Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Iași, 23.11.2012
PROTEINE COLAGENICE
Colagenul reprezintă aproximativ
compoziţia în aminoacizi
secvenţa aminoacizilor în lanţul polipeptidic
reactivitatea histochimică
periodicitatea la microscopul electronic
Din grupa B fac parte colagenele tip IV, VIII, X care formează
reţele ca în membranele bazale
Tipurile IX, XII, XIV, XVI şi XIX formează clasa colagenelor asociate,
FACIT (Fibril Associated Collagens with Interruped Triple Helice) (C).
Colagenele tip XIII şi XVII parţial caracterizate, formează domeniul transmembranar (F)
H
Colagenul tip I, [α1(I) ]2α2(I)], reprezintă circa 90% din totalul
colagenelor ţesuturilor conjunctive; el participă în constituţia pielii,
tendoanelor, corneei, a organelor interne etc.
Acest tip de colagen a fost cel mai mult studiat, de la care s-au
obţinut cele mai multe informaţii privind structura şi proprietăţile
colagenelor.
formarea macromoleculei
de colagen (tropocolagenul)
formarea protofibrilelor
(filamentelor), fibrilelor,
fibrelor şi a fasciculelor
de fibre
In funcţie de localizarea subcelulară:
Colagenul de tip I
Biosinteza colagenului
Mecanismul glicozilării
colagenului este conform
3 IF 2 Formarea unor amino-acizi
hidroxilaţi (hidroxiprolina şi
principiilor generale de hidroxilizina), care nu
glicozilare a existau în stare liberă în
Glicozilarea Hidroxilarea citoplasma celulei
glicoproteinelor.
N C
Propagarea
triplului helix
Asamblarea, organizarea şi
interconectarea (similar cristalizării într-o
soluţie suprasaturată)
FAZA EXTRAFIBROBLASTICĂ
Molecula de molecula de colagen (tropocolagen) se formează din molecula
de procolagen după ce cele 3 lanţuri pro-α ale sale sunt complet hidroxilate
şi glicozilate şi au pierdut prin hidroliză enzimatică (procolagen-peptidaza)
peptidele de stabilizare.
— NH — CH — CO — — NH — CH — CO
| |
(I) (CH2)4 (CH2)4
| |
NH2 N
Condensare + → ||
aldiminică CHO - H2O CH
| |
(II) (CH2)3 (CH2)3
| |
— NH — CH — CO — — NH — CH — CO —
I. Rest de lizină
II.Rest de allizină Punte aldiminică
Patogeneza biosintezei colagenului
Hidroxilarea prolinei şi lizinei este un proces enzimatic
care implică prezenţa, acidului ascorbic (vitamina C)
Ser
Lys - Arg
Gly
Glu - Asp
Ala
Pro-Hyp
