Tabel

997.11A Rezultate de studiu interlaboratoare pentru enumerarea confirmată de E. coli O157: H7 prin metode de cultură ISO-GRID
și BAM
b
Log media Estimări de precizie
a s s
Alimente Nivel Metodă numărului / g sau mlL r R r R RSDr, % RSDR ,%
Cidru de mere Ridicat ISO-GRID 2.57 0.53 0.73 0.19 0.26 7.27 10.10
Cultură BAM 2.05 0.71 2.68 0.25 0.95 12.27 46.17
Mediu ISO-GRID 2.32 0.28 0.59 0.10 0.21 4.32 9.03
BAM 1.95 0.70 2.31 0.25 0.82 12.64 41.81
Scăzut ISO-GRID 1.83 0.44 0.48 0.16 0.17 8.54 9.33
Cultură BAM 1.49 0.89 1.69 0.31 0.60 21.10 40.07
Total ISO-GRID 2.23
Cultură BAM 1.83
Lapte pasteurizat Ridicat ISO-GRID 2.84 1.60 1.76 0.57 0.62 19.89 21.86
Cultură BAM 1.93 1.77 2.80 0.62 0.99 32.41 51.26
Mediu ISO-GRID 2.42 1.71 1.58 0.60 0.56 24.98 23.15
Cultură BAM 1.58 0.89 1.92 0.31 0.68 19.83 42.88
Scăzut ISO-GRID 2.15 1.23 1.13 0.43 0.40 20.19 18.63
Cultură BAM 1.24 1.54 2.05 0.54 0.73 43.97 58.74
c
Total ISO-GRID 2.46
Cultură BAM 1.58
Brânză de vacă Ridicat ISO-GRID 2.35 1.12 1.24 0.39 0.44 16.82 18.66
Cultură BAM 2.10 1.22 2.68 0.43 0.95 20.65 45.28
Mediu ISO-GRID 2.15 1.44 1.87 0.51 0.66 23.62 30.70
Cultură BAM 1.77 0.99 2.38 0.35 0.84 19.73 47.58
Scăzut ISO-GRID 1.82 0.83 1.83 0.29 0.65 16.02 35.41
Cultură BAM 1.28 0.99 2.03 0.35 0.72 27.40 56.23
Total ISO-GRID 2.11
Cultură BAM 1.71
Carne de porc gătită Ridicat ISO-GRID 2.04 1.57 1.63 0.55 0.58 27.14 28.18
Cultură BAM 1.44 2.21 2.52 0.78 0.89 54.04 61.84
Mediu ISO-GRID 1.79 0.73 1.18 0.26 0.42 14.35 23.20
Cultură BAM 1.41 0.69 2.22 0.24 0.78 17.26 55.46
Scăzut ISO-GRID 1.12 0.49 0.59 0.17 0.21 15.51 18.63
Cultură BAM 0.83 0.49 1.70 0.17 0.60 20.89 72.50
c
Total ISO-GRID 1.65
Cultură BAM 1.24
Carne tocată de vită Ridicat ISO-GRID 2.29 0.81 1.06 0.29 0.37 12.55 16.32
Cultură BAM 1.18 1.50 2.01 0.53 0.71 44.84 59.98
Mediu ISO-GRID 1.13 0.96 0.40 0.34 24.36 20.71
Cultură BAM 0.99 1.31 1.33 0.46 0.47 46.91 47.52
Scăzut ISO-GRID 1.12 0.46 0.50 0.16 0.18 14.61 15.90
Cultură BAM 0.61 0.55 0.72 0.19 0.25 31.98 41.87
c
Total ISO-GRID 1.73
Cultură BAM 0.93
Ou întreg congelat Ridicat ISO-GRID Direct 2.95 0.55 1.24 0.19 0.44 6.54 14.83
Resuscitare 3.20 0.77 1.21 0.27 0.43 8.54 13.40
ISO-GRID
Cultură BAM 2.72 1.78 2.99 0.63 1.06 23.13 38.83
Mediu ISO-GRID Direct 1.12 0.50 0.84 0.18 0.30 15.70 26.52
Resuscitare 1.25 0.66 0.98 0.23 0.35 18.65 27.71
ISO-GRID
Cultură BAM 1.03 1.04 1.47 0.37 0.52 35.66 50.43
Scăzut ISO-GRID Direct 1.19 1.51 1.45 0.54 0.51 44.87 42.85
Resuscitare 1.16 0.50 0.91 0.18 0.32 15.19 27.64
ISO-GRID
Cultură BAM 0.83 1.20 1.32 0.42 0.47 50.96 55.93
d
Total ISO-GRID Direct 1.76
Resuscitare 1.87
ISO-GRID
Cultură BAM 1.53
a ISO-GRID = metoda ISO-GRID folosind agar SD-39 și confirmare serologică; Cultura BAM = metoda de cultură BAM modificată
(Bacteriological Analytical Manual, 7th Ed., 1992, AOAC INTERNATIONAL, Gaithersburg, MD, USA); Metoda directă ISO-GRID =
metoda directă de testare; Resuscitare ISO-GRID = metoda de testare a resuscitării.
b Estimările de precizie au fost calculate după conversia datelor in LOG10;r=2,8xsr;R=2,8xsR; sr=deviația stabdard de
repetabilitate;sR=deviația standard de reproductibilitate;RSRr=deviația standard relativă a repetabilității; RSRR=deviația standar a
reproductibilității
c Diferența dintre metode este semnificativ diferită la nivelul de 5%.
d Diferența dintre metoda de testare a resuscitării și metoda de referință este semnificativ diferită la nivelul de 5%.
