Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Nanomateriale generatoare de
oxigen pentru tratamentul diabetului
București
Ianuarie 2021
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
CUPRINS
Introducere..............................................................................................................2
DIABET ZAHARAT....................................................................................................4
Problematica abordată.....................................................................................................4
Ingineria tisulară...............................................................................................................5
Proprietați........................................................................................................................7
Materiale fluorurate.........................................................................................................9
Generalități.....................................................................................................................22
PDMS-CaO2.....................................................................................................................24
Metode de sinteză..........................................................................................................25
Metode de caracterizare.................................................................................................37
Concluzii................................................................................................................42
Bibliografie............................................................................................................45
1
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
INTRODUCERE
2
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
3
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
DIABET ZAHARAT
Problematica abordată
Apariția crescândă a diabetului zaharat în întreaga lume a condus la etichetarea
diabetului drept epidemie a secolului al XXI-lea. Pacienții diabetici au o probleme
cardiovasculare cum ar fi neuropatia, nefropatia sau retinopatia. Diabetul zaharat, o tulburare
metabolică, se caracterizează prin afectarea absorbției glucozei la nivel celular. Mecanistic,
este o boală complexă cauzată de o combinație de modificări genetice multiple și factori de
mediu care declanșează o succesiune de evenimente ce cauzează o creștere în concentrația de
glucoză din sânge (hiperglicemie).
Diabetul zaharat este de trei tipuri:
Tip1-insulino-dependent(type 1 diabetes mellitus-T1DM)
Este o boală autoimună ce are două potențiale cauze: una virală(incă nu a fost
identificată) și una gentică (genele HLA DR3 si HLA DR4 sunt puternic asociate cu diabetul).
Proteinele virale se leagă de celulele beta și complexul MHC-I(proteine de suprafață).
Celulele citotoxice T recunosc asta ca antigen generează anticorpi. Celulele beta sunt distruse
de anticorpii, ceea ce duce la inflamarea cronică a pancreasului care poate dura ani și zeci de
ani de zile ceea ce duce la distrugerea mai multor celule beta. Simptomele încep să apară încă
din copilărie.
Tip2-noninsulino-dependent(type 1 diabetes mellitus-T2DM)
Reprezintă 90-95% din totalul cazurilor de diabet. Simptomele apar la maturitate sau
la o vârstă înaintată. Recent, din cauza creșterii BMI-ului populației și a scăderii activității
fizice, chiar și copii obezi au simptome de diabet zaharat. Celelalte celule din organsim devin
rezistente la insulină(asta înseamnă ca in sânge glicemia o sa rămana ridicată), hiperglicemia
4
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
stimulează producția de insulină care , în timp, scade activitatea celulelor beta ceea ce duce la
scăderea producției de insulină ceea ce înseamnă că o sa avem în permanență hiperglicemie.
Diabet gestațional
5
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
Ingineria tisulară
Ingineria țesuturilor a deschis o fereastră nouă pentru tratamentul diabetului. Această
zonă a științei a avut multe succese în dezvoltarea substitutelor pentru repararea țesuturilor
deteriorate și refacerea funcționalității acestora. Transplantul de insule (IT) pentru a reface
masa celulelor beta în T1DM sau pentru a compensa numărul redus de celule beta din T2DM
poate îmbunătăți afectarea producției de insulină.Cu toate acestea, lipsa de organe și cerința
de agenți imunosupresori pentru transplant sunt în mod clar principalele obstacole pentru
utilizarea clinică a acestei abordări.
Generarea de celule beta din celule stem cu sursă embrionară sau hematopoietică ar fi
o abordare ideală pentru a prepara cantități adecvate de masă de celule beta. Pe de altă parte,
transplantul de organe devine o alternativă viabilă la terapia cu insulină, care se bazează pe
furnizarea unei mase de celule beta adecvate pentru a restabili o glicemie normală.
Transplantul pancreatic de organ integral (WOP) și IT(transplant de insule pancreatice) ca
două strategii curative paralele au fost efectuate pentru a atenua T1DM. În ultimele decenii au
fost făcute rapoarte încurajatoare despre transplantul de WOP cu succes și s-a demonstrat că
transplantarea simultană de pancreas și rinichi poate îmbunătăți rezultatele.
S-a arătat că șansa de supraviețuire a țesutului înlocuit în primul an de transplant
simultan de rinichi și pancreas, pancreas după transplant renal și doar pancreas a fost de: 89%,
86% și respectiv 82%, în timp ce a scăzut la 71%, 65%, respectiv 58%, în termen de 5 ani de
la transplant. Prin urmare, mulți receptori de organe trebuie re-transplantați câțiva ani mai
târziu. Xenotransplantul a fost introdus ca o soluție pentru a depăși lipsa de organe; cu toate
acestea, este asociat cu un risc crescut de respingere a grefei și de transmitere virală.
Este bine stabilit că transplantul de organe poate fi asociat cu diverse complicații. De
exemplu, primitorii de transplant pot dezvolta diabet zaharat care în sine este considerat o
sursă de o serie de consecințe care duc la pierderea grefei. Sensibilitatea ridicată la infecțiile
fungice, bacteriene și virale este o altă preocupare importantă în această strategie. Același
fenomen poate afecta transplantul de celule beta care poate compromite succesul implantării.
S-a raportat că sunt implicați mai mulți agenți și mecanisme de reglare a creșterii
celulei β atât in vitro, cât și in vivo. Celulele transplantate au fost însămânțate pe o schelă 3D
care a acționat ca o barieră împotriva sistemului imunitar, pe lângă asigurarea unui transport
adecvat de substanțe nutritive, oxigen și produse reziduale. Într-un pancreas artificial, trebuie
să existe un acces adecvat la oxigen și glucoză și îndepărtarea deșeurilor metabolice. De fapt,
6
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
ingineria țesuturilor a fost explorată pentru a defini agenții înrudiți și a-i utiliza în cadrul
micromediului 3D cu scopul de a sprijini viabilitatea și funcționalitatea celulelor pancreatice.
De exemplu, s-a dovedit că joncțiunile adherens (desmozomii), proteine transmembranare ce
leagă două celule una de alta, au un rol critic în funcționalitatea și viabilitatea celulelor
secretoare de insulină.