Amino-acidul % Amino-acidul %
Alanina 11,0 Metionina 0,6
Iași, 23.11.2012
STUDIUL SECVENŢEI AMINOACIZILOR DIN LANŢURILE
α-POLIPEPTIDICE
S
CH3
Metionil_peptidã Bromurã de cianogen
+
R NH CH C NH_ CHR' COOH H2O
O Br + S C N
_
CH2 CH2
CH3
Bromurã de imino _ lactonã Tiocianat de metil
R NH CH C O
O + H2N CHR' COOH
_
CH2 CH2
Homoserinã Aminoacid
(forma lactonã
la capãtul C terminal)
Scindarea cu enzime
↓
—R — Lys / Arg — R—
Glu−Leu−Ser−Tyr−Glu−Tyr−Asp−Glu−Lys−Ser−Thr−Gly−Ile−Ser−Val−Pro− 16
Gly−Pro−Met−Gly−Pro−Ser−Gly−Pro−Arg−Gly−Leu−Hyp−Gly−Pro−Hyp−Gly−Ala−Hyp− 18
Gly−Pro−Gln−Gly−Phe−Gly−Gly−Pro−Hyp−Gly−Glu−Hyp−Gly−Glu−Hyp−Gly−Ala−Ser− 36
Gly−Pro−Met−Gly−Pro−Arg−Gly−Pro−Hyp−Gly−Pro−Hyp−Gly−Lys−Asn−Gly−Asp−Asp− 54
Gly−Glu−Ala−Gly−Lys−Pro−Gly−Arg−Hyp−Gly−Gln−Arg−Gly−Pro−Hyp−Gly−Pro−Gln− 72
Gly−Ala− Arg−Gly−Leu−Hyp−Gly−Thr−Ala−Gly−Leu−Hyp−Gly−Met−Hyl−Gly−His−Arg− 90
Gly−Phe−Ser− Gly−Leu−Asp− Gly−Ala−Lys−Gly−Asn−Ala− Gly−Pro−Ala− Gly−Pro−Lys− 108
Gly−Glu−Hyp−Gly−Ser−Hyp−Gly−Glu−Asn−Gly−Ala−Hyp−Gly−Gln−His−Gly−Pro−Arg− 126
Gly−Leu−Hyp−Gly−Glu−Arg−Gly−Arg−Hyp−Gly−Pro−Hyp−Gly−Ser−Ala−Gly−Ala−Arg− 144
Gly−Asp−Asp−Gly−Ala−Val− Gly−Ala−Ala−Gly−Pro−Hyp−Gly−Pro−Thr−Gly−Pro−Thr− 162
Gly−Pro−Hyp−Gly−Phe−Hyp−Gly−Ala−Ala−Gly−Ala−Lys−Gly−Glu−Ala−Gly−Pro−Gln− 180
Gly−Ala−Arg−Gly−Ser−Glu−Gly−Pro−Gln−Gly−Val−Arg−Gly−Glu−Hyp−Gly−Pro−Hyp− 198
Gly−Pro−Ala−Gly−Ala−Ala−Gly−Pro−Ala−Gly−Asn−Hyp−Gly−Ala−Asp−Gly−Gln−Hyp− 216
Gly−Ala−Arg−Gly−Pro−Ser−Gly−Pro−Gln−Gly−Pro−Ser−Gly−Ala−Hyp−Gly−Pro−Lys− 234
Gly−Asn−Ser−Gly−Glu−Hyp−Gly−Ala−Hyp−Gly−Asn−Lys−Gly−Asp−Thr−Gly−Ala−Lys− 252
Gly−Glu−Hyp−Gly−Pro−Ala−Gly−Val−Gln−Gly−Pro−Hyp−Gly−Pro−Ala−Gly−Glu−Glu− 270
Gly−Lys−Arg−Gly−Ala−Arg−Gly−Glu−Hyp−Gly−Pro−ser−Gly−Leu−Hyp−Gly−Pro−Hyp− 288
Gly−Glu−Arg−Gly−Gly−Hyp−Gly−Ser−Arg−Gly−Phe−Hyp−Gly−Ala−Asp−Gly−Val−Ala− 306
Gly−Pro−Lys−Gly−Pro−Ala−Gly−Glu−Arg−Gly−Ser−Hyp−Gly−Pro−Ala−Gly−Pro−Lys− 324
Gly−Ser−Hyp−Gly−Glu−Ala−Gly−Arg−Hyp−Gly−Glu−Ala−Gly−Leu−Hyp−Gly−Ala−Lys− 342
Gly−Leu−Thr−Gly−Ser−Hyp−Gly−Ser−Hyp−Gly−Pro−Asp−Gly−Lys−Thr−Gly−Pro−Hip− 360
Gly−Pro−Ala−Gly−Glu−Asn−Gly−Arg−Hyp−Gly−Pro−Ala−Gly−Pro−Hyp−Gly−Ala−Arg− 378
Gly−Gln−Ala−Gly−Val−Met−Gly−Phe−Hyp−Gly−Pro−Lys−Gly−Ala−Ala−Gly−Glu−Hyp− 396
Gly−Lys−Ala−Gly−Glu−Arg−Gly−Val−Hyp−Gly−Pro−Hyp−Gly−Ala−Val−Gly−Pro−Ala− 414
