nmulirea prin micropropagare in vitro

Aceast metod de nmulire se bazeaz pe proprietatea unor celule sau esuturi meristematice,
de a reproduce clonal ntreaga plant.

Interesul deosebit pentru nmulirea in vitro (micropropagare sau micronmulire) se

datoreaz posibilitilor pe care le ofer de a nmuli rapid, n condiii controlate soiuri, clone valoroase,
portaltoi. De asemenea, face posibil obinerea unor descendene sntoase, din material iniial infectat
cu diverse boli virotice.

Metoda se poate practica numai n uniti specializate, dotate cu camere aseptice i aparatur
corespunztoare (I.C.D.P. Mrcineni, S.C.D.P. Bistria),

S.C.D.P. Cluj-Napoca).

Iniiatorii acestei noi tehnici de nmulire a fost Martin, care n anul 1952, au reuit s cultive in
vitro meristeme, cu scopul obinerii de plante libere de boli virotice.

La speciile pomicole, metoda se aplic pentru nmulirea speciilor, care emit uor rdcini
adventive: cpun (Maria Isac, 1982, Sansavini, 1980); mr (A.J. Abbot, 1976, Luminia Nicolae, 1991);
piersic (O.P. Jones, 1976, 1977, Tatiana Coman, 1983, Paulina Tudor, 1992); cire i viin (G. Popov, 1976,
Maria Isac, 1984, 1986).

n general, metoda cuprinde urmtoarele etape (fig. 8.9.).

0 pregtirea materialului iniial de nmulire i a mediilor de cultur; I prelevarea i

diferenierea explantului;

II multiplicarea;

III alungirea lstarilor; IV nrdcinarea;

V aclimatizarea tinerelor plante.

Creterile anuale se recolteaz n perioada noiembrie-ianuarie i se pstreaz n frigidere la 2-

3C.

Dezinfectarea materialului nainte de prelevare, poriunile de ramur de cte un mugur sunt

dezinfectate ntr-o soluie de alcool 94, timp de 10 minute i de hipoclorit de calciu 5% timp de 20
minute.

Prelevarea explantului se realizeaz la binocular, n condiii aseptice, cu instrumente

dezinfectate la fiecare prelevare (hot cu flux de aer laminar).

Sunt prelevate esuturi de 0,1-0,3 mm (meristeme), care sunt trecute pe medii de cultur. Ca
medii de baz sunt folosite mediile de cultur Murashige-Skoog i Fossard, care cuprind n proporii
diferite macroelemente, vitamine, la care se adaug n funcie de faza de cretere in vitro, stimulatori
de cretere, n diferite concentraii (Maria Isac, 1986), (tabelul 8.4.).
 Fig. 8.9. - Schema privind fazele care trebuie parcurse n decursul procesului de micropropagare a

plantelor, pe medii aseptice

Fazele I IV se desfoar n camere climatizate cu o temperatur de 22-24C i 2-4 mii de

luci, n condiii de zi lung de 16 ore.

Diferenierea explantului - Explantul prelevat n spaii cu flux de aer laminar, este transferat n
eprubete cu medii de cultur specifice.

Multiplicarea Rozete de frunze ob inute n etapa anterioar, sunt transferate n vase

Erlenmayer de 50 ml, ntr-un mediu nutritiv specific.

Prezenta citochininei n mediu a favorizat dezvoltarea de muguri axilari, care la rndul lor dau
natere la noi rozete de frunze, dup 3-4 sptmni.

Se repet operaia de micronmulire pn se obine un numr de plantedorit.

Alungirea plantelor Dup multiplicare, plantele sunt trecute n vase Erlenmayer de 100 ml,
pe medii de cultur specifice, pentru alungirea internodiilor. Aceast faz dureaz 3 sptmni i se
realizeaz o alungire a plantelor ntre 3-7 cm (Maria Isac, 1986).

nrdcinarea plantelor Se realizeaz n vase Erlenmayer de 100 i 200 ml, pe un mediu

nutritiv specific. Primordiile radiculare ncep s apar dup 10 zile.

Tabelul 8.4.

Compoziia mediilor nutritive n funcie de faza de cretere (dup Maria Isac, 1986)

Za A
Mediul de baz Fazele haroz gar
I I I
(MB) II II V % %
 A A A A
G IA G IA
I B A
Murashige-Skoog BA AP NA
MB 1 B I
AP BA
P
0
G
2,5 ,6
A A A A
G IA G IA
I B A
BA AP NA
Fossard MB 2 B I
AP BA
P
G

MB macroelemente, microelemente, vitamine

AG acid giberilic 1 mg/l

IBA acid indolil butiric 1-2 mg/l

AIA acid indolil acetic 1 mg/l

BAP 6 benzil amino purin 0,1 mg/1 faza I i 1-2 i 4 mg/1 faza II

PG phloroglucinol 1 mg/1

Aclimatizarea plantelor Cnd rd cinile au atins 1 -2 cm lungime, plantele sunt scoase din
laborator i trecute la faza de aclimatizare.

Rdcinile sunt splate ntr-un curent de ap, pentru nlturarea eventualelor resturi de medii
nutritive. Apoi, plantele sunt trecute n ghivece cu diametrul de 8 cm, pe un substrat format din mrani,
pmnt de frunze i pierlit n proporii egale.

Ghivecele sunt puse n camere de vegetaie sau solarii, prevzute cu instalaii de cea artificial.
n primele zile, temperatura se menine la 24- 25C i umiditatea relativ 85-95%, n condiii de zi lung.
Dup 8-10 zile, se ncepe

clirea materialului, prin aerisirea treptat i mrirea intervalului de declanare a ceii artificiale.
n aceast faza, se aplic tratamente fitosanitare i 1-2 fertilizri suplimentare.
 Dup retestarea virotic, noile plante sunt plante n cmpul I al colii de pomi, pentru altoirea
n luna august, pe portaltoi generativi liberi de boli virotice sau n cmpul II n cazul soiurilor pe rdcini
proprii