Mai multe studii au raportat că schelele (scaffolds) de hidrogel polietilenglicol (PEG)
ar putea furniza și imita joncțiunea aderentă a celulei în microambientul celulelor β secretoare
de insulină. Bernard și colab. (2012) au proiectat un sistem de cultură celulară realizat dintr-
un microplacă pe bază de hidrogel PEG. Ei au observat că celulele β formează agregate în
hidrogeluri. Celulele agregate au prezentat mai multă viabilitate și funcționalitate celulară
(secreția de insulină) decât culturile monocelulare. Kelly și colab. (2010) au dezvoltat un
PEG-ECM pentru a imita interacțiunea micro-mediu a insulelor. În acest scop, a fost fabricat
un hidrogel care conține PEG, colagen de tip I, colagen de tip IV, fibrinogen, fibronectină,
laminină și vitronectină. Celulele secretoare de insulină au fost apoi încapsulate în hidrogelul
PEG-ECM. O creștere semnificativă a viabilității celulare și a nivelului de secreție de insulină
a fost raportată de acest grup. Principala complicație asociată cu agregarea celulelor insulare
este condițiile de hipoxie care apar în sit din cauza unui nivel insuficient de oxigen, ducând la
necroză și moarte celulară. [1]
7
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
Proprietați
Insulele lui Langerhans sunt una dintre cele mai costisitoare în ceea ce privește
oxigenul, datorită activității lor metabolice ridicate. În pancreas, insulele sunt formate din
două tipuri de celule producătoare de hormoni endocrini (celule α și ß). ß-Celulele sunt
responsabile pentru secreția de insulină.Un aport insuficient de oxigen poate afecta profund
funcționalitatea acestor celule și poate duce la diabet. În plus, radicalii liberi sunt produși în
timpul condițiilor de hipoxie care determină oprirea ciclului celular, dăunând ADN-ului. Prin
urmare, o distribuție adecvată de nutrienți, în special oxigen, este esențială pentru succesul în
terapia diabetului. S-au făcut multe încercări pentru a depăși astfel de impedimente. Pentru
prima dată, Bloch și colab. (2006b) au introdus o tehnică nouă în fotosinteza naturală pentru a
genera oxigen pentru insulele pancreatice încapsulate. Într-un studiu similar, celulele insulelor
au fost încapsulate în agar, alginat și chitosan pentru a primi selectiv oxigen și a elimina
deșeurile (Colton, 2014). Cu toate acestea, inaccesibilitatea la un nivel suficient de oxigen a
rămas în continuare problematică. Recent, cercetătorii au adoptat câteva nanobiomateriale noi
cu capacitatea de a produce oxigen pentru a explora o modalitate de depășire a livrării de
oxigen. Nanobio-materialele generatoare de oxigen se descompun în oxigen atunci când sunt
expuse la apă. Cele mai comune nanobiomateriale generatoare de oxigen, precum și
mecanismele lor de oxigenare, sunt descrise mai jos.
8
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
H 2 O2 ( aq )+ 2 F e3+ ¿ aq → O g + 2 F e
( ) ( )
2 ¿
(0)
3+¿ ( aq) ¿
+ ¿ (aq )→ 2H 2 O (l )+ 2F e ¿
3+ ¿ ( aq ) +2 H
H 2 O 2 ( aq )+ 2 F e ¿
(0)
În studiul lor, Harrison și colab. (2007) au conceput un scaffold din poli(lactic-co-
glicolic acid)(PLGA) în care au încorporat percarbonat de sodiu(Na 2CO3). Ei au raportat că
eliberarea completă de oxigen a avut loc pe parcursul a 3 zile. Pentru a încetini oxigenarea,
același grup de cercetare a efectuat un alt studiu (Oh și colab., 2009b). În acest caz, au
încapsulat CaO2 în PLGA și au arătat eliberarea sa consistentă de oxigen până la 10 zile in
vitro. De asemenea, au evaluat efectul diferitelor rapoarte molare de CaO 2 (variind de la 0% la
10%) în construcția CaO2-PLGA în eficiența oxigenării. Conform rezultatelor lor, 5% greutate
/ volum% - CaO2 s-a dovedit a fi mai eficient comparativ cu alte concentrații atunci când este
expus celulelor.
prelungită a fost realizată prin sinteza PVP / H 2O2 / PLGA / catalază / hidrogel (Li și colab.,
2012). În acest scop, H2O2 a fost atașat la poli (vinil pirolidonă) (PVP) și complexul PVP /
H2O2 rezultat a fost încapsulat în PLGA pentru a forma o microsferă miez-coajă(core-shell
method). Microsfera a fost apoi încorporată în hidrogel care conține catalază. Autorii au arătat
că eliberarea de oxigen în această construcție a fost susținută timp de până la 14 zile.
Abdi și colab. (2011) a realizat cu succes oxigenarea prin microîncapsularea
particulelor de H2O2 într-o construcție în două straturi. Au plasat peroxidul de hidrogen într-
un strat intrinsec de PLGA care era înconjurat de un strat secundar compus din alginat. Au
arătat că particulele de H2O2 sunt eliberate din PLGA în stratul secundar și descompuse în
oxigen de către enzima catalază legată de alginat.
Materiale fluorurate
Perfluorocarburile (PFC), ca un nanobiomaterial promițător generator de oxigen, au
atras atenția cercetătorilor datorită capacității lor de a produce o cantitate mare de oxigen.
PFC-urile se descompun în oxigen și dioxid de carbon la expunerea la apă. Incapsularea PFC
în alginat sa dovedit a fi o strategie eficientă pentru susținerea și localizarea livrării de oxigen,
crescând oxigenarea până la 1 săptămână (Khattak și colab., 2007). Autorii au sugerat
potențialele aplicații ale unei astfel de strategii în încapsularea celulelor, în special celulele
pancreatice.