Gly−Lys−Asp−Gly−Glu−Ala−Gly−Ala−Gln−Gly−Pro−Hyp−Gly−Pro−Ala−Gly−Pro−Ala− 432
Gly−Glu−Arg−Gly−Glu−Gln−Gly−Pro−Ala−Gly−Ser−Hyp−Gly−Phe−Gln−Gly−Leu−Hyp− 450
Gly−Pro−Ala−Gly−Pro−Hyp−Gly−Glu−Ala−Gly−Lys−Hyp−Gly−Glu−Gln−Gly−Val−Hyp− 468
Gly−Asp−Leu−Gly−Ala−Hyp−Gly−Pro−Ser−Gly−Ala−Arg−Gly−Glu−Arg−Gly−Phe−Hyp− 486
Secvenţa completă a aminoacizilor dintr-un lanţ α1 al moleculei
de colagen tip I (continuare)
Gly−Glu−Arg−Gly−Val−Glu−Gly−Pro−Hyp−Gly−Pro−Ala−Gly−Pro−Arg−Gly−Ala−Asn− 504
Gly−Ala−Hyp−Gly−Asn−Asp−Gly−Ala−Lys−Gly−Asp−Ala−Gly−Ala−Hyp−Gly−Ala−Hip− 522
Gly−Ser−Gln−Gly−Ala−Hyp−Gly−Leu−Gln−Gly−Met−Hyp−Gly−Glu−Arg−Gly−Ala−Ala− 540
Gly−Leu−Hyp−Gly−Pro−Lys−Gly−Asp−Arg−Gly−Asp−Ala−Gly−Pro−Lys−Gly−Ala−Asp− 558
Gly−Ala−Pro−Gly−Lys−Asp−Gly−Val−Arg−Gly−Leu−Thr−Gly−Pro−Ile−Gly−Pro−Hyp− 576
Gly−Pro−Ala−Gly−Ala−Hyp−Gly−Asp−Lys−Gly−Glu−Ala−Gly−Pro−Ser−Gly−Pro−Ala− 594
Gly−Thr−Arg−Gly−Ala−Hyp−Gly−Asp−Arg−Gly−Glu−Hyp−Gly−Pro−Hyp−Gly−Pro−Ala− 612
Gly−Phe−Ala−Gly−Pro−Hyp−Gly−Ala−Asp−Gly−Gln−Hyp−Gly−Ala−Lys−Gly−Glu−Hyp− 630
Gly−Asp−Ala−Gly−Ala−Lys−Gly−Pro−Hyp−Gly−Pro−Hyp−Gly−Pro−Ala−Gly−Pro−Ala− 648
Gly−Pro−Hyp−Gly−Pro−Ile−Gly−Asn−Val−Gly−Ala−Hyp−Gly−Pro−Hyl−Gly−Ala−Arg− 666
Gly−Ser−Ala−Gly−Pro−Hyp−Gly−Ala−Thr−Gly−Phe−Hyp−Gly−Ala−Ala−Gly−Arg−Val− 684
Gly−Pro−Hip−Gly−Pro−Ser−Gly−Asn−Ala−Gly−Pro−Hyp−Gly−Pro−Hyp−Gly−Pro−Ala− 702
Gly−Lys−Glu−Gly−Ser−Lys−Gly−Pro−Arg−Gly−Glu−Thr−Gly−Pro−Ala−Gly−Arg−Hyp− 720
Gly−Glu−Val−Gly−Pro−Hyp−Gly−Pro−Hyp−Gly−Pro−Ala−Gly−Glu−Lys−Gly−Ala−Hyp− 738
Gly−Ala−Asp−Gly−Pro−Ala−Gly−Ala−Hyp−Gly−Thr−Pro−Gly−Pro−Gln−Gly−Ile−Ala− 756
Gly−Gln−Arn−Gly−Val−Val−Gly−Leu−Hyp−Gly−Gln−Arg−Gly−Glu−Arg−Gly−Phe−Hyp− 774
Gly−Leu−Hyp−Gly−Pro−Ser−Gly−Glu−Hyp−Gly−Lys−Gln−Gly−Pro−Ser−Gly−Ala−Ser− 792
Gly−Glu−Arg−Gly−Pro−Hyp−Gly−Pro−Met−Gly−Pro−Hyp−Gly−Leu−Ala−Gly−Pro−Hyp− 810
Gly−Glu−Ser−Gly−Arg−Glu−Gly−Ala−Hyp−Gly−Ala−Glu−Gly−Ser−Hyp−Gly−Arg−Asp− 828
Gly−Ser−Hyp−Gly−Ala−Lys−Gly−Asp−Arg−Gly−Glu−Thr−Gly−Pro−Ala−Gly−Ala−Hyp− 846
Gly−Pro−Hyp−Gly−Ala−Hyp−Gly−Ala−Hyp−Gly−Pro−Val−Gly−Pro−Ala−Gly−Lys−Ser− 864
Gly−Asp−Arg−Gly−Glu−Thr−Gly−Pro−Ala−Gly−Pro−Ile−Gly−Pro−Val−Gly−Pro−Ala− 882
Gly−Ala−Arg−Gly−Pro−Ala−Gly−Pro−Gln−Gly−Pro−Arg−Gly−Asn−Hyl−Gly−Gly−Thr− 900
