomicin. Coloniile
sunt mici, de tip S, opace, alb-cenuii, nehemolitice cu unele variaii n raport cu
specia.
Peptococcus niger cultiv greu coloniile aprnd dup 96 de ore de la
nsmnare. Sunt mici, de tip S, lucioase, negre sau mslinii devenind cenuii
dup expunere la aer.
Caractere biochimice i de metabolism
Identificarea complet a germenilor din genul Peptostreptococcus i
Peptococcus este dificil din cauza dificultilor de cultivare. Pentru ncadrarea n
gen sunt necesare teste biochimice i metode cromatografice de identificare.
Peptostreptococcus spp. sunt catalaz negativi, descompun fermentativ
zaharurile (cu unele excepii care sunt azaharolitice), descompun peptonele i
aminoacizii cu formare de acid acetic i butiric, mai rar acid caproic, izocaproic i
lactic.
Peptococcus niger este catalaz pozitiv i azaharolitic, descompune
peptonele i aminoacizii cu eliberare de acid butiric i caproic.
Rezistena fa de factorii fizici, chimici, biologici
Marea majoritate a tulpinilor din genul Peptostreptococcus i Peptococcus
sunt nc sensibile fa de cloramfenicol, metronidazol, rifampicin, vancomicin,
fluorochinolone de ultim generaie.
Sunt rezisteni fa de peniciline prin producerea de proteine care leag
antibioticele beta-lactamice. Dup tratamentul cu clindamicin au fost izolate
tulpini care prezentau rezisten indus fa de macrolide-lincosamide.
Caractere de patogenitate
Patogenitatea tulpinilor din genurile Peptostreptococcus i Peptococcus
este asigurat de urmtorii factori:
o Capsula;
o Hialuronidaza prezent la tulpinile implicate n boala
parodontal;
o Enzime proteolitice produse de tulpini implicate n infecii
supurative ale esuturilor moi. Au fost identificate colagenaze i gelatinaze la
tulpini de Peptostreptococcus micros i Peptostreptococcus magnus;
o Proteina L produs ca structur de suprafa de unele tulpini
de Peptostreptococcus magnus afecteaz funcia imunoglobulinelor umane prin
capacitatea lor de a se lega de lanul K al domeniului variabil al acestora.
Peptococcus niger este probabil nepatogen.
Procesul infecios
Infeciile avnd Peptostreptococcus spp. ca etiologie sunt mai frecvente n
rile n curs de dezvoltare unde tratamentul este inadecvat sau chiar neglijat, pot
apare la orice vrst, pot avea orice localizare i cel mai frecvent sunt asociate cu
alte bacterii aerobe sau anaerobe. Specia cel mai frecvent izolat din infecii
umane este Peptostreptococcus magnus care de cele mai multe ori este izolat n
cultur pur.
Afinitatea diferitelor specii de peptostreptococ pentru esuturi este redat n
tabelul II.
Peptostreptococcus poate cauza infecii cu localizare variat: sistem nervos
central, cap, gt, torace, abdomen, regiune pelvian, tegument, esuturi moi (tabel
III).
n infeciile tractului respirator peptostreptococii sunt asociai cu coci Gram
pozitivi aerobi i anaerobi i cu streptococi microaerofili: Staphylococcus aureus,
Streptococcus spp., Fusobacterium spp., Prevotella spp., Porphyromonas spp.
n infeciile tractului digestiv sunt n general asociai cu E.coli, Bacteroides
fragilis, Clostridium spp.
Infeciile din sfera pelvian la femeie sunt cauzate cel mai frecvent de
Peptostreptococcus spp. n asociere cu Prevotella bivia i Prevotella disiensis. n
urma avortului septic se pot instala infecii cu coci Gram pozitivi anaerobi asociai
cu streptococi microaerofili, infecii care sunt adesea asociate cu bacteriemie.
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
TRATAMENT
G E N U L NE I S S E R I A
DEFINIIE, NCADRARE
Numele genului Neisseria provine de la cel care a descris pentru prima dat
germenul cauzator al gonoreei, medicul german A.L.S.Neisser.
Familia Neisseriaceae include mai multe genuri: Neisseria, Moraxella,
Acinetobacter, Kingella.
n genul Neisseria, speciile importante pentru patologia uman sunt N.
meningitidis (meningococul) i N. gonorrhoeae (gonococul).
Celelalte Neisserii sunt componente ale microbiotei indigene a mucoasei
buco-faringiene, uro-genitale i conjunctivale, au virulen limitat afectnd gazde
imunocompromise, cauznd:
Meningit N.lactamica; N.mucosa; N.flava;
Endocardit N.mucosa; N.sicca; N.subflava; N.cinerea; N.elongata;
Septicemie N.lactamica; N.subflava;
Osteomielit, artrit, sinuzit, otit medie, bronhopneumonie,
conjunctivit etc.
CARACTERE GENERALE
Habitat
N. lactamica a fost evideniat la 3-40% din persoanele sntoase, la nivel
nazal sau faringian. A fost izolat mai frecvent la copii dect la aduli.
Moraxella catarrhalis: 40-50% din copiii de vrst colar sntoi
adpostesc aceast bacterie ca i component a florei normale a tractului
respirator superior. Poate fi implicat i ntr-o serie de infecii (bronite, pneumonii,
sinuzite, otite, conjunctivite), n special la gazde cu deficiene ale capacitii de
aprare.
N. gonorrhoeae se poate gsi la nivelul mucoaselor genitale la gazdele
infectate (indiferent dac infecia este sau nu simptomatic).
N. meningitidis a fost izolat la persoane sntoase de la nivel nazal sau
faringian. Portajul rinofaringian reprezint sursa epidemic major i poate fi
punctul de plecare al meningitei. La pacienii cu meningit meningococic,
germenul se multiplic n lichidul cefalorahidian (LCR).
Microorganismele prezentate mai sus au necesiti nutritive complexe i se
pot dezvolta la anumite temperaturi.
Dat fiind implicarea n patologia uman n continuare vor fi prezentate
doar dou dintre speciile enumerate, respectiv N. gonorrhoeae i N. Meningitidis
care sunt specii strict parazite pentru om.
Caractere morfotinctoriale
Att meningococul ct i gonococul sunt coci gram-negativi, reniformi (cu
feele adiacente aplatizate; aspect de boab de cafea). Sunt dispui n diplo,
ocazional formeaz tetrade.
Sunt imobili, nconjurai de o structur capsular comun, cu o structur de
polifosfat sau polizaharid-polifosfat (n cazul meningococului), situaie n care
capsula este mai evident. n funcie de structura capsulei exist mai multe
serogrupuri.
Excepie face N.elongata care apare ca bacil fin, scurt, cu dispoziie n
perechi sau lanuri scurte.
Caractere de cultur
Neisseriile sunt bacterii strict aerobe. N. meningitidis i N. gonorrhoeae au
nevoie n vederea izolrii de medii de cultur mbogite cu hemin, extract de
levur, autolizat de ficat etc., cum ar fi mediul Hyl sau Thayer-Martin. Necesitile
nutritive sunt mai mari n cazul gonococului, meningococul poate cultiva i pe
geloz-snge. Creterea este influenat negativ de uscciune i de prezena
acizilor grai. Temperatura optim de incubare este de 35-37C. Atmosfera umed
suplimentat cu 3-10% CO2 este necesar creterii. Coloniile apar n 24-48 de
ore, mai rapid n cazul meningococului.
Gonococul produce colonii de tip S, cu dimensiuni de 0,5-1 mm sau
colonii de tip M, nepigmentate, transparente sau opace. Pe aceeai plac pot
aprea pn la cinci tipuri de colonii (T1-T5), ceea ce poate facilita identificarea.
Placa este eliminat n cazul n care nu se dezvolt colonii dup 72 de ore.
Meningococul poate crete pe geloz-chocolat sau pe geloz-snge,
incubate n atmosfer umed, n aerobioz suplimentat cu 5% CO2. Coloniile de
meningococ sunt de tip S, cu dimensiuni de circa 1 mm, transparente,
nepigmentate. Tulpinile ncapsulate (A, C) formeaz colonii de tip M (mucoide).
Caractere biochimice
Produc citocrom-oxidaz, ceea ce reprezint un test cheie n identificare.
Metabolizeaz diferii carbohidrai, activitate care poate fi util n
identificare. Spre exemplu, gonococul poate metaboliza glucoza, nu i maltoza, n
timp ce meningococul metabolizeaz ambele zaharuri menionate.
Rezistena fa de factori fizici i chimici
Neisseriile implicate n patologia uman sunt foarte sensibile la uscciune,
lumin solar i la variaii de temperatur, precum i la majoritatea antisepticelor i
dezinfectantelor. Produc enzime autolitice.
Gonococul este o bacterie fragil, sensibil la temperaturi joase i la
uscciune. S-a adaptat la transmiterea intim, sexual. De menionat prezena
anumitor plasmide implicate n rezistena la antibioticele beta-lactamice.
Meningococul este foarte sensibil n mediul extern fiind repede distrus la
uscciune i i la temperaturi joase.
Structur antigenic
La nivelul membranei externe Neisseriile au lanuri zaharidice scurte, care
alctuiesc lipooligozaharidul (LOZ) denumit i endotoxin. n funcie de structura
acestuia exist mai multe serotipuri, 6 n cazul gonococului i 12 n cazul
meningococului. Gonococii pot exprima simultan mai multe structuri antigenic
diferite. Lipooligozaharidul se fragmenteaz n lipidul A, responsabil pentru
toxicitate, i respectiv n oligozaharidul O.
Neisseria meningitidis
Meningococul posed structuri antigenice care permit ncadrarea sa n
serogrupe i serotipuri.
Antigenele capsulare, de natur polizaharidic, permit identificarea a 13
grupe serologice dintre care cele mai importante sunt grupele: A, B, C, X, Y i
W135. Antigenul polizaharidic B este identic cu cel al tulpinilor de E.coli K1 ceea
ce explic reaciile ncruciate cu seruri imune specifice.
Meningococul este de asemenea clasificat n serotipuri i imunotipuri pe
baza diferenelor prezentate de proteinele membranei externe i a compoziiei n
oligozaharide a LOZ.
Att pilii ct i proteinele membranei externe sunt prezente i n cazul
meningococului, ns fr fenomenele de variaie antigenic.
Rspuns imun
n infeciile cu gonococ apare un rspuns imun, dar datorit fenomenelor
de variaie antigenic a pilinei i de variaie de faz n expresia pilinei, nu exist
practic imunitate postinfecioas i aceeai persoan poate face infecii repetate
iar vaccinurile elaborate sunt ineficiente.
Anticorpii formai ca rspuns la infecia gonococic sunt predominant IgG3.
Se formeaz anticorpi fa de pilin, proteina Opa i LOZ, i n cantitate foarte
mic fa de proteina Por. Anticorpii anti-LOS activeaz complementul, elibereaz
componenta C5a a acestuia care are efect chemotactic pentru neutrofile. Fa de
proteina Rmp se formeaz anticorpi IgG i anticorpi IgA1 secretori.
Neisseria gonorrhoeae
Datorit apariiei tulpinilor de gonococ rezistente la antibiotice i existenei
unui numr important de infecii asimptomatice (n special la femei), infeciile
gonococice continu s reprezinte o problem important de sntate public
inclusiv n rile cu o economie dezvoltat.
Tabel IV. Factorii de virulen ai Neisseria gonorrhoeae (dup B.T.Buiuc)
Factorul de virulen Efectul biologic
Protein;
Pilina Mediaz ataarea la epiteliul mucoaselor umane
(epiteliul vaginal, al trompelor uterine, cavitatea oral)
Interfer efectul uciga al neutrofilelor
LOS Lipooligozaharid
Activitate de endotoxin
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
TRATAMENT
G E N U L V EI L LON E L L A
DEFINIIE. NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Speciile de Veillonella fac parte din flora normal a cavitii bucale. Nu sunt
patogene dar adesea sunt confundate n laborator cu tulpini de Neisseria. Cel mai
adesea se izoleaz Veillonella parvula.
Caractere morfotinctoriale
Sunt coci mici, Gram negativi dispui n diplo asemntori cu Neisseria spp.
Sunt imobili, nesporulai.
Caractere de cultur
Cultiv n condiii de strict anaerobioz. Dup 48 de ore de incubare la
37C formeaz colonii transparente sau opac-albe, nehemolitice.
Caractere biochimice i de metabolism
Sunt inerte biochimic. Ocazional unele tulpini pot fi catalaz pozitive,
oxidaz pozitive.
G E N U L AC I NE TO B AC TE R
DEFINIIE. NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Acinetobacter este un germen ubicuitar n sol i n apele de suprafa. Face
parte din microbiota flotant a tegumentului, este prezent n nazofaringe,
orofaringe, colon, vagin. n spital, tulpini de Acinetobacter au fost izolate de pe
instalaii tehnico-sanitare, aparate de climatizare, mna personalului, n instalaiile
de ap etc. A fost izolat de asemenea din sputa, secreiile tractului respirator,
urina, plgile pacienilor spitalizai. Sunt frecvent izolai n industria alimentar a
crnii.
Caractere morfotinctoriale
Sunt bacili pleomorfi, scuri, groi, pn la cocoizi, gram negativi, adesea
dispui n perechi. Pe acelai frotiu se pot ntlni forme cocoide i forme
filamentoase cu o lungime de cteva zeci de micrometri. Sunt imobili, frecvent
capsulai. Pe frotiul colorat gram adesea pot fi confundai cu Haemophilus
influenzae.
Caractere de cultur
Este un germen nepretenios, cultiv pe medii uzuale. n funcie de specie,
cresc la temperaturi cuprinse ntre 10-35C, acesta constituind un caracter de
identificare a speciei de Acinetobacter.
Coloniile sunt de tip S, rotunde, netede, convexe, lucioase sau mate,
nepigmentate. Unele specii produc hemoliz beta pe geloza snge.
Caractere biochimice i de metabolism
Sunt germeni catalaz pozitivi, oxidaz negativi, nu reduc nitraii. n funcie
de capacitatea de a descompune sau nu zaharurile se identific speciile de
Acinetobacter.
Rezistena fa de agenii fizici, chimici i biologici
Acinetobacter spp. supravieuiete timp ndelungat n mediul de spital, n
special pe suprafee umede, echipamente respiratorii de terapie intensiv, pe
pielea uman. Rezist timp de 6 zile pe hrtia de filtru uscat.
Acinetobacter baumanii este un microorganism multirezistent fa de
antibiotice.
Structura antigenic
Peretele i membrana celular a tulpinilor de Acinetobacter au compoziie
asemntoare cu majoritatea germenilor gram negativi.
Din punct de vedere al structurilor capsulare se difereniaz 28 de
serovaruri capsulare de Acinetobacter.
Rspuns imun
Sunt nc foarte multe necunoscute legate de statusul imun n infeciile
cauzate de Acinetobacter spp.
Caractere de patogenitate
Acinetobacter spp. este un microorganism cu virulen sczut care poate
totui cauza infecii fie singur fie n asociere cu alte microorganisme a cror
virulen o poate exacerba. Infeciile mixte n care este implicat i Acinetobacter
spp. au evoluie mai sever dect cele n care Acinetobacter este unic factor
etiologic.
Virulena bacteriei, dei sczut, este asigurat de:
- capsula polizaharidic (protecie fa de fagocitoz, aderena de celulele
epiteliale)
- prezena endotoxinei
- producerea de enzime care modific lipidele tisulare
- prezena fimbriilor care asigur adeziunea de celulele epiteliale
- abilitatea de a obine fierul necesar creterii n organismul uman.
Majoritatea izolatelor de Acinetobacter provenite de la pacieni spitalizai, n
special cele provenite din tractul respirator sau urinar sunt mai degrab tulpini de
colonizare dect ageni etiologici ai infeciei.
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
A.radioresistens
A.calcoaceticus
A.haemolyticus
A.baumanii
A.johnsonii
Caracterul
A.lwoffii
A.junii
Cretere la:
44C - + - - - - -
41C - + - + - - -
37C + + + + - + +
Acidifierea glucozei + + d - - - d
Hidroliza gelatinei - - + - - - -
Hemoliza - - + - - - -
Utilizarea:
DL-lactat + + - + + + +
DL-4-aminobutirat + + + d d d +
Trans-aconitat + + d - - - -
Citrat + + + d + - -
Glutarat + + - - - - +
Aspartat + + d d d - -
Azelat + + - - - + +
Beta alanin + + - - - - -
L-histidin + + + + - - -
D-malat - + + + d d -
Malonat + + - - d - +
Histamin - - - - - - -
L-fenilalanin + d - - - - +
Fenilacetat + d - - - + +
TRATAMENT
Acinetobacter baumanii este n mod natural mutirezistent la antibiotice prin
producere de beta-lactamaze i enzime de inactivare a aminoglicozidelor. Puine
sunt antibioticele eficiente n infeciile cauzate de Acinetobacter spp.: meropenem,
imipenem, piperacilin-tazobactam, amikacin. Tratamentul trebuie fcut obligatoriu
doar n cazurile de infecie documentat cu Acinetobacter spp. i sub controlul
strict al antibiogramei.
G E N U L BO RD ETE L L A
DEFINIIE, NCADRARE
Bordetella
Bordetella
Bordatella
Bordetella
bronchise
parapertu
pertussis
holmesii
avium
hinzii
ptica
ssis
B.
mobilitate - - + + + -
afinitate tract + + + + + -
respirator
gazd om om cine, pisic, cal, curcan, curcani i alte
cobai, obolan, oarece psri
porc,
citotoxina + + + + - -
traheal
toxina dermo + + + + - -
necrotic
pili + + + + - -
adenilat + + + - - -
ciclaza
hema + + + - - -
glutinina
filamen
toas
pertractina + + + - - -
toxina + - - - - -
pertussis
factor + - - - - -
colonizare
trahee
boala tuse tuse rinit atrofic, coriza
convulsiv convulsiv brohopneumonie la porc curcanilor
BORDETELLA PERTUSSIS
CARACTERE GENERALE
Habitat
Bordetellele colonizeaz cilii epiteliului respirator al mamiferelor. Cu toate
c se consider c nu are capacitate invaziv studii recente au demonstrat
prezena bacteriei n interiorul macrofagelor alveolare. Este un patogen al omului
i al primatelor superioare nici un alt rezervor nefiind nc identificat.
Caractere morfologice
Pe frotiurile din prelevate patologice sau din primoculturi, B. pertussis, este
un cocobacil gram negativ, cu dimensiunea de 0,5 m / 0,5-2 m, dispus izolat
sau n perechi, mai rar n lanuri scurte. Exist specii imobile (B.pertussis,
B.parapertussis, B.holmesii) i specii mobile (B.avium, B.hinzii, B.bronchiseptica).
Atunci cnd este recent izolat prezint capsul, n primele ore de cultivare
prezint pili ataai de peretele bacterian care dup 24 ore se pot gsi n mediul
de cultur.
Prin treceri succesive pe medii de cultur microorganismul devine pleomorf,
bacilar sau filamentos, lipsit de capsul i pili, dispus izolat sau n pereche, foarte
rar n lanuri.
Se coloreaz bipolar; prezint incluziuni metacromatice la coloraia cu
albastru de toluidin.
Caractere de cultur
Este o bacterie pretenioas nutritiv fiind cultivat pe medii mbogite cu
snge. Poate crete pe medii sintetice care conin sruri, aminoacizi, factori de
cretere (nicotinamida).
Cultivarea se realizeaz greu, B. pertussis fiind inhibat acizi grai, peroxizi
organici etc. fapt care mpiedic dezvoltarea bacteriei pe mediile uzual folosite n
diagnosticul bacteriologic. Pentru cultivare necesit:
o nicotinamid sau acid nicotinic
o substane nutritive aminoacizi, vitamine
o ageni reductori ioni de fier, glutation
o sruri minerale cloruri, fosfai
o neutralizani ai substanelor inhibitoare amidon, crbune activat
o snge.
Cel mai cunoscut mediu de cultur care ofer condiiile necesare cultivrii
este mediul Bordet-Gengou (agar, macerat de cartof, 30% snge defibrinat de
iepure, glicerol i penicilin sau cefalexin). Temperatura optim de incubare este
de 35-37C.
Dup 3-6 zile de incubare la 37C n atmosfer umed i 10% CO2 se pot
dezvolta colonii de tip S mici, convexe, uor transparente, cu strlucire metalic,
foarte aderente, nconjurate de un halou de hemoliz care n lumina transmis
oblic seamn cu picturile de mercur.
La izolare este necesar mediul Bordet-Gengou, ns prin treceri repetate
coloniile pot crete i pe geloz-snge sau pe geloz simpl. n subculturi
microorganismul se va dezvolta mai rapid, coloniile vor fi mai opace i vor aprea
modificri morfologice (pleomorfism), alterri structurale, virulena lor fiind sczut.
Pentru c mediul Bordet-Gengou este eficient doar 1-7 zile de la preparare,
unii autori recomand utilizarea unei geloze cu crbune activat i snge de cal pe
care cultura apare mai repede.
Caractere biochimice
Are metabolism strict respirator niciodat fermentativ. Temperatura optim
de dezvoltare este de 35-37C. Caracterele biochimice i de metabolism utilizate
n identificarea speciilor de Bordetella sunt redate n tabelul VIII.
Aciunea factorilor fizici, chimici
Rezistena n mediul extern este sczut: rezist maximum 2 ore la
temperatura camerei, lumina solar o distruge n 60 de minute, iar la 55C este
distrus n 30 de minute. Este puin rezistent la aciunea dezinfectantelor uzuale
i este sensibil la aciunea macrolidelor, ampicilinei, amoxicilinei,
cotrimoxazolului.
Structura antigenic
Structura antigenic este foarte complex incluznd:
- o hemaglutinin fimbrial de natur proteic;
- aglutinogene de suprafa (K);
- endotoxina.
bronchiseptica
parapertussis
Bordetella
Bordetella
Bordetella
Bordetella
Bordetella
Bordetella
pertussis
holmesii
avium
hinzii
a
Caractere
creterea pe:
agar Bordet-Gengou (zile) 3-6 1-3 1-2 2 2 2
agar Regan-Lowe (zile) 3-6 2-3 1-2 1-2 2 2
agar Mac Conkey - + + + + +
agar cu pepton:
creterea - + + + + +
pigment brun - + - - - +
beta-hemoliz + + v v ? -
mobilitate - - + + + -
catalaza vb + + + + +
oxidaza + - + + + -
asimilarea citratului - v + v + -
reducerea nitrailor - - + -c - -
ureaza - - (24h) + (4h) - v -
a
simboluri: + = 90% tulpini pozitive; v = 11-89% tulpini pozitive; - = 90% tulpini
negative; ? = rezultat necunoscut
b
70% tulpini pozitive
c
test pozitiv n mediu cu ser sanguin
Rspuns imun
Dup infecie apar titruri nalte de anticorpi anti-toxina pertussis i anti-
hemaglutinina fimbrial de tip IgA secretori care sunt protectori. Anticorpii formai
fa de componentele toxinei pertussis previn colonizarea celulelor epiteliului ciliat
oferind protecie efectiv.
Titrul anticorpilor anti-toxina pertussis persist timp ndelungat, posibil pe
tot parcursul vieii, fiind corelai cu imunitatea fa de o nou mbolnvire. La
eliminarea bacteriei din plmn intervine i imunitatea mediat celular.
Pentru c subunitatea S3 a toxinei pertussis este capabil s se lege de
suprafaa fagocitelor i pentru c hemaglutinina filamentoas se ataeaz de
integrina CR3 a fagocitelor (receptorul pentru fraciunea C3b a complementului) s-a
speculat c bacteria se leag preferenial de fagocite pentru a facilita propria ei
nglobare. Rolul unei astfel de fagocitri auto-iniiat nu este clar. n orice caz
sunt dovezi c Bordetella pertussis poate utiliza acest mecanism pentru a
ptrunde i a persista n interiorul fagocitelor ca parazit intracelular ceea ce ar
explica de ce imunitatea n tusea convulsiv se coreleaz mai bine cu prezena
limfocitelor citotoxice T dect cu a anticorpilor antibacterieni.
Caractere de patogenitate
B. pertussis este patogen n special prin localizare, multiplicare i
toxinogenez. Factorii de patogenitate sunt reprezentai de factorii de aderare i
toxine.
a) Factorii de aderare
- fimbriile
- aglutinogenele de suprafa (K) de natur proteic. Exist aglutinogene
specifice de gen i de specie. Datorit implicaiilor epidemiologice, ar fi de
menionat c microorganismul are capacitatea de a-i modifica serotipul in vitro;
- hemaglutinina filamentoas (FHA) este o protein mare (220 kDa) care
formeaz structuri filamentoase la suprafaa bacteriei i asigur adezivitatea la cilii
epiteliului respirator legndu-se de terminaiile galactoz ale sulfatidelor prezente
pe suprafaa celulelor ciliate. Este codificat de locusul genetic bvg (Bordetella
virulence genes) i este unul din factorii de virulen ai acestei bacterii. Mutaiile
aprute la nivelul genelor structurale codante pentru hemaglutinina filamentoas
reduc abilitatea de colonizare a microorganismului.
- toxina pertussis
b) Toxinele
- endotoxina situat la nivelul peretelui celular, antigen comun germenilor
Gram negativi, care contribuie i el la lezarea celulelor epiteliului respirator. Este
de natur lipopolizaharidic i exteriorizeaz urmtoarele efecte: inducie de
interleukin-1 (IL-1) care are efect piretogen, activarea complementului, efect
histaminosensibilizant, hipotensiune arterial etc.
- citotoxina traheal - codificat de gene din afara locusului bvg, inhib
sinteza ADN n celulele ciliate, are efect citotoxic i determin imobilitatea cililor.
Nu este de natur proteic deci nu este o exotoxin. Este un fragment de
peptidoglican care omoar celula ciliat, stimuleaz eliberarea de citotoxine IL-1
determinnd astfel instalarea febrei.
- toxina dermonecrotic (letal) este o protein cu greutatea molecular
de 102 kDa alctuit din 4 subuniti. Este responsabil de inflamaia i necroza
local. Are aciune vasoconstrictoare ceea ce determin necroze ischemice
predominant pulmonare.
- adenilatciclaza calmodulin dependent are funcie dubl: de enzim i
de toxin. Determin hipersecreie de mucus apos, inhib macrofagele alveolare,
permeabilizeaz epiteliul respirator pentru toxina pertusis. Este o protein de 45
kDa, responsabil de zona de hemoliz care nconjoar colonia bacterian pe
mediul cu snge. Este activ numai n prezena moleculei regulatoare a
eucariotelor numit calmodulin, deci este activ doar n celulele eucariote.
- toxina pertussis - factor major de virulen, dar i cel mai important antigen
i imunogen. Mediaz aderarea i stadiul de toxemie. Este implicat n procesul
de aderen la epiteliul traheal. Este o protein cu greutate molecular de 150
kDa. Este o exotoxin bacterian de tip A+B format din 6 subuniti.
Componenta A format din subunitatea S1 este o ADP ribozil-transferaz.
Polipeptidul A este responsabil de: sensibilizarea la histamin, hipersecreia de
insulin i activarea adenilat-ciclazei membranare.
Componenta B este alctuit din 5 subuniti (S2, S3, S5 i dou subuniti
S4) se leag de carbohidraii specifici de pe suprafaa celulei gazd. Polipeptidul B
asigur legarea de receptorii membranari fiind i mitogen nespecific pentru
limfocitele T citotoxice i T supresoare.
Componentele S2 i S3 funcioneaz ca adezine intervenind n legarea
bacteriei de celula gazd. Utilizeaz receptori celulari diferii: S2 se leag specific
de lactosilceramide (un glicopeptid) prezent pe celula epitelial ciliat n timp ce S3
se leag de o glicoprotein prezent mai ales pe fagocite.