În plus față de biocompatibilitate, rata de eliberare a oxigenului nanobiomaterialelor
generatoare de oxigen este un alt factor important care ar putea influența direct maturarea
țesuturilor. În scopul de a furniza o cantitate satisfăcătoare de oxigen, rata de oxigenare
trebuie ajustată pentru a evita explozii sau eliberarea foarte îndelungată de oxigen. Există
câțiva factori, cum ar fi temperatura, pH-ul, cantitatea de peroxid și tipul de mediu care ar
putea afecta profund cantitatea și consistența oxigenării din nanobiomaterialele generatoare de
oxigen (Soleymani și colab., 2011). De exemplu, rata de oxigenare se reduce odată cu
scăderea temperaturii mediului. Pe de altă parte, așa cum am menționat mai devreme în acest
capitol, încorporarea particulelor de peroxid în unii polimeri este o modalitate de a ajusta rata
și durabilitatea eliberării de oxigen. De exemplu, spre deosebire de compușii hidrofobi,
materialele hidrofile cresc eliberarea de oxigen datorită difuziei rapide a oxigenului în
interiorul acestora (Harrison și colab., 2007; Fraker și colab., 2011).
Seifu și colab. (2011) au introdus recent particule de zeolit fluorurat ca noi
nanobiomateriale generatoare de oxigen în ingineria țesuturilor. Au indicat faptul că
10
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
11
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
Există două metode generale pentru sintetizarea peroxizilor. Prima implică încălzirea
oxidului într-un curent uscat de oxigen pur, fără CO2. Această metodă este favorizată pentru
obținerea de peroxizi care sunt considerabil mai stabili decât oxidul corespunzător, de
exemplu, pentru prepararea BaO2. De fapt, BaO2 este produs industrial prin încălzirea BaO la
500 ◦C în oxigen pur. Sinteza SrO2 mai puțin stabil necesită condiții mai drastice, și anume
încălzirea oxidului la o temperatură de 350 ◦C într-o bombă care conține oxigen cu presiune
ridicată (250 atm). În cele din urmă, CaO2, cel mai puțin stabil dintre cele trei, nu poate fi
A doua tehnică, care este mai potrivită pentru pregătirea de peroxizi mai puțin stabili,
implică precipitarea peroxidului insolubil din soluția apoasă prin adăugarea de H2O2 la o
2 HCl+ 2 N H 3 → 2 N H 4 Cl (0)
1. Prepararea soluției de CaO2:
Pentru a precipita produsul, o soluție de NaOH (pH 13) a fost adăugat pentru a forma
un mediu bazic. Acest lucru a fost făcut până când s-a atins o valoare a pH-ului de 11,5. La
adăugarea NaOH, amestecul a fost schimbat într-o suspensie de culoare albă. Precipitatul alb
12
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
a fost separat prin centrifugă și după procesul de centrifugare pulberea a fost spălată de trei ori
cu soluție de NaOH. În cele din urmă, s-au făcut două spălări suplimentare cu apă distilată
până la atingerea pH-ului final de 8,4 pentru apa reziduală. Precipitatul rezultat a fost uscat la
80 ° C timp de 2 ore într-un cuptor evacuat.
3. Analiza nanopulberii:
Analiza XRD a fost făcută pe pulberi de CaO2 pentru a se identifica materialul. Un
rezultat reprezentativ este prezentat în Fig. 1, cele trei vârfuri dominante: 2θ = 30,1, 35,6, 47,3
se potrivesc cu XRD de CaO2 (numărul cardului 03-0865). Rezultatul XRD a dovedit cu tărie
că compusul CaO2 a fost format prin această procedură.
13
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
14
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
îmbunătățită și simplă. Procesul este spontan și nu sunt necesare echipamente sau surse de
etapele. [2]
15
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
pregătite trei microparticule diferite (M): mai întâi, microparticule bazate exclusiv pe
M); și în cele din urmă, PCL, F-127 (Pluronic F-127 ) și CPO (PCL-F-CPO-M). Toți au fost
pregătiți urmând aceeași procedură, așa cum este descris în secțiunea experimentală. Pe scurt,
o soluție de PCL (100 mg / ml) a fost preparată și omogenizată timp de 3 ore și apoi agitată
timp de 2 ore. După aceea, Pluronic F-127 (10 mg / ml) a fost adăugat la amestecul de reacție
și agitat în continuare timp de încă 3 ore. Apoi, s-a adăugat soluția CPO (50 mg / ml) și s-a
agitat timp de 3,5 ore. Ulterior, soluția de amestec a fost supusă tehnicii de electrospray,
suferit mai multe etape de spălare și, după uscare, au fost produse PCL-F-CPO-M.
toxicitate scăzută,care poate fi utilizat ca aditiv hidrofil atunci când interacționează cu PCL.
umectabilitatea suprafeței și crește porozitatea suprafeței datorită interacțiunii dintre cele două
16
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
Fig.1 O prezentare schematică a strategiei de fabricație pentru tehnica electrospray în proiectarea și pregătirea
PCL-M, PCL-CPO-M și PCL-F-CPO-M și un tabel care prezintă masele și concentrația utilizate pentru diferitele materiale
pentru pregătirea soluțiilor Solventul utilizat pentru prepararea soluțiilor a fost diclormetan (DCM).
de perfuzie și volumul din soluția de polimer din seringă a fost de 3,0 ml. Seringa utilizată în
acest proces a fost de sticlă, iar acul a fost realizat din oțel inoxidabil și plastic (0,42 mm
diametru intern și 1 inch). A fost aplicată o tensiune de 12 kV. Faza pozitivă a fost atașată la
17
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
vârful acului, iar ground-ul a fost atașat la o placă metalică din oțel inoxidabil acoperită cu
folie de aluminiu și situată sub placa colectoare conținând 100 ml soluție de metanol. Apoi, s-
a aplicat tensiunea și soluția inițială de PCL a fost evacuată în formă spirală (conul Taylor).
Figura 3A. Reflecțiile tipice ale PCL au fost identificate cu două faze la 21,30 ° și 23,60 °,
care sunt caracteristice naturii semi-cristaline a PCL (Figura 3A-i). Mai mult, principalele
vârfuri caracteristice ale CPO sunt situat la 30,20 °, 35,58 °, 47,31 °, atribuit CaO2 conform
codului JCPDS 01-085-0514 (Figura 3A-ii și iv) .36 Vârfurile atribuite carbonatului de calciu
(CaCO3) (card nr. 01- 072-0506 și 01-083-0578) și Ca (OH) 2 (card nr. 00-044-1481) se
18
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
claritate și intensitate adecvate (Figura 3A-iii și iv). Aceste vârfuri sunt în concordanță cu cele
caracteristice ale PCL au fost menținute, iar prezența fazelor intermediare nu a fost observată.