Gly−Gln−Gln−Gly−Asn−Arg−Gly−Ile−Hyl−Gly−His−Arg−Gly−Phe−Ser−Gly−Leu−Gln− 918
Gly−Pro−Hyp−Gly−Pro−Hyp−Gly−Ser−Hyp−Gly−Glu−Gln−Gly−Pro−Ser−Gly−Ala−Ser− 936
Gly−Pro−Ala−Gly−Pro−Arg−Gly−Pro−Hyp−Gly−Ser−AQla−Gly−Ser−Hyp−Gly−Lys−Asp− 954
Gly−Leu−Asn−Gly−Leu−Hyp−Gly−Pro−Ile−Gly−Hyp−Hyp−Gly−Pro−Arg−Gly−Arg−Thr− 972
Gly−Asp−Ala−Gly−Pro−Ala−Gly−Pro−Hyp−Gly−Pro−Hyp−Pro−Gly−Hyp−Gly−Pro−Hyp− 990
Gly−Pro−Pro− 993
Ser−Gly−Gly−Tyr−Asp−Leu−Ser−Phe−Leu−Pro−Gln−Pro−Pro−Gln−Gln−Gln−Lys−Ala− 18
His−Asp−Gly−Gly−Arg−Tyr−Tyr 7
Secvenţa aminoacizilor din lanţul polipeptidic de colagen este următoarea:
- Gly–X–Y-
Glicina constitue totdeauna unul din 3 resturi de aminoacizi din lanţ:
–(Gly–X –Y)n
–X este adesea prolină (Pro)
–Y este adesea hidroxiprolină (Hyp)
În colagen Pro & Hyp constitue 22% din toate resturile de aminoacizi
• Glicina se situează spre centrul triplului helix
• Prolina & Hyp formează catene laterale expuse în întregime mediului de solvent
Cele mai dese secvenţe din zonele apolare ale lanţurilor polipeptidice sunt de forma:
Gly−Pro−Hypro
Gly−Pro−Gly
Gly−Pro−Ala
Acestea conţin 94% din totalul prolinei şi 74% din totalul glicinei.
STRUCTURA SECUNDARĂ A COLAGENULUI
1,5
20
1,8
17
15
2,3 Stabilitatea structurii complexe a unui lanţ
13 α−polipeptidic se realizează prin legături de
hidrogen de tipul NH. . .O = C, între grupele
2,62 3,05
10 legăturilor peptidice ale aminoacizilor din
spirele alăturate.
7 2,7 4,1
2,25 Catenele laterale R ale diferitelor resturi de
5
3,75 aminoacizi ies radial din helix
5,4
3 4,5 7,4
Helix de stânga
α - helix
N C
Reprezentarea schematică a elicei:
- p - pasul elicei;
- r - raza elicei;
- β - unghiul de rotaţie
(Parametrii geometrici ai spiralei )
lungimea proiecţiei unui aminoacid sensul de rotaţie al spirei (spre
pe axa de rotaţie a elicei stânga sau spre dreapta).
Unităţile peptidice din lanţuri sunt marcate prin linii care unesc atomii de carbon α.
Numerele indică înălţimea atomilor de carbon α, în Ǻ, în cele trei lanţuri A, B, C.
Atomii de hidrogen H1 şi H2 sunt ataşaţi la atomii de carbon α, C1, iar atomii de
carbon β, în configuraţia L (marcaţi cu Cβ) pot fi uşor ataşaţi la atomii de carbon α,
C2 şi C3.
Inelul pirolidinic al restului de prolină este ataşat la atomul C3 într-un lanţ (marcat
Cα, Cβ, Cγ , N).