Toxina pertussis este transportat de la locul de cantonare al Bordetellei
pertussis spre celulele i esuturile susceptibile ale gazdei. Dup legarea
componentei B a toxinei de celula gazd, subunitatea A strbate membrana
citoplasmatic a celulei prin mecanism direct ptrunznd n citoplasm. Aici se
leag de proteina Gi de la nivelul membranei celulare, o inhib ceea ce are ca
urmare o stimulare a adenilatciclazei i respectiv o cretere a sintezei de AMPc.
Dintre efectele negative care se datoreaz sintezei de toxin pertussis
putem enumera:
- alterarea activitii hormonale: creterea producerii de insulin urmat de
hipoglicemie;
- sensibilizarea la histamin cu creterea permeabilitii capilare,
hipotensiune, oc;
- reducerea activitii macrofagelor;
- diminuarea rspunsului imun umoral ceea ce favotizeaz infecii
secundare;
- limfocitoza.
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR
TRATAMENT
DEFINIIE, NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Sunt patogeni primari ai multor animale habitatul principal al brucellelor fiind
reprezentat de organismul infectat. Germenii pot rezista i n mediul datorit unor
mecanisme care le asigur persistena (posibilitatea transformrii n condiii
nefavorabile n forme L).
Caractere morfotinctoriale
Sunt cocobacili gram-negativi, imobili, nesporulai, izolai sau mai rar
prezeni n grmezi neregulate. Se coloreaz bipolar. n produsul patologic sunt
prezeni special intracelular. Cu tehnici speciale de colorare se poate evidenia o
capsul fin. n culturi vechi prezint un mare grad de polimorfism.
Caractere de cultur
Sunt bacterii pretenioase, toate speciile avnd cerine nutritive complexe.
Pentru cultivarea lor este nevoie de medii mbogite cu substane nutritive
(aminoacizi, proteine serice, glucoz, sruri, vitamine, factori de cretere etc.), de
un pH de 6,8 i o temperatur de 34C.
Microorganismele sunt aerobe facultativ anaerobe. Brucella abortus
necesit la prima izolare o atmosfer cu 5-10% CO2.
Cresc lent, mai ales la prima cultivare. Coloniile, iniial de tip S, devin
vizibile dup 2 sau mai multe zile. Trecerea de la forma S la forma R este nsoit
de scderea virulenei.
Pentru hemoculturi se folosete curent mediul bifazic Castaneda.
Hemocultura trebuie supravegheat minimum 3-4 sptmni. Mediul lichid este
tulburat uniform.
Caractere biochimice
Au activitate metabolic sczut. Posed oxidaz, produc catalaz i
descompun n mod variabil ureea, utilizeaz carbohidrai, dar nu produc hidrogen
sau gaz n cantiti suficiente pentru clasificare. Descompunerea zaharurilor este
lent i nu poate fi decelat pe medii de cultur uzuale pentru c acidifierea este
mascat de producerea de amoiniac. Nu utilizeaz citratul i nu produc indol sau
acetil-metil-carbinol (reacia Vogues-Proskauer negativ).
Identificarea unor specii sau n cadrul speciei a unor biotipuri are la baz o
serie de teste convenionale (clasificarea Huddleson) (tabel IX).
Aglutinare
pe mediu
Necesit
Cretere
anticorpi
Produce
Ureaz
CO2
H2S
cu
cu
fucsin
tionin
anti-M
anti-A
B.abortus + + + - + + -
B.melitensis - - + + + - +
B.suis - ++ + + -
Caractere de patogenitate
Caracterele de patogenitate se manifest prin capacitatea germenilor de a
se multiplica i de a invada organismul. Nu s-au detectat exotoxine i nu s-au pus
n eviden constitueni antifagocitari capsulari sau ai peretelui celular care s fie
implicai n patogenitatea Brucellei. Endotoxina (antigenul O, LPZ) este implicat
n patogenitate.
n schimb tulpinile de Brucella prezint rezisten fa de distrugerea de
ctre polimorfonucleare explicabil prin faptul c nu are loc stimularea
metabolismului oxidativ i se inhib degranularea neutrofilelor, precum i
descrcarea enzimelor din granulaii.
Pare s existe un factor de patogenitate neprecizat, produs numai in vivo,
care ajut supravieuirea intracelular. Serul animalelor receptive conine o
globulin i o lipoprotein care favorizeaz creterea formei S (virulente) a
bacteriei. Aceste elemente lipsesc din serul altor specii ceea ce le face
nereceptive fa de infecia cu Brucella.
Cele mai patogene specii sunt Brucella melitensis, urmat de Brucella suis
i de Brucella abortus.
Brucellele sunt microorganisme parazite pentru o serie de animale sau
pentru om, capabile s determine infecii acute, cronice sau infecii inaparente.
Dintre animalele de laborator, cobaiul pare s fie animalul cel mai constant
sensibil. Cronicizarea depinde de capacitatea de multiplicare n celule fagocitare.
Au afinitate pentru placenta i esuturile fetale ale animalelor receptive
avnd capacitatea de a metaboliza un hidrocarbonat (eritritol) prezent n aceste
structuri. La animalele gestante provoac avort, dup care infecia se localizeaz
la nivelul glandei mamare, Brucella eliminndu-se timp ndelungat prin lapte.
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
I. Diagnosticul direct
1. Microscopia direct i chiar coloraia imunofluorescent rmne
frecvent negativ.
2. Izolarea bacteriei impune utilizarea mediilor speciale, bogate n
substane nutritive, a mediilor bifazice pentru hemoculturi. Pentru produsele
patologice bogate n flor de asociaie mediile sunt suplimentate cu amestecuri
selective. Incubarea se face aerob n atmosfer de 10% CO2, timp de 10 zile (3
sptmni pentru hemoculturi), timp n care culturile sunt urmrite zilnic.
3. Identificarea bacteriei se bazeaz pe caracterele de cultur, pe aspectul
microscopic al culturii, pe teste biochimice preliminare i pe aglutinarea pe lam
cu seruri anti-brucella forma S:
o fermentarea glucozei i lactozei prin metode clasice;
o producerea de oxidaz;
o hidroliza semicantitativ a ureei.
TRATAMENT
G E N U L FR AN C I S EL L A
DEFINIIE, NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Are larg rspndire n natur. A fost izolat de la mamifere, psri,
artropode, animale domestice, precum i din ap, noroi sau fecalele animalelor.
F. tularensis infecteaz animalele slbatice i domestice: iepuri, obolani,
oareci, popndi, hrciogi, bizami, veverie etc., psrile, este prezent i la unele
cpue, mute de animale i nari. Francisella poate persista 2-3 ani n
organismul cpuei, ele pot transmite microorganismul transovarian. Din acest
motiv, n focarele de infecie cpuele joac un rol important n transmiterea
bacteriei.
Caractere morfotinctoriale
Pe frotiurile din produs patologic, colorate Gram bacteria este greu de
observat. F. tularensis este un cocobacil gram negativ, foarte mic. Se coloreaz
relativ slab, adesea bipolar.
Este de preferat coloraia Giemsa care evideniaz cocobacili colorai
bipolar, capsulai, grupai n mici grmezi.
Depistarea i identificarea rapid a F. tularensis n prelevatele patologice
de la animale se poate realiza cu coloraia imunofluorescent.
Microscopul electronic a pus n eviden i elemente mai mici de 0,1, sub
posibilitile de rezoluie ale microscopului optic, care pot trece prin filtrele uzuale
pentru sterilizare bacteriologic.
Caractere de cultur
Este greu de cultivat, numai pe medii speciale, cu glbenu de ou coagulat
(McCoy) sau cu cistein-glucoz-snge la temperatura de 37C, n condi ii de
aerobioz.. La prima inoculare coloniile cresc lent, devin vizibile dup 2-10 zile. Se
Coloniile sunt de tip S, mici, transparente i uor de emulsionat.
Caractere biochimice
F. tularensis este catalaz pozitiv i oxidaz negativ, oate fermenta unii
carbohidrai sau alcooli fr producere de gaz. Pentru c prezint o activitate
biochimic redus, testele biochimice nu prezint importan n diagnosticul
curent.
Rezistena fa de factorii fizici i chimici
n mediul extern F. tularensis poate fi distrus la 45C, precum i de
antisepticele uzuale. Este rezistent la frig i la congelare. n ap, noroi, n
carcasele de animale n putrefacie poate persista mai multe sprmni.
Supravieuiete n ap sau noroi pentru c poate supravieui i se poate nmuli n
interiorul amoebelor. Mutele pot purta agentul patogen circa 14 zile, iar cpuele
2-3 ani.
Structura antigenic
Tulpinile de F. tularensis sunt omogene antigenic, dar genul poate fi
mprit n dou biovaruri: A sau tularensis prezent exclusiv n America de Nord i
B sau palaearctica, mai puin virulent, circulant n Europa, Asia, America.
Capsula conine lipopolizaharide i carbohidrai iar n peretele tulpinilor de
F.tularensis exist o serie de antigene printre care antigenul somatic O
(endotoxina).
Unele antigene al tulpinilor de Francisella tularensis au structuri proteice
nrudite cu antigenele aglutinante ale tulpinilor de Brucella i de Yersinia
enterocolitica O:3.
Caractere de patogenitate
Cu toate c factorii responsabili pentru patogenitatea F. tularensis nu sunt
foarte bine definii, capsula i endotoxina par a fi implicate n patogenitatea
bacteriei. Este o bacterie facultativ intracelular.
Marea infeciozitate a bacteriei face din Francisella tularensis o potenial
arm biologic
Rspuns imun
Imunitatea dup infecie persist toat viaa.
Este asigurat de anticorpii aglutinani care apar dup 7-10 zile de la
debutul bolii, cresc pn la un nivel maxim, se menin la titru ridicat pe toat
durata bolii. n convalescen scad rmnnd la valori constante ani de zile dar
fr efect protector.
Francisella tularensis are capacitatea de a supravieui intracelular ceea ce
explic recderile i cronicizarea bolii chiar n prezena unor titruri ridicate de
anticorpi.
Imunitatea celular reprezint modalitatea principal de aprare fa de
infecie, este de durat i nalt protectiv..
PATOGENIE. BOALA LA OM
DEFINIIE, NCADRARE
PASTEURELLA MULTOCIDA
CARACTERE GENERALE
Habitat
P. multocida poate fi izolat de la nivelul cilor aero-digestive superioare al
animalelor slbatice i domestice, importante surse de infecie pentru om fiind
pisica i cinele. Persoanele care vin n contact strns cu aceste animale pot fi
purttoare nazo-faringiene ale bacteriei.
Caractere morfotinctoriale
Este un cocobacil Gram negativ, colorat bipolar, imobil, nesporulat, poate fi
capsulat.
Caractere de cultur
Bacteria se dezvolt la 37C pe medii de cultur obinuite n aero-
anaerobioz. Sunt aerobi facultativ anaerobi Creterea este stimulat dac mediul
conine i snge sau ser. Pe agar coloniile sunt de tip S, mici, rotunde,
neuniforme, bombate, semitransparente, cu opalescen albstruie. Pe geloz-
snge coloniile sunt mici, cenuii, nehemolitice. Dup repicare coloniile pot deveni
de tip R. Tulpinile de origine uman, capsulate, formeaz colonii mari, mucoide,
de tip M.
Caractere biochimice
P. multocida posed oxidaz, catalaz i nitrat-reductaz dar nu produce
lizin-decarboxilaz i nici arginin-dezaminaz.
Fermentarea zaharurilor este corelat cu tipul antigenic i cu originea
tulpinii. Fermenteaz glucoza, zaharoza, xyloza, arabinoza i manitolul, nu i
maltoza. Aciunea asupra lactozei este variabil, n funcie de tulpin. Nu poate
utiliza citratul ca unic surs de carbon.
Descompune proteinele cu producere de indol i nu cu eliberare de H2S. Nu
posed ureaz i gelatinaz.
Rezistena n mediul extern
Este o bacterie sensibil. Este distrus n 15 minute sub aciunea fenolului
0,5% i n cteva minute prin nclzire la 60C.
Structur antigenic
Prezint antigene somatice i capsulare.
Pasteurella prezint lipopolizaharide, constituente ale membranei externe,
care se comport ca endotoxin constituind antigenul somatic O.
Polizaharidele capsulare antigenice au permis clasificarea n 5 serotipuri
capsulare (A, B, D, E, F) pe baza unei reacii de hemaglutinare indirecte. Tulpinile
implicate n patologia uman aparin tipului A sau, mai rar, serotipului D.
Variantele M ale serotipurilor A i D, formatoare de colonii mucoase pe mediul de
cultur, posed o capsul de acid hialuronic ce va masca prezena altor antigene.
Rspuns imun
Pasteurella multocida este o bacterie cu dezvoltare intracelular cu
precdere. Probabil cei mai importani anticorpi aprui n cursul infeciei sunt
anticorpii opsonizani.
Caractere de patogenitate
P. multocida este patogen n special prin multiplicare i invazivitate.
Factorul de virulen este reprezentat de capsul care, inhibnd fagocitarea
germenilor, permite invadarea organismului gazd. Unele tulpini de P.multocida
produc o citotoxin dermonecrotic.
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
TRATAMENT
G E N U L H AE M OP HI L U S
DEFINIIE, NCADRARE
Factor V
catalaza
oxidaza
Specia
ureaza
indolul
H.aphrophilus + - - + - -
H.haemoglobinophilus + - + (+) - +
H.ducreyi + - - - - -
Legend: +/- = caracter pozitiv/negativ la toate tulpinile; (+)/(-) = caracter
pozitiv/negativ la majoritatea tulpinilor.
HAEMOPHILUS INFLUENZAE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Colonizeaz mucoasa tractului respirator uman la 75% din copii i la 40%
din aduli. Poate coloniza i mucoasa conjunctival precum i tractul genital la 30-
80% din persoanele sntoase.
Caractere morfologice
n produsul patologic germenii sunt prezeni sub form de cocobacili Gram
negativi, mici (1-1,5 / 0,3 m) sau bacili scuri, drepti, cu capete rotunjite, uneori
dispui n lanuri scurte.
Pe frotiul efectuat din culturi n medii bogate, la 6-8 ore, predomin formele
cocobacilare, care au i capsul. Pe frotiul din culturile vechi bacteria se
caracterizeaz prin pleomorfism; se pierde capsula ceea ce creaz probleme de
diagnostic diferenial microbiologic.
Caractere de cultur
Se cultiv pe mediile amintite mai sus, Haemophilus influenzae necesitnd
pentru iniierea creterii 5-10% CO2, atmosfer umed, temperatur de 35-37 C,
i un pH = 7,6. Durata incubrii este minim 24-48 de ore. Prezint fenomenul de
satelitism.
Pe geloz chocolat crete sub form de colonii cenuii, opace sau
transparente, netede, cu margini bine delimitate asemntoare cu picturile de
rou (de condens), care ating 1-3 mm abia dup 36-48 ore. Tulpinile capsulate
formeaz colonii mucoide cu tendin de confluare.
Pe geloz-snge cu infuzie de inim-creier apar colonii mici, rotunde,
convexe, de tip S, care n primele 24 ore prezint irizaii puternice, caracteristice.
Nu apare hemoliz.
Pe mediile transparente (geloza Fildes, geloza Levinthal, mediul HTM etc.)
coliniile sunt rotunde, convexe sau conice, transparente sau albastru-verzui.
Caractere biochimice i de metabolism
Sunt germeni aerobi - facultativ anaerobi i carboxifili. Posed o catalaz i
o oxidaz, 70% din tulpini sunt indol pozitive. Fermenteaz slab i inconstant
carbohidraii: descompune glucoza, maltoza, xiloza, nu descompune lactoza i
zaharoza. Pe baza unor teste biochimice specia a putut fi mprit n 8 biotipuri
numerotate de la I la VIII. Biotipul I este cel mai frecvent izolat.
Aciunea agenilor fizici, chimici i biologici
Este foarte sensibil n mediul extern. Prin uscare sunt omori rapid, n
sput pot rezista pn la 48 de ore. Sunt distrui de dezinfectanii obinuii sau de
meninerea timp de 30 minute la 56.
Tulpinile izolate pot fi conservate prin liofilizare sau prin meninerea la -
70C.
Referitor la efectul antibioticelor asupra tulpinilor de Haemophilus
influenzae este de remarcat emergena tulpinilor rezistente la ampicilin prin
producerea de beta-lactamaz. Rezistena fa de tetraciclin, cloramfenicol,
kanamicin este adesea asociat cu cea fa de ampicilin i prin testarea
concomitent a acestor 4 antibiotice au fost identificate 12 fenotipuri de rezisten.
Este sensibil fa de penicilinele A asociate cu un inhibitor de beta-lactamaz, fa
de cefalosporinele de generaia a doua i a treia, de fluorochinolone i de
gentamicin. Puine tulpini sunt rezistente fa de cotrimoxazol. Lincozaminele
sunt ineficiente iar macrolidele sunt inconstant eficace.
Structur antigenic
Tulpinile de Haemophilus influenzae prezint ca structuri antigenice
capsula, fimbriile (pilii), lipopolizaharidul i proteinele membranei externe.
Tulpinile virulente prezint o capsul polizaharidic care are o compoziie
diferit, n funcie de tipul serologic. Exist 6 tipuri antigenice capsulare
(serovaruri) notate de la a la f. Tipurile (a-f) se pot diferenia prin reacii de umflare
a capsulei i de imunofluorescen folosind seruri specifice. Cel mai rspndit i
mai patogen este tipul b, la care antigenul este poliribozil-ribitol-fosfat (PRP) i
prezint nrudiri antigenice cu Streptococcus pneumoniae, Streptococcus
pyogenes, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Enterococcus
faecium, E.coli K1 (majoritatea microorganismelor din flora normal a tractului
respirator nu prezint capsul).
Alte structuri de suprafa prezente la Haemophilus influenzae sunt
antigenice i pot fi utile n studiile epidemiologice pe baza lor identificndu-se
subtipuri n snul serovarurilor.
Haemophilus influenzae de tip b izolat din nazo-faringe prezint fimbrii n
timp ce izolatele din lichid cefalorahidian i din snge nu prezint pili.
Antigenele somatice sunt reprezentate de cel puin dou proteine:
substana M, un antigen de suprafa labil i substana P, care constituie o parte
nsemnat a corpului bacterian.
Endotoxina (antigenul O) se poate extrage de exemplu din culturi realizate
n mediu lichid, dar natura ei antigenic nu este foarte clar.
Rspunsul imun
La nou nscui i la sugarii sub 3 luni exist o stare de imunitate, ei
posednd anticorpi provenii de la mam. Dup aceast vrst, concentraia de
anticorpi scade. Corelaia ntre anticorpii bactericizi anti-capsulari (care contribuie
la realizarea lizei dependent de complement i care stimuleaz fagocitoza) i
rezistena la infecii majore cu Haemophilus influenzae exist, ns nu este foarte
clar n ce msur aceti anticorpi pot duce singuri la instalarea imunitii.
Macroorganismul nu poate mpiedica instalarea strii de comensalism dar se
opune generalizrii infeciei prin anticorpii anti-capsulari cu efect opsonizant i prin
sistemul complement. Anticorpii de tip IgA secretorii asigur imunitatea la nivelul
mucoaselor.
Pacienii fr anticorpi anti-capsulari, deficieni de complement i
splenectomizai sunt predispui infeciilor cu Haemophilus influenzae.
Anticorpii anti-capsul apar n urma infeciei naturale, a vaccinrii sau a
transferului pasiv de anticorpi materni.
Caractere de patogenitate
Haemophilus influenzae este patogen prin multiplicare i invazie.Principalii
factori de virulen sunt polizaharidele capsulare, pilii de adeziune i IgA
proteazele.
Rolul esenial n patogenitatea tulpinii l are prezena capsulei care i
confer caracterul invaziv, iar din cele ase tipuri, tipul b apare n circa 90% din
cazurile severe de infecie cu Haemophilus influenzae. Are rol n colonizare i este
factor major al virulenei protejnd bacteria de fagocitoz i de liza mediat prin
complement.
Pentru tulpinile capsulate, n special cele de tip b, adezinele mediaz
colonizarea orofaringelui i a epiteliului respirator cu H.influenzae. Componentele
peretelui bacterian afecteaz funcia cililor, bacteriile sunt translocate prin celulele
epiteliale i endoteliale, ptrund n torentul sanguin. n absena anticorpilor
opsonizani specifici fa de capsul, apare bacteriemie cu diseminare
meningean, articular, renal.
Prezint adezine de suprafa, filamentoase, care sunt importante pentru
colonizare dar nu confer caracter invaziv tulpinii.
Endotoxina are un rol redus n patogenitate. Rolul antigenelor somatice
urmeaz s fie clarificat.
Tulpinile din tipul antigenic b produc bacteriocine.
IgA proteazele sunt enzime produse de Haemophilus influenzae, capabile
s cliveze IgA. n acest fel tulpinile de Haemophilus influenzae reduc aprarea
local a mucoaselor infectate. Enzime asemntoare sunt identificate i la alte
specii de Haemophilus ca i la alte bacterii: Streptococcus pneumonaie, Neisseria
meningitidis, Neisseria gonorrhoeae.
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
TRATAMENT
Multe din tulpini sunt sensibile la ampicilina, dei 25% produc lactamaze
sub control plasmidic i din 1980 este cunoscut rezistena la ampicilin prin
modificarea proteinelor de legare a penicilinelor ceea ce determin creterea CMI
pentru toate -lactaminele. Multe din tulpini sunt susceptibile la cloramfenicol.
Importana tratamentului bine deriv din faptul c peste 90% din copiii cu
meningit cu Haemophilus influenzae netratat decedeaz i sunt posibile
implicri ulterioare neurologice i intelectuale.
Infeciile grave sunt tratate parenteral cu ceftriaxon sau cefotaxim.
Tratamentul celorlalte tipuri de infecii este util s se fac sub controlul
antibiogrameii al detectrii beta-lactamazelor.
HAEMOPHILUS DUCREYI
CARACTERE GENERALE
Habitat
Este strict patogen pentru specia uman, gsindu-se uneori n leziunile
bolnavului. Se dezvolt intra- i extracelular, este facultativ anaerob.
Caractere morfologice
Este un bacil scurt, Gram negativ, colorat bipolar, dispus n perechi sau
lanuri paralele.
Caractere de cultur
Crete optim pe medii care au factorul X, pe geloz chocolat cu adaos de
vancomicin i polimixin, pe geloza cu snge de iepure i ser fetal de viel,
incubate la 33-35C i n atmosfer de 10% CO2. Este un germen facultativ
anaerob. Coloniile apar trziu, dup 72 de ore, sunt mici, netede, cenuii,
lucioase, nconjurate de hemoliz beta pe geloza snge.
PATOGENITATE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
IMUNITATE
Exist rspuns imun umoral i celular de scurt durat dar nu exist
imunitate fa de reinfecie.
TRATAMENT
G E N U L G AR D N E R E L L A
GARDNERELLA VAGINALIS
DEFINIIE. NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Este o bacterie prezent n vaginul a 5% din fetele virgine i a 14 69% din
femeile active sexual. Poate fi izolat din flora uretrei anterioare a partenerilor
sexuali ai femeilor cu vaginoz bacterian. A fost izolat rar din flora ano-rectal a
adulilor heterosexuali i a copiilor, din sperma cuplurilor sterile i din orofaringe.
Caractere morfologice
Pe frotiul din cultur aspectul morfotinctorial apare diferit n funcie de
compoziia mediului i vrsta culturii. Din cultura de 24 de ore pe geloz snge
apare ca bacili fini Gram variabili sau cocobacili. Sunt bacterii imobile. Pe agar
Gardnerella vaginalis apare ca bacili scuri, Gram negativi (nu apar forme
filamentoase!) iar pe mediul cu amidon are aspect polimorf, cu corpul bacterian
striat.
n hemocultura de 48 de ore i n cultura tnr de pe mediii cu ser apar
frecvent forme Gram pozitive.
Studiile referitoare la ultrastructura peretelui bacterian au artat c acesta
este similar cu al bacteriilor Gram pozitive cu meniunea c este mult mai subire
pentru c stratul de peptidoglican este mai slab reprezentat.
Pe frotiul efectuat din scurgerea vaginal a femeilor cu vaginoz se
evideniaz aa-numitele clue-cells Gardnerella ader i acoper marginea
celulelor epiteliale care apar ca celule cu margini neclare, cu aspect granular. Sunt
considerate indicatorul cel mai relevant al vaginozei bacteriene.
Alturi de aceste celule cu cuie este prezent pe frotiu flor de asociaie
mixt constnd din:
o Bacili sau cocobacili Gram negativi: Prevotella,
Porphyromonas;
o Bacili sau cocobacili Gram variabili: Gardnerella vaginalis;
o Lactobacili aproape abseni.
Caractere de cultur
Crete pe medii speciale, incubate la 35-37C n atmosf er de 5% CO2.
Tulpinile strict anaerobe trebuie incubate ntr-o atmosfer de 85% N2, 10% H2 i
5% CO2. Mediile trebuie s conin acid folic, acid nicotinic, adenin, biotin,
niacin, tiamin, triptofan, baze purinice i pirimidinice. Nu trebuie s conin
factorul X (hemina) sau factorul V (NAD) ci doar un factor existent n stroma
hematiilor.
Pentru o bun izolare din produsele patologice polimicrobiene, n mediul de
cultur se adaug suplimente alctuite din 2-3 substane selective: acid nalidixic,
amfotericin, colistin, gentamicin.
Este sensibil la polianetol sulfonat de sodiu (anticoagulant) care nu trebuie
s fie prezent n mediile pentru hemocultur.
Dup 24 de ore apar colonii mici cu diametrul sub 0,5 mm, nconjurate de
hemoliz beta pe agar cu snge de om sau de iepure i nehemolitice pe agar cu
snge de berbec. Coloniile sunt mai bine vizibile dup 48 ore de incubare i au
aspecte diferite n funcie de mediul de cultur.
Caractere biochimice i de metabolism
Sunt bacterii aerobe dei exist i tulpini anaerobe. Sunt catalaz, oxidaz,
ureaz i indol negative. Au un metabolism fermentativ lent cu formare de acid
acetic. Pe baza producerii de lipaz, beta-galactozidaz i a hidrolizei hipuratului
de sodiu se pot identifica 8 biotipuri de G. vaginalis dintre care biotipurile 1, 5, 6
sunt cele mai frecvente. Biotiparea este util pentru studiile epidemiologice.
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
TRATAMENT
G E N U L LE G I O N E L L A
DEFINIIE. NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Nu face parte din flora saprofit uman izolarea ei din produsele patologice
umane fiind asociat cu boala. Nu a fost izolat niciodat n pmnt uscat, n apa
de mare sau la animal.
Se dezvolt n apele dulci: lacuri, ruri, noroaie ca i n bazinele i
rezervoarele de ap artificiale, n reeaua de canalizare unde triete n simbioz
cu componenii microbiocenozelor respective. A fost izolat n apa menajer fiind
asociat cu temperatura sczut a apei calde (sub 55C), temperatur insuficient
pentru distrugerea bacteriei.
Poate infecta i se poate replica n organismul protozoarelor care triesc n
bazinele de ap sau n sistemul de alimentare cu ap (Acanthamoeba,
Hartmanella spp.). n interiorul amibelor, nu sunt distruse de enzimele lizozomale
i se replic n fagozom. Legionella supravieuiete n amibe ceea ce i permite s
persiste n natur i s se rspndeasc prin intermediul chisturilor de amibe.