Fig.3.A. Difractie de raze X (XRD) i) PCL-M, ii) CPO, iii) PCL-CPO-M, and iv) PCL-F-CPO-M
19
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
În plus, materialele au fost caracterizate prin FTIR (Figura 3B). CPO a arătat banda de
absorbție la 3000-3700 cm − 1,care este atribuit modului de alungire al grupelor -OH din
CPO transformate în molecule de apă și în banda de 1635 cm − 1 referindu-se la deformarea
HOH a H2O fără reziduuri (Figura 3B-i). Vârfuri corespunzătoare modului de vibrație O-Ca-
O de îndoire a CaO2 și CO32 din grupul calcitar putea fi observată în intervalul larg de 1600-
1300 cm − 1, confirmându-se astfel cu rezultatele XRD ale materialelor cu CPO (Figura 3A-
ii, iii și iv) .37 Banda de absorbție la 875 cm − 1 este atribuită puntea de oxigen (OO) a
CPO.Toate vârfurile importante ale PCL, cum ar fi 2945 cm − 1, corespund benzilor asociate
vibrațiilor de alungire asimetrică υas (CH2); întinderea simetrică υs (CH2) la 2865 cm − 1;
alungire carbonil la 1725 cm − 1 υ (C = O), 1473, 1397 și 1361 cm − 1 (CH2)
bending(îndoire); alungire în faza de linie cristalină la 1295 cm – 1 υcr (C-O; C-C); întinderea
asimetrică υas (C-O-C) la 1241 cm − 1; și vibrația de întindere ν (OC-O) la 1188 cm − 1 au
fost de asemenea identificate (Figura 3B-ii). Benzile caracteristice pentru PCL
20
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
Fig 4. Scanning electron microscopy (SEM) image of the various microparticles (A) PCL-M, (B) PCL-CPO-M, and
(C) PCL-F-CPO-M. The SEM-Energy dispersive X-ray spectroscopy (EDS) of the (D) PCL-M, (E) PCL-CPO-M, (F) PCL-F-
CPO-M. The size distribution presented in the histogram of the (G) PCL-M, (H) PCL-CPO-M, and the (I) PCL-F-CPO-M.
21
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
22
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
Generalități
Livrarea de celule ß ca celule producătoare de insulină către pancreas este una dintre
cele mai eficiente strategii pentru terapia diabetului. Cu toate acestea, există unele provocări
asociate cu o astfel de strategie, inclusiv răspunsul imun al corpului, incapacitatea de a asigura
o cantitate suficientă de oxigen și îndepărtarea deșeurilor metabolice care trebuie adresate.
După fiecare implantare, în special în cantități mari, neovascularizarea precoce necesită
suficient timp pentru a fi realizată (aproximativ câteva săptămâni). Prin urmare, eliberarea de
oxigen ar trebui susținută pentru a oferi suficient timp pentru neovascularizare și maturare a
țesuturilor modificate. Eliminarea perioadei de hipoxie între transplant și formarea
neovascularizării ar putea reduce dramatic moartea celulară indusă de hipoxie și necroză.
Au fost dezvoltate mai multe strategii pentru livrarea suficientă de oxigen către, de
exemplu, stimularea preneovascularizării în locul implantării, promovarea neovascularizării
timpurii folosind factori angiogeni precum celulele endoteliale și factorii de creștere
endotelial vascular, utilizarea purtătorilor de oxigen din cadrul nanobiomaterialelor și
generarea in situ de oxigen prin nanobiomateriale generatoare de oxigen.
Dintre strategiile menționate mai sus, oxigenarea in situ este considerată cea mai de
dorit datorită capacității sale de a furniza suficient oxigen la implantare fără a fi nevoie de
intervenții chirurgicale suplimentare. Au fost investigate diferite biomateriale pentru
capacitatea lor de oxigenare. În ciuda marelui succes, eliberarea rapidă de oxigen de către
nanobiomaterialele generatoare de oxigen rămâne încă provocatoare. Trebuie subliniat faptul
că compoziția chimica ale nanobiomaterialelor generatoare de oxigen ar putea afecta profund
23
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
24
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
25
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
PDMS-CaO2
Proprietăți:
Există un timp imediat, după implantare si inainte de angiogeneza din interorul
implantului, în care celulele pancreatice suferă de hipoxie ceea ce duce la necroză și apoptoză,
precum și trecerea la metabolismul anaerob și conservare energetică. Furnizarea suficientă a
oxigenului pentru implanturile care conțin celule foarte metabolic active, cum ar fi insulele
pancreatice, este deosebit de dificilă. Nu numai că rata consumului de oxigen pentru insulele
pancreatice este crescută în comparație cu multe alte tipuri de celule, ele sunt, de asemenea,
susceptibile la afectarea funcțională chiar și la tensiuni moderate de oxigen(diferente
moderate de concentrație).
În primele zile după implantarea dispozitivului, în absența infiltrării vasculare,
concentrația maximă de oxigen apare la limitele exterioare ale implantului și scade progresiv
cu pătratul distanței în direcția radială spre interior. Densitățile ridicate ale implantului (multe
celule/ unitatea de volum) exacerbează și mai mult hipoxia, prin creșterea sarcinii metabolice
generale. Astfel, proiectarea dimensiunilor corespunzătoare a dispozitivului și a încărcărilor
celulare pentru a limita hipoxia în cadrul unui transplant este o sarcină dificilă, care duce în
mod obișnuit la scări ale dispozitivului care nu sunt practice pentru implantarea clinică.