 10-15 ml HO steril pentru a vărsa și trageți prin plasă ca înainte.
Strângeți clema A pentru a direcționa vidul către baza unității de
C. Prepararea probelor filtrare și se trage lichidul prin filtru.
2
Deschideți clema A. Rotiți brațul mobil K al clemei din oțel inoxidabil în
deblocat (aproximativ 45 °) și plăcile de alunecare L fără flanșe B. Rotiți
(a) Ouă lichide - Se amestecă bine probele de testare cu lingura sterilă înapoi pâlnia C.
sau spatulă. Se prepară diluția 1:10 prin cântărirea aseptică a ouălor cu 11 g
material în sticlă sterilă cu filet. Se adaugă 99,0 ml PT diluant, B (h) și 1 E. Rezultatul prezumtiv
lingură de sticlă sterilă. Foarte agitate 1:10 Plasați filtrul pe suprafața plăci de agar SD-39. Incubați 24 ± 2 h
diluție pentru a asigura distribuirea completă a materialului din ouă în diluant prin 44,0-44,5 ° C.
agitarea rapidă a fiecărei sticle de 25 ×, fiecare scuturându-se în sus și în jos mișcare Nu utilizați lămpi ultraviolete pentru a examina filtrul. Examinați
de aproximativ 30 cm în ≤7 s. Lăsați bulele să scape. În cazul tratamentului cu filtrul în lumină naturală, în lumină incandescentă sau în lumină
enzime este necesar(vezi Tabelul 997.11B pentru tratamente cu diluanți și enzime) se fluorescentă ,pentru prezența unor colonii portocalii sau roz (prezumtiv
combină diluția de 1:10 cu 1:10 cu 1,0 ml adecvat soluție stoc de enzime și se pozitiv E. coli O157: H7). Alte organizații vor produce verde sau
amestecă prin pipetare în sus și în jos sau prin soluția stoc de enzime și se amestecă coloniile galbene. Ocazional, un pătrat mixt care conține atât o colonie
prin pipetare în sus și în jos sau prin agitare. Se incubează soluția timp de 20-30 roz și o colonie verde vor apărea violet.
minute în baie de apă la 35-37 ° C. Corectarea pentru diluare suplimentară Ar trebui, de asemenea, să fie considerat prezumtiv pozitiv.
se face prin filtrarea a 1,2 ml de suspensie cu enzimă tratată Numărul total de pătrate care conțin una sau mai multe prezumtive
pozitive, așa cum s-a descris mai sus. Acesta este scorul prezumtiv.
(b) Alte alimente lichide. - Se amestecă bine conținutul recipientului. F. Rezultat confirmat
Pentru a prepara diluția de 1:10,se transferă aseptic 10,0 ml porțiune de test în
90,0 ml peptonă diluantă, B (g) sau diluant PT, B (h) (vezi Tabelul 997.11B) în steril Selectați până la 5 pătrate prezumtiv pozitive și subcultură
cu gura largă, cu sticlă cu filet. Se amestecă prin agitare de 25 × prin arc de 30 cm pentru TSA, B (k) și TSTB, B (l).
în ≤ 7 s. Dacă este necesar un tratament cu enzime (vezi tabelul 997.11B), se Incubați timp de 18-24 ore la 36 ± 1 ° C. Examineați TSA
combină diluția de 5,0 ml 1:10 cu 1,0 ml stoc de soluție enzimatică adecvată și se pentru puritate și se purifiți, dacă este necesar, prin inocularea
amestecă prin pipetare în sus și în jos sau prin soluția stoc de enzime adecvată și se TSA proaspătă și TSTB cu o colonie izolată și incubând ca mai sus.
amestecă. Prin pipetare în sus și în jos sau prin agitare ușoară.Se incubează soluția Examinați culturile purificate pentru pigmentare și aruncați
timp de 20-30 minute în baie de apă la 35-37 ° C. Corectarea pentru diluare orice izolat pigmentat fără a efectua teste serologice.
suplimentară se face prin filtrarea a 1,2 ml de suspensie tratată cu enzime. Dacă sunt toate cele 5 izolări pigmentate, raportat ca fiind mai mic decât
