Forme fundamentale bacteriene

Tehnica examinrii microscopice

Tehnici de colorare
Dup forma celulei, bacteriile pot fi
grupate n 5 mari categorii:

coci;
bacilli;
vibrioni;
spirili;
spirochete.

2
1. Cocii au corpul sferic sau ovalar, diametrele celulei (longitudinal
i transversal) fiind aproximativ egale.
Dintre acetia:
- corpul sferic sau aproape sferic - Staphylococcus spp.
- corpul uor ovalar - Streptococcus pyogenes
- vrf de lance sau flacr de lumnare - Streptococcus
pneumoniae
- aspect de boabe de cafea - Neisseria meningitidis =
meningococcus

3
2. Bacilii prezint corpul alungit, cilindric ca un bastona;
- unele bacterii au capetele rotunjite - Enterobacteriaceae
- alte bacterii au capetele tiate drept - Bacillus anthracis
- alte bacterii au capetele mciucate
Corynebacterium diphtheriae = Bacillus Klebs-Lffler
- alte bacterii au capetele ascuite - Bacillus fusiformis
- unele au corpul neregulat, granular
Mycobacterium tuberculosis = bacilul Koch

Cocobacilii sunt reprezentai de bacterii cu morfologie intermediar ntre coci i bacilli; adesea
se coloreaz bipolar, lund aspect de brcu sau suveic.

4
5
6
Bacteriile pot fi aezate izolat sau dac dup diviziune rmn
unite, ele prezint o aezare caracteristic speciei, care
uureaz recunoaterea lor.
La coci se observ urmtoarele tipuri caracteristice de aezare
a bacteriilor:
a) stafilococii n grmezi neregulate, sub form de ciorchine
de strugure (staphylos = strugure);
b) streptococii -n lanuri;
c) pneumococii - n diplo (cte doi);
d) tetrada - dispuse n tetrade (cte 4 elemente);
e) sarcina dispoziie cubic (8 elemente).

7
Aezarea bacililor:
- Klebsiella pneumoniae (bacilul Friedlander) - n perechi
(diplobacili);
- Bacillus anthracis - n lanuri (streptobacili);
- Corynebacterium diphteriae - sub form de litere chinezeti
sau aspect de litere mari de tipar, X, Y, Z;
- Mycobacterium tuberculosis - cte dou elemente unite prin
una din extremiti: V, Y.

8
 n microbiologie, microscopul este
indispensabil.
Microscopia uzual o
facem cu fond luminos.
Numai n circumstane speciale
recurgem la:
- microscopia cu fond negru,
- microscopia cu contrast de
faz
- microscopia cu luminiscen.
 Microscopia optic pe fond luminos

Bacteriile, fungii, protozoarele le urmrim:

n produse patologice
n culturi

fie n stare nativ, vie (preparate umede),

fie dup fixare i colorare (preparate colorate).
 Microscopia optic pe fond luminos
Materiale necesare:
- lame de sticl
- lamele de sticl
- microscop optic
 Microscopia optic pe fond luminos
Preparate microscopice colorate
Principiu:
Fixarea coloranilor
pe structurile
protoplastului
mrete refringena
microorganismelor
i permite
observarea
detaliilor
morfologice.
 Microscopia optic pe fond luminos
Preparate microscopice colorate
Peretele bacterian este elementul constitutiv
principal al bacteriilor pentru identificarea
acestora cu ajutorul coloraiilor
Structuri speciale asociate peptidoglicanului din
structura peretelui celular bacterian determin
anumite afiniti tinctoriale care apar dup
coloraii difereniale: Gram, Ziehl Neelsen
 grosime 10 15 nm
alctuit din proteine, lipide, hidrai de carbon

Structura
strat bazal
stratul structurilor speciale

n funcie de proporia celor 2 straturi i de elementele componente

ale structurilor speciale, distingem:
Bacterii Gram pozitive
Bacterii Gram negative
Bacterii acido-alcoolo-rezistente
Bacterii cu perete celular alterat

14
 Peptidoglican
Reea bi/tridimensional alctuit din
macromolecule lungi, polizaharidice paralele:

Acid N-acetil-muramic
N-acetil-glucozamin
Lizina
Adenina
Acid diaminopimelic

15
 gros rigid, simplu
Peptidoglicanul: 80% (aezare tridimensional)
Structurile speciale: 20%

subire, flexibil
Peptidoglicanul: 20% (aezare bidimensional)
Structurile speciale: 80%