Colonizarea i multiplicarea Legionellei n bazinele de ap artificiale este
favorizat de: temperatura de 25-42C; stagnarea apei; sedimente; prezena
protozoarelor rizopode sau flagelate n bazinele respective.
Caractere morfotinctoriale
Germenii din genul Legionella sunt bacili gram negativi, mici, cu forme
filamentoase n culturile vechi. Se coloreaz greu cu coloraiile obinuite fiind mai
uor de evideniat prin impregnare argentic. n funcie de temperatur, pot avea
sau nu flageli care s le asigure mobilitatea. Sunt nesporulai, necapsulai, strict
aerobi.
Caractere de cultur
Sunt bacterii strict aerobe care cultiv numai pe medii suplimentate cu L-
cistein, sruri de fier, diveri aminoacizi i factori de cretere. Mediul de cultur
trebuie s aib un pH exact de 6,9. Pentru cultivare este foarte bun mediul BCYE
(buffered charcoal yeast extract -cetoglutarat) ai crui componeni i stimuleaz
creterea. Mediile trebuie incubate la 35C n atmosfer mbogit cu CO2.
Crete lent, coloniile apar dup 3-5 zile de la inoculare. Coloniile sunt
rotunde, netede, au luciu rou-albastru-verzui, au caracter filamentos. Jocul luminii
pe suprafaa lor le face s par colonii cu aspect neregulat.
Caractere biochimice i de metabolism
Sunt bacterii catalaz pozitive, slab oxidaz pozitive. Sunt incapabile s
descompun prin fermentare sau oxidare zaharurile, nu produc nitrat-reductaz i
nici ureaz. Sunt strict aerobe i necesit medii mbogite pentru cultivare.
Rezistena fa de agenii fizici, chimici i biologici
Sunt relativ rezistente n mediul extern. Rezist:
- un an n apa de robinet, la 4C;
- patru luni n apa distilat;
- 30 minute la pH de 4,2;
- n apele reziduale clorinate din sistemul de alimentare cu ap
la o concentraie sczut de clor.
Sunt sensibile la aciunea dezinfectantelor uzuale: fenoli, compui
cuaternari de amoniu i a celor pe baz de clor.
Sunt rezistente la peniciline i la unele cefalosporine prin producere de
beta-lactamaz. Sunt sensibile la macrolide, flurochinolone.
Sunt sensibile la uscciune. n rezervoarele de ap, protozoarele rizopode
i ciliate le inger fr a le distruge, protejndu-le n mediile srace nutritiv ca i de
uscciune.
Structura antigenic
Legionella pneumophila are urmtoarele antigene:
- lipopolizaharidul (LPS), bogat n acizi grai, are activitate similar cu
endotoxina bacteriilor gram negative. Poriunea sa polizaharidic constituie
antigenul O pe baza cruia s-au identificat 15 serogrupe de Legionella
pneumophila din care serogrupul 1 este divizat prin anticorpi monoclonali n
subtipuri;
- proteina major a membranei externe (MOMP - major outer
membran protein) are specificitate de specie dar este comun tuturor serogrupelor
de Legionella pneumophila;
- antigenul flagelar H are specificitate de tip.
Au fost identificate 50 serogrupe de Legionella pneumophila dintre care
serogrupele 1, 4, 6 sunt n principal cauzatoare de infecii umane.
Rspuns imun
Imunitatea este asigurat n principal de imunitatea mediat celular fapt
care explic de ce bacteria a fost izolat mai frecvent de la pacieni
imunodeprimai. Limfocitele T activate produc limfokine care stimuleaz activitatea
antimicrobian a macrofagelor mpiedicnd astfel replicarea intracelular a
bacteriei.
Imunitatea mediat umoral joac un rol secundar n aprarea anti
Legionella. Anticorpii au rol modest n imunitate, sunt anticorpi opsonizani. Apar la
7 zile de la debutul bolii, ating nivel maxim dup o lun, se menin 2-3 luni dup
care dispar.
Caractere de patogenitate
Sunt bacterii facultativ intracelulare. Tulpinile de Legionella pneumophila au
diferite grade de virulen n funcie de prezena sau absena unor structuri. Sunt
patogene prin:
- glicocalix un nveli dispus distal peretelui bacterian prezent la
unele tulpini (slime). Prin structura sa fibrilar asigur protecia bacteriei.
Funcioneaz ca ligand la mucoasa respiratorie sau la suprafee inerte (mase
plastice, cauciuc, sticl, metal);
- flagelii care mediaz aderena de celulele pulmonare ca prim pas
n iniierea infeciei. Tulpinile care nu dispun de flageli nu cauzeaz mbolnvire;
- endotoxina lipopolizaharidic;
- exotoxine- insuficient studiate;
- proteaze.
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
TRATAMENT
G E N U L M OR AX E L L A
DEFINIIE. NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Germenii din genul Moraxella colonizeaz mucoasele omului i animalelor
fiind localizai n special n tractul respirator superior.
n primul an de via un procent de 28-100% din copii vor avea tractul
respirator colonizat cu M. catarrhalis, procent care scade la 1-10% la aduli.
Transmiterea se realizeaz pe cale aerogen prin picturi naso-faringiene.
M.osloensis este o specie comensal a tractului genital.
Caractere morfotinctoriale
Speciile de Moraxella sunt cocobacili gram negativi, dispui n diplo sau n
lanuri scurte, asemntori cu Neisseriile. Nu prezint cili, spor sau capsul.
M.osloensis poate mbrca aspectul de bacili foarte subiri, uneori cu aspect
filamentos.
Caractere de cultur
Strict bacterii strict aerobe. Sunt pretenioase nutritiv necesitnd medii
mbogite, geloz ocolat i o temperatur de incubare de 35C. Moraxella
catarrhalis este nepretenioas, crete i pe medii simple la temperatura camerei.
Coloniile sunt mici, de tip S, nehemolitice pe geloz snge.
Pe mediul cu ser coagulat Moraxella lacunata formeaz colonii S care se
afund n mediu datorit aciunii enzimelor proteolitice.
Caractere biochimice i de metabolism
Speciile din genul Moraxella sunt azaharolitice, oxidaz i catalaz pozitive.
Moraxella catarrhalis este azaharolitic: nu descompune zaharoza,
glucoza, maltoza i lactoza. Este oxidaz pozitiv, catalaz pozitiv, produce DN-
az, reduce nitraii/nitriii, hidrolizeaz tributirina.
Structura antigenic
Componentele antigenice ale tulpinilor de Moraxella catarrhalis fa de care
se formeaz anticorpi sunt: proteinele peretelui celular, lipooligozaharidele i
proteinele membranei externe.
Rspuns imun
Anticorpii fa de Moraxella catarrhalis se formeaz treptat, cu vrsta, titrul
de IgG crescnd pe durata copilriei. Rspunsul imun fa de proteinele
membranei externe aparin subclasei IgG3.
Caractere de patogenitate
Cu toate c este considerat n continuare ca germen oportunist, Moraxella
catarrhalis posed o endotoxin de natur lipopolizaharidic asemntoare cu cea
a speciilor de Neisseria care pare a avea rol n procesul patologic. Unele tulpini de
Moraxella catarrhalis sunt patogene prin:
- pili/fimbrii care asigur aderena la epiteliul respirator
- producerea unei structuri proteice care confer rezisten fa de
aciunea complementului
- exprimarea unor proteine specifice fixatoare de fier care acioneaz ca
receptori pentru transferin i lactoferin.
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
TRATAMENT
G E N U L CO RY NE B AC TE R I U M
DEFINIIE, NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Habitatul este strict uman, Corynebacterium diphtheriae fiind prezent n
tractul respirator superior uman la 3-5% din persoanele sntoase, precum i la
nivel tegumentar.
Caractere morfotinctoriale
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
Difteria este o toxiinfecie, iar fixarea toxinei pe celulele "int" este practic
ireversibil, astfel nct decizia instituirii tratamentului trebuie luat rapid.
Diagnosticul bacteriologic este util numai pentru confirmarea suspiciunii de
difterie i n scopuri epidemiologice, deoarece tratamentul specific se instituie fr
ntrziere, fr a atepta finalizarea diagnosticului bacteriologic.
Diagnosticul de laborator al difteriei necesit evidenierea unei tulpini
toxigene de Corynebacterium diphtheriae.
Prelevatele prelucrate de la purttori sunt secreia faringian, nazal
recoltate cu cte un tampon i nsmnate n mediul de mbogire OCST.
De la bolnav se ndeprteaz falsa membran i se terge suprafaa
subiacent (n falsa membran bacilii nu sunt viabili) cu 3 tampoane: unul pentru
frotiu, unul pentru mediul de mbogire i unul pentru mediul Loeffler.
Examinarea frotiului realizat din produsul patologic colorat Gram i cu
albastru de metil este rareori concludent dar poate ridica suspiciunea de difterie
dac se evideniaz bacili gram pozitivi cu morfologie i dispoziie spaial
asemntoare bacilului difteric.
nsmnarea trebuie fcut rapid, pe un mediu de mbogire i pe mediul
Loeffler. Pe acesta din urm, bacilul difteric crete repede fiind foarte important
examinarea culturilor la 6, 12 i 18 ore. Diagnosticul poate fi realizat mai rapid
atunci cnd se obin culturi din care, dup circa 4-6 ore, se obin frotiuri care se
coloreaz imunofluorescent.
Repicarea coloniilor suspecte se face pe medii mbogite, coninnd telurit
pentru a inhiba flora de asociaie. Identificarea tulpinilor de Corynebacterium
diphtheriae ine cont de caracterele culturale i biochimice amintite mai sus.
Evidenierea producerii de exotoxin de ctre tulpina de Corynebacterium
diphtheriae izolat se face prin:
- inoculare la animal de laborator. Se inoculeaz unui cobai, subcutan, o
suspensie de bacil difteric. Dac tulpina este productoare de exotoxin animalul
moare n 48-72 de ore prezentnd un edem alb, moale, gelatinos la locul
inoculrii, cu adenopatie satelit i hipertrofia cu congestie hemoragic a
capsulelor suprarenale.
Inocularea toxinei nu produce modificri locale ci doar modificrile la
distan, fiind de asemenea letal.
- reacia clasic de imunoprecipitare, testul Elek;
- toxicitatea pe linii de celule Vero celulele eucariote vor
muri sub aciunea toxinei elaborat de tulpina de Corynebacterium
diphtheriae;
- reacia de amplificare genic (PCR) rezultatul poate fi
obinut n 6 ore de la cultivarea bacilului difteric.
TRATAMENT
G E N U L AR C AN O B AC TE R I U M
DEFINIIE, NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Arcanobacterium haemolyticum face parte din flora comensal a tractului
respirator superior.
Caractere morfotinctoriale
Arcanobacterium haemolyticum este un bacil gram pozitiv, subire,
neregulat calibrat, cu dispoziie n V. Pe frotiul din culturi vechi, prin fragmentarea
bacililor, germenul apare sub form de coci mici, neregulai. Nu prezint cili.
Caractere de cultur
Crete greu pe medii uzuale. Cultiv pe medii cu snge sau ser sanguin.
Sunt germeni aerobi, facultativ anaerobi creterea fiind favorizat de atmosfera
suplimentat cu CO2 i de o temperatur de incubare de 37C.
Dup 24 de ore de incubaie coloniile sunt mici, punctiforme, rotunde,
untoase, nconjurate de o zon ngust de hemoliz beta. La 48 de ore coloniile
sunt mai mari, de aproximativ 1 mm diametru.
Caractere biochimice i de metabolism
Sunt germeni catalaz negativi, descompun fermentativ carbohidraii cu
eliberare de acid din glucoz, galactoz, zaharoz, fructoz, lactoz, maltoz,
dextrin. Nu elibereaz acid din arabinoz, xiloz, ramnoz, celobioz, melibioz,
zaharoz, rafinoz, dulcitol, glicerol, sorbitol, inozitol. Nu hidrolizeaz esculina,
cazeina i gelatina, nu produce indol i ureaz. Majoritatea tulpinilor reduc nitraii.
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
TRATAMENT
Cel mai eficient antibiotic este eritromicina.
G E N U L E RY SI P E LO TH R I X
DEFINIIE, NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Este o bacterie larg rspndit n natur, prezent mai ales n materiile
organice aflate n descompunere, n gunoiul de grajd. A fost izolat ca i bacterie
comensal sau patogen de la o mare varietate de animale, principalul rezervor
fiind porcul. Gazdele naturale (crustacee, peti, psri, mamifere) contamineaz
solul, apele de suprafa i reziduale.
Caractere morfotinctoriale
Este un bacil fin, gram pozitiv, nesporulat, necapsulat, neciliat, cu tendin
de cretere filamentoas. La coloraia gram se poate decolora uor ceea ce face
ca pe frotiu s apar gram negativ. Este dispus izolat, n perechi sau lanuri
scurte, de multe ori fiind confundat cu Listeria.
Caractere de cultur
Este facultativ anaerob i carboxifil n primocultur, aerob prin subcultivare,
pretenios nutritiv. Crete lent pe geloza snge sau pe geloza ocolat, n
atmosfer mbogit cu 5-10% CO2, la 35-37C. Poate crete pe medii cu telurit
de potasiu coloniile fiind mici i negre.
Crete sub forma coloniilor de tip S, mici, rotunde, convexe, lucioase,
transparente. Pe geloz cu snge de oaie produce hemoliz de tip . Creterea
este mult mbuntit dac se adaug glucoz, ser de cal, acid oleic n
compoziia mediului de cultur.
n subculturi poate prezenta colonii R, mari, plate, cu contur neregulat.
Caractere biochimice i de metabolism
Prezint o slab activitate fermentativ. Nu produce catalaz, oxidaz,
ureaz, indol, nu reduce nitraii, nu crete pe mediul cu citrat. Nu descompune
esculina. Pe mediu TSI fermenteaz glucoza, lactoza i produce H2S.
Rezistena fa de agenii fizici, chimici i biologici
Este un germen foarte rezistent, n form uscat poate persista civa ani.
Rezist la srare, afumare, acidifiere. Este distrus prin fierbere.
Erysipelothrix rhusiopathie este rezistent fa de aminozide, biseptol,
polimixine, glicopeptide, inclusiv fa de vancomicin. Prezint sensibilitate fa de
penicilina G care constituie de altfel antibioticul de elecie n tratament.
Structura antigenic
Bacteria prezint trei antigene: 2 termolabile i unul termostabil. Pe baza
structurii antigenice au fost identificate 26 serotipuri notate cu cifre arabe. Tulpinile
care nu reacioneaz cu serurile imune cunoscute au fost incluse n serotipul N.
Rspuns imun
Anticorpii umorali care apar n cursul bolii nu contribuie la confirmarea
diagnosticului serologic al erisipeloidului Rosenbach.
Caractere de patogenitate
Erysipelothrix rhusiopathie devine patogen prin multiplicare i invazivitate.
Ca factori ai virulenei prezint:
- adezina de suprafa cu proprieti antifagocitare;
- hialuronidaza;
- neuraminidaza.
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
G E N U L LI S TE RI A
DEFINIIE, NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Este prezent peste tot n natur: la nivelul solului, plantelor, animalelor i
omului. Infecteaz animale domestice (mai ales ovine) i slbatice, psri, reptile,
peti, crustacee. Poate fi izolat din alimente, cu precdere din brnzeturi.
Caractere morfotinctoriale
Listeria monocytogenes este un bacil gram pozitiv, necapsulat, nesporulat.
Prezint flageli peritrichi n special la temperatura de 20C.
n culturi tinere are aspect pleomorf: forme cocoidale, cocobacilare i
bacilare pleomorfismul fiind i mai accentuat n culturi btrne. Poate fi dispus n
perechi sau lanuri scurte.
Pe frotiul din produs biologic poate fi dispus izolat, intra- sau extra-celular.
Caractere de cultur
Crete pe medii uzuale sau complexe, speciale, suplimentate cu snge,
glucoz, lichid de ascit, n atmosfer de 5-10% CO2 sub form de colonii de tip S,
mici, rotunde, convexe, transparente, n pictur de rou. Pe geloza snge
coloniile sunt nconjurate de o zon de hemoliz de tip , discret.
Este o bacterie aerob, facultativ anaerob care se multiplic la temperaturi
cuprinse ntre 3-47C. De i temperatura optim de dezvoltare este 20-30C se
poate dezvolta i la 2C, n culturile iniiale, temperatura sczut favoriznd
multiplicarea Listeriei. Cultura degaj un miros de lapte acidulat.
Listeria monocytogenes exprim mobilitatea numai la 25C i o reprim la
37C.
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
TRATAMENT
DEFINIIE, NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Germenii din genul Nocardia sunt rspndii ubicuitar ca saprofii ai solului,
apei dulci sau marine i ai materiilor organice n descompunere.
Caractere morfotinctoriale
Nocardia este un germen gram variabil (frecvent gram pozitiv), care pe
frotiul din produs patologic sau din cultur ca i pe preparatele de esut apar ca
filamente subiri, ramificate, care se fragmenteaz n cursul manipulrii dnd
natere la forme bacilare sau cocoide.
Sunt slab acido-alcoolo-rezistente. Pot fi colorate cu metoda Ziehl-Neelsen
cu condiia s nu se insiste pe timpul de decolorare cu alcool acidulat.
Caractere de cultur
Sunt greu cultivabile din urmtoarele considerente:
- n produsele patologice pstrate prin refrigerare nocardiile i pierd
viabilitatea;
- n esuturi nocardiile pot suferi alterri structurale i funcionale care
prelungesc timpul de adaptare al bacteriei la condiiile de mediu;
- flora de asociaie invadeaz mediul de cultur, lucru valabil mai ales
pentru sput; decontaminarea chimic i fluidifierea sputei omoar nocardiile.
Se pot cultiva pe medii cu infuzie de cord, infuzie cord-creier, agar
Sabouraud glucozat, agar snge, agar ocolat sau Loewenstein dac prelevatele
nu sunt contaminate.
Pentru prelevatele cu flor de asociaie se folosesc medii selective (agar
DST Oxoid, agar BCYE Oxoid sau Merck).
Mediile se incubeaz aerob, la 37C. Coloniile apar dup 48 de ore, sunt
mici, nconjurate de o discret zon de hemoliz beta (N.brasiliensis,
N.otitidiscaviarum) sau de hemoliz alfa.
Nocardiile formeaz hife vegetative ramificate care cresc pe suprafaa i n
profunzimea mediilor agarizate. Din aceast cauz, dup 3-4 zile coloniile devin
aderente de mediu, mai mari, netede sau granulare, neregulate, ncreite.
Unele specii de Nocardia produc pigment:
- carotenoid care coloreaz colonia n galben, portocaliu, roz, rou;
- difuzibil care coloreaz colonia i mediul de cultur de la glbui la
brun.
n mediile lichide Nocardia formeaz un depozit membranos lsnd mediul
clar i o pelicul superficial groas, uscat, pigmentat pe care se dezvolt hife
aeriene ce se extind pe pereii tubului.
Dac dup o incubare de 48 de ore mediul de cultur nsmnat rmne
steril, incubarea de prelungete la 14 zile la temperatura de 37C sau la 21 de z ile
la 25C pentru a permite adaptarea microorganismulu i la mediul de cultur oferit.
Caractere biochimice i de metabolism
Nocardia este sensibil la aciunea lizozimului, descompune oxidativ unele
zaharuri. Pentru identificarea speciilor de Nocardia se utilizeaz o serie de teste:
- hidroliza cazeinei, tirozinei, xantinei, hipoxantinei, gelatinei,
amidonului;
- eliberarea de acid din glucoz i ramnoz;
- producerea de arilsulfataz;
- creterea la temperaturi difereniate.
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
TRATAMENT
G E N U L B AC I L LU S
DEFINIIE, NCADRARE
Germenii din genul Bacillus sunt germeni ubicuitari datorit faptului c sporii
le confer o rezisten crescut la factorii de mediu. Se gsesc n sol (principalul
rezervor), n apa mrii, n apa dulce, pe plante. Se gsesc de asemenea n
produsele alimentare i medicamentoase, chiar i n cele care poart inscripia
sterilizate, datorit termorezistenei sporilor bacterieni.
Germenii din genul Bacillus se prezint sub form de bacili lungi, sporulati,
Gram pozitivi, cei mai muli mobili, cu cili peritrichi, cu sau fr capsul. Sunt
aerobi facultativ anaerobi, oxidaz pozitivi i majoritatea catalaz pozitivi.
Genul aparine familiei Bacillaceae, este foarte heterogen, cuprinde un
numr foarte mare de specii (cel puin 36), dintre care n patologie sunt mai
frecvent implicate B. anthracis, B. cereus i B. subtilis.
Un mod artificial dar convenabil de organizare a membrilor genului Bacillus
este acela de ncadrare n grupe ecofiziologice cum ar fi:
- specii alcalifile: B.alcalophilus, B.pasteurii care au pH-ul optim de
dezvoltare de 8 sau pentru unele tulpini chiar de 11;
- specii halofile: B.pantothenticus, B.pasteurii. Unele tulpini cresc la
concentraii de 10% NaCl;
- specii psichrofile: B.globisporus, B.insolitus, B.marinus, B.megaterium,
B.polymyxa;
- specii termofile, cu limita temperaturii maxime de 65C: B.
acidocaldarius, B. stearothermophilus;
- specii care reduc nitriii n nitrai: B.azotoformans, B.cereus,
B.licheniformis, B.pasteurii, B.stearothermophilus;
- specii fixatoare de azot: B.macerans, B.polymyxa;
- specii productoare de antibiotice: B.brevis (gramicidina, tyrotricina),
B.cereus (cerexin, zwittermicina), B.licheniformis (bacitracina), B.polymyxa
(polimixina, colistina), B.subtilis (polimixina, subtilina, mycobacilina), B.pumilus
(pumulina), B.laterosporus (laterosporina). Antibioticele secretate de diferite specii
din genul Bacillus au un spectru larg de activitate antimicrobian. Bacitracina,
pumulina, laterosporina, gramicidina sunt active pe bacterii Gram pozitive.
Colistina i polimixina au eficien asupra bacteriilor Gram negative n timp ce
mycobacilina i zwittermicina sunt antifungice. Producerea de antibiotic este
nsoit de oprirea creterii formei vegetative i a sporulrii;
- specii patogene pentru insecte i larve: B.larvae, B.popilliae,
B.lentimorbis, B. thuringiensis. B.larvae (pentru albine), B.popilliae (pentru
crbui, gndaci), B.lentimorbis (pentru crbui, gndaci) sunt patogeni invazivi,
sporuleaz n larvele insectelor, sunt catalaz negativi, nu cresc n bulion nutritiv,
necesit tiamin ca factor de cretere. B.thuringiensis produce cristale proteice
parasporale toxice pentru Lepidoptera, poate sporula n larvele insectelor dar i pe
plante sau n sol. Sporii unor specii entomo-patogene sunt utilizai sub form de
pulbere care se rspndete pe suprafaa apelor stttoare pentru a distruge
larvele de nari.
- specii patogene pentru animale: B. anthracis i B.cereus. B.alvei,
B.megaterium, B.coagulans, B.laterosporus, B.subtilis, B.sphaericus, B.circulans,
B.brevis, B.licheniformis, B.macerans, B. thuringiensis, B.pumilus au fost, rareori,
izolai din infecii umane.
Genul Bacillus cuprinde dou specii cu importan medical: B. anthracis,
agentul cauzal al antraxului, i B. cereus, agentul cauzal al unor toxiinfecii
alimentare.
Celelalte specii de Bacillus (se numesc antracoizi) pot cauza o mare
varietate de procese infecioase fiind n prezent recunoscute tot mai des ca
patogeni umani.
Crbunele este cunoscut nc din antichitate. Din 1780, Chabert a descris
boala la animal insistnd asupra culorii negre a organelor provenite de la animalul
bolnav. n 1785, Chaussier a observat pustula maligna la om. n 1825,
Barthelemy a reuit s transmit infecia la animalul sntos prin inoculare de
snge provenit de la bolnav. n anii 1850, Davaine descoper n sngele
animalelor bolnave bastonae mici pe care dup 13 de ani (1863) le identific
drept ageni etiologici ai bolii. n 1876 Koch reuete s cultive bacilul crbunos
cruia i descrie sporii iar n 1881, Pasteur demonstreaz rolul etiologic al bacteriei
i eficiena unui vaccin constituit dintr-o tulpin cu virulena atenuat. Proprietile
toxigene ale bacilului crbunos au fost recunoscute abia n 1954.
BACILLUS ANTHRACIS
CARACTERE GENERALE
Habitat
Bacillus anthracis este agentul etiologic al unei zoonoze care afecteaz
ierbivorele (vite, oi, cai, catri, capre). Bacillus anthracis se gsete n esuturile i
umorile animalelor bolnave. Este eliminat n mediu prin dejeciile acestora
contaminnd elementele de mediu extern. Pe sol condiiile fiind nefavorabile
germenul sporuleaz, supravieuind astfel zeci de ani. Sporii sunt extrem de
rezisteni, rezervorul principal pentru B. anthracis fiind reprezentat de sol.
Caractere morfotinctoriale
Sunt bacili Gram pozitivi, mari (3-5 m lungime/1-1,2 m grosime), cu
capetele tiate drept sau uor concave, imobili. Pe frotiurile din esuturile
animalelor bolnave apar dispui n lanuri scurte sau n perechi nconjurai de o
capsul unic. Pe frotiurile din cultur bacilii sunt dispui n lanuri paralele i sunt
sporulai. Sporul, format numai n prezena oxigenului, are diametrul egal sau mai
mic dect grosimea bacilului, este oval i este dispus central.
Caractere de cultur
Este o bacterie aerob facultativ anaerob, nepretenioas nutritiv, se
dezvolt pe medii simple, la 35-37C. Limitele de temperatu r la care se poate
dezvolta sunt foarte largi: 12-40C. Sporularea are loc la temperatura camerei.
Pe mediul cu agar formeaz colonii relativ mari (2-3 mm diametru), alb-
cenuii, de tip R, rugoase. Examinate la stereomicroscop, periferia coloniilor are
aspect de uvie de pr mpletit, aspect ce a fost denumit cap de medusa.
Pe geloza snge nu produce hemoliz.
n bulion, las mediul limpede i formeaz flocoane care se depun la fundul
eprubetei.
Din punct de vedere genotipic i fenotipic B. anthracis este asemntor cu
B.cereus i B. thuringiensis de care se poate diferenia pe baza caracterelor
cuprinse n tabelul XII.
Caractere biochimice
Este o bacterie catalaz pozitiv. Are activitate proteolitic, lichefiaz
gelatina dar nu produce ureaz. Fermenteaz unele zaharuri (glucoza, maltoza,
zaharoza). Produce acetil-metil-carbinol (reacia Vogues-Proskauer pozitiv)
proprietate util n clasificarea speciilor de Bacillus. Reduce nitraii, hidrolizeaz
cazeina, este indol negativ.
Rezistena fa de factori fizici i chimici
Rezistena formelor vegetative este similar cu a celorlalte bacterii, fiind
distruse de exemplu n 30 de minute la 60C c ldur umed.
Sporii sunt deosebit de rezisteni la aciunea acizilor, dezinfectantelor,
radiaiilor, temperaturilor nalte (rmn viabili i dup fierbere timp de cteva ore).
Supravieuiesc cteva sptmni n dezinfectantele pe baz de fenol. La
temperaturi de -5C pot rezista pn la 10 ani. S-a reuit germinarea sporilor
pstrai la ntuneric i la temperatura camerei dup mai mult de 30 ani.
Sunt distrui la temperatura de fierbere n circa 10 minute i prin
autoclavare.
n frotiuri fixate i colorate nu i pierd viabilitatea.