(factorul de diluție reciproc) E. coli
Table 997.11B Diluanți și tratamente enzimatice pentru alimente
(c) Alimente pulverizate - Se amestecă bine eșantionul testat steril cu o lingură
sau o spatulă. Se prepară diluția 1:10 prin cântărire aseptică de 10 g testați Alimente Diluant Enzimă
portiunea în sticlă sterilă cu filet. Se adaugă 90,0 ml peptonă, B (g) sau PT, Carne tocată de vită PT
b
Nu
B (h), diluant (vezi Tabelul 997.11B) și se agită rapid de 25 de ori, fiecare Carne de vită gătită PT Nu
mișcare în sus și în jos este de aproximativ 30 cm in ≤ 7 s. Lăsați bulele să scape.
Carne de curcan macră PT Nu
Dacă este necesar tratamentul enzimatic (vezi Tabelul 997.11B),
se combină diluția de 1:10 cu 1,0 ml soluție enzimatică Carne de curcan gătită PT Nu
adecvată și se amestecă prin pipetare în sus și în jos sau prin Carne tocată de porc PT Nu
agitare ușoară. Se incubează soluția timp de 20-30 minute în baie Carne de porc gătită PT Nu
de apă la 35-37 ° C.Corectarea pentru diluare suplimentară se face
Carne tocată de miel PT Nu
prin filtrarea a 1,2 ml de suspensie cu enzimă tratată.
Cârnați PT Nu
(d) Alte alimente - Se prepară diluția 1:10 prin cântărire aseptică PT Papaina
10 g porțiune de test în recipientele sterile de mixare. Se adaugă 90,0 ml peptonă, Lapte pasteurizat PT Papaina
B (g) sau PT, B (h), diluant (vezi Tabelul 997.11B) și se amestecă 2 minute la c d
viteză mică(10 000-12 000 rpm). Dacă este necesar tratamentul enzimatic Înghețată Peptonă Papaina + AMG
Brânză de vacă PT Papaina
(vezi Tabelul 997.11B), se combină diluția de 1:10 cu 1,0 ml soluție stoc de enzime
și se amestecă prin pipetare în sus și în jos sau prin agitare ușoră. Cașcaval PT Papaina
Se incubează soluția timp de 20-30 minute în baie de apă la 35-37 ° C. Cremă de brânză PT Papaina
Corectarea pentru diluare suplimentară se face prin filtrarea a 1,2 ml de Mâncare pentru nou-născuti Peptonă Papaina
suspensie cu enzimă tratată.
Cidru de mere Peptonă Nu
e
D. Analiză Ou intreg pasteurizat Peptonă APUG
Maioneză Peptonă Papaina + AMG
[A se vedea figurile 986.32A și B (vezi 17.2.05)]. Porniți vidul
sursă. Așezați unitatea de filtrare sterilă pe vasul de colectare sau de vid. Lapte praf Peptonă Papaina + celulaza
Deschideți clema A. Rotiți înapoi procentul de pâlnie C. Aseptic plasați steril a Pe baza analizei de diluție de 1:10 de 1:10. Alimentele testate la diluții de 1: 100
sau mai mari nu necesită, de regulă, tratament cu enzime. Faceți referire și la
filtrul, B (a), pe suprafața bazei D. Rotiți pâlnia înainte. Clema cu care Oficiul AOAC Metodele 986.32 (vezi 17.2.05) și 995.21 (vezi 17.2.08) pentru recomandarea
tratamentelor enzimatice ale alimentelor care nu sunt enumerate în acest tabel.
închideți părtile glisante L din clema din oțel inoxidabil peste lungimea flanșei
B care se extind în ambele laturi ale pâlniei C și ale bazei D și se rotesc, b PT = 0,1% peptonă + 1,0% diluant Tween 80.
c
mișcați brațul K în poziție orizontală (blocată). Peptonă = 0,1% diluant de peptonă.
Aseptic se adaugă 15-20 ml steril H0 prin pâlnie. Se pipetează 1,0 ml d AMG = enzima amiloglucozidază.
Diluație 1:10 (sau volum adecvat de suspensie tratată cu enzime) e APUG = enzima protează alcalină.
în pâlnie. Aplicați capătul liber al tubului de vid E în orificiul de aspirație F până
trageți lichidul prin plasa de prefiltrare G. Aseptic adăugați suplimentar.
 O157:H7/g or mL.