16
 susine mecanic celula bacterian
menine forma bacteriei
asigur protecia celulei bacteriene
intervine n procesele de osmoz i difuziune
este sediul:
unor antigene
receptorilor specifici
particip la diviziunea bacteriei

datorit structurii diferite a peretelui bacterian prin

coloraia Gram s-au difereniat dou mari categorii
de bacterii: Gram-pozitive (Gram +) i Gram-
negative (Gram -).
17
 Microscopia optic pe fond luminos
Preparate microscopice colorate

Tehnica de lucru:
1. Efectuarea frotiului:
Frotiul este materialul microbian etalat n
strat subire pe suprafaa unei lame de
microscop, marcat cu indicativul produsului
examinat.
 Microscopia optic pe fond luminos
Preparate microscopice colorate

Frotiul se efectueaz n 3 timpi:

- Etalarea

- Uscarea rapid a frotiului n aer cald

- Fixarea frotiului pentru bacterioscopie

 Microscopia optic pe fond luminos
Preparate microscopice colorate
2. Colorarea frotiului

3. Protejarea frotiului prin montarea n

Balsam de Canada
 Microscopia optic pe fond luminos
Preparate microscopice colorate
Coloraia Gram

1. Colorare cu sol. Violet de geniana (cristal violet) 1% - 1.

Splare cu ap de robinet.
2.Fixare (mordantare) cu sol. Lugol (sol. de I2 in KI) 1.
Splare cu ap de robinet.
3. Decolorare cu sol. alcool aceton 10-15
Splare cu ap de robinet.
4. Colorare cu sol. Safranin (fucsin bazic diluat) 1.
Splare cu ap de robinet.
Coloraia Gram
Coloraia Gram
 Coloraia Ziehl-Neelsen
(acid-alcoolo-rezistent)
Acid-fast Stain (Ziehl-Neelsen stain )
 Coloraia Ziehl-Neelsen
Este o coloraie bacteriologic special care identific microorganismele acid-
alcoolo-rezistente, n mod special speciile de Mycobacteria.
Mycobacterium tuberculosis este cea mai importanta din acest grup pentru c
este responsabil pentru dezvoltarea tuberculozei.

Microorganismele acid-alcoolo-rezistente (Mycobacterium ) conin o cantitate

important de lipide ceroase acizi micolici; acetia rezist reactivilor din
coloraiile Gram
Un alt exemplu de microorganisme acid-alcoolo-rezistente sunt speciile de
Nocardia;
Reactivii utilizai n coloraia ZiehlNeelsen: carbolfucsina, soluie de alcool etilic
i HCl, albastru de metilen

Microorganismele (bacili, n general) specifice se coloreaz n rou-

strlucitor
Microorganisme acid-alcoolo-rezistente
(Acid fast bacteria)
Coloraia Sporilor
 Sporul constituie forma de rezisten a bacteriei n natur, n scopul perpeturii speciei
!!!!!
Formaiune situat n interiorul celulei i apare numai la anumite specii bacteriene (Bacillus,
Clostridium etc.), sporogeneza fiind considerat n prezent o etap fiziologic normal n
evoluia bacteriilor sporulate. De obicei, sporul apare la bacteriile mature n faza de
mbtrnire sau n anumite condiii de mediu modificate.

Odat cu maturarea sporului din interiorul celulei, survine liza corpului bacterian. Sporul
eliberat de forma vegetativ, poate rezista n mediu extern foarte mult timp (uneori zeci de
ani); rezistena sa este explicat prin coninutul redus de ap i prin faptul c sub forma de
spor bacteria se afl ntr-un repaus metabolic complet. Repus n condiii favorabile, sporul
reproduce bacteria iniial cu toate caracterele speciei, nemodificate.

Sporul este constituit dintr-un nucleu nconjurat de sporoplasm, membrane i de o serie

de straturi exterioare: cortex i nvelisuri sporale.
Sporii pot fi rotunzi sau ovalari. Dup aezare se pot diferenia:
- spori centrali care nu deformeaz corpul bacterian (genul Bacillus)
- spori situai central sau subterminal dar care prin dimensiunile lor deformeaz corpul
bacterian (genul Clostridium)
- spori situai terminal care modific morfologia bacteriei (genul Plectridium).
29
 Coloraia (identificarea) sporilor
(Metoda Schaeffer-Fulton)

Colorant specific: Verde de Malachit

Tratare cu Safranin (1 minut)
Splare
Observare la microscop
Coloratie spori