Limitarea sau eliminarea perioadei hipoxice dintre implantare și dezvoltarea unei
rețele vasculare complet funcționale în interiorul implantului, ar reduce dramatic moartea
celulară indusă de hipoxie. Astfel de metode includ pre-vascularizația locului transplantului,
accelerarea vasculației prin eliberarea factorilor de creștere(vascular endothelial growth factor
VEGF), încorporarea purtătorilor de oxigen în biomateriale sau generarea in situ de oxigen
suplimentar. Generarea in situ de oxigen este o abordare extrem de dorită, deoarece nu
necesită intervenții chirurgicale multiple și asigură oxigen suplimentar imediat după
implantare. Au fost investigați diferiți agenți pentru potențialul lor de generare a oxigenului,
de la descompunerea electrochimică a apei până la fotosinteza microalgelor până la utilizarea
camerelor de oxigen. Deși toți acești agenți evidențiază potențialul generării de oxigen in situ
pentru a spori viabilitatea celulară, cei mai mulți dintre aceștia complică locul transplantului
prin creșterea dimensiunii dispozitivului implantabil și / sau, eventual, prin introducerea de
produși secundari toxici. O sursă puternică de generare a oxigenului este descompunerea de
peroxizi solizi, în special peroxid de calciu, care este activat hidrolitic pentru a genera oxigen
prin reacția prezentată în Eq.1:
2 CaO2 +4 H 2 O →2 Ca ( OH )2+ 2 H 2 O2 → 2Ca ( OH )2 +2 H 2 O+O2 (0)
26
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
Cu toate acestea, generarea de oxigen prin hidratarea peroxidului solid este prea
rapidă, ducând la condiții de hiperoxid care duc la acumularea intermediarului reacției: a
peroxidului de hidrogen și la susceptibilitatea crescută a reacțiilor secundare, cum ar fi
generarea de radicali hidroxilici (OH-).Radicalii hidroxil sunt oxidanți puternici și
reacționează,relativ nediscriminabili cu cei mai mulți compuși organici.
Incapsularea peroxidului solid într-un polimer ar putea servi la temperarea reactivității
sale hidrolitice. A fost publicată o platformă solidă de peroxid care folosește pelicule de acid
poli (lactic-co-glicolic) (PLGA), prin care potențialul generator de oxigen al acestor materiale
a fost arătat prin proliferarea îmbunătățită a fibroblaștilor și reducerea necrozei într-un model
de șoarece cu lambou de piele(skin flap muse model). Cu toate acestea, beneficiile filmelor au
fost de scurtă durată, iar cinetica reacției a fost mai puțin controlată din cauza degradării
hidrolitice a PLGA(polimer hidrofil). În plus, a fost necesară suplimentarea cu enzima
catalază pentru a atenua citotoxicitatea. Astfel, cocultura acestor materiale cu celule mai puțin
rezistente decât fibroblastele, în special cele sensibile la stresul radicalilor liberi, cum ar fi
celulele β, este extrem de nedorită.
Stiudiul prezentat urmărește fabricarea unui biomaterial generator de oxigen prin
încapsularea peroxizilor solizi într-un material hidrofob, biostabil, polidimetilsiloxan
(PDMS).
Prin încapsularea peroxidului solid într-un biomaterial foarte hidrofob, am introdus o barieră
difuzională care reduce substanțial reactivitatea sa, modulând în consecință eliberarea de
oxigen pentru mai mult de 40 de zile. Reactivitatea peroxidului încapsulat este puternic
dictată de viteza de difuzie a apei în PDMS, deoarece permeabilitatea la apă în PDMS este
foarte scăzută, iar prin încorporarea particulelor de peroxid solid permeabilitatea la apă crește
puțin. Mai mult, difuzia și permeabilitatea oxigenului în PDMS este deosebit de mare,
asigurând astfel difuzia eficientă a oxigenului din material și în mediul înconjurător. Cu acest
grad de control, geometria și dimensiunile discului, precum și încărcarea peroxidului de
calciu, pot fi manipulate pentru a obține cinetica de eliberare dorită a oxigenului. Având în
vedere că reactivitatea peroxidului este reversibilă, generarea in situ de oxigen depinde și de
condițiile de oxigen din jur, permițând astfel o altă modulare a cineticii.
Metode de sinteză
27
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
Peroxidul solid a fost încapsulat în PDMS la 25% greutate / greutate (Fig. 5A), iar
potențialul generator de oxigen al sistemului a fost monitorizat neinvaziv într-un incubator
folosind senzori de oxigen. Cu tensiunea țintă de oxigen a incubatorului setată la 0,05 mM
oxigen, sistemul reprezintă un sistem deschis, în care schimbul de gaz între soluție și aer au
avut loc la rate de difuzie limitate. Fig. 5B rezumă concentrația medie zilnică de oxigen în
soluțiile care conțin discuri PDMS-CaO2, precum și pentru discul de control numai PDMS.
Pentru discul de control numai PDMS, oxigenul a rămas constant la 0,05 ± 0,0001 mM,
confirmând stabilitatea incubatorului și lipsa producției de oxigen. Adăugarea unui singur disc
PDMS-CaO2 a dus la o creștere semnificativă a oxigenului în soluție. În prima săptămână,
concentrația de oxigen a fluctuat, în medie 0,16 ± 0,017 mM. În a doua săptămână, nivelurile
de oxigen au fost în medie de 0,12 ± 0,003 mM, în timp ce pentru următoarele 4 săptămâni
(17-45 d) nivelurile de oxigen au fost în medie de 0,073 ± 0,007 mM. Astfel, în timpul
primelor 2 săptămâni, aceste discuri generează oxigen la un grad care duce la trecerea de la un
mediu hipoxic la cel apropiat de condițiile de cultură celulară optime.
Fig. 5. A
28
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
Fig.5.. B
Pentru a evalua capacitatea unui disc PDMS-CaO2 de a genera suficient oxigen pentru
a minimiza moartea celulară indusă de hipoxie, celulele MIN6, o linie celulară β, au fost
cultivate peste noapte în condiții hipoxice (0,01 mM) cu sau fără un disc PDMS-CaO2.
Supraviețuirea celulară a fost evaluată și comparată cu celulele cultivate la tensiunea standard
de oxigen (0,20 mM). Așa cum se arată în Fig. 6, cocultura celulelor MIN6 hipoxice cu
PDMS-CaO2 a prevenit moartea celulelor, evidențiată de niveluri crescute de bromură de
metiltiazolilfenil-tetrazoliu (MTT) și proteine totale, cu scăderi concomitente ale eliberării
lactatului dehidrogenazei (LDH) și ale activității caspazei.