(a) Împingeți testul de aglutinare - efectuați testul pe izolate

nonpigmentate după cum urmează:
G. Interpretarea rezultatelor
(1) Marcați 2 suprafețe de pe lamela microscopului curat folosind un
creion de ceară. (1) Izolații care nu sunt pigmentați pe TSA și dau rezultate pozitive
(2) Puneți o picătură de soluție salină sterilă în fiecare zonă pe lamelă. reacția la antiserul O157 și H7 este confirmată ca E. coli O157: H7.
(3) Se emulsionează materialul din cultura TSA în ambele picături de Determinarea proporției de 5 izolate originale care îndeplinesc
soluție salină,folosind material suficient pentru a face emulsie aceste criterii (de exemplu, 3/5) și multiplică această fracție cu
uniformă turbidă. scorul prezumptiv, E,pentru a obține scorul confirmat.
(4) Se adaugă o singură picătură de antiser O157 la una dintre Convertiți scorul confirmat la indicele cu numărul cel
picăturile de cultură. mai probabil (MPN) după cum urmează:
(5) Rotiți înainte și înapoi timp de aproximativ 1 minut, urmărindu-vă
aglutinarea să apară. Aglutinarea ar trebui înregistrată ca fiind
pozitivă numai dacă controlul picăturilor rămâne emulsionat fără MPN = 1600 × log [1600/(1600 – x)]
probleme.
Înregistrați rezultatul aglutinării și aruncați orice izolat care nu unde x = numărul de pătrate pozitive pentru E. coli O157: H7.
reacționează în testul de aglutinare pe diapozitiv cu antiser O157. Se multiplică MPN prin reciprocitatea factorului de diluare,
Dacă toate izolatele nepigmentate nu sunt, de asemenea, reactive rotunjind la 2 cifre semnificative și raportat ca
la antiserul O157, raportați ca fiind mai mică decât (factorul de E. coli O157: H7 / g sau ml.
diluție reciproc) E. coli O157: H7 (2) Izolații care nu sunt pigmentați pe TSA, dau reacții
/ g sau ml. pozitive la antiserul O157 și sunt nonmotili sunt confirmați ca
E. coli O157: NM.
(b) Testul de aglutinare al tubului H7. - Efectuați pe izolatele pozitive Determinați proporția primelor 5 izolate care îndeplinesc aceste
criterii și multiplicați această fracțiune cu scorul prezumptiv, E, pentru
O157 nonpingmentate după cum urmează (includeți întotdeauna culturi
a obține scorul confirmat. Convertiți scorul confirmat la indexul MPN
pozitive cunoscute cu fiecare serie de teste de aglutinare a tuburilor
după cum urmează:
pentru a confirma corectitudinea funcțioării reactivilor):
(1) Dezactivați cultură TSTB de 1,0 ml prin adăugarea a 20 µL MPN = 1600 × log [1600/(1600 – x)]
37% dehidă-formală (soluție comercială cu putere totală). Dacă
pipeta de 20 μL nu este disponibilă, se prepară o diluție de e
unde x = numărul de pătrate pozitive pentru E. coli O157: NM.
formaldehidă 37% în soluție salină și 1: 5 transferați 0,1 ml
Se multiplică MPN prin reciprocitatea factorului de diluare, se
formaldehidă diluată în cultura TSTB. rotunjește la 2 cifre semnificative și se înregistrează ca
(2) Se diluează antiserul H7 în soluție salină în conformitate cu E. coli O157: NM / g sau ml.
instrucțiunile producătorului. Transferați 0,5 ml antiser H7
diluat în steril tubul de cultură de sticlă de 13 × 100 mm. Referință: J. AOAC Int. 81, 403 (1998).
(3) Se adaugă 0,5 ml de cultură TSTB inactivată din (1) în
diluat antiserul (2). Se agită ușor tubul pentru a se amesteca.
(4) Se adaugă 0,5 ml soluție salină în restul de 0,5 ml TSTB inactivat
cultura (1) ca un control negativ.
Se agită ușor tubul pentru a se amesteca.
(5) Incubați ambele tuburi timp de 60-90 minute în baie de apă la
50 ± 1 ° C.
(6) Scoateți cu grijă tuburile din baia de apă și fără
agitarea tuburilor sau a deranja conținutul, examinați pentru dovezi
de aglutinare în tubul ce conține antiser H7, dar nu în tubul de control
negativ. Dacă este prezentă aglutinarea, înregistrați ca rezultat
pozitiv.Dacă rezultatul este negativ, treceți la (c).

