Cultura de ovare şi fragmente de ovule obţinute prin

hibridizare intraspecifică la Tulipa kaufmaniana L.

Scopul: creşterea coeficientului de înmulţire pentru lalelele din soiul

Giuseppe Verdi (RBL9).

Protocolul de lucru (RBL9)

- 1. sursa de material biologic
- capsule imature de lalele din soiul Giuseppe Verdi
- 2. tipul de explant
- a) pentru cultura de ovare constă din capsule imature (3 – 5
săptămâni de la polenizare), care după sterilizare au fost fragmentate
dinspre partea bazală (zona pedunculului), înspre partea apicală (vârful
capsulei) => 8 explante/capsulă;
- b) pentru cultura din fragmente de ovule constă din părţi de ovule
prelevate din fragmente de ovare aflate in vitro de patru săptămâni
- 3. sterilizarea de suprafaţă pentru:
- a) capsule imature poate fi realizată prin imersarea în etanol 70% timp
de 1’ şi în soluţie de Domestos 10% timp de 15’;
- b) ovule nu este necesară deoarece sunt prelevate de la material
biologic aflat in vitro
- 4. îndepărtarea agentului sterilizant
- se realizează prin trei spălări succesive cu H 2O ds timp de 10’/spălare
- 5. medii nutritive
- a) pentru cultura de ovare
- inoculare = MS (1962) + ANA 1 mg/l
sucroză 30 g/l
agar 7 g/l

1
 nystatin 50 mg/l
cefotaxim 200 mg/l
- transferuri periodice = MS (1962) + ANA 1 mg/l
sucroză 90 g/l
agar 7 g/l
nystatin 50 mg/l
- b) pentru cultura din fragmente de ovule
- inoculare şi transferuri periodice = MS (1962) + ANA 1 mg/l
sucroză 90 g/l
agar 7 g/l
nystatin 50 mg/l
- 6. parametri fizici de incubare a culturilor
- tº = + 15 ºC şi fotoperioada de 16 h, timp de 10 – 12 săptămâni;
- tº = + 5 ºC şi fotoperioada de 0 h, timp de 12 săptămâni