Comparativ cu controalele normoxidice (0,20 mM), supraviețuirea celulei MIN6 în
condiții hipoxice (0,01 mM) cu discul PDMS-CaO2 a fost comparabilă sau chiar îmbunătățită,
cu niveluri statistice identice de MTT și proteine totale, precum și scăderi semnificative ale
LDH eliberarea și activitatea caspazei (P <0,05). Adăugarea unui disc PDMS-CaO2 în
condiții de cultură normoxică a dus la o creștere moderată, dar statistic semnificativă a
29
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
proteinelor totale și la scăderea eliberării LDH și a activității caspazei. Aceste rezultate din
urmă indică un beneficiu al prezenței materialului generator de oxigen chiar și în condiții
normoxidice.
Fig. 6. Incubarea celulelor beta MIN6 într-un mediu de cultură pentru 24 de ore.
creșterea permeabilității membranei celulare, după cum reiese din LIVE/DEAD Imaging (Fig.
7E). Alternativ, s-a observat o îmbunătățire substanțială a supraviețuirii insulelor cu
adăugarea unui singur disc PDMS-CaO2, cu o creștere semnificativă a activității metabolice
celulare globale și scăderi complementare ale eliberării LDH și ale activității caspazei.
Răspunsul la glucoză al insulelor a fost menținut, cu secreția de insulină stimulată
comparabilă cu cea din martori, dar la un indice global de stimulare redus (6,94) datorită
secreției crescute de insulină bazală. Acest lucru a fost susținut în continuare de imagini vii /
moarte, care prezentau sferoide insulare foarte intacte, foarte viabile.
31
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
Fig. 7. Celule insulare pancreatice (rat islet 1500IEQ) incubate timp de 6 ore in conditii hipoxice
32
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
numărului total de celule pentru controale, în timp ce celulele suplimentate cu un disc PDMS-
CaO2 ar prolifera datorită disponibilității crescute de oxigen.
Fig. 8. Celulele beta Min6 au fost incubate 3 saptămâni sub condiții de oxigen considerate hipoxice 0,05mM
Așa cum era de așteptat, viabilitatea globală a celulelor pentru controale a rămas
constantă pe parcursul experimentului, fără nicio modificare a activității metabolice MTT (P
= 0,101). Dimpotrivă, celulele MIN6 cultivate sub oxigen scăzut cu un disc PDMS-CaO2 au
crescut rapid în activitatea metabolică în primele 3 zile și au ajuns la un nivel echivalent cu
mai mult de două ori mai mare decât martorii (medie de 2,32 ± 0,31 ori de la 3 la 23 zile, P
<0,001). Nu a fost observată nicio modificare semnificativă a viabilității între zilele 7 și 23
pentru acest grup (P = 0,141). Dacă discul PDMS-CaO2 a fost îndepărtat, măsurătorile MTT
efectuate 3 zile mai târziu au fost statistic echivalente cu cele din controalele cu oxigen scăzut
33
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
(Fig. 4A; liniile punctate urmăresc citirile înainte și după îndepărtarea discului în zilele 3, 7 și
17).
În general, celulele β cultivate la 0,05 mM oxigen cu discul PDMS-CaO2 (Fig. 6) au
fost statistic echivalente cu celulele martor cultivate la tensiunea standard de oxigen (0,20
mM) (Fig. 9). Introducerea discului PDMS-CaO2 în celule la nivelul de oxigen de 0,2 mM, cu
toate acestea, nu a afectat în mod substanțial activitatea metabolică celulară generală per
absorbanță MTT (Fig. 9). Această lipsă de beneficii la o concentație normală de oxigen indică
faptul că oxigenul nu mai este factorul limitativ pentru proliferarea MIN6; mai degrabă alți
factori, cum ar fi disponibilitatea glucozei sau inhibarea contactului, previn creșteri
suplimentare ale proliferării celulare. Controalele discului PDMS(fără CaO2) au fost statistic
identice cu controalele fără materiale (Fig. 9 și 10), verificând faptul că prezența doar a
PDMS-ului nu are niciun efect asupra supraviețuirii celulare.
Conținutul de ADN al celulelor din cadrul acestor grupuri experimentale a urmat
tendințe similare cu rezultatele MTT: ADN-ul total pentru godeurile cultivate cu discurile
PDMS-CaO2 a fost de 2,51 ± 0,36 ori mai mare decât la martorii în condiții identice de
oxigen scăzut din ziua 7 până la 24 ( Fig. 4B; P <0,001), indicând o creștere substanțială și
susținută a numărului total de celule pe parcursul experimentului.
Imagini confocale în timp viu / mort (Fig. 8.C) ale celulelor MIN6 cultivate sub
tensiune scăzută de oxigen (0,05 mM) au dezvăluit viabilitate sporită și proliferarea celulelor
atunci când discul PDMS-CaO2 era prezent. În plus, celulele incubate cu discuri PDMS-
CaO2 au avut tendința de a forma sferoide celulare mai mari, datorită fie creșterii celulelor în
grupuri, datorită agregării.
34
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
35
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
Fig. 9. Viabilitatea celulelor MIN6, cuantificată prin testul metabolic MTT, cultivată la 20% tensiune de oxigen
(0,20 mM) cu un singur disc PDMS-CaO2 (diamante solide), un singur disc PDMS (diamante gri) sau fără niciun disc
( diamante deschise). Nu s-a detectat nicio diferență statistică între grupurile ce au avut doar PDMS și grupurile fară disc,
cu excepția zilei 14 (P = 0,44). O diferență statistică semnificativă între grupul care conține discul PDMS-CaO2 și celelalte
condiții au fost detectate în zilele 10 și 14. Barele de eroare reprezintă deviația standard din medie, cu n = 3 pe condiție.