Structur antigenic
Bacillus anthracis posed diverse structuri antigenice:
o componente ale complexului exotoxinic (componenta B):
Exotoxina este determinat plasmidic (plasmidul pOX1) const dintr-un amestec
de trei proteine imunogene: factorul edematos i factorul letal care formeaz
componenta A a toxinei; antigenul protectiv (componenta B), capabil s induc
producerea de anticorpi.
o antigenul capsular polipeptidic (antigenul K): Toate tulpinile
virulente formeaz un singur tip de antigen polipeptidic capsular (poli-D-glutamat).
Producerea antigenului capsular este codificat de plasmida pOX2 a crei transfer
la tulpini necapsulate este posibil prin transducie.
o antigenul somatic polizaharidic din peretele celular, responsabil
de reacia de precipitare n inel care are loc n prezena anticorpilor specifici
(reacia Ascoli).
Rspuns imun
Infecia cu baciIul antraxului este urmat de apariia de anticorpi fa de
componenta B a exotoxinei, anticorpi care mpiedic endocitarea factorilor
edematogen i letal. n felul acesta este suprimat activitatea toxic a complexului.
Apar de asemenea anticorpi i fa de polipeptidul capsular.
Caractere de patogenitate
Este patogen prin virulen (capsula) i prin toxigenez (exotoxina
crbunoas).
Formarea capsulei este codificat plasmidic (plasmidul pOX2); are
proprieti antifagocitare, protejeaz microorganismul de anticorpii litici i pare s
aib un rol important n patogenitate n primele faze ale constituirii focarului
infecios.
n fazele avansate i terminale ale bolii patogenitatea tulpinii de B.anthracis
este asigurat de exotoxina crbunoas. Producerea exotoxinei este mediat de o
plasmid termolabil, pOX1, care determin formarea a trei proteine termolabile,
antigenic distincte, componente ale exotoxinei, grupate astfel:
- Componenta A alctuit din 2 pri cu efecte distincte:
o factorul edematogen (FE; factorul I): este o adenilat-ciclaz a
crei efecte biologice includ edemul local i inhibiia funciilor polimorfonuclearelor,
procese mediate de AMPc.
o factorul letal (FL; factorul III) este responsabil de efectele letale
ale exotoxinei.
- Componenta B a exotoxinei este factorul (antigenul) protector (AP;
factorul II). Se numete antigen protector pentru c induce experimental formarea
de anticorpi antitoxici protectori la cobai. Iniiaz ptrunderea factorului letal i a
celui edematogen n celule ceea ce determin moartea acestora, mecanismul fiind
ns necunoscut.
Pierderea plasmidelor pOX1 sau pOX2 care codific producerea exotoxinei
respectiv formarea capsulei atrage dup sine pierderea patogenitii.
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
TRATAMENT
BACILI ANTRACOIZI
Bacillus cereus
Este o bacterie prezent n mediul extern, contaminnd orezul, legumele,
fructele uscate, brnzeturile. Este recunoscut ca agent etiologic al toxiinfeciilor
alimentare ncepnd din anul 1955.
Caracterele microscopice i de cultivare sunt asemntoare cu ale
B.anthracis cu meniunea c este mobil i pe medii cu snge produce -hemoliz.
Izolarea din prelevatele polimicrobiene se face pe mediul cu manitol,
glbenu de ou, polimixin i rou fenol, pe care se poate evidenia absena
fermentrii manitolului i producerea de lecitinaz.
Este implicat n toxiinfecii alimentare iar la pacieni imunodeprimai poate
cauza infecii ale plgilor, pneumonii, pleurezii, endocardite, septicemii, meningite,
infecii respiratorii, mionecroze i ocazional infecii oculare. Antibioticul de elecie
este vancomicina, dei B.cereus este sensibil la o gam larg de antibiotice.
Poate cauza 2 tipuri de toxiinfecii alimentare datorit faptului c bacilul
produce 2 toxine diferite (una termostabil i una termolabil) fiind necesar o
contaminare masiv a alimentului (peste 105 germeni/gram aliment):
1. toxiinfecie alimentar care are o perioad scurt de incubaie
(1-6 ore) dup care apar greuri, vomismente, colici abdominale, eventual diaree,
simptome care persist 8-10 ore. Este cauzat de enterotoxina termostabil
preformat n aliment. Din punct de vedere clinic seamn mult cu toxiinfecia
alimentar stafilococic.
2. toxiinfecie alimentar cu perioad lung de incubaie (8-16
ore), cu colici abdominale, diaree apoas, greuri, manifestri care dureaz 12 ore.
Manifestrile clinice se datoreaz unei enterotoxine termolabile care activeaz
adenilat-ciclaza intestinal ceea ce determin creterea secreiei intestinale.
Seamn mult cu toxiinfecia alimentar cauzat de Clostridium perfringens.
Bacillus subtilis
Are acelai habitat ca i B.cereus. Cuprinde bacili mici, Gram pozitivi,
mobili, dispui izolat sau n lanuri scurte. Coloniile pe mediul solid sunt mari, de
tip R, ncojurate de -hemoliz.
Cauzeaz toxiinfecii alimentare, bacteriemie, septicemie, endocardit,
infecii respiratorii, tratamentul eficace fiind cel cu vancomicin, clindamicin,
imipenem.
G E N U L L AC TO B AC I L L US
DEFINIIE, NCADRARE
Genul Lactobacillus cuprinde bacili gram pozitivi, fini, alungii sau polimorfi.
Sunt germeni nesporulai i n cea mai mare parte imobili. Nu posed catalaz iar
sensibilitatea fa de oxigenul atmosferic este variabil.
Foarte rar este patogen fiind izolat din endocardite sau din supuraii bucale
sau pulmonare
Sunt recunoscute 56 de specii de Lactobacillus clasificate n 3 grupe:
- obligat heterofermentative
- facultativ heterofermentative
- obligat homofermentative
CARACTERE GENERALE
Habitat
Unii lactobacili fac parte din flora normal a
- cavitii bucale: L. acidophilus, L. casei, L. fermentum, L.
salivarius;
- intestinului: L. acidophilus, L. fermentum, L. salivarius, L. reuteri;
- vaginului (bacil Dderlein): L. acidophilus, L. casei, L. fermentum,
L. cellobiosus, L. jensenii.
Sunt prezeni n produsele lactate fiind utilizai pe scar larg n industria
agro-alimentar datorit puterii lor de fermentare.
Caractere morfotinctoriale
Sunt bacili mari, Gram pozitivi, uneori dispui n lanuri. Nu prezint spori i
nici cili.
Caractere de cultur
Cultiv n condiii anaerobe sau microaerofile i n prezena CO2, la pH 5-6.
Cultiv lent, pe medii care conin diferii factori de cretere: extract de carne i de
levur, pepton, carbohidrai fermentabili. Incubarea mediilor nsmnate se face
fie n anaerobioz fie n atmosfer de 90% N2 i 10% CO2. Temperatura de
incubare este de 37C pentru tulpinile umane i de 28-30C pentru tulpinile
saprofite din alimente. Coloniile apar dup 2-3 zile de incubare, sunt mari, rotunde,
convexe, albe.
Caractere biochimice i de metabolism
Este catalaz i oxidaz negativ. Descompun zaharurile fermentativ. Multe
specii din genul Lactobacillus fermenteaz glucoza n lactoz. Descompun
glucoza cu eliberare de acid lactic.
Diferenierea speciilor cu semnificaie clinic se face pe baza unor teste
care urmresc creterea la diferite temperaturi, la concentraia de 4% NaCl,
fermentarea carbohidrailor.
PATOGENIE. BOALA LA OM
Multe specii de Lactobacillus fac parte din flora vaginal normal. Prin
capacitatea lor de a elibera acid lactic din glucoz creeaz un pH acid care inhib
creterea majoritii microorganismelor implicate etiologic n infecii uro-genitale.
Lactobacillus este n general nepatogen pentru om, cauznd rareori infecii.
Foarte rar este patogen fiind izolat din endocardite, din supuraii bucale sau
pulmonare, meningite, infecii ale tractului urinar. n aceste cazuri este necesar
identificarea corect i argumentarea semnificaiei clinice a izolatului.
TRATAMENT
DEFINIIE, NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Germenii din genul Actinomyces fac parte din microbiota cilor aero-
digestive superioare. Reprezint 20% din bacteriile salivei i limbii, 35% din
germenii crevaselor gingivale i 40% din cei ai plcii dentare. Cele mai frecvente
specii componente ale microbiotei orofaringiene sunt: A. israelii, A.naeslundii,
A.viscosus, A. odontolyticus i A. meyeri. n criptele amigdaliene se identific A.
israelii, A.naeslundii.
Sunt de asemenea, n cantiti mai mici, componente ale microbiotei
tractului genito-urinar i digestiv.
Caractere morfotinctoriale
Sunt bacili Gram pozitivi polimorfi:
- pe frotiurile din cultura pe geloz snge apar ca filamente
ramificate care prin fragmentare dau natere la bastonae
mciucate cu aspect difterimorf sau forme cocobacilare;
- pe frotiul din produs patologic apar ca filamente Gram pozitive
aezate radial. Capetele lor prezint formaiuni piriforme Gram
negative care nconjoar filamentele ca o coroan.
Caractere de cultur
Cultiv pe agar- infuzie cord-creier- snge incubat
- anaerob, la 37C, timp de 21 de zile pentru speci ile anaerobe;
- aerob, la 25, 30 i 37C , timp de 14 zile pentru speciile aerobe
Cresc pe medii cu snge sau ser incubate n anaerobioz i n prezena
CO2. Coloniile apar lent, dup 3-4 zile.
Coloniile sunt mari, pigmentate, rugoase, aderente de mediu.
Caractere biochimice i de metabolism
Sunt catalaz, indol, ureaz, lipaz i DN-az negativi, atac zaharurile
fermentativ (glucoza, zaharoza, lactoza, maltoza).
Rezistena fa de agenii fizici, chimici i biologici
Actinomicetele sunt sensibile la aciunea antibioticelor beta-lactamice,
macrolidelor, vancomicinei, tetraciclinelor, cloramfenicolului. Sunt rezistente la
aminoglicozide.
Caractere de patogenitate
Microorganismele din genul Actinomyces nu sunt virulente. Ele necesit o
bre n integritatea tegumentului sau a membranelor mucoase, prezena
esuturilor devitalizate pentru a invada structurile profunde cauznd mbolnvire.
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
TRATAMENT
G E N U L M OB I LU N C U S
G E N U L E U B AC TE R I UM
G E N U L P RO PI O N I B AC TE R I UM
G E N U L CL O S TR I DI U M
DEFINIIE. NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Sunt prezeni n intestinul animalelor i al omului, de unde, eliminai cu
materiile fecale ajung pe sol. Datorit endosporilor supravieuiesc timp ndelungat,
unele specii chiar multiplicndu-se n sol.
Caractere morfotinctoriale
Sunt bacili Gram pozitivi sau Gram variabili, cu capetele rotunjite, cu corpul
bacterian deformat de endosporul mai mare dect corpul bacteriei. Unele specii
prezint capsul.
Caractere de cultur
Pot fi cultivate pe medii uzuale, incubate la 37C, n anaerobioz. Cresc
lent, sub form de colonii S (unele specii au caracter invaziv). Pe geloza snge
majoritatea speciilor produc hemoliz beta.
Identificarea speciilor din genul Clostridium se face pe baza caracterelor
biochimice i de metabolism: fermentarea zaharurilor i identificarea metaboliilor
finali rezultai, elaborarea de enzime proteolitice, coagularea i acidifierea laptelui
turnesolat etc.
Rezistena la ageni fizici, chimici, biologici
Formele vegetative de Clostridii nu sunt foarte rezistente n mediul extern n
timp ce sporii au o rezisten marcat (tabel XIII)
Tabel XIII. Rezistena sporilor de Clostridium la aciunea diferiilor ageni
fizici i chimici
Agentul fizic/chimic Timp de supravieuire
fierbere 5 minute
105C, c ldur umed 30 minute
glutaraldehida, dezinfectani pe baz de halogeni 2-3 ore
formaldehid, derivai fenolici 4-5 zile
mediul extern, ferii de raze solare,de umezeal zeci de ani
C L O S TR I DI U M TE T AN I
DEFINIIE, NCADRARE.
CARACTERE GENERALE.
Habitat.
n stare vegetativ sunt prezeni n intestinul omului i al animalelor de
unde, cu materiile fecale, ajung n mediul extern (pe sol) unde sporuleaz. Sporii
sunt foarte rezisteni.
n mediul spitalicesc poate contamina bandaje, aa chirurgical, pudra de
talc, lenjeria etc.
Caractere morfotinctoriale
Este un bacil mare, cu capetele rotunjite, Gram pozitiv, cu cili peritrichi. n
prezena oxigenului formeaz un spor sferic terminal, mai mare dect diametrul
celulei bacteriene, care confer germenului aspectul de b de chibrit, b de tob,
ac de gmlie.
Caractere de cultur
Cresc pe medii simple, n condiii de de strict anaerobioz, la temperatura
de 37C. Coloniile pe geloz snge apar dup 48 de ore, sunt colonii rotunde, 4-6
mm diametru, mate, de tip S, nconjurate de o zon pufoas i de o zon ngust
de -hemoliz.
Caractere biochimice
Elaboreaz o hemolizin, o exotoxin neurotrop, proteaze, gelatinaze, etc.
Rezistena fa de factori fizici i chimici
Formele vegetative sunt distruse de expunerea timp de 15-20 de minute la
temperaturi de 55-60C i de substane dezinfectante.
Sporii rezist la temperatura de 100C, dar sunt distru i prin autoclavare la
120C i 1 atm, timp de 30 de minute i la Poupinel timp de 1 or la 180C. n
mediul extern, n condiii de uscciune sporii rmn viabili zeci i chiar sute de ani.
Structur antigenic
Prezint antigene flagelare de tip H, antigenul somatic O din peretele
bacterian i o exotoxin cu structur proteic. Toi bacilii tetanici elaboreaz un
singur tip de toxin, codificat plasmidic.
Rspuns imun.
Rspunsul imun const n producerea anticorpilor antitoxin care nu sunt
utili din punct de vedere al proteciei i nici n scop diagnostic.
Caractere de patogenitate
CI. tetani este patogen prin:
- multiplicare la poarta de intrare unde rmne cantonat
neavnd capacitate de invazivitate;
- prin toxinogenez - produce o exotoxin neurotrop numit
tetanospasmin;
- prin producerea unei hemolizine oxigen labile numite
tetanolizin.
Tetanolizina (asemntoare structural i funcional cu streptolizina O) are
aciune litic asupra unui numr mare de celule: polimorfonucleare, macrofage,
eritrocite, fibroblati etc. Este inhibat reversibil de oxigen i reactivat de
tioglicolat i cistein, efectul ei toxic i letal fiind neutralizat de steroli. Rolul
tetanolizinei n producerea i progresia tetanosului nu este pe deplin elucidat.
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
TRATAMENT
C L O S TR I DI U M B O TU LI N UM
DEFINIIE, NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat.
Este prezent n intestinul omului i al animalelor n stare vegetativ de unde
se elimin n mediul extern o dat cu materiile fecale. Dup eliminare n mediul
extern, pe sol, sporuleaz unele specii putndu-se chiar multiplica. Sporii sunt
foarte rezisteni, la adpost de radiaiile solare i de umezeal supravieuind zeci
de ani.
Caractere morfo-tinctoriale
Sunt bacili mari (3,0-20,2 m / 0,6-1,4 m), Gram pozitivi, ciliai peritrichi,
necapsulai. Prezint spor ovalar, situat central sau subterminal, mai mare dect
diametrul bacteriei. Bacteria este deformat de spor, lund aspect de brcu.
Caractere de cultur
Pot fi cultivate pe medii uzuale cu condiia incubrii la 37C n strict
anaerobioz. Dup 1-2 zile formeaz colonii de tip S, mari, fimbriate, transparente,
nconjurate de o zon pufoas iar pe mediile cu snge coloniile sunt nconjurate
de hemoliz beta.
Caractere biochimice
Produc enzime care descompun glucoza cu eliberare de acid, produc
lipaz, gelatinaz, lecitinaz. Diferenierea tipurilor de C.botulinum se face pe
baza reaciilor de descompunere a maltozei, zaharozei, a hidrolizei esculinei i a
descompunerii proteinelor cu eliberare de indol.
Rezistena fa de factori fizici, chimici, biologici
Formele vegetative nu sunt foarte rezistente la factorii de mediu: sunt
distruse la temperaturi de 60C dup 15-20 de minute precum i de dezinfectante.
Sporii sunt termorezisteni. Sunt distrui prin:
autoclavare la 120C, timp de 30 de minute, la pre siunea de 1
atmosfer ;
meninerea n Poupinel timp de 1 or la 180C.;
expunere la glutaraldehid i dezinfectani pe baz de halogeni timp
de 2-3 ore;
expunere la formaldehid i derivai fenolici timp de 4-5 zile.
Structura antigenic
Prezint antigene flagelare de tip H, antigene la nivelul peretelui precum i
antigene solubile (exotoxine).
Clostridium botulinum produce 8 tipuri antigenice de exotoxine, notate de la
A la H. Toxinele A, B, E, F sunt codificate cromosomal, toxinele C i D sunt
codificate de un profag iar toxina G este codificat plasmidic.
A fost identificat i o toxin G (al aptelea tip de exotoxin botulinic), cu
codificare plasmidic.
Toxinele botulinice sunt rezistente la aciditatea gastric i sunt termolabile.
Rspuns imun
Apare un rspuns imun umoral cu producerea de anticorpi antitoxin,
ineficient din punct de vedere al proteciei i al diagnosticului.
Caractere de patogenitate
Nu se multiplic n organism ci n alimente unde produce o exotoxin care
este distrus prin fierbere la 100C, timp de 20 minute.
Este patogen prin toxinogenez. Elaboreaz exotoxine cu neurotropism
fa de sistemul nervos periferic. Toxinele A, B, E sunt mai comune la om, n zona
noastr geografic. Toxina botulinic este cea mai puternic otrav cunoscut;
doza letal pentru om este de1-2 mg.
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
TRATAMENT
C L O S TR I DI I LE G AN G R E NEI G AZ O AS E
DEFINIIE, NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Sunt germeni ubicuitari fiind prezeni cu precdere n solurile cultivate. Au
fost izolai ca i componeni ai microbiotei colonului, tegumentului, vaginului.
Formele vegetative eliminate din organism sporuleaz contaminnd solul care
devine astfel sursa principal de Clostridii.
Caractere morfotinctoriale
Sunt bacili mari (1 / 6-10), Gram-pozitivi care formeaz endospori n
condiii de anaerobioz. Endosporii sunt mai mari dect diametrul bacililor, sunt
localizai central sau terminal. Cu excepia speciei C. perfringens care este
ncapsulat i imobil ceilali reprezentani ai genului implicai n gangrena gazoas
sunt mobili prezentnd cili peritrichi.
Caractere de cultur
Clostridiile gangrenei gazoase cresc pe medii simple n strict anaerobioz.
Celulele vegetative sunt ucise de expunerea la oxigen n timp ce sporii sunt
capabili s supravieuiasc lungi perioade n aerobioz. Se pot folosi:
- mediul VF
- agar snge suplimentat cu glucoz, extract de levur, vitamina K1 etc.
Pe medii cu snge produc hemoliz. C.perfringens produce hemoliz de tip
cald-rece: o prim zon de hemoliz care apare la termostat va fi nconjurat de o
a doua zon de hemoliz mai larg, dup meninere la ghea.
Coloniile speciilor mobile sunt rotunde, convexe, transparente, invazive iar
n coloana de agar moale coloniile sunt pufoase sau dendritice.
C.perfringens fiind imobil formeaz colonii fr caracter invaziv, de tip S
iar n coloan de agar moale cresc sub form de colonii lenticulare.
Caractere biochimice
Toate speciile implicate n gangrena gazoas au un metabolism strict
fermentativ. Sunt catalaz negativi. Speciile productoare de -toxin opacifiaz
mediul cu geloz, glucoz i glbenu de ou prin descompunerea lecitinei.
Rezistena fa de factori fizici i chimici
Formele vegetative sunt mai sensibile la aciunea factorilor fizici, chimici.
Sunt distruse de dezinfectantele uzuale i de temperatura de 55-60C la care s
fie expuse timp de 15-20 minute.
Formele vegetative sunt sensibile la antibiotice: sunt 100% sensibile la
penicilin asociat cu metronidazol, la eritromicin, clindamicin, cloramfenicol.
Toate speciile de Clostridium sunt rezistente la colistin i sensibile la vancomicin
(test de identificare).
Sporii sunt rezisteni supravieuind timp ndelungat pe sol. Sunt distrui prin
autoclavare la 120C timp de 30 minute sau la Poupi nel la 180C timp de 1 or .
Structura antigenic
Antigenele germenilor din genul Clostridium sunt:
- antigene somatice (parietale);
- antigene capsulare K ( C.perfringens);
- antigene flagelare H (C. histolyticum, C. septicum, C. novyi i C.
sporogenes);
- antigene solubile (exotoxine).
Rspuns imun
n cursul infeciei organismul uman sintetizeaz anticorpi tip anti-toxin,
anticorpi fr eficien n cursul bolii.
Caractere de patogenitate
Clostridiile gangrenei gazoase sunt patogene prin multiplicare, invazivitate
i toxinogenez. Germenii se multiplic la poarta de intrare.
esutul sntos este invadat prin aciunea unor exotoxine eliberate de
Clostridii care acioneaz ca antigene solubile histo-toxice. Astfel de toxine sunt:
lecitinaze, colagenaze, fibrinolizine, hialuronidaze, hemaglutinine, hemolizine.
Alfa-toxina eliberat de majoritatea speciilor de clostridii ale gangrenei
gazoase are aciune litic asupra hematiilor, miocitelor, fibroblastelor,
trombocitelor i a leucocitelor. De asemenea scade capacitatea de agregare a
trombocitelor impiedicnd formarea trobului.
Kappa-toxina produs de Clostridium perfringens este o colagenaz care
distruge esutul conjunctiv favoriznd extinderea necrozei n esut sntos.
Theta-toxina are efecte distructive directe asupra vaselor, cauzeaz
citoliz, hemoliz, degenerarea leucocitelor i distrugerea polimorfonuclearelor.
Aceste efecte asupra leucocitelor explic rspunsul inflamator minim al
organismului fa de infecie.
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
TRATAMENT
AL TE B O LI C AU Z A TE D E S P EC I I D I N G E N U L
C L OS TR I D I U M
CLOSTRIDIUM PERFRINGENS
CLOSTRIDIUM DIFFICILE
Familia Enterobacteriaceae
DEFINIIE, NCADRARE
Familia Enterobacteriaceae este o familie larg de bacterii incluznd muli
dintre cei mai familiari ageni patogeni sau condiionat patogeni, cum ar fi
Salmonella, Shigella, Escherichia coli. n urma studiilor genetice acetia au fost
plasai n Proteobacteria avnd propriul ordin, Enterobacteriales. Multe bacterii
ale acestei familii fac parte din microbiota intestinului uman sau animal, altele sunt
prezente n ap, pe sol, pe plante etc. Clasificarea tiinific a enterobacteriilor
este urmtoarea:
Regn: Bacteria, Phylum: Proteobacteria, Classa: Gamma Proteobacteria,
Ordin: Enterobacteriales, Familia Enterobacteriaceae. Genul, Specia.
Taxonomia Familiei Enterobacteriaceae cuprinde peste 30 de genuri i 120
specii. Cele care prezint importan clinic, n proporie de 95%, sunt grupate n
10 genuri, dup cum urmeaz:
Habitat
Enterobacteriile au fost evideniate n flora intestinal normal, unele n
flora tractului respirator superior, n ap, pe sol, pe plante etc.
Enterobacteriile sunt responsabile de o mare parte a infeciilor
nosocomiale.
Ele pot fi mprite n dou mari categorii:
- saprofite, condiionat patogene (E. coli spp., Klebsiella spp.,
Enterobacter spp. etc.)
- patogene (Salmonella spp., Shigella spp., Yersinia spp.).
Caractere morfotinctoriale
Sunt bacili Gram-negativi, cu dimensiuni de 0,3-1,0 x 1,0-6,0m, ciliai sau
neciliai, nesporulai, cu sau fr capsul.
Caractere de cultur
Enterobacteriile sunt germeni nepretenioi, cresc pe medii simple. Sunt
germeni aerobi, facultativ anaerobi care necesit, pentru o cretere optim,
temperaturi de 22-37C. Pe mediile neselective, for meaz colonii de culoare gri
(exceptnd Serratia marcescens, de culoare roie), de tip S, M (excepie
Proteus spp., fenomen de crare). Pe geloz-snge, unele specii determin
hemoliz .
Caractere de patogenitate
Enterobacteriile sunt microorganisme care se gsesc n mediul nconjurtor
i/sau au evoluat pentru a alctui flora normal intestinal. Totui, unii membrii au
necesitat n plus informaie genetic asigurat prin intermediul plasmidelor,
transpozonilor i bacteriofagilor, ceea ce a dus la apariia unor factori de
patogenitate, aceste tulpini devenind patogene. Informaia genetic adiional
poate fi codat cromozomial sau extracromozomial.
Factorii de patogenitate pot fi grupai dup cum urmeaz:
1. Adezine. Enterobacteriile prezint pili (fimbrii) care asigur aderarea la
mucoase, permind bacteriilor colonizarea i multiplicarea. Aceti pili se mpart n
4 tipuri. Tipul 1 de pili sunt manozo-sensibili. Ei se leag de celula gazd n
acelai locus ca i D-manoza. Sunt importani n colonizarea normal a tractului
gastro-intestinal.
Ali pili sunt manozo-rezisteni i nu se leag de celula gazd n acelai
locus cu D-manoza.
Tipul 2 de pili sunt importani factori de virulen, ajutnd microorganismele
s determine afeciuni n afara zonei lor normale de aciune.
Exist cteva tipuri de fimbrii, printre care amintim pilii P, adezinele X,
ambele fiind asociate cu E.coli uropatogene, i BFP (bundle-forming pili), care
particip la ataarea de celula gazd a unei tulpini patogene de E.coli.
2. Invazinele sunt proteine care acioneaz local distrugnd sau invadnd
celula gazd i/sau facilitnd creterea i rspndirea agentului patogen. Yersinia
enterocolitica posed o astfel de protein de suprafa, numit invazin.
3. Toxinele produse de unele Enterobacterii se mpart n dou categorii:
exotoxine i endotoxine.
Exotoxinele sunt, dup cum urmeaz:
- toxina Shiga (Shigella), codificat cromozomial, inhib sinteza de
proteine n celula gazd ducnd la moartea acesteia;
- toxina Shiga-like (Shigella i unele tulpini de E. coli), codificat
bacteriofagic, are acelai mecanism ca i toxina Shiga;
- toxina LT termic labil (E.coli), codificat plasmidic, are efect
similar cu exotoxina vibrionului holeric, determinnd o secreie crescut de Cl-,
Na+, H2O;
- toxina ST termic stabil (ETEC), peptid codificat plasmidic, este
analoag unei proteine hormonale (guanylina) legndu-se de acelai receptor ca
aceasta (Guanylate ciclaza C), determinnd secreie de Cl-;
- alfa-hamolizinele, sunt citotoxine (E.coli);
- beta-hemolizinele, legate de celul, inhib fagocitoza i chemotaxia
leucocitelor.
