Disciplina de Microbiologie UMF Tg.

Mure
LP2

Schema diagnosticului bacteriologic, virusologic, parazitologic

bacteriologic virusologic parazitologic

METODE DIRECTE
1 Examenul direct al produsului patologic Examenul direct al produsului Examen coproparazitologic
Examen patologic
direct
examen macroscopic - examen macroscopic
examen microscopic - microscopie examen microscopic examen microscopic
optic o evidenierea incluziilor o metode directe
o preparat nativ virale microscopie optic
preparat nativ, n ser
o coloraie negativ o microscopie electronic fiziologic
o coloraie simpl
preparat nativ n
o coloraii compuse soluie lugol

frotiu colorat
o metode de examinare
n strat gros
o metode de concentrare
o metode larvoscopice
o amprenta anal
evidenierea antigenelor bacteriene reacii antigen-anticorp
prin metode serologice (evidenierea antigenului)

detectarea ADN-ului microbian detectarea ADN-ului - reacii de detectarea ADN-ului -

(reacii de hibridizare, amplificare hibridizare, amplificare genic reacii de hibridizare,
genic PCR) (PCR) amplificare genic (PCR)

-1-
Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure
LP2

2 Izolarea germenului n cultur pur Cultivarea virusurilor Cultivarea paraziilor

Cultivare
o nsmnarea i cultivarea pe medii o culturi celulare, linii celulare o nsmnarea se face
de cultur pentru paraziii
unicelulari pe medii
nclzite la 37C, 1
sau mai multe zile
o inoculare la animale de laborator o animale de laborator o animale de laborator

o - o oul de gin embrionat o -

3 Identificarea germenului izolat din Identificarea virusului izolat
Identificare cultur pur
o cercetarea caracterelor de cultur o examen microscopic
i morfotinctoriale
o cercetarea caracterelor biochimice o prin modificrile caracteristice
i de metabolism aprute pe culturile celulare,
OGE, animale de experien
o determinarea structurii antigenice o reacii antigen-anticorp o reacii antigen-
prin: anticorp

reacii de aglutinare

reacii de precipitare

reacii de umflare a capsulei
o determinarea sensibilitii
germenului la antibiotice i
chimioterapice (antibiograma)

o determinarea sensibilitii la
bacteriofagi (lizotipia)
o tehnici de detectare a ADN
microbian
o detectare a ADN ului - o tehnici de detectare a
reacii de hibridizare, ADN
amplificare genic (PCR)

-2-
Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure
LP2

Determinarea patogenitii
germenului izolat prin:
o teste in vitro
o teste in vivo (boala experimental)

METODE INDIRECTE

Diagnostic detectarea anticorpilor din serul detectarea anticorpilor din detectarea

serologic bolnavilor (anticorpii se urmresc n serul bolnavilor anticorpilor din serul
dinamic) o Seroconversia: creterea bolnavilor
titrului de anticorpi n o anticorpii se
probele de ser recoltate la urmresc n
interval de 10-14 zile dinamic
o (demonstrarea unei infecii
recente, actuale)
reacii biologice
cutanate de diagnostic
(IDR) - rar

-3-
Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure
LP2

Morfologia microorganismelor
Morfologia celulei bacteriene
Poate fi observat la microscopie optic
Organisme procariote
o nu au membran nuclear proprie
o prezint un singur cromozom
forma bacteriilor
o controlat genetic
o important criteriu taxonomic

forma sferic (coci)

forma cilindric (bacilli)

forma spiralat (ncurbat)
dimensiunile bacteriilor 0,5 20 m

Structura celulei bacteriene

o Elemente obligatorii

perete bacterian

membrana
citoplasmatic

citoplasma bacterian

material nuclear
o Elemente facultative

capsula bacterian

cilii (flagelii)

fimbriile (pilii)

sporul

-4-
 Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure
LP2

Morfologia viral
Virion = virus
o unitatea viral, morfofuncional, complet, intact, infecioas, cu diametrul
cuprins ntre, capabil s infecteze bacterii, plante, animale, omul
Dimensiuni extrem de mici18-400 nm
o Se evideniaz la microscopul electronic
Se multiplic doar n interiorul unei celule vii

Morfologia virusurilor
o sferic
o cilindric, bastona
o paralelipiped
o cartu
o filamentos
sferic cu coad

Structura virusurilor
o genom viral - ARN/ADN
o capsida
o nveli viral - peplos
o

Morfologia parazitar
Parazitul: fiin de natur vegetal sau animal care triete pe suprafaa sau n
interiorul unei alte fiine,
Organismul gazd: acea fiin de natur vegetal, animal sau uman pe seama
cruia se dezvolt parazitul.
Omul poate fi:
gazd definitiv cnd parazitul i atinge maturitatea sexual n acesta
gazd intermediar, cnd parazitul se gsete doar trector, ntr-un anumit
stadiu evolutiv n el, i nu i atinge maturitatea sexual n acesta

Cele peste 160 de specii de parazii se organizeaz n 3 ncrengturi.

Protozoa:
o cuprinde paraziii unicelulari
Helminthes: viermii parazii
o plathelminthes: viermii plai, teniile

dimensiuni cuprinse ntre 1 cm 10-12 m
o nemathelminthes: viermii cilindrici

dimensiuni cuprinse ntre 1 mm 15 cm
Arthropoda: insectele parazite

-5-
 Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure
LP2

Morfologia fungilor
ciuperci, fungi, micete
o vegetale inferioare
o saprofite/parazite
o lipsite de clorofil
o se hrnesc heterotrof
o se nmulesc prin spori sexuai sau asexuai
o prezint:

o parte vegetativ thal (thallos = ramur)
celula
o globuloas, ovalar sau alungit de 3-5 izolate
sau alturate
o filamentoase, cu filamente lungi, de ordinul
milimetrilor
parte reproductoare reprezentat de
o spori
o aparatul sporifer (smna)

Examenul microscopic

Preparatul nativ (umed, ntre lam i lamel)

Permite studierea:
mobilitii germenilor
morfologiei bacteriene
Tehnica de lucru: se realizeaz o suspensie de germeni vii ntre lam i lamel
Examinarea se face cu:
microscopul optic, cu obiective uscate, condensator cobort.
microscopul cu fond ntunecat
microscop cu contrast de faz

Preparate colorate
Permit studierea:
morfologia germenilor
dispoziia germenilor
afinitatea tinctorial (colorabilitatea)
Etapele realizrii frotiurilor:
etalarea ntinderea pp. pe lam (s nu ating marginile)
uscarea la temperatura camerei
fixarea (la flacr sau chimic) se denatureaz proteinele bacteriene -> moartea
microbilor; asigur adeziunea preparatului de lam.

-6-
 Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure
LP2

Coloraii:
1. coloraii simple
- se folosete un singur colorant (1-2 min), nlturarea colorantului n exces,
splare, uscare, examinare la microscop cu obiectiv de imersie.

2. coloraii compuse:
a. Coloraia Gram
Difereniaz bacteriile Gram pozitive de cele negative

Etape Gram + Gram -

colorare cu violet de geniana 2 min. Violet V
mordantare (lugol) 2 min. V V
splare cu ap de robinet V V
decolorare cu alcool 96 V
splare cu ap de robinet V
recolorare fuxin 2 min. V Rou
splare cu ap de robinet V R
uscare V R

b. coloraia Ziehl-Neelsen
Se utilizeaz pentru evidenierea germenilor acido-alcoolo-rezisteni
Rezultatul coloraiei: pe fondul albastru al frotiului se observ bacili acido-alcoolo-
rezisteni.

-7-