(c) Testul de motilitate - Efectuați numai dacă testul de aglutinare H7 (b)

este negativ. Procedați după cum urmează:
(1) Inoculați tubul agar de motilitate prin străpungere în centrul tubului.
Incubați 18-24 ore la 35 ° C.
(2) Examinați pentru evidențierea motilității. Culturile motrice vor crește
într-un model difuz, departe de zona de străpungere, atât în interiorul
agar și peste suprafața agar. Culturile nonmotile vor crește
doar imediat în vecinătatea străpungeri.
(3) Subculturile motile în mediu TSTB proaspăt.
Incubați 18-24 ore la 35 ° C și repetați procedura de aglutinare H7, (b).
(4) Reinocularea culturilor nonmotile în agar de motilitate
proaspătă. Incubați și examinați ca la punctele (1) și (2).
Dacă cultura este încă nemotabilă după 3 încercări de a induce motilitatea,
înregistrați ca "nonmotil" pentru rezultatul H7. Dacă cultura este motilă,
dar testul H7 de aglutinare este încă negativ după 3 încercări, înregistrați
ca fiind rezultat negativ H7.
 17.4.01
D AOAC Metoda oficială 998.08
Escherichia coli confirmat contează în Păsări de
curte, Carne și Fructe de mare
Metoda peliculară rehidratabilă uscată Metoda Petrifilm
™ E. coli /Placa cu coliforme
(Se aplică pentru determinarea Escherichia coli confirmată la
păsări, carne și fructe de mare în 24 de ore)
A se vedea Tabelul 998.08 pentru rezultatele studiului
interlaborator care sprijină acceptarea metodei.
A. Principiu
Se adaugă porțiuni de testare nediluate sau diluate de 1,0 ml pe
plăci cu mediu uscat și gel solubil în apă rece. Presiunea, atunci
când este aplicată pe distribuitorul de plastic plasat pe filmul
suprapus, împrăștie suspensia uniform pe o suprafață de
aproximativ 20 cm pătrați. Agentul de gelifiere este lăsat să se
solidifice și plăcile sunt incubate și numărate. Placa de calcul
Petrifilm E. coli / Coliform (EC) este un sistem de mediu de
cultură gata pregatit care conține bile roșii violete modificate
(VRB), nutrienți, un agent de gelifiere solubil în apa rece, un
indicator de tetrazoliu care facilitează enumerarea coloniilor și
indicatorul,glucuronidaza:5-brom-4-clor-3-indolol-þ-D-
glucuronid.
Glucuronidaza, care este produsă de majoritatea E. coli,
reacționează cu colorantul indicator pentru a forma un precipitat
albastru în jurul coloniei. Astfel, E. coli pozitive la glucuronidază
apar ca colonii albastre cu gaz. Coliformele non-E. coli care sunt
negative cu glucuronidază apar ca colonii roșii cu gaz..
B.Aparate și reactivi
Plăcile de tip Petrifilm EC conțin plăci VRB conforme cu
standardele Asociației Americane pentru Sănătatea Publică, așa
cum este prezentată în Compendiul de Metode pentru Examinarea
Microbiologică a Alimentelor (1992), ediția a 3-a, Sănătatea