Fig. 10. Viabilitatea celulelor MIN6, cuantificată prin testul metabolic MTT, cultivată la 5% tensiune de oxigen
(0,05 mM) cu un singur disc PDMS-CaO2 (diamante solide), un singur disc PDMS-unic (diamante gri) sau fără niciun disc (
diamante deschise). Nu s-a detectat nicio diferență statistică între discurile PDMS și grupuri fără disc după 3 zile (P =
0,78). Barele de eroare reprezintă deviația standard din medie, cu n = 3 pe condiție)
36
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
Fig. 11. Viabilitate crescută a celulelor β MIN6 în construcțiile care conțin disc PDMS-CaO2. (A) Schema
construcțiilor de agaroză care conține un singur disc PDMS-CaO2 de 25% în greutate / greutate. Discul interior PDMS-
CaO2 avea 8 mm diametru și 1 mm înălțime, iar adăugarea construcției exterioare MIN6 / agaroză a dus la o construcție
finală de 10 mm diametru / 3 mm înălțime. (B)Modificarea pliurilor în viabilitatea MIN6, evaluată prin testul metabolic
MTT, peste valorile inițiale de încărcare a celulei după 3 zile de cultură, 25 × 105 celule MIN6 în construcții de agaroză
fără sau cu un disc PDMS-CaO2. Valorile pliurilor peste 1 reprezintă o creștere a viabilității celulei în timpul perioadei de
cultură. Eroare = SD, n = 3. * P <0,05, testul t al studentului. (C) Imagini confocale reprezentative z-stivuite ale celulelor β
MIN6 colorate cu vii / moarte (vii, verzi; moarte, roșii) și coincuse cu discuri numai PDMS (control, superior) sau PDMS-
CaO2 (inferior) fie 0,2 mM ( Stânga) sau 0,05 mM (Dreapta) oxigen. (Bare de scară, 200 μm.)
oxigen care duce de obicei la buzunarele interioare ale celulelor moarte sau disfuncționale
este absent atunci când un disc PDMS-CaO2 este plasat central în interiorul construcției.
Fig. 12. Modele de simulare multipfazică a gradienților de oxigen din construcțiile 3D de agaroză care conțin fie
disc PDMS, fie PDMS-CaO2
39
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
40
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
Metode de caracterizare
1. Activitatea metabolică a celulelor MIN6 a fost evaluată prin testul MTT (Promega).
Probele au fost spălate o dată, suspendate în 250 μL de mediu plus 28 μL de colorant
MTT și incubat timp de 1 oră. După aceea, 185 μL de soluție stop / solubilizare a fost
adăugată (o soluție ce vine cu chitul de reacție are rolul de a opri reacția prin solubilizarea
formazanului pentru a putea fi înregistrată absorbanța) în fiecare eprubetă,apoi au fost
depozitate, învelite în parafilm, timp de 24 de ore pentru a permite solubilizarea completă
a cristalelor de formazan. Ulterior, 120-μL din fiecare probă au fost încărcate într-o placă
cu 96 de godeuri și absorbția la 570 nm a fost măsurată utilizând un cititor de microplacă
Spectramax M5(Molecular Devices).
1.1. Celulele viabile cu metabolism activ transformă MTT în formazan. Celulele moarte
pierd această. Astfel, formarea culorii servește ca un marker util și convenabil numai
pentru celulele viabile. Absorbanta masurata la 570 nm este proportionala cu numarul
de celule viabile.
1.2. Testul MTT este o măsură a activității metabolice a celulelor analizate; cu cât
activitatea metabolică este mai mare în eșantion, cu atât semnalul este mai mare.
2. Proteine totale. Pentru proteina totală, 300 pl de celule au fost spălate cu PBS și suspendat
în 400 μL de 0,1 M NaOH prin pipetare viguroasă. Conținutul de proteine a fost
determinat prin testul de proteine BCA Kit: 25 μL de probă de celule și 200 μL de reactiv
de lucru au fost placat într-o placă cu 96 de godeuri limpede optic și incubat timp de 30
min la 37 Celsius și absorbanța a fost măsurată la 562 nm cu a cititor de plăci
2.1. PBS- soluție tampon Dulbecco(Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline) are multiple
roluri
2.1.1. Oferă celulelor apă și anumiți ioni anorganici esențiali pentru metabolismul
celular normal.
2.1.2. Servește nu numai ca fluid de irigare și transport, ci și ca diluant menținând în
același timp osmoreglarea, echilibrul optim și constant al gradienților de presiune
osmotică între compartimentele intracelulare și extracelulare.
2.1.3. Menține ph celular în intervalul fiziologic 7,2-7,6
2.1.4. Atunci când este combinat cu un carbohidrat (CHO), cum ar fi glucoza
(C6H12O6), acesta furnizează principala sursă de energie pentru procesele
metabolice celulare.
41
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
42
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
3.1. LDH(lactat dehidrogenază) este o enzimă stabilă, prezentă în toate celulele, ce e rapid
eliberată în exteriorul celulei din cauza deteriorării membranei celulare.
3.2. O creștere a cantității de celule moarte sau deteriorate de membrană plasmatică
rezultă o creștere a activității enzimei LDH în supernatantul de cultură. Această
creștere a cantității de activitate enzimatică în supernatant se corelează direct cu
cantitatea de formazan format într-o perioadă limitată de timp. Prin urmare, cantitatea
de culoare formată în test este proporțională cu numărul de celule lizate. Colorantul
formazan format este solubil în apă și prezintă un aspect larg absorbție maximă la
aproximativ 500 nm, în timp ce sarea de tetrazoliu INT arată nicio absorbție
semnificativă la aceste lungimi de undă
3.3. Chitul de determinare al citotoxicității fabricat de PROMEGA, folosește același
principiu doar că alt colorant “luciferin” care este convertit în semnal bioluminescent
de către o enzimă ce vine cu chitul lor, Ultra-Glo™ rLuciferase (Reacția necesită
ATP). Intensitatea luminoasă este direct proporțională cu deteriorarea celulară.
43
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
Figură 1
44
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
homodimer-1 (5). Celulele au fost apoi clătite în HBSS și plasate pe o lamă de sticlă
pentru vizualizare printr-un microscop confocal cu scanare fluorescentă pentru viu celule
(verzi) (excitație, 494 nm; emisie, 517 nm) și moarte celule (roșii) (excitație, 528 nm;
emisie, 617 nm). Pentru insulițe și au fost colectate și combinate imagini multislice (5 μm)
folosind software-ul Leica.
5.1. Kitul EarlyTox Live / Dead Assay Kit conține doi markeri pentru celulele vii sau
moarte care pot fi utilizați pe celulele mamiferice. Calcein AM este un marker de
celule vii utilizat pe scară largă. Calceina AM non-fluorescentă pătrunde în
membrana celulară intactă și este transformată în calceină, forma fluorescentă, de
esteraze intracelulare. Celulele vii sunt colorate cu fluorescență verde intensă în
citosol. Pentru testele de proliferare celulară sau alte teste în care se dorește doar
colorarea celulelor vii, calceina AM poate fi utilizată ca reactiv independent așa cum
este prevăzut în setul EarlyTox ™ Live Cell Assay Kit (P / N R8342 pentru kitul
Explorer, P / N R8343 pentru Bulk trusa).