Endotoxinele (antigenul O) sunt de natur lipopolizaharidic. Sunt
responsabile de instalarea:
- febrei,
- activrii cii alternative a sistemului complement (C3a, C5a),
- efectelor asupra sistemului circulator; leucopenia, vasodilataia,
scderea circulaiei periferice, microhemoragii, peteii, hipotensiune,
- efectelor de coagulare sangvin (CID, tromboze, trombocitopenie),
- afectrii metabolismului i a funciilor hepatice,
- scderii sideremiei,
- hipoglicemiei,
- citotoxicitii,
- necrozei de organ
- ocului endotoxic.
4. Achiziia de fier. n organismul uman fierul nu se gsete liber, n form
nelegat. Gazda uman produce o serie de proteine cu afinitate mare de legare a
fierului, acestea gsindu-se n esuturi i pe suprafaa mucoaselor (transferina,
lactoferina, feritine, mioglobina i hemoglobina). Acest mecanism de legare a
fierului reprezint i o cale de control a creterii bacteriene. Enterobacteriile,
avnd nevoie de fier pentru cretere i dezvoltare, au mai multe mecanisme de a-l
acapara, cele mai importante dintre acestea fiind:
- capturarea fierului de la transferin/lactoferin;
- folosirea Hem-ului rezultat n urma distruciei tisulare
- producerea de siderofori speciali (enterobactin, aerobactin) care
acioneaz competitiv cu proteinele de legare a fierului. Aceti siderofori cheleaz
fierul, formnd complexul siderofor-fier care este apoi transportat n celula
bacterian prin receptori specifici din membrana extern. Aceti transportori
servesc, de asemenea, ca receptori pentru bacteriofagi i loc de legare pentru
colicin.
5. Structurile capsulare. Principala funcie a capsulei este s apere
microorganismul de fagocitoz. Dintre structurile capsulare amintim:
- antigenul K la E.coli, de natur proteic, cu rol n colonizare, diminu
opsonizarea i fagocitoza. Antigenul K1, este similar structurilor self, slab
imunogen. Capsula de tip K1 a E.coli previne activarea cii alternative a sistemului
complement.
- antigenul K la Klebsiella este un antigen capsular.
- antigenul Vi la Salmonella typhi.
6. Plasmidele codific rezistena la antibiotice i caracterele de virulen ale
enterobacteriilor.
7. Antioxidanii sunt compui care protejeaz microorganismul de
distrugerile ce pot apare n prezena radicalilor liberi de oxigen.
Este important de reinut c o enterobacterie patogen poate s nu prezinte
toi factorii de virulen.
G E N U L E S C HER I C HI A- S HI G EL L A
DEFINIIE, NCADRARE
Pe baza datelor obinute n urma studiilor de hibridare ADN-ADN i a
caracteristicilor fenotipice speciile de Escherichia i Shigella sunt cuprinse ntr-un
singur gen care poart nc ambele denumiri: genul Escherichia-Shigella.
n continuare, din considerente practice cele dou genuri vor fi prezentate
separat.
G E N U L E S C HER I C HI A
CARACTERE GENERALE
Habitat
Habitatul natural al E. coli este tractul gastrointestinal al animalelor cu
snge cald i al oamenilor. n intestinul omului E. coli reprezint flora dominant a
intestinului gros avnd un rol important n meninerea unei fiziologii normale a
acestuia i n sinteza unor proteine din grupul B i K. Eliminat n mediul extern cu
materiile fecale contamineaz apa, solul, alimentele etc.
Prezena constant a tulpinilor de E.coli n intestinul uman i animal i n
materiile fecale au fcut din aceast bacterie indicatorul de poluare fecal a
mediului, n special a apei.
Caractere morfotinctoriale
Escherichia coli este un bacil Gram negativ care prezint uneori forme
filamentoase. Majoritatea speciilor prezint cili peritrichi i sunt necapsulate. Exist
ns tulpini de Escherichia coli imobile, unele prezentnd capsul.
Caractere de cultur
E.coli este un germen bine adaptat mediului su de via. Nu este
pretenios. Crete pe medii simple n care glucoza este singurul constituent
organic. Este un germen aerob, facultativ anaerob care poate avea deopotriv
metabolism fermentativ sau respirator. Pe medii solide crete sub form de colonii
de tip S iar n mediul lichid determin tulburare uniform i inel aderent pe
peretele tubului.
Caractere biochimice i de metabolism
E. coli fermenteaz glucoza i ali carbohidrai cu producere de acid i gaz.
Majoritatea tulpinilor sunt oxidaz negative, sunt capabile s reduc nitriii n
nitrai.
Nu produc ureaz, nu descompun proteinele cu formare de H2S, nu
folosesc citratul ca unic surs de carbon. Descompun lactoza cu eliberare de
acid, descompun proteinele cu formare de indol, dau reacia rou-metil pozitiv.
Unele tulpini, de obicei cele implicate n infecii urinare, determin hemoliz
beta pe geloza snge.
Tulpinile de Escherichia coli care posed plasmidul col elibereaz
colicine, substane toxice pentru alte tulpini bacteriene.
Rezistena fa de agenii fizici, chimici i biologici
Este o bacterie rezistent n mediul extern. Este distrus de antisepticele i
dezinfectantele uzuale precum i de colorani ca verde de malachit, cristal violet.
Are o capacitate deosebit de adaptare la modificrile de mediu cum ar fi
prezena unor minerale, modificri de pH, temperatur, osmolaritate.
Poate sesiza prezena sau absena unor substane chimice sau gaze n
mediul su de via i, cu ajutorul cililor, se poate apropia sau ndeprta de
acestea.
Poate de asemenea s devin imobil i s produc fimbrii de adeziune
care s-i permit aderarea de substratul specific.
Ca rspuns la modificrile de temperatur sau osmolaritate i modific
dimensiunea porilor prin modificri ale porinelor constituente ale membranei
externe. Astfel i poate mri dimensiunea porilor pentru a acumula moleculele
mari de nutrieni sau pentru a elimina substanele inhibitoare.
Posed un mecanism complex de reglare a metabolismului celulei
bacteriene care i permite s-i asigure o via uoar: sintetizeaz doar acele
enzime necesare utilizrii compuilor din mediu. Va opri sinteza enzimelor
necesare obinerii unor metabolii atunci cnd acetia sunt prezeni n mediu de
unde i poate folosi ca atare.
Este un microorganism care dezvolt rezisten fa de substanele
antibacteriene prin elaborarea de enzime care hidrolizeaz betalactaminele
(penicilinaze, cefalosporinaze) sau prin mutaii care afecteaz porinele devenind
astfel rezistente fa de aminozide.
Structura antigenic
Tulpinile de Escherichia coli posed urmtoarele structuri antigenice:
- antigenul O sau antigenul somatic. Este antigenul cu specificitate
de grup care corespunde poliozidelor fixate pe lipopolizaharidele peretelui
bacterian. Este termostabil i acido-alcoolo-rezistent. Prin reacii de aglutinare au
fost identificate 180 de serogrupe antigenice O. Multe serogrupe O ale tulpinilor
de Escherichia coli prezint reacii ncruciate cu antigene ale unor tulpini de
Klebsiella, Salmonella, Providencia, Vibrio; iar altele sunt comune cu grupul
Shigella.
- antigenul H sau antigenul flagelar. Prezent doar la tulpinile
ciliate, este format dintr-o protein specific numit flagelin. Are specificitate de
tip, este termolabil i este inactivat de alcool. Prin reacii de aglutinare au fost
evideniate, greu, 56 de serotipuri H:
- antigenul K sau antigenul capsular. Este de natur
polizaharidic, are specificitate de tip, a fost identificat la tulpini uropatogene de
Escherichia coli i la tulpini implicate n cazuri de meningit neo-natal (antigen K-
1). Determin O-inaglutinabilitatea tulpinilor care-l posed. Se cunosc 103
antigene K.
- Antigenul B, cu diferitele sale variante, este un antigen de
suprafa.
- Antigenele de aderen (adezine, pili, fimbrii), de natur proteic.
Pe baza antigenelor O, H i K au fost identificate peste 700 de serotipuri de
E.coli. Serotipia este util n identificarea acelor tulpini implicate n procese
patologice umane.
Caractere de patogenitate
n cadrul speciei se disting numeroase variante care exprim caractere de
patogenitate, variante numite patovaruri, patotipuri. Escherichia coli este patogen
prin virulen i/sau toxigenitate. Determinanii de patogenitate sunt variai (tabel
XIV). n funcie de determinanii de patogenitate pe care i au tulpinile de
Escherichia coli pot cauza diferite afeciuni.
PATOGENIE. BOALA LA OM
Infecii intestinale
Infeciile intestinale, sau enterocolitele infecioase, sunt determinate de cele
cinci patotipuri diareigene recunoscute, fiecare avnd subgrupe serologice i
determinnd manifestri clinice distincte:
- ETEC (enterotoxigenic Escherichia coli);
- EPEC (enteropathogenic Escherichia coli);
- EHEC (enterohaemorrhagic Escherichia coli);
- EIEC (enteroinvasive Escherichia coli);
- EAggEC (enteroaggregative Escherichia coli).
Infecii extraintestinale
- infecii urinare
Tulpinile uropatogene de Escherichia coli (UPEC) sunt responsabile de
90% din infeciile tractului urinar. Sunt afectate cu precdere femeile tinere, active
sexual, colonizate iniial n intestin cu tulpini UPEC. Tulpinile uropatogene aparin
serotipurilor O 1,2,4,6,7,16,18,75 i serotipurilor K 1,2,3,12,13 care posed
adezine ce permit aderarea de epiteliul urinar.
- infecii intra-abdominale
Escherichia coli este responsabil de supuraii peritoneale, biliare,
apendiculare, genitale. Tulpinile respective au proprieti antifagocitare, au aciune
citotoxic asupra polinuclearelor i posed sisteme de captare a fierului.
- bacteriemie
Este cauzat de tulpini de Escherichia coli cu mare capacitate invaziv.
Aceste tulpini posed siderofori, citotoxine, capsul i lipopolizaharide care
asigur protecia fa de aciunea bactericid a serului.
- oc endotoxinic
Apare n urma distrugerii masive de celule de Escherichia coli eliberndu-
se brusc o cantitate mare de endotoxin ceea ce determin sindromul de rspuns
inflamator sistemic provocat de eliberarea masiv de interleukin-1 i factor de
necroz tisular (TNF). Pacientul prezint febr, hemoragii, colaps circulator.
- meningita neonatal
Este cauzat de tulpini de Escherichia coli care sintetizeaz antigenul
capsular K-1, tulpini care din naso-faringe sau din tractul intestinal ajung n
torentul sanguin i pe aceast cale la meninge.
- infecii nosocomiale
Apar datorit rspndirii infeciei de ctre personalul medical sau prin
instrumentarul medical la pacieni care prezint factori predispozani: diabet,
traumatisme, boli pulmonare cronice etc.
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
G E N U L S HI G E L L A
DEFINIIE, NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Germenii din grupul Shigella sunt bacterii strict adaptate omului,
ntotdeauna patogene. Sunt ntlnite n intestinul i materiile fecale ale bolnavilor,
convalescenilor precum i la purttorii aparent sntoi. Singurele animale care
pot fi gazde accidentale sunt primatele captive care vin n contact cu oamenii.
Caractere morfotinctoriale
Sunt bacili Gram negativi, neciliai, necapsulai i nesporulai.
Caractere de cultur
Sunt bacterii aerobe, facultativ anaerobe care se dezvolt bine la 37C pe
medii slab i moderat selective i difereniale (Istrati Meitert, ADCL). Formeaz
colonii S, lactozo-negative, transparente.
Caractere biochimice i de metabolism
Ca toate enterobacteriile reduce nitraii la nitrii, sunt oxidazo-negative,
fermenteaz glucoza, dar fr producere de gaz. Nu produc indol, excepia fiind
Shigella flexneri care este indol pozitiv. Speciile Shigella nu formeaz hidrogen
sulfurat, nu descompune lactoza, nu metabolizeaz urea i nu folosesc citratul ca
unic surs de carbon. Sunt germeni imobili care fermenteaz doar civa
carbohidrai i numai cteva tulpini decarboxileaz ornitina. Dup prezena sau
absena fermentaiei manitei, shigelele pot fi mprite n dou mari subgrupe
biochimice:
Grupul manito-pozitiv (grupele B,C,D);
Grupul manito-negativ (grupul A, Sh. dysenteriae).
Rezistena fa de factori fizici, chimici i biologici
Speciile din genul Shigella rezist n praf uscat (10 zile), n ape la 7-10C (9
zile), pe lenjerie (dou sptmni), n alimente 1-2 sptmni, n ghea 2 luni.
Sunt inactivate n 10 minute la 50-60C. Sunt germeni sensibili la antagonismul
microbian i la bacteriofagi specifici.
Structura antigenic
Antigenul somatic O st la baza mpririi n patru grupe antigenice i
subdiviziunii acestora n serotipuri:
o Grupul A: Shigella dysenteriae (12 serotipuri)
o Grupul B: Shigella flexneri (6+2 serotipuri)
o Grupul C: Shigella boydii (18 serotipuri)
o Grupul D: Shigella sonnei (1 serotip care prezint dou faze antigenice
S i R).
Unele tulpini posed capsul (antigenul K). Acest antigen nu este utilizat n
tipizarea serologic a genului Shigella, dar pot interfera cu determinarea
antigenului somatic O (inaglutanibilitate O).
Alte antigene ale tulpinilor Shigella sunt:
o Exotoxina termolabil exprimat de Shigella dysenteriae serotip 1
o ShET 1 i ShET 2;
o Invasion Plasmid Antigens (Ipa);
o Proteina InterCellular Spread (Ics);
Rspuns imun
Rolul protectiv al rspunsului imun al organismului mpotriva antigenelor
descrise este neclar. n general este neprotectiv; totui unele studii controlate pe
voluntari aduli au artat c o infecie anterioar cu Shigella flexneri protejeaz
mpotriva reinfeciei cu serotipul omolog (cu o eficacitate de 70%).
Dup administrare de vaccin Shigella dysenteriae, imunoglobulinele de tip
A vor reaciona cu tulpina omolog, imunitatea n dizenterie avnd un caracter
predominant local, la nivelul colonului, cu o durat de 6-12 luni.
Caractere de patogenitate
Virulena Shigellei const exclusiv n multiplicarea ei n epiteliul colonului
gazdei umane. Factorii de virulen sunt codificai plasmidic i au funcii identice la
toate speciile Shigella (tabel XVI).
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
TRATAMENT
G E N U L S AL M O N E L L A
DEFINIIE, NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Principalul habitat al salmonelelor este tractul intestinal al oamenilor i
animalelor.
Toate serovarurile de Salmonella enterica subspecia enterica sunt parazite
pentru om i mamifere, n timp ce celelalte subspecii se ntlnesc preponderent la
psri i animale cu snge rece. Cele dou surse majore, omul i animalele, vor
determina poluarea solului, apelor reziduale, apelor de suprafa n care pot
supravieui de la cteva luni pn la civa ani de zile, dac condiiile de
temperatur, umiditate i pH sunt favorabile. n mediul nconjurtor ele doar
supravieuiesc, multiplicarea lor nefiind semnificativ. Majoritatea serovarurilor nu
au specificitate de gazd cu excepia serovarurilor Typhi i Paratyphi cu
specificitate pentru om, serovarul Abortus ovis pentru ovine, serovarul Typhisuis
pentru porci, serovarul Gallinarum i serovarul Pullorum pentru psri.
Salmonelele ubicuitare cauzeaz diverse simptome clinice, de la infecii
asimptomatice pn la sindroame typhoid-like la copii sau la animale cu nalt
susceptibilitate (oareci). La persoanele adulte salmonelele ubicuitare sunt n
marea majoritate responsabile de toxiinfeciile alimentare.
Caractere morfotinctoriale
Salmonella spp. sunt bacili Gram negativi, nesporulai, prezentnd flageli
peritrichi care asigur mobilitatea (cu excepia salmonelelor imobile S. gallinarum
i S. pullorum), necapsulai.
Caractere de cultur
Salmonella, enterobacterie aerob, facultativ anaerob, poate crete foarte
uor pe majoritatea mediilor de cultur. Pe mediile selective i difereniale care
conin sruri biliare determin colonii lactozo negative de tip S. Producerea de
H2S, evideniat prin apariia unei pete de culoare neagr n centrul coloniilor, face
ca acestea s se numeasc colonii n ochi de pisisc. Pe mediul Wilson Blair
formeaz colonii opace, rugoase, cu margini neregulate, negre, cu luciu metalic.
Mediile de mbogire pentru Salmonella sunt mediile selenit azid de sodiu i
bulion Mller - Kauffmann, pe acestea dezvoltndu-se prompt n 24 de ore i chiar
mai rapid la 40C. Dup 24-48 de ore pot vira n crmiziu culoarea mediului cu
selenit cu sau fr depozit i pot duce la decolorarea mediului Mller Kauffmann.
Caractere biochimice i de metabolism
Sunt bacterii lactozo negative; prin fermentarea glucozei duc la formare
de acid i gaz. S. typhi este singura specie care produce doar acid, fr gaz.
Fermenteaz cu eliberare de acid i gaz, manitolul, maltoza i sorbitolul; nu se
formeaz acid n mediile care conin adonitol, sucroz, salicin i lactoz. Speciile
de Salmonella nu formeaz indol i ureaz, descompun proteinele cu eliberare de
H2S i folosesc citratul ca unic surs de carbon.
Testul cu rou metil este pozitiv; testul Voges Proskauer este negativ;
decarboxileaz lizina i ornitina. Nu cresc pe mediul cu cianuri de potasiu, nu
hidrolizeaz gelatina i nu dezamineaz fenilalanina i triptofanul.
Rezistena fa de factori fizici, chimici i biologici
Salmonelele sunt germeni rezisteni; n solul punilor pot supravieui pn
la 200 de zile, n ap cteva luni. n alimente supravieuiesc ntre 10 i 180 de zile,
n pulberile de ou 4 ani. Sunt sensibile la cldur fiind distruse n 5 minute la
100C; dezinfectantele le distrug n 30-120 de minu te. Sunt sensibile la aciunea
cloramfenicolului, streptomicinei, tetraciclinei, ampicilinei etc. i a bacteriofagilor
specifici. Din ce n ce mai frecvent se identific tulpini care prezint plurirezisten
la antibiotice, acestea fiind implicate n infeciile nozocomiale.
Structur antigenic
Structura antigenic a salmonelelor permite definirea a peste 2300 de
serotipuri. Ca toate enterobacteriile, genul Salmonella prezint trei tipuri
importante de antigene, antigenul somatic, cel de suprafa i antigenul flagelar,
acestea avnd aplicaii n diagnostic sau identificare.
Antigenul somatic O, alctuit din fraciuni antigenice, este rezistent la
cldur i alcool. Prin studiile de cross-absorbie s-au individualizat 67 de structuri
antigenice diferite care sunt folosite pentru identificare serologic. Antigenele O
etichetate cu acelai numr sunt nrudite, dei nu sunt ntotdeauna identice
antigenic. Pot fi tipuri distincte O (exemplu O:35), sau antigene O pariale (care
prezint un numr de antigene pariale, exemplu O:4,5,12). Salmonelele care nu
posed secvena complet de uniti repetitive a polizaharidului O se numesc
rough datorit coloniilor R pe care le determin. Sunt n general avirulente sau
puin virulente n comparaie cu tulpinile smooth care posed secvena complet
de uniti repetitive a polizaharidului O. De asemenea antigenul O prezint
specificitate de grup, ceea ce duce la ncadrarea salmonelelor n serogrupe,
notate cu litere majuscule, fiecare grup coninnd multe serovaruri.
Antigenele de suprafa (nveli) ale unor serovaruri de Salmonella sunt
frecvent observate i la alte genuri ale bacteriilor enterice (E. coli i Klebsiella).
Antigenele de suprafa ale salmonelelor pot masca antigenul O, determinnd
inaglutinabilitate O n reaciile serologice. Antigenul Vi este un antigen specific de
suprafa ntlnit doar la trei serovaruri Salmonella: Typhi, Paratyphi C, Dublin.
Este asociat virulenei i invazivitii determinnd leucopenie, scderea nivelului
complementului seric i capacitatea de multiplicare intrafagocitar. Reprezint i
substratul de fixare al bacteriofagilor.
Antigenele flagelare H sunt proteine labile termic situate la nivelul cililor. Se
cunosc peste 50 de antigene H care pot de asemenea s fie subtipate ca antigene
pariale. Fenomenul de variaie de faz se ntlnete la multe tipuri Salmonella,
astfel putnd s-i schimbe tipul de specificitate al flagelilor cu un altul. Antigenele
H se pot prezenta sub una sau sub ambele forme: faza 1 i/sau faza 2. Unele
serovaruri de Salmonella enterica (serovar Enteritidis, Typhi) produc flageli care
au ntotdeauna aceeai specificitate antigenic, antigen H monofazic. Totui,
majoritatea serovarurilor Salmonella pot produce alternativ flageli cu dou
specificiti antigenice H diferite, antigen H difazic. Astfel serovarul Typhimurium
poate produce flageli cu antigenul i sau antigenul 1,2. Unele serovaruri pot avea
chiar i antigen H trifazic. Prin transducie unele tulpini au pierdut antigenul H,
devenind imobile. Antigenul H este notat cu o singur cifr, o liter mic a
alfabetului sau cu litera z urmat de un sufix.
LPS (lipopolizaharidul) bacteriilor din genul Salmonella, ca i la ali bacili
Gram-negativi, este coninut de nveliul celular. Eliberat dup liza bacterian,
funcioneaz ca endotoxin i poate fi important i n determinarea virulenei
microorganismelor. Acest complex macromolecular endotoxinic conine trei
componente:
o ptur polizaharidic - O extern, responsabil de specificitatea O
i determinarea virulenei microorganismului;
o poriune mijlocie, R core, antigen comun tuturor enterobacteriilor,
determin producerea de anticorpi care protejeaz mpotriva infeciilor provocate
de bacterii Gram negative care au o structur asemntoare a miezului LPS sau
pot modera efectul lor letal;
o ptur intern lipidic, lipidul A.
Endotoxina, poate juca un rol important n patogeneza multor manifestri
clinice: febra, activarea complementului seric, activarea kininelor, activarea
sistemelor de coagulare, scderea contractilitii miocardului i alterarea funciilor
limfocitelor. Endotoxina circulant poate fi responsabil, n parte, pentru multe
manifestri ale ocului septic ce poate aprea n infecii sistemice.
Rspuns imun
Dup infecia cu Salmonella serovar Typhi i Salmonella serovar Paratyphi
apar n circulaie anticorpi circulani anti-O, anti-H, anti-Vi asigurnd imunitate pe
via.
Dup gastroenterite cu Salmonella, imunitatea dobndit lipsete de obicei,
boala evolund foarte rapid, nu este timp pentru apariia rspunsului imun. Pe
perioada acestor afeciuni anticorpii anti-R acioneaz mpotriva altor infecii Gram
negative. Anticorpi secretori sau ai mucoasei tip IgA protejeaz intestinul
mpotriva salmonelelor.
Caractere de patogenitate
Patogenitatea salmonelelor este datorat factorilor de virulen. Adezinele
i toxinele sunt adevraii factori de virulen ai salmonelelor (tabel XVII).
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
TRATAMENT
G E N U L Y E R SIN I A
DEFINIIE, NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Speciile din genul Yersinia au ca rezervor roztoarele, psrile, mamiferele
domestice de unde se rspndesc n mediul ncojurtor contaminnd solul,
alimentele. Sunt prezente n organismul vectorilor: purecele de obolan, purecele
uman.
Caractere morfotinctoriale
Yersinia pestis se prezint ca un bacil gros, Gram-negativ, colorat bipolar,
neciliat, nesporulat. In vivo i pe mediile bogate, la 37C, Yersinia pestis dezvo lt
capsul.
Yersinia pseudotuberculosis este bacterie polimorf care se poate
prezenta sub form de cocobacil sau bacil, Gram-negativ, colorat bipolar, cu cili
peritrichi la 24C i imobil la 37C.
Yersinia enterocolitica este un cocobacil cu capetele rotunjite, Gram
negativ, cu cili peritrichi la 28C, neciliat la 37 C, necapsulat.
Caractere de cultur
Toate speciile de Yersinia sunt aerobe, tolerante la concentraii de sare de
peste 5%, capabile s se dezvolte n limite largi de temperatur (4-43C)
multiplicndu-se i la temperatura frigiderului. Pe mediile lichide creterea este
vizibil dup 48 ore, observndu-se:
o pelicul i depozit floconos abundent, restul mediului rmnnd
clar pentru Yersinia pestis;
o depozit, iar mediul este tulburat progresiv de la fundul eprubetei
pentru Yersinia pseudotuberculosis;
o tulburare uniform a mediului pentru Yersinia enterocolitica.
Pe geloz simpl cresc toate speciile de Yersinia astfel:
o Yersinia pestis formeaz colonii mici de 0,1-0,2 m dup 24
ore de incubare i de 1-2 mm la 48 de ore, rotunde, cu marginile uor franjurate, la
nceput gri cu centrul glbui i bombat asemnate cu o plrie chinezeasc;
o Yersinia pseudotuberculosis determin formarea de colonii
mici, translucide, cenuii-glbui;
o Yersinia enterocolitica colonii S, mici.
Pe mediile slab selective Yersinia spp. dezvolt colonii S lactozo-negative,
translucide. Nu se dezvolt pe medii moderat sau nalt selective.
Caractere biochimice
Yersiniile sunt bacterii aerobe, oxidazo-negative, care fermenteaz glucoza,
trehaloza, sorbitolul, ramnoza numai cu producere de acizi, nu i de gaz. Nu
fermenteaz lactoza, nu produc H2S, lizindecarboxilaz sau
fenilalanindezaminaz. Nu folosesc citratul ca unic surs de carbon i nu
scindeaz malonatul; produc ureaz i -galactozidaz. Sunt imobile la 37C.
Yersinia pestis este imobil, indol negativ, ureaz negativ, lactozo- i
manito-pozitiv. Nu fermenteaz zaharoza.
Yersinia pseudotuberculosis este mobil la temperatura camerei, nu
fermenteaz zaharoza, indol negativ. Reacia cu rou-metil i reacia catalazei
sunt pozitive.
Yersinia enterocolitica cuprinde tulpini mobile la temperatura camerei,
zaharozo-pozitive. Reaciile cu rou-metil i reacia catalazei sunt pozitive.
Producerea de indol este variabil, pe cnd cea de ornitindecarboxilaz este
constant acestei specii.
Rezistena fa de factori fizici, chimici i biologici
Yersinia pestis este distrus n 5 minute la 55C i imediat n fenol 5%. n
dejectele ectoparaziilor supravieuiete luni de zile. Este sensibil la
streptomicin, tetraciclin i cloramfenicol.
Yersinia pseudotuberculosis este sensibil fa de lumina soarelui i
uscciune. La 56C moare n 30 minute. Fenolul 1% o omo ar n cteva minute.
Prezint sensibilitate la streptomicin, cloramfenicol i neomicin.
Yersinia enterocolitica are o rezisten asemntoare speciei Yersinia
pseudotuberculosis. n plus rezist la temperaturi de refrigerare (+/- 4C). Este
sensibil fa de streptomicin, cloramfenicol, tetracicline, polimixina B, colistin
sulfat etc.
Structura antigenic
Yersinia pestis prezint un antigen de nveli termolabil i un antigen
somatic termostabil.
Antigenul de nveli (F1), sau antigenul capsular, este termolabil, se
pierde cnd microorganismul crete in vitro sau n insecta vector. Este constituit
din 3 fraciuni antigenice:
Antigenul A este un complex format dintr-o protein i un lan
polizaharidic, solubil, imunogen, anticorpii formai fa de aceast fraciune oferind
protecie;
Antigenul B este un polizaharid solubil, cu specificitate de specie,
anticorpii formai nu ofer protecie;
Antigenul C este un polizaharid insolubil, nonimunogen.