Publică Americană, în calitate de Soția, Washing ton, DC 20001 -
3710, USA, agent de gelifiere solubil în apă rece, indicator de clor
2,3,5-trifeniltetrazoliu (pentru coliformi)
și 5-bromo-4-clor-3-indolil-t-D-glucuronid (pentru E. coli) ca
indicator al activității glucuronidazei. Aceasta permite ca prezența
coliformelor și a E. coli să fie citită pe aceeași placă. (Disponibilă
de la 3M Microbiology Products, 3M Center Bldg, 275-5W-05, St
Paul, MN 55144-1000, USA).
Dispozitiv de împrăștiere plastic - prevăzut cu plăci Petrifilm;
are o latură îndoită și o latură plană netedă, proiectată pentru a
răspândi uniform porțiunea de test peste zona de creștere a
plăcii.
Pipetă - Calibrat pentru utilizare bacteriologică sau seringă cu
pipetă continuă cu buclă de placă pentru a furniza 1,0 ml (cu
gradare de 0,1 ml). Pot fi utilizate pipete automate. Pipetele
trebuie să livreze cu exactitate volumul necesar. Nu utilizați
<10% din volumul total. De exemplu, pentru a elibera 1 ml,
nu utilizați pipeta> 10 ml; pentru a elibera 0,1 ml, nu utilizați
pipeta> 1 ml.
Contor de colonii - aparat standard, Model Quebec preferat
(Fisher Laboratory Products, 200 Park Ln, Pittsburgh, PA
15275, SUA, Nr. 07-908-7) sau unul care oferă o mărire și o
vizibilitate echivalente.
Diluția apei - A se vedea 940.36A (a) (a se vedea 17.1.02).
C.Suspensia testului
Se prepară suspensii alimentare ca la 966.23B (a se vedea
17.2.01).Se cântărește o porție de probă de 50 g în vasul
blenderului steril. Se adaugă 450 ml de diluant și se amestecă 2
minute într-un vas de amestecare de mare viteză la 10 000 până la
12 000 rpm.Dacă eșantionul întreg de testare conține <50 g, se
cântărește o parte din proba de testare și se adaugă diluant steril
pentru a obține o diluție de 1 + 10. Se prepară toate diluțiile
zecimale cu 90 ml diluant steril plus 10 ml diluție anterioară, dacă
nu se specifică altfel.Se agită toate diluțiile viguros 25 × în arc de
30 cm timp de 7 s.

Tabelul 998.08. Rezultatele studiului interlaborator al plăcii Petrifilm ™ EC și MPN pentru detectarea E. coli în alimente
Petrifilm E. coli / placă de coliforme Cel mai probabil număr
Nivel na Meanb sr RSDr, % r sR RSDR, % R na Mean sr RSDr, % r sR RSDR,% R
Peşte

Scăzut 11 2.32 0.23 9.91 0.65 0.42 18.10 1.18 11 2.42 0.27 11.16 0.76 0.58 23.97 1.64
Mediu 11 2.95 0.14c 4.75 0.39 0.32 10.88 0.90 11 3.11 0.37 11.90 1.04 0.51 16.45 1.44

Înalt 11 3.77 0.12c 3.18 0.31 0.27 7.16 0.76 8 3.71 0.27 7.28 0.82 0.32 8.44 0.90
Curcan

Scăzut 11 2.06 0.24 11.65 0.67 0.38 18.45 1.06 11 2.32 0.37 15.95 1.04 0.38 16.38 1.07
Mediu 10 2.55 0.10c 3.92 0.28 0.22 8.63 0.62 11 2.73 0.39 14.29 1.10 0.45 16.48 1.27