5.2. Ethidium homodimer-III (EthD-III) este practic non-fluorescent și impermeabil la o
membrană plasmatică intactă. În cazul compromiterii integrității membranei celulare
care este asociată cu moartea celulelor, EthD-III intră în celule și se leagă de acizii
nucleici, rezultând fluorescență roșie aprinsă în celulele moarte. Evenimentele
citotoxice care afectează integritatea membranei celulare pot fi evaluate cu exactitate
folosind această metodă.
5.3. Semnalele fluorescente de la calceină și EthD-III pot fi detectate folosind un cititor de
microplacă fluorescentă SpectraMax și analizate rapid utilizând un protocol
preconfigurat în SoftMax® Pro Software pentru a determina cantitățile relative de
celule vii și moarte.
5.4. Este posibil ca evenimentele citotoxice care nu afectează membrana celulară să nu fie
evaluate cu exactitate folosind această metodă. Nivelurile de fluorescența de fond
sunt inerent scăzute cu această tehnică de testare deoarece coloranții sunt practic non-
fluorescenți înainte de a interacționa cu celulele.[4]
45
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
CONCLUZII
46
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
grupurile tratate întărește teoria conform căreia îmbunătățirile observate se datorează exclusiv
eliberării de oxigen și nu datorită unui artefact sau a unei protecții inițiale împotriva hipoxiei.
De asemenea, trebuie remarcat faptul că nu au fost utilizate în acest studiu materiale pentru
eliminarea radicalilor liberi sau a peroxizilor, spre deosebire de alte rapoarte publicate care
utilizează peroxizi solizi în care catalaza a fost utilizată pentru toate studiile experimentale.
Evaluarea discurilor PDMS-CaO2 încorporate în hidro-gelurile au ilustrat, de
asemenea, beneficiile acestor materiale generatoare de oxigen atunci când celulele sunt
expuse la condiții hipoxice. Amplasarea discurilor generatoare de oxigen în centrul
construcției a dus la cel mai mare beneficiu prin scăderea gradienților interni de oxigen. Acest
lucru este verificat prin rezultate de modelare predictivă, care s-au corelat puternic cu
rezultatele experimentale prin care activitatea metabolică celulară a fost comparabilă cu
constructele cultivate la presiuni de oxigen de patru ori mai mari. Imagistica distribuției
viabile a celulelor β în construcțiile de agaroză a permis evaluarea proliferării și remodelării
celulare ca răspuns la disponibilitatea oxigenului. Construcțiile de control au prezentat modele
de viabilitate tipice pentru disponibilitatea limitată a oxigenului, cu celule vii retrogradate pe
o margine subțire pe marginea exterioară a constructului și un nucleu de celule predominant
moarte. Construcțiile care conțin discuri PDMS-CaO2, însă, au ilustrat o distribuție uniformă
a celulelor predominant vii, indicând un model divergent în remodelarea celulară. Acest lucru
stabilește în continuare că discul PDMS-CaO2 ameliorează hipoxia centrală oferind o sursă
suplimentară de oxigen provenind din centrul constructului, acolo unde este cel mai necesar.
Studiile care urmăresc să evalueze corelația dintre disponibilitatea oxigenului și
viabilitatea celulelor β ilustrează beneficiile acestor materiale generatoare de oxigen în cadrul
construcțiilor 3D atunci când oxigenul este limitat. Scăderile încărcării celulelor au scăzut
efectul pozitiv al materialelor PDMS-CaO2, probabil din cauza ratei totale mai mici a
consumului de oxigen, care, atunci când este asociat cu eliberarea de oxigen de pe discurile
PDMS-CaO2, are ca rezultat un surplus local de oxigen. Condițiile de hiperoxie pot fi la fel
de dăunătoare pentru celule ca hipoxia, în special pentru celulele care sunt mai sensibile la
stresul radicalilor liberi, cum ar fi celulele β. Prin urmare, utilizarea acestor materiale în
construcții restrânse trebuie să fie relegată la scenarii în care este posibil să se dezvolte
gradienți nocivi de oxigen. Așa cum se ilustrează în acest studiu, modelarea matematică poate
fi utilizată pentru a prezice ce încărcări celulare și geometrii implanturilor vor duce la limitări
de oxigen. Prin urmare, dozarea materialului generator de oxigen, încărcarea peroxidului,
geometria și raportul suprafață / volum, pot fi ulterior adaptate.
47
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
Deoarece discurile PDMS-CaO2 sunt cele mai benefice la densități mari de încărcare a
celulelor, ele reprezintă un instrument ideal pentru îmbunătățirea oxigenării țesuturilor
prelucrate pe bază de celule, în special în perioada inițială de gravare. Prin suplimentarea
oxigenului în timpul perioadei precare de vascularizație, pierderea celulară indusă de hipoxie
ar putea fi redusă. Se prevede că implanturile bazate pe PDMS ar fi foarte de dorit pentru
transplanturilor, având în vedere profilul său de siguranță clinică dovedit și utilizarea prolifică
în administrarea locală a agenților. Cu proprietăți de aderență reduse, inserția PDMS poate fi
îndepărtată cu ușurință odată ce peroxidul solid încorporat este expirat sau suplimentarea
locală de oxigen nu mai este dorită. Deși un potențial dezavantaj al acestei abordări este că:
anumite căi ce stimulează eliberarea factorilor de creștere angiogenă induse de hipoxie ar fi
suprimate și ar putea întârzia vascularizarea implantului, anticipăm că acest efect ar putea fi
atenuat prin livrarea codului de factori proangiogeni. În general, am demonstrat utilitatea
materialelor noastre pentru a atenua moartea celulară indusă de hipoxie, ceea ce ar fi extrem
de dorit pentru păstrarea viabilității celulelor transplantate după transplant, în special pentru
implanturile pentru care dozarea celulară este critică pentru eficacitate, cum ar fi în
transplantul de celule β pentru diabetul de tip 1.
48
Universitatea POLITEHNICA din Bucureşti
Facultatea De Inginerie Medicală
49