Caractere de patogenitate
Factorii de patogenitate comuni ai speciilor de Yersinia implicate n infecii
umane sunt:
- proteinele din membrana extern (Yops = Yersinia Outer Proteins)
sunt codificate de gene prezente pe plasmidul pYV, sintetizate la 37C, corespund
antigenelor V i W, inhib migrarea polimorfonuclearelor i fagocitoza, au efect
citotoxic;
- proteina P1 codificat de gene prezente pe plasmidul de virulen
pYV, asigur aderarea bacteriei de celulele eucariote;
- chelatori de fier.
PATOGENIE. BOALA LA OM
Yersinia pestis este, n primul rnd, un agent patogen al roztoarelor,
oamenii fiind gazde accidentale infectate prin muctura puricilor de obolan
(Xenopsyla cheopis). De la gazda infectat, puricele inger, odat cu prnzul
sangvin, microorganisme viabile care vor ptrunde n tractul su intestinal.
Purecele poate rmne infectat mai multe sptmni. Bacteriile se multiplic in
situ suficient astfel nct s-i blocheze proventriculul, iar cteva dintre
microorganisme s poat fi regurgitate n urmtoarea plag produs prin
muctura sa, realizndu-se astfel transferul infeciei la o nou gazd. Ct timp se
dezvolt n gazda nevertebrat, Y. pestis i pierde nveliul capsular astfel c la
locul inoculrii n noua gazd microorganisme sunt necapsulate. O mare parte
dintre acestea sunt fagocitate i omorte de polimorfonucleare neutrofile care
ajung la locul infeciei n numr mare. Un numr mic de bacili sunt preluai i de
ctre macrofagele tisulare, care nu pot s-i distrug dar le asigur protecie astfel
nct microorganismele i pot resintetiza capsula i alte antigene de virulen.
Recapsulate, bacteriile omoar macrofagele i sunt eliberate n spaiul extracelular
unde pot rezista, de data aceasta, fagocitozei. Infecia rezultat se rspndete
rapid ctre nodulii limfatici regionali. Aceste mecanisme se produc n perioada de
incubaie care dureaz 3-6 zile. La nivelul nodulilor limfatici de releu determin
leziuni caracteristice: ganglionii devin tumefiai, moi, foarte calzi i hemoragici,
aspect caracteristic bubonului negru, responsabil de numele acestei afeciuni.
Pesta bubonic poate evolua n dou direcii. Bubonul poate s fistulizeze iar
puroiul de la acest nivel se poate scurge curndu-se plaga. Acest stadiu local
este vindecabil n totalitate, iar bolnavul este mai puin contagios. Dac bariera
ganglionar este rapid distrus, iar infecia se rspndete prin curentul sangvin
(septicemie) are loc o afectare substanial a ficatului, splinei i plmnilor. Ca
rezultat, pacientul dezvolt o pneumonie bacterian secundar, sever, eliminnd
un numr mare de microorganisme viabile prin sput i prin picturile Flgge.
Aceti pacieni sunt extrem de contagioi pentru personalul medical. Un procent
de 90% din pacienii netratai vor muri, decesul survenind n mai puin de 24 ore
dup instalarea simptomelor clinice. n condiiile aglomerrilor, malnutriiei i
infestrii mari cu ectoparazii epidemia de pest bubonic se poate dezvolta, va
predomina forma pulmonar care este mult mai dificil de controlat i care prezint
o mortalitate de 100%. Propagarea infeciei se face, de aceast dat, rapid de la
om la om prin inhalarea particulelor ncrcate cu germeni ducnd la apariia pestei
pulmonare primare, fr s se mai treac prin stadiul de bubon.
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
TRATAMENT
G E N U L CI TRO B AC TE R
DEFINIIE, NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Speciile de Citrobacter triesc n ap, sol, ocazional n alimente sau fac
parte din flora normal a tractului intestinal al omului i animalelor. Pot fi ntlnite
i n apa distilat sau deionizat folosite n mediul intraspitalicesc.
Caractere morfotinctoriale
Speciile genului Citrobacter sunt bacili Gram-negativi, ciliai peritrichi,
necapsulai, nesporulai.
Caractere de cultur
Citrobacter spp. sunt bacterii aerobe, facultativ anaerobe, cu caracteristici
de cultivare asemntoare genurilor Salmonella i Proteus. Pe mediile selective i
difereniale, cu bil sau cu sruri biliare, determin formarea de colonii tip S,
lactozo-negative, de culoarea mediilor. Speciile care nu produc H2S pot fi
difereniate de Salmonella spp. i Proteus spp. care formeaz colonii ochi de
pisic datorit producerii de H2S.
Caractere biochimice i de metabolism
Izolarea pe medii difereniale i selectiv difereniale face posibil
evidenierea caracterelor biochimice, precum i diferenierea lor de genurile
Salmonella i Proteus. Sunt bacterii care nu fermenteaz lactoza. Glucoza, n
schimb, este fermentat cu eliberare de acid i gaz. Zaharozo-negative sunt
Citrobacter werkmanii, Citrobacter sedlakii, iar cele malonat-negative Citrobacter
farmeri i Citrobacter braakii. Speciile care nu produc H2S sunt Citrobacter
diversus, Citrobacter farmeri, Citrobacter sedlakii, iar cea care nu produce indol
este Citrobacter werkmanii.
Sunt bacterii mobile care nu produc lizindecarboxilaz i
fenilalanindezaminaz, dar fermenteaz dulcitolul i cellobioza. Produc -
galactozidaz, folosesc citratul ca unic surs de carbon i nu descompun ureea.
Pot crete i pe mediile cu cianur (testul Braun).
PATOGENIE. BOALA LA OM
Citrobacter spp. sunt bacili care pot face parte din flora normal intestinal.
Infeciile cu aceste bacterii apar mai ales la persoanele care prezint factori de risc
de infecie (imunocompromii, bolnavi oncologici, pacieni cu tratament
imunosupresor, btrni, copii mici, persoane spitalizate etc.). Aceste
microorganisme pot cauza septicemii, infecii pulmonare, infecii urinare, meningite
etc.
TRATAMENT
G E N U L KL E B S I E L LA
DEFINIIE, NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Speciile genului Klebsiella sunt foarte rspndite n natur (sol, ape de
suprafa, plante) i frecvent fac parte din flora normal a tractului gastrointestinal,
a tractului respirator superior i a tegumentelor umane i animale.
Caractere morfotinctoriale
Sunt bacili nesporulai, neciliai, Gram-negativi, scuri i groi, cu capete
rotunjite, dispui n diplo. n produsele patologice apar sub form de cocobacili,
nconjurai de capsul.
Caractere de cultur
Nu sunt germeni pretenioi, crescnd foarte bine pe mediile de cultur
convenionale. Sunt germeni aerobi, facultativ anaerobi. Temperatura optim de
cretere este de 37C, dar pot cre te i la temperatura camerei. Pe geloz simpl
determin formarea de colonii foarte bombate, alb-cenuii, lucioase, cu aspect
mucos (colonii tip M). Se observ deseori apariia de variante ale tipului de
colonie: tipul S i tipul R (colonii plate i uscate). Pe mediile slab selective i
pstreaz aspectul mucoid al coloniilor, iar mediile moderat selective induc
formarea de colonii cu caracter mucoid mai puin pregnant dect cel de pe
celelalte medii.
Caractere biochimice
Fermenteaz lactoza, zaharoza i glucoza cu eliberare de acid i gaz. Nu
produc indol, cu excepia tulpinilor de K. oxytoca. Produc ureaz, acetil-metil
carbinol, folosesc citratul ca unic surs de carbon, dar nu descompun proteinele
cu eliberare de H2S.
Rezistena fa de factori fizici, chimici i biologici
Tulpinile de Klebsiella sunt omorte de cldura umed (la 55C n 30
minute). La temperatura camerei i la ntuneric pot supravieui sptmni i luni de
zile. Unele tulpini pot prezenta o cretere a rezistenei la antiseptice i
dezinfectante.
Klebsiella spp. este sensibil la cefalosporinele de generaia a III-a,
floxacine, colimicin i gentamicin.
Structura antigenic
n genul Klebsiella sunt descrise 3 feluri de antigene: antigenul somatic O
(ntlnit la formele smooth), antigenul somatic R (ntlnit la formele rough) i
antigenul capsular K. Nu prezint antigen flagelar H. n schema antigenic de
diagnostic se disting 5 grupe de antigene O i 77 de fraciuni antigenice K. Unele
tulpini izolate de la copii mici sau nou-nscui cu gastroenterit secretatau o
enterotoxin termostabil.
Rspuns imun
n cadrul infeciei cu tulpini patogene de Klebsiella apare un rspuns imun
umoral i celular din partea gazdei, dar prezena capsulei protejeaz bacteriile de
aciunile acestora.
Caractere de patogenitate
Tulpinile genului Klebsiella sunt patogene prin virulen. Virulena lor este
legat de prezena capsulei de natur polizaharidic, format din D-glucoz,
fucoz i acid uronic. i a fimbriilor (tabel XIX)
PATOGENIE . BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
TRATAMENT
G E N U L E N TE R O B AC TE R
DEFINIIE, NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Germenii aparinnd acestui gen sunt rspndii n natur (ap, sol, plante),
n tractul intestinal al oamenilor i animalelor i ocazional i ntlnim n alimente.
Caractere morfotinctoriale
Sunt cocobacili Gram-negativi, ciliai, nesporulai.
Caractere de cultur
Se dezvolt repede pe mediile simple formnd colonii S, mari (2-3 mm).
Colonii R, rugoase, conopidiforme determin E. agglomerans, iar E. aerogenes
colonii mari, mucoase, de tip M, lactozo-pozitive, asemntoare celor de Klebsiella
spp. E. agglomerans i E. sakazakii produc un pigment galben dup 2-4 zile de la
nsmnare.
Caractere biochimice i de metabolism
Speciile genului Enterobacter sunt germeni lactozo-pozitivi, zaharozo-
pozitivi, glucozo-pozitivi cu eliberare de gaz (excepie fcnd cteva biovaruri de
E. agglomerans), ureazo-negativi. Nu produc fenilalanindezaminaz, H2S, indol iar
lizindecarboxilaz au doar dou specii (E. aerogens i E. gergoviae).
Rezistena fa de factori fizici, chimici i biologici
Sunt enterobacterii rezistente, putnd supravieui n apa distilat i
deionizat n mediul intraspitalicesc, n soluii perfuzabile, sau chiar n apa utilizat
n aparatele de hemodializ sau n cele folosite pentru terapia respiratorie. Sunt
rezistente fa de cefalosporinele de prim generaie i fa de unele de generaie
mai nou. Prezint o rezisten crescut la antiseptice i dezinfectante.
Structur antigenic
Structura antigenic a genului Enterobacter este reprezentat de antigenele
somatice O cu specificitate de grup i de cele flagelare H specifice de tip, fiind
cunoscute 79 de serotipuri de Enterobacter. n mod normal nu prezint antigen K.
Rspuns imun
Apar anticorpi anti-O i anti-H care nu au rol protectiv.
Caractere de patogenitate
Patogenitatea tulpinilor de Enterobacter se datoreaz virulenei (tabel XX)
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
TRATAMENT
G E N U L H AF N I A
DEFINIIE, NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
S-a putut evidenia n ape poluate, n sol, materii fecale etc.
Caractere morfotinctoriale
Bacil Gram-negativ, necapsulat, nesporulat, ciliat.
Caractere de cultur
Crete cu uurin pe mediile uzuale sub form de colonii S, mai rar de tip
R.
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
TRATAMENT
Tratamentul se face conform antibiogramei i localizrii infeciei.
G E N U L S E R R ATI A
DEFINIIE, NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Germenii aparinnd acestui gen sunt rspndii n natur (ap, sol, plante),
n tractul intestinal al oamenilor i animalelor i ocazional i ntlnim n alimente.
Caractere morfotinctoriale
Sunt parvobacili, Gram-negativi, cu cili peritrichi.
Caractere de cultur
Sunt germeni nepretenioi, crescnd bine pe medii simple. n bulion cresc
foarte bine, determinnd apariia unui inel rou sau a unei pelicule la suprafaa
mediului. Pe geloz simpl determin formarea de colonii de tip S, rotunde,
bombate, cu diametrul de 1-2 mm, care au consisten untoas. Dup 48-72 ore
de la nsmnare speciile S.marcescens, S.rubidaea, S.plymuthica produc un
pigment rou aprins. Pe geloz-snge S.marcescens formeaz colonii hemolitice.
Caractere biochimice
Sunt enterobacterii mobile, lactozo-negative care fermenteaz glucoza cu
eliberare de acid i de gaz n cantiti mici. Speciile acestui gen produc proteaze,
decarboxilaze, dezoxiribonucleaze, lipaze. Nu produc indol, H2S,
fenilalanindezaminaz. Testul Voges-Proskauer i -galactozidaza sunt pozitive.
Specific speciei S.odorifera este producerea de miros putred.
Rezistena fa de factori fizici, chimici i biologici
Sunt bacterii foarte rezistente att fa de antiseptice i dezinfectante ct i
fa de antibiotice.
Structur antigenic
Pe baza antigenelor O i H s-a ntocmit o schem antigenic ce cuprinde
70 serovaruri.
Rspuns imun
Se formeaz anticorpi neprotectivi anti-O i anti-H.
Caractere de patogenitate
Patogenitatea este datorat, probabil, unor pili de tip 2 i enterotoxinelor.
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
TRATAMENT
DEFINIIE, NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Germenii din genul Proteus sunt ubicuitar rspndii n natur, putndu-se
ntlni n sol, ape reziduale, ape de suprafa, n materiile organice n putrefacie,
n tractul intestinal uman, n alimente i n produse patologice.
Caractere morfotinctoriale
Sunt bacili Gram-negativi, ciliai peritrichi sau lofotrichi. Sunt polimorfi: au
variate forme, de la bastonae scurte de 1-3 m lungime, pn la forme lungi
filamentoase. Nu prezint capsul i nici spori.
Caractere de cultur
Nu sunt germeni pretenioi. Pe geloz simpl i pe geloz-snge au
caracteristica unic n familia Enterobacteriaceae de a invada mediul, fenomen
numit fenomen de crare. invazie, roire. Din locul inoculrii, valuri succesive
de cultur migreaz concentric pn la marginea mediului sau pn la ntlnirea
cu vlul migrator al altei colonii. Dac coloniile migratoare aparin aceleiai tulpini,
valurile se intric, formnd o pnz continu. Dac ele aparin unor tulpini diferite,
chiar din aceeai specie de Proteus, migrrile se opresc la o distan de 1-2 mm,
ntre ele trasndu-se o linie de demarcaie, fenomen cunoscut sub numele de
fenomen Dienes. Acesta reprezint un important marker epidemic. Pe mediile
selective care conin sruri biliare, dezoxicholat, morfin etc. Proteus crete sub
form de colonii S, netede, rotunde, translucide, lactozo-negative, de culoarea
mediului, n ochi de pisic datorit producerii de H2S, evideniat prin apariia unei
pete de culoare neagr n centrul coloniilor.
Caractere biochimice
Sunt germeni aerobi, facultativ anaerobi, care fermenteaz glucoza cu
producere de acid i puin gaz. Unele tulpini pot fermenta zaharoza.
Nefermentarea lactozei este un indicator al patogenitii. Proteus vulgaris este
singurul care produce indol i care nu fermenteaz maltoza. Producerea de H2S
este obligatorie n cadrul acestui gen. Descompun ureea. Produc
fenilalanindezaminaz; specia P.vulgaris fiind singura care nu produce
ornitindecarboxilaz. Proteus spp. iau parte la procesele de putrefacie, pe de o
parte prin folosirea oxigenului din mediu, favoriznd dezvoltarea bacteriilor
anaerobe, i pe de alt parte prin sinteza de enzime proteolitice care descompun
proteinele. Acest aspect se evideniaz pe mediul Lffler prin lichefierea mediului.
Rezistena fa de factori fizici, chimici i biologici
Rezistena fa de factori fizici i chimici a tulpinilor de Proteus este similar
rezistenei celorlalte enterobacterii. Poate rezista o perioad mai ndelungat n
unele soluii antiseptice, de detergeni, precum i n soluii perfuzabile, n cele care
conin glucoz putndu-se multiplica la temperatura camerei, fapt ce explic
difuzibilitatea bacteriilor n mediul spitalicesc. Rezistena la antibiotice a acestor
bacterii este foarte mare.
Structur antigenic
Proteus spp. pot prezenta antigen somatic O, antigen flagelar H, pili i
enterotoxine.
Antigenul somatic O prezint specificitate de grup, fiind comun la P.vulgaris
i P.mirabilis. Se cunosc 55 antigene somatice O.
Antigenul flagelar H, cu specificitate de tip, prezint 31 de fraciuni
antigenice.
Anumite tulpini de P.vulgaris (OX-19, OX-2, OX-K) produc antigene
asemntoare antigenelor unor tulpini de Rickettsia. Aceste tulpini sunt folosite n
testele de aglutinare (testul Weil-Felix) pentru decelarea anticorpilor serici produi
mpotriva Rickettsia prowazeki, agenii tifosului exantematic.
Proteus spp. nu prezint antigen capsular (K).
Caractere de patogenitate
Patogenitatea Proteus spp. este determinat de factori de virulen (tabel
XXI).
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
TRATAMENT
DEFINIIE, NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Habitatul este prea puin cunoscut, de la om au putut fi izolate cel mai
frecvent din urin i materii fecale.
Caractere morfotinctoriale
Sunt bacili Gram-negativi, ciliai, necapsulai, nesporulai.
Caractere de cultur
Pe mediile de cultur formeaz de colonii de tip S.
Caractere biochimice i de metabolism
Din punct de vedere metabolic sunt foarte asemntoare cu Proteus spp.
diagnosticul diferenial fiind dat de lipsa migrrii pe mediile de cultur simple,
utilizrii citratului ca unic surs de carbon i de capacitatea de a scinda
malonatul.
Izolate pe mediile selective i difereniale, se vor dezvolta sub form de
colonii tip S, lactozo-negative. Fermentarea glucozei se face cu eliberare de acid
n cantiti foarte mici sau fr producere de gaz. Nu produc H2S dar produc
fenilalanindezaminaz i indol. Numai unele specii pot produce ureaz (P.rettgeri
i unele tulpini de P.stuartii).
Structur antigenic
Providencia spp. prezint antigene somatice O, cu specificitate de grup i
antigene flagelare H, cu specificitate de tip. P.rettgeri cuprinde 45 serovaruri
datorit celor 34 fraciuni antigenice O i 26 fraciuni antigenice H. Providencia
stuartii i P. alcalifaciens cuprind, mpreun, 45 serovaruri datorate fraciunilor
antigenice O (62), respectiv H (30).
Rspuns imun
Rspunsul imun al gazdei se caracterizeaz prin formare de anticorpi anti-
O i anti-H specifici i neprotectivi.
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
TRATAMENT
G E N U L M OR GA N E L L A
DEFINIIE, NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
M.morganii are un habitat puin studiat. La om se poate evidenia din
materiile fecale, din urin i mai rar din snge.
Caractere morfotinctoriale
Morganella spp. sunt bacili Gram-negativi, nesporulai, necapsulai, ciliai.
Caractere de cultur
Sunt germeni nepretenioi, pe geloz simpl formnd colonii tip S. Nu
prezint fenomen de migrare, iar pe cele selective coloniile sunt de culoarea
mediilor, lactoz negative.
Caractere biochimice i de metabolism
Bacili lactozo-negativi, care produc cantiti sczute de gaz la fermentarea
glucozei i nu fermenteaz zaharoza. Nu produc H2S, sunt indol-pozitivi, mobili,
productori de fenilalanindezaminaz. Nu produce lizindecarboxilaz i nu
utilizeaz citratul ca unic surs de carbon.
Structur antigenic
Antigenele somatice O (34 fraciuni) i antigenele flagelare H ( 25 fraciuni)
mpart specia n serovaruri.
Rspuns imun
Elaborarea anticorpilor anti-O i anti-H neprotectivi.
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
TRATAMENT
G E N U L P S E UDO M O N AS
DEFINIIE, NCADRARE
P SE UD O M O N A S AE R U G I NO S A
CARACTERE GENERALE
Este numit i bacilul piocianic este specia izolat cel mai frecvent n
laboratorul de bacteriologie.
Habitat
Comensal al tubului digestiv, este un microorganism ubicuitar, prezent n
sol, pe plante. Este o bacterie creia i place apa. A fost izolat din apa de ru, de
canal, de piscin, de mare, din apa potabil, mineral, termal etc. Se gsete pe
vegetale, legume, fructe, flori. Contamineaz produsele alimentare sau
farmaceutice chiar dac sunt stocate la frigider. Este din ce n ce mai frecvent
izolat din mediul de spital de pe diferite suprafee sau chiar de pe instrumente,
dispozitive medicale, din soluii antiseptice, injectabile, produse medicamentoase
sau cosmetice.
Caractere morfotinctoriale
Pseudomonas aeruginosa este un bacil fin, Gram negativ, dispus izolat, n
perechi sau lanuri scurte, nesporulat, prezentnd un cil polar care i confer
mobilitate.
Caractere de cultur
Este un germen nepretenios care poate crete i n ap distilat. Poate
crete pe medii simple n strict aerobioz. Temperatura la care se poate dezvolta
variaz n limite largi pentru tulpinile patogene: 5 - 42C. Dup 24 ore de incubare
dezvolt colonii S, transparente. Att colonia ct i mediul sunt pigmentate n
verde-albstrui, colonia avnd reflexe metalice. Cultura eman un miros aromat
de tei, salcm sau iasomie. Pe geloza-snge cultura este nconjurat de o zon
larg de hemoliz beta. Pe medii lactozate coloniile sunt lactoz negative
Pentru identificare se folosesc medii care stimuleaz producerea de
pigment: mediul King A pentru piocianin i mediul King B pentru pioverdin.
Pe medii lichide, Pseudomonas aeruginosa crete sub forma unei pelicule
fine la suprafa sub care se acumuleaz un strat de pigment.
Caractere biochimice
Pseudomonas aeruginosa nu atac fermentativ zaharurile dar poate
descompune oxidativ glucoza determinnd acidifierea mediului. Este oxidaz
pozitiv, descompune gelatina, nu produce indol, H2S, ureaz. Sintetizeaz o serie
de enzime (nitrat-reductaz, arginin-dehidrogenaz) n timp ce este deficitar n
sinteza lizin-decarboxilazei, ornitin-decarboxilazei, ortonitrofenil-galactozei.
Utilizeaz diferite substraturi ca unic surs de carbon: glucoz, acid lactic, acid
acetic, manitol, arginin, citrat, malonat etc.
Produce pigment alctuit din 2 componente:
- piocianina de culoare verde-albstruie, solubil n cloroform;
- pioverdina, galben-verzuie, fluorescent, solubil n ap.
Exist totui 10% din tulpini care nu produc pigment i 1% din tulpini care
produc un pigment rou sau negru.
Rezistena fa de factori fizici, chimici i biologici
Este o bacterie rezistent n mediul extern, supravieuind mai multe luni de
zile i chiar multiplicndu-se n ap la temperatura mediului ambiant.
Produce bacteriocine care au efect bacteriostatic fa de alte tulpini (piocine
i aeruginocine).
Este rezistent i fa de unele antiseptice i dezinfectante. Este sensibil la
pH acid i la srurile de Ag.
Este deosebit de rezistent fa de antibiotice. Rezistena natural fa de
antibiotice este datorat impermeabilitii membranei externe i producerii unei
beta-lactamaze inductibile. Rezistena dobndit apare prin 2 mecanisme care
uneori au aciune sinergic:
- Structura lipopolizaharidului membranar este heterogen, porinele
membranei externe, al cror numr i dimensiuni variaz, condiioneaz
permeabilitatea pentru antibiotice.
- Posed numeroase plasmide transferabile prin conjugare sau prin
transducie i mare parte a tulpinilor sunt lizogene. Se explic astfel numeroasele
variaii genetice ale tulpinilor de Pseudomonas aeruginosa, n special n ceea ce
privete polirezistena fa de substanele antibacteriene.
Este sensibil la aciunea unui numr variabil de bacteriofagi.
Structur antigenic
Pseudomonas aeruginosa posed un antigen somatic O, de natur
lipopolizaharidic, termostabil, localizat n peretele bacterian. Acest antigen are 20
de variante fa de 16 dintre ele fiind obinute seruri imune specifice (O:1 O:16).
Aceste seruri pot fi livrate i sub forma de seruri polivalente, fiecare grupnd 4
antiseruri, notate cu litere majuscule A, C, E, F. Serotipurile O:6 i O:11 sunt cel
mai frecvent izolate n laboratorul de bacteriologie medical iar serotipul O:12 este
foarte rezistent la antibiotice.
Antigenul flagelar H este e natur proteic.
Slime, substana mucoid extras din coloniile mucoase ale tulpinilor
implicate n infecii ale tractului respirator la pacieni cu fibroz chistic este factor
de adeziune.
Rspuns imun
Persoanele cu sistem imun integru se apr fa de colonizarea cu
Pseudomonas aeruginosa prin mecanisme nespecifice: fagocitoz i complement
seric. Mijloacele aprrii nespecifice pot fi depite n urma ingestiei sau inoculrii
unei cantiti mari de germen sau a unei tulpini foarte virulente. n aceste cazuri
infecia se instaleaz i se generalizeaz nainte ca organismul s dezvolte un
rspuns imun specific.
Imunitatea este asigurat de anticorpi anti-lipopolizaharidici, anti-proteaze
i anti-toxici.
Caractere de patogenitate
Tulpinile de Pseudomonas aeruginosa sunt patogene prin virulen i
toxigenez. Este puin virulent pentru organismul sntos dar devine agresiv
pentru cei imunodeprimai.
Virulena este asigurat de:
- capsul. Are rol de adezin, mpiedic ptrunderea antibioticelor n
celula bacterian, are rol antifagocitar;
- pili. Asigur adeziunea de substratul specific;
- lipopolizaharidul din peretele bacterian, are rol de endotoxin;
- sideroforii.
- Tulpinile patogene de Pseudomonas aeruginosa sintetizeaz
numeroase substane difuzibile cu efect toxic:
- citotoxina de natur proteic, altereaz leucocitele;
- hemolizine, glicolipide, fosfolipaza C care acioneaz sinergic;
- proteaze, elastaze, colagenaze care lezeaz esuturile;
- exotoxina A, de natur proteic, sintetizat n cantiti variabile n funcie
de tulpin. Are structur i mod de aciune similar toxinei difterice dar nu poate fi
transformat n anatoxin. Inhib sinteza proteic, lezeaz esuturile, are aciune
de imunodeprimare;
- exotoxina S, mai puin toxic, prezent la tulpinile cu afinitate pentru
esutul pulmonar. Inhib sinteza proteic i produce imunosupresie.
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
TRATAMENT
G E N U L B AC TE R OI DES
DEFINIIE, NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Au ca habitat intestinul unde se gsesc n cantitate de 109 germeni / gram
de materii fecale.
Caractere morfotinctoriale
Sunt bacili Gram negativi, mari, polimorfi, colorai bipolar, neciliai.