High 10 3.15 0.09c 2.86 0.25 0.19 6.03 0.54 11 3.36 0.34 10.12 0.96 0.35 10.42 0.99
Vită

Scăzut 11 2.08 0.14c 6.73 0.39 0.26 12.50 0.73 11 2.17 0.46 21.20 1.30 0.49 22.58 1.38

Mediu 11 2.74 0.15c 5.47 0.42 0.25 9.12 0.71 11 2.76 0.61 22.10 1.72 0.61 22.10 1.72
High 11 3.45 0.32 9.28 0.90 0.40 11.59 1.13 10 3.61 0.32 8.86 0.90 0.41 11.36 1.16

a) Numărul de laboratoare cu date complete.

b) Numărați numărul E. coli / g.
1999 AOAC INTERNATIONAL
c) Repetabilitate semnificativ mai mare (p <0,01).
 D.Analiză 17.4.02
Așezați plăcuța uscată Petrifilm EC pe o suprafață plană. Ridicați Metoda oficială AOAC 982.36 Invaziunea
filmul superior și inoculați suspensia de test de 1 ml pe centrul celulelor de mamifere de către
filmului. Îndepărtați cu atenție filmul de sus în jos pe inocul.
Escherichia coli
Distribuiți suspensia pe o suprafață de creștere de 20 cm2 cu
presiune descendentă pe centrul dispozitivului de distribuire din Metoda microbiologică
plastic (cu fața plană în jos).Lăsați placa să nu se deterioreze timp
de cel puțin 1 minut pentru a permite gelului să se solidifice. Prima acțiune din 1982
Placile se incubează 24 ± 1 h la 35 ° C. În incubator, placile se Acțiunea finală 1987
plasează în poziție orizontală, cu fața liberă în sus, în stive care nu
depășesc 20 de unități.Numărați plăcile prompt după perioada de A.Principiu
incubație. Dacă este imposibil să numărați imediat după incubarea Invazivitatea este detectată prin creșterea intracelulară pe monostrat de
necesară, depozitați plăcile la o temperatură sub -15 ° C, nu mai celule HeLa pe diapozitive. Pentru a minimiza multiplicarea
mult de o săptămână. Acest lucru ar trebui evitat ca practică de bacteriilor extracelulare, interacțiunea gazdă-patogen este rezolvată în
rutină. 2 faze, infecțioase și intracelulare, utilizând substraturi
Plăcile Petrifilm EC pot fi numărate pe un contor de colonii corespunzătoare și protocoalele următoare: creșterea monostratului în
standard sau o altă sursă de lumină mărită. Nu numărați colonii pe diapozitivele de cameră, folosind inoculul controlat și perioada de
barajul de spumă deoarece acestea sunt îndepărtate din influența incubație; determinarea condițiilor optime de creștere pre-infecție
selectivă a mediului. Nu numărați bule de artefact care ar putea fi pentru agentul patogen; spălarea agenților patogeni pentru a elimina
prezente. Majoritatea coloniilor de E. coli apar ca colonii albastre produsele finale toxice, infectarea celulei gazdă în condiții controlate
asociate cu bule de gaz într-un singur diametru al coloniei.Toate ale numărului și multiplicității infecției și mediul și durata incubării,
celelalte coliforme apar ca colonii roșii care au asociat cu unul sau eliminarea ulterioară a bacteriilor neacoperite;
mai multe bule de gaz (cu un diametru de colonie). Se selecteaza
plăci cu 10-150 colonii. Dacă nici o placă nu are cel puțin 10
colonii albastre cu gaz, se înregistrează numărul exact al
suspensiei cu cea mai mică diluție. Dacă toate plăcile au număr
de> 150, numărul estimat este determinat prin numărarea
numărului de colonii în unul sau mai multe pătrate reprezentative,
determinând numărul mediu pe pătrat și apoi multiplicând
numărul mediu cu 20 (zona de creștere circulară este de
aproximativ 20 cm2) . Dacă plăcile sunt prea aglomerate pentru a
estima numărul, numărul este raportat ca fiind prea numeroase
pentru a fi numărate.

Referinţă: J.AOAC Int.82.73(1999)