Atomii de carbon sunt indicaţi cu cercuri mari şi atomii de hidrogen cu cercuri mici
Structura cu punţi de apă a tripluhelixului de colagen propusă
de Ramachandran şi Chandraskaran
Triplul helix
Trei α-helixuri cu spirale care se rotesc
de la stânga la dreapta iar
α-helixurile se înfăşoară dela dreapta
spre stânga
Spectrul în IR a colagenului nativ
STRUCTURA CUATERNARĂ A COLAGENULUI
Organizarea tridimensională a asociatelor moleculare
Agregarea laterală a
protofibrilelor sau a
macromoleculelor de
colagen, determinând Fibrile, fibre, fascicule de fibre
apariţia fibrilelor, fibrelor,
fasciculelor de fibre
Formarea fibrilelor este un proces de tranziţie la starea solidă
care decurge în două etape:
5 4 3 3 2 1 5
1 5 4 4 3 2 1
2 1 5 5 4 3 2
B
C A 3 2 1 1 5 4 3
D E 4 3 2 2 1 5 4
5 4 3 3 2 1 5
a 1 5 4 4 3 2 1
Ilustrarea structurii de filament compus din cinci lanţuri moleculare de colagen într-un
aranjament decalat regulat. Filamentul este prezentat în (a) privit în secţiune
transversală şi în (b) privit perpendicular pe lungime, din două direcţii (Schmith).
Stabilitatea acestei structuri se realizează prin legături
intermoleculare de hidrogen, ionice, hidrofobe, dar şi covalente.
punti covalente
=
între douã lizine
Fibril de
colagen
Filamente Fibra elementară de colagen se formează din fibrile, ce se aşează paralel,
în număr variabil de la 200 până la 1000. Există şi excepţii de la aşezarea
paralelă şi s-a ajuns la concluzia că fibrilele din fibrele de colagen sunt
răsucite între ele.
Microfibrilă, Subfibrilă, Fibrilă
Agregare laterală
Protofibrilă 15Å
Agregare cap la cap
Legături Legături
hidrofobe electrovalente
Legături
covalente
Legăturile de hidrogen acţionează la distanţa de 2-3 Å.
Se formează în acelaşi lanţ polipeptidic, între grupele legăturilor
peptidice ale amino-acizilor din spiralele alăturate sau între două
lanţuri polipeptidice adiacente prin grupele hidroxilice, carboxilice,
aminice, amidice ale resturilor laterale de amino-acizi ale acestor
lanţuri.
Legături de
hidrogen în:
(a) partea N
terminală şi în
(b) partea C
terminală a
unui α- helix
Grupele hidroxilice ale hidroxiprolinei, hidroxilizinei, serinei, tirozinei şi treoninei, grupele aminice
libere ale lizinei şi argininei, grupele carboxilice libere ale acizilor dicarboxilici (acidul glutamic şi
acidul aspartic), monoamidele de la asparagină şi gluamină sunt posibilităţile formării legăturilor de
hidrogen între două lanţuri polipeptidice adiacente.
Legăturile hidrofobe se formează între catenele laterale ale amino-acizilor
apolari. Aceste legături au afinitate redusă pentru apă şi prezintă tendinţa
de a se orienta în interiorul agregatelor moleculare.
Legăturile covalente contribuie la asigurarea stabilităţii colagenului.
Ele sunt prezente intra şi intermolecular.
Legăturile covalente apar în număr tot mai mare pe măsură ce colagenul devine
matur.
Legarea glucidelor se realizează prin punţi glicozidice de tip ester, între grupele
hidroxil ale glucidului şi grupele carboxil ale lanţurilor polipeptidice.
O mare parte din hexoze sunt localizate în zona polară a moleculei de colagen şi
sunt fixate O-glicozidic la hidroxilizină.
A: interlanţ,
1 moleculă de apă
B: interlanţ,
2 molecule de apă
C: intralanţ,
3 molecule de apă Suprafaţa moleculară
D: intralanţ,
Reţea de molecule de apă
Din colagen lipsesc aminoacizii cistina şi cisteina, iar aminoacizii
aromatici se găsesc sub formă de urme.
Peretele vaselor
sanguine 5 – 12 Sistemul nervos central 0,2 – 0,4
———————————————————————————————
Conţinutul în colagen separat din organele diferitelor organisme
Organul Organismul
Conţinutul mediu de colagen, %
din substanţa uscată a organului
———————————————————————————————
Piele Porc de mare 63
Şobolan 67
Câine 64
Bovine 80
Om 72
Aortă Şobolan 25
Bovine 23
Porcine 16
Om 12 – 24
Iași, 23.11.2012