Caractere de cultur
Cultiv n strict anaerobioz, la 37C, pe medii cu snge. Cre te sub
form de colonii mari, bine delimitate, netede, lucioase, n general nehemolitice
Creterea le este inhibat pe medii cu dezoxicolat dar este stimulat de bil. Pe
geloza-snge cu bil Bacteroides fragilis descompune srurile biliare ducnd la
apariia unui precipitat cafeniu n jurul coloniei. Pe agarul bil-esculin hidrolizeaz
esculina determinnd nnegrirea mediului
Caractere biochimice
Descompune fermentativ carbohidraii cu eliberare de acid i gaz metaboliii
finali fiind acidul acetic i acidul succinic.
Rezistena fa de factori fizici, chimici i biologici
Produc beta-lactamaz care inactiveaz penicilinele i cefalosporinele cu
excepia cefamicinelor. Sunt sensibile fa de metronidazol i clindamicin.
Caractere de patogenitate
Bacteroides fragilis este patogen prin:
- lipopolizaharidul cu specificitate de tip care are activitate endotoxic
slab;
- capsula polizaharidic ce are rol antifagocitar;
- enzime eliberate extracelular: proteinaze, colagenaze, fibrinolizina,
fosfataze, hialuronidaze etc.
PATOGENIE. BOALA LA OM
G E N U L P O RP H Y RO M O N AS
DEFINIIE, NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
P.asaccharolytica habiteaz colonul i vaginul n timp ce P.catoniae,
P.endodontalis sunt componente ale microbiotei din crevasele gingivale.
Caractere morfotinctoriale
Se prezint sub form de bacili i cocobacili Gram negativi, neciliai,
nesporulai.
Caractere de cultur
Pretenioase nutritiv, cultiv lent, n strict anaerobioz producnd un
pigment brun sau negru care poate colora colonia, se poate dezvolta n jurul sau
sub colonie n interval de 6-10 zile. Dup incubare la 37C timp de 5-7 zile apar
colonii de diferite dimensiuni, rotunde, cu margini bine delimitate, lucioase, umede
Caractere biochimice
Descompune fermentativ o serie de aminoacizi: aspartic, glutamic cu
metabolii finali acidul n-butiric, acetic i propionic.
Rezistena fa de factori fizici, chimici i biologici
Sunt sensibile la amoxicilin, macrolide, clindamicin, fluorochinolone,
metronidazol.
PATOGENIE. BOALA LA OM
G E N U L P RE VO TE LL A
DEFINIIE, NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Sunt componeni ai microbiotei bucale. P.melaninogenica se gsete n
crevasele gingivale i n vagin. P.intermedia i P.nigrescens fc parte din
microbiota colonului i a cavitii bucale a omului i animalelor.
Caractere morfotinctoriale
Sunt bacili Gram negativi polimorfi predominnd formele cocobacilare,
neciliai, nesporulai.
Caractere de cultur
n strict anaerobioz, dup incubare la 37C timp de 48 de ore, apar
colonii de diferite dimensiuni, rotunde, cu margini bine delimitate, lucioase, umede.
Unele specii produc un pigment brun sau negru care poate colora colonia, se
poate dezvolta n jurul sau sub colonie. Hemoliza variaz cu specia.
Creterea este favorizat de hemin i menadion i inhibat de
concentraia de 6,5% NaCl, bil, sruri biliare.
Caractere biochimice
Descompune fermentativ carbohidraii elibernd ca metabolii finali acid
acetic i succinic.
Rezistena fa de factori fizici, chimici i biologici
Sunt, n marea majoritate, sensibile la benzilpenicilin i amoxicilin dei
unele tulpini, prin secreia de beta-lactamaz devin rezistente fa de aceste
substane antibacteriene. Sunt sensibile fa de macrolide i metronidazol.
Structur antigenic
PATOGENIE. BOALA LA OM
G E N U L FU S O BAC TE R I U M
DEFINIIE, NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Fusobacterium nucleatum, F.periodonticum, F. alocis i F.necrophorum au
ca habitat cavitatea bucal a omului. F.naviforme i F.gonidioformans sunt
componente ale microbiotei vaginale.
Alte specii de fusobacterii fac parte din flora tractului intestinal.
Caractere morfotinctoriale
Sunt bacili Gram negativi polimorfi: forme filamentoase, balonizate,
fusiforme, cocobacilare. Nu prezint cili sau spor.
Caractere de cultur
Cultiv n strict anaerobioz, la 37C, incubare timp de 48 de ore dup
care apare cultura ce eman un intens miros putid. Coloniile sunt:
- mari, turtite, opace, albe sau cenuii, margini neregulate, nconjurate de
beta-hemoliz Fusobacterium necrophorum subspecia necrophorum;
- mici, rotunde, margini regulate, cenuii, slab i tardiv beta-hemolitice -
Fusobacterium necrophorum subspecia funduliformis sau alte specii;
Caractere biochimice
Descompune fermentativ carbohidrai, aminoacizi sau peptide elibernd n
final acid n-butiric.
Rezistena fa de factori fizici, chimici i biologici
Sunt sensibile la clindamicin, carbapeneme, metronidazol. Produc beta-
lactamaze ceea ce le confer rezisten fa de antibioticele de tip beta-lactamic.
PATOGENIE. BOALA LA OM
G E N U L V I B RI O
DEFINIIE, NCADRARE
Microorganismele din acest gen sunt bacili Gram negativi, ncurbai n
virgul, mobili printr-un flagel polar, nesporulai, necapsulai, catalazo- i oxidazo-
pozitivi. Se multiplic n mediu alcalin (pH 7-9) fiind organisme acvatice adaptate
la variate saliniti.
Sunt cunoscute 36 de specii de Vibrio, dintre care cel puin 12 sunt
patogene sau cu potenial patogen pentru om. Germenii din acest gen determin
cel mai frecvent boli gastrointestinale dar i infecii invazive (septicemii cu punct
de plecare necunoscut sau din plgi suprainfectate), infecii ale plgilor expuse la
ap marin. Specii cu importan medical sunt
- Vibrio cholerae, agentul etiologic al holerei,
- Vibrio parahaemolyticus, determin infecii gastrointestinale,
infecii ale plgilor,
- Vibrio vulnificus, determin septicemie, infecii localizate ale
plgilor.
V I B RI O CH O L E R AE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Vibrionii sunt microorganisme acvatice, putnd supravieui n ape marine
sau ape dulci i formeaz o microflor autohton a apelor slcii, a lacurilor srate,
estuarelor i a apelor marine i oceanice din vecintatea rmurilor situate n
zonele temperate i calde.
n apele dulci se pot gsi speciile non-halofile, ca V. cholerae, dar prezena
lor este tranzitorie. n apele marine i estuariene, speciile halofile care tolereaz
concentraii crescute de NaCl persist sub mai multe forme: forma liber, forma
epibiotic i forma dormant. Forma liber persist att timp ct apa le ofer
concentraii optime de nutrieni necesari pentru cretere. Forma epibiotic
reprezint o asociere strns a vibrionilor cu matricea chitinoas a
zooplanctonului, scoicilor sau a copepodelor. Aceast asociere este favorizat de
producerea de ctre vibrioni a chitinazei care poate descompune i recicla
substana organic planctonic. Forma dormant este reprezentat de
microvibrioni i celule viabile dar necultivabile i a fost demonstrat prin coloraii
imunofluorescente a probelor de mediu.
Caractere morfologice
Sunt bacterii cu form de bastonae relativ scurte (1,5 - 3 / 0,5m),
ncurbate sau drepte, alteori n form de S, Gram negative, prezentnd un flagel la
unul dintre capete. Nu prezint spori i nici capsul.
Caractere de cultur
Vibrionii sunt bacterii aerobe. Cresc pe medii cu pH alcalin care au n
componen sruri biliare. Pe ap peptonat alcalin vibrionii au o cretere rapid,
n 6 ore fac un vl fin la suprafa i tulbur mediul.
Pe mediile solide dau colonii de tip S, umede. Pe mediul TCBS descompun
sucroza coloniile avnd culoarea galben. Pe geloz snge variantele
neholerigene produc n general colonii hemolitice. Dintre tulpinile holerigene,
biotipul El Tor produce hemoliz beta.
Caractere biochimice i de metabolism
Vibrio cholerae este un germen aerob, oxidazo-pozitiv i catalazo-pozitiv.
Descompune unele zaharuri (glucoz, manoz, sucroz i galactoz), este indol
pozitiv, nu produce ureaz i H2S
Aciunea agenilor fizici i chimici
Vibrio cholerae moare repede prin expunere la lumin, uscare i
antiseptice. n scaunul bolnavilor rezist cteva zile la frig. Rezistena sa n ap
depinde de temperatur, pH, i prezena altor microorganisme. n zonele
temperate se izoleaz din ape, sedimente, plancton, pete, molute i crustacee
n anotimpurile clduroase. Dac temperatura apei nu scade sub 10C se pot izola
n toat perioada anului. n fructe, pete i alte vieuitoare marine rezist 2 3 zile
la temperaturi de 20 - 30C, iar n unt i ngheat mai multe zile. n lapte moare
repede datorit mediului acid.
Structura antigenic
Vibrio cholerae posed antigen flagelar H i un antigen somatic O.
Antigenul flagelar H este comun tuturor vibrionilor.
Pe baza antigenului somatic O vibrionii au fost ncadrai n mai multe
serogrupe notate O1-O6 i O139. Dintre acestea patogene (holerigene) sunt
serogropele O1 i O139. Celelalte serogrupuri sunt neholerigene.
Serogrupul O1 prezint dou biotipuri: clasic i El Tor, difereniate pe baza
unor proprieti fiziologice i a sensibilitii fa de bacteriofagi. Tot serogrupul O1
prezint 13 factori antigenici notai cu litere mari de la A la M. Prin combinaia
acestor factori antigenici, biotipurile se subdivid n 3 serotipuri: Inaba (A+C),
Ogawa (A+B) i Hikojima (A+B+C)
Rspunsul imun
n urma infeciei holerice apar anticorpi fa de:
- antigenul somatic O. Sunt considerai vibriocizi deoarece
determin liza vibrionilor n prezena complementului seric. Titrul acestor anticorpi
crete atingnd un maxim la 10 zile de la infecie, apoi scade rmnnd la un titru
constant 2 7 luni. Prezena lor determin rezisten la reinfecii.
- antigenul flagelar H. Anticorpii antiflagelari determin imobilizarea
vibrionilor.
- anticorpi antitoxici.
Cu toate c titrul anticorpilor virulicizi scade, totui nu se observ foarte
multe reinfecii. Acest lucru poate fi explicat prin prezena anticorpilor secretori de
tip IgA. Acetia acioneaz la nivelul mucoasei intestinale i nu necesit prezena
complementului.
Imunitatea dup vaccinare este parial i dureaz numai 3-6 luni.
Caractere de patogenitate
Cel mai important caracter de patogenitate este reprezentat de producerea
de toxin holeric. Aceasta este o enterotoxin de natur proteic. Este alctuit
din dou subuniti active A i 5 subuniti de aderare. Subunitile B se fixeaz
de receptori specifici ai enterocitelor, permind subunitilor A s acioneze.
Aciunea lor const n activarea adenilciclazei urmat de acumularea de AMPc n
enterocite. Activarea sistemului adenilciclaz/AMPc duce la inhibarea absorbiei
intestinale de sodiu i creterea secreiei de ap n lumenul intestinal. De
asemenea crete eliminarea de potasiu i bicarbonat de sodiu. Urmarea acestei
aciuni este apariia unei diareei apoase cu pierdere masiv de electrolii.
Ali factori de patogenitate sunt mobilitatea i producerea de chemotaxine
care permit vibrionilor s se ndrepte direct ctre suprafaa enterocitelor.
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
TRATAMENT
VIBRIO PARAHAEMOLYTICUS
VIBRIO VULNIFICUS
DEFINIIE, NCADRARE
Microorganismele din acest gen sunt bacili spiralai, Gram negativi, cu 4-6
flageli la un pol i sunt microaerofili. Pe baza acestor caractere au fost ncadrai la
nceput n genul Campylobacter. Mai recent, studii de taxonomie molecular au
pledat pentru ncadrarea lor ntr-un gen nou, genul Helicobacter.
Germenii din genul Helicobacter au ca habitat natural omul i animalele
care le gzduiesc n:
- stomac: H.pylori, H.heilmanni, H.nemestrinae, H.acinonyx, H.mustelae,
H.felis, H.bizzozeronnii etc;
- intestin: H.cinaedi, H.fenneliae, H.canis, H.hepaticus, H.pullorum,
H.bilis, H.muridarum etc.
Importan medical o are Helicobacter pylori i mai puin Helicobacter
heilmannii. Evidenierea n 1982, prin examen microscopic i cultur a H. pylori n
biopsiile de mucoas gastric a fost probabil cea mai important descoperire
medical de la sfrit de secol, cercetrile ulterioare demonstrnd implicarea
acestei bacterii n patogenia afeciunilor gastroduodenale.
HELICOBACTER PYLORI
CARACTERE GENERALE
Habitat
H. pylori colonizeaz mucoasa gastric, ndeosebi zona antral, fiind
deosebit de bine adaptat la condiiile ostile oferite de stomac. Odat stabilit in
stomac poate persista o lung perioad de timp, chiar toat viaa. Poate disprea
spontan odat cu instalarea gastritei atrofice ce determin dispariia receptorilor
specifici.
Caractere morfotinctoriale
Sunt bacterii Gram negative, ncurbate sau spiralate, prezentnd 4-6 flageli
localizai la un pol. La microscopul electronic pot avea forma literei S sau pot fi
cocoide.
Caractere de cultur
Pentru cultivare se utilizeaz o gam larg de medii care trebuie
suplimentate cu snge 10% i ageni antimicrobieni pentru a preveni contaminarea
fungic i bacterian. Plcile se incubeaz la 37C, n microaerofilie (CO2 10%, N
85%, O2 5%), peste 7 zile, cu prima citire la 3 zile.
H.pylori produce colonii de tip S, translucide, de 1-2 mm.
Caractere biochimice i de metabolism
Sunt bacterii care cresc n condiii de microaerofilie, au metabolism
respirator, nu cresc la 25C, sunt oxidazo pozitive i nu descompun zaharurile.
Principala caracteristic biochimic este producerea de ureaz n cantiti mari,
descompunnd ureea din mediu n 5-20 de minute. Testul ureazei este astfel
principalul test screening n diagnostic.
Rezistena la ageni fizici i chimici
H. pylori are o rezisten sczut n mediul extern, dar este rezistent la pH-
ul acid din stomac.
Structura antigenic
H. pylori prezint ase structuri antigenice: ureaza, proteinele de oc termic
(HSP B), lipoproteina 20, DnaK, metionin-sulfoxid-reductaza A i o protein cu
greutatea de 28 kDa bogat n cistein.
Rspunsul imun
mpotriva bacteriei organismul secret IgA i IgG. La majoritatea
persoanelor infectate, datorit alterrii mucoasei gastrice, IgA reprezint un
mecanism de aprare ineficient. De asemenea datorit localizrii extracelulare a
bacteriei, la suprafaa celulei epiteliale, spre cavitatea stomacului, bacteria este
ferit de aciunea IgG.
Lipopolizaharidele din structura H. pylori determin producerea de
autoanticorpi care vor determina i apoi accentua atrofia mucoasei gastrice. Acest
eveniment se asociaz cu scderea titrului IgG.
Prezena H. pylori pe suprafaa mucoasei gastrice se nsoete de prezena
unui infiltrat inflamator format din limfocite, plasmocite, macrofage,
polimorfonucleare.
Caractere de patogenitate
Factorii de patogenitate sunt reprezentai de enzimele i citotoxinele pe
care le secret bacteria. Acestea sunt:
- ureaza asigur supravieuirea bacteriei n mediul acid al stomacului
prin neutralizarea aciditii gastrice, stimuleaz chemotaxia neutrofilelor i
producerea de citokine inflamatorii;
- fosfolipaza A i proteaza diger mucusul;
- proteina ocului termic crete activitatea ureazei;
- factori de colonizare, adezine care mediaz legarea la celula gazd;
- flagelii care asigur penetrarea n mucusul gastric protejnd bacteria de
pH-ul acid;
- citotoxinele.
Citotoxinele sunt de dou tipuri: vacuolizant i asociat genei A. Citotoxina
vacuolizant determin apariia de vacuole n celulele mucoasei. Secreia ei este
codificat de gena Vac A. Din motive necunoscute, 60% dintre tulpini nu secret
aceast citotoxin.
Citotoxina asociat genei A determin celulele gastrice s secrete factori
chemotactici pentru neutrofile. Producerea ei este codificat de gena Cag A. 40%
dintre tulpini nu secret aceast toxin.
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
TRATAMENT
HELICOBACTER HEILMANNII
Investigarea curent a biopsiilor gastrice pentru infecia cu H.pylori a dus la
descoperirea unei alte bacterii spiralate. Descris pentru prima dat n 1987 este
denumit iniial Gastrospirillum hominis, pentru ca ulterior s fie inclus n genul
Helicobacter ca Helicobacter heilmannii.
Prevalena infeciei este mult mai sczut, comparativ cu H. pylori, fiind
apreciat la 0,25-1,9% din persoanele care au efectuat gastroscopie. Forma
spiralat, flagelii multiplii bipolari i producerea de ureaz i permit bacteriei s
colonizeze mucoasa gastric. Colonizarea este urmat de apariia unei gastrite
cronice active.
Infecia este suspectat de a fi o zoonoz, deoarece bacterii necultivabile
cu caractere morfologice i structurale asemntoare au fost puse n eviden la
cini, pisici, porci.
Diagnosticul etiologic este exclusiv microscopic prin recunoaterea
bacteriei pe frotiul efectuat din fragmentul de biopsie gastric colorat cu fucsin
Gram. H. heilmannii se prezint sub forma unor bacili spiralai, cu 4-8 spire
strnse, regulate, dispui mai ales n grupuri n stratul de mucus, la distan de
celulele epiteliului gastric.
Testul ureazei preformate este inconstant pozitiv, deoarece enzima este
produs n cantitate mai mic.
Imposibilitatea de a fi cultivat in vitro nu a permis obinerea unor antigene
pentru un eventual diagnostic serologic al infeciei.
G E N U L C AM P YL O B AC TE R
DEFINIIE. NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Germeni din genul Campylobacter sunt comensali n intestinul animalelor,
n general psri: pui, curcani, rae, pescrui (C. lari), dar i al mamiferelor:
bovine, ovine, cini i pisici. Germenii contamineaz laptele, alimentele i apa
potabil unde pot supravieui mai multe sptmni.
Caractere morfotinctoriale
Sunt bacili Gram negativi, de form spiralat, ncurbat sau asemntoare
literei S, prevzui cu un singur flagel polar la una sau ambele extremiti. Nu sunt
sporulai. n culturi mai vechi de 48 de ore se pot observa forme rotunjite de 0,5m
sau mai mari, denumite corpi cocoizi, care sunt de fapt un stadiu de degenerare
a bacteriilor datorit condiiilor de cultivare.
Examinarea preparatului nativ la microscopul cu fond ntunecat evideniaz
micarea caracteristic n zbor de musculi datorat flagelului unipolar.
Caractere de cultur
Cresc n condiii de microaerofilie, la o temperatur de 42-43C, pe medii
speciale, selective. Mediile selective conin factori nutritivi, snge de cal sau de
berbec i antibiotice ca ageni selectivi i inhibitori ai florei de asociaie.
Antibioticele folosite pot fi: vancomicin, trimetoprim, polimixin, cefalosporine.
Sunt disponibile mai multe medii gata preparate: Skirow, Preston, Campy-agar.
Coloniile tipice sunt mici, de aproximativ 1 mm diametru, nehemolitice, cu
tendina de curgere de-a lungul liniei de nsmnare, convexe, netede,
translucide, incolore sau gri, cu aspect de pictur de miere.
Caractere biochimice i de metabolism
Sunt germeni care cresc n microaerofilie, la 42-43C, oxidazo-pozitivi,
catalazo-pozitivi. Nu produc ureaz. Lipsa producerii de H2S pe mediul TSI i
hidroliza hipuratului de sodiu, difereniaz C. jejuni de C. coli.
Aciunea agenilor fizici i chimici
Germenii supravieuiesc n alimente n funcie de felul alimentului i de
condiiile de pstrare a lui. Astfel n laptele de vac crud supravieuiete 3
sptmni la 4C i 3 zile la 25C, la 60C moare ntr-un minut. n brnzeturi nu se
dezvolt datorit aciditii i coninutului n sare. n unele crnuri, cum sunt
carcasele de pasre care sunt frecvent i bogat contaminate, bacteriile se
multiplic dac sunt pstrate la temperaturi nalte de 35-42C. De asemenea
bacteria supravieuiete cteva luni sau sptmni n carnea pstrat prin
refrigerare sau congelare. Supravieuirea bacteriei este mai lung n carnea roie
pstrat n pachete vacuumate.
Campylobacteriile sunt sensibile la uscciune i temperatura camerei.
C. jejuni este sensibil la o serie de dezinfectani ca hipocloritul de sodiu,
fenol, alcool etilic, glutaraldehid, monocloramin. Astfel clorinarea apei i-a gsit
aplicare practic n prevenirea acestor infecii.
Sunt sensibili la eritromicin, macrolide, gentamicin, cloramfenicol,
tetraciclin. Sunt rezisteni la trimetoprim, vancomicin.
Structura antigenic
Tulpinile de C.jejuni sunt diferite din punct de vedere antigenic, se disting
cel puin 42 de serotipuri bazate pe antigenele O termostabile. De asemenea
proteinele flagelare sunt i ele de natur antigenic, putnd fi folosite n serotipare.
Rspunsul imun
Infecia acut determin o imunitate de scurt durat. Bolnavii prezint n
ser IgG, IgM i IgA specifice. IgA apar i n secreiile intestinale. Persistena i
gravitatea evoluiei bolii la pacienii cu SIDA sau hipogamaglobulinemie ne
sugereaz c n prevenirea i vindecarea bolii intervine att imunitatea umoral
ct i cea mediat celular.
Caractere de patogenitate
Capacitatea patogen a C. jejuni variaz de la tulpin la tulpin i este
determinat de mai muli factori legai de bacterie sau de gazd.
Factorii care determin caracterele de virulen sunt: producerea de toxine,
structura suprafeei celulare, folosirea fierului n metabolismul bacteriei.
C. jejuni produce enterotoxin, citotoxin i endotoxin.
Enterotoxina este asemntoare cu enterotoxina holeric i este produs
de 75% dintre tulpinile izolate de la bolnavi, n timp ce tulpinile izolate de la
purttori asimptomatici nu o produc sau o produc n cantitate redus. Este
termolabil, inactivndu-se ntr-o or la 56C i ntr-o lun la 4C. Este
responsabil de diareea de tip secretor i are efecte citopatice pe culturi de celule.
Citotoxina este o alt toxin produs de C. jejuni i are efecte citopatice pe
culturi celulare. Este mai tolerant fa de cldur dar este sensibil la aciunea
tripsinei.
Endotoxina este lipidul A a lipopolizaharidelor din peretele celular, la fel ca
la majoritatea bacteriilor Gram negative.
Lipopolizaharidele i proteinele majore ale membranei externe (structuri ale
suprafeei celulare) sunt implicate n aderarea i invazia bacteriei n celula gazd.
Tot n acest proces de aderare i invazie un rol antifagocitar l are microcapsula
prezent la unele specii (C. fetus).
C. jejuni supravieuiete 6-7 zile n monocitele din sngele periferic,
fenomen socotit ca o evaziune fagocitar i care contribuie la virulen.
Folosirea fierului de ctre bacteriile Gram negative este considerat ca un
factor de virulen deoarece producerea toxinei este sporit cnd fierul este n
exces. Tulpini care nu produc cantiti detectabile de toxin, devin productoare
pe medii suplimentate cu fier.
Factorii de virulen amintii pot fi codificai de plasmide.
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
TRATAMENT
Spirochete
G E N U L TR E P ON E M A
DEFINIIE, NCADRARE
Microorganismele din acest gen sunt bacterii spiralate, subiri, foarte
mobile. Sunt strict aerobe sau microaerofile i sunt foarte pretenioase nutritiv.
Speciile patogene nici nu se cultiv pe medii artificiale.
Faptul c nu se pot cultiva face dificil i clasificarea lor. Speciile definite
pn acum au fost descrise n funcie de patogenitate i habitat. Exist specii
patogene i specii care fac parte din flora normal a cavitii bucale i a
mucoaselor genitale.
Speciile patogene pentru om sunt Treponema pallidum cu trei subspecii:
pallidum, agentul etiologic al sifilisului, subspecia endemicum, agentul etiologic al
bejelului i subspecia pertenue, agentul etiologic al pianului.
Treponemele genitale sunt prezente n sebumul pliurilor genitale i se
cultiv n condiii anaerobe. Treponemele orale sunt foarte numeroase n placa
dentar, n pungile gingivale ale pacienilor cu boal peridontal. Unele sunt
cultivabile iar altele sunt necultivabile i au fost denumite generic PROS
(pathogen-related oral spirochetes) pentru c apar asociate gingivitelor ulcerative
i periodontitelor fiind absente la persoanele sntoase.
TREPONEMA PALLIDUM
CARACTERE GENERALE
Habitat
T. pallidum are ca unic gazd omul, nefiind izolat de la animale. n mediul
extern nu rezist fiind foarte sensibil la uscciune i la aciunea dezinfectantelor.
Caractere morfotinctoriale
T. pallidum este o bacterie spiralat, cu spire regulate i cu capetele drepte.
Este foarte subire i relativ scurt avnd lungimea de 2 20 m i grosimea de
0,1 - 0,3 m. Este foarte mobil, mobilitatea fiindu-i asigurat prin mai multe fibre
axiale periplasmice nfurate n jurul protoplastului i inserate la extremitile
cilindrului protoplasmic prin corpii bazali. Micarea caracteristic se observ prin
examinarea treponemelor la microscopul cu fond ntunecat unde apar ca
spirochete fine, cu 6 - 14 spire regulate (1,1 m lungimea de und i 0,3 m
amplitudine) capetele efilate, animate de micri graioase de nurubare, flexie i
translaie.
Caractere de cultur
T. pallidum nu se poate cultiva pe medii de cultur artificiale. Poate fi
meninut n via prin inoculri intratesticulare la iepure care dezvolt o orhit
sifilitic. n acest mod s-a pstrat n laboratoarele de referin tulpina Nichols de T.
pallidum obinut n 1912 de la un pacient care a decedat de neurosifilis. Din
aceast tulpin se prepar antigenele necesare diagnosticului serologic.
Caractere biochimice i de metabolism
Este un germen microaerofil pentru c nu poate fi cultivat in vitro
caracterele biochimice nu sunt cunoscute.
Rezistena fa de agenii fizici, chimici i biologici
Treponema pallidum este distrus de uscciune, de temperaturi de 42C,
de sruri de mercur i bismut, de antiseptice, dezinfectante. Este sensibil fa de
antibioticele beta-lactamice, n special fa de penicilin.
Treponema pallidum rmne viabil mai muli ani n suspensia pstrat la -
70C.
Structura antigenic
Se difereniaz trei structuri antigenice importante:
- antigenul cardiolipinic. Este prezent la toate treponemele dar i la alte
bacterii, la unele plante i n esuturile animale, cum ar fi cordul de bou. Acest
antigen determin formarea de anticorpi antilipoidici, denumii n trecut i reagine;
- antigenul proteic Reiter. Are specificitate de gen i este prezent la toate
treponemele, indiferent dac sunt patogene sau nu. mpotriva lui se formeaz
anticorpi antiproteici;
- antigenul specific numai pentru T. pallidum. Fa de acest antigen se
formeaz anticorpi antiproteici, antipolizaharidici i imobilizine.
Caractere de patogenitate
Treponema pallidum este patogen prin multiplicare i invazivitate.
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
TRATAMENT
G E N U L BO RR EL I A
DEFINIIE. NCADRARE
BORRELIA BURGDORFERI
CARACTERE GENERALE
Habitat
Specia este gzduit de variate psri slbatice i mamifere iar
transmiterea se face prin cpue Ixodides i probabil prin nari. Cpuele au un
ciclu de via de doi ani iar n acest timp au trei perioade n care se hrnesc cu
snge parazitnd mamifere slbatice. Astfel se pot infecta cu Borrelia spp. i pot
transmite boala la alte animale, ntreinnd astfel rezervorul natural.
Caractere morfotinctoriale
Borrelia spp. sunt spirochete mai groase (0,2-0,5 m grosime, 830 m
lungime) cu 3-10 spire laxe, cu capetele drepte i foarte mobile. Mobilitatea este
asigurat prin mai multe fibre axiale periplasmatice (7-20 de fibre la fiecare
extremitate) care le confer micri de flexie, rotaie i nurubare. Aceast
micare se observ pe preparatele native examinate la microscopul cu fond
ntunecat.
Caractere de cultur
Crete pe medii speciale sau poate fi izolat in vivo. Mediul folosit este
mediul Kelly modificat care conine ageni reductori, N-acetilglucozamin, ser de
iepure. Mediile se incubeaz n condiii de microaerofilie la 32C. Se urmrete
creterea prin microscopie pe fond ntunecat, la 3-4 zile, minimum 4-6 sptmni.
Dac are loc multiplicarea bacteriei culoarea indicatorului vireaz dar mediul
rmne limpede i nu are sediment. Orice tulburare a mediului semnific o
contaminare cu alte bacterii.
Pentru cultivarea in vivo sunt folosii obolanii tineri, oarecii, coloniile de
cpue i oul de gin embrionat.
Structura antigenic
Antigenele tulpinilor de Borrelia burgdorferi sunt reprezentate de
aproximativ 80 de polipeptide, mai frecvent identificate fiind urmtoarele:
- proteinele majore ale suprafeei externe, rar detectate, numai la peste 6
luni de evoluie:
o OspA este o protein heterogen ceea ce a permis descrierea
a 7 serotipuri;
o OspB prezent numai la Borrelia burgdorferi
- proteina OspC, protein heterogen, joac rol important n instalarea
rspunsului imun precoce. Exprimarea ei depinde de temperatur (32-37C) i de
prezena substratului nutritiv reprezentat de sngele fiinei parazitate. Este
necesar infectrii gazdei;
- proteinele de suprafa OspE i OspD care intervin n patogenitate
avnd rol de adezine, inte pentru anticorpii bactericizi, porine i receptori pentru
moleculele solubile;
- proteina p39 asociat membranei, este specific pentru Borrelia
burgdorferi, este antigenic determinnd apariia de anticorpi;
- proteina p41 (flagelina), este proteina structural a endoflagelilor, nu
este specific de specie. Este un factor de patogenitate flagelii asigurnd marea
mobilitate a bacteriei chiar i n medii vscoase cum este pielea. Induce apariia
precoce a anticorpilor anti-Borrelia;
- proteina p60, proteinele de stress, HSP (heat shock proteins), localizate
pe membrana extern, nu sunt specifice fiind prezente i la unele bacterii Gram
negative. Din acest motiv n cursul diagnosticului serologic pot apare reacii fals
pozitive pentru borrelioza Lyme dei n realitatea pacientul are infecie cu
enterobacterii, micobacterii, cu Legionella spp. sau cu Coxiella spp. Proteina HSP
a tulpinilor de Borrelia burgdorferi este puternic imunogen determinnd un
rspuns imun puternic la pacieni cu boala Lyme cronic. Aceast protein are
aproximativ jumtate din aminoacizii componeni identici cu ai HSP-60 umane
ceea ce face ca anticorpii anti-HSP-Borrelia burgdorferi s reacioneze ncruciat
cu proteina HSP-60 uman dezvoltnd astfel artrite inflamatorii autoimune.
- Complexul de proteine p100, p94, p83 are nalt specificitate fiind
implicat n rspunsul imun tardiv, din stadiul III al borreliozei Lyme.
Borrelia burgdorferi este capabil s sufere variaii antigenice i modificri
n exprimarea proteinelor de suprafa ceea ce-i confer posibilitatea de a eluda
rspunsul imun al organismului mamifer i explic marea varietate de manifestri
clinice ale bolii.
Structurile antigenice al tulpinilor de Borrelia burgdorferi sunt codificate de
gene prezente pe cromozomul bacterian (flagelina, HSP, p83) sau pe plasmide.
PATOGENIE. BOALA LA OM
Boala Lyme apare dup muctura de cpu infectat. Apariia bolii este
legat de timpul de expunere. Formele larvare sau nimfele sunt mai mici dect
cpua adult, de aceea sunt mai greu de observat i paraziteaz mai mult timp
organismul. Dup ce prin muctura infectant au fost introduse n piele, borreliile
difuzeaz local apoi n tot organismul localizndu-se n final n variate situsurii cum
ar fi sistemul nervos i articulaiile. Boala evolueaz n trei stadii.
Primul stadiu se manifest dup o incubaie de 1-3 sptmni i este
reprezentat de modificrile locale cutanate de la locul nepturii. Caracteristic este
eritemul migrator de la locul mucturii. Acesta se ntinde centrifug, sub form
inelar, zona central rmnnd clar, palid. Poate s fie nsoit de adenopatie i
de semne generale.
Al doilea stadiu apare dup sptmni sau luni de la infecie prin
diseminarea general a borreliilor. Pot aprea multiple leziuni tegumentare sub
form de eritem inelar, afectare cardiac cu miocardit, afectarea sistemului
nervos cu paralizii de nervi cranieni i meningite cu lichid clar.
Al treilea stadiu de diseminare tardiv este dominat de manifestri
articulare cronice, recidivante n special la articulaiile mari, mai frecvent afectat
fiind genunchiul. n acest stadiu tegumentul este afectat sub forma acrodermatitei
cronice atrofice.
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR
n boala Lyme numrul borreliilor n esuturi i mai ales n umori este prea
sczut pentru a avea o ans de reuit vreo metod de microscopie.
Detectarea microscopic a B. burgdorferi n sngele pacienilor cu boal
Lyme nu a putut fi realizat. Diagnosticul microscopic este posibil prin coloraii
imunofluorescente ale seciunilor tisulare. Se face biopsie de la marginea
eritemului migrator la 4 mm de la margine, spre interiorul leziunii. Preparatul
obinut se coloreaz imunofluorescent cu anticorpi policlonali sau monoclonali
marcai. Tehnica are rezultate superioare coloraiei prin impregnaie argentic.
B. burgdorferi se mai poate pune n eviden prin metode de biologie
molecular, prin reacia de amplificare genic.
Borreliile se mai pot evidenia din cpua capturat de pe bolnav.
Izolarea borreliilor este de competena laboratoarelor de referin i nu intr
n practica curent a diagnosticului bacteriologic.
Diagnosticul serologic este cel mai utilizat n diagnosticul bolii Lyme. Primii
anticorpi care apar sunt de tip IgM care prezint un vrf la 6 sptmni de la debut
dup care scad fiind nlocuii de cei de tip IgG. Anticorpii pot persista mult timp de
la tratament.
La pacienii cu suspiciune de boal Lyme se determin din ser sau/i din
lichidul cefalorahidian prezena anticorpilor anti-borrelia printr-o metod
imunoenzimatic (ELISA) sau prin imunofluorescen. Un rezultat pozitiv ar trebui
confirmat prin metode Western-blot. De asemenea trebuie excluse reaciile
ncruciate cu antigenele treponemice, efectundu-se obligatoriu i reacia TPHA.
Rezultate fals pozitive mai pot fi ntlnite n boli autoimune, artrite reumatoide.
TRATAMENT
Borrelioza Lyme este o zoonoz pasiv ntruct omul nchide ciclul infeciei
fr s devin izvor de infecie. Boala nu este transmis interuman dect de la
mam la ft, transplacentar.
Rezervorul potenial de infecie este foarte vast, diferit n funcie de zona de
pe glob, fiind reprezentat de animale care pot fi gazde pentru agentul vector:
mamifere mari slbatice (cervidee, mistrei, vulpi), mamifere mari domestice
(ovine, bovine, cini), animale mici (roztoare), reptile, psri.
Borrelia burgdorferi este transmis de la un rezervor la altul prin intermediul
cpuelor din genul Ixodes aflate n diferite stadii de dezvoltare (larv, nimf,
adult) fiecare stadiu avnd un singur prnz hematofag.
Persoanele care prezint factori de risc pentru borrelioza Lyme sunt
persoanele care frecventeaz zonele unde se ntlnesc sursa de infecie i
vectorul specific: silvicultori, muncitori forestieri, agricultori, vntori, veterinari,
excursioniti etc.
Receptivitatea este general fiind mai frecvent afectai copiii sub 14 ani i
adulii ntre 30-50 de ani. Imunitatea post-boal nu este de lung durat.
Profilaxia nespecific vizeaz evitarea mucturii de cpu prin:
- evitarea zonelor din natur cu densiti mari de cpue;
- acoperirea suprafeelor cutanate accesibile cpuelor cnd se
frecventeaz zone n care se tie c sunt astfel de cpue: bocanci, jambiere,
cma cu mneca lung i cu guler, haine deschise la culoare pentru a observa
cpua;
- autosupravegherea atent a pielii i ndeprtarea urgent a eventualelor
cpue.
n caz de muctur se ndeprteaz cu atenie cpua astfel nct s nu i
se rup piesele bucale, se spal bine zona cutanat cu ap i spun, se
antiseptizeaz cu alcool. Se controleaz locul mucturii timp de 1 lun pentru a
sesiza apariia unui eventual eritem.
Pentru profilaxia specific au fost i sunt n derulare studii care urmresc
nivelul proteciei induse de o serie de vaccinuri recombinante, monovalente sau
mai nou se ncearc inducerea rspunsului imun prin administrare de plasmide ce
codific proteina de suprafa OspA.
G E N U L LE P TO S PI R A
DEFINITIE. NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Leptospira interrogans este gzduit de mamifere dar i de reptile i
amfibieni. Gazdele se mpart n trei categorii: de meninere, accidentale i de
amplificare.
Gazdele de meninere poart leptospirele n rinichi i posibil i n organele
de reproducere, fiind aparent sntoase. Doza infectant este mic i infecia se
transmite prin urin sau pe cale sexual. Exist o afinitate a serovarurilor pentru o
anumit gazd: L. icterohaemorrhagiae pentru obolan, L. canicola pentru cini, L.
pomona pentru porci, L. grippotyphosa i L. hebdomadis pentru oareci. Cele mai
numeroase gazde de meninere sunt roztoarele.
Gazdele accidentale sunt reprezentate de om sau animale domestice care
se infecteaz prin elementele din mediu contaminate cu urina gazdelor de
meninere sau a altor gazde accidentale. Doza infectant este mare, portajul renal
este de scurt durat, infecia fiind manifest clinic frecvent.
Gazdele de amplificare sunt gazde accidentale la care infecia se poate
transmite epidemic. Aceste condiii sunt ndeplinite n cresctoriile de animale
domestice unde acestea transmit infecia i ctre om i ctre gazdele de
meninere.
Animalele contamineaz prin urin apa, solul umed sau nmolul unde
leptospirele pot supravieui pn la 42 de zile la ntuneric, mediu cald i pH neutru
sau uor alcalin. L. biflexa triete n apele de suprafa.
Caractere morfotinctoriale
Leptospirele sunt spirochete subiri, fine (lungime 6-20 m, diametrul 0,1
m) cu spire strnse i regulate i cu capetele ncrligate. Sunt organisme mobile,
avnd doi flageli periplasmici inserai subterminal, nfurai ntr-un cilindru
protoplasmic protector. Flagelii sunt inserai la capetele opuse ale corpului
bacterian. Forma spiralat i dispoziia flagelilor i permite s ptrund n organism
prin tegumente i mucoase intacte i i confer micarea caracteristic de
nurubare, flexie dar cu deplasare redus n spaiu.
Sunt bacterii Gram negative dar se coloreaz greu, de aceea pentru
evidenierea lor pe frotiuri se poate folosi coloraia Giemsa sau impregnaia
argentic.
Forma i mobilitatea caracteristic se observ pe preparate native la
microscopul cu fond ntunecat sau cu contrast de faz.
Caractere de cultur
Leptospirele sunt bacterii spiralate dar care se pot cultiva pe medii lichide
sau semisolide suplimentate cu ser de iepure (mediul Korthof). Culturile se
incubeaz la 28-30C, la ntuneric. Majoritatea speciilor patogene au nevoie de 6-
14 zile de incubaie sau chiar mai mult.
n mediu lichid, creterea leptospirelor nu determin niciodat o turbiditate
franc. Tulburarea mediului indic o contaminare bacterian. Creterea
leptospirelor se urmrete prin microscopie pe fond ntunecat la intervale de 3-5
zile. La nivelul mediilor semisolide creterea leptospirelor determin apariia unui
disc linear la 1-3 cm distan de suprafa.
Caractere biochimice i de metabolism
Sunt uor microaerofile, utilizeaz c surs de carbon acuzii grai i alcoolii
grai cu lanuri lungi. Au un bogat echipament enzimatic: catalaz, oxidaz,
hialuronidaz, fosfolipaz. Au slab activitate ureazic, n special speciile
patogene.
Rezistena fa de agenii fizici, chimici i biologici
Sunt sensibile fa de uscciune, lumin solar, pH acid sau intens alcalin,
temperatura sub 14C sau peste 28C astfel c n mediul extern leptospirele
supravieuiesc greu.
Sunt distruse de alcool, acizi, baze, cloramin. Sunt sensibile fa de beta-
lactamine.
Structura antigenic
Germenii din genul Leptospira au urmtoarele antigene:
- antigen somatic O. Are specificitate de gen fiind comun leptospirelor
patogene i saprofite. Este situat n profunzimea nveliului bacterian din punct de
vedere chimic fiind un complex lipo-polizaharido-polipeptidic.
- antigene de suprafa. Au specificitate de grup i tip i sunt reprezentate
de un complex polizaharido-polipeptidic. Sunt imunogene, anticorpii specifici
conferind protecie de grup i tip pe durat limitat.
Rspuns imun
n urma trecerii prin boal organismul uman sintetizeaz anticorpi fa de
antigenele de suprafa. Durata proteciei este variabil, de ordinul anilor i este
specific serotipului tulpinii infectante. Anticorpii formai sunt anticorpi aglutinani,
fixatori de complement i anticorpi litici. Ating un titru detectabil n ser la 4-6 zile de
la debutul bolii, titrul este maxim n sptmnile 3-6 de boal dup care scade
treptat disprnd n decurs de civa ani.
Caractere de patogenitate
Leptospira interrogans este patogen prin multiplicare i invazivitate.
Mobilitatea i gradul de ncovoiere a extremitilor corpului bacterian confer
leptospirei puterea de penetrare a esuturilor. Unele tulpini posed un factor de
virulen Vi.
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR
TRATAMENT
G E N U L M Y CO BA C TE R I U M
DEFINIIE, NCADRARE
MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS
CARACTERE GENERALE
Structur antigenic
Constituenii peretelui celular induc apariia unui rspuns imun de tip celular
i a unei hipersensibiliti de tip IV. Mycobacterium tuberculosis prezint la nivelul
peretelui celular urmtoarele structuri antigenice:
- tuberculolipidele reprezentate de acizii micolici, ceruri i alcooli
superiori. n peretele tulpinilor patogene se gsete un sulfo-lipid care induce
dezvoltarea pe cultur sub form de cordoane: cord-factor;
- tuberculoproteinele induc sensibilizare de tip anafilactic iar n asociere
cu tuberculolipide induc rspuns imun predominant celular.
- polizaharidele induc formarea de anticorpi circulani.
Rspuns imun
Imunitatea este indus doar de bacteriile vii, nu este niciodat total ci
constituie o stare de premuniie adic o stare de rezisten fa de o nou
infecie. Imunitatea n tuberculoz este mediat celular i dispare dup vindecarea
microbiologic iar anticorpii decelabili nu au rol protector.
Starea de sensibilizare fa de antigenele Mycobacterium tuberculosis,
numit alergie tuberculinic este evideniat prin intradermoreacia la
tuberculin, folosit n scop de diagnostic.
Caractere de patogenitate
Mycobacterium tuberculosis nu produce toxine.
Este patogen prin capacitatea sa de a se multiplica n organismul gazd.
Distrugerea bacteriei se soldeaz cu eliberarea de constitueni antigenici care
induc o reacie imunitar de hipersensibilitate ce st la baza transformrii
cazeoase. Cord-factorul prezent prezent pe suprafaa extern a Mycobacterium
tuberculosis inhib migrarea polimorfonuclearelor i induce formarea
granulomului.
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
TRATAMENT
Tratamentul tuberculozei presupune administratrea de antibiotice
antituberculoase: rifampicina, izoniazida, pirazinamida, etambutolul etc. Pentru a
evita selectarea de mutante rezistente se impune efectuarea tratamentului cu
asocieri de substane antibacteriene. Bolnavul va fi monitorizat clinic, radiologic i
bacteriologic att pe durata spitalizrii ct i dup externare.
Este necesar de asemenea chimiprofilaxia pentru contacii pacientului
diagnosticat cu tuberculoz.
Sursa de infecie este exclusiv uman: omul bolnav cu leziuni deschise iar
transmiterea este exclusiv interuman pe cale aerogen, mai rar prin contact
direct cu leziuni deschise. Receptivitatea este general risc mare avnd extremele
de vrst, boli asociate, condiii precare de via, boli imunodeprimante.
Pandemia de infecie cu HIV a favorizat recrudescena tuberculozei. Dac
dup primo-infecie un procent de 3-5% din pacieni dezvolt n cursul vieii boala
tuberculoas, la pacienii HIV pozitivi acest procent se ridic la 30%. Localizarea
bolii este mixt (pulmonar i extrapulmonar) i are evoluie sever la pacienii
infectai HIV.
Profilaxia nespecific a bolii const n depistarea precoce a surselor de
infecie, izolarea lor, tratarea, educaia sanitar a populaiei.
Profilaxia specific este realizat prin vaccinarea BCG care este obligatorie
la noi n ar. Vaccinul conine o tulpin de Mycobacterium bovis care, dup ce a
fost subcultivat de 230 de ori de Calmette i Guerin pe mediul cu bil i cartof, i-
a pierdut capacitatea patogen rmnnd imunogen. Vaccinul BCG (bacille
Calmette-Guerin) se utilizeaz n profilaxia tuberculozei din 1921.
Tulpina vaccinal de Mycobacterium bovis crete pe mediul Loewenstein-
Jensen n 2-4 sptmni formnd colonii rugoase, margini netede. Nu produce
niacin, nitrat-reductaz, este rezistent la pirazinamid i la cicloserin. Este
catalaz pozitiv i sensibil la hidrazida acidului tiophen-2-carboxilic
Caractere de cultur
Mycobacterium bovis cultiv pe mediul Loewenstein-Jensen. Crete lent
sau foarte lent, srac (disgonic) sub form de colonii S, mici, umede,
nepigmentate.
Mycobacterium africanum are caractere intermediare ntre Mycobacterium
tuberculosis i Mycobacterium bovis. Crete sub form de colonii plate, rugoase.
PATOGENIE. BOALA LA OM
DEFINIIE, NCADRARE
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
G E N U L M Y CO P L AS M A I GE NU L U RE AP L AS M A
DEFINIIE, NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Din microbiota oral au fost izolate Mycoplasma orale i Mycoplasma
salivarium. Ca patogen este prezent n arborele respirator Mycoplasma
pneumoniae.
La nivelul cilor genitale sunt izolate Ureaplasma urealyticum i
Mycoplasma genitalium, hominis i fermentans.
Caractere morfotinctoriale
Sunt bacterii foarte mici, cu dimensiuni de 300 nm motiv pentru care nu pot
fi evideniate la microscopul optic. Nu au perete bacterian, citoplasma conine
genomul i ribozomii iar membrana citoplasmatic trilaminat este bogat n lipide,
glucide, glicolipide i proteine. Lipsa peretelui bacterian le confer o foarte mare
plasticitate i polimorfism. Apar ca forme filamentoase, bacilare, cocoide.
Caractere de cultur
Cultivarea este dificil necesitnd medii bogate n colesterol, extract de
levur, precursori pentru sinteza de acizi nucleici. Crete lent, n atmosfer
microaerofil coloniile apar n cteva zile, sunt foarte mici, vizibile cu lupa.
Coloniile au aspect de ou prjit.
Mycoplasma hominis este facultativ anaerob, crete pe medii speciale cu
arginin, n 1-4 zile n timp ce Ureaplasma urealyticum crete pe medii cu uree.
Coloniile ambelor specii sunt minuscule cu aspect de ou prjit.
Caractere biochimice
Caracterele biochimice utile n identificarea germenilor din genul
Mycoplasma i Ureaplasma sunt: fermentarea glucozei, hidroliza ureei i argininei.
Rezistena fa de factori fizici, chimici i biologici
Sunt germeni sensibili n mediul extern la variaiile de pH, temperatur i
presiune osmotic, fa de aciunea agenilor tensioactivi.
Sunt rezistente fa de beta-lactamine.
Structur antigenic
Mycoplasmele posed antigene specifice de grup i specie. Mycoplasma
pneumoniae posed urmtoarele antigene:
- antigene proteice din care proteiena P1 cu rol de adezin este cea mai
important;
- antigenul glicolipidic folosit n reacia de fixare a complementului
- determinani antigenici comuni cu structuri ale organismului uman:
muchi, creier, plmni, limfocite, hematii.
Rspuns imun
Imunitatea este asigurat de IgA secretorii, este tranzitorie, reinfeciile sunt
posibile.
Caractere de patogenitate
Mycoplasma pneumoniae este patogen prin virulen asigurat de
proteina P1 care o leag de celula epitelial care n final este distrus. Un alt
factor de virulen este inhibitorul catalazei produs de Mycoplasma pneumoniae.
Acesta mpiedic descompunerea peroxidului de hidrogen care se formeaz n
cursul metabolismului bacterian i celular. Acumularea peroxidului duce la
distrugerea celulei epiteliale.
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
TRATAMENT
Bacterii intracelulare
G E N U L CH L AM Y DI A
DEFINIIE, NCADRARE
CARACTERE GENERALE
Habitat
Chlamydia trachomatis are ca gazde omul, oarecele i porcul.
Chlamydophila pneumoniae are ca gazde naturale omul i caii. Chlamydophyla
psittaci este gzduit de:
- psrile slbatice: pescrui, egrete etc;
- psri domestice: curcan, ra, gin;
- psri de agrement: papagal, canar, pescru;
- mamifere: bovine, ovine, pisici.
Caractere morfotinctoriale
Bacterii mici, 0,2 m, cocoide, parazii intracelulari obligatorii cu perete
rigid, multilaminat, asemntor ca structur cu cel al bacteriilor Gram negative.
n interiorul celulelor incluzia este nconjurat de o matrice bogat n
glicogen. Din acest motiv, incluziile chlamydiene pot fi evideniate pe frotiu prin
colorare cu iod (Lugol).
Coloraia Giemsa, mai frecvent utilizat permite diferenierea incluziilor
tinere alctuite din corpi reticulai care se coloreaz n albastru i a incluziilor
mature n care predomin corpii elementari care se coloreaz n rou.
Caractere de cultur
Cultivarea Chlamydiilor se face pe oul embrionat de gin care se
inoculeaz n sacul vitelin, pe culturi de celule, pe culturi de organ. Creterea
bacteriei este evideniat pe frotiu prin apariia incluziilor intracitoplasmatice.
Rezistena fa de factori fizici, chimici i biologici
Corpusculii elementari rmn infecioi perioade lungi chiar i n condiii de
uscciune. Sunt inactivai de eter, sruri cuaternare de amoniu, fenol, cldur
umed.
Sunt sensibile fa de rifampicin, cicline, macrolide, fluorochinolone iar
Chlamydia trachomatis este sensibil n plus fa de sulfamide.
Structur antigenic
Peretele bacterian conine urmtoarele structuri antigenice:
- antigenul specific de gen: de natur lipopolizaharidic, termostabil,
fixator de complement. Este comun celor 3 specii i este prezent n toate stadiile
de dezvoltare. Poate fi extras din peretele bacterian i este utilizat n
serodiagnostic;
- antigenul cu specificitate de specie: de natur proteic, termolabil, se
numete protein major a membranei externe (PMME). Este prezent n toate
stadiile de dezvoltare dar este specific fiecrei specii de Chlamydia.
- Antigene cu specificitate de tip: de natur proteic, permit clasificare
serovarurilor n cadrul speciei. Chlamydia trachomatis este subdivizat n 16
serovaruri, Chlamydophila psittaci n 13 i Chlamydophila pneumoniae ntr-un
biovar.
Rspuns imun
Rspunsul imun const n sinteza de anticorpi IgM, IgG i IgA fa de
antigene cu specificitate de gen, specie i tip care ns nu au putere protectoare.
Caractere de patogenitate
Sunt patogene prin:
- proteinele hsps = heat shock protein din nveliul chlamydian, care
asigur ptrunderea bacteriei n celula gazd;
- lipoproteina MIP = macrophage infectivity potentiator protein cu rol n
virulena bacteriei.
PATOGENIE. BOALA LA OM
DIAGNOSTIC DE LABORATOR
Chlamydia trachomatis
Pentru c bacteria se gsete intracelular este necesar ca prelevatul
destinat diagnosticului de laborator s fie recoltat prin raclajul blnd al mucoaselor
pentru a recolta celule. Se examineaz tamponul endouretral, din endocolul uterin,
raclat conjunctival. De la nou nscut se recolteaz secreia nasofaringian iar de
la cazurile de linfogranulomatoz venerian se examineaz aspiratul ganglionar i
puroiul din fistul.
Pe frotiul colorat Giemsa sau cu iod se pot evidenia incluzii citoplasmice,
ntr-o matrice albastr, care deformeaz nucleul. Se pot aplica tehnici de
imunofluorescen direct care utilizeaz anticorpi monoclonali anti-Chlamydia
trachomatis, marcai, pentru evidenierea corpusculilor elementari.
Izolarea se poate face pe culturi celulare Mac Coy sau HeLa.
Cele mai sensibile metode de diagnostic sunt cele de biologie molecular:
hibridizare ADN/ARN, PCR.
Diagnosticul serologic const n evidenierea anticorpilor formai fa de
antigenele cu specificitate de gen, specie i tip prin reacii fixare a complementului,
imunofluorescen, ELISA, Western blot. Prezena anticorpilor de tip IgM sau
seroconversia este semn de infecie recent. n infeciile genitale se caut
anticorpi de tip IgA a cror prezen denot o infecie nalt, activ.
Chlamydophila psittaci
Pentru diagnosticul psitacozei/ornitozei folosim sput, tampon
nasofaringian, snge, esut pulmonar examinate prin PCR.
n infecia uman cauzat de Chlamydophila psittaci se determin prezena
anticorpilor cu reacia de fixare a complementului n care se folosete antigenul
specific de grup sau cu reacia de imunofluorescen indirect.
Chlamydophila pneumoniae
Se examineaz tamponul faringian prin frotiu colorat imunofluorescent.
Se poate cultiva pe oul de gin embrionat sau pe culturi de celule efectul
citopatogen constnd n apariia de mici incluzii intracelulare, rotunde,
caracteristice.
Serodiagnosticul presupune evidenierea anticorpilor cu ajutorul reaciilor
de imunofluorescen indirect sau ELISA. Seroconversia apare la 3 sptmni de
la debutul bolii.
